BR112018013314B1 - Regulador de crescimento de planta resistente a alta tensão e preparação e uso do mesmo - Google Patents
Regulador de crescimento de planta resistente a alta tensão e preparação e uso do mesmo Download PDFInfo
- Publication number
- BR112018013314B1 BR112018013314B1 BR112018013314-0A BR112018013314A BR112018013314B1 BR 112018013314 B1 BR112018013314 B1 BR 112018013314B1 BR 112018013314 A BR112018013314 A BR 112018013314A BR 112018013314 B1 BR112018013314 B1 BR 112018013314B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- substituted
- compound
- unsubstituted
- formula
- alkyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D265/04—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines
- C07D265/12—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D265/14—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
- C07D265/18—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring with hetero atoms directly attached in position 2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
- C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D215/38—Nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- A01N43/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings
- A01N43/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings condensed with carbocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/54—1,3-Diazines; Hydrogenated 1,3-diazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
- A01N43/86—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms six-membered rings with one nitrogen atom and either one oxygen atom or one sulfur atom in positions 1,3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
- C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D215/20—Oxygen atoms
- C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
- C07D215/227—Oxygen atoms attached in position 2 or 4 only one oxygen atom which is attached in position 2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
- C07D239/78—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in position 2
- C07D239/80—Oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
- C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
- C07D263/58—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
- C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Fertilizers (AREA)
- Hydroponics (AREA)
Abstract
a invenção divulga um regulador de crescimento de plantas altamente resistentes ao estresse e um método de preparação e uso dos mesmos. em particular, o composto fornecido pela presente invenção é um substituto de aba para melhorar significativamente a resistência das plantas ao estresse e, portanto, tem uma perspectiva de aplicação muito ampla.
Description
[0001] A presente invenção refere-se ao campo de botânica, em particular, a um regulador de crescimento de planta resistente a alta tensão e preparação e uso do mesmo.
[0002] O Ácido Abscísico (ABA) é um fator-chave que equilibra hormônios endógenos de planta e metabolismo de substâncias de crescimento ativo relacionadas, que tem a habilidade para fazer com que as plantas absorvam água e fertilizante em equilíbrio e coordenem o metabolismo in vivo, pode regular de modo eficaz a raíz/coroa das plantas, e o crescimento vegetativo e crescimento reprodutivo em plantas, e desempenha um papel importante no aprimoramento da qualidade e do rendimento de colheitas. Através da aplicação de ABA, há um efeito de atividade fisiológica importante e valor de aplicação no aprimoramento da qualidade de produtos agrícolas e muitos outros aspectos. Além disso, ABA exógeno pode causar o rápido fechamento de estômato de folha e inibição de transpiração, que pode ser usado para a preservação de flor, ou impedir a murchidão durante o processo de transporte de cultivo de transplantação de muda de colheita. ABA também pode controlar a diferenciação de broto de flor, regular a fase de florescimento, que possui um grande valor de aplicação nos aspectos de flor e jardinagem.
[0003] ABA pode aprimorar o crescimento de colheita na baixa temperatura, seca, resfriamento primavero, sal e outros ambientes de crescimento indesejáveis. Portanto, ABA é amplamente usado em gramado, área rural e jardim, especificamente, nas áreas deficientes de água, tais como a região ocidental, que é de grande significância para o desenvolvimento da indústria agrícola da China.
[0004] No entanto, a atividade natural (+)-ABA é instável e difícil de ser sintetizada, que resulta em um alto custo de produção. Portanto, ABA não foi amplamente usado para a produção agrícola, enquanto cientistas de todo o mundo estão desenvolvendo alternativas para ABA natural.
[0005] Até o momento, embora algumas alternativas para ABA tenham sido desenvolvidas, a atividade dessas alternativas é insatisfatória, cujo valor de aplicação na produção agrícola é baixo. Além disso, algumas alternativas são menos ecológicas.
[0006] Portanto, há uma necessidade urgente na técnica por desenvolver compostos que sejam ecológicos e possam aumentar de modo eficaz a resistência a tensão de planta.
[0007] O objetivo da presente invenção é fornecer compostos, que são ecológicos e podem aumentar de modo eficaz a resistência a tensão de planta e a preparação e usos dos mesmos.
[0008] No primeiro aspecto da presente invenção, um composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um produto racêmico, ou um solvato, ou um precursor do mesmo é fornecido,
em que R1 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R2 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R3 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R4 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R5 é halogênio, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, SF5 ou C3-C8 cicloalquila; R6 é C1-C7 alquila substituída ou não substituída, C2-C7 alquenila substituída ou não substituída, C2-C7 alquinila substituída ou não substituída, C3C7 cicloalquila substituída ou não substituída, ou -Ra-O-Rb substituída ou não substituída, em que Ra é C1-C2 alquileno e Rb é H, C1-C3 alquila; e o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, - CN, -N(Rb)2, e nitro; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C2-C6 alquenila substituída ou não substituída, C2-C6 alquinila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C10 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, - ORb, -CN, e -N(Rb)2; em que Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O, S, e o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, - ORb, -CN, -N(Rb)2, e nitro; R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C3-C8 alcóxi, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; R11 é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído; em que o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, - CN, -N(Rb)2, e nitro; R11 é H, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; X é CR12, NR13, O, ou S, em que R12 é selecionado a partir do grupo que consiste em: H, halogênio, C1-C3 alquila, C2-C3 alquenila, C2-C3 alquinila, C1-C3 haloalquila, e uma combinação desses; R13 é nenhum ou selecionado a partir do grupo que consiste em: H, halogênio, C1-C3 alquila, C2-C3 alquenila, C2C3 alquinila, C1-C3 haloalquila e uma combinação desses; m=1 ou 2; "=" representa uma ligação simples ou uma ligação dupla; contanto que, quando X for CR12, "=" seja uma ligação dupla.
[0009] Em outra modalidade preferida, R6 é C1-C7 alquila, C2-C7 alquenila, C2-C7 alquinila, C3-C7 cicloalquila, ou -Ra-O-Rb, em que Ra é C1-C2 alquileno e Rb é H, C1-C3 alquila.
[0010] Em outra modalidade preferida, R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C2-C6 alquenila substituída ou não substituída, C2-C6 alquinila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C10 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, -ORb, -CN, e -N(Rb)2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O, S, e o termo “substituído” significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, -CN, -N(Rb)2, e nitro.
[0011] Em outra modalidade preferida, quando X for CR12 e R12 é H, “^=” é uma ligação dupla.
[0012] Em outra modalidade preferida, R7 é H.
[0013] Em outra modalidade preferida, quando X for CR12, R8, R9, R10 não são H no mesmo tempo.
[0014] Em outra modalidade preferida, quando X for CR12, R8, R9, R10 são H ao mesmo tempo.
[0015] Em outra modalidade preferida, quando Rnfor nenhum, “=z= ” é uma ligação dupla e m=1.
[0016] Em outra modalidade preferida, quando R13 for selecionado a partir do grupo que consiste em: H, halogênio, C1-C3 alquila, C2-C3 alquenila, C2-C3 alquinila, C1-C3 haloalquila, e uma combinação desses, “^=” é uma ligação simples e m=1 ou 2.
[0017] Em outra modalidade preferida, quando X for O ou S, “^=” é uma ligação simples.
[0018] Em outra modalidade preferida, o halogênio compreende F, Cl, Br ou I.
[0019] Em outra modalidade preferida, o halogênio é F.
[0020] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da fórmula Ia:
em que as definições de R1-R10 e m são descritas acima.
[0021] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da fórmula Ib:
em que as definições de R1-R10, R13, m, e “=” são descritas como acima.
[0022] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da fórmula Ic:
em que as definições de R1-R10 e m são descritas acima.
[0023] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da fórmula Id:
em que as definições de R1-R10, R12 e m são descritas como acima.
[0024] Em outra modalidade preferida, todos dentre R1, R2, R3 e R4 são H.
[0025] Em outra modalidade preferida, 1, 2, 3 ou 4 de R1, R2, R3 e R4 são halogênio.
[0026] Em outra modalidade preferida, o halogênio compreende F, Cl, Br ou I.
[0027] Em outra modalidade preferida, o halogênio é F.
[0028] Em outra modalidade preferida, 4 de R1, R2, R3 e R4 são F.
[0029] Em outra modalidade preferida, R5 é C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, SF5 ou C3-C6 cicloalquila.
[0030] Em outra modalidade preferida, R5 é metila ou ciclopropila.
[0031] Em outra modalidade preferencial, R6 é C1-C5 alquila substituída ou não substituída, C2-C7 alquenila substituída ou não substituída, C2-C5 alquinila substituída ou não substituída, C3-C7 cicloalquila substituída ou não substituída, ou -Ra-O-Rb substituída ou não substituída, em que Ra é C1-C2 alquileno e Rb é H, ou C1-C3 alquila; e o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, - CN, -N(Rb)2, ou nitro;
[0032] Em outra modalidade preferida, R6 é n-propila, etila,isopropila, isobutila, ou n-propila de flúor.
[0033] Em outra modalidade preferida, R6 é C3 alquila, C3 alquenila ou C3 alquinila.
[0034] Em outra modalidade preferida, R6 é n-propila.
[0035] Em outra modalidade preferida, R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C2-C4 alquenila substituída ou não substituída, C2-C4 alquinila substituída ou não substituída, C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C8 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, -OH, -CN, e -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O, S, e o termo “substituído” significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, -CN, -NH2, e nitro; e R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C3-C6 alcóxi, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, - CN, -NH2, e nitro.
[0036] Em outra modalidade preferida, R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C2-C4 alquenila substituída ou não substituída, C2-C4 alquinila substituída ou não substituída, C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C8 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, -OH, -CN, e -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 heteroátomo selecionado a partir de N, O, S, e o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, -CN, -NH2, e nitro; e
[0037] R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C3-C6 alcóxi, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, -CN, -NH2, e nitro.
[0038] Em outra modalidade preferida, R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C2-C4 alquenila substituída ou não substituída, C2-C4 alquinila substituída ou não substituída, C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C8 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, -OH, -CN, e -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O, S, e o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, -CN, -NH2, e nitro; e R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C3-C6 alcóxi, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, - CN, -NH2, e nitro.
[0039] Em outra modalidade preferida, R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: C1-C4 alquila, substituída ou não substituída, C2-C4 alquenila substituída ou não substituída, C2-C4 alquinila substituída ou não substituída, C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C8 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, -OH, -CN, e -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 heteroátomo selecionado a partir de N, O, S, e o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, -CN, -NH2, e nitro; e R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C3-C6 alcóxi, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído; em que o termo "substituído" significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -OH, - CN, -NH2, e nitro.
[0040] Em outra modalidade preferida, R7, R8, R9 e R10 são os grupos específicos que correspondem a cada composto específico nos Exemplos deste pedido.
[0041] Em outra modalidade preferida, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[0042] Em outra modalidade preferida, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[0043] No segundo aspecto da presente invenção, um uso de um composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico, ou um produto racêmico, ou um solvato, ou um precursor do mesmo, de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, é fornecido para a preparação de uma formulação agrícola ou uma composição, que é usada para (i) o melhoramento de resistência a tensão de planta; (ii) a preparação de um agonista para receptor de ABA; e/ou (iii) a preparação de um inibidor para a germinação de semente.
[0044] Em outra modalidade preferida, o agonista promove a interação da proteína PYL de receptor de ABA com a proteína fosfatase PP2C.
[0045] Em outra modalidade preferida, a formulação agrícola ou a composição é usada para um ou mais dentre os seguintes usos: (i) promover a interação da proteína PYL de receptor de ABA com a proteína fosfatase PP2C; (ii) reduzir a transpiração das folhas; (iii) inibir a germinação de semente.
[0046] Em outra modalidade preferida, a resistência a tensão é resistência a tensão abiótica relacionada a ABA.
[0047] Em outra modalidade preferida, a resistência a tensão é selecionada a partir do grupo que consiste em: uma resistência uma seca, uma resistência a frio, uma tolerância a sal, uma resistência a pressão osmótica, uma resistência a calor e uma combinação desses.
[0048] Em outra modalidade preferida, a planta é a planta que contém receptor de ABA (ou receptores de ABA) da família PYR/PYL.
[0049] Em outra modalidade preferida, a planta compreende um musgo, um feto, uma gimnosperma, uma monocotiledona e uma dicotiledônea.
[0050] Em outra modalidade preferida, a planta compreende uma planta agrícola, uma planta hortícola e uma planta florestal.
[0051] Em outra modalidade preferida, a planta compreende uma planta lenhosa e uma erva.
[0052] Em outra modalidade preferida, a planta compreende uma planta completa, um órgão (tal como raiz, haste, folha, galho, flor, fruta ou emente), um tecido (tal como calo), ou uma célula.
[0053] Em outra modalidade preferida, a planta é selecionada a partir do grupo que consiste em: Poaceae, Asteraceae, Liliaceae, Cruciferae, Rosaceae, Leguminosae, Theaceae, Sterculiaceae, Pinaceae, Juglandaceae, Piperaceae, Magnoliaceae, Ericaceae, Actinidiaceae, Vitaceae, Begoniaceae, Bromeliaceae, Ginkgoaceae, Illiciaceae, Zingiberaceae, Punicaceae,Apocynaceae, Berberidaceae, Rutaceae, Solanaceae, Cupressaceae, Aquifoliaceae, Palmae e uma combinação desses.
[0054] Em outra modalidade preferida, a planta é selecionada a partir do grupo que consiste em: Arabidopsis, tabaco, algodão, alface, arroz, trigo, milho, amendoim, sorgo, aveia, centeio, cana-de-açúcar, soja, batata, trigo sarraceno, pimenta, uva, pera, maçã, banana, ginseng, tomate, pimenta caiena, berinjela, couve-flor, couve chinesa, colza oleaginosa, pepino, melão, cebola, girassol, lírio, rosa, crisântemo, peônia, cravo, árvore de cânfora, árvore parasol chinesa, pinheiro, e uma combinação desses.
[0055] No terceiro aspecto da presente invenção, uma formulação agrícola é fornecida, que compreende: (i) um composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico, ou um produto racêmico, ou um solvato, ou um precursor do mesmo de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção; e (ii) um carreador agricolamente aceitável.
[0056] Em outra modalidade preferida, na formulação agrícola, o teor do componente (i) é de 0,1 a 1.000 μM, preferencialmente, 1 a 200 μM, mais preferencialmente 5 a 100 μM.
[0057] Em outra modalidade preferida, a formulação agrícola contém 0,0001 a 99% em peso, preferencialmente, 0,1 a 90% em peso do componente (i), com base no peso total da formulação agrícola.
[0058] Em outra modalidade preferida, a formulação agrícola compreende adicionalmente um agente resistente a seca adicional (tal como um agente de revestimento de semente resistente a seca, um agente de retentor de umidade resistente a seca ou a agente de pulverização resistente a seca) ou outros ingredientes agrícolas ativos.
[0059] Em outra modalidade preferida, o ingrediente agrícola ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em: fungicidas, herbicidas, pesticidas, nematicidas, inseticidas, ativadores vegetais, sinergistas, reguladores de crescimento de planta, e acaricidas.
[0060] Em outra modalidade preferida, a formulação agrícola compreende adicionalmente um tensoativo (tal como tensoativo catiônico, tensoativo aniônico, tensoativo anfotérico ou tensoativo não iônico).
[0061] Em outra modalidade preferida, a forma de dosagem da formulação agrícola é selecionada a partir do grupo que consiste em: soluções, emulsões, suspensões, pós, agentes espumantes, pastas, grânulos, aerossóis, e uma combinação desses.
[0062] No quarto aspecto da presente invenção, um método para melhorar a resistência a tensão de planta é fornecido, administrando-se a uma planta um composto da fórmula I, ou um sal, ou um isômero óptico, ou um racemato, ou um solvato, ou um precursor do mesmo, de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, ou uma formulação agrícola, de acordo com o terceiro aspecto da presente invenção.
[0063] Em outra modalidade preferida, a administração é selecionada a partir do grupo que consiste em: pulverização ou irrigação.
[0064] Em outra modalidade preferida, a dosagem para administração é de 2 a 100 g/hectare, preferencialmente, 4 a 80 g/hectare, mais preferencialmente, 6 a 60 g/hectare.
