BR112019004989B1

BR112019004989B1 - Uplemento para ração animal e método para preparar um suplemento para ração animal

Info

Publication number: BR112019004989B1
Application number: BR112019004989-4A
Authority: BR
Inventors: Matias JANSEN; Filip Nuyens; Ilse Mast
Original assignee: Kemin Industries, Inc
Priority date: 2016-09-16
Filing date: 2017-09-15
Publication date: 2023-04-04
Also published as: EP3512349A4; GB2569073A; EP3512349A1; AU2017326435B2; BR112019004989A2; AU2017326435A1; BR112019004989A8; US20180077951A1; GB2569073B; KR20190052072A; WO2018053286A1; GB201904607D0; RU2731643C1; ZA201901458B

Abstract

Uma composição de suplemento para ração animal compreendendo uma combinação de lisolecitina ou compostos ricos em lisofosfolipídeo purificado, monoglicerídeos e pelo menos um emulsificante sintético em quantidades suficientes para intensificar a digestibilidade, absorção ou utilização de nutrientes da ração.

Description

Pedidos relacionados

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pedido de Patente Provisório US No. 62/454.311, depositado em 3 de fevereiro de 2017, e reivindica o benefício de prioridade para o Pedido de Patente Provisório US No. 62/395.449, depositado em 16 de setembro de 2016, que são ambos aqui incorporados por referência na sua totalidade.

Fundamento da invenção

[002] A presente invenção refere-se no geral a suplementos para ração animal e, mais especificamente, a um suplemento para ração animal que é uma combinação sinérgica de ingredientes que melhora a digestibilidade e absorção de gorduras e outros nutrientes da ração animal.

[003] A busca de criação pecuária com ração de alta qualidade ao menor custo possível apresenta grandes desafios na produção pecuária moderna. Por um lado, as raças pecuárias modernas são de rápido crescimento e altamente eficientes na conversão de ração em carne, ovos ou leite. Por outro lado, a conversão eficiente requer um amplo suprimento de nutrientes. O aumento dos custos de ração e a disponibilidade de matérias-primas alternativas de ração estimulam os produtores pecuários a usar dietas reformuladas que sejam mais econômicas, mas também mais difíceis de digerir. Devido à sua alta concentração de energia, grandes quantidades de gorduras e óleos são comumente adicionadas à ração para atender às crescentes exigências diárias de energia. Esta ração com alto teor de gordura tipicamente apresenta condições dietéticas desafiadoras para o gado. Portanto, há uma necessidade de aditivos para rações que possam melhorar a digestibilidade e a absorção de gorduras e outros nutrientes da ração na moderna indústria de produção pecuária.

[004] As lisolecitinas têm sido usadas por muitos anos para melhorar a digestibilidade e absorção de nutrientes, especialmente gorduras, da ração. É postulado que as lisolecitinas suplementadas pela ração, juntamente com os sais biliares, atuam como um emulsificante nas primeiras etapas da digestão lipídica ( ZHANG et al., “Effect of fat type and lysophosphatidylocholine addition to broiler diets on performance, apparent digestibility of fatty acids, and apparent metabolizable energy content”, Animal Feed Science and Technology, Volume 163, 2011, pp. 177-184). Ao aumentar a relação superfície/volume da gordura no trato intestinal, acredita-se que as lisolecitinas aumentem a área superficial total disponível para que as lipases se fixem à interface das gotículas de gordura e, assim, aumentem a hidrólise lipídica. Adicionalmente, recentemente foi proposto que as lisolecitinas são capazes de participar na formação de micelas mistas ( JANSEN, Matias, “Modes of action of lysophospholipids as feed additives on fat digestion in broilers”, KU Leuven, Science, Engineering & Technology, 2015, pp. 218). Deste modo, as lisolecitinas podem desempenhar um papel crítico deslocando os produtos da hidrólise lipídica (monoglicerídeos e ácidos graxos livres) da interface de gotículas, permitindo a continuação da hidrólise lipídica. Por fim, as lisolecitinas são conhecidas por melhorarem a absorção de lipídeos e possivelmente outros nutrientes (Jansen, 2015; AT4.2). Não se sabe se a absorção de lipídeos é um efeito secundário da interferência da lisolecitina na formação de micelas ou o resultado de uma interação direta de lisolecitinas com a membrana do enterócito ou as proteínas da membrana do enterócito.

[005] Os monoglicerídeos são gerados durante o processo de hidrólise lipídica no animal (LAIRON et al., “Digestion and absorption of lipids”, Designing Functional Foods: Measuing and Controlling Food Structure Breakdown and Nutrient Absorption, 2009, pp. 13). Durante o processo de digestão de gorduras e óleos, o complexo colipase-lipase primeiro hidrolisa os triglicerídeos em diglicerídeos e ácidos graxos livres. Em uma etapa seguinte, o complexo colipase-lipase hidrolisa os diglicerídeos em monoglicerídeos e ácidos graxos livres. Estes monoglicerídeos e ácidos graxos livres, em seguida, organizam as micelas misturadas que são subsequentemente absorvidas pelos enterócitos do intestino delgado. Os monoglicerídeos têm um alcance de aplicação muito ampla. Na indústria alimentar eles são usados em produtos de panificação, confeitaria, margarinas, sucos e produtos lácteos, onde podem funcionar como composto ligante, agente antiespumante, agente aromatizante, estabilizante, espessante, lubrificante e texturizante. Na indústria cosmética, os monoglicerídeos são usados em diferentes óleos, pomadas e cremes hidratantes, onde funcionam como agentes emulsionantes de dispersão e (água em óleo). Outros usos de monoglicerídeos incluem o PVC, indústria farmacêutica e têxtil.

[006] O uso de monoglicerídeos na indústria de ração é limitado. Monoglicerídeos específicos esterificados com ácidos graxos de cadeia curta (<7 átomos de carbono) são usados como um agente antimofo e antimicrobiano (WO2010/106488; AT4.4). Os monoglicerídeos com maiores comprimentos de cadeia (> 7 átomos de carbono) são usados principalmente como auxiliar técnico para estabilizar fisicamente as formulações. Até onde sabemos, existe um aditivo de ração comercialmente disponível que inclui um monoglicerídeo específico (monoestearato de glicerol) e afirma aumentar a digestão e absorção de nutrientes em animais (comercialmente conhecido como LipidMate). No entanto, não há literatura disponível sobre o modo de ação exibido por esses monoglicerídeos quando adicionados à ração para aumentar a digestão e absorção de nutrientes. Além disso, altos níveis de inclusão (80-100 gramas por tonelada de ração) são propostos pelo fabricante para alcançar essas melhorias e o produto não contém lisolecitina e/ou ricinoleato de glicerol polietilenoglicol.

[007] Um emulsificante sintético que é normalmente usado na indústria de rações é o ricinoleato de glicerol polietilenoglicol (E484; Registro Comunitário dos Aditivos para as Rações - Reg. Da UE N.° 1831/2003). O ricinoleato de glicerol polietilenoglicol é composto por um esqueleto triglicerídeo no qual os ácidos graxos foram etoxilados em um processo industrial. Dependendo das condições do processo, o grau de etoxilação pode variar entre 8 e 200 grupos de óxido de etileno. O ricinoleato de glicerol polietilenoglicol é o principal constituinte do óleo de rícino etoxilado. O óleo de rícino etoxilado é comercializado como um aditivo de rações para aumentar a digestão de nutrientes em animais. Altos níveis de inclusão (200500 gramas por tonelada de ração) são propostos pelos fabricantes para alcançar essas melhorias. É postulado que esses emulsificantes sintéticos também atuam como emulsificantes nos primeiros estágios da digestão lipídica, aumentando a relação superfície/volume da gordura no trato intestinal ( Excential Energy Plus, ROVERS, Marc, “Saving energy and feed costs with nutritional emulsifier”, International Poultry Production, Volume 22, No. 4, pp. 2). No entanto, existe um compromisso entre a emulsificação aumentada da gordura e o impedimento estereoquímico dos componentes emulsificantes aderidos à interface das gotículas lipídicas. Se muitos emulsificantes sintéticos são aderidos à interface de gotículas lipídicas, a molécula relativamente grande de ricinoleato de glicerol polietilenoglicol pode fisicamente impedir a ligação do complexo colipase-lipase à interfase de gotículas.

Sumário da invenção

[008] É verificada uma fórmula de produto que consiste em (1) lisolecitina ou compostos ricos em lisofosfolipídeos purificados, (2) monoglicerídeos e (3) emulsificante sintético ou misturas de emulsificantes sintéticos. O produto é útil como aditivo de ração, pois intensifica a digestibilidade, absorção e utilização de nutrientes. Além disso, a fórmula tem vários efeitos fisiológicos positivos que excedem os benefícios da lisolecitina, monoglicerídeos ou emulsificantes sintéticos isoladamente.

