BR112016029523B1 - USES OF COMPOUNDS THAT INHIBIT THE ATR AND CHK1 PROTEIN KINASES - Google Patents

Abstract

MÉTODO PARA TRATAMENTO DE CÂNCER USANDO UMA COMBINAÇÃO DE INIBIDORES DE CHK1 E ATR. A presente invenção se refere a métodos de tratamento de câncer em um paciente por meio de administração de um composto útil como um inibidor de proteína quinase ATR em combinação com um composto útil como um inibidor de proteína quinase Chk1. A combinação mencionada acima exibe um efeito sinérgico surpreendente no tratamento de câncer, apesar das proteína quinases-alvo estarem dentro da mesma via biológica. Além disso, a presente invenção também se refere a métodos de tratamento de câncer através da administração de um composto útil como um inibidor da proteína quinase ATR; administração de um composto útil como um inibidor da proteína quinase Chk1; bem como administração de um agente de dano ao DNA a um paciente. Os compostos usados na presente invenção são representados pela fórmula I e pela fórmula II: em que as variáveis são conforme definidos aqui.METHOD FOR TREATMENT OF CANCER USING A COMBINATION OF CHK1 AND ATR INHIBITORS. The present invention relates to methods of treating cancer in a patient by administering a compound useful as an ATR protein kinase inhibitor in combination with a compound useful as a Chk1 protein kinase inhibitor. The above-mentioned combination exhibits a surprising synergistic effect in cancer treatment, despite the target protein kinases being within the same biological pathway. Furthermore, the present invention also relates to methods of treating cancer by administering a compound useful as an ATR protein kinase inhibitor; administering a compound useful as a Chk1 protein kinase inhibitor; as well as administering a DNA damaging agent to a patient. The compounds used in the present invention are represented by formula I and formula II: wherein the variables are as defined herein.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃOBACKGROUND OF THE INVENTION

[0001] ATR ("ATM e Rad3 relacionados") é um mediador chave das respostas celulares a uma estrutura de dano de DNA que é caracterizada por conjuntos de DNA de filamento único revestidos pela proteína de replicação A (RPA). O DNA de filamento único revestido com RPA comumente surge como um resultado do estresse de replicação, que ocorre quando uma célula tenta replicar o DNA através de lesões de dano ao DNA não resolvidas. A incapacidade de reparar o estresse de replicação pode levar a quebras letais de filamento duplo ou mutação deletéria do DNA. A ATR juntamente com seus substratos coordena funções celulares múltiplas em resposta ao estresse de replicação, incluindo o controle do ciclo celular, a replicação do DNA e o reparo de dano do DNA. Chk1 é um substrato de princípio para a ATR.[0001] ATR ("ATM and Rad3 related") is a key mediator of cellular responses to a DNA damage structure that is characterized by sets of single-stranded DNA coated by replication protein A (RPA). RPA-coated single-stranded DNA commonly arises as a result of replication stress, which occurs when a cell attempts to replicate DNA through unresolved DNA damage lesions. Failure to repair replication stress can lead to lethal double-strand breaks or deleterious DNA mutation. ATR together with its substrates coordinates multiple cellular functions in response to replication stress, including cell cycle control, DNA replication, and DNA damage repair. Chk1 is a principle substrate for ATR.

[0002] As células cancerosas tipicamente possuem níveis elevados de estresse de replicação fundamentais que podem surgir da expressão de oncogenes, hipóxia ou defeitos em outras vias de reparação, por exemplo, reparação de excisão de base. Isso pode levar a uma dependência sobre a ATR para a sobrevivência em algumas células cancerosas. Adicionalmente, as células requerem ATR para resolver o estresse de replicação após o tratamento com muitos medicamentos prejudiciais ao DNA e radiação ionizante, ou a partir do tratamento com agentes que bloqueiam outras vias de reparo tais como inibidores de PARP, os quais bloqueiam a reparação da excisão de base.[0002] Cancer cells typically have elevated levels of fundamental replication stress that can arise from oncogene expression, hypoxia or defects in other repair pathways, for example, base excision repair. This may lead to a dependence on ATR for survival in some cancer cells. Additionally, cells require ATR to resolve replication stress following treatment with many DNA-damaging drugs and ionizing radiation, or from treatment with agents that block other repair pathways such as PARP inhibitors, which block DNA repair. base excision.

[0003] Os inibidores da via de sinalização de ATR têm sido apresentados de reduzir a sobrevivência celular em algumas células cancerosas que expressam oncogenes tais como Cyclin E or Myc (See Schoppy et. al., J Clin Invest, 2012, vol. 122, pp. 241-52).; estão sobre um ambiente hipóxico (Ver Pires et. al., Br J Cancer. 2012, vol. 107, pp. 291-99); ou que carregam defeitos em outras proteínas de reparo do DNA tais como ERCC1 (Mohni et. al., Cancer Res, 2014, vol. 74, pp. 2835-45). Adicionalmente, os inibidores da via de ATR têm sido apresentados de sensibilizar algumas células cancerosas aos efeitos citotóxicos de múltiplos medicamentos prejudiciais ao DNA e radiação ionizante, ou aos inibidores de outras vias de reparação, por exemplo, os inibidores de PARP. Em contraste, as células normais foram demonstradas de tolerar a inibição de ATR, como agentes individuais ou quando utilizadas em combinação com outros agentes. Isso é atribuído à ativação da sinalização de reparo do DNA compensatório em células normais, que muitas vezes não está disponível para as células cancerosas.[0003] Inhibitors of the ATR signaling pathway have been shown to reduce cell survival in some cancer cells that express oncogenes such as Cyclin E or Myc (See Schoppy et. al., J Clin Invest, 2012, vol. 122, pp. 241-52).; are in a hypoxic environment (See Pires et. al., Br J Cancer. 2012, vol. 107, pp. 291-99); or that carry defects in other DNA repair proteins such as ERCC1 (Mohni et. al., Cancer Res, 2014, vol. 74, pp. 2835-45). Additionally, inhibitors of the ATR pathway have been shown to sensitize some cancer cells to the cytotoxic effects of multiple DNA-damaging drugs and ionizing radiation, or to inhibitors of other repair pathways, for example, PARP inhibitors. In contrast, normal cells have been shown to tolerate ATR inhibition, either as single agents or when used in combination with other agents. This is attributed to the activation of compensatory DNA repair signaling in normal cells, which is often not available to cancer cells.

SUMÁRIO DA INVENÇÃOSUMMARY OF THE INVENTION

[0004] A presente invenção refere-se aos métodos de tratamento de câncer em um paciente através da administração de um composto útil como um inibidor da proteína cinase ATR em combinação com um composto útil como um inibidor da proteína cinase Chk1. A combinação anteriormente mencionada apresentou um efeito sinérgico surpreendente no tratamento de câncer apesar das proteínas cinases alvo estando dentro da mesma via biológica. Além do mais, a presente invenção também se refere aos métodos de tratamento de câncer através da administração de um composto útil como um inibidor da proteína cinase ATR; administração de um composto útil como um inibidor da proteína cinase Chk1; assim como a administração de um ou mais agentes de dano do DNA a um paciente.[0004] The present invention relates to methods of treating cancer in a patient by administering a compound useful as an ATR protein kinase inhibitor in combination with a compound useful as a Chk1 protein kinase inhibitor. The previously mentioned combination showed a surprising synergistic effect in cancer treatment despite the target protein kinases being within the same biological pathway. Furthermore, the present invention also relates to methods of treating cancer by administering a compound useful as an ATR protein kinase inhibitor; administering a compound useful as a Chk1 protein kinase inhibitor; as well as the administration of one or more DNA damaging agents to a patient.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF FIGURES

[0005] Figura 1: gráfico que mostra a indução de YH2AX pan- nuclear em uma linhagem celular U2OS tratada isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-821.[0005] Figure 1: graph showing the induction of pan-nuclear YH2AX in a U2OS cell line treated alone and in combination with AZD7762 and VE-821.

[0006] Figura 2a: gráfico que mostra a sobrevivência clonogênica de um painel de linhagens celulares tratadas isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-821.[0006] Figure 2a: graph showing the clonogenic survival of a panel of cell lines treated alone and in combination with AZD7762 and VE-821.

[0007] Figura 2b: gráfico que mostra a sobrevivência clonogênica de um painel de linhagens celulares tratadas com VE-821.[0007] Figure 2b: graph showing the clonogenic survival of a panel of cell lines treated with VE-821.

[0008] Figura 2c: gráfico que avalia a sobrevivência clonogênica de um painel de células que super-expressam o oncogene de cMYC após tratamento isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-821.[0008] Figure 2c: graph evaluating the clonogenic survival of a panel of cells that overexpress the cMYC oncogene after treatment alone and in combination with AZD7762 and VE-821.

[0009] Figura 2d: gráfico que avalia a sobrevivência clonogênica de um painel de células com p53 e RB inativos e que super-expressam o oncogene H-RAS após tratamento isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-821.[0009] Figure 2d: graph that evaluates the clonogenic survival of a panel of cells with inactive p53 and RB and that overexpress the H-RAS oncogene after treatment alone and in combination with AZD7762 and VE-821.

[0010] Figura 3a: gráfico que mostra o volume do tumor de camundongos xeno-enxertados MX1 tratados isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-822.[0010] Figure 3a: graph showing tumor volume of MX1 xenografted mice treated alone and in combination with AZD7762 and VE-822.

[0011] Figura 3b: gráfico que mostra uma curva de sobrevivência para os camundongos xeno-enxertados MX1 tratados isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-822.[0011] Figure 3b: graph showing a survival curve for MX1 xenografted mice treated alone and in combination with AZD7762 and VE-822.

[0012] Figura 4a: gráfico que mostra o volume tumoral de camundongos xeno-enxertados H460 tratados isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-822.[0012] Figure 4a: graph showing tumor volume of H460 xenografted mice treated alone and in combination with AZD7762 and VE-822.

[0013] Figura 4b: gráfico que mostra uma curva de sobrevivência para camundongos xeno-enxertados H460 tratados isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-822.[0013] Figure 4b: graph showing a survival curve for H460 xenografted mice treated alone and in combination with AZD7762 and VE-822.

[0014] Figura 5: gráfico que mostra os níveis de Caspase-3 clivado em células U2OS tratadas isoladamente e em combinação com AZD7762 e VE-821.[0014] Figure 5: graph showing the levels of cleaved Caspase-3 in U2OS cells treated alone and in combination with AZD7762 and VE-821.

[0015] Figura 6a: gráfico que mostra o impacto da inibição de Chk1 e da inibição de ATR sobre os níveis de danos do DNA nas células de câncer U2OS através da medição do acúmulo de pan- nuclear YH2AX.[0015] Figure 6a: graph showing the impact of Chk1 inhibition and ATR inhibition on DNA damage levels in U2OS cancer cells by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation.

[0016] Figura 6b: gráfico que mostra o impacto da inibição de Chk1 e da inibição de ATR nos níveis de dano do DNA em células de fibroblasto normais VH-10 através da medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear.[0016] Figure 6b: graph showing the impact of Chk1 inhibition and ATR inhibition on DNA damage levels in normal VH-10 fibroblast cells by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation.

[0017] Figura 6c: gráfico que mostra o impacto da inibição de Chk1 e da inibição de ATR sobre os níveis de danos do DNA nas células de câncer U2OS através da medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear.[0017] Figure 6c: graph showing the impact of Chk1 inhibition and ATR inhibition on DNA damage levels in U2OS cancer cells by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation.

[0018] Figura 6d: gráfico que mostra o impacto da inibição de Chk1 e da inibição de ATR nos níveis de dano do DNA nas células de câncer U2OS utilizando um ensaio de cometa alcalino.[0018] Figure 6d: graph showing the impact of Chk1 inhibition and ATR inhibition on DNA damage levels in U2OS cancer cells using an alkaline comet assay.