[0065] Em outra modalidade preferida, a dosagem para administração é de 1 a 5.000 μg/planta, preferencialmente, 10 a 2.500 μg/planta, mais preferencialmente, 20 a 1.000 μg/planta.
[0066] No quinto aspecto da presente invenção, um método para preparar um composto da fórmula I ou um sal do mesmo, que compreende as etapas de: (a) reagir um composto da fórmula I-A com um composto da fórmula I-S2 em um solvente inerte, dessa forma, formando um composto da fórmula I;
[0067] Em cada fórmula, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, m, X, “=” são definidos como no primeiro aspecto da presente invenção.
[0068] Em outra modalidade preferida, o solvente inerte é selecionado a partir do grupo que consiste em: N, N-dimetilformamida (DMF), diclorometano (DCM), acetonitrila (ACN) e uma combinação desses.
[0069] Em outra modalidade preferida, a reação é realizada na presença de um agente de ligação de ácido.
[0070] Em outra modalidade preferida, o agente de ligação de ácido é selecionado a partir do grupo que consiste em: carbonato de potássio (K2CO3), trietilamina (Et3N), piridina (Py) e uma combinação desses.
[0071] Em outra modalidade preferida, na etapa (a), a temperatura de reação é de 0 a 150oC (ou temperatura de refluxo), preferencialmente, 10 a 60 oC, mais preferencialmente, 20 a 40 oC.
[0072] Em outra modalidade preferida, na etapa (a), o tempo de reação é de 0,1 a 72 horas, mais preferencialmente, 1 a 24 horas, mais preferencialmente, 8 a 20 horas, mais preferencialmente 4 a 12 horas.
[0073] Em outra modalidade preferida, na fórmula I-A, X é O, e “= ” é uma ligação simples.
[0074] Em outra modalidade preferida, o composto I-S2 é preparado pelo seguinte método: (1) reagir um composto da fórmula I-SS1 com tioureia em um solvente inerte, dessa forma, formando assim um composto da fórmula I-S2;
em cada fórmula, R1, R2, R3, R4, e R5 são definidos como no primeiro aspecto da presente invenção, X2 é um grupo de saída (tal como Cl, Br ou I).
[0075] Em outra modalidade preferida, o solvente inerte é selecionado a partir do grupo que consiste em: etanol, acetonitrilo, tetraidrofurano e uma combinação desses.
[0076] Em outra modalidade preferida, a reação é realizada na presença de ácido.
[0077] Em outra modalidade preferida, o ácido é selecionado a partir do grupo que consiste em: ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico e uma combinação desses.
[0078] Em outra modalidade preferida, na etapa (i), a temperatura de reação é de 0 a 150 oC (ou temperatura de refluxo), preferencialmente, 10 a 50oC, mais preferencialmente, 15 a 25oC.
[0079] Em outra modalidade preferida, na etapa (i), o tempo de reação é de 0,1 a 72 horas, mais preferencialmente, 1 a 24 horas, mais preferencialmente, 2 a 12 horas.
[0080] Deve-se entender que, no escopo da presente invenção, cada recurso técnico da presente invenção descritos acima e a seguir (como exemplos) podem ser combinados entre si para formar uma solução técnica nova ou preferida, que não é listada aqui devido a limitações espaciais.
[0081] A Figura 1 mostra múltiplos compostos da presente invenção, incluindo 0224 (Figura 1a), 0304 (Figura 1b), 0706, 0708, 0713, 0715 (Figura 1c), 1028c (Figura 1d), 0428 (1e), 1022B (1f) e NC0F4 (1g) que podem se ligar a um complexo de receptor-HAB1 de PYL2 de Arabidopsis thaliana, dessa forma, inibindo a atividade de proteína fosfatase HAB1. Em concentrações inferiores, todos dentre os compostos acima exibem efeitos inibitórios, e os efeitos inibitórios da maior parte dos compostos são melhores ou significativamente melhores que aqueles de ABA.
[0082] A Figura 2 mostra uma multiplicidade de compostos da presente invenção que exibem um efeito dependente de dose as um agonista de receptor de PYL. Em que uma curva de resposta de dose de 0224 e 0304 com receptores PYR1 (Figura 2a), PYL1 (Figura 2b), PYL2 (Figura 2c) e PYL7 (Figura 2d) de Arabidopsis thaliana, e curvas de resposta de dose de quatro compostos (0706, 0708, 0713 e 0715) (Figura 2e), compostos 0428 (Figura 2f), 1022B (Figura 2g) e NCOF4 (Figura 2h) com um agonista de receptor de receptor PYL2 de Arabidopsis thaliana mostram que os compostos conforme descritos acima podem promover a interação de proteína fosfatase HAB1 e os receptores PYL de Arabidopsis thaliana, e a interação exibe um efeito dependente de dose. Os valores de EC50 mostram que a afinidade dos compostos acima com os receptores correspondentes é significativamente maior que aquele de ABA.
[0083] A Figura 3 mostra os efeitos do composto 0224 e ABA na germinação de semente de Col-0 e mutantes triplos pyr1;pyl1;pyl4 em uma concentração de 1 μM. Col-0 é semeado na metade do lado esquerdo e o mutante triplo pyr1;pyl1;pyl4 é semeado na metade do lado direito em cada vaso de cultura. As fotos foram tiradas 4 dias após a germinação de semente (6 dias após a semeadura) dos mutantes triplos pyr1;pyl1;pyl4. O tratamento de DMSO é um grupo de controle. Os resultados mostram que o composto 0224 pode inibir a germinação de semente de Col-0, enquanto o efeito inibitório na germinação de semente do mutante triplo pyr1;pyl1;pyl4 é significativamente reduzido, indicando que a inibição do composto 0224 na germinação de semente em Arabidopsis thaliana é mediada através de receptores ABA, em vez de mostrar efeitos tóxicos.
[0084] A Figura 4 mostra que o tratamento dos compostos 0224, 0304, 0706, 0715 ou 0428 da presente invenção reduziu significativamente a taxa de transpiração de folha, resultando em uma temperatura de folha aumentada em Arabidopsis. Em que a Figura 4a mostra que após o tratamento com 5 μM de composto ABA ou 0224, a temperatura de folha é significativamente aumentada em comparação àquela com tratamento de controle (DMSO) e a duração do composto 0224 é mais longa. A Figura 4b mostra que após o tratamento com 5 μM de composto 0304, a temperatura de folha é significativamente aumentada em comparação àquela com tratamento de controle (DMSO). Embora após a concentração do composto 0224 tenha sido diminuída para 2 μM ou 1 μM, a temperatura de folha ainda é significativamente aumentada em comparação àquela com tratamento de controle (DMSO) e o efeito é gradualmente diminuído, indicando que ainda há um efeito dependente de concentração para o efeito inibitório do composto 0224 na transpiração de folha. A Figura 4c mostra que após o tratamento com 5 μM de composto 0706 ou 0715, a temperatura de folha é significativamente aumentada em comparação àquela com tratamento de controle (DMSO), em que a duração desse é equivalente àquela de 0224. A Figura 4d mostra que após o tratamento com 5 μM, 2 μM e 1 μM do composto 0428, a temperatura de folha é significativamente aumentada em comparação àquela com o tratamento de DMSO, e a temperatura de folha é aumentada com o aumento da concentração, indicando que há um efeito dependente de concentração para o efeito inibitório de composto 0428 na transpiração de folha.
[0085] A Figura 5 mostra que após o tratamento com os compostos 0224 e 0304 da presente invenção, a taxa de transpiração de folha de soja é significativamente reduzida, resultando em uma temperatura de folha aumentada. 14 dias após a semeadura, interrompe-se a irrigação e pulverização das plantas de soja com composto 0224 ou 0304, da presente invenção, ou ABA. Em comparação com o grupo de controle (DMSO), 20 μM do composto 0224 ou 0304 podem, ambos, reduzir significativamente a taxa de transpiração da folha de soja, e o efeito inibitório é melhor que aquele de ABA na mesma concentração.
[0086] A Figura 6 mostra que o tratamento com o composto 0224 da presente invenção reduziu significativamente a taxa de transpiração da folha de algodão, resultando em uma temperatura de folha aumentada. 25 dias após a semeadura, interrompeu-se a irrigação e pulverização das plantas de algodão com o composto 0224 da presente invenção ou ABA. Em comparação com o grupo de controle (DMSO), 20 μM do composto 0224 podem significativamente reduzir a taxa de transpiração da folha de algodão, e o efeito inibitório é melhor que àquele de ABA na mesma concentração.
[0087] A Figura 7 mostra os resultados de experimentos de seca de solo em Arabidopsis thaliana. Arabidopsis thaliana é fotografada antes da seca e quatro semanas após a seca. A Arabidopsis thaliana no grupo de controle (tratada com DMSO) murchou quatro semanas após a seca, enquanto o Arabidopsis tratado com composto 0224, 0706 ou 0715 ainda cresce normalmente.
[0088] A Figura 8 mostra os resultados de experimentos de seca de solo em soja. A soja na Figura 5 é irrigada novamente após 6 dias de seca. As fotos mostram a condição de crescimento de soja um dia após a nova irrigação. O crescimento da soja tratada com o composto 0224 ou 0304 é significativamente melhor que aquele do grupo de controle (DMSO) ou aquele da soja tratada com a mesma concentração de ABA.
[0089] A Figura 9 mostra os resultados de experimentos de seca de solo em algodão. O algodão na Figura 6 é irrigado novamente após 6 dias de seca, e o composto 0224 da presente invenção ou ABA é pulverizado uma vez a cada 3 dias durante esse período. As fotos mostram a condição de crescimento de algodão antes da nova irrigação e um dia após a nova irrigação. O crescimento de algodão tratado com o composto 0224 é significativamente melhor que aquele do grupo de controle (DMSO) ou aquele do algodão tratado com a mesma concentração de ABA.
[0090] A Figura 10 mostra uma alteração transcricional de genes relacionados a tensão induzida por ABA em Arabidopsis thaliana do tipo selvagem após o tratamento com 10 μM do composto 1022B da presente invenção por 6 horas. O tratamento com DMSO e a mesma concentração de ABA foram usados como grupo de controle negativo e positivo, respectivamente. Os resultados mostram que os níveis transcricionais dos quatro genes relacionados a tensão induzidos pelo composto 1022B da presente invenção são todos maiores que aqueles de ABA.
[0091] As Figuras 11a e 11b mostram uma estrutura bidimensional da interação entre ABA (a), ou os compostos da presente invenção (0428) (b) e múltiplos resíduos de aminoácidos na estrutura de cavidade de complexo de PYL2-HAB1, respectivamente. Moléculas de água, átomos de nitrogênio, átomos de oxigênio e átomos de halogênio são mostrados na Figura, as linhas pontilhadas representam ligações de hidrogênio, e os números indicam a distância entre dois átomos/duas moléculas (a unidade é Angstroms (A)). Os resultados mostram que, semelhante à ABA, o composto 0428 da presente invenção forma várias ligações de hidrogênio com os resíduos de aminoácidos na estrutura de cavidade de PYL2, exceto pelo fato de que a formação dessas ligações de hidrogênio não exige a mediação de molécula de água, que permite uma ligação mais próxima do composto 0428 ao complexo de PYL2-HAB1.
[0092] A Figura 12 mostra os resultados de experimentos de seca de solo em Arabidopsis. Interrompeu-se a irrigação e a pulverização das plantas de Arabidopsis do tipo selvagem (Col-0) que cresceram por 3 semanas em um ambiente de dia curto com 5 μM de ABA ou do composto 0428 da presente invenção. A condição de crescimento da planta no dia e 14 dias após a primeira pulverização dos compostos é mostrada na Figura, respectivamente. A planta pulverizada com a solução de DMSO é usada como um controle negativo. Os resultados mostram que a planta pulverizada com o composto 0428 exibe uma condição de crescimento melhor que aquela no grupo de controle e aquela pulverizada com ABA.
[0093] A Figura 13 mostra uma curva de resposta à dose de agonistas de receptor de GmPYL6 de soja e OsPYL2 de arroz dos compostos da presente invenção (tais como composto 0428) e ABA. O composto 0428 pode promover a interação da proteína fosfatase HAB1 de Arabidopsis com GmPYL6 de soja ou OsPYL2 de arroz, e essa interação é dependente de dose.
[0094] As Figuras 14a e 14b mostram os resultados de experimentos de seca de solo em soja e milho, respectivamente. O milho em período de boca de sino pequeno e a soja no estágio trifoliado triplo são selecionados, e os compostos da presente invenção (tais como o composto 0428) são pulverizados no primeiro dia e no segundo dia após o estabelecimento de seca. A condição de crescimento geral do milho após 4 dias de tratamento com seca e a soja após 9 dias de tratamento com seca é mostrada na Figura. A concentração do composto 0428 no experimento é de 50 μM. A condição de crescimento de milho e soja tratados com o composto 0428 é significativamente melhor que aquela no grupo de controle.
[0095] A Figura 15 mostra o efeito do composto 0428 e ABA na germinação da semente de Col-0 e mutante triplo pyr1;pyl1;pyl4 em uma concentração de 2 μM. Col-0 é semeado no lado esquerdo e o mutante triplo pyr1;pyl1;pyl4 é semeado no lado direito do vaso de cultura. As fotos foram tiradas 7 dias após a germinação de semente (9 dias após a semeadura) dos mutantes triplos pyr1;pyl1;pyl4. O tratamento de DMSO é usado como grupo de controle. Os resultados mostram que o composto 0428 pode inibir a germinação de semente do Col-0, mas o efeito inibitório na germinação de semente dos mutantes triplos pyr1;pyl1;pyl4 é significativamente reduzida, indicando que a inibição de germinação de semente do composto 0428 no Arabidopsis é mediada através de receptores ABA, em vez de efeitos tóxicos.
[0096] A Figura 16 mostra que o tratamento com o composto 0224 da presente invenção reduziu significativamente a taxa de transpiração da folha de trigo, resultando em uma temperatura de folha aumentada. 18 dias após a semeadura, interrompeu-se a irrigação das plantas de trigo e o composto 0224 da presente invenção é pulverizado. Em comparação ao grupo de controle (DMSO), 100 μM de composto 0224 podem significativamente reduzir a taxa de transpiração da folha de trigo.
[0097] A Figura 17 mostra os resultados de experimentos de seca de solo em trigo. O trigo na Figura 16 foi fotografado após 6 dias de seca, e as fotos mostram que a condição de crescimento de trigo tratado com 100 μM do composto 0224 ou ABA é significativamente melhor que aquela no grupo de controle (DMSO).
[0098] Após um estudo extensivo e aprofundado, os presentes inventores, em primeiro lugar, desenvolveram uma classe de alternativas de ABA (os compostos da presente invenção) com altas atividades de ácido abscísico (ABA). Os compostos da presente invenção podem significativamente aumentar as múltiplas resistências da planta (tais como resistência a seca, resistência a frio, etc.). Além disso, os compostos da presente invenção são fácies de serem preparados, e têm as vantagens, tais como ser ecologicamente excelente e ter uma ação rápida e assim por diante, e, dessa forma, os mesmos têm um amplo prospecto de aplicação. Com base nisso, os inventores completam a presente invenção.
[0099] Os experimentos mostraram que os compostos da presente invenção podem se ligar a uma diversidade de receptores PYR/PYL, e a atividade in vitro atividade que é melhor que aquela de Ácido Abscísico (ABA) e pode significativamente aumentar a resistência a tensão de uma variedade de plantas diferentes.
[0100] Conforme usado no presente documento, o termo "substituído ou não substituído" significa que o grupo pode ser não substituído, ou o H no grupo é substituído por um ou mais (tal como, 1 a 10, preferencialmente, 1 a 5, mais preferencialmente, 1 a 3, com máxima preferência, 1 a 2) substituintes.
[0101] Conforme usado no presente documento, o termo “substituição” ou “substituído” significa que o grupo tem um ou mais (preferencialmente, 1 a 6, mais preferencialmente, 1 a 3) substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, hidroxila, -NH2, nitro, -CN, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, C3-C6 cicloalquila, C1-C3 carboxila, C2-C4 alquenila, C2-C4 alquinila.