Breve descrição dos desenhos

[009] A Figura 1 é um gráfico do acúmulo de ácidos graxos livres durante a hidrólise in vitro de gordura animal (Controle), gordura animal com lisolecitina, gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A) e gordura animal de uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B); os tratamentos experimentais foram realizados em triplicata; as concentrações médias dos lipídeos (mg/ml) são dadas ao longo do tempo (min), com barras de erro indicando os valores de erro padrão.

[0010] A Figura 2 é um gráfico da taxa de liberação de ácido graxo livre expressa como a constante da velocidade aparente (k) para a hidrólise in vitro de gordura animal (Controle), gordura animal com lisolecitina, gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A) e gordura animal de uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B); os dados são médias de três observações por tratamento, com barras de erro indicando os valores de erro padrão. É importante enfatizar que valores a-d com sobrescritos diferentes são significativamente diferentes (P <0,05).

[0011] A Figura 3 é um gráfico da absorção de monoglicerídeos e ácidos graxos livres gerados durante a hidrólise in vitro de gordura animal (Controle), gordura animal com lisolecitina, gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A) e gordura animal de uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B) por monocamadas diferenciadas de células de adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2) e expressa como percentagem de monoglicerídeos aplicados e ácidos graxos livres; os dados são médias de três observações por tratamento, com barras de erro indicando os valores de erro padrão. Importante mencionar que valores dentro de um parâmetro com sobrescritos diferentes são significativamente diferentes (P <0,05).

Descrição da invenção

[0012] As lisolecitinas são preparadas pela hidrólise enzimática da lecitina. As lisolecitinas têm tipicamente uma quantidade total de lisofosfolipídeos entre 45 e 180 g/kg, dos quais 20 a 80 g/kg de lisofosfatidilcolina, 10 a 40 g/kg de lisofosfatidiletanolamina, 10 a 40 g/kg de lisofosfatidilinositol e 5 a 20 g/kg de ácido lisofosfatídico (WP-08-00120; AT4.8). As taxas de inclusão de lisolecitina na ração animal variam tipicamente de 50 a 250 gramas por tonelada de ração, embora outras inclusões possam ser usadas dependendo das condições da dieta e das espécies animais. Para alcançar os efeitos desejados, as taxas de inclusão de aditivos para ração baseados em óleo de rícino etoxilado variam tipicamente de 200 a 500 gramas por tonelada de ração animal. Da mesma forma, uma taxa de inclusão entre 100 e 150 gramas por tonelada de ração animal para um aditivo de ração baseado em monoglicerídeos foi proposta.

[0013] A presente invenção divulga que uma taxa de inclusão típica de lisolecitinas, por exemplo, 150 gramas por tonelada de ração, pode ser suplementada com quantidades menores de monoglicerídeos, por exemplo, 25 gramas por tonelada, e emulsificantes sintéticos, por exemplo 2,5 gramas por tonelada, para adicionalmente intensificar as melhorias obtidas com lisolecitinas. Os níveis de inclusão de monoglicerídeos e emulsificante sintético na presente invenção estão bem abaixo das taxas de inclusão tipicamente usadas. No entanto, a combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético resultou em uma reação inesperada e sinérgica, proporcionando efeitos fisiológicos positivos que excedem os benefícios da lisolecitina, monoglicerídeos ou emulsificantes sintéticos isolados.

[0014] Devido à natureza inesperada dos eventos sinérgicos, o modo exato de ação de uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético não é conhecida no momento da invenção. Pode ser postulado que, além do conhecido impacto dos lisofosfolipídeos na emulsificação lipídica, pequenas quantidades de moléculas emulsificantes sintéticas otimizam ainda mais a emulsificação de lipídeos na ração.

[0015] Além disso, as excelentes propriedades emulsificantes dos emulsificantes sintéticos podem melhorar a liberação de lipídeos da matriz alimentar e, assim, melhorar a extensão e a taxa de cobertura dos lipídeos na ração pelos lisofosfolipídeos do aditivo.

[0016] As mudanças nas condições ambientais (por exemplo, liberação de sais biliares da vesícula biliar) que acompanham a entrada das gotículas lipídicas no duodeno iniciam o deslocamento de lisofosfolipídeos da interfase de gotículas na direção da formação de micelas misturadas. A presença de pequenas quantidades de monoglicerídeos pode intensificar ainda mais esse deslocamento para a formação “inicial” de micelas, pois monoglicerídeos e ácidos graxos são necessários além dos lisofosfolipídeos e sais biliares. Pequenas quantidades de ácidos graxos livres no geral já são geradas pela hidrólise de triglicerídeos em diglicerídeos e ácidos graxos livres durante a fase pré-duodenal da digestão lipídica. Os monoglicerídeos, no entanto, são apenas formados pela hidrólise de diglicerídeos que ocorre tipicamente no intestino delgado do animal. Através da ação sinérgica dos lisofosfolipídeos e monoglicerídeos durante a formação inicial de micelas, os monoglicerídeos podem ter um papel crítico ao deslocar os produtos da hidrólise da interface e permitir que a hidrólise dos lipídeos continue.

[0017] Outra interação entre os lisofosfolipídeos da lisolecitina e monoglicerídeos pode ser observada na interface da gotícula quando os sais biliares entram na interface das gotículas. Uma interação direta entre o grupo de cabeça polar de moléculas ativas de superfície, tais como (liso)fosfolipídeos e monoglicerídeos e sais biliares foi observada ( DREHER et al., “Surface Chemistry of the Monoglyceride-Bile Salt System: Its Relationship to the Function of Bile Salts in Fat Absorption” Journal of Colloid and Interface Science, Volume 25, 1967, pp. 71-83). A interação permite que a face hidrofóbica dos sais biliares gire e entre em contato mais próximo com a interface. A interação combinada de lisofosfolipídeos e monoglicerídeos com sais biliares pode melhorar a ligação do sal biliar à gotícula lipídica, o que, por sua vez, melhorará a taxa de hidrólise.

[0018] Por fim, tal como descrito para os lisofosfolipídeos, a absorção de lipídeos e possivelmente outros nutrientes pode ainda ser melhorada como um efeito secundário da interferência de monoglicerídeos e lisofosfolídeos com a formação de micelas.

[0019] Considerando que a quantidade de lipídeos em diferentes rações pode variar em grande extensão e considerando que a taxa de inclusão de compostos visando a melhoria e absorção de nutrientes é tipicamente relacionada à quantidade de lipídeos na ração, a presente invenção refere-se ao uso de uma combinação de lisolecitina a uma taxa de inclusão entre 15 e 1500 gramas por tonelada, monoglicerídeos a uma taxa de inclusão entre 2,5 e 250 gramas por tonelada e emulsificante sintético a uma taxa de inclusão de 0,25 a 25 gramas por tonelada de ração.

[0020] As lisolecitinas, os monoglicerídeos e os emulsificantes sintéticos podem ser aplicados separadamente ao lote de ração, combinados em uma única pré-mistura ou como uma preparação de pré-misturas. Os produtos, separadamente ou combinados, podem ser aplicados como líquidos ou colocados em um veículo adequado (por exemplo, frações de sílica ou fibras vegetais) e aplicados como produtos secos.

[0021] Os lisofosfolipídeos são os componentes ativos na lisolecitina. Assim, na presente invenção, em vez de lisolecitina, os lisofosfolipídeos podem ser adicionados à pré-mistura ou ração como componentes purificados ou concentrados.

[0022] Os monoglicerídeos são compostos de um grupo de glicerol que é esterificado na posição sn-1, sn-2 ou sn-3 com um ácido graxo. A presente invenção refere-se a monoglicerídeos ou misturas de monoglicerídeos contendo ácidos graxos com comprimentos de cadeia entre 1 e 24 átomos de carbono, ou sem ligações duplas ou com uma ou mais ligações duplas. Em relação ao número de ligações duplas nos monoglicerídeos, os monoglicerídeos considerados nesta invenção incluem aqueles com um número de iodo entre 0 e 200 gI2/100g.

[0023] Os emulsificantes sintéticos considerados nesta invenção referem-se especificamente ao ricinoleato de glicerol polietilenoglicol (E484) contendo 8 a 200 grupos de óxido de etileno. A presente invenção refere-se à extensão a todos os emulsificantes, incluindo, mas não se limitando a, emulsificantes conforme aprovados no Registro Comunitário de Aditivos para as Rações (Reg. Da UE n.° 1831/2003), tais como ésteres de polietileno glicol de ácidos graxos de óleo de soja (E487) e monolaurato de sorbitano (E493). Relacionado com a estrutura molecular dos emulsificantes, os emulsificantes considerados nesta invenção incluem aqueles com um equilíbrio hidrofílico- lipofílico (valor de HLB) entre 2 e 20. EXEMPLO 1: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar a hidrólise lipídica in vitro.

