BR112017023121B1 - COMPOUND, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, PROCESS FOR PREPARING A PHARMACEUTICAL COMPOSITION, KIT FOR THE THERAPEUTIC TREATMENT OF CANCER, AND USE OF A COMPOUND - Google Patents

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO, MÉTODO DE TRATAMENTO DO CÂNCER, KIT PARA O TRATAMENTO TERAPÊUTICO DO CÂNCER E USO DE UM COMPOSTO. São descritos compostos de benzoxazepina oxazolidinona com atividade ou função de modulação da fosfoinositídeo-3 quinase (PI3K) possuindo a estrutura de Fórmula I, ou estereoisômeros, tautômeros ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e com os substituintes e características estruturais descritos na presente invenção. Também são descritos medicamentos e composições farmacêuticas que incluem os compostos de Fórmula I, bem como métodos de uso de tais moduladores da PI3K, isolados e em combinação com outros agentes terapêuticos, para tratar doenças ou condições que são mediadas ou dependentes da desregulação de PI3K.COMPOUND, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, PROCESS FOR PREPARING A COMPOSITION, METHOD OF TREATMENT OF CANCER, KIT FOR THE THERAPEUTIC TREATMENT OF CANCER AND USE OF A COMPOUND. Benzoxazepine oxazolidinone compounds with activity or function of modulating phosphoinositide-3 kinase (PI3K) having the structure of Formula I, or stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, and with the substituents and structural characteristics described in the present invention are described. Also described are medicaments and pharmaceutical compositions that include the compounds of Formula I, as well as methods of using such PI3K modulators, alone and in combination with other therapeutic agents, to treat diseases or conditions that are mediated or dependent on PI3K dysregulation.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA PARA OS PEDIDOS RELACIONADOSCROSS REFERENCE TO RELATED ORDERS

[0001] Este pedido não provisório depositado sob o 37 CFR §1.53(b) reivindica o benefício sob o título 35 da USC §119(e) dos EUA ao Pedido de Patente Provisório US 62/188.029 depositado em 2 de julho de 2015, que é integralmente incorporado pela referência.[0001] This non-provisional application filed under 37 CFR §1.53(b) claims the benefit under USC title 35 §119(e) of US Provisional Patent Application 62/188,029 filed July 2, 2015, which is fully incorporated by reference.

CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF INVENTION

[0002] A invenção diz respeito, de modo geral, aos compostos benzoxazepina oxazolidinona com atividade contra distúrbios hiperproliferativos, tal como o câncer. A invenção também diz respeito aos métodos de uso dos compostos para o diagnóstico ou tratamento in vitro, in situ ou in vivo de células de mamíferos, ou as condições patológicas associadas.[0002] The invention generally concerns benzoxazepine oxazolidinone compounds with activity against hyperproliferative disorders, such as cancer. The invention also relates to methods of using the compounds for the in vitro, in situ or in vivo diagnosis or treatment of mammalian cells, or associated pathological conditions.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃOBACKGROUND OF THE INVENTION

[0003] A regulação positiva da via de sinalização da fosfoinositídeo-3 quinase (PI3K)/Akt é uma característica comum na maioria dos cânceres (Yuan e Cantley (2008) Oncogene 27:5497-510). Os desvios genéticos na via foram detectados em muitos cânceres humanos (Osaka et al (2004) Apoptosis 9: 667-76) e atuam principalmente estimulando a proliferação celular, migração e sobrevida das células. A ativação da via ocorre após a ativação de mutações pontuais ou amplificações do gene PIK3CA que codifica as isoformas P110a (alfa) PI3K (Hennessy et al (2005) Nat. Rev. Drug Discov. 4:988-1004). 4:988-1004). A deleção genética ou mutações de perda de função dentro do supressor de tumor PTEN, uma fosfatase com função oposta à PI3K, também aumenta a sinalização da via PI3K (Zhang e Yu (2010) Clin. Cancer Res. 16:4325-30. Essas aberrações levam ao aumento da sinalização a jusante através de quinases, como a Akt e mTOR, e o aumento da atividade da via PI3K foi proposto como característica da resistência ao tratamento do câncer (Opel et al (2007) Cancer Res. 67: 735-45; Razis et al. (2011) Breast Cancer Res. Treat. 128: 447-56).[0003] Upregulation of the phosphoinositide-3 kinase (PI3K)/Akt signaling pathway is a common feature in most cancers (Yuan and Cantley (2008) Oncogene 27:5497-510). Genetic deviations in the pathway have been detected in many human cancers (Osaka et al (2004) Apoptosis 9: 667-76) and act mainly by stimulating cell proliferation, migration and cell survival. Activation of the pathway occurs following the activation of point mutations or amplifications of the PIK3CA gene encoding the P110a (alpha) PI3K isoforms (Hennessy et al (2005) Nat. Rev. Drug Discov. 4:988-1004). 4:988-1004). Genetic deletion or loss-of-function mutations within the tumor suppressor PTEN, a phosphatase with function opposite to PI3K, also increase PI3K pathway signaling (Zhang and Yu (2010) Clin. Cancer Res. 16:4325-30. These aberrations lead to increased downstream signaling through kinases such as Akt and mTOR, and increased activity of the PI3K pathway has been proposed as a feature of resistance to cancer treatment (Opel et al (2007) Cancer Res. 67: 735- 45; Razis et al. (2011) Breast Cancer Res. Treat. 128: 447-56).

[0004] A fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) é uma importante sinalização linfonodal para os sinais essenciais de sobrevida e crescimento nos linfomas e está em oposição à atividade da fosfatase PTEN. A via de sinalização da quinase dependente de fosfoinositídeo (PI3K) é a via mais desregulada no câncer de mama positivo para receptor hormonal (HR+BC). A via da PI3K também está desregulada nas formas agressivas de linfoma (Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370). Oito por cento de cânceres DLBCL (linfoma difuso de grandes células B) possuem mutações missense na PI3CA (subunidade alfa catalítica da fosfatidilinositol-3 quinase) e 37% são PTEN negativos pelo ensaio de imuno-histoquímica.[0004] Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) is an important lymph node signaling for essential signs of survival and growth in lymphomas and is in opposition to the activity of the PTEN phosphatase. The phosphoinositide-dependent kinase (PI3K) signaling pathway is the most dysregulated pathway in hormone receptor-positive breast cancer (HR+BC). The PI3K pathway is also dysregulated in aggressive forms of lymphoma (Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370). Eight percent of DLBCL (diffuse large B-cell lymphoma) cancers have missense mutations in PI3CA (phosphatidylinositol-3 kinase catalytic alpha subunit) and 37% are PTEN negative by immunohistochemistry assay.

[0005] O fosfatidilinositol é um dentre uma variedade de fosfolipídios encontrados na membrana celular, e que participa na transdução de sinal intracelular. A sinalização celular via fosfoinositídeos 3’-fosforilados foi descrita por estar envolvida em uma variedade de processos celulares, por exemplo, a transformação para a malignidade, sinalização de fator de crescimento, inflamação e imunidade (Rameh et al (1999) J. Biol Chem. 274:8347-8350). A enzima responsável pela geração destes produtos fosforilados da sinalização, a fosfatidilinositol 3-quinase (também referida como PI 3-quinase ou PI3K), foi originalmente identificada como uma atividade associada com oncoproteínas virais e receptores tirosina quinase de fatores de crescimento que fosforilam o fosfatidilinositol (PI) e seus derivados fosforilados na hidroxila 3’ do anel inositol (Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2:358-60). As fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) são quinases lipídicas que fosforilam lipídios no resíduo 3-hidroxila de um anel inositol (Whitman et al (1988) Nature, 332:664). Os fosfolipídios 3-fosforilados (PIP3s) gerados pelas PI3-quinases agem como segundos mensageiros recrutando quinases com domínios de ligação para lipídios (incluindo as regiões de homologia da plecstrina (PH)), tal como Akt e PDK1, quinase - 1 dependente de fosfoinositídeo (Vivanco et al (2002) Nature Rev. Cancer 2:489; Phillips et al (1998) Cancer 83:41).[0005] Phosphatidylinositol is one of a variety of phospholipids found in the cell membrane, which participates in intracellular signal transduction. Cell signaling via 3'-phosphorylated phosphoinositides has been described to be involved in a variety of cellular processes, e.g. transformation to malignancy, growth factor signaling, inflammation and immunity (Rameh et al (1999) J. Biol Chem 274:8347-8350). The enzyme responsible for generating these phosphorylated signaling products, phosphatidylinositol 3-kinase (also referred to as PI 3-kinase or PI3K), was originally identified as an activity associated with viral oncoproteins and growth factor tyrosine kinase receptors that phosphorylate phosphatidylinositol. (PI) and its derivatives phosphorylated on the 3' hydroxyl of the inositol ring (Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2:358-60). Phosphoinositide 3-kinases (PI3K) are lipid kinases that phosphorylate lipids on the 3-hydroxyl residue of an inositol ring (Whitman et al (1988) Nature, 332:664). Phospholipid-3-phosphorylated (PIP3s) generated by PI3-kinases act as second messengers by recruiting kinases with lipid-binding domains (including pleckstrin homology (PH) regions), such as Akt and PDK1, phosphoinositide-dependent kinase-1 (Vivanco et al (2002) Nature Rev. Cancer 2:489; Phillips et al (1998) Cancer 83:41).

[0006] A família da PI3 quinase compreende pelo menos 15 enzimas diferentes subclassificadas pela homologia estrutural e são divididas em 3 classes com base na homologia da sequência e produto formado pela catálise da enzima. As PI3 quinases classe I são compostas de 2 subunidades: uma subunidade catalítica de 110 kD e uma subunidade reguladora de 85 kD. As subunidades reguladoras possuem domínios SH2 e se ligam aos resíduos de tirosina fosforilados pelos receptores de fatores de crescimento com uma atividade tirosina quinase ou produtos de oncogenes, induzindo dessa forma a atividade PI3K da subunidade catalítica que fosforila seu lipídio substrato. As PI3 quinases classe I estão envolvidas em importantes eventos de transdução de sinal a jusante de citocinas, integrinas, fatores de crescimento e imunoreceptores, sugerindo que o controle desta via pode levar a importantes efeitos terapêuticos, tal como a modulação da proliferação celular e a carcinogênese. As PI3Ks classe I podem fosforilar a fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato, e fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2) para produzir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato e fosfatidilinositol- 3,4,5-trifosfato, respectivamente. As PI3Ks classe II fosforilam a PI e fosfatidilinositol-4-fosfato. As PI3Ks classe III podem apenas fosforilar a PI. Uma isoforma chave da PI3-quinase no câncer é a PI3-quinase Classe I, p110a conforme indicado pelas mutações oncogênicas recorrentes na p110a (Samuels et al (2004) Science 304:554; US 5824492; US 5846824; US 6274327). Outras isoformas podem ser importantes no câncer e também estão envolvidas em doenças cardiovasculares e imunoinflamatórias (Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396; Patel et al (2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Resumo LB-247) 95th Annual Meeting, 27 a 31 de março, Orlando, Florida, EUA; Ahmadi K e Waterfield M.D. (2004) “Phosphoinositide 3- Kinase: Function and Mechanisms” Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press), as mutações oncogênicas de p100a (alfa) foram encontradas com uma frequência significativa em tumores de cólon, mama, cérebro, fígado, ovário, gástricos, de pulmão e tumores sólidos de cabeça e pescoço. Cerca de 35-40% dos cânceres de mama positivos para receptor hormonal (HR+) possuem uma mutação no PIK3CA. As anormalidades de PTENsão encontradas em glioblastomas, melanoma, cânceres de próstata, endométrio, ovário, mama, pulmão, cabeça e pescoço, hepatocelulares e cânceres de tireoide.[0006] The PI3 kinase family comprises at least 15 different enzymes subclassified by structural homology and are divided into 3 classes based on sequence homology and product formed by enzyme catalysis. Class I PI3 kinases are composed of 2 subunits: a 110 kD catalytic subunit and an 85 kD regulatory subunit. The regulatory subunits have SH2 domains and bind to tyrosine residues phosphorylated by growth factor receptors with tyrosine kinase activity or oncogene products, thus inducing the PI3K activity of the catalytic subunit that phosphorylates its substrate lipid. Class I PI3 kinases are involved in important signal transduction events downstream of cytokines, integrins, growth factors and immunoreceptors, suggesting that control of this pathway can lead to important therapeutic effects, such as modulation of cell proliferation and carcinogenesis . Class I PI3Ks can phosphorylate phosphatidylinositol (PI), phosphatidylinositol-4-phosphate, and phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PIP2) to produce phosphatidylinositol-3-phosphate (PIP), phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate, and phosphatidylinositol- 3,4,5-triphosphate, respectively. Class II PI3Ks phosphorylate PI and phosphatidylinositol-4-phosphate. Class III PI3Ks can only phosphorylate PI. A key isoform of PI3-kinase in cancer is the Class I PI3-kinase, p110a as indicated by recurrent oncogenic mutations in p110a (Samuels et al (2004) Science 304:554; US 5824492; US 5846824; US 6274327). Other isoforms may be important in cancer and are also involved in cardiovascular and immunoinflammatory diseases (Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396; Patel et al (2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Abstract LB -247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA; Ahmadi K and Waterfield M.D. (2004) “Phosphoinositide 3- Kinase: Function and Mechanisms” Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier /Academic Press), oncogenic p100a (alpha) mutations have been found with significant frequency in colon, breast, brain, liver, ovarian, gastric, lung, and head and neck solid tumors. About 35-40% of hormone receptor positive (HR+) breast cancers have a mutation in PIK3CA. PTEN abnormalities are found in glioblastomas, melanoma, prostate, endometrial, ovarian, breast, lung, head and neck, hepatocellular, and thyroid cancers.

[0007] A PI3-quinase (PI3K) é um heterodímero de consiste das subunidades p85 e p110 (Otsu et al (1991) Cell 65:91-104; Hiles et al (1992) Cell 70:419-29). Foram identificadas quatro PI3Ks classes I distintas, designadas PI3K a (alfa), ß (beta), d (delta), Y(gama), cada uma consistindo de uma subunidade catalítica de 110 kDa distinta e uma subunidade reguladora. Cada uma das três subunidades catalíticas, ou seja, p110 alfa, p110 beta e p110 delta, interage com a mesma subunidade reguladora, p85, enquanto a p110 gama interage com uma subunidade reguladora distinta, a p101. Os padrões de expressão de cada uma destas PI3Ks nas células e tecidos humanos são distintos. Em cada um dos subtipos de PI3K alfa, beta e delta, a subunidade p85 atua para localizar a PI3 quinase na membrana plasmática pela interação de seu domínio SH2 com resíduos de tirosina fosforilados (presentes em uma sequência contexto adequada) na proteína alvo (Rameh et al (1995) Cell, 83:821-30; Volinia et al (1992) Oncogene, 7:789-93).[0007] PI3-kinase (PI3K) is a heterodimer consisting of the p85 and p110 subunits (Otsu et al (1991) Cell 65:91-104; Hiles et al (1992) Cell 70:419-29). Four distinct class I PI3Ks were identified, designated PI3K a (alpha), ß (beta), d (delta), Y (gamma), each consisting of a distinct 110 kDa catalytic subunit and a regulatory subunit. Each of the three catalytic subunits, namely p110 alpha, p110 beta and p110 delta, interacts with the same regulatory subunit, p85, while p110 gamma interacts with a distinct regulatory subunit, p101. The expression patterns of each of these PI3Ks in human cells and tissues are distinct. In each of the alpha, beta and delta PI3K subtypes, the p85 subunit acts to localize PI3 kinase to the plasma membrane by interaction of its SH2 domain with phosphorylated tyrosine residues (present in an appropriate context sequence) on the target protein (Rameh et al. al (1995) Cell, 83:821-30; Volinia et al (1992) Oncogene, 7:789-93).

[0008] A via da PI3 quinase/Akt/PTENé um alvo atrativo para o desenvolvimento de fármacos para o tratamento do câncer, já que se espera que tais agentes inibam a proliferação celular, reprimam os sinais a partir das células estromais que fornecem sobrevivência e quimioresistência para as células cancerosas, revertam a repressão da apoptose e trasponham a resistência intrínseca das células cancerosas aos agentes citotóxicos. A PI3K é ativada através da sinalização do receptor tirosina-quinase, bem como por mutações ativadoras na subunidade catalítica p110 da PI3K, perda do supressor tumoral PTEN ou através de mutações raras de ativação em AKT.[0008] The PI3 kinase/Akt/PTEN pathway is an attractive target for the development of drugs for the treatment of cancer, as such agents are expected to inhibit cell proliferation, repress signals from stromal cells that provide survival and chemoresistance for cancer cells, reverse the repression of apoptosis and overcome the intrinsic resistance of cancer cells to cytotoxic agents. PI3K is activated through receptor tyrosine kinase signaling, as well as by activating mutations in the p110 catalytic subunit of PI3K, loss of the tumor suppressor PTEN, or through rare activating mutations in AKT.

[0009] O Taselisib (GDC-0032, Roche RG7604, CAS Reg. No. 1282512-48-4, Genentech Inc.), designado como 2-(4-(2-(1-isopropil-3-metil- 1H-1,2,4-triazol-5-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9-il)-1H- pirazol-1-il)-2-metilpropanamida, possui uma potente atividade PI3K (Ndubaku, C. O., et al. (2013) J. Med. Chem. 56: 4597-4610; WO 2011/036280; US 8242104; US 8343955) e está sendo estudado em pacientes com tumores sólidos localmente avançados ou metastáticos. O Taselisib (GDC-0032) é um inibidor poupador de isoforma beta da subunidade catalítica PI3K, 31x mais seletivo para a subunidade alfa, em comparação com a beta. Taselisib exibe maior seletividade para isoformas PI3Ka mutantes do que para PI3Ka tipo selvagem (Olivero AG et al, AACR 2013. Resumo DDT02-01). O Taselisib está atualmente sendo desenvolvido como um tratamento para pacientes com câncer de mama metastático (mBC) HER2-negativo e com receptor de estrogênio (ER)-positivo e pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). No estudo de fase Ia com taselisib como agente único, observaram-se respostas parciais (PRs) em 6/34 pacientes inscritos. Todas as 6 respostas foram observadas em pacientes com tumores PIK3CA-mutantes (Juric D. et al. AACR 2013), indicando a necessidade de determinar o estado da mutação no PIK3CA nos pacientes tratados com Taselisib.[0009] Taselisib (GDC-0032, Roche RG7604, CAS Reg. No. 1282512-48-4, Genentech Inc.), designated as 2-(4-(2-(1-isopropyl-3-methyl- 1H- 1,2,4-triazol-5-yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9-yl)-1H-pyrazol-1-yl )-2-methylpropanamide, has potent PI3K activity (Ndubaku, C. O., et al. (2013) J. Med. Chem. 56: 4597-4610; WO 2011/036280; US 8242104; US 8343955) and is being studied in patients with locally advanced or metastatic solid tumors. Taselisib (GDC-0032) is a beta isoform-sparing inhibitor of the PI3K catalytic subunit, 31x more selective for the alpha subunit compared to the beta. Taselisib exhibits greater selectivity for mutant PI3Ka isoforms than for wild-type PI3Ka (Olivero AG et al, AACR 2013. Summary DDT02-01). Taselisib is currently being developed as a treatment for patients with HER2-negative, estrogen receptor (ER)-positive metastatic breast cancer (mBC) and patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). In the phase Ia study with single-agent taselisib, partial responses (PRs) were observed in 6/34 enrolled patients. All 6 responses were observed in patients with PIK3CA-mutant tumors (Juric D. et al. AACR 2013), indicating the need to determine PIK3CA mutation status in patients treated with Taselisib.

[0010] Dados clínicos recentes com inibidores de PI3K implicaram a atividade delta PI3K como uma fonte de toxicidade gastrointestinal (Akinleye et al Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics” Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104; C. Saura et al “Phase Ib Study of the PI3K Inhibitor Taselisib (GDC-0032) in Combination with Letrozole in Patients with Hormone Receptor-Positive Advanced Breast Cancer” San Antonio Breast Cancer Symposium - Dezembro, 2014, PD5-2; Lopez et al “Taselisib, a selective inhibitor of PIK3CA, is highly effective on PIK3CA- mutated and HER2/neu amplified uterine serous carcinoma in vitro and in vivo ” (2014) Gynecologic Oncology).[0010] Recent clinical data with PI3K inhibitors have implicated delta PI3K activity as a source of gastrointestinal toxicity (Akinleye et al Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics” Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104; C. Saura et al “Phase Ib Study of the PI3K Inhibitor Taselisib (GDC-0032) in Combination with Letrozole in Patients with Hormone Receptor-Positive Advanced Breast Cancer” San Antonio Breast Cancer Symposium - December, 2014, PD5-2; Lopez et al “Taselisib, a selective inhibitor of PIK3CA, is highly effective on PIK3CA- mutated and HER2/neu amplified uterine serous carcinoma in vitro and in vivo ” (2014) Gynecologic Oncology).

[0011] O Idelalisib (GS-1101, CAL-101, ZYDELIG®, Gilead Sciences Inc., Reg. CAS 870281-82-6, 5-fluoro-3-fenil-2- [(1S)-1-(7H-purin-6- ilamina)propil]-4(3H)-quinazolinona) é um inibidor PI3Kd (delta) seletivo e aprovado para o tratamento da leucemia linfoide crônica, CLL (Somoza, J.R. et al (2015) J. Biol.Chem. 290: 8439-8446; US 6800620; US 6949535; US 8138195; US 8492389; US 8637533; US 8865730; US 8980901; RE44599; RE44638). A diarreia e a colite estão entre os eventos adversos mais comuns relatados após o tratamento com Idelalisib (Brown et al “Idelalisib, an inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase p110d, for relapsed/refractory chronic lymphocytic leukemia” (2014) Blood 123 (22):3390-3397; Informação de prescrição Zydelig® 2014; Folha de informações Zydelig® REMS). As significativas toxicidades GI observadas após o tratamento com Idelalisib são consistentes com a hipótese de que a inibição de PI3Kd (delta) é uma fonte de toxicidade gastrointestinal. Foram observados efeitos colaterais graves adicionais em ensaios clínicos de idelalisib (Zydelig®) em combinação com outras terapias. Os eventos adversos, incluindo morte, foram associados a infecções como a pneumonia. Em março de 2016, o Comitê de Avaliação do Risco em Farmacovigilância (PRAC) da Agência Europeia de Medicamentos (EMA) emitiu um alerta provisório e uma recomendação que os pacientes devem receber cotratamento com antibióticos e serem monitorados por rotina para infecção quando sob tratamento com Zydelig (idelalisib). Em março de 2016, a US Food and Drug Administration emitiu um alerta de que “seis ensaios clínicos que exploram idelalisib (Zydelig®) em combinação com outras terapias foram interrompidos devido a relatos de aumento na taxa de eventos adversos, incluindo a morte”.[0011] Idelalisib (GS-1101, CAL-101, ZYDELIG®, Gilead Sciences Inc., CAS Reg. 870281-82-6, 5-fluoro-3-phenyl-2- [(1S)-1-(7H -purin-6-ylamine)propyl]-4(3H)-quinazolinone) is a selective PI3Kd (delta) inhibitor approved for the treatment of chronic lymphocytic leukemia, CLL (Somoza, J.R. et al (2015) J. Biol.Chem 290: 8439-8446; US 6800620; US 6949535; US 8138195; US 8492389; US 8637533; US 8865730; US 8980901; RE44599; RE44638). Diarrhea and colitis are among the most common adverse events reported after treatment with Idelalisib (Brown et al “Idelalisib, an inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase p110d, for relapsed/refractory chronic lymphocytic leukemia” (2014) Blood 123 (22) :3390-3397; Zydelig® Prescribing Information 2014; Zydelig® REMS Information Sheet). The significant GI toxicities observed following Idelalisib treatment are consistent with the hypothesis that PI3Kd (delta) inhibition is a source of gastrointestinal toxicity. Additional serious side effects have been observed in clinical trials of idelalisib (Zydelig®) in combination with other therapies. Adverse events, including death, have been associated with infections such as pneumonia. In March 2016, the Pharmacovigilance Risk Assessment Committee (PRAC) of the European Medicines Agency (EMA) issued an interim warning and recommendation that patients should receive co-treatment with antibiotics and be routinely monitored for infection when under treatment with Zydelig (idelalisib). In March 2016, the US Food and Drug Administration issued an alert that “six clinical trials exploring idelalisib (Zydelig®) in combination with other therapies have been discontinued due to reports of an increased rate of adverse events, including death.”

[0012] Há uma necessidade de moduladores de PI3Ka adicionais úteis para o tratamento de cânceres, particularmente um inibidor da PI3Ka que seja seletivo para tumores que expressam PI3Ka mutante em relação às células que expressam a PI3Ka não mutante. Existe a necessidade especial de tal agente que possa inibir seletivamente a isoforma PI3Ka em relação às isoformas PI3Kß, PI3Kd e PI3KY,o qual esperar-se que resulte em uma janela terapêutica melhorada.[0012] There is a need for additional PI3Ka modulators useful for treating cancers, particularly a PI3Ka inhibitor that is selective for tumors that express mutant PI3Ka relative to cells that express non-mutant PI3Ka. There is a special need for such an agent that can selectively inhibit the PI3Ka isoform over the PI3Kß, PI3Kd and PI3KY isoforms, which is expected to result in an improved therapeutic window.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃOBRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0013] A invenção diz respeito de modo geral aos compostos benzoxazepina oxazolidinona com atividade seletiva na modulação de formas mutantes da isoforma PI3Ka (alfa) e que possuem a estrutura de Fórmula I: e estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitável do mesmo. Os diversos substituintes são definidos na presente invenção.[0013] The invention generally concerns benzoxazepine oxazolidinone compounds with selective activity in modulating mutant forms of the PI3Ka (alpha) isoform and which have the structure of Formula I: and stereoisomers, geometric isomers, tautomers and pharmaceutically acceptable salts thereof. The various substituents are defined in the present invention.

[0014] Outro aspecto da invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um composto benzoxazepina oxazolidinona de fórmula I e um veículo farmaceuticamente aceitável, deslizante, diluente ou excipiente.[0014] Another aspect of the invention is a pharmaceutical composition comprising a benzoxazepine oxazolidinone compound of formula I and a pharmaceutically acceptable carrier, glidant, diluent or excipient.

[0015] Outro aspecto da invenção é um método de tratamento de câncer em um paciente com câncer compreendendo administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto benzoxazepina oxazolidinona de Fórmula I.[0015] Another aspect of the invention is a method of treating cancer in a cancer patient comprising administering to said patient a therapeutically effective amount of a benzoxazepine oxazolidinone compound of Formula I.

[0016] Outro aspecto da invenção é um kit para o tratamento terapêutico do câncer de mama, compreendendo: a) um composto de benzoxazepina oxazolidinona de Fórmula I; e b) instruções para uso no tratamento terapêutico do câncer de mama.[0016] Another aspect of the invention is a kit for the therapeutic treatment of breast cancer, comprising: a) a benzoxazepine oxazolidinone compound of Formula I; and b) instructions for use in the therapeutic treatment of breast cancer.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF FIGURES

[0017] Figura 1: Exibe estruturas de cocristal de raio-x de PI3Ka com: A) taselisib (GDC-0032); B) Composto 529 da US 8.242.104; C) Composto 101 e D) Composto 103.[0017] Figure 1: Displays x-ray cocrystal structures of PI3Ka with: A) taselisib (GDC-0032); B) Compound 529 of US 8,242,104; C) Compound 101 and D) Compound 103.

[0018] Figura 2: Exibe estruturas de cocristal de raio-x de PI3K a com: A) taselisib (GDC-0032) e B) Composto 101.[0018] Figure 2: Displays x-ray cocrystal structures of PI3K with: A) taselisib (GDC-0032) and B) Compound 101.

[0019] Figura 3A: Exibe dados dos resultados de Western blot que descrevem os níveis de p110a (p110a, p110 alfa) 24 horas após tratamento com o Composto 101, Composto 103 e Composto 436 da US 8.242.104 em células HCC-1954 (PI3Ka-mutante H1047R).[0019] Figure 3A: Displays data from Western blot results describing the levels of p110a (p110a, p110 alpha) 24 hours after treatment with Compound 101, Compound 103 and Compound 436 of US 8,242,104 in HCC-1954 cells ( PI3Ka-mutant H1047R).

[0020] Figura 3B: Exibe dados dos resultados de Western blot que descrevem os níveis de p110a (p110a, p110 alfa) 24 horas após tratamento com o Composto 101, Composto 103 e Composto 436 da US 8.242.104 em células HDQ-P1 (PI3Ka tipo selvagem).[0020] Figure 3B: Displays data from Western blot results describing the levels of p110a (p110a, p110 alpha) 24 hours after treatment with Compound 101, Compound 103 and Compound 436 of US 8,242,104 in HDQ-P1 cells ( PI3Ka wild type).

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS REALIZAÇÕES EXEMPLARESDETAILED DESCRIPTION OF EXEMPLARY ACHIEVEMENTS

[0021] A referência passará a ser feita em detalhes em determinados exemplos de realização da invenção, cujos exemplos estão ilustrados nas estruturas e fórmulas anexas. Embora a invenção seja descrita em conjunto com os exemplos de realização enumerados, entender-se-á que estes não se destinam a limitar a invenção aos exemplos de realizações. Pelo contrário, a invenção tem a intenção de cobrir todas as alternativas, modificações e equivalências que possam ser incluídas no escopo da presente invenção, tal como definido pelas reivindicações. Um técnico no assunto reconhecerá que muitos materiais e métodos similares ou equivalentes aos descritos no presente documento, poderiam ser utilizados na prática da presente invenção. A presente invenção não está de forma alguma limitada aos métodos e materiais descritos. No caso em que uma ou mais literaturas, patentes e materiais similares incorporados, se diferirem ou contradizerem ao presente pedido, incluindo, mas não se limitado a, definição de termos, uso de termos, técnicas descritas e similares, as definições do presente pedido prevalecerá. A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos utilizados no presente têm o mesmo significado que é comumente compreendido por um técnico hábil no assunto ao qual esta invenção pertence. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes aos descritos na presente invenção possam ser utilizados na prática ou testes da invenção, os métodos e materiais adequados estão descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências citadas no presente são incorporados ao presente pela referência em sua totalidade. A nomenclatura utilizada no presente pedido baseia-se na nomenclatura sistemática da IUPAC, salvo quando indicado de outra forma.[0021] Reference will now be made in detail to certain examples of carrying out the invention, examples of which are illustrated in the attached structures and formulas. Although the invention is described in conjunction with the enumerated embodiment examples, it will be understood that these are not intended to limit the invention to the exemplary embodiments. Rather, the invention is intended to cover all alternatives, modifications and equivalences that may be included within the scope of the present invention as defined by the claims. One skilled in the art will recognize that many materials and methods similar or equivalent to those described herein could be used in the practice of the present invention. The present invention is in no way limited to the methods and materials described. In the event that one or more incorporated literatures, patents and similar materials differ from or contradict this application, including, but not limited to, definition of terms, use of terms, techniques described and the like, the definitions of this application will prevail . Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as is commonly understood by one skilled in the art to which this invention belongs. Although methods and materials similar or equivalent to those described in the present invention may be used in practicing or testing the invention, suitable methods and materials are described below. All publications, patent applications, patents and other references cited herein are incorporated herein by reference in their entirety. The nomenclature used in this application is based on the IUPAC systematic nomenclature unless otherwise indicated.

DEFINIÇÕESDEFINITIONS

[0022] Quando indicado o número de substituintes, o termo “um ou mais” refere-se ao intervalo de um substituinte até o maior número possível de substituições, ou seja, a substituição de um hidrogênio até a substituição de todos os hidrogênios pelos substituintes. O termo “substituinte” denota um átomo ou um grupo de átomos que substitui um átomo de hidrogênio na molécula parental. O termo “substituído” indica que um grupo especificado suporta um ou mais substituintes. Quando qualquer grupo pode levar vários substituintes e uma variedade de possíveis substituintes é fornecida, os substituintes são selecionados, independentemente e não precisam ser iguais. O termo “não substituído” significa que o grupo especificado não tem qualquer substituinte. O termo “opcionalmente substituído” significa que o grupo especificado é não substituído ou substituído por um ou mais substituintes, escolhidos independentemente a partir do grupo de possíveis substituintes. Quando indicado o número de substituintes, o termo “um ou mais” significa de um substituinte até o maior número possível de substituições, ou seja, a substituição de um hidrogênio até a substituição de todos os hidrogênios pelos substituintes.[0022] When indicating the number of substituents, the term “one or more” refers to the range from one substituent to the greatest possible number of substitutions, that is, the replacement of one hydrogen until the replacement of all hydrogens by the substituents . The term “substituent” denotes an atom or group of atoms that replaces a hydrogen atom in the parent molecule. The term “substituted” indicates that a specified group bears one or more substituents. When any group can carry multiple substituents and a variety of possible substituents are provided, the substituents are selected independently and need not be the same. The term “unsubstituted” means that the specified group does not have any substituent. The term “optionally substituted” means that the specified group is unsubstituted or substituted by one or more substituents, independently chosen from the group of possible substituents. When indicating the number of substituents, the term “one or more” means from one substituent to the greatest possible number of substitutions, that is, the replacement of one hydrogen until the replacement of all hydrogens by the substituents.

[0023] O termo “alquila” conforme utilizado na presente invenção, refere-se a um radical hidrocarboneto monovalente saturado linear ou de cadeia ramificada de um a doze átomos de carbono (C1-C12), em que o radical alquila pode ser opcionalmente substituído de maneira independente com um ou mais substituintes descrito abaixo. Em outro exemplo de realização, um radical alquila é de um a oito átomos de carbono (C1-C8), ou de um a seis átomos de carbono (C1-C6). Exemplos de grupos alquila incluem, mas não estão limitados a, metila (Me,-CH3), etila (Et,-CH2CH3), 1-propila (n-Pr, n- propila, -CH2CH2CH3), 2-propila (i-Pr, i-propila, -CH(CH3)2), 1-butila (n-Bu, n-butila, -CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propila (i-Bu, i-butila, -CH2CH(CH3)2), 2-butila (s-Bu, s-butila, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propila (t-Bu, t-butila, - C(CH3)3), 1-pentila (n-pentila, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-pentila (- CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentila (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butila (- C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butila (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butila (- CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butila (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexila (- CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexila (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexila (- CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentila (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-metil- 2-pentila (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentila (- CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentila (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3- pentila (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butila (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butila (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptila, 1-octila, e similares.[0023] The term “alkyl” as used in the present invention refers to a linear or branched-chain saturated monovalent hydrocarbon radical of one to twelve carbon atoms (C1-C12), in which the alkyl radical may be optionally substituted independently with one or more substituents described below. In another exemplary embodiment, an alkyl radical is one to eight carbon atoms (C1-C8), or one to six carbon atoms (C1-C6). Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me, -CH3), ethyl (Et, -CH2CH3), 1-propyl (n-Pr, n-propyl, -CH2CH2CH3), 2-propyl (i- Pr, i-propyl, -CH(CH3)2), 1-butyl (n-Bu, n-butyl, -CH2CH2CH2CH3), 2-methyl-1-propyl (i-Bu, i-butyl, -CH2CH(CH3 )2), 2-butyl (s-Bu, s-butyl, -CH(CH3)CH2CH3), 2-methyl-2-propyl (t-Bu, t-butyl, - C(CH3)3), 1- pentyl (n-pentyl, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-pentyl (- CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentyl (-CH(CH2CH3)2), 2-methyl-2-butyl (- C(CH3)2CH2CH3), 3-methyl-2-butyl (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-methyl-1-butyl (- CH2CH2CH(CH3)2), 2-methyl-1-butyl (-CH2CH(CH3)CH2CH3 ), 1-hexyl (- CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexyl (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexyl (- CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-methyl-2-pentyl (-C(CH3)2CH2CH2CH3 ), 3-methyl-2-pentyl (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-methyl-2-pentyl (- CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-methyl-3-pentyl ( -C(CH3)(CH2CH3)2), 2-methyl-3-pentyl (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimethyl-2-butyl (-C(CH3)2CH(CH3) 2), 3,3-dimethyl-2-butyl (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptyl, 1-octyl, and the like.

[0024] Os termos “carbociclo”, “carbociclila”, “anel carbocíclico” e “cicloalquila” referem-se a anéis saturados ou parcialmente insaturados, monovalentes não aromáticos de 3 a 12 átomos de carbono (C3-C12) como um anel monocíclico ou 7 a 12 átomos de carbono como um anel bicíclico. Bicíclicos carbocíclicos contendo 7-12 átomos podem ser organizados, por exemplo, como um sistema bicíclo [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6] e bicíclico carbocíclicos contendo 9 ou 10 átomos no anel podem ser organizados como um sistema bicíclo [5,6] ou [6,6], ou como sistemas de ponte, tal como biciclo [2.2.1] heptano, biciclo [2.2.2] octano e biciclo [3.2.2] nonano. Grupos espiro carbocíclicos também estão incluídos no escopo desta definição. Exemplos de grupos espiro carbociclila incluem [2.2]pentanila, [2.3]hexanila e [2.4]heptanila. Exemplos de carbocíclicos monocíclicos incluem, mas não estão limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 1-ciclopento-1-enila, 1-ciclopento-2- enila, 1-ciclopento-3-enila, ciclohexila, 1-ciclohex-1-enila, 1-ciclohex-enil-2, 1-ciclohex-3-enila, ciclohexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, ciclononila, ciclodecila, cicloundecila, ciclododecila, e similares. Os grupos carbociclila são opcionalmente substituídos de forma independente por um ou mais substituintes descritos no presente.[0024] The terms “carbocycle”, “carbocyclyl”, “carbocyclic ring” and “cycloalkyl” refer to saturated or partially unsaturated, monovalent non-aromatic rings of 3 to 12 carbon atoms (C3-C12) such as a monocyclic ring or 7 to 12 carbon atoms as a bicyclic ring. Carbocyclic bicyclics containing 7-12 atoms can be organized, for example, as a [4,5], [5,5], [5,6] or [6,6] bicyclic system and carbocyclic bicyclics containing 9 or 10 atoms in the ring can be organized as a bicycle [5,6] or [6,6] system, or as bridge systems, such as bicycle [2.2.1] heptane, bicycle [2.2.2] octane, and bicycle [3.2.2] nonano. Spirocarbocyclic groups are also included in the scope of this definition. Examples of spiro carbocyclyl groups include [2.2]pentanyl, [2.3]hexanyl, and [2.4]heptanyl. Examples of monocyclic carbocyclics include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, 1-cyclopento-1-enyl, 1-cyclopento-2-enyl, 1-cyclopento-3-enyl, cyclohexyl, 1-cyclohex-1- enyl, 1-cyclohex-enyl-2, 1-cyclohex-3-enyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, cycloundecyl, cyclododecyl, and the like. The carbocyclyl groups are optionally independently substituted by one or more substituents described herein.

[0025] “Arila” indica um radical hidrocarboneto aromático monovalente de 6-20 átomos de carbono (C6-C20) derivados da remoção de um átomo de hidrogênio a partir de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático parental. Alguns grupos arila são representados nas estruturas exemplares como “Ar”. Arila inclui radicais biciclo compreendendo um anel aromático fundido a um anel saturado ou parcialmente insaturado, ou anel aromático carbocíclico. Grupos arila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais derivados de benzeno (fenila), benzenos substituídos, naftaleno, antraceno, bifenila, indenila, indanila, 1,2-dihidronaptaleno, 1,2,3,4- tetrahidronaptila, e similares. Os grupos arilas são opcionalmente substituídos de forma independente por um ou mais substituintes descritos no presente.[0025] “Aryl” indicates a monovalent aromatic hydrocarbon radical of 6-20 carbon atoms (C6-C20) derived from the removal of a hydrogen atom from a single carbon atom of a parent aromatic ring system. Some aryl groups are represented in the exemplary structures as “Ar”. Aryl includes bicyclic radicals comprising an aromatic ring fused to a saturated or partially unsaturated ring, or carbocyclic aromatic ring. Typical aryl groups include, but are not limited to, benzene (phenyl)-derived radicals, substituted benzenes, naphthalene, anthracene, biphenyl, indenyl, indanyl, 1,2-dihydronapthalene, 1,2,3,4-tetrahydronaptyl, and the like. . The aryl groups are optionally independently substituted by one or more substituents described herein.

[0026] Os termos “heterociclo”, “heterociclil” e “anel heterocíclico” são utilizados no presente de forma intercambiável e referem-se a um radical carbocíclico saturado ou parcialmente insaturado (ou seja, contendo uma ou mais ligações duplas e/ou triplas no anel) de 3 a cerca de 20 átomos no anel, no qual, pelo menos um átomo do anel é um heteroátomo selecionado a partir de hidrogênio, oxigênio, fósforo e enxofre, os átomos restantes do anel são C, no qual um ou mais átomos do anel é (são) opcionalmente substituído(s) de maneira independente por um ou mais dos substituintes descrito abaixo. Um heterociclo pode ser um monociclo contendo de 3 a 7membros no anel (2 a 6 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O, P e S), ou um bicíclico com 7 a 10 membros no anel (4 a 9 átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O, P e S), por exemplo: um sistema biciclo [4.5], [5.5], [5.6] ou [6.6]. Heterociclos são descritos em Paquette, Leo A.; “Principles of Modern Heterocíclicos Chemistry” (WA Benjamin, Nova Iorque, 1968), especialmente nos capítulos 1, 3, 4, 6, 7 e 9; “The Chemistry of Heterocyclic Coumpounds, A Series Monography”(John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1950), em especial nos volumes 13, 14, 16, 19 e 28, e J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. “Heterocíclicos” também incluem radicais em que os radicais heterociclos são fundidos com um anel saturado, parcialmente insaturado ou carbocíclico aromático ou anel heterocíclico. Exemplos de anéis heterocíclicos incluem, mas não estão limitados a, morfolin-4-ila, piperidin-1- ila, piperazinila, piperazin-4-il-2-ona, piperazin-4-il-3-ona, pirrolidin-1-ila, tiomorfolin-4-ila, S-dioxotiomorfolin-4-ila, azocan-1-ila, azetidin-1-ila, octahidropirido [1,2-a]pirazin-2-ila, [1,4]diazepan-1-ila, pirrolidinila, tetrahidrofuranila, dihidrofuranila, tetrahidrotienila, tetrahidropiranila, dihidropiranila, tetrahidrotiopiranila, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanila, piperazinila, homopiperazinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, homopiperidinila, oxepanila, tiepanila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, 2-pirrolinila, 3- pirrolinila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3-dioxolanila, pirazolinila, ditianila, ditiolanila, dihidropiranila, dihidrotienila, dihidrofuranila, pirazolidinilimidazolinila, imidazolidinila, 3-azabiciclo [3.1.0]hexanila, 3- azabiciclo [4.1.0]heptanila, azabiciclo [2.2.2]hexanila, 3H-indolil quinolizinila e N-piridil uréias. Grupos heterociclila também estão incluídos no escopo desta definição. Exemplos de porções espiro heterocíclilas incluem azaspiro [2.5]octanila e azaspiro [2.4]heptanila. Exemplos de um grupo heterocíclico onde 2 átomos do anel são substituídos por moléculas oxo (= O) são pirimidinonila e 1,1-dioxo-tiomorfolinila.[0026] The terms “heterocycle”, “heterocyclyl” and “heterocyclic ring” are used herein interchangeably and refer to a saturated or partially unsaturated carbocyclic radical (i.e., containing one or more double and/or triple bonds in the ring) of 3 to about 20 ring atoms, in which at least one ring atom is a heteroatom selected from hydrogen, oxygen, phosphorus and sulfur, the remaining ring atoms are C, in which one or more ring atoms is (are) optionally independently substituted by one or more of the substituents described below. A heterocycle can be a monocycle containing 3 to 7 ring members (2 to 6 carbon atoms and 1 to 3 heteroatoms selected from N, O, P and S), or a bicyclic with 7 to 10 ring members (4 to 9 carbon atoms and 1 to 4 heteroatoms selected from N, O, P and S), for example: a bicycle system [4.5], [5.5], [5.6] or [6.6]. Heterocycles are described in Paquette, Leo A.; “Principles of Modern Heterocyclic Chemistry” (W. A. Benjamin, New York, 1968), especially chapters 1, 3, 4, 6, 7 and 9; “The Chemistry of Heterocyclic Coumpounds, A Series Monograph” (John Wiley & Sons, New York, 1950), especially in volumes 13, 14, 16, 19 and 28, and J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. "Heterocyclic" also includes radicals in which the heterocyclic radicals are fused to a saturated, partially unsaturated, or aromatic carbocyclic ring or heterocyclic ring. Examples of heterocyclic rings include, but are not limited to, morpholin-4-yl, piperidin-1-yl, piperazinyl, piperazin-4-yl-2-one, piperazin-4-yl-3-one, pyrrolidin-1- yl, thiomorpholin-4-yl, S-dioxothiomorpholin-4-yl, azocan-1-yl, azetidin-1-yl, octahydropyrido [1,2-a]pyrazin-2-yl, [1,4]diazepan-1 -yl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, tetrahydrothienyl, tetrahydropyranyl, dihydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, piperidino, morpholino, thiomorpholino, thioxanyl, piperazinyl, homopiperazinyl, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, homopiperidinyl, oxepanil, thiepanyl, oxazepinyl, diazepinyl, thiazepinil, 2-pyrrolinyl , 3-pyrrolinyl, indolinyl, 2H-pyranyl, 4H-pyranyl, dioxanyl, 1,3-dioxolanyl, pyrazolinyl, dithianyl, dithiolanyl, dihydropyranyl, dihydrothienyl, dihydrofuranyl, pyrazolidinylimidazolinyl, imidazolidinyl, 3-azabicyclo [3.1.0]hexanyl, 3 - azabicyclo [4.1.0]heptanyl, azabicyclo [2.2.2]hexanyl, 3H-indolyl quinolizinyl and N-pyridyl ureas. Heterocyclyl groups are also included in the scope of this definition. Examples of heterocyclic spiro moieties include azaspiro [2.5]octanyl and azaspiro [2.4]heptanyl. Examples of a heterocyclic group where 2 ring atoms are replaced by oxo molecules (= O) are pyrimidinonyl and 1,1-dioxo-thiomorpholinyl.

