BR112017007654B1

BR112017007654B1 - método para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo, e sistema para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo

Info

Publication number: BR112017007654B1
Application number: BR112017007654-3A
Authority: BR
Inventors: Bart J. Wanders
Original assignee: Iris International, Inc
Priority date: 2014-10-17
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2020-12-01
Also published as: BR112017007654A2; WO2016060691A1; AU2014409119A1; US10422738B2; EP3207358B1; CN107003223A; JP2017534866A; KR20170071535A; JP6596491B2; JP6749451B2; US20160109372A1; JP2019144255A; CN107003223B; KR102137303B1; EP3207358A1; US9429524B2; AU2014409119B2; US20170268984A1

Abstract

Sistemas e metodos para o imageamento de uma pluralidade de amostras de fluido sangumeo ou outros tipos de amostras incluem processar pelo menos uma porcao de uma amostra para aprimorar o imageamento de certas particulas naquela porcao e, subsequentemente, imagear a porcao de amostra. Em alguns casos, o processamento e o imageamento de varias amostras podem ser dispostos de maneira a otimizar o rendimento do sistema ou do metodo.

Description

CAMPOS RELACIONADOS

[0001]Sistemas e métodos para a análise de partículas, incluindo imageamento de partículas em amostras de fluido, utilizando dispositivos parcialmente ou totalmente automatizados para distinguir e quantificar partículas como células sanguíneas na amostra. Por exemplo, os sistemas e métodos da presente revelação podem ser úteis para a contagem e/ou a caracterização de partículas em fluidos biológicos, como eritrócitos, reticulócitos, eritrócitos nucleados, plaquetas, e para a contagem diferencial de leucócitos baseada em imagens e morfologicamente, categorização, subcategorização, caracterização e/ou análise.

ANTECEDENTES

[0002]A análise de células sanguíneas é um dos ensaios médicos mais comumente realizados para fornecer uma visão geral do estado de saúde de um paciente. Uma amostra sanguínea pode ser extraída de um corpo de um paciente e armazenada em um tubo de ensaio contendo um anticoagulante para evitar a coagulação. Uma amostra de sangue total normalmente compreende três classes principais de células sanguíneas, incluindo glóbulos vermelhos (eritrócitos), glóbulos brancos (leucócitos) e plaquetas (trombócitos). Cada classe pode ser dividida adicionalmente em subclasses de elementos.Por exemplo, os cinco tipos ou subclasses principais de leucócitos (WBCs) - neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos - têm, cada um, formatos e funções diferentes.As subclasses de eritrócitos (RBCs) podem incluir reticulócitos e eritrócitos nucleados. O número e aparecimento de células sanguíneas ou outras partículas em uma amostra podem ser diferentes de acordo com as condições patológicas, a maturidade da célula e outras causas.

[0003]Hemogramas completos (CBC) e outras contagens de célula sanguíneas estimando a concentração de, ou de outro modo caracterizando os eritrócitos, leucócitos ou plaquetas podem ser feitos manualmente ou com o uso de um analisador automatizado. Quando as contagens de célula sanguíneas são feitas manualmente, uma gota de sangue é aplicada a uma lâmina para microscópio como um esfregaço delgado, que pode ser manualmente examinada sob um microscópio de luz. Corantes e manchas histológicas podem ser usados para manchar células ou estruturas celulares. Por exemplo, uma mancha de Wright é uma mancha histológica que foi usada para manchar esfregaços de sangue para exame sob um microscópio de luz.

[0004]Um CBC automatizado pode empregar métodos ou instrumentos para diferenciar tipos diferentes de células, que incluem eritrócitos, leucócitos e plaquetas, que podem ser contadas separadamente. Por exemplo, uma técnica de contagem que requer um tamanho de partícula ou volume mínimo poderia ser usado para contar somente células grandes.

[0005]Alguns analisadores automatizados, incluindo alguns analisadores automatizados que usam citometria de fluxo, contam o número de partículas ou células diferentes em uma amostra sanguínea com base na impedância ou dispersão dinâmica de luz, conforme as partículas ou células individuais passam através de uma área de detecção ao longo de uma trajetória de fluxo estreita, como um tubo pequeno. Métodos de citometria de fluxo foram usados para detectar partículas suspensas em um fluido, como células em uma amostra sanguínea, e para analisar as partículas quanto ao tipo de partícula, dimensão e distribuição de volume, de modo a inferir a concentração do respectivo tipo de partícula ou volume de partícula na amostra sanguínea.

[0006]Sistemas automatizados que usam dispersão dinâmica de luz ou impedância têm sido usados para se obter um hemograma completo do sangue, o que, em alguns casos, pode incluir um ou mais dentre: contagem de leucócitos total, volume celular total de células vermelhas (distribuição de eritrócitos), hemoglobina HGB (a quantidade de hemoglobina no sangue), volume celular médio (CVM) (volume médio de glóbulos vermelhos), MPV (volume de TCP médio), hematócrito (HCT), MCH (HGB/RBC) (a quantidade média de hemoglobina por células vermelhas do sangue), e MCHC (HGB/HCT) (a concentração média de hemoglobina nas células). Processos automatizados ou parcialmente automatizados foram usados para facilitar a contagem diferencial em cinco partes de leucócitos e outras análises de amostras sanguíneas.

[0007]Alguns analisadores automatizados utilizam técnicas baseadas em imagens para contar ou, de outro modo, analisar partículas em um fluido fluindo através de uma célula de fluxo. Alguns exemplos de sistemas que utilizam técnicas de imageamento e células de fluxo são descritos na patente US n° 6.825.926, atribuída a Turner et al., na patente US n° 6.184.978, atribuída a Kasdan et al., na patente US n° 6.424.415, atribuída a Kasdan et al., e a patente US n° 6.590.646, atribuída a Kasdan et al.

[0008]Embora técnicas, sistemas e métodos conhecidos atualmente para a contagem de partículas (como células em um fluido sanguíneo ou outros tipos de partículas em um fluido) e outras análises diagnósticas possam fornecer benefícios reais a médicos, profissionais de saúde e pacientes, melhorias adicionais ainda são possíveis.

BREVE SUMÁRIO

[0009]Em algumas modalidades, um método para imageamento de uma pluralidade de fluidos sanguíneos inclui: receber uma primeira porção de fluido sanguíneo em um sistema de análise de amostra; processar a primeira porção, de modo a melhorar a imageabilidade de um primeiro tipo de célula; receber uma segunda porção de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; imagear a primeira porção em uma célula de fluxo; e imagear a segunda porção na célula de fluxo, sendo que o imageamento da segunda porção ocorre após o processamento da primeira porção, ou pelo menos parcialmente ao mesmo tempo que o processamento da primeira porção.

[00010] Em algumas modalidades, o imageamento de cada uma das porções de fluido sanguíneo tem um tempo de imageamento associado; o processamento de cada uma das porções de fluido sanguíneo tem um tempo de processamento associado; e os tempos de processamento associados são mais longos que os tempos de imageamento associados.

[00011] Em algumas modalidades, o primeiro tipo de células compreende leucócitos e o processamento da primeira porção compreende manchamento e incubação de leucócitos da primeira porção, de modo a melhorar a imageabilidade dos leucócitos.

[00012] Em algumas modalidades, cada etapa de imageamento tem uma duração menor que cerca de 40 segundos.

[00013] Em algumas modalidades, a etapa de processamento para a primeira porção tem uma duração de mais que cerca de 30 segundos.

[00014] Em algumas modalidades, a etapa de processamento para a primeira porção compreende adicionalmente aquecimento da primeira porção por elementos de aquecimento em uma primeira estação de processamento.

[00015] Em algumas modalidades, o método inclui também inserir uma primeira amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; e separar a primeira amostra de fluido sanguíneo em uma primeira e uma segunda porções, sendo que o imageamento da primeira porção é realizado após o imageamento da segunda porção.

[00016] Em algumas modalidades, a segunda porção compreende eritrócitos e o processamento da segunda porção compreende a obtenção de um volume de sangue predeterminado suficiente para o imageamento dos eritrócitos.

[00017] Em algumas modalidades, o método inclui também: após receber as primeira e segunda porções, receber uma terceira porção de fluido sanguíneo e uma quarta porção de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; processar a terceira porção, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula; imagear a terceira porção na célula de fluxo; imagear a quarta porção na célula de fluxo; e sendo que o imageamento de ambas a segunda e quarta porções ocorre antes do imageamento de ambas as primeira e terceira porções.

[00018] Em algumas modalidades, o método inclui também: após inserir a primeira amostra de fluido sanguíneo, inserir uma segunda amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; separar a segunda amostra de fluido sanguíneo em uma terceira porção de fluido sanguíneo e uma quarta porção de fluido sanguíneo; e processar a terceira porção, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula; sendo que pelo menos uma porção do processamento da primeira porção ocorre em uma primeira estação de processamento, sendo que pelo menos uma porção do processamento da terceira porção ocorre em uma segunda estação de processamento separada da primeira estação de processamento.

[00019] Em algumas modalidades, o método inclui também: colocar a primeira porção em contato com um reagente em um primeiro local e, subsequentemente, transportar a primeira porção até a primeira estação de processamento; e colocar a terceira porção em contato com um reagente no primeiro local e, subsequentemente, transportar a terceira porção até a segunda estação de processamento.

[00020] Em algumas modalidades, o método inclui também inserir uma primeira amostra de fluido sanguíneo e uma segunda amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra, sendo que a primeira amostra de fluido sanguíneo inclui a primeira porção, e a segunda amostra de fluido sanguíneo inclui a segunda porção; e processar a segunda porção, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula; sendo que o imageamento da segunda porção é realizado após o imageamento da primeira porção.

[00021] Em algumas modalidades, a segunda porção compreende leucócitos e o processamento da segunda porção compreende o manchamento e incubação dos leucócitos, de modo a melhorar a imageabilidade dos leucócitos.

[00022] Em algumas modalidades, pelo menos parte do processamento da primeira porção ocorre ao mesmo tempo em que pelo menos parte do processamento da segunda porção.

[00023] Em algumas modalidades, processar a primeira porção inclui o aquecimento da primeira porção em uma primeira estação de processamento, e o processamento da segunda porção inclui o aquecimento da segunda porção em uma segunda estação de processamento separada da primeira estação de processamento.

[00024] Em algumas modalidades, processar a primeira porção inclui o contato da primeira porção com um reagente em um primeiro local de reagente; e sendo que o processamento da segunda porção inclui colocar a segunda porção em contato com o reagente no primeiro local de reagente.

[00025] Em algumas modalidades, um sistema para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo inclui: um sistema de amostra de fluido que tem: um sistema de válvulas que separa a amostra, uma primeira passagem de fluido sanguíneo, uma segunda passagem de fluido sanguíneo separada da primeira passagem de amostra de fluido sanguíneo, e uma passagem de fluido sanguíneo comum em comunicação fluida com as primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo, sendo que o sistema de válvulas para separar a amostra está em comunicação fluida com as primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo e é configurado para fornecer uma primeira porção de fluido sanguíneo contendo um primeiro tipo de célula à primeira passagem de fluido sanguíneo, e uma segunda porção de fluido sanguíneo na segunda passagem de fluido sanguíneo, sendo que a primeira passagem de fluido sanguíneo compreende uma primeira estação de processamento configurada para processar o primeiro fluido sanguíneo, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula; e uma célula de fluxo que tem uma porta de amostra acoplada de modo operacional à passagem de fluido sanguíneo comum, de modo que, quando as primeira e segunda porções de fluido sanguíneo estão no sistema fluídico de amostra, a primeira porção de amostra e a segunda porção de amostra são injetadas na passagem comum até a porta de amostra ao longo das primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo, respectivamente.