[0019] Figura 7a: gráfico que mostra os níveis de ssDNA nas células de câncer U2OS após o tratamento com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR, isoladamente e em combinação.[0019] Figure 7a: graph showing ssDNA levels in U2OS cancer cells after treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor, alone and in combination.

[0020] Figura 7b: gráfico que mostra os níveis de ssDNA em células de fibroblastos normais VH-10 após tratamento com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR, isoladamente e em combinação.[0020] Figure 7b: graph showing ssDNA levels in normal VH-10 fibroblast cells after treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor, alone and in combination.

[0021] Figura 8a: gráfico que mostra a viabilidade celular de células cancerosas U2OS após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e inibidor de ATR.[0021] Figure 8a: graph showing cell viability of U2OS cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and ATR inhibitor.

[0022] Figura 8b: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de fibroblastos normais VH-10 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0022] Figure 8b: graph showing cell viability of normal VH-10 fibroblast cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0023] Figura 8c: gráfico que mostra a viabilidade celular de células cancerosas H460 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0023] Figure 8c: graph showing cell viability of H460 cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0024] Figura 8d: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de câncer MX-1 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0024] Figure 8d: graph showing cell viability of MX-1 cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0025] Figura 8e: gráfico que mostra a viabilidade celular de células cancerosas HCT-116 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0025] Figure 8e: graph showing cell viability of HCT-116 cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0026] Figura 8f: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de câncer MCF7 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e inibidor de ATR.[0026] Figure 8f: graph showing cell viability of MCF7 cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and ATR inhibitor.

[0027] Figura 8g: gráfico que mostra a viabilidade celular de células endoteliais normais HUVAC após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0027] Figure 8g: graph showing cell viability of normal HUVAC endothelial cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0028] Figura 8h: gráfico que mostra a viabilidade celular de células cancerosas HL60 após tratamento de combinação com um inibidor de Chk1 e um inibidor de ATR.[0028] Figure 8h: graph showing cell viability of HL60 cancer cells after combination treatment with a Chk1 inhibitor and an ATR inhibitor.

[0029] Figura 9: gráfico que mostra o impacto da inibição de Chk1 e de inibição de ATR nos níveis de dano do DNA nas células de fibroblastos normais VH-10 através da medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear e através da medição do acúmulo de focos discretos de YH2AX e 53BP1.[0029] Figure 9: graph showing the impact of Chk1 inhibition and ATR inhibition on DNA damage levels in normal VH-10 fibroblast cells by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation and by measuring accumulation of discrete foci of YH2AX and 53BP1.

[0030] Figura 10a: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de câncer HT-29 após tratamento de combinação com o inibidor de ATR VE-822 e o inibidor de Chk1 AZD-7762.[0030] Figure 10a: graph showing cell viability of HT-29 cancer cells after combination treatment with the ATR inhibitor VE-822 and the Chk1 inhibitor AZD-7762.

[0031] Figura 10b: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de câncer HT-29 após tratamento de combinação com o inibidor de ATR VE-822 e o inibidor de Chk1 LY-2603618.[0031] Figure 10b: graph showing cell viability of HT-29 cancer cells after combination treatment with the ATR inhibitor VE-822 and the Chk1 inhibitor LY-2603618.

[0032] Figura 10c: gráfico que mostra a viabilidade celular de células cancerosas HT-29 após tratamento de combinação com o inibidor de ATR VE-822 e o inibidor de Chk1 PF-477736.[0032] Figure 10c: graph showing cell viability of HT-29 cancer cells after combination treatment with the ATR inhibitor VE-822 and the Chk1 inhibitor PF-477736.

[0033] Figura 10d: gráfico que mostra a viabilidade celular de células de câncer HT-29 após tratamento de combinação com o inibidor de ATR VE-822 e inibidor de Chk1 SCH-900776.[0033] Figure 10d: graph showing cell viability of HT-29 cancer cells after combination treatment with the ATR inhibitor VE-822 and Chk1 inhibitor SCH-900776.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃODETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0034] Um ou mais aspectos da presente invenção fornecem um método de tratamento de câncer em um paciente que compreende a administração de um primeiro composto que inibe a proteína cinase ATR; e a administração de um segundo composto que inibe a proteína cinase Chk1. Outro aspecto da presente invenção fornece um método de tratamento de câncer em um paciente que compreende a administração de um primeiro composto que inibe a proteína cinase ATR; a administração de um segundo composto que inibe a proteína cinase Chk1; e a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais.[0034] One or more aspects of the present invention provide a method of treating cancer in a patient comprising administering a first compound that inhibits ATR protein kinase; and administration of a second compound that inhibits the Chk1 protein kinase. Another aspect of the present invention provides a method of treating cancer in a patient comprising administering a first compound that inhibits ATR protein kinase; administration of a second compound that inhibits the Chk1 protein kinase; and administering one or more additional therapeutic agents.

CompostosCompounds

[0035] Em outro aspecto da presente invenção, o composto que inibe a proteína cinase ATR é representado pela Fórmula I: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste mesmo, em que R1 é um anel de arila ou heteroarila monocíclico de 5 a 6 membros tendo de 0 a 4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, em que o dito anel de arila ou heteroarila monocíclico é opcionalmente fundido a outro anel para formar um anel de arila ou heteroarila bicíclico de 8 a 10 membros tendo de 0 a 6 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada R1 é opcionalmente substituído com 1 a 5 grupos de J1; R2 é um anel de arila ou heteroarila monocíclico de 5 a 6 membros tendo de 0 a 3 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, em que o dito anel de arila ou heteroarila monocíclico é opcionalmente fundido a outro anel para formar um anel de arila ou heteroarila bicíclico de 8 a 10 elementos tendo de 0 a 4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada R2 é opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos de J2; L é -C(O)NH- ou -C(O)N(CI-6 alquila)-; n é 0 ou 1; cada J1 e J2 é independentemente halo, -CN, -NO2, -V1-R ou -(V2)m-Q; V1 é uma cadeia C1-10 alifática em que 0 a 3 unidades de metileno são opcional e independentemente substituídas por O, NR", S, C(O), S(O) ou S(O)2; V1 é opcionalmente substituído por 1 a 6 ocorrências de JV1; V2 é uma cadeia C1-10 alifática em que 0 a 3 unidades de metileno são opcional e independentemente substituídas por O, NR", S, C(O), S(O) ou S(O)2; V2 é opcionalmente substituído por 1 a 6 ocorrências de JV2; m é 0 ou 1; Q é um anel monocíclico saturado ou insaturado de 3 a 8 membros tendo de 0 a 4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou um anel bicíclico saturado ou insaturado de 9 a 10 membros tendo de 0 a 6 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada Q é opcionalmente substituído por 0-5 JQ; cada JV1 ou JV2 é independentemente halogêneo, CN, NH2, NO2, C1-4 alifática, NH(C1-4 alifática), N(C1-4 alifática)2, OH, O(C1-4 alifática), CO2H, CO2(C1-4 alifática), C(O)NH2, C(O)NH(C1-4 alifática), C(O)N (C1-4 alifática)2, NHCO(C1-4 alifática), N(C1-4 alifática)CO(C1-4 alifática), SO2(C1-4 alifática), NHSO2(C1-4 alifática) ou N(C1-4 alifática)SO2 (C1-4 alifática), em que a dita C1-4 alifática é opcionalmente substituída por halo; R é H ou C1-6 alifática em que a dita C1-6 alifática é opcionalmente substituída por 1 a 4 ocorrências de NH2, NH(C1-4 alifática), N(C1-4 alifática)2, halogêneo, C1-4 alifática, OH, O(C1-4 alifática), NO2, CN, CO2H, CO2(C1-4 alifática), CO(C1-4 alifática), O(haloC1-4 alifática) ou haloC1-4 alifática; cada JQ é independentemente halo, oxo, CN, NO2, X-R ou - (X)p-Q4; p é 0 ou 1; X é C1-10 alifática; em que 1 a 3 unidades de metileno de dita C1-6 alifática são opcionalmente substituídas por -NR, -O-, -S-, C(O), S(O)2 ou S(O); em que X é opcional e independentemente substituído por 1 a 4 ocorrências de NH2, NH(C1-4 alifática), N(C1-4 alifática)2, halogênio, C1-4 alifática, OH, O(C1-4 alifática), NO2, CN, CO(C1-4 alifática), CO2H, CO2(C1-4 alifática), C(O)NH2, C(O)NH(C1-4 alifática), C(O)N(C1-4 alifática)2, SO(C1-4 alifática), SO2(C1-4 alifática), SO2NH(C1-4 alifática), SO2N(C1-4 alifática)2, NHC(O)(C1-4 alifática), N(C1-4 alifática)C(O)(C1-4 alifática), em que a dita C1-4 alifática é opcionalmente substituída por 1 a 3 ocorrências de halo; Q4 é um anel monocíclico saturado ou insaturado de 3 a 8 membros tendo de 0 a 4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou um anel bicíclico saturado ou insaturado de 8 a 10 membros tendo de 0 a 6 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada Q4 é opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos de JQ4; JQ4 é halo, CN ou C1-4 alquila em que até 2 unidades de metileno são opcionalmente substituídas por O, NR*, S, C(O), S(O) ou S(O)2; R é H ou C1-4 alquila em que a dita C1-4 alquila é opcionalmente substituída por 1 a 4 halo; R’, R", e R* são cada um independentemente H, C1-4 alquila ou estão ausentes; em que a dita C1-4 alquila é opcionalmente substituída por 1 a 4 halo;[0035] In another aspect of the present invention, the compound that inhibits ATR protein kinase is represented by Formula I: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R1 is a 5- to 6-membered monocyclic aryl or heteroaryl ring having from 0 to 4 heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen or sulfur, wherein said monocyclic aryl or heteroaryl ring is optionally fused to another ring to form an 8 to 10 membered bicyclic aryl or heteroaryl ring having 0 to 6 heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen or sulfur; each R1 is optionally substituted with 1 to 5 J1 groups; R2 is a 5 to 6 membered monocyclic aryl or heteroaryl ring having from 0 to 3 independently selected heteroatoms of nitrogen, oxygen or sulfur, wherein said monocyclic aryl or heteroaryl ring is optionally fused to another ring to form a ring of bicyclic aryl or heteroaryl of 8 to 10 elements having 0 to 4 heteroatoms independently selected from nitrogen, oxygen or sulfur; each R2 is optionally replaced by 1 to 5 J2 groups; L is -C(O)NH- or -C(O)N(CI-6 alkyl)-; n is 0 or 1; each J1 and J2 is independently halo, -CN, -NO2, -V1-R or -(V2)mQ; V1 is a C1-10 aliphatic chain in which 0 to 3 methylene units are optionally and independently substituted by O, NR", S, C(O), S(O) or S(O)2; V1 is optionally substituted by 1 to 6 occurrences of JV1; V2 is a C1-10 aliphatic chain in which 0 to 3 methylene units are optionally and independently substituted by O, NR", S, C(O), S(O) or S(O) two; V2 is optionally replaced by 1 to 6 occurrences of JV2; m is 0 or 1; Q is a saturated or unsaturated 3 to 8 membered monocyclic ring having 0 to 4 independently selected heteroatoms of nitrogen, oxygen or sulfur or a saturated or unsaturated 9 to 10 membered bicyclic ring having 0 to 6 independently selected heteroatoms of nitrogen, oxygen or sulfur; each Q is optionally replaced by 0-5 JQ; each JV1 or JV2 is independently halogen, CN, NH2, NO2, C1-4 aliphatic, NH(C1-4 aliphatic), N(C1-4 aliphatic)2, OH, O(C1-4 aliphatic), CO2H, CO2( C1-4 aliphatic), C(O)NH2, C(O)NH(C1-4 aliphatic), C(O)N (C1-4 aliphatic)2, NHCO(C1-4 aliphatic), N(C1-4 aliphatic)CO(C1-4 aliphatic), SO2(C1-4 aliphatic), NHSO2(C1-4 aliphatic) or N(C1-4 aliphatic)SO2 (C1-4 aliphatic), wherein said C1-4 aliphatic is optionally replaced by halo; R is H or C1-6 aliphatic wherein said C1-6 aliphatic is optionally replaced by 1 to 4 occurrences of NH2, NH(C1-4 aliphatic), N(C1-4 aliphatic)2, halogen, C1-4 aliphatic , OH, O(C1-4 aliphatic), NO2, CN, CO2H, CO2(C1-4 aliphatic), CO(C1-4 aliphatic), O(haloC1-4 aliphatic) or haloC1-4 aliphatic; each JQ is independently halo, oxo, CN, NO2, XR or - (X)p-Q4; p is 0 or 1; X is C1-10 aliphatic; wherein 1 to 3 methylene units of said C1-6 aliphatic are optionally substituted by -NR, -O-, -S-, C(O), S(O)2 or S(O); wherein NO2, CN, CO(C1-4 aliphatic), CO2H, CO2(C1-4 aliphatic), C(O)NH2, C(O)NH(C1-4 aliphatic), C(O)N(C1-4 aliphatic) )2, SO(C1-4 aliphatic), SO2(C1-4 aliphatic), SO2NH(C1-4 aliphatic), SO2N(C1-4 aliphatic)2, NHC(O)(C1-4 aliphatic), N(C1 -4 aliphatic)C(O)(C1-4 aliphatic), wherein said C1-4 aliphatic is optionally replaced by 1 to 3 halo occurrences; Q4 is a saturated or unsaturated 3- to 8-membered monocyclic ring having 0 to 4 independently selected heteroatoms of nitrogen, oxygen or sulfur or a saturated or unsaturated 8- to 10-membered bicyclic ring having 0 to 6 independently selected heteroatoms of nitrogen, oxygen or sulfur; each Q4 is optionally replaced by 1 to 5 groups of JQ4; JQ4 is halo, CN or C1-4 alkyl in which up to 2 methylene units are optionally substituted by O, NR*, S, C(O), S(O) or S(O)2; R is H or C1-4 alkyl wherein said C1-4 alkyl is optionally substituted by 1 to 4 halo; R', R", and R* are each independently H, C1-4 alkyl or are absent; wherein said C1-4 alkyl is optionally substituted by 1 to 4 halo;