[0027] O termo “heteroarila” refere-se a um radical aromático monovalente, de 5-, 6-, ou 7- membros de anel, e inclui sistemas de anéis fundidos (onde pelo menos um deles é aromático) de 5-20 átomos, contendo um ou mais heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Exemplos de grupos heteroaril são piridinila (incluindo, por exemplo, 2-hidroxipiridinila), imidazolila, imidazopiridinila, pirimidinila (incluindo, por exemplo, 4-hidroxipirimidinila), pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxadiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, quinolinila, isoquinolinila, tetrahidroisoquinolinila, indolila, benzimidazolila, benzofuranila, cinolinila, indazolila, indolizinila, ftalazinila, piridazinila, triazinila, isoindolila, pteridinila, purinila, oxadiazolila, triazolila, tiadiazolila, tiadiazolila, furazanila, benzofurazanila, benzotiofenila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinazolinila, quinoxalinila, naftiridinila e furopiridinila.[0027] The term “heteroaryl” refers to a monovalent aromatic radical, with 5-, 6-, or 7-ring members, and includes fused ring systems (where at least one of them is aromatic) of 5-20 atoms, containing one or more heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen and sulfur. Examples of heteroaryl groups are pyridinyl (including, for example, 2-hydroxypyridinyl), imidazolyl, imidazopyridinyl, pyrimidinyl (including, for example, 4-hydroxypyrimidinyl), pyrazolyl, triazolyl, pyrazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, isoxazolyl, thiazolyl, oxadiazolyl , oxazolyl, isothiazolyl, pyrrolyl, quinolinyl, isoquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, indolyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, cinolinyl, indazolyl, indolizinyl, phthalazinyl, pyridazinyl, triazinyl, isoindolyl, pteridinyl, purinyl, oxadiazolyl, triazolyl, thiadiazolyl, thiadiazolyl , furazanil, benzofurazanil, benzothiophenyl , benzothiazolyl, benzoxazolyl, quinazolinyl, quinoxalinyl, naphthyridinyl and furopyridinyl.

[0028] Os termos “tratar” e “tratamento” referem-se tanto ao tratamento terapêutico, em que o objetivo é abrandar (diminuir) uma mudança ou distúrbio fisiológico indesejável, como o desenvolvimento ou propagação da artrite ou do câncer. Para os propósitos da presente invenção, resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, alívio dos sintomas, diminuição da extensão da doença, estabilização (ou seja, a não piora) do estado de doença, atraso ou abrandamento da progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença, e remissão (seja ela parcial ou total), seja esta detectável ou indetectável. “Tratamento” também pode prolongar a sobrevida média, quando comparada com expectativa de sobrevida, se o tratamento não é administrado. Aqueles que precisam de tratamento incluem aqueles com a condição ou distúrbio.[0028] The terms “treat” and “treatment” refer to both therapeutic treatment, in which the objective is to slow down (decrease) an undesirable physiological change or disorder, such as the development or spread of arthritis or cancer. For purposes of the present invention, beneficial or desired clinical results include, but are not limited to, relief of symptoms, lessening of the extent of disease, stabilization (i.e., non-worsening) of the disease state, delay or slowing of disease progression. disease, improvement or palliation of the disease state, and remission (whether partial or total), whether detectable or undetectable. “Treatment” can also prolong median survival, when compared to expected survival, if treatment is not administered. Those who need treatment include those with the condition or disorder.

[0029] A expressão “quantidade terapeuticamente eficaz” refere- se a uma quantidade do composto da presente invenção que é capaz de (i) tratar a determinada doença, condição ou distúrbio, (ii) atenuar, melhorar ou eliminar um ou mais sintomas da doença, condição, distúrbio em particular, ou (iii) prevenir ou retardar o aparecimento de um ou mais sintomas da doença, condição ou distúrbio em particular descritos no presente. No caso do câncer, a quantidade terapeuticamente eficaz do medicamento pode reduzir o número de células do câncer, reduzir o tamanho do tumor; inibir (ou seja, reduzir até certo ponto e, de preferência, parar) a infiltração de células do câncer em órgãos periféricos; inibir (ou seja, reduzir até certo ponto e, de preferência, parar) a metástase do tumor, inibir, em alguma extensão, o crescimento tumoral e/ou aliviar em alguma extensão, um ou mais sintomas associados com o câncer. A medida que o fármaco pode impedir o crescimento e/ou matar as células cancerosas já existentes, ele pode ser considerado citostático e/ou citotóxico. Na terapia para o câncer, a eficácia pode ser mensurada, por exemplo, avaliando o tempo de progressão da doença (TTP) e/ou determinando a taxa de resposta (RR).[0029] The expression “therapeutically effective amount” refers to an amount of the compound of the present invention that is capable of (i) treating the given disease, condition or disorder, (ii) alleviating, improving or eliminating one or more symptoms of the particular disease, condition, disorder, or (iii) prevent or delay the onset of one or more symptoms of the particular disease, condition or disorder described herein. In the case of cancer, the therapeutically effective amount of the drug can reduce the number of cancer cells, reduce the size of the tumor; inhibit (i.e., reduce to some extent and preferably stop) the infiltration of cancer cells into peripheral organs; inhibit (i.e., reduce to some extent and, preferably, stop) tumor metastasis, inhibit, to some extent, tumor growth and/or alleviate to some extent, one or more symptoms associated with cancer. To the extent that the drug can prevent the growth and/or kill existing cancer cells, it can be considered cytostatic and/or cytotoxic. In cancer therapy, efficacy can be measured, for example, by assessing time to disease progression (TTP) and/or determining response rate (RR).

[0030] O termo “câncer” refere-se ou descreve a condição fisiológica em mamíferos que normalmente é caracterizada pelo crescimento de maneira não regulada das células. Um “tumor” compreende uma ou mais células cancerosas. Exemplos de cânceres incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, leucemias ou malignidades linfoides. Exemplos mais específicos desses cânceres incluem câncer de células escamosas (por exemplo, câncer de células epiteliais escamosas), câncer de pulmão incluindo o câncer de pulmão de pequenas células e o câncer de pulmão de células não pequenas (“NSCLC”), adenocarcinoma de pulmão e carcinoma escamoso de pulmão, câncer de peritônio, câncer hepatocelular, câncer gástrico ou de estômago incluindo o câncer gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer de colo do útero, câncer de ovário, câncer hepático, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer de reto, câncer colorretal, câncer de endométrio ou uterino, carcinoma de glândulas salivares, rins ou câncer renal, câncer de próstata, cânceres vulvares, câncer da tiroide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pênis, bem como câncer de cabeça e pescoço.[0030] The term “cancer” refers to or describes the physiological condition in mammals that is normally characterized by the unregulated growth of cells. A “tumor” comprises one or more cancer cells. Examples of cancers include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, leukemias, or lymphoid malignancies. More specific examples of these cancers include squamous cell cancer (e.g., squamous epithelial cell cancer), lung cancer including small cell lung cancer and non-small cell lung cancer (“NSCLC”), lung adenocarcinoma and squamous lung carcinoma, peritoneal cancer, hepatocellular cancer, gastric or stomach cancer including gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer , colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine cancer, salivary gland carcinoma, kidney or kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancers, thyroid cancer, liver carcinoma, anal carcinoma, penile carcinoma, as well such as head and neck cancer.

[0031] As “malignidades hematológicas” são os tipos de câncer que afetam o sangue, medula óssea e linfonodos. Como os três estão intimamente conectados através do sistema imunológico, uma doença que afeta um dos três também afetará os outros: embora o linfoma seja uma doença que acomete linfonodos, ele frequentemente se espalha para a medula óssea, afetando o sangue. As neoplasias malignas hematológicas são neoplasmas malignos (“câncer”) e geralmente são tratadas por especialistas em hematologia e/ou oncologia. Em alguns centros, “hematologia/oncologia” estão em uma única subespecialidade de medicina interna, enquanto que em outros centros são consideradas divisões separadas (há também oncologistas cirúrgicos e especializados em radioterapia). Nem todos os distúrbios hematológicos são malignos (“cancerosos”); essas outras condições no sangue também podem ser administradas por um hematologista. As neoplasias hematológicas podem derivar de uma das duas principais linhagens de células sanguíneas: linhagens mieloide e linfoide. A linhagem de células mieloides normalmente produz granulócitos, eritrócitos, trombócitos, macrófagos e mastócitos; e a linhagem de células linfoides produz células B, T, NK e plasmáticas. Os linfomas, leucemias linfocíticas e mieloma são da linhagem linfoide, enquanto a leucemia mielogênica aguda e crônica, síndromes mielodisplásicas e doenças mieloproliferativas são de origem mieloide. As leucemias incluem leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mielogênica crônica (CML), leucemia monocítica aguda (AMOL) e linfoma linfocítico pequeno (SLL). Os linfomas incluem os linfomas de Hodgkin (quatro subtipos) e linfomas não- Hodgkin (NHL, todos os subtipos).[0031] “Hematological malignancies” are types of cancer that affect the blood, bone marrow and lymph nodes. Because the three are closely connected through the immune system, a disease that affects one of the three will also affect the others: although lymphoma is a disease that affects lymph nodes, it often spreads to the bone marrow, affecting the blood. Hematological malignancies are malignant neoplasms (“cancer”) and are usually treated by specialists in hematology and/or oncology. In some centers, “hematology/oncology” are within a single subspecialty of internal medicine, while in other centers they are considered separate divisions (there are also surgical oncologists and radiation oncologists). Not all hematological disorders are malignant (“cancerous”); These other blood conditions can also be managed by a hematologist. Hematological malignancies can derive from one of two main blood cell lineages: myeloid and lymphoid lineages. The myeloid cell lineage normally produces granulocytes, erythrocytes, thrombocytes, macrophages, and mast cells; and the lymphoid cell lineage produces B, T, NK, and plasma cells. Lymphomas, lymphocytic leukemias, and myeloma are of the lymphoid lineage, while acute and chronic myelogenous leukemia, myelodysplastic syndromes, and myeloproliferative diseases are of myeloid origin. Leukemias include acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML), chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic myelogenous leukemia (CML), acute monocytic leukemia (AMOL), and small lymphocytic lymphoma (SLL). Lymphomas include Hodgkin lymphomas (four subtypes) and non-Hodgkin lymphomas (NHL, all subtypes).

[0032] Um “agente quimioterápico” é um composto químico útil no tratamento do câncer, independentemente do mecanismo de ação. As classes de agentes quimioterápicos incluem, mas não estão limitadas a: agentes alquilantes, antimetabólitos, alcaloides de espinhos de plantas venenosas, antibióticos citotóxicos/antitumorais, inibidores da topoisomerase, anticorpos, fotossensibilizadores e inibidores da quinase. Os agentes quimioterápicos incluem os compostos utilizados na “terapia-direcionada” e quimioterapia convencional. Exemplos de agentes quimioterápicos incluem: ibrutinib (IMBRUVICA™, APCI-32765, Pharmacyclics Inc./Janssen Biotech Inc.; CAS Reg. No. 936563-96-1, US 7.514.444), idelalisib (anteriormente CAL-101, GS 1101, GS-1101, Gilead Sciences Inc.; CAS Reg. No. 1146702-54-6), erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi- Aventis), 5-FU 5-FU (fluorouracila, 5-fluorouracila, CAS Reg. N° 51-21-8), gemcitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS N° 391210-10-9, Pfizer), cisplatina (Platinol®, (SP-4-2)-diaminodicloroplatina(II), cis-diamina, dicloroplatina(II), CAS N° 15663-27-1), carboplatina (CAS N° 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), temozolomida (4-metil-5-oxo- 2,3,4,6,8-pentazabiciclo [4.3.0]nona-2,7,9-trieno-9-carboxamida, CAS N° 8562293-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), tamoxifeno ((Z)-2- [4-(1,2- difenilbut-1-enil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) e doxorrubicina (ADRIAMYCIN®, CAS N° 23214-92-8), Akti-1/2, HPPD e rapamicina.[0032] A “chemotherapeutic agent” is a chemical compound useful in treating cancer, regardless of the mechanism of action. Classes of chemotherapeutic agents include, but are not limited to: alkylating agents, antimetabolites, poisonous plant thorn alkaloids, cytotoxic/antitumor antibiotics, topoisomerase inhibitors, antibodies, photosensitizers, and kinase inhibitors. Chemotherapeutic agents include compounds used in “targeted therapy” and conventional chemotherapy. Examples of chemotherapeutic agents include: ibrutinib (IMBRUVICA™, APCI-32765, Pharmacyclics Inc./Janssen Biotech Inc.; CAS Reg. No. 936563-96-1, US 7,514,444), idelalisib (formerly CAL-101, GS 1101 , GS-1101, Gilead Sciences Inc.; CAS Reg. No. 1146702-54-6), erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU 5-FU (fluorouracil, 5-fluorouracil, CAS Reg. No. 51-21-8), gemcitabine (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), cisplatin (Platinol®, (SP -4-2)-diaminodichloroplatinum(II), cis-diamine, dichloroplatinum(II), CAS No. 15663-27-1), carboplatin (CAS No. 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), temozolomide (4-methyl-5-oxo- 2,3,4,6,8-pentazabicyclo [4.3.0]none-2,7,9- triene-9-carboxamide, CAS No. 8562293-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plow), tamoxifen ((Z)-2-[4-(1,2-diphenylbut-1-enyl)phenoxy]-N, N-dimethylethaneamine, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) and doxorubicin (ADRIAMYCIN®, CAS No. 23214-92-8), Akti-1/2, HPPD and rapamycin.

[0033] Os agentes quimioterápicos incluem inibidores de alvos de receptores de células B, tais como inibidores BTK, Bcl-2 e JAK.[0033] Chemotherapeutic agents include inhibitors of B cell receptor targets, such as BTK, Bcl-2 and JAK inhibitors.

[0034] Mais exemplos de agentes quimioterápicos incluem: oxaliplatina (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), sutent (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), letrozolo (FEMARA®, Novartis), imatinib mesilato (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (inibidor da Mek, Exelixis, documento WO 2007/044515), ARRY-886 (inibidor da Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inibidor da PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inibidor da PI3K, Novartis), XL-147 (inibidor da PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorin (ácido folínico), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43- 9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecan (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE® (livres de Cremofor), formulação do paclitaxel desenvolvidas com nanopartículas de albumina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), cloranmbucila, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELCYTA®, Telik), tiotepa e ciclosfosfamida (CYTOXAN®, NEOSAR®); sulfonato de alquila como busulfan, improsulfan e piposulfan; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa, e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenemelamina, trietilenefosforamida, trietilenetiofosforamida e trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente a bulatacina e bulatacinona); uma camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecan); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (especialmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo seus análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; a sarcodictiina; espongistatina; mostardas do nitrogênio como clorambucila, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalan, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostardas da uracila; nitrosoureas como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, e ranimnustina; antibióticos como os antibióticos eledina (por exemplo, caliceamicina, caliceamicina gama1I, caliceamicina omegaI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicina, dinemicina A; bisfosfonatos, como clodronato; uma esperamicina; bem como neocarzinostatina cromóforo e antibióticos cromóforos de enedina relacionados a cromoproteína), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolina-doxorubicina, cianomorfolina-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina e deoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina,c idarubicina, nemorubicina, marcellomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabólitos como o metotrexato e 5- fluorouracila (5-FU); análogos do ácido fólico como a denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos da purina como fludarabina, 6- mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos da pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos como calusterona, dromostanolona propionato, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicosídeo; ácido aminolevulínico; eniluracila; amsacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; uma epotilona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiurea; lentinan; lonidainina; maitansinoides como a maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK® complexo polissacarídeo (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirana; espirogermanio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2'0,2”-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente a toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinosida (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos da platina como a cisplatina e carboplatina; vinblastina; etoposida (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrona; teniposida; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roche); ibandronato; CPT-11; inibidor da topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como ácido retinoico; e os sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.[0034] More examples of chemotherapeutic agents include: oxaliplatin (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), sutent (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), letrozole (FEMARA®, Novartis), imatinib mesylate (GLEEVEC ®, Novartis), , BEZ-235 (PI3K inhibitor, Novartis), ®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43- 9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecan (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE® (free from Cremofor), paclitaxel formulation developed with albumin nanoparticles (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), vandetanib ( rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), chlorammbucil, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), Pazopanib (GlaxoSmithKline), camphosphamide (TELCYTA®, Telik), thiotepa and cyclophosphamide (CYTOXAN®, NEOSAR®); alkyl sulfonate such as busulfan, improsulfan and piposulfan; aziridines such as benzodopa, carboquone, meturedopa, and uredopa; ethyleneimines and methylamelamines including altretamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide and trimethylomelamine; acetogenins (especially bulatacin and bulatacinone); a camptothecin (including the synthetic analogue topotecan); bryostatin; kallistatin; CC-1065 (including its synthetic analogues adozelesin, carzelesin and bizelesin); cryptophycins (especially cryptophycin 1 and cryptophycin 8); dolastatin; duocarmycin (including its synthetic analogues, KW-2189 and CB1-TM1); eleutherobine; pancratistatin; sarcodictiin; spongistatin; nitrogen mustards such as chlorambucil, chlornafazine, chlorophosphamide, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, melphalan, novembicin, phenesterine, prednimustine, trophosphamide, uracil mustards; nitrosoureas such as carmustine, chlorozotocin, fotemustine, lomustine, nimustine, and ranimnustine; antibiotics such as eledin antibiotics (e.g., calyceamicin, calyceamicin gamma1I, calyceamicin omegaI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dynemycin, dynemycin A; bisphosphonates such as clodronate; esperamycin; as well such as chromophore neocarzinostatin and chromoprotein-related enedine chromophore antibiotics), aclacinomysins, actinomycin, authramycin, azaserine, bleomycins, cactinomycin, carabicin, carminomycin, carzinophylline, chromomycins, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine , morpholine-doxorubicin, cyanomorpholine-doxorubicin, 2-pyrroline-doxorubicin and deoxidoxorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, nemorubicin, marcellomycin, mitomycins such as mitomycin C, mycophenolic acid, nogalamycin, olivomycins, peplomycin, porphyromycin, puromycin, chelamycin, rhodorubicin , streptonigrin, streptozocin, tubecidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin; anti-metabolites such as methotrexate and 5-fluorouracil (5-FU); folic acid analogues such as denopterin, methotrexate, pteropterin, trimetrexate; purine analogues such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiamiprine, thioguanine; pyrimidine analogues such as ancitabine, azacitidine, 6-azauridine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxifluridine, enocitabine, floxuridine; androgens such as calusterone, dromostanolone propionate, epithiostanol, mepitiostane, testolactone; anti-adrenal drugs such as aminoglutethimide, mitotane, trilostane; folic acid replenisher such as frolinic acid; aceglatone; aldophosphamide glycoside; aminolevulinic acid; enyluracil; amsacrine; bestrabucil; bisantrene; edatraxate; defofamine; demecolcine; diaziquone; elfornithine; elliptinium acetate; an epothilone; ethoglucide; gallium nitrate; hydroxyurea; lentinan; lonidainin; maytansinoids such as maytansine and ansamitocins; mitoguazone; mitoxantrone; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; losoxantrone; podophyllinic acid; 2-ethylhydrazide; procarbazine; PSK® polysaccharide complex (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxane; rhizoxin; sizophyran; spirogermanium; tenuazonic acid; triaziquone; 2,2'0,2”-trichlorotriethylamine; trichothecenes (especially T-2 toxin, verracurin A, roridin A and anguidin); urethane; vindesine; dacarbazine; mannomustine; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacytosin; arabinoside (“Ara-C”); cyclophosphamide; thiotepa; 6-thioguanine; mercaptopurine; methotrexate; platinum analogues such as cisplatin and carboplatin; vinblastine; etoposide (VP-16); ifosfamide; mitoxantrone; vincristine; vinorelbine (NAVELBINE®); novantrona; teniposide; edatrexate; daunomycin; aminopterin; capecitabine (XELODA®, Roche); ibandronate; CPT-11; topoisomerase inhibitor RFS 2000; difluoromethylornithine (DMFO); retinoids such as retinoic acid; and the pharmaceutically acceptable salts, acids or derivatives of any of the above.

[0035] Também incluídos nesta definição de “agentes quimioterápicos” estão: (i) agentes anti-hormonais que agem para regular ou inibir a ação hormonal sobre tumores, tais como antiestrógenos e moduladores seletivos de receptores de estrógeno (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo o NOLVADEX® tamoxifen), raloxifeno, droloxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, e FARESTON (citrato de toremifeno) e moduladores seletivos de receptores de estrogênio (SERDs), como fulvestrant (FASLODEX®, Astra Zeneca); (ii) inibidores da aromatase que inibem a enzima aromatase, o qual regula a produção de estrógeno pelas glândulas adrenais, como por exemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® acetato de megestrol, AROMASIN® (exemestana, Pfzer) formestano, fadrozolo, RIVISOR® (vorozolo), FEMARA® (letrozolo, Novartis), e ARIMIDEX® (anastrozole; AstraZeneca); (iii) anti- andrógenos, tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina; bem como, troxacitabina (um análogo da citisona 1,3-dioxolano nucleosideo); (iv) inibidores da proteína quinase, tal como inibidores da MEK quinase, tal como cobimetinib (WO 2007/044515); (v) inibidores do lipídeo quinase, tal como taselisib (GDC-0032, Genentech Inc.), (vi) oligonucleotídeos antisense, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes envolvidos na via de sinalização da proliferação celular aberrante, tais como, PKC-alfa, Ralf e H-Ras, tal como oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribizimas, tais como inibidores de expressão da VEGF, (por exemplo, ribozima AGIOZYME®) e inibidores da expressão de HER2, (viii) vacinas tais como, vacinas de terapia gênica, por exemplo, vacina ALLOVECTIN®, vacina LEUVECTIN®, e vacina VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inibidor da topoisomerase 1 LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes anti- angiogênicos, tais como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); e (x) sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis e derivados dos acima mencionados.[0035] Also included in this definition of “chemotherapeutic agents” are: (i) antihormonal agents that act to regulate or inhibit hormonal action on tumors, such as antiestrogens and selective estrogen receptor modulators (SERMs), including, for example, example, tamoxifen (including NOLVADEX® tamoxifen), raloxifene, droloxifene, 4-hydroxytamoxifen, trioxifen, keoxifen, LY117018, onapristone, and FARESTON (toremifene citrate) and selective estrogen receptor modulators (SERDs) such as fulvestrant (FASLODEX® , Astra Zeneca); (ii) aromatase inhibitors that inhibit the aromatase enzyme, which regulates estrogen production by the adrenal glands, such as 4(5)-imidazoles, aminoglutethimide, MEGASE® megestrol acetate, AROMASIN® (exemestan, Pfzer) formestane , fadrozole, RIVISOR® (vorozole), FEMARA® (letrozole, Novartis), and ARIMIDEX® (anastrozole; AstraZeneca); (iii) anti-androgens, such as flutamide, nilutamide, bicalutamide, leuprolide and goserelin; as well as, troxacitabine (an analogue of the cytisone 1,3-dioxolane nucleoside); (iv) protein kinase inhibitors, such as MEK kinase inhibitors, such as cobimetinib (WO 2007/044515); (v) lipid kinase inhibitors, such as taselisib (GDC-0032, Genentech Inc.), (vi) antisense oligonucleotides, particularly those that inhibit the expression of genes involved in the aberrant cell proliferation signaling pathway, such as, PKC- alpha, Ralf and H-Ras, such as oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribizymes, such as inhibitors of VEGF expression, (e.g., AGIOZYME® ribozyme) and inhibitors of HER2 expression, (viii) vaccines such as, gene therapy vaccines, e.g., ALLOVECTIN® vaccine, LEUVECTIN® vaccine , and VAXID® vaccine; PROLEUKIN® rIL-2; topoisomerase 1 inhibitor LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) anti-angiogenic agents, such as bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); and (x) pharmaceutically acceptable salts, acids or derivatives and derivatives of the aforementioned.

[0036] Também estão incluídos na definição de “agente quimioterápico” os anticorpos terapêuticos como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), trastuzumab emtansine (KADCYLA®, Genentech Inc.), e tositumomab (BEXXAR, Corixia).[0036] Also included in the definition of “chemotherapeutic agent” are therapeutic antibodies such as alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), trastuzumab emtansine (KADCYLA®, Genentech Inc.), and tositumomab (BEXXAR, Corixia).

[0037] Um “metabólito” é um produto produzido através do metabolismo do corpo de um composto específico ou sal deste. Metabólitos de um composto podem ser identificados por meio técnicas rotineiras conhecidas no estado da técnica e sua atividade pode ser determinada utilizando testes como os aqui descritos. Esses produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, redução, hidrólise, amidação, desamidação, esterificação, desesterificação, clivagem enzimática, e processos similares, do composto administrado. Consequentemente, a invenção abrange os metabólitos dos compostos da invenção, incluindo compostos produzidos por um processo que compreende a exposição do composto de Fórmula I da presente invenção a um mamífero por um período de tempo suficiente para produzir um produto metabólico deste.[0037] A “metabolite” is a product produced through the body's metabolism of a specific compound or salt thereof. Metabolites of a compound can be identified using routine techniques known in the art and their activity can be determined using tests such as those described here. These products may result, for example, from oxidation, reduction, hydrolysis, amidation, deamidation, esterification, deesterification, enzymatic cleavage, and similar processes, of the administered compound. Accordingly, the invention encompasses the metabolites of the compounds of the invention, including compounds produced by a process comprising exposing the compound of Formula I of the present invention to a mammal for a period of time sufficient to produce a metabolic product thereof.

[0038] O termo “bula” da forma como é utilizado no presente refere-se a instruções habitualmente incluídas nos recipientes comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informações sobre as indicações, utilização, posologia, administração, contraindicações e/ou advertências relativas à utilização de tais produtos terapêuticos.[0038] The term “package leaflet” as it is used herein refers to instructions usually included on commercial containers of therapeutic products, which contain information on indications, use, dosage, administration, contraindications and/or warnings relating to use of such therapeutic products.

[0039] O termo “quiral” refere-se a moléculas que têm a propriedade de não serem sobreponíveis sobre sua própria imagem, enquanto que o termo “aquiral” refere-se a moléculas que são sobreponíveis sobre sua imagem em espelho.[0039] The term “chiral” refers to molecules that have the property of not being superimposable over their own image, while the term “achiral” refers to molecules that are superimposable over their mirror image.

[0040] O termo “estereoisômeros” refere-se aos compostos que possuem composição química idêntica, mas diferem no que diz respeito ao arranjo dos átomos ou grupos no espaço.[0040] The term “stereoisomers” refers to compounds that have identical chemical composition, but differ with regard to the arrangement of atoms or groups in space.

[0041] “Diasterômero” refere-se a um estereoisômero com dois ou mais centros de quiralidade e cujas moléculas não são imagens em espelho uma da outra. Diasterômeros têm diferentes propriedades físicas, por exemplo, ponto de fusão, ponto de ebulição, propriedades espectrais e reatividade. Misturas de diasterômeros podem se separar sob procedimentos analíticos de alta resolução, tais como eletroforese e cromatografia.[0041] “Diasteromer” refers to a stereoisomer with two or more centers of chirality and whose molecules are not mirror images of each other. Diasteromers have different physical properties, e.g. melting point, boiling point, spectral properties and reactivity. Mixtures of diasteromers can separate under high-resolution analytical procedures such as electrophoresis and chromatography.

[0042] “Enantiômeros” refere-se a dois estereoisômeros de um composto que não são sobreponíveis sobre a imagem em espelho entre si.[0042] “Enantiomers” refers to two stereoisomers of a compound that are not superimposable on the mirror image of each other.

[0043] As definições e as convenções de estereoquímica usadas no presente seguem geralmente S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984) McGraw-Hill Book Company, Nova Iorque; e Eliel, E. e Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, 1994. Os compostos da invenção podem conter centros assimétricos ou quirais e, portanto, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Pretende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da invenção, incluindo, mas não limitados a, diastereômeros, enantiômeros e atropisômeros, bem como as suas misturas como, por exemplo, as misturas racêmicas, estejam incluídas e façam parte da presente invenção. Muitos compostos orgânicos existem em formas oticamente ativas, isto é, têm a habilidade de girar o plano do plano de luz polarizada. Na descrição de um composto oticamente ativo, os prefixos D e L, ou R e S, são usados para denotar a configuração absoluta da molécula sobre seus centro(s) quiral(is). Os prefixos d e l ou (+) e (-) são empregados para designar o sinal da rotação do plano de luz polarizada pelo composto, com (-) ou por 1 significando que o composto é levorotatório. Um composto prefixado com (+) ou d é dextrorrotatório. Para uma estrutura química dada, estes esterioisômeros são idênticos exceto por serem uma imagem em espelho entre si. Um estereoisômero específico pode também ser referido como um enantiômero, e uma mistura de tais isômeros é frequentemente denominada de mistura enantiomérica. Uma mistura 50:50 de enantiômeros é referida como a uma mistura racêmica ou racemato, que podem ocorrer onde não houver uma estereoseleção ou estereoespecificidade em uma reação química ou processo. Os termos “mistura racêmica” e “racemato” referem-se a uma mistura equimolar de duas espécies enantioméricas, isentas de atividade ótica. Os enantiômeros podem ser separados de uma mistura racêmica por um método de separação quiral, tal como cromatografia fluida supercrítica (SFC). A atribuição de configuração em centros quirais em enantiômeros separados pode ser tentada e representada nas estruturas da Tabela 1 para propósitos ilustrativos, enquanto que a estereoquímica é definitivamente estabelecida, tal como, por exemplo, a partir de dados cristalográficos de raios-x.[0043] The definitions and conventions of stereochemistry used herein generally follow S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Compounds of the invention may contain asymmetric or chiral centers and therefore exist in different stereoisomeric forms . It is intended that all stereoisomeric forms of the compounds of the invention, including, but not limited to, diastereomers, enantiomers and atropisomers, as well as mixtures thereof such as, for example, racemic mixtures, are included and form part of the present invention. Many organic compounds exist in optically active forms, that is, they have the ability to rotate the plane of polarized light. In describing an optically active compound, the prefixes D and L, or R and S, are used to denote the absolute configuration of the molecule about its chiral center(s). The prefixes d and l or (+) and (-) are employed to designate the sign of the rotation of the plane of polarized light by the compound, with (-) or 1 meaning that the compound is levorotatory. A compound prefixed with (+) or d is dextrorotatory. For a given chemical structure, these stereoisomers are identical except for being a mirror image of each other. A specific stereoisomer may also be referred to as an enantiomer, and a mixture of such isomers is often called an enantiomeric mixture. A 50:50 mixture of enantiomers is referred to as a racemic mixture or racemate, which can occur where there is no stereoselection or stereospecificity in a chemical reaction or process. The terms “racemic mixture” and “racemate” refer to an equimolar mixture of two enantiomeric species, free from optical activity. Enantiomers can be separated from a racemic mixture by a chiral separation method, such as supercritical fluid chromatography (SFC). The assignment of configuration at chiral centers in separate enantiomers can be attempted and represented in the structures of Table 1 for illustrative purposes, while the stereochemistry is definitively established, such as, for example, from x-ray crystallographic data.

[0044] Os termos “tautômero” ou “forma tautomérica” referem-se aos isômeros estruturais de diferentes energias que são intermutáveis através de uma barreira de baixa energia. Por exemplo, tautômeros prótons (também conhecido como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões através da migração de um próton, tal como as isomerizações ceto-enol e imina-enamina. Tautômeros de valência incluem interconversões pela reorganização de alguns dos elétrons de ligação.[0044] The terms “tautomer” or “tautomeric form” refer to structural isomers of different energies that are interchangeable across a low energy barrier. For example, proton tautomers (also known as prototropic tautomers) include interconversions through the migration of a proton, such as the keto-enol and imine-enamine isomerizations. Valence tautomers include interconversions by rearranging some of the bonding electrons.

[0045] O termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” designa sais que não são biologicamente ou de outra forma indesejáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácido e base. A expressão “farmaceuticamente aceitável” indica que a substância ou composição deve ser compatível quimicamente e/ou toxicologicamente com os outros ingredientes compreendidos uma formulação, e/ou para o mamífero a ser tratado com estes.[0045] The term “pharmaceutically acceptable salts” designates salts that are not biologically or otherwise undesirable. Pharmaceutically acceptable salts include acid and base addition salts. The expression “pharmaceutically acceptable” indicates that the substance or composition must be chemically and/or toxicologically compatible with the other ingredients comprising a formulation, and/or for the mammal to be treated with them.

[0046] O termo “sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável” designa os sais farmaceuticamente aceitáveis formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbônico, ácido fosfórico e ácidos orgânicos selecionados a partir de aril alifático, cicloalifático, aromático-alifáticos, heterocíclicos, carboxílicos e classes sulfônicas de ácidos orgânicos tais como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido glucônico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutâmico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido embônico, ácido fenilacético, “mesilato” de ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, e ácido salicílico.[0046] The term “pharmaceutically acceptable acid addition salt” designates pharmaceutically acceptable salts formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, carbonic acid, phosphoric acid and organic acids selected from aryl aliphatic, cycloaliphatic, aromatic-aliphatic, heterocyclic, carboxylic and sulfonic classes of organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, gluconic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malic acid, maleic acid, acid malonic acid, succinic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, aspartic acid, ascorbic acid, glutamic acid, anthranilic acid, benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, embonic acid, phenylacetic acid, methanesulfonic acid “mesylate”, ethanesulfonic acid , p-toluenesulfonic acid, and salicylic acid.

[0047] O termo “sal de adição de base farmaceuticamente aceitável” designa os sais farmaceuticamente aceitáveis formados com uma base orgânica ou inorgânica. Exemplos de bases inorgânicas aceitáveis incluem sais de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês e alumínio. Os sais derivados de bases não tóxicos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas básicas de troca iônica, tais como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glicosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina e resinas de poliamina.[0047] The term “pharmaceutically acceptable base addition salt” designates pharmaceutically acceptable salts formed with an organic or inorganic base. Examples of acceptable inorganic bases include sodium, potassium, ammonium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese and aluminum salts. Salts derived from pharmaceutically acceptable organic non-toxic bases include salts of primary, secondary and tertiary amines, substituted amines including naturally occurring substituted amines, cyclic amines and basic ion exchange resins such as isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, ethanolamine, 2-diethylaminoethanol, trimethamine, dicyclohexylamine, lysine, arginine, histidine, caffeine, procaine, hydrabamine, choline, betaine, ethylenediamine, glucosamine, methylglucamine, theobromine, purines, piperazine, piperidine, N-ethylpiperidine and polyamine resins.

[0048] Um “solvato” refere-se a uma associação ou complexo de uma ou mais moléculas solvente e um composto da invenção. Exemplos de solventes, que formam solvatos incluem, mas não se limitada a, água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e etanolamina.[0048] A “solvate” refers to an association or complex of one or more solvent molecules and a compound of the invention. Examples of solvents that form solvates include, but are not limited to, water, isopropanol, ethanol, methanol, DMSO, ethyl acetate, acetic acid and ethanolamine.

[0049]O termo “EC50” é a metade da concentração máxima eficaz e denota a concentração plasmática de um composto particular necessário para obter 50% do máximo de um efeito in vivo particular.[0049] The term “EC50” is half the maximum effective concentration and denotes the plasma concentration of a particular compound necessary to obtain 50% of the maximum of a particular in vivo effect.

[0050]O termo “Ki” é a constante de inibição e denota a afinidade de ligação absoluta de um inibidor particular a um receptor. Ele é medido usando ensaios de ligação de competição e é igual à concentração em que o inibidor particular iria ocupar 50% dos receptores se nenhum competidor concorrente (por exemplo, um radioligante) estivesse presente. Os valores Ki podem ser convertidos logaritmicamente em valores pKi (-log Ki), nos quais valores mais altos indicam uma potência exponencialmente maior.[0050] The term “Ki” is the inhibition constant and denotes the absolute binding affinity of a particular inhibitor to a receptor. It is measured using competitive binding assays and is equal to the concentration at which the particular inhibitor would occupy 50% of the receptors if no competing competitor (e.g., a radioligand) were present. Ki values can be converted logarithmically to pKi values (-log Ki), where higher values indicate exponentially greater potency.

[0051]O termo “IC50” é a metade da concentração inibitória máxima e indica a concentração de um composto particular necessária para obter 50% de inibição de um processo biológico in vitro. Os valores IC50 podem ser convertidos logaritmicamente em valores pIC50 (-log IC50), nos quais valores mais altos indicam uma potência exponencialmente maior. O valor IC50 não é um valor absoluto, mas depende das condições experimentais empregadas, por exemplo, as concentrações utilizadas e pode ser convertido para uma constante de inibição absoluta (Ki), usando a equação de Cheng-Prusoff (Biochem. Pharmacol. (1973) 22: 3099). Outros parâmetros percentuais de inibição, como IC70 , IC90, etc., podem ser calculados.[0051] The term “IC50” is half the maximum inhibitory concentration and indicates the concentration of a particular compound necessary to obtain 50% inhibition of an in vitro biological process. IC50 values can be converted logarithmically to pIC50 values (-log IC50), where higher values indicate exponentially greater potency. The IC50 value is not an absolute value, but depends on the experimental conditions employed, for example, the concentrations used, and can be converted to an absolute inhibition constant (Ki), using the Cheng-Prusoff equation (Biochem. Pharmacol. (1973 ) 22: 3099). Other percentage inhibition parameters such as IC70, IC90, etc. can be calculated.

[0052]Os termos “composto da invenção” e “compostos da presente invenção” e “compostos de Fórmula I” incluem compostos de Fórmula I e estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros, solvatos, metabólitos, sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-drogas dos mesmos.[0052] The terms “compound of the invention” and “compounds of the present invention” and “compounds of Formula I” include compounds of Formula I and stereoisomers, geometric isomers, tautomers, solvates, metabolites, pharmaceutically acceptable salts and prodrugs thereof .

[0053]Qualquer fórmula ou estrutura aqui fornecida, incluindo compostos de Fórmula I, também pretende representar hidratos, solvatos e polimorfos de tais compostos, e suas misturas.[0053] Any formula or structure provided herein, including compounds of Formula I, is also intended to represent hydrates, solvates and polymorphs of such compounds, and mixtures thereof.

[0054]Qualquer fórmula ou estrutura aqui fornecida, incluindo compostos de Fórmula I, também pretende representar formas não marcadas, bem como formas isotopicamente marcadas dos compostos. Os compostos isotopicamente marcados têm estruturas representadas pelas fórmulas aqui fornecidas, exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo que possui uma massa atômica ou um número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados aos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como, mas não se limitando a 2H (deutério, D), 3H (trítio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl e 125I. Diversos compostos isotopicamente marcados da presente invenção, por exemplo, aqueles com isótopos radioativos tais como 3H, 13C e 14C, são incorporados. Tais compostos isotopicamente marcados podem ser úteis em estudos metabólicos, estudos de cinética de reação, técnicas de detecção ou de imagem, tais como Tomografia por Emissão de Pósitrons (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de fotón único (SPECT) incluindo ensaios de distribuição tecidual do fármaco ou substrato ou tratamento radioativo dos pacientes. Os compostos terapêuticos marcados ou substituídos pelo deutério da invenção podem ter propriedades melhoradas de DMPK (metabolismo de fármacos e farmacocinética), relacionadas à distribuição, metabolismo e excreção (ADME). A substituição com isótopos mais pesados, como o deutério, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior estabilidade metabólica, por exemplo, aumento da meia-vida in vivo ou requisitos de dosagem reduzidos. Um composto marcado com 18F pode ser útil para estudos PET ou SPECT. Os compostos isotopicamente marcados da invenção e os seus pró-fármacos podem geralmente ser preparados executando os procedimentos descritos nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritos a seguir, substituindo um reagente isotopicamente marcado prontamente disponível por um reagente não isotopicamente marcado. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, particularmente o deutério (ou seja, H2 ou D) pode oferecer algumas vantagens terapêuticas decorrentes da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou necessidade de dosagens reduzidas ou uma melhoria no índice terapêutico. Entende-se que o deutério neste contexto é considerado como um substituinte no composto de fórmula (I). A concentração de um isótopo mais pesado, especificamente o deutério, pode ser definida por um fator de enriquecimento isotópico. Nos compostos da presente invenção, qualquer átomo não designado especificamente como um isótopo particular pretende representar qualquer isótopo estável desse átomo. Salvo se indicado de outra forma, quando uma posição é designada especificamente como “H” ou “hidrogênio”, entendem-se que a posição possui hidrogênio em sua composição isotópica de abundância natural. Consequentemente, nos compostos da invenção, qualquer átomo especificamente designado como um deutério (D) pretende representar deutério.[0054] Any formula or structure provided herein, including compounds of Formula I, is also intended to represent unlabeled forms as well as isotopically labeled forms of the compounds. Isotopically labeled compounds have structures represented by the formulas given herein, except that one or more atoms are replaced by an atom having a selected atomic mass or mass number. Examples of isotopes that can be incorporated into compounds of the invention include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, fluorine and chlorine, such as, but not limited to, 2H (deuterium, D), 3H (tritium), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl and 125I. Various isotopically labeled compounds of the present invention, for example, those with radioactive isotopes such as 3H, 13C and 14C, are incorporated. Such isotopically labeled compounds may be useful in metabolic studies, reaction kinetics studies, detection or imaging techniques such as Positron Emission Tomography (PET) or single photon emission computed tomography (SPECT) including tissue distribution assays. of the drug or substrate or radioactive treatment of patients. The deuterium-labeled or deuterium-substituted therapeutic compounds of the invention may have enhanced DMPK (drug metabolism and pharmacokinetics) related distribution, metabolism and excretion (ADME) properties. Substitution with heavier isotopes, such as deuterium, may provide certain therapeutic advantages resulting from greater metabolic stability, e.g., increased in vivo half-life or reduced dosage requirements. An 18F-labeled compound may be useful for PET or SPECT studies. The isotopically labeled compounds of the invention and their prodrugs can generally be prepared by carrying out the procedures described in the schemes or in the examples and preparations described below, substituting a readily available isotopically labeled reagent for a non-isotopically labeled reagent. Furthermore, substitution with heavier isotopes, particularly deuterium (i.e., H2 or D) may offer some therapeutic advantages arising from greater metabolic stability, e.g., increased in vivo half-life or need for reduced dosages or an improvement in therapeutic index. It is understood that deuterium in this context is considered as a substituent in the compound of formula (I). The concentration of a heavier isotope, specifically deuterium, can be defined by an isotopic enrichment factor. In the compounds of the present invention, any atom not specifically designated as a particular isotope is intended to represent any stable isotope of that atom. Unless otherwise indicated, when a position is specifically designated as “H” or “hydrogen”, the position is understood to have hydrogen in its naturally abundant isotopic composition. Accordingly, in the compounds of the invention, any atom specifically designated as a deuterium (D) is intended to represent deuterium.

