BR112019012568A2 - composições compreendendo tacrolimus para o tratamento de doenças intraoculares inflamatórias - Google Patents

Abstract

a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para uso em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória.

Description

COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO TACROLIMUS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS INTRAOCULARES INFLAMATÓRIAS

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0001] As doenças oculares inflamatórias compreendem vários tipos de inflamação que podem afetar qualquer parte do olho ou do tecido circundante. A vasta gama de doenças inflamatórias dos olhos conhecidas compreende, por exemplo, condições muito comuns, tais como, conjuntivite alérgica devido à febre do feno ou condições mais raras e perigosas tais como uveíte, esclerite, neurite óptica, queratite, vasculite retiniana ou vasculite crônica todas tendo o potencial de colocar em perigo a visão de uma pessoa afetada.

[0002] Algumas doenças oculares inflamatórias são efetivamente tratadas com corticosteroides, tais como, por exemplo, a dexametasona. O uso prolongado de dexametasona, no entanto, pode resultar em efeitos colaterais graves, como é comumente conhecido a partir do tratamento em longo prazo com corticosteroides em geral. O efeito colateral comum associado à administração de corticosteroides, como a dexametasona, é o desenvolvimento de catarata ou glaucoma. O aumento do risco do desenvolvimento de uma catarata ou glaucoma seria especialmente problemático no caso do tratamento de uma doença ocular inflamatória já existente.

[0003] A uveíte é uma condição inflamatória do trato uveal do olho. Clinicamente, pode ser classificada em anterior, intermediária, posterior e pan-uveíte com base na parte afetada do trato uveal. A uveíte anterior é responsável por 60 a 80% de todos os casos de uveíte. A uveíte continua sendo uma causa significativa de cegueira

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2/53 em pessoas em idade ativa que representam 10 a 15% da cegueira total nos Estados Unidos da América.

[0004] A uveíte pode ter etiologias infecciosas ou não infecciosas (autoimunes). A uveíte autoimune é mediada por linfócitos T específicos do antígeno da retina, incluindo as células Thl e Thl7, e os corticosteroides continuam sendo a principal terapia para essa condição. A uveíte anterior é geralmente tratada com esteroides tópicos, embora a imunossupressão sistêmica possa ser necessária se os pacientes também tiverem outras condições autoimunes sistêmicas. Para a uveíte posterior, além da supressão imune sistêmica, a injeção intravítrea de esteroides (por exemplo, dexametasona, triancinolona e fluocinolona) é agora comumente empregada. Vários implantes intraoculares também foram desenvolvidos para melhorar a liberação de medicamentos intraoculares. Embora a injeção intravítrea de esteroides possa controlar melhor a inflamação e causar efeitos colaterais sistêmicos limitados, os efeitos adversos locais continuam sendo uma grande preocupação. Por exemplo, 30 a 50% dos pacientes desenvolveram glaucoma após injeção intravítrea de triancinolona; quase todos os pacientes que receberam injeções intravítreas de fluocinolona através do implante Retisert tiveram glaucoma e 40% deles necessitaram de cirurgia para controlar a pressão. A catarata é outro efeito colateral comum, particularmente em pacientes que recebem múltiplas injeções intravítreas de esteroides. Claramente, terapias mais eficazes e seguras são urgentemente necessárias para a uveíte.

[0005] Tacrolimus (FK506), uma lactona macrolida

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3/53 isolada do fungo Streptomyces tsukubaensis, é um fármaco imunossupressor potente. 0 tacrolimus tem a mesma ação mecanicista de inibir a transdução do sinal dos linfócitos Tea proliferação celular como a ciclosporina, mas é 100 vezes mais potente. Foi relatado que o tacrolimus é usado como uma segunda linha de terapia para uveite através de administração sistêmica e provou ser eficaz, particularmente em pacientes com resistência a esteroides ou intolerância.

[0006] O tacrolimus tem uma fraca capacidade para penetrar na barreira tecidular após administração tópica devido às suas propriedades físico-químicas (Tamura e outros, 2002, J. Pharm. Sei. 91, 719-729).

[0007] O documento US 2003/0018044 Al descreve uma formulação contendo Tacrolimus para tratar uma doença ocular, tal como doença de olho seco (DED), bem como outras doenças oculares. O tacrolimus pode ser dissolvido em um solvente aquoso, tal como solução salina a 0,9% ou dextrose a 5%, ou um solvente orgânico tal como dimetilssulfóxido (DMSO) ou um álcool.

[0008] O documento WO 2011/073134 Al proporciona composições farmacêuticas para o tratamento de ceratoconjuntivite seca compreendendo veículos líquidos que incluem um ou mais alcanos semifluorados. As composições incorporam um ingrediente ativo selecionado do grupo de imunossupressores de macrolido. Eles podem ser administrados topicamente ao olho.

[0009] O documento WO 2012/160179 A2 descreve composições farmacêuticas líquidas ou semissólidas para administração tópica compreendendo um alcano semifluorado.

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As composições são úteis para a liberação de ingredientes ativos em camadas profundas da pele ou apêndices da pele. Podem ser incorporados vários ingredientes ativos, tais como imunossupressores, anti-infecciosos, agentes antifúngicos, agentes anti-inflamatórios e resinoides. 0 documento WO 2012/160180 A2 descreve composições farmacêuticas semissolidas ou líquidas para administração tópica a um dedo ou unha de um ser humano. As composições são úteis para a liberação de ingredientes ativos profundamente na unha. Vários ingredientes ativos podem ser incorporados, tais como agentes antifúngicos, antiinfecciosos, agentes anti-inflamatórios, imunossupressores, anestésicos locais e resinoides.

[0010] É um objetivo da presente invenção proporcionar uma composição farmacêutica que seja útil e eficaz no tratamento de uma vasta gama de doenças intraoculares inflamatórias e que possa ser administrada topicamente.

[0011] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar uma composição farmacêutica que permita um manuseio seguro, dosagem precisa e um regime de dosagem conveniente e fácil de seguir para suportar a administração regular e a conformidade global pelo paciente necessita de tal tratamento.

[0012] Constitui outro objetivo da invenção proporcionar uma composição farmacêutica para uso no tratamento de doenças intraoculares inflamatórias útil e eficaz em adição ou como um substituto para tratamentos de primeira linha comuns de tais doenças oculares e que não mostre os efeitos secundários de tratamentos esteroides

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5/53 padrão no que diz respeito ao aumento da pressão intraocular.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0013] A presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para uso em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória.

[0014] A presente invenção proporciona ainda um kit compreendendo uma composição farmacêutica consistindo em uma quantidade farmaceuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para uso em um método para o tratamento de uma doença intraocular inflamatória; e um recipiente para conter a composição, em que o recipiente compreende, de um modo preferido, meios de distribuição adaptados para administração tópica da composição a uma superfie do olho, de um modo preferido, em uma pálpebra inferior, ao saco lacrimal ou a um tecido oftálmico.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0015] Figura 1: Efeitos do tratamento do colírio tacrolimus/SFA em apresentações clínicas do modelo de camundongo com uveíte induzida por endotoxina (EIU).

[0016] Figura 2: Histopatologia de EIU em diferentes grupos de camundongos.

[0017] Figura 3: Efeitos do tratamento do colírio tacrolimus/SFA na apresentação clínica da Uveoretinite autoimune experimental (EAU).

[0018] Figura 4: Histopatologia de EAU em

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6/53 diferentes grupos de camundongos.

[0019] Figura 5: Níveis de Tacrolimus no vítreo (Figura 5A) , coroide/esclera (Figura 5B) , retina (Figura 5C) e sangue total (Figura 5D) dos olhos de camundongos normais.

[0020] Figuras 6A a D: níveis de tacrolimus no vítreo dos olhos do camundongo com e sem uveíte.

[0021] Figura 7: Infiltração de células imunes na retina utilizando citometria de fluxo em estudos EIU.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0022] Em um primeiro aspecto, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória.

[0023] A composição farmacêutica da presente invenção compreende tacrolimus em uma quantidade terapeuticamente eficaz. O tacrolimus (também conhecido como FK-506 ou fujimicina; CAS 104987-11-3) é uma lactona macrolida com a fórmula C44H69NO12 e uma massa molecular de 804.018 g / mol.

[0024] O tacrolimus pode ser isolado do caldo de fermentação da bactéria Streptomyces tsukubaensis sendo comercialmente disponível, por exemplo, na Zhejian Hisun Chemical Co, China, e é geralmente fornecida na forma de seu monoidrato sólido ou na forma de uma solução mestra. O termo quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus tal como empregado no presente documento significa uma dose, concentração ou força de tacrolimus que é útil para

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7/53 produzir o efeito farmacológico desejado, mais especificamente o efeito farmacológico no tratamento de uma doença intraocular inflamatória conforme descrito em detalhes abaixo.

[0025] Em uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção é uma preparação líquida. O termo preparação líquida, tal como empregado no presente documento, significa qualquer preparação que não seja inteiramente sólida. A preparação líquida de acordo com a presente invenção pode ser constituída de líquidos de fluxo livre ou, em outras palavras, ter uma baixa viscosidade ou pode ser constituída de líquidos com uma viscosidade média ou elevada, tal como um creme ou uma pasta ou um gel. De preferência, contudo, as presentes composições farmacêuticas são líquidos fluidos, pelo menos a temperatura fisiológica, que podem ser administrados gota a gota.

[0026] A composição farmacêutica da presente invenção pode ser formulada na forma de uma solução, suspensão ou emulsão. Preferencialmente, a composição farmacêutica da presente invenção é formulada como uma solução, ainda mais preferida como uma solução límpida.

[0027] O termo solução límpida, como mencionado acima e entendido no presente documento, se refere a uma solução líquida na qual todos os solutos são completamente dissolúveis ou dissolvidos em condições de temperatura ambiente, isto é, entre 15 e 25°C. A solução límpida não compreende quaisquer componentes em partículas ou em fase sólida e preferivelmente tem um índice de refração aproximado ao da água (isto é, 1,333) à temperatura

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8/53 ambiente .