[0036] Em algumas modalidades, L é -C(O)NH-; e R1 e R2 são fenila.[0036] In some embodiments, L is -C(O)NH-; and R1 and R2 are phenyl.

[0037] Em outra modalidade o composto que inibi a ATR cinase é representada pela Fórmula I-a: em que N-N O'N o anel A é ou J5o é H, F, Cl, C1-4 alifática, O(C1-3 alifática) ou OH; J5p é J5p1 é H, C1-4 alifática, oxetanila, tetra-hidrofuranila, tetra- hidropiranila; em que J5p1 é opcionalmente substituído por 1 a 2 ocorrências de OH ou halo; J5p2 é H, metila, etila, CH2F, CF3 ou CH2OH; J2o é H, CN ou SO2CH3; J2m é H, F, Cl ou metila; J2p é -SO2(C1-6 alquila), -SO2(C3-6 cicloalquila), -SO2(hetero- ciclila de 4 a 6 membros), -SO2(C1-4alquil)N(C1-4alquila)2 ou -SO2 (C1-4alquil)-(heterociclila de 4 a 6 membros), em que a dita heterociclila contém 1 heteroátomo selecionado de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; e em que o dito J2p é opcionalmente substituído por 1 a 3 ocorrências de halo, OH ou O(C1-4 alquila).[0037] In another embodiment, the compound that inhibits ATR kinase is represented by Formula Ia: where NN O'N ring A is or J5o is H, F, Cl, C1-4 aliphatic, O(C1-3 aliphatic) or OH; J5p is J5p1 is H, C1-4 aliphatic, oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl; wherein J5p1 is optionally replaced by 1 to 2 occurrences of OH or halo; J5p2 is H, methyl, ethyl, CH2F, CF3 or CH2OH; J2o is H, CN or SO2CH3; J2m is H, F, Cl or methyl; J2p is -SO2(C1-6 alkyl), -SO2(C3-6 cycloalkyl), -SO2(4- to 6-membered heterocyclyl), -SO2(C1-4alkyl)N(C1-4alkyl)2 or -SO2 (C1-4alkyl)-(4- to 6-membered heterocyclyl), wherein said heterocyclyl contains 1 heteroatom selected from oxygen, nitrogen or sulfur; and wherein said J2p is optionally substituted by 1 to 3 occurrences of halo, OH or O(C1-4 alkyl).

[0038] Em algumas modalidades, Ring UM é [0038] In some embodiments, Ring UM is

[0039] Em outras modalidades, o Anel A é [0039] In other embodiments, Ring A is

[0040] Em algumas modalidades, o composto que inibe a ATR cinase é selecionado de: [0040] In some embodiments, the compound that inhibits ATR kinase is selected from:

[0041] Em certas modalidades, o composto que inibe a ATR cinase é: [0041] In certain embodiments, the compound that inhibits ATR kinase is:

[0042] Em outra modalidade, o composto que inibe a ATR cinase é: [0042] In another embodiment, the compound that inhibits ATR kinase is:

[0043] Em outro aspecto da presente invenção, o composto que inibe proteína cinase ATR é representado pela Fórmula II: ou um sal farmacêutico ou seu derivado, em que: R10 é independentemente selecionado de flúor, cloro, ou - C(J10)2CN; J10 é independentemente selecionado de H ou C1-2 alquila; ou duas ocorrências de J10 , juntamente com o átomo de carbono ao qual elas são ligadas, formam um anel carbocíclico opcionalmente substituído de 3 a 4 membros; R20 é independentemente selecionado de H; halo; -CN; NH2; uma C1-2 alquila opcionalmente substituída com 0 a 3 ocorrências de flúor; ou uma cadeia C1-3 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, - NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; R3 é independentemente selecionado de H; halo; C1-4 alquila opcionalmente substituída com 1 a 3 ocorrências de halo; C3-4 cicloalquila; -CN; ou uma cadeia C1-3 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; R4 é independentemente selecionado de Q1 ou uma cadeia C1-10 alifática em que até quatro unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou - S(O)z-; cada R4 é opcionalmente substituído com 0 a 5 ocorrências de JQ1; ou R3 e R4, tomados juntos com os átomos aos quais eles são ligados, formam um anel aromático ou não aromático de 5 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; o anel formado por R3 e R4 é opcionalmente substituído com 0 a 3 ocorrências de JZ; Q1 é independentemente selecionado de um anel monocíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 3 a 7 membros, o anel de 3 a 7 membros tendo de 0 a 3 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; ou um anel bicíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 7 a 12 membros tendo de 0 a 5 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; Jz é independentemente selecionado de C1-6 alifática, =O, halo, ou →O; JQ1 é independentemente selecionado de -CN; halo; =O; Q2; ou uma cadeia C1-8 alifática em que até três unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, - C(O)-, ou -S(O)z-; cada ocorrência de JQ1 é opcionalmente substituída por 0 a 3 ocorrências de JR; ou duas ocorrências de JQ1 sobre o mesmo átomo, tomadas juntas com o átomo ao qual elas são unidas, formam um anel de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; em que o anel formado por duas ocorrências de JQ1 é opcionalmente substituído com 0 a 3 ocorrências de JX; ou duas ocorrências de JQ1, juntamente com Q1, formam um sistema de anel ligado com ponte saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 10 membros; Q2 é independentemente selecionado de um anel monocíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 3 a 7 membros tendo de 0 a 3 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; ou um anel bicíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 7 a 12 membros tendo de 0 a 5 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; JR é independentemente selecionado de -CN; halo; =O; -►O; Q3; ou uma cadeia C1-6 alifática em que até três unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, - NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z-; cada JR é opcionalmente substituído com 0 a 3 ocorrências de JT; ou duas ocorrências de JR sobre o mesmo átomo, juntamente com o átomo ao qual elas são unidas, formam um anel de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; em que o anel formado por duas ocorrências de JR é opcionalmente substituído com 0 a 3 ocorrências de JX; ou duas ocorrências de JR, juntamente com Q2, formam um sistema de anel ligado com ponte saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 10 membros; Q3 é um anel monocíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 3 a 7 membros tendo de 0 a 3 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; ou um anel bicíclico completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático de 7 a 12 membros tendo de 0 a 5 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; JX é independentemente selecionado de -CN; =O; halo; ou uma cadeia C1-4 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z-; JT é independentemente selecionado de halo, -CN; ->O; =O; -OH; uma cadeia C1-6 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, - NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z-; ou um anel não aromático de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; cada ocorrência de JT é opcionalmente substituída com 0 a 3 ocorrências de JM; ou duas ocorrências de JT sobre o mesmo átomo, juntamente com o átomo ao qual elas são unidas, formam um anel de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; ou duas ocorrências de JT, juntamente com Q3, formam um sistema de anel ligado com ponte saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 10 membros; JM é independentemente selecionado de halo ou C1-6 alifática; J é H ou Cl; z é 0, 1 ou 2; e Ra é independentemente selecionado de H ou C1-4 alifática.[0043] In another aspect of the present invention, the compound that inhibits ATR protein kinase is represented by Formula II: or a pharmaceutical salt or derivative thereof, wherein: R10 is independently selected from fluorine, chlorine, or - C(J10)2CN; J10 is independently selected from H or C1-2 alkyl; or two occurrences of J10, together with the carbon atom to which they are attached, form an optionally substituted 3- to 4-membered carbocyclic ring; R20 is independently selected from H; halo; -CN; NH2; an optionally substituted C1-2 alkyl having 0 to 3 occurrences of fluorine; or a C1-3 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; R3 is independently selected from H; halo; C1-4 optionally substituted alkyl with 1 to 3 halo occurrences; C3-4 cycloalkyl; -CN; or a C1-3 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; R4 is independently selected from Q1 or a C1-10 aliphatic chain in which up to four methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z- ; each R4 is optionally replaced with 0 to 5 occurrences of JQ1; or R3 and R4, taken together with the atoms to which they are bonded, form a 5- to 6-membered aromatic or non-aromatic ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; the ring formed by R3 and R4 is optionally substituted with 0 to 3 occurrences of JZ; Q1 is independently selected from a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 3- to 7-membered monocyclic ring, the 3 to 7-membered ring having 0 to 3 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; or a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 7 to 12 membered bicyclic ring having from 0 to 5 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; Jz is independently selected from C1-6 aliphatic, =O, halo, or →O; JQ1 is independently selected from -CN; halo; =O; Q2; or a C1-8 aliphatic chain in which up to three methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z-; each occurrence of JQ1 is optionally replaced by 0 to 3 occurrences of JR; or two occurrences of JQ1 on the same atom, taken together with the atom to which they are attached, form a 3- to 6-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; wherein the ring formed by two occurrences of JQ1 is optionally replaced with 0 to 3 occurrences of JX; or two occurrences of JQ1, together with Q1, form a 6- to 10-membered saturated or partially unsaturated bridged ring system; Q2 is independently selected from a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 3- to 7-membered monocyclic ring having 0 to 3 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; or a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 7- to 12-membered bicyclic ring having 0 to 5 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; JR is independently selected from -CN; halo; =O; -►O; Q3; or a C1-6 aliphatic chain in which up to three methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z-; each JR is optionally replaced with 0 to 3 occurrences of JT; or two occurrences of JR on the same atom, together with the atom to which they are attached, form a 3- to 6-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; wherein the ring formed by two occurrences of JR is optionally replaced with 0 to 3 occurrences of JX; or two occurrences of JR, together with Q2, form a saturated or partially unsaturated 6- to 10-membered bridged ring system; Q3 is a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 3 to 7 membered monocyclic ring having 0 to 3 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; or a fully saturated, partially unsaturated or aromatic 7- to 12-membered bicyclic ring having 0 to 5 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; JX is independently selected from -CN; =O; halo; or a C1-4 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z-; JT is independently selected from halo, -CN; ->O;=O;-OH; a C1-6 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z-; or a 3 to 6 membered non-aromatic ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; each occurrence of JT is optionally replaced with 0 to 3 occurrences of JM; or two occurrences of JT on the same atom, together with the atom to which they are attached, form a 3- to 6-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; or two occurrences of JT, together with Q3, form a saturated or partially unsaturated 6- to 10-membered bridged ring system; JM is independently selected from halo or C1-6 aliphatic; J is H or Cl; z is 0, 1 or 2; and Ra is independently selected from H or C1-4 aliphatic.