COMPOSTOS DE BENZOXAZEPINA OXAZOLIDINONABENZOXAZEPINE OXAZOLIDINONE COMPOUNDS

[0055] A presente invenção fornece compostos de benzoxazepina oxazolidinona de Fórmula I, e suas formulações farmacêuticas, que são potencialmente úteis no tratamento do câncer, possuindo a estrutura: e estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R1é selecionado a partir de -CH3, -CH2CH3, ciclopropila, e ciclobutila; R2é selecionado a partir de -CH3, -CHF2, -CH2F, e -CF3.[0055] The present invention provides benzoxazepine oxazolidinone compounds of Formula I, and their pharmaceutical formulations, which are potentially useful in the treatment of cancer, having the structure: and stereoisomers, geometric isomers, tautomers and pharmaceutically acceptable salts thereof; wherein R1 is selected from -CH3, -CH2CH3, cyclopropyl, and cyclobutyl; R2 is selected from -CH3, -CHF2, -CH2F, and -CF3.

[0056] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é ciclopropila.[0056] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is cyclopropyl.

[0057] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é CH3 ou ciclopropila.[0057] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is CH3 or cyclopropyl.

[0058] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é CH3.[0058] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is CH3.

[0059] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R2é -CHF2.[0059] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R2 is -CHF2.

[0060] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R2é -CH2F.[0060] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R2 is -CH2F.

[0061] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é ciclopropila e R2é -CHF2.[0061] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is cyclopropyl and R2 is -CHF2.

[0062] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é ciclopropila e R2é -CH2F.[0062] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is cyclopropyl and R2 is -CH2F.

[0063] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem exemplos em que R1é CH3 e R2é -CHF2.[0063] Examples of embodiments of compounds of formula I include examples in which R1 is CH3 and R2 is -CHF2.

[0064] Exemplos de realização de compostos de fórmula I incluem os compostos na Tabela 1.[0064] Examples of embodiments of compounds of formula I include the compounds in Table 1.

[0065] Os compostos de Fórmula I da presente invenção podem conter centros assimétricos ou quirais e, portanto, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Pretende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da invenção, incluindo, mas não limitados a, diastereômeros, enantiômeros e atropisômeros, bem como as suas misturas como, por exemplo, as misturas racêmicas, estejam incluídas e façam parte da presente invenção. Em alguns casos, a estereoquímica não foi determinada ou era provisória.[0065] The compounds of Formula I of the present invention may contain asymmetric or chiral centers and, therefore, exist in different stereoisomeric forms. It is intended that all stereoisomeric forms of the compounds of the invention, including, but not limited to, diastereomers, enantiomers and atropisomers, as well as mixtures thereof such as, for example, racemic mixtures, are included and form part of the present invention. In some cases, stereochemistry was not determined or was tentative.

[0066] Além disso, a presente invenção abrange todos os diastereômeros, incluindo isômeros cis-trans(geométricos) e conformacionais. Por exemplo, se um composto de Fórmula I incorpora uma ligação dupla ou um anel fundido, tanto a forma cis- quanto a forma trans-, bem como misturas destas formas, são abrangidas dentro do escopo da presente invenção.[0066] Furthermore, the present invention covers all diastereomers, including cis-trans (geometric) and conformational isomers. For example, if a compound of Formula I incorporates a double bond or a fused ring, both the cis- and the trans- forms, as well as mixtures of these forms, are encompassed within the scope of the present invention.

[0067] Nas estruturas exibidas na presente invenção, onde a estereoquímica de qualquer átomo quiral em particular não é especificada, então todos os estereoisômeros são contemplados e incluídos como os compostos da invenção. Onde estereoquímica é especificada por uma cunha sólida ou linha tracejada representa uma configuração específica, então esse estereoisômero é assim determinado e definido.[0067] In the structures exhibited in the present invention, where the stereochemistry of any particular chiral atom is not specified, then all stereoisomers are contemplated and included as the compounds of the invention. Where stereochemistry is specified by a solid wedge or dashed line representing a specific configuration, then that stereoisomer is thus determined and defined.

[0068] Os compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas bem como em formas solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis, tal como a água, etanol, e similares, e pretende- se que a invenção abranja as formas solvatadas e não solvatadas.[0068] The compounds of the present invention can exist in unsolvated forms as well as in solvated forms with pharmaceutically acceptable solvents, such as water, ethanol, and the like, and it is intended that the invention covers both solvated and unsolvated forms.

[0069] Os compostos da presente invenção também podem existir em diferentes formas tautoméricas, e todas essas formas são abrangidas pelo escopo da invenção. Os termos “tautômero” ou “forma tautomérica” referem-se aos isômeros estruturais de diferentes energias que são intermutáveis através de uma barreira de baixa energia. Por exemplo, tautômeros prótons (também conhecido como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões através da migração de um próton, tal como as isomerizações ceto-enol e imina-enamina. Tautômeros de valência incluem interconversões pela reorganização de alguns dos elétrons de ligação.[0069] The compounds of the present invention can also exist in different tautomeric forms, and all these forms fall within the scope of the invention. The terms “tautomer” or “tautomeric form” refer to structural isomers of different energies that are interchangeable across a low-energy barrier. For example, proton tautomers (also known as prototropic tautomers) include interconversions through the migration of a proton, such as the keto-enol and imine-enamine isomerizations. Valence tautomers include interconversions by rearranging some of the bonding electrons.

AVALIAÇÃO BIOLÓGICABIOLOGICAL ASSESSMENT

[0070]As eficiências relativas de compostos de Fórmula I como inibidores de uma atividade enzimática (ou outra atividade biológica) podem ser estabelecidas determinando as concentrações em que cada composto inibe a atividade em uma extensão pré-definida e depois comparando os resultados. Tipicamente, a determinação preferida é a metade da concentração inibitória da atividade em um ensaio bioquímico, ou seja, a concentração inibidora de 50% ou “IC50”. Determinação dos valores IC50 pode ser realizada utilizando técnicas convencionais conhecidas no estado da técnica. Em geral, um valor de IC50 pode ser determinado medindo a atividade de uma determinada enzima, na presença de uma faixa de concentrações do inibidor em estudo. Os valores obtidos de maneira experimental da atividade da enzima são então plotados contra as concentrações de inibidores utilizadas. A concentração do inibidor que mostra 50% da atividade enzimática (como comparada com a atividade na ausência de qualquer inibidor) é tomado como o valor de IC50. Analogamente, outras concentrações inibitórias podem ser definidas através de determinações apropriadas de atividade. Por exemplo, em algumas configurações, pode ser desejável estabelecer uma concentração inibidora de 90%, ou seja, IC90, etc.[0070] The relative efficiencies of compounds of Formula I as inhibitors of an enzymatic activity (or other biological activity) can be established by determining the concentrations at which each compound inhibits the activity to a pre-defined extent and then comparing the results. Typically, the preferred determination is half the inhibitory concentration of activity in a biochemical assay, i.e., the 50% inhibitory concentration or “IC50”. Determination of IC50 values can be carried out using conventional techniques known in the art. In general, an IC50 value can be determined by measuring the activity of a given enzyme, in the presence of a range of concentrations of the inhibitor under study. The experimentally obtained values of enzyme activity are then plotted against the concentrations of inhibitors used. The concentration of inhibitor that shows 50% enzyme activity (as compared with the activity in the absence of any inhibitor) is taken as the IC50 value. Similarly, other inhibitory concentrations can be defined through appropriate activity determinations. For example, in some configurations, it may be desirable to establish an inhibitory concentration of 90%, i.e. IC90, etc.

[0071]Os compostos de Fórmula I exemplares na Tabela 1 foram preparados, caracterizados e testados para ligação a diversas isoformas e formas mutantes de PI3K de acordo com os métodos da invenção e possuem as seguintes estruturas, nomes correspondentes (ChemBioDraw, Versão 12.0.2, CambridgeSoft Corp ., Cambridge MA), e atividade biológica. Quando mais de um nome está associado a um composto de Fórmula I ou intermediário, a estrutura química deve definir o composto. TABELA 1 COMPOSTOS DE FÓRMULA I [0071] Exemplary compounds of Formula I in Table 1 were prepared, characterized and tested for binding to various isoforms and mutant forms of PI3K in accordance with the methods of the invention and have the following structures, corresponding names (ChemBioDraw, Version 12.0.2 , CambridgeSoft Corp ., Cambridge MA), and biological activity. When more than one name is associated with a Formula I or intermediate compound, the chemical structure must define the compound. TABLE 1 COMPOUNDS OF FORMULA I

TASELISIBTASELISIB

[0072] O composto conhecido como Taselisib, GDC-0032 e Roche RG7604 (N ° CAS 1282512-48-4, Genentech Inc.) tem um nome IUPAC: 2-(4- (2-(1-isopropil-3- metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)-1H-pirazol-1-il)-2-metilpropanamida e a estrutura: taselisib incluindo estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitável do mesmo.[0072] The compound known as Taselisib, GDC-0032 and Roche RG7604 (CAS No. 1282512-48-4, Genentech Inc.) has an IUPAC name: 2-(4- (2-(1-isopropyl-3- methyl -1H-1,2,4-triazol-5-yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-yl)-1H-pyrazol- 1-yl)-2-methylpropanamide and the structure: taselisib including stereoisomers, geometric isomers, tautomers and pharmaceutically acceptable salts thereof.

[0073] O Taselesib pode ser preparado e caracterizado conforme descrito nos documentos WO 2011/036280, US 8242104 e US 8343955.[0073] Taselesib can be prepared and characterized as described in documents WO 2011/036280, US 8242104 and US 8343955.

PICTILISIBPICTILISIB

[0074] O composto conhecido como Pictilisib, GDC-0941, Roche, RG-7321 e pictrelisib, (Reg. CAS 957054-30-7, Genentech Inc.) é um potente inibidor classe I (pan) multidirecionado das isoformas de PI3K. O GDC-0941 está atualmente em estudos clínicos de fase II para o tratamento de tumores sólidos avançados. O GDC-0941 é designado como 4-(2-(1H-indazol-4-il)-6-((4- (metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)tieno [3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (US 7.781.433; US 7.750.002; Folkes et al. (2008) Jour de Med. Chem. 51(18):5522-5532) e tem a estrutura: incluindo estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitável do mesmo.[0074] The compound known as Pictilisib, GDC-0941, Roche, RG-7321 and pictrelisib, (CAS Reg. 957054-30-7, Genentech Inc.) is a potent class I (pan) multitargeted inhibitor of PI3K isoforms. GDC-0941 is currently in phase II clinical trials for the treatment of advanced solid tumors. GDC-0941 is designated as 4-(2-(1H-indazol-4-yl)-6-((4-(methylsulfonyl)piperazin-1-yl)methyl)thiene[3,2-d]pyrimidin-4 -yl)morpholine (US 7,781,433; US 7,750,002; Folkes et al. (2008) Jour de Med. Chem. 51(18):5522-5532) and has the structure: including stereoisomers, geometric isomers, tautomers and pharmaceutically acceptable salts thereof.

ALPELISIBALPELISIB

[0075] O composto conhecido como alpelisib (BYL719, Novartis, CAS #: 1217486-61-7) é um inibidor oral, seletivo da isoforma alfa de PI3K e está em ensaios clínicos para o potencial tratamento de uma variedade de tipos de tumores, incluindo um estudo fase III em combinação com fulvestrant para tratar o câncer de mama metastático avançado receptor HER2 positivo de segunda linha (Furet, P. et al (2013) Bioorg. Med. Chem. Lett. 23:3741-3748; Patentes US 8.227.462; US 8.476.268; US 8.710.085). O alpelisib é designado (S)-N1-(4-metil-5-(2-(1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-il)piridin-4-il)tiazol-2- il)pirrolidina-1,2-dicarboxamida) e tem a estrutura: [0075] The compound known as alpelisib (BYL719, Novartis, CAS #: 1217486-61-7) is an oral, selective inhibitor of the alpha isoform of PI3K and is in clinical trials for the potential treatment of a variety of tumor types, including a phase III study in combination with fulvestrant to treat second-line HER2 receptor-positive advanced metastatic breast cancer (Furet, P. et al (2013) Bioorg. Med. Chem. Lett. 23:3741-3748; US Patents 8,227 ,462; US 8,476,268; US 8,710,085). Alpelisib is called (S)-N1-(4-methyl-5-(2-(1,1,1-trifluoro-2-methylpropan-2-yl)pyridin-4-yl)thiazol-2-yl)pyrrolidine -1,2-dicarboxamide) and has the structure:

[0076] A capacidade de um composto da invenção atuar como um inibidor com seletividade para PI3Ka sobre PI3Kß, PI3Kd e PI3KY foi determinada utilizando os métodos do Exemplo 901. Os valores Ki mostrados nas Tabelas 2A e 2B representam a média geométrica de um mínimo de três experimentos independentes, salvo quando indicado de outra forma.[0076] The ability of a compound of the invention to act as an inhibitor with selectivity for PI3Ka over PI3Kß, PI3Kd and PI3KY was determined using the methods of Example 901. The Ki values shown in Tables 2A and 2B represent the geometric mean of a minimum of three independent experiments, unless otherwise indicated.

INIBIÇÃO BIOQUÍMICA DAS ISOFORMAS DE PI3KBIOCHEMICAL INHIBITION OF PI3K ISOFORMS

[0077] A Tabela 2A mostra a inibição bioquímica de quatro isoformas de PI3K pelos compostos de Fórmula I da Tabela 1. Além disso, dois compostos para PI3K clinicamente testados, taselisib e pictilisib, são incluídos como comparadores. Os compostos representativos da invenção exibem uma forte atividade contra PI3Ka e exibem seletividade significativamente melhorada em relação às outras isoformas PI3Kß , PI3Kd e PI3KY quando comparados com taselisib (GDC-0032) e pictilisib (GDC-0941). Em particular, os coeficientes de seletividade no segundo a partir da coluna da direita da Tabela 2A mostram que cada um compostos de fórmula I (101-107) tem uma razão de seletividade para PI3K alfa em relação a isoforma delta muito maior do que o taselisib ou pictilisib. De fao, tanto o taselisib quanto o pictilisib têm uma atividade mais forte contra PI3K delta do que contra PI3K alfa, ou seja, suas razões de seletividade são menores que 1. Os coeficientes de seletividade do composto de Fórmula I, 101-107m variam de 301 vezes a 634 vezes.[0077] Table 2A shows the biochemical inhibition of four PI3K isoforms by the compounds of Formula I of Table 1. In addition, two clinically tested PI3K compounds, taselisib and pictilisib, are included as comparators. Representative compounds of the invention exhibit strong activity against PI3Ka and exhibit significantly improved selectivity towards the other isoforms PI3Kß, PI3Kd and PI3KY when compared to taselisib (GDC-0032) and pictilisib (GDC-0941). In particular, the selectivity coefficients in the second from the right column of Table 2A show that each compound of formula I (101-107) has a selectivity ratio for PI3K alpha relative to the delta isoform much greater than taselisib. or pictilisib. In fact, both taselisib and pictilisib have stronger activity against PI3K delta than against PI3K alpha, that is, their selectivity ratios are less than 1. The selectivity coefficients of the compound of Formula I, 101-107m vary from 301 times to 634 times.

[0078] A Tabela 2B mostra a inibição bioquímica de duas isoformas de PI3K, alfa e delta e as razões de seletividade da PI3K alfa para delta para alguns compostos comparativos do documento US 8.242.104 e um composto que possui um grupo dimetiloxazolidin-2-ona do documento US 8.263.633 (Composto 356, coluna 149). Os compostos de comparação mostrados aqui na Tabela 2B são exemplos dos gêneros amplos descritos em cada um dos documentos US 8.242.104 e US 8.263.633. As patentes US 8.242.104 e US 8.263.633 não descrevem um composto dentro do escopo dos compostos de Fórmula I da invenção. Embora os exemplos comparativos representativos da US 8.242.104, tal como descrito na Tabela 2B, demonstram razões de seletividade de PI3Ka (alfa) para PI3Kd (delta) > 1, a relação de seletividade máxima observada é de 46,9 vezes. Os compostos de Fórmula I 101-107, consequentemente, alcançam razões de seletividade significativamente mais elevadas do que os exemplos da patente US 8.242.104. Não há orientação nas Patentes US 8.242.104 ou US 8.263.633 para fazer a seleção de elementos estruturais dos compostos de Fórmula I para atingir a propriedade de alta seletividade para PI3K alfa versus PI3K delta. Esta propriedade inesperada de maior seletividade para PI3K alfa de 300 vezes é conservada em todo o espectro dos compostos exemplificados na Tabela 1.[0078] Table 2B shows the biochemical inhibition of two isoforms of PI3K, alpha and delta and the selectivity ratios of PI3K alpha to delta for some comparative compounds from US 8,242,104 and a compound that has a dimethyloxazolidin-2- group one of document US 8,263,633 (Compound 356, column 149). The comparison compounds shown here in Table 2B are examples of the broad genera described in each of US 8,242,104 and US 8,263,633. US Patents 8,242,104 and US 8,263,633 do not describe a compound within the scope of the Formula I compounds of the invention. Although the representative comparative examples of US 8,242,104, as described in Table 2B, demonstrate selectivity ratios of PI3Ka (alpha) to PI3Kd (delta) > 1, the maximum selectivity ratio observed is 46.9 times. The compounds of Formula I 101-107 therefore achieve significantly higher selectivity ratios than the examples of US patent 8,242,104. There is no guidance in US Patents 8,242,104 or US 8,263,633 for making the selection of structural elements of compounds of Formula I to achieve the property of high selectivity for PI3K alpha versus PI3K delta. This unexpected property of 300-fold greater selectivity for PI3K alpha is conserved across the entire spectrum of compounds exemplified in Table 1.

[0079] Os inibidores PI3K atuais em ensaios clínicos, tais como taselisib (WO 2011/036280; US 8.242.104; US 8.343.955), e outros exemplos representativos na US 8.242.104 exibem atividade significativa contra a isoforma PI3Kd (delta). Essa falta de seletividade versus PI3Kd (delta) é consistente com a toxicidade GI observada na clínica para o taselisib. Existe uma necessidade de inibidores de PI3Ka (alfa) que contenham as características favoráveis representativas dos exemplos da patente US 8.242.104 e que sejam simultaneamente sem atividade contra PI3Kd (delta). A presente invenção provê compostos que satisfazem esta atividade e perfil de seletividade.[0079] Current PI3K inhibitors in clinical trials, such as taselisib (WO 2011/036280; US 8,242,104; US 8,343,955), and other representative examples in US 8,242,104 exhibit significant activity against the PI3Kd (delta) isoform . This lack of selectivity versus PI3Kd (delta) is consistent with the GI toxicity observed in the clinic for taselisib. There is a need for PI3Ka (alpha) inhibitors that contain the favorable characteristics representative of the examples of US patent 8,242,104 and that are simultaneously without activity against PI3Kd (delta). The present invention provides compounds that satisfy this activity and selectivity profile.

[0080] A propriedade inesperada da seletividade para isoforma alfa de PI3K é vantajosa para remover a toxicidade gastrointestinal observada nos inibidores clínicos da PI3K candidatos. Dados clínicos recentes com inibidores da PI3K implicaram a atividade da PI3K delta como fonte de toxicidade gastrointestinal (Akinleye et al., “Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics” Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104). Veja a Tabela 2 dos inibidores de PI3K em ensaios clínicos, taselisib e pictilisib.[0080] The unexpected property of selectivity for PI3K alpha isoform is advantageous for removing the gastrointestinal toxicity observed in candidate clinical PI3K inhibitors. Recent clinical data with PI3K inhibitors have implicated PI3K delta activity as a source of gastrointestinal toxicity (Akinleye et al., “Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics” Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104) . See Table 2 for PI3K inhibitors in clinical trials, taselisib and pictilisib.

[0081] Com uma seletividade significativamente maior para a inibição de PI3Ka (alfa) em relação à inibição de PI3Kd (delta), os compostos de Fórmula I 101-107 poderiam, portanto, conseguir uma maior margem entre a atividade clínica impulsionada pela inibição de PI3Ka (alfa) em relação às toxicidades impulsionadas pela inibição de PI3Kd (delta), em comparação com o taselisib e pictilisib testados clinicamente ou qualquer um dos exemplos da US 8.242.104 ou US 8.263.633. Consequentemente, os compostos de Fórmula I da invenção podem ser úteis como agentes terapêuticos com um perfil de toxicidade relativamente diminuído em relação aos agentes que apresentam uma maior inibição das funções normais de PI3Kß, PI3Kd ou PI3KY. TABELA 2A INIBIÇÃO BIOQUÍMICA DAS ISOFORMAS DEPI3K POR COMPOSTOS DE FÓRMULA I E COMPOSTOS DE COMPARAÇÃO TASELISIB E PICTILISIB TABELA 2B INIBIÇÃO BIOQUÍMICA DE ISOFORMASPI3K POR COMPOSTOS DE COMPARAÇÃO * O valor de Ki representa a média de dois experimentos, ** O valor Ki representa um único experimento.[0081] With significantly greater selectivity for inhibition of PI3Ka (alpha) relative to inhibition of PI3Kd (delta), compounds of Formula I 101-107 could therefore achieve a greater margin between clinical activity driven by inhibition of PI3Ka (alpha) relative to toxicities driven by inhibition of PI3Kd (delta), compared to clinically tested taselisib and pictilisib or any of the examples in US 8,242,104 or US 8,263,633. Consequently, the compounds of Formula I of the invention may be useful as therapeutic agents with a relatively decreased toxicity profile relative to agents that exhibit a greater inhibition of the normal functions of PI3Kß, PI3Kd or PI3KY. TABLE 2A BIOCHEMICAL INHIBITION OF DEPI3K ISOFORMS BY COMPOUNDS OF FORMULA I AND COMPARISON COMPOUNDS TASELISIB AND PICTILISIB TABLE 2B BIOCHEMICAL INHIBITION OF ISOFORMASPI3K BY COMPARISON COMPOUNDS * The Ki value represents the average of two experiments, ** The Ki value represents a single experiment.

INTERAÇÕES DE COMPOSTOS COMPI3KCOMPI3K COMPOUND INTERACTIONS

[0082] Uma base racional para a seletividade à PI3Ka pelos compostos de Fórmula I pode residir em determinadas interações de ligação.[0082] A rational basis for selectivity to PI3Ka by compounds of Formula I may reside in certain binding interactions.

[0083] A capacidade de um composto da invenção de interagir especificamente com PI3Ka foi determinada pela resolução da estrutura de cocristais por raios-x dos compostos representativos com PI3Ka (alfa) utilizando os métodos do Exemplo 908. O design estrutural otimizado de inibidores da PI3K com seletividade para a isoforma PI3Ka sobre as outras isoformas pode incluir o posicionamento preciso e a disposição de átomos e grupos funcionais para interagir com resíduos específicos da isoforma no sítio de ligação. Particularmente, descobriu-se que a substituição na posição 9 e na posição 2 do sistema de anel do 5,6-dihidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepina tem impactos críticos sobre a atividade específica dos compostos contra PI3Ka.[0083] The ability of a compound of the invention to interact specifically with PI3Ka was determined by resolving the x-ray cocrystal structure of representative compounds with PI3Ka (alpha) using the methods of Example 908. Optimized structural design of PI3K inhibitors with selectivity for the PI3Ka isoform over other isoforms may include the precise positioning and arrangement of atoms and functional groups to interact with specific residues of the isoform in the binding site. Particularly, substitution at position 9 and position 2 of the 5,6-dihydrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxazepine ring system was found to have critical impacts on the specific activity of compounds against PI3Ka.

[0084] As Figuras 1A-D mostram as estruturas de cocristais por raios- x do taselisib (GDC-0032), composto de referência 529 (US 8.242.104) e dois compostos representativos da invenção com PI3Ka. Conforme mostrado na Figura 1A, o taselisib (GDC-0032) contém um grupo funcional de amida primária que está posicionado em próximo contato de Gln859 e Ser854, aparecendo para oferecer a possibilidade de interações de ligação de hidrogênio. O resíduo Gln859 é específico para a isoforma PI3Ka com um resíduo diferente ocupando esta posição em outras isoformas (PI3Kß = Asp, PI3Kd = Asn, PI3KY = Lis). Entretanto, apesar deste contato próximo com um resíduo específico de PI3Ka conforme medido em um ensaio bioquímico, GDC-0032 tem atividade igual em relação as duas isoformas PI3Ka e PI3Kd, e apenas uma atividade ligeiramente reduzida contra a isoforma PI3KY (vide a Tabela 2A).[0084] Figures 1A-D show the x-ray cocrystal structures of taselisib (GDC-0032), reference compound 529 (US 8,242,104) and two representative compounds of the invention with PI3Ka. As shown in Figure 1A, taselisib (GDC-0032) contains a primary amide functional group that is positioned in close contact with Gln859 and Ser854, appearing to offer the possibility of hydrogen bond interactions. The Gln859 residue is specific to the PI3Ka isoform with a different residue occupying this position in other isoforms (PI3Kß = Asp, PI3Kd = Asn, PI3KY = Lys). However, despite this close contact with a specific residue of PI3Ka as measured in a biochemical assay, GDC-0032 has equal activity against both isoforms PI3Ka and PI3Kd, and only slightly reduced activity against the PI3KY isoform (see Table 2A). .

[0085] Conforme ilustrado na Figura 1B, o composto de referência 529 (US 8.242.104) contém um grupo funcional amida primária em uma posição semelhante à do taselisib. Esta funcionalidade está dentro da distância apropriada e de geometria apropriada de ambos resíduos, Ser854 e Gln859, para fazer interações de ligação de hidrogênio. A relação de seletividade 46,9 vezes maior para PI3Ka em relação a PI3Kd (veja a Tabela 2B) pode ser racionalizada à luz dessas interações, e ao conhecimento de que a PI3Kd não contém um resíduo Gln na posição 859 e, portanto, essas interações devem ser específicas para PI3Ka.[0085] As illustrated in Figure 1B, reference compound 529 (US 8,242,104) contains a primary amide functional group in a position similar to that of taselisib. This functionality is within the appropriate distance and appropriate geometry of both residues, Ser854 and Gln859, to make hydrogen bonding interactions. The 46.9-fold selectivity ratio for PI3Ka over PI3Kd (see Table 2B) can be rationalized in light of these interactions, and the knowledge that PI3Kd does not contain a Gln residue at position 859 and therefore these interactions must be specific for PI3Ka.

[0086] As Figuras 1C e 1D mostram que a amida primária do grupo (S)-2-aminopropanamida do Composto 101 e o grupo (S)-2-amino-2- ciclopropilacetamida do Composto 103 ocupam um lugar muito semelhante ao sítio de ligação para as amidas primárias do GDC-0032 e do composto de referência 529 (US 8.242.104). Esta funcionalidade de amida primária em cada representante da invenção está dentro da distância apropriada e da geometria apropriada da Ser854 e Gln859 para fazer interações ideais de ligação de hidrogênio. Apesar das aparentes semelhanças na colocação e orientação do grupo funcional, os exemplos representativos ilustrados nas Figuras 1C e 1D, bem como outros compostos desta invenção com substituintes e funcionalidades semelhantes, melhoram as interações da amida primária tanto do taselisib como do composto de referência 529 (US 8.242.104) de tal modo que os compostos desta invenção são observados como tendo uma seletividade substancialmente aumentada para PI3Ka relação à PI3Kd quando mensurada em um ensaio bioquímico. O Composto 101 é 361 vezes seletivo e o Composto 103 é 634 vezes seletivo, um aumento substancial em relação ao composto de referência 529 (US 8.242.104) que é apenas 46,9 vezes seletivo. Diante da semelhança do posicionamento da funcionalidade de amida primária entre taselisib e outros compostos do documento US 8.242.104 (como exemplificado pelo composto de referência 529), a seletividade aumentada para PI3Ka em relação à PI3Kd, tal como demonstrado pelos compostos da presente invenção, é uma propriedade inesperada. Não há orientação nas Patentes US 8.242.104 ou US 8.263.633 para fazer a seleção de elementos estruturais dos compostos de Fórmula I para atingir a propriedade de alta seletividade para PI3Ka (> 300 vezes). Os compostos de Fórmula I da invenção melhoram as interações da amida primária do GDC-0032 de tal modo que os compostos da presente invenção são observados como tendo uma seletividade substancialmente aumentada para PI3Ka relação a PI3Kd quando medida em um ensaio bioquímico em relação aos compostos de comparação (vide as Tabelas 2A e 2B).[0086] Figures 1C and 1D show that the primary amide of the (S)-2-aminopropanamide group of Compound 101 and the (S)-2-amino-2-cyclopropylacetamide group of Compound 103 occupy a place very similar to the site of bond to the primary amides of GDC-0032 and reference compound 529 (US 8,242,104). This primary amide functionality in each representative of the invention is within the appropriate distance and appropriate geometry from Ser854 and Gln859 to make ideal hydrogen bond interactions. Despite apparent similarities in functional group placement and orientation, the representative examples illustrated in Figures 1C and 1D, as well as other compounds of this invention with similar substituents and functionalities, improve the primary amide interactions of both taselisib and reference compound 529 ( US 8,242,104) such that the compounds of this invention are observed to have substantially increased selectivity for PI3Ka over PI3Kd when measured in a biochemical assay. Compound 101 is 361-fold selective and Compound 103 is 634-fold selective, a substantial increase over reference compound 529 (US 8,242,104) which is only 46.9-fold selective. Given the similarity of the positioning of the primary amide functionality between taselisib and other compounds of US 8,242,104 (as exemplified by reference compound 529), the increased selectivity for PI3Ka over PI3Kd, as demonstrated by the compounds of the present invention, is an unexpected property. There is no guidance in US Patents 8,242,104 or US 8,263,633 to make the selection of structural elements of compounds of Formula I to achieve the property of high selectivity for PI3Ka (> 300 times). The compounds of Formula I of the invention enhance the primary amide interactions of GDC-0032 such that the compounds of the present invention are observed to have substantially increased selectivity for PI3Ka over PI3Kd when measured in a biochemical assay relative to compounds of comparison (see Tables 2A and 2B).

[0087] A Figura 2A mostra uma estrutura de raio-x do taselisib ligado no sítio PI3Ka (alfa). O átomo N2 do anel triazol não é capaz de interagir diretamente com a cadeia lateral de Tir836 (distância de 4,04 A) ou Ser774 (distância de 2,74 e 2,82 A, sem polaridade complementar entre o ligante e o resíduo). A Figura 2B mostra uma estrutura de raios-x do Composto 101 ligado no sítio ativo PI3Ka e mostra que o anel oxazolidinona é capaz de fazer múltiplas interações melhoradas com a proteína em relação ao anel triazol. A funcionalidade carbonila está próxima da cadeia lateral Tir836 (2,67 A) e capaz de fazer uma interação polar favorável. Um átomo de flúor do substituinte de oxazolidinona está em contato próximo (2,21 A) com o grupo hidroxila de Ser774 e é consistente com uma interação polar ou ligação de hidrogênio não clássica, uma interação favorável permitida pela polarização da ligação carbono-flúor (Bohm et. al, Fluorine in Medicinal Chemistry,(2004) ChemBioChem, 5:637-643; Zhou et. al, “Fluorine Bonding - How Does it Work In Protein-Ligand Interactions”, (2009) J. Chem. Inf. Model., 49:2344-2355).[0087] Figure 2A shows an x-ray structure of taselisib bound at the PI3Ka (alpha) site. The N2 atom of the triazole ring is not able to interact directly with the side chain of Tir836 (distance of 4.04 A) or Ser774 (distance of 2.74 and 2.82 A, without complementary polarity between the ligand and the residue) . Figure 2B shows an x-ray structure of Compound 101 bound in the PI3Ka active site and shows that the oxazolidinone ring is capable of multiple enhanced interactions with the protein relative to the triazole ring. The carbonyl functionality is close to the Tir836 side chain (2.67 A) and capable of making a favorable polar interaction. A fluorine atom of the oxazolidinone substituent is in close contact (2.21 A) with the hydroxyl group of Ser774 and is consistent with a polar interaction or nonclassical hydrogen bond, a favorable interaction permitted by the polarization of the carbon-fluorine bond ( Bohm et al, Fluorine in Medicinal Chemistry, (2004) ChemBioChem, 5:637-643; Zhou et al, “Fluorine Bonding - How Does it Work In Protein-Ligand Interactions”, (2009) J. Chem. Inf. Model., 49:2344-2355).

[0088] Todos os compostos da invenção contêm um anel oxazolidinona e são capazes de fazer a interação melhorada com Tir836 de PI3Ka (alfa). Alguns exemplos da invenção também contêm um substituinte fluorado no anel oxazolidinona e são capazes de fazer a interação melhorada com Ser774 de PI3Ka. Ambas as interações de ligação podem contribuir para a seletividade aumentada para PI3Ka observada para exemplos da invenção em relação aos exemplos da patente US 8.242.104. Conforme mostrado nas Tabelas 2A e 2B, os compostos que contêm o anel de oxazolidinona possuem maior seletividade de isoforma do que compostos comparáveis que contêm o anel triazol. Os resíduos Ser774 e Tir836 não são únicos para a isoforma PI3Ka, a PI3Kd contém estes mesmos resíduos nas mesmas posições, e a seletividade para isoforma melhorada dos inibidores oxazolidinona não está prevista por estas estruturas cristalinas. Diferenças sutis no posicionamento e orientação da mesma identidade de resíduos entre diferentes isoformas podem resultar de alterações sutis na estrutura da proteína secundária e terciária. Essas diferenças são difíceis de prever e interpretar mesmo em relação às estruturas cristalinas por raios-x de ambas as isoformas de proteínas. As propriedades surpreendentes e inesperadas de interações moleculares melhoradas e seletividade de isoformas reforçada de inibidores oxazolidinona são conservadas em todo o espectro dos compostos exemplificados na Tabela 1.[0088] All compounds of the invention contain an oxazolidinone ring and are capable of enhanced interaction with Tir836 of PI3Ka (alpha). Some examples of the invention also contain a fluorinated substituent on the oxazolidinone ring and are capable of enhanced interaction with Ser774 of PI3Ka. Both binding interactions may contribute to the increased selectivity for PI3Ka observed for examples of the invention relative to the examples of US patent 8,242,104. As shown in Tables 2A and 2B, compounds containing the oxazolidinone ring have greater isoform selectivity than comparable compounds containing the triazole ring. Residues Ser774 and Tir836 are not unique to the PI3Ka isoform, PI3Kd contains these same residues in the same positions, and the enhanced isoform selectivity of the oxazolidinone inhibitors is not predicted by these crystal structures. Subtle differences in the positioning and orientation of the same residue identity between different isoforms may result from subtle changes in secondary and tertiary protein structure. These differences are difficult to predict and interpret even with respect to the x-ray crystal structures of both protein isoforms. The surprising and unexpected properties of enhanced molecular interactions and enhanced isoform selectivity of oxazolidinone inhibitors are conserved across the spectrum of compounds exemplified in Table 1.

[0089] A oxazolidinona é estruturalmente diferenciada do triazol, na medida em que a oxazolidinona possui uma carbonila, é mais polar e não tem caráter aromático. O triazol não tem um grupo carbonila, é menos polar e tem caráter aromático.[0089] Oxazolidinone is structurally different from triazole, in that oxazolidinone has a carbonyl, is more polar and does not have an aromatic character. Triazole does not have a carbonyl group, is less polar and has an aromatic character.

[0090] O anel de oxazolidinona proporciona um benefício adicional em relação ao anel triazol em termos de aumento de caractere sp3 e contagem de anel aromático reduzido. Geralmente, é aceito na literatura que um número aumentado de anéis aromáticos está correlacionado com um risco aumentado de ligação promíscua. Em contraste, um aumento na fração de carbonos sp3 (n° carbonos sp3 / n° carbonos totais) está correlacionado com propriedades físico-químicas melhoradas e diminuição da ligação promíscua, diminuindo o risco de toxicologia fora do alvo. Esses conceitos são descritos nas referências Lovering et. al, “Escape From Flatland”, (2009) J. Med. Chem., 52:6752-6756 e Ritchie e Macdonald, “Physicochemical Descriptors of Aromatic Character and Their Use in Drug Discovery”, (2014) J. Med. Chem., 57:7206-7215. A substituição do anel aromático triazol tal como exemplificado por exemplos representativos do documento US 8.242.104 com um anel heterocíclico saturado, a oxazolidinona contida em todos os exemplos da invenção, representa uma diminuição favorável no risco de toxicologia fora do alvo. A totalidade dos compostos exemplificados no documento US 8.242.104 é predominantemente populada por compostos com anéis aromáticos nesta posição, 4 exemplos de um grupo funcional carboxamida que substitui o anel aromático e nenhum exemplo de sistemas cíclicos ou heterocíclicos saturados. Devido às interações de ligação significativamente diferentes e aos requisitos estéreis de heterociclos aromáticos e saturados, eles normalmente não são intercambiáveis. Sem exemplos de sistemas heterocíclicos saturados na posição 2 do anel 5,6-dihidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina, o documento US 8.242.104 não fornece nenhuma orientação sobre um método para substituir o anel aromático com um heterociclo saturado enquanto mantém a atividade contra PI3Ka.[0090] The oxazolidinone ring provides an additional benefit over the triazole ring in terms of increased sp3 character and reduced aromatic ring count. It is generally accepted in the literature that an increased number of aromatic rings is correlated with an increased risk of promiscuous binding. In contrast, an increase in the fraction of sp3 carbons (# sp3 carbons/# total carbons) is correlated with improved physicochemical properties and decreased promiscuous binding, decreasing the risk of off-target toxicology. These concepts are described in references Lovering et. al, “Escape From Flatland”, (2009) J. Med. Chem., 52:6752-6756 and Ritchie and Macdonald, “Physicochemical Descriptors of Aromatic Character and Their Use in Drug Discovery”, (2014) J. Med. Chem ., 57:7206-7215. Replacement of the aromatic triazole ring as exemplified by representative examples of US 8,242,104 with a saturated heterocyclic ring, the oxazolidinone contained in all examples of the invention, represents a favorable decrease in the risk of off-target toxicology. The totality of compounds exemplified in US 8,242,104 is predominantly populated by compounds with aromatic rings in this position, 4 examples of a carboxamide functional group that replaces the aromatic ring and no examples of saturated cyclic or heterocyclic systems. Due to the significantly different bonding interactions and sterile requirements of aromatic and saturated heterocycles, they are typically not interchangeable. With no examples of saturated heterocyclic systems at the 2-position of the 5,6-dihydrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxazepine ring, US 8,242,104 provides no guidance on a method for replacing the aromatic ring with a saturated heterocycle while maintaining activity against PI3Ka.

[0091] Consequentemente, os compostos da invenção contêm substituintes e funcionalidades otimizadas tanto na posição 9 como na posição 2 da 5,6-dihidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina. Esses compostos otimizados fornecem um benefício significativo e até agora desconhecido em relação a interações moleculares melhoradas e aumento da atividade seletiva contra PI3Ka, com atividade reduzida contra PI3Kd. Os compostos da invenção podem ser úteis como agentes terapêuticos com uma janela terapêutica melhorada em relação a agentes relacionados, tal como taselisib (GDC-0032).[0091] Consequently, the compounds of the invention contain substituents and optimized functionalities in both position 9 and position 2 of 5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepine. These optimized compounds provide a significant and hitherto unknown benefit regarding improved molecular interactions and increased selective activity against PI3Ka, with reduced activity against PI3Kd. Compounds of the invention may be useful as therapeutic agents with an improved therapeutic window over related agents such as taselisib (GDC-0032).

INIBIÇÃO SELETIVA DE PI3Ka (ALFA) MUTANTESELECTIVE INHIBITION OF MUTANT PI3Ka (ALPHA)

[0092] A capacidade de um composto da invenção para atuar preferencialmente contra células contendo mutante PI3Ka foi determinada pela medição da inibição da via PI3K em linhagens de células isogênicas SW48: PI3Ka tipo selvagem (parental), domínio helicoidal E545K mutante, e domínio quinase H1047R mutante, tal como descrito nos métodos do Exemplo 902.[0092] The ability of a compound of the invention to act preferentially against cells containing mutant PI3Ka was determined by measuring inhibition of the PI3K pathway in isogenic SW48 cell lines: wild-type (parental) PI3Ka, mutant E545K helical domain, and H1047R kinase domain mutant, as described in the methods of Example 902.

[0093] Análise Estatística: valores EC50 representam a média geométrica de um mínimo de 4 experimentos independentes, a menos que seja observado de outra forma. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando o software KaleidaGraph (versão 4.1.3). Um teste t de Student foi realizado utilizando dados não pareados com variância igual para comparar a atividade contra células mutantes e células tipo selvagem. P <0,05 é considerado estatisticamente significante.[0093] Statistical Analysis: EC50 values represent the geometric mean of a minimum of 4 independent experiments, unless otherwise noted. All statistical analyzes were performed using KaleidaGraph software (version 4.1.3). A Student's t test was performed using unpaired data with equal variance to compare activity against mutant cells and wild-type cells. P <0.05 is considered statistically significant.

[0094] A Tabela 3A mostra a inibição de P-PRAS40 em células isogênicas SW48 pelos compostos de Fórmula I da Tabela 1. Estes compostos exibem atividade aumentada contra células com PI3Ka mutante em relação às células com PI3Ka tipo selvagem. Os compostos da invenção mostram atividade semelhante ao do taselisib em células SW48 PI3Ka-mutantes, com seletividade igual ou maior do que o taselisib em relação à atividade sobre células PI3Ka tipo selvagem (vide a Tabela 3B).[0094] Table 3A shows the inhibition of P-PRAS40 in isogenic SW48 cells by compounds of Formula I of Table 1. These compounds exhibit increased activity against cells with mutant PI3Ka relative to cells with wild-type PI3Ka. The compounds of the invention show similar activity to taselisib in SW48 PI3Ka-mutant cells, with selectivity equal to or greater than taselisib in relation to activity over wild-type PI3Ka cells (see Table 3B).

[0095] A Tabela 3B mostra a inibição de P-PRAS40 em células isogênicas SW48 por certos compostos de comparação do documento US 8.242.104, um composto contendo um grupo dimetiloxazolidin-2-ona a partir do documento US 8.263.633 (Composto 356, coluna 149) e pictilisib. Os compostos de comparação mostrados aqui na Tabela 3B são exemplos dos gêneros amplos descritos em cada um dos documentos US 8.242.104 e US 8.263.633. As patentes US 8.242.104 e US 8.263.633 não descrevem um composto dentro do escopo dos compostos de Fórmula I da invenção. Os compostos de comparação contêm exemplos que não têm atividade significativamente aumentada para células PI3Ka- mutantes em relação às células PI3Ka-tipo selvagem (veja os compostos de comparação 436 e 549, p > 0,05). Estes compostos são estruturalmente muito semelhantes aos compostos de comparação que não exibem atividade significativamente aumentada para células PI3Ka-mutantes em relação às células PI3Ka-tipo selvagem (vide o composto de comparação 529). Não existe um elemento estrutural comum dentro dos compostos de comparação que fornece orientação para a inibição seletiva das células PI3Ka (alfa)-mutantes. Em termos mais amplos, não há nenhuma orientação em qualquer um das patentes US 8.242.104 ou US 8.263.633 para fazer a seleção de elementos estruturais dos compostos de fórmula I para se conseguir a atividade aumentada ou equivalente contra células PI3Ka-mutantes em relação às células PI3Ka-tipo selvagem. Esta propriedade inesperada é conservada em todo o espectro dos compostos exemplificados na Tabela 1. TABELA 3A INIBIÇÃO DEP-PRAS40 EM CÉLULAS ISOGÊNICAS SW48 PELOS COMPOSTOS DE FÓRMULA I TABELA 3B INIBIÇÃO DEP-PRAS40 EM CÉLULAS ISOGÊNICAS SW48 PELOS COMPOSTOS DE COMPARAÇÃO * EC50 representativo de um único experimento.[0095] Table 3B shows the inhibition of P-PRAS40 in isogenic SW48 cells by certain comparison compounds from US 8,242,104, a compound containing a dimethyloxazolidin-2-one group from US 8,263,633 (Compound 356 , column 149) and pictilisib. The comparison compounds shown here in Table 3B are examples of the broad genera described in each of US 8,242,104 and US 8,263,633. US Patents 8,242,104 and US 8,263,633 do not describe a compound within the scope of the Formula I compounds of the invention. Comparison compounds contain examples that do not have significantly increased activity for PI3Ka-mutant cells relative to PI3Ka-wild-type cells (see comparison compounds 436 and 549, p > 0.05). These compounds are structurally very similar to comparison compounds that do not exhibit significantly increased activity towards PI3Ka-mutant cells relative to PI3Ka-wild-type cells (see comparison compound 529). There is no common structural element within the comparator compounds that provides guidance for the selective inhibition of PI3Ka(alpha)-mutant cells. More broadly, there is no guidance in either US 8,242,104 or US 8,263,633 for selecting structural elements of compounds of formula I to achieve increased or equivalent activity against PI3Ka-mutant cells relative to to wild-type PI3Ka cells. This unexpected property is conserved across the spectrum of compounds exemplified in Table 1. TABLE 3 DEP-PRAS40 INHIBITION IN ISOGENIC SW48 CELLS BY COMPOUNDS OF FORMULA I TABLE 3B DEP-PRAS40 INHIBITION IN ISOGENIC SW48 CELLS BY COMPARISON COMPOUNDS * Representative EC50 from a single experiment.