[0102] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C7 alquila" se refere a um grupo alquila reta ou ramificada que tem 1 a 7 átomos de carbono, tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, t- butila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C7 alquila substituída ou não substituída.
[0103] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C6 alquila" se refere a um grupo alquila reta ou ramificada que tem 1 a 6 átomos de carbono, tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, t- butila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C6 alquila substituída ou não substituída.
[0104] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C4 alquila" se refere a um grupo alquila reta ou ramificada que tem 1 a 4 átomos de carbono, tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, t- butila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C4 alquila substituída ou não substituída.
[0105] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C3 alquila" se refere a um grupo alquila reta ou ramificada que tem 1 a 3 átomos de carbono, tal como metila, etila, propila, isopropila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C3 alquila substituída ou não substituída.
[0106] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C2 alquileno" se refere a um grupo hidrocarboneto divalente que tem 1 a 2 átomos de carbono, tal como metileno, etileno ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C2 alquileno substituído ou não substituído.
[0107] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C7 alquenila" se refere a um grupo alquenila reta ou ramificada que tem 2 a 7 átomos de carbono, tal como etenila, alila, 1-propenila, isopropenila, 1-butenila, 2- butenila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C7 alquenila substituída ou não substituída.
[0108] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C6 alquenila" se refere a um grupo alquenila reta ou ramificada que tem 2 a 6 átomos de carbono, tal como etenila, alila, 1-propenila, isopropenila, 1-butenila, 2- butenila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C6 alquenila substituída ou não substituída.
[0109] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C3 alquenila" se refere a um grupo alquenila reta ou ramificada que tem 2 a 3 átomos de carbono, tal como etenila, alila, 1-propenila, isopropenila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C3 alquenila substituída ou não substituída.
[0110] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C7 alquinila" se refere a um grupo alquinila reta ou ramificada que tem 2 a 7 átomos de carbono, tal como etinila, propinila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C7 alquinila substituída ou não substituída.
[0111] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C6 alquinila" se refere a um grupo alquinila reta ou ramificada que tem 2 a 6 átomos de carbono, tal como etinila, propinila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C6 alquinila substituída ou não substituída.
[0112] Conforme usado no presente documento, o termo "C2-C3 alquinila" se refere a um grupo alquinila reta ou ramificada que tem 2 a 3 átomos de carbono, tal como etinila, propinila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C2-C3 alquinila substituída ou não substituída.
[0113] Conforme usado no presente documento, o termo "C3-C8 cicloalquila" se refere a uma alquila cíclica que tem 3 a 8 átomos de carbono, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0114] Conforme usado no presente documento, o termo "C3-C7 cicloalquila" se refere a uma alquila cíclica que tem 3 a 7 átomos de carbono, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C3-C7 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0115] Conforme usado no presente documento, o termo "C3-C6 cicloalquila" se refere a uma alquila cíclica que tem 3 a 6 átomos de carbono, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0116] Conforme usado no presente documento, o termo "C5-C10 heterociclila" se refere a um grupo saturado, parcialmente saturado ou insaturado (mas não aromáticos) que tem um anel único ou anel fundido (que inclui sistema de anel conectado e sistemas de anel em espiral, que têm 5 a 10 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, enxofre ou oxigênio). Em um sistema de anel fundido, um ou mais anéis podem ser cicloalquila, arila ou heteroarila, contanto que o ponto de afixação passe anéis não aromáticos. O termo inclui heterociclila substituída ou não substituída.
[0117] Conforme usado no presente documento, o termo "C5-C8 heterociclila" se refere a um grupo saturado, parcialmente saturado ou insaturado (mas não aromáticos) que tem um anel único ou anel fundido (que inclui sistema de anel conectado e sistemas de anel em espiral, que têm 5 a 8 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, enxofre ou oxigênio). Em um sistema de anel fundido, um ou mais anéis podem ser cicloalquila, arila ou heteroarila, contanto que o ponto de afixação passe anéis não aromáticos. O termo inclui heterociclila substituída ou não substituída.
[0118] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C3 haloalquila" se refere a um grupo alquila reta ou ramificada que tem 1 a 3 átomos de carbono em que hidrogênio é substituído por um ou mais halogênios, por exemplo, halometila, haloetila, halopropila, haloisopropila ou semelhantes. Quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C3 haloalquila substituída ou não substituída.
[0119] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C6 alcóxi" se refere a um grupo que tem uma estrutura "(C1-C6 alquila)-O-”, por exemplo, CH3-O-, C2H5-O-, C3H7-O-, (CH3)2CH-O-, nC4H9-O-, tC4H9-O-, ou semelhantes, e quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído.
[0120] Conforme usado no presente documento, o termo "C1-C4 alcóxi" se refere a um grupo que tem uma estrutura "(C1-C4 alquila)-O-” estrutura, por exemplo, CH3-O-, C2H5-O-, C3H7-O-, (CH3)2CH-O-, nC4H9-O-, tC4H9-O-, ou semelhantes, e, quando não for especificado o contrário, o termo inclui C1-C4 alcóxi substituído ou não substituído.
[0121] Conforme usado no presente documento, o termo "halogênio" se refere a flúor, cloro, bromo ou iodo, preferencialmente, flúor ou cloro, com máxima preferência, flúor.
[0122] Conforme usado no presente documento, o termo "halogenado" se refere a um grupo que é substituído por um ou mais dentre os mesmos ou diferentes átomos de halogênio descritos conforme acima, que podem ser parcialmente halogenados ou peralogenados, tais como trifluorometila, pentafluoroetila, heptafluoroisopropila ou semelhantes.
[0123] Os compostos da presente invenção podem conter um ou mais centros assimétricos e, portanto, ocorrer como racematos, misturas racêmicas, enantiômeros únicos, compostos diastereoméricos e diastereômeros únicos. O centro assimétrico que pode existir depende da natureza dos vários substituintes na molécula. Cada tal centro assimétrico produzirá independentemente dois isômeros ópticos, e todos os possíveis isômeros ópticos e misturas diastereoméricas e compostos puros ou parcialmente puros são incluídos no escopo desta invenção. A invenção inclui todas as formas isoméricas dos compostos.
[0124] Conforme usado no presente documento, os termos "compostos da presente invenção", "substitutos de ABA da presente invenção" e "composto da fórmula I" podem ser usados intercambiavelmente, os quais se referem a compostos que têm a estrutura mostrada na Fórmula I. Além disso, os termos também incluem sais, isômeros ópticos, racematos, solvatos (tais como hidratos), e/ou precursores dos compostos da fórmula I,
em que R1-R10, R11, m, X, e “ ” são definidos como acima.
[0125] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da Fórmula Ia:
em que R1-R10 e m são definidos como acima.
[0126] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da Fórmula Ib:
em que R1-R10, R13, m, e “=” são como definidos acima.
[0127] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da Fórmula Ic:
em que R1-R10 e m são definidos como acima.
[0128] Em outra modalidade preferida, o composto tem uma estrutura da Fórmula Id:
em que R1-R10, R12, e m são como definidos acima.
[0129] O método de preparação dos compostos da fórmula I, de acordo com a presente invenção, é descrito mais especificamente conforme abaixo, mas não se destina a limitar a invenção de qualquer forma. Os compostos da presente invenção também podem ser convencionalmente preparados por uma combinação de vários métodos de síntese descritos no presente relatório descritivo ou conhecidos na técnica, e tais combinações estão prontamente disponíveis para aqueles versados na técnica. De modo geral, no método de preparação da presente invenção, a maior parte das reações são fornecidas em um solvente inerte a uma temperatura de 0 oC a 150 oC (ou temperatura de refluxo) (preferencialmente, 10 a 60 oC, ou 20 a 40 oC) por um período de tempo (tal como, 0,1 a 72 horas, preferencialmente, 2 a 20 horas).
[0130] Conforme usado no presente documento, a temperatura ambiente se refere a 4 a 35 oC, preferencialmente, 20 a 30 oC.
[0131] Preferencialmente, os compostos da fórmula I, de acordo com a presente invenção, podem ser preparados seguindo-se esquemas, os métodos exemplificativos descritos nos exemplos e a literatura publicada relevante usada por aqueles versados na técnica.
[0132] Tipicamente, o método de preparação dos compostos da Fórmula Ia da presente invenção pode incluir, porém, sem limitação, os seguintes esquemas. ESQUEMA (TOMANDO X=O, R6=PROPILA, R7=METILA, R8=H, R9=H, R10=H, M=1 COMO EXEMPLO) (1) PREPARAÇÃO DE 1-PROPIL-4-METIL-6-AMINO-1,4-DI- HIDROBENZOXAZOL-2-ONA:
[0133] Na etapa 1, em primeiro lugar, reagir o composto da fórmula I-1 com N,N‘-carbonildi-imidazola (CDI) em um solvente inerte (tal como tetraidrofurano) em uma determinada temperatura (tal como, 20 a 40 °C) por um período de tempo, dessa forma, formando um composto da fórmula I-2.
[0134] Etapa 2: na presença de um álcali (tal como hidrato de sódio), reagir o composto da fórmula I-2 com iodopropano em um solvente inerte (tal como N-N-dimetilformamida) em uma determinada temperatura (tal como 20 a 40 °C) por um período de tempo, dessa forma, formando um composto da fórmula I-3.
[0135] Etapa 3: Na presença de um ácido (tal como ácido sulfúrico), reagir o composto da fórmula I-3 com nitrato de potássio em uma determinada temperatura (tal como 0 a 10 °C) por um período de tempo, dessa forma, formando um composto da fórmula I-4.
[0136] Etapa 4: Em um solvente inerte (tal como metanol), o composto da fórmula Ia-4 é submetido a uma reação de redução com paládio em carbono como um catalisador em uma determinada temperatura (tal como 20 a 40 °C), dessa forma, formando um composto da fórmula I-5. (2) PREPARAÇÃO DE CLORETO DE 4-METIL- HALOBENZILSULFONILA:
Etapa 5: Em um solvente inerte (tal como etanol, acetonitrilo), reagir o composto da fórmula I-SS1 (tal como brometo de 2, 3, 5, 6-tetrafluoro-4- metilbenzila ou cloreto de 2, 3, 5, 6-tetrafluoro- 4-metilbenzila) com tioureia, dessa forma, formando um produto de reação; e, então, na presença de um ácido (tal como ácido hidroclórico concentrado), reagir o produto de reação com clorito de sódio em um solvente inerte (tal como acetonitrilo) em uma determinada temperatura (tal como 15 a 25 °C), dessa forma, formando um composto da fórmula I-S2. (3) PREPARAÇÃO DE UM COMPOSTO DA FÓRMULA Ia
[0137] Etapa 6: na presença de um agente de ligação de ácido (tal como carbonato de potássio), reagir o composto da fórmula 1 a 5 com o composto da fórmula I-S2 em um solvente inerte (tal como DMF) em uma determinada temperatura (tal como 20 a 50 °C) por um período de tempo, dessa forma, formando um composto da fórmula Ia.
[0138] No esquema I, X2 é um grupo de saída, que é cloro, bromo ou iodo. Outros substituintes e grupos são conforme definido no relatório descritivo.
[0139] As substâncias ativas (compostos da fórmula I, ou sais desses, ou isômeros ópticos desses, ou racematos desses, ou solvatos desses, ou precursores desses) da presente invenção podem ser preparadas em formulações agrícolas de maneiras convencionais, por exemplo, soluções, emulsões, suspensões, poeiras, agentes espumantes, pastas, grânulos, aerossóis, materiais naturais e sintéticos impregnados com substâncias ativas, microcápsulas em polímeros, materiais de revestimento para sementes.
[0140] Essas formulações podem ser produzidas por métodos conhecidos, por exemplo, misturando-se os compostos ativos com extensores que são diluentes ou carreadores líquidos ou liquefeitos ou sólidos e, opcionalmente, com tensoativos, isto é, emulsificadores e/ou dispersantes e/ou formadores de espuma. Por exemplo, quando água for usada como um extensor, os solventes orgânicos também podem ser usados como auxiliares.
[0141] Este é basicamente adequado quando estiver usando um solvente líquido como um diluente ou um carreador, por exemplo, hidrocarbonetos aromáticos, tais como xileno, tolueno ou naftaleno de alquila; hidrocarbonetos aromáticos clorinatados ou alifáticos clorinatados, tais como clorobenzeno, cloreto de vinila ou cloreto de metileno; hidrocarbonetos alifáticos, tais como ciclo-hexano, ou parafinas, tais como frações de óleo mineral; álcoois e seus éteres e ésteres, tais como etanol ou etilenoglicol; cetonas, tais como acetona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclo-hexanona; ou solventes polares menos comumente usados, tais como as dimetilformamida e sulfóxido de dimetila e água.
[0142] No caso de diluentes ou carreadores liquefeitos, os mesmos se referem a um líquido que superará um gás em uma temperatura atmosférica e uma pressão atmosférica, tal como um propelente de aerossol, tal como hidrocarbonetos halogenados, bem como butano, propano, nitrogênio e dióxido de carbono.
[0143] O carreador sólido pode ser minerais naturais moídos, tais como caulim, argila, talco, quartzo, argila atividade, montmorilonita ou terra diatomácea, bem como minerais sintéticos moídos, tais como ácido silícico altamente dispersado, alumina e silicatos. Carreadores sólidos para grânulos são zircônios naturais moídos e fracionados, tais como calcita, mármore, púmice, sepiolita e dolomita, bem como grânulos sintetizados por pó grosso inorgânico e orgânico e materiais orgânicos, tais como partículas de serragem, casca de coco, espigas de milho, hastes de tabaco e assim por diante.
[0144] Os emulsificadores não iônicos e iônicos podem ser usados como emulsificadores e/ou formadores de espuma. Por exemplo, ésteres de ácido graxo de polioxietileno, éteres de álcool de ácido graxo de polioxietileno, por exemplo éteres poliglicólicos de alquilarila, sulfonatos de alquila, sulfatos de alquila, arilsulfonatos e hidrolisato de albumina. Os dispersantes incluem, por exemplo, licores residuais de sulfito de lignina e metilcelulose.
[0145] Os ligantes, tais como carboximetilcelulose e polímeros naturais e sintéticos na forma de pós, grânulos ou emulsões, podem ser usados na formulação, tais como acácia, álcool polivinílico e acetato polivinílico.
[0146] O corante pode ser usado, por exemplo, pigmentos inorgânicos, tais como óxido de ferro, óxido de cobalto e Azul da Prússia; pigmentos orgânicos, tais como pigmentos orgânicos de pigmentos azo ou pigmentos de cianina de titânio metálico; e traçar nutrientes, tais como sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, alumínio e zinco e semelhantes.
[0147] Na presente invenção, a "formulação agrícola” é, de modo geral, um regulador de crescimento de planta agrícola, que compreende um composto da fórmula I ou um sal, um isômero óptico, um racemato, um solvato ou um precursor do mesmo como um ingrediente ativo para melhorar a resistência a tensão de planta (tal como resistência a seca); e um carreador agricolamente aceitável.
[0148] Conforme usado no presente documento, o "carreador agricolamente aceitável" é um solvente, uma suspensão ou um excipiente agricolamente aceitável que é usado para distribuir os compostos da fórmula I ou sais, isômeros ópticos, racematos, solvatos ou precursores dos mesmos da presente invenção para uma planta. O carreador pode ser líquido ou sólido. Um carreador agricolamente aceitável adequado para o uso na presente invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em: água, tampões, DMSO, tensoativos, tais como Tween-20, e uma combinação desses. Qualquer carreador agricolamente aceitável conhecido por aqueles versados na técnica pode ser usado na presente invenção.
[0149] As formulações agrícolas da presente invenção podem ser formuladas com outros agentes resistentes a seca em uma mistura para estarem presentes em suas formulações de produto ou nas formas de dosagem preparadas a partir dessas formulações, tais outros agentes resistentes a seca incluem (porém, sem limitação) agentes de revestimento de semente resistentes a seca, agentes de retenção de umidade resistentes a seca ou agentes de pulverização resistentes a seca.