[0028] Consequentemente, o tacrolimus como descrito acima pode ser dissolvido ou suspenso ou emulsionado no veículo líquido da presente composição farmacêutica. O termo veículo líquido, tal como empregado no presente documento, significa a fase contínua (ou coerente), tipicamente o solvente ou mistura de diferentes solventes da presente composição farmacêutica em que o tacrolimus é dissolvido ou suspenso ou emulsionado.

[0029] Algumas das principais vantagens da composição farmacêutica da presente invenção são provocadas pela presença de um alcano semifluorado no veículo líquido das presentes composições farmacêuticas, funcionando como um veículo de suspensão líquida ou solvente no caso de uma solução.

[0030] O termo alcano semifluorado (também referido como SFA ao longo deste documento) como empregado no presente documento se refere a um composto linear ou ramificado consistindo em pelo menos um segmento perfluorado (segmento F) e pelo menos um segmento de hidrocarboneto não fluorado (Segmento-H). Mais preferivelmente, o alcano semifluorado é um composto linear ou ramificado composto por um segmento perfluorado (segmento F) e um segmento de hidrocarboneto não fluorado (segmento-H). Preferivelmente, o dito alcano semifluorado é um composto que existe em um estado líquido pelo menos a uma temperatura dentro da faixa de temperatura de 4 a 40 °C. Em uma forma de realização, o segmento perfluorado e / ou o segmento de hidrocarboneto do referido SFA compreendem, opcionalmente, ou consistem em um segmento de

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9/53 hidrocarboneto cíclico, ou opcionalmente o dito SFA compreende uma porção insaturada dentro do segmento de hidrocarboneto.

[0031] De preferência, o segmento F de um SFA linear ou ramificado compreende entre 3 a 10 átomos de carbono. É também preferido que o segmento H compreenda entre 3 a 10 átomos de carbono. É particularmente preferido que o segmento F e o segmento H compreendam, porém independentemente uns dos outros, 3 a 10 átomos de carbono. De um modo preferido, cada segmento independentemente do outro tem 3 a 10 átomos de carbono.

[0032] É ainda preferido que o segmento F de

SFA linear ou ramificado compreenda entre 4 a 10 átomos de carbono e/ou que o segmento H compreenda entre 4 a 10 átomos de carbono. É ainda particularmente preferido que o segmento F e o segmento H compreendam, porém independentemente um do outro, 4 a 10 átomos de carbono. De preferência, cada segmento independentemente do outro apresenta 3 a 10 átomos de carbono.

[0033] Consequentemente, em uma forma de realização preferida da presente invenção, o veículo líquido compreende pelo menos um alcano semifluorado que é um composto, preferivelmente um composto linear, da fórmula F (CF2) n (CH2) _mH, em que nem são números inteiros independentemente selecionados da gama de 3 a 10, de um modo preferido, selecionados da gama de 4 a 10 e, de um modo ainda mais preferido, selecionados da gama de 4 a 8 átomos de carbono.

[0034] Opcionalmente, o SFA linear ou ramificado pode compreender um segmento de hidrocarboneto ramificado

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10/53 não fluorado compreendendo um ou mais grupos alquila selecionados do grupo consistindo em -CH3, -C2H5, -C3H7 e C4H9 e / ou o SFA linear ou ramificado pode compreender um segmento de hidrocarboneto perfluorado ramificado, compreendendo um ou mais grupos alquila perfluorados selecionados do grupo consistindo em -CF3, -C2F5, -C3F7 e C4F9. É ainda preferido que a razão dos átomos de carbono do segmento F e do segmento H (a referida razão obtida dividindo o número de átomos de carbono no segmento F pelo número de átomos de carbono no segmento H; por exemplo, a referida razão é de 0,75 para 1-perfluoreexiloctano (F6H8)) de um SFA linear ou ramificado é >0,5, de um modo mais preferido, a referida razão é >0,6. É ainda preferido que a razão dos átomos de carbono do segmento F e do segmento H esteja no intervalo entre 0,6 e 3,0, mais preferencialmente a referida razão está entre 0,6 e 1,0.

[0035] Em uma forma de realização preferida da presente invenção, o alcano semifluorado se refere a um composto linear consistindo em pelo menos um segmento perfluorado (segmento F) e pelo menos um segmento de hidrocarboneto (segmento H). Mais preferencialmente, o referido alcano semifluorado é um composto linear consistindo em um segmento perfluorado (segmento F) e um segmento de hidrocarboneto (segmento H).

[0036] De preferência, o segmento F de um SFA linear compreende entre 3 a 10 átomos de carbono. É também preferido que o segmento H compreenda entre 3 a 10 átomos de carbono. É particularmente preferido que o segmento F e o segmento H compreendam, porém independentemente uns dos outros, de 3 a 10 átomos de carbono. De um modo preferido,

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11/53 cada segmento independentemente do outro tem 3 a 10 átomos de carbono.

[0037] É ainda preferido que o segmento F de um SFA linear compreenda entre 4 a 10 átomos de carbono e/ou que o segmento H compreenda entre 4 e 10 e ainda mais preferencialmente 4 a 8 átomos de carbono. É particularmente preferido que os segmentos F e H compreendam, porém independentemente uns dos outros, 4 a 10 átomos de carbono, ainda mais preferencialmente 4 a 8 átomos de carbono. De um modo preferido, cada segmento é independente de outro tendo 4 a 10, de um modo preferido, 4 a 8 átomos de carbono.

[0038] De acordo com outra nomenclatura, os alcanos semifluorados lineares, como utilizados na presente invenção podem ser referidos como FnHm, em que F significa o segmento de hidrocarboneto perfluorado, H, significa o segmento de hidrocarboneto não fluorado e n, m é o número de átomos de carbono do respectivo segmento. Por exemplo, F4H5 é utilizado para 1-perfluorbutil pentano.

[0039] Em uma forma de realização particularmente preferida da presente invenção, o veículo líquido da composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um alcano semifluorado linear selecionado do grupo consistindo em: F4H4, F4H5, F4H6, F4H7, F4H8, F5H4, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H2, F6H4, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10, F6H12, F8H8, F8H10, F8H12 e F10H10.

[0040] Mais preferivelmente, o veículo líquido da composição farmacêutica de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um alcano semifluorado linear

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12/53 selecionado do grupo consistindo em: F4H4, F4H5, F4H6, F5H4, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H2, F6H4, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10, F8H8, F8H10, F8H12 e F10H10, ainda mais preferencialmente o SFA linear é selecionado do grupo consistindo em: F4H4, F4H5, F4H6, F5H4, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H4, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10, F8H8, F8H10, F8H12 e F10H10, mais preferencialmente o SFA linear selecionado do grupo consistindo em: F4H4, F4H5, F4H6, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10, F8H8, F8H10, F8H12 e F10H10 e ainda mais preferencialmente o SFA linear é selecionado do grupo consistindo em: F4H4, F4H5, F4H6, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10 e F8H8.

[0041] Ainda em outra forma de realização preferida, o veículo líquido da composição farmacêutica de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um SFA linear selecionado do grupo consistindo em: F4H5, F4H6, F5H6, F5H7, F6H6, F6H7 e F6H8.

[0042] Ainda em outra forma de realização preferida, o veículo líquido de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um SFA linear, de preferência pelo menos um SFA linear selecionado do grupo constituído por F4H5, F4H6 e F6H8. De um modo ainda mais preferido, o veículo líquido de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um SFA linear selecionado do grupo que consiste em F4H5 e F6H8. Mais preferencialmente, na presente invenção, o veículo líquido compreende F4H5 (1perfluorbutí1-pentano) como o único alcano semifluorado.

[0043] Em outra forma de realização, o alcano semifluorado compreendido no veículo líquido pode ser

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13/53 utilizado como uma mistura de dois ou mais alcanos semifluorados diferentes, como descrito acima. Consequentemente, a presente composição farmacêutica pode compreender mais do que um SFA. Pode ser útil combinar diferentes SFAs, por exemplo, a fim de atingir uma propriedade alvo específica, como certa densidade ou viscosidade. Se for utilizada uma mistura de dois ou mais SFAs diferentes, é ainda preferido que a mistura compreenda pelo menos um de F4H5, F4H6, F6H4, F6H6, F6H8 e F6H10, e em particular um de F4H5, F6H6 e F6H8. Em outra forma de realização, a mistura compreende pelo menos dois membros selecionados de F4H5, F4H6, F6H4, F6H6, F6H8 e F6H10 e, em particular, pelo menos dois membros selecionados de F4H5, F6H6 e F6H8.

[0044] Os SFA líquidos são química e fisiologicamente inertes, incolores e estáveis. Suas densidades típicas variam de 1,1 a 1,7 g / cm³, e sua tensão superficial pode ser tão baixa quanto 19 mN / m. Os SFAs do tipo FnHm são insolúveis em água, mas também um pouco anfifílicos, com aumento de lipofilicidade correlacionando com um tamanho crescente do segmento não fluorado.

[0045] Em outra forma de realização, o veículo líquido da composição farmacêutica da presente invenção compreende pelo menos um alcano semifluorado que é líquido a temperatura ambiente, tal como F4H4, F4H5, F4H6, F5H5, F5H6, F5H7, F5H8, F6H6, F6H7, F6H8, F6H9, F6H10 e F8H8.

[0046] Um alcano semifluorado particularmente preferido compreendido pelo veículo líquido da composição farmacêutica da presente invenção é 1-perfluorbutil

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14/53 pentano, um alcano semifluorado com a fórmula química F (CF₂) 4 (CH2) sH. 0 mesmo é um líquido inerte, insolúvel em água, com uma densidade de 1,284 g / cm³ a 25°C e índice de refração de 1,3204 a 20°C. A nomenclatura alternativa para este composto inclui F4H5, em que F denota um segmento de alcano perfluorado de cadeia linear compreendendo 4 átomos de carbono e em que H designa um segmento de hidrocarboneto de alcano linear e não fluorado de 5 átomos de carbono.