[0044] Em algumas modalidades, R10 e R3 são flúor.[0044] In some embodiments, R10 and R3 are fluorine.

[0045] Em outras modalidades, R4 é Q1.[0045] In other embodiments, R4 is Q1.

[0046] Em mais outras modalidades, Q1 é independentemente selecionado de piperidinila e imidazolila.[0046] In other embodiments, Q1 is independently selected from piperidinyl and imidazolyl.

[0047] Em ainda outra modalidade, o composto que inibe a ATR é representado pela estrutura: [0047] In yet another embodiment, the compound that inhibits ATR is represented by the structure:

[0048] Em outra modalidade, o composto que inibe a ATR é representado pela Fórmula II-a: ou um sal ou profármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que: R10 é independentemente selecionado de flúor, cloro, ou - C(J10)2CN; J10 é independentemente selecionado de H ou C1-2 alquila; ou duas ocorrências de J1, juntamente com o átomo de carbono ao qual elas são ligadas, formam um anel carbocíclico de 3 a 4 membros opcionalmente substituído; R3 é independentemente selecionado de H; cloro; flúor; C1-4 alquila opcionalmente substituída com 1 a 3 ocorrências de halo; C3-4 cicloalquila; -CN; ou uma cadeia C1-3 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; L1 é H; um anel de 3 a 7 membros aromático ou não aromático tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio nitrogênio ou enxofre; ou uma cadeia C1-6 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; cada L1 é opcionalmente substituído com C1-4 alifática; -CN; halo; -OH; ou um anel não aromático de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; L2 é H; um anel de 3 a 7 membros aromático ou não aromático tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio nitrogênio ou enxofre; ou uma cadeia C1-6 alifática em que até duas unidades de metileno da cadeia alifática são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; cada L2 é opcionalmente substituído com C1-4 alifática; -CN; halo; -OH; ou um anel não aromático de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; ou L1 e L2, juntamente com o nitrogênio ao qual eles são ligados, formam um Anel D; o Anel D é opcionalmente substituído com 0 a 5 ocorrências de JG; L3 é H; C1-3 alifática; ou CN; o Anel D é independentemente selecionado de um anel heterocíclico de 3 a 7 membros tendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; ou um anel bicíclico completamente saturado ou parcialmente insaturado de 7 a 12 membros tendo de 1 a 5 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; JG é independentemente selecionado de halo; -CN; -N(R°)2; -►O; uma carbociclila de 3 a 6 membros; uma heterociclila de 3 a 6 membros tendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio nitrogênio, ou enxofre; ou uma cadeia de C1-4 alquila em que até duas unidades de metileno da cadeia de alquila são opcionalmente substituídas com -O-, -NRa-, -C(O)-, ou -S(O)z; cada JG é opcionalmente substituído com 0 a 2 ocorrências de JK; duas ocorrências de JG sobre o mesmo átomo, juntamente com o átomo ao qual elas são unidas, formam um anel de 3 a 6 membros tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre; ou duas ocorrências de JG, juntamente com o Anel D, formam um sistema de anel ligado com ponte saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 10 membros; JK é um anel de 3 a 7 membros aromático ou não aromático tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre; z é 0, 1, ou 2; e Ra e R° são H ou C1-4 alquila.[0048] In another embodiment, the compound that inhibits ATR is represented by Formula II-a: or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, wherein: R10 is independently selected from fluorine, chlorine, or - C(J10)2CN; J10 is independently selected from H or C1-2 alkyl; or two occurrences of J1, together with the carbon atom to which they are attached, form an optionally substituted 3- to 4-membered carbocyclic ring; R3 is independently selected from H; chlorine; fluorine; C1-4 optionally substituted alkyl with 1 to 3 halo occurrences; C3-4 cycloalkyl; -CN; or a C1-3 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; L1 is H; an aromatic or non-aromatic 3- to 7-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; or a C1-6 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; each L1 is optionally replaced with aliphatic C1-4; -CN; halo; -OH; or a 3- to 6-membered non-aromatic ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; L2 is H; an aromatic or non-aromatic 3- to 7-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; or a C1-6 aliphatic chain in which up to two methylene units of the aliphatic chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; each L2 is optionally replaced with aliphatic C1-4; -CN; halo; -OH; or a 3- to 6-membered non-aromatic ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; or L1 and L2, together with the nitrogen to which they are attached, form a D Ring; the D Ring is optionally replaced with 0 to 5 occurrences of JG; L3 is H; C1-3 aliphatic; or CN; Ring D is independently selected from a 3 to 7 membered heterocyclic ring having 1 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; or a fully saturated or partially unsaturated 7- to 12-membered bicyclic ring having 1 to 5 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; JG is independently selected from halo; -CN; -N(R°)2; -►O; a 3- to 6-membered carbocyclyl; a 3 to 6 membered heterocyclyl having 1 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; or a C1-4 alkyl chain in which up to two methylene units of the alkyl chain are optionally substituted with -O-, -NRa-, -C(O)-, or -S(O)z; each JG is optionally replaced with 0 to 2 occurrences of JK; two occurrences of JG on the same atom, together with the atom to which they are attached, form a 3- to 6-membered ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen, or sulfur; or two occurrences of JG, together with Ring D, form a 6- to 10-membered saturated or partially unsaturated bridged ring system; JK is a 3- to 7-membered aromatic or non-aromatic ring having 0 to 2 heteroatoms selected from oxygen, nitrogen or sulfur; z is 0, 1, or 2; and Ra and R° are H or C1-4 alkyl.

[0049] Em outra modalidade, R1 e R3 são flúor.[0049] In another embodiment, R1 and R3 are fluorine.

[0050] Em mais outras modalidades, o composto que inibe a ATR é representado pela estrutura: [0050] In other embodiments, the compound that inhibits ATR is represented by the structure:

[0051] Em ainda outra modalidade, o composto é selecionado de um composto descrito no WO 2010/071837 ou WO 2014/089379.[0051] In yet another embodiment, the compound is selected from a compound described in WO 2010/071837 or WO 2014/089379.

[0052] Em outra modalidade, o composto que inibe a Chk1 cinase é independentemente selecionado de AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124, e PF-477736. O processo para a produção dos inibidores de Chk1 é conhecido por aqueles versados na técnica.[0052] In another embodiment, the compound that inhibits Chk1 kinase is independently selected from AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124, and PF-477736. The process for producing Chk1 inhibitors is known to those skilled in the art.

[0053] Em algumas modalidades, as variáveis são como representadas nos compostos da descrição incluindo os compostos nas tabelas deste documento.[0053] In some embodiments, the variables are as represented in the compounds of the description including the compounds in the tables of this document.

[0054] Para os propósitos deste pedido, ficará entendido que os termos modalidade, exemplo e aspecto são utilizados de modo trocável.[0054] For the purposes of this application, it will be understood that the terms modality, example and aspect are used interchangeably.

[0055] Para os propósitos deste pedido, ficará entendido que quando duas ocorrências de JQ1, em conjunto com Q1, formam um sistema de anel de ligado com ponte, as duas ocorrências de JQ1 são ligadas aos átomos separados de Q1. Adicionalmente, quando duas ocorrências de JR, juntamente com Q2, formam um sistema de anel ligado com ponte, as duas ocorrências de JR são ligadas a átomos separados de Q2. Além do mais, quando duas ocorrências de JT, juntamente com Q3, formam um sistema de anel ligado com ponte, as duas ocorrências de JT são ligadas aos átomos separados de Q3. Finalmente, quando duas ocorrências de JG, em conjunto com o Anel D, formam um sistema de anel ligado com ponte, as duas ocorrências de JG são ligadas aos átomos separados do Anel D.[0055] For the purposes of this application, it will be understood that when two occurrences of JQ1, together with Q1, form a bridged bonded ring system, the two occurrences of JQ1 are linked to the separate atoms of Q1. Additionally, when two instances of JR together with Q2 form a bridged ring system, the two instances of JR are bonded to separate atoms of Q2. Furthermore, when two instances of JT together with Q3 form a bridged ring system, the two instances of JT are bonded to the separate atoms of Q3. Finally, when two JG occurrences, together with the D Ring, form a bridged ring system, the two JG occurrences are bonded to the separate atoms of the D Ring.

[0056] Para os propósitos deste pedido, ficará entendido que os termos ATR, ATR cinase e proteína cinase ATR são utilizados de modo trocável. De modo semelhante, os termos Chk1, Chk1 cinase e proteína cinase Chk1 são utilizados de modo trocável.[0056] For the purposes of this application, it will be understood that the terms ATR, ATR kinase and ATR protein kinase are used interchangeably. Similarly, the terms Chk1, Chk1 kinase, and Chk1 protein kinase are used interchangeably.

[0057] Será compreendido por aqueles versados na técnica que a seta em ^O representa uma ligação dativa.[0057] It will be understood by those skilled in the art that the arrow in ^O represents a dative connection.

[0058] Os compostos desta invenção incluem aqueles aqui descritos uma forma geral, e são ainda ilustrados pelas classes, subclasses e espécies aqui divulgadas. Como aqui utilizado, as seguintes definições serão aplicadas, a não ser que de outra maneira indicada. Para os propósitos desta invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed. Adicionalmente, os princípios gerais da química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, e "March’s Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, cujos conteúdos inteiros são aqui incorporados por referência.[0058] The compounds of this invention include those described herein in general terms, and are further illustrated by the classes, subclasses and species disclosed herein. As used herein, the following definitions will apply unless otherwise noted. For the purposes of this invention, the chemical elements are identified in accordance with the Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed. Additionally, the general principles of organic chemistry are described in "Organic Chemistry", Thomas Sorrell , University Science Books, Sausalito: 1999, and "March's Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

[0059] Como aqui descrito, uma faixa numérica especificada de átomos inclui qualquer número inteiro a esse respeito. Por exemplo, um grupo tendo de 1 a 4 átomos pode ter 1, 2, 3 ou 4 átomos.[0059] As described herein, a specified numerical range of atoms includes any integer in this regard. For example, a group having 1 to 4 atoms may have 1, 2, 3 or 4 atoms.

[0060] Conforme aqui descrito, os compostos da invenção podem opcionalmente ser substituídos com um ou mais substituintes, tais como são ilustrados aqui de uma forma geral, ou como exemplificados por classes, subclasses e espécies particulares da invenção. Será observado que a frase "opcionalmente substituída" é utilizada de modo trocável com a frase "substituída ou não substituída", Em geral, o termo substituído, quer precedido pelo termo "opcionalmente" ou não, refere-se à substituição de radicais de hidrogênio em uma dada estrutura com o radical de um substituinte especificado. A não ser que de outra maneira indicada, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em cada posição substituível do grupo e quando mais do que uma posição em qualquer estrutura dada pode ser substituída com mais do que um substituinte selecionado de um grupo especificado, o substituinte pode ser o mesmo ou diferente em cada posição. As combinações de substituintes previstas por esta invenção são preferivelmente aquelas que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente viáveis.[0060] As described herein, the compounds of the invention may optionally be substituted with one or more substituents, as are generally illustrated here, or as exemplified by particular classes, subclasses and species of the invention. It will be noted that the phrase "optionally substituted" is used interchangeably with the phrase "substituted or unsubstituted." In general, the term substituted, whether preceded by the term "optionally" or not, refers to the substitution of hydrogen radicals. in a given structure with the radical of a specified substituent. Unless otherwise indicated, an optionally substituted group may have one substituent at each substitutable position of the group and when more than one position in any given structure may be substituted with more than one substituent selected from a specified group, the Substituent can be the same or different in each position. The combinations of substituents provided for by this invention are preferably those that result in the formation of stable or chemically viable compounds.