[0150] Além disso, as formulações agrícolas da presente invenção também podem ser formuladas com sinergistas em uma mistura a estar presente em suas formulações de produto ou nas formas de dosagem preparadas a partir dessas formulações, e esses sinergistas são compostos que melhoram a ação do composto ativo. Visto que o próprio composto ativo está ativo, os sinergistas não podem ser adicionados.
[0151] As formas de dosagem das formulações agrícolas da presente invenção podem ser variadas, e todas as que podem permitir a distribuição eficaz do ingrediente ativo na planta in vivo podem ser usadas. A partir do ponto de vista de facilidade para preparação e admissão, a formulação agrícola preferida é uma pulverização ou uma solução.
[0152] As formulações agrícolas da presente invenção contêm frequentemente de 0,0001 a 99% em peso, preferencialmente, de 0,1 a 90% em peso, dos compostos da presente invenção, com base no peso total da formulação agrícola. A concentração dos compostos da presente invenção em formulações comerciais ou formas de dosagem usadas podem ser amplamente variadas. A concentração dos compostos da presente invenção em formulações comerciais ou formas de dosagem usadas pode estar na faixa de 0,0000001 a 100% (g/v), preferencialmente, entre 0,0001 e 1% (g/v).
[0153] A presente invenção fornece um método para melhorar a resistência a tensão de planta, tal como resistência a seca, resistência a frio, que compreende as etapas de: administrar a uma planta um composto da fórmula I ou um sal, um isômero óptico, um racemato, um solvato ou um precursor do mesmo, ou uma formulação agrícola correspondente do mesmo.
[0154] A administração pode ser realizada por vários métodos que já são conhecidos, por exemplo, por pulverização, atomização, salpicamento de pó ou semeadura por dispersão do composto ou a formulação agrícola que contém o composto em folhas de planta, material de propagação, ou por outras maneiras para colocar a planta em contato com o composto ou a formulação agrícola que contém o composto, se, para entrar em contato com as sementes, os mesmos forem tratados por revestimento, recobrimento ou outras formas. Outro método de tratamento de plantas ou sementes diretamente antes da plantação é introduzir a formulação agrícola da presente invenção no solo ou outro meio a ser semeado. Em algumas modalidades, um carreador também pode ser usado, que pode estar em um estado sólido ou líquido, conforme descrito acima.
[0155] Em uma modalidade preferida, o composto ou a formulação agrícola que contém o composto também podem ser distribuídos para a planta por pulverização (tal como pulverização por aeronave) ou irrigação.
[0156] Pela primeira vez, uma classe de alternativas de ABA (compostos da presente invenção) com uma alta atividade de ácido abscísico (ABA) foi desenvolvida. Os compostos da presente invenção podem significativamente melhorar uma variedade de resistências a tensão (tal como resistência a seca, resistência a frio, etc.) da planta. Além disso, os compostos da presente invenção são fáceis para preparação e são ecologicamente excelentes, e, portanto, têm um amplo prospecto de aplicação. Com base nisso, a presente invenção foi completada.
[0157] Os experimentos mostraram que os compostos da presente invenção (tais como compostos 0224, 0304, 0706, 0708, 0713, 0715, 0428, 1022B e semelhantes) podem se ligar a uma diversidade de receptores PYL diferentes, a atividade in vitro que é significativamente melhor que aquele de Ácido Abscísico (ABA) e pode significativamente melhorar a resistência a tensão de uma variedade de plantas diferentes.
[0158] (1) A presente invenção sintetizou uma série de alternativas altamente ativas de ácido abscísico natural (ABA) pela primeira vez. Os compostos da presente invenção podem significativamente melhorar uma variedade de resistências a tensão em plantas (tal como resistência a seca e resistência a frio). Ademais, todos dentre os isômeros ópticos ou racematos dos presentes compostos têm uma alta atividade.
[0159] (2) A atividade dos compostos da presente invenção é significativamente melhor que do ácido abscísico (ABA) e dos análogos de ABA existentes.
[0160] (3) Os compostos da presente invenção podem promover a interação entre uma pluralidade de proteínas receptoras PYR/PYL e proteína fosfatase PP2C HAB1.
[0161] (4) Os métodos de síntese dos compostos da presente invenção são simples e de baixo custo.
[0162] A presente invenção é descrita adicionalmente abaixo com referência às modalidades específicas. Deve-se entender que esses exemplos são apenas para ilustrar a presente invenção e não se destinam a limitar o escopo da presente invenção. As condições dos métodos experimentais não especificamente indicadas nos seguintes exemplos estão frequentemente de acordo com condições convencionais, conforme descrito em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Nova Iorque, E.U.A.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989), ou de acordo com as condições descritas no Journal of Microbiology: An Experimental Handbook (editado por James Cappuccino e Natalie Sherman, Pearson Education Press) ou conforme as condições propostas pelo fabricante. Salvo caso indicado de outra forma, as porcentagens e partes são em peso e partes em peso.
[0163] Salvo caso indicado o contrário, os materiais e os reagentes usados nos exemplos da presente invenção são todos produtos disponíveis comercialmente.
[0164] As plantas modelo usadas nos experimentos são todas variedades convencionais ou comercialmente disponíveis, em que Arabidopsis thaliana inclui: Ecótipo Colombia (Col-0) e mutantes de síntese de ABA com base em ecótipo Col-0 aba2-1 e mutante triplo (pyr1;pyl1;pyl4) de receptores PYL. As variedades de soja são Shandou 125 (0224, 0304, 0706, 0708, 0713, 0715 e 1028c) e Hanxia 10 (0428, 1022B e NC0F4) comercialmente disponibilizadas, as variedades de algodão são algodão upland R15 comercialmente disponíveis, e as variedades de trigo são Xinong 979 comercialmente disponíveis, e as variedades de milho são Yedan 13 comercialmente disponíveis.
[0165] Os compostos da presente invenção (tais como 0224, 0304, 0706, 0708, 0713, 0715, 1028c, 0428, 1022B e NC0F4, etc.) são mostrados em cada exemplo.
[0166] A temperatura de crescimento para Arabidopsis thaliana é de 22 o C. O fotoperíodo de plantas que cresceram em meios de crescimento vegetal é o dia longo (luz por 24 horas), e o fotoperíodo de plantas que crescera em solo (tais como, em experimentos de transpiração de folha e experimentos de seca de solo) é o dia curto (luz por 8 horas/escuridão por 16 horas), e a intensidade de luz é de 75 μmol • m-2 • s-1.
[0167] A temperatura de crescimento para soja e algodão é de 26 o C e o fotoperíodo é de luz por 14 horas/escuridão por 10 horas. A temperatura de crescimento para milho é de 27 o C, e o fotoperíodo é de luz por 11 horas/escuridão por 13 horas. A temperatura de crescimento para trigo é de 27 o C, e o fotoperíodo é de luz por 11 horas/escuridão por 13 horas. A intensidade de luz é de 400 μmol • m-2 • s-1.
[0168] Salvo caso indicação contrária, todos dentre os meios de crescimento vegetal usados nos experimentos são mídias sólidas de 1/2 MS (Murashige e Skoog) que contém 1% (p/v) de sacarose e 0,6% (p/v) de ágar (adquirido junto à Phyto Technology Labotories Company).
[0169] O método de construção de plasmídeos recombinantes para os genes PYL1 (sequência de aminoácido 36-211), PYL2 (sequência de aminoácido 14-188) de Arabidopsis thaliana com marcações duplas de 6*His e sequência de SUMO e o gene HAB1 Arabidopsis thaliana (sequência de aminoácido 172-511) com a sequência de marcações de Biotina em detalhes em "A gate-latch-lock mechanism for hormone signaling by abscisic acid receptors" (Nature, Volume 462, 2009). O método de construção de plasmídeos recombinantes para PYR1 e PYL7 (sequência de codificação de gene completo) e GmPYL6 de Soja e OsPYL2 de arroz com marcações duplas de 6*His e sequência de SUMO é o mesmo que para PYL2 de Arabidopsis.
[0170] O plasmídeo recombinante acima é transformado em célula competente de E. coli BL21 (DE3) (adquirido junto à NEB company), e inoculado em 200 mL de meio líquido de LB que contém resistência a Amp (adquirido junto à OXOID company) e cultivado da noite para o dia a 37 °C a 200 rpm; e inoculado em 2 l de meio líquido de LB que contém resistência a Amp em uma razão de 1:50 a 1:100 para uma cultura estendida, e cultivada a 37 o C, 200 rpm por 3 a 4 horas, e a uma baixa temperatura de 16 °C até que OD600 seja de cerca de 0,8 a 1,0. Os plasmídeos recombinantes para PYR1 / PYL1 / PYL2 / PYL7 /GmPYL6/OsPYL2 com marcações duplas de 6*His e sequência de SUMO foram induzidos da noite para o dia com 100 μM de IPTG enquanto o plasmídeo recombinante HAB1 com a sequência de marcações de Biotina foi induzida simultaneamente com 100 μM de IPTG e 40 μM de biotina.
[0171] Após 16 horas de indução, a solução bacteriana foi centrifugada a 4.000 rpm por 20 minutos a 4 o C em uma centrífuga de alta capacidade e baixa velocidade, e as células bacterianas foram coletadas. As células bacterianas foram ressuspensas em 50 mL de tampão de extração (que contém 20 mM de Tris, pH de 8,0, 200 mM de NaCl e 10% (v / v) de glicerol) por 2 l de solução bacteriana e, então, submetidas à quebra por pressão a 1.000 Pa e 4 o C 3 a 5 vezes. As células quebradas foram submetidas a ultracentrifugação, centrifugadas a 16.000 rpm por 30 minutos, e esse processo foi repetido duas vezes. O sobrenadante foi coletado e submetido a uma coluna de cromatografia por afinidade.
[0172] Para proteínas PYR/PYL com marcações duplas de 6*His e sequências de SUMO, 50 mL de coluna de Ni de cromatografia por afinidade (coluna de Ni-NTA de 50 mL, disponibilizada por GE) foi usada. Em primeiro lugar, a coluna foi equilibrada com 600 mL de tampão B a 10% (que contém 20 mM de Tris, pH de 8,0, 200 mM de NaCl, 500 mM de imidazola e 10% de glicerol), e, então, eluída com 200 mL de tampão B a 50% e, finalmente, eluída com 100 mL de tampão B a 100%. As proteínas para análise de cristal foram misturadas com enzima ulp1 a uma razão molar de 1.000: 1 para diálise enzimática da noite para o dia. As proteínas digeridas foram submetidas a cromatografia por afinidade em uma coluna de Ni mais uma vez. A solução coletada foi submetida a uma coluna de filtração por gel HiLoad 26/60 Superdex200 (comercialmente disponibilizada por GE) e eluída com uma solução de eluição (que contém 25 mM de Tris, pH de 8,0, 200 mM de acetato de amônio, 1 mM de ditiotreitol e 1 mM de EDTA) para separar e purificar adicionalmente a proteína.
[0173] Para uma proteína HAB1 com uma sequência de marcações de Biotina, a mesma foi submetida a uma coluna de afinidade de MBP de 50 mL (disponibilizada por GE). A coluna foi, em primeiro lugar, equilibrada com 600 mL de tampão C a 10% (que contém 20 mM de Tris, pH de 8,0, 200 mM de NaCl, 10 mM de Maltose e 10% de Glicerol), e eluída com 200 mL de tampão C a 50% e, finalmente, eluída com 100 mL de tampão C a 100%. A solução de coleção foi submetida a uma coluna de filtração por gel HiLoad 26/60 Superdex200 e eluída com uma solução de eluição (que contém 20 mM de Tris, pH de 8,0, 200 mM de NaCl e 10% de Glicerol) separar e purificar adicionalmente a proteína.
[0174] O kit AlphaScreen (disponibilizado por Perkin Elmer) foi usado e o método foi conforme o seguinte: um tampão de 10x (50 mM de MOPS, pH de 7,4, 50 mM de NaF, 50 mM de CHAPS, 0,1 mg/mL de albumina de soro bovino) diluída em 1:10, cada um dentre 100 nM de HAB1 com sequência de marcações de Biotina e proteína PYR1/PYL1/PYL2/PYL7/GmPYL6/OsPYL2 com marcações duplas de 6*His e sequências de SUMO, concentrações correspondentes de (+)-ABA/0224/0304/0706/0708/0713/0715/0428/NC0F4, e 5 μg/mL de microesferas doadoras e microesferas aceitadoras (disponibilizadas por Perkin Elmer) estiveram contidas em 150 μl de sistema experimental. Após a incubação por 1,5 hora em temperatura ambiente no escuro, o mesmo foi colocado em um Leitor de Placa Envision (disponibilizado por Perkin Elmer) sob o procedimento AlphaScreen programado para leituras.
[0175] 50 mM de imidazola, pH de 7,2, 5mM de MgCl2, 0,1% de β-mercaptoetanol, 0,5 μg • mL -1 de BSA, 100 nM de proteína HAB1 com uma sequência de marcações de Biotina, 500 nM de proteína receptora PYL2 com sequência de marcações duplas de 6*His-SUMO e a concentração correspondente de (+)-ABA/0224/0304/0706/0708/0713/0715/1028c/0428/1022B/NC0F4 estiveram contidas no sistema de reação. O sistema de reação foi incubado em temperatura ambiente por 30 minutos, seguido por uma reação adicional por 30 minutos após adicionar um polipeptídeo fosforilado de ácido 11-amono como um substrato. O polipeptídeo fosforilado é aminoácido 170-180 de quinase proteína SnRK2.6, em que a serina fosforilada na posição 175 (com uma sequência de HSQPKpSTVGTP, comprada a partir de Kingsley Company) foi um sítio-alvo de desfosforilação de HAB1 conhecido. Após 30 minutos, o reagente cromogênico (adquirido junto à BioVision) foi adicionado, e a absorbância a 650 nm foi lida em um leitor de microplaca (Molecular Devices).
[0176] A planta inteira ou as folhas foram tomadas, e a extração de RNA foi realizada com o uso de métodos convencionais. Após a transcrição reversa, o PCR quantitativo de fluorescência foi realizado. Três amostras biológicas foram tomadas para cada tratamento que foi realizado duas vezes. O gene ACT7 foi usado como um gene de referência.
[0177] Antes da cristalização, as proteínas PYL2 e HAB1 de Arabidopsis thaliana com marcação removida por digestão foram misturadas com (+)-ABA ou o composto 0428 em uma razão molar de 1: 1: 5 e concentradas a 6 mg/mL para formação de cristal. A formação de cristal foi realizada pelo método da gota pendente; o tampão de poço para cristalização conteve 0,2 M de tartrato de dissódio e 20% de PEG 3350. Após um dia, os cristais podem ser observados, os quais cresceram a 100 a 120 μm em cerca de 3 a 4 dias. Os cristais foram analisados por difração de raios X e os dados de difração foram coletados, e a estrutura do complexo foi analisada de acordo com o modelo de estrutura de receptor PYR / PYL relevante.
[0178] Considera-se os compostos 0428 e 0224 da presente invenção como exemplos. As sementes de ecótipo Col-0 de Arabidopsis thaliana e o mutante triplo de receptor PYL (pyr1;pyl1;pyl4) foram esterilizados com NaClO e colocados a 4 o C por 3 dias da vernalização, e, então, a semeadura em meio sólido de 1/2 MS que contém 1 μM de composto (+)-ABA/0224 ou 0,05% de DMSO (controle) ou em meio sólido de 1/2 MS que contém 2 μM de (+)-ABA/composto 0428 da presente invenção ou 0,05% de DMSO (controle). Duas linhagens de planta foram semeadas simultaneamente em cada meio de 6 cm de diâmetro, com 15 a 20 sementes semeadas para cada linhagem e 4 réplicas para cada composto. O meio de cultura foi colocado a 22 o C com cultura de dia longo. As sementes germinadas em um meio sólido que contém 1 μM de composto (+)-ABA/0224 foram fotografadas 6 dias após a semeadura, e as sementes germinadas em meio sólido que contém 2 μM de composto (+)- ABA/0428 foram fotografadas 9 dias após a semeadura.