[0047] A composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreende tacrolimus em uma quantidade terapeuticamente eficaz e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado, enquanto que em uma modalidade preferida a composição farmacêutica da presente invenção compreende ou consiste em pelo menos 75% em peso, de preferência pelo menos 80% em peso, mais preferivelmente de pelo menos 85% em peso, ainda mais preferivelmente de pelo menos 90 e mais preferivelmente de pelo menos 95% em peso do veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado, com base no peso da composição farmacêutica final (forma de dosagem final). A composição farmacêutica compreendendo tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado pode opcionalmente compreender outros solventes e excipientes como descrito em detalhe abaixo. Em uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção consiste em desde cerca de 95 a cerca de 99,999% em peso, mais preferivelmente desde cerca de 95 a cerca de 99,99% em peso, mais preferivelmente desde 99 a 99,99% em peso, ainda mais preferencialmente, de 99,95 a 99,99% em peso e, mais

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15/53 preferencialmente, de cerca de 99,96 a cerca de 99,98% em peso do veículo líquido, compreendendo pelo menos um alcano semifluorado descrito acima, com base no peso da composição final.

[0048] Em algumas formas de realização preferidas, a composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreende até Img/mL de tacrolimus, preferencialmente até 0,5mg/mL de tacrolimus e mais preferencialmente até 0,3mg/mL de tacrolimus (com base no volume da composição final (forma de dosagem final). Por conseguinte, as formas de realização preferidas da composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreendem cerca de 0,01% (p/v) a 0,1% (p/v) (correspondendo a 0,1 a Img/mL) de tacrolimus. Em uma forma de realização preferida, contudo, a presente composição farmacêutica compreende cerca de 0,01% a 0,05% (p/v) (correspondendo a 0,1 a 0,5mg/mL) e ainda mais preferivelmente a cerca de 0,02 % a cerca de 0,04% (p/v) (correspondendo a 0,2 a 0,4mg/mL) de tacrolimus.

[0049] A composição farmacêutica da presente invenção pode também compreender um ou mais excipientes adicionais como um componente opcional e adicional. O termo excipientes, tal como empregado no presente documento, se refere a qualquer substância natural ou sintética farmaceuticamente aceitável que possa ser adicionada às composições farmacêuticas da presente invenção, mais especificamente ao veículo líquido da composição farmacêutica para melhorar ou de outro modo modificar a sua constituição física ou química, estabilidade ou propriedades terapêuticas. A presente composição

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16/53 farmacêutica pode compreender opcionalmente um ou mais excipientes, tais como, por exemplo, um antioxidante, um conservante, um excipiente lipidico ou oleoso, um agente tensoativo ou um lubrificante ou uma combinação de pelo menos 2 excipientes do mesmo.

[0050] Antioxidantes adequados para uso na presente composição farmacêutica compreendem, por exemplo: hidroxitolueno butilado (BHT), hidroxianisol butilado (BHA), butil-hidroquinona terciária (TBHQ), vitamina E, derivados de vitamina E (isto é, acetato de alfa-tocoferol) e/ou ácido ascórbico.

[0051] Os excipientes lipidicos ou oleosos adequados para uso na composição farmacêutica da presente invenção compreendem, por exemplo, óleos triglicerídeos (isto é, óleo de soja, azeite, óleo de sésamo, óleo de semente de algodão, óleo de rícino, óleo de amêndoa doce), triglicerídeos, óleo mineral (isto é, petrolato e parafina líquida), triglicerídeos de cadeia média (MCT), ácidos graxos oleosos, miristato de isopropila, alcoóis graxos oleosos, ésteres de sorbitol e ácidos graxos, ésteres oleosos de sacarose ou qualquer outra substância oleosa que é fisiologicamente tolerada pelos olhos.

[0052] Lubrificantes adequados para emprego na composição farmacêutica da presente invenção compreendem, por exemplo, carboximet ilcelulose e o seu sal de sódio (CMC, carmelose), álcool polivinílico, hidroxipropil metilcelulose (HPMC, hipromelose), ácido hialurônico e o seu sal de sódio e goma guar hidroxipropila.

[0053] A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ou não compreender conservantes

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17/53 naturais ou sintéticos farmaceuticamente adequados, tais como, por exemplo, cloreto de benzalcônio e clorexidina. Em uma forma de realização preferida, no entanto, a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção não compreende um conservante farmaceuticamente aceitável.

[0054] Além dos excipientes como descrito acima como componentes opcionais, o veiculo liquido da presente composição farmacêutica pode também compreender um ou mais solventes adicionais. O termo outros solventes, tal como empregado no presente documento, se refere a um solvente ou mistura de dois ou mais solventes diferentes, além de pelo menos um alcano semifluorado do veiculo liquido. Outros solventes adequados podem ser escolhidos, por exemplo, de alcoóis, tais como etanol, isopropanol ou outro solvente adicional que seja fisiologicamente tolerado pelos olhos.

[0055] Um solvente preferido é o etanol que pode estar presente na composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção em uma quantidade de até cerca de 1,4% em peso (correspondendo a 1,4% (p/p) ) ou menos, preferivelmente até cerca de 1,0% em peso, tal como, por exemplo, de 0,2 a 1,0% em peso (correspondendo a 0,2% a 1,0% (p/p)) ou 0, 5a 1,0% em peso (correspondendo a 0,5 a 1,0% (p/p)), com base no peso total do veiculo liquido da composição final (forma de dosagem final). Mais preferivelmente, o veiculo liquido da composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreende 1,0% em peso de etanol (além de pelo menos um alcano semifluorado como descrito acima). Mais preferencialmente, o veiculo liquido da composição para uso de acordo com a presente invenção compreende 1,4% em peso

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18/53 de etanol (além de pelo menos um alcano semifluorado como descrito acima).

[0056] Em outra forma de realização, a água também pode estar presente na composição farmacêutica da presente invenção, no entanto, de preferência em pequenas quantidades até 1,0% em peso ou até 0,1% em peso ou menos, com base em a composição final (forma de dosagem final). Em uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção é essencialmente isenta de água, enquanto a água residual pode ser atribuída ao potencial teor de água residual do tacrolimus. O termo essencialmente, tal como empregado no presente documento, significa, se presente, então, em quantidades vestigiais ou residuais, de modo a não conferir qualquer vantagem técnica ou relevância em relação à matéria da invenção.

[0057] Por exemplo, o 1-perfluorbutil-pentano (F4H5) como um alcano semifluorado preferido em algumas formas de realização da presente invenção não contém qualquer água, ou apresenta um teor de água não superior à solubilidade máxima da água em 1-perfluorobutil-pentano, por exemplo, apresenta um teor de água inferior a 1,6 x 10⁴mg/mL, conforme determinado por métodos conhecidos na técnica para análise de umidade, tal como os métodos de titulação de Karl-Fischer.

[0058] Em uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção é (essencialmente) isenta de água e/ou isenta de conservantes.

[0059] Em outra forma de realização preferida, a composição farmacêutica para uso de acordo com a presente

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19/53 invenção compreende 0,01% a 0,05% (p/v) de tacrolimus, 0,2 a 1,4% (p/p) de etanol (com base na quantidade de alcano semifluorado) e o alcano semifluorado compreendido no veículo líquido selecionado de F4H5 e F6H8. Ainda em outra forma de realização preferida, a composição farmacêutica para uso de acordo com a presente invenção compreende 0,01% a 0,05% (p/v) de tacrolimus, 0,2 a 1,4% (p/p) de etanol (com base na quantidade de alcano semifluorado) e o alcano semifluorado compreendido no veículo líquido é F4H5. Em outra forma de realização preferida, o veículo líquido da presente composição consiste em 0,2 a 1,4% (p/p) de etanol (com base na quantidade de alcano semifluorado) e o alcano semifluorado selecionado de F4H5 e F6H8, preferivelmente o alcano semifluorado é F4H5.

[0060] Em outra forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção compreende 0,03% (p/v) de tacrolimus, 1,4% (p/p) de etanol e o alcano semifluorado é F4H5. Em uma forma de realização especialmente preferida, a composição farmacêutica da presente invenção consiste essencialmente em 0,03% (p/v) de tacrolimus, 1,4% (p/p) de etanol e F4H5, todos com base no peso da composição final (forma de dosagem final).

[0061] Em outra forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção compreende 0,03% (p/v) de tacrolimus, 1,0% (p/p) de etanol e o alcano semifluorado é F4H5. Em uma forma de realização especialmente preferida, a composição farmacêutica da presente invenção consiste essencialmente em 0,03% (p/v) de tacrolimus, 1,0% (p/p) de etanol e F4H5, todos com base no peso da composição final (forma de dosagem final).

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20/53 [0062] De acordo com o primeiro aspecto, a presente invenção é dirigida à composição farmacêutica compreendendo tacrolimus em uma quantidade terapeuticamente eficaz e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória. O termo doença intraocular inflamatória como empregado no presente documento significa qualquer tipo de inflamação na camada intermediária do olho e na parte posterior dos olhos. Especificamente, doenças inflamatórias oculares que envolvem a córnea e a conjuntiva não estão incluídas na definição de doenças intraoculares inflamatórias, tal como empregado no presente documento.

[0063] O termo doenças inflamatórias oculares, como empregado no presente documento, se refere à inflamação que afeta qualquer parte dos olhos ou tecido circundante. A inflamação envolvendo os olhos pode variar de conjuntivite alérgica da febre do feno à condições raras e potencialmente de cegueira, como uveíte, esclerite, neurite óptica, ceratite, vasculite retiniana e conjuntivite crônica.

[0064] Em uma forma de realização preferida, a doença intraocular inflamatória é selecionada do grupo consistindo em uveíte, inflamação retiniana, esclerite, neurite óptica e combinações destas.

[0065] A uveíte, como mencionada acima e seus diferentes tipos, conforme definido abaixo, se caracteriza por ser uma inflamação no interior dos olhos, isto é, uma doença intraocular inflamatória, afetando especificamente uma ou mais das três partes do olho que compõem a úvea.