[0061] Salvo indicação em contrário, um substituinte conectado por uma ligação tirada do centro de um anel significa que o substituinte pode ser ligado a qualquer posição no anel. No exemplo i abaixo, por exemplo, J1 pode ser ligado a qualquer posição no anel de piridila. Para os anéis bicíclicos, uma ligação traçada através de ambos os anéis indica que o substituinte pode ser ligado a partir de qualquer posição do anel bicíclico. No exemplo ii abaixo, por exemplo, J1 pode ser ligado ao anel de 5 membros (no átomo de nitrogênio, por exemplo), e ao anel de 6 membros. [0061] Unless otherwise indicated, a substituent connected by a bond taken from the center of a ring means that the substituent can be attached to any position on the ring. In example i below, for example, J1 can be attached to any position on the pyridyl ring. For bicyclic rings, a bond drawn through both rings indicates that the substituent can be attached from any position on the bicyclic ring. In example ii below, for example, J1 can be linked to the 5-membered ring (on the nitrogen atom, for example), and to the 6-membered ring.

[0062] O termo "estável", como aqui utilizado, refere-se aos compostos que não são substancialmente alterados quando submetidos ao paciente nas condições que levam em conta a sua produção, detecção, recuperação, purificação e utilização para um ou mais dos propósitos aqui divulgados. Em algumas modalidades, um composto estável ou um composto quimicamente viável é aquele que não é substancialmente alterado quando mantido em uma temperatura de 40°C ou menos, na ausência de umidade ou outras condições quimicamente reativas, durante pelo menos uma semana.[0062] The term "stable", as used herein, refers to compounds that are not substantially altered when subjected to the patient under conditions that take into account their production, detection, recovery, purification and use for one or more of the purposes published here. In some embodiments, a stable compound or a chemically viable compound is one that is not substantially changed when maintained at a temperature of 40°C or less, in the absence of moisture or other chemically reactive conditions, for at least one week.

[0063] O termo "ligação dativa", como aqui utilizado, é definido como a ligação de coordenação formada após a interação entre as espécies moleculares, uma das quais serve como doador e a outra como um aceitante do par de elétrons a ser partilhada no complexo formado.[0063] The term "dative bond", as used herein, is defined as the coordination bond formed upon interaction between molecular species, one of which serves as a donor and the other as an acceptor of the electron pair to be shared in the complex formed.

[0064] O termo "alifático" ou "grupo alifático", como aqui utilizado, significa uma cadeia de hidrocarboneto de cadeia reta (isto é, não ramificada), ramificada ou cíclica, substituída ou não substituída que é completamente saturada ou que contém uma ou mais unidades de insaturação que possui um único ponto de ligação ao resto da molécula.[0064] The term "aliphatic" or "aliphatic group", as used herein, means a straight-chain (i.e., unbranched), branched or cyclic, substituted or unsubstituted hydrocarbon chain that is completely saturated or that contains a or more unsaturation units that have a single point of attachment to the rest of the molecule.

[0065] A não ser que de outra maneira especificada, os grupos alifáticos contêm de 1 a 20 átomos de carbono alifáticos. Em alqgumas modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 10 átomos de carbono alifáticos. Em outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 8 átomos de carbono alifáticos. Em mas outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 6 átomos de carbono alifáticos, e em mais outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 4 átomos de carbono alifáticos. Os grupos alifáticos podem ser grupos de alquila, alquenila ou alquinila, lineares ou ramificados, substituídos ou não substituídos. Exemplos específicos incluem, mas não são limitados a estes, metila, etila, isopropila, n-propila, sec-butila, vinila, n- butenila, etinila e terc-butila. Os grupos alifáticos também podem ser cíclicos, ou possuem uma combinação de grupos lineares ou ramificados e cíclicos. Exemplos de tais tipos de grupos alifáticos incluem, mas não são limitados a estes, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, -CH2-ciclopropila, CH2CH2CH(CH3)-ciclo-hexila.[0065] Unless otherwise specified, aliphatic groups contain from 1 to 20 aliphatic carbon atoms. In some embodiments, the aliphatic groups contain from 1 to 10 aliphatic carbon atoms. In other embodiments, the aliphatic groups contain from 1 to 8 aliphatic carbon atoms. In yet other embodiments, the aliphatic groups contain from 1 to 6 aliphatic carbon atoms, and in yet other embodiments, the aliphatic groups contain from 1 to 4 aliphatic carbon atoms. Aliphatic groups can be alkyl, alkenyl or alkynyl groups, linear or branched, substituted or unsubstituted. Specific examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, isopropyl, n-propyl, sec-butyl, vinyl, n-butenyl, ethynyl and tert-butyl. Aliphatic groups can also be cyclic, or have a combination of linear or branched and cyclic groups. Examples of such types of aliphatic groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, -CH2-cyclopropyl, CH2CH2CH(CH3)-cyclohexyl.

[0066] O termo "cicloalifático" (ou "carbociclo" ou "carbociclila") refere-se a um hidrocarboneto C3-C8 monocíclico ou um hidrocarboneto C8-C12 bicíclico que está completamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, mas que não é aromático, que possui um único ponto de ligação ao resto da molécula em que qualquer anel individual no dito sistema de anel bicíclico possui de 3 a 7 membros. Exemplos de grupos cicloalifáticos incluem, mas não são limitados a estes, grupos de cicloalquila e cicloalquenila. Exemplos específicos incluem, mas não são limitados a estes, ciclo- hexila, ciclopropenila e ciclobutila.[0066] The term "cycloaliphatic" (or "carbocycle" or "carbocyclyl") refers to a C3-C8 monocyclic hydrocarbon or a C8-C12 bicyclic hydrocarbon that is completely saturated or that contains one or more unsaturation units, but which is non-aromatic, which has a single point of attachment to the rest of the molecule in which any individual ring in said bicyclic ring system has from 3 to 7 members. Examples of cycloaliphatic groups include, but are not limited to, cycloalkyl and cycloalkenyl groups. Specific examples include, but are not limited to, cyclohexyl, cyclopropenyl and cyclobutyl.

[0067] O termo "heterociclo", "heterociclila" ou "heterocíclico" como aqui utilizado, significa sistemas de anéis não aromáticos, monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos em que um ou mais membros do anel são um heteroátomo independentemente selecionado. Em algumas modalidades, o grupo "heterociclo", "heterociclila" ou "heterocíclico" possui de três a catorze membros de anel em que um ou mais membros de anel são um heteroátomo independentemente selecionado de oxigênio, enxofre, nitrogênio ou fósforo, e cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel.[0067] The term "heterocycle", "heterocyclyl" or "heterocyclic" as used herein means non-aromatic, monocyclic, bicyclic or tricyclic ring systems in which one or more ring members is an independently selected heteroatom. In some embodiments, the "heterocycle," "heterocyclyl," or "heterocyclic" group has three to fourteen ring members wherein one or more ring members is a heteroatom independently selected from oxygen, sulfur, nitrogen, or phosphorus, and each ring in the system contains from 3 to 7 ring members.

[0068] Exemplos de heterociclos incluem, mas não são limitados a estes, 3-1H-benzimidazol-2-ona, 3-(1-alquil)-benzimidazol-2-ona, 2-tetra -hidrofuranila, 3-tetra-hidrofuranila, 2-tetra-hidrotiofenila, 3-tetra-hidro- furanila, 2-tetra-hidrotiofenila, 3-tetra-hidrotiofenila, 2-morfolino, 3-mor- folino, 4-morfolino, 2-tiomorfolino, 3-tiomorfolino, 4-tiomorfolino, 1-pirro- lidinila, 2-pirrolidinila, 3-pirrolidinila, 1-tetra-hidropiperazinila, 2-tetra- hidropiperazinila, 3-tetra-hidropiperazinila, 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 1-pirazolinila, 3-pirazolinila, 4-pirazolinila, 5-pirazolinila, 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 4-piperidinila, 2-tiazolidinila, 3-tiazolidinila, 4-tiazolidinila, 1-imidazolidinila, 2-imidazolidinila, 4-imi- dazolidinila, 5-imidazolidinila, indolinila, tetra-hidroquinolinila, tetra-hi- droisoquinolinila, benzotiolano, benzoditiano, e 1,3-di-hidro-imidazol-2- ona.[0068] Examples of heterocycles include, but are not limited to, 3-1H-benzimidazol-2-one, 3-(1-alkyl)-benzimidazol-2-one, 2-tetrahydrofuranyl, 3-tetrahydrofuranyl , 2-tetrahydrothiophenyl, 3-tetrahydro-furanyl, 2-tetrahydrothiophenyl, 3-tetrahydrothiophenyl, 2-morpholino, 3-morpholino, 4-morpholino, 2-thiomorpholino, 3-thiomorpholino, 4 -thiomorpholino, 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, 3-pyrrolidinyl, 1-tetrahydropiperazinyl, 2-tetrahydropiperazinyl, 3-tetrahydropiperazinyl, 1-piperidinyl, 2-piperidinyl, 3-piperidinyl, 1-pyrazolinyl , 3-pyrazolinyl, 4-pyrazolinyl, 5-pyrazolinyl, 1-piperidinyl, 2-piperidinyl, 3-piperidinyl, 4-piperidinyl, 2-thiazolidinyl, 3-thiazolidinyl, 4-thiazolidinyl, 1-imidazolidinyl, 2-imidazolidinyl, 4 -imidazolidinyl, 5-imidazolidinyl, indolinyl, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, benzothiolane, benzodithiane, and 1,3-dihydro-imidazol-2-one.

[0069] Grupos cíclicos (por exemplo, cicloalifáticos e heterociclos), podem ser linearmente fundidos, ligados com ponte ou espirocíclicos.[0069] Cyclic groups (e.g., cycloaliphatic and heterocycles) can be linearly fused, bridged or spirocyclic.

[0070] O termo "heteroátomo" significa um ou mais de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo ou silício (incluindo qualquer forma oxidada de nitrogênio, enxofre, fósforo ou silício, a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico ou um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por exemplo, N (como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolila), NH (como em pirrolidinila) ou NR+ (como em pirrolidinila N-substituída)).[0070] The term "heteroatom" means one or more of oxygen, sulfur, nitrogen, phosphorus or silicon (including any oxidized form of nitrogen, sulfur, phosphorus or silicon, the quaternized form of any basic nitrogen or a substitutable nitrogen of a ring heterocyclic, for example, N (as in 3,4-dihydro-2H-pyrrolyl), NH (as in pyrrolidinyl) or NR+ (as in N-substituted pyrrolidinyl)).

[0071] O termo "insaturado", como aqui utilizado, significa que um componente possui uma ou mais unidades de insaturação. Como seria conhecido por uma pessoa com habilidade na técnica, os grupos insaturados podem ser parcialmente insaturados ou completamente insaturados. Exemplos de grupos parcialmente insaturados incluem, mas não são limitados a estes, buteno, ciclo-hexeno e tetra- hidropiridina. Os grupos totalmente insaturados podem ser aromáticos, antiaromáticos ou não aromáticos. Exemplos de grupos totalmente insaturados incluem, mas não são limitados a estes, fenila, ciclooctatetraeno, piridila, tienila e 1-metilpiridin-2(1H)-ona.[0071] The term "unsaturated", as used herein, means that a component has one or more units of unsaturation. As would be known to a person skilled in the art, unsaturated groups can be partially unsaturated or completely unsaturated. Examples of partially unsaturated groups include, but are not limited to, butene, cyclohexene and tetrahydropyridine. Fully unsaturated groups can be aromatic, anti-aromatic or non-aromatic. Examples of fully unsaturated groups include, but are not limited to, phenyl, cyclooctatetraene, pyridyl, thienyl and 1-methylpyridin-2(1H)-one.