[00026] Em algumas modalidades, o sistema inclui também uma câmara de diluição em comunicação fluida com o sistema de válvulas e a segunda passagem de fluido sanguíneo, de modo que o sistema de válvulas libera a segunda porção de fluido sanguíneo primeiro à câmara de diluição, antes de ela ser liberada à segunda passagem de fluido sanguíneo.

[00027] Em algumas modalidades, a primeira estação de processamento compreende um elemento de aquecimento para incubar a primeira porção de fluido sanguíneo.

[00028] Em algumas modalidades, o sistema inclui também sensores de temperatura acoplados à célula de fluxo, ou ao sistema fluídico para produzir uma leitura de temperatura, e um controlador configurado para receber a leitura de temperatura dos sensores de temperatura e ajustar as operações do elemento aquecedor, de modo que a primeira porção de fluido sanguíneo na primeira estação de processamento é mantida a uma temperatura desejada.

[00029] Em algumas modalidades, o sistema inclui também uma bomba de diluente configurada para injetar um diluente na segunda passagem de fluido sanguíneo, de modo a liberar a segunda porção de fluido sanguíneo à passagem comum.

[00030] Em algumas modalidades, o sistema inclui também uma bomba de amostra configurada para injetar um fluido na passagem comum, de modo a fornecer a segunda porção de fluido sanguíneo da passagem comum para a porta de amostra da célula de fluxo.

[00031] Em algumas modalidades, o sistema inclui também uma bomba de diluente configurada para injetar um diluente a uma parte substancial da segunda passagem de fluido sanguíneo e à câmara de diluição, e uma bomba de vácuo configurada para evacuar o diluente da câmara de diluição e da parte substancial da segunda passagem de fluido sanguíneo.

[00032] Em algumas modalidades, a segunda porção de fluido sanguíneo compreende o primeiro tipo de célula, a segunda passagem de fluido sanguíneo compreende uma segunda estação de processamento configurada para processar a segunda porção de fluido sanguíneo, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula, e a primeira porção de fluido sanguíneo é encaminhada à primeira passagem de processamento abrindo as primeira e segunda válvulas de controle situadas na primeira estação de processamento e fechando a terceira e quarta válvulas de controle situadas na segunda estação de processamento.

[00033] Em algumas modalidades, a segunda porção de fluido sanguíneo compreende o primeiro tipo de célula, a segunda passagem de fluido sanguíneo compreende uma segunda estação de processamento configurada para processar a segunda porção de fluido sanguíneo, de modo a melhorar a imageabilidade do primeiro tipo de célula, e a segunda porção de fluido sanguíneo é encaminhada à segunda passagem de fluido sanguíneo fechando as primeira e segunda válvulas de controle situadas na primeira estação de processamento, e abrindo a terceira e quarta válvulas de controle situadas na segunda estação de processamento.

[00034] Em algumas modalidades, o sistema inclui também uma passagem de desvio que desvia a primeira passagem de fluido sanguíneo, sendo que a segunda porção de fluido sanguíneo é direcionada à segunda porção de passagem de fluido sanguíneo através da passagem de desvio.

[00035] Em algumas modalidades, a segunda porção de fluido sanguíneo compreende eritrócitos e o sistema de válvulas separa o sistema fluídico entre a primeira passagem de fluido sanguíneo e a segunda passagem de fluido sanguíneo, a segunda passagem de fluido sanguíneo incluindo uma estação de retenção para conter um volume predeterminado da segunda porção de fluido sanguíneo.

[00036] Em algumas modalidades, a estação de retenção compreende um laço de tubulação e um par de válvulas da estação de retenção nas extremidades do laço de tubulação.

[00037] Em algumas modalidades, um método para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo inclui: receber pelo menos uma porção de uma primeira amostra em um sistema fluídico interno de um sistema de análise de amostra; após receber a porção da primeira amostra no sistema fluídico interno, receber pelo menos uma porção de uma segunda amostra no sistema fluídico; após receber as primeira e segunda amostras no sistema fluídico interno, fazer fluir a porção da segunda amostra através de uma célula de fluxo e formar uma imagem da porção da segunda amostra conforme ela flui através da célula de fluxo; após fazer fluir a porção da segunda amostra através da célula de fluxo, fazer fluir a porção da primeira amostra através da célula de fluxo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00038] A Figura 1 é uma ilustração esquemática, parcialmente seccionada e não em escala, que mostra os aspectos operacionais de uma célula de fluxo exemplificadora, um sistema de autofoco e um dispositivo de imageamento óptico de alta resolução para análise de imagens da amostra usando-se processamento de imagens digitais.

[00039] A Figura 2 é uma ilustração em perspectiva de um exemplo de uma célula de fluxo.

[00040] A Figura 3 é uma vista em seção longitudinal mediana ao longo das linhas 3-3 da célula de fluxo mostrada na Figura 2.

[00041] As Figuras 3(a) e 3(b) são vistas seccionais de outros exemplos de célula de fluxo.

[00042] A Figura 4 ilustra aspectos de outro exemplo de um sistema de imageamento.

[00043] As Figuras 5 e 6 ilustram exemplos de taxas de esforço do fluxo.

[00044] As Figuras de 7 a 12 ilustram exemplos de regulação de tempo ou estagiamento do processamento e imageamento de várias amostras de fluido.

[00045] As Figuras de 13(a) a 13(m) ilustram um exemplo de um sistema fluídico com sequências de fluxo diferentes de um sistema de imageamento automatizado.

DESCRIÇÃO DETALHADA DOS DESENHOS

[00046] A presente descrição refere-se a sistemas e métodos para analisar uma amostra de fluido contendo partículas. Algumas modalidades referem-se a um sistema automatizado de imageamento de partícula que compreende um analisador que pode ser, por exemplo, um analisador visual, e sistemas/subsistemas fluídicos e métodos para o direcionamento e estagiamento de amostras de fluido ou porções de amostra para imageamento. Em algumas modalidades, o analisador visual pode compreender adicionalmente um processador para facilitar a análise automatizada das imagens.

[00047] O sistema de análise pode ser útil, por exemplo, na caracterização de partículas em fluidos biológicos, como a detecção e quantificação de eritrócitos, reticulócitos, eritrócitos nucleados, plaquetas e leucócitos, incluindo contagem diferencial de leucócitos, categorização e subcategorização e análise. Outros usos similares, como a caracterização de células sanguíneas ou de outras partículas de outros fluidos, também são abrangidos pelas modalidades da presente invenção.

(1) Célula de fluxo, imageamento e análise

[00048] Para facilitar a capacidade, velocidade e eficácia em que partículas como as células sanguíneas são categorizadas e/ou subcategorizadas, pode ser vantajoso fornecer imagens limpas de alta qualidade das células sanguíneas para análise automatizada por um sistema de processamento de dados. Em algumas modalidades, uma amostra de fluido sanguíneo ou uma porção de amostra é introduzida em um fluido de revestimento, e os fluidos de revestimento e amostra combinados são compactados dentro de uma zona de transição de uma passagem de fluxo afunilada que reduz a espessura do fluxo de fluidos da faixa de amostra. Portanto, partículas como células podem ser orientadas e/ou comprimidas dentro da amostra de fluido sanguíneo pelo fluido de revestimento viscoso circundante, por exemplo, em combinação com um efeito de focalização geométrica fornecido por uma zona de transição afunilada. De maneira similar, as características internas dentro das células sanguíneas podem ser, em algumas modalidades não limitadoras, alinhadas e orientadas como resultado de um diferencial de viscosidade entre o fluido de amostra e o fluido de revestimento, por exemplo, em combinação com um efeito de focalização geométrica fornecido por uma zona de transição afunilada. Disposições de células sanguíneas como estas podem facilitar a obtenção de imagens de alta qualidade das células sanguíneas para análise pelo sistema de processamento de dados.

[00049] Referindo-se agora aos desenhos, a Figura 1 mostra esquematicamente uma célula de fluxo 22 para transportar um fluido de amostra ou uma porção de fluido através de uma zona de visualização 23 de um dispositivo de imageamento óptico de alta resolução 24, em uma configuração para imageamento de partículas microscópicas em um fluxo de amostra 32, usando-se o processamento de imagens digital. A célula de fluxo 22 é acoplada a uma fonte 25 de amostra de fluido ou a porções de amostra, algumas ou todas podendo ter sido submetidas a processamento, como o contato com uma composição de agente de contraste de partícula e aquecimento. A célula de fluxo 22 também é acoplada a uma ou mais fontes 27 de uma partícula e/ou líquido de alinhamento de organelas intracelulares (PIOAL) ou outro tipo de fluido de revestimento, que pode ser, em alguns casos, uma solução de glicerol transparente que tem uma viscosidade que é maior que a viscosidade do fluido de amostra.

[00050] Na Figura 1, a amostra de fluido é injetada através de uma abertura achatada em uma extremidade distal 28 de um tubo de alimentação de amostra 29 e para o interior da célula de fluxo 22, em um ponto onde o fluxo de PIOAL foi substancialmente estabelecido, resultando em um fluxo laminar estável e simétrico do PIOAL acima e abaixo (ou em lados opostos) do fluxo de amostra em formato de fita. A amostra e o fluxo de PIOAL podem ser fornecidos por uma seringa ou outros tipos de bombas dosadoras de precisão que movem o PIOAL com o fluido de amostra injetado ao longo de uma trajetória de fluxo que diminui substancialmente. O PIOAL envolve e comprime a amostra de fluido na zona 21, onde a trajetória de fluxo se afunila. Portanto, a diminuição na trajetória de fluxo na zona 21 pode contribuir para a focalização geométrica do fluxo de amostra 32. A fita de amostra de fluido 32 é envolta pelo e transportada juntamente com o PIOAL a jusante da zona de afunilamento 21, passando na frente ou, de outro modo, através da zona de visualização 23 do dispositivo de imageamento óptico de alta resolução 24, onde imagens são coletadas, por exemplo, usando-se um CCD 48. O processador 18 pode receber, como entrada, os dados de pixel do CCD 48. O fluido de amostra em fita flui juntamente com o PIOAL para uma descarga ou rejeito 33.

[00051] Conforme mostrado na Figura 1, a zona de afunilamento 21 pode ter uma porção de trajetória de fluxo proximal 21a que tem uma espessura proximal PT, e uma porção de trajetória de fluxo distal 21b que tem uma espessura distal DT, de modo que a espessura distal DT é menor que a espessura proximal PT. O fluido de amostra pode ser, portanto, injetado através da extremidade distal 28 do tubo de amostra 29, em um local distal à porção proximal 21a e proximal à porção distal 21b. Portanto, a amostra de fluido pode entrar no envoltório de PIOAL conforme o fluido de PIOAL é comprimido pela zona 21.

[00052] De acordo com algumas modalidades, o sistema pode operar para hidrofocalizar a fita de fluido de amostra 32. O termo hidrofoco ou hidrofocalização pode, em alguns casos, se referir a (sem se limitar a) um efeito de foco, que é influenciado por uma diferença de viscosidade entre os fluidos de revestimento e amostra, uma zona de transição afunilada geométrica da célula de fluxo, e uma diferença de velocidade entre os fluidos de revestimento e amostra. O fluxo hidrodinâmico pode resultar da diferença entre as velocidades dos fluxos de fluido de revestimento e amostra, que afeta a espessura e formato do fluxo em fita.