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21/53 [0066] O termo uveíte, tal como empregado no presente documento, se refere genericamente à inflamação da úvea, a camada intermediária do olho que consiste na íris, corpo ciliar e coroide. A úvea está imprensada entre a esclera (a parte branca do olho) e o tecido nervoso (retina) dentro do olho. O tipo de uveíte geralmente é classificado por onde a inflamação ocorre na úvea. A uveíte é geralmente tratada com esteroides.

[0067] O termo uveíte anterior como empregado no presente documento significa uma inflamação da íris (irite) ou da íris e do corpo ciliar (iridociclite) . O principal tratamento para irite é o colírio esteroide. O principal efeito colateral deste tratamento reside em diminuir a capacidade do olho de combater infecções e acelerar o glaucoma e a catarata em alguns pacientes.

[0068] O termo uveíte intermediária, tal como empregado no presente documento, significa uma inflamação da área atrás do corpo ciliar e da gelatina vítrea.

[0069] O termo uveíte posterior, tal como empregado no presente documento, significa uma inflamação no fundo do olho, no coroide e na retina.

[0070] Além disso, o termo uveíte difusa (também denominada pan-uveíte) como empregado no presente documento significa uma inflamação de todas as áreas da úvea.

[0071] A inflamação da retina é mais um exemplo de uma doença intraocular inflamatória. O termo inflamação da retina, como empregado no presente documento, se refere a inchaço no tecido na parede do fundo dentro do olho. A inflamação da retina pode ser causada por cirurgia de

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22/53 catarata, diabetes, pucker macular (membrana epirretiniana), doenças sistêmicas, trauma ou pode não ter uma causa discernível. Como empregado no presente documento, o termo inflamação da retina compreende ainda doenças da retina que têm um componente inflamatório, tal como, por exemplo, retinopatia diabética e degeneração macular relacionada com a idade (AMD).

[0072] Outra doença intraocular inflamatória exemplar é a esclerite. O termo esclerite, tal como empregado no presente documento, se refere à inflamação da esclerótica. A esclera é o revestimento externo duro e branco do olho que fornece suporte estrutural rígido ao olho. O tratamento da esclerite depende da gravidade da inflamação. Pessoas com formas graves de esclerite geralmente precisam de tratamento com esteroides.

[0073] Ainda outra doença intraocular inflamatória de acordo com a presente invenção é a neurite óptica. O termo neurite óptica, como empregado no presente documento, se refere à inflamação do nervo óptico. O tratamento principal geralmente consiste na administração de corticosteroides. A inflamação da cabeça do nervo óptico é chamada de papilite ou neurite óptica intraocular. O termo papilite, tal como empregado no presente documento, se refere a um tipo específico de neurite óptica. Além disso, a inflamação da porção orbital do nervo é chamada neurite óptica retrobulbar ou neurite óptica orbital.

[0074] As composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado como descrito acima são úteis para a terapia

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23/53 ou tratamento de ou para a melhoria dos sintomas associados a uma doença intraocular inflamatória selecionada do grupo consistindo em uveite, inflamação da retina, esclerite e neurite óptica ou suas combinações.

[0075] Em outra forma de realização adicional, a presente invenção se refere portanto a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veiculo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória selecionada do grupo consistindo em uveite, inflamação da retina, esclerite e neurite óptica ou suas combinações. Em outra forma de realização da presente invenção, a doença intraocular inflamatória é selecionada de uveite, inflamação da retina e combinações das mesmas. Como mencionado acima, as combinações de doenças intraoculares inflamatórias são possíveis. Isto significa que apenas uma das ditas doenças intraoculares inflamatórias pode ocorrer em um paciente ao mesmo tempo ou que duas, três ou todas as quatro doenças acima mencionadas podem ocorrer em um paciente ao mesmo tempo e podem ser tratadas com sucesso com a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção.

[0076] Em uma forma de realização preferida da presente invenção, a doença ocular inflamatória é uveite. Consequentemente, em uma forma de realização a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para uso em um método de tratamento de

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24/53 uveíte.

[0077] Em uma forma de realização específica, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo tacrolimus em uma quantidade terapeuticamente eficaz, e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória, de um modo preferido, uma uveíte selecionada do grupo consistindo em uveíte anterior, uveíte intermediária e uveíte posterior ou combinações das mesmas. Em outras palavras, as formas de realização preferidas da presente invenção se referem à composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um modo de tratamento de uveíte anterior e/ou uveíte intermediária e/ou uveíte posterior .

[0078] A uveíte pode ser aguda, quando se resolve rapidamente após o tratamento, ou recorrente, quando os episódios repetidos são separados por intervalos de vários meses ou crônica, quando a condição continua em longo prazo ou requer medicação em longo prazo para controlá-la, por exemplo, a condição dura mais de três meses. Outras formas de realização da presente invenção se referem- à composição farmacêutica para uso em um método para tratamento de uma doença intraocular inflamatória aguda ou crônica, tal como, por exemplo, uveíte e/ou inflamação da retina. Outras formas de realização preferidas da presente invenção se referem a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano

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25/53 semifluorado para uso em um modo de tratamento de uveíte, em que a uveíte é crônica ou aguda. Ainda noutra forma de realização, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica como descrita acima, para uso em um método de tratamento de uveíte, em que a uveíte é uveíte refratária.

[0079] Como já foi referido anteriormente, todas as doenças intraoculares inflamatórias mencionadas a serem tratadas com a composição farmacêutica da presente invenção podem ocorrer isoladamente ou em conjunto com uma ou duas ou mais outras doenças intraoculares inflamatórias diferentes como descrito acima. Em uma forma de realização particularmente preferida, a presente invenção é dirigida a uma composição farmacêutica como descrita acima, para emprego no tratamento de uveíte ou um tipo específico de uveíte, tal como, uveíte anterior, uveíte intermediária e/ou uveíte posterior em combinação com inflamação retiniana. Deve-se notar que todas as doenças intraoculares inflamatórias que podem ocorrer em combinação com outras podem ou não ser crônicas ou agudas. Por exemplo, uma uveíte crônica pode ocorrer em conjunto com uma inflamação aguda da retina ou vice-versa.

[0080] A composição farmacêutica da presente invenção é especialmente útil como uma composição

oftálmica,	e	pode	preferivelmente	ser	administrada
topicamente	ao	olho,	pálpebra, saco ocular,	superfície do
olho e/ou	a	um	tecido oftálmico	de	um paciente.

Preferivelmente, contudo, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada topicamente a uma superfície externa do olho de um paciente ou a um tecido oftálmico que seja prontamente acessível pelo paciente ou

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26/53 por outra pessoa que administra a composição farmacêutica ao olho do paciente que dela necessita.

[0081] A composição farmacêutica, especialmente quando utilizada como líquido de baixa ou maior viscosidade (normalmente na gama de 1 a 3,5 mPas) , pode vantajosamente ser administrada na forma de gotas ou por pulverização ou por injeção, como, por exemplo, injeção intravítrea ou injeção periocular. Mais preferencialmente, contudo, a composição farmacêutica líquida da presente invenção pode ser administrada como gotas, mais especificamente como colírios para serem administrados topicamente ao olho.

[0082] Dependendo da extensão da doença ou de se os dois olhos do paciente a ser tratado são ou não afetados, as gotas ou colírio oftálmico das presentes composições farmacêuticas oftálmicas podem ser administradas apenas a um olho ou a ambos os olhos do paciente. Principalmente devido a características físicas específicas dos alcanos semifluorados compreendidos no veículo líquido da presente composição farmacêutica, tal como, por exemplo, uma alta densidade e baixa tensão superficial, o volume das gotículas geralmente varia de cerca de 5 a cerca de 50 pm. Este pequeno tamanho de gota geralmente facilita a administração gota a gota e, além disso, facilita a dosagem precisa da composição farmacêutica da presente invenção. Consequentemente, a composição farmacêutica oftálmica da presente invenção administrada como gotas simples com um volume de cerca de 5 a 50 pL por dose por olho, de preferência com um volume de cerca de 8 a 15 m por dose por olho, mais preferencialmente com um volume de cerca de 8 a 12 pL por dose por olho e

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27/53 mais preferencialmente com um volume de cerca de 10 pL por dose por olho.

[0083] A composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada uma vez por dia ou várias vezes por dia, usualmente até 8 vezes ou até 5 vezes por dia, de preferência em intervalos mais ou menos iguais. Em muitos casos, a composição farmacêutica da presente invenção é administrada preferencialmente até 4 vezes por dia, tal como apenas uma vez por dia ou duas vezes por dia ou três ou quatro vezes por dia.

[0084] Em uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada a pacientes com tratamento de primeira linha de uma doença inflamatória ocular ou, de um modo preferido, mesmo com tratamento de primeira linha de uma doença intraocular inflamatória. O termo tratamento de primeira linha como empregado no presente documento significa um tratamento de uma doença intraocular inflamatória ou, mais especificamente, um tratamento de uma doença intraocular inflamatória com um composto ou composição ativa diferente da composição farmacêutica da presente invenção compreendendo tacrolimus e um veículo líquido compreendendo um alcano semifluorado. A administração da presente composição farmacêutica para emprego no tratamento de uma doença intraocular inflamatória de acordo com a presente invenção pode, consequentemente, ser proporcionada como uma terapia de segunda linha ou terapia ou tratamento adjuvante, dependendo se ou não a escolha da terapia de primeira linha ou o tratamento foi interrompido antes do início do tratamento de segunda linha ou ainda está em

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28/53 curso no caso de uma terapia adjuvante ou tratamento.

[0085] De acordo com uma forma de realização preferida, a composição farmacêutica da presente invenção é administrada a pacientes tratados com esteroides ou corticosteroides, tais como, por exemplo, dexametasona, triancinolona e fluocinolona, de preferência dexametasona como tratamento de primeira linha. Tais compostos esteroides são vulgarmente utilizados como um tratamento de primeira linha para muitas doenças oculares inflamatórias, especialmente muitas doenças intraoculares inflamatórias, tais como, por exemplo, uveite e inflamação da retina, como descrito acima. Preferivelmente, no entanto, a composição farmacêutica compreendendo tacrolimus e pelo menos um veiculo liquido compreendendo um alcano semifluorado para emprego na presente invenção é administrados (como um tratamento de segunda linha) a pacientes tratados com esteroides como o tratamento de primeira linha da uveite.