[0024] Nas instalações de pesquisa da Kemin Europa NV (Herentals, Bélgica), um modelo de hidrólise lipídica in vitro foi empregado para avaliar o impacto de misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético em amostras de hidrólise lipídica in vitro.

Materiais e métodos

[0025] Gordura animal, lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético. Uma amostra de gordura animal, destinada a ração animal, foi fornecida pelo Instituto de Pesquisa Agrícola e Pesqueira (ILVO, Merelbeke, Bélgica). Lisolecitina (lecitina de soja hidrolisada com um teor total de lisofosfolipídeos de 124,9 g/kg), monooleato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono e uma dupla ligação; número de iodo de 75,8 g I2/100g), monoestearato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono sem ligações duplas, o número de iodo de 0,6 g I2/100g) e emulsificante sintético (óleo de rícino etoxilado contendo em média 40 grupos de óxido de etileno e com um valor de HLB de 12,5) foram usados para preparar as misturas.

[0026] Misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e um emulsificante sintético. Duas misturas, indicadas como Mistura A e Mistura B (Tabela 1), foram preparadas pesando com precisão todos os componentes juntos. Em seguida, a Mistura A foi agitada a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos usando um agitador magnético. Devido à diferença na viscosidade dos monoglicerídeos, a Mistura B foi primeiro aquecida a 60°C e depois agitada a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos. Tabela 1 - Visão geral dos teores da Mistura A e da Mistura B

[0027] Tratamentos experimentais. Foram dispersados 1,20 g de lisolecitina, 1,42 g de Mistura A e 1,42 g de Mistura B em 100,00 g de gordura animal para preparar as dispersões de gordura armazenada. Desta forma, os teores finais de lisolecitina nos três tratamentos experimentais são idênticos (Tabela 2). Além disso, os tratamentos de Mistura A e Mistura B diferem apenas no tipo de monoglicerídeo incluído (Tabela 1 e Tabela 2). Tabela 2 - Visão geral das dispersões de gordura armazenada para avaliação da hidrólise lipídica

[0028] Modelo de hidrólise lipídica. O modelo de hidrólise lipídica descrito anteriormente por Jansen et al. (2015) foi usado para avaliar o efeito dos componentes na hidrólise lipídica. O fluido intestinal simulado em estado de jejum (FaSSIF) foi preparado adicionando 2,24 g de pó de FaSSIF (Biorelevant.com Ltd, Croydon, Reino Unido) a 1 l de tampão de fosfato (35 mM, pH 6,5) contendo 106 mM de NaCl. Alíquotas de 0,25 g de cada um dos respectivos tratamentos de gordura armazenada (Tabela 2) e 14,75 ml de FaSSIF foram adicionadas a tubos de centrífuga de 50 ml. O teor de cada tubo foi misturado durante 30 s com um misturador de alto cisalhamento (24000 rpm; IKA ULTRA-TURRAX T18, Staufen, Alemanha). Em seguida, 24 mg de pancreatina foram adicionados (P7545, Sigma Aldrich) a cada tubo e estes foram incubados durante duas horas a 40°C enquanto se agitava (250 rpm). Os teores finais nas digestões foi 106 mM de NaCl, 1,6 g/l de pancreatina, 1,6 g/l de sais biliares e 16,7 g/l de gordura animal. Aos 0, 15, 30, 60, 90 e 120 min de incubação, uma amostra de 0,5 ml de cada digestão foi retirada e diluída em 9,5 ml de tetra-hidrofurano (THF, grau HPLC, VWR International, Leuven, Bélgica) para inativar as enzimas e preparar a diluição apropriada para análise lipídica. Cada digestão foi realizada em triplicata. No final da incubação, as amostras de hidrólise do tratamento de controle, o tratamento com Mistura A e o tratamento com Mistura B foram submergidos em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C (ver Exemplo 2).

[0029] Análises lipídicas. Em cada amostra obtida durante a digestão lipídica in vitro, o grau de hidrólise lipídica foi analisado por HPLC. Os ácidos graxos livres foram determinados por cromatografia de permeação em gel (coluna PL 1110-6520, 5 μm 100A 300 x 7,5 mm, Agilent Technologies, Diegem, Bélgica) com Detector de Espalhamento de Luz Evaporativo (ELSD 85, VWR International). O THF foi usado como a fase móvel a uma taxa de fluxo de 0,5 ml/min.

[0030] Cálculos e análises estatísticas. O seguinte modelo cinético de primeira ordem, usado anteriormente por Jansen et al. (2015) para analisar os dados de digestibilidade, foi aplicado aos dados obtidos para a liberação de ácidos graxos livres durante a digestão in vitro:

onde k (min-1) é a constante de velocidade aparente para liberação de ácidos graxos livres, Ct é a quantidade (mg/ml) de ácidos graxos livres liberados em um dado tempo de digestão t (min) e Cmax é a quantidade máxima (mg/ml) ml) de ácidos graxos livres liberados. Para determinar a constante de velocidade aparente (k), ln ((Cmax - Ct)/Cmax) foi traçado contra t.

[0031] As constantes de velocidade aparente para liberação de ácidos graxos livres foram submetidas à análise de variância (ANOVA). A ANOVA dos tratamentos experimentais foi feita com o software STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), e as médias foram separadas pelo procedimento de diferenças menos significativas (LSD). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0032] Hidrólise lipídica. O acúmulo de ácidos graxos livres durante a hidrólise in vitro de gordura animal, gordura animal com 1,2% de lisolecitina, gordura animal com 2% de lisolecitina, gordura animal com Mistura A e gordura animal com Mistura B são mostrados na Figura 1. Durante todo o período de incubação de 120 minutos, as quantidades de ácidos graxos livres acumulados tanto na Mistura A como na Mistura B foram marcadamente mais altas do que aquelas de gordura animal e gordura animal com lisolecitina.

[0033] As constantes de velocidade aparente de primeira ordem para liberação de ácido graxo livre (k) foram 10,00 x 10-3 min-1, 14,12 x 10—3 min-1, 15,06 x 10—3 min-1 e 15,84 x 10—3 min-1 para a hidrólise in vitro da gordura animal (Controle), gordura animal com lisolecitina, gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A) e gordura animal de uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B), respectivamente. Uma comparação das constantes de velocidade aparente de primeira ordem para o acúmulo de ácidos graxos livres para cada tratamento é apresentada na Figura 2.

[0034] A adição de lisolecitina, a adição da Mistura A e a adição da Mistura B tiveram um impacto significativo (P <0,05) na taxa de liberação de ácidos graxos livres. A adição de lisolecitina aumentou a taxa de liberação de ácidos graxos livres em 41%. Embora as mesmas quantidades de lisolecitina tenham sido adicionadas, a Mistura A e a Mistura B tiveram mais sucesso no aumento da taxa de liberação de ácidos graxos livres. A adição da Mistura A e da Mistura B aumentou a taxa de liberação de ácidos graxos livres em 50% e 58%, respectivamente. EXEMPLO 2: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar a absorção lipídica in vitro.

[0035] Nas instalações de pesquisa da Kemin Europa NV (Herentals, Bélgica), um modelo baseado na cultura de células foi desenvolvido para avaliar o efeito de diferentes compostos na absorção lipídica in vitro. Para avaliar o impacto de misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético na absorção de lipídeos in vitro, as amostras de hidrólise (ver Exemplo 1) foram aplicadas a monocamadas diferenciadas de células de adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2).

Materiais e métodos

[0036] Misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e um emulsificante sintético. Uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A, Tabela 1) e uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B, Tabela 1) foram avaliadas neste experimento (ver Exemplo 1).

[0037] Tratamentos experimentais. As amostras de hidrólise obtidas no final da hidrólise in vitro de gordura animal (Controle), gordura animal com Mistura A e gordura animal com Mistura B (ver Exemplo 1) foram submersas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80°C até os experimentos de absorção.

[0038] Cultura de células. As células de adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2) foram obtidas da Coleção Europeia de Culturas Celulares (Public Health England, Porton Down, Salisbury, Reino Unido). O estoque de trabalho de células de adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2) foi usado entre as passagens 54 e 60. As células foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 10% de soro bovino fetal inativado pelo calor (Hyclone, Thermo scientific, Leuven, Bélgica), 1% de aminoácidos não essenciais, 100 U/ml de penicilina e 100 U/ml de estreptomicina. As células foram mantidas a 37°C em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 e rotineiramente passadas. Salvo indicação em contrário, os meios de cultura de células e suplementos foram fornecidos por Westburg (Leusden, Holanda).