[00053] As Figuras 5 e 6 representam aspectos dos valores de taxa de tensão de cisalhamento para determinadas condições de fluxo em uma célula de fluxo, de acordo com modalidades da presente invenção.Em cada um desses desenhos, um fluido de revestimento com 30% de glicerol é usado. Em alguns casos, a viscosidade pode ter um valor de 2,45 x 10-3. Um valor de tensão de cisalhamento pode ser igual ao produto obtido pela multiplicação de um valor de viscosidade por um valor de taxa de tensão. Com relação à Figura 5, a amostra pode ter uma taxa de fluxo de 0,3 μL/seg, e o fluido de revestimento pode ter uma taxa de fluxo de 21 μL/seg. Com relação à Figura 6, a amostra pode ter uma taxa de fluxo de 1 μL/seg, e o fluido de revestimento pode ter uma taxa de fluxo de 70 μL/seg. Em cada uma dessas figuras, pode-se notar que o fluxo apresenta um valor de tensão menor em direção ao centro (C), e um valor de tensão maior em direção à periferia (P). Tais valores de tensão podem corresponder a uma configuração de célula de fluxo assimétrica, em algumas modalidades.

[00054] Conforme representado na Figura 5, de acordo com algumas modalidades, a taxa de tensão menor em direção à porção central (C) do fluxo pode ter um valor de cerca de 500 (1/s) ou menos, e a taxa de tensão maior em direção à periferia (P) do fluxo pode ter um valor de cerca de 3000 (1/s) ou mais. Conforme representado na Figura 6, de acordo com algumas modalidades, a taxa de tensão menor em direção à porção central (C) do fluxo pode ter um valor de cerca de 1000 (1/s) ou menos, e a taxa de tensão maior em direção à periferia (P) do fluxo pode ter um valor de cerca de 9000 (1/s) ou mais.

[00055] Portanto, pode ser visto que taxas do fluido de revestimento e de amostra menores (por exemplo, Figura 5) correspondem a taxas de tensão menores, e taxas de fluido de revestimento e de amostra maiores (por exemplo, Figura 6) correspondem a taxas de tensão maiores neste exemplo específico. Deve-se entender que as modalidades da presente invenção abrangem o uso de fluidos de amostra e/ou revestimento correspondentes a vários valores de viscosidade, vários valores de taxa de tensão e/ou vários valores de tensão de cisalhamento.

[00056] O fluido da amostra em fita e o PIOAL na Figura 1 fluem além de um dispositivo de imageamento óptico de alta resolução 24 com uma lente objetiva 46 que está direcionada ao longo de um eixo óptico que cruza o fluxo da amostra em formato de fita 32. A distância relativa entre o objetivo 46 e a célula de fluxo 22 é variável, pela operação de um motor de acionamento 54, para analisar e coletar uma imagem digitalizada focalizada em um conjunto foto sensor.

[00057] Uma modalidade da célula de fluxo 22 é mostrada em maiores detalhes nas Figuras 2 e 3. Conforme mostrado aqui, a célula de fluxo 22 pode ser acoplada a uma fonte de amostra 25 e, também, a uma fonte de material PIOAL 27. O fluido de amostra ou porção de amostra é injetado na célula de fluxo 22 através da cânula 29, por exemplo, através de uma porta de saída distal 31 da cânula 29. Tipicamente, o fluido de revestimento de PIOAL não está em um estado de fluxo laminar conforme ele passa através de uma seção de canal curva 41 na célula de fluxo, da fonte 27 em direção à zona de visualização 23. Entretanto, a célula de fluxo 22 pode ser configurada de modo que o fluido de revestimento de PIOAL é ou se torna laminar, ou apresenta um perfil de velocidade plano, conforme ele passa através da porta de saída distal 31 onde o fluido de amostra é introduzido no fluido de revestimento em fluxo. O fluido de amostra e o PIOAL podem fluir ao longo da célula de fluxo 22 em uma direção indicada, de modo geral, pela seta A e, então, para fora da célula de fluxo 22 através de uma descarga 33. A célula de fluxo 22 define uma trajetória de fluxo interna 20 que se afunila simetricamente (por exemplo, na zona de transição 21) na direção de fluxo A, que pode, em alguns casos, contribuir para um fluxo robusto e centralizado do fluxo de amostra. A célula de fluxo 22 está configurada para direcionar um fluxo 32 da amostra envolve em PIOAL através de uma zona de visão 23 na célula de fluxo, ou seja, atrás da porta de visualização 57. Um padrão de foco automático 44 está associado à janela de visualização 57.A célula de fluxo 22 tem, também, um assento arredondado ou rebaixado 58 que está configurado para aceitar ou receber um objetivo de microscópio (não mostrado).

[00058] O comprimento e volume da cânula e o achatamento da seção transversal podem ser selecionados para reduzir o período de instabilidade de fluxo da amostra, aumentando assim sua capacidade de processamento. Em algumas modalidades, o período de instabilidades do fluxo pode ser menor que cerca de 3, 2,75, 2,5, 2,25, 2, 1,75, 1,5 1,25, ou menor que cerca de 1 segundo. Um volume de cânula menor pode, também, reduzir o tempo e volume de diluente necessários para limpar a cânula entre processamentos de amostra.Em algumas modalidades, o tempo de trânsito através da célula de fluxo é de 1, 2, 3, ou 4 segundos, ou qualquer faixa entre quaisquer dois destes tempos.Em algumas modalidades, o tempo de trânsito pode ser menor que 4, 3 ou 2 segundos.

[00059] A Figura 3A representa uma modalidade de célula de fluxo onde uma distância entre o eixo de imageamento 355 e a porção da zona de transição distal 316 é de cerca de 8,24 mm. Uma distância entre a porção da zona de transição distal 316 e a porta de saída da cânula 331 é de cerca de 12,54 mm. Uma distância entre a porta de saída da cânula 331 e a entrada do fluido de revestimento 301 é de cerca de 12,7 mm. Uma distância entre a porta de saída da cânula 331 e uma porção da zona de transição proximal 318 é de cerca de 0,73 mm. A Figura 3B representa aspectos de uma modalidade de célula de fluxo onde a porta de saída da cânula foi movida para um local mais distal em relação à zona de transição, em comparação com a modalidade da Figura 3A. Conforme mostrado aqui, a extremidade distal da cânula é avançada para dentro da zona de transição de afunilamento da célula de fluxo, e uma distância entre o eixo de imageamento 355 e a porção da zona de transição distal 316 está dentro de uma faixa de cerca de 16 mm a cerca de 26 mm. Em alguns casos, a distância entre o eixo de imageamento 355 e a porção da zona de transição distal 316 é de cerca de 21 mm.

[00060] Novamente com referência à Figura 1, o contorno interno da célula de fluxo (por exemplo, em uma zona de transição 21) e as taxas de fluxo do PIOAL e da amostra podem ser ajustadas, em algumas modalidades, de modo que a amostra é formada em um fluxo em formato de fita 32. O fluxo pode ser aproximadamente tão fino quanto ou até mesmo mais fino que as partículas que são envolvidas pelo fluxo de amostra em formato de fita. Os leucócitos podem ter um diâmetro em torno de 10 μm, por exemplo.Ao fornecer um fluxo de amostra em formato de fita com uma espessura menor que 10 μm, em alguns casos, as células podem ser orientadas quando o fluxo de amostra em formato de fita é estendido pelo fluido de revestimento, ou PIOAL. Surpreendentemente, em algumas modalidades, o estiramento do fluxo de amostra em formato de fita ao longo de uma trajetória de fluxo afunilada dentro de camadas de PIOAL com uma viscosidade diferente do fluxo de amostra em formato de fita, como uma viscosidade mais alta, tende a alinhar vantajosamente, em algumas modalidades, partículas não esféricas em um plano substancialmente paralelo à direção de fluxo e aplica forças sobre as células, melhorando o conteúdo intracelular em foco das estruturas de células. O eixo óptico do dispositivode imageamento óptico de altaresolução 24 é substancialmente normal (perpendicular) ao plano do fluxo de amostra em formato de fita. A velocidade linear do fluxo de amostra em formato de fita no ponto de imageamento pode ser, por exemplo, de 20 a 200 mm/segundo. Em algumas modalidades, a velocidade linear do fluxo de amostra em formato de fita pode ser, por exemplo, de 50 a 150 mm/segundo.

[00061] A espessura do fluxo de amostra em formato de fita pode ser afetada pelas viscosidades e taxas de fluxo relativas do fluido de amostra e do PIOAL. A fonte 25 de fluido de amostra e/ou a fonte 27 de PIOAL, por exemplo, sistemas/subsistemas fluídicos que compreendem bombas de deslocamento de precisão, podem ser configuradas para fornecer o fluido de amostra e/ou o PIOAL a taxas de fluxo controláveis para otimização das dimensões do fluxo de amostra em formato de fita 32, isto é, como uma fita delgada ao menos tão larga quanto o campo de visão do dispositivo de imageamento óptico de alta resolução 24.

[00062] Em uma modalidade, a fonte 27 do PIOAL está configurada para fornecer o PIOAL a uma viscosidade predeterminada. Essa viscosidade pode ser diferente da viscosidade da amostra, e pode ser mais alta que a viscosidade da amostra. A viscosidade e densidade do PIOAL, a viscosidade do material de amostra, a taxa de fluxo do PIOAL e a taxa de fluxo do material de amostra são coordenados para manter o fluxo em formato de fita a uma distância de deslocamento do padrão de foco automático, e com características dimensionais predeterminadas, como uma espessura de fluxo vantajosa da amostra em formato de fita.

[00063] Em algumas modalidades, o PIOAL tem uma velocidade linear maior que a da amostra e uma viscosidade mais alta que a da amostra, estirando assim a amostra em uma fita plana, em alguns casos. A viscosidade do PIOAL pode ser de até 10 centipoises, em algumas modalidades.

[00064] Com referência, também, às Figuras 2 e 3, a trajetória de fluxo interna da célula de fluxo se estreita a jusante do ponto de injeção do fluxo de amostra em formato de fita no PIOAL, para produzir uma espessura de fluxo de amostra em formato de fita de, por exemplo, até 7 μm, e/ou a trajetória de fluxo interna produz uma largura de fluxo de amostra em formato de fita de 500 a 3.000 μm. Em algumas modalidades, conforme representado na Figura 1, a trajetória de fluxo interna da célula de fluxo inicia uma zona de afunilamento a montante do ponto de injeção do fluxo de amostra no PIOAL.

[00065] Em algumas modalidades, a trajetória de fluxo interna se afunila para produzir uma espessura de fluxo de amostra em formato de fita de 2 a 4 μm e/ou a trajetória de fluxo interna resulta em um fluxo de amostra em formato de fita de 2000 μm de largura.Estas dimensões podem ser particularmente úteis para hematologia, em alguns casos.A espessura do fluxo, neste caso, é menor que o diâmetro de algumas partículas, como os eritrócitos em seu estado relaxado. Consequentemente, estas partículas podem, em alguns casos, ser reorientadas para ficar voltadas para sua dimensão mais larga em relação ao eixo de imageamento, o que pode ser útil na revelação de características peculiares.

[00066] Em algumas modalidades, a velocidade linear do fluxo de amostra em formato de fita pode ser limitada o suficiente para evitar o desfoque por movimento da imagem digitalizada no tempo de exposição do conjunto foto-sensor. A fonte de luz pode ser, opcionalmente, uma luz estroboscópica que é lampejada para aplicar alta amplitude incidente durante um período de tempo breve. Visto que o padrão de foco automático 44 e a imagem estão no mesmo campo de visão, a fonte de luz é configurada para iluminar o fluxo de amostra em formato de fita e o padrão de foco automático simultaneamente. No entanto, em outras modalidades, o campo de visão para imageamento e para foco automático podem ser diferentes, por exemplo, iluminados e/ou imageados separadamente.