[0086] A composição farmacêutica da presente invenção oferece uma alternativa clinica ao tratamento padrão com esteroide ou corticosteroides sem, no entanto, induzir um aumento da pressão intraocular como um efeito adverso comum de um tratamento com esteroides ou corticosteroides aumentando o risco de complicações adicionais tais como glaucoma ou catarata. Além disso, a composição farmacêutica da presente invenção oferece todas as vantagens de um tratamento de segunda linha que pode ser autoadministrado topicamente. Além disso, verificou-se surpreendentemente que a composição farmacêutica da presente invenção é eficaz na redução do número de células imunes infiltrantes na retina. Portanto, a presente

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29/53 invenção também se refere a um método para reduzir o número de células imunes infiltrantes na retina de um paciente com uma doença ocular inflamatória ou mais especificamente uma doença intraocular inflamatória compreendendo administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado. Além disso, a presente invenção também se refere a um método para reduzir o número de células imunes infiltrantes na retina de um paciente que sofre de uma doença que tem um componente inflamatório envolvendo a retina, como, por exemplo, retinopatia diabética compreendendo administrar topicamente uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado.

[0087] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória compreendendo a administração de uma composição compreendendo tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado ao olho.

[0088] Ainda em outro aspecto, a presente invenção se refere ao uso de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado em um método de tratamento de doença intraocular inflamatória.

[0089] Ainda em outro aspecto, a presente invenção se refere à utilização de um composição

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30/53 farmacêutica compreendendo tacrolimus, de um modo preferido, em uma quantidade terapeuticamente eficaz, e um veículo líquido compreendendo, pelo menos, um alcano semifluorado para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença intraocular inflamatória.

[0090] Ainda em outro aspecto, a presente invenção se refere a um kit que compreende:

i. a composição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método para o tratamento de uma doença intraocular inflamatória; e ii. um recipiente para manter a composição, em que o recipiente compreende, de um modo preferido, meios de distribuição adaptados para administração tópica da composição a uma superfie do olho, de um modo preferido, em uma pálpebra inferior, ao saco lacrimal ou a um tecido oftálmico e iii. opcionalmente informações ou instruções de uso da composição farmacêutica na terapia, tratamento, prevenção ou melhora de doenças ou transtornos intraoculares inflamatórios.

[0091] De acordo com o item i. deste aspecto da invenção, o kit farmacêutico compreende uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus como descrito acima para o primeiro aspecto da presente invenção.

[0092] Um container como usado em conexão com o

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31/53 item ii. deste aspecto da invenção pode ser proporcionado em qualquer forma adequada como um recipiente para uso única contendo uma dose única da composição farmacêutica ou como um recipiente para usos múltiplos contendo uma pluralidade de doses únicas. De um modo preferido, o recipiente compreende um meio de distribuição que permite a administração tópica gota a gota da composição farmacêutica a uma superfície do olho de um paciente. Em uma forma de realização, o recipiente compreendendo um meio de distribuição pode ser um frasco conta-gotas convencional, tal como uma garrafa feita de vidro ou um elastômero termoplástico com meios de distribuição adequados ou contagotas de uso único.

[0093] Em outra forma de realização preferida deste aspecto da invenção, os meios de distribuição compreendem um conta-gotas de uma dimensão, de modo a distribuir gotículas tendo um volume de cerca de 8 a 15 pL, de um modo preferido, de cerca de 8 a 12 pL, de um modo mais preferido, de cerca de 10 pL. Com um pequeno volume de gotas, pode ser obtida uma dosagem precisa no olho (evitando a sobredosagem) e pode evitar-se uma quantidade excessiva de descarga de uma fração substancial da composição do olho após a administração.

[0094] Em uma forma de realização preferida, o kit de acordo com este aspecto da invenção compreende adicionalmente como um item iii. instruções de uso.

[0095] Informações ou instruções de uso da composição farmacêutica de acordo com o item iii. deste aspecto da invenção podem ser proporcionadas de qualquer forma adequada, tal como, por exemplo, como uma etiqueta ou

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32/53 folheto de instruções incluído em impresso ou outra forma legível ou em qualquer outro suporte de dados adequado. Alternativamente, as instruções de uso podem ser fornecidas em formato eletrônico ou legível por computador, como um código de barras ou um código QR.

[0096] As instruções de acordo com o item iii. podem compreender instruções para a emprego das presentes composições farmacêuticas na terapia, tratamento, prevenção ou melhoria de doenças ou transtornos intraoculares inflamatórios, de preferência na terapia de uma doença intraocular inflamatória selecionada de uveíte, inflamação retiniana, esclerite e neurite óptica ou suas combinações.

[0097] O que se segue são formas de realização numeradas compreendidas pela presente invenção:

1. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um modo para o tratamento de uma doença intraocular inflamatória ou um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória compreendendo a administração de uma composição consistindo em uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado no olho, ou o uso de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado em um método de tratamento de doença intraocular

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33/53 inflamatória ou emprego de uma composição farmacêutica compreendendo tacrolimus, de um modo preferido em uma quantidade terapeuticamente eficaz e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um doença ocular inflamatória intraocular, ou um kit compreendendo i. a composição farmacêutica consistindo em uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veículo líquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para uso em um método para o tratamento de uma doença intraocular inflamatória; e ii. um recipiente para manter a composição, em que o recipiente preferencialmente compreende meios de distribuição adaptados para administração tópica da composição a uma superfie do olho, de preferência na pálpebra inferior, ao saco lacrimal ou a um tecido oftálmico, em que a doença intraocular inflamatória é selecionada do grupo que consiste em uveíte, inflamação da retina, esclerite e neurite óptica ou suas combinações.

2. Uma forma de realização de acordo com a modalidade 1, em que a doença intraocular inflamatória é selecionada de uveíte, inflamação retiniana e combinações destas.

3. Uma forma de realização de acordo com a modalidade 2, em que a doença intraocular inflamatória é uveíte.

4. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das

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34/53 modalidades anteriores, em que a uveite é uveite refratária.

5. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das formas de realização precedentes, em que a uveite é uveite anterior e/ou uveite intermediária e/ou uveite posterior.

6. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a uveite é crônica ou aguda.

7. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das modalidades precedentes, em que o alcano semifluorado é um composto da fórmula F (CF2) n (CH2)_mH em que nem são inteiros selecionados independentemente da faixa de 3 a 10.

8. Uma forma de realização de acordo com a concretização 7, em que o referido alcano semifluorado é selecionado do grupo consistindo em F4H5, F4H6, F6H6, F6H8, preferencialmente em que o referido alcano semifluorado é selecionado de F4H5, F6H8, mais preferencialmente o referido alcano semifluorado é F4H5.

9. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, em que a referida composição compreende até Img/mL de tacrolimus, de um modo preferido, até 0,5mg/mL de tacrolimus, de um modo mais preferido, até 0,3mg/mL de tacrolimus.

10. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, a referida composição compreende um excipiente orgânico, preferencialmente etanol, mais preferencialmente até 1,4% em peso de etanol.

11. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a composição é uma preparação líquida.

12. Uma forma de realização de acordo com a forma de

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35/53 realização 11, em que a preparação líquida é isenta de água e/ou isenta de conservante.

13. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a referida composição é formulada na forma de uma solução, suspensão ou emulsão, preferencialmente a referida composição é formulada como uma solução.

14. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das formas de realização precedentes, em que a referida composição é administrada topicamente ao olho, pálpebra do olho, saco ocular, superfície do olho ou a um tecido oftálmico.

15. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, em que a composição é administrada na forma de gotas ou por pulverização ou por injeção.

16. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, em que a referida composição é administrada como gotas simples com um volume de cerca de 5

a 50 m, de um modo preferido, cerca	de	8 a 15 m, mais
preferencialmente cerca de 10 m por dia.	olho	, at4 vezes por
17. Uma forma de realização de acordo	com	qualquer uma das
formas de realização anteriores, em	que	a composição é
administrada a pacientes tratados primeira linha.	com	tratamento de
18. Uma forma de realização de acordo	com	qualquer uma das
concretizações precedentes, em que a	composição é
administrada a pacientes tratados	com	esteroides como

tratamento de primeira linha.

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19. Uma forma de realização de acordo com a forma de realização 17 ou 18, em que a doença inflamatória é uveíte.

20. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações anteriores em que a composição compreende 0,03% p/v de tacrolimus, 1,4% p/p de etanol e o alcano semifluorado é F4H5.

21. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, em que a composição compreende ainda um ou mais outros excipientes.

22. Uma forma de realização de acordo com qualquer uma das concretizações precedentes, em que a composição consiste essencialmente em 0,03% (p/v) de tacrolimus, 1,4% (p/p) de etanol e o alcano semifluorado é F4H5.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0098] A Figura 1 mostra os efeitos do tratamento com colírio de tacrolimus/SFA nas apresentações clínicas do modelo de camundongo com uveíte induzida por endotoxina (EIU) . EIU foi induzida em camundongos por injeção intravítrea de 200ng/LPS ocular como descrito abaixo. Imediatamente após a injeção de LPS, os camundongos foram tratados com 0,1% de dexametasona/PBS (DXM) ou 0,03% de tacrolimus/PBS (Tacro/PBS) ou 0,03% de colírio de Tacrolimus/SFA (Tacro/SFA), 3 vezes por dia. A avaliação clínica, incluindo imagens de fundo de olho, foi realizada 48 h depois.

[0099] As Figuras IA a E mostram imagens de fundo de olho não tratado de camundongos (A, C) , camundongos tratados com tacrolimus/PBS (C) , tratados com DXM (D) e tratados com tacrolimus/SFA (E) . A Figura 1 (F) mostra a classificação clínica de inflamação da retina nos

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37/53 diferentes grupos; estatísticas de acordo com o teste de Mann-Whitney.