[0039] Modelo de absorção lipídica. As células de adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2) foram semeadas em inserções Transwell-COL revestidas com colágeno (1,12 cm2, tamanho de poro 0,4 μm, Corning Costar Corporation, Cambridge, MA) em placas de 24 poços a uma densidade de 2,5 x 105 células por inserção e incubadas durante 21 dias para permitir que as células se diferenciem. Durante a incubação, o meio (apical e basal) foi trocado três vezes por semana e a resistência elétrica trans-epitelial (TEER) foi monitorada (Millicell-ERS, Millipore, Overijse, Bélgica). Em seguida, as diferentes amostras de hidrólise obtidas com o modelo de hidrólise lipídica (Exemplo 1) foram diluídas 25 vezes em FaSSIF e aplicadas no lado apical da monocamada. Simultaneamente, o meio essencial mínimo de Eagle (EMEM) com 5% de soro bovino fetal inativado pelo calor, 2% de L-glutamina e 1% de aminoácidos não essenciais foi aplicado no lado basal da monocamada. No início e após 60 minutos de incubação, uma amostra do fluido apical foi retirada e diluída duas vezes em THF e submetida à análise lipídica. Cada experimento de absorção realizado em três repetições.

[0040] Análises lipídicas. Em cada amostra obtida durante a absorção lipídica in vitro, a quantidade de monoglicerídeos e ácidos graxos livres foi analisada por HPLC. Monoglicerídeos e ácidos graxos livres foram determinados por cromatografia de permeação em gel (coluna PL 1110-6520, 5 μm 100A 300 x 7,5 mm, Agilent Technologies, Diegem, Bélgica) com Detector de Espalhamento de Luz Evaporativo (ELSD 85, VWR International). O THF foi usado como a fase móvel a uma taxa de fluxo de 0,5 ml/min.

[0041] Cálculos e análises estatísticas. A absorção de monoglicerídeos (%) em cada poço foi calculada da seguinte forma: absorção de monoglicerídeos = MG0 - MG60/MG0 x 100 onde MG0 e MG60 são os respectivos teores de monoglicerídeos (mg/ml) antes e após 60 minutos de incubação. Correspondentemente, a absorção de ácidos graxos livres (%) foi calculada a partir dos respectivos teores de ácidos graxos livres.

[0042] Os valores de monoglicerídeos e de absorção de ácidos graxos livres foram submetidos a análise de variância (ANOVA). A ANOVA dos tratamentos experimentais foi feita com o software STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), e as médias foram separadas pelo procedimento de diferenças menos significativas (LSD). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0043] Absorção lipídica. Absorção de monoglicerídeos e ácidos graxos livres gerados durante a hidrólise in vitro da gordura animal (controle), gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monooleato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura A) e gordura animal com uma mistura de lisolecitina, monoestearato de glicerol e emulsificante sintético (Mistura B) é apresentado na Figura 3. A absorção de monoglicerídeos foi significativamente maior (P <0,01) na Mistura A e na Mistura B (35,0% e 40,6%, respectivamente) do que no Controle (14,5%). Da mesma forma, a absorção de ácidos graxos livres foi significativamente maior (P <0,05) na Mistura A e na Mistura B (23,5% e 28,7%, respectivamente) do que no Controle (13,3%).

[0044] Assim, a Mistura A e a Mistura B mais do que duplicaram (e no caso da Mistura B quase triplicaram) a absorção de monoglicerídeos. Além disso, a Mistura A e a Mistura B aumentaram a absorção de ácidos graxos livres em mais de 75%. EXEMPLO 3: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar a digestão e absorção de nutrientes in vivo.

[0045] Um experimento de desempenho com frangos de corte encomendados pela Kemin Europa NV foi realizado de 28 de outubro de 2015 a 9 de dezembro de 2015 no aviário experimental na estação experimental da Faculdade de Zootecnia e Biotecnologia da Universidade de Ciências Agrárias e Veterinárias do Banat. "Rei Miguel I da Romênia" de Timiçoara. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desempenho de aves alimentadas com dieta basal, uma dieta basal formulada com menor energia metabolizável e aves alimentadas com a dieta formulada com menor energia metabolizável com a suplementação de duas diferentes misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético. Simultaneamente, este estudo foi usado para avaliar o impacto de uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético nas características de carcaça das aves.

Materiais e métodos

[0046] Misturas de lisolecitina, monoglicerídeos e um emulsificante sintético. Lisolecitina (lecitina de soja hidrolisada com um teor total de lisofosfolipídeos de 124,9 g/kg), monooleato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono e uma dupla ligação; número de iodo de 75,8 g I2/100g), monoestearato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono sem ligações duplas; número de iodo de 0,6 g I2/100g) e emulsificante sintético (óleo de rícino etoxilado contendo em média 40 grupos de óxido de etileno e com um valor de HLB de 12,5) foram usados para preparar duas misturas, indicadas como Mistura A e Mistura B (Tabela 3), foram preparadas pesando primeiro com precisão a lisolecitina, os monoglicerídeos e o emulsificante sintético em conjunto. Em seguida, as misturas líquidas foram aquecidas a 60°C e agitadas a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos antes de serem aplicadas em um veículo seco (Tabela 3). Tabela 3 - Visão geral dos aditivos experimentais para ração

[0047] Dietas e tratamentos dietéticos. As dietas foram formuladas com milho como principal cereal e com farelo de soja como principal fonte de proteína. Duas dietas básicas foram formuladas: uma dieta basal preenchendo todas as exigências dietéticas (T1; controle positivo) e dieta basal com menor energia metabolizável (T2; controle negativo; 60 kcal/kg menor em energia metabolizável no iniciador e 80 kcal/kg menor em energia metabolizável no cultivador e finalizador). As composições globais das dietas de iniciador basal (0-14 dias), crescimento (15-35 dias) e finalizador (35-42 dias) são apresentados na Tabela 4. Todas as dietas também continham uma mistura enzimática comercial com fitase (KEMZYME® Plus P Secagem 500 g/tonelada, Kemin Europa NV, Herentals, Bélgica).

[0048] Para a dieta basal com menor energia metabolizável, primeiramente um único lote de ração (tanto para período inicial, crescimento e final) foi feito para que a composição quantitativa das dietas experimentais fosse exatamente a mesma para os tratamentos T2, T3 e T4 (Tabela 5). Em seguida, as dietas basais com uma menor energia metabolizável foram divididas em lotes iguais e misturadas sucessivamente em um pequeno misturador com as diferentes pré-misturas para produzir os tratamentos dietéticos: T2, controle negativo; T3, controle negativo com 500 ppm de Mistura A no topo; T4, controle negativo com 500 ppm da Mistura B no topo. Tabela 4 - Ingredientes e composição nutricional das dietas iniciais, produtores e finalizadores.

CP: Proteína bruta; AMEn: Energia Metabolizável Aparente Tabela 5 - Visão geral dos tratamentos dietéticos

[0049] Aves e manejo. O experimento de desempenho de frangos de corte foi realizado na Universidade de Ciências Agrárias e Medicina Veterinária de Banat (Timisoara. Romênia). As aves foram alojadas na instalação experimental de avicultura em 36 cercados de pavimentos, cada um com uma superfície disponível de 800 cm2. Um total de 288 frangos de corte machos Ross 308 foram alojados com oito aves por cercado. Cada tratamento dietético foi replicado nove vezes. Replicados (cercados) foram alocados para os tratamentos para uma distribuição homogênea de tratamentos dentro da sala. Imediatamente após a chegada, as aves foram examinadas por um veterinário responsável pelo bem-estar animal e selecionadas pelo peso e atribuídas aos tratamentos, a fim de alcançar a máxima homogeneidade possível dentro de cada grupo e diferenças mínimas entre todos os grupos de estudo. Um sistema dinâmico de ventilação e aquecimento forneceu a melhor temperatura e ventilação da avicultura. Durante todo o período de teste foi usado um esquema de iluminação de 23 horas de luz e 1 hora de escuridão. A ração foi fornecida ad libitum por manjedouras (1 por cercado). Aves foram alimentadas com dietas de ração com o sistema de alimentação trifásico (iniciador, produtor e finalizador). A água potável foi fornecida ad libitum por uma rede interna de sistema de água. As aves foram criadas de acordo com as Recomendações 526/2007 CE. Duas vezes por dia, animais e instalações de alojamento foram inspecionados para o estado geral de saúde, ração constante e abastecimento de água, bem como temperatura e ventilação, aves mortas e eventos inesperados.

[0050] Medições e gravações. A fim de determinar os parâmetros de desempenho, o peso corporal médio (ABW) foi registrado em cada cercado no início e após 14 dias de idade e o consumo de ração foi registrado entre 0 e 14 dias. Mortalidade diária e abates foram registrados por cercado.