[0179] O mutante de síntese ABA aba2-1 foi usado em experimento de transpiração de folha de Arabidopsis. Sob condição de tensão ambiental, o teor de ABA endógeno nesse mutante não aumenta, e é apenas 1/40 de tal Col-0 de Arabidopsis do tipo selvagem sob a mesma condição. Portanto, esse mutante é usado para excluir o efeito de ABA endógeno no experimento de transpiração. As plantas foram pulverizadas com uma solução que contém 0,05% de tween-20 e concentrações correspondentes de (+)- ABA/0224/0304/0706/0715/0428 ou 0,05% de Tween-20 e 0,05% DMSO(controle) após três semanas de irrigação contínua com uma quantidade de 1,2 mL/pote. Experimentos de transpiração de folha de sojas foram conduzidos a 26 °C com iluminação de dia longo e as sojas foram pulverizadas com uma solução que contém 0,1% de tween-20 e 20μM de composto (+)- ABA/0224/0304 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) 14 dias após a semeadura com uma quantidade de 4 mL/pote; em que os experimentos de transpiração de folha de algodões foram pulverizados com uma solução que contém 0,1% de tween-20 e 20 μM de composto (+)-ABA/0224 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO, respectivamente, 25 dias após a semeadura com uma quantidade de 4 mL/pote; em que os experimentos de transpiração de folha de trigos foram pulverizados com um a solução que contém 0,1% de tween-20 e 100 μM de composto (+)-ABA/0224 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) 18 dias após a semeadura com uma quantidade de 6 mL/pote. As imagens foram tiradas diariamente com o uso do imageador térmico FLIR A655sc ao mesmo tempo antes e após a pulverização.
[0180] As sementes de ecótipo Col-0 de Arabidopsis foram esterilizadas com NaClO e, então, semeadas em meio sólido de 1/2 MS a 4 o C por 3 dias de vernalização. Após 6 dias de crescimento, as mudas crescidas que tem tamanho uniforme foram selecionadas e transferidas em potes de 8 x 7 x 6 cm3. Cada pote foi preenchido com o mesmo peso de solo e o mesmo número de plantas (seis plantas) foi transferido para reduzir o erro experimental. Todos os potes foram submetidos a uma cultura de dia curto a 22 o C. Após duas semanas, a irrigação foi interrompida para tratamento com seca. Uma solução que contém 0,05% de Tween-20 e 5μM de 0224/0706/0715/0428 ou 0,05% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada na superfície da folha uma vez por semana com uma quantidade de pulverização de 2 mL solução/pote. A posição do pote de flor foi alterada todos os dias durante o processo de seca para reduzir o erro causado por fatores ambientais. Durante o período de seca completo, a solução foi pulverizada duas vezes no total e as fotos foram registradas após quatro semanas.
[0181] Soja, algodão e trigo para experimentos de transpiração de folha foram usados simultaneamente para experimentos de seca de solo, em que cada pote foi preenchido com o mesmo peso de solo para reduzir o erro experimental. Todas as plantas de soja foram submetidas a uma cultura de dia longo a 26 o C. 14 dias após a semeadura, a irrigação foi interrompida e as plantas com a condição de crescimento consistente foram selecionadas para tratamento com seca. No início da seca, uma solução que contém 0,1% de Tween-20 e 20μM de (+)-ABA/0224/0304 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada na superfície da folha uma vez com uma quantidade de pulverização de 4 mL de solução/pote. Enquanto isso, a posição do pote foi alterada e irrigada novamente 6 dias após a seca, e as fotos foram tiradas 1 dia após a nova irrigação. O experimento de seca de solo de algodão foi semelhante àquele de sojas, em que a irrigação foi interrompida 25 dias após a semeadura, as plantas com a condição de crescimento consistente foram selecionadas para o tratamento com seca. No início da seca, uma solução que contém 0,1% de Tween-20 e 20μM de (+)-ABA/0224 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada na superfície da folha uma vez com uma quantidade de pulverização de 4 mL de solução/pote, e, então, pulverizada uma vez a cada 3 dias. Enquanto isso, a posição do pote foi alterada e irrigada novamente 6 dias após a seca, e as fotos foram tiradas antes da nova irrigação e 1 dia após a nova irrigação. No experimento de seca de solo de trigo, o trigo com a condição de crescimento consistente 16 dias após a semeadura foi selecionada para o tratamento com seca, no início da seca, uma solução com 0,1% de Tween-20 e 100 μM de (+)-ABA/0224 ou 0,1% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada uma vez, e, então, pulverizada uma vez a cada 3 dias com uma quantidade de pulverização de 4 mL/pote. Enquanto isso, a posição do pote foi alterada e as fotos foram tiradas 6 dias após a seca.
[0182] Os experimentos de seca de solo usados para composto 0428 em soja e maís foram semelhantes àquele usado para o composto 0224 em sojas, com apenas uma planta contida em cada pote. Todas as plantas de soja foram cultivadas em dia longo a 26 o C. A irrigação foi interrompida após a planta ter tido três folhas em cada um dentre os três grupos e as plantas com crescimento consistente foram selecionadas para o tratamento com seca. Quanto ao milho, a irrigação foi interrompida durante o período de boca de sino pequeno for tratamento com seca. Uma solução que contém 0,05% de tween-20 e 50 μM de (+)-0428 ou 0,05% de Tween-20 e 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada uma vez na superfície da folha no primeiro dia e no segundo dia da seca, respectivamente, com uma quantidade de pulverização de 4 mL/pote. Enquanto isso, a posição de pote também foi alterada. As sojas foram irrigadas novamente 9 dias após a seca, o milho foi irritado novamente 4 dias após a seca e as fotos foram tiradas no dia seguinte. EXEMPLO 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0224 1.1 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2- ONA
[0183] 3,4 g de 1-(2-aminofenil) etanol e 1,6 g de CDI foram adicionados em 50 mL de tetraidrofurano anidroso, e a reação foi mantida em temperatura ambiente por 2 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se 1M de solução de HCl e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O concentrado foi realizado sob pressão reduzida. A purificação foi realizada através da cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 3,8 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 93%.
[0184] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,16 (s, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,20 (d, 1 H), 7,02 (t, 1 H), 6,08 (d, 1H), 5,49 (m, 1H), 1,57 (d, 3H) ppm.1.2 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0185] 3,0 g de 4-metil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foram adicionados em 80 mL de N,N-dimetilformamida, e agitados sob banho de água gelada, 1,05 equivalente de hidrato de sódio foi adicionado em bateladas, após a adição, em que a mistura foi agitada por 0,5 hora. 1,05 equivalente de iodopropano foi adicionado por gotejamento, o banho de água gelada foi removido e a reação foi realizada por 12 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se a solução de cloreto de amônia saturado e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar 3,1 g de 4-metil-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona como um óleo, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional, e o rendimento cru foi de 85%.1.3 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-6-NITRO-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0186] 20 mL de ácido sulfúrico foram adicionados em um frasco que contém 3,0 g de 4-metil-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona sob banho de água gelada e agitados intensamente por 0,5 hora; 1,1 equivalente de nitrato de potássio em solução de ácido sulfúrico foi lentamente adicionado por gotejamento com um funil de gotejamento, em que a temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com muita água. O foi recristalizado com etanol para gerar 2,5 g de 4-metil-6-nitro-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona com um rendimento de 74%.
[0187] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,27 (dd, 1 H), 8,05 (d, 1 H), 7,07 (d, 1 H), 5,47 (m, 1 H), 3,82 (t, 2H), 1,78 (m, 2H), 1,77 (d, 3H), 1,04 (t, 3H) ppm.1.4 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-4-METIL-1-PROPIL-1,4-DI- HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0188] 1,7 g de 4-metil-6-nitro-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foi adicionado em metanol e paládio-carbono foi adicionado como um catalisador. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes, e a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 8 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea e o sólido foi removido. A purificação foi realizada através da cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,5 g de um sólido amarelo com um rendimento de 90%.
[0189] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,77 (d, 1 H), 6,60 (dd, 1 H), 6,48 (d, 1 H), 5,27 (m, 1 H), 3,82 (t, 2H), 3,49(s, 2H), 1,74 (m, 2H), 1,63(d, 3H), 0,98 (t, 3H) ppm.1.5 PREPARAÇÃO DE CLORETO DE 2,3,5,6-TETRAFLUORO-4- METILBENZILSULFONILA
[0190] O cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzila e 1 equivalente de tioureia foram dissolvidos em etanol e, então, a mistura foi lentamente aquecida para refluir, após a reação ter sido realizada por 4 a 6 horas, a solução de reação foi concentrada. Acetonitrila e ácido hidroclórico concentrado foram adicionados. A temperatura foi controlada abaixo de 5 a 10 °C, 3,5 equivalentes de clorito de sódio foram adicionados em batelada sob intensa agitação. A reação foi realizada a 15 a 20 °C por 8 a 16 horas. A reação foi interrompida adicionando-se água e extraída com acetato de etila três vezes, e o licor de extrato foi concentrado para gerar um sólido amarelo claro, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. 1.6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0224
[0191] 1,0 g de 6-amino-4-metil-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2- ona e 1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzilsulfonila foram adicionados em DMF e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila, e seca através de sulfato de sódio anidroso para concentrar a fase orgânica. O produto bruto foi purificado com cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,7 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 75%.
[0192] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,18 (s, 1H), 7,17-7,06 (m, 3H), 5,36 (m, 1H), 4,61 (s,2H), 3,77 (m, 2H), 2,22 (s,3H), 1,61 (m, 2H), 1,49 (d, 3H), 0,92 (t, 3H)ppm.EXEMPLO 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0304 2.1 PREPARAÇÃO DE 2-(2-AMINOFENIL)PROPAN-2-OL
[0193] 5,0 g de o-aminoacetofenona foram adicionados em 150 mL de tetraidrofurano anidroso e 2 equivalentes de iodo de magnésio de metila em solução de tetraidrofurano foram adicionados por gotejamento a -40 graus Celsius. A reação foi lentamente aquecida a temperatura ambiente e agitada por 12 horas. A reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se o cloreto de amônia aquoso saturado e extraída com acetato de etila. A mistura foi seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada para gerar 4,2 g de um produto bruto amarelo, sem purificação adicional e o rendimento foi de 75%.2.2 PREPARAÇÃO DE 4,4-DIMETIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL- 2-ONA
[0194] 3,4 g de 2-(2-aminofenil)-2-propanol e 5,5 g de CDI foram adicionados em 50 mL de tetraidrofurano anidroso e a mistura foi reagida em temperatura ambiente por 12 horas; a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se 1M de solução de HCl e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente foi destilado sob pressão reduzida para gerar 3,7 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 92%.
[0195] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ9,61 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,15 (d, 1 H), 7,07 (m, 1 H), 6,92 (dd, 1H), 1,74 (s, 6H) ppm.2.3 PREPARAÇÃO DE 4,4-DIMETIL-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0196] 4,0 g de 4,4-dimetil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foram adicionados em 80 mL de N,N-dimetilformamida e agitados sob banho de gelo, 1,05 equivalente de hidrato de sódio foi adicionado em bateladas. Após a adição, a mistura foi agitada por 0,5 hora; em 1,05 equivalente de iodopropano foi adicionado por gotejamento, o banho de água gelada foi removido, e a reação foi realizada por 12 horas; a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se a solução de cloreto de amônia saturado e extraídas com acetato de etila, e a fase orgânica foi combinada e lavada com solução de cloreto de sódio saturado, a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e o iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida. A purificação foi realizada através da cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 2,9 g de 4,4-dimetil-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona como um óleo com um rendimento de 60%.
[0197] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ7,33(m, 1H), 7,20-7,18(d, 1H), 7,10 (m, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 3,91 (t, 2H), 1,76(m, 2H), 1,71(s, 6H), 1,02 (t, 3H)ppm.2.4 PREPARAÇÃO DE 4,4-DIMETIL-6-NITRO-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0198] 20 mL de ácido sulfúrico foram adicionados em um frasco que contém 2,0 g de 4,4-dimetil-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona sob banho de água gelada e agitados intensamente por 0,5 hora; em que 1,1 equivalente de nitrato de potássio em solução de ácido sulfúrico foi lentamente adicionado por gotejamento com um funil de gotejamento, em que uma temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com bastante água. O produto bruto foi recristalizado com etanol para gerar 1,8 g de 4,4-dimetil-6-nitro- 1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona com um rendimento de 78%.
[0199] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ8,25(dd, 1H)8,08 (d, 1 H), 7,06 (d, 1 H), 3,97 (t, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,76(s, 6H), 1,05 (t, 3H). 2.5 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-4,4-DIMETIL-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0200] 1,8 g de 4,4-dimetil-6-nitro-1-propil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foi adicionado em 100 mL de metanol e 100 mg de paládio em carbono foram adicionados como um catalisador sob uma atmosfera de nitrogênio. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 8 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea, o sólido foi removido e o filtrato foi concentrado. A purificação foi realizada através da cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,4 g de a sólido amarelo amarronzado com um rendimento de 90%.
[0201] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ6,76 (d, 1 H), 6,65 (dd, 1 H), 6,53 (d, 1 H), 3,84 (t, 2H), 3,34 (s, 2 H), 1,74 (m, 2H), 1,64 (s, 6H), 0,99 (t, 3H) ppm.2.6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0304
[0202] 0,8 g de 6-amino-4,4-dimetil-1-propil-1,4-di- hidrobenzoxazol-2-ona e 1,1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4- metilbenzilsulfonila foram adicionados em bateladas a DMF e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada e o produto bruto foi submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,1 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 70%.
[0203] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ7,23 (dd, 1 H), 7,10 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,89 (t, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,76 (m,2H), 1,67 (s, 6H), 1,03 (t, 3H) ppm.EXEMPLO 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0706 3.1 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-6-NITRO-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0204] 20 mL de ácido sulfúrico foram adicionados em um frasco que contém 3,0 g de 4-metil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona sob banho de água gelada e agitados intensamente por 0,5 horas; em que 1,1 equivalente de nitrato de potássio na solução de ácido sulfúrico foi lentamente adicionado por gotejamento com o uso de um funil de gotejamento. A temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com bastante água. O produto bruto foi recristalizado com etanol para gerar 2,5 g de 4-metil-6-nitro-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona com um rendimento de 77%.
[0205] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,87 (s, 1H), 8,20-8,18 (d, 1 H), 8,13 (s, 1H), 7,07-7,05 (d, 1H), 5,68-5,64 (m, 1H), 1,64-1,62 (d, 3H) ppm.3.2 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-6-NITRO-1-ETIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0206] 3,0 g de 4-metil-6-nitro-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foi adicionado em 80 mL de N,N-dimetilformamida e a mistura foi agitada sob banho de água gelada, em que 1,05 equivalente de hidrato de sódio foi adicionado em bateladas, após a adição, a mistura foi agitada por 0,5 hora. 1,05 equivalente de iodoetano foi adicionado por gotejamento, o banho de água gelada foi removido e a reação foi realizada por 12 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se a solução de cloreto de amônia saturado, e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada e lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e o iodoetano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar 3,1 g de 4-metil-6-nitro-1-etil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona. A próxima etapa foi realizada sem purificação adicional e o rendimento cru foi de 85%.3.3 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-4-METIL-1-ETIL-1,4-DI-HIDROBENZOXAZOL-2-ONA
[0207] 2,0 g de 4-metil-6-nitro-1-etil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona foi adicionado em metanol e paládio-carbono foi adicionado como um catalisador. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 8 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea e o sólido foi removido para gerar 1,7 g de um sólido. O produto bruto não foi submetido a uma purificação adicional e o campo cru foi de 89%.3.4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0706
[0208] 1,0 g de 6-amino-4-metil-1-etil-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona e 1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzilsulfonila foi adicionado a DMF e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e a mistura foi agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso e a fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,8 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 82%.
[0209] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,18 (s, 1H), 7,18-7,06 (m, 3H), 5,42 (m, 1H), 4,61 (s,2H), 3,86 (q, 2H), 2,22(s,3H),1,48 (d,3H), 1,19 (t, 3H)ppm.
[0210] O método de preparação para o intermediário de 0708 foi o mesmo que para 0706, exceto que 2-iodopropano foi usado em vez de 1- iodoetano.
[0211] 1.0 g de 6-amino-4-metil-1-isopropila-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona e 1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4- metilbenzilsulfonila foi adicionado a DMF e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e a mistura foi agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso e a fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,6 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 72%.