[0072] O termo "alcóxi" ou "tioalquila", como aqui utilizado, refere- se a um grupo de alquila, como anteriormente definido, ligado através de um átomo de oxigênio ("alcóxi") ou enxofre ("tioalquila").[0072] The term "alkoxy" or "thioalkyl", as used herein, refers to an alkyl group, as previously defined, linked through an oxygen ("alkoxy") or sulfur ("thioalkyl") atom.

[0073] Os termos "haloalquila", "haloalquenila", "haloalifático" e "haloalcóxi" significam alquilo, alquenila ou alcóxi, conforme o caso pode ser, substituído com um ou mais átomos de halogêneo. Este termo inclui grupos de alquila perfluorados, tais como -CF3 e CF2CF3.[0073] The terms "haloalkyl", "haloalkenyl", "haloaliphatic" and "haloalkoxy" mean alkyl, alkenyl or alkoxy, as the case may be, substituted with one or more halogen atoms. This term includes perfluorinated alkyl groups such as -CF3 and CF2CF3.

[0074] Os termos "halogênio", "halo" e "hal" significam F, Cl, Br ou I.[0074] The terms "halogen", "halo" and "hal" mean F, Cl, Br or I.

[0075] O termo "arila" utilizado isoladamente ou como parte de uma componente maior como em "aralquila", "aralcóxi" ou "ariloxialquila", refere-se aos sistemas de anel monocíclicos, bicíclicos e tricíclicos tendo um total de cinco a catorze membros de anel, em que pelo menos um anel no sistema é aromático e em que cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. O termo "arila" pode ser utilizado de modo trocável com o termo "anel de arila".[0075] The term "aryl", used alone or as part of a larger component as in "aralkyl", "aralkoxy" or "aryloxyalkyl", refers to monocyclic, bicyclic and tricyclic ring systems having a total of five to fourteen ring members, wherein at least one ring in the system is aromatic and wherein each ring in the system contains from 3 to 7 ring members. The term "aryl" may be used interchangeably with the term "aryl ring".

[0076] O termo "heteroarila", utilizado isoladamente ou como parte de um componente maior como em "heteroaralquila" ou "heteroarilalcóxi", refere-se aos sistemas de anel monocíclicos, bicíclicos e tricíclicos tendo um total de cinco a catorze membros de anel, em que pelo menos um anel no sistema contém um ou mais heteroátomos, e em que cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. O termo "heteroarila" pode ser utilizado alternadamente com o termo "anel de heteroarila" ou o termo "heteroaromático". Exemplos de anéis de heteroarila incluem, mas não são limitados a estes, 2-furanila, 3-furanila, N-imidazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, 5-imidazolila, benzimidazolila, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5-isoxazolila, 2-oxazolila, 4-oxazolila, 5-oxazolila, N-pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila, 5- pirimidinila, piridazinila (por exemplo, 3-piridazinil), 2-tiazolila, 4- tiazolila, 5-tiazolila, tetrazolila (por exemplo, 5-tetrazolila), triazolila (por exemplo, 2-triazolila e 5-triazolila), 2-tienila, 3-tienila, benzofurila, benzotiofenila, indolila (por exemplo, 2-indolila), pirazolila (por exemplo, 2-pirazolila), isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,5- oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,3,4- tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, purinila, pirazinila, 1,3,5-triazinila, quinolinila (por exemplo, 2-quinolinila, 3-quinolinila, 4-quinolinila), e isoquinolinila (por exemplo, 1-isoquinolinila, 3-isoquinolinila ou 4-isoquinolinila).[0076] The term "heteroaryl", used alone or as part of a larger component as in "heteroaralkyl" or "heteroarylalkoxy", refers to monocyclic, bicyclic and tricyclic ring systems having a total of five to fourteen ring members , wherein at least one ring in the system contains one or more heteroatoms, and wherein each ring in the system contains from 3 to 7 ring members. The term "heteroaryl" may be used interchangeably with the term "heteroaryl ring" or the term "heteroaromatic". Examples of heteroaryl rings include, but are not limited to, 2-furanyl, 3-furanyl, N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl, 5-imidazolyl, benzimidazolyl, 3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl, 5- isoxazolyl, 2-oxazolyl, 4-oxazolyl, 5-oxazolyl, N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3-pyrrolyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl, 2-pyrimidinyl, 4-pyrimidinyl, 5-pyrimidinyl, pyridazinyl (e.g. 3-pyridazinyl), 2-thiazolyl, 4-thiazolyl, 5-thiazolyl, tetrazolyl (e.g. 5-tetrazolyl), triazolyl (e.g. 2-triazolyl and 5-triazolyl), 2-thienyl, 3-thienyl, benzofuryl, benzothiophenyl, indolyl (e.g. 2-indolyl), pyrazolyl (e.g. 2-pyrazolyl), isothiazolyl, 1,2,3-oxadiazolyl, 1,2,5-oxadiazolyl, 1,2, 4-oxadiazolyl, 1,2,3-triazolyl, 1,2,3-thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, 1,2,5-thiadiazolyl, purinyl, pyrazinyl, 1,3,5-triazinyl, quinolinyl ( for example, 2-quinolinyl, 3-quinolinyl, 4-quinolinyl), and isoquinolinyl (for example, 1-isoquinolinyl, 3-isoquinolinyl or 4-isoquinolinyl).

[0077] Ficará entendido que o termo "heteroarila" inclui certos tipos de anéis de heteroarila que existem em equilíbrio entre duas formas diferentes. Mais especificamente, por exemplo, as espécies tais como hidropiridina e piridinona (e igualmente hidroxipirimidina e pirimidinona) são planejadas de serem incluídas dentro da definição de "heteroarila". [0077] It will be understood that the term "heteroaryl" includes certain types of heteroaryl rings that exist in equilibrium between two different forms. More specifically, for example, species such as hydropyridine and pyridinone (and also hydroxypyrimidine and pyrimidinone) are intended to be included within the definition of "heteroaryl".

[0078] O termo "grupo de proteção" e "grupo protetor" como aqui utilizado são permutáveis e referem-se a um agente utilizado para bloquear temporariamente um ou mais grupos funcionais desejados em um composto com múltiplos sítios reativos. Em certas modalidades, um grupo de proteção possui uma ou mais, ou de preferência todas, as seguintes características: a) é adicionado seletivamente a um grupo funcional com bom rendimento para fornecer um substrato protegido que é b) estável às reações que ocorrem em um ou mais dos outros sítios reativos; e c) é seletivamente removível com bom rendimento por reagentes que não atacam o grupo funcional desprotegido regenerado. Como seria compreendido por uma pessoa versada na técnica, em alguns casos, os reagentes não atacam outros grupos reativos no composto. Em outros casos, os reagentes também podem reagir com outros grupos reativos no composto. Exemplos de grupos de proteção são detalhados em Greene, T.W., Wuts, P. G in "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999 (e outras edições do livro), cujos conteúdos inteiros dos quais são aqui incorporados por referência. O termo "grupo de proteção de nitrogênio", como aqui utilizado, refere-se a um agente utilizado para bloquear temporariamente um ou mais sítios reativos de nitrogênio desejados em um composto multifuncional. Os grupos de proteção de nitrogênio preferidos também possuem as características exemplificadas para um grupo de proteção acima e certos grupos de proteção de nitrogênio exemplares também são detalhados no Capítulo 7 em Greene, T.W., Wuts, P. G in "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999, cujos conteúdos completos são aqui incorporados por referência.[0078] The terms "protecting group" and "protecting group" as used herein are interchangeable and refer to an agent used to temporarily block one or more desired functional groups in a compound with multiple reactive sites. In certain embodiments, a protecting group has one or more, or preferably all, of the following characteristics: a) is selectively added to a functional group in good yield to provide a protected substrate that is b) stable to reactions occurring in a or more of the other reactive sites; and c) it is selectively removable with good yield by reagents that do not attack the regenerated unprotected functional group. As would be understood by one skilled in the art, in some cases, the reactants do not attack other reactive groups in the compound. In other cases, reactants may also react with other reactive groups in the compound. Examples of protective groups are detailed in Greene, T.W., Wuts, P. G in "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999 (and other editions of the book), the entire contents of which which are incorporated herein by reference. The term "nitrogen protecting group", as used herein, refers to an agent used to temporarily block one or more desired nitrogen reactive sites in a multifunctional compound. Preferred nitrogen protecting groups also have the characteristics exemplified for a protecting group above and certain exemplary nitrogen protecting groups are also detailed in Chapter 7 in Greene, T.W., Wuts, P. G in "Protective Groups in Organic Synthesis" , Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

[0079] Em algumas modalidades, uma unidade de metileno de uma cadeia alquílica ou alifática é opcionalmente substituída por outro átomo ou grupo. Exemplos de tais átomos ou grupos incluem, mas não são limitados a estes, nitrogênio, oxigênio, enxofre, -C(O)-, -C(=N- CN)-, -C(=NR)-, -C(=NOR)-, -SO-, e -SO2-. Estes átomos ou grupos podem ser combinados para formar grupos maiores. Exemplos de tais grupos maiores incluem, mas não são limitados a estes, -OC(O)-, -C(O)CO-, -CO2-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO2NR-, -NRSO2-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR-, e -NRSO2NR-, em que R é, por exemplo, H ou C1-6 alifática. Deve ficar compreendido que estes grupos podem ser ligados às unidades de metileno da cadeia alifática através de ligações isoladas, duplas ou triplas. Um exemplo de uma substituição opcional (átomo de nitrogênio neste caso) que está ligada à cadeia alifática através de uma ligação dupla seria -CH2CH=N- CH3. Em alguns casos, especialmente na extremidade terminal, uma substituição opcional pode ser ligada ao grupo alifático através de uma ligação tripla. Um exemplo deste seria CH2CH2CH2C=N. Deve ficar entendido que nesta situação, o nitrogênio terminal não está ligado a outro átomo.[0079] In some embodiments, a methylene unit of an alkyl or aliphatic chain is optionally replaced by another atom or group. Examples of such atoms or groups include, but are not limited to, nitrogen, oxygen, sulfur, -C(O)-, -C(=N- CN)-, -C(=NR)-, -C(= NOR)-, -SO-, and -SO2-. These atoms or groups can be combined to form larger groups. Examples of such larger groups include, but are not limited to, -OC(O)-, -C(O)CO-, -CO2-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO2NR-, -NRSO2-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR-, and -NRSO2NR-, where R is, for example, H or C1-6 aliphatic. It should be understood that these groups can be linked to the methylene units of the aliphatic chain through single, double or triple bonds. An example of an optional substitution (nitrogen atom in this case) that is attached to the aliphatic chain through a double bond would be -CH2CH=N- CH3. In some cases, especially at the terminal end, an optional substitution may be attached to the aliphatic group through a triple bond. An example of this would be CH2CH2CH2C=N. It should be understood that in this situation, the terminal nitrogen is not bonded to another atom.

[0080] Também deve ficar entendido que, o termo "unidade de metileno" também pode referir-se às unidades de metileno ramificadas ou substituídas. Por exemplo, em um componente de isopropila [-CH (CH3)2], um átomo de nitrogênio (por exemplo, NR) que substitui a primeira "unidade de metileno" recitada iria resultar em dimetilamina [-N(CH3)2]. Em casos como estes, uma pessoa de habilidade na técnica deve entender que o átomo de nitrogênio não terá quaisquer átomos adicionais ligados a ele, e o "R" de "NR" estaria ausente neste caso.[0080] It should also be understood that the term "methylene unit" may also refer to branched or substituted methylene units. For example, in an isopropyl component [-CH(CH3)2], a nitrogen atom (e.g., NR) replacing the first recited "methylene unit" would result in dimethylamine [-N(CH3)2]. In cases such as these, one of skill in the art should understand that the nitrogen atom will not have any additional atoms attached to it, and the "R" of "NR" would be absent in this case.