ATIVIDADE ANTIPROLIFERATIVA EM CÉLULAS TUMORAIS PI3K MUTANTESANTIPROLIFERATIVE ACTIVITY IN PI3K MUTANT TUMOR CELLS

[0096] A capacidade de um composto da invenção em atuar em células tumorais PI3K mutantes foi determinada medindo o EC50 da viabilidade celular em células HCC1954 (PI3Ka-mutantes H1047R) e células MCF7 (PI3Ka-mutantes E545K) usando os métodos do Exemplo 903. A Tabela 4 mostra que os compostos representativos de Fórmula I, 101 e 103, da invenção são capazes de inibir a via PI3K e inibir a proliferação de células HCC1954 e células MCF7 com um nível de potência semelhante aos compostos de comparação taselisib (composto 196, US 8.242.104), pictilisib e composto 436 (US 8.242.104). TABELA 4 ATIVIDADE ANTIPROLIFERATIVA DE COMPOSTOS PI3K EM CÉLULAS TUMORAIS PI3K- ALFA MUTANTES [0096] The ability of a compound of the invention to act on PI3K mutant tumor cells was determined by measuring the EC50 of cell viability in HCC1954 cells (PI3Ka-mutant H1047R) and MCF7 cells (PI3Ka-mutant E545K) using the methods of Example 903. Table 4 shows that representative compounds of Formula I, 101 and 103, of the invention are capable of inhibiting the PI3K pathway and inhibiting the proliferation of HCC1954 cells and MCF7 cells with a level of potency similar to the comparator compounds taselisib (compound 196, US 8,242,104), pictilisib and compound 436 (US 8,242,104). TABLE 4 ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITY OF PI3K COMPOUNDS IN PI3K- ALPHA MUTANTS TUMOR CELLS

EFICÁCIA IN VIVOIN VIVO EFFICACY

[0097] As tabelas 5-8 mostram dados de estudos de inibição in vivo do crescimento tumoral (TGI) com compostos PI3K. A variação no volume tumoral foi medida por 20 dias ou mais em coortes de camundongos imunocomprometidos com xenoenxertos de câncer de mama, com tratamentos diários por administração oral (PO) com veículo e compostos PI3K (Exemplo 904).[0097] Tables 5-8 show data from in vivo tumor growth inhibition (TGI) studies with PI3K compounds. Change in tumor volume was measured for 20 days or more in cohorts of mice immunocompromised with breast cancer xenografts, with daily oral (PO) administration treatments with vehicle and PI3K compounds (Example 904).

[0098] A Tabela 5 mostra que, nas doses máximas toleradas (MTD), o GDC-0032 (taselisib), o Composto 103 e o Composto 101 são mais eficazes do que o alpelisib (BYL-719) em um modelo de tumor PI3K mutante.[0098] Table 5 shows that, at maximum tolerated doses (MTD), GDC-0032 (taselisib), Compound 103 and Compound 101 are more effective than alpelisib (BYL-719) in a PI3K tumor model mutant.

[0099] A Tabela 6 mostra que, em doses inferiores à dose máxima tolerada (ou seja, 25 mg/kg), o Composto 101 é mais eficaz do que GDC-0032 em um modelo de tumor PI3K-mutante. Existe potencial para maior índice terapêutico (TI) com o Composto 101, uma vez que a eficácia máxima é alcançada antes da tolerabilidade máxima.[0099] Table 6 shows that, at doses lower than the maximum tolerated dose (i.e., 25 mg/kg), Compound 101 is more effective than GDC-0032 in a PI3K-mutant tumor model. There is potential for higher therapeutic index (TI) with Compound 101, as maximum efficacy is achieved before maximum tolerability.

[0100] A Tabela 7 mostra que, nas doses máximas toleradas, as respostas aumentadas (PRs e CRs) são observadas com o Composto 101 comparado ao GDC-0032 em um modelo de tumor com PI3K-mutante. Além disso, nas doses máximas toleradas, GDC-0032 e BYL-719 são igualmente eficazes.[0100] Table 7 shows that, at maximum tolerated doses, increased responses (PRs and CRs) are observed with Compound 101 compared to GDC-0032 in a PI3K-mutant tumor model. Furthermore, at maximum tolerated doses, GDC-0032 and BYL-719 are equally effective.

[0101] A Tabela 8 mostra que, nas doses máximas toleradas, o GDC-0032 e o Composto 101 são mais eficazes do que BYL-719, e o Composto 101 é aproximadamente tão eficaz quanto o GDC-0032 em um modelo de tumor PI3K-mutante. TABELA 5 COMPARAÇÃO DE DOSES MÁXIMAS TOLERADAS (MTD) DE COMPOSTOS PI3K NO MODELO DE XENOENXERTO DE CÂNCER DE MAMA HCC-1954X1 (ER-, PI3KH1047R) TABELA 6 ESTUDO DO INTERVALO DE DOSAGEM DO COMPOSTO 101 NO MODELO DE XENOENXERTO DE CÂNCER DE MAMA HCC-1954X1 (ER-, PI3KH1047R) TABELA 7 ESTUDO DO INTERVALO DE DOSAGEM DO COMPOSTO 101 NO MODELO DE XENOENXERTO DE CÂNCER DE MAMA KPL-4 (ER-, PI3KH1047R) TABELA 8 COMPARAÇÃO DE GDC-0032, COMPOSTO 101 E BYL-719 NO MODELO DE XENOENXERTO PDX DE MAMA HCI-003 (ER+, PI3KH1047R) [0101] Table 8 shows that, at maximum tolerated doses, GDC-0032 and Compound 101 are more effective than BYL-719, and Compound 101 is approximately as effective as GDC-0032 in a PI3K tumor model -mutant. TABLE 5 COMPARISON OF MAXIMUM TOLERATED DOSES (MTD) OF PI3K COMPOUNDS IN THE HCC-1954X1 (ER-, PI3KH1047R) BREAST CANCER XENOGRAFT MODEL TABLE 6 STUDY OF THE DOSAGE INTERVAL OF COMPOUND 101 IN THE HCC-1954X1 (ER-, PI3KH1047R) BREAST CANCER XENOGRAFT MODEL TABLE 7 STUDY OF THE DOSAGE INTERVAL OF COMPOUND 101 IN THE KPL-4 (ER-, PI3KH1047R) BREAST CANCER XENOGRAFT MODEL TABLE 8 COMPARISON OF GDC-0032, COMPOUND 101 AND BYL-719 IN THE BREAST PDX XENOGRAFT MODEL HCI-003 (ER+, PI3KH1047R)

INIBIÇÃO DA VIA EM CÉLULAS B ISOLADASPATHWAY INHIBITION IN ISOLATED B CELLS

[0102]A capacidade de um composto da invenção de inibir a via PI3K em células B foi avaliada pela influência dos compostos nos níveis de CD69 pós-tratamento com a-IgM agonístico utilizando os métodos do Exemplo 906. Considera-se que a expressão de CD69 em células B resultantes do tratamento com a-IgM é conduzida pela sinalização através de PI3Kd (delta). A Tabela 9 mostra que compostos representativos de Fórmula 1 são inibidores mais seletivos da sinalização da via em uma linhagem de células mutantes para PI3K (SW48 (H1047R)) vs. Células B (coluna 3) em comparação com taselisib, pictilisib, alpelisib, composto 436 (US 8.242.104) e idelalisib. TABELA 9 INIBIÇÃO DA EXPRESSÃO DECD69 EM CÉLULAS B POR COMPOSTOS SELECIONADOS * IC50 da expressão de CD69 medida no sangue total humano e corrigida pela multiplicação por fu humano medido a partir de um experimento de ligação à proteína plasmática.[0102] The ability of a compound of the invention to inhibit the PI3K pathway in B cells was evaluated by the influence of the compounds on CD69 levels post-treatment with agonistic a-IgM using the methods of Example 906. It is considered that the expression of CD69 on B cells resulting from a-IgM treatment is driven by signaling through PI3Kd (delta). Table 9 shows that representative compounds of Formula 1 are more selective inhibitors of pathway signaling in a cell line mutant for PI3K (SW48 (H1047R)) vs. B cells (column 3) compared to taselisib, pictilisib, alpelisib, compound 436 (US 8,242,104), and idelalisib. TABLE 9 INHIBITION OF DECD69 EXPRESSION IN B CELLS BY SELECTED COMPOUNDS * IC50 of CD69 expression measured in human whole blood and corrected for multiplication by human fu measured from a plasma protein binding experiment.

INIBIÇÃO DA VIA EM CÉLULAS TUMORAIS PI3K-MUTANTES E TIPO SELVAGEMPATHWAY INHIBITION IN PI3K-MUTANTS AND WILD-TYPE TUMOR CELLS

[0103] A capacidade de um composto da invenção inibir a sinalização da via PI3K em células tumorais foi avaliada medindo os níveis de p-PRAS40 na linhagem de células HCC1954 (PI3Ka-mutante H1047R) e HDQ- P1 (PI3Ka tipo selvagem), utilizando os métodos do Exemplo 907. A Tabela 10 mostra que os compostos representativos de Fórmula 101, 103 e 105 são capazes de inibir a via PI3K de forma seletiva em células PI3Ka-mutantes (HCC1954, PI3Ka com mutação H1047R) vs. células PI3Ka tipo selvagem (HDQ-P1, PI3Ka tipo selvagem). Os compostos 101, 103 e 105 têm maior seletividade para o tipo mutante em relação ao tipo selvagem do que compostos de comparação; taselisib, pictilisib, alpelisib e composto 436 (US 8.242.104). TABELA 10 INIBIÇÃO DEP-PRAS40 NAS LINHAGENS HCC1954 E HDQ-P1 PELOS COMPOSTOS SELECIONADOS. [0103] The ability of a compound of the invention to inhibit PI3K pathway signaling in tumor cells was evaluated by measuring the levels of p-PRAS40 in the cell lines HCC1954 (PI3Ka-mutant H1047R) and HDQ-P1 (PI3Ka wild type), using the methods of Example 907. Table 10 shows that representative compounds of Formula 101, 103 and 105 are capable of selectively inhibiting the PI3K pathway in PI3Ka-mutant cells (HCC1954, PI3Ka with H1047R mutation) vs. wild-type PI3Ka cells (HDQ-P1, wild-type PI3Ka). Compounds 101, 103, and 105 have greater selectivity for the mutant relative to the wild type than comparison compounds; taselisib, pictilisib, alpelisib, and compound 436 (US 8,242,104). TABLE 10 DEP-PRAS40 INHIBITION IN HCC1954 AND HDQ-P1 LINES BY SELECTED COMPOUNDS.

DEGRADAÇÃO DE P110a EM CÉLULAS TUMORAIS PI3K-MUTANTESDEGRADATION OF P110a IN PI3K-MUTATING TUMOR CELLS

[0104]A capacidade de um composto da invenção diminuir os níveis de p110a foi determinada em experimentos com linhagens HCC1954 (PI3Ka-mutante H1047R) e HDQ-P1 (PI3Ka tipo selvagem), utilizando os métodos do Exemplo 905. As Figuras 3A e 3B mostram que os compostos de Fórmula 1 representativos 101 e 103 são capazes de promover a redução dos níveis de p110a de maneira seletiva em células PI3Ka- mutantes (HCC1954, PI3Ka-mutante H1047R) vs. células tumorais com PI3Ka tipo selvagem (HDQ-P1, PI3Ka-tipo selvagem) de maneira dependente da concentração. Figura 3A mostra dados dos resultados de Western blot que descrevem os níveis de p110a (p110a, p110 alfa) 24 horas após tratamento com o Composto 101, Composto 103 e Composto 436 da patente US 8.242.104 em células HCC-1954 (PI3Ka-mutante H1047R). Figura 3B mostra dados dos resultados de Western blot que descrevem os níveis de p110a (p110a, p110 alfa) 24 horas após tratamento com o Composto 101, Composto 103 e Composto 436 da patente US 8.242.104 em células HDQ-P1 (PI3Ka tipo selvagem). Os compostos 101 e 103 influenciam mais fortemente os níveis de p110a em comparação com o composto 436 (US 8.242.104).[0104] The ability of a compound of the invention to decrease p110a levels was determined in experiments with strains HCC1954 (PI3Ka-mutant H1047R) and HDQ-P1 (PI3Ka wild type), using the methods of Example 905. Figures 3A and 3B show that representative Formula 1 compounds 101 and 103 are capable of promoting the reduction of p110a levels selectively in PI3Ka-mutant cells (HCC1954, PI3Ka-mutant H1047R) vs. tumor cells with wild-type PI3Ka (HDQ-P1, PI3Ka-wild type) in a concentration-dependent manner. Figure 3A shows data from Western blot results describing the levels of p110a (p110a, p110 alpha) 24 hours after treatment with Compound 101, Compound 103 and Compound 436 of US patent 8,242,104 in HCC-1954 cells (PI3Ka-mutant H1047R). Figure 3B shows data from Western blot results describing the levels of p110a (p110a, p110 alpha) 24 hours after treatment with Compound 101, Compound 103 and Compound 436 of US patent 8,242,104 in HDQ-P1 cells (wild type PI3Ka ). Compounds 101 and 103 more strongly influence p110a levels compared to compound 436 (US 8,242,104).

ADMINISTRAÇÃO POR MÚLTIPLAS DOSES DIÁRIAS EM CÃESADMINISTRATION BY MULTIPLE DAILY DOSES IN DOGS

[0105] A capacidade de um composto da invenção promover a inflamação gastrointestinal e/ou sistêmica ou causar depleção linfoide foi avaliada através de avaliação de patologia clínica e anatômica após administração dos compostos por diversos dias em cães Beagle (7-14 dias). Os compostos de Fórmula 1, 101 e 103, em múltiplas exposições > 5 vezes acima do TGI60 (60% de inibição do crescimento tumoral em um estudo de xenoenxerto de PI3K) não promovem uma assinatura pró-inflamatória, conforme determinado pela patologia clínica ou avaliação da patologia anatômica (Tabela 11a, 11b). Da mesma forma, os compostos 101 e 103 produzem apenas pequenas quantidades de depleção linfoide em múltiplas exposições elevadas. Em contraste, os experimentos realizados com o composto de comparação taselisib indicam efeitos pró- inflamatórios significativos e depleção linfoide em < 0,3 vezes de exposição livre sobre TGI60 (Tabela 11c). Os compostos de comparação alpelisib (BYL-719) e o composto 436 (US 8.242.104) também causam inflamação e depleção linfoide em múltiplas exposições mais baixas em comparação com os compostos 101 e 103 da Fórmula 1 (Tabela 11d, 11e). A extensão e a gravidade das observações é consistente com o aumento da inibição de PI3Kd (delta) em múltiplas exposições sobre a IC50 de CD69 para os compostos de comparação. TABELA 11 MÚLTIPLAS DOSES DIÁRIAS DO COMPOSTO DE FÓRMULA 1 E COMPOSTOS COMPARATIVOS EM CÃES (A) [0105] The ability of a compound of the invention to promote gastrointestinal and/or systemic inflammation or cause lymphoid depletion was evaluated by evaluating clinical and anatomical pathology after administration of the compounds for several days in Beagle dogs (7-14 days). Compounds of Formula 1, 101 and 103, at multiple exposures >5 times above the TGI60 (60% inhibition of tumor growth in a PI3K xenograft study) do not promote a pro-inflammatory signature as determined by clinical pathology or assessment. of anatomical pathology (Table 11a, 11b). Likewise, compounds 101 and 103 produce only small amounts of lymphoid depletion at multiple high exposures. In contrast, experiments performed with the comparator compound taselisib indicate significant pro-inflammatory effects and lymphoid depletion at <0.3-fold free exposure on TGI60 (Table 11c). The comparison compounds alpelisib (BYL-719) and compound 436 (US 8,242,104) also cause inflammation and lymphoid depletion at multiple lower exposures compared to Formula 1 compounds 101 and 103 (Table 11d, 11e). The extent and severity of the observations is consistent with increased PI3Kd (delta) inhibition at multiple exposures over the IC50 of CD69 for the comparison compounds. TABLE 11 MULTIPLE DAILY DOSES OF THE COMPOUND OF FORMULA 1 AND COMPARATIVE COMPOUNDS IN DOGS (A)

[0106] Fu cão = 0.692; Fu camundongo = 0.252 (Fu = fração não ligada em espécies plasmáticas). 1 Múltiplas exposições usando TGI60 a partir de um estudo de xenoenxerto com KPL4 de 21 dias; TGI60 @ 2 mg/kg, 1,04 µM hr total, 0,26 µM hr livre. 2 * IC50 da expressão de CD69 estimulada por a-IgM (sangue total) = 67 nM. + Achados relacionados à inflamação e órgãos linfoides. [0106] Fu dog = 0.692; Mouse Fu = 0.252 (Fu = unbound fraction in plasma species). 1 Multiple exposures using TGI60 from a 21-day KPL4 xenograft study; TGI60 @ 2 mg/kg, 1.04 µM hr total, 0.26 µM hr free. 2 * IC50 of CD69 expression stimulated by a-IgM (whole blood) = 67 nM. + Findings related to inflammation and lymphoid organs.

[0107] Fu cão = 0,507; Fu camundongo = 0,03 (Fu = fração não ligada em espécies plasmáticas). * Múltiplas exposições usando TGI60 a partir de um estudo de TGI HCC1954 de 21 dias; TGI60 @ 3 mg/kg, 1,13 µM hr total, 0,03 µM hr livre. ** IC50 da expressão de CD69 estimulada por a-IgM (sangue total) = 142 nM + Achados relacionados à inflamação e órgãos linfoides. [0107] Fu dog = 0.507; Mouse Fu = 0.03 (Fu = unbound fraction in plasma species). * Multiple exposures using TGI60 from a 21-day TGI HCC1954 study; TGI60 @ 3 mg/kg, 1.13 µM hr total, 0.03 µM hr free. ** IC50 of CD69 expression stimulated by a-IgM (whole blood) = 142 nM + Findings related to inflammation and lymphoid organs.

[0108] Fu cão = 0,28; Fu camundongo = 0,10 (Fu = fração não ligada em espécies plasmáticas). 1 Múltiplas exposições usando TGI60 a partir de um estudo de xenoenxerto com KPL4 de 21 dias; TGI60 @ 4,3 µM hr (total), 0,44 µM hr livre. 2 * IC50 da expressão de CD69 estimulada por a-IgM (sangue total) = 3,1 nM. + Achados relacionados à inflamação e órgãos linfoides. [0108] Fu dog = 0.28; Mouse Fu = 0.10 (Fu = unbound fraction in plasma species). 1 Multiple exposures using TGI60 from a 21-day KPL4 xenograft study; TGI60 @ 4.3 µM hr (total), 0.44 µM hr free. 2 * IC50 of CD69 expression stimulated by a-IgM (whole blood) = 3.1 nM. + Findings related to inflammation and lymphoid organs.

[0109] Fu cão = 0,68; Fu camundongo = 0,36 (Fu = fração não ligada em espécies plasmáticas). 3 Múltiplas exposições usando TGI60 a partir de um estudo de xenoenxerto com KPL4 de 21 dias; TGI60 @ 2,8 µM hr total, 1,0 µM hr livre. 4 * IC50 da expressão de CD69 estimulada por a-IgM (sangue total) = 45 nM. + Achados relacionados à inflamação e órgãos linfoides. (e) [0109] Fu dog = 0.68; Mouse Fu = 0.36 (Fu = unbound fraction in plasma species). 3 Multiple exposures using TGI60 from a 21-day KPL4 xenograft study; TGI60 @ 2.8 µM hr total, 1.0 µM hr free. 4 * IC50 of CD69 expression stimulated by a-IgM (whole blood) = 45 nM. + Findings related to inflammation and lymphoid organs. (It is)

[0110] Fu cão = 0,072; Fu camundongo = 0,082 (Fu = fração não ligada em espécies plasmáticas). 5 Múltiplas exposições usando TGI60 a partir de um estudo de xenoenxerto com KPL4 de 21 dias; TGI60 @ 72 µM hr (total), 5,9 µM hr (livre). ** IC50 da expressão de CD69 estimulada por a-IgM (sangue total) = 613 nM. + Achados relacionados à inflamação e órgãos linfoides.[0110] Fu dog = 0.072; Mouse Fu = 0.082 (Fu = unbound fraction in plasma species). 5 Multiple exposures using TGI60 from a 21-day KPL4 xenograft study; TGI60 @ 72 µM hr (total), 5.9 µM hr (free). ** IC50 of CD69 expression stimulated by a-IgM (whole blood) = 613 nM. + Findings related to inflammation and lymphoid organs.

ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSTOS DE FÓRMULAIADMINISTRATION OF FORMULAI COMPOUNDS

[0111] Os compostos da invenção podem ser administrados por qualquer via adequada para a condição a ser tratada. As vias adequadas incluem oral, parenteral (inclusive por via subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intradérmica, intratecal e peridural), transdérmica, retal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. Para o tratamento imunossupressor local, os compostos podem ser administrados pela administração intralesional, incluindo a perfusão ou contato do enxerto com o inibidor antes do transplante. Será apreciado que a via preferida pode variar de acordo com, por exemplo, a condição do indivíduo receptor. Quando o composto de Fórmula I é administrado por via oral, ele pode ser formulado como uma cápsula, comprimido e etc., com um veículo farmaceuticamente aceitável ou excipiente. Quando o composto de Fórmula I é administrado por via parenteral, ele pode ser formulado com um veículo farmaceuticamente aceitável parenteral e em uma forma de dosagem unitária injetável, conforme detalhado abaixo.[0111] The compounds of the invention can be administered by any route suitable for the condition to be treated. Suitable routes include oral, parenteral (including subcutaneous, intramuscular, intravenous, intra-arterial, intradermal, intrathecal, and epidural), transdermal, rectal, nasal, topical (including buccal and sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonary, and intranasal. For local immunosuppressive treatment, compounds can be administered by intralesional administration, including perfusion or contact of the graft with the inhibitor before transplantation. It will be appreciated that the preferred route may vary according to, for example, the condition of the receiving individual. When the compound of Formula I is administered orally, it can be formulated as a capsule, tablet, etc., with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. When the compound of Formula I is administered parenterally, it can be formulated with a parenteral pharmaceutically acceptable carrier and in an injectable unit dosage form, as detailed below.

[0112] Uma dose para o tratamento de pacientes humanos pode variar de cerca de 1 mg a cerca de 1000 mg de um composto de Fórmula I. Uma dose típica pode ser de cerca de 10 mg a cerca de 300 mg do composto. A dose pode ser administrada uma vez por dia (QID), duas vezes por dia (BID), ou mais frequentemente, dependendo das propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas, incluindo a absorção, distribuição, metabolismo e excreção do composto específico. Além disso, os fatores de toxicidade podem influenciar a posologia e regime de administração. Quando administrado por via oral, a pílula, cápsula ou comprimido pode ser ingerido diariamente, ou com uma frequência menor por um período de tempo especificado. O esquema pode ser repetido para um número de ciclos de tratamento.[0112] A dose for treating human patients can range from about 1 mg to about 1000 mg of a compound of Formula I. A typical dose can be from about 10 mg to about 300 mg of the compound. The dose may be administered once daily (QID), twice daily (BID), or more frequently, depending on the pharmacokinetic and pharmacodynamic properties, including absorption, distribution, metabolism, and excretion of the specific compound. Furthermore, toxicity factors may influence the dosage and administration regimen. When administered orally, the pill, capsule, or tablet may be taken daily, or less frequently for a specified period of time. The regimen may be repeated for a number of treatment cycles.

MÉTODOS DE TRATAMENTO COM COMPOSTOS DE FÓRMULAITREATMENT METHODS WITH FORMULAI COMPOUNDS

[0113] Os compostos de Fórmula I da presente invenção são úteis para tratar um paciente humano ou animal que sofre de uma doença ou distúrbio resultante do crescimento, função ou comportamento celular anormal associado à PI3K, tal como o câncer, que podem ser tratados por um método que compreende a administração de um composto da presente invenção conforme definido acima ao humano ou animal. Um paciente humano ou animal que sofre de câncer também pode ser tratado por um método que compreende a administração de um composto da presente invenção conforme definido acima. A condição do paciente pode, dessa forma, ser melhorada ou amenizada.[0113] The compounds of Formula I of the present invention are useful for treating a human or animal patient suffering from a disease or disorder resulting from abnormal cellular growth, function or behavior associated with PI3K, such as cancer, which can be treated by a method comprising administering a compound of the present invention as defined above to a human or animal. A human or animal patient suffering from cancer can also be treated by a method comprising administering a compound of the present invention as defined above. The patient's condition can thus be improved or alleviated.

[0114] Os métodos da invenção também incluem o tratamento de câncer selecionado a partir de câncer de mama, ovário, colo do útero, próstata, testículos, trato genitourinário, esôfago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estômago, pele, ceratoacantoma, pulmão, carcinoma epidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma de pulmão de células não pequenas (NSCLC), carcinoma de células pequenas, adenocarcinoma de pulmão, ósseo, de cólon, adenoma, pâncreas, adenocarcinoma, de tireoide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma hepático e das vias biliares, carcinoma renal, pancreático, distúrbios mieloides, linfoma, de células pilosas, cavidade bucal, nasofaríngeo, de faringe, de lábio, de língua, de boca, de intestino delgado, de cólon-reto, de intestino grosso, de reto, cerebral e do sistema nervoso central, doença de Hodgkin, leucemia, brônquico, de tireoide, fígado e intra-hepático, hepatocelular, gástrico, glioma/glioblastoma, endometrial, melanoma, da pélvis renal e renal, de bexiga, corpo uterino, colo uterino, mieloma múltiplo, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfocítica, leucemia linfoide crônica (CLL), leucemia mieloide, cavidade oral e de faringe, linfoma não Hodgkin, melanoma e adenoma do cólon viloso.[0114] The methods of the invention also include treating cancer selected from cancer of the breast, ovary, cervix, prostate, testicles, genitourinary tract, esophagus, larynx, glioblastoma, neuroblastoma, stomach, skin, keratoacanthoma, lung, squamous cell carcinoma, large cell carcinoma, non-small cell lung carcinoma (NSCLC), small cell carcinoma, adenocarcinoma of lung, bone, colon, adenoma, pancreas, adenocarcinoma, thyroid, follicular carcinoma, undifferentiated carcinoma, papillary carcinoma , seminoma, melanoma, sarcoma, bladder carcinoma, hepatic and bile duct carcinoma, renal carcinoma, pancreatic carcinoma, myeloid disorders, lymphoma, hairy cell carcinoma, oral cavity, nasopharyngeal, pharyngeal, lip, tongue, mouth, small intestine, colon-rectum, large intestine, rectum, cerebral and central nervous system, Hodgkin's disease, leukemia, bronchial, thyroid, liver and intrahepatic, hepatocellular, gastric, glioma/glioblastoma, endometrial, melanoma , renal and renal pelvis, bladder, uterine body, cervix, multiple myeloma, acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia, lymphocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia (CLL), myeloid leukemia, oral cavity and pharynx, non-Hodgkin's lymphoma, melanoma and villous colon adenoma.

[0115] Com base na análise de expressão, análise imuno- histoquímica e no perfil das células, as malignidades do cólon, mama, colo do útero, estômago, pulmão e mieloma múltiplo são mais propensas a responder aos moduladores ou inibidores de PI3K.[0115] Based on expression analysis, immunohistochemical analysis and cell profiling, malignancies of the colon, breast, cervix, stomach, lung and multiple myeloma are more likely to respond to PI3K modulators or inhibitors.

[0116] A invenção diz respeito ao uso de um composto, tal como descrito acima para tratar o câncer em um paciente.[0116] The invention concerns the use of a compound as described above to treat cancer in a patient.

[0117] A invenção diz respeito ao uso de um composto aqui descrito para a fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer em um paciente.[0117] The invention concerns the use of a compound described here for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer in a patient.

[0118] A invenção diz respeito ao uso de um composto, tal como descrito acima, para uso no tratamento do câncer em um paciente.[0118] The invention relates to the use of a compound, as described above, for use in treating cancer in a patient.

[0119] A invenção diz respeito ao uso de um composto descrito acima para tratar o câncer em um paciente, em que o câncer é selecionado a partir de câncer de mama e câncer de pulmão de células não pequenas.[0119] The invention relates to the use of a compound described above to treat cancer in a patient, wherein the cancer is selected from breast cancer and non-small cell lung cancer.

[0120] A invenção diz respeito ao uso de um composto aqui descrito para a fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer em um paciente, em que o câncer é selecionado a partir de câncer de mama e câncer de pulmão de células não pequenas.[0120] The invention relates to the use of a compound described herein for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer in a patient, wherein the cancer is selected from breast cancer and non-small cell lung cancer.

[0121] A invenção diz respeito ao composto descrito acima para uso no tratamento do câncer em um paciente, em que o câncer é selecionado a partir de câncer de mama e câncer de pulmão de células não pequenas.[0121] The invention relates to the compound described above for use in treating cancer in a patient, wherein the cancer is selected from breast cancer and non-small cell lung cancer.

[0122] A invenção, tal como descrito acima.[0122] The invention, as described above.

FORMULAÇÕES FARMACÊUTICASPHARMACEUTICAL FORMULATIONS

[0123] A fim de utilizar um composto da presente invenção para o tratamento terapêutico de mamíferos incluindo humanos, o composto é normalmente formulado em conformidade com a prática farmacêutica padrão na forma de uma composição farmacêutica. De acordo com este aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.[0123] In order to use a compound of the present invention for the therapeutic treatment of mammals including humans, the compound is normally formulated in accordance with standard pharmaceutical practice in the form of a pharmaceutical composition. In accordance with this aspect of the invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention in association with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.

[0124] Uma formulação típica é preparada misturando os compostos da presente invenção e um veículo, diluente ou excipiente. Os veículos, diluentes e excipientes adequados são bem conhecidos aos técnicos hábeis no assunto e incluem materiais como carboidratos, ceras, solúveis em água e/ou polímeros gelificantes, materiais hidrofílicos ou hidrofóbicos, gelatina, óleos, solventes, água e similares. O veículo, diluente ou excipiente específico utilizado dependerá dos meios e fins para os quais os compostos da presente invenção serão aplicados. Os solventes são geralmente selecionados com base em solventes reconhecidos como seguros (GRAS) pelos técnicos hábeis no assunto para serem administrados a um mamífero. Em geral, solventes seguros são solventes aquosos atóxicos, como água e outros solventes atóxicos que são solúveis ou miscíveis em água. Solventes aquosos adequados incluem água, etanol, propileno glicol, polietileno glicol (por exemplo, PEG400, PEG300) e etc. e misturas destes. As formulações também podem incluir um ou mais tampões, agentes estabilizantes, tensoativos, umectantes, agentes lubrificantes, emulsificantes, agentes de suspensão, conservantes, antioxidantes, agentes de opaciamento, fluidificantes, aditivos de processamento, corantes, adoçantes, agentes de perfume, aromatizantes e outros agentes aditivos conhecidos para fornecer uma apresentação elegante do medicamento (ou seja, um composto da presente invenção ou composição farmacêutica deste) ou auxiliar na fabricação do produto farmacêutico (ou seja, o medicamento).[0124] A typical formulation is prepared by mixing the compounds of the present invention and a carrier, diluent or excipient. Suitable carriers, diluents and excipients are well known to those skilled in the art and include materials such as carbohydrates, waxes, water-soluble and/or gelling polymers, hydrophilic or hydrophobic materials, gelatin, oils, solvents, water and the like. The specific vehicle, diluent or excipient used will depend on the means and purposes for which the compounds of the present invention will be applied. Solvents are generally selected based on solvents recognized as safe (GRAS) by those skilled in the art to be administered to a mammal. In general, safe solvents are non-toxic aqueous solvents, such as water and other non-toxic solvents that are soluble or miscible in water. Suitable aqueous solvents include water, ethanol, propylene glycol, polyethylene glycol (e.g. PEG400, PEG300) and so on. and mixtures thereof. The formulations may also include one or more buffers, stabilizing agents, surfactants, humectants, lubricating agents, emulsifiers, suspending agents, preservatives, antioxidants, opacifying agents, fluidizers, processing additives, colorants, sweeteners, perfume agents, flavoring agents and other additive agents known to provide an elegant presentation of the medicament (i.e., a compound of the present invention or pharmaceutical composition thereof) or assist in the manufacture of the pharmaceutical product (i.e., the medicament).

[0125] As formulações podem ser preparadas usando procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Por exemplo, substância medicamentosa a granel (ou seja, o composto da presente invenção ou forma estabilizada do composto (por exemplo, complexo com um derivado da ciclodextrina ou outro agente complexante conhecido)) é dissolvida em um solvente adequado, na presença de um ou mais dos excipientes descritos acima. O composto da presente invenção é tipicamente formulado na forma de dosagens farmacêuticas facilmente controláveis para fornecer uma dose controlada do fármaco e permitir que o paciente cumpra com o regime prescrito.[0125] Formulations can be prepared using conventional dissolving and mixing procedures. For example, bulk drug substance (i.e., the compound of the present invention or stabilized form of the compound (e.g., complexed with a cyclodextrin derivative or other known complexing agent)) is dissolved in a suitable solvent, in the presence of one or more of the excipients described above. The compound of the present invention is typically formulated in the form of easily controllable pharmaceutical dosages to provide a controlled dose of the drug and allow the patient to comply with the prescribed regimen.

[0126] A composição farmacêutica (ou formulação) para o pedido pode ser embalado de diversas maneiras dependendo do método utilizado para a administração do fármaco. Geralmente, um artigo para a distribuição inclui um recipiente tendo depositado nele a fórmula farmacêutica em uma forma adequada. Recipientes adequados são bem conhecidos pelos técnicos hábeis no assunto e incluem materiais como garrafas (plástico e vidro), bolsas, ampolas, sacos plásticos, cilindros de metal, e similares. O recipiente pode também incluir a montagem de uma tampa inviolável para evitar o acesso imprudente ao conteúdo do pacote. Além disso, o recipiente possui um rótulo que descreve o conteúdo do recipiente. O rótulo também pode incluir avisos adequados.[0126] The pharmaceutical composition (or formulation) for the application can be packaged in several ways depending on the method used to administer the drug. Generally, an article for dispensing includes a container having deposited therein the pharmaceutical formula in a suitable form. Suitable containers are well known to those skilled in the art and include materials such as bottles (plastic and glass), pouches, ampoules, plastic bags, metal cylinders, and the like. The container may also include mounting a tamper-evident lid to prevent reckless access to the contents of the package. Additionally, the container has a label that describes the contents of the container. The label may also include appropriate warnings.

[0127] As formulações farmacêuticas dos compostos da presente invenção podem ser preparadas por várias vias e tipos de administração. Por exemplo, um composto da Fórmula I possuindo o grau de pureza desejado pode opcionalmente ser misturado com diluentes, veículos excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16a Edição, Ed.Osol, A.), na forma de uma formulação liofilizada, pó moído ou solução aquosa. A formulação pode ser realizada pela mistura em temperatura ambiente, em pH adequado, e com o grau de pureza desejado, com veículos fisiologicamente aceitáveis, ou seja, veículos que não sejam tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações empregadas. O pH da formulação depende principalmente do uso específico e da concentração dos compostos, mas pode variar entre cerca de 3 a 8. A formulação de um tampão acetato em pH 5 é uma realização adequada.[0127] Pharmaceutical formulations of the compounds of the present invention can be prepared by various routes and types of administration. For example, a compound of Formula I having the desired degree of purity may optionally be mixed with pharmaceutically acceptable diluents, carriers, excipients or stabilizers (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th Edition, Ed.Osol, A.), in the form of a formulation freeze-dried, ground powder or aqueous solution. The formulation can be made by mixing at room temperature, at an appropriate pH, and with the desired degree of purity, with physiologically acceptable vehicles, that is, vehicles that are not toxic to the recipients in the dosages and concentrations used. The pH of the formulation depends mainly on the specific use and concentration of the compounds, but can vary between about 3 to 8. Formulation of an acetate buffer at pH 5 is a suitable embodiment.

[0128] O composto normalmente pode ser armazenado como uma composição sólida, uma formulação liofilizada ou solução aquosa.[0128] The compound can normally be stored as a solid composition, a lyophilized formulation or aqueous solution.

[0129] As composições farmacêuticas da presente invenção serão formuladas, dosadas e administradas de um modo, ou seja, quantidades, concentrações, horários, curso, veículos e vias de administração, consistente com a boa prática médica. Fatores que devem ser considerados neste contexto incluem o distúrbio específico a ser tratado, a mamífero específico a ser tratado, a condição clínica do paciente, a causa do distúrbio, o local de entrega do agente, o método de administração, o esquema de administração e outros fatores conhecidos pelos médicos. O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” do composto a ser administrado será regido por tais considerações, e é a quantidade mínima necessária para melhorar ou tratar um distúrbio hiperproliferativo.[0129] The pharmaceutical compositions of the present invention will be formulated, dosed and administered in a manner, that is, amounts, concentrations, times, course, vehicles and routes of administration, consistent with good medical practice. Factors that must be considered in this context include the specific disorder being treated, the specific mammal being treated, the clinical condition of the patient, the cause of the disorder, the site of delivery of the agent, the method of administration, the schedule of administration, and other factors known to doctors. The term “therapeutically effective amount” of the compound to be administered will be governed by such considerations, and is the minimum amount necessary to ameliorate or treat a hyperproliferative disorder.

[0130] Como proposição geral, a quantidade inicial farmaceuticamente eficaz do inibidor administrado por via parenteral por dose estará na faixa de cerca de 0,01-100 mg/kg, ou seja, cerca de 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal do paciente por dia, com o intervalo inicial típico de compostos utilizados sendo de 0,3 a 15 mg/kg/dia.[0130] As a general proposition, the initial pharmaceutically effective amount of parenterally administered inhibitor per dose will be in the range of about 0.01-100 mg/kg, i.e., about 0.1 to 20 mg/kg of weight patient's body per day, with the typical starting range of compounds used being 0.3 to 15 mg/kg/day.

[0131] Os diluentes, veículos, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são atóxicos aos receptores nas dosagens e concentrações empregadas, e incluem tampões tais como fosfato, citrato, e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, ácool butílico ou benzilíco; alquil parabenos tais como metil- ou propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina do soro, gelatina, ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos, e outros carboidratos incluindo a glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açucares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal tal como sódio; complexos metálicos (tal como, complexos Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos tais como TWEEN®, PLURONICS® ou polietileno glicol (PEG). Os ingredientes farmaceuticamente ativos também podem ser armazenados em microcápsulas preparadas, por exemplo, através de técnicas de coacervação ou através de polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de fornecimento de drogas coloidais (por exemplo, lipossomos, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a Edição, Osol, A. Ed. (1980).[0131] Acceptable diluents, vehicles, excipients or stabilizers are non-toxic to receptors at the dosages and concentrations employed, and include buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl- or propylparaben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m- cresol); low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine, or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (such as Zn-protein complexes); and/or non-ionic surfactants such as TWEEN®, PLURONICS® or polyethylene glycol (PEG). Pharmaceutically active ingredients can also be stored in microcapsules prepared, for example, through coacervation techniques or through interfacial polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly-(methylmethacrylate) microcapsules, respectively, in drug delivery systems. colloidal drugs (e.g. liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or in macroemulsions. Such techniques are disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition, Osol, A. Ed. (1980).

[0132] Podem ser preparadas preparações de liberação controlada dos compostos de Fórmula I. Exemplos adequados de preparações de liberação prolongada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros sólidos hidrofóbicos contendo um composto de Fórmula I, no qual as matrizes são moldadas em forma de artigos, por exemplo, filmes ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de liberação prolongada incluem poliésteres, hidrogéis (tais como poli-(metacrilato de 2-hidroxietila) ou álcool poli-(vinílico)), poli- lactídeos (patente US 3773919), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama-etil L-glutamato, acetato de etilenovinila não degradável, copolímeros degradáveis de ácido láctico e ácido glicólico, tal como LUPRON DEPOT® (microesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido láctico e ácido glicólico e acetato de leuprolide) e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.[0132] Controlled-release preparations of compounds of Formula I can be prepared. Suitable examples of sustained-release preparations include semipermeable matrices of hydrophobic solid polymers containing a compound of Formula I, in which the matrices are molded into the form of articles, e.g. , films or microcapsules. Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels (such as poly(2-hydroxyethyl methacrylate) or poly(vinyl alcohol)), polylactides (US patent 3,773,919), copolymers of L-glutamic acid and gamma-ethyl L-glutamate, non-degradable ethylene vinyl acetate, degradable copolymers of lactic acid and glycolic acid, such as LUPRON DEPOT® (injectable microspheres composed of copolymer of lactic acid and glycolic acid and leuprolide acetate) and poly-D-(-) acid -3-hydroxybutyric.

[0133] As formulações incluem aquelas adequadas para as vias de administração detalhadas no presente. As formulações podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos conhecidos no estado da técnica farmacêutica. Técnicas e formulações são geralmente encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tais métodos incluem a etapa de fornecer em associação o ingrediente ativo com o veículo que contém um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas sob condições estéreis por indução uniforme e discreta na associação do ingrediente ativo com o veículo líquido ou finamente separado no veículo sólido, ou ambos, e depois, se necessário, moldando o produto.[0133] Formulations include those suitable for the routes of administration detailed herein. The formulations may conveniently be presented in unit dosage form and may be prepared by any of the methods known in the pharmaceutical art. Techniques and formulations are generally found in Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Such methods include the step of providing in association the active ingredient with the carrier containing one or more accessory ingredients. In general, formulations are prepared under sterile conditions by uniformly and discretely inducing association of the active ingredient with the liquid carrier or finely separated solid carrier, or both, and then, if necessary, shaping the product.

[0134] As formulações de um composto de Fórmula I adequado para a administração por via oral podem ser preparadas como unidades discretas, tais com pílulas, cápsulas, comprimidos ou selos cada uma contendo uma determinada quantidade de um composto de Fórmula I. Comprimidos prensados podem ser preparados pela compressão do ingrediente ativo em uma máquina apropriada em uma forma fluída livre, como um pó ou granulado, opcionalmente misturado com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, conservante, de superfície ativa ou agente dispersante. Comprimidos moldados podem ser feitos pela moldagem de uma mistura do ingrediente ativo em pó umidificado com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem ser opcionalmente revestidos ou marcados e são opcionalmente formulados de modo a proporcionar a liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo deste. Comprimidos, pastilhas, pílulas, suspensões aquosas ou óleo, pó ou grânulos dispersíveis, emulsões, cápsulas duras ou moles, por exemplo, cápsulas de gelatina, xaropes ou elixires podem ser preparados para o uso oral. As formulações de compostos de Fórmula I destinados a uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido no estado da técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes, incluindo agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes, a fim de proporcionar uma preparação palatável. Os comprimidos contendo o ingrediente ativo na mistura com excipientes atóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a fabricação de comprimidos são aceitáveis. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tal como o carbonato de cálcio ou de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou de sódio; agentes de granulação e desintegração, tais como o amido de milho, ou ácido algínico; agentes ligantes, tais como o amido, gelatina ou acácia e agentes lubrificantes, como o magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas, incluindo a microencapsulação para atrasar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, assim, proporcionar uma ação prolongada durante um período mais longo. Por exemplo, pode ser empregado um material de retardamento, tal como gliceril monoestearato ou gliceril distearato sozinho ou com uma cera.[0134] Formulations of a compound of Formula I suitable for oral administration can be prepared as discrete units, such as pills, capsules, tablets or stamps each containing a certain amount of a compound of Formula I. Compressed tablets can be prepared by compressing the active ingredient in a suitable machine into a free-flowing form, such as a powder or granule, optionally mixed with a binder, lubricant, inert diluent, preservative, surface-active or dispersing agent. Molded tablets can be made by molding a mixture of the moistened powdered active ingredient with an inert liquid diluent. The tablets may optionally be coated or scored and are optionally formulated to provide slow or controlled release of the active ingredient thereof. Tablets, lozenges, pills, aqueous or oil suspensions, dispersible powders or granules, emulsions, hard or soft capsules, for example, gelatin capsules, syrups or elixirs may be prepared for oral use. Formulations of compounds of Formula I intended for oral use may be prepared according to any method known in the art for the manufacture of pharmaceutical compositions and such compositions may contain one or more agents, including sweetening agents, flavoring agents, coloring agents and preservative agents in order to provide a palatable preparation. Tablets containing the active ingredient in admixture with pharmaceutically acceptable non-toxic excipients that are suitable for tablet manufacturing are acceptable. These excipients may be, for example, inert diluents, such as calcium or sodium carbonate, lactose, calcium or sodium phosphate; granulating and disintegrating agents, such as corn starch, or alginic acid; binding agents, such as starch, gelatin or acacia and lubricating agents, such as magnesium, stearic acid or talc. The tablets may be uncoated or may be coated by known techniques, including microencapsulation to delay disintegration and absorption in the gastrointestinal tract and thus provide prolonged action over a longer period. For example, a delay material such as glyceryl monostearate or glyceryl distearate may be employed alone or with a wax.