[0051] Ao final do período de criação (42 dias de idade), dos tratamentos T1, T2 e T3 (controle positivo, controle negativo e mistura A, respectivamente), duas aves por cercado foram sacrificadas. O peso vivo das aves foi registrado pela primeira vez. As aves foram então processadas de acordo com procedimentos padrão de abate e o peso de toda a carcaça (eviscerada), o peito (com osso) e a almofada de gordura abdominal foi registrada.

[0052] Cálculos e análises estatísticas. O ganho médio diário (ADG) e taxa de conversão alimentar (FCR) foram calculados para 0 - 14 dias (período inicial). O ADG (g/ave/dia) foi calculado subtraindo o peso corporal médio do cercado no início do período de medição (no dia 0) do peso corporal médio no final desse período de medição (no dia 14) e dividindo este valor pelo número de dias nesse período de medição (14 dias). A FCR foi calculada dividindo-se o consumo médio de ração (g/ave/dia) do período pelo ADG (g/ave/dia) do período. O rendimento da carcaça, o rendimento de peito e o teor de gordura abdominal foram calculados, respectivamente, dividindo-se o peso da carcaça, peito e gordura abdominal pelo peso vivo da ave.

[0053] Os dados de desempenho (ABW, ADG, FCR), rendimento da carcaça, rendimento do peito e teor de gordura abdominal foram submetidos à análise de variância (ANOVA). A ANOVA dos tratamentos experimentais foi feita com o software STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), e as médias foram separadas pelo procedimento de diferenças menos significativas (LSD). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0054] Desempenho. O ABW, ADG e FCR de aves alimentadas com a dieta de Controle Positivo, a dieta de Controle Negativo, a de Mistura A ou a de Mistura B são apresentadas na Tabela 6. ABW e ADG foram significativamente maiores para aves alimentadas com Controle Positivo, Dieta da Mistura A ou Dieta da Mistura B do que para aquelas alimentadas com dieta de controle negativo. A adição da Mistura A ou B foi capaz de aumentar o ADG em 1,3 e 1,5 g/ave/dia, respectivamente. Além disso, ABW e ADG foram significativamente maiores (16 g/ave e 1,1 g/ave/dia, respectivamente) para as aves alimentadas com a dieta da Mistura B do que para aquelas alimentadas com a dieta de Controle Positivo. A FCR foi significativamente menor nas aves alimentadas com a dieta da Mistura A ou com a dieta da Mistura B do que nas aves alimentadas com dieta de controle negativo. A adição da Mistura A ou B foi capaz de reduzir a FCR em 7 e 8 pontos, respectivamente. Assim, devido a uma melhor digestão e absorção de nutrientes, as aves alimentadas com uma dieta suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético foram capazes de recuperar uma lacuna de energia de 60 kcal/kg na dieta. Tabela 6 - Peso corporal médio, ganho médio diário e taxa de conversão alimentar

[0055] Rendimento de carcaça, rendimento de peito e almofada de gordura abdominal. O rendimento de carcaça, rendimento de peito e teores de almofada de gordura abdominal de aves alimentadas com a dieta de controle positivo, dieta de controle negativo ou dieta de mistura A são apresentados na Tabela 7. O rendimento de carcaça e rendimento de peito foram significativamente maiores em aves alimentadas com dieta de controle positivo ou a dita da Mistura A que em aves alimentadas com a dieta de controle negativo. Além disso, o teor da almofada abdominal de aves alimentadas com a dieta da Mistura A foi significativamente menor do que em aves alimentadas com a dieta de controle positivo ou negativo. Este último mostra que a adição da mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético resultou em uma melhor utilização dos nutrientes absorvidos para a produção de carne. Tabela 7 - Rendimento de carcaça (%), rendimento de peito (%) e teores de almofada de gordura abdominal (%)

EXEMPLO 4: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar o desempenho in vivo, digestão e absorção de nutrientes.

[0056] Um experimento de desempenho e digestibilidade de nutrientes com frangos de corte foi realizado no aviário experimental do Laboratório de Zootecnia, pertencente à Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Aristóteles de Tessalônica. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desempenho e a digestibilidade dos nutrientes de aves alimentadas com uma dieta basal que atenda a todas as exigências nutricionais, uma dieta formulada com menor energia metabolizável e suplementada com lisolecitina ou uma dieta formulada com menor energia metabolizável e suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético. Materiais e métodos

[0057] Lisolecitina e mistura de monoglicerídeos de lisolecitina e um emulsificante sintético. Lisolecitina (lecitina de soja hidrolisada), monooleato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono e uma dupla ligação; número de iodo de 75,8 g I2/100g) e emulsificante sintético (óleo de rícino etoxilado contendo em média 40 grupos de óxido de etileno e com um valor de HLB 12,5) foram usados para preparar dois produtos de tratamento, adicionalmente indicados como Lisolecitina seca e Mistura seca (Tabela 8). Para a preparação da Mistura seca, primeiro foi preparada uma pré-mistura líquida. Em seguida, lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético foram primeiramente pesados com precisão, aquecidos a 60°C e agitados a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos. A lisolecitina ou a pré- mistura foram então aplicadas em um veículo seco (Tabela 8) para produzir os respectivos produtos finais de tratamento (Lisolecitina seca e Mistura seca, respectivamente). Tabela 8 - Visão geral dos aditivos experimentais para ração

[0058] Dietas e tratamentos dietéticos. As dietas foram formuladas com trigo e milho como os principais cereais e com farelo de soja como principal fonte de proteína. Duas dietas basais foram formuladas: uma dieta basal preenchendo todas as exigências dietéticas (T1; controle positivo) e uma dieta basal com menor energia metabolizável (aproximadamente 80 kcal/kg menor na energia metabolizável). As composições globais das dietas de início basal (0-14 dias), produtor (15-35 dias) e finalizador (35-42 dias) são apresentadas na Tabela 9. Todas as dietas também continham uma mistura enzimática comercial com fitase (KEMZYME® Plus P Dry 500 g/tonelada, Kemin Europa NV, Herentals, Bélgica) e dióxido de titânio (TiO2, a 3 g por kg de ração) como marcador indigesto do experimento de digestibilidade.

[0059] Para a dieta basal com menor energia metabolizável, primeiro um único lote de ração (tanto para iniciador, produtor e finalizador) foi feito para que a composição quantitativa das dietas experimentais fosse exatamente a mesma para os tratamentos T2 e T3 (Tabela 10). Em seguida, a dieta basal com menor energia metabolizável foi dividida em lotes iguais e misturada sucessivamente em um pequeno misturador com as diferentes pré-misturas para produzir os tratamentos dietéticos T2; controle negativo com 500 ppm de Lisolecitina seca em cima e T3; controle negativo com 500 ppm de mistura em cima. Tendo em conta a concentração da lisolecitina e a mistura em Lisolecitina seca e a Mistura seca, T2 e T3 distribuíram assim 250 g de lisolecitina e 177,5 g da mistura por tonelada de razão, respectivamente. Tabela 9 - Ingredientes e composição de nutrientes das dietas iniciadoras, produtoras e finalizadora s experimentais. Dieta basal Dieta basal com energia

CP: Proteína bruta; AMEn: Energia Metabolizável Aparente; Razão U/S: razão de ácidos graxos saturados sobre insaturados (sem unidade) Tabela 10 - Visão geral dos tratamentos dietéticos Tratamento Dieta Aditivo da ração

[0060] Aves, dietas e manejo. O teste de desempenho e digestibilidade de frangos de corte foi realizado na Universidade Aristóteles de Thessaloniki (Thessaloniki, Grécia). As aves foram alojadas em uma instalação avícola em 24 cercados, cada um com uma superfície disponível de 2,0 m2 Um total de 408 frangos de corte Ross 308 de sexo misto com um dia de idade (como chocado) foram alojados com 17 aves por cercado (8,5 aves por m2). Cada tratamento dietético foi replicado oito vezes. Replicados (cercados) foram alocados para os tratamentos para uma distribuição homogênea de tratamentos dentro da sala. Um sistema dinâmico de ventilação e aquecimento forneceu a melhor temperatura e ventilação da avicultura. Durante todo o período de teste foi usado um esquema de iluminação de 23 horas de luz e 1 hora de escuridão. A ração foi fornecida ad libitum. Aves foram alimentadas com dietas de ração com o sistema de ração trifásico (período inicial, crescimento e final). A água potável foi fornecida ad libitum. Duas vezes por dia, animais e instalações de alojamento foram inspecionados para o estado geral de saúde, ração constante e abastecimento de água, bem como temperatura e ventilação, aves mortas e eventos inesperados.