[00100] A Figura 2 mostra a histopatologia de EIU em diferentes grupos de camundongos. Camundongos EIU foram tratados com 0,1% de dexametasona/PBS (DXM) ou 0,03% de Tacrolimus/PBS, ou 0,03% de colírios de tacrolimus/SFA 3 vezes por dia do dia 0 ao dia 2 após a indução da EIU. Os olhos foram coletados no dia 2 e processados para coloração H-E (coloração com hematoxilina e eosina). As Figuras 2A a D mostram imagens microscópicas de luz de camundongos EIU não tratados (A) como camundongos tratados com controle, camundongos tratados com Tacrolimus/PBS (B) , camundongos tratados com DXM (C) e camundongos tratados com tacrolimus/SFA (D) . A Figura 2E mostra a classificação histopatológica da inflamação retiniana. Um gráfico representa a classificação de um camundongo (isto é, a classificação média de dois olhos de um camundongo); estatística de acordo com o teste de Mann-Whitney (AC significa câmara anterior; CB significa corpo ciliar; Ir significa íris; Vi significa vítreo; Re significa retina).

[00101] Figura 3 mostra os efeitos do tratamento com colírio de tacrolimus/SFA na apresentação clínica após uveoretinite experimentalmente autoimune (EAU). A EAU foi induzida em camundongos C57BL/6J utilizando a imunização com o peptídeo IRBP1-20. No dia 14 pós-imunização (p.i.) os camundongos foram tratados com diferentes colírios oculares 3 vezes por dia. Imagens de fundo de olho foram feitas no dia 25 p.i. a partir de camundongos de EAU não tratados de controle (A), camundongos tratados com 0,03% de

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38/53 tacrolímus/PBS (B), camundongos tratados com dexametasona a 0,1% (DXM) (C) e tratados com 0,03% de tacrolimus/SFA (D). A Figura 3E mostra as alterações na avaliação clínica de EAU desde o dia 14 p.i. ao dia 25 p.i. em diferentes grupos (estatísticas de acordo com o teste de pares combinados de Wilcoxon). A Figura 3F mostra uma comparação da classificação clínica de EAU no dia 25 p.i. nos diferentes grupos (estatísticas de acordo com teste de Mann-Whitney).

[00102] A Figura 4 mostra a histopatologia de EAU em diferentes grupos de camundongos. Os camundongos EAU foram tratados com 0,1% de dexametasona (DXM), ou 0,03% de colírio ocular de tacrolimus/SFA, 3 vezes por dia, desde o dia 14 até o dia 24 p.i. Os olhos foram coletados no dia 25 p.i. e processados para coloração H-E. As Figuras 4A a D mostram imagens microscópicas de luz em camundongos não tratados de EAU de controle (A) , camundongos tratados com dexametasona (DXM) (B) , camundongos tratados com Tacrolimus/PBS (c) e camundongos tratados com tacrolimus/SFA (D) . A Figura 4E mostra a classificação histopatológica da inflamação retiniana. Um gráfico representa a classificação de um camundongo (isto é, a classificação média dos dois olhos de um camundongo) (estatística de acordo com o teste de Mann-Whitney).

[00103] A Figura 5 mostra os níveis de tacrolimus no vítreo (Figura 5A), coroide/esclera (Figura 5B) , retina (Figura 5C) e sangue total (Figura 5D) dos olhos normais do camundongo. Os camundongos foram tratados com colírio tacrolimus/SFA ou tacrolimus/PBS 3 vezes por dia durante 3 dias. Em diferentes momentos após o último tratamento com colírio (em 15 min., 30 min., 1 h, 2 h, 4 h, 6 h), amostras

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39/53 foram coletadas e processadas para medição de tacrolimus usando o método de espectrometria de massa em tandem com cromatografia líquida (LC-MS/MS). 0 nível de tacrolimus foi normalizado para o peso do tecido na retina e na coroide/esclera. Média ± DP N = 4, * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 em comparação com olhos tratados com tacrolimus/PBS ao mesmo tempo, ANOVA de 2 vias. + P <0,05, ++ P <0,01 em comparação com os olhos tratados com tacrolimus/PBS ao mesmo tempo (teste t não pareado). significa valores abaixo da capacidade de detecção no ensaio.

[00104] As Figuras 6A a D mostram os níveis de tacrolimus no vítreo dos olhos do camundongo com e sem uveíte. Os camundongos de controle sem uveíte e os camundongos com uveíte foram tratados com colírio de tacrolimus/SFA 3 vezes por dia durante 3 dias. Em diferentes momentos após o último tratamento com colírio (15 min., 30 min., 1 h, 2 h, 4 h, 6 h) foram coletadas amostras. A Figura 6A mostra os níveis de tacrolimus no vítreo. A Figura 6B mostra os níveis de tacrolimus nos tecidos da coroide/esclera. A Figura 6C mostra os níveis de tacrolimus nos tecidos da retina e a Figura 6d mostra os níveis de tacrolimus no sangue total. O nível de tacrolimus foi normalizado para o peso do tecido na retina e na coroide/esclera. Média ± DP N = 4; * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 em comparação com olhos de controle sem uveíte no mesmo momento. ANOVA de 2 vias. + P <0,05, ++ P <0,01 em comparação com os olhos sem uveíte ao mesmo tempo (teste t não pareado); designa o nível de tacrolimus abaixo do valor detectável no ensaio.

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40/53 [00105] A Figura 7 mostra a infiltração de células imunes observada no modelo de camundongo de uveite induzida por Endotoxina (EIU). No presente documento, as células imunes infiltrantes na retina foram medidas usando citometria de fluxo. Observou-se um nivel mais baixo de células imunes infiltrantes na retina quando se utilizaram colírio oftálmico de 0,03% (p/v) de tacrolimus/SFA, (controle = não tratado, Dex = 0,1% de dexametasona em PBS, Tacro/SFA = tacrolimus SFA, Tacro/PBS = 0,1 % tacrolimus em PBS; Marcadores de células imunes infiltrantes: Grl + = células positivas ao marcador granulocítico; LFA1 + = Antígeno 1 associado à função linfocitária encontrado em todas as células T e também em células B, macrófagos e neutrófilos; CD62L + = L-selectina (CD62L) molécula de adesão celular positiva encontrada em linfócitos; CCR2 + = monócitos inflamatórios positivos para receptores de quimiocinas CC tipo 2).

[00106] Os exemplos seguintes servem para ilustrar a invenção, no entanto, estes não devem ser entendidos como restringindo o âmbito da invenção. EXEMPLOS VISTA GERAL: Composições usadas:

[00107] Uma solução de 0,03% p/v de tacrolimus [0,3mg/ml] dissolvida em F4H5 contendo 1,4% (p/p) de etanol foi formulada para incorporar e administrar o fármaco altamente lipofílico a ser administrado topicamente na forma de colírio oftálmico a serem aplicadas 3 vezes por dia (1 gota/olho). Esta formulação é abreviada no presente documento como Tacro/SFA ou alternativamente como

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41/53 tacrolimus/SFA ou como Tac/SFA.

[00108] O tacrolimus suspenso em PBS (solução salina tamponada com fosfato, 0,03%) foi utilizado como controle. Esta formulação é abreviada no presente documento como Tacro/PBS ou alternativamente como tacrolimus/PBS ou como Tac/PBS.

[00109] Além disso, 0,1% de dexametasona (DXM) (Sigma-Aldrich, UK) suspensa em PBS foi usada como um controle de terapia padrão. Esta formulação é abreviada no presente documento como DXM ou alternativamente como Dex ou como 0,1% de dexametasona/PBS.

Animais:

[00110] Camundongos C57BL/6J com 10-12 semanas de idade foram tratados em conformidade com o Home Office Regulations for Animal (Scientific Procedures) Act 1986 (Reino Unido) e com a Association for Research in Vision and Ophthalmology Statement para o emprego de Animais nas Pesquisas Oftálmicas e de Visão. Todos os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Ética competente.

Avaliação clínica da inflamação ocular:

[00111] Os animais foram anestesiados por inalação de isoflurano (Vet Tech Solutions Ltd, Reino Unido) e as pupilas dilataram-se utilizando atropina a 1% e fenilefrina a 2,5% (Minims, Bausch e Lomb, UK). A gravidade da inflamação ocular foi avaliada ao microscópio levando em consideração a inflamação anterior e posterior (por exame de fundo de olho utilizando o sistema de imagem do fundo de olho) . A avaliação clínica para uveíte anterior foi classificado de acordo com um sistema de classificação previamente definido (graus 0 a 4) (Goureau e outros, 1995,

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J. Immunol. 154, 6518-6523):

- grau 0, ausência de reação inflamatória;

- grau 1, inflamação discreta da íris e vasos conjuntivais;

grau 2, dilatação dos vasos da íris e da conjuntiva com moderada exacerbação na câmara anterior;

- grau 3, hiperemia na íris associada ao efeito de Tyndall na caâmâra anterior; e

- grau 4, os mesmos sinais clínicos que para 3 mais a presença de fibrina ou sinéquias.

[00112] De modo a avaliar a inflamação posterior, foram feitas imagens de fundo de olho de cada camundongo utilizando o sistema TEFI (Topical Endoscopic Fundus Imaging) como descrito anteriormente (Xu e outros, 2008, Exp. Res. 87, 319-326). Imagens digitais de cada olho foram analisadas e a classificação clínica foi avaliada por dois pesquisadores independentes usando um sistema de classificação padrão desenvolvido por nós anteriormente (Xu e outros, 2008, Exp. Res. 87, 319-326).

Histologia:

[00113] Os olhos foram coletados a partir do dia 25 após a indução da Uveoretinite Autoimune Experimental (EAU) conforme descrito abaixo ou a partir do dia 2 após a indução nos camundongos de uveíte induzida por Endotoxina (EIU) para exame histológico como descrito abaixo. Todos os olhos foram fixados em glutaraldeído a 2,5% (p / v) (Agar Scientific Ltd, Stansted, Reino Unido) durante pelo menos 24 horas. Os olhos foram então embebidos em parafina e processados para coloração com hematoxilina e eosina (H &

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E) . Para cada olho, quatro seções de quatro camadas diferentes foram classificadas de acordo com os critérios descritos anteriormente (Agarwal e outros, 2012, Methods Mol. Biol. 900, 443-469).