[00067] A Figura 4 representa outra modalidade de um sistema 400 para imageamento de partículas em uma amostra, amostras e/ou porções de amostra de fluido sanguíneo.Conforme mostrado aqui, o sistema 400 inclui um sistema de injeção de fluido de amostra 410, uma célula de fluxo 420, um dispositivo de captura de imagem 430, e um processador 440. A célula de fluxo 420 fornece uma trajetória de fluxo 422 que transmite um fluxo de fluido de revestimento (como um PIOAL), opcionalmente em combinação com o fluido de amostra. De acordo com algumas modalidades, o sistema de injeção de fluido de amostra 410 pode incluir ou ser acoplado com uma cânula ou tubo 412. O sistema de injeção de fluido de amostra 410 pode estar em comunicação fluida com a trajetória de fluxo 422 (por exemplo, através da entrada de fluido de amostra 402), e pode funcionar de modo a injetar o fluido de amostra 424 através de uma porta de saída distal 413 da cânula 412 e para dentro de um fluido de revestimento 426 fluindo dentro da célula de fluxo 420, de modo a fornecer um fluxo de fluido de amostra 428.

[00068] O processador 440 pode incluir, ou pode estar em associação operacional com um meio de armazenamento que tem um aplicativo de computador que, quando executado pelo processador, está configurado para fazer com que o sistema de injeção de fluido de amostra 410 injete fluido de amostra 424 no fluido de revestimento 426 em fluxo. Conforme mostrado aqui, o fluido de revestimento 426 pode ser introduzido na célula de fluxo 420 por meio de um sistema de injeção de fluido de revestimento 450 (por exemplo, através da entrada de fluido de revestimento 401). Em algumas modalidades, o processador 440 pode incluir, ou pode estar em associação operacional com um meio de armazenamento que tem um aplicativo de computador que, quando executado pelo processador, está configurado para fazer com que o sistema de injeção de fluido de revestimento 450 injete fluido de revestimento 426 na célula de fluxo 420.

[00069] O processador 440 pode ser acoplado ao sistema injetor de fluido de amostra 410, ao dispositivo de captura de imagem 430 e, opcionalmente, ao sistema de injeção de fluido de revestimento 450. O processador 440 pode ser configurado para interromper a injeção de um primeiro fluido de amostra (ou uma primeira porção de uma amostra) para dentro do fluido de revestimento 426 e iniciar a injeção de um segundo fluido de amostra (ou uma segunda porção da amostra) para dentro do fluido de revestimento 426, de modo que fluidos de amostra transitórios são iniciados. Por exemplo, o processador 440 pode incluir ou estar em associação operacional com um meio de armazenamento que tem um aplicativo de computador que, quando executado pelo processador, está configurado para fazer com que o sistema de injeção de fluido de amostra 410 injete o segundo fluido de amostra para dentro do fluido de revestimento 426 em fluxo, de modo que fluidos de amostra transitórios são iniciados.

[00070] Em algumas modalidades, o processador 440 pode ser configurado para iniciar a captura de uma imagem ou imagens de uma segunda pluralidade de partículas a partir do segundo fluido de amostra no local de captura de imagem 432 da célula de fluxo 420, após a transição do fluido de amostra e dentro de 4 segundos do imageamento de uma primeira pluralidade de partículas, a partir de uma primeira amostra. Por exemplo, o processador 440 pode incluir ou estar em associação operacional com um meio de armazenamento que tem um aplicativo de computador que, quando executado pelo processador, está configurado para fazer com que o dispositivo de captura de imagem 430 inicie a captura de uma imagem ou imagens de uma segunda pluralidade de partículas a partir do segundo fluido de amostra no local de captura de imagem 432 da célula de fluxo 420, após a transição do fluido da amostra e dentro de quatro segundos do imageamento da primeira pluralidade de partículas. Em outras modalidades, o sistema pode ser configurado para operar com outros períodos de tempo que separam o imageamento do primeiro e segundo fluidos de amostra, que podem ou não envolver fluidos de amostra transitórios.

[00071] Qualquer uma de uma variedade de técnicas de análise de hematologia ou partículas de sangue pode ser realizada com o uso de imagens do fluido de amostra ou porções do fluido de amostra fluindo através da célula de fluxo. Frequentemente, a análise de imagens pode envolver determinar certos parâmetros de célula ou partícula, ou medir, detectar ou avaliar determinadas características de célula ou partícula. Por exemplo, a análise de imagens pode envolver o processamento automatizado por computador para avaliar ou quantificar o tamanho da célula ou partícula, características do núcleo celular, características do citoplasma celular, características da organela intracelular, e similares. De maneirasimilar,as técnicas de análise podemabranger determinadosmétodosdecontagem ouclassificação, outestes de diagnóstico, que incluem diferenciais de leucócitos (WBC). Em alguns casos, as imagens obtidas usando-se a célula de fluxo podem suportar um teste de diferencial de leucócitos em 5 partes.Em alguns casos, as imagens obtidas usando-se a célula de fluxo podem suportar um teste de diferencial de leucócitos em 9 partes. De maneira similar, com referência à Figura 4, o processador 440 pode incluir ou estar em associação operacional com um meio de armazenamento que tem um aplicativo de computador que, quando executado pelo processador, está configurado para fazer com que o sistema 400 diferencie tipos diferentes de células com base em imagens obtidas a partir do dispositivo de captura de imagem. Por exemplo, técnicas de teste ou diagnóstico baseadas em computador podem ser utilizadas para diferenciar várias células (por exemplo, neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos, basófilos, metamielócitos, mielócitos, promielócitos e blastos).

[00072]A discriminação de células sanguíneas em uma amostra sanguínea é uma aplicação exemplificadora à qual modalidades da presente invenção são particularmente adequadas, embora não estejam limitadas às mesmas. A amostra é preparada através de técnicas automatizadas e apresentadas a um dispositivo de imageamento óptico de alta resolução como um fluxo de amostra em formato de fita delgado (ou uma série de duas ou mais porções de uma amostra) para ser periodicamente imageada enquanto o fluxo de amostra em formato de fita flui através do campo de visão. As imagens das partículas (como células sanguíneas) podem ser distinguidas entre si, categorizadas, subcategorizadas e contadas, usando-se técnicas de processamento de dados de imagem de pixel programados, ou exclusivamente de maneira automática, ou com assistência humana limitada, para identificar e contar as células ou partículas. Em adição a imagens de célula, que podem ser armazenadas e disponibilizadas no caso de características incomuns ou críticas das partículas, os dados de saída incluem uma contagem de ocorrências de cada categoria e/ou subcategoria específica da célula ou partícula distinguida nas imagens de amostra registradas.

[00073] As contagens das diferentes partículas encontradas em cada imagem podem ser processadas adicionalmente, por exemplo, usadas para acumular razões de células precisas e estatisticamente significativas de cada categoria e/ou subcategoria distintas na amostra como um todo. A amostra usada para discriminação visual pode ser diluída, mas as proporções de células em cada categoria e/ou subcategoria são representadas na amostra diluída, particularmente depois de um número de imagens ser processado.

[00074] A amostra pode ser uma amostra biológica, por exemplo, uma amostra de fluido corpóreo contendo leucócitos, incluindo, mas não se limitando a, sangue, soro, medula óssea, fluido de lavagem, efusões, exsudatos, líquido cefalorraquidiano, fluido pleural, fluido peritoneal e fluido amniótico. Em algumas modalidades, a amostra pode ser uma amostra de tecido sólido, por exemplo, uma amostra de biópsia que foi tratada para produzir uma suspensão de células. A amostra também pode ser uma suspensão obtida a partir do tratamento de uma amostra fecal. Uma amostra também pode ser uma amostra laboratorial ou de linha de produção que compreende partículas, como uma amostra de cultura celular. O termo amostra pode ser usado para referir-se a uma amostra obtida a partir de um paciente ou laboratório, ou qualquer fração ou alíquota dos mesmos. A amostra pode ser diluída, dividida em porções ou manchada em alguns processos.

[00075] A presente revelação refere-se adicionalmente a sistemas, métodos e composições para combinar um contador de hemograma completo (CBC) com um analisador, como um analisador visual, a fim de se obter um CBC e uma contagem diferencial de leucócitos expandida com base na imagem, e um contagem de plaquetas expandida com base na imagem, estendendo assim a faixa de detecção eficaz para contagem de plaquetas.

[00076] Em alguns aspectos, as amostras são apresentadas, imageadas e analisadas de uma maneira automatizada. No caso de amostras sanguíneas, a amostra pode ser diluída substancialmente com um diluente ou solução salina adequada, o que reduz a probabilidade da visualização de algumas células de estar oculta por outras células em uma amostra não diluída ou menos diluída. As células podem ser tratadas com agentes que acentuam o contraste de alguns aspectos da célula, por exemplo, mediante o uso de agentes permeabilizantes para tornar as membranas celulares permeáveis, e manchas histológicas para se aderir a e revelar características, como grânulos e o núcleo. Em algumas modalidades, pode ser desejável manchar uma alíquota da amostra para contagem e caracterização de partículas que incluem reticulócitos, eritrócitos nucleados e plaquetas, e para diferenciação, caracterização e análise de leucócitos. Em outras modalidades, as amostras contendo eritrócitos podem ser diluídas antes da introdução à célula de fluxo e imageamento.

(2) Sistemas e métodos fluídicos

[00077] As modalidades descritas acima podem ser incorporadas a vários sistemas automatizados ou outros sistemas que processam, formam imagens de, e/ou analisam grandes números de fluidos de amostra. Em alguns casos, uma preocupação referente a tais sistemas é otimizar a capacidade de processamento ou a eficiência. Por exemplo, para algumas modalidades, incluindo algumas modalidades específicas a fluidos sanguíneos, pode ser desejável que um sistema apresente uma capacidade de processamento de 120 amostras (ou porções de amostra) por hora, ou outra taxa de capacidade de processamento relativamente alta, como de 60 a 180 amostras por hora, mais de 60 amostras por hora, mais de 100 amostras por hora, ou outras taxas de capacidade de processamento.

[00078] Em um exemplo não limitador, um sistema com uma capacidade de processamento alvo de 120 amostras (ou porções de amostra) por hora pode ser necessário para aspirar, processar e imagear (e possivelmente analisar) uma amostra (ou porções de amostra) a cada 30 segundos, para se obter a capacidade de processamento alvo.Em alguns casos, entretanto, algumas das etapas podem precisar de mais de 30 segundos para serem finalizadas. Por exemplo, processar uma amostra de fluido sanguíneo em preparação para imageamento de leucócitos na amostra pode precisar de mais de 30 segundos para ser finalizada (por exemplo, pode precisar de cerca de 45 segundos para ser finalizada). Em tais casos, medições adicionais além do processamento sequencial, imageamento e/ou análise dos fluidos de amostra podem ser benéficas para a obtenção de taxas de capacidade de processamento alvo. Os tempos e taxas de capacidade de processamento acima são fornecidos somente a título de exemplo. Outras modalidades não limitadoras da presente invenção podem referir-se a sistemas e métodos fluídicos usados para imageamento de fluidos de amostra, nos quais uma etapa de processamento para uma amostra ou porção de amostra necessita de ou, de outro modo, ocupa um período de tempo que é de um comprimento que impediria a obtenção de uma taxa de capacidade de processamento desejada para o sistema, se todas as amostras/porções de amostra fossem simplesmente processadas e imageadas em ordem sequencial e em série.

[00079] As Figuras de 7 a 12 ilustram várias modalidades de estadiamento do processamento e imageamento das amostras/porções de amostra, de acordo com várias modalidades da presente invenção. Deve-se compreender que, enquanto tempos específicos são mostrados para os estadiamentos refletidos nas Figuras de 7 a 12, estes estadiamentos podem ser implementados para outros métodos onde algumas etapas levam mais tempo do que outras etapas.