[0061] Amostragem e gravações. Amostras de cada uma das dietas acabadas foram tomadas imediatamente após a produção de ração. Aos 34 dias, em cada cercado, um tapete de nylon espesso foi colocado em cima do material de cama para coleta de excretas. As excretas foram coletadas durante um período de aproximadamente oito horas, raspando as excretas do tapete de nylon. As matérias que não excretaram (por exemplo, penas e partículas de ração) foram removidas à mão antes das excretas serem recolhidas. Uma amostra homogênea da excreta retida de cada cercado foi imediatamente congelada e subsequentemente liofilizada. O peso corporal médio (ABW) foi registrado em cada cercado no início e após 14, 28 e 42 dias de idade e o consumo de ração foi registrado entre 0 e 14 dias, 14 e 28 dias e 28 e 42 dias de idade. Mortalidade diária e abate foram registrados por cercado.

[0062] Análises químicas de rações e excretas. Todas as análises foram realizadas pela Universidade Aristóteles de Thessaloniki (Thessaloniki, Grécia). As amostras de ração e de excreta foram analisadas quanto ao teor de matéria seca (DM), proteína bruta (CP, N x 6,25) e gordura bruta (CF) de acordo com os métodos da Associação de Químicos Analíticos Oficiais (AOAC, 2003). A energia bruta (GE) foi calculada utilizando um calorímetro de bomba adiabática (Calorimeter System C 5000 Control, IKA®, Staufen, Alemanha). A determinação do dióxido de titânio foi realizada por Espectrometria de Emissão Óptica Plasma Acoplada Indutivamente seguindo o procedimento de van Brussel (van Bussel W., Kerkhof F., van Kessel T., Lamers H., Nous D., Verdonk H., Verhoeven B. ( 2010) Determinação precisa de titânio como dióxido de titânio para estudos de digestibilidade de tamanho de amostra limitada de razões e matrizes de razões por espectrometria de emissão óptica de plasma indutivamente acoplado com padronização interna simultânea em tempo real.

[0063] Cálculos e análises estatísticas. O ganho médio diário (ADG) e conversão alimentar foram calculados para 0 a 14 dias (período inicial), 15 a 28 dias (período de crescimento), 29 a 42 dias (período final) e 0 a 42 dias (período de criação total). O ADG (g/ave/dia) foi calculado subtraindo-se o ABW de cada cercado no início do período de medição (por exemplo, no dia 0) do peso corporal médio no final desse período de medição (por exemplo, no dia 14) e dividindo este valor pelo número de dias nesse período de medição (por exemplo, 14 dias). O FCR foi calculado dividindo-se o consumo médio de ração (g/ave/dia) do período pelo ADG (g/ave/dia) do período. O rendimento de carcaça, o rendimento de peito e o teor da almofada de gordura abdominal foram calculados, respectivamente, dividindo-se o peso da carcaça, peito e almofada da gordura abdominal pelo peso vivo da ave.

[0064] As digestibilidades de nutrientes (DM, CP e CF) foram determinadas pelo uso das concentrações do marcador de dióxido de titânio na excretas e na ração e calculadas de acordo com a Equação 1. Os teores de energia metabolizável aparente (AME) das dietas experimentais foram calculados a partir suas respectivas razões de dióxido de titânio e correspondentes teores de GE, como mostrado na Equação 2. O resultado foi corrigido para retenção zero de nitrogênio usando uma energia equivalente a 8,22 kcal/g de nitrogênio retido e fornecido o valor AMEn da dieta.

Copiar fórmula

[0065] Equação 1. Cálculo das digestibilidades de nutrientes fecais aparentes. Nutrientdiet e nutrientexcreta são as concentrações dos respectivos nutrientes (matéria seca, proteína bruta, gordura bruta) analisadas nas amostras de dieta e excreta (g/kg), e TiO2diet e TiO2excreta são as concentrações de dióxido de titânio analisadas nas amostras da dieta e excreta (g/kg).

[0066] Equação 2. Cálculo do teor de energia metabolizável aparente das dietas experimentais. GEdiet e GEexcreta são os valores de energia bruta analisados das amostras da dieta e excreta (kcal/kg).

[0067] Os dados de desempenho (ABW, ADG, FCR) e digestibilidade (digestibilidade de DM, CP e CF e EMAn), rendimento de carcaça, rendimento de peito e teor de gordura abdominal foram submetidos à análise de variância (ANOVA). A ANOVA dos tratamentos experimentais foi feita com o software STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), e as médias foram separadas pelo procedimento de diferenças menos significativas (LSD). Um cercado com 17 animais foi a unidade experimental e cada um dos três tratamentos foi replicado oito vezes (oito cercados por tratamento). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0068] Desempenho. A Tabela 11 apresenta o peso corporal médio (g/ave) aos 0, 14, 28 e 42 dias de idade das aves alimentadas com uma dieta basal (Controle), uma dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável suplementada apenas com lisolecitina (Lisolecitina, 250 g/tonelada no topo) ou uma dieta com reduzido teor de energia metabolizável suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (Mistura, 177,5 g/tone no topo). Apesar do reduzido teor de energia das dietas Lisolecitina e Mistura em comparação com a dieta de controle (entre 74 e 95 kcal por kg de ração, Tabela 9), não foram encontradas diferenças significativas no ABW intermediário e final dos frangos de corte (Tabela 11). O maior ABW final foi observado para as aves alimentadas com a mistura dietética (2856 g/ave vs. 2849 g/ave). Tabela 11 - Peso corporal médio (g/ave) aos 0, 14, 28 e 42 dias de idade

[0069] O ganho médio diário (g/ave/dia) para o período inicial (0-14 dias), crescimento (15-28 dias), final (29-42 dias) e período de criação total (0-42 dias) de aves alimentadas com dieta basal (Controle), uma dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável suplementada apenas com lisolecitina (Lisolecitina, 250 g/tonelada no topo) ou uma dieta com reduzido teor de energia metabolizável suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (Mistura, 177,5 g/tonelada no topo) são apresentados na Tabela 12. Taxa de conversão alimentar para o período inicial (0-14 dias), crescimento (15-28 dias), final (29-42 dias) e todo período de criação (0-42 dias) de aves alimentadas com uma dieta basal (Controle), uma dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável suplementado apenas com lisolecitina (Lisolecitina, 250 g/tonelada no topo) ou uma dieta com reduzido teor de energia metabolizável suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (Mistura, 177,5 g/tonelada no topo) são apresentados na Tabela 13. De acordo com os resultados do ABW de aves, não foram observadas diferenças significativas em ADG ou FCR entre qualquer um dos tratamentos. Assim, apesar do reduzido teor energético das dietas Lisolecitina e Mistura, as aves alimentadas com essas dietas ainda eram capazes de atender aos rigorosos padrões de desempenho estabelecidos com a dieta Controle. Tabela 12 - Ganho médio diário (g/ave/dia)

Tabela 13 - Taxa de conversão alimentar (FCR)

[0070] Digestibilidade de nutrientes. Os coeficientes de digestibilidade dos nutrientes (%) (DM, CP, CF) e energia metabolizável aparente corrigida para zero retenção de nitrogênio (AMEn, kcal/kg) foram determinados aos 35 dias de idade das aves alimentadas com dieta basal (Controle), uma dieta basal com teor reduzido de energia metabolizável suplementado apenas com lisolecitina (Lisolecitina, 250 g/tonelada no topo) ou uma dieta com teor reduzido de energia metabolizável suplementado com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (mistura, 177,5 g/tonelada no topo) são apresentados em Tabela 14. Em contraste com os parâmetros de desempenho, diferenças significativas entre os tratamentos foram observadas para a digestibilidade da DM e CP, bem como para a AMEn. A digestibilidade da DM foi significativamente maior nas aves alimentadas com a dieta Mistura comparada com aquelas alimentadas com dieta de controle ou dieta de Lisolecitina. A digestibilidade da CP foi significativamente maior nas aves alimentadas com a Mistura quando comparada à dieta com Lisolecitina. Embora não seja significativo, observações semelhantes foram feitas para a digestão da CF. A maior digestão da CF foi observada com as aves alimentadas com a dieta Mistura (89,68%), seguidas pelas alimentadas com a dieta Lisolecitina (87,57%) e a dieta Controle (85,52%), respectivamente. A digestibilidade melhorada de nutrientes também se refletiu em um AMEn significativamente maior que foi observado para as aves alimentadas com a Dieta Mistura (3.513 kcal/kg) quando comparadas àquelas alimentadas com dieta de controle ou Lisolecitina (3.220 e 3.255 kcal/kg, respectivamente). Tabela 14 - Coeficientes de digestibilidade (%) e energia metabolizável aparente (kcal/kg)

a-b Valores dentro de colunas com diferentes sobrescritos são significativamente diferentes (P <0,05)

[0071] Como refletido pelos dados de desempenho, a Lisolecitina e a Mistura foram capazes de recuperar a lacuna de energia (entre 74 e 95 kcal por kg de ração) em suas dietas, levando ao mesmo desempenho de aves alimentadas com menos energia na dieta. O desempenho é provavelmente mantido pela melhor digestibilidade dos nutrientes que foi observada.