[0135] Para o tratamento dos olhos ou outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são preferencialmente aplicadas como uma pomada tópica ou creme contendo os ingredientes ativos em uma quantidade de, por exemplo, 0,075 a 20% p/p. Quando formulada em uma pomada, os princípios ativos podem ser empregados com qualquer base parafínica ou pomada miscível em água. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser formulados em uma base de creme óleo em água. Se desejado, a fase aquosa da base cremosa pode incluir um álcool poli-hídrico, ou seja, um álcool que contém dois ou mais grupos hidroxila, tais como propilenoglicol, 1,3-diol butano, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol (incluindo PEG 400) e misturas destes. Pode ser desejável que as formulações tópicas incluam um composto que melhore a absorção ou penetração da substância ativa através da pele ou de outras áreas afetadas. Exemplos deste tipo de potenciadores da penetração cutânea incluem dimetilsulfóxido e análogos relacionados. A fase oleosa das emulsões da presente invenção pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidos em uma maneira conhecida. Embora a fase possa compreender apenas um emulsificante, é desejável que a mistura contenha de pelo menos um emulsificante com uma gordura ou um óleo, ou ambas, gordura e óleo. Preferencialmente, um emulsificante hidrofílico é incluído juntamente com um emulsificante lipofílico, que age como um estabilizante. É também preferido que inclua tanto um óleo quanto uma gordura. Juntos, o(s) emulsificante(s) com ou sem estabilizante(s), perfazem a então chamada cera emulsificante, e a cera, juntamente com o óleo e a gordura formam a então chamada base de pomada emulsificante que constitui a fase dispersa oleosa nas formulações cremosas. Emulsificantes e estabilizantes de emulsão adequados para o uso na formulação da presente invenção incluem Tween® 60, Span® 80, álcool cetoestearílico, álcool benzílico, álcool miristílico, mono-estearato gliceril e laurilsulfato de sódio.[0135] For the treatment of eyes or other external tissues, for example, mouth and skin, the formulations are preferably applied as a topical ointment or cream containing the active ingredients in an amount of, for example, 0.075 to 20% w/w . When formulated into an ointment, the active ingredients can be used with any paraffinic base or water-miscible ointment. Alternatively, the active ingredients may be formulated in an oil-in-water cream base. If desired, the aqueous phase of the cream base may include a polyhydric alcohol, that is, an alcohol that contains two or more hydroxyl groups, such as propylene glycol, 1,3-diol butane, mannitol, sorbitol, glycerol and polyethylene glycol ( including PEG 400) and mixtures thereof. It may be desirable for topical formulations to include a compound that improves absorption or penetration of the active substance through the skin or other affected areas. Examples of this type of skin penetration enhancer include dimethyl sulfoxide and related analogues. The oil phase of the emulsions of the present invention can be constituted from known ingredients in a known manner. Although the phase may comprise only one emulsifier, it is desirable that the mixture contains at least one emulsifier with a fat or an oil, or both fat and oil. Preferably, a hydrophilic emulsifier is included together with a lipophilic emulsifier, which acts as a stabilizer. It is also preferred that it includes both an oil and a fat. Together, the emulsifier(s), with or without stabilizer(s), make up the so-called emulsifying wax, and the wax, together with the oil and fat form the so-called emulsifying ointment base that constitutes the oily dispersed phase. in creamy formulations. Emulsifiers and emulsion stabilizers suitable for use in the formulation of the present invention include Tween® 60, Span® 80, cetostearyl alcohol, benzyl alcohol, myristyl alcohol, glyceryl monostearate and sodium lauryl sulfate.

[0136] As suspensões aquosas de compostos de Fórmula I contém materiais ativos na mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes incluem um agente de suspensão, como carboximetilcelulose de sódio, croscarmelose, povidona, metilcelulose hidroxipropil metilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma de acácia, e dispersantes ou agentes umectantes como uma fosfatida natural (por exemplo, lecitina), um produto de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos (por exemplo, estearato de polioxietileno), um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool de cadeia alifática longa (por exemplo, heptadecaetilenoxicetanol), um produto de condensação do óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um anidrido hexitol (por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano). A suspensão aquosa também pode conter um ou mais conservantes, como etila ou n-propila p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes de coloração, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.[0136] Aqueous suspensions of compounds of Formula I contain active materials in mixture with excipients suitable for the manufacture of aqueous suspensions. Such excipients include a suspending agent such as sodium carboxymethylcellulose, croscarmellose, povidone, methylcellulose hydroxypropyl methylcellulose, sodium alginate, polyvinylpyrrolidone, gum tragacanth and acacia gum, and dispersants or wetting agents such as a natural phosphatide (e.g. lecithin), a condensation product of an alkylene oxide with fatty acids (e.g. polyoxyethylene stearate), a condensation product of ethylene oxide with a long aliphatic alcohol (e.g. heptadecaethylenexycetanol), a condensation product of alkylene oxide ethylene with a partial ester derived from a fatty acid and a hexitol anhydride (e.g. polyoxyethylene sorbitan monooleate). The aqueous suspension may also contain one or more preservatives, such as ethyl or n-propyl p-hydroxybenzoate, one or more coloring agents, one or more flavoring agents, and one or more sweetening agents, such as sucrose or saccharin.

[0137] As composições farmacêuticas de compostos de Fórmula I podem estar na forma de uma preparação injetável estéril, como uma solução aquosa ou suspensão oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com o estado da técnica usando agentes dispersantes ou umectantes adequados e os agentes de suspensão que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente atóxico parenteralmente aceitável, como uma solução em 1,3-butano-diol ou preparado como um pó liofilizado. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão; a água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos estéreis fixos podem ser empregados convenientemente como um meio solvente ou de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo suave pode ser empregado, incluindo mono ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como ácido oleico também poderá ser usado na preparação de injetáveis.[0137] Pharmaceutical compositions of compounds of Formula I may be in the form of a sterile injectable preparation, such as an aqueous solution or sterile injectable oleaginous suspension. This suspension can be formulated in accordance with the state of the art using suitable dispersing or wetting agents and the suspending agents that have been mentioned above. The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable solution or suspension in a parenterally acceptable non-toxic diluent or solvent, such as a solution in 1,3-butane-diol, or prepared as a lyophilized powder. Among the acceptable vehicles and solvents that can be used are; water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution. Furthermore, fixed sterile oils can be conveniently employed as a solvent or suspending medium. For this purpose, any mild fixed oil may be employed, including synthetic mono- or diglycerides. Furthermore, fatty acids such as oleic acid can also be used in the preparation of injectables.

[0138] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com o material de suporte para produzir uma forma de dosagem única vai variar dependendo do paciente a ser tratado e do modo de administração. Por exemplo, uma formulação de liberação prolongada destinada a administração oral para humanos pode conter cerca de 1 a 1000 mg de material ativo composto com uma quantidade adequada e conveniente de material transportador (veículo), que pode variar entre cerca de 5 a 95% do total das composições (peso:peso). A composição farmacêutica pode ser preparada para fornecer facilmente quantidades mensuráveis para a administração. Por exemplo, uma solução aquosa destinada a perfusão intravenosa pode conter de 3 a 500 µg do ingrediente ativo por mililitro de solução a fim de que a infusão de um volume adequado em uma velocidade de cerca de 30 ml/hr possa ocorrer.[0138] The amount of active ingredient that can be combined with the support material to produce a single dosage form will vary depending on the patient being treated and the mode of administration. For example, an extended-release formulation intended for oral administration to humans may contain about 1 to 1000 mg of active material compounded with a suitable and convenient amount of carrier material (vehicle), which may range from about 5 to 95% of the total compositions (weight:weight). The pharmaceutical composition can be prepared to readily provide measurable quantities for administration. For example, an aqueous solution intended for intravenous infusion may contain from 3 to 500 µg of the active ingredient per milliliter of solution so that infusion of a suitable volume at a rate of about 30 ml/hr can occur.

[0139] As formulações adequadas para administração parenteral incluem soluções injetáveis estéreis aquosas e não aquosas, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do paciente, e suspensões estéreis aquosas e não aquosas, que podem incluir agentes de suspensão e espessantes.[0139] Formulations suitable for parenteral administration include aqueous and non-aqueous sterile injectable solutions, which may contain antioxidants, buffers, bacteriostats and solutes that make the formulation isotonic with the patient's blood, and aqueous and non-aqueous sterile suspensions, which may include suspending agents and thickeners.

[0140] As formulações adequadas para a administração tópica ao olho também incluem colírios onde o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso em um veículo adequado, especialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. O ingrediente ativo está preferencialmente presente em tais formulações em uma concentração de cerca de 0,5 a 20% p/p, por exemplo, cerca de 0,5 a 10% p/p, por exemplo, cerca de 1,5% p/p.[0140] Formulations suitable for topical administration to the eye also include eye drops where the active ingredient is dissolved or suspended in a suitable vehicle, especially an aqueous solvent for the active ingredient. The active ingredient is preferably present in such formulations in a concentration of about 0.5 to 20% w/w, e.g., about 0.5 to 10% w/w, e.g., about 1.5% w/w. /P.

[0141] As formulações adequadas para a administração tópica na boca incluem pastilhas contendo o ingrediente ativo em uma base aromatizada, geralmente sacarose e acácia ou goma tragacanto; Pastilhas contendo o ingrediente ativo em uma base inerte, tal como a gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e colutórios contendo o ingrediente ativo em um veículo líquido adequado.[0141] Formulations suitable for topical administration in the mouth include lozenges containing the active ingredient in a flavored base, generally sucrose and acacia or gum gum tragacanth; Lozenges containing the active ingredient in an inert base, such as gelatin and glycerin, or sucrose and acacia; and mouthwashes containing the active ingredient in a suitable liquid vehicle.

[0142] As formulações para a administração retal podem ser apresentadas como um supositório com uma base adequada composta, por exemplo, de manteiga de cacau ou um salicilato.[0142] Formulations for rectal administration can be presented as a suppository with a suitable base composed, for example, of cocoa butter or a salicylate.

[0143] As formulações adequadas para a administração intrapulmonar ou nasal possuem um tamanho de partículas, por exemplo, na faixa de 0,1 a 500 micras (incluindo tamanhos de partículas na faixa entre 0,1 e 500 micras no aumento de micras, como 0.5, 1, 30 micras, 35 micras, etc ), que é administrada por inalação rápida através da passagem nasal ou por inalação através da boca, de modo a atingir os sacos alveolares. Formulações adequadas incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo. Formulações adequadas para a administração em aerossol ou pó seco pode ser preparado de acordo com métodos convencionais e pode ser entregue com outros agentes terapêuticos, tais como compostos outrora utilizados no tratamento ou profilaxia de distúrbios conforme descrito abaixo.[0143] Formulations suitable for intrapulmonary or nasal administration have a particle size, for example, in the range of 0.1 to 500 microns (including particle sizes in the range between 0.1 and 500 microns in increasing microns, such as 0.5, 1, 30 microns, 35 microns, etc.), which is administered by rapid inhalation through the nasal passage or by inhalation through the mouth, in order to reach the alveolar sacs. Suitable formulations include aqueous or oily solutions of the active ingredient. Formulations suitable for aerosol or dry powder administration can be prepared according to conventional methods and can be delivered with other therapeutic agents, such as compounds formerly used in the treatment or prophylaxis of disorders as described below.

[0144] As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espuma ou formulações em spray contendo além do ingrediente ativo, veículos como os conhecidos no estado da técnica como sendo adequados.[0144] Formulations suitable for vaginal administration may be presented as pessaries, tampons, creams, gels, pastes, foam or spray formulations containing, in addition to the active ingredient, vehicles such as those known in the art as being suitable.

[0145] As formulações podem ser embaladas em doses unitárias ou recipientes para doses múltiplas, por exemplo, ampolas e frascos fechados, e podem ser armazenadas em condição liofilizada necessitando apenas a adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água para injeção, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões de injeção extemporânea são preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis do tipo descrito anteriormente. Unidades de dosagem preferidas das formulações são aquelas que contêm uma dose diária ou unidade de subdose diária, tal como recitado acima, ou uma fração apropriada desta, do ingrediente ativo.[0145] Formulations can be packaged in unit doses or multiple dose containers, for example, ampoules and closed vials, and can be stored in a lyophilized condition requiring only the addition of the sterile liquid vehicle, for example, water for injection, immediately before of use. Extemporaneous injection solutions and suspensions are prepared from sterile powders, granules and tablets of the type described previously. Preferred dosage units of the formulations are those that contain a daily dose or daily subdose unit, as recited above, or an appropriate fraction thereof, of the active ingredient.

[0146] A invenção fornece ainda composições para uso veterinário compreendendo pelo menos um ingrediente ativo conforme definido acima em conjunto com um veículo veterinário deste. Veículos veterinários são materiais úteis para o propósito de administrar a composição e podem ser materiais sólidos, líquidos ou gasosos, que são inertes ou de outra forma aceitável na técnica veterinária e são compatíveis com o princípio ativo. Estas composições veterinárias podem ser administradas por via parenteral, oral ou por qualquer outra via desejada.[0146] The invention further provides compositions for veterinary use comprising at least one active ingredient as defined above together with a veterinary vehicle thereof. Veterinary vehicles are materials useful for the purpose of administering the composition and may be solid, liquid or gaseous materials, which are inert or otherwise acceptable in the veterinary art and are compatible with the active ingredient. These veterinary compositions can be administered parenterally, orally or by any other desired route.

TERAPIA COMBINADACOMBINED THERAPY

[0147] Os compostos de Fórmula I podem ser empregados isoladamente ou em combinação com outros agentes terapêuticos adicionais para o tratamento de uma doença ou distúrbio descrito na presente invenção, tal como a inflamação ou um distúrbio hiperproliferativo (por exemplo, o câncer). Em certas realizações, um composto de Fórmula I é combinado em uma formulação de combinação farmacêutica, ou regime de administração terapêutica combinada, com um segundo composto terapêutico adicional que tem propriedades anti-inflamatórias ou anti-hiperproliferativas, ou que é útil para tratar uma inflamação, distúrbio da resposta imune ou distúrbio hiperproliferativo (por exemplo, o câncer). A terapêutica adicional pode ser um inibidor de Bcl-2, um inibidor JAK, um agente anti-inflamatório, um agente imunomodulador, agente quimioterápico, um estimulador da apoptose, um fator neurotrópico, um agente para tratar doenças cardiovasculares, um agente para tratamento de doença hepática, um agente antiviral, um agente para tratamento de distúrbios sanguíneos, um agente para o tratamento de diabetes e um agente para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência. O segundo agente terapêutico pode ser um agente anti-inflamatório AINE. O segundo agente terapêutico pode ser um agente quimioterápico. O segundo composto da fórmula farmacêutica combinada ou regime de dosagem possui preferencialmente atividades complementares ao composto de Fórmula I, de modo que eles não se prejudiquem entre si. Tais compostos estão adequadamente presentes na combinação em quantidades que são eficazes para o propósito pretendido. Em um exemplo de realização, uma composição da presente invenção compreende um composto de Fórmula I, ou um estereoisômero, tautômero, solvato, metabólito, ou sal farmaceuticamente aceitável ou pró-droga deste, em combinação com um agente terapêutico, como um AINE.[0147] The compounds of Formula I can be used alone or in combination with other additional therapeutic agents for the treatment of a disease or disorder described in the present invention, such as inflammation or a hyperproliferative disorder (for example, cancer). In certain embodiments, a compound of Formula I is combined in a pharmaceutical combination formulation, or combined therapeutic administration regimen, with a second additional therapeutic compound that has anti-inflammatory or anti-hyperproliferative properties, or that is useful for treating inflammation. , immune response disorder, or hyperproliferative disorder (e.g., cancer). Additional therapy may be a Bcl-2 inhibitor, a JAK inhibitor, an anti-inflammatory agent, an immunomodulatory agent, a chemotherapeutic agent, an apoptosis stimulator, a neurotropic factor, an agent for treating cardiovascular diseases, an agent for treating liver disease, an antiviral agent, an agent for treating blood disorders, an agent for treating diabetes, and an agent for treating immunodeficiency disorders. The second therapeutic agent may be an NSAID anti-inflammatory agent. The second therapeutic agent may be a chemotherapeutic agent. The second compound of the combined pharmaceutical formula or dosage regimen preferably has complementary activities to the compound of Formula I, so that they do not harm each other. Such compounds are suitably present in the combination in amounts that are effective for the intended purpose. In an exemplary embodiment, a composition of the present invention comprises a compound of Formula I, or a stereoisomer, tautomer, solvate, metabolite, or pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, in combination with a therapeutic agent, such as an NSAID.

[0148] A terapia combinada pode ser administrada como um regime sequencial ou simultâneo. Quando administrado sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais administrações. A administração combinada inclui a coadministração, utilizando formulações separadas ou uma única formulação farmacêutica, e a administração consecutiva em qualquer ordem, onde preferivelmente existe um período de tempo quanto ambos (ou todos) os agentes ativos exercem simultaneamente suas atividades biológicas.[0148] Combination therapy can be administered as a sequential or simultaneous regimen. When administered sequentially, the combination may be administered in two or more administrations. Combined administration includes coadministration, using separate formulations or a single pharmaceutical formulation, and consecutive administration in any order, where preferably there is a period of time during which both (or all) active agents simultaneously exert their biological activities.

[0149] As dosagens adequadas para qualquer um dos agentes coadministrados acima são os atualmente utilizados e podem ser reduzidos devido à ação combinada (sinergia) do agente recém-identificado e outros agentes ou tratamentos terapêuticos.[0149] Suitable dosages for any of the above co-administered agents are those currently used and may be reduced due to the combined action (synergy) of the newly identified agent and other therapeutic agents or treatments.

[0150] A terapia combinada pode proporcionar “sinergia” e se provar “sinérgica”, ou seja, o efeito obtido quando os ingredientes ativos utilizados em conjunto são maiores que a soma dos efeitos resultante da utilização dos compostos separadamente. Um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os ingredientes ativos são: (1) coformulados e administrados ou entregue simultaneamente em uma formulação de dosagem combinada, unitária, (2) entregue por alternância ou paralelamente, na forma de formulações distintas, ou (3) por algum outro regime. Quando entregue na terapia alternada, um efeito sinérgico pode ser atingido quando os compostos são administrados ou entregues sequencialmente, por exemplo, por injeções diferentes em seringas separadas, pílulas ou capsulas separadas ou em infusões separadas. Em geral, durante o tratamento com alternância (terapia alternada), uma dose eficaz de cada ingrediente ativo é administrado sequencialmente, ou seja, serialmente, enquanto que na terapia combinada, a dose eficaz de dois ou mais ingredientes ativos são administradas juntas.[0150] Combined therapy can provide “synergy” and prove “synergistic”, that is, the effect obtained when the active ingredients used together are greater than the sum of the effects resulting from the use of the compounds separately. A synergistic effect can be achieved when the active ingredients are: (1) co-formulated and administered or delivered simultaneously in a unitary, combined dosage formulation, (2) delivered by alternation or parallel, in the form of separate formulations, or (3) by some other regime. When delivered in alternating therapy, a synergistic effect can be achieved when the compounds are administered or delivered sequentially, for example, by different injections in separate syringes, separate pills or capsules, or in separate infusions. In general, during alternation treatment (alternating therapy), an effective dose of each active ingredient is administered sequentially, that is, serially, whereas in combination therapy, the effective dose of two or more active ingredients are administered together.

[0151] Em um exemplo de realização específico da terapia, um composto de Fórmula I, ou um estereoisômero, tautômero, solvato, metabolito, ou seu sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou pró-fármaco do mesmo, pode ser combinado com outros agentes terapêuticos, hormônios ou anticorpos, tal como os descritos na presente invenção, bem como combinados com terapia cirúrgica e radioterapia. As terapias combinadas de acordo com a presente invenção compreendem assim a administração de pelo menos um composto de Fórmula I, ou um estereoisômero, tautômero, solvato, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo e o uso de pelo menos outro método de tratamento do câncer. As quantidades do(s) composto(s) de Fórmula I e do(s) outro(s) agente(s) terapêutico(s) farmacologicamente ativo(s) e os horários relativos de administração serão selecionados de modo a obter o efeito terapêutico combinado desejado.[0151] In a specific embodiment of therapy, a compound of Formula I, or a stereoisomer, tautomer, solvate, metabolite, or pharmaceutically acceptable salt thereof or prodrug thereof, can be combined with other therapeutic agents, hormones or antibodies, such as those described in the present invention, as well as combined with surgical therapy and radiotherapy. Combination therapies according to the present invention thus comprise the administration of at least one compound of Formula I, or a stereoisomer, tautomer, solvate, metabolite or pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof and the use of at least one other method of cancer treatment. The amounts of the compound(s) of Formula I and the other pharmacologically active therapeutic agent(s) and the relative times of administration will be selected to obtain the therapeutic effect desired combination.

[0152] Outros agentes terapêuticos utilizados em combinação com um composto de Fórmula I incluem 5-FU, docetaxel, eribulina, gemcitabina, cobimetinib, ipatasertib, paclitaxel, tamoxifeno, fulvestrant, GDC-0810, dexametasona, palbociclib, bevacizumab, pertuzumab, trastuzumab emtansina, trastuzumab e letrozol.[0152] Other therapeutic agents used in combination with a compound of Formula I include 5-FU, docetaxel, eribulin, gemcitabine, cobimetinib, ipatasertib, paclitaxel, tamoxifen, fulvestrant, GDC-0810, dexamethasone, palbociclib, bevacizumab, pertuzumab, trastuzumab emtansine , trastuzumab and letrozole.

METABOLITOS DOS COMPOSTOS DE FÓRMULAIMETABOLITES OF FORMULAI COMPOUNDS

[0153] Também estão dentro do escopo da presente invenção os produtos metabólicos in vivo da Fórmula I aqui descritos. Esses produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, redução, hidrólise, amidação, desamidação, esterificação, desesterificação, clivagem enzimática, e processos similares, do composto administrado. Consequentemente, a invenção abrange os metabólitos dos compostos de Fórmula I, incluindo compostos produzidos por um processo que compreende a exposição do composto da presente invenção a um mamífero por um período de tempo suficiente para produzir um produto metabólico deste.[0153] The in vivo metabolic products of Formula I described here are also within the scope of the present invention. These products may result, for example, from oxidation, reduction, hydrolysis, amidation, deamidation, esterification, deesterification, enzymatic cleavage, and similar processes, of the administered compound. Accordingly, the invention encompasses the metabolites of compounds of Formula I, including compounds produced by a process comprising exposing the compound of the present invention to a mammal for a period of time sufficient to produce a metabolic product thereof.

[0154] Os produtos metabolitos são normalmente identificados pela preparação de um isótopo radiomarcado (por exemplo, C14 e H3) de um composto da invenção, administrando-o por via parenteral em dose detectável (por exemplo, maior do que cerca de 0,5 mg/kg) para um animal como o rato, camundongo, cobaia, macaco ou homem, permitindo tempo suficiente para que ocorra o metabolismo (normalmente cerca de 30 segundos a 30 horas) e isolando os seus produtos convertidos na urina, sangue ou outras amostras biológicas. Estes produtos são facilmente isolados uma vez que são marcados (os outros são isolados pelo uso de anticorpos capazes de manter epítopos de ligação no metabólito). As estruturas do metabolito são determinadas de maneira convencional, por exemplo, por MS, LC/MS ou a análise de RMN. Em geral, a análise de metabolitos é feita da mesma forma como nos estudos convencionais do metabolismo de drogas bem conhecido pelos técnicos hábeis no assunto. Os produtos metabólitos, desde que eles não sejam encontrados de outra forma in vivo, são úteis em testes diagnósticos para a dosagem terapêutica dos compostos da invenção.[0154] Metabolite products are normally identified by preparing a radiolabeled isotope (e.g., C14 and H3) of a compound of the invention, administering it parenterally at a detectable dose (e.g., greater than about 0.5 mg/kg) to an animal such as rat, mouse, guinea pig, monkey or man, allowing sufficient time for metabolism to occur (typically about 30 seconds to 30 hours) and isolating its converted products in urine, blood or other samples biological. These products are easily isolated once they are labeled (others are isolated by the use of antibodies capable of maintaining binding epitopes on the metabolite). Metabolite structures are determined in a conventional manner, for example, by MS, LC/MS or NMR analysis. In general, metabolite analysis is done in the same way as in conventional studies of drug metabolism well known to those skilled in the art. The metabolite products, as long as they are not otherwise found in vivo, are useful in diagnostic tests for therapeutic dosing of the compounds of the invention.

ARTIGOS DE MANUFATURAMANUFACTURING ITEMS

[0155] Em outro exemplo de realização da invenção, é fornecido um artigo de manufatura, ou “kit”, contendo materiais úteis para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico dos distúrbios e doenças descritos anteriormente. Em um exemplo de realização, o kit compreende um recipiente que compreende um composto de Fórmula I, ou um estereoisômero, tautômero, solvato, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo. O kit pode compreender ainda um rótulo ou bula na embalagem ou associado ao recipiente. O termo “bula” da forma como é utilizado no presente refere-se a instruções habitualmente incluídas nos recipientes comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informações sobre as indicações, utilização, posologia, administração, contraindicações e/ou advertências relativas à utilização de tais produtos terapêuticos. Recipientes apropriados incluem, por exemplo, garrafas, frascos (vials), seringas, blister e etc. O recipiente pode ser formado a partir de uma série de materiais como o vidro ou plástico. O recipiente pode armazenar um composto de Fórmula I ou uma formulação do mesmo que é eficaz para o tratamento da condição e pode ter uma porta de acesso estéril (o recipiente pode ser, por exemplo, uma bolsa de solução intravenosa ou uma ampola que contém uma tampa perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um composto de Fórmula I. O rótulo ou bula indica que a composição é utilizada para o tratamento da condição de escolha, como o câncer. Além disso, o rótulo ou bula pode indicar que o paciente a ser tratado é aquele que possui um distúrbio, tal como um distúrbio hiperproliferativo, neurodegeneração, hipertrofia cardíaca, dor, enxaqueca ou doença ou evento neurotraumático. Em uma realização, o rótulo ou bula indica que a composição compreendendo um composto de Fórmula I pode ser utilizada para tratar um distúrbio resultante do crescimento celular anormal. O rótulo ou bula indica pode indicar também que a composição pode ser utilizada para o tratamento de outros distúrbios. Alternativamente ou adicionalmente, o artigo manufaturado pode compreender ainda um segundo recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Ele pode incluir adicionalmente outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.[0155] In another example of embodiment of the invention, an article of manufacture, or “kit”, is provided containing materials useful for the treatment, prevention and/or diagnosis of the disorders and diseases described above. In an exemplary embodiment, the kit comprises a container comprising a compound of Formula I, or a stereoisomer, tautomer, solvate, metabolite or pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof. The kit may also comprise a label or leaflet on the packaging or associated with the container. The term “package leaflet” as used herein refers to instructions usually included on commercial containers of therapeutic products, which contain information on the indications, use, dosage, administration, contraindications and/or warnings relating to the use of such products. therapeutics. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes, blisters, etc. The container can be formed from a number of materials such as glass or plastic. The container may store a compound of Formula I or a formulation thereof that is effective for treating the condition and may have a sterile access port (the container may be, for example, an intravenous solution bag or an ampoule containing a cap pierceable by a hypodermic injection needle). At least one active agent in the composition is a compound of Formula I. The label or leaflet indicates that the composition is used for the treatment of the condition of choice, such as cancer. Additionally, the label or leaflet may indicate that the patient being treated is one who has a disorder, such as a hyperproliferative disorder, neurodegeneration, cardiac hypertrophy, pain, migraine, or neurotraumatic disease or event. In one embodiment, the label or package insert indicates that the composition comprising a compound of Formula I can be used to treat a disorder resulting from abnormal cell growth. The label or leaflet indicates may also indicate that the composition can be used to treat other disorders. Alternatively or additionally, the manufactured article may further comprise a second container comprising a pharmaceutically acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. It may additionally include other commercially and user-desirable materials, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.

[0156] O kit pode ainda compreender instruções para a administração do composto de Fórmula I e, se presente, a da segunda formulação farmacêutica. Por exemplo, se o kit compreender uma primeira composição compreendendo um composto de Fórmula I e uma segunda formulação farmacêutica, o kit pode compreender ainda instruções para a administração simultânea, sequencial ou separada da primeira e segunda composição farmacêutica a um paciente com tal necessidade.[0156] The kit may further comprise instructions for administering the compound of Formula I and, if present, that of the second pharmaceutical formulation. For example, if the kit comprises a first composition comprising a compound of Formula I and a second pharmaceutical formulation, the kit may further comprise instructions for the simultaneous, sequential or separate administration of the first and second pharmaceutical composition to a patient in need thereof.

[0157] Em outro exemplo de realização, os kits são adequados para a administração de formas sólidas orais de um composto de Fórmula I, tais como comprimidos ou cápsulas. Tal kit inclui, de preferência, diversas dosagens unitárias. Tais kits podem incluir um cartão possuindo dosagens orientadas na ordem do uso pretendido. Um exemplo desse kit é uma embalagem alveolar (blister pack). As embalagens alveolares são bem conhecidas na indústria de embalagens e são amplamente utilizadas para embalar formas de dosagem farmacêutica unitária. Se desejado, pode ser fornecido um auxílio de memória, por exemplo, sob a forma de números, letras ou outras marcas ou com uma inserção de calendário, designando os dias na programação de tratamento em que as dosagens podem ser administradas.[0157] In another exemplary embodiment, the kits are suitable for administering solid oral forms of a compound of Formula I, such as tablets or capsules. Such a kit preferably includes several unit dosages. Such kits may include a card having dosages oriented in the order of intended use. An example of this kit is a blister pack. Honeycomb packaging is well known in the packaging industry and is widely used to package pharmaceutical unit dosage forms. If desired, a memory aid may be provided, for example in the form of numbers, letters or other markings or with a calendar insert, designating the days in the treatment schedule on which dosages may be administered.

[0158] De acordo com um exemplo de realização, o kit pode compreender (a) um primeiro recipiente com um composto de Fórmula I contido nele; e (b) um segundo recipiente com uma segunda formulação farmacêutica contida nele, em que a segunda formulação farmacêutica compreende um segundo composto com atividade anti-hiperproliferativa. Alternativamente ou adicionalmente, o artigo manufaturado pode compreender ainda um terceiro recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Ele pode incluir adicionalmente outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.[0158] According to an exemplary embodiment, the kit may comprise (a) a first container with a compound of Formula I contained therein; and (b) a second container with a second pharmaceutical formulation contained therein, wherein the second pharmaceutical formulation comprises a second compound having antihyperproliferative activity. Alternatively or additionally, the manufactured article may further comprise a third container comprising a pharmaceutically acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. It may additionally include other commercially and user-desirable materials, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.

[0159] Em outros exemplos de realização em que o kit compreende uma composição de Fórmula I e um segundo agente terapêutico, o kit pode compreender um recipiente para conter as composições separadas, tal como uma garrafa dividida ou um pacote de folha dividido, no entanto, as composições separadas também podem estar contidas em um único recipiente não dividido. Normalmente o kit compreende instruções para a administração dos componentes separados. A forma do kit é particularmente vantajosa quando os componentes separados são preferencialmente administrados em diferentes formas de dosagem (por exemplo, oral e parenteral), quando são administrados em diferentes intervalos de dosagem, ou quando a titulação dos componentes individuais da combinação é desejada pelo médico que prescreve o tratamento.[0159] In other embodiments where the kit comprises a composition of Formula I and a second therapeutic agent, the kit may comprise a container for containing the separate compositions, such as a divided bottle or a divided foil packet, however , the separate compositions may also be contained in a single undivided container. Typically the kit includes instructions for administering the separate components. The kit form is particularly advantageous when the separate components are preferably administered in different dosage forms (e.g., oral and parenteral), when they are administered at different dosage intervals, or when titration of the individual components of the combination is desired by the physician. who prescribes the treatment.

PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS DE FÓRMULAIPREPARATION OF FORMULAI COMPOUNDS

[0160] Os compostos de Fórmula I podem ser sintetizados por vias sintéticas que incluem processos análogos aos conhecidos nas artes químicas, particularmente diante da descrição aqui contida, e aqueles para outros heterociclos descritos em: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editores Katritzky e Rees, Elsevier, 1997, por exemplo, Volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990), sendo cada um deles expressamente incorporados pela referência. As matérias primas estão disponíveis de modo geral por fontes comerciais, como pela Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ou são facilmente preparadas usando métodos conhecidos pelos técnicos hábeis no assunto (por exemplo, preparado por métodos geralmente descrito em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluindo suplementos (também disponível através do banco de dados online da “Beilstein”)).[0160] Compounds of Formula I can be synthesized by synthetic routes that include processes analogous to those known in the chemical arts, particularly given the description contained herein, and those for other heterocycles described in: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier , 1997, for example, Volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990), each of which is expressly incorporated by reference. The raw materials are generally available from commercial sources, such as from Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) or are readily prepared using methods known to those of skill in the art (e.g., prepared by methods generally described in Louis F. Fieser and Mary Fieser , Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), or Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, including supplements (also available through the bank online data collection from “Beilstein”)).

[0161] As transformações químicas sintéticas e metodologias de grupos protetores (proteção e desproteção) úteis na síntese dos compostos de Fórmula I e reagentes necessários e intermediários são conhecidos no estado da técnica e incluem, por exemplo, aqueles descritos em R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T. W. Greene e P. G .M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,3aEd., John Wiley & Sons (1999); e L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1995) e suas edições subsequentes.[0161] Synthetic chemical transformations and protecting group methodologies (protection and deprotection) useful in the synthesis of compounds of Formula I and necessary reagents and intermediates are known in the art and include, for example, those described in R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons (1999); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1995) and subsequent editions.

[0162] Os exemplos fornecem métodos exemplificativos para a preparação de compostos de Fórmula I. Os técnicos hábeis no assunto irão apreciar que outras vias sintéticas podem ser usadas para sintetizar os compostos de Fórmula I. Embora matérias-primas e reagentes específicos estejam representados e discutidos nas Figuras e Exemplos, outras matérias- primas e reagentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Além disso, muitos dos compostos exemplares preparados pelos métodos descritos podem ser modificados em função desta divulgação usando a química convencional bem conhecida pelos técnicos hábeis no assunto.[0162] The examples provide exemplary methods for preparing compounds of Formula I. Those skilled in the art will appreciate that other synthetic routes can be used to synthesize compounds of Formula I. Although specific starting materials and reagents are represented and discussed in the Figures and Examples, other starting materials and reagents can be easily substituted to provide a variety of derivatives and/or reaction conditions. Furthermore, many of the exemplary compounds prepared by the described methods can be modified in light of this disclosure using conventional chemistry well known to those skilled in the art.

[0163] Na preparação de compostos de Fórmula I, a proteção da funcionalidade remota (por exemplo, amina primária ou secundária) de intermediários pode ser necessária. A necessidade de tal proteção pode variar dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. Grupos amino protetores adequados incluem grupos acetila, trifluoroacetila, t-butoxicarbonila (BOC), benziloxicarbonila (CBZ) e 9- fluorenilmetilenoxicarbonila (Fmoc). A necessidade de tal proteção é facilmente determinada por um técnico hábil no assunto. Para uma descrição de grupos protetores e seu uso, vide, T.W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis” 2aEd., John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1991.[0163] In the preparation of compounds of Formula I, protection of remote functionality (e.g., primary or secondary amine) of intermediates may be necessary. The need for such protection may vary depending on the nature of the remote functionality and the conditions of the preparation methods. Suitable amino protecting groups include acetyl, trifluoroacetyl, t-butoxycarbonyl (BOC), benzyloxycarbonyl (CBZ) and 9-fluorenylmethyleneoxycarbonyl (Fmoc) groups. The need for such protection is easily determined by a technician skilled in the art. For a description of protective groups and their use, see, T.W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis” 2nd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1991.

[0164] Nos métodos de preparação de compostos de fórmula I pode ser vantajoso separar os produtos da reação entre si e/ou a partir das matérias- primas. Os produtos desejados de cada etapa ou de uma série de etapas são separados e/ou purificados para o grau desejado de homogeneidade por meio de técnicas comuns atualmente conhecidas no estado da técnica. Normalmente tais separações envolvem a extração multifásica, cristalização de um solvente ou mistura de solvente, destilação, sublimação ou cromatografia. A cromatografia pode envolver uma variedade de métodos, incluindo, por exemplo: de fase reversa e fase normal, por exclusão de tamanho, de troca iônica; métodos de cromatografia líquida e aparelhos de alta, média e baixa pressão; de pequena escala analítica; de leito móvel simulado (SMB) e cromatografia preparativa em camada fina ou grossa, bem como técnicas de pequenas escala de cromatografia em modo flash e em camada fina.[0164] In methods for preparing compounds of formula I, it may be advantageous to separate the reaction products from each other and/or from the raw materials. The desired products from each step or series of steps are separated and/or purified to the desired degree of homogeneity using common techniques currently known in the art. Typically such separations involve multiphase extraction, crystallization from a solvent or solvent mixture, distillation, sublimation, or chromatography. Chromatography can involve a variety of methods, including, for example: reverse phase and normal phase, size exclusion, ion exchange; liquid chromatography methods and high, medium and low pressure devices; small-scale analytical; simulated moving bed (SMB) and thin or thick layer preparative chromatography, as well as small-scale flash mode and thin layer chromatography techniques.

[0165] Outra classe de métodos de separação envolve o tratamento de uma mistura com um reagente selecionado para ligar ou processar de outra forma separável um produto desejado, material de partida que não reagiu, subproduto da reação, ou similar. Tais reagentes incluem adsorventes ou absorventes, como o carvão ativado, peneiras moleculares, meio de troca iônica ou similares. Alternativamente, os reagentes podem ser ácidos, no caso de um material básico, podem ser básicos, no caso de um material ácido, reagentes de ligação, como anticorpos, proteínas de ligação, quelantes seletivos como os éteres de coroa, reagentes de extração iônicos líquido/líquido (LIX) ou similares. A seleção dos métodos apropriados de separação depende da natureza dos materiais envolvidos, tais como, ponto de ebulição e peso molecular na destilação e sublimação, presença ou ausência de grupos funcionais polares em cromatografia, estabilidade de materiais em meios ácidos e básicos na extração multifásica, e similares.[0165] Another class of separation methods involves treating a mixture with a selected reagent to bind or otherwise process separably a desired product, unreacted starting material, reaction byproduct, or the like. Such reagents include adsorbents or absorbents, such as activated carbon, molecular sieves, ion exchange media or the like. Alternatively, the reagents may be acidic, in the case of a basic material, they may be basic, in the case of an acidic material, binding reagents such as antibodies, binding proteins, selective chelators such as crown ethers, liquid ionic extraction reagents /liquid (LIX) or similar. The selection of appropriate separation methods depends on the nature of the materials involved, such as boiling point and molecular weight in distillation and sublimation, presence or absence of polar functional groups in chromatography, stability of materials in acidic and basic media in multiphase extraction, and similar.

[0166] As misturas diastereoméricas podem ser separadas em seus diastereoisômeros individuais com base nas suas diferenças físicas, químicas por métodos conhecidos pelos técnicos hábeis no assunto, como por cromatografia e/ou cristalização fracionada. Enantiômeros podem ser separados pela conversão da mistura enantiomérica em uma mistura diastereomérica pela reação com um composto adequado opticamente ativo (por exemplo, auxiliares quirais, como o álcool quiral ou ácido clorídrico de Mosher), separando os diastereômeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diastereoisômeros individuais em enantiômeros puros correspondentes. Além disso, alguns dos compostos da presente invenção pode ser atropisômeros (por exemplo, biarilas substituídas) e são considerados como parte da presente invenção. Enantiômeros também podem ser separados pelo uso de uma coluna de HPLC quiral.[0166] Diastereomeric mixtures can be separated into their individual diastereoisomers based on their physical and chemical differences by methods known to those skilled in the art, such as by chromatography and/or fractional crystallization. Enantiomers can be separated by converting the enantiomeric mixture into a diastereomeric mixture by reacting with a suitable optically active compound (e.g., chiral auxiliaries such as chiral alcohol or Mosher's hydrochloric acid), separating the diastereomers and converting (e.g., hydrolyzing) the individual diastereoisomers into corresponding pure enantiomers. Furthermore, some of the compounds of the present invention may be atropisomers (e.g., substituted biaryls) and are considered to be part of the present invention. Enantiomers can also be separated by using a chiral HPLC column.

[0167] Um único estereoisômero, por exemplo, um enantiômero, substancialmente livre de seu estereoisômero pode ser obtido pela resolução da mistura racêmica usando um método como a formação de diastereoisômeros utilizando agentes de resolução opticamente ativos Eliel, E. e Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, 1994; Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., 113(3):283-302 (1975)). As misturas racêmicas de compostos quirais da invenção podem ser separadas e isoladas por qualquer método adequado, incluindo: (1) a formação de sais diastereoméricos, iônicos com compostos quirais e separação por cristalização fracionada ou outros métodos, (2) formação de compostos diastereoméricos com reagentes de derivatização quirais, separação dos diastereoisômeros e conversão em estereoisômeros puros, e (3) de separação direta dos estereoisômeros substancialmente puros ou enriquecidos sob condições quirais. Vide: Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology, Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., Nova Iorque (1993).[0167] A single stereoisomer, for example, an enantiomer, substantially free of its stereoisomer can be obtained by resolving the racemic mixture using a method such as the formation of diastereoisomers using optically active resolving agents Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., 113(3):283-302 (1975)). Racemic mixtures of chiral compounds of the invention may be separated and isolated by any suitable method, including: (1) formation of diastereomeric, ionic salts with chiral compounds and separation by fractional crystallization or other methods, (2) formation of diastereomeric compounds with chiral derivatization reagents, separation of diastereoisomers and conversion to pure stereoisomers, and (3) direct separation of substantially pure or enriched stereoisomers under chiral conditions. See: Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology, Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).

[0168] Sob o método (1), sais diastereoméricos podem ser formados pela reação de bases quirais enantiomericamente puras, tais como brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-ß-feniletilamina (anfetaminas), e similares, compostos assimétricos carregando funcionalidade acídica, tal como ácido carboxílico e ácido sulfônico. Os sais diastereoméricos podem ser induzidos a separação pela cristalização fracionada ou cromatografia iônica. Para a separação de isômeros ópticos dos compostos amino, a adição de ácidos carboxílicos quirais ou ácidos sulfônicos, como o ácido canforsulfônico, ácido tartárico, ácido mandélico e ácido láctico pode resultar na formação de sais diastereoméricos.[0168] Under method (1), diastereomeric salts can be formed by the reaction of enantiomerically pure chiral bases, such as brucine, quinine, ephedrine, strychnine, a-methyl-ß-phenylethylamine (amphetamines), and similar, asymmetric compounds carrying acidic functionality, such as carboxylic acid and sulfonic acid. Diastereomeric salts can be induced to separate by fractional crystallization or ion chromatography. For the separation of optical isomers of amino compounds, the addition of chiral carboxylic acids or sulfonic acids such as camphorsulfonic acid, tartaric acid, mandelic acid, and lactic acid can result in the formation of diastereomeric salts.