Exemplo 1: Modelo de camundongo com uveíte induzida por endotoxina (EIU)

Indução de Uveíte Conduzida por Endotoxina (EIU) como modelo para uveíte anterior aguda humana:

[00114] EIU foi induzida em camundongos C57BL/6J por injeção intravítrea de LPS (lipopolissacarídeo) usando um protocolo previamente descrito (Rosenbaum e outros, 2011, Invest. Oftalmol. Vis. Sei. 52, 6472-6477) ligeiramente modificado como se segue: Escherichia coli 055: B5 LPS (Sigma, UK) foi dissolvido em solução salina tamponada com fosfato, isenta de pirogênios (PBS) . Os camundongos foram injetados por via intravítrea com 200ng/olho de LPS em 1 pL usando uma agulha de calibre 30 e uma seringa de 25 pL em um Repeating Dispenser (PB600-1, Hamilton, Nevada, EUA) . A inflamação intraocular começou 4 a 6 horas após o desafio com LPS por injeção intravítrea e atingiu o pico em 24 a 48h. A inflamação começou então a melhorar após 3 dias. O olho pode voltar ao normal dentro de uma semana (Rosenbaum e outros, 2011, Invest. Oftalmol. Vis. Sei. 52, 6472-6477) .

Tratamento de EIU:

[00115] Os camundongos foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos no estudo EIU: Grupo 1: Controle (sem colírio oftálmico), n=6 camundongos; Grupo 2: tratamento com 0,1% de dexametasona, n=6 camundongos; Grupo 3: tratamento com 0,03% de tacrolimus/PBS, n=6 camundongos;

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Grupo 4: 0,03% de tacrolimus/SFA, n=8 camundongos. Todos os camundongos foram tratados com colírios oculares três vezes por dia, iniciando imediatamente após a injeção intravítrea de LPS por dois dias. O estudo foi repetido duas vezes.

O efeito do colírio de Tacrolimus/SFA no tratamento de EIU:

[00116] A investigação clínica revelou ingurgitamento de vasos conjuntivais, infiltração maciça de células imunes na câmara anterior e o vítreo de camundongos EIU não tratados e tratados com PBS com tacrolimus às 48 h (Figura IA, B; setas) . As células infiltrantes foram mais frequentemente observadas na parte inferior do corpo vítreo (Figura IB) . Descolamento de retina e hemorragia foram observados em olhos com inflamação (Figura 1C). A gravidade da inflamação intraocular foi reduzida após o tratamento com administração de dexametasona (Figura ID) ou tacrolimus/SFA (Figura IE) comparado ao controle e grupos tratados com Tacrolimus/PBS (Figura 1F).

[00117] Consistente com os sinais clínicos, a análise histológica revelou características marcantes da EIU caracterizadas pelo acúmulo de células imunes na câmara anterior (CA), cavidade vítrea (Vi) e área do corpo ciliar (CB) em camundongos sem tratamento (Figura 2A) ou tratados com colírio Tacrolimus/PBS (Figura 2B). A destruição grave da retina (descolamento de retina, camadas retinianas desorganizadas, hemorragia) associada a infiltração maciça de células imunes na retina foi também observada (setas nas Figuras 2A e 2B). Infiltração branda de células no vítreo e retina foi observada em olhos tratados com 0,1% de dexametasona ou colírios de tacrolimus/SFA, e a arquitetura

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45/53 geral das camadas da retina permaneceu intacta (Figuras 2C, D) . Os resultados histopatológicos nos olhos tratados com dexametasona e tacrolimus/SFA foram significativamente inferiores aos dos olhos EIU controle não tratados (Figura 2E) . Estudos repetidos em dois conjuntos adicionais de camundongos revelaram resultados semelhantes.

[00118] Em resumo, o tratamento com colírios de tacrolimus/SFA reduziu a gravidade da uveíte aguda no modelo de camundongo com uveíte induzida por endotoxina (EIU): observaram-se reduções na classificação clínica, bem como na classificação histológica. Além disso, foi observado um nível mais baixo de células imunes infiltrantes na retina (localizada na parte posterior do olho).

Exemplo 2: Uveorretinite Autoimune Experimental (EAU)

Indução do modelo experimental de uveorretinite autoimune (EAU) em camundongo para uveíte posterior:

[00119] A EAU foi induzida como descrito anteriormente por Chen e outros, 2012 e Xu e outros, 2005. Camundongos C57BL / 6J foram imunizados subcutaneamente com 500 pg de peptídeo 1-20 de IRPB (GPTHLFQPSLVLDMAKVLLD; GL (Biochem) Shanghai Ltd, China) emulsionados em adjuvante completo de Freund (CFA, H37Ra, Disco Laboratories, Detroit, MI, EUA) . Os camundongos foram administrados com uma injeção intraperitoneal adicional de 100 pL (1,5 pg) de toxina de Bordetella pertussis (Tocris Bioscience, UK) . A inflamação da retina desenvolveu-se nos dias 12 a 14 após a imunização (p.i.) e atingiu o pico no dia 22 a 25 p.i. A gravidade da inflamação declina após o estágio de pico, no entanto, a inflamação da retina permanece ativa por mais de

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46/53 meses (Chen e outros, 2012) .

Tratamento de EAU:

[00120] No dia 14 p.i. os camundongos EAU foram divididos em quatro grupos com base na classificação clinica de inflamação e a classificação em cada grupo foi comparável. Grupo 1: Controle (sem tratamento, n=7 camundongos); Grupo 2: colírios de dexametasona a 0,1% (DXM) (n=7 camundongos); Grupo 3: colírio oftálmico 0,03% de tacrolimus/PBS (n=7 camundongos); Grupo 4: colírio oftálmico de 0,03% de tacrolimus/SFA (n=7 camundongos). Todos os camundongos nos grupos 2 a 4 receberam tratamento de colírio oftálmico três vezes por dia a partir do dia 14 p.i. ao dia 25 p.i.

O papel terapêutico do colírio de tacrolimus/SFA no modelo de uveite posterior em camundongos (EAU):

[00121] Tendo demonstrado que o tratamento com colírios de tacrolimus/SFA suprimiu a inflamação na EIU, seus efeitos terapêuticos foram avaliados em EAU, um modelo de uveite posterior em camundongos. A administração tópica dos colírios foi iniciada após o início da uveite, isto é, 14 dias p.i. . Os resultados clínicos de EAU foram comparáveis entre os grupos de estudo antes do tratamento (isto é, dia 14). Inflamação retiniana grave, caracterizada por infiltração retiniana extensa (lesões esbranquiçadas, vide Figura 3A e 3B), pneumonia (setas, Figura 3A) e lesões lineares (cabeça de seta, Figura 3A) foi observada em camundongos não tratados e tratados com tacrolimus/PBS tratados com EAU. Inflamação leve caracterizada por pequenos infiltrados discretos, pneumonia leve e inchaço da cabeça óptica (Figuras 3C & 3D) foram observados em olhos

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47/53 tratados com dexametasona e tacrolimus/SFA. A gravidade da inflamação da retina aumentou do dia 14 para o dia 25 p.i. em todos os grupos, embora o incremento tenha sido mais significativo nos grupos tratados com tacrolimus/PBS em comparação com os grupos tratados com tacrolimus/SFA e dexametasona (Figura 3E). No dia 25 p.i., as classificações clínicas dos grupos tratados com dexametasona e tacrolimus/SFA foram significativamente inferiores às dos camundongos não tratados (Figura 3F).

[00122] O exame histológico revelou infiltração maciça de células imunes na retina e vítreo nos olhos de camundongos não tratados (Figura 4A) e tratados com tacrolimus/PBS (Figura 4C) . As camadas retinianas foram desorganizadas nestes olhos. Pequenos números de infiltração de células imunes e lesões granulomatosas (setas, Figura 4) foram observados na dexametasona (Figura 4B) e olhos tratados com Tacrolimus/SFA (Figura 4D), embora a estrutura retiniana estivesse praticamente intacta nesses camundongos. A classificação histopatológica global de EAU foi significativamente menor em camundongos tratados com dexametasona e tacrolimus/SFA em comparação com controles não tratados (Figura 4E). Nossos resultados sugerem que o colírio de Tacrolimus/SFA é eficaz para o controle da inflamação ocular em curso na EUA.

[00123] Em resumo, o tratamento com colírios de tacrolimus/SFA reduziu a inflamação da retina no modelo de camundongo de Uveorretinite Autoimune Experimental (EAU): observaram-se reduções na classificação clínica, bem como na classificação histológica.

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Exemplo 3: Estudo de farmacocinética e absorção do colírio de tacrolimus / SFA Tratamento com colírios e grupos: [00124] A farmacocinética do colírio de tacrolimus/SFA foi realizada em ambos camundongos normais e em camundongos EIU (como descrito acima). Camundongos normais C57BL/6J ou camundongos EIU (imediatamente após a injeção de LPS) foram tratados com colírios 0,03% de tacrolimus/SFA ou 0,03% e tacrolimus/PBS (60pL/gota) três vezes ao dia durante três dias. Em diferentes momentos (15 min., 30 min., 1 h, 2 h, 4 h e 6 h) após o último tratamento com colírio, os animais foram sacrificados e as seguintes amostras foram coletadas para medição de tacrolimus mo (1) humor vítreo, (2) retina, (3) coroide/esclera e (4) sangue. Utilizaram-se 4 camundongos em cada grupo e utilizaram-se 20 camundongos normais e 8 camundongos EIU que não receberam qualquer tratamento de colírio como controles. Coleta e processamento de amostras: [00125] Cada camundongo forneceu 6 a 8pL de humor vítreo. Os tecidos da retina foram dissecados e pesados imediatamente após sacrificar o animal e colocados em um tubo Eppendorf. Os tecidos coroide/esclerais foram dissecados e pesados imediatamente após o sacrifício do animal e colocados em um tubo Eppendorf. Uma quantidade de 200 a 500 pL de sangue integral foi coletada de cada camundongo em tubos revestidos com EDTA. [00126] Todas as amostras foram armazenadas a 20°C e, em seguida, o tacrolimus foi quantitativamente determinado por cromatografia líquida em tandem

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49/53 espectrometria de massa (LC-MS/MS) método, que foi qualificado para as respectivas matrizes antes da análise da amostra. 0 limite inferior de quantificação foi 0,25ng/mL para sangue, 0,05ng/mL para retina e homogenato de coroide/esclera e l,25ng/mL para o vítreo.