[00080] A Figura 7 ilustra uma modalidade que inclui uma primeira porção de amostra e uma segunda porção de amostra. Nesta modalidade, a primeira porção de amostra é processada durante um segundo período de tempo de 45 segundos (do tempo 0 até o tempo 45), enquanto a segunda porção de amostra é imageada durante um período de tempo de 30 segundos (do tempo 0 até o tempo 30), com a primeira porção de amostra sendo imageada durante um segundo período de tempo de 30 segundos (do tempo 60 até o tempo 90) após seu processamento estar completo e após o imageamento da segunda porção de amostra ser concluído. Nas modalidades das Figuras de 7 a 12, etapas de imageamento são ilustradas como ocorrendo em um segundo período de tempo de 30 segundos; entretanto, em pelo menos alguns casos, o imageamento real não ocorre durante a totalidade do período de tempo de 30 segundos, e pode exigir menos que 30 segundos, como aproximadamente de 2 a 3 segundos, 5 segundos, 20 segundos, ou outro período de tempo entre 1 e 30 segundos. O imageamento pode requerer (ou, de outro modo, ocupar) diferentes quantidades de tempo para a primeira porção e a segunda porção. Por exemplo, em algumas modalidades, o imageamento de uma primeira porção após o processamento pode ocupar períodos de tempo substancialmente mais longos que o imageamento de uma segunda porção que não é processada da mesma maneira que a primeira porção (por exemplo, porções de amostra de fluido sendo imageadas para leucócitos podem requerer, ou de outro modo ocupar, mais tempo de imageamento que porções de amostra de fluido sendo imageadas para eritrócitos). Também deve ser entendido que ambos os períodos de tempo de 45 e 30 segundos ilustrados nas Figuras de 7 a 12 são apenas exemplos, e que outros tempos são contemplados e estão dentro do escopo da presente invenção.

[00081] Em um exemplo consistente com a modalidade da Figura 7 (e outras figuras), a primeira porção de amostra pode ser uma porção de uma amostra de fluido sanguíneo, que é processada para facilitar ou intensificar o imageamento de leucócitos. O processamento pode incluir misturar ou, de outro modo, colocar a primeira amostra em contato com um reagente que mancha os leucócitos e lisa os eritrócitos na primeira porção de amostra. O processamento também pode incluir incubar a primeira porção de amostra após contato com o reagente pela aplicação de calor. Embora a Figura 7 indique que o processamento da primeira porção ocorre em uma única estação, em algumas modalidades, incluindo algumas modalidades descritas abaixo, o processamento pode ocorrer em múltiplos locais.Por exemplo, a primeira porção de amostra pode se misturar ao reagente em uma câmara de mistura e, então, mover-se para uma estação de incubação separada para completar seu processamento.

[00082] Em um exemplo consistente com a modalidade da Figura 7 (e outras figuras), a segunda porção de amostra pode ser uma outra porção de amostra do fluido sanguíneo discutida imediatamente acima, com esta porção sendo usada para o imageamento de eritrócitos na amostra. Em alguns casos, não é necessário processar a segunda porção de amostra de maneira extensiva, ou sequer processar a mesma. Em alguns casos, a segunda amostra pode ser diluída antes do imageamento, mas não é colocada em contato com reagentes, de outro modo processada, ou processada de uma maneira que exige uma quantidade significativa de tempo.

[00083] Em algumas modalidades, o processamento de um primeiro tipo de célula (por exemplo, manchamento e incubação de uma porção de uma amostra de fluido sanguíneo, para melhorar a imageabilidade dos leucócitos na porção de amostra) pode exigir ou, de outro modo, ocupar segmentos de tempo mais longos que os segmentos de tempo necessários ou, de outro modo, ocupados por outras etapas envolvidas no processo de imageamento como um todo. Por exemplo, em algumas modalidades, o processamento de uma de uma amostra de fluido sanguíneo pode exigir ou, de outro modo, ocupar mais tempo que o imageamento daquela porção de amostra por si só ou em combinação com outras etapas de processamento descritas adicionalmente abaixo. Nessas e em outras modalidades, o processamento de uma porção de uma amostra de fluido sanguíneo para melhorar a imageabilidade de certos tipos de células naquela porção de amostra pode exigir ou, de outro modo, ocupar mais tempo que um processo completo exige ou, de outro modo, ocupa para outras porções das amostras de fluido sanguíneo, como porções de amostra que não são processadas para melhorar a imageabilidade de certos tipos de célula na porção de amostra.

[00084] Embora não mostrado especificamente na Figura 7, será evidente aos versados na técnica que o estadiamento ilustrado na Figura 7 (e outras figuras) pode ser repetido várias vezes para múltiplas amostras/porções de amostra.

[00085] A Figura 8 ilustra uma modalidade que inclui, também, uma primeira porção de amostra e uma segunda porção de amostra; entretanto, nesta modalidade, a segunda porção de amostra é imageada após o processamento e o imageamento da primeira porção de amostra serem completados.

[00086] A Figura 9 ilustra uma modalidade que inclui uma primeira amostra de fluido sanguíneo e uma segunda amostra de fluido sanguíneo, as amostras de fluido sanguíneo incluindo múltiplos tipos de célula (por exemplo, eritrócitos, leucócitos e, possivelmente, outros tipos de célula ou partículas). A primeira amostra de fluido sanguíneo é separada em uma primeira porção (por exemplo, em alguns casos, utilizada para o imageamento de leucócitos na primeira amostra) e uma segunda porção (por exemplo, em alguns casos, utilizada para o imageamento de eritrócitos na primeira amostra). A segunda amostra de fluido sanguíneo é separada em uma terceira porção (por exemplo, em alguns casos, utilizada para o imageamento de leucócitos na segunda amostra de fluido sanguíneo) e uma quarta porção (por exemplo, em alguns casos, utilizada para o imageamento de eritrócitos na segunda amostra de fluido sanguíneo).

[00087] Nesta modalidade, a primeira porção é processada durante um período de tempo de 45 segundos do tempo 0 até o tempo 45 (por exemplo, para desintegrar os eritrócitos e manchar os leucócitos), enquanto a segunda porção pode ser imageada durante pelo menos uma porção de um segundo período de tempo de trinta segundos do tempo 0 até o tempo 30 (por exemplo, para imagear os eritrócitos na segunda porção). A parte de processamento da terceira porção (que ocorre durante um período de tempo de 45 segundos do tempo 30 até o tempo 75) também ocorre enquanto a primeira porção está sendo processada (a sobreposição ocorrendo do tempo 30 até o tempo 45, durante aproximadamente 15 segundos). O imageamento da quarta porção (que ocorre durante pelo menos uma porção de um período de tempo de trinta segundos do tempo 30 até o tempo 60, após o imageamento da segunda porção) pode, em alguns casos, se sobrepor a ambos processamentos das primeira e terceira porções. O imageamento da primeira porção ocorre após o imageamento da segunda e quarta porções e pode se sobrepor parcialmente ao processamento da terceira porção. O imageamento da terceira porção ocorre após o imageamento da primeira, segunda e quarta porções e após as primeira e terceira porções serem processadas.

[00088] Conforme mostrado na Figura 9, ao menos uma porção do processamento da primeira porção da amostra de fluido sanguíneo e da terceira porção da segunda amostra de fluido sanguíneo pode ocorrer em diferentes estações de processamento. Por exemplo, em modalidades nas quais as primeira e terceira porções são porções de amostras de fluido sanguíneo a serem imageadas para leucócitos, o processamento pode incluir uma mistura ou, de outro modo, contato das porções de amostra com um reagente (o que pode levar um tempo relativamente curto, por exemplo, de alguns segundos), e também inclui incubação de porções de amostra através da aplicação de calor (o que pode levar um tempo relativamente longo, por exemplo, aproximadamente 45 segundos). Em alguns casos, tanto a primeira como a terceira porções podem ser misturadas com um reagente na mesma câmara de mistura (embora em tempos diferentes), mas serem incubadas em duas estações de incubação separadas ("estação 1" e "estação 2" na Figura 9). Em outras instâncias, a primeira porção pode ser misturada e incubada em um local separado da terceira porção. Na modalidade da Figura 9, uma amostra pode ser processada e imageada aproximadamente a cada 30 segundos, embora a etapa de processamento exija mais de 30 segundos, devido ao uso de múltiplas estações de processamento.

[00089] Embora não seja mostrado explicitamente na Figura 9, a primeira amostra de fluido sanguíneo pode ser obtida e separada em umas primeira e segunda porções antes da segunda amostra de fluido sanguíneo ser obtida e separada na terceira e quarta porções. Por exemplo, em algumas modalidades, um sistema pode aspirar a primeira amostra de fluido sanguíneo a partir de um recipiente (por exemplo, um tubo de amostra) para dentro do sistema e separá-la em uma primeira e uma segunda porções e, então, posteriormente, aspirar a segunda amostra de fluido sanguíneo a partir de um segundo recipiente para dentro do sistema e separá-la em uma terceira e quarta porções. Em alguns casos, as amostras podem ser aspiradas em intervalos de tempo aproximadamente iguais conforme o imageamento de outras porções de amostra são completadas. Por exemplo, na Figura 9, a segunda amostra pode ser aspirada perto do tempo 30, próximo à conclusão do imageamento da segunda porção.

[00090] Conforme ilustrado, por exemplo, pelos estadiamentos mostrados na Figura 9 (e outras figuras), algumas modalidades estadiam as etapas de processamento e imageamento para várias amostras e porções de amostra de uma maneira não sequencial, intercalada ou fora de ordem. Por exemplo, a quarta porção da segunda amostra de fluido sanguíneo (o que, conforme mencionado acima, pode, em alguns casos, ser uma amostra que foi recebida no sistema após a primeira amostra) pode ser imageada antes da primeira porção da primeira amostra, mas após a segunda porção da primeira amostra, com as etapas de imageamento sendo intercaladas ou alternadas entre as primeira e segunda amostras, apesar do fato de que a segunda amostra pode ser obtida ou recebida pelo sistema após o processamento da primeira amostra já ter começado.

[00091] A Figura 10 ilustra uma modalidade que inclui uma primeira, segunda, terceira e quarta amostras de fluido sanguíneo, cada amostra incluindo pelo menos um primeiro tipo de célula de interesse (por exemplo, pelo menos leucócitos). Na Figura 10, porções das quatro amostras são processadas e imageadas em ordem, e pelo menos parte do processamento (por exemplo, uma etapa de incubação) ocorre ou em uma primeira estação ("estação 1" na Figura 10) ou em uma segunda estação separada ("estação 2" na Figura 10), de modo que pelo menos parte do processamento pode se sobrepor ou ocorrer simultaneamente para múltiplas porções de amostra. Especificamente, na modalidade da Figura 10, o processamento das primeira e segunda porções de amostra se sobrepõem (com a primeira porção sendo processada em uma primeira estação, e a segunda porção sendo processada em uma segunda estação), o processamento da segunda e terceira porções de amostra se sobrepõem (com a terceira porção sendo processada na primeira estação após o processamento da primeira porção ser finalizado), e o processamento da terceira e quarta porções da amostra se sobrepõem (com a quarta porção sendo processada na segunda estação após o processamento da segunda porção ser finalizado). Na modalidade da Figura 10, uma amostra pode ser processada e imageada aproximadamente a cada 30 segundos, embora a etapa de processamento exija mais de 30 segundos, devido ao uso de múltiplas estações de processamento.