[0169] Alternativamente, pelo método (2), o substrato a ser resolvido é reagido com um enantiômero de um composto quiral para formar um par diastereomérico (Eliel, E. e Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., 1994, pág. 322). Compostos diastereoméricos podem ser formados pela reação de compostos assimétricos com reagentes derivatizante quirais enantiomericamente puros, tais como os derivados de mentila, seguido pela separação dos diastereoisômeros e hidrólise para produzir o enantiômero puro ou enriquecido. Um método de determinação da pureza óptica envolve a produção de ésteres quirais, tal como um éster mentila, por exemplo, (-) Cloroformiato de mentila na presença de base, ou éster de Mosher, acetato de a-metóxi-a- (trifluorometil)fenila (Jacob, J. Org Chem (1982)47:4165), da mistura racêmica, e analisando o espectro por RMN H1 para verificar a presença dos dois enantiômeros atropisoméricos ou diastereoisômeros. Diastereoisômeros estáveis de compostos atropisoméricos podem ser separados e isolados por cromatografia normal de em fase reversa e em seguida pelos métodos de separação de naftil-isoquinolinas atropisoméricas (WO 96/15111). Pelo método (3), uma mistura racêmica de dois enantiômeros pode ser separada por cromatografia usando uma fase estacionária quiral (“Chiral Liquid Chromatography” (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman e Hall, Nova iorque; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378). Enantiômeros enriquecidos ou purificados podem ser distinguidos com os métodos usados para diferenciar outras moléculas quirais com átomos de carbono assimétricos, tal como a rotação óptica e dicroísmo circular.[0169] Alternatively, by method (2), the substrate to be resolved is reacted with an enantiomer of a chiral compound to form a diastereomeric pair (Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons , Inc., 1994, p. 322). Diastereomeric compounds can be formed by reacting asymmetric compounds with enantiomerically pure chiral derivatizing reagents, such as mint derivatives, followed by separation of the diastereoisomers and hydrolysis to produce the pure or enriched enantiomer. One method of determining optical purity involves the production of chiral esters, such as a menthyl ester, e.g., (-) Menthyl Chloroformate in the presence of base, or Mosher's ester, a-methoxy-a-(trifluoromethyl) acetate phenyl (Jacob, J. Org Chem (1982)47:4165), of the racemic mixture, and analyzing the spectrum by H1 NMR to verify the presence of the two atropisomeric enantiomers or diastereoisomers. Stable diastereoisomers of atropisomeric compounds can be separated and isolated by normal reversed-phase chromatography and then by the atropisomeric naphthyl isoquinoline separation methods (WO 96/15111). By method (3), a racemic mixture of two enantiomers can be separated by chromatography using a chiral stationary phase (“Chiral Liquid Chromatography” (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr. , (1990) 513:375-378). Enriched or purified enantiomers can be distinguished with methods used to differentiate other chiral molecules with asymmetric carbon atoms, such as optical rotation and circular dichroism.

[0170] Os compostos da invenção foram preparados conforme ilustrado nos Esquemas gerais 1 e 2. a) MgCl2, trietilamina, paraformaldeído, acetonitrila, aquecimento; b) oxaldeído, hidróxido de amônio, aquecimento; c) carbonato de césio, 1,2- dibromoetano, DMF, aquecimento; d) N-iodosuccinimida, DMF, aquecimento; e) i. EtMgBr, THF, -20 °C, ii. cloreto de amônio aquoso[0170] The compounds of the invention were prepared as illustrated in general Schemes 1 and 2. a) MgCl2, triethylamine, paraformaldehyde, acetonitrile, heating; b) oxaldehyde, ammonium hydroxide, heating; c) cesium carbonate, 1,2-dibromoethane, DMF, heating; d) N-iodosuccinimide, DMF, heating; Hey. EtMgBr, THF, -20°C, ii. aqueous ammonium chloride

[0171] Conforme exibido no Esquema 1, 4-bromo-2- hidroxibenzaldeído 2 pode ser obtido pela formilação de 3-bromofenol comercialmente disponível. Aquecimento 2 com oxaldeído e hidróxido de amônio forma 3. O anel oxazepina pode ser formado pelo aquecimento de 3 com 1,2- dibromoetano. A bis iodação pode ser induzida pela reação com N-iodosuccinimida, e o grupo 3-iodo seletivamente removido pelo tratamento com brometo de etilmagnésio em temperatura reduzida, para formar 6. f) oxazolidin-2-ona 4-substituída, Cu(OAc)2, trans-N,N’- dimetilciclohexano-1,2-diamina, carbonato de potássio, dioxano, aquecimento; g) HN(R2)CH(R1)CO2H, CuI, K3PO4, DMSO, aquecimento; h) cloreto de amônio, trietilamina, HATU (1- [Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo [4,5-b]piridínio 3- óxido hexafluorofosfato).[0171] As shown in Scheme 1, 4-bromo-2-hydroxybenzaldehyde 2 can be obtained by formylation of commercially available 3-bromophenol. Heating 2 with oxaldehyde and ammonium hydroxide forms 3. The oxazepine ring can be formed by heating 3 with 1,2-dibromoethane. Bisiodination can be induced by reaction with N-iodosuccinimide, and the 3-iodine group selectively removed by treatment with ethylmagnesium bromide at reduced temperature, to form 6. f) 4-substituted oxazolidin-2-one, Cu(OAc)2, trans-N,N'-dimethylcyclohexane-1,2-diamine, potassium carbonate, dioxane, heating; g) HN(R2)CH(R1)CO2H, CuI, K3PO4, DMSO, heating; h) ammonium chloride, triethylamine, HATU (1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo [4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate).

[0172] Conforme exibido no Esquema 2, 6 pode ser acoplado a uma oxazolidin-2-ona substituída usando catálise por cobre para fornecer 7. O intermediário bromo 7 pode ser acoplado aminoácidos adequadamente substituídos sob catálise por cobre, seguido por acoplamento de amida medida por HATU com cloreto de amônio para fornecer compostos 8. EXEMPLOS ABREVIAÇÕES [0172] As shown in Scheme 2, 6 can be coupled to a substituted oxazolidin-2-one using copper catalysis to provide 7. The bromine intermediate 7 can be coupled to suitably substituted amino acids under copper catalysis, followed by measured amide coupling by HATU with ammonium chloride to provide compounds 8. EXAMPLES ABBREVIATIONS

[0173] LCMS Método A: Experimentos realizados em um espectrômetro de massa quádruplo Waters Micromass ZQ2000 ligado a um sistema UPLC Waters Acquity com um detector UV PDA. O espectrômetro possui uma fonte de eletropulverização (electrospray) funcionando no modo de íon positivo e negativo. Este sistema usa uma coluna Acquity BEH C18, 1,7 µm 100 x 2,1 mm, mantida a 40 °C ou uma coluna Acquity BEH Shield RP18, 1,7 µm 100 x 2,1 mm, mantida a 40 °C e uma velocidade de fluxo de 0,4 mL/minuto. O sistema inicial de solvente foi de 95% de água contendo 0,1% de ácido fórmico (solvente A) e 5% de acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico (solvente B) para o primeiro 0,4 minuto seguido por um gradiente de até 5% solvente A e 95% solvente B durante os próximos 5,6 minutos. Este foi mantido durante 0,8 minutos antes de retornar para 95% de solvente A e 5% de solvente B durante os próximos 0,2 minutos. O tempo de execução total foi de 8 minutos.[0173] LCMS Method A: Experiments performed on a Waters Micromass ZQ2000 quadruple mass spectrometer linked to a Waters Acquity UPLC system with a UV PDA detector. The spectrometer has an electrospray source operating in positive and negative ion mode. This system uses an Acquity BEH C18, 1.7 µm 100 x 2.1 mm column, maintained at 40 °C or an Acquity BEH Shield RP18, 1.7 µm 100 x 2.1 mm column, maintained at 40 °C and a flow rate of 0.4 mL/minute. The initial solvent system was 95% water containing 0.1% formic acid (solvent A) and 5% acetonitrile containing 0.1% formic acid (solvent B) for the first 0.4 minute followed by a gradient up to 5% solvent A and 95% solvent B over the next 5.6 minutes. This was held for 0.8 minutes before returning to 95% solvent A and 5% solvent B for the next 0.2 minutes. Total running time was 8 minutes.

[0174]LCMS Método B: Os experimentos realizados em um aparelho de HPLC Agilent 1100 acoplada com o espectrômetro de massa Agilent MSD usando ESI como fonte de ionização. A separação por LC utilizou uma coluna Phenomenex XB-C18, 1,7 mm, 50 x 2,1 mm com uma velocidade de fluxo de 0,4 mL/minuto. O solvente A é água com 0,1% de ácido fórmico e o solvente B é acetonitrila com 0,1% de ácido fórmico. O gradiente consistiu em 2 - 98% de solvente B ao longo de 7 minutos e se manteve a 97% de B durante 1,5 minutos após o equilíbrio durante 1,5 minutos. A temperatura da coluna LC é de 40 °C. A absorbância UV foi coletada a 220 nm e 254 nm e a análise completa dos espectros de massa foi aplicada em todos os experimentos. EXEMPLO 101 (S )-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2- D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)PROPANAMIDA 101 ETAPA 1: 4-BROMO-2-HIDROXIBENZALDEÍDO [0174]LCMS Method B: The experiments were carried out on an Agilent 1100 HPLC device coupled with the Agilent MSD mass spectrometer using ESI as an ionization source. LC separation utilized a Phenomenex XB-C18, 1.7 mm, 50 x 2.1 mm column with a flow rate of 0.4 mL/minute. Solvent A is water with 0.1% formic acid and solvent B is acetonitrile with 0.1% formic acid. The gradient consisted of 2 - 98% solvent B over 7 minutes and maintained at 97% B for 1.5 minutes after equilibration for 1.5 minutes. The temperature of the LC column is 40 °C. UV absorbance was collected at 220 nm and 254 nm and full mass spectra analysis was applied to all experiments. EXAMPLE 101 (S )-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2- D] [1,4]OXAZEPIN-9-YL)AMINO)PROPANAMIDE 101 STEP 1: 4-BROMO-2-HYDROXYBENZALDEHYDE

[0175] Em um balão de fundo redondo de 4 bocas de 20 L purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi colocado 3- bromofenol (1300 g, 7,51 mol), dicloromagnésio (1078 g, 11,3 mol), trietilamina (3034 g, 30,0 mol) e acetonitrila (7,8 L). A mistura foi agitada por 30 minutos a 40 °C. Paraformaldeído foi adicionado à mistura (676 g, 22,6 mol) a 80 °C. A solução resultante foi agitada por 6 horas a 76 °C. Essa reação foi repetida 5 vezes. As misturas da reação combinadas foram bloqueadas pela adição de 12 L de cloreto de hidrogênio aquoso (4 N). O valor de pH da solução foi ajustado para 5 com cloreto de hidrogênio aquoso concentrado (12 N). A solução resultante foi extraída com 1 x 20 L de acetato de etila. Os extratos orgânicos foram evaporados em vácuo. O resíduo foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (eluído 15% acetato de etila em éter de petróleo) para formar o produto bruto que foi lavado com 2,4 L de éter metil terc-butílico: hexano (1:4). Os sólidos resultantes foram coletados por filtração para formar 7,0 kg (78%) do composto título como um sólido amarelo. ETAPA 2: 5-BROMO-2-(1 H-IMIDAZOL-2-IL)FENOL [0175] In a 20 L 4-neck round bottom flask purged and maintained with an inert nitrogen atmosphere was placed 3-bromophenol (1300 g, 7.51 mol), dichloromagnesium (1078 g, 11.3 mol), triethylamine (3034 g, 30.0 mol) and acetonitrile (7.8 L). The mixture was stirred for 30 minutes at 40 °C. Paraformaldehyde was added to the mixture (676 g, 22.6 mol) at 80 °C. The resulting solution was stirred for 6 hours at 76 °C. This reaction was repeated 5 times. The combined reaction mixtures were blocked by the addition of 12 L of aqueous hydrogen chloride (4 N). The pH value of the solution was adjusted to 5 with concentrated aqueous hydrogen chloride (12 N). The resulting solution was extracted with 1 x 20 L of ethyl acetate. The organic extracts were evaporated in vacuum. The residue was purified via flash chromatography on silica gel (eluted 15% ethyl acetate in petroleum ether) to form the crude product which was washed with 2.4 L of methyl tert-butyl ether: hexane (1:4). The resulting solids were collected by filtration to form 7.0 kg (78%) of the title compound as a yellow solid. STEP 2: 5-BROMO-2-(1 H-IMIDAZOL-2-YL)PHENOL

[0176] Em um balão de fundo redondo de 4 bocas de 20 L foi colocada uma solução de 4-bromo-2-hidroxibenzaldeído (700 g, 3,50 mol) em metanol (7,0 L) e oxaldeído (40%) (2540 g, 17,5 mol) seguido pela adição gota a gota durante 4 horas de amônia aquosa (25-28%, 3500 g) sob agitação e mantendo a temperatura a baixo de 40 °C. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 30-35 °C. Essa reação foi repetida 9 vezes. As misturas de reação 9 combinadas foram evaporadas sob vácuo mantendo a temperatura a baixo de 45 °C. O resíduo foi diluído com 100 L de acetato de etila sob agitação por 30 minutos. Os sólidos foram retirados por filtração e a solução resultante foi diluída com água. A fase aquosa foi extraída com 35 L de acetato de etila. Os extratos orgânicos foram evaporados em vácuo e o resíduo foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 5-75% acetato de etila em éter de petróleo) para formar 2,4 kg (29%) do composto título como um sólido amarelo. ETAPA 3: 9-BROMO-5,6-DI-HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1 ,4]OXAZEPINA [0176] A solution of 4-bromo-2-hydroxybenzaldehyde (700 g, 3.50 mol) in methanol (7.0 L) and oxaldehyde (40%) was placed in a 20 L round-bottom flask. (2540 g, 17.5 mol) followed by the dropwise addition over 4 hours of aqueous ammonia (25-28%, 3500 g) under stirring and maintaining the temperature below 40 °C. The resulting solution was stirred for 15 hours at 30-35 °C. This reaction was repeated 9 times. The combined reaction mixtures were evaporated under vacuum keeping the temperature below 45°C. The residue was diluted with 100 L of ethyl acetate under stirring for 30 minutes. The solids were removed by filtration and the resulting solution was diluted with water. The aqueous phase was extracted with 35 L of ethyl acetate. The organic extracts were evaporated in vacuum and the residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 5-75% ethyl acetate in petroleum ether) to form 2.4 kg (29%) of the title compound as a yellow solid. STEP 3: 9-BROMO-5,6-DIHYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPINE

[0177] Em um balão de fundo redondo de 4 bocas de 20 L foi colocada uma solução de 5-bromo-2-(1H-imidazol-2-il)fenol (1,4 kg, 5,86 mol) em N,N-dimetilformamida (14 L) e carbonato de césio (7,2 kg, 22,1 mol). A mistura foi agitada por 20 minutos. À mistura da reação foi adicionada 1,2- dibromoetano (4,1 kg, 21,8 mol). A solução resultante foi agitada por 4-12 horas a 85-90 °C, resfriada até 15 °C, e filtrada. O bolo de filtração foi lavado com 3,0 L de acetato de etila. O filtrado foi diluído com 14 L de acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina (4 x 14 L), secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados sob vácuo para formar 1,1 kg (71%) do composto título como um sólido amarelo claro. LCMS (ESI): [M+H]+ =265; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 8,32 (d, J = 8,4, 1H), 7,35-7,24 (m, 3H), 7,06 (s, 1H), 4,47-4,42 (m, 4H). ETAPA 4: 9-BROMO-2,3-DI-IODO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2- [0177] In a 20 L 4-neck round bottom flask, a solution of 5-bromo-2-(1H-imidazol-2-yl)phenol (1.4 kg, 5.86 mol) in N was placed, N-dimethylformamide (14 L) and cesium carbonate (7.2 kg, 22.1 mol). The mixture was stirred for 20 minutes. To the reaction mixture was added 1,2-dibromoethane (4.1 kg, 21.8 mol). The resulting solution was stirred for 4-12 hours at 85-90 °C, cooled to 15 °C, and filtered. The filter cake was washed with 3.0 L of ethyl acetate. The filtrate was diluted with 14 L of ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline (4 x 14 L), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated under vacuum to give 1.1 kg (71%) of the title compound as a light yellow solid. LCMS (ESI): [M+H]+ =265; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8.32 (d, J = 8.4, 1H), 7.35-7.24 (m, 3H), 7.06 (s, 1H), 4, 47-4.42 (m, 4H). STEP 4: 9-BROMO-2,3-DI-IODO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-

[0178] Em um balão de fundo redondo de 4 bocas de 20 L foram adicionados 9-bromo-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina (2,5 kg, 9,43 mol) e N,N-dimetilformamida (12,5 L) seguido pela adição de N- iodosuccinimida (6,0 kg, 26,7 mol) em diversos lotes com agitação. A solução resultante foi agitada por 12 horas a 60 °C, resfriada até 15 °C com um banho de água/gelo, diluída com 12,5 L de água/gelo, e filtrada. Os sólidos filtrados foram recristalizados a partir de éter de petróleo para formar 4,0 kg (82%) do composto título como um sólido amarelo. ETAPA 5: 9-BROMO-2-IODO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1 ,4]OXAZEPINA [0178] In a 20 L 4-neck round bottom flask, 9-bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepine (2.5 kg) was added , 9.43 mol) and N,N-dimethylformamide (12.5 L) followed by the addition of N-iodosuccinimide (6.0 kg, 26.7 mol) in several batches with stirring. The resulting solution was stirred for 12 hours at 60 °C, cooled to 15 °C with a water/ice bath, diluted with 12.5 L of water/ice, and filtered. The filtered solids were recrystallized from petroleum ether to form 4.0 kg (82%) of the title compound as a yellow solid. STEP 5: 9-BROMO-2-IODO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPINE

[0179] Em um balão de fundo redondo de 4 bocas de 20 L purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foram adicionados 9-bromo-2,3-di-iodo-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina (800 g, 1,55 mol) e tetrahidrofurano (2,4 L) seguido pela adição gota a gota de brometo de etilmagnésio (1 N solução em éter, 1,7 L) sob agitação a -20 °C, durante 3,5 horas. A mistura da reação foi agitada por 3 horas com a temperatura mantida a -15 °C usando um banho de gelo/sal. A mistura resultante foi bloqueada pela adição de 3,0 L de cloreto de amônio aquoso saturado, e extraída com acetato de etila (2 x 8,0 L). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina (2 x 10 L), secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados sob vácuo. O resíduo bruto foi triturado com 8,0 L de acetato de etila: éter de petróleo (1:5), filtrado e lavado com éter de petróleo para formar 501 g (83%) do composto título como um sólido marrom. LCMS (ESI): [M+H]+ = 391; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 8,22 (d, J = 8,7, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 2H), 4,45-4,41 (m, 4H). ETAPA 6: (R)-2,2-DIMETIL- [1,3]DIOXOLANO-4-CARBALDEÍDO [0179] In a 20 L 4-neck round bottom flask purged and maintained with an inert nitrogen atmosphere, 9-bromo-2,3-diiodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [ 1,2-d] [1,4]oxazepine (800 g, 1.55 mol) and tetrahydrofuran (2.4 L) followed by dropwise addition of ethylmagnesium bromide (1 N solution in ether, 1.7 L ) under stirring at -20 °C for 3.5 hours. The reaction mixture was stirred for 3 hours with the temperature maintained at -15 °C using an ice/salt bath. The resulting mixture was blocked by adding 3.0 L of saturated aqueous ammonium chloride, and extracted with ethyl acetate (2 x 8.0 L). The combined organic extracts were washed with saline (2 x 10 L), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated under vacuum. The crude residue was triturated with 8.0 L of ethyl acetate: petroleum ether (1:5), filtered and washed with petroleum ether to form 501 g (83%) of the title compound as a brown solid. LCMS (ESI): [M+H]+ = 391; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8.22 (d, J = 8.7, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.30-7.25 (m, 2H), 4, 45-4.41 (m, 4H). STEP 6: (R)-2,2-DIMETHYL- [1,3]DIOXOLAN-4-CARBALDEHYDE

[0180] Periodato de sódio (57,0 g, 270 mmol) foi dissolvido em água quente (115 mL) e sílica (200 g, 60 A 220-440 mesh, tamanho de partícula 35-75 µm) foi adicionada. A mistura foi agitada vigorosamente até que fluxo livre de pó fosse obtido. Este foi adicionado a uma solução de 1,2:5,6-bis- O-(1-metiletilideno)-D-manitol (50 g, 190 mmol) em diclorometano (1,0 L) e a reação foi agitada a temperatura ambiente por 1 hora. A mistura resultante foi filtrada através de um pad de Na2SO4 e os sólidos completamente lavados com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram evaporados sob vácuo para formar 37,2 g (75%) do composto título como um óleo sem cor. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 9,73 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 4,38 (ddd, J = 7,4, 4,7, 1,9 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 8,8, 7,4 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 8,8, 4,7 Hz, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,43 (s, 3H). ETAPA 7: (R)-4-DIFLUOROMETIL-2,2-DIMETIL- [1,3]DIOXOLANO [0180] Sodium periodate (57.0 g, 270 mmol) was dissolved in hot water (115 mL) and silica (200 g, 60 A 220-440 mesh, particle size 35-75 µm) was added. The mixture was stirred vigorously until free flow of powder was obtained. This was added to a solution of 1,2:5,6-bis-O-(1-methylethylidene)-D-mannitol (50 g, 190 mmol) in dichloromethane (1.0 L) and the reaction was stirred at temperature environment for 1 hour. The resulting mixture was filtered through a Na2SO4 pad and the solids washed thoroughly with dichloromethane. The combined organic extracts were evaporated under vacuum to form 37.2 g (75%) of the title compound as a colorless oil. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 9.73 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.38 (ddd, J = 7.4, 4.7, 1.9 Hz, 1H), 4 .18 (dd, J = 8.8, 7.4 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 8.8, 4.7 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H), 1, 43 (s, 3H). STEP 7: (R)-4-DIFLUOROMETHYL-2,2-DIMETHYL-[1,3]DIOXOLANE

[0181] Em uma solução de (R)-2,2-dimetil- [1,3]dioxolano-4- carbaldeído (7,08 g, 54 mmol) em diclorometano (50 mL) resfriada em um banho de água foi adicionado, gota a gota, trifluoreto de dietilaminosulfeto (8,4 mL, 62,6 mmol) e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A mistura resultante foi adicionada gota a gota a uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada resfriada em gelo rapidamente agitada. A mistura foi adicionalmente extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados sob vácuo para formar 6,58 g (79%) do composto título bruto como um óleo laranja. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,69 (td, J = 55,8, 4,9 Hz, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 1H), 4,16 - 4,03 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,38 (s, 3H). ETAPA 8: (R)-3-(TERC-BUTILDIMETILSILANILOXI)-1,1-DIFLUOROPROPAN-2-OL [0181] In a solution of (R)-2,2-dimethyl-[1,3]dioxolane-4-carbaldehyde (7.08 g, 54 mmol) in dichloromethane (50 mL) cooled in a water bath was added , dropwise, diethylaminosulfide trifluoride (8.4 mL, 62.6 mmol) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The resulting mixture was added dropwise to a rapidly stirred ice-cold saturated aqueous sodium bicarbonate solution. The mixture was further extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated under vacuum to give 6.58 g (79%) of the crude title compound as an orange oil. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.69 (td, J = 55.8, 4.9 Hz, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 1H), 4.16 - 4.03 ( m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.38 (s, 3H). STEP 8: (R)-3-(TERC-BUTYLDIMETYLSILANYLOXY)-1,1-DIFLUOROPROPAN-2-OL

[0182] HCl em dioxano (4 N, 10,8 mL, 43,2 mmol) foi adicionado a uma solução de (R)-4-difluorometil-2,2-dimetil [1,3]dioxolano (6,58 g, 43,2 mmol) em metanol (40 mL) e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura resultante foi evaporada sob vácuo e azeotropada com acetonitrila. O resíduo foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (10 mL) e terc-cloreto de butildimetilsilila (6,53 g, 43,2 mmol), trietilamina (9,0 mL, 64,9 mmol) e 4- (dimetilamino)piridina (catalítico) foram adicionados. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura resultante foi lavada com água e extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo bruto resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-30% acetato de etila em ciclohexano) para formar 3,43 g (35%) do composto título como um óleo amarelo. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,66 (td, J = 56,4, 4,6 Hz, 1H), 3,76 - 3,60 (m, 2H), 2,46 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). ETAPA 9: ((S)-2-AZIDO-3,3-DIFLUOROPROPOXI)-TERC-BUTILDIMETILSILANO [0182] HCl in dioxane (4N, 10.8 mL, 43.2 mmol) was added to a solution of (R)-4-difluoromethyl-2,2-dimethyl [1,3]dioxolane (6.58 g , 43.2 mmol) in methanol (40 mL) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The resulting mixture was evaporated under vacuum and azeotroped with acetonitrile. The residue was dissolved in N,N-dimethylformamide (10 mL) and tert-butyldimethylsilyl chloride (6.53 g, 43.2 mmol), triethylamine (9.0 mL, 64.9 mmol) and 4-(dimethylamino) pyridine (catalytic) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was washed with water and extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The resulting crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-30% ethyl acetate in cyclohexane) to give 3.43 g (35%) of the title compound as a yellow oil. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.66 (td, J = 56.4, 4.6 Hz, 1H), 3.76 - 3.60 (m, 2H), 2.46 (d, J = 6.4Hz, 1H), 0.81 (s, 9H), 0.00 (s, 6H). STEP 9: ((S)-2-AZIDO-3,3-DIFLUOROPROPOXY)-TERT-BUTYLDIMETYLSILANE

[0183] Anidrido trifluorometanosulfônico (2,9 mL, 17,4 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de (R)-3-(terc-butildimetilsilaniloxi)-1,1- difluoropropan-2-ol (3,43 g, 15,1 mmol) e piridina (2,0 mL, 24,2 mmol) em diclorometano (50 mL) a -20 °C e a mistura da reação agitada a -20 °C por 20 minutos e, em seguida, a 0 °C por 1 hora. A mistura resultante foi diluída com HCl aquoso 0,5 N e extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de magnésio e evaporados em vácuo. O resíduo bruto foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (10 mL), azida sódica (2,96 g, 45,5 mmol) foi adicionada e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura resultante foi diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados sob vácuo para formar 4,50 g do composto título bruto. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,74 (td, J = 55,4, 4,4 Hz, 1H), 3,81 - 3,71 (m, 2H), 3,58 - 3,47 (m, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). ETAPA 10: (S)-1 -(TERC-BUTILDIMETILSILANILOXIMETIL)-2,2-DIFLUOROETILAMINA [0183] Trifluoromethanesulfonic anhydride (2.9 mL, 17.4 mmol) was added dropwise to a solution of (R)-3-(tert-butyldimethylsilanyloxy)-1,1-difluoropropan-2-ol (3.43 g, 15.1 mmol) and pyridine (2.0 mL, 24.2 mmol) in dichloromethane (50 mL) at -20 °C and the reaction mixture stirred at -20 °C for 20 minutes and then at 0°C for 1 hour. The resulting mixture was diluted with 0.5N aqueous HCl and extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuum. The crude residue was dissolved in N,N-dimethylformamide (10 mL), sodium azide (2.96 g, 45.5 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resulting mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated under vacuum to give 4.50 g of the crude title compound. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.74 (td, J = 55.4, 4.4 Hz, 1H), 3.81 - 3.71 (m, 2H), 3.58 - 3.47 ( m, 1H), 0.81 (s, 9H), 0.00 (s, 6H). STEP 10: (S)-1 -(TERT-BUTYLDIMETYLSILANYLOXYMETHYL)-2,2-DIFLUOROETHYLAMINE

[0184] Hidróxido de paládio sobre carbono (200 mg, 20%) foi adicionado a uma solução de ((R)-2-azido-3,3-difluoropropoxi)-terc- butildimetilsilano (4,50 g, bruto, assume ~15,1 mmol) em acetato de etila (20 mL) e metanol (2,0 mL) e a reação foi agitada em um balão de hidrogênio por 16 horas. A reação foi filtrada, e hidróxido de paládio sobre carbono fresco (400 mg, 20%) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada em um balão de hidrogênio por 16 horas. A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob vácuo para formar 3,08 g (90%) do produto título bruto como um óleo sem cor. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,66 (td, J = 57,0, 4,7 Hz, 1H), 3,71 - 3,57 (m, 2H), 3,00 - 2,89 (m, 1H), 1,42 (br s, 2H), 0,82 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). ETAPA 11: (S)-4-DIFLUOROMETILOXAZOLIDIN-2-ONA [0184] Palladium hydroxide on carbon (200 mg, 20%) was added to a solution of ((R)-2-azido-3,3-difluoropropoxy)-tert-butyldimethylsilane (4.50 g, crude, assume ~ 15.1 mmol) in ethyl acetate (20 mL) and methanol (2.0 mL) and the reaction was stirred in a hydrogen flask for 16 hours. The reaction was filtered, and fresh palladium hydroxide on carbon (400 mg, 20%) was added and the reaction mixture was stirred in a hydrogen flask for 16 hours. The resulting mixture was filtered and the filtrate was evaporated in vacuo to form 3.08 g (90%) of the crude title product as a colorless oil. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.66 (td, J = 57.0, 4.7 Hz, 1H), 3.71 - 3.57 (m, 2H), 3.00 - 2.89 ( m, 1H), 1.42 (br s, 2H), 0.82 (s, 9H), 0.00 (s, 6H). STEP 11: (S)-4-DIFLUOROMETHYLOXAZOLIDIN-2-ONE

[0185] HCl em dioxano (4 N, 5,0 mL, 20 mmol) foi adicionado a uma solução de (R)-1-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2,2-difluoroetilamina (Org. Lett., Vol. 9, No. 1, 2007, 41-44) (2,30 g, 10,3 mmol) em metanol (5,0 mL) e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi evaporada sob vácuo e o óleo resultante foi triturado com éter dietílico para formar um sólido que foi seco sob vácuo. O sólido foi dissolvido em uma mistura de tolueno (20 mL) e KOH (2,50 g, 44,6 mmol em 20 mL água) a 0 °C. Fosfogênio (16,3 mL, 20% em tolueno) foi adicionado gota a gota, o banho utilizado para o resfriamento foi removido e a mistura da reação foi agitada por 1 hora. A mistura foi evaporada sob vácuo, o resíduo resultante foi extraído com alcoóis metilados industriais quentes e o sólido foi coletado por filtração. O filtrado foi evaporado sob vácuo e o resíduo resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-100% acetato de etila em ciclohexano) para formar 830 mg (68%) do composto título como um sólido esbranquiçado. [a]D = +10,1 (c = 2,37, CHCl3). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,96 (br s, 1H), 5,78 (td, J = 55,3, 4,8 Hz, 1H), 4,54 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 9,6, 4,4 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 1H). ETAPA 12: (S)-3-(9-BROMO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-2- IL)-4-(DIFLUOROMETIL)OXAZOLIDIN-2-ONA [0185] HCl in dioxane (4N, 5.0 mL, 20 mmol) was added to a solution of (R)-1-(tert-butyldimethylsilanyloxymethyl)-2,2-difluoroethylamine (Org. Lett., Vol. 9 , No. 1, 2007, 41-44) (2.30 g, 10.3 mmol) in methanol (5.0 mL) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was evaporated under vacuum and the resulting oil was triturated with diethyl ether to form a solid which was dried under vacuum. The solid was dissolved in a mixture of toluene (20 mL) and KOH (2.50 g, 44.6 mmol in 20 mL water) at 0 °C. Phosphogen (16.3 mL, 20% in toluene) was added dropwise, the bath used for cooling was removed, and the reaction mixture was stirred for 1 hour. The mixture was evaporated under vacuum, the resulting residue was extracted with hot industrial methylated spirits and the solid was collected by filtration. The filtrate was evaporated under vacuum and the resulting residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-100% ethyl acetate in cyclohexane) to form 830 mg (68%) of the title compound as an off-white solid. [a]D = +10.1 (c = 2.37, CHCl3). H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.96 (br s, 1H), 5.78 (td, J = 55.3, 4.8 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 9.6, 4.4 Hz, 1H), 4.17 - 4.06 (m, 1H). STEP 12: (S)-3-(9-BROMO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-2- IL)-4-(DIFLUOROMETHYL)OXAZOLIDIN -2-ONA

[0186] Uma mistura de 9-bromo-2-iodo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina (250 mg, 0,64 mmol), (S)-4- difluorometiloxazolidin-2-ona (88 mg, 0,64 mmol), trans-N,N'-dimetil-1,2- ciclohexano diamina (36 mg, 0,26 mmol), iodeto cuproso (24 mg, 0,13 mmol) e carbonato de potássio (177 mg, 1,28 mmol) em dioxano (3,0 mL) foi desgaseificada com argônio sob sonicação. A mistura da reação foi aquecida a 100 °C por 5 h e, em seguida, deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi diluída com 15% amônia aquosa e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados sob vácuo. O resíduo resultante foi triturado com metanol e, em seguida, purificado via HPLC preparativa [C18, 60% acetonitrila (0,1% ácido fórmico) em água (0,1% ácido fórmico), 20 minutos de execução] para formar 20 mg (8%) do composto título como um sólido branco. LCMS (ESI): [M+H]+ = 400/402. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 8,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,24 - 7,19 (m, 2H), 6,65 (ddd, J = 57,8, 54,5, 1,0 Hz, 1H), 4,87 (ddd, J = 24,0, 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,73 (dd, J = 9,5, 4,2 Hz, 1H), 4,53 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,48 - 4,43 (m, 2H), 4,38 - 4,33 (m, 2H). ETAPA 13: (S)-2-((2-((S)-4-(DIFLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)PROPANAMIDA[0186] A mixture of 9-bromo-2-iodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepine (250 mg, 0.64 mmol), (S )-4-difluoromethyloxazolidin-2-one (88 mg, 0.64 mmol), trans-N,N'-dimethyl-1,2-cyclohexane diamine (36 mg, 0.26 mmol), cuprous iodide (24 mg, 0.13 mmol) and potassium carbonate (177 mg, 1.28 mmol) in dioxane (3.0 mL) was degassed with argon under sonication. The reaction mixture was heated to 100 °C for 5 h and then allowed to cool to room temperature. The resulting mixture was diluted with 15% aqueous ammonia and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated under vacuum. The resulting residue was triturated with methanol and then purified via preparative HPLC [C18, 60% acetonitrile (0.1% formic acid) in water (0.1% formic acid), 20 minutes run] to form 20 mg (8%) of the title compound as a white solid. LCMS (ESI): [M+H]+ = 400/402. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.19 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.24 - 7.19 (m, 2H), 6.65 (ddd, J = 57.8, 54.5, 1.0 Hz, 1H), 4.87 (ddd, J = 24.0, 9.2, 4.0 Hz, 1H), 4.73 (dd , J = 9.5, 4.2 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.48 - 4.43 (m, 2H), 4.38 - 4, 33 (m, 2H). STEP 13: (S)-2-((2-((S)-4-(DIFLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2 -D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)PROPANAMIDE

[0187] (S)-3-(9-Bromo-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona (600 mg, 1,50 mmol), L-alanina (267 mg, 3,00 mmol), iodeto cuproso (57 mg, 0,30 mmol) e fosfato de potássio tribásico (637 mg, 3,00 mmol) foram suspensos em dimetilsulfóxido (6,0 mL). A mistura da reação foi aquecida a 100 °C por 2 horas. Após resfriar até a temperatura ambiente, foram adicionados dimetilsulfóxido (4,0 mL), cloreto de amônio (480 mg, 9,00 mmol), e trietilamina (3,1 mL, 22,5 mmol). À suspensão resultante agitada foi adicionado, 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol [4,5- b]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato (5,10 g, 13,5 mmol), em porções durante 5 minutos. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora e filtrada através de Celite®, e lavada com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram lavados com bicarbonato de sódio aquoso saturado e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob vácuo. O resíduo bruto foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-5% metanol em diclorometano) e, em seguida, por cromatografia com fluido supercrítico quiral para formar 294 mg (46%) de 101 como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI): RT (min) = 2,89 [M+H]+ = 408, Método = A; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 8,00 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,38 (br s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,00 (br s, 1H), 6,71 (t, J = 55,9 Hz, 1H), 6,41 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1H), 6,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,02 - 4,89 (m, 1H), 4,63 - 4,52 (m, 2H), 4,39 - 4,30 (m, 4H), 3,76 (quinteto, J = 7,0 Hz, 1H), 1,30 ( d, J = 7,1 Hz, 3H). EXEMPLO 102 (S )-2-CICLOBUTIL-2-((2-(( R )-4-METIL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDA 102 ETAPA1: (R)-4-METILOXAZOLIDIN-2-ONA [0187] (S)-3-(9-Bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4-(difluoromethyl)oxazolidin -2-one (600 mg, 1.50 mmol), L-alanine (267 mg, 3.00 mmol), cuprous iodide (57 mg, 0.30 mmol) and tribasic potassium phosphate (637 mg, 3.00 mmol) were suspended in dimethylsulfoxide (6.0 mL). The reaction mixture was heated at 100 °C for 2 hours. After cooling to room temperature, dimethyl sulfoxide (4.0 mL), ammonium chloride (480 mg, 9.00 mmol), and triethylamine (3.1 mL, 22.5 mmol) were added. To the resulting stirred suspension was added, 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazole[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (5.10 g, 13.5 mmol), in portions for 5 minutes. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour and filtered through Celite®, and washed with ethyl acetate. The organic extracts were washed with saturated aqueous sodium bicarbonate and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under vacuum. The crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-5% methanol in dichloromethane) and then by chiral supercritical fluid chromatography to form 294 mg (46%) of 101 as an off-white solid. LCMS (ESI): RT (min) = 2.89 [M+H]+ = 408, Method = A; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8.00 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.38 (br s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.00 ( br s, 1H), 6.71 (t, J = 55.9 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.02 - 4.89 (m, 1H), 4.63 - 4.52 (m, 2H), 4.39 - 4.30 (m, 4H), 3.76 (quintet, J = 7.0 Hz, 1H), 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 3H). EXAMPLE 102 (S )-2-CYCLOBUTYL-2-((2-(( R )-4-METHYL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-YL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1, 2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-YL)AMINO)ACETAMIDE 102 STAGE1: (R)-4-METHYLOXAZOLIDIN-2-ONE

[0188] Em uma mistura de D-alaninol (8,65 g, 0,12 mmol) em tolueno e KOH aquoso (124 mL, 12,5% aq, 0,28 mmol) a 0 °C foi adicionado fosfogênio (72,7 mL, 20% em tolueno, 0,14 mmol) em uma taxa na qual a temperatura interna se mantivesse < 5 °C. A mistura da reação foi agitada a 0 °C por mais 40 minutos e, então, foi evaporada até a secura. O resíduo bruto foi extraído com álcool metilado industrial, a pasta foi filtrada e o filtrado evaporado sob vácuo. O resíduo resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 40-100% acetato de etila em ciclohexano) para formar 10,4 g (90%) do composto título como um sólido branco. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 6,00 (br s, 1H), 4,50 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,07 - 3,97 (m, 1H), 3,95 (dd, J = 7,8, 6,2 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 6,1 Hz, 3H). ETAPA2: (R)-3-(9-BROMO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1 ,4]OXAZEPIN-2- IL)-4-METILOXAZOLIDIN-2-ONA E (R)-3-(9-IODO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2- D] [1,4]OXAZEPIN-2-IL)-4-METILOXAZOLIDIN-2-ONA [0188] In a mixture of D-alaninol (8.65 g, 0.12 mmol) in toluene and aqueous KOH (124 mL, 12.5% aq, 0.28 mmol) at 0 °C, phosphogen (72 .7 mL, 20% in toluene, 0.14 mmol) at a rate at which the internal temperature remains < 5 °C. The reaction mixture was stirred at 0 °C for an additional 40 minutes and then evaporated to dryness. The crude residue was extracted with industrial methylated spirits, the slurry was filtered and the filtrate was evaporated under vacuum. The resulting residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 40-100% ethyl acetate in cyclohexane) to form 10.4 g (90%) of the title compound as a white solid. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 6.00 (br s, 1H), 4.50 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3, 95 (dd, J = 7.8, 6.2 Hz, 1H), 1.30 (d, J = 6.1 Hz, 3H). STEP2: (R)-3-(9-BROMO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-2-IL)-4-METHYLOXAZOLIDIN-2-ONE E (R)-3-(9-IODO-5,6-DI-HYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2- D] [1,4]OXAZEPIN-2-IL)-4-METHYLOXAZOLIDIN-2-ONE

[0189] Uma mistura de 9-bromo-2-iodo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina (30,0 g, 76,7 mmol), (R)-4- metiloxazolidin-2-ona (7,70 g, 76,7 mmol), iodeto cuproso (1,61 g, 8,40 mmol), trans-N,N’-dimetil-1,2-ciclohexano diamina (2,7 mL, 16,9 mmol) e carbonato de potássio (14,9 g, 107 mmol) foram suspensos em 1,4-dioxano (200 mL) e a mistura da reação foi desgaseificada com argônio sob sonicação. A mistura resultante foi aquecida a 100 °C por 16 h. A mistura da reação foi diluída com solução de amônia aquosa (~16%) e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados sob vácuo. O resíduo resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-100% acetato de etila em ciclohexano) para formar 13,4 g (~42%) de os compostos títulos (~2:1 mistura de produtos 9-Br: 9-I). RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 8,28 (d, J = 7,6 Hz, 0,33H), 8,11 (d, J = 6,9 Hz, 0,66H), 7,42 - 7,38 (m, 1H), 7,28 - 7,24 (m, 1,33H), 7,23 - 7,18 (m, 0,66H), 4,77 - 4,68 (m, 1H), 4,58 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 4,49 - 4,39 (m, 2H), 4,37 - 4,30 (m, 2H), 4,08 (dd, J = 8,4, 4,5 Hz, 1H), 1,57 - 1,50 (m, 3H). ETAPA 3: (R)-3-(9-BROMO-5,6-DI-HIDROIMIDAZO [1,2-D] [1 ,4]BENZOXAZEPIN-2-IL)-4- METIL-OXAZOLIDIN-2-ONA [0189] A mixture of 9-bromo-2-iodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepine (30.0 g, 76.7 mmol), (R)-4-methyloxazolidin-2-one (7.70 g, 76.7 mmol), cuprous iodide (1.61 g, 8.40 mmol), trans-N,N'-dimethyl-1,2- cyclohexane diamine (2.7 mL, 16.9 mmol) and potassium carbonate (14.9 g, 107 mmol) were suspended in 1,4-dioxane (200 mL) and the reaction mixture was degassed with argon under sonication. The resulting mixture was heated at 100 °C for 16 h. The reaction mixture was diluted with aqueous ammonia solution (~16%) and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated under vacuum. The resulting residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-100% ethyl acetate in cyclohexane) to form 13.4 g (~42%) of the title compounds (~2:1 mixture of products 9 -Br: 9-I). H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.28 (d, J = 7.6 Hz, 0.33H), 8.11 (d, J = 6.9 Hz, 0.66H), 7.42 - 7 .38 (m, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 1.33H), 7.23 - 7.18 (m, 0.66H), 4.77 - 4.68 (m, 1H) , 4.58 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 4.37 - 4.30 (m, 2H), 4.08 (dd, J = 8.4, 4.5 Hz, 1H), 1.57 - 1.50 (m, 3H). STEP 3: (R)-3-(9-BROMO-5,6-DIHYDROIMIDAZO [1,2-D] [1,4]BENZOXAZEPIN-2-IL)-4- METHYL-OXAZOLIDIN-2-ONE

[0190] 80 mg de uma mistura de (R )-3-(9-Bromo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-metiloxazolidin-2-ona e (R)-3- (9-Iodo-5,6-di-hidrobenzo [ f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-metiloxazolidin-2- ona foi separada por SFC quiral, para formar 27,6 mg do composto título. LCMS (ESI): [M+H]+ = 364,0/366,0/367,2; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,31 (dd, J = 8,7, 2,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,65 - 4,54 (m, 2H), 4,49 - 4,43 (m, 4H), 4,09 - 4,06 (m, 1H), 1,42 (d, J = 6,0 Hz). ETAPA4: (S)-2-CICLOBUTIL-2-((2-((R)-4-METIL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]0XAZEPIN-9-IL)AMIN0)ACETAT0 DE METILA [0190] 80 mg of a mixture of (R )-3-(9-Bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)- 4-methyloxazolidin-2-one and (R)-3-(9-Iodo-5,6-dihydrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxazepin-2-yl)-4 -methyloxazolidin-2-one was separated by chiral SFC to form 27.6 mg of the title compound. LCMS (ESI): [M+H]+ = 364.0/366.0/367.2; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8.22 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 2, 1 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.65 - 4.54 (m, 2H), 4.49 - 4.43 (m, 4H), 4, 09 - 4.06 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.0 Hz). STEP4: (S)-2-CYCLOBUTYL-2-((2-((R)-4-METHYL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [F]IMIDAZO [1, 2-D] [1,4]0XAZEPIN-9-IL)AMIN0)METHYL ACETATE0

[0191] Uma mistura de (4R)-3-(9-bromo-5,6-di-hidroimidazo [1,2- d] [1,4]benzoxazepin-2-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona (0,2746 mmol, 100 mg), iodeto cuproso (0,084 mmol, 16 mg), ácido (2S)-2-amino-2-ciclobutil-acético (1,10 mmol, 142 mg) e fosfato de potássio tribásico (1,37 mmol, 297 mg) em dimetilsulfóxido (3 mL) foi aquecida sob irradiação de micro-ondas a 120 °C por 2 horas. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, e iodometano (1,4 mmol, 0,086 mL) foi adicionado e a reação foi extraída com diclorometano e água. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salina, e secos com sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob vácuo. O produto bruto foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (24 g silica, gradiente de solvente: 5-40% 3:1 acetato de isopropila:metanol em diclorometano) para formar 100 mg (85%) do composto título.[0191] A mixture of (4R)-3-(9-bromo-5,6-dihydroimidazo [1,2-d] [1,4]benzoxazepin-2-yl)-4-methyl-oxazolidin-2 -one (0.2746 mmol, 100 mg), cuprous iodide (0.084 mmol, 16 mg), (2S)-2-amino-2-cyclobutyl-acetic acid (1.10 mmol, 142 mg) and tribasic potassium phosphate (1.37 mmol, 297 mg) in dimethyl sulfoxide (3 mL) was heated under microwave irradiation at 120 °C for 2 hours. The reaction was cooled to room temperature, and iodomethane (1.4 mmol, 0.086 mL) was added and the reaction was extracted with dichloromethane and water. The organic extracts were combined, washed with saline, and dried with sodium sulfate, filtered and evaporated under vacuum. The crude product was purified via flash chromatography on silica gel (24 g silica, solvent gradient: 5-40% 3:1 isopropyl acetate:methanol in dichloromethane) to form 100 mg (85%) of the title compound.