[0212] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,19 (s, 1H), 7,20-7,07 (m, 3H), 5,29 (m, 1H), 4,61 (s,2H), 4,30 (m, 1H), 2,21(s,3H),1,50-1,44 (m,9H)ppm.
[0213] O método de preparação para o intermediário de 0713 foi o mesmo que para 0706, exceto que 1-iodoisobutila foi usado em vez de 1- iodoetano.
[0214] 1,0 g de 6-amino-4-metil-1-isobutila-1,4-di-hidrobenzoxazol-2-ona e 1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzilsulfonila foram adicionados a DMF e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e foi seca através de sulfato de sódio anidroso e a fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,3 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 63%.
[0215] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,14 (s, 1H), 7,10-7,02 (m, 3H), 5,34 (q, 1H), 4,57 (s,2H), 3,69 (d, 2H), 2,23-2,17(m,4H),1,46 (d,3H),0,87- 0,84(dd,6H)ppm.
[0216] O método de preparação para o intermediário de 0715 foi o mesmo que para 0706, exceto que 1-fluoro-3-iodopropano foi usado em vez de 1-iodoetano.
[0217] 1,0 g de 6-amino-4-metil-1-(3-fluoropropil)-1,4-di-equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4- metilbenzilsulfonila foram adicionados a DMF, e 3 equivalentes de carbonato de potássio foi adicionado a um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e a mistura foi agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso e a fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,4 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 71%.
[0218] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,19 (s, 1H), 7,18-7,06 (m, 3H), 5,42 (q, 1H), 4,61 (s,2H), 4,61(t,1H),4,50(t,1H), 3,95 (t, 2H), 2,22(s,3H),2,06-1,94 (m,2H), 1,51 (d,3H)ppm. EXEMPLO 7 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0428 7.1 PREPARAÇÃO DE 1,4-DI-HIDRO-2H-3,1-BENZOXAZIN-2-ONA
[0219] 3,0 g de álcool de 2-aminobenzila e 1,6 g de ureia foram adicionadas a 80 mL de DMF, e a temperatura foi elevada a 150 °C. A reação foi realizada por 12 horas. A reação foi bruscamente arrefecida pela adição de solução de cloreto de sódio saturado, e extraída com acetato de etila três vezes. A fase orgânica foi combinada e lavada com solução de cloreto de sódio aquoso saturado e 2N de ácido hidroclórico para remover álcool de 2-aminobenzila e ureia não reagidos. A fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso e destilada para secar sob pressão reduzida para gerar 3,0 g de 1,4-di-hidro-2H- 3,1-benzoxazin-2-ona. A pureza detectada por HPLC foi de 92%, e a próxima etapa foi realizada sem purificação adicional. O rendimento foi de 83%.
[0220] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ5,27(s, 2H),6,85-7,27(m, 4H), 10,15(s, 1H) ppm. 7.2 PREPARAÇÃO DE 1-PROPIL-1,4-DI-HIDRO-2H-3,1- BENZOXAZIN-2-ONA
[0221] 2,0 g de 1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona foram adicionados a 80 mL de N,N-dimetilformamida, e 1,05 equivalente de hidrato de sódio foi adicionado em bateladas enquanto agitado sob banho de água gelada. Após a adição, a mistura foi agitada por 0,5 hora; em que 1,05 equivalente de iodopropano foi adicionado por gotejamento, o banho de água gelada foi removido e a reação foi realizada por 12 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se a solução de cloreto de amônia saturado, e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar 2,2 g de 1-propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona como um óleo. A pureza detectada por HPLC foi de 92% e a próxima etapa foi realizada sem purificação adicional. O rendimento foi de 88%.7.3 PREPARAÇÃO DE 6-NITRO-1-PROPIL-1,4-DI-HIDRO-2H-3,1- BENZOXAZIN-2-ONA
[0222] 20 mL de ácido sulfúrico foram adicionados a um frasco que contém 2 g de 1-propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona sob banho de água gelada, e agitados intensamente por 0,5 hora; em que 1,1 equivalente de nitrato de potássio em solução de ácido sulfúrico foi lentamente adicionado por gotejamento com o uso de um funil de gotejamento. A temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com bastante água. A secagem foi realizada sob luz infravermelha, e o produto bruto foi recristalizado com etanol para gerar 1,8 g de 6-nitro-1-propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona com um rendimento de 77%.
[0223] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ0,93(t, 3H),1,63(m, 2H), 3,85(t, 2H), 5,39(s, 2H), 7,37(m, 1H), 8,22(m, 2H) ppm.7.4 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-1-PROPIL-1,4-DI-HIDRO-2H-3,1- BENZOXAZIN-2-ONA
[0224] 1,8 g de 6-nitro-1-propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2- ona foi adicionado a metanol e paládio-carbono foi adicionado como um catalisador. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 8 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea e o sólido foi removido. O filtrato foi concentrado para gerar 1,4 g de 6-amino-1- propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona. A próxima etapa foi realizada sem purificação adicional. O rendimento cru foi de 90%.7.5 PREPARAÇÃO DE CLORETO DE 2,3,5,6-TETRAFLUORO-4- METILBENZILSULFONILA
[0225] 1,0 g de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzila e 1 equivalente de tioureia foram dissolvidos em 40 mL de etanol e, então, lentamente aquecidos para o refluxo. Após 4 a 6 horas de reação, a solução de reação foi concentrada para gerar a sólido branco . 10 mL de acetonitrilo e 4 mL de ácido hidroclórico concentrado foram adicionados. A temperatura foi controlada abaixo de 5 a 10 °C, e 2,25 g de clorito de sódio foram adicionados em bateladas com intensa agitação. A reação foi realizada a 15 a 20 °C por 8 a 16 horas. A reação foi interrompida adicionando-se água e extraída com acetato de etila três vezes. O licor de extrato foi concentrado para gerar cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzilsulfonila. A próxima etapa foi realizada sem purificação adicional. 7.6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 0428
[0226] 1,0 g de 6-amino-1-propil-1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona e 1,2 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4- metilbenzilsulfonila foram adicionados a 20 mL de DMF, e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,5 g de composto 0428 com um rendimento de 70%.
[0227] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ0,92(t, 3H), 1,60(m, 2H), 2,27 (s, 3H), 3,77(t, 2H), 4,60(s, 2H), 5,17(s, 2H), 7,10-7,18(m, 3H), 10,19(s, 1H) ppm. EXEMPLO 8 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 1022B 8.1 PREPARAÇÃO DE 1-PROPIL-2(1H)-QUINOLINONA
[0228] 4,0 g de 2-hidroxiquinolina foram adicionados a 100 mL de DMF e agitados sob banho de água gelada. 1,1 equivalente de hidrato de sódio foram adicionados em bateladas. Após a adição, a temperatura foi mantida e a mistura foi agitada por 0,5 hora; em que 1,1 equivalente de iodopropano foi adicionado por gotejamento, e o banho de água gelada foi removido, a reação foi realizada por 12 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida com solução de cloreto de amônia saturado e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com solução de cloreto de sódio aquoso saturado e seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar um produto bruto oleoso. A separação foi realizada através de cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 3,3 g de 1-propil-2(1H)-quinolinona como um líquido oleoso sem cor com um rendimento de 62%.
[0229] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ0,95(t, 3H), 1,62(m, 2H), 4,18(t, 2H), 6,63(d, 1H), 7,25(t,1H), 7,60(m, 2H), 7,72(d, 1H), 7,90(d, 1H) ppm.8.2 PREPARAÇÃO DE 6-NITRO-1-PROPIL-2(1H)-QUINOLINONA
[0230] 40 mL de ácido sulfúrico foram adicionados a um frasco que contém 2,0 g de 1-propil-2(1H)-quinolinona sob banho de água gelada, e intensamente agitados por 0,5 hora; em que 15 mL de 1,1 equivalente de nitrato de potássio em solução de ácido sulfúrico foram lentamente adicionados por gotejamento com um funil de gotejamento. A temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com bastante água. A secagem foi realizada sob luz infravermelha. O produto bruto foi recristalizado com etanol para gerar 1,7 g de 6-nitro-1-propil-2(1H)-quinolinona com um rendimento de 72%.
[0231] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ0,95(t, 3H), 1,63(m, 2H), 4,24(t, 2H), 6,76(d,1H), 7,76(d,1H), 8,12 (d,1H), 8,35(d, 1H), 8,71(s,1H) ppm.8.3 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-1-PROPIL-2(1H)-QUINOLINONA
[0232] 1,7 g de 6-nitro-1-propil-2(1H)-quinolinona foi adicionado a 80 mL de metanol, e paládio-carbono fio adicionado como um catalisador. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea e o sólido foi removido. O filtrato foi concentrado para gerar 1,4 g de 6-amino-1-propil- 2(1H)-quinolinona. O produto bruto foi obtido sem purificação adicional e o rendimento foi 90%.
[0233] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ0,92(t, 3H), 1,60(m, 2H), 4,08(t, 2H), 5,08(s, 2H), 6,46 (d,1H), 6,79(s, 1H), 6,94 (d,1H), 7,29(d, 1H), 7,66 (d, 1H) ppm.8.4 PREPARAÇÃO DE CLORETO DE P-METIL- HALOBENZILSULFONILA
[0234] 1,0 g de brometo de p-metilbenzila e 1 equivalente de tioureia foram adicionados a 40 mL de etanol e, então, lentamente aquecidos para o refluxo e a solução foi tornada transparente. Após 4 a 6 horas de reação, a solução de reação foi concentrada para gerar a sólido branco . 10 mL de acetonitrilo e 4 mL de ácido hidroclórico concentrado foram adicionados. A temperatura foi controlada abaixo de 5 a 10 °C, em que 2,25 g de clorito de sódio foram adicionados em bateladas com intensa agitação. A reação foi realizada a 15 a 20 °C por 8 a 16 horas. A reação foi interrompida adicionando-se água e extraída com acetato de etila três vezes. O licor de extrato foi concentrado para gerar cloreto de p-metilbenzilsulfonila. O produto bruto foi diretamente usado na próxima etapa sem purificação. 8.5 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 1022B
[0235] 1,0 g de 6-amino-1-propil-2(1H)-quinolinona e 1,2 equivalente de cloreto de p-metilbenzilsulfonila foram adicionados a 20 mL de DMF, e 3 equivalentes de carbonato de potássio foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e agitada por 12 a 16 horas. Após isso, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila três vezes e a fase orgânica foi combinada e seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada e o produto bruto foi submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,3 g de composto 1022B com um rendimento de 70%.
[0236] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 0,95(t, 3H), 1,62(m, 2H), 2,27 (s, 3H), 4,18(t, 2H), 4,42 (s, 2H), 6,60 (d, 1H), 7,12-7,17(m, 4H), 7,40(d, 1H), 7,45(s, 1H), 7,55(d, 1H), 7,83(d, 1H) ppm; 13CNMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 11,53, 20,99, 21,54, 43,35, 57,34,116,08, 119,20, 121,17, 122,14, 124,01,126,89, 129,46, 131,34, 133,02, 135,97, 138,12, 139,45, 161,12 ppm. EXEMPLO 9 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO NC0F4 9.1 PREPARAÇÃO DE 2-AMINOMETIL-4-NITROANILINA
[0237] 5,0 g de 2-ciano-4-nitroanilina foram adicionados a 200 mL de tetraidrofurano seco, e 3,5 equivalentes de solução de tetraidrofurano borano foram adicionados por gotejamento e agitados sob banho de água gelada. Após a adição, a mistura foi agitada em temperatura ambiente da noite para o dia; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se lentamente por gotejamento a solução de cloreto de amônia saturado. A mistura foi extraída adicionando-se diclorometano. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e o iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar 4,2 g de 2-aminometil-4-nitroanilina com um rendimento de 83%.
[0238] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ8,05(d, 1H), 7,88(dd, 1H), 6,70-6,59(m, 3H), 3,63(s, 2H)ppm. 9.2 PREPARAÇÃO DE 6-NITRO-3,4-DI-HIDROQUINAZOLINA- 2(1H)-ONA
[0239] 4,5 g de 2-aminometil-4-nitroanilina foram adicionados a 250 mL de tetraidrofurano seco e 1,5 equivalente de CDI foram adicionados sob agitação. Após a adição, a mistura foi aquecida para o refluxo e agitado da noite para o dia; em que o tetraidrofurano foi destilado sob pressão reduzida e a mistura foi extraída com água e diclorometano. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso para gerar 6-Nitro-3,4-di-hidroquinazolina -2(1H)- ona com um rendimento de 74%.
[0240] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ9,78(s, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,04(m, 1H), 7,17(d, 1H), 6,93(d, 1H), 4,43(s, 2H)ppm.9.3 PREPARAÇÃO DE 1-PROPIL-6-NITRO-3,4-DI-HIDROQUINAZOLINA -2(1H)-ONA
[0241] O método de síntese é o mesmo que aquele no Exemplo 7.2, exceto pelo fato de que 6-nitro-3,4-di-hidroquinazolina-2(1H)-ona é usado em vez de 1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazina-2-cetona. O produto bruto foi diretamente submetido à próxima etapa sem purificação adicional e o rendimento cru foi de 56%.9.4 PREPARAÇÃO DE 1-PROPIL-6-AMINO-3,4-DI-HIDROQUINAZOLINA-2(1H)-ONA.
[0242] O método de síntese é o mesmo que aquele no Exemplo 7.4, exceto pelo fato de que 1-propil-6-nitro-3,4-di-hidroquinazolina-2(1H)-ona é usado em vez de 6-nitro-1-propila 1,4-di-hidro-2H-3,1-benzoxazina-2-ona. O produto bruto não foi submetido a uma purificação adicional, em que o rendimento brutofoi de 87%.9.5 PREPARAÇÃO DE NC0F4
[0243] O método de síntese é o mesmo que aquele no Exemplo 7.6, exceto pelo fato de que -propil-6-amino-3,4-di-hidroquinazolina-2(1H)-ona é usado em vez de 6-amino-1-propil-1,4-di-hidro -2H-3,1- benzoxazina-2-ona.
[0244] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,0(s, 1H), 7,06-6,90(m, 4H,), 4,56(s, 2H), 4,20(s, 2H), 3,69(s, 2H), 2,24(s, 3H), 1,52(m,2H), 0,89(t, 3H)ppm.EXEMPLO 10 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 1028C 10.1 PREPARAÇÃO DE AMINA DE ÁCIDO N-(1-(2-AMINOFENIL)ETILIDENO)- T-BUTILSULFÍNICO
[0245] 2,0 g de 2-aminoacetofenona e 1 equivalente de terc-butilsulfinamida foram adicionados a 2 equivalentes de titanato tetraetílico, o nitrogênio foi preenchido e o tubo foi vedado e aquecido a 75 °C e a mistura foi agitada por 16 horas e resfriada a temperatura ambiente, e vertida em salmoura gelada, a reação foi bruscamente arrefecida e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com solução de cloreto de sódio aquoso saturado e seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada sob pressão reduzida, e purificada por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 2,7 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 74%.
[0246] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,66 (d, 1 H), 7,43 (s, 2H), 7,20(t, 1 H), 6,75 (d, 1 H), 6,58 (t, 1H), 2,68(s, 3H), 1,18(s,9H) ppm.10.2 PREPARAÇÃO DE AMINA DE ÁCIDO N-(1-(2- AMINOFENIL)ETILA)- T-BUTILSULFÍNICO
[0247] 2,5 g de amina de ácido N-(1-(2-aminofenil)etilideno)t-butilsulfínico foram dissolvidos em tetraidrofurano anidroso absoluto, em que a solução foi controlada a -78 °C, e complexo de sulfeto de borano dimetílico em solução de tetraidrofurano foi lentamente adicionado por gotejamento sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a adição, a mistura foi agitada por 3 horas; a reação foi bruscamente arrefecida por adição por gotejamento da salmoura saturada e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 2,3 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 91%.