[00092] A Figura 11 ilustra uma modalidade que inclui uma primeira, segunda, e terceira amostras de fluido sanguíneo, cada uma contendo pelo menos dois tipos de célula (por exemplo, eritrócitos e leucócitos), e cada uma separada em duas porções (da "primeira" até a "sexta porção" na Figura 11). Conforme algumas modalidades discutidas acima, as etapas de imageamento para várias porções de amostra são intercaladas, de forma que o imageamento ocorre na seguinte ordem: (1) imagear o segundo tipo de célula na primeira amostra; (2) imagear o segundo tipo de célula na segunda amostra; (3) imagear o primeiro tipo de célula na primeira amostra; (4) imagear o segundo tipo de célula na terceira amostra; (5) imagear o primeiro tipo de célula na segunda amostra; e (6) imagear o primeiro tipo de célula na terceira amostra. A Figura 12 é similar à Figura 11, exceto pelo fato de que ele inclui uma quarta amostra de fluido sanguíneo no estadiamento, de modo que o imageamento ocorre na seguinte ordem: (1) imagear o segundo tipo de célula na primeira amostra; (2) imagear o segundo tipo de célula na segunda amostra; (3) imagear o primeiro tipo de célula na primeira amostra; (4) imagear o segundo tipo de célula na terceira amostra; (5) imagear o primeiro tipo de célula na segunda amostra; (6) imagear o segundo tipo de célula na quarta amostra; (7) imagear o primeiro tipo de célula na terceira amostra; e (8) imagear o primeiro tipo de célula na quarta amostra. Como nas Figuras 9 e 10, as Figuras 11 e 12 utilizam duas estações separadas para o processamento de um primeiro tipo de célula.

[00093] Deve ser compreendido que a duração de tempo específica e o intervalo das etapas ilustradas nas Figuras de 7 a 12 são apenas exemplos e outras durações e intervalos são possíveis. Como um exemplo alternativo, deve ser observado que, por exemplo, nas Figuras de 10 a 12, a "estação 1" e a "estação 2" não estão sempre em uso e, portanto, os tempos de início, duração e finalização específicos das etapas de processo indicadas esquematicamente por essas figuras poderiam ser alterados sem impacto no estadiamento ilustrado nelas. Como um exemplo específico, na Figura 10 a "estação 1" é mostrada como estando em uso do tempo 0 até o tempo 45, e do tempo 60 até o tempo 105, mas não do tempo 46 até o tempo 59 e, desse modo, ajustes no início, duração e término dos processos ocorrendo na "estação 1" são possíveis, sem afetar o estadiamento geral mostrado na Figura 10 e enquanto ainda fornece uma etapa de imageamento a ser completada a cada 30 segundos.

[00094] As Figuras de 13(a) a 13(m) ilustram uma modalidade de um sistema fluídico configurado para implementar pelo menos parte dos métodos de estadiamento ilustrados nas Figuras de 7 a 12, incluindo as modalidades com múltiplas estações ilustradas nas Figuras de 9 a 12. Em algumas modalidades, o sistema fluídico ilustrado nas Figuras de 13(a) a 13(m) funciona (totalmente ou em parte) como as fontes de amostra e PIOAL 25, 27 mostradas na Figura 1 e descritas acima. Em algumas modalidades, o sistema fluídico ilustrado nas Figuras de 13(a) a 13(m) funciona (totalmente ou em parte) como os sistemas de injeção de fluidos de revestimento e amostra 410, 450 ilustrados na Figura 4.

[00095] As Figuras de 13(a) a 13(m) ilustram a progressão de várias porções de amostra de fluido ao longo do sistema até uma célula de fluxo 1302, incluindo as porções de amostra indicadas por WBC 1, RBC 1, WBC 2 e RBC 2 (das quais algumas não são introduzidas até mais adiante nas Figuras de 13(a) a 13(m)). No exemplo não limitador ilustrado nas Figuras de 13(a) a 13(m), as porções de amostra WBC 1 e WBC 2 representam porções de amostras de fluido sanguíneo que serão imageadas na célula de fluxo 1302 para leucócitos, e as porções de amostra RBC 1 RBC 2 representam porções correspondentes das amostras de fluido sanguíneo que serão imageadas na célula de fluxo 1302 para eritrócitos. Em outras palavras, na modalidade específica mostrada, o RBC 1 e o WBC 1 são de uma única amostra sanguínea.

[00096] Nas Figuras de 13(a) a 13(m), as porções de amostra de fluido são introduzidas no sistema no separador de amostra 1304. Na modalidade específica mostrada, o separador de amostra 1304 é uma válvula de cisalhamento configurada para separar porções de amostra a partir de uma amostra de fluido sanguíneo aspirada a partir de um tubo ou outro recipiente. A válvula de cisalhamento pode ser configurada para separar volumes específicos e predeterminados das porções de amostra de fluido a partir da amostra aspirada.Em um exemplo, uma aspiração a partir de um recipiente irá preencher diversos (por exemplo, dois) anéis de tubulação associados à válvula de cisalhamento com porções de amostra de fluido.Embora não mostrado, o sistema pode ser configurado para aspirar ou, de outro modo, obter amostras a partir de um grande número de tubos de amostra, que podem ser mantidos em prateleiras ou outros dispositivos de suporte. Em algumas modalidades, o sistema de transporte por prateleiras pode mover tubos de amostra sequencialmente em proximidade com uma sonda que aspira uma amostra a partir de um tubo, para transporte subsequente até a válvula de cisalhamento descrita acima. Nestas ou em outras modalidades, o sistema pode incluir também uma entrada manual ou outro mecanismo para a introdução de amostras no sistema fora de ordem, com os tubos de amostra mantidos em prateleiras.

[00097] Um sistema de hematologia de acordo com modalidades da presente invenção pode processar uma amostra sanguínea, que tem um volume de cerca de 150 μL. O volume de sangue aspirado pode ser de cerca de 120 a 150 μL. Em alguns casos, o volume mínimo de sangue disponível no tubo de amostra é de cerca de 500 μL para um modo de amostragem automático, e de cerca de 250 μL para um modo de amostragem manual.

[00098] Começando pela Figura 13(a), as porções de amostra de fluido WBC 1 (mostradas como uma linha cruzada diagonal de trás para frente) e RBC 1 (mostradas como uma linha cruzada diagonal) são primeiro recebidas a partir de um separador de amostra 1304 nas câmaras de mistura 1306 e 1308, respectivamente. O separador de amostra 1304 pode ser configurado para fornecer um volume específico e definido das porções de amostra de fluido nas câmaras de mistura. Na câmara de mistura 1306, o WBC 1 é misturado ou, de outro modo, colocado em contato com um diluente e um reagente configurado para desintegrar eritrócitos e manchar leucócitos na porção de amostra de fluido. Na câmara de mistura 1308, o RBC 1 se mistura a um diluente, mas, pelo menos nesta modalidade específica, não é tratado de outro modo. A bomba 1310 pode bombear diluente através do separador de amostra 1304 e para dentro de ambas as câmaras de mistura 1306, 1308. Na modalidade específica mostrada, a bomba 1310 é um pistão de seringa (bem como algumas das outras bombas descritas abaixo), que pode se reabastecer periodicamente através da extração de diluente a partir de um recipiente a granel contendo um grande volume de diluente (não mostrado). A bomba 1312 (que pode também ser uma bomba de seringa que extrai o reagente a partir de um recipiente a granel) pode bombear o reagente através do separador de amostra 1304 e para dentro da câmara de mistura 1306. Em algumas modalidades, as bombas 1310,1312 podem bombear diluente e reagente para dentro de câmaras de mistura adequadas através do separador de amostra 1304 (ao invés de diretamente para dentro das câmaras de mistura 1306, 1308), a fim de fornecer volumes específicos e definidos do diluente e/ou reagente para dentro das câmaras de mistura próximas. Em algumas modalidades, isso também irá mover as porções de amostra de fluido WBC 1 e RBC 1 do separador de amostra 1304 para dentro das câmaras de mistura 1306 e 1308. Em outras modalidades, o diluente e/ou o reagente podem ser bombeados diretamente para dentro das câmaras de mistura, ou introduzidos nas câmaras de mistura de outra maneira, em volumes predefinidos, durante tempos predefinidos, ou de outras maneiras predefinidas ou não predefinidas. Em algumas modalidades, a mistura pode levar cinco segundos ou menos ou, em algumas modalidades, aproximadamente dois segundos.

[00099]Conforme mostrado na Figura 13(b), após a mistura, a porção de fluido de amostra WBC 1 é direcionada para a câmara de mistura 1306 na primeira estação de incubação 1314, e o RBC 1 é direcionado a partir da câmara de mistura 1308 para dentro da estação de retenção 1316. Na modalidade específica mostrada, o WBC 1 passa através de um circuito fluídico que inclui válvulas 1318, 1320, 1322, 1324, 1326, que são configuradas de modo que o WBC 1 irá fluir para dentro da primeira estação de incubação 1314 e, em alguns casos, uma porção do WBC 1 pode fluir para fora da primeira estação de incubação 1314, e pode fluir no desvio para além da segunda estação de incubação 1328. As válvulas 1318, 1320, 1322, 1324, 1326 podem ser válvulas de múltiplas portas que podem ser acionadas (como por um sistema de controle baseado em processador) para direcionar fluidos passando através das mesmas para diferentes portas de saída das válvulas, dependendo da configuração específica da válvula no momento. Dessa forma, no momento ilustrado no exemplo específico da Figura 13(b), as válvulas 1320 e 1322 são configuradas para permitir que o fluido entre na primeira estação de incubação 1314, ao invés de desviar da mesma, e as válvulas 1324 e 1326 são configuradas para evitar que os fluidos entrem na segunda estação de incubação 1328 e, em vez disso, fluam através de uma linha de desvio para além da mesma. A estação de retenção 1316 retendo o RBC 1 na Figura 13(b) está próxima às válvulas 1330, 1332, 1334. No momento ilustrado no exemplo específico da Figura 13(b), as válvulas 1332 e 1334 são configuradas para permitir que o fluido entre na estação de retenção 1316, ao invés de fluir através de uma linha de desvio para além da mesma.

[000100] Na modalidade específica mostrada, as bombas 1336, 1338 podem ser usadas para extrair as porções de fluido de amostra WBC 1 e RBC 1 nas porções de circuito fluídico ilustradas na Figura 13(b).

[000101] Na modalidade específica mostrada, o volume de RBC 1 e WBC 1 (incluindo, em alguns casos, o volume do WBC 1 e RBC 1 incluindo o diluente e/ou reagente misturado ao mesmo) é maior que a capacidade para fluidos da primeira estação de incubação 1314 e da estação de retenção 1316, respectivamente, e o sistema é configurado de modo que, conforme mostrado na Figura 13(b), parte do WBC 1 e do RBC 1 permanece nas válvulas e/ou passagens fora de cada extremidade da primeira estação de incubação 1314 e da estação de retenção 1316, respectivamente, após eles terem sido completamente carregados. Em algumas, embora não necessariamente todas, modalidades, isso pode facilitar, garantindo que o fluido contido no interior da primeira estação de incubação 1314 e da estação de retenção 1316 é totalmente composto por WBC 1 e RBC 1 misturados, respectivamente, e tem um volume específico, definido e/ou repetível. Em algumas, embora não necessariamente todas, modalidades, isso também pode facilitar, garantindo que qualquer ar que possa estar presente no início ou no final da amostra extraída da câmara de mistura não estará presente na primeira estação de incubação 1314 ou na estação de retenção 1316.

[000102] Em algumas modalidades, o carregamento de WBC 1 na primeira estação de incubação 1314 e o carregamento de RBC 1 na estação de retenção 1316 pode levar cinco segundos ou menos ou, em algumas modalidades, aproximadamente três segundos.