ETAPA 5: (S)-2-CICLOBUTIL-2-((2-((R)-4-METIL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDASTEP 5: (S)-2-CYCLOBUTYL-2-((2-((R)-4-METHYL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [F]IMIDAZO [1 ,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-YL)AMINO)ACETAMIDE

[0192] Em uma solução de (2S)-2-ciclobutil-2- [ [2- [(4R)-4-metil-2- oxo-oxazolidin-3-il]-5,6-di-hidroimidazo [1,2-d] [1,4]benzoxazepin-9- il]amino]acetato de metila (0,234 mmol, 100 mg) em tetrahidrofurano (5 mL) foi adicionada água (0,45 mL) e hidróxido de lítio mono-hidratado (0,357 mmol, 15 mg). A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 6 horas. A mistura da reação foi evaporada sob vácuo. Em uma solução do resíduo resultante em N,N -dimetilformamida (3 mL) foi adicionado 1 [bis (dimetilamino)metileno]-1 H -1,2,3-triazol [4,5-b ]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato (0,353 mmol, 137 mg), cloreto de amônio (0,71 mmol, 38 mg) e N,N-di-isopropiletilamina (0,705 mmol, 0,123 mL) e a mistura da reação agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura da reação foi evaporada sob vácuo e o resíduo resultante tratado com água e extraído com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio e evaporados em vácuo. O produto bruto foi purificado via HPLC de fase reversa, seguido por SFC e liofilizado para formar 15,0 mg (15%) de 102. LCMS (ESI): RT (min) = 3,03, [M+H]+ = 412,2, método = D; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,39 - 7,36 (brs, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,00 - 6,97 (brs, 1H), 6,44 (dd, J = 8,9, 2,3 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,62 - 4,49 (m, 2H), 4,38 - 4,28 (m, 4H), 4,06-4,03 (m, 1H), 3,70 - 3,61 (m, 1H), 2,06 - 1,75 (m, 6H), 1,42 - 1,34 (m, 3H).[0192] In a solution of (2S)-2-cyclobutyl-2- [ [2- [(4R)-4-methyl-2- oxo-oxazolidin-3-yl]-5,6-dihydroimidazo [1 Methyl ,2-d] [1,4]benzoxazepin-9-yl]amino]acetate (0.234 mmol, 100 mg) in tetrahydrofuran (5 mL) was added water (0.45 mL) and lithium hydroxide monohydrate (0.357 mmol, 15 mg). The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 hours. The reaction mixture was evaporated under vacuum. To a solution of the resulting residue in N,N-dimethylformamide (3 mL) was added 1 [bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazole [4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate ( 0.353 mmol, 137 mg), ammonium chloride (0.71 mmol, 38 mg) and N,N-diisopropylethylamine (0.705 mmol, 0.123 mL) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was evaporated under vacuum and the resulting residue treated with water and extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuum. The crude product was purified via reverse phase HPLC followed by SFC and lyophilized to form 15.0 mg (15%) of 102. LCMS (ESI): RT (min) = 3.03, [M+H]+ = 412.2, method = D; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 - 7.36 (brs, 1H), 7.13 (s, 1H), 7 .00 - 6.97 (brs, 1H), 6.44 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5, 96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.62 - 4.49 (m, 2H), 4.38 - 4.28 (m, 4H), 4.06-4.03 (m, 1H), 3.70 - 3.61 (m, 1H), 2.06 - 1.75 (m, 6H), 1.42 - 1.34 (m, 3H).

EXEMPLO 103 (S )-2-CICLOPROPIL-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDA 103EXAMPLE 103 (S )-2-CYCLOPROPYL-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [ 1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDE 103

[0193] Uma mistura de (S)-3-(9-bromo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona a partir do Exemplo 101, etapa 12 (400 mg, 1,00 mmol), L-ciclopropilglicina (230 mg, 2,00 mmol), iodeto cuproso (38 mg, 0,20 mmol) e fosfato de potássio tribásico (424 mg, 2,00 mmol) em dimetilsulfóxido (2,0 mL) foram desgaseificados com argônio sob sonicação. A mistura foi aquecida a 100 °C por 5 horas e então resfriada até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi diluída com dimetilsulfóxido (5,0 mL) e cloreto de amônio (320 mg, 6,00 mmol) e trietilamina (1,4 mL, 10,0 mmol) foram adicionados. Na suspensão agitada foi então adicionado 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol [4,5- b]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato (2,28 g, 6,0 mmol), em porções, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos. A mistura resultante foi diluída com 15% solução de amônia aquosa e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo bruto foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-7% metanol em acetato de etila). O resíduo foi dissolvido em um mínimo de acetonitrila. A água foi então adicionada para precipitar um sólido que foi coletado por filtração e seco em vácuo para formar 324 mg (75%) de 103 como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI): RT (min) = 3,21, [M+H]+ = 434, Método = A; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,98 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,40 (br s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 6,71 (t, J = 56,0 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,01 - 4,89 (m, 1H), 4,63 - 4,51 (m, 2H), 4,38 - 4,29 (m, 4H), 3,15 ( t, J = 7,7 Hz, 1H), 1,16 - 1,05 (m, 1H), 0,56 - 0,44 (m, 3H), 0,33 - 0,25 (m, 1H).[0193] A mixture of (S)-3-(9-bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4-( difluoromethyl)oxazolidin-2-one from Example 101, step 12 (400 mg, 1.00 mmol), L-cyclopropylglycine (230 mg, 2.00 mmol), cuprous iodide (38 mg, 0.20 mmol) and tribasic potassium phosphate (424 mg, 2.00 mmol) in dimethyl sulfoxide (2.0 mL) were degassed with argon under sonication. The mixture was heated at 100 °C for 5 hours and then cooled to room temperature. The resulting mixture was diluted with dimethyl sulfoxide (5.0 mL) and ammonium chloride (320 mg, 6.00 mmol) and triethylamine (1.4 mL, 10.0 mmol) were added. To the stirred suspension was then added 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (2.28 g, 6.0 mmol), in portions, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The resulting mixture was diluted with 15% aqueous ammonia solution and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-7% methanol in ethyl acetate). The residue was dissolved in a minimum of acetonitrile. Water was then added to precipitate a solid which was collected by filtration and dried in vacuo to form 324 mg (75%) of 103 as an off-white solid. LCMS (ESI): RT (min) = 3.21, [M+H]+ = 434, Method = A; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.98 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.03 ( br s, 1H), 6.71 (t, J = 56.0 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.9, 2.4 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 2H), 4.38 - 4.29 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 1.16 - 1.05 (m, 1H), 0.56 - 0.44 ( m, 3H), 0.33 - 0.25 (m, 1H).

EXEMPLO 104 (S )-2-CICLOPROPIL-2-((2-(( R )-4-METIL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDA 104EXAMPLE 104 (S )-2-CYCLOPROPYL-2-((2-(( R )-4-METHYL-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1, 2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDE 104

[0194] Uma mistura de (R)-3-(9-bromo-5,6-di-hidroimidazo [1,2- d] [1,4]benzoxazepin-2-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona (Exemplo 102, etapa 3) (1,098 mmol, 400 mg), iodeto cuproso (0,330 mmol, 62,8 mg), ácido (2S )-2- amino-2-ciclopropil-acético (3,295 mmol, 379,3 mg) e fosfato de potássio tribásico (4,393 mmol, 951,5 mg) em dimetilsulfóxido (35 mmol, 2,5 mL) foi aquecida a 110 °C por 2 horas sob irradiação de micro-ondas. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente. Foi adicionada à mistura da reação 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1 H -1,2,3-triazol [4,5-b ]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato (12,08 mmol, 4260 mg), cloreto de amônio (12,08 mmol, 646 mg) e trietilamina (1,53 mL, 11,0 mmol). Após 20 minutos em temperatura ambiente, a mistura da reação foi tratada com água e extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O produto bruto foi purificado via HPLC de fase reversa e liofilizado para formar 110 mg (25% em 2 etapas) de 104. LCMS (ESI): RT (min) = 2,588, [M+H]+ = 398,2, método = B; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,02 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,20 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,61 - 4,49 (m, 2H), 4,40 - 4,27 (m, 4H), 4,10 - 3,99 (m, 1H), 3,22 - 3,09 (m, 1H), 1,42 - 1,36 (m, 3H), 1,16 - 1,04 (m, 1H), 0,56 - 0,42 (m, 3H), 0,32 - 0,27 (m, 1H). EXEMPLO 105 (S )-2-CICLOPROPIL-2-((2-(( S )-4-(FLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]?XAZEPIN-9-IL)AMIN?)ACETAMIDA 105 Etapa 1: (R )-1-( terc- Butildimetilsilaniloxi)-3-fluoropropan-2-ol [0194] A mixture of (R)-3-(9-bromo-5,6-dihydroimidazo [1,2- d] [1,4]benzoxazepin-2-yl)-4-methyl-oxazolidin-2 -one (Example 102, step 3) (1.098 mmol, 400 mg), cuprous iodide (0.330 mmol, 62.8 mg), (2S)-2-amino-2-cyclopropyl-acetic acid (3.295 mmol, 379.3 mg) and tribasic potassium phosphate (4.393 mmol, 951.5 mg) in dimethylsulfoxide (35 mmol, 2.5 mL) was heated at 110 °C for 2 hours under microwave irradiation. The reaction was cooled to room temperature. To the reaction mixture was added 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazole[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (12.08 mmol, 4260 mg), sodium chloride ammonium (12.08 mmol, 646 mg) and triethylamine (1.53 mL, 11.0 mmol). After 20 minutes at room temperature, the reaction mixture was treated with water and extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The crude product was purified via reverse phase HPLC and lyophilized to form 110 mg (25% in 2 steps) of 104. LCMS (ESI): RT (min) = 2.588, [M+H]+ = 398.2, method =B; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H ), 7.02 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.9, 2.4 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 7.1 Hz , 1H), 6.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 2H), 4.40 - 4.27 (m, 4H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.22 - 3.09 (m, 1H), 1.42 - 1.36 (m, 3H), 1.16 - 1.04 (m, 1H), 0, 56 - 0.42 (m, 3H), 0.32 - 0.27 (m, 1H). EXAMPLE 105 (S )-2-CYCLOPROPYL-2-((2-(( S )-4-(FLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [ 1,2-D] [1,4]?XAZEPIN-9-YL)AMIN?)ACETAMIDE 105 Step 1: (R)-1-(tert-Butyldimethylsilanyloxy)-3-fluoropropan-2-ol

[0195] Cloreto de terc-butildimetilsilila (1,60 g, 10,63 mmol) foi adicionado a uma solução de (R)-3-fluoropropano-1,2-diol (1,00 g, 10,6 mmol), trietilamina (1,93 mL, 13,8 mmol) e 4-(dimetilamino)piridina catalítica em diclorometano a 0 °C e a mistura da reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente por 16 horas. A mistura da reação foi diluída com água e extraída com diclorometano. As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salina, secas em sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas em vácuo. o resíduo bruto resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-40% acetato de etila em ciclohexano) para formar 1,80 g (81%) do composto título como um óleo sem cor. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 4,45 - 4,36 (m, 1H), 4,34 - 4,25 (m, 1H), 3,87 - 3,73 (m, 1H), 3,66 - 3,56 (m, 2H), 2,30 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). ETAPA 2: (S)-2-AZIDO-3-FLUOROPROPOXI)-TERC-BUTILDIMETILSILANO [0195] Tert-Butyldimethylsilyl chloride (1.60 g, 10.63 mmol) was added to a solution of (R)-3-fluoropropane-1,2-diol (1.00 g, 10.6 mmol), triethylamine (1.93 mL, 13.8 mmol) and catalytic 4-(dimethylamino)pyridine in dichloromethane at 0 °C and the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred at room temperature for 16 hours. The reaction mixture was diluted with water and extracted with dichloromethane. The combined organic fractions were washed with brine, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuo. the resulting crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-40% ethyl acetate in cyclohexane) to form 1.80 g (81%) of the title compound as a colorless oil. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 4.45 - 4.36 (m, 1H), 4.34 - 4.25 (m, 1H), 3.87 - 3.73 (m, 1H), 3, 66 - 3.56 (m, 2H), 2.30 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 0.82 (s, 9H), 0.00 (s, 6H). STEP 2: (S)-2-AZIDO-3-FLUOROPROPOXY)-TERT-BUTYLDIMETYLSILANE

[0196] Adicionou-se trifluorometanosulfônico anidrido (1,67 mL, 9,93 mmol) gota a gota a uma solução de (R)-1-(terc-butildimetilsilaniloxi)-3- fluoropropan-2-ol (1,80 g, 8,60 mmol) e piridina (1,2 mL, 13,8 mmol) em diclorometano a -20 °C e a mistura da reação agitada a -20 °C por 20 minutos e, em seguida, a 0 °C por 30 minutos. A mistura da reação foi diluída com HCl aquoso 0,5 N e extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (5,0 mL) e azida sódica (1,68 g, 25,9 mmol) foi adicionada. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura resultante foi diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo para formar o composto título bruto que foi levado a diante sem purificação. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 4,58 - 4,26 (m, 2H), 3,75 - 3,63 (m, 2H), 3,62 - 3,46 (m, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). ETAPA 3: (S)-1 -(TERC-BUTILDIMETILSILANILOXIMETIL)-2-FLUOROETILAMINA [0196] Trifluoromethanesulfonic anhydride (1.67 mL, 9.93 mmol) was added dropwise to a solution of (R)-1-(tert-butyldimethylsilanyloxy)-3-fluoropropan-2-ol (1.80 g , 8.60 mmol) and pyridine (1.2 mL, 13.8 mmol) in dichloromethane at -20 °C and the reaction mixture stirred at -20 °C for 20 minutes and then at 0 °C for 30 minutes. The reaction mixture was diluted with 0.5 N aqueous HCl and extracted with dichloromethane. The combined organic extracts were dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The residue was dissolved in N,N-dimethylformamide (5.0 mL) and sodium azide (1.68 g, 25.9 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resulting mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuo to form the crude title compound which was carried forward without purification. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 4.58 - 4.26 (m, 2H), 3.75 - 3.63 (m, 2H), 3.62 - 3.46 (m, 1H), 0, 80 (s, 9H), 0.00 (s, 6H). STEP 3: (S)-1 -(TERT-BUTYLDIMETYLSILANYLOXYMETHYL)-2-FLUOROETHYLAMINE

[0197] Foi adicionado hidróxido de paládio (400 mg, 20% em carbono) a uma solução de ((S)-2-azido-3-fluoropropoxi)-terc-butildimetilsilano (bruto, assume 8,60 mmol) em acetato de etila (15 mL) e metanol (5,0 mL) e a mistura da reação foi agitada em um balão de hidrogênio por 16 horas. A mistura resultante foi filtrada, e foi adicionado hidróxido de paládio fresco (400 mg, 20% em carbono) e a reação foi agitada em um balão de hidrogênio por mais 16 horas. A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi evaporado em vácuo para formar o composto título como uma mistura ~2:1 de produto: material de partida, que foi levado a diante sem purificação. ETAPA 4: (S)-4-FLUOROMETILOXAZOLIDIN-2-ONA [0197] Palladium hydroxide (400 mg, 20% in carbon) was added to a solution of ((S)-2-azido-3-fluoropropoxy)-tert-butyldimethylsilane (crude, assumes 8.60 mmol) in acetate ethyl (15 mL) and methanol (5.0 mL) and the reaction mixture was stirred in a hydrogen flask for 16 hours. The resulting mixture was filtered, and fresh palladium hydroxide (400 mg, 20% carbon) was added and the reaction was stirred in a hydrogen flask for an additional 16 hours. The resulting mixture was filtered and the filtrate was evaporated in vacuo to form the title compound as a ~2:1 mixture of product: starting material, which was carried forward without purification. STEP 4: (S)-4-FLUOROMETHYLOXAZOLIDIN-2-ONE

[0198] HCl em dioxano (4 N, 2,0 mL, 8,00 mmol) foi adicionado a uma solução de (S)-1-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-fluoroetilamina (bruto, assume 8,60 mmol) em metanol (3,0 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura da reação foi evaporada em vácuo. O resíduo resultante foi dissolvido em uma mistura de tolueno (20 mL) e KOH (2,89 g, 51,6 mmol, 12,5% aq) a 0 °C. A essa mistura foi adicionado fosfogênio (13,6 mL, 20% em tolueno) gota a gota, o banho utilizado para o resfriamento foi removido e a mistura resultante foi agitada por 1 hora. A mistura da reação foi evaporada em vácuo e o resíduo resultante foi extraído com alcoóis metilados industriais quentes. O filtrado foi evaporado em vácuo e o resíduo resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 50-100% acetato de etila em ciclohexano) para formar 450 mg (44%, 3 steps) do composto título como um sólido esbranquiçado. RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 5,69 (br s, 1H), 4,59 - 4,42 (m, 2H), 4,42 - 4,32 (m, 1H), 4,25 - 4,08 (m, 2H). ETAPA 5: (S)-3-(9-BROMO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1 ,2-D] [1 ,4]OXAZEPIN-2-IL)-4- (FLUOROMETIL)OXAZOLIDIN-2-ONA E (S)-3-(9-IODO-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1 ,2- D] [1,4]OXAZEPIN-2-IL)-4-(FLUOROMETIL)OXAZOLIDIN-2-ONA [0198] HCl in dioxane (4N, 2.0 mL, 8.00 mmol) was added to a solution of (S)-1-(tert-butyldimethylsilanyloxymethyl)-2-fluoroethylamine (crude, assume 8.60 mmol) in methanol (3.0 mL) and the resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was evaporated in vacuum. The resulting residue was dissolved in a mixture of toluene (20 mL) and KOH (2.89 g, 51.6 mmol, 12.5% aq) at 0 °C. To this mixture, phosphogen (13.6 mL, 20% in toluene) was added dropwise, the bath used for cooling was removed and the resulting mixture was stirred for 1 hour. The reaction mixture was evaporated in vacuum and the resulting residue was extracted with hot industrial methylated spirits. The filtrate was evaporated in vacuo and the resulting residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 50-100% ethyl acetate in cyclohexane) to form 450 mg (44%, 3 steps) of the title compound as a solid whitish. H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 5.69 (br s, 1H), 4.59 - 4.42 (m, 2H), 4.42 - 4.32 (m, 1H), 4.25 - 4 .08 (m, 2H). STEP 5: (S)-3-(9-BROMO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1 ,2-D] [1 ,4]OXAZEPIN-2-IL)-4- (FLUOROMETHYL)OXAZOLIDIN -2-ONE AND (S)-3-(9-IODO-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2- D] [1,4]OXAZEPIN-2-IL)-4-(FLUOROMETHYL )OXAZOLIDIN-2-ONE

[0199] Uma mistura de 9-bromo-2-iodo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepina (722 mg, 1,85 mmol), (S)-4- fluorometiloxazolidin-2-ona (220 mg, 1,85 mmol), 3,4,7,8-tetrametil-1,10- fenantrolina (131 mg, 0,55 mmol), Cu(OAc)2.H2O (74 mg, 0,37 mmol), carbonato de potássio (510 mg, 3,70 mmol) e dioxano (6,0 ml) foi selada em um tubo e a mistura foi desgaseificada com argônio sob sonicação. A mistura da reação foi aquecida a 100 °C por 72 horas. A mistura resultante da reação foi diluída com 15% amônia aquosa e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo bruto foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-100% acetato de etila em ciclohexano) para formar 390 mg (53%) de os compostos títulos (mistura aproximada de 2:1 de produtos 9-Br e 9-I). LCMS (ESI): [M+H]+ = 382/384/430; RMN H1 (400 MHz, CDCl3) d 8,22 (d, J = 9,3 Hz, 0,7H), 8,05 (d, J = 8,8 Hz, 0,3H), 7,43 - 7,37 (m, 0,6H), 7,29 (s, 1,2H), 7,23 - 7,18 (m, 1,2H), 5,03 - 4,66 (m, 3H), 4,60 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 4,54 (dd, J = 8,6, 4,3 Hz, 1H), 4,47 - 4,43 (m, 2H), 4,37 - 4,33 (m, 2H).[0199] A mixture of 9-bromo-2-iodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepine (722 mg, 1.85 mmol), (S )-4-fluoromethyloxazolidin-2-one (220 mg, 1.85 mmol), 3,4,7,8-tetramethyl-1,10-phenanthroline (131 mg, 0.55 mmol), Cu(OAc)2. H2O (74 mg, 0.37 mmol), potassium carbonate (510 mg, 3.70 mmol) and dioxane (6.0 ml) was sealed in a tube and the mixture was degassed with argon under sonication. The reaction mixture was heated at 100 °C for 72 hours. The resulting reaction mixture was diluted with 15% aqueous ammonia and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-100% ethyl acetate in cyclohexane) to form 390 mg (53%) of the title compounds (approximate 2:1 mixture of 9-Br products and 9-I). LCMS (ESI): [M+H]+ = 382/384/430; H1 NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.22 (d, J = 9.3 Hz, 0.7H), 8.05 (d, J = 8.8 Hz, 0.3H), 7.43 - 7 .37 (m, 0.6H), 7.29 (s, 1.2H), 7.23 - 7.18 (m, 1.2H), 5.03 - 4.66 (m, 3H), 4 .60 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 8.6, 4.3 Hz, 1H), 4.47 - 4.43 (m, 2H), 4, 37 - 4.33 (m, 2H).

ETAPA 6: (S)-2-CICLOPROPIL-2-((2-((S)-4-(FLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3- IL)-5,6-DI-HIDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDASTEP 6: (S)-2-CYCLOPROPYL-2-((2-((S)-4-(FLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3- IL)-5,6-DIHYDROBENZO [F]IMIDAZO [1,2-D] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)ACETAMIDE

[0200] Uma mistura de (S)-3-(9-bromo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona e (S)-3-(9-iodo-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4- (fluorometil)oxazolidin-2-ona (195 mg, ~2:1 mix Br:I, ~0,49 mmol), L- ciclopropilglicina (104 mg, 0,90 mmol), iodeto cuproso (17 mg, 0,09 mmol) e fosfato de potássio tribásico (190 mg, 0,90 mmol) em dimetilsulfóxido (1,5 mL) foi desgaseificada com argônio sob sonicação. A mistura da reação foi aquecida a 100 °C por 16 horas e então resfriada até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi diluída com dimetilsulfóxido (1,0 mL) e cloreto de amônio (144 mg, 2,70 mmol) e trietilamina (950 µL, 6,75 mmol) foram adicionados. A essa mistura foi então adicionado 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol [4,5-b]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato (1,54 g, 4,05 mmol), em porções, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura resultante foi diluída com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo bruto resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-5% metanol em diclorometano) e, em seguida, foi adicionalmente purificado por cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-100% acetato de metila em ciclohexano) para formar 90 mg (48%) de 105 como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI): RT (min) = 2,76 [M+H]+ = 416, Método = A; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,40 (br s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 6,41 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,99 (ddd, J = 48,3, 9,8, 2,5 Hz, 1H), 4,81 - 4,56 (m, 3H), 4,40 (dd, J = 8,6, 3,9 Hz, 1H), 4,37 - 4,29 (m, 4H), 3,15 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 1,16 - 1,05 (m, 1H), 0,54 - 0,43 (m, 3H), 0,33 - 0,25 (m, 1H).[0200] A mixture of (S)-3-(9-bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4-( fluoromethyl)oxazolidin-2-one and (S)-3-(9-iodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4 - (fluoromethyl)oxazolidin-2-one (195 mg, ~2:1 mix Br:I, ~0.49 mmol), L-cyclopropylglycine (104 mg, 0.90 mmol), cuprous iodide (17 mg, 0. 09 mmol) and tribasic potassium phosphate (190 mg, 0.90 mmol) in dimethyl sulfoxide (1.5 mL) was degassed with argon under sonication. The reaction mixture was heated at 100 °C for 16 h and then cooled to room temperature. The resulting mixture was diluted with dimethyl sulfoxide (1.0 mL) and ammonium chloride (144 mg, 2.70 mmol) and triethylamine (950 µL, 6.75 mmol) were added. To this mixture was then added 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (1.54 g, 4.05 mmol), in portions, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was diluted with saturated aqueous sodium bicarbonate solution and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The resulting crude residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-5% methanol in dichloromethane) and then further purified by flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-100% dichloromethane). methyl in cyclohexane) to form 90 mg (48%) of 105 as an off-white solid. LCMS (ESI): RT (min) = 2.76 [M+H]+ = 416, Method = A; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.03 ( br s, 1H), 6.41 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.99 (ddd, J = 48.3, 9.8, 2.5 Hz, 1H), 4.81 - 4.56 (m, 3H), 4.40 (dd , J = 8.6, 3.9 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 1.16 - 1, 05 (m, 1H), 0.54 - 0.43 (m, 3H), 0.33 - 0.25 (m, 1H).

EXEMPLO 106 (S )-2-((2-(( S )-4-(FLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D ] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)PROPANAMIDA 106EXAMPLE 106 (S )-2-((2-(( S )-4-(FLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2- D ] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)PROPANAMIDE 106

[0201] Uma mistura de (S)-3-(9-bromo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona e (S)-3-(9-iodo-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4- (fluorometil)oxazolidin-2-ona (Exemplo 105, etapa 5) (195 mg, mistura aproximada de 2:1 9-Br: 9-I, 0,49 mmol), L-alanina (87 mg, 0,98 mmol), iodeto cuproso (17 mg, 0,09 mmol) e fosfato de potássio tribásico (208 mg, 0,98 mmol) em dimetilsulfóxido (3,0 mL) foram desgaseificados com argônio sob sonicação. A mistura da reação foi aquecida a 100 °C por 4 horas e então resfriada até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi diluída com dimetilsulfóxido (3,0 mL) e cloreto de amônio (157 mg, 2,94 mmol) e trietilamina (683 µL, 4,8 mmol) foram adicionados. A essa mistura foi então adicionado 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol [4,5-b]piridínio 3- óxido hexafluorofosfato (1,10 g, 2,94 mmol), em porções, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura resultante foi diluída com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salina, secos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados em vácuo. O resíduo resultante foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-5% metanol em diclorometano) e, em seguida, foi adicionalmente purificado por cromatografia com fluido supercrítico quiral para formar 36 mg (19%) de 106 como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI): RT (min) = 2,43 [M+H]+ = 390, Método = A; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (br s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,00 (br s, 1H), 6,39 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,08 - 4,55 (m, 5H), 4,42 - 4,28 (m, 4H), 3,76 (quinteto, J = 7,2 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 7,2 Hz, 3H).[0201] A mixture of (S)-3-(9-bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4-( fluoromethyl)oxazolidin-2-one and (S)-3-(9-iodo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4 - (fluoromethyl)oxazolidin-2-one (Example 105, step 5) (195 mg, approximate 2:1 mixture 9-Br:9-I, 0.49 mmol), L-alanine (87 mg, 0.98 mmol), cuprous iodide (17 mg, 0.09 mmol) and tribasic potassium phosphate (208 mg, 0.98 mmol) in dimethyl sulfoxide (3.0 mL) were degassed with argon under sonication. The reaction mixture was heated at 100 °C for 4 h and then cooled to room temperature. The resulting mixture was diluted with dimethyl sulfoxide (3.0 mL) and ammonium chloride (157 mg, 2.94 mmol) and triethylamine (683 µL, 4.8 mmol) were added. To this mixture was then added 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (1.10 g, 2.94 mmol), in portions, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The resulting mixture was diluted with saturated aqueous sodium bicarbonate solution and extracted with ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with saline, dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuum. The resulting residue was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-5% methanol in dichloromethane) and then further purified by chiral supercritical fluid chromatography to form 36 mg (19%) of 106 as a off-white solid. LCMS (ESI): RT (min) = 2.43 [M+H]+ = 390, Method = A; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.37 (br s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.00 ( br s, 1H), 6.39 (dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.08 - 4.55 (m, 5H), 4.42 - 4.28 (m, 4H), 3.76 (quintet, J = 7.2 Hz, 1H), 1.30 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

EXEMPLO 107 (S )-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETIL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI- HIDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2-D ] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)BUTANAMIDA 107EXAMPLE 107 (S )-2-((2-(( S )-4-(DIFLUOROMETHYL)-2-OXO-OXAZOLIDIN-3-IL)-5,6-DI-HYDROBENZO [ F]IMIDAZO [1,2- D ] [1,4]OXAZEPIN-9-IL)AMINO)BUTANAMIDE 107

[0202] Uma mistura de (S)-3-(9-bromo-5,6-di- hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2- ona (Exemplo 101, etapa 12) (240 mg, 0,60 mmol), ácido (S)-2-aminobutírico (124 mg, 1,19 mmol), iodeto cuproso (22,8 mg, 0,119 mmol), fosfato de potássio tribásico (255 mg, 1,19 mmol) e dimetilsulfóxido (6,0 mL) foi agitada sob argônio a 100 °C por 6 horas. A mistura resultante foi deixada resfriar até a temperatura ambiente e então cloreto de amônio (188 mg, 3,52 mmol) e trietilamina (1,2 mL, 8,80 mmol) foram adicionados. Na suspensão agitada foi adicionado 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol [4,5-b]piridínio 3- óxido hexafluorofosfato (2,01 g, 5,28 mmol), em porções, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura resultante foi diluída com acetato de etila, lavada com cloreto de amônio saturado, seca em sulfato de magnésio, filtrada, e evaporada sob vácuo. O produto bruto foi purificado via cromatografia flash em sílica gel (gradiente de solvente: 0-10% metanol em acetato de etila), adicionalmente purificado via HPLC de fase reversa, em seguida com cromatografia com fluido supercrítico quiral para formar 73,6 mg (30%) de 107 como um sólido branco. LCMS (ESI): RT (min) = 3,13, [M+H]+ = 422, Método = A; RMN H1 (400 MHz, DMSO-d6) d 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,71 (t, J = 56,0 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,02 - 4,89 (m, 1H), 4,62 - 4,53 (m, 2H), 4,41 - 4,27 (m, 4H), 3,65 - 3,60 (m, 1H), 1,72 - 1,59 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 3H).[0202] A mixture of (S)-3-(9-bromo-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-2-yl)-4-( difluoromethyl)oxazolidin-2-one (Example 101, step 12) (240 mg, 0.60 mmol), (S)-2-aminobutyric acid (124 mg, 1.19 mmol), cuprous iodide (22.8 mg, 0.119 mmol), tribasic potassium phosphate (255 mg, 1.19 mmol) and dimethyl sulfoxide (6.0 mL) was stirred under argon at 100 °C for 6 hours. The resulting mixture was allowed to cool to room temperature and then ammonium chloride (188 mg, 3.52 mmol) and triethylamine (1.2 mL, 8.80 mmol) were added. 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazole [4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (2.01 g, 5.28 mmol) was added to the stirred suspension in portions. , and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was diluted with ethyl acetate, washed with saturated ammonium chloride, dried over magnesium sulfate, filtered, and evaporated under vacuum. The crude product was purified via flash chromatography on silica gel (solvent gradient: 0-10% methanol in ethyl acetate), further purified via reversed-phase HPLC, then with chiral supercritical fluid chromatography to form 73.6 mg ( 30%) of 107 as a white solid. LCMS (ESI): RT (min) = 3.13, [M+H]+ = 422, Method = A; H1 NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.03 (s , 1H), 6.71 (t, J = 56.0 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 2, 2 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.02 - 4.89 (m, 1H), 4.62 - 4.53 (m, 2H), 4, 41 - 4.27 (m, 4H), 3.65 - 3.60 (m, 1H), 1.72 - 1.59 (m, 2H), 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

EXEMPLO 901 ENSAIO DE LIGAÇÃO AOP110a (ALFA) PI3KEXAMPLE 901 AOP110a (ALFA) PI3K BINDING ASSAY

[0203] Os ensaios de ligação à PI3K destinam-se a determinar a potência bioquímica dos inibidores PI3K tipo moléculas pequenas. A reação PI3K lipídeo quinase é realizada na presença de substrato lipídico PIP2:3PS (Promega # V1792) e ATP. Após o término da reação da quinase, o turnover de ATP para ADP pela fosforilação do substrato lipídico é detectado utilizando o ensaio Promega ADP-Glo™ (Promega # V1792). As reações são realizadas utilizando as seguintes condições para cada isoforma PI3K como na Tabela 5. TABELA 5 [0203] PI3K binding assays are intended to determine the biochemical potency of small molecule PI3K inhibitors. The PI3K lipid kinase reaction is carried out in the presence of lipid substrate PIP2:3PS (Promega #V1792) and ATP. After completion of the kinase reaction, the turnover of ATP to ADP by phosphorylation of the lipid substrate is detected using the Promega ADP-Glo™ assay (Promega #V1792). Reactions are performed using the following conditions for each PI3K isoform as in Table 5. TABLE 5

[0204] Após 120 minutos de tempo de reação, a reação da quinase é concluída. Qualquer ATP que permaneça após a reação é depletada, deixando apenas ADP. Em seguida, o Reagente de Detecção de Quinase é adicionado para converter ADP em ATP, que é usado em uma reação de luciferina/luciferase acoplada. A saída luminescente é mensurada e é correlacionada com a atividade da quinase.[0204] After 120 minutes of reaction time, the kinase reaction is completed. Any ATP that remains after the reaction is depleted, leaving only ADP. Next, Kinase Detection Reagent is added to convert ADP to ATP, which is used in a coupled luciferin/luciferase reaction. Luminescent output is measured and is correlated with kinase activity.

[0205] Todas as reações são realizadas à temperatura ambiente. Para cada isoforma de PI3K, adiciona-se uma solução de 3 µl (1:1) de substrato de enzima/lipídeo a uma placa de ensaio branca de 384 poços (Perkin Elmer # 6007299) contendo 50 nl de composto de teste ou DMSO apenas para controles não tratados. A reação é iniciada pela adição de 2 µL de ATP/MgCl2. O tampão de reação da quinase contém HEPES 50 mM, NaCl 50 mM, MgCl2 3 mM, BSA a 0,01%, DMSO a 1%, e concentrações de enzima e substrato, tal como indicado na tabela acima. A reação é interrompida pela adição de 10 µL de reagente ADP-Glo. As placas são lidas em um sistema Perkin Elmer Envision usando o modo luminescência. São geradas curvas de dose-resposta de 10 pontos para cada composto teste. Os valores Ki para cada composto são determinados usando a Equação de Morrison.[0205] All reactions are carried out at room temperature. For each PI3K isoform, a 3 µl (1:1) enzyme/lipid substrate solution is added to a white 384-well assay plate (Perkin Elmer #6007299) containing 50 nl of test compound or DMSO alone. for untreated controls. The reaction is started by adding 2 µL of ATP/MgCl2. The kinase reaction buffer contains 50 mM HEPES, 50 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 0.01% BSA, 1% DMSO, and enzyme and substrate concentrations as indicated in the table above. The reaction is stopped by adding 10 µL of ADP-Glo reagent. Plates are read on a Perkin Elmer Envision system using luminescence mode. 10-point dose-response curves are generated for each test compound. Ki values for each compound are determined using the Morrison Equation.

[0206] Ensaio de ligação: experimentos de polarização inicial foram realizados em um dispositivo Analyst HT 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA). As amostras para medições de afinidade de polarização de fluorescência foram preparadas pela adição de diluições em série de 1:3 de p110alfa PI3K (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA), iniciando em uma concentração final de 20 µg/mL em tampão de polarização (Tris 10 mM pH 7,5, NaCl 50 mM, MgCl2 4 mM, 0,05% de CHAPS e DTT 1 mM)até a concentração final de 10 mM de PIP2 (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.). Após um tempo de incubação de 30 minutos à temperatura ambiente, as reações foram interrompidas pela adição de GRP-1 e sonda PIP3-TAMRA (EchelonInc., Salt Lake City, UT.) 100 nM e 5 nM de concentrações finais, respectivamente. A leitura foi realizada com filtros de corte padrão para o fluoróforo rodamina (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) em placas Proxiplates® de 384 poços pretos de baixo volume (PerkinElmer, Wellesley, MA). Os valores de polarização da fluorescência foram traçados em função da concentração de proteína. Os valores de EC50 foram obtidos ajustando os dados a uma equação de quatro parâmetros usando o software KaleidaGraph® (Synergy Software, Reading, PA). Este experimento também estabelece a concentração de proteína apropriada para uso em experimentos de competição subsequentes com inibidores.[0206] Binding assay: Initial polarization experiments were performed on an Analyst HT 96-384 device (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA). Samples for fluorescence polarization affinity measurements were prepared by adding 1:3 serial dilutions of p110alpha PI3K (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA), starting at a final concentration of 20 µg/mL in polarization buffer. (10 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 4 mM MgCl2, 0.05% CHAPS, and 1 mM DTT) to a final concentration of 10 mM PIP2 (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) . After an incubation time of 30 minutes at room temperature, reactions were stopped by adding GRP-1 and PIP3-TAMRA probe (EchelonInc., Salt Lake City, UT.) at 100 nM and 5 nM final concentrations, respectively. Reading was performed with standard cutoff filters for the rhodamine fluorophore (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) in low-volume black 384-well Proxiplates® plates (PerkinElmer, Wellesley, MA). Fluorescence polarization values were plotted as a function of protein concentration. EC50 values were obtained by fitting data to a four-parameter equation using KaleidaGraph® software (Synergy Software, Reading, PA). This experiment also establishes the appropriate protein concentration for use in subsequent competition experiments with inhibitors.

[0207] Os valores de IC50 foram determinados pela adição de 0,04 mg/mL de p110alfa PI3K (concentração final) em combinação com PIP2 (concentração final de 10 mM) aos poços que contêm diluições em série 1:3 dos antagonistas em uma concentração final de ATP de 25 mM (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) no tampão de polarização. Após um tempo de incubação de 30 minutos à temperatura ambiente, as reações foram interrompidas pela adição de GRP-1 e sonda PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) 100 nM e 5 nM de concentrações finais, respectivamente. A leitura foi realizada com filtros de corte padrão para o fluoróforo rodamina (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) em placas Proxiplates® de 384 poços pretos de baixo volume (PerkinElmer, Wellesley, MA). Os valores da polarização de fluorescência foram representados graficamente em função da concentração de antagonista, e foram obtidos valores IC50 ajustando os dados a uma equação de 4 parâmetros no software Assay Explorer (MDL, San Ramon, CA).[0207] IC50 values were determined by adding 0.04 mg/mL of p110alpha PI3K (final concentration) in combination with PIP2 (10 mM final concentration) to wells containing 1:3 serial dilutions of the antagonists in a final concentration of 25 mM ATP (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) in the polarization buffer. After an incubation time of 30 minutes at room temperature, reactions were stopped by adding GRP-1 and PIP3-TAMRA probe (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) at 100 nM and 5 nM final concentrations, respectively. . Reading was performed with standard cutoff filters for the rhodamine fluorophore (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) in low-volume black 384-well Proxiplates® plates (PerkinElmer, Wellesley, MA). Fluorescence polarization values were plotted against antagonist concentration, and IC50 values were obtained by fitting the data to a 4-parameter equation in Assay Explorer software (MDL, San Ramon, CA).

[0208] Alternativamente, a inibição de PI3K foi determinada em um ensaio radiométrico usando enzima recombinante purificada e ATP a uma concentração de 1 µM (micromolar). O composto foi diluído em série em 100% de DMSO. A reação da quinase foi incubada durante 1 h à temperatura ambiente e a reação foi terminada pela adição de PBS. Os valores de IC50 foram subsequentemente determinados utilizando um ajuste da curva dose- resposta sigmoidal (declive variável).[0208] Alternatively, PI3K inhibition was determined in a radiometric assay using purified recombinant enzyme and ATP at a concentration of 1 µM (micromolar). The compound was serially diluted in 100% DMSO. The kinase reaction was incubated for 1 h at room temperature and the reaction was terminated by the addition of PBS. IC50 values were subsequently determined using a sigmoidal (variable slope) dose-response curve fit.

EXEMPLO 902EXAMPLE 902 INIBIÇÃO SELETIVA DE PI3Ka (ALFA) MUTANTESELECTIVE INHIBITION OF MUTANT PI3Ka (ALPHA)

[0209] A capacidade de um composto da invenção para atuar preferencialmente contra células contendo mutante PI3Ka (alfa) foi determinada pela medição da inibição da via PI3K em linhagens de células isogênicas SW48: PI3Ka tipo selvagem (parental), domínio helicoidal E545K mutante, e domínio quinase H1047R mutante. Os seguintes ensaios foram utilizados com a intenção de determinar a potência celular e a seletividade mutante de inibidores PI3Ka de molécula pequena. O ensaio utiliza linhagens de células isogênicas que expressam PI3Ka WT, PI3Ka mutante E545K/+ (Horizon Discovery 103-001) ou PI3Ka mutante H1047R/+ (Horizon Discovery 103-005). A potência da inibição de pPRAS40 pela PI3Ka em cada linhagem de células é medida após 24 horas de tratamento com o composto. A seletividade mutante de inibidores PI3Ka é determinada pela relação de potência EC50 nas linhagens de células WT vs. E545K e WT vs. H1047R.[0209] The ability of a compound of the invention to act preferentially against cells containing mutant PI3Ka (alpha) was determined by measuring inhibition of the PI3K pathway in isogenic SW48 cell lines: PI3Ka wild type (parental), E545K helical domain mutant, and mutant H1047R kinase domain. The following assays were used with the intention of determining the cellular potency and mutant selectivity of small molecule PI3Ka inhibitors. The assay utilizes isogenic cell lines expressing PI3Ka WT, PI3Ka mutant E545K/+ (Horizon Discovery 103-001), or PI3Ka mutant H1047R/+ (Horizon Discovery 103-005). The potency of pPRAS40 inhibition by PI3Ka in each cell line is measured after 24 hours of treatment with the compound. Mutant selectivity of PI3Ka inhibitors is determined by the EC50 potency ratio in WT vs. WT cell lines. E545K and WT vs. H1047R.

[0210] Cultura de Células: As linhagens de células são mantidas em uma incubadora de cultura celular a 37 °C e 5% de CO2 em meio de cultura de células contendo RPMI1640 (preparado na Genentech), SBF a 10% (Gibco 16140-071), 2 mM de L-glutamina (preparada na Genentech) e 10 mM de HEPES pH 7,2 (preparado na Genentech). As culturas de células são divididas a cada 72 horas com uma proporção de 1:8 utilizando 0,25% de tripsina-EDTA (Gibco 25200).[0210] Cell Culture: Cell lines are maintained in a cell culture incubator at 37 ° C and 5% CO2 in cell culture medium containing RPMI1640 (prepared at Genentech), 10% FBS (Gibco 16140- 071), 2 mM L-glutamine (prepared at Genentech) and 10 mM HEPES pH 7.2 (prepared at Genentech). Cell cultures are split every 72 hours at a ratio of 1:8 using 0.25% trypsin-EDTA (Gibco 25200).