[0248] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,16(d, 1 H), 6,96 (t, 1H), 6,64(d, 1 H), 6,56(t, 1 H), 5,37(d,1H),4,95 (s, 2H), 4,40(m, 1H), 4,14(d,3H) 1,11(s,9H)ppm. 10.3 PREPARAÇÃO DE 2-(1-AMINOETIL)ANILINA
[0249] 2,2 g de amina de ácido N-(1-(2-aminofenil)etila)-t- butilsulfínico foram dissolvidos em metanol e 4M de ácido hidroclórico (1:1), e a solução foi agitada da noite para o dia; e concentrada sob pressão reduzida, e o pH foi ajustado para alcalino. A reação extraída foi realizada adicionando-se salmoura saturada/acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, e a fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida para gerar 1,2 g de produto com um rendimento de 91%.
[0250] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,05(d, 1 H), 6,89 (t, 1H), 6,56(d, 1 H), 6,50(t,1H),5,27(s,2H),4,03 (q, 1H), 3,37(em pico de água)1,27(d,3H)ppm.10.4 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-3,4-DI-HIDROQUINAZOLINA- 2(1H)-ONA
[0251] 1,2 g de 2-(1-aminoetil)anilina foi dissolvido em 70 mL de tetraidrofurano anidroso, 1,2 equivalente de trifosgene (BTC) foi adicionado em bateladas e a reação foi realizada em temperatura ambiente por 12 horas; em que a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se 1M de solução de HCl e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi combinada, lavada com solução de cloreto de sódio aquoso saturado e seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente foi destilado sob pressão reduzida para gerar 1,2 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 82%.
[0252] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,06(s,1H),7,12-6,84(m, 4 H), 6,77 (d, 1H), 4,45(m, 1H), 1,31(d, 3H)ppm.10.5 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-1-PROPIL-1,4-DI- HIDROQUINAZOLINA-2(1H)-ONA
[0253] 1,2 g de 4-metil-3,4-di-hidroquinazolina -2(1H)-ona foi adicionado a 80 mL de N,N-dimetilformamida, e 1,05 equivalente de hidrato de sódio foi adicionado em bateladas e agitado sob banho de água gelada. Após a adição, a mistura foi agitada por 0,5 hora; em 1,05 equivalente de iodopropano foi adicionado por gotejamento, o banho de água gelada foi removido, e a reação foi realizada por 12 horas; a reação foi bruscamente arrefecida adicionando-se a solução de cloreto de amônia saturado e extraídas com acetato de etila, e a fase orgânica foi combinada e lavada com solução de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi seca através de sulfato de sódio anidroso. O solvente e o iodopropano em excesso foram destilados sob pressão reduzida para gerar 1,4 g de produto oleoso, que não foi submetido a uma purificação adicional, e o rendimento foi de 92%.10.6 PREPARAÇÃO DE 4-METIL-6-NITRO-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROQUINAZOLINA -2(1H)-ONA
[0254] 20 mL de ácido sulfúrico foram adicionados a um frasco que contém 1,2 g de 4-metil-1-propil-3,4-di-hidroquinazolina-2(1H)-ona sob banho de gelo e a mistura foi agitada intensamente por 0,5 horas; em que 1,1 equivalente de nitrato de potássio em solução de ácido sulfúrico foi lentamente adicionado por gotejamento através de um funil de gotejamento, em que a temperatura de banho de gelo foi mantida e a reação foi realizada por 1 a 2 horas; em que a solução de reação foi vertida em água gelada e agitada por 0,5 hora. A mesma foi filtrada e o bolo de filtro foi lavado com bastante água. O produto bruto foi recristalizado com etanol para gerar 1,1 g de 4-metil-6-nitro-1-propil-1,4-di- hidroquinazolina-2(1H)-ona com um rendimento de 72%.
[0255] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ8,11(dd, 1H)8,10 (s, 1 H), 7,54 (d, J=1,6 Hz,1 H), 7,18(d, J=8,8 Hz,1H),4,62 (m, 1H), 3,81 (m, 2H), 1,55(m, 2H), 1,33(d, 3H),0,90 (t, 3H)ppm.10.7 PREPARAÇÃO DE 6-AMINO-4-METIL-1-PROPIL-1,4-DI-HIDROQUINAZOLINA-2(1H)-ONA
[0256] 1,1 g de 4-metil-6-nitro-1-propil-1,4-di-hidroquinazolina- 2(1H)-ona foi adicionado a 100 mL de metanol e 40 mg de paládio-carbono foram adicionados como um catalisador sob uma atmosfera de nitrogênio. O sistema de reação foi recarregado com hidrogênio três vezes. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 8 horas. A solução de reação foi filtrada através de um funil de areia de vidro carregado com terra diatomácea e o sólido foi removido e o filtrato foi concentrado. A purificação foi realizada através da cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,2 g de a sólido amarelo amarronzado com um rendimento de 93%.
[0257] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ6,75 (s, 1 H), 6,65 (d, J=8,8 Hz,1 H), 6,46 (dd, 1 H), 6,37 (d, J=2,0 Hz,1H), 4,75 (s, 2 H), 4,26(m, 1H), 3,67 (m, 2H),1,51(m, 2H),1,25(d, J=6,4 Hz,3H) 0,86 (t, J=7,2 Hz,3H) ppm.10.8 PREPARAÇÃO DE 1028C
[0258] 1,0 g de 6-amino-4-metil-1-propil-1,4-di-hidroquinazolina- 2(1H)-ona e 1,1 equivalente de cloreto de 2,3,5,6-tetrafluoro-4- metilbenzilsulfonila foram adicionados em bateladas a DMF e 3 equivalentes de trietilamina (TEA) foram adicionados como um agente de ligação de ácido. A reação foi mantida em temperatura ambiente e a mistura foi agitada por 12 a 16 horas. Após a reação ter sido completada, a água gelada foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila e seca através de sulfato de sódio anidroso. A fase orgânica foi concentrada e o produto bruto foi submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica para gerar 1,1 g de um sólido amarelo claro com um rendimento de 70%.
[0259] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ10,0(s,1H),7,07-7,04 (m, 2 H), 6,98(d, J=2,4 Hz,1H), 6,92 (d, J=8,8 Hz,1H), 4,56 (s, 2H), 4,35(m,1H), 3,75 (m, 2H), 3,03 (s, 3H), 1,52 (m, 2H), 1,25 (d, J=6,4 Hz, 3H), 0,87 (t, J=7,2 Hz, 3H) ppm.
[0260] Os experimentos bioquímicos in-vitro sugeriram que uma multiplicidade de compostos da presente invenção, como os agonistas de receptor PYL eficazes, tiveram altas afinidades de ligação a uma pluralidade de receptores PYL e promoveram a ligação de receptores PYL e inibiram a atividade de proteína fosfatase PP2C.
[0261] Os resultados foram mostrados nas Figuras 1a a 1g. O experimento da atividade de proteína fosfatase HAB1, em que um polipeptídeo fosforilado SnRK2.6 foi usado como um substrato, mostrou que todos dentre os compostos 0224, 0304, 0706, 0708, 0713, 0715, 1028c, 0428, 1022B e NC0F4 podem promover a ligação entre receptor PYL2 e proteína fosfatase PP2C (HAB1), desse modo, inibindo o efeito desfosforilação de HAB1 em polipeptídeo fosforilado SnRK2.6. Ademais, em uma baixa concentração, o efeito da maior parte dos compostos foi melhor ou significativamente melhor que aquele de ABA na mesma concentração.
[0262] A tecnologia AlphaScreen foi usada para testar a habilidade dos compostos da presente invenção para promover o receptor PYL que se liga à proteína fosfatase PP2C (HAB1).
[0263] Os resultados experimentais mostraram que houve um efeito dependente de dose dos compostos 0224 e 0304 na habilidade de ligação do complexo de proteína fosfatase HAB1 de receptores PYL. Para receptor PYR1, PYL1, PYL2, PYL7 de Arabidopsis, tanto o composto 0224 quanto 0304 tiveram significativamente melhor afinidade para receptores que ABA, em que o valor de EC50 de 0224 e 0304 com complexo de proteína fosfatase HAB1 de receptor PYR1 foi 1/40 e 1/24 de ABA, respectivamente (Figura 2a), o valor de EC50 de 0224 e 0304 com complexo de proteína fosfatase HAB1 de receptor PYL1 foi de 1/8 e 1/7 de ABA, respectivamente (Figura 2b), o valor de EC50 de 0224 e 0304 com complexo de proteína fosfatase HAB1 de receptor PYL2 foi de 1/29 e 1/15 de ABA, respectivamente (Figura 2c), o valor de EC50 de 0224 e 0304 com complexo de proteína fosfatase HAB1 de receptor PYL7 foi de 1/10 de ABA (Figura 2d). Os compostos 0706, 0708, 0713, 0715, 0428, 1022B e NC0F4 também mostraram melhor afinidade de receptor PYL2 através de ABA, em que o valor de EC50 de 0706, 0708, 0713 e 0715 foi aproximadamente de 1/5 a 1/8 de ABA (Figura 2e). A valor de EC50 do composto 0428 foi de cerca de 1/8 daquele de ABA (Figura 2f), o valor de EC50 de 1022B foi uma ordem de magnitude menor que aquela de ABA (Figura 2g), e a habilidade de ligação de receptor PYL2 a HAB1 foi um efeito dependente de dose com os compostos acima. O composto NCOF4 mostrou melhor afinidade de receptor PYR1 através de ABA com um valor de EC50 de cerca de 1/11 de ABA (Figura 2h).
[0264] Os resultados acima sugeriram que os compostos 0224, 0304, 0706, 0708, 0713, 0715, 1028c, 0428, 1022B e NC0F4 foram os agonistas de receptor PYL que forma mais eficazes que ABA.
[0265] Além disso, os experimentos que usam GmPYL6 de soja (gene homólogo para Arabidopsis PYL2) e OsPYL2 de arroz (gene homólogo para Arabidopsis PYL2) e Arabidopsis AtHAB1 mostraram que o composto 0428 também teve afinidades significativamente maiores com proteína GmPYL6 de soja e proteína OsPYL2 de arroz que aquelas de ABA, e o valor de EC50 foi apenas de cerca 1/14 e 1/3 de ABA, respectivamente.
[0266] Os resultados acima sugeriram que os múltiplos acima de compostos da presente invenção foram uma série de agonistas de receptor PYL que foram mais eficazes que compostos existentes, tais como ABA.
[0267] Além disso, quando as concentrações de outros compostos da presente invenção testados in vitro estiverem em uma faixa de 0,01 a 100 μM, os compostos da presente invenção exibiram todos uma afinidade significativa com o receptor PYR/PYL.
[0268] Os resultados foram mostrados na Figura 3 e na Figura 15. Os compostos 0224 e 0428 foram considerados como exemplos. 1 μM de composto 0224 ou 2 μM de composto 0428 podem inibir a germinação de semente de ecótipo Col-0, mas não podem inibir a germinação de semente de mutante triplo PYR/PYL pyr1; pyl1; pyl4. Os resultados acima mostraram que o efeito inibitório de germinação dos compostos da presente invenção (tais como compostos 0224 e 0428) foi devido à ativação de uma trajetória de sinalização de ABA intrínseco em planta, em vez de ter causado a toxicidade à planta semente.
[0269] Nesse experimento, a alteração de temperatura de superfície da folha foi observada e registrada por uma câmera de infravermelho, desse modo, refletindo a intensidade de transpiração de planta. Quanto mais forte for a transpiração menor será a temperatura de folha.
[0270] Os resultados de experimento de transpiração de folha de Arabidopsis forma mostrados na Figura 4. Após 5 μM de ABA, o composto 0224 (Figura 4a) ou o composto 0304 (Figura 4b) foi pulverizado em aba2-1 de Arabidopsis, a temperatura de folha foi maior que aquela no grupo de controle de DMSO, indicando que as plantas tratadas com composto tiveram uma transpiração mais fraca. Quatro dias após a pulverização, a temperatura de folha das plantas pulverizadas com composto o 0224 ou 0304 ainda era significativamente maior que aquela no controle de DMSO, mesmo após a concentração ter caído para 2 μM ou 1 μM, quatro dias após a pulverização, a temperatura de folha das plantas pulverizadas com a concentração correspondente do composto 0224 ainda era significativamente maior que aquela no controle DMSO (Figura 4b), enquanto quatro dias após a pulverização, a superfície da temperatura de folha da planta pulverizada com 5 μM de ABA caiu para o nível antes da pulverização. Os resultados acima mostraram que o efeito inibitório de compostos 0224 e 0304 na transpiração de folha de Arabidopsis thaliana foram melhores que aqueles de ABA, e houve um efeito dependente de dose na inibição de transpiração, em que 0224 teve um efeito melhor. Após aba2-1 de Arabidopsis ter sido pulverizada com 5 μM de composto 0706 ou 0715, a temperatura de folha também foi significativamente aumentada em comparação ao tratamento de controle (DMSO) e a duração foi equivalente ao 0224 (Figura 4c). Por outro lado, a temperatura de folha tratada com 5 μM/2 μM/1 μM do composto 0428 por um dia também foi maior que aquela no grupo de controle de DMSO, indicando que a transpiração das plantas tratadas com composto foi enfraquecida, e, enquanto isso, o composto 0428 teve um efeito dependente de dose na inibição na transpiração (Figura 4d).
[0271] Os resultados dos experimentos de transpiração de folha em soja, algodão e trigo foram mostrados na Figura 5 e na Figura 6. Os experimentos na inibição de transpiração de folha em soja mostraram que dois dias após a pulverização, para as plantas pulverizadas com 20 μM do composto 0224 ou 0304, a temperatura de folha ainda foi significativamente maior que aquela de plantas em grupo de controle pulverizado com DMSO, indicando que a transpiração das folhas de soja ainda foi inibida nesse momento, em que a temperatura de folha das plantas pulverizadas com a mesma concentração de ABA não teve diferença daquela no grupo de controle (Figura 5). Os experimentos na inibição de transpiração de folha em algodão mostraram que dois dias após a pulverização, para as plantas pulverizadas com 20 μM do composto 0224, a temperatura de folha ainda foi significativamente maior que aquela de plantas em grupo de controle pulverizado com DMSO, em que a temperatura de folha das plantas pulverizadas com a mesma concentração de ABA não teve diferença daquela no grupo de controle (Figura 6). Os experimentos na inibição de transpiração de folha em trigo mostraram que um dia após a pulverização, para as plantas pulverizadas com 100 μM do composto 0224 ou ABA, a temperatura de folha ainda foi significativamente maior que aquela das plantas em grupo de controle pulverizado com DMSO, indicando que a transpiração do trigo folhas ainda foi inibida nesse momento (Figura 16). Os resultados mostraram que o composto 0224 pode não apenas inibir a transpiração de folha nas colheitas dicotiledônea, tais como soja e algodão, mas também pode inibir a transpiração de folha em colheitas de monocotiledônea, tais como trigo. Os resultados acima mostraram que os compostos 0224 e 0304 em soja e o composto 0224 em algodão e trigo também tiveram o mesmo efeito de inibição de transpiração de folha que aquele em Arabidopsis thaliana.
[0272] Interrompeu-se a irrigação do ecótipo Col-0 de Arabidopsis thaliana que cresceu no solo por duas semanas, em que a folha foi pulverizada com uma solução que contém 5 μM de composto 0224/0706/0715 ou 0,05% de DMSO (controle) uma vez a por semana durante a seca, com uma quantidade de pulverização de 2 mL de solução/pote, duas vezes no total e 0,05% (v/v) de tensoativo Tween-20 foi adicionado à solução para melhorar o efeito de penetração do agente de pulverização na epiderme de folha. Após quatro semanas de tratamento com seca, o grupo de controle pulverizado com DMSO morreu de seca, enquanto as plantas pulverizadas com 5 μM do composto 0224/0706/0715 ainda sobreviveram (Figura 7). O mesmo método foi realizado para o tratamento com seca e (+)-ABA ou o Arabidopsis tratado com 0428 fio fotografado duas semanas após a seca. Conforme mostrado na Figura 12, devido à baixa concentração, o crescimento das plantas pulverizadas com 5 μM de (+)-ABA não teve diferente daquele de plantas no grupo de controle pulverizado com DMSO, em que o crescimento de Arabidopsis pulverizado com 5 μM de 0428 foi significativamente melhor que aquele de plantas no grupo de controle pulverizado com DMSO e plantas pulverizadas com 5 μM de (+)-ABA.