[000103] As estações de incubação 1314 e 1328 podem estar próximas a um ou mais elementos aquecedores (não mostrados) configurados para aplicar calor aos fluidos contidos nas estações de incubação. Em alguns casos, um ou mais sensores de temperatura ou outra funcionalidade podem ser incluídos para, direta ou indiretamente, medir a temperatura ou, de outro modo, regular a temperatura nas estações de incubação. Em alguns casos, as estações de incubação 1314 e 1328 e/ou elementos de aquecimento associados podem ser isolados para reduzir o aquecimento de outros componentes ou áreas do sistema. Em alguns casos, o WBC 1 e outras porções de amostra processados para melhorar a imageabilidade de leucócitos podem ser incubados em uma das estações de incubação 1314 ou 1328 durante aproximadamente 45 segundos.

[000104] Em alguns casos, o WBC 1 e outras porções de amostra processados para melhorar a imageabilidade de leucócitos podem ser incubados em uma das estações de incubação 1314 ou 1328 por períodos de tempo mais longos que aquelas porções de amostra necessitam ou, de outro modo, ocupar outras etapas ilustradas nas Figuras de 13(a) a 13(m) (individualmente ou como um todo). Em alguns casos, o WBC 1 e outras porções de amostra processados para melhorar a imageabilidade de leucócitos podem ser incubados por períodos de tempo mais longos que uma taxa de capacidade de processamento desejada do sistema (por exemplo, incubada durante 45 segundos com uma taxa de capacidade de processamento desejada de 1 porção de amostra (ou amostra) a cada 30 segundos). Na modalidade mostrada, o WBC 1 pode ser incubado nas estações de incubação 1314 por um período de tempo mais longo que o RBC 1 necessita ou, de outro modo, ocupa todas as etapas ilustradas nas Figuras de 13(a) a 13(f). Na modalidade mostrada, o WBC 1 pode ser incubado nas estações de incubação 1314 por um período de tempo mais longo que o RBC 1 e o RBC 2 necessitam ou, de outro modo, ocupam todas as etapas ilustradas nas Figuras de 13(a) a 13(m).

[000105] Em algumas modalidades, as estações de incubação 1314, 1328 e a estação de retenção 1316 podem ser anéis de tubulação que são dimensionados para conter um volume suficiente de uma porção de amostra de fluido para imageamento na célula de fluxo 1302. Em outras modalidades, outros componentes ou configurações podem ser utilizados para conter volumes suficientes e/ou predeterminados de amostras de fluido. Em ainda outras modalidades, estações diferentes podem não ser necessárias, e o sistema pode, de outro modo, ser configurado para processar ou direcionar as porções de amostra de fluido até a célula de fluxo 1302 sem a necessidade de estações separadas ou distintas.

[000106] Voltando-se para a Figura 13(c), após o carregamento, porções dos circuitos fluídicos são lavadas para remover o excesso de WBC 1 e RBC 1, como o excesso de WBC 1 e RBC 1 que pode estar no circuito fluídico fora da primeira estação de incubação 1314 e da estação de retenção 1316, respectivamente. As porções dos circuitos fluídicos podem ser lavadas com qualquer fluido adequado, como, em alguns casos, um diluente e/ou fluido de limpeza. Na modalidade específica mostrada, o diluente (mostrado como uma linha em negrito) é bombeado a partir das bombas 1310, 1336, 1338, de modo que o diluente flui através das câmaras de mistura 1306, 1308, e através das válvulas 1318, 1320, 1322, 1324, 1326, 1330, 1332, 1334, algumas estando configuradas de modo que o fluxo de diluente desvia da primeira estação de incubação 1314, da segunda estação de incubação 1328, e da estação de retenção 1316. O diluente é então removido como resíduo. Em algumas modalidades, o diluente é aspirado para fora do sistema (mostrado como uma linha cruzada) pela bomba de vácuo 1340. Em algumas modalidades, lavar o excesso de WBC 1 e RBC 1 pode levar cinco segundos ou menos, ou, em algumas modalidades, aproximadamente três segundos.

[000107] Embora não mostrado em uma figura, após a lavagem do excesso de WBC 1 e RBC 1 (ou durante os períodos de tempo sobrepostos), o diluente e/ou limpador podem ser lavados através da célula de fluxo. Em uma modalidade, o diluente pode ser bombeado da bomba 1338, através das válvulas 1332, 1334 (configuradas durante este segmento para desviar da estação de retenção 1316), através de linhas adicionais válvulas configuradas adequadamente, e então, por fim, através de uma passagem de fluido comum 1342, onde ele entra na célula de fluxo 1302. Em alguns casos, um fluido de revestimento também pode fluir através da célula de fluxo 1302 ao mesmo tempo, como através de uma das ou ambas as bombas de fluido de revestimento 1344,1346 mostradas nas figuras. Em algumas modalidades, lavar a célula de fluxo pode levar cinco segundos ou menos, ou, em algumas modalidades, aproximadamente dois segundos.

[000108] Voltando-se para a Figura 13(d), o sistema pode, em seguida, começar a fluir RBC 1 através da célula de fluxo 1302. Na modalidade específica mostrada, válvulas incluindo as válvulas 1330, 1332, 1334, são configuradas de modo tal que a bomba 1338 pode bombear diluente para dentro da estação de retenção 1316 para começar a empurrar o RBC 1 para fora da estação de retenção 1316 e, eventualmente, para dentro da passagem de fluido comum 1342, onde ele entra na célula de fluxo 1302. Ao mesmo tempo, uma das bombas de fluido de revestimento (por exemplo, 1344) pode começar a (ou continuar a) bombear fluido de revestimento (mostrado como uma linha de ferrovia) através da célula de fluxo 1302. Em algumas modalidades, a pressão inicial do RBC 1 através da célula de fluxo 1302 ocorre durante aproximadamente dois segundos, e pode ser realizada antes do imageamento, de modo a escorvar a passagem que leva até a célula de fluxo e a cânula, e outras partes da célula de fluxo 1302.

[000109] Na Figura 13(e), o sistema está formando a imagem do RBC 1 conforme ele passa pela célula de fluxo 1302. Na modalidade específica mostrada, a bomba 1338 continua a bombear diluente através da estação de retenção 1316 (com as válvulas configuradas adequadamente) de modo a continuar a empurrar o RBC 1 através da célula de fluxo 1302, enquanto uma das bombas de fluido de revestimento (por exemplo, 1346) bombeia o fluido de revestimento através da célula de fluxo 1302. Na modalidade específica mostrada, a bomba 1348 também bombeia diluente através de determinadas válvulas (adequadamente configuradas) e da passagem de fluido comum 1342, para facilitar a impulsão do RBC 1 através da célula de fluxo 1302. Em algumas modalidades, o imageamento será completado antes do diluente da bomba 1348 alcançar a célula de fluxo 1302. Em algumas modalidades, o sistema forma uma imagem do RBC 1 conforme ele flui através da célula de fluxo 1302 durante aproximadamente 5 segundos. Em outras modalidades, o sistema forma imagens de porções de amostra do RBC durante outros períodos de tempo, como um período de tempo na faixa de 1 a 30 segundos. Em algumas modalidades, o uso de duas bombas de fluido de revestimento pode facilitar o fornecimento de um suprimento constante de fluido de revestimento à célula de fluxo 1302. Em outras modalidades, não é necessário ter várias bombas de fluido de revestimento.

[000110] Na Figura 13(f), depois que o RBC 1 foi imageado, o diluente e/ou limpador é lavado através da célula de fluxo. Na modalidade específica mostrada, o diluente é bombeado da bomba 1338, através das válvulas 1332, 1334 (configuradas durante este segmento para desviar da estação de retenção 1316), através de linhas adicionais válvulas configuradas adequadamente, e então, por fim, através da passagem de fluido comum 1342, onde ele entra na célula de fluxo 1302. Na modalidade específica mostrada, o fluido de revestimento também flui através da célula de fluxo 1302 ao mesmo tempo, como através de uma das ou ambas as bombas de fluido de revestimento 1344, 1346 mostradas nas figuras. Em algumas modalidades, lavar a célula de fluxo pode levar cinco segundos ou menos ou, em algumas modalidades, aproximadamente dois segundos.

[000111] Embora não seja mostrado nas figuras, o diluente e/ou o limpador podem ser subsequentemente lavados através da célula de fluxo com o uso da bomba 1336, para bombear o diluente e/ou limpador através das válvulas e outros componentes próximos à primeira e à segunda estações de incubação 1314, 1328.

[000112] Na Figura 13(g), porções de amostra do fluido WBC 2 (mostradas como uma linha cruzada diagonal para frente) e RBC 2 (mostradas como uma cruzada tracejada) são carregadas na segunda estação de incubação 1328 e na estação de retenção 1316, respectivamente (após serem misturadas com um reagente e/ou diluente em uma etapa não mostrada nas figuras). O WBC 2 e o RBC 2 são carregados de maneiras similares a como o WBC 1 e o RBC 1 foram carregados em uma etapa descrita anteriormente, exceto pelo fato de que, por exemplo, aqui as válvulas 1320,1322,1324,1326 são configuradas de modo que o WBC 2 desvia da primeira estação de incubação 1314 e entra na segunda estação de incubação 1328. Em algumas modalidades, as porções de amostra são carregadas no sistema aproximadamente a cada 30 segundos.

[000113] Na Figura 13(h), quantidades em excesso de WBC 2 e RBC 2 são lavadas para descarte de um modo similar à etapa de lavagem descrita acima na Figura 13(c).

[000114] Na Figura 13(i), o sistema então começa a fluir o RBC 2 através da célula de fluxo 1302 de uma maneira similar àquela descrita acima para a Figura 13(d).

[000115] Na Figura 13(j), o sistema forma uma imagem do RBC 2 conforme ele flui através da célula de fluxo 1302 de uma maneira similar àquela descrita acima para a Figura 13(e). Deve-se notar que, neste momento do processo, duas porções de amostra de fluido de RBC foram agora imageadas antes do WBC 1 ser imageado (incluindo o RBC 2, que foi recebido no sistema após o WBC 1 ter sido recebido e começar a ser processado).

[000116] Na Figura 13(k), após o RBC 2 ter sido imageado, o diluente e/ou o limpador são lavados através da célula de fluxo de uma maneira similar àquela descrita para a Figura 13(f).

[000117] Na Figura 13(l), o sistema então começa a fluir o WBC 1 através da célula de fluxo 1302 de uma maneira similar àquela descrita acima para a Figura 13(d). Neste momento do processo, o WBC 1 esteve no sistema por aproximadamente 50 segundos e incubado na primeira estação de incubação durante aproximadamente 45 segundos.

[000118] Na Figura 13(m), o sistema forma uma imagem do WBC 1 conforme ele flui através da célula de fluxo 1302 de uma maneira similar àquela descrita acima para a Figura 13(e).

[000119] Embora não seja mostrado nas figuras, os versados na técnica reconhecerão que as etapas ilustradas nas Figuras de 13(a) a 13(m) podem ser repetidas para amostras adicionais. Em algumas modalidades, as porções de amostra podem ser imageadas na seguinte ordem: RBC 1, RBC 2, WBC 1, RBC 3, WBC 2, RBC 4, WBC 3, RBC 5, WBC 4 .... Em outras palavras, duas porções de amostra de RBC podem ser inicialmente imageadas, seguidas pela porção de amostra de WBC, com imageamentos subsequentes alternando entre porções de amostra de RBC e WBC. Em algumas modalidades, as porções de amostra podem ser imageadas na seguinte ordem: RBC 1, RBC 2, WBC 1, RBC 3, WBC 2, RBC 4, WBC 3, RBC 5, WBC 4 .. RBC N, WBC N- 1, WBC N. Em outras palavras, duas porções de amostra de RBC podem ser inicialmente imageadas, seguidas pela porção de amostra WBC, com imageamentos subsequentes alternando entre porções de amostra de RBC e WBC, com duas porções de amostra de WBC sendo imageadas na conclusão do imageamento de todas as amostras.