[0081] A não ser que de outra maneira indicada, as substituições opcionais formam um composto quimicamente estável. As substituições opcionais podem ocorrer dentro da cadeia e/ou em cada extremidade da cadeia; isto é, tanto no ponto de ligação quanto também na extremidade terminal. Duas substituições opcionais também podem estar adjacentes entre si dentro de uma cadeia, contanto que resulte em um composto quimicamente estável. Por exemplo, um alifático C3 pode ser opcionalmente substituído por 2 átomos de nitrogênio para formar -C-N=N. As substituições opcionais também podem substituir completamente todos os átomos de carbono em uma cadeia. Por exemplo, um alifático C3 pode ser opcionalmente substituído por NR-, -C(O)- e NR- para formar -NRC(O)NR- (uma ureia).[0081] Unless otherwise indicated, optional substitutions form a chemically stable compound. Optional substitutions may occur within the chain and/or at each end of the chain; that is, both at the connection point and also at the terminal end. Two optional substitutions may also be adjacent to each other within a chain, as long as they result in a chemically stable compound. For example, an aliphatic C3 can be optionally replaced by 2 nitrogen atoms to form -C-N=N. Optional substitutions can also completely replace all carbon atoms in a chain. For example, a C3 aliphatic may be optionally substituted by NR-, -C(O)- and NR- to form -NRC(O)NR- (a urea).

[0082] A não ser que de outra maneira indicada, se a substituição ocorre na extremidade terminal, o átomo de substituição é ligado a um átomo de hidrogênio na extremidade terminal. Por exemplo, se uma unidade de metileno de -CH2CH2CH3 fosse opcionalmente substituída por -O-, o composto resultante poderia ser -OCH2CH3, -CH2OCH3, ou -CH2CH2OH. Deve ficar entendido que se o átomo terminal não contém quaisquer elétrons de valência livre, então um átomo de hidrogênio não é necessário na extremidade terminal (por exemplo, -CH2CH2CH=O ou -CH2CH2CSN).[0082] Unless otherwise indicated, if the substitution occurs at the terminal end, the replacement atom is bonded to a hydrogen atom at the terminal end. For example, if a methylene moiety of -CH2CH2CH3 were optionally replaced by -O-, the resulting compound could be -OCH2CH3, -CH2OCH3, or -CH2CH2OH. It should be understood that if the terminal atom does not contain any free valence electrons, then a hydrogen atom is not needed at the terminal end (e.g., -CH2CH2CH=O or -CH2CH2CSN).

[0083] Salvo indicação em contrário, as estruturas aqui representadas pretendem também incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantioméricas, diastereoméricas, geométricas, conformacionais e rotacionais) da estrutura. Por exemplo, as configurações R e S para cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla (Z) e (E), e isômeros conformacionais (Z) e (E) são incluídas nesta invenção. Como seria compreendido por uma pessoa versada na técnica, um substituinte pode rodar livremente em torno de quaisquer ligações rotativas. Por exemplo, um substituinte desenhado como também representa .[0083] Unless otherwise indicated, the structures represented here are also intended to include all isomeric (e.g., enantiomeric, diastereomeric, geometric, conformational and rotational) forms of the structure. For example, R and S configurations for each asymmetric center, double bond isomers (Z) and (E), and conformational isomers (Z) and (E) are included in this invention. As would be understood by one skilled in the art, a substituent can rotate freely around any rotatable bonds. For example, a substituent drawn as also represents .

[0084] Portanto, os isômeros estereoquímicos isolados assim como as misturas enantioméricas, diastereoméricas, geométricas, conformacionais e rotacionais dos presentes compostos estão dentro do escopo da invenção.[0084] Therefore, isolated stereochemical isomers as well as enantiomeric, diastereomeric, geometric, conformational and rotational mixtures of the present compounds are within the scope of the invention.

[0085] A menos que indicado de outro modo, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão dentro do escopo da invenção[0085] Unless otherwise indicated, all tautomeric forms of the compounds of the invention are within the scope of the invention

[0086] Adicionalmente, a não ser que de outra maneira indicada, as estruturas aqui representadas também devem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos com as presentes estruturas exceto para a substituição de hidrogênio por deutério ou trítio ou a substituição de um carbono por um carbono enriquecido em 13C- ou 14C- estão dentro do escopo desta invenção. Esses compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíticas ou sondas nos ensaios biológicos.[0086] Additionally, unless otherwise indicated, the structures represented here must also include compounds that differ only in the presence of one or more isotopically enriched atoms. For example, compounds with the present structures except for the replacement of hydrogen with deuterium or tritium or the replacement of a carbon with a carbon enriched in 13C- or 14C- are within the scope of this invention. These compounds are useful, for example, as analytical tools or probes in biological assays.

Sais, Solvatos, Clatratos, Profármacos e Outros Derivados Farmaceuticamente AceitáveisSalts, Solvates, Clathrates, Prodrugs and Other Pharmaceutically Acceptable Derivatives

[0087] Os compostos aqui descritos podem existir na forma livre, ou, onde apropriado, como sais. Os sais que são farmaceuticamente aceitáveis são de interesse particular visto que são úteis na administração dos compostos descritos abaixo para propósitos médicos. Os sais que não são farmaceuticamente aceitáveis são úteis nos processos de fabricação, para propósitos de isolamento e purificação, e em alguns casos, para uso na separação de formas estereoisoméricas dos compostos da invenção ou seus intermediários.[0087] The compounds described herein can exist in free form, or, where appropriate, as salts. Salts which are pharmaceutically acceptable are of particular interest as they are useful in administering the compounds described below for medical purposes. Salts that are not pharmaceutically acceptable are useful in manufacturing processes, for isolation and purification purposes, and in some cases, for use in separating stereoisomeric forms of the compounds of the invention or their intermediates.

[0088] Como aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais de um composto que são, dentro do escopo da perfeita avaliação médica, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem efeitos colaterais indevidos, tais como, toxicidade, irritação, resposta alérgica e outras mais, e são proporcionais a uma relação de benefício/risco razoável.[0088] As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to salts of a compound that are, within the scope of perfect medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of humans and lower animals without side effects. undue consequences, such as toxicity, irritation, allergic response and others, and are proportional to a reasonable benefit/risk relationship.

[0089] Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis com detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, aqui incorporado por referência. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos aqui descritos incluem os derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação dos compostos.[0089] Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. For example, S. M. Berge et al. describe pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, incorporated herein by reference. Pharmaceutically acceptable salts of the compounds described herein include those derived from suitable inorganic and organic acids and bases. These salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compounds.

[0090] Onde o composto aqui descrito contém um grupo básico, ou um bioisóster suficientemente básico, os sais de adição ácidos podem ser preparados por 1) reagir o composto purificado na sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e 2) isolar o sal assim formado. Na prática, os sais de adição ácidos podem estar em uma forma mais conveniente para uso e utilização das quantidades de sal para uso da forma básica livre.[0090] Where the compound described herein contains a basic group, or a sufficiently basic bioisoster, acid addition salts can be prepared by 1) reacting the purified compound in its free base form with a suitable organic or inorganic acid and 2) isolate the salt thus formed. In practice, the acid addition salts may be in a form more convenient to use and use than the amounts of salt for use in the free basic form.

[0091] Exemplos de sais de adição ácidoss não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo de amino formado com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido maléico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou através do uso de outros métodos utilizados na técnica tais como a troca iônico. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formato, fumarato, glucoeptonato, glicerofosfato, glicolato, gluconato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridreto, bromidreto, iodidreto, 2-hidróxi-etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p- toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato, e similares.[0091] Examples of pharmaceutically acceptable non-toxic acid addition salts are salts of an amino group formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchloric acid or with organic acids such as acetic acid, acid oxalic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid or through the use of other methods used in the art such as ion exchange. Other pharmaceutically acceptable salts include adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, glycolate, gluconate, glycolate , hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydrochloride, hydrobromide, iodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, palmoate, pectinate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, salicylate, stearate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, p-toluenesulfonate, undecanoate, valerate salts, and the like.

[0092] Onde o composto aqui descrito contém um grupo de carbóxi ou um bioisóster suficientemente ácido, os sais de adição de base podem ser preparados por 1) reagir o composto purificado na sua forma ácida com uma base orgânica ou inorgânica adequada e 2) isolar o sal assim formado. Na prática, o uso do sal de adição de base pode ser mais conveniente e a utilização da forma de sal inerentemente equivale ao uso da forma de ácido livre. Os sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metal alcalino (por exemplo, sódio, lítio e potássio), de metal alcalino terroso (por exemplo, magnésio e cálcio), de amônio e N+ (C1-4 alquila)4. Esta invenção também prevê a quaternização de quaisquer grupos contendo nitrogênio básico dos compostos aqui divulgados. Os produtos solúveis ou dispersíveis em água ou óleo podem ser obtidos por tal quaternização.[0092] Where the compound described herein contains a carboxy group or a sufficiently acidic bioisoster, base addition salts can be prepared by 1) reacting the purified compound in its acidic form with a suitable organic or inorganic base and 2) isolating the salt thus formed. In practice, use of the base addition salt may be more convenient and use of the salt form inherently equates to use of the free acid form. Salts derived from suitable bases include alkali metal (e.g., sodium, lithium and potassium), alkaline earth metal (e.g., magnesium and calcium), ammonium and N+ (C1-4 alkyl)4 salts. This invention also provides for the quaternization of any basic nitrogen-containing groups of the compounds disclosed herein. Products soluble or dispersible in water or oil can be obtained by such quaternization.

[0093] Os sais de adição básicos incluem sais de metal e amina farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de metal adequados incluem o sódio, potássio, cálcio, bário, zinco, magnésio e alumínio. Os sais de sódio e potássio são geralmente preferidos. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, cátions de amônio não tóxicos, de amônio quaternário e de amina formados utilizando contraíons, tais como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila. Os sais de adição de base inorgânicas adequadas são preparados a partir de bases metálicas, as quais incluem hidreto de sódio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de alumínio, hidróxido de lítio, hidróxido de magnésio, hidróxido de zinco e similares. Os sais de adição de base de amina adequados são preparados a partir de aminas que são frequentemente utilizadas na química medicinal devido à sua baixa toxicidade e aceitabilidade para uso médico. Amônia, etilenodiamina, N-metil-glucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'-dibenziletilonodiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-benzilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-aminometano, hidróxido de tetrametilamônio, trietilamina, dibenzilamina, efenamina, desidroabietilamina, N- etilpiperidina, benzilamina, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, aminoácidos básicos, diciclo-hexilamina e similares são exemplos de sais de adição de base adequados.[0093] Basic addition salts include pharmaceutically acceptable metal and amine salts. Suitable metal salts include sodium, potassium, calcium, barium, zinc, magnesium and aluminum. Sodium and potassium salts are generally preferred. Other pharmaceutically acceptable salts include, where appropriate, non-toxic ammonium, quaternary ammonium and amine cations formed using counterions, such as halide, hydroxide, carboxylate, sulfate, phosphate, nitrate, lower alkyl sulfonate and aryl sulfonate. Suitable inorganic base addition salts are prepared from metal bases, which include sodium hydride, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, aluminum hydroxide, lithium hydroxide, magnesium hydroxide, zinc hydroxide and similar. Suitable amine base addition salts are prepared from amines that are frequently used in medicinal chemistry due to their low toxicity and acceptability for medical use. Ammonia, ethylenediamine, N-methyl-glucamine, lysine, arginine, ornithine, choline, N,N'-dibenzylethylonediamine, chloroprocaine, diethanolamine, procaine, N-benzylphenethylamine, diethylamine, piperazine, tris(hydroxymethyl)-aminomethane, tetramethylammonium hydroxide, triethylamine, dibenzylamine, ephenamine, dehydroabiethylamine, N-ethylpiperidine, benzylamine, tetramethylammonium, tetraethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, ethylamine, basic amino acids, dicyclohexylamine and the like are examples of suitable base addition salts.

[0094] Outros ácidos e bases, embora não sejam eles próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos aqui descritos e dos seus sais de adição ácidos ou base farmaceuticamente aceitáveis.[0094] Other acids and bases, although not themselves pharmaceutically acceptable, can be used in the preparation of salts useful as intermediates in obtaining the compounds described herein and their pharmaceutically acceptable acid or base addition salts.

[0095] Deve ficar entendido que esta invenção inclui misturas/combinações de diferentes sais farmaceuticamente aceitáveis e também misturas/combinações de compostos na forma livre e sais farmaceuticamente aceitáveis.[0095] It should be understood that this invention includes mixtures/combinations of different pharmaceutically acceptable salts and also mixtures/combinations of compounds in free form and pharmaceutically acceptable salts.

[0096] Os compostos aqui descritos também podem existir como solvatos farmaceuticamente aceitáveis (por exemplo, hidratos) e clatratos. Como aqui utilizado, o termo "solvato farmaceuticamente aceitável" é um solvato formado a partir da associação de uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis a um dos compostos aqui descritos. O termo solvato inclui hidratos (por exemplo, hemi-hidrato, monoidrato, di-hidrato, triidrato, tetra-hidrato e similares).[0096] The compounds described herein can also exist as pharmaceutically acceptable solvates (e.g., hydrates) and clathrates. As used herein, the term "pharmaceutically acceptable solvate" is a solvate formed from the association of one or more pharmaceutically acceptable solvent molecules with one of the compounds described herein. The term solvate includes hydrates (e.g., hemihydrate, monohydrate, dihydrate, trihydrate, tetrahydrate and the like).

[0097] Como aqui utilizado, o termo "hidrato" significa um composto aqui descrito ou um sal deste que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de água ligada por forças intermoleculares não covalentes.[0097] As used herein, the term "hydrate" means a compound described herein or a salt thereof that further includes a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by non-covalent intermolecular forces.

[0098] Como aqui utilizado, o termo "clatrato" significa um composto aqui descrito ou um sal deste na forma de uma treliça cristalina que contém espaços (por exemplo, canais) que possuem uma molécula hóspede (por exemplo, um solvente ou água) aprisionada dentro.[0098] As used herein, the term "clathrate" means a compound described herein or a salt thereof in the form of a crystalline lattice that contains spaces (e.g., channels) that have a guest molecule (e.g., a solvent or water) trapped inside.

[0099] Além dos compostos aqui descritos, os derivados ou profármacos farmaceuticamente aceitáveis destes compostos podem também ser empregados em composições para tratar ou prevenir os distúrbios aqui identificados.[0099] In addition to the compounds described here, pharmaceutically acceptable derivatives or prodrugs of these compounds can also be used in compositions to treat or prevent the disorders identified here.

[00100] Um "derivado ou profármaco farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer éster farmaceuticamente aceitável, sal de um éster, ou outro derivado ou seu sal de um composto aqui descrito que, após a administração a um receptor, é capaz de fornecer, direta ou indiretamente, um composto aqui descrito ou um metabólito inibitório ativo ou resíduo deste. Os derivados ou profármacos particularmente favorecidos são aqueles que aumentam a biodisponibilidade dos compostos quando tais compostos são administrados a um paciente (por exemplo, permitindo que um composto administrado por via oral seja mais facilmente absorvido no sangue) ou que acentuam a liberação do composto de origem a um compartimento biológico (por exemplo, o cérebro ou o sistema linfático) em relação à espécie de origem.[00100] A "pharmaceutically acceptable derivative or prodrug" includes any pharmaceutically acceptable ester, salt of an ester, or other derivative or salt thereof of a compound described herein that, upon administration to a recipient, is capable of directly or indirectly providing , a compound described herein or an active inhibitory metabolite or residue thereof. Particularly favored derivatives or prodrugs are those that increase the bioavailability of compounds when such compounds are administered to a patient (e.g., allowing an orally administered compound to be more easily absorbed into the blood) or that enhance the release of the parent compound. to a biological compartment (e.g., the brain or lymphatic system) in relation to the species of origin.

[00101] Como aqui utilizado e a não ser que de outra maneira indicada, o termo "profármaco" significa um derivado de um composto que pode hidrolisar, oxidar ou reagir de outro modo sob condições biológicas (in vitro ou in vivo) para fornecer um composto aqui descrito. Os profármacos podem tornar-se ativos após tal reação sob condições biológicas, ou eles podem ter atividade nas suas formas não reagidas. Exemplos de profármacos contemplados nesta invenção incluem, mas não são limitados a estes, análogos ou derivados de compostos da invenção que compreendem componentes bio-hidrolisáveis tais como amidas bio-hidrolisáveis, ésteres bio-hidrolisáveis, carbamatos bio- hidrolisáveis, carbonatos bio-hidrolisáveis, ureídos bio-hidrolisáveis e análogos de fosfato bioidrolisáveis. Outros exemplos de profármacos incluem derivados de compostos aqui descritos que compreendem componentes de -NO, -NO2, -ONO ou -ONO2. Os profármacos podem tipicamente ser preparados utilizando métodos bem conhecidos, tais como aqueles descritos por BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG DISCOVERY (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed).[00101] As used herein and unless otherwise indicated, the term "prodrug" means a derivative of a compound that can hydrolyze, oxidize or otherwise react under biological conditions (in vitro or in vivo) to provide a compound described here. Prodrugs may become active following such a reaction under biological conditions, or they may have activity in their unreacted forms. Examples of prodrugs contemplated by this invention include, but are not limited to, analogues or derivatives of compounds of the invention which comprise biohydrolyzable components such as biohydrolyzable amides, biohydrolyzable esters, biohydrolyzable carbamates, biohydrolyzable carbonates, biohydrolyzable ureides and biohydrolyzable phosphate analogues. Other examples of prodrugs include derivatives of compounds described herein that comprise -NO, -NO2, -ONO or -ONO2 components. Prodrugs can typically be prepared using well-known methods, such as those described by BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG DISCOVERY (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed).

Usos TerapêuticosTherapeutic Uses

[00102] Um aspecto desta invenção fornece uma terapia de combinação que inibe a via de ATR que compreende um composto útil para a inibição da ATR cinase, assim como um composto útil para inibir a Chk1 cinase (a.k.a. "terapia de combinação ATR/Chk1"). Em algumas modalidades, o composto útil para a inibição da ATR é selecionado do grupo que consiste em um composto de fórmula I ou um composto de fórmula II. A terapia de combinação é útil para tratar ou diminuir a gravidade de uma doença, condição ou distúrbio onde a via de ATR está implicada na doença, condição ou distúrbio.[00102] One aspect of this invention provides a combination therapy that inhibits the ATR pathway comprising a compound useful for inhibiting ATR kinase, as well as a compound useful for inhibiting Chk1 kinase (a.k.a. "ATR/Chk1 combination therapy" ). In some embodiments, the compound useful for inhibiting ATR is selected from the group consisting of a compound of formula I or a compound of formula II. Combination therapy is useful for treating or lessening the severity of a disease, condition or disorder where the ATR pathway is implicated in the disease, condition or disorder.

[00103] Outro aspecto desta invenção fornece uma terapia de combinação útil para o tratamento de doenças, distúrbios e condições caracterizadas pela proliferação celular excessiva ou anormal, incluindo doenças proliferativas ou hiperproliferativas. Exemplos de doenças proliferativas e hiperproliferativas incluem, mas não são limitados a estas, câncer e distúrbios mieloproliferativos.[00103] Another aspect of this invention provides a combination therapy useful for treating diseases, disorders and conditions characterized by excessive or abnormal cell proliferation, including proliferative or hyperproliferative diseases. Examples of proliferative and hyperproliferative diseases include, but are not limited to, cancer and myeloproliferative disorders.

[00104] O termo "câncer" inclui, mas não é limitado aos seguintes tipos de cânceres: oral, pulmonar, gastrointestinal, trato geniturinário, fígado, osso, sistema nervoso, ginecológico, pele, glândula tireoide ou glândula adrenal. Mais especificamente, o "câncer" inclui, mas não é limita do aos seguintes cânceres: Oral: cavidade bucal, lábio, língua, boca, faringe; Cardíaco: sarcoma (angiossarcoma, fibrossarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (células escamosas ou epidermoides, células pequenas indiferenciadas, células grandes indiferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, laringe, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma dutal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma), cólon, colorretal; reto, Trato geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transição, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiais, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiossarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma, passagens biliares; Osso: sarcoma osteogênico (osteossarcoma), fibrossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiplo, cordoma maligno, tumor de células gigantes, osteocondroma (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide e tumores de células gigantes; Sistema nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiossarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanoma, retinoblastoma, tumores congênitos), neurofibroma da medula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), colo do útero (carcinoma do colo do útero, displasia cervical pré-tumor), ovários (carcinoma de ovário [cistadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinomas, carcinoma não classificado], tumores de células da granulosa e teca, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrossarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiossarcoma embrionário), trompas de falópio (carcinoma), mama; Hematológico: sangue (leucemia mieloide [aguda e crônica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, doenças mieloproliferativas, múltiplos mielomas, síndrome mielodisplásica), doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin [linfoma maligno] células pilosas; Pele: melanoma maligno, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, queratoacantoma, verrugas displásicas, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; Glândula tiroide: carcinoma papilífero da tiroide, carcinoma folicular da tiroide, câncer da tiroide não diferenciada, carcinoma medular da tiroide, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2A, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2B, câncer da tiroide medular familiar, feocromocitoma, paraganglioma; e Glândulas suprarrenais: neuroblastoma.[00104] The term "cancer" includes, but is not limited to, the following types of cancers: oral, lung, gastrointestinal, genitourinary tract, liver, bone, nervous system, gynecological, skin, thyroid gland or adrenal gland. More specifically, "cancer" includes, but is not limited to, the following cancers: Oral: oral cavity, lip, tongue, mouth, pharynx; Cardiac: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, liposarcoma), myxoma, rhabdomyoma, fibroma, lipoma and teratoma; Lung: bronchogenic carcinoma (squamous or epidermoid cells, undifferentiated small cells, undifferentiated large cells, adenocarcinoma), alveolar (bronchiolar) carcinoma, bronchial adenoma, sarcoma, lymphoma, chondromatous hamartoma, mesothelioma; Gastrointestinal: esophagus (squamous cell carcinoma, larynx, adenocarcinoma, leiomyosarcoma, lymphoma), stomach (carcinoma, lymphoma, leiomyosarcoma), pancreas (ductal adenocarcinoma, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, carcinoid tumors, vipoma), small intestine (adenocarcinoma, lymphoma , carcinoid tumors, Kaposi's sarcoma, leiomyoma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), large intestine (adenocarcinoma, tubular adenoma, villous adenoma, hamartoma, leiomyoma), colon, colorectum; rectum, Genitourinary tract: kidney (adenocarcinoma, Wilm's tumor [nephroblastoma], lymphoma, leukemia), bladder and urethra (squamous cell carcinoma, transitional cell carcinoma, adenocarcinoma), prostate (adenocarcinoma, sarcoma), testis (seminoma, teratoma, embryonal carcinoma, teratocarcinoma, choriocarcinoma, sarcoma, interstitial cell carcinoma, fibroma, fibroadenoma, adenomatoid tumors, lipoma); Liver: hepatoma (hepatocellular carcinoma), cholangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, hepatocellular adenoma, hemