BR112018002582B1 - Composição microbiana - Google Patents
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Abstract
COMPOSIÇÃO MICROBIANA. A invenção se refere a uma composição microbiana que compreende, como um ingrediente ativo, pelo menos um microrganismo probiótico selecionado a partir do grupo de Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, Streptococcus bovis e Butyrivibrio fibrisolvens, junto com adjuvantes e um veículo aceitável. A composição da invenção é estável e eficaz na redução de ocorrências de diarreia em bezerros e também aumenta significativamente o peso corporal do mesmo.
Description
[001] A presente invenção pertence à área farmacêutica, particularmente ao campo das composições medicinais de uso veterinário. A invenção refere-se a uma composição microbiana que compreende microrganismos probióticos para reduzir a diarreia e incrementar a vitalidade de bovinos neonatos.
[002] A FAO (Organização das Nações Unidas para a Agricultura e a Alimentação), define os probióticos como microrganismos vivos que ao serem administrados em doses adequadas produzem efeitos benéficos para a saúde do ente receptor [1]. Um produto probiótico é composto de microrganismos que sobrevivem e podem ser implantados em diferentes órgãos do trato digestivo como o estômago, o intestino delgado ou o cólon, com o objetivo de aperfeiçoar o funcionamento da flora intestinal do hospedeiro, ajudando a degradar completamente os alimentos para a sua posterior absorção [2].
[003] Adicionalmente, a presença de probióticos na flora intestinal pode induzir a que algumas proteínas sofram mudanças na conformação e com isso, ativar mecanismos bioquímicos intracelulares que favorecem a produção de mediadores de inflamação, promovendo a diferenciação celular ou apoptose celular e ativar a resposta imune frente a qualquer possível infeção [3].
[004] Os mamíferos ruminantes têm uma morfologia e uma fisiologia digestiva muito particular. A capacidade dos ruminantes para aproveitar os carboidratos fibrosos da dieta é devida ao rúmen, ao retículo e ao omaso, que são os órgãos que precedem o abomaso [4]. O rúmen é uma câmara de fermentação com ambiente anaeróbico e pH variável que permite uma retenção alta de partículas longas de forragem e estimula a ruminação e o metabolismo corporal, mantendo um ambiente apropriado para o crescimento e reprodução de microrganismos.
[005] Os microrganismos ruminais são favorecidos pela ausência de oxigênio, produto da hidrólise de ureia, processo que requer de um consumo de oxigênio por parte das bactérias aderidas na parede. Esses microrganismos têm a capacidade para digerir polissacarídeos complexos (por exemplo, celulose, hemicelulose, pectina) para produzir carboidratos e também aproveitam o nitrogênio não proteico para a síntese de aminoácidos e proteínas [5].
[006] A alimentação do gado à base de pastos, faz com que as bactérias presentes no rúmen sejam do tipo fibrolítico tais como Butyrivibrio fibrisolvens, Ruminococcus flavefaciens e Fibrobacter succinogenes [5]. Em contraste, se o gado é alimentado com uma alta porcentagem de concentrados, o crescimento de bactérias ácido-lácticas tais como Lactobacillus sp e Streptococus bovis [6] é favorecido.
[007] No momento do nascimento, o trato gastrointestinal dos bezerros é estéril e os microrganismos da flora intestinal somente são introduzidos a partir do contato com suas mães. Porém, nos novos sistemas de produção bovina, os bezerros são separados das suas mães no momento do nascimento e alimentados com substitutos do leite, sem permitir que os mesmos sejam alimentados do colostro, o que altera notavelmente o desenvolvimento da sua flora intestinal. Em consequência, nesses sistemas de produção, a principal causa de doenças em bezerros até os três meses de vida é a diarreia.
[008] Para o tratamento da diarreia em bovinos, podem ser utilizados tanto agentes antibióticos, os quais podem gerar um fenómeno indesejável de resistência antimicrobiana, quanto podem ser empregados produtos probióticos à base de microrganismos. Alguns produtos comerciais de probióticos para gado como Prokura®, Provita®, BioBoost® e Probios Calf®, contêm microrganismos aeróbios não ruminais, tais como Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium bifidum e Bacillus subtilis [7]. O documento no U.S. 3956482 descreve uma composição de microrganismos ruminais que compreende Megasphaera elsdenii, Streptococcus boviss, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium adolescentes, Bacteroides ruminicola e Butyrivibrio fibrisolvens, os quais são adaptados em um meio nutritivo e administrados ao animal durante as primeiras 24 horas e/ou no período compreendido entre 80 e 140 dias após nascimento.
[009] O documento no WO 2012147044 divulga um método para reduzir a produção de metano em ruminantes, que compreende a administração de uma mistura de cepas de bactérias do género Propionibacterium e Lactobacillus, preferencialmente, Propionibacterium jensenii P63, Lactobacillus plantarum Lpll5 e Lactobacillus rhamnosus Lr32. De igual forma, o documento aponta que a administração desses microrganismos também pode estimular o crescimento do animal.
[010] A publicação "Bacterial direct-fed microbials in ruminant diets: performance response and mode of action " descreve os efeitos benéficos da administração de composições de microrganismos tais como Lactobacillus, Enterococcus, Streptococcus e Bifidobacterium na alimentação de animais bovinos [8]. Entre os efeitos favoráveis, são citados a geração de uma microflora intestinal adequada, a prevenção do estabelecimento de organismos enteropatógenos e os ganhos diários em peso.
[011] A fim de aperfeiçoar a competitividade dos sistemas de leitaria e de produção de carne bovina, é necessário desenvolver alternativas funcionais para o tratamento das diarreias e a substituição dos antibióticos. Indiscutivelmente, uma boa alternativa é o desenvolvimento de produtos probióticos que possam ser administrados aos bovinos para prevenir doenças e incrementar a vitalidade.
[012] A presente invenção se refere a uma composição microbiana que compreende pelo menos um microrganismo probiótico selecionado do grupo que consiste em Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens, junto com coadjuvantes e um veículo aceitável. A composição da invenção apresenta uma eficácia adequada na redução de incidência de diarreias e promove os ganhos em peso nos bovinos neonatos.
[013] Figura 1. Corresponde a resultados da viabilidade Log (UFC/ml) da composição microbiana do Exemplo 2 armazenada a 4 °C +/- 2 °C durante 6 meses. Os tratamentos com a mesma letra não apresentam diferenças significativas de acordo com o teste de Tukey (95%).
[014] Figura 2. Corresponde a resultados da viabilidade Log (UFC/ml) da composição microbiana do Exemplo 2 armazenada a 18 °C +/- 2 °C durante 6 meses. Os tratamentos com a mesma letra não apresentam diferenças significativas de acordo com o teste de Tukey (95%).
[015] As composições microbianas da invenção compreendem pelo menos um microrganismo probiótico como ingrediente ativo, coadjuvantes e um veículo aceitável. Os microrganismos probióticos de acordo com a presente invenção, podem ser, entre outros, bactérias anaeróbias facultativas ou bactérias anaeróbias estritas. A definição, características e propriedades de cada uma das mesmas podem ser encontradas em detalhes no texto Manual of Determinative Bacteriology [9], que é incorporado ao presente documento em sua totalidade a título de referência.
[016] Em uma modalidade preferida da invenção, as composições compreendem, como ingrediente ativo, microrganismos anaeróbios selecionados do grupo que consiste em Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolven, os quais podem ser quantificados, servindo como unidades de medida, a concentração e a viabilidade dos mesmos. Preferencialmente, a concentração de cada um dos ditos microrganismos do ingrediente ativo da presente invenção está entre 1x103 e 1x1011 UFC/ml, mais preferencialmente, entre 1xl06 e 1x1010 UFC/ml, e ainda mais preferencialmente, 1x109 UFC/ml.
[017] O ingrediente ativo pode estar contido em água, em um dissolvente, em uma mistura de dissolventes, em um meio de cultivo líquido, em um liofilizado, em uma suspensão aquosa ou em uma pasta concentrada, em quantidades iguais ou diferentes de cada um dos microrganismos probióticos.
[018] As composições da invenção incluem, além do ingrediente ativo, diferentes coadjuvantes com funções específicas para dar forma e características próprias à apresentação final (por exemplo, formar emulsões, regular o pH, aperfeiçoar a estabilidade e aumentar a vida útil durante o armazenamento). A concentração do ingrediente ativo nas composições da invenção está preferencialmente entre 0,1% e 99,9% (p/p), mais preferencialmente, entre 20,0% e 60,0% (p/p) e ainda mais preferencialmente, em 40,0% (p/p).
[019] Como coadjuvantes são incluídos todos aqueles conhecidos no campo técnico, dentre os que podem ser citados, água, solventes orgânicos, óleos minerais, óleos vegetais tais como óleo de soja, óleo de milho, óleo de canola, óleo de oliva, óleo de coco, óleo de gérmen de trigo e misturas dos mesmos, polissorbatos, polióis, polímeros, lipídios, lipídios saponificáveis, substâncias de suporte (por exemplo, caulins, talco, bentonitas, silicatos), diluentes, agentes emulsificantes, agentes viscosificantes, surfactantes, reguladores de pH, estabilizadores e corantes. A concentração dos coadjuvantes nas composições da invenção, seja de maneira individual ou em conjunto, está preferencialmente entre 0,01% e 99,99% (p/p) e mais preferencialmente, entre 0,1% e 60,0% (p/p).
[020] Os agentes emulsificantes incluem, porém sem limitação, polissorbatos, ésteres de sorbitano, nonifenol, lauril sulfato de sódio e misturas dos mesmos. Os agentes viscosificantes incluem, porém sem limitação, polímeros, gomas, hidrocoloides, sólidos divididos finamente, ceras e misturas dos mesmos. Os agentes reguladores de pH incluem, porém sem limitação, carbonatos, fosfatos, citratos e boratos.
[021] O termo "veículo aceitável" para efeitos da presente invenção, pode ser definido como uma mistura de substâncias (por exemplo, dissolventes, soluções, emulsões e suspensões) com a capacidade para conter o ingrediente ativo e/ou os coadjuvantes, sem que seja afetada a sua capacidade para realizar a função desejada.
[022] As composições da invenção podem ser em forma de polvos, granulado solúvel, granulado dispersível, comprimidos dispersíveis, suspensão ou emulsão. Pretende-se que termo "granulado solúvel" inclua grânulos para a aplicação após a dissolução do ingrediente ativo em água em forma de solução, que contém, opcionalmente, auxiliares de formulação insolúveis. O termo “granulado dispersível” se refere a grânulos para a aplicação na forma de suspensão, após a sua desintegração e dispersão em água ou em outro solvente aquoso.
[023] Para fins da presente invenção, o termo “comprimido dispersível” se refere a uma formulação na forma de comprimidos, para uso individual, para formar uma suspensão do ingrediente ativo após sua desintegração em água. O termo "suspensão" se refere a líquidos que contêm o ingrediente ativo e os coadjuvantes suspendidos de maneira estável, seja para ser aplicado diretamente ou diluído em água. Pretende-se que o termo "emulsão" inclua sistemas heterodispersos com diferentes graus de viscosidade, que originam sistemas líquidos ou semissólidos, que podem ser encapsulados ou não e utilizados para gerar formas farmacêuticas sólidas.
[024] Para preparar as composições da invenção pode ser utilizado qualquer método convencional descrito no estado da técnica de acordo à forma farmacêutica desejada, os quais podem ser encontrados em detalhes nos textos "Tecnología Farmacéutica Industrial" ou em "The Science and Practice of Pharmacy", os quais são incorporados ao presente documento em sua totalidade a título de referência [10, 11]. Em uma modalidade preferida, pode ser preparada uma composição do tipo emulsão misturando uma fase aquosa que contém o ingrediente ativo com uma fase oleosa que contém agentes emulsificantes. Uma vez misturadas as duas fases, a emulsão com CO2 é gasificada e são adicionados os reguladores de pH e os agentes estabilizadores.
[025] Para determinar a concentração e/ou viabilidade dos microrganismos probióticos presentes nas composições da presente invenção, pode ser empregada qualquer técnica convencional conhecida por uma pessoa versada na técnica. Uma dessas é a técnica denominada de "Roll tube" descrita em Rodríguez y cois., [12], que é específica para microrganismos anaeróbios.
[026] Em uma modalidade preferida, a composição microbiana da invenção está em forma de emulsão, tem como ingrediente ativo microrganismos probióticos anaeróbios e coadjuvantes tais como emulsificantes, polímeros e reguladores de pH que melhoram a viabilidade, a eficácia e a vida útil do produto.
[027] Em uma modalidade ainda mais preferida, a composição microbiana da invenção é uma emulsão água-óleo (A/O), em que os microrganismos anaeróbios estão na fase aquosa da emulsão (fase interna), revestidos pela fase oleosa (fase externa) que outorga proteção aos mesmos diante do oxigênio do meio externo. A fase aquosa da emulsão é um meio de cultivo adequado que contém os microrganismos, enquanto que a fase oleosa da emulsão pode estar conformada, entre outros, por óleos vegetais, polissorbatos e lipídios saponificáveis que favoreçam a formação da emulsão A/O.
[028] O termo "meio de cultivo adequado", de acordo à presente invenção, se refere a qualquer meio de cultivo que contenha as fontes de nutrientes e oligoelementos necessários para o crescimento dos microrganismos anaeróbios. Em uma modalidade preferida, o meio de cultivo adequado compreende glicose, extrato de levedura, um indicador de anaerobiose, bicarbonato de sódio, cisteína- HC1, ácidos graxos voláteis, KHPO4, KH2PO4, sulfato de amônio, NaCl, MgSO4 e CaCl2 em concentrações entre 0,0001 e 100,0 g/l de cada um dos mesmos. Os exemplos abaixo ilustram a invenção, sem que o conceito inventivo seja limitado aos mesmos.
[029] As bactérias probióticas do rúmen de bovinos de raças originárias de Colômbia e estrangeiras e de um herbívoro selvagem foram isoladas. A Butyrivibrio fibrisolvens (B9) foi isolada de um bovino da raça Holstein-Friesand, a Streptococcus bovis (C2) foi isolada de um bovino da região do Valle del Cauca da raça Hartón del Valle, a Ruminococcus flavefaciens (Rf) foi isolada de um bovino da raça Lucerna e a Fibrobacter succinogenes (Fs) foi isolada do ceco de uma capivara da região de Casanare (Colômbia). As cepas foram reativadas em um meio de cultivo rico em celobiose- glicose e foram incubadas a 39 °C durante 3 dias.
[030] As cepas estão armazenadas no Banco de Germoplasma de Microrganismos com Interesse em Nutrição animal de CORPOICA (BGMINA).
[031] Foi preparada uma composição em forma de emulsão A/O com uma mistura de Butyrivibrio fibrisolvens (B9), Streptococcus bovis (C2), Ruminococcus flavefaciens (Rf) e Fibrobacter succinogenes (Fs) como ingrediente ativo. Os microrganismos foram obtidos de acordo com o Exemplo 1. Os componentes da fase oleosa (óleo de girassol, polissorbato 20 e lecitina) foram dispostos em uma marmita, foram misturados com a ajuda de um homogeneizador Dynamic® e foram gasificados com CO2 durante 10 minutos. Após esse tempo, essa fase oleosa foi misturada com a fase aquosa (meio de cultivo de cada bactéria em relação 1: 1) com a ajuda de um homogeneizador Dynamic® no máximo nível de agitação durante 5 minutos. A emulsão formada também foi gasificada com CO2. A Tabela 1 mostra as concentrações de cada componente. TABELA 1.
[032] Para uma composição microbiana obtida de acordo com o Exemplo 2 foram determinados parâmetros de qualidade tais como concentração (expressada como UFC/ml), pH e teor de contaminantes.
[033] Para determinar a concentração foi tomado 1 ml de cada amostra e foram realizadas diluições seriadas. A partir das diluições 1x10-7, 1x10-8 e 1x10-9, tubos com ágar celobiose fundido foram inoculados. Para cada tubo semeado foi realizado um "Rolling". Posteriormente, foi deixado em incubação durante 72 horas a uma temperatura de 39 °C e foi realizada a contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). Para avaliar o pH foi utilizado um analisador eletroquímico Consort C931®, previamente calibrado com soluções tampão de pH 4 e 7.
[034] Para estabelecer o teor de contaminantes foi tomado 1 ml de cada amostra e foram realizadas diluições seriadas (10-1 a 10-2) em solução salina em 4%. Posteriormente, 0,1 ml da diluição 1x10-2 foi inoculado em placas de Petri em meio Ágar Nutritivo durante 24 horas a 37 °C +/- 2 °C para determinar as bactérias aeróbias presentes e em meio PDA durante 7 dias a 25 °C +/- 2 °C para determinar os mofos filamentosos. Os resultados são mostrados na Tabela 2. TABELA 2.
[035] Para uma composição microbiana obtida de acordo com o Exemplo 2, foi determinada a sua estabilidade sob condições de armazenamento. As amostras foram armazenadas a uma Temperatura de 4 °C +/- 2 °C (TI) e de 18 °C +/- 2 °C (T2) durante 6 meses. Para realizar o ensaio, foram envasados 12 ml da composição microbiana em uma seringa para dosagem de polipropileno de alta densidade, as quais corresponderam à unidade experimental de cada tratamento.
[036] O estudo de estabilidade foi feito com uma configuração experimental completamente aleatória, com medidas repetidas no tempo e todas as medições foram realizadas por triplicado. Os resultados do estudo de estabilidade foram submetidos a uma análise de variância e, posteriormente, a comparações de médias através do teste de Tukey (95%).
[037] No tempo zero e após seis meses de armazenamento, foram tomadas três amostras de cada tratamento e foi avaliada a sua viabilidade, a contaminação (bactérias aeróbias e mofos) e o pH de acordo com o Exemplo 3. Na tabla 3 são apresentados os valores de pH obtidos nas três amostras avaliadas para cada temperatura, os quais estão ao redor de 7,0. [10]. TABELA 3.
[038] Os resultados de viabilidade obtidos para cada um dos tratamentos são ilustrados na Figura 1 e na Figura 2. Na Figura 1 são observados os resultados dos tratamentos armazenados a 4 °C, em que é evidenciado que após 6 meses de armazenamento foi apresentada uma redução significativa da viabilidade em relação ao tempo zero. Porém, a concentração dos microrganismos não é inferior a 1x108 (Figura 1).
[039] A viabilidade a 18 °C também foi reduzida significativamente após 6 meses de armazenamento, porém, também não foi inferior a 1x108 (Figura 2). Nas duas temperaturas de armazenamento avaliadas, a redução na viabilidade dos microrganismos foi de 1 Logaritmo após os 6 meses de armazenamento.
[040] Inicialmente, no tempo zero, o teor de bactérias aeróbias e de fungos foi inferior a 103 UFC/ml para todos os tratamentos. Após 2 meses de armazenamento, nas duas temperaturas avaliadas, os tratamentos armazenados a 4 °C +/-2 °C apresentaram um teor de bactérias aeróbias contaminantes e fungos inferior a 1x104 UFC/ml. De igual maneira, foi encontrado que na temperatura de 18 °C +/- 2 °C o teor de contaminantes fúngicos e bactérias foi mantido em uma faixa de 1x104 UFC/ml. Em nenhum foi encontrada presença de bactérias patógenas.
[041] Cento e oitenta (180) terneiros foram alocadas no momento da sua nascença de maneira aleatória a três grupos experimentais:
[042] • Grupo 1: Administração de composição microbiana fresca.
[043] • Grupo 2: Administração de composição microbiana armazenada durante 6 meses.
[044] • Grupo Controle: Não foi administrada a composição microbiana ao mesmo.
[045] Em um projeto completo aleatório com um fatorial 3x2, foram analisadas 2 variáveis: incidência de diarreia e ganhos em peso corporal. Cada terneiro dos grupos 1 e 2 recebeu 12 doses de 10 ml/dia por via oral de uma composição microbiana segundo o Exemplo 3. A composição microbiana foi administrada durante 10 dias consecutivos, iniciando o dia de nascença (D1), enquanto as duas doses seguintes foram fornecidas aos 15 e 30 dias (D15 e D30).
[046] Foram determinados os ganhos em peso dos terneiros mediante pesagem mensal com báscula electrónica, iniciando desde o D1 até os três meses de idade. A presença de diarreias foi determinada por observação direta em cada animal e foi registrada a frequência. A composição microbiana ensaiada demonstrou que reduz a incidência de diarreias e aumenta os ganhos em peso corporal nos animais avaliados. Os Resultados são mostrados na Tabela 4. TABELA 4.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Hume, M.E. 2011. Food safety symposium: Potential impact of reduced antibiotic use and the roles of prebiotics, probiotics, and other alternatives in antibiotic-free broiler production. Historie perspectives: Prebiotics, probiotics, and other alternatives to antibiotics. Poultry Science. 90: 2.663 a 2.669. 2. Frizzo, L.S., Zbrun, M.V., Soto, L.P., Signorini, M.L. 2011. Effects of probiotics on growth performance in young calves: A meta-analysis of randomized controlled triáis. Animal Feed Science and Technology. 169: 147 a 156. 3. Patel, S. Shukla, R., Goyal, A. 2015. Probiotics in valorization of innate immunity across various animal models. Journal of functional foods. 14: 549 a 561. 4. Lean, I.J., Golder, H.M., Hall, M.B. 2014. Feeding, evaluating, and controlling rumen function. Veterinary clinics of North America. Food Animal Practice. 30: 539 a 575. 5. Ospina, C.A. e F. Rodríguez. 2011. El ecosistema ruminal y los microorganismos con potencial probiótico. Páginas 41 a 59. Em: Desarrollo de Probióticos para Ganaderías Productoras de Leche. F. Rodríguez e F.ou. Carvajal. (Eds.). Bogotá, Produmedios. página 98. 6. Minuti, A., Ahmed, S., Trevisi, E., Piccioli- Cappelli, F., Bertoni, G., Jahan, N., Bani, P. 2014. Experimental acute rúmen acidosis in sheep: Consequences on clinical, rúmen, and gastrointestinal permeability conditions and blood chemistry. Journal of Animal Science. 92: 3966 a 3977. 7. Callaway, T., Carr, M.A., Edrington, T.S., Anderson, R.C., Nisbet, DJ. 2009. Diet, Escherichia coli 0157:H7, and cattle: A review after 10 years. Current issues in molecular biology. 11: 67 a 80. 8. Krehbiel, C.R., Rust, S.R., Zhang, G., Guilliland, S.E. 2003. Bacterial direct- fed microbials in ruminant diets: performance response and mode of action. Journal of Animal Science (E. Suppl.2): E120 a E132. 9. Bergey D. et al, Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, novena edição, Baltimore: Williams & Wilkins, 1994. 10. Salarzar, R. 2003. Tecnología Farmacéutica industrial. Tomo I e II. Fabricación industrial. Editorial Síntesis. Impresso em Espanha. Página 1.260. 11. REMINGTON, Joseph Price. Remington: The science and practice of pharmacy. 21a edição. Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. USA. 2006 12. Rodríguez, F., Martin, E., Laverde, C, Mayorga, O.L., Carvajal, F., Rodríguez, T.A., Rodríguez, J.A. 2011. Manual de Laboratorio para el Estudio de Microorganismos Anaerobios Obligados. Produmedios. Página 36.
Claims (7)
1. Composição microbiana em forma de emulsão A/O compreendendo uma fase aquosa e uma fase oleosa, CARACTERIZADA pelo fato de que: a fase aquosa compreende um ingrediente ativo que consiste em uma mistura dos microrganismos probióticos Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus Flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens; e a fase oleosa compreende óleos de origem vegetal, um agente emulsificante, um agente viscosificante e um agente regulador de pH, onde a concentração da mistura dos microrganismos probióticos Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus Flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens na composição microbiana está entre 20,0% e 60,0% (p/p), onde a concentração de cada um dos microrganismos probióticos Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus Flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens na composição microbiana está entre 1x106 e 1x1010 UFC/ml, e onde o agente emulsificante da fase oleosa é selecionado entre polissorbatos, ésteres de sorbitano, nonifenol, lauril sulfato de sódio e misturas dos mesmos.
2. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o óleo de origem vegetal é selecionado do grupo que consiste em óleo de girassol, óleo de soja, óleo de milho, óleo de canola, óleo de oliva, óleo de coco, óleo de gérmen de trigo e misturas dos mesmos.
3. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o agente regulador de pH é selecionado do grupo que consiste em fosfatos, citratos, boratos e carbonatos.
4. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o agente viscosificante é selecionado do grupo que consiste em polímeros, gomas, hidrocoloides, sólidos divididos finamente, ceras e misturas dos mesmos.
5. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que tem a seguinte composição: ingrediente ativo (microrganismos probióticos Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens em meio de cultivo adequado) 40,00% p/p; óleo de girassol 49,96% p/p; polissorbato 20 1,84% p/p; lecitina líquida 5,95% p/p; hidrocoloide 1,50% p/p; e bicarbonato de sódio 0,75% p/p.
6. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADA pelo fato de que o meio de cultivo adequado que compreende microrganismos probióticos tem a seguinte composição: microrganismos anaeróbios (Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, Streptococcus bovis e Butytrivibrio fibrisolvens) 1x106 a 1x1010 UFC/mL; glicose 2,0 a 40,0 g/L; extrato de levedura 2,0 a 5,0g/L; indicador de anaerobiose 0,5 a 2,0g/L; bicarbonato de sódio 3,0 a 10,0 g/L; cisteína-HCl 0,5 a 3,0 g/L; ácidos graxos voláteis 0,2 a 0,6 g/L; KHPO4 0,003 a 0,005 g/L; KH2PO4 1,0 a 5,0 g/L; sulfato de amônio 4,0 a 8,0 g/L; NaCl 4,0 a 6,0 g/L; MgSO4 3,50 a 5,00 g/L; e CaCl2 0,5 a 1,0 g/L.
7. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é para prevenir diarreias neonatais e incrementar os ganhos em peso corporal em bezerros.
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