[0072] Além disso, embora quantidades maiores de lisolecitina tenham sido fornecidas na dieta com Lisolecitina (250 versus 150 g de lisolecitina por tonelada de ração para a dieta de Lisolecitina e Mistura, respectivamente), a mistura teve mais sucesso em melhorar a digestibilidade da DM e CP. A digestibilidade da DM e CP foi, respectivamente, 5,85% e 12,65% maior nas aves alimentadas com a dieta da Mistura em comparação com as alimentadas com a dieta da Lisolecitina. Embora não significativa, a digestão de CF também foi 2,11% e 4,16% maior em aves alimentadas com a dieta da Mistura quando comparadas àquelas alimentadas com a dieta da Lisolecitina ou Controle, respectivamente. Além disso, o AMEn também foi 258 e 293 kcal/kg maior em aves alimentadas com a dieta da Mistura, quando comparadas àquelas alimentadas com a dieta da Lisolecitina ou Controle, respectivamente. Levando-se em consideração o já reduzido teor energético da dieta, a Mistura foi, portanto, muito bem-sucedida em melhorar o uso de nutrientes e energia dos frangos de corte, excedendo os benefícios de suplementar apenas a lisolecitina. EXEMPLO 5: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar o rendimento da refeição

[0073] Um experimento com frangos de corte foi realizado no aviário experimental da Kemin Industries South Asia Private Limited. O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção da refeição de aves alimentadas com ou dieta basal preenchida com todas as exigências dietéticas, uma dieta formulada com menor energia metabolizável ou dieta formulada com menor energia metabolizável e suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético.

Materiais e métodos

[0074] Mistura de monoglicerídeos de lisolecitina e um emulsificante sintético. Lisolecitina (lecitina de soja hidrolisada), monooleato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono e uma dupla ligação; número de iodo de 75,8 g I2/100g) e emulsificante sintético (óleo de rícino etoxilado contendo em média 40 grupos de óxido de etileno e com um valor de HLB 12,5) foram usados para preparar o produto de tratamento, apresentado na Tabela 15 como a “Mistura seca”. Para o preparo da Mistura seca, primeiro uma pré-mistura líquida foi preparada na qual monoglicerídeos e emulsificante sintético foram primeiramente pesados com precisão, aquecidos a 60°C e agitados a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos. A pré-mistura foi então aplicada em um veículo seco, também apresentado na Tabela 15, para produzir a Mistura seca. Tabela 15 - Visão geral do aditivo experimental para ração

[0075] Dietas e tratamentos dietéticos. As dietas foram formuladas com milho como principal cereal e com farelo de soja como principal fonte proteica. Duas dietas básicas foram formuladas: uma dieta basal preenchendo todas as exigências dietéticas (T1; controle positivo) e uma dieta basal com menor energia metabolizável (aproximadamente 100 kcal/kg menor na energia metabolizável). As composições globais das dietas basais do período inicial (0-14 dias), crescimento (15-28 dias) e final (29-42 dias) são apresentadas na Tabela 16. Todas as dietas também continham um ligante de toxina (ToxfinTM, 1 kg/tonelada, Kemin Industries South Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, Índia), um probiótico (CLOSTAT™, 500 g/tonelada, Kemin Industries South Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, Índia) e uma mistura enzimática comercial (KEMZYME® XPF, 250 g/tonelada, Kemin Industries do Sul Asia Private Limited, Gummudipoondi, Tamil, na Índia). Tabela 16 - Ingredientes e composição de nutrientes das dietas de período inicial, crescimento e final

CP: Proteína bruta; AMEn: Energia Metabolizável Aparente; a Outros ingredientes são: Acidificador alimentar (0,5 g/kg), Inibidor de mofo (1,0 g/kg), Betaína (0,5 g/kg), Pré-mistura de vitaminas e minerais (0,5 g/kg), Tônicos hepáticos (0,5 g/kg), Anticoccídicos (0,5 g/kg), Oligominerais (0,5 g/kg), Promotor de crescimento de antibiótico (0,5 g/kg), Antioxidante (0,1 g/kg) e Fitase (0,1 g/kg)

[0076] Para a dieta basal com menor energia metabolizável, primeiro um único lote de ração (tanto para o período inicial, crescimento e final) foi feito para que a composição quantitativa das dietas experimentais fosse exatamente a mesma para os tratamentos T2 e T3, mostrados na Tabela 17. Em seguida, a dieta basal com menor energia metabolizável foi dividida em lotes iguais e misturada sucessivamente em um pequeno misturador com as diferentes pré-misturas para produzir os tratamentos dietéticos T2; controle negativo e T3; controle negativo com 500 ppm da Mistura Seca no topo. Tabela 17 - Visão geral dos tratamentos dietéticos

[0077] Aves, dietas e manejo. O experimento de frangos de corte foi realizado no aviário experimental da Kemin Industries South Asia Private Limited (Gummudipoondi, Tamil, Índia). As aves foram alojadas na instalação avícola em 18 cercados. Um total de 408 frangos de corte Vencobb 430 de sexo misto de um dia de vida (como incubados) foram alojados com 12 aves por cercado. Cada tratamento dietético foi replicado seis vezes. Replicados (cercados) foram alocados para os tratamentos para uma distribuição homogênea de tratamentos dentro da sala. A instalação avícola consiste em um sistema de alojamento aberto seguindo a temperatura e a iluminação do ambiente. A ração foi fornecida ad libitum. As aves foram alimentadas com dietas de ração com o sistema de ração trifásico (período inicial, crescimento e final). A água potável foi fornecida ad libitum. Duas vezes por dia, animais e instalações de alojamento foram inspecionados para o estado geral de saúde, ração constante e abastecimento de água, bem como temperatura e ventilação, aves mortas e eventos inesperados.

[0078] Amostragem e gravações. Aos 40 dias, um frango de corte macho de cada cercado foi sacrificado aleatoriamente. O peso de cada ave foi registrado. Cada ave foi então processada de acordo com os procedimentos padrão de abate e o peso do tecido da carne foi registrado.

[0079] Cálculos e análises estatísticas. Os rendimentos da carne foram calculados dividindo o peso do tecido de carne pelo respectivo peso vivo da ave. Os dados de rendimento da carne foram então submetidos a análise de variância (ANOVA). A ANOVA dos tratamentos experimentais foi feita com o software STATGRAPHICS Centurion XVI (Statpoint Technologies Inc., Warrenton, VA), e as médias foram separadas pelo procedimento de diferenças menos significativas (LSD). Um cercado com 12 animais foi a unidade experimental e cada um dos três tratamentos foi replicado seis vezes (seis cercados por tratamento). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0080] Rendimento da carne. A Tabela 18 apresenta o rendimento da carne (%) aos 40 dias de idade das aves alimentadas com dieta basal (Controle positivo), dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável (Controle Negativo) ou dieta com reduzido teor de energia metabolizável suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (Mistura). Tabela 18 - Rendimento da carne (% do peso corporal) aos 40 dias de idade

a-b Valores com diferentes sobrescritos são significativamente diferentes (P <0,05)

[0081] Aves alimentadas com a dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável (T2, Controle Negativo) apresentaram um rendimento de carne numericamente menor em comparação com as aves alimentadas com a dieta basal (T1, Controle Positivo). No entanto, as aves alimentadas com a mistura (T3) tiveram um rendimento de carne significativamente maior em comparação com as alimentadas com a dieta de controle negativo (T2). Além disso, a maior produção de carne foi observada em aves alimentadas com a Mistura (T3). Assim, apesar do reduzido teor energético, as aves alimentadas com a dieta da Mistura foram capazes de produzir o maior rendimento de carne devido à adição da Mistura seca. EXEMPLO 6: Uma combinação de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético para melhorar a taxa de conversão alimentar

[0082] Um desempenho com frangos de corte foi realizado no aviário experimental da Southern Poultry Research, Athens, Georgia (EUA). O objetivo do presente estudo foi avaliar o ganho de peso corporal e a conversão alimentar de aves alimentadas com dieta basal preenchida com todas as exigências dietéticas, uma dieta formulada com menor energia metabolizável ou dieta formulada com menor energia metabolizável e suplementada com mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético.

