BR112018004863B1

BR112018004863B1 - Compostos usados para a prevenção ou aplicação terapêutica de hiperuricemia ou gota

Info

Publication number: BR112018004863B1
Application number: BR112018004863-1A
Authority: BR
Inventors: Dongfang Shi; Changjin FU; Xi Cheng; Jianghua Zhu; Jie Wen; Jie Gu
Original assignee: Jiangsu Atom Bioscience And Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2015-09-10
Filing date: 2016-09-08
Publication date: 2023-04-18
Also published as: JP2018526417A; CN106432229A; RS60697B1; HUE051448T2; EA201890694A1; CY1123137T1; ES2803223T3; AU2016320073A1; EA037280B1; WO2017041732A1; US20180282321A1; US10399971B2; SI3348557T1; MX2018003006A; HRP20201094T1; TWI681772B; SG11201802010QA; TW201808284A; KR20180044426A; IL257960A

Abstract

COMPOSTOS USADOS PARA A PREVENÇÃO OU APLICAÇÃO TERAPÊUTICA DE HIPERURICEMIA OU GOTA. A invenção refere-se a uma classe de compostos para tratar ou prevenir hiperuricemia ou gota que é um composto mostrado na fórmula geral (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável. Esses compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis na invenção são úteis para a promover a excreção de ácido úrico para tratar ou prevenir hiperuricemia ou gota.

Description

CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se ao campo da química medicinal e, particularmente, refere-se a uma classe de derivados de (4-hidroxifenil)(imidazo[1,2- a]piridin-3-il)metanona, suas composições e suas aplicações na medicina.

HISTÓRICO DA INVENÇÃO

[002] Gota é uma doença metabólica causada pelos níveis de ácido úrico no soro (sUA | serum uric acid) cronicamente elevados (hiperuricemia) devido à desordem de metabolismo de purina e/ou de eliminação renal insuficiente de ácido úrico. A deposição dos cristais tipo agulha de urato nas articulações leva à artrite inflamatória dolorosa. Hiperuricemia, definida como concentração de sUA mais alta ou igual a 6,8 mg/dL, pode resultar na precipitação de urato como sal monossódico no fluido sinovial do tecido macio humano, na cartilagem da articulação periférica, na aurícula da orelha e na bursa do olécrano do cotovelo. Quando tais sintomas estão presentes, a condição pode ser diagnosticada como gota. (Terkeltaub RA. Crystal Deposition Diseases. In: Goldman L, Aus-iello D, eds. The Cecil Textbook of Medicine, 23rd ed. Philadelphia, PA: Saunders Elsevier Co; 2008:2069-2075; Richette P, Bardin T. Gout. Lancet. 2010, 375(9711):318-328).

[003] Gota é o tipo comum de artrite inflamatória e tem uma incidência de aproximadamente 1% a 2%. A incidência nos países desenvolvidos é relativamente alta, conforme uma pesquisa de 2007 a 2008 relatou que havia cerca de 8,3 milhões de pacientes com gota nos Estados Unidos. Na China, a incidência de gota aumentou dramaticamente na década passada. É relatado que o número de pacientes com gota na China excedeu 50 milhões, e a proporção de homens com gota é muito maior do que de mulheres.

[004] Atualmente, as medicações para gota envolvem tratamento a curto prazo para alívio da dor e redução da inflamação durante um ataque agudo, a inibição de produção de ácido úrico e a promoção de excreção de ácido úrico. O medicamento para o tratamento de ataque agudo de gota inclui principalmente colchicina, drogas anti-inflamatórias não esteroides (NSAIDs | non-steroidal anti-inflammatory drugs), hormônio adrenocorticotrópico e glucocorticoides.

[005] As medicações a longo prazo de gota envolvem a diminuição da formação de ácido úrico e/ou aumento de excreção renal de ácido úrico. Alopurinol e ulorico são as drogas mais usadas com frequência na diminuição da formação de ácido úrico. O mecanismo dessas drogas é reduzir a formação de ácido úrico pela inibição de xantina oxidase necessária para a transformação de purina para ácido úrico. Uricosúricos são a segunda classe de terapia de redução de urato atualmente disponíveis, que agem pelo aumento de eliminação renal de ácido úrico. Eles incluem, principalmente, probenecida, sulfinpirazona e benzbromarona, etc.

[006] O tratamento de ataques de gota agudos pode apenas controlar os sintomas e aliviar a dor dos pacientes, mas não pode reduzir a concentração de sUA. Colchicina é muito tóxica, frequentemente acompanhada pelas reações adversas comuns tais como diarreia, vômito e espasmos de dor abdominal. Alopurinol é um dos inibidores de xantina oxidase. Ele precisa ser usado em alta dose, e para algumas pessoas pode causar síndrome de Stevens Johnson fatal (eritema multiforme da pele), frequentemente acompanhado pelo desconforto abdominal, náusea, diarreia, dor de cabeça, febre, perda de apetite, perda de peso, dor ao urinar, hematuria e outros efeitos colaterais. Outro inibidor de xantina oxidase é chamado ulorico (febuxostato), que foi lançado na Europa e nos Estados Unidos em 2009. Embora o ulorico mostre boa eficácia na diminuição dos níveis de ácido úrico no corpo, ele também tem sérios efeitos colaterais tais como problema cardiovascular e desconforto gastrointestinal, potencialmente causando cefaleias e lesão hepática. Benzbromarona tem uma boa eficácia uricossúrgica, mas leva à lesão hepática fatal. Tanto o probenecida quanto a sulfinpirazona são agentes uricossúrgicos com administração de alta dose em baixa eficácia e efeitos colaterais ruins.

[007] O mecanismo de uricossúrgicos envolve a inibição da reabsorção de ácido úrico nas células tubulares proximais para aumentar a excreção renal de ácido úrico e reduz a concentração de ácido úrico no sangue. Cerca de 70% de excreção de ácido úrico em humanos é feita pelos rins, e cerca de 80 a 85% de pacientes com hiperuricemia são causados pela desordem de excreção de ácido úrico. (Família portadora de Cheeseman C. Solute 2, membro 9 e homeostase de ácido úrico. Current Opinion in Nephrology and Hypertension, 2009, 18 (5): 428-432).

[008] A excreção de ácido úrico desempenha um papel muito importante no tratamento de hiperuricemia e gota. O transportador de ânion urato humano 1 (hURAT1) está localizado na membrana celular epitelial tubular proximal, e ele pertence a um membro da superfamília de um transportador de ânion orgânico (OAT | organic anion transporter), que é codificado pelo gene SLC22A12. Seu cDNA tem várias mutações que tornam o metabolismo do ácido úrico anormal. Uma Meta análise mostrou que esse gene tem 0,13% de variáveis contribuídas para o nível de ácido úrico no soro. (So A, Thorens B. Uric acid transport and disease. Journal of Clinical Investigation., 2010, 120 (6): 1791-1799).

[009] O URAT1 controla mais de 90% da reabsorção do ácido úrico após filtração de glomerular. Portanto, a inibição seletiva de URAT1 pode diminuir a reabsorção do ácido úrico e promove a excreção de ácido úrico nos rins para reduzir os níveis de ácido úrico no corpo. (Michael FW, Jutabha P, Quada B. Developing potent human uric ácido transporter 1 (hURAT1) inhibitors. Journal of Medicinal Chemistry. 2011,54:27012713)

[010] Atualmente, benzbromarona, como o inibidor de URAT1, ainda é amplamente usada no mercado para o tratamento de gota. Seu nome químico é (3,5-dibromo-4- hidroxifenil)(2-etil-benzofuran-3-il)metanona, desenvolvida pela empresa France Sanofi-Synthelabo e lançada em 1976. É o agente uricossúrico mais eficaz no mercado e foi usado por quase 40 anos. Mas o uso de benzbromarona não foi aprovado nos Estados Unidos e foi retirado dos mercados europeus em 2003 devido a seu efeito colateral de toxicidade hepática grave. (Jansen TL, Reinders MK, van Roon EN, et al. Benzbromarona withdrawn from the European market: another case of “absence of evidence is evidence of absence”. Clinical Experimental Rheumatology, 2004, 22(5): 651). Outra desvantagem é que ele tem um efeito inibitório forte na enzima CYP2C9 do fígado. Entretanto, mais de 20 países, tais como China, Alemanha, Japão, Brasil e Nova Zelândia ainda o usam por falta de boas drogas para gota no mercado.

Benzbromarona

[011] Estudos mostraram que a lesão hepática fulminante ou fatal de benzbromarona foi associada com seus metabólitos reativos. Um possível mecanismo da toxicidade hepática pode envolver a bioativação de benzbromarona através de hidroxilação sequencial do anel de benzofurano para formar 6-hidróxi-benzbromarona e um catecol por CYP2C9, que pode ainda ser oxidado pelas enzimas P450s para um metabólito de quinona reativo capaz de formar adutos de reagentes de tiol/resíduos de cisteína. (Matthew G. McDonald, Rettie AE. Sequential metabolism and bioactivation of the hepatotoxin benzbromarone: formation of glutathione adducts from a catechol intermediate. Chemical Research in Toxicology. 2007, 20 (12):1833-1842).

[012] Benzbromarona também tem outros efeitos colaterais, tais como diarreia, desconforto no estômago, náusea, sintomas do sistema digestivo, alergias na pele tais como mácula, rubor, coceira e assim por diante.

[013] Atualmente, os graves efeitos colaterais de quaisquer agentes uricossúricos ou inibidores de xantina oxidase afetaram grandemente o uso a longo prazo desses medicamentos para gota. Portanto, é fundamental desenvolver drogas para gota que sejam altamente eficazes e têm baixa toxicidade.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[014] São fornecidos uma classe de novos derivados de (4-hidroxifenil)(imidazo[1,2- a]piridin-3-il)metanona como inibidores de URAT1, métodos para sua preparação e intermediários e composições sintéticas relacionados. Os resultados de teste tanto in vitro quanto in vivo mostraram que os compostos providos por essa invenção podem melhorar significativamente o efeito inibitório em URAT1, bem como aumentar significativamente a excreção de ácido úrico em camundongos e reduzir a toxicidade para as células hepáticas normais em comparação com benzbromarona. A dose oral máxima tolerada ela invenção foi muito menor que aquela de benzbromarona. Os estudos mostraram que o composto provido pela invenção é altamente eficaz na excreção de ácido úrico e tem baixa toxicidade.

[015] Outra finalidade da presente invenção é prover uma composição farmacêutica, contendo derivados de (4-hidroxifenil)(imidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona.

[016] Adicionalmente, os compostos de (4-hidroxifenil)(imidazo[1,2-a]piridin-3- il)metanona descritos aqui são úteis na prevenção ou tratamento de hiperuricemia, nefropatia ou gota.

[017] As aplicações da invenção podem ser alcançadas pelas seguintes medições:

[018] Os compostos da presente invenção são representados pela Fórmula (I)

ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, em que: - R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, hidroxila, alquila C1-5, alquila C1-5 substituída, alcóxi C1-3, alcóxi C1-3 substituído, alquiltio C1-3 ou alquiltio C1-3 substituído em um ou mais; - R3 é selecionado do grupo substituído ou não substituído consistindo em alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4, e os substituintes são independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, alquila C1-2 ou cicloalquila C3-4; - R4 e R5 são independentemente selecionados do grupo consistindo em halogênio, deutério, ciano, alquenila C2-3, alquinila C2-3, alquila C1-3, alquila C1-3 substituída, alcóxi C1-3, alcóxi C1-3 substituído, alquiltio C1-3 ou alquiltio C1-3 substituído em um ou mais; em que os substituintes em R1, R2, R4 e R5 são independentemente selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

[019] R1, R2, R4 e R5 na invenção podem ser selecionados a partir de um, dois ou mais de dois dos grupos definidos individualmente. Quando R1, R2, R4 ou R5 são selecionados para dois ou mais de dois, esses grupos são localizados nos locais correspondentes de anel de fenila ou anel de imidazo[1,2-a]piridila. Por exemplo, quando R4 usa dois grupos, os dois grupos podem estar nas posições 2 e 3 na 4-hidróxi fenila, respectivamente.

[020] Em uma aplicação, cada R1 ou R2 é independentemente selecionado dentre hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, hidroxila, alquila C1-5, alquila C1-5 substituída, alcóxi C1-3, alcóxi C1-3 substituído, alquiltio C1-3 ou alquiltio C1-3 substituído; os substituintes são selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou C1-3 alcóxi.

[021] Em outra aplicação preferida, R1 e R2 são independentemente selecionados dentre um ou mais de hidrogênio, deutério, flúor, cloro, bromo, ciano, hidroxila, alquila C1-3, alquila C1-3 substituída, alcóxi C1-3 ou alcóxi C1-3 substituído; os substituintes são selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

[022] Em algumas aplicações, R1 ou R2 são independentemente selecionados de um ou mais hidrogênio, deutério, flúor, cloro, bromo, ciano, alquila C1-3, alquila C1-3 halogenada ou alcóxi C1-3.

[023] Em algumas aplicações, R1 e R2 são independentemente selecionados de hidrogênio, deutério, flúor, cloro, bromo, ciano, metil, etila, metóxi, etóxi, trifluorometila e assim por diante.

[024] Em algumas aplicações, R3 é independentemente selecionado dentre alquila C13, alquila C1-3 substituída, cicloalquila C3-4 ou cicloalquila C3-4 substituída; os substituintes são selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-2 ou cicloalquila C3-4.

[025] Em algumas aplicações, R3 é selecionado dentre alquila C2-3 ou C3-4 cicloalquila.

[026] Em algumas aplicações, R3 é selecionado dentre etila ou ciclopropila.

[027] Em algumas aplicações, R4 e R5 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, alquenila C2-3, alquinila C2-3, alquila C1-3, alquila C1-3 substituída, C1-3 alcóxi, alcóxi C1-3 substituído, alquiltio C1-3 ou alquiltio C1-3 substituído; os substituintes são selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

[028] Em algumas aplicações, R4 e R5 são independentemente selecionados de um ou mais de hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, etileno, acetileno, alquila C1-2, alquila C1-2 substituída, alcóxi C1-2, alcóxi C1-2 substituído, alquiltio C1-2 ou alquiltio C1-2 substituído; os substituintes são selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-2, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

[029] Em algumas aplicações, R4 e R5 são independentemente selecionados de um ou mais de hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, alquila C1-2, alquila C1-2 halogenada, alcóxi C1-2 ou alquiltio C1-2.

[030] Em algumas aplicações, R4 e R5 são independentemente selecionados de um ou mais de hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, metila, etila, metóxi, etóxi, trifluorometila, metiltio ou etiltio.

[031] Em algumas aplicações, R4 é selecionado dentre um ou mais de halogênios, e R5 é selecionado dentre ciano.

[032] Em algumas aplicações, “sais farmaceuticamente aceitáveis” são sais formados pelos compostos na invenção com ácidos, os quais são obtidos pela reação de bases livres dos compostos de origem com ácidos inorgânicos ou ácidos orgânicos, em que os ácidos inorgânicos e os ácidos orgânicos incluem (entre outros): por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido propanóico, ácido acrílico, ácido oxálico, (D) ou (L) ácido málico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido hidroxibenzoico, ácido Y-hidroxibutírico, ácido metoxibenzoico, ácido ftálico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1-naftalenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico e similar.

[033] Um composto da presente invenção e seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o composto é selecionado dentre: (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3,5-di-iodofenil)metanona; (3-Cloro-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; 3-Cloro-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila; (3-Bromo-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-iodo-5-metilfenil)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-iodofenil)metanona; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila; (3-Cloro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (3-Cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi-3-metilbenzonitrila; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-(trifluorometil)fenil)metanona; (3-Bromo-4-hidróxi-5-(trifluorometil)fenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metoxi-imidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; 3-Bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi-3-iodobenzonitrila; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-3-fluoro-2-hidroxibenzonitrila; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-propilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(2-etilsulfanil-4-hidroxifenil)metanona; (3-Bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Bromo-5-fluoro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (2-Etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3-fluoro-4-hidróxi-5-iodofenil)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-hidroxi-imidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (6-Bromo-2-etil-7-metilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4- hidroxifenil)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridin-3- il)metanona; 3-(3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)-2-etilimidazo[1,2-a]piridina-6-carbonitrila; (2-Deutério-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (2-Deutério-3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona; (6-Deutério-2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)metanona; (2-Ciclopropilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)metanona; Cloreto de hidrogênio de 3-Bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2- hidroxibenzonitrila; e cloreto de hidrogênio de 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridina-3- carbonil)-2-hidróxi-3-iodobenzonitrila.

[034] Os compostos da presente invenção podem ser preparados pelos seguintes métodos sintéticos:

[035] Esquema Geral 1:

[036] No esquema geral 1, a 2-aminopiridina substituída foi reagida com cloreto de acila para dar a amida correspondente, a qual foi adicionalmente reagida com 2- bromo-1-feniletanona substituída para obter a (imidazo[1,2-a]piridin-3-il)- (fenil)metanona correspondente. O composto pode ser o produto final ou o produto alvo foi obtido por desmetilação, halogenação e/ou outras reações.

[037] Esquema geral 2:

[038] No esquema geral 2, a acetofenona substituída foi reagida com o éster correspondente para dar o composto 1,3-dicetona que foi reagido com a 2- aminopiridina correspondente para obter (imidazo[1,2-a]piridin-3-il)- (fenil)metanona. O composto alvo foi oferecido por desmetilação, halogenação e/ou outras reações.

[039] A definição de cada grupo nos esquemas sintéticos é conforme descrita abaixo.

[040] Salvo indicação em contrário, os termos a seguir usados nas reivindicações e instruções têm os significados dados abaixo.

[041] “Hidrogênio” refere-se a prótio (1H) o qual é um isótopo estável principal de hidrogênio.

[042] “Deutério” é um isótopo estável de hidrogênio e também referido como hidrogênio pesado, e seu símbolo de elemento é D.

[043] “Halogênio” refere-se a átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo ou átomo de iodo.

[044] “Alquila” é um grupo alifático saturado tendo de 1 a 20 átomos de carbono, incluindo um grupo de cadeia linear e um grupo de cadeia ramificada (a faixa numérica (por exemplo, de 1 a 20) mencionados no presente pedido significa que esse grupo (alquila nesse caso) pode conter um átomo de carbono, dois átomos de carbono, três átomos de carbono ou mesmo vinte átomos de carbono). Uma alquila contendo de 1 a 4 átomos de carbono é chamada de alquila de baixo nível. Uma alquila de baixo nível sem nenhum grupo substituinte é chamada de alquila de baixo nível não substituída, por exemplo, metila, etila, propila, 2-propila, n-butila, isobutila, terc-butila ou similar. A alquila pode ser substituída ou não substituída.

[045] “Alcóxi” representa -O- (alquila não substituída) e -O- (cicloalquila não substituída), e representa ainda -O- (alquila não substituída). Os exemplos não representativos incluem, entre outros, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, ciclopropóxi, ciclobutóxi, ciclopentilóxi, ciclo-hexilóxi ou similar.

[046] “Alquiltio” representa os grupos -S- (alquila não substituída) e -S- (cicloalquila não substituída), também indica o -S- (alquila não substituída). Os exemplos representativos incluem, entre outros, metionila, etiltio, propiltio, butiltio ou ciclopropiltio, ciclobutiltio, ciclopentitio, ciclo-hexilthio e similar.

[047] “Alquenila” representa um grupo hidrocarbila linear ou ramificado tendo de 2 a 7 átomos de carbono e, em algumas aplicações, de 2 a 6 átomos de carbono ou de 2 a 4 átomos de carbono. Os exemplos representativos incluem, por exemplo, etenila, propenila, alila e similar.

[048] “Alquinila” representa um radical hidrocarboneto monovalente linear ou um radical hidrocarboneto monovalente ramificado tendo de 2 a 7 átomos de carbono e, em algumas aplicações, de 2 a 6 átomos de carbono ou de 2 a 4 átomos de carbono. Os exemplos representativos incluem etinila, propinila, propargila e similar.

[049] “Cicloalquila” representa um grupo alquila de anel único ou duplo com mais de 3 átomos de carbono, incluindo, entre outros, grupos ciclopropila, ciclobutila, ciclo- hexenila e diciclo-heptila.

[050] “Ciano” representa o grupo -CN.

[051] “Sais farmaceuticamente aceitáveis” são sais formados pelos compostos da fórmula (I) com ácidos orgânicos ou ácidos inorgânicos, e representam sais mantendo a biodisponibilidade e propriedades dos compostos originais. Esses sais incluem: - sais formados pelos compostos com ácidos, os quais são obtidos pela reação com bases livres dos compostos originais com ácidos inorgânicos ou ácidos orgânicos, em que os ácidos inorgânicos incluem (entre outros): por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metafosfórico, ácido sulfúrico, ácido sulfuroso, ácido perclórico e similares; os ácidos orgânicos incluem (entre outros): por exemplo, ácido acético, ácido propanoico, ácido acrílico, ácido oxálico, (D) ou (L) ácido málico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido hidroxibenzoico, ácido Y-hidroxibutírico, ácido metoxibenzoico, ácido ftálico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1-naftalenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido succínico, ácido malônico e similar; e - sais gerados pela substituição de prótons acídicos nos compostos originais com íons metálicos ou coordenação dos prótons acídicos nos compostos originais com álcalis orgânicos, em que os íons metálicos incluem, por exemplo, íons de metal alcalino, íons de metal alcalino-terroso ou íons de alumínio; e os álcalis orgânicos incluem, por exemplo, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamol, N-metilglucamina e similar.

[052] “Composição farmacêutica” refere-se à mistura de um ou mais compostos descritos aqui ou seus sais ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis, junto com outros componentes químicos, tais como transportadores e excipientes farmaceuticamente aceitáveis. A finalidade da composição farmacêutica é promover a distribuição de droga do composto para o organismo.

[053] Na seção a seguir, a menos que especificamente restrito, os compostos (I), os quais são ingredientes ativos de agentes terapêuticos, incluindo todos os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, devem ser entendidos como abrangidos no escopo dessa invenção. Nesse relatório descritivo, eles são simplesmente referidos como compostos da fórmula (I) para conveniência.

[054] A invenção compreende uma composição farmacêutica, a qual compreende qualquer composto da invenção, seu sal farmaceuticamente aceitável ou seu éster de pró-droga facilmente hidrolisado como um ingrediente ativo, suplementado por excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[055] Os compostos acima da fórmula (I) na invenção foram confirmados nas seguintes aplicações, eles podem melhorar significativamente o efeito inibitório em URAT1, significativamente aumenta a excreção de ácido úrico em camundongos, e a toxicidade é muito mais baixa do que de benzbromorona. Portanto, o composto provido pela presente invenção tem efeito de excreção de ácido úrico mais excelente e maior segurança. Com base nessas propriedades, um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável respectiva pode ser usado na preparação de droga uricossúrica para o tratamento das doenças relacionadas ao distúrbio de excreção de ácido úrico, especialmente usado no tratamento ou prevenção de Hiperuricemia, nefrose ou gota.

MÉTODOS DE IMPLEMENTAÇÃO ESPECÍFICA

[056] Exemplo 1: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-piridin- 3-il)metanona (4)

[057] Etapa A: Para uma mistura de 2-aminopiridina (2,0 g, 21,3 mmols) e trietilamina (2,58 g, 25,5 mmols) em diclorometano (20 mL), foi adicionado cloreto de propionila (2,07 g, 22,4 mmols) gota a gota em um banho de água gelada. Após adição, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite, diluída com água (40 mL), extraída com diclorometano (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro, concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:15-1:10) para dar N-(piridina-2- il)propionamida (1) (2,74 g) com 85, 6% de rendimento.

[058] Etapa B: Uma mistura do composto 1 (300 mg, 2,0 mmols) e 2-bromo-1-(4- metoxifenil-etanona (460 mg, 2,0 mmols) em tolueno (10 mL) foi aquecida sob refluxo por 48 h. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água (30 mL), ajustada ao pH 8 a 9 com carbonato de potássio saturado, extraída com diclorometano (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo =1:30-1:1) para proporcionar (2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-metoxifenil)metanona (2) (254 mg) com 45,3% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,18 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,74-7,69 (m, 3H), 7,58-7,55 (m, 1H), 7,17-7,14 (m, 1H), 7,09 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,11 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 281,1 [M+H]+.

[059] Etapa C: Tribrometo de boro (0,6 mL, 1,0 M em tolueno) foi adicionado gota a gota em uma solução do composto 2 (80 mg, 0,285 mmols) em diclorometano anidro (6 mL) em um banho de água gelada. Após adição, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente, agitada durante a noite, derramada em água gelada (30 mL), ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado, e extraída com acetato de etila (40 mLx2). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada sobre vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo =1:20-1:1) para proporcionar (2-etilimidazo[1,2-a]-piridina-3-il)(4-hidroxifenil)metanona (3) (67 mg) com 88,3% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10,29 (s, 1H), 9,11 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,62-7,51 (m, 3H), 7,15-7,11 (m, 1H), 6,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 267,2 [M+H]+.

[060] Etapa D: Para uma mistura do composto 3 (67 mg, 0,252 mmols) e acetato de sódio (62 mg, 0,755 mmols) em ácido acético (5 mL) foi adicionado bromo (90 mg, 0,563 mmols) em ácido acético (1 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 3 h, extinta pela adição de bissulfato de sódio aquoso saturado e concentrada sob vácuo. Ao resíduo, foi adicionada água (30 mL), e a mistura foi ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila (40 mLx2). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo=1:10-1:1) para proporcionar (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-imidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (4) (48 mg) com 44.9% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,19 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,87 (s, 2H), 7,75 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,63-7,58 (m, 1H), 7,22-7,17 (m, 1H), 2,44 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 422,9 [M+H]+.

[061] Exemplo 2: Síntese de (2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi- 3,5- diiodofenil)metanona (5).

[062] Uma mistura do composto 3 (556 mg, 2,09 mmols), acetato de sódio (367 mg, 4,58 mmols) e iodeto (1,17 g, 4,61 mmols) em metanol (20 mL) foi agitada sob refluxo por 1 h. Então, foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (151 mg, 3,78 mmols) em água (20 mL). A mistura de reação foi agitada sob refluxo por 1 h e resfriada à temperatura ambiente. Bissulfato de sódio aquoso saturado (20 mL) foi adicionado. Os precipitados formados foram coletados por filtração, lavados com água e secados. O produto bruto foi cristalizado a partir de éter de petróleo/acetato de etila para dar (2- etilimidazo[1,2-a]-piridina-3-il)(4-hidróxi-3,5-diiodofenil)metanona (5) (924 mg) com 85,3% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,17 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,05 (s, 2H), 7,75 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,64-7,58 (m, 1H), 7,22-7,17 (m, 1H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 518,8 [M+H]+.

[063] Exemplo 3: Síntese de (3-cloro-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3- il)metanona (8) e (3-cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-piridin-3- il)metanona (9)

[064] Etapa A: Uma solução de brometo de 2-bromoacetila (6,8 g, 33,7 mmols) em diclorometano anidro (10 mL) foi adicionado gota a gota para uma mistura de 1-cloro- 2-metoxibenzeno (4,0 g, 28,1 mmols) e cloreto de alumínio (4,12 g, 30,9 mmols) em diclorometano anidro (30 mL) em um banho de gelo. Após adição, a mistura de reação foi agitada por mais 1,5 h e derramada em água gelada (100 mL). A mistura foi extraída com diclorometano (60 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL), bicarbonato de sódio saturado (30 mLx2), água (30 mL) e salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada através de uma almofada curta de sílica-gel e concentrada sob vácuo. O resíduo foi recristalizado com éter de petróleo/diclorometano para conseguir 2-bromo-1-(3-cloro-4-metoxifenil)etanona (6) (3,37 g) com 45,5% de rendimento.

[065] Etapa B: Uma mistura do composto 1 (780 mg, 5,23 mmols) e composto 6 (1,37 g, 5,20 mmols) em tolueno (20 mL) foi agitada sob refluxo por 24 h e resfriada à temperatura ambiente. Após adição de água (50 mL), a mistura de reação foi ajustada ao pH 8 a 9 com carbonato de potássio saturado e extraída com diclorometano (60 mLx3). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:20-1:5) para proporcionar (3-cloro-4-metoxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (7) (510 mg) com 31,2% de rendimento.

[066] Etapa C: Tribrometo de boro (3,2 mL, 1,0 M em tolueno) foi adicionado gota a gota para uma mistura de composto 7 (500 mg, 1,57 mmols) em diclorometano anidro (15 mL) em um banho de água gelada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, derramada em água gelada (40 mL), ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila (40 mLx2). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila /éter de petróleo = 1:5-3:1) para proporcionar (3-cloro-4- hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-piridina-3-il)metanona (8) (380 mg) com 79,5% de rendimento. MS (EI, m/z): 301,7 [M+H]+.

[067] Etapa D: Uma mistura do composto 8 (378 mg, 1,26 mmols), acetato de sódio (114 mg, 1,39 mmols) e iodo (351 mg, 1,38 mmols) em metanol (30 mL) foi agitada sob refluxo por 1 h. Após adição de uma solução de hidróxido de sódio (45 mg, 1,13 mmols) em água (13 mL), a mistura de reação foi agitada sob refluxo por 1 h e resfriada à temperatura ambiente. Bissulfato de sódio aquoso saturado (30 mL) foi adicionado. Os precipitados foram coletados por filtração, lavados com água e secados. O produto bruto foi recristalizado com éter de petróleo/acetato de etila para proporcionar (3-cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (9) (430 mg) com 85,3% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,04 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,71-7,68 (m, 2H), 7,54-7,51 (m, 1H), 7,13-7,10 (m, 1H), 2,49-2,47 (m, 2H), 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 426,9 [M+H]+.

[068] Exemplo 4: Síntese de 3-cloro-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2- hidroxibenzonitrila (10)

[069] Uma mistura do composto 9 (393 mg, 0,921 mmols) e cianeto cuproso (124 mg, 1,38 mmols) em DMF (5 mL) foi agitada a 130°C durante a noite, resfriada à temperatura ambiente, diluída com água (30 mL) e extraída com acetato de etila (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mLx2) e salmoura (10 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 2:1-5:1) para proporcionar 3-cloro-5-(2-etilimidazo[1,2- a]piridina-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila (10). 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,11 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 7,94-7,90 (m, 2H), 7,80-7,77 (m, 1H), 7,68-7,63 (m, 1H), 7,26-7,21 (m, 1H), 2,50-2,48 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 324,0 [M-H]-.

[070] Exemplo 5: Síntese de (3-bromo-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]- piridina-3-il)metanona (11)

[071] O Composto 11 foi preparado de acordo com o procedimento do exemplo 3 ao usar 1-bromo- 2-metoxibenzeno na etapa A como um reagente alternativo. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,16 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,62-7,56 (m, 1H), 7,20-7,16 (m, 1H), 2,43 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 470,9 [M+H]+.

[072] Exemplo 6: Síntese de (2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-iodo-5- metilfenil)metanona (12)

[073] O Composto 12 foi preparado de acordo com o procedimento do exemplo 3 pelo uso de 1-metóxi-2-metilbenzeno na etapa A como um reagente alternativo. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,91 (s, 1H), 9,14 (dd, J = 0,9, 6,9 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,74-7,71 (m, 1H), 7,59-7,51 (m, 2H), 7,18-7,13 (m, 1H), 2,44 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 406,9 [M+H]+.

[074] Exemplo 7: Síntese de (2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-iodofenil)- metanona (13)

[075] O Composto 13 foi preparado de acordo com os procedimentos das etapas A, B e C no exemplo 3 pelo uso de 1-iodo- 2-metoxibenzeno como um reagente alternativo. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 11,16 (s, 1H), 9,13 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,57-7,54 (m, 1H), 7,16-7,13 (m, 1H), 7,01 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 392,9 [M+H]+.

[076] Exemplo 8: Síntese de 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi- benzonitrila (14)

[077] Usar o composto 13 como o material de partida, o composto 14 foi preparado de acordo com o procedimento do exemplo 4. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 11,91 (s, 1H), 9,19 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,61-7,57 (m, 1H), 7,19-7,15 (m, 2H), 2,43 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,13(t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 292,0 [M+H]+.

[078] Exemplo 9: Síntese de (3-bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoro- imidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (18)

[079] Etapa A: Para uma mistura de 2-amino-5-fluoropiridina (2,5 g, 22,3 mmols) e trietilamina (2,71 g, 26,8 mmols) em diclorometano anidro (25 mL) foi adicionado cloreto de propionila (2,17 g, 23,5 mmols) gota a gota em um banho de água gelada. Após adição, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, extinta com água (40 mL) e extraída com diclorometano (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:5) para proporcionar N-(5-fluoropiridina-2-il)propionamida (15) (3,04 g) com 81,1% de rendimento.

[080] Etapa B: Uma mistura do composto 15 (960 mg, 5,71 mmols) e composto 6 (1,5 g, 5,69 mmols) em tolueno (30 mL) foi agitada sob refluxo durante a noite, resfriada à temperatura ambiente, diluída com água (30 mL), ajustada ao pH 8 a 9 com carbonato de potássio saturado e extraída com diclorometano (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água, secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:30-1:1) para proporcionar (3-cloro-4- metoxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (16) (270 mg) com 14,3% de rendimento.

[081] Etapa C: Uma solução a 1,0 M de tribrometo de boro em tolueno (2,4 mL) foi adicionada gota a gota para uma mistura de composto 16 (262 mg, 0,787 mmols) em diclorometano anidro (10 mL) em um banho de água gelada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 6 h, diluída com água gelada (30 mL), ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:6-1:4) para proporcionar (3-cloro-4- hidroxifenil)(2-etil-6-fluoro-imidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona (17) (90 mg) com 35,9% de rendimento. MS (EI, m/z): 339.7 [M+H]+.

[082] Etapa D: Para uma mistura de composto 17 (41 mg, 0,129 mmols) e acetato de sódio (26 mg, 0,317 mmols) em ácido acético (5 mL) foi adicionado bromo (25 mg, 0,156 mmols) em ácido acético (1 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 h, extinta por bissulfato de sódio aquoso saturado, e então concentrada sob vácuo. Ao resíduo foi adicionada água (20 mL), e a mistura foi ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:6-1:3) para proporcionar (3-bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)-(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (18). 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 11,06 (s, 1H), 9,22-9,21 (m, 1H), 7,86-7,83 (m, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 2,43 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 398,9 [M+H]+.

[083] Exemplo 10: Síntese de (3-cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etil-6-fluoro- imidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (19)

[084] Uma mistura do composto 17 (41 mg, 0,129 mmols), acetato de sódio (12 mg, 0,146 mmols) e iodo (36 mg, 0,142 mmols) em metanol (10 mL) foi agitada sob refluxo por 1 h, e então uma solução de hidróxido de sódio (5 mg, 0,125 mmols) em água (3 mL) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada sob refluxo por 1 h, resfriada à temperatura ambiente e bissulfato de sódio aquoso saturado adicionado (10 mL). Os precipitados formados foram coletados por filtração, lavados com água e secados. O produto bruto foi cristalizado com éter de petróleo/acetato de etila para conseguir (3- cloro-4-hidróxi-5- iodofenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a] piridina-3-il)metanona (19). 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,13 (s, 1H), 7,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,83-7,80 (m, 1H), 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69-7,65 (m, 1H), 2,46 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 444,9 [M+H]+.

[085] Exemplo 11: Síntese de 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi-3- metilbenzonitrila (24)

[086] Etapa A: Uma mistura de 1-(4-hidróxi-3-metilfenil)etanona (4,95 g, 33,0 mmols), acetato de sódio (2,98 g, 36,3 mmols) e iodo (9,21 g, 36,3 mmols) em metanol (80 mL) foi agitada sob refluxo por 1 h, e então uma solução de hidróxido de sódio (1,19 g, 29,7 mmols) em água (55 mL) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada sob refluxo por 1 h e evaporada a cerca de metade do volume sob vácuo. Os precipitados formados foram coletados por filtração. A torta foi dissolvida em acetato de etila (200 mL), e a solução foi lavada com bissulfato de sódio aquoso saturado (40 mL) e salmoura (40 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para dar 1-(4-hidróxi-3-iodo-5-metilfenil)etanona (21) (7,91 g) com 86,8% de rendimento.

[087] Etapa B: Uma mistura do composto 21 (3,90 g, 14,1 mmols) e cianeto cuproso (1,90 g, 21,2 mmols) em DMF (25 mL) foi agitada a 130°C durante a noite. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada através de uma almofada de celite. Ao filtrado, foi adicionada água (100 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (50 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mLx2) e salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/ éter de petróleo = 1:15-1:3) para proporcionar 5-acetil-2-hidróxi-3- metil-benzonitrila (22) (2,07 g) com 83,8% de rendimento.

[088] Etapa C: Para uma solução de composto 22 (500 mg, 2,85 mmols) em metanol (10 mL) foi adicionado bromo (548 mg, 3,43 mmols) em metanol (4 mL), e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 6 h. Após adição de água (50 mL), a mistura resultante foi extraída com acetato de etila (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo para proporcionar 5-(2-bromoacetil)-2-hidróxi-3- metilbenzonitrila (23) (800 mg). O produto bruto 23 foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.

[089] Etapa D: Uma mistura do composto bruto 23 (800 mg) e composto 1 (600 mg, 3,99 mmols) em tolueno (15 mL) foi agitada sob refluxo durante a noite e resfriada à temperatura ambiente. À mistura de reação, foram adicionados metanol (15 mL) e carbonato de potássio (1,10 g, 8,0 mmols). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos, diluída com água (40 mL) e extraída com acetato de etila (50 mLx3). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:30-1:1) para proporcionar 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi-3-metilbenzonitrila (24). 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10,99 (s, 1H), 9,15 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,74-7,72 (m, 2H), 7,60-7,55 (m, 1H), 7,19-7,14 (m, 1H), 2,43 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 306,1 [M+H]+.

[090] Exemplo 12: Síntese de (2-tilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)(4-hidróxi-3-(trifluoro- metil)fenil)metanona (28) e (3-bromo-4-hidróxi-5-(trifluorometil)fenil)-(2- etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)metanona (29)

[091] Etapa A: Uma mistura de 1-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)etanona (1,0 g, 4,85 mmols) e metóxido de sódio (288 mg, 5,33 mmols) em DMF (5 mL) foi agitada por 2 h em um banho de água gelada e então à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) and extraída com acetato de etila (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:40) para conseguir 1-(4-metóxi-3-(trifluorometil)fenil)etanona (25) (950 mg) com 89,8% de rendimento.

[092] Etapas B e C foram seguidas pelos métodos nas etapas C e D do exemplo 11.

[093] Etapa D: Hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 69 mg, 1,73 mmols) foi adicionado em porções a uma solução de etanotiol (107 mg, 1,73 mmols) em DMF (5 mL), e a mistura foi agitada por cerca de 5 minutos à temperatura ambiente. Uma solução de composto 27 (200 mg, 0,574 mmols) em DMF (3 mL) foi adicionada na mistura acima. A mistura de reação foi agitada a 120°C por 2 h, resfriada à temperatura ambiente e diluída com água (40 mL). A mistura foi ajustada ao pH 8 a 9 com ácido clorídrico a 2 M e extraída com acetato de etila (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL) e salmoura (20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:1) para dar (2-etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)-(4-hidróxi-3- (trifluorometil)fenil)metanona (28) (120 mg) com 62,6% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 11,55 (s, 1H), 9,17 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,63-7,57 (m, 1H), 7,21-7,16 (m, 1H), 2,43 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 335,1 [M+H]+.

[094] Etapa E: Para uma mistura de composto 28 (96 mg, 0,287 mmols) e acetato de sódio (59 mg, 0,719 mmols) em ácido acético (5 mL) foi adicionado bromo (55 mg, 0,719 mmols) em ácido acético (1 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 h, extinta pela adição de bissulfato de sódio aquoso saturado, concentrada sob vácuo e então diluída com água (20 mL). A mistura foi ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado, extraída com acetato de etila (40 mLx2), secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila /éter de petróleo = 1:5-3:2) para proporcionar (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2- etilimidazo[1,2-a]piridina-3-il)-metanona (29)(85 mg) com 71,9% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,19 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,66-7,62 (m, 1H), 7,24-7,21 (m, 1H), 2,41 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 413,0 [M+H]+.

[095] Exemplo 13: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metil-imidazo[1,2- a]piridina-3-il)metanona (30)

[096] O Composto 30 foi preparado de acordo com o procedimento de exemplo 1 pelo uso de 5-metil-piridin-2-amina como um reagente alternativo na etapa A. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,04 (s, 1H), 7,87 (s, 2H), 7,69 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,42-2,38 (m, 5H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 436,9 [M-H]-.

[097] Exemplo 14: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metóxiimidazo[1,2-]piridina-3-il)metanona (33)

[098] Etapa A: Para uma mistura de 2-bromo-1-(4-hidroxifenil)etanona (639 mg, 2,98 mmols) e acetato de sódio (740 mg, 9,02 mmols) em ácido acético (10 mL) foi adicionado bromo (960 mg, 6,0 mmols) em ácido acético (5 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 10 minutos. Após adição de água (40 mL), os precipitados formados foram coletados por filtração, lavados com água e secados para dar 2-bromo-1-(3,5-dibromo- 4-hidroxifenil)etanona (31) (890 mg) com 80,1% de rendimento.

[099] Etapa B: Para uma mistura de 5-metoxipiridin-2-amina (1,0 g, 8,05 mmols) e trietilamina (981 mg, 9,69 mmols) em diclorometano (8 mL) foi adicionado cloreto de propionila (777 mg, 8,4 mmols) gota a gota em um banho de água gelada. Após adição, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. À mistura de reação, foi adicionada água (40 mL), e a mistura foi extraída com diclorometano (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo=1:30-1:8). O produto foi recristalizado com éter de petróleo para proporcionar N-(5-metoxipiridina-2-il)-propionamida (32) (349 mg) com 21,4% de rendimento.

[100] Etapa C: Uma mistura do composto 31 (790 mg, 2,12 mmols) e composto 32 (340 mg, 1,89 mmols) em tolueno (20 mL) foi agitada sob refluxo por 48 h e resfriada à temperatura ambiente. À mistura, foi adicionada água (50 mL), e a mistura resultante foi ajustada ao pH 8 a 9 com carbonato de potássio saturado e extraída com diclorometano (50 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:10-2:5) para proporcionar (3,5-dibromo-4-hidroxifenil) (2-etil-6-metoxiimidazo [1,2-a]piridina-3- il)metanona (33) (87 mg) com 10,1% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8,71 (s, 1H), 7,79(s, 2H), 7,64 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J =10,0 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 452,9 [M-H]-.

[101] Exemplo 15: Síntese de 3-bromo-5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-carbonil)-2- hidroxibenzonitrila (38)

[102] Etapa A: 1-(4-Metoxifenil)etanona (44 g, 293 mmols) foi adicionada dentro de uma mistura de bis(tetrafluoroborato) de 1-clorometil-4-fluoro-1,4- diazoniabiciclo [2.2.2]ocatano (104 g, 294 mmols) e iodo (38,6 g, 152 mmols) em acetonitrila (440 mL) em um banho de água gelada. A mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. À mistura, foi adicionada água (1350 mL). Os precipitados formados foram coletados por filtração, lavados com água e secados para dar 1-(3-iodo-4-metoxifenil)etanona (34) (70 g) com 86,5% de rendimento.

[103] Etapa B: Uma mistura do composto 34 (70,0 g, 254 mmols) e cianeto cuproso (34,0 g, 380 mmols) em DMF (400 mL) foi agitada a 130°C durante a noite. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada através de uma almofada de celite. Ao filtrado foi adicionada água (1600 mL), e a mistura foi extraída com acetato de etila (800 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (40 mLx2) e salmoura (400 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo para dar 5-acetil-2-metoxibenzonitrila (35) (50,0 g). O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.

[104] Etapa C: A uma solução do composto bruto 35 (45,0 g) em metanol (250 mL) foi adicionado bromo (49,0 g, 307 mmols) em metanol (50 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. À mistura foi adicionada água (900 mL) e o precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e secado para dar 5-(2- bromoacetil)-2-metoxibenzonitrila (36) (41,0 g). O rendimento total das etapas B e C foi de 70,6%.

[105] Etapa D: Uma mistura do composto 36 (41,0 g, 161 mmols) e composto 1 (24,0 g, 161 mmols) em tolueno (600 mL) foi agitada em refluxo por 48 h. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água (400 mL), ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com diclorometano (600 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:30-2:1) para proporcionar 5- (2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-metoxibenzonitrila (37) (25,7 g) com 52,3% de rendimento.

[106] Etapa E: Hidreto de sódio (60% de dispersão em óleo mineral, 4,8 g, 120 mmols) foi adicionado em porções a uma solução de etanotiol (8,4 mL) em THF (30 mL). A mistura de reação foi agitada por cerca de 5 minutos e filtrada. A torta foi adicionada em uma solução do composto 37 (9,0 g, 29,5 mmols) em DMF (25 mL). A mistura resultante foi agitada a 60°C por 2 h, resfriada à temperatura ambiente, e filtrada através de uma almofada de celite. Ao filtrado foi adicionada água (100 mL), e a mistura foi ajustada ao pH 5 a 6 com ácido cítrico aquoso a 2 M. Os precipitados formados foram coletados por filtração, lavados com água e secados. A torta foi cristalizada a partir de acetonitrila para dar 5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-carbonil)- 2-hidroxibenzonitrila (14) (7,2 g) com 83,8% de rendimento.

[107] Etapa F: Para uma solução do composto 14 (7,2 g, 24,7 mmols) em DMF (70 mL) foi adicionada N-bromossuccimida (5,28 g, 29,7 mmols) em porções. Após adição, a mistura de reação foi agitada por mais 1 h e diluída com água (210 mL). Os precipitados foram coletados por filtração, lavados com água e secados. A torta foi cristalizada a partir de acetonitrila para dar 3-bromo-5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3- carbonil)-2-hidroxibenzonitrila (38) (7,0 g) com 76,8% de rendimento. 1H NMR (DMSO- d6, 300 MHz) δ 9,01 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,65-7,59 (m, 1H), 7,22-7,17 (m, 1H), 2,58-2,50 (m, 2H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 368,0 [M-H]-.

[108] Exemplo 16: Síntese de 5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-carbonil)-2-hidróxi-3- iodobenzonitrila (39)

[109] Usar o composto 14 como um material de partida, o composto 39 foi preparado de acordo com o procedimento do exemplo 10. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,04 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,66-7,63 (m, 1H), 7,23-7,21 (m, 1H), 2,56-2,50 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 416,0 [M-H]-.

[110] Exemplo 17: Síntese de 5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-carbonil)-3-fluoro-2- hidroxibenzonitrila (40)

[111] O Composto 40 foi preparado de acordo com os procedimentos das etapas A, B e C no exemplo 11 e etapa C no exemplo 14 pelo uso de 1-(3-fluoro-4- hidroxifenil)etanona como um reagente alternativo. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,18 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,83-7,75 (m, 3H), 7,64-7,59 (m, 1H), 7,23-7,18 (m, 1H), 2,46-2,41 (m, 2H), 1,15 (t, J = 7,2 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 310,1 [M+H]+.

[112] Exemplo 18: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-propylimidazo [1,2-a]- piridina-3-il)metanona (41)

[113] O Composto 41 foi preparado de acordo com o procedimento do exemplo 1 pelo uso de cloreto de butirila na etapa A. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 10,81 (s, 1H), 9,18 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,86 (s, 2H), 7,73 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,61-7,58 (m, 1H), 7,19-7,17 (m, 1H), 2,38 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,68-1,63 (m, 2H), 0,76 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 436,9 [M-H]-.

[114] Exemplo 19: Síntese de (2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-il)(2-etilsulfanil-4- hidroxifenil)metanona (44)

[115] O Composto 44 foi preparado de acordo com os procedimentos das etapas B, C e D no exemplo 12 pelo uso de 1-(2-fluoro-4-metoxifenil)etanona como um reagente alternativo. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 10,08 (s, 1H), 9,42 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,63-7,59 (m, 1H), 7,27-7,20 (m, 2H), 6,88 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 2,88 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,26 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 325,1 [M-H]-.

[116] Exemplo 20: Síntese de (3-bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo [1,2-a]- piridin-3-il)metanona (45)

[117] Usar o composto 8 como um material de partida, o composto 45 foi preparado de acordo com o procedimento de etapa D no exemplo 9. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,19 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,76-7,74 (m, 2H), 7,61-7,58 (m, 1H), 7,20-7,17 (m, 1H), 2,43 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H), MS (EI, m/z): 379,0 [M-H]-.

[118] Exemplo 21: Síntese de (3-bromo-5-fluoro-4-hidroxifenil)(2-etil-6- fluoroimidazo- [1,2-a]piridin-3-il)metanona (48)

[119] Etapa A: Para uma solução de 1-(3-fluoro-4-hidroxifenil)etanona (806 mg, 5,23 mmols) em DMF (10 mL) foi adicionada N-bromossuccimida (977 mg, 5,49 mmols) em porções. Após adição, a mistura de reação foi agitada por mais 1 h. Água (50 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mLx3) e salmoura (20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi cristalizado a partir de éter de petróleo/acetato de etila para dar 1-(3-bromo-5-fluoro-4-hidróxi-fenil)etanona (46) (1,0 g) com 82,0% de rendimento.

[120] Etapa B: Para uma solução de composto 46 (1,0 g, 4,29 mmols) em metanol (20 mL) foi adicionado bromo (824 mg, 5,16 mmols) em metanol (5 mL), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, extinta com água (60 mL), e extraída com acetato de etila (60 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo =1:5) para proporcionar 2-bromo-1-(3-bromo-5- fluoro-4-hidroxifenil)-etanona (47) (940 mg) com 70,2% de rendimento.

[121] Etapa C: Uma mistura do composto 15 (210 mg, 1,25 mmols) e composto 47 (300 mg, 0,962 mmols) em 1-metil-2-pirrolidinona (10 mL) foi agitada a 150° C durante a noite. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e água (50 mL) foi adicionada. A mistura foi ajustada ao pH 7 a 8 com ácido cítrico aquoso a 2 M e extraída com diclorometano (50 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/ éter de petróleo = 1:25-1:5) para proporcionar (3-bromo-5-fluoro-4-hidroxifenil)(2-etil-6- fluoroimidazo [1,2-a]-piridin-3-il)metanona (48). 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 9,24-9,22 (m, 1H), 7,88-7,85 (m, 1H), 7,75-7,71 (m, 2H), 7,63-7,60 (m, 1H), 2,47 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 379,0 [M-H]-.

[122] Exemplo 22: Síntese de (2-etil-6-fluoroimidazo [1,2-a]piridin-3-il)(3-fluoro-4- hidróxi-5-iodofenil)metanona (51)

[123] Usando o composto 15 como o material de partida, o composto 51 foi preparado de acordo com os procedimentos das etapas B e C no exemplo 9, seguido pelo procedimento no exemplo 10. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 9,19-9,17 (m, 1H), 7,86-7,81 (m, 2H), 7,73-7,66 (m, 1H), 7,60-7,56 (m, 1H), 2,49-2,41 (m, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 427,1 [M-H]-.

[124] Exemplo 23: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-hidroxi-imidazo- [1,2-a]piridin-3-il)metanona (52)

[125] Usando o composto 33 como o material de partida, o composto 52 foi preparado de acordo com o procedimento de etapa C no exemplo 1. 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 7,84 (s, 2H), 7,63 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,317,29 (m, 1H), 2,37 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,13 (t, J = 7,6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 441,0 [M+H]+.

[126] Exemplo 24: Síntese de (6-bromo-2-etil-7-metilimidazo [1,2-a]piridin-3-il)-(3,5- dibromo-4-hidroxifenil)metanona (56)

[127] Etapa A: Hidreto de sódio (60% de dispersão em óleo mineral, 1,68 g, 42 mmols) foi adicionado em porções para uma solução de 1-(4-metoxifenil)etanona (3,0 g, 20,0 mmols) em DMF (15 mL) a -10 a 0°C. A mistura foi agitada a essa temperatura por mais 40 minutos, e propionato de etila foi adicionado (2,04 g, 20 mmols). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, diluída com água (60 mL), e extraída com acetato de etila (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mLx2), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:30) para conseguir 1-(4- metoxifenil)pentano-1,3-diona (53) (3,16 g) com 76,6% de rendimento.

[128] Etapa B: Para uma solução de 5-bromo-4-metilpiridin-2-amina (187 mg, 1,0 mmols) e composto 53 (247 mg, 1,2 mmols) em THF (6 mL) foi adicionado (diacetoxi- iodo)benzeno (386 mg, 1,2 mmols) e trifluoreto éter de boro (28 mg, 0,2 mmols) em um banho de água gelada. Após adição, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e diluída com água (30 mL). A mistura foi ajustada ao pH 7 a 8 com bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mL), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:30) para conseguir (6-bromo-2-etil-7-metilimidazo- [1,2-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (54) (120 mg) com 32,2% de rendimento.

[129] Os métodos usados nas etapas C e D do exemplo 1 foram seguidos nas etapas C e D para proporcionar (6-bromo-2-etil-7-metilimidazo [1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo- 4-hidroxifenil) metanona (56). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,35 (s, 1H), 7,86 (s, 2H), 7,80 (s, 1H), 2,41 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 518,9 [M+H]+.

[130] Exemplo 25: Síntese de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-7-(trifluorometil)- imidazo [1,2-a]piridin-3-il)metanona (57)

[131] Usando 5-(trifluorometil)piridin-2-amina como o material de partida, o composto 57 foi preparado de acordo com o procedimento de etapa B no exemplo 25 e os procedimentos das etapas C e D no exemplo 1. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,23 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,93 (s, 2H), 7,45 (dd, J = 2,0, 7,2 Hz, 1H), 2,50-2,48 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 492,9 [M+H]+.

[132] Exemplo 26: Síntese de 3-(3,5-dibromo-4-hidroxibenzoil)-2-etilimidazo [1,2-a]- piridina-6-carbonitrila (58)

[133] Usando 6-aminonicotinonitrila como o material de partida, o composto 58 foi preparado de acordo com o procedimento de etapa B no exemplo 25 e os procedimentos das etapas C e D no exemplo 1. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,56-9,55 (m, 1H), 7,92-7,89 (m, 3H), 7,86-7,83 (m, 1H), 2,48-2,46 (m, 2H), 1,22-1,17 (m, 3H). MS (EI, m/z): 450,0 [M+H]+.

[134] Exemplo 27: Síntese de (2-deutério-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo [1,2-a]-piridina- 3-il)metanona (62) e (2-deutério-3,5-dibromo-4-hidroxifenil)-(2-etilimidazo [1,2- a]piridina-3-il)metanona (63)

[135] Etapa A: Para uma mistura de 1-(2-bromo-4-metoxifenil)etanona (1,28 g, 5,59 mmols) e deuteróxido (0,5 mL) em DMF (10 mL) foi adicionado paládio em carbono ativado (5%, 100 mg). Depois de trocar com o gás deutério, a mistura de reação foi agitada sob gás deutério a partir de um balão de gás deutério durante a noite e filtrada através de uma almofada de celite. Ao filtrado foi adicionada água (40 mL), e a mistura extraída com acetato de etila (30 mLx2). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mLx4), secada sobre sulfato de sódio anidro, concentrada sob vácuo para dar 1-(2-deutério-4-metoxifenil)etanona (59)(910 mg) com 100% de rendimento.

[136] O método usado na etapa C do exemplo 15 foi seguido na etapa B para proporcionar o composto 60.

[137] Os métodos descritos nas etapas B, C e D no exemplo 1 foram seguidos nas etapas C, D e E para dar (2-deutério-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo [1,2-a]piridina- 3- il)metanona (62) e (2-deutério-3,5-dibromo-4-hidroxifenil) (2-etilimidazo [1,2- a]piridina-3-il)metanona (63). Composto 62 : 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,20 (s, 1H), 9,16 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,74 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,61-7,56 (m, 2H), 7,19-7,15 (m, 1H), 7,11-7,09 (m, 1H), 2,46 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,2 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 268,2 [M+H]+. Composto 63: 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,19 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,63-7,59 (m, 1H), 7,21-7,18 (m, 1H), 2,44 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 426,0 [M+H]+.

[138] Exemplo 28: Síntese de (6-deutério-2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-il)(3,5- dibromo-4-hidroxifenil)metanona (69)

[139] Etapa A: Uma mistura de 5-bromopiridin-2-amina (5,19 g, 30,0 mmols), etildi- isopropilamina (8,58 g, 66,4 mmols), 4-dimetilaminopiridina (366 mg, 3,0 mmols) e dicarbonato de di-terc-butila (14,4 g, 66,0 mmols) em diclorometano (30 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:20-1:3) para conseguir (2-(4-bromo- 2-piridinil)-1,3-bis(1,1-dimetiletil))éster de ácido imidodicarbônico (64) (5,38 g) com 48,0% de rendimento.

[140] Etapa B: Para uma mistura do composto 64 (5,59 g, 15,0 mmols), DMF (25 mL) e deuteróxido (0,5 mL), foi adicionado paládio em carbono ativado (5%, 200 mg). Depois de trocar com gás deutério, a mistura foi agitada sob gás deutério a partir de um balão por 48 h. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite. Ao filtrado foi adicionada água (100 mL), e a mistura extraída com acetato de etila (50 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mLx3), secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:40-1:1) para conseguir (2-(4-deutério-2-piridinil)-1,3-bis(1,1- dimetiletil))éster de ácido imidodicarbônico (65) (2,70 g) com 60,9% de rendimento.

[141] Etapa C: Uma mistura do composto 65 (2,69 g, 9,11 mmols), ácido trifluoroacético (4 mL) e água (0,5 mL) em diclorometano (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. À mistura de reação foi adicionada água (30 mL), e a mistura foi ajustada ao pH 8 a 9 com hidróxido de sódio aquoso a 2 M e extraída com acetato de etila (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (eluído com acetato de etila/éter de petróleo = 1:10-1:1) para conseguir 2-amino-4-deutério-piridina (66) (676 mg) com 78,0% de rendimento.

[142] Os métodos descritos nas etapas B, C e D no exemplo 25 foram seguidos nas etapas D, E e F para dar (6-deutério-2-etilimidazo [1,2-a]piridina-3-il)(3,5-dibromo-4- hidroxifenil)metanona (69). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,20-9,19 (m, 1H), 7,88 (s, 2H), 7,77-7,75 (m, 1H), 7,64-7,59 (m, 1H), 2,43 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 426,0 [M+H]+.

[143] Exemplo 29: Síntese de (2-ciclopropilimidazo [1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4- hidroxifenil)metanona (73)

[144] Usando ciclopropanocarboxilato de etila como o material de partida, o composto 71 foi preparado de acordo com os procedimentos das etapas A e B no exemplo 24. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,24-9,23 (m, 1H), 7,81-7,79 (m, 2H), 7,68-7,65 (m, 1H), 7,58-7,56 (m, 1H), 7,16-7,09 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 1,56-1,54 (m, 1H), 1,08-1,06 (m, 2H), 0,88-0,85 (m, 2H).

[145] O método usado na etapa E no exemplo 15 foi seguido na etapa C para dar (2- ciclopropil-imidazo [1,2-a]piridin-3-il)(4-hidroxifenil)metanona (72). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,17-9,16 (m, 1H), 7,72-7,70 (m, 2H), 7,66-7,64 (m, 1H), 7,55-7,51 (m, 1H), 7,14-7,10 (m, 1H), 6,91-6,89 (m, 2H), 1,62-1,60 (m, 1H), 1,07-1,05 (m, 2H), 0,88-0,85 (m, 2H).

[146] O método usado na etapa F do exemplo 15 foi seguido na etapa D para dar (2- ciclopropilimidazo- [1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)metanona (73). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,25-9,23 (m, 1H), 7,97 (s, 2H), 7,70-7,68 (m, 1H), 7,61- 7,57 (m, 1H), 7,20-7,16 (m, 1H), 1,58-1,55 (m, 1H), 1,13-1,10 (m, 2H), 0,94-0,89 (m, 2H). MS (EI, m/z): 437,0 [M+H]+.

[147] Exemplo 30: Síntese de cloreto de hidrogênio de 3-bromo-5-(2-etilimidazo [1,2- a]piridina-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila (74)

[148] Uma mistura do composto 38 (970 mg, 2,62 mmols) em acetato de etila (200 mL) foi agitada sob refluxo por 20 minutos para dar uma solução clara, então resfriada à temperatura ambiente, borbulhada com cloreto de hidrogênio por cerca de 5 minutos. Os precipitados formados foram coletados por filtração para dar cloreto de hidrogênio de 3-bromo-5-(2-etilimidazo [1,2-a]-piridina-3-carbonil)-2- hidroxibenzonitrila (74) (794 mg) com 74,5% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,12 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,99-7,91 (m, 2H), 7,50-7,45 (m, 1H), 2,57 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,23 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 368,0 [M-H]-.

[149] Exemplo 31: Síntese de cloreto de hidrogênio de 5-(2-etilimidazo [1,2-a]piridina- 3-carbonil)-2-hidróxi-3-iodobenzonitrila (75)

[150] Usando o composto 39 como o material de partida, o composto 75 foi preparado após o mesmo procedimento como o exemplo 30. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,11 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,41 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,02-7,95 (m, 2H), 7,54-7,49 (m, 1H), 2,59 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 416,0 [M-H]-.

[151] Exemplo 32: Ensaio de inibição de transporte de ácido úrico para compostos na linhagem de célula de transfecção HEK293-hURAT1

MATERIAIS

[152] Benzbromarona foi comprada de Sigma-Aldrich Co. LLC. O plasmídeo pCMV6- hURAT1 foi comprador de Origene Technologies, Inc. G418 foi comprador de Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A linhagem de célula HEK293 foi comparada de Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences da Academia Chinesa de Ciências. 14C-Ácido úrico foi comprador de American Radiolabeled Chemicals, Inc. Gluconato de sódio, gluconato de potássio, gluconato de cálcio, KH2PO4, MgSO4, glicose e HEPES foram comprados de Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. Meio de cultura DMEM e soro bovino fetal foram comprados de Thermo Fisher Scientific Inc.

2. MÉTODOS EXPERIMENTAIS

[153] 2.1 Construção de uma linhagem de célula estável HEK293 com alta expressão de hURAT1: O plasmídeo pCMV6-hURAT1 foi transfectado em células HEK293, então a cepa estável foi obtida pela varredura de resistência de G418 (concentração final 500 μg/mL), que é a alta expressão de proteína de membrana transportadora hURATl. El pode ser usado para ensaio de inibição in vitro de ácido úrico transportador hURAT1. (Weaver YM, Ehresman DJ, Butenhoff JL, et al. Roles of rat renal organic anion transporters in transporting perfluorinated carboxylates com different chain lengths. Toxicological Sciences, 2009, 113(2):305-314)

[154] 2.2 Em uma placa revestida de 24 poços foram adicionados 200 μL de 0,1 mg/mL de polilisina por poço e a placa foi deixada durante a noite. Polilisina foi removida dos poços. Os poços foram completamente limpos com água asséptica e secada para uso.

[155] 2.3 À placa revestida de 24 poços acima, foram adicionadas células estáveis HEK293-hURAT1 (2x105 células por poço). As células foram cultivadas a 37 °C sob 5% de CO2 por 3 dias.

[156] 2.4 A preparação do tampão HBSS: pesou os seguintes reagentes de acordo com a concentração de gluconato de sódio a 125 mM, gluconato de sódio a 4,8 mM, gluconato de cálcio a 1,3 mM, KH2PO4 a 1,2 mM, MgSO4 a 1,2 mM, glicose a 5,6 mM e HEPES a 25 mM com água desionizada. A solução foi totalmente misturada para dar tampão HBSS (valor de pH: 7,4). O tampão foi armazenado a -20°C.

[157] 2.5 O tampão de HBSS foi aquecido a 37C em um banho-maria. As células lavadas com HBSS duas vezes, adicionaram 160 μL de HBSS e 20 μL de composto de teste por poço. A concentração final do composto de teste por poço é de 500 nM. O poço de controle em branco contém apenas 180 μL de HBSS sem o composto testado. A placa foi colocada à temperatura ambiente por 30 minutos.

[158] 2.6 Para cada poço foram adicionados 20 μL de 14C-Ácido úrico a 50 μM. A placa foi colocada à temperatura ambiente por 20 minutos.

[159] 2.7 A solução em cada poço foi removida e as células em cada poço foram lavadas com tampão de HBSS pré-resfriado. Para cada poço foi adicionado NaOH a 0,2 M para dissolver as células. A solução contendo os fragmentos de célula foi coletada e a quantidade certa de líquido de cintilação foi adicionada. A intensidade do radioisótopo do 14C-Ácido úrico (valor de CPM) foi então detectada pelo uso de analisador de cintilação líquida PerkinElmer MicroBeta Trilux 1450.

[160] 2.8 Todos os testes foram repetidos três vezes e os resultados tiveram a média calculada e o desvio padrão (SD | standard deviation) foi calculado. A fórmula para calcular a taxa inibitória do transporte de ácido úrico para compostos foi mostrada como abaixo: CPM do poço de controle branco - CPM do poço do Taxa inibitória (%) composto de teste x100% CPM do poço do composto branco

RESULTADOS DE TESTE

[161] As taxas inibitórias de transporte de ácido úrico para compostos 4, 5, 9, 11, 12, 18, 19, 29, 30, 33, 38, 39, 41, 45, 51, 52, 56, 69, 74, 75, e benzbromarona a 500 nM foram obtidas de acordo com os procedimentos experimentais acima. Os resultados testados foram listados na tabela 1. Os resultados mostraram que em comparação com a droga de controle benzbromarona, os compostos têm efeito inibitório igual ou melhor de transporte de ácido úrico na linhagem de célula de transfecção HEK293- hURAT1.

[162] Tabela 1. Taxas inibitórias de transporte de ácido úrico para compostos de teste e benzbromarona a 500 nM na linhagem de célula de transfecção HEK293-hURAT1

[163] BBR: benzbromarona.

[164] Exemplo 33: Teste de citotoxicidade dos compostos nas linhagens de célula hepática normais L-02 e WRL-68

[165] Foi relatado que benzbromarona tem uma grave hepatotoxicidade. Portanto, benzbromarona foi usada como uma droga de controle positivo nesse ensaio. A citotoxicidade dos compostos em duas linhagens de célula hepática normais L-02 e WRL-68 foi testada, respectivamente.

Materiais

[166] A linhagem de célula hepática normal humana L-02 foi comprada de Procell Life Science & Technology Co., Ltd. A linhagem de célula hepática normal humana WRL-68 foi dada pela Life Science Institute of Nanjing University. Benzbromarona, Resazurina e azul de Metileno foram comprados de Sigma-Aldrich Co. LLC. Ferricianeto de potássio e ferrocianeto de potássio foram comprados de Aladdin (Shanghai) Biological Technology Co., Ltd. O meio de cultura DMEM, o meio de cultura DMEM livre de vermelho fenol e soro bovino fetal foram comprados de Thermo Fisher Scientific Inc. Penicilina e estreptomicina foram comprados de Beyotime Biotechnology Co., Ltd.

2. Métodos Experimentais

[167] 2.1 As linhagens de célula hepática normais L-02 e WRL-68 foram cultivadas com meio de cultura DMEM (contendo 10% de soro bovino fetal, 100 U/mL de penicilina e 0,1 mg/mL de estreptomicina) em uma incubadora sob 5% de CO2 a 37°C até a densidade de célula ser cerca de 90%, respectivamente.

[168] 2.2 As células foram inoculadas em uma placa de 96 poços em uma população de célula de 1x103/poço e então cultivadas em uma incubadora sob 5% de CO2 a 37°C por 24 h.

[169] 2.3 Os compostos testados e benzbromarona em diferentes gradientes de concentração foram preparados pelo uso de meio de cultura DMEM e adicionados em poços em 100 μL/poço como poços de compostos. O meio de cultura DMEM foi adicionado nos poços a 100 μL/poço sem composto testado como poços de controle negativo. Todas as placas foram colocadas em uma incubadora sob 5% de CO2 a 37°C por 120 h.

[170] 2.4 Resazurina (15 mg/50 mL, 200x), azul de Metileno (25 mg/10 mL, 1000x), Ferricianeto de potássio (0,329 g/100 mL, 100x) e Ferrocianeto de potássio (0,422 g/100 mL, 100x) foram dissolvidos em PBS (0,1 M, pH=7,4) para obter solução 10xAzul Alamar para modo de espera. Essa solução 10xAzul Alamar foi diluída em uma solução 1xAzul Alamar com meio de cultura DMEM livre de vermelho fenol antes do uso.

[171] 2.5 As células foram lavadas com PBS (0,1 M, pH=7,4) duas vezes. A solução Azul Alamar foi adicionada nos poços em 100 μL/poço. 100 μL de solução Azul Alamar foram adicionados nos poços sem células para servir como poço de controle em branco. A placa de 96 poços foi colocada em uma incubadora sob 5% de CO2 a 37°C por 3 h. Cada concentração do composto foi repetida três vezes durante o teste.

[172] 2.6 O valor de fluorescência das células foi detectado em Ex 530/Em 590 nm por ELISA Victor X4 (Perkin Elmer). O valor de fluorescência das células contendo o composto é o F (composto de teste); o valor de fluorescência das células sem composto como controle vazio é o F (controle em branco); o valor de fluorescência das células do grupo de controle negativo é F (controle negativo). O valor médio e o desvio padrão da viabilidade de célula de três concentrações repetidas foram calculados pela seguinte fórmula: _ F(composto de teste) — F(controle branco) F(composto negativo) — F(controle branco)

[173] 2.7 A metade da concentração inibitória (IC50) do composto para as células L-02 e WRL-68 foi obtida da viabilidade da célula pelo software Prism Graph.

3. Resultados De Teste

[174] A metade da concentração inibitória (IC50) dos compostos 4, 5, 9, 18, 33, 38, 39, 45, 51, 52, 56, 69, 74 e 75 contra as linhagens de célula hepática normais humanas L- 02 e WRL-68 é maior que 100 μM. A IC50 de Benzbromarona para L-02 e WRL-68 foi de 40,17 μM e 45,54 μM, respectivamente.

[175] Exemplo 34: Teste de excreção de ácido úrico do composto 74 em camundongos com Hiperuricemia

Materiais

[176] 1.1. Preparação do composto testado 74 e benzbromarona

[177] Para o composto 74 ou benzbromarona foi adicionada certa quantidade de 0,5% de solução CMC-Na e a mistura foi agitada à temperatura ambiente para obter uma suspensão à base da dosagem designada, respectivamente.

[178] 1.2. Animais

[179] Espécies: os camundongos Kingming (Nível Limpo); pesos corporais: 25 a 30 g; idades: 4 a 5 semanas; sexo: masculino. Esses camundongos foram comprados de Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd. Certificado n°: SCXK (HU) 2012-2002. Número de certificado de qualidade do animal: 2015000522173.

Reagentes

[180] Extrato de levedura em pó foi comprado de Beijing Aoxing Biology Co., Ltd. Adenina e potassium oxonao foram comprados de Aladdin (Shanghai) Biological Technology Co., Ltd. CMC-Na foi comprado de Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. O kit de ensaio de ácido úrico (método de ácido fosfotúngstico) foi comprado de Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute.

MÉTODOS EXPERIMENTAIS

[181] 2.1 Preparação de uma suspensão mista de extrato de levedura e adenina

[182] Uma certa quantidade de adenina e extrato de levedura em pó foi pesada e uma certa quantidade de água destilada em dobro foi adicionada. A mistura foi agitada em cerca de 60 °C por 40 minutos para dar uma suspensão, cuja concentração de extrato de levedura é de 0,6 g/mL e a concentração de adenina é de 12 mg/mL.

[183] 2.2 Preparação de suspensão de oxonato de potássio

[184] Uma suspensão de 20 mg/mL de oxonato de potássio foi preparada pela mistura de uma certa quantidade de oxonato de potássio com 0,5% de solução de CMC-Na antes do uso.

[185] 2.3 Estabelecimento de modelo de camundongos com Hiperuricemia e administração de materiais testados

[186] Camundongos Kunming machos foram aleatoriamente divididos em quatro grupos: grupo de controle em branco, grupo modelo, grupo do composto 74 e grupo benzbromarona. Cada grupo tem seis camundongos. Todos os camundongos foram mantidos em jejum de 2 a 3 h antes do uso. O grupo modelo, o grupo de benzbromarona e o grupo do composto 74 receberam oralmente uma suspensão de extrato de levedura e adenina preparada acima para alcançar a dosagem final de 10 g/kg (peso corporal) de extrato de levedura e 200 mg/kg (peso corporal) de adenina, respectivamente. O grupo de controle em branco apenas recebeu o mesmo volume de solução salina normal oralmente. Após 2,5 h, todos os camundongos no grupo do composto 74 e no grupo de benzbromarona receberam 10 mL/kg de suspensão do composto 74 (1,5 mg/mL) e 10 mL/kg de suspensão de benzbromarona (1.5 mg/mL), respectivamente. O grupo de controle em branco e grupo modelo receberam oralmente o mesmo volume de 0,5% de solução de CMC-Na. Todos os animais foram tratados da mesma maneira por sete dias através do uso de métodos de administração descritos acima. No último dia, após administração de uma suspensão de extrato de levedura e adenina para o grupo modelo, grupo do composto 74, e grupo da benzbromarona, todos os camundongos nesses três grupos receberam 12,5 mL/kg de oxonato de potássio (20 mg/mL) por i.p. O controle em branco apenas recebeu o mesmo volume de 0,5% de solução de CMC-Na por i.p. Após 30 minutos, o composto 74 e benzbromarona foram administrados oralmente aos camundongos nas mesmas dosagens conforme acima no grupo do composto 74 e no grupo de benzbromarona, respectivamente. O grupo de controle em branco e grupo modelo receberam oralmente o mesmo volume de 0,5% de solução de CMC-Na.

[187] 2.3 Coleta de amostra e análise

[188] Coleta de amostra de urina: todos os camundongos foram colocados em gaiolas metabólicas com dieta normal individualmente após receber compostos de teste no último dia. A urina de 24 h foi coletada e o volume da urina foi medido. A urina foi centrifugada a 3000 rpm por 20 minutos e o sobrenadante foi coletado.

[189] A detecção da concentração de ácido úrico de amostras de urina de camundongos: concentração de ácido úrico nas amostras foi detectada pelo uso do kit de ensaio de ácido úrico (método do ácido fosfotúngstico) seguido pelos procedimentos descritos na instrução.

RESULTADOS DE TESTE

[190] Os resultados de promoção de excreção de ácido úrico em camundongos com Hiperuricemia foram listados na tabela 2. Tanto o composto 74 quanto benzbromarona significativamente aumentaram a excreção de ácido úrico em camundongos com hiperuricemia. A eficácia do composto 74 na promoção de excreção de ácido úrico foi significativamente melhor que benzbromarona. Comparada com o grupo modelo dos camundongos com hiperuricemia, a excreção de ácido úrico do composto 74 foi aumentada em cerca de 46,77%, enquanto a excreção de ácido úrico de benzbromarona foi aumentada em cerca de 25,35%. Tabela 2. Teste de excreção de ácido úrico do composto 74 e benzbromarona por administração oral em camundongos com hiperuricemia

[191] A mudança de excreção da quantidade de ácido úrico no grupo modelo é estabelecida em 100%. vs. grupo de controle branco, ## significa: P<0,01. vs. grupo modelo, * significa: P<0,05, ** significa: P<0,01. vs. grupo Benzbromarona, ▲ significa: P<0,05.

[192] Exemplo 35: Estudo sobre a toxicidade aguda de dose única do composto 74 em ratos.

Materiais

[193] 1.1. Preparação do composto testado 74 e benzbromarona.

[194] O Composto 74 e benzbromarona foram triturados e certa quantidade de 0,5% de solução de CMC-Na foi adicionada para preparar uma suspensão, respectivamente, antes do uso. Benzbromarona foi comprada de Mianyang Kaixing Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Número do lote é BXML-201506005.

[195] 1.2. Animais

[196] Espécies: ratos SD (Nível SPF); pesos corporais: 120 a 180 g; idades: 5 a 6 semanas. Fonte: comprados de Animal Research Center of Wuhan University; certificado n° SCXK (E) 2014-0004; número de certificado de qualidade do animal: 2015000522173.

2. Métodos experimentais e resultados

[197] No pré-experimento de toxicidade aguda em ratos, a dose mais elevada em 5 g/kg do composto 74 não causou a morte dos ratos. Portanto, a dosagem do composto 74 foi determinada para ser 5 g/kg nesse ensaio. Quando a dose de benzbromarona foi de 0,14 g/kg no pré-experimento, nenhuma morte de ratos foi encontrada. Portanto, a dosagem de benzbromarona foi determinada para ser 0,14 g/kg nesse ensaio.

[198] Os ratos foram aleatoriamente divididos no grupo A1, grupo B1 e grupo de controle em branco. Cada grupo tem 10 ratos com metade macho e metade fêmea. Uma dose única da suspensão do composto 74, suspensão de benzbromarona e 0,5% de solução de CMC-Na a 20 mL/kg foi dada por administração oral para o grupo A1, grupo B1 e grupo de controle em branco, respectivamente, após 6 h de jejum.

[199] A dosagem e o índice de mortalidade foram mostrados na tabela 3. Nenhuma toxicidade imediata foi encontrada em cada grupo e toxicidade atrasada não foi encontrada no período de observação de 24 h a 14 dias. Todos os ratos sobreviveram e estavam em boa condição com ganho de peso. As mudanças de peso foram listadas na tabela 4. A dose máxima tolerada do composto 74 e benzbromarona no teste de toxicidade aguda foi de 5 g/kg e 0.14 g/kg, respectivamente. Tabela 3. A dosagem e índice de mortalidade de ratos SD em cada grupo

[200] Cada grupo tem 10 ratos. Tabela 4. Mudanças de peso de ratos SD em cada grupo

“Taxa de ganho de peso” significa o peso dos ratos no dia 14 comparado ao dia 0, e “+” significa que o peso foi aumentado.

[201] Exemplo 36: Estudo sobre Farmacocinética do composto 74 após administração oral e intravenosa em ratos SD

MATERIAIS

[202] 1.1. Preparação de solução de composto testado 74.

[203] Preparação da formulação de dose para PO: Pese a quantidade desejada do composto 74. Adicione aproximadamente 70% de 0,5% de CMC-Na com agitação, vórtice e sonicação para misturar bem até visualizar bem a suspensão. Então adicione o restante do veículo ao volume total do alvo e misture com vórtice.

[204] Preparação da formulação de dose para IV: Pese a quantidade desejada do composto 74. Adicione DMSO apropriado com sonicação até dissolver, então adicione solução de água de HP-β-Ciclodextrina apropriada (20%, p/v) com vórtice para misturar bem.

[205] 1.2. Animais

[206] Espécies: ratos SD (Nível SPF); sexo: masculino; fonte: Sino-British SIPPR/BK Lab Animal Ltd., Shanghai.

2. Métodos

[207] 2.1 Dose e administração

[208] Os animais que foram administrados oralmente foram mantidos em jejum durante a noite (10 a 14 horas) antes da administração oral. O fornecimento de alimento aos animais administrados oralmente foi retomado 4 h após a dose. A informação de administração de dose é apresentada na tabela 5. Tabela 5. A dosagem do composto para ratos SD

[209] 2.2 Coleta de amostra e bioanálise.

[210] Amostras de sangue (aproximadamente 250 μL/amostra) foram coletadas através da veia jugular na pré-dose e pós-dose (5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, e 24 h). As amostras de sangue foram colocadas em tubos contendo heparina de sódio e condições centrifugadas a 8000 rpm por 6 minutos de 2 a 8 °C para separar o plasma das amostras. A amostra do plasma (50 μL) foi transferida para o tubo, então uma solução de 250 μL de IS (200 ng/mL de Tolbutamida) foi adicionada a ela. Após vórtice por 1 minuto e centrifugação por 5 minutos a 15000 rpm, 200 μL de alíquotas de sobrenadante foram transferidos para placa de 96 poços para análise de LC-MS/MS. A curva de calibração do composto 74 estava variando de 1 a 1000 ng/mL. A LLOQ é de 1 ng/mL para o plasma.

[211] 2.3 Análise farmacocinética

[212] Um módulo não compartimentado de WinNonlin® Professional 5.2 foi usado para calcular parâmetros. A biodisponibilidade foi calculada como F% = (Dose(IV) x AUC(o-t)(Po)) / (Dose(po)X AUC (0—t)(lv)) x 100%.

Resultados

[213] Os parâmetros farmacocinéticos dos ratos SD com composto 74 obtidos dos métodos acima são mostrados na tabela 6. O Composto 74 dessa invenção tem bons parâmetros farmacocinéticos e alta biodisponibilidade em ratos SD. Tabela 6. Parâmetros farmacocinéticos do composto 74 em ratos SD após administração oral e administração intravenosa

*: Obtid o de AUC(0-t)

Claims

1) “COMPOSTOS USADOS PARA A PREVENÇÃO OU APLICAÇÃO TERAPÊUTICA DE HIPERURICEMIA OU GOTA” composto da Fórmula (I)

ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R1 e R2 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, deutério, halogênio, ciano, hidroxila, alquila C1-5, alquila C1-5 substituída, C1-3 alcóxi, alcóxi C1-3 substituído, alquiltio C1-3 ou alquiltio C1-3 substituído em um ou mais; R3 ser selecionado do grupo substituído ou não substituído consistindo em alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4 e seus substituintes serem selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, alquila C1-2 ou cicloalquila C3-4; R4 e R5 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, ciano, alquenila C2-3, alquinila C2-3, alquila C1-3, alquila C1-3 substituída, alcóxi C1-3, ou alcóxi C1-3 substituído em um ou mais, alquiltio C1-3, ou alquiltio substituído C1-3 em um ou mais; em que os substituintes em R1, R2, R4, e R5 são independentemente selecionados dentre deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

2) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 1 da Formula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R1 e R2 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, deutério, flúor, cloro, bromo, ciano, hidroxila, alquila C1-3, alquila C1-3 substituída, alcóxi C1-3, ou alcóxi substituído C1-3 em um ou mais; em que os substituintes são independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, alquila C1-3, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

3) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R1 e R2 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, deutério, flúor, cloro, bromo, CN, alquila C1-3, alquila C1-3 halogenada ou alcóxi C1-3 em um ou mais.

4) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R3 ser selecionado do grupo substituído ou não substituído consistindo em alquila C1-3 e cicloalquila C3-4; em que os substituintes são independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, alquila C1-2 ou cicloalquila C3-4.

5) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R4 e R5 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, ciano, etileno, acetileno, alquila C1-2, alquila C1-2 substituída, alcóxi,C1-2, alcóxi C1-2 substituído, alquiltio C1-2, ou alquiltio substituído C1-2 em um ou mais; em que os substituintes são independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, alquila C1-2, cicloalquila C3-4 ou alcóxi C1-3.

6) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, caracterizado por: R4 e R5 serem independentemente selecionados do grupo consistindo em deutério, halogênio, ciano, alquila C1-2, alquila C1-2 halogenada, alcóxi C1-2 ou alquiltio C1-2 em um ou mais.

7) “COMPOSTO” de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo selecionado do grupo caracterizado por: (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-hidróxi-3,5-di-iodofenil)metanona; (3-Cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; 3-Cloro-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila; (3-Bromo-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-hidróxi-3-iodo-5-metilfenil)metanona; (3-Bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Cloro-4-hidróxi-5-iodofenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidróxi-3-metillbenzonitrila; (3-Bromo-4-hidróxi-5-(trifluorometil)fenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-piridin-3-il)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; 3-Bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidróxi-3-iodobenzonitrila; 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-3-flúor-2-hidroxibenzonitrila; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-propilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Bromo-5-cloro-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (3-Bromo-5-fluor-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (2-Etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3-fluoro-4-hidróxi-5-iodofenil)metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-6-hidroxi-imidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (6-Bromo-2-etil-7-metilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)- metanona; (3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridin-3-il)- metanona; 3-(3,5-Dibromo-4-hidroxifenil)-2-etilimidazo[1,2-a]piridina-6-carbonitrila; (2-Deutério-3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona; (6-Deutério-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)metanona; (2-Ciclopropilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)metanona; 3-bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrila de Cloreto de hidrogênio; e 5-(2-Etilimidazo[1,2-a]piridin-3-carbonil)-2-hidróxi-3-iodobenzonitrila de cloreto de hidrogênio.

8) “COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA”, compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7 caracterizado por seu sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo ou ingrediente ativo principal e um transportador farmaceuticamente aceitável.

9) “COMPOSTO” de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7 caracterizado por seu sal farmaceuticamente aceitável na fabricação de um medicamento para aumentar a excreção do ácido úrico.

10) “COMPOSTO” de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7 caracterizado por seu sal farmaceuticamente aceitável na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir hiperuricemia, nefrose ou gota.