[0273] As sojas foram semeadas por 14 dias e o algodão foi semeado por 25 dias, respectivamente. As plantas com o mesmo tamanho foram selecionadas para experimentos de seca de solo. As sojas foram pulverizadas com uma solução aquosa que contém 20 μM do composto ABA/0224/0304 ou 0,05% de DMSO (controle) uma vez após o início de seca, em que o algodão foi pulverizado com uma solução aquosa que contém 20 μM do composto ABA/0224 ou 0,05% uma vez a cada 3 dias após o início de seca. 0,1% (v/v) de tensoativo Tween-20 foi adicionado à solução acima para melhorar o efeito de penetração do agente de pulverização na epiderme de folha. Irrigando-se novamente após 6 dias da seca, as sojas pulverizadas com 20 μM do composto 0224 ou 0304 (Figura 8) e o algodão pulverizado com 20 μM do composto 0224 (Figura 9) tiveram significativamente melhor crescimento após a nova irrigação que aquela no grupo de controle pulverizado com DMSO e as plantas pulverizadas com a mesma concentração de ABA.
[0274] Em outro grupo de experimentos, os experimentos de seca de solo foram realizados em sojas com três folhas em três grupos ou plantas de milho durante o período de trompete pequeno do mesmo tamanho. Após o início da seca, uma solução aquosa que contém 50 μM do composto 0428 ou 0,05% de DMSO (controle) foi pulverizada uma vez a dia por dois dias, e 0,1% (v/v) de tensoativo Tween-20 também foi adicionado à solução. A nova irrigação foi realizada após 4 dias do tratamento com seca para milho e após 9 dias do tratamento com seca para soja, respectivamente, as sojas (Figura 14a) e o milho (Figura 14b) pulverizados com 50 μM do composto 0428 tiveram crescimento significativamente melhor após a nova irrigação que aquela no grupo de controle pulverizado com DMSO.
[0275] Em outro grupo de experimentos, o trigo foi semeado por 16 dias e as plantas do mesmo tamanho foram selecionadas para experimentos de seca de solo. O trigo foi pulverizado com uma solução aquosa que contém 100 μM do composto ABA/0224 ou 0,1% de DMSO (controle) uma vez a cada 3 dias após o início de seca, e 0,1% (v/v) de tensoativo Tween-20 foi adicionado à solução acima para melhorar o efeito de penetração do agente de pulverização na epiderme de folha. Após 6 dias de seca, o trigo no grupo de controle murchou, enquanto o trigo tratado com 100 μM do composto 0224 ou ABA permanecer em posição ereta, e o crescimento significativamente melhor que aquele no grupo de controle (DMSO) (Figura 16).
[0276] Os resultados acima mostraram que os compostos da presente invenção tiveram um efeito significativo de melhoria de resistência a seca tanto em plantas dicotiledôneas e monocotiledôneas.
[0277] Os inventores analisaram o efeito de composto adicionado de modo exógeno 1022B na expressão de genes de planta.
[0278] Os resultados de análise de expressão de gene mostraram que o composto 1022B pode induzir a expressão de gene relacionado a tensão responsiva ao ABA, e a maior parte dos níveis de expressão foram de até ou maiores que aquele induzido por ABA exógeno na mesma concentração (Figura10). Dentre plantas de muda de 10 dias de vida da Arabidopsis thaliana do tipo selvagem (Col-0), o nível de expressão de 4 genes relacionados a tensão ambiental induzida por ABA conhecidos (COR15a, COR47, RAB18 e RD29b) foram significativamente aumentados após o tratamento com 10 μM do composto 1022B, que excederam significativamente o nível nas plantas tratadas com 10 μM de ABA ao mesmo tempo.
[0279] Os resultados mostraram que o efeito de indução do composto 1022B na maioria dos genes relacionados a tensão ambienta foi significativamente melhor que aquele de ABA.
[0280] A estrutura de cristal complexo PYL2-0428-HAB1 formado com o composto 0428 da presente invenção foi examinado com o uso do método de análise de cristal de proteína descrito no método geral. A resolução do cristal complexo PYL2-0428-HAB1 é de 240 picômetros (2,4 angstroms) e o controle é ABA. Conforme a parte esboça a estrutura bidimensional de dois cristais complexos foram mostrados na Figura 11a e 11b.
[0281] Conforme observado na Figura 11a e 11b, 0428 esteve presente na estrutura de cavidade de PYL2, e quatro átomos de oxigênio na estrutura de ABA pode formar ligações de hidrogênio com múltiplos resíduos de aminoácidos na estrutura de cavidade de PYL2 e HAB1 por meio de diversas moléculas de água. Os átomos de oxigênio e átomos de nitrogênio no grupo sulfonamida do composto 0428, assim como átomos de oxigênio no anel de quinolina também pode formar ligações de hidrogênio. Além disso, os substituintes de halogênio (átomo de flúor) em p-xileno também podem formar ligações de hidrogênio com resíduos de aminoácidos na estrutura de cavidade de PYL2 para o melhoramento adicional da afinidade do composto 0428 com o receptor PYL2.
[0282] Todas as publicações mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência como se cada documento individual fosse citado como uma referência, como no presente pedido. Deve-se entender que, após a leitura dos ensinamentos acima da presente invenção, aqueles versados na técnica podem realizar várias alterações ou modificações equivalentes, as quais estão no escopo das reivindicações, conforme definido nas reivindicações anexas.
Claims (10)
1. Composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvato do mesmo,
CARACTERIZADO pelo fato de que, R1 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R2 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R3 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R4 é H, halogênio, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; R5 é halogênio, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, SF5 ou C3-C8 cicloalquila; R6 é C1-C7 alquila substituída ou não substituída, C2-C7 alquenila substituída ou não substituída, C2-C7 alquinila substituída ou não substituída, C3C7 cicloalquila substituída ou não substituída, ou -Ra-O-Rb substituída ou não substituída, em que Ra é C1-C2 alquileno e Rb é H, C1-C3 alquila; e o substituída significa substituída por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, - CN, -N(Rb)2, e nitro; R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C2-C6 alquenila substituída ou não substituída, C2-C6 alquinila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C5-C10 heterociclila substituída ou não substituída, Rc-C(O)-, - ORb, -CN, e -N(Rb)2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído; em que a heterociclila contém 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O, S, e o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, - ORb, -CN, -N(Rb)2, e nitro; R8, R9, R10 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em: (i) H; (ii) C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C3-C8 alcóxi, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, halogênio, Rc-C(O)-, -OH, -NH2; Rc é selecionado a partir do grupo que consiste em: hidroxila, mercapto, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 alcóxi substituído ou não substituído; em que o substituído significa substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em: halogênio, -ORb, - CN, -N(Rb)2, e nitro; R11 é H, C1-C3 alquila, ou C1-C3 haloalquila; X é NR13, O, ou S, em que R13 é nenhum, ou selecionado a partir do grupo que consiste em: H, halogênio, C1-C3 alquila, C2-C3 alquenila, C2-C3 alquinila, C1-C3 haloalquila, e uma combinação desses; m=1 ou 2; "—'" representa uma ligação simples ou uma ligação dupla; e 3, ou 4 de R1, R2, R3, e R4 são halogênio.
2. Composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvato do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto tem uma estrutura da fórmula Ia:
em que as definições de R1-R10, e m são descritas como acima.
3. Composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvato do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto tem uma estrutura da fórmula Ib:
em que as definições de R1-R10, R13, m, e “—” são descritas como acima.
4. Composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvato do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto tem uma estrutura da fórmula Ic:
em que as definições de R1-R10, m são descritas como acima.
5. Composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvato do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
6. Composto, representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico ou um racemato, ou um solvaoto do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
7. Uso de um composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico, ou um racemato, ou um solvato do mesmo conforme definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de uma formulação agrícola ou de uma composição, que é usada para (i) o melhoramento de resistência a tensão de planta; (ii) a preparação de um agonista para receptor ABA; e/ou (iii) a preparação de um inibidor para a germinação de semente.
8. Formulação agrícola, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende: (i) um composto representado pela fórmula (I), ou um sal, ou um isômero óptico, ou um racemato, ou um solvato do mesmo conforme definido na reivindicação 1; e (ii) um carreador agricolamente aceitável.
9. Método para melhorar a resistência a tensão de planta, CARACTERIZADO pelo fato de que é para administrar a uma planta um composto da fórmula I, ou um sal, ou um isômero óptico, ou um racemato, ou um solvato do mesmo conforme definido na reivindicação 1, ou uma formulação agrícola conforme definida na reivindicação 8.
10. Método para preparar um composto da fórmula I ou um sal do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende as etapas de: (a) reagir um composto da fórmula I-A com um composto da fórmula I-S2 em um solvente inerte, formando assim um composto da fórmula I;
em cada fórmula, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, m, X, e “—” são conforme definidos na reivindicação 1.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201511004527.2 | 2015-12-28 | ||
| CN201511004527 | 2015-12-28 | ||
| CN201610325811 | 2016-05-16 | ||
| CN201610325811.8 | 2016-05-16 | ||
| PCT/CN2016/107516 WO2017114052A1 (zh) | 2015-12-28 | 2016-11-28 | 高抗逆性的植物生长调节剂及其制法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112018013314A2 BR112018013314A2 (pt) | 2018-12-26 |
| BR112018013314B1 true BR112018013314B1 (pt) | 2022-02-08 |
Family
ID=58902229
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112018013314-0A BR112018013314B1 (pt) | 2015-12-28 | 2016-11-28 | Regulador de crescimento de planta resistente a alta tensão e preparação e uso do mesmo |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11076597B2 (pt) |
| EP (1) | EP3398940B1 (pt) |
| CN (1) | CN106749080B (pt) |
| AU (1) | AU2016380736B2 (pt) |
| BR (1) | BR112018013314B1 (pt) |
| CA (1) | CA3010014C (pt) |
| ES (1) | ES2923784T3 (pt) |
| WO (1) | WO2017114052A1 (pt) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018017490A1 (en) * | 2016-07-18 | 2018-01-25 | The Regents Of The University Of California | Carbamate quinabactin |
| CN109053847B (zh) * | 2018-07-18 | 2020-05-19 | 云南大学 | 一种17β-咪唑烷基溴盐-去氢表雄烷衍生物及其制备方法和应用 |
| US20220304321A1 (en) * | 2021-03-25 | 2022-09-29 | The United States of America, as represented by the Secretary of Agriclture | Germination/sprouting and fruit ripening regulators |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013148339A1 (en) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | The Regents Of The University Of California | Synthetic compounds for vegetative aba responses |
| CN104170823A (zh) * | 2013-05-23 | 2014-12-03 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种增强植物抗逆性的小分子化合物 |
| EP3013800A1 (en) | 2013-06-28 | 2016-05-04 | The Regents of the University of California | Compounds that induce aba responses |
| AR099828A1 (es) | 2014-04-10 | 2016-08-24 | Bayer Cropscience Ag | Uso de oxotetrahidroquinolinilsulfonamidas sustituidas o sus sales para aumentar la tolerancia al estrés en plantas |
| JP6505825B2 (ja) * | 2014-08-08 | 2019-04-24 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 植物成長調節剤化合物 |
| WO2016022915A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | The Regent Of The University Of California | 6-sulfonylamino quinoline compounds as plant growth regulators |
| AR103543A1 (es) * | 2015-02-13 | 2017-05-17 | Bayer Cropscience Ag | 1-cicloalquil-2-oxotetrahidroquinolina-6-ilsulfonamida sustituida o una sal de la misma y su uso para aumentar la tolerancia al estrés en plantas |
| US10842151B2 (en) * | 2015-08-28 | 2020-11-24 | Cas Center For Excellence In Molecular Plant Sciences | Small molecule compound for enhancing plant stress resistance |
| WO2018017490A1 (en) * | 2016-07-18 | 2018-01-25 | The Regents Of The University Of California | Carbamate quinabactin |
-
2016
- 2016-11-18 US US16/066,755 patent/US11076597B2/en active Active
- 2016-11-28 CN CN201611066258.7A patent/CN106749080B/zh active Active
- 2016-11-28 ES ES16880842T patent/ES2923784T3/es active Active
- 2016-11-28 CA CA3010014A patent/CA3010014C/en active Active
- 2016-11-28 WO PCT/CN2016/107516 patent/WO2017114052A1/zh active Application Filing
- 2016-11-28 EP EP16880842.6A patent/EP3398940B1/en active Active
- 2016-11-28 AU AU2016380736A patent/AU2016380736B2/en active Active
- 2016-11-28 BR BR112018013314-0A patent/BR112018013314B1/pt active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112018013314A2 (pt) | 2018-12-26 |
| EP3398940A1 (en) | 2018-11-07 |
| CN106749080A (zh) | 2017-05-31 |
| EP3398940B1 (en) | 2022-06-22 |
| US11076597B2 (en) | 2021-08-03 |
| EP3398940A4 (en) | 2019-06-19 |
| CN106749080B (zh) | 2021-06-15 |
| CA3010014A1 (en) | 2017-07-06 |
| WO2017114052A1 (zh) | 2017-07-06 |
| US20190000084A1 (en) | 2019-01-03 |
| AU2016380736B2 (en) | 2019-11-14 |
| ES2923784T3 (es) | 2022-09-30 |
| AU2016380736A1 (en) | 2018-08-09 |
| CA3010014C (en) | 2020-10-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2016314390B2 (en) | Small molecule compound for enhancing plant stress resistance | |
| WO2017107939A1 (zh) | 一种丙二腈肟醚类化合物及其用途 | |
| BRPI0713025A2 (pt) | compostos derivados de etenila carboxamida úteis como microbiocidas, método de controle ou prevenção de infestação de plantas úteis por microorganismo fitopatogênicos e composição para controle e prevenção dos referidos microorganismos | |
| CN108069984B (zh) | 含嘧啶并环的取代五元杂环类化合物及其制备方法和用途 | |
| US11737462B2 (en) | Methods for modulating plant response to environmentally-induced stress | |
| BR112018013314B1 (pt) | Regulador de crescimento de planta resistente a alta tensão e preparação e uso do mesmo | |
| KR910004206B1 (ko) | 4, 5, 6, 7-테트라히드로-2h-인다졸 유도체의 제조방법 | |
| CN106749044B (zh) | 增强植物抗逆性的aba类似物 | |
| AU2015206634B2 (en) | S-Benzylthiouracil compounds and methods of enhancing plant root growth | |
| CN113549053B (zh) | 一种吡唑喹（唑）啉醚类化合物及其应用 | |
| JPH0368566A (ja) | ５‐置換３‐アリールインオキサゾール‐誘導体、その製法及びこれを含有する有害生物防除剤 | |
| CN110964037A (zh) | 含嘧啶并环类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN103288772B (zh) | 具有除草活性的2,4,5-多取代噻唑衍生物及其制备 | |
| CN110396083B (zh) | 含哒嗪酮基丁烯内酯类化合物及其用途 | |
| JP6583737B2 (ja) | アブシジン酸誘導体 | |
| JPWO2020054878A1 (ja) | 植物の耐塩性向上剤 | |
| CN110724136A (zh) | 酰胺类化合物及其制备方法和应用 | |
| JPS63264508A (ja) | 除草組成物 | |
| JPS59122472A (ja) | ピラゾ−ル誘導体、その製造方法および該誘導体を含有する選択性除草剤 | |
| JPH01113388A (ja) | 除草剤組成物 | |
| NO803509L (no) | Fungizide sulfonyl- resp. sulfinylacetanilider | |
| JPS58167588A (ja) | ピラゾ−ル誘導体，その製造法および該誘導体を含有する除草剤 | |
| HU180918B (en) | Plant growth regulating and herbicide compositions containing thiophene-2-carboxamide-oxime derivatives as active substances and process for preparing the active substances | |
| JPS63215605A (ja) | ２−ニトロ−５−（置換フエノキシ）ベンゾヒドロキシム酸誘導体を有効成分とする除草剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B25A | Requested transfer of rights approved |
Owner name: CAS CENTER FOR EXCELLENCE IN MOLECULAR PLANT SCIENCES (CN) |
|
| B350 | Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 28/11/2016, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. |