Materiais e métodos

[0083] Mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e um emulsificante sintético. Lisolecitina (lecitina de soja hidrolisada), monooleato de glicerol (ácido graxo com 18 átomos de carbono e uma dupla ligação; número de iodo de 75,8 g I2/100g) e emulsificante sintético (óleo de rícino etoxilado contendo em média 40 grupos de óxido de etileno e com um valor de HLB 12,5) foram usados para preparar o produto de tratamento, ainda indicado como Mistura seca, como mostrado na Tabela 19. Para a preparação da Mistura seca, primeiro foi preparada uma pré-mistura líquida. Em seguida, lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético foram primeiramente pesados com precisão, aquecidos a 60°C e agitados a aproximadamente 250 rpm durante 30 minutos. A pré-mistura foi então aplicada em um veículo seco, também mostrado na Tabela 19, para produzir a Mistura seca. Tabela 19 - Visão geral dos aditivos experimentais para ração

[0084] Dietas e tratamentos dietéticos. As dietas foram formuladas com milho como principal cereal e com farelo de soja como principal fonte proteica. Duas dietas básicas foram formuladas: uma dieta basal preenchendo todas as exigências dietéticas (T1; controle positivo) e uma dieta basal com menor energia metabolizável (aproximadamente 120 kcal/kg menor na energia metabolizável). As composições globais da dieta basal do período inicial (0-21 dias), crescimento (22-35 dias) e final (36-42 dias) são apresentadas na Tabela 20. Todas as dietas também continham uma enzima comercial (Hostazym® X 1.0, Huvepharma Inc., St. Louis, EUA) e uma fitase (Ronozyme® HiPhos 2700 GT, DSM Nutritional Products, Ames, EUA), um medicamento anticoccídico (Bio-Cox®, Alpharma LLC, Nova Jersey, EUA) e uma bacitracina (BMD 50, Zoetis Inc., Kalamazoo, EUA). Tabela 20 - Ingredientes e composição nutricional das dietas de período inicial, crescimento e final Item (g/kg, a menos que seja _ anotado) Dieta basal Dieta basal com energia metabolizável reduzida

CP: Proteína Bruta; DDGS: Grãos Secos de Destilação com Solúveis; AMEn: Energia Metabolizável

Aparente

[0085] Para a dieta basal com menor energia metabolizável, primeiro um único lote de ração (tanto para o período inicial, crescimento e final) foi feito para que a composição quantitativa das dietas experimentais fosse exatamente a mesma para os tratamentos T2 e T3 apresentados na Tabela 21. Em seguida, a dieta basal com menor energia metabolizável foi dividida em lotes iguais e misturada sucessivamente em um pequeno misturador com as diferentes pré-misturas para produzir os tratamentos dietéticos T2; controle negativo e T3; controle negativo com 500 ppm de Mistura seca no topo. Tabela 21 - Visão geral dos tratamentos dietéticos

[0086] Aves, dietas e manejo. O experimento de desempenho de frangos de corte foi realizado em uma instalação avícola experimental da Southern Poultry Research, Inc. (Brock Road, Geórgia, EUA). A casa dos frangos de corte é dividida em cercados de igual tamanho dispostos ao longo de um corredor central. As aves foram alojadas em 48 cercados. Um total de 2496 frangos de corte macho Cobb 500 foram alojados com 52 aves por cercado (± 11 aves por m2). Cada tratamento dietético foi replicado 16 vezes. Replicados (cercados) foram alocados para os tratamentos para uma distribuição homogênea de tratamentos dentro da sala usando um delineamento de blocos ao acaso. Ração e água potável foram fornecidas ad libitum. Aves foram alimentadas com o sistema de ração trifásico (iniciador, crescimento e finalizador). Aves foram alimentadas com uma dieta desintegrada na fase inicial e dietas peletizadas nas fases de crescimento e final. Do dia 1 até o dia 7, a ração foi fornecida em uma bandeja colocada na serapilheira de cada cercado. Posteriormente, as dietas foram fornecidas a partir de um alimentador de tubo por cercado. Duas vezes por dia, animais e instalações de alojamento foram inspecionados para o estado geral de saúde, ração constante e abastecimento de água, bem como temperatura e ventilação, aves mortas e eventos inesperados.

[0087] Gravações. O peso médio das aves por cercado (g/ave) foi registrado no início (Dia 0) e no final (Dia 42) do ensaio. O consumo de ração (g) por cercado foi registrado durante todo o período de criação.

[0088] Cálculos e análises estatísticas. O ganho médio diário (ADG/ g/ave/dia) e razão de conversão alimentar (FCR) foram calculados para todo o período de criação (0 a 42 dias). Os dados de ADG e FCR foram então submetidos à análise de variância (ANOVA) usando o pacote de software JMP® (SAS Inc., Cary, NC, EUA), com comparação de médias por t de Student (P <0,05). Um cercado com 54 animais foi a unidade experimental e cada um dos três tratamentos foi replicado 16 vezes (16 cercados por tratamento). Todas as declarações de significância foram baseadas em um valor P igual ou menor que 0,05.

Resultados

[0089] Desempenho. A Tabela 22 apresenta o ganho médio diário (g/ave/dia) e FCR ao longo de todo o período de criação de aves alimentadas com dieta basal (T1; Controle positivo), dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável (T2; controle negativo) ou dieta com reduzido teor de energia metabolizável suplementado com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético (T3; Mistura). O ADG das aves alimentadas com dieta basal com reduzido teor de energia metabolizável (T2, Controle Negativo) foi significativamente menor em relação ao ADG das aves alimentadas com dieta basal (T1, controle positivo). Apesar do teor de energia reduzido, o ADG das aves alimentadas com a Mistura (T3) não foi significativamente menor em comparação com o ADG das aves alimentadas com dieta controle positivo (T1). Além disso, as aves alimentadas com a dieta de controle negativo (T2) tiveram uma FCR significativamente maior do que aquelas alimentadas com a dieta de controle positivo. Em contraste, apesar do teor de energia reduzido, a FCR das aves alimentadas com a Mistura (T3) não foi significativamente menor em comparação com a FCR das aves alimentadas com a dieta de controle positivo (T1). Tabela 22 - Ganho médio diário (ADG/g/ave/dia) e razão de conversão alimentar (FCR)

[0090] Assim, devido a uma melhor digestão e absorção de nutrientes, as aves alimentadas com uma dieta suplementada com uma mistura de lisolecitina, monoglicerídeos e emulsificante sintético foram capazes de recuperar uma lacuna de energia de 120 kcal/kg na dieta.

[0091] A descrição e desenhos anteriores compreendem formas de realização ilustrativas da presente invenção. As formas de realização anteriores e os métodos aqui descritos podem variar com base na capacidade, experiência e preferência dos versados na técnica. Meramente listar as etapas do método em uma determinada ordem não constitui nenhuma limitação na ordem das etapas do método. A descrição e desenhos anteriores meramente explicam e ilustram a invenção, e a invenção não é limitada a eles, exceto na medida em que as reivindicações são assim limitadas. Os versados na técnica que estiverem diante da divulgação serão capazes de fazer modificações e variações na mesma sem se afastarem do escopo da invenção.

Claims

1. Suplemento para ração animal, caracterizado pelo fato de que compreende uma combinação de lisolecitina, pelo menos um monoglicerídeo selecionado do grupo consistindo em monooleato de glicerol e monoestearato de glicerol e pelo menos um emulsificante sintético, o referido emulsificante sintético possuindo um equilíbrio hidrofílico-lipofílico entre 2 a 20, em que o emulsificante sintético é selecionado do grupo que consiste em ésteres de polietilenoglicol de ácidos graxos e monolaurato de sorbitano.

2. Suplemento para ração animal de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o emulsificante sintético é ricinoleato de glicerol polietilenoglicol contendo de 8 a 200 grupos óxido de etileno.

3. Suplemento para ração animal de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o emulsificante sintético é óleo de rícino etoxilado.

4. Suplemento para ração animal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que os monoglicerídeos tem um valor de iodo entre 0 e 200g I2/100g.

5. Suplemento para ração animal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por compreender 84,5% em peso de lisolecitina, 14,1% em peso de monoglicerídeos, e1,4% em peso de emulsificante sintético.

6. Método para preparar um suplemento para ração animal, caracterizado pelo fato de que compreende a adição de uma composição à ração animal, em que a composição compreende lisolecitina, pelo menos um monoglicerídeo selecionado do grupo consistindo de monooleato de glicerol e monoestearato de glicerol e pelo menos um emulsificante sintético possuindo um equilíbrio hidrofílico-lipofílico entre 2 e 20, em que o emulsificante sintético é selecionado a partir do grupo consistindo de ésteres de polietileno glicol de ácidos graxos e monolaurato de sorbitano.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o método compreende a aplicação do suplemento para ração animal ao lote de ração ou a combinação do suplemento de ração animal em uma pré-mistura ou preparações de pré-misturas.

8. Método de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que o suplemento para ração animal é um líquido.

9. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o suplemento para ração animal é administrado como um produto seco.