Farmacocinética e absorção do colírio de Tacrolimus em camundongos normais sem inflamação:

[00127] Os níveis de tacrolimus no humor vítreo coletados entre 15 min. e 2 h após o tratamento com colírio tacrolimus/SFA foram entre 2 a 6ng/mL. Às 4 e 6 horas, o nível de tacrolimus estava abaixo do nível detectável na maioria das amostras em camundongos tratados com tacrolimus/SFA. Nos camundongos tratados com tacrolimus/PBS, o nível de tacrolimus estava abaixo do nível detectável em todas as amostras, à exceção daquelas a partir de 1 hora. O nível de tacrolimus no vítreo do grupo tacrolimus/SFA foi significativamente superior aos do grupo tacrolimus/PBS em 1 h após a administração (Figura 5A).

[00128] Na coroide/esclera, foram detectados níveis elevados de tacrolimus entre 15 min. e 1 h após a administração do colírio de tacrolimus/SFA (276ng/g de tecido a 337ng/g de tecido, Figura 5B) . Os níveis foram então reduzidos para 150ng/g de tecido às 2 h e 70ng/g de tecido às 6h (Figura 5B) . Nos olhos tratados com tacrolimus/PBS, foram detectados 23ng/g e 34ng/g de tecido de tacrolimus entre 15 min. e 1 h, e os níveis foram reduzidos para 8,45ng/g de tecido por 6 h (Figura 5B) . Os níveis de tacrolimus na coroide/esclera no grupo tacrolimus/SFA em todos os momentos foram significativamente superiores aos do grupo tratado com

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50/53 tacrolimus/PBS (Figura 5B).

[00129] Os níveis de tacrolimus na retina no tacrolimus/SFA foram de 48ng/g de tecido aos 15 min. após a administração do colírio e aumentaram para 90ng/g de tecido em 1 h (Figura 5C) . Os níveis de tacrolimus diminuíram ligeiramente após 2 h, mas permaneceram no tecido a 53ng/g às 6 h após o tratamento com colírio (Figura 50). Nos olhos tratados com tacrolimus/PBS, os níveis de tacrolimus estavam entre 2 a 7ng/g de tecido em todos os momentos e foram significativamente inferiores aos dos olhos tratados com tacrolimus/SFA (Figura 50).

[00130] O nível de tacrolimus no sangue de camundongos normais tratados com o tacrolimus/SFA aumentou de 35ng/mL aos 15 min. para 118ng/mL aos 30 min. e depois foi reduzido de 1 h mas permaneceu a 62ng/mL às 2 h após o tratamento (Figura 5D) . Nível inferior de tacrolimus (2 a 40ng/mL) foi detectado no sangue em camundongos tratados com colírio de tacrolimus/PBS. Não houve diferença entre os controles tratados com tacrolimus/PBS e não tratados (Figura 5D) . Os níveis de tacrolimus no sangue no grupo tratado com tacrolimus/SFA foi significativamente maior do que no grupo tratado com tacrolimus/PBS aos 30 min., lhe 4 h (Figura 5D).

[00131] Os resultados mostram que o tacrolimus/SFA tem uma maior permeabilidade que o tacrolimus/PBS, e podem penetrar rapidamente nas barreiras oculares nos olhos de camundongo normais e distribuir a todos os tecidos oculares assim como a circulação sanguínea rapidamente (15 a 30 min.) após a administração do colírio. Farmacocinética e Absorção do Colírio de

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Tacrolimus em Camundongos com Uveite:

[00132] Uma vez que apenas o tacrolimus/SFA foi testado nos olhos da uveíte, a farmacocinética do colirio do tacrolimus/SFA entre os olhos com uveíte e os olhos sem uveíte foi comparada. Os níveis de tacrolimus no vítreo de camundongos com uveíte foram de 24ng/mL e 14ng/mL aos 15 min. e 30 min., respectivamente, de modo significativo maiores do que nos camundongos sem uveíte (2,5ng/mL e 2,3ng/mL, respectivamente). Seis horas após a administração do colírio, foram detectados lOng/mL de Tacrolimus no vítreo dos olhos com uveíte, em comparação com l,lng/mL nos olhos sem uveíte (Figura 6A).

[00133] O nível de tacrolimus na coroide/esclera foi de 855,5ng/g de tecido aos 15 min. após a administração do colírio em camundongos com uveíte em comparação com 27 6ng/g de tecido em camundongos normais (Figura 6B) . As concentrações de tacrolimus diminuíram aos 30 min. e 1 h nos olhos com uveíte a níveis comparáveis aos do olho sem uveíte. Às 2 horas e 6 horas, os camundongos com uveíte tinham níveis significativamente mais altos de tacrolimus em comparação com os camundongos normais sem inflamação (Figura 6B).

[00134] Níveis significativamente mais elevados de tacrolimus foram detectados na retina de camundongos com uveíte em comparação com camundongos sem uveíte após 15 min. (102 vs 48ng/g tecido) e 2 h (115ng/g vs 61ng/g tecido) (Figura 6C) de administração. O nível de tacrolimus da retina às 6 h foi aproximadamente 67% do que em 15 min. nos olhos de uveíte (Figura 6C).

[00135] O nível sanguíneo de tacrolimus foi de

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280 ng/mL em camundongos com uveíte 15 min. após a administração, significativamente maior do que em camundongos sem uveíte (35ng/mL) (Figura 6D) . Os níveis diminuíram em camundongos com uveíte para 143ng mL aos 30 min. e para 73ng/mL às 6 h após o tratamento com colírio. Nos camundongos sem inflamação, os níveis sanguíneos de tacrolimus aumentaram aos 30 min. para 118ng/mL e permaneceram nos níveis comparáveis aos dos camundongos com uveíte em outros pontos temporais (Figura 6D).

[00136] O presente estudo farmacocinético mostra que o tacrolimus/SFA, mas não o tacrolimus/PBS rapidamente (em 15 minutos), penetra nas barreiras teciduais (por exemplo, epiteliais, membranas e barreiras endoteliais) após administração tópica e atinge tecidos oculares como coroide/esclera em níveis significativos no camundongo normal.

[00137] A penetração nos tecidos oculares (como coroide/esclera e retina) é muito maior quando o olho está inflamado, e os níveis de tacrolimus na coroide/esclera de camundongos com uveíte foram 3 e 8 vezes maiores do que em camundongos sem uveíte 15 min. após a administração.

[00138] Além disso, o tacrolimus/SFA penetra não apenas na barreira tecidular geral, mas também na barreira ocular. Quantidades significativas de tacrolimus foram detectadas no vítreo e na retina após administração tópica aos 15 min. e o fármaco permaneceu na retina durante pelo menos 6 h nos olhos de camundongo normais. Os níveis de tacrolimus no vítreo e na retina foram 2 e 10 vezes mais elevados na uveíte ocular do que nos olhos sem uveíte aos 15 min. após a administração.

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53/53 [00139] Os dados sugerem que o tacrolimus/SFA é capaz de penetrar nas barreiras oculares (como coroide/esclera) em camundongos, atingir o tecido intraocular (como a retina) em níveis terapêuticos e suprimir a inflamação da retina. É demonstrado que 0,03% de colírios de tacrolimus/SFA suprimem a inflamação intraocular nos modelos EIU e EAU. O Tacrolimus/PBS não mostrou qualquer efeito supressor nos modelos EIU e EAU e não foi capaz de penetrar nas barreiras oculares.

Claims (15)

1. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de tacrolimus e um veiculo liquido compreendendo pelo menos um alcano semifluorado para emprego em um método de tratamento de uma doença intraocular inflamatória.

2. Composição para uso de acordo com a reivindicação 1, em que a doença intraocular inflamatória é selecionada do grupo consistindo em uveite, inflamação retinal, esclerite e neurite óptica ou suas combinações.

3. Composição para uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a doença intraocular inflamatória é selecionada de uveite, inflamação retiniana e combinações destas.

4. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a doença intraocular inflamatória é uveite.

5. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a uveite é uveite anterior e / ou uveite intermediária e / ou uveite posterior.

6. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o alcano semifluorado é um composto da fórmula F (CF2) n (CH2) _mH em que nem são números inteiros independentemente selecionados da gama de 3 a 10.

7. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o referido alcano semifluorado é selecionado do grupo que consiste em F4H5, F4H6, F6H6 e F6H8.

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8. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a referida composição é formulada na forma de uma solução, suspensão ou emulsão.

9. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que a referida composição é administrada topicamente ao olho, pálpebra do olho, saco ocular, superfície do olho ou a um tecido oftálmico.

10. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a referida composição é administrada como gotas simples com um volume de cerca de 5 a 50 pg por dose por olho.

11. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a referida composição é administrada até 4 vezes por dia.

12. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a composição é administrada a pacientes com tratamento de primeira linha de uma doença ocular inflamatória.

13. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a composição é administrada a pacientes tratados com esteroides como o tratamento de primeira linha.

14. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a composição compreende 0,01% (p / v) a 0,05% (p / v) de tacrolimus, 0,2 a 1,4% (p / p) de etanol e o alcano semifluorado é F4H5.

15. Kit compreendendo a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores e um recipiente para manter a composição, em que

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3/3 o recipiente compreende, de preferência, meios de distribuição adaptados para administração tópica da composição a uma superfície de olho, de preferência em uma pálpebra inferior. o saco lacrimal ou a um tecido oftálmico.