[000120] Diferentes disposições dos componentes mostrados nos desenhos ou descritos acima, bem como componentes e etapas não mostradas ou descritas são possíveis. De modo similar, algumas características e subcombinações são úteis e podem ser empregadas sem referência a outras características e subcombinações. Modalidades da invenção foram descritas aqui para propósitos ilustrativos e não restritivos, e modalidades alternativas se tornarão evidentes a leitores desta patente. Em certos casos, as etapas ou operações do método podem ser realizadas ou executadas em uma ordem diferente, ou operações podem ser adicionadas, removidas ou modificadas. Será entendido que, em determinados aspectos da invenção, um componente único pode ser substituído por múltiplos componentes, e múltiplos componentes podem ser substituídos por um componente único, para fornecer um elemento ou estrutura, ou para executar uma determinada função ou funções. Exceto onde tal substituição não seria operativa para a prática de certas modalidades da invenção, tal substituição é considerada como estando dentro do escopo da invenção. Consequentemente, a presente invenção não está limitada às modalidades descritas acima e representadas nos desenhos e diversas modalidades e modificações podem ser feitas sem se afastar do escopo das reivindicações abaixo.

Claims

1.Método para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo, o método caracterizado pelo fato de que compreende: a)receber uma primeira porção de fluido sanguíneo em um sistema de análise de amostra; b)processar a primeira porção, de modo a melhorar imageabilidade de um primeiro tipo de célula; c)receber uma segunda porção de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; e)imagear a primeira porção em uma célula de fluxo; e f)imagear a segunda porção na célula de fluxo, em que o imageamento da segunda porção ocorre subsequente ao processamento da primeira porção ou, pelo menos parcialmente, ao mesmo tempo que o processamento da primeira porção.

2.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: o imageamento de cada uma das porções de fluido sanguíneo tem um tempo de imageamento associado; o processamento de cada uma das porções de fluido sanguíneo tem um tempo de processamento associado; e os tempos de processamento associados são mais longos do que os tempos de imageamento associados.

3.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro tipo de células compreende leucócitos e o processamento da primeira porção compreende coloração e incubação dos leucócitos da primeira porção, de modo a melhorar imageabilidade dos leucócitos.

4.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada etapa de imageamento tem uma duração menor do que 40 segundos, e a etapa de processamento para a primeira porção tem um tempo de duração superior a 30 segundos.

5.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de processamento para a primeira porção ainda compreende aquecer a primeira porção com elementos de aquecimento em uma primeira estação de processamento.

6.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ainda compreende: inserir uma primeira amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; e separar a primeira amostra de fluido sanguíneo nas primeira e segunda porções, em que o imageamento da primeira porção é realizado após o imageamento da segunda porção.

7.Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a segunda porção compreende eritrócitos e o processamento da segunda porção compreende obter um volume de sangue predeterminado suficiente para imagear os eritrócitos.

8.Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que ainda compreende: após receber as primeira e segunda porções, receber uma terceira porção de fluido sanguíneo e uma quarta porção de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; processar a terceira porção, de modo a melhorar imageabilidade do primeiro tipo de célula; imagear a terceira porção na célula de fluxo; imagear a quarta porção na célula de fluxo; em que o imageamento de ambas as segunda e quarta porções ocorre antes do imageamento de ambas as primeira e terceira porções.

9.Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que ainda compreende: após inserir a primeira amostra de fluido sanguíneo, inserir uma segunda amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra; separar a segunda amostra de fluido sanguíneo em uma terceira porção de fluido sanguíneo e em uma quarta porção de fluido sanguíneo; e processar a terceira porção, de modo a melhorar imageabilidade do primeiro tipo de célula; em que pelo menos uma porção do processamento da primeira porção ocorre em uma primeira estação de processamento e em que pelo menos uma porção do processamento da terceira porção ocorre em uma segunda estação de processamento separada da primeira estação de processamento, em que o método ainda compreende: colocar a primeira porção em contato com um reagente em um primeiro local e, subsequentemente, transportar a primeira porção para a primeira estação de processamento; e colocar a terceira porção em contato com o reagente no primeiro local e, subsequentemente, transportar a terceira porção para a segunda estação de processamento.

10.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ainda compreende: inserir uma primeira amostra de fluido sanguíneo e uma segunda amostra de fluido sanguíneo no sistema de análise de amostra, em que a primeira amostra de fluido sanguíneo inclui a primeira porção e a segunda amostra de fluido sanguíneo inclui a segunda porção; e processar a segunda porção, de modo a melhorar imageabilidade do primeiro tipo de célula; em que o imageamento da segunda porção é realizado após o imageamento da primeira porção, em que a segunda porção compreende leucócitos, e o processamento da segunda porção compreende coloração e incubação dos leucócitos, de modo a melhorar imageabilidade dos leucócitos, e em que pelo menos parte do processamento da primeira porção ocorre ao mesmo tempo do que pelo menos parte do processamento da segunda porção.

11.Método, de acordo com a reivindicação10, caracterizado pelo fato de que processar a primeira porção inclui aquecer a primeira porção em uma primeira estação de processamento e processar a segunda porção inclui aquecer a segunda porção em uma segunda estação de processamento separada da primeira estação de processamento, em que processar a primeira porção inclui colocar a primeira porção em contato com um reagente em um primeiro local de reagente; e em que processar a segunda porção inclui colocar a segunda porção em contato com o reagente no primeiro local de reagente.

12.Sistema para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo que utiliza o método como definido na reivindicação 1, o sistema caracterizado pelo fato de que compreende: um sistema fluídico de amostra possuindo: um sistema de válvulas para separação de amostra, uma primeira passagem de fluido sanguíneo, uma segunda passagem de fluido sanguíneo separada da primeira passagem de fluido sanguíneo, e uma passagem de fluido sanguíneo comum em comunicação fluida com as primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo, em que o sistema de válvulas para separação de amostra está em comunicação fluida com as primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo e é configurado para entregar uma primeira porção de fluido sanguíneo contendo um primeiro tipo de célula na primeira passagem de fluido sanguíneo, e uma segunda porção de fluido sanguíneo na segunda passagem de fluido sanguíneo, em que a primeira passagem de fluido sanguíneo compreende uma primeira estação de processamento configurada para processar a primeira porção de fluido sanguíneo, de modo a melhorar a capacidade do sistema de imagear o primeiro tipo de célula, em que a primeira estação de processamento processa a primeira porção de fluido sanguíneo através de mistura, manchamento, aquecimento por incubação ou qualquer combinação dos mesmos; e uma célula de fluxo possuindo uma porta de amostra acoplada de modo operacional com a passagem de fluido sanguíneo comum, de modo que, quando as primeira e segunda porções de fluido sanguíneo estão no sistema fluídico de amostra, a primeira porção de amostra e a segunda porção de amostra são injetadas na passagem comum até a porta de amostra ao longo das primeira e segunda passagens de fluido sanguíneo, respectivamente.

13.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que ainda compreende uma câmara de diluição em comunicação fluida com o sistema de válvulas e a segunda passagem de fluido sanguíneo, de modo que o sistema de válvulas entrega a segunda porção de fluido sanguíneo primeiro na câmara de diluição, antes de ser entregue na segunda passagem de fluido sanguíneo, em que o sistema ainda compreende: uma bomba diluente configurada pra injetar um diluente em uma parte substancial da segunda passagem de fluído sanguíneo e na câmara de diluição, e uma bomba de vácuo configurada para evacuar o diluente na câmara de diluição e na parte substancial da segunda passagem de fluído sanguíneo.

14.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a primeira estação de processamento compreende um elemento de aquecimento para incubar a primeira porção de fluido sanguíneo, em que o sistema ainda compreende sensores de temperatura acoplados à célula de fluxo, ou ao sistema fluídico para produzir uma leitura de temperatura, e um controlador configurado para receber a leitura de temperatura dos sensores de temperatura e ajustar operações do elemento de aquecimento, de modo que a primeira porção de fluido sanguíneo na primeira estação de processamento é mantida a uma temperatura desejada.

15.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que ainda compreende uma bomba de diluente configurada para injetar um diluente na segunda passagem de fluido sanguíneo, de modo a entregar a segunda porção de fluido sanguíneo na passagem comum, em que o sistema ainda compreende uma bomba de amostra configurada para injetar um fluido na passagem comum, de modo a entregar a segunda porção de fluido sanguíneo a partir da passagem comum para a porta de amostra da célula de fluxo.

16.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que: a segunda porção de fluido sanguíneo compreende o primeiro tipo de célula, a segunda passagem de fluido sanguíneo compreende uma segunda estação de processamento configurada para processar a segunda porção de fluido sanguíneo, de modo a melhorar a capacidade do sistema de imagear o primeiro tipo de célula, em que a segunda estação de processamento processa a segunda porção de fluido sanguíneo através de mistura, manchamento, aquecimento por incubação ou qualquer combinação dos mesmos; e a primeira porção de fluido sanguíneo é direcionada à primeira passagem de processamento pela abertura das primeira e segunda válvulas de controle localizadas na primeira estação de processamento e pelo fechamento das terceira e quarta válvulas de controle localizadas na segunda estação de processamento.

17.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que: a segunda porção de fluido sanguíneo compreende o primeiro tipo de célula, a segunda passagem de fluido sanguíneo compreende uma segunda estação de processamento configurada para processar a segunda porção de fluido sanguíneo, de modo a melhorar a capacidade do sistema de imagear o primeiro tipo de célula, em que a segunda estação de processamento processa a segunda porção de fluido sanguíneo através de mistura, manchamento, aquecimento por incubação ou qualquer combinação dos mesmos, e a segunda porção de fluido sanguíneo é direcionada à segunda passagem de fluído sanguíneo pelo fechamento das primeira e segunda válvulas de controle localizadas na primeira estação de processamento, e pela abertura das terceira e quarta válvulas de controle localizadas na segunda estação de processamento,

18.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o sistema ainda compreende uma passagem de desvio que desvia da primeira passagem de fluido sanguíneo, em que a segunda porção de fluido sanguíneo é direcionada à segunda porção de passagem de fluido sanguíneo através da passagem de desvio.

19.Sistema, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a segunda porção de fluido sanguíneo compreende eritrócitos, e o sistema de válvula separa o sistema fluídico na primeira passagem de fluido sanguíneo e na segunda passagem de fluido sanguíneo, a segunda passagem de fluido sanguíneo incluindo uma estação de retenção para conter um volume predeterminado da segunda porção de fluído sanguíneo, em que a estação de retenção compreende um laço de tubulação e um par de válvulas de estação de retenção nas extremidades do laço de tubulação.

20.Método para imageamento de uma pluralidade de porções de fluido sanguíneo, o método caracterizado pelo fato de que compreende: receber pelo menos uma porção de uma primeira amostra em um sistema fluídico interno de um sistema de análise de amostra; após receber a porção da primeira amostra no sistema fluídico interno, receber pelo menos uma porção de uma segunda amostra no sistema fluídico interno; após receber a primeira e segunda amostras no sistema fluídico interno, fluir a porção da segunda amostra através de uma célula de fluxo e imagear a porção da segunda amostra conforme ela flui através da célula de fluxo; após fluir a porção da segunda amostra através da célula de fluxo, fluir a porção da primeira amostra através da célula de fluxo, em que o imageamento ainda compreende porções de fluxo das primeira ou segunda amostras ou ambas através de uma estação de processamento configurada para processar as porções das amostras de modo a melhorar a capacidade do sistema de imagear células na amostra, em que a estação de processamento processa as porções das amostras através de mistura, manchamento, incubação, aquecimento ou qualquer combinação dos mesmos.