[0211] Procedimento do Ensaio: As células são coletadas e plaqueadas em placas de ensaio de cultura de tecidos de 384 poços (Greiner cat # 781091) e incubadas durante a noite a 37 °C a 5% de CO2. As três linhagens de células (WT, E545K e H1047R) são plaqueadas e ensaiadas em paralelo. No dia seguinte, os compostos de teste são diluídos em série em dimetilsulfóxido (DMSO) e adicionados às células (concentração final de DMSO 0,5%). As células são então incubadas durante 24 horas a 37 °C e 5% de CO2 . Após 24 horas, as células são lisadas e os níveis de pPRAS40 são mensurados usando o kit de ensaio personalizado pPRAS40 384w da Meso-Scale (Meso Scale Discovery, cat # L21CA-1). Os lisados celulares são adicionados nas placas de ensaio pré-revestidas com anticorpos contra PRAS40 fosforilado. O PRAS40 fosforilado nas amostras se ligam aos anticorpos de captura durante a incubação de um dia para o outro a 4 °C. O anticorpo de detecção (anti-PRAS40 total, marcado com um marcador eletroquimioluminescente SULFO-TAG) é adicionado ao lisado ligado e incubado durante 1 hora em temperatura ambiente. O tampão de leitura MSD é adicionado de tal modo que, quando uma voltagem é aplicada aos elétrodos da placa, os marcadores ligados à superfície do eletrodo emitem luz. O Instrumento MSD Sector mede a intensidade de luz, e mede quantitativamente a quantidade de PRAS40 fosforilado na amostra. A percentagem de inibição da fosforilação de PRAS40 pelas diferentes concentrações dos compostos testes é calculada em relação aos controles não tratados. Os valores de EC50 são calculados utilizando o modelo de dose-resposta de regressão não linear de 4 parâmetros logísticos.[0211] Assay Procedure: Cells are collected and plated in 384-well tissue culture assay plates (Greiner cat # 781091) and incubated overnight at 37 ° C at 5% CO2. The three cell lines (WT, E545K and H1047R) are plated and assayed in parallel. The next day, the test compounds are serially diluted in dimethyl sulfoxide (DMSO) and added to the cells (0.5% DMSO final concentration). The cells are then incubated for 24 hours at 37°C and 5% CO2. After 24 hours, cells are lysed and pPRAS40 levels are measured using Meso-Scale's custom pPRAS40 384w assay kit (Meso Scale Discovery, cat # L21CA-1). Cell lysates are added to assay plates pre-coated with antibodies against phosphorylated PRAS40. Phosphorylated PRAS40 in samples binds to capture antibodies during overnight incubation at 4°C. The detection antibody (anti-total PRAS40, labeled with an electrochemiluminescent marker SULFO-TAG) is added to the bound lysate and incubated for 1 hour at room temperature. The MSD reading buffer is added such that when a voltage is applied to the plate electrodes, markers attached to the electrode surface emit light. The MSD Sector Instrument measures light intensity, and quantitatively measures the amount of phosphorylated PRAS40 in the sample. The percentage of inhibition of PRAS40 phosphorylation by different concentrations of test compounds is calculated in relation to untreated controls. EC50 values are calculated using the 4-parameter logistic non-linear regression dose-response model.

[0212] Análise Estatística: valores EC50 representam a média geométrica de um mínimo de 4 experimentos independentes. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando o software KaleidaGraph(versão 4.1.3). Um teste t de Student foi realizado utilizando dados não pareados com variância igual para comparar a atividade contra células mutantes e células tipo selvagem. P <0,05 é considerado estatisticamente significante.[0212] Statistical Analysis: EC50 values represent the geometric mean of a minimum of 4 independent experiments. All statistical analyzes were performed using KaleidaGraph software (version 4.1.3). A Student's t test was performed using unpaired data with equal variance to compare activity against mutant cells and wild-type cells. P <0.05 is considered statistically significant.

EXEMPLO 903EXAMPLE 903 ENSAIOS DE VIABILIDADE CELULAR IN VITROIN VITRO CELL VIABILITY TESTS

[0213] As células foram semeadas (1.500 por poço) em placas de 384 poços durante 16 h. No dia 2, foram feitas nove diluições seriadas 1:3 de compostos em DMSO em uma placa de 96 poços. Em seguida, os compostos foram diluídos em meios de crescimento utilizando um robô Rapidplate (Zymark Corp.). Os compostos diluídos foram então adicionados em quadruplicatas aos poços nas placas de células de 384 poços e incubados a 37 °C e 5% de CO2 . Após 4 dias, os números relativos de células viáveis foram mensurados por luminescência usando o kit Cell Titer-Glo (Promega) de acordo com as instruções do fabricante e as placas foram lidas em um leitor Wallac Multilabel Reader (Perkin-Elmer). Os valores de EC50 foram calculados usando o software Prism 6.0 (GraphPad).[0213] Cells were seeded (1,500 per well) in 384-well plates for 16 h. On day 2, nine serial 1:3 dilutions of compounds were made in DMSO in a 96-well plate. Then, the compounds were diluted in growth media using a Rapidplate robot (Zymark Corp.). The diluted compounds were then added in quadruplicates to wells in 384-well cell plates and incubated at 37°C and 5% CO2. After 4 days, the relative numbers of viable cells were measured by luminescence using the Cell Titer-Glo kit (Promega) according to the manufacturer's instructions and the plates were read on a Wallac Multilabel Reader (Perkin-Elmer). EC50 values were calculated using Prism 6.0 software (GraphPad).

EXEMPLO 904 EFICÁCIA DE XENOENXERTO TUMORAL IN VIVO EM CAMUNDONGOEXAMPLE 904 EFFICACY OF IN VIVO TUMOR XENOGRAFT IN MICE

[0214] Camundongos: Camundongos fêmeas com imunodeficiência combinada severa (CB-17 SCID.bg Charles River Labs, San Diego), NOD.SCID (Charles River Labs, Hollister) ou NCR.nude (Taconic) com 8 a 9 semanas de idade e com um peso corpóreo entre 18-26 gramas no dia 0 do estudo. Os animais receberam ad libitum água e ração para roedores Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010 (LabDiet St. Louis, MO). Os camundongos foram alojados em microisoladores em um ciclo de 12 horas de luz. A Genentech cumpre especificamente as recomendações das diretrizes para cuidado e uso de animais em laboratórios em relação à restrição, criação, procedimentos cirúrgicos, regulação de alimentação e fluidos e cuidados veterinários. O programa de cuidados e uso de animais da Genentech é credenciado pela Associação Americana para Licenciamento sobre Cuidados com Animais de Laboratório (AAALAC), que garante o cumprimento das normas aceitas para o cuidado e uso de animais de laboratório. Os camundongos foram alojados no biotério da Genentech em gaiolas microisoladoras padrão para roedores e foram aclimatados às condições do estudo pelo menos 3 dias antes da implantação das células tumorais. Apenas os animais que pareciam saudáveis e que estavam livres de anomalias óbvias foram utilizados para o estudo.[0214] Mice: Female mice with severe combined immunodeficiency (CB-17 SCID.bg Charles River Labs, San Diego), NOD.SCID (Charles River Labs, Hollister) or NCR.nude (Taconic) 8 to 9 weeks old and with a body weight between 18-26 grams on day 0 of the study. Animals received ad libitum water and Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010 rodent chow (LabDiet St. Louis, MO). Mice were housed in microisolators on a 12-hour light cycle. Genentech specifically complies with the recommendations of the Guidelines for the Care and Use of Laboratory Animals regarding restraint, husbandry, surgical procedures, regulation of food and fluids, and veterinary care. Genentech's animal care and use program is accredited by the American Association for Licensing Laboratory Animal Care (AAALAC), which ensures compliance with accepted standards for the care and use of laboratory animals. Mice were housed in the Genentech vivarium in standard rodent microisolator cages and were acclimatized to study conditions at least 3 days before tumor cell implantation. Only animals that appeared healthy and were free of obvious abnormalities were used for the study.

[0215] Implantação do tumor: Os xenoenxertos foram iniciados com células cancerosas (HCC1954x1 ou KPL4) ou tumores de passagem (HCI- 003). As células foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal, 2 mM de glutamina, 100 unidades/mL de penicilina, 100 µg/mL (microgramas por ml) de sulfato de estreptomicina e 25 µg/mL de gentamicina, coletadas no crescimento da fase logarítmica e resuspensas em 50% de Matrigel sem fenol (Becton Dickinson Bioscience, San Jose, CA) e solução salina balanceada de Hank a uma concentração de 3x106 ou 5x106 células/mL dependendo do tempo de duplicação da linhagem de células. Para o modelo derivado do paciente com HCI-003, foram implantados 60 gramas de cera de abelha de 30 mg contendo aproximadamente 1 mg de 17ß (beta)- estradiol subcutaneamente 3 dias antes da implantação de fragmentos do tumor. Células tumorais ou fragmentos foram implantados no panículo adiposo mamário 2/3, e o crescimento do tumor foi monitorado quando o tamanho médio aproximou-se da faixa alvo de 100 a 250 mm3. Uma vez que a maioria dos tumores atingiu a faixa alvo, os camundongos foram distribuídos em grupos de 7-10 camundongos com base no volume tumoral.[0215] Tumor implantation: Xenografts were initiated with cancer cells (HCC1954x1 or KPL4) or passage tumors (HCI-003). Cells were cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 units/mL penicillin, 100 µg/mL (micrograms per ml) streptomycin sulfate and 25 µg/mL gentamicin. collected at log phase growth and resuspended in 50% phenol-free Matrigel (Becton Dickinson Bioscience, San Jose, CA) and Hank's balanced salt solution at a concentration of 3x106 or 5x106 cells/mL depending on cell line doubling time . For the patient-derived model with HCI-003, 60 grams of 30 mg beeswax containing approximately 1 mg of 17ß(beta)-estradiol were implanted subcutaneously 3 days before implantation of tumor fragments. Tumor cells or fragments were implanted into the 2/3 mammary adipose panniculus, and tumor growth was monitored when the average size approached the target range of 100 to 250 mm3. Once the majority of tumors reached the target range, mice were distributed into groups of 7-10 mice based on tumor volume.

[0216] Agentes terapêuticos: Os compostos PI3K foram fornecidos como uma base livre em pó seco e armazenados à temperatura ambiente protegidos da luz. O veículo para taselisib (GDC-0032) e BYL719 foi 0,5% de metilcelulose: 0,2% de Tween 80 (MCT) em água deionizada. O controle veículo para o composto 101 foi nanossuspensão de 0,5% de metilcelulose/0,2% de Tween-80 (MCT). A nanossuspensão MCT é inicialmente preparada pela preparação de uma suspensão MCT. Uma vez preparada, são utilizadas esferas de vidro de 1 mm e uma barra de agitação magnética de terrosos raros para moer a suspensão MCT por cerca de 24 horas até se obter uma nanossuspensão fina. O analisador de tamanho de partículas foi usado para verificar o tamanho final das partículas. As doses de fármaco foram preparadas semanalmente e armazenadas a 4°C.[0216] Therapeutic agents: PI3K compounds were supplied as a free base in dry powder and stored at room temperature protected from light. The vehicle for taselisib (GDC-0032) and BYL719 was 0.5% methylcellulose: 0.2% Tween 80 (MCT) in deionized water. The vehicle control for compound 101 was 0.5% methylcellulose/0.2% Tween-80 (MCT) nanosuspension. The MCT nanosuspension is initially prepared by preparing an MCT suspension. Once prepared, 1 mm glass beads and a rare earth magnetic stir bar are used to grind the MCT suspension for about 24 hours until a fine nanosuspension is obtained. Particle size analyzer was used to check the final particle size. Drug doses were prepared weekly and stored at 4°C.

[0217] Tratamento: Os camundongos foram tratados (Veículo) ou dose em mg/kg indicada de compostos PI3K (expresso como base livre equivalente), PO por gavagem diária durante 21-28 dias em um volume de 100 µL, microlitros (5 mL/kg).[0217] Treatment: Mice were treated (Vehicle) or indicated mg/kg dose of PI3K compounds (expressed as equivalent free base), PO by daily gavage for 21-28 days in a volume of 100 µL, microliters (5 mL /kg).

[0218] Desfecho (endpoint): O volume tumoral foi medido em 2 dimensões (comprimento e largura), usando paquímetros Ultra Cal IV (modelo 54 10 111; Fred V. Fowler), da seguinte forma: volume tumoral (mm3 ) = (comprimento x largura2) x 0,5 e analisados usando o programa Excel versão 11.2 (Microsoft Corporation). Uma abordagem de modelo linear misto (LME) foi usada para analisar adequadamente a medição repetida dos volumes tumorais a partir dos mesmos animais ao longo do tempo (Pinheiro J, et al. nlme: linear and nonlinear mixed effects models, 2009; R package version 3.2.5.). Esta abordagem aborda as medidas repetidas e os abandonos modestos devido a qualquer morte não relacionada ao tratamento dos animais antes do final do estudo. Splinescúbicas de regressão foram utilizadas para ajustar um perfil não linear para os cursos de tempo de volume tumoral log2 para cada nível de dosagem. Estes perfis não lineares foram então relacionados à dose dentro do modelo misto. A inibição do crescimento tumoral como percentagem do veículo controle (% TGI) foi calculada como a percentagem da área sob a curva ajustada (AUC) para o respectivo grupo de dose por dia em relação ao veículo, utilizando a seguinte fórmula: % TGI = 100 x (1 - AUCdose/ AUCveículo). Usando esta fórmula, um valor TGI de 100% indica estase tumoral, um valor de TGI superior a (>) 1% mas menor que (<) 100% indica atraso do crescimento tumoral e um valor de TGI superior a (>) 100% indica regressão tumoral. A resposta parcial (PR) para um animal foi definida como uma regressão tumoral superior a (>) 50% mas inferior a (<) 100% do volume do tumor inicial. A resposta completa (CR) foi definida como regressão tumoral de 100% (ou seja, nenhum tumor mensurável) em qualquer dia durante o estudo.[0218] Endpoint: Tumor volume was measured in 2 dimensions (length and width), using Ultra Cal IV calipers (model 54 10 111; Fred V. Fowler), as follows: tumor volume (mm3) = ( length x width2) x 0.5 and analyzed using Excel version 11.2 (Microsoft Corporation). A linear mixed model (LME) approach was used to adequately analyze repeated measurement of tumor volumes from the same animals over time (Pinheiro J, et al. nlme: linear and nonlinear mixed effects models, 2009; R package version 3.2.5.). This approach addresses repeated measures and modest dropouts due to any non-treatment-related death of the animals before the end of the study. Regression splinescubes were used to fit a nonlinear profile to the log2 tumor volume time courses for each dose level. These nonlinear profiles were then related to dose within the mixed model. Tumor growth inhibition as a percentage of vehicle control (%TGI) was calculated as the percentage of the fitted area under the curve (AUC) for the respective dose group per day relative to vehicle using the following formula: %TGI = 100 x (1 - AUCdose/AUCvehicle). Using this formula, a TGI value of 100% indicates tumor stasis, a TGI value greater than (>) 1% but less than (<) 100% indicates delayed tumor growth, and a TGI value greater than (>) 100% indicates tumor regression. Partial response (PR) for an animal was defined as tumor regression greater than (>) 50% but less than (<) 100% of the initial tumor volume. Complete response (CR) was defined as 100% tumor regression (i.e., no measurable tumor) on any day during the study.

[0219] Toxicidade: Os animais foram pesados diariamente durante os primeiros cinco dias do estudo e posteriormente duas vezes por semana. Peso corporal dos animais foi medido usando uma escala Adventurer Pro AV812 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). A porcentagem de alteração de peso foi calculada da seguinte forma: mudança de peso corporal (%) = [(peso novo dia - pesodia 0)/pesodia 0 ] x 100. Os camundongos foram frequentemente observados por sinais de quaisquer efeitos colaterais adversos relacionados ao tratamento, e os sinais clínicos de toxicidade foram registrados quando observados. A toxicidade aceitável é definida como uma perda média de peso corporal do grupo (BW) inferior a 20% durante o estudo e não mais de uma morte relacionada ao tratamento (TR) entre dez animais tratados. Qualquer regime de dosagem que resulte em maior toxicidade é considerado acima da dose máxima tolerada (MTD). Uma morte é classificada como TR se atribuível aos efeitos colaterais do tratamento como evidenciado por sinais clínicos e/ou necropsia, ou também pode ser classificada como TR se devido a causas desconhecidas durante o período de dosagem ou no prazo de 10 dias após a última dose. Uma morte é classificada como NTR se não houver evidência de que a morte esteja relacionada aos efeitos colaterais do tratamento.[0219] Toxicity: The animals were weighed daily during the first five days of the study and twice a week thereafter. Animal body weight was measured using an Adventurer Pro AV812 scale (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). The percentage of weight change was calculated as follows: body weight change (%) = [(new weight day - weight day 0)/weight day 0 ] x 100. Mice were frequently observed for signs of any adverse side effects related to treatment, and clinical signs of toxicity were recorded when observed. Acceptable toxicity is defined as a group mean body weight (BW) loss of less than 20% during the study and no more than one treatment-related death (TR) among ten treated animals. Any dosage regimen that results in increased toxicity is considered above the maximum tolerated dose (MTD). A death is classified as TR if attributable to treatment side effects as evidenced by clinical signs and/or necropsy, or may also be classified as TR if due to unknown causes during the dosing period or within 10 days after the last dose. . A death is classified as NTR if there is no evidence that the death was related to treatment side effects.

EXEMPLO 905EXAMPLE 905 EXPERIMENTOS DE CULTURA CELULAR E INIBIDOR IN VITROCELL CULTURE AND IN VITRO INHIBITOR EXPERIMENTS

[0220] As linhagens de células foram cultivadas em condições de cultura de tecidos em meio RPMI com 10% de soro bovino fetal, 100 U/mL de penicilina, e 100 µg/mL de estreptomicina. HCC-1954 e HDQ-P1 são linhagens de células de câncer de mama (American Type Culture Collection; Manassas, VA. As células HCC-1954 e HDQ-P1 foram colocadas em cada poço de uma placa de cultura de tecido de 6 poços a 800.00 células/poço e incubadas 37 °C durante a noite. As células foram incubadas com as concentrações indicadas de cada composto durante 24 horas. Após a incubação, as células foram lavadas uma vez com salina tamponada com fosfato (PBS) resfriada e lisadas em Biosource®Cell Extraction Buffer (Invitrogen; Carlsbad, CA) suplementado com inibidores de protease (F. Hoffman-LaRoche, Mannheim, Alemanha), 1 mM de fluoreto de fenilmetilsulfonila e coquetéis 1 e 2 de inibidor de fosfatase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). As concentrações de proteínas foram determinadas utilizando o kit Pierce BCA Protein Assay (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL).[0220] The cell lines were grown under tissue culture conditions in RPMI medium with 10% fetal bovine serum, 100 U/mL penicillin, and 100 µg/mL streptomycin. HCC-1954 and HDQ-P1 are breast cancer cell lines (American Type Culture Collection; Manassas, VA. HCC-1954 and HDQ-P1 cells were placed in each well of a 6-well tissue culture plate at 800.00 cells/well and incubated at 37°C overnight. Cells were incubated with the indicated concentrations of each compound for 24 hours. After incubation, cells were washed once with chilled phosphate-buffered saline (PBS) and lysed in Biosource®Cell Extraction Buffer (Invitrogen; Carlsbad, CA) supplemented with protease inhibitors (F. Hoffman-LaRoche, Mannheim, Germany), 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, and phosphatase inhibitor cocktails 1 and 2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) Protein concentrations were determined using the Pierce BCA Protein Assay kit (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL).

[0221] Ensaios de proteínas:_A concentração de proteínas foi determinada utilizando o kit Pierce BCA Protein Assay (Rockford, IL). Para imunoblots, quantidades iguais de proteína foram separadas por eletroforese através de géis em gradiente NuPage Bis-Tris 4-12% (Invitrogen; Carlsbad, CA); as proteínas foram transferidos para membranas de nitrocelulose usando o sistema IBlot e seguindo o protocolo de InVitrogen. Anticorpos para p110alfa e fosfo-Akt (Ser473), foram obtidos da Cell Signaling (Danvers, MA). Anticorpos para ß-actina e GAPDH eram da Sigma.[0221] Protein assays: Protein concentration was determined using the Pierce BCA Protein Assay kit (Rockford, IL). For immunoblots, equal amounts of protein were separated by electrophoresis through 4-12% NuPage Bis-Tris gradient gels (Invitrogen; Carlsbad, CA); Proteins were transferred to nitrocellulose membranes using the IBlot system and following the InVitrogen protocol. Antibodies to p110alpha and phospho-Akt (Ser473) were obtained from Cell Signaling (Danvers, MA). Antibodies to ß-actin and GAPDH were from Sigma.

EXEMPLO 906EXAMPLE 906 EXPRESSÃO DECD69 EM CÉLULAS B, ENSAIO EM SANGUE TOTAL HUMANO PARA EXPRESSÃO DECD69 EM CÉLULAS B CD19+ CD27-DECD69 EXPRESSION IN B CELLS, HUMAN WHOLE BLOOD ASSAY FOR DECD69 EXPRESSION IN CD19+ CD27- B CELLS

[0222] CulturadeCélulas: O sangue total humano foi distribuído em placas de poço de 96 poços a 100 µL por poço. Os compostos foram diluídos em DMSO para gerar as concentrações de estoque desejadas e depois diluídos em PBS até a concentração de trabalho desejada e adicionados em um volume de 5,5 µL por poço. As amostras foram então incubadas durante 1 hora a 37 °C sob 5% de CO2 antes da adição de 5 µg (10 µl por poço) de anticorpo de cabra anti-IgM F(ab')2 (Southern Biotech, AL) e incubadas durante 18 horas a 37°C sob 5% de CO2. Todos os tratamentos foram testados em duplicatas.[0222] Cell Culture: Human whole blood was distributed into 96-well plates at 100 µL per well. Compounds were diluted in DMSO to generate desired stock concentrations and then diluted in PBS to the desired working concentration and added in a volume of 5.5 µL per well. Samples were then incubated for 1 hour at 37°C under 5% CO2 before adding 5 µg (10 µl per well) of goat anti-IgM F(ab')2 antibody (Southern Biotech, AL) and incubated for 18 hours at 37°C under 5% CO2. All treatments were tested in duplicates.

[0223] Procedimentos de isolamento de células e coloração: Após a incubação, o nível de expressão de CD69 em células CD19+ CD27- foi determinado pela coloração das amostras de sangue total com um coquetel de CD27; 10 µL/poço (clone L128; BD Biosciences, NJ) CD19; 7,5 µL/poço (clone SJ25C1; BD Biosciences, NJ) e CD69; 10 µL (clone FN50; BD Biosciences, NJ). Além disso, o sangue total humano de cada doador foi corado com anticorpos de controle fluorescente compatíveis com isotipo. Após a adição do coquetel de anticorpos apropriado, as amostras de sangue total foram coradas durante 30 minutos no escuro e depois lisadas usando BD Pharm Lysis (BD Bioscience, NJ). As amostras resultantes foram então lavadas com tampão FACS (solução salina tamponada com fosfato (Ca/Mg++ livre), 1 mM de EDTA, 25 mM de HEPES pH 7,0, Soro bovino fetal a 1% (inativado pelo calor) e fixado em tampão FACS suplementado com 0,1% de formaldeído (Polysciences Inc, PA) e 0,1% de Pluronic F-68 (Sigma, MO). Os dados foram adquiridos usando um BD LSR-II (BD Biosciences) com o software BD FACSDiva.[0223] Cell isolation and staining procedures: After incubation, the level of CD69 expression on CD19+ CD27- cells was determined by staining whole blood samples with a CD27 cocktail; 10 µL/well (clone L128; BD Biosciences, NJ) CD19; 7.5 µL/well (clone SJ25C1; BD Biosciences, NJ) and CD69; 10 µL (clone FN50; BD Biosciences, NJ). In addition, human whole blood from each donor was stained with isotype-matched fluorescent control antibodies. After addition of the appropriate antibody cocktail, whole blood samples were stained for 30 minutes in the dark and then lysed using BD Pharm Lysis (BD Bioscience, NJ). The resulting samples were then washed with FACS buffer (phosphate buffered saline (free Ca/Mg++), 1 mM EDTA, 25 mM HEPES pH 7.0, 1% fetal bovine serum (heat inactivated) and fixed in FACS buffer supplemented with 0.1% formaldehyde (Polysciences Inc, PA) and 0.1% Pluronic F-68 (Sigma, MO) Data were acquired using a BD LSR-II (BD Biosciences) with BD software FACSDiva.

[0224] Expressão de CD69 em células B CD19+ CD27-: As células foram avaliadas por citometria de fluxo para os níveis de CD19, CD27 e CD69 usando o software BD FACSDiva e a MFI-Média de CD69 da população de linfócitos CD19+ CD27- foi determinada. A concentração de composto que resulta em 50% de inibição de MFI-Média CD69 (IC50) foi determinada utilizando o software Genedata (Genedata Screener, MA).[0224] Expression of CD69 on CD19+ CD27- B cells: Cells were assessed by flow cytometry for the levels of CD19, CD27 and CD69 using BD FACSDiva software and the CD69 MFI-Mean of the CD19+ CD27- lymphocyte population was determined. The compound concentration resulting in 50% MFI-Mean CD69 inhibition (IC50) was determined using Genedata software (Genedata Screener, MA).

EXEMPLO 907EXAMPLE 907 EC50 DE PPRAS40 EM HCC1954 E HDQP1EC50 OF PPRAS40 IN HCC1954 AND HDQP1

[0225] As células são plaqueadas em placas de ensaio de cultura de tecidos de 384 poços e incubadas durante a noite. No dia seguinte, as células são tratadas com compostos e incubadas durante 24 horas. Após 24 horas, as células são lisadas e os níveis de pPRAS40 são medidos usando a plataforma de ensaio Meso-Scale. Essas linhagens de células são bastante úteis para caracterizar a seletividade de inibidores PI3Ka para a PI3Ka mutante. A linhagem de células HCC1954 expressa PI3Ka mutante (E545K) vs a linhagem WT HDQP1.[0225] Cells are plated in 384-well tissue culture assay plates and incubated overnight. The next day, the cells are treated with compounds and incubated for 24 hours. After 24 hours, cells are lysed and pPRAS40 levels are measured using the Meso-Scale assay platform. These cell lines are very useful for characterizing the selectivity of PI3Ka inhibitors for mutant PI3Ka. The HCC1954 cell line expresses mutant PI3Ka (E545K) vs the WT HDQP1 line.

[0226] Princípio do ensaio: a plataforma MSD fornece um método para medir os níveis fosforilados de pPRAS40 em uma única amostra. Os lisados celulares são adicionados nas placas de ensaio pré-revestidas com anticorpos contra PRAS40 total. Após a lise celular, PRAS40 em amostras pode se ligar aos anticorpos de captura. O anticorpo de detecção (anti-fosfo PRAS40), marcado com um composto eletroquimiluminescente MSD SULFOTAG, é adicionado ao lisado ligado. O tampão de leitura MSD é adicionado de tal modo que, quando uma voltagem é aplicada aos elétrodos da placa, os marcadores ligados à superfície do eletrodo emitem luz. O Instrumento MSD Sector mede a intensidade de luz, e mede quantitativamente a quantidade de fosfo_EGFR na amostra (Meso Scale Assay Principle).[0226] Assay principle: The MSD platform provides a method for measuring phosphorylated levels of pPRAS40 in a single sample. Cell lysates are added to assay plates pre-coated with antibodies against total PRAS40. After cell lysis, PRAS40 in samples can bind to capture antibodies. The detection antibody (anti-phospho PRAS40), labeled with an electrochemiluminescent compound MSD SULFOTAG, is added to the bound lysate. The MSD reading buffer is added such that when a voltage is applied to the plate electrodes, markers attached to the electrode surface emit light. The MSD Sector Instrument measures light intensity, and quantitatively measures the amount of phospho_EGFR in the sample (Meso Scale Assay Principle).

[0227] Materiais: PROCEDIMENTO • Compostos preparados a uma concentração de 2 mM em DMSO. Preparar a placa de titulação de composto DMSO, 1:3 em DMSO puro. • A placa DMSO mãe contém 72 µL de 13 compostos. • Composto de controle seletivo mutante: Adicionar 72 µL de composto controle 2 mM ao poço B2 em cada placa de ensaio. Este composto de controle demonstra uma potência aproximadamente 20 vezes maior na linhagem de células HCC1954 em relação à linhagem HDQP1. • Utilizando uma pipeta multicanal, transfira 36 µL de cada composto no poço para o poço diretamente abaixo (exemplo, de B2 para C2) para configurar as curvas dose-resposta duplicadas. • Use o método Biomek Fx intitulado “SLS_serial dilution/1 plate_384_3_13_3x” para fazer diluições seriadas de compostos na placa mãe. • Sele e mantenha as placas mãe DMSO e filha com um selador a calor quando não estiver em uso. DIA 1: PLAQUEAMENTO DE CÉLULAS 1. Semear 12.500 células em 45 µL de meio para cada linhagem de células. Deixar as células assentar/aderir as placa durante 15 a 20 minutos à temperatura ambiente. 2. Incube as células durante a noite em uma incubadora com umidade controlada e temperatura de 37 °C. DIA 2: PREPARAÇÃO DA PLACA DE COMPOSTO E TRATAMENTO COM COMPOSTO 1. Para a placa de diluição intermediária 10X: adicione 95 µL de meio sem soro para uma placa de polipropileno de 384 poços de perfil padrão. 2. Use o protocolo Biomek Fx para a diluição do composto intermediário em meio e adicione às células: “SLS Intermed Dil Add 5 ul to Cells July 13 2012.” Este protocolo Biomek transfere 5 µL da placa filha DMSO para a placa de diluição intermediária contendo 95 µL de meio e mistura os compostos+meio. O método então transfere 5 µL da placa de diluição intermediária para a placa de célula apropriada. 3. Incubar as células tratadas a 37 graus durante 24 horas em uma incubadora umidificada com 5% CO2. DIA 3: LISE CELULAR E ADIÇÃO ÀS PLACAS MSD[0227] Materials: PROCEDURE • Compounds prepared at a concentration of 2 mM in DMSO. Prepare DMSO compound titration plate, 1:3 in pure DMSO. • The DMSO mother plate contains 72 µL of 13 compounds. • Mutant Selective Control Compound: Add 72 µL of 2 mM control compound to well B2 on each assay plate. This control compound demonstrates approximately 20-fold greater potency in the HCC1954 cell line relative to the HDQP1 cell line. • Using a multichannel pipette, transfer 36 µL of each compound in the well to the well directly below (example, from B2 to C2) to set up duplicate dose-response curves. • Use the Biomek Fx method titled “SLS_serial dilution/1 plate_384_3_13_3x” to make serial dilutions of compounds on the motherboard. • Seal and maintain the DMSO motherboard and daughterboard with a heat sealer when not in use. DAY 1: CELL PLATING 1. Seed 12,500 cells in 45 µL of medium for each cell line. Allow the cells to settle/adhere to the plates for 15 to 20 minutes at room temperature. 2. Incubate the cells overnight in a humidity-controlled incubator at 37 °C. DAY 2: COMPOUND PLATE PREPARATION AND COMPOUND TREATMENT 1. For the 10X Intermediate Dilution Plate: Add 95 µL of serum-free medium to a standard profile 384-well polypropylene plate. 2. Use the Biomek Fx protocol to dilute the intermediate compound in medium and add to the cells: “SLS Intermed Dil Add 5 ul to Cells July 13 2012.” This Biomek protocol transfers 5 µL from the DMSO daughter plate to the intermediate dilution plate containing 95 µL of medium and mixes the compounds+medium. The method then transfers 5 µL from the intermediate dilution plate to the appropriate cell plate. 3. Incubate the treated cells at 37 degrees for 24 hours in a humidified incubator with 5% CO2. DAY 3: CELL LYSIS AND ADDITION TO MSD PLATES

[0228] Bloqueie a placa de ensaio MSD com 50 µL de bloqueador A 3% / tampão de lavagem MSD por 1-2 minutos à temperatura ambiente. Esta solução pode ser armazenada a 4 °C por até um mês. O tampão de bloqueio A contém tampão MSD de lavagem 1X. 20 mL de tampão de lavagem Tris 1X e 600 mg de bloqueador A.[0228] Block the MSD assay plate with 50 µL of 3% blocker A/MSD wash buffer for 1-2 minutes at room temperature. This solution can be stored at 4°C for up to one month. Blocking Buffer A contains 1X MSD wash buffer. 20 mL of 1X Tris wash buffer and 600 mg of blocker A.

[0229] Prepare o tampão de lise: [0229] Prepare the lysis buffer:

[0230] Aspire o meio e lisar as células; 1. Lisar as células em 50 µL de tampão de lise. Lisar em temperatura ambiente durante 10-20 minutos em agitador de placas. 2. Enquanto as células estão sendo lisadas, lave as placas bloqueadas com tampão de lavagem MSD 1x. 3. Transfira 42 µL dos lisados (21+21 µL) para uma placa de ensaio MSD pPRAS40-bloqueada. 4. Sele as placas MSD e incube a 4 °C com agitação durante a noite. DIA4: ENSAIO/DETECÇÃO MSD 8. Faça uma solução de bloqueador A 1% no tampão de lavagem MSD 1X. (20 mL de tampão de lavagem Tris 1X e 200 mg de bloqueador A (1% p/v). Esta solução pode ser armazenada a 4 °C por até um mês. 9. Lave as placas MSD com tampão de lavagem MSD 1x. 10. Adicione 10 µL do anticorpo de detecção SULFO-TAG diluído às placas. Incube durante 1 hora com agitação à temperatura ambiente. 11. Lave as placas por 4x com tampão de lavagem MSD 1x. 12. Adicione 35 µL de tampão de leitura 1X com pipetagem reversa para evitar bolhas. 13. Faça a leitura da placa imediatamente no instrumento MSD SECTOR.[0230] Aspirate the medium and lyse the cells; 1. Lyse cells in 50 µL of lysis buffer. Lyse at room temperature for 10-20 minutes on a plate shaker. 2. While cells are being lysed, wash blocked plates with 1x MSD wash buffer. 3. Transfer 42 µL of the lysates (21+21 µL) to a pPRAS40-blocked MSD assay plate. 4. Seal the MSD plates and incubate at 4°C with shaking overnight. DAY4: MSD ASSAY/DETECTION 8. Make 1% blocker A solution in 1X MSD wash buffer. (20 mL of 1X Tris Wash Buffer and 200 mg of Blocker A (1% w/v). This solution can be stored at 4°C for up to one month. 9. Wash MSD plates with 1x MSD Wash Buffer. 10. Add 10 µL of diluted SULFO-TAG detection antibody to the plates and incubate for 1 hour with shaking at room temperature. 11. Wash plates 4x with 1x MSD wash buffer. 12. Add 35 µL of 1X reading buffer by reverse pipetting to avoid bubbles. 13. Read the plate immediately on the MSD SECTOR instrument.

EXEMPLO 908EXAMPLE 908 COCRISTALOGRAFIA COM Pl10a (ALFA)CO-CRYSTALOGY WITH Pl10a (ALPHA)

[0231] A p110a (alfa) truncada na extremidade N-terminal foi produzida de acordo com Chen et al e Nacht et al. (Chen, P., Y. L. Deng, S. Bergqvist, M. D. Falk, W. Liu, S. Timofeevski e A. Brooun “Engineering of an isolated p110alpha subunit of PI3Kalpha permits crystallization and provides a platform for structure-based drug design,” (2014) Protein Sci 23(10):1332-1340; Nacht, M. et al (2013) “Discovery of a potent and isoform-selective targeted covalent inhibitor of the lipid kinase PI3Kalpha” J. Med. Chem. 56(3): 712-721).[0231] N-terminally truncated p110a (alpha) was produced according to Chen et al and Nacht et al. (Chen, P., Y. L. Deng, S. Bergqvist, M. D. Falk, W. Liu, S. Timofeevski, and A. Brooun “Engineering of an isolated p110alpha subunit of PI3Kalpha allows crystallization and provides a platform for structure-based drug design,” (2014) Protein Sci 23(10):1332-1340; Nacht, M. et al (2013) “Discovery of a potent and isoform-selective targeted covalent inhibitor of the lipid kinase PI3Kalpha” J. Med. Chem. 56(3 ): 712-721).

[0232] Os protocolos padrão foram aplicados na produção de cristais na presença de compostos do projeto. Os cristais coletados foram preservados para a coleta de dados de difração por imersão em nitrogênio líquido e montados em uma linha de luz de síncrotron produzindo raios-X monocromáticos. Os dados de difração foram coletados, reduzidos e mesclados usando protocolos padrão. As células da unidade cristalográfica e o grupo espacial foram isomorfos com aqueles relatados anteriormente (Nacht, 2013; Chen, 2014). A colocação de compostos do projeto em mapas de densidade de elétrons e refinamento cristalográfico para limites de resolução entre 2,36 e 2,56 A foram realizados usando protocolos padrão.[0232] Standard protocols were applied to the production of crystals in the presence of project compounds. The collected crystals were preserved for diffraction data collection by immersion in liquid nitrogen and mounted on a synchrotron beamline producing monochromatic X-rays. Diffraction data were collected, reduced, and merged using standard protocols. The crystallographic unit cells and space group were isomorphic with those previously reported (Nacht, 2013; Chen, 2014). Placement of project compounds into electron density maps and crystallographic refinement to resolution limits between 2.36 and 2.56 A were performed using standard protocols.

[0233] Neste pedido as unidades que aparecem como ul, uMol etc. significam µl, µMol, etc.[0233] In this order, the units that appear as ul, uMol, etc. mean µl, µMol, etc.

[0234] Embora a invenção divulgada acima tenha sido descrita em detalhes por meio de ilustrações e exemplos com o intuito de elucidar seu entendimento, as descrições e os exemplos não devem ser interpretados como limitantes do escopo da presente invenção. As divulgações de todas as patentes e literaturas científicas citadas são expressamente e integralmente incorporadas ao presente pela referência.[0234] Although the invention disclosed above has been described in detail through illustrations and examples in order to elucidate its understanding, the descriptions and examples should not be interpreted as limiting the scope of the present invention. The disclosures of all cited patents and scientific literature are expressly and fully incorporated herein by reference.

Claims (22)

1. COMPOSTO, caracterizado por ser selecionado a partir da Fórmula I: e sais farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R1 é selecionado a partir de -CH3, -CH2CH3, ciclopropila, e ciclobutila; R2 é selecionado a partir de -CH3, -CHF2, -CH2F, e -CF3.1. COMPOUND, characterized by being selected from Formula I: and pharmaceutically acceptable salts thereof; wherein R1 is selected from -CH3, -CH2CH3, cyclopropyl, and cyclobutyl; R2 is selected from -CH3, -CHF2, -CH2F, and -CF3. 2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser -CH3 ou ciclopropila.2. COMPOUND, according to claim 1, characterized in that R1 is -CH3 or cyclopropyl. 3. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado por R2 ser -CHF2.3. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 2, characterized in that R2 is -CHF2. 4. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-((2-((S)-4- (difluorometil)-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)propanamida tendo a estrutura: 4. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 3, characterized in that Formula I is (S)-2-((2-((S)-4- (difluoromethyl)-2-oxo-oxazolidin-3-yl )-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)propanamide having the structure: 5. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-ciclobutil-2-((2-((R)- 4-metil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9- il)amino)acetamida tendo a estrutura: 5. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 3, characterized in that Formula I is (S)-2-cyclobutyl-2-((2-((R)- 4-methyl-2-oxo-oxazolidin-3 -yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)acetamide having the structure: 6. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-ciclopropil-2-((2- ((S)-4-(difluorometil)-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)acetamida tendo a estrutura: 6. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 3, characterized in that Formula I is (S)-2-cyclopropyl-2-((2- ((S)-4-(difluoromethyl)-2-oxo-oxazolidin -3-yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)acetamide having the structure: 7. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-ciclopropil-2-((2- ((R)-4-metil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)acetamida tendo a estrutura: 7. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 3, characterized by Formula I being (S)-2-cyclopropyl-2-((2- ((R)-4-methyl-2-oxo-oxazolidin-3 -yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)acetamide having the structure: 8. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-ciclopropil-2-((2- ((S)-4-(fluorometil)-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)acetamida tendo a fórmula: 8. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 4, characterized in that Formula I is (S)-2-cyclopropyl-2-((2- ((S)-4-(fluoromethyl)-2-oxo-oxazolidin -3-yl)-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)acetamide having the formula: 9. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-((2-((S)-4- (fluorometil)-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)propanamida tendo a fórmula: 9. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 4, characterized in that Formula I is (S)-2-((2-((S)-4- (fluoromethyl)-2-oxo-oxazolidin-3-yl )-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2-d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)propanamide having the formula: 10. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela Fórmula I ser (S)-2-((2-((S)-4- (difluorometil)-2-oxo-oxazolidin-3-il)-5,6-di-hidrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-il)amino)butanamida tendo a fórmula: 10. COMPOUND, according to any one of claims 1 to 4, characterized in that Formula I is (S)-2-((2-((S)-4- (difluoromethyl)-2-oxo-oxazolidin-3-yl )-5,6-dihydrobenzo [f]imidazo [1,2- d] [1,4]oxazepin-9-yl)amino)butanamide having the formula: 11. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e um veículo, deslizante, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.11. PHARMACEUTICAL COMPOSITION, characterized in that it comprises a compound, as defined in any one of claims 1 to 10, and a pharmaceutically acceptable carrier, glidant, diluent or excipient. 12. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo veículo, deslizante, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis serem selecionados a partir de dióxido de silício, celulose em pó, celulose microcristalina, estearatos metálicos, aluminossilicato de sódio, benzoato de sódio, carbonato de cálcio, silicato de cálcio, amido de milho, carbonato de magnésio, talco sem amianto, stearowet C, amido, amido 1500, laurilsulfato de magnésio, óxido de magnésio e combinações dos mesmos.12. COMPOSITION, according to claim 11, characterized in that the pharmaceutically acceptable carrier, glidant, diluent or excipient is selected from silicon dioxide, powdered cellulose, microcrystalline cellulose, metal stearates, sodium aluminosilicate, sodium benzoate, carbonate calcium, calcium silicate, corn starch, magnesium carbonate, asbestos-free talc, stearowet C, starch, starch 1500, magnesium lauryl sulfate, magnesium oxide and combinations thereof. 13. PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizado por compreender a combinação de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, com um veículo, deslizante, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.13. PROCESS FOR PREPARING A PHARMACEUTICAL COMPOSITION, characterized in that it comprises the combination of a compound, as defined in any one of claims 1 to 10, with a pharmaceutically acceptable carrier, glidant, diluent or excipient. 14. USO DE UM COMPOSTO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer em um paciente, em que o câncer é selecionado a partir do câncer de mama e câncer de pulmão de células não pequenas.14. USE OF A COMPOUND, as defined in any one of claims 1 to 10, characterized in that it is for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer in a patient, in which the cancer is selected from breast cancer and cancer non-small cell lung. 15. USO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo câncer ser câncer de mama.15. USE, according to claim 14, characterized in that the cancer is breast cancer. 16. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo câncer de mama ser câncer de mama com receptor de estrogênio (ER)- positivo.16. USE, according to claim 15, characterized in that breast cancer is estrogen receptor (ER)-positive breast cancer. 17. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo subtipo do câncer de mama ser basal ou luminal.17. USE, according to claim 15, characterized in that the breast cancer subtype is basal or luminal. 18. USO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo câncer expressar mutação PIK3CA selecionada a partir de E542K, E545K, Q546R, H1047L e H1047R.18. USE, according to claim 14, characterized in that the cancer expresses PIK3CA mutation selected from E542K, E545K, Q546R, H1047L and H1047R. 19. USO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo câncer expressar uma mutação PTEN.19. USE, according to claim 14, characterized in that the cancer expresses a PTEN mutation. 20. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo câncer ser HER2 positivo.20. USE, according to claim 15, characterized in that the cancer is HER2 positive. 21. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo paciente ser HER2-negativo, ER (receptor de estrogênio) negativo, e PR (receptor de progesterona) negativo.21. USE, according to claim 15, characterized in that the patient is HER2-negative, ER (estrogen receptor) negative, and PR (progesterone receptor) negative. 22. KIT PARA O TRATAMENTO TERAPÊUTICO DO CÂNCER DE MAMA, caracterizado por compreender: (a) a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 11 a 12; e (b) instruções para uso no tratamento terapêutico do câncer de mama.22. KIT FOR THE THERAPEUTIC TREATMENT OF BREAST CANCER, characterized in that it comprises: (a) the pharmaceutical composition, as defined in any one of claims 11 to 12; and (b) instructions for use in the therapeutic treatment of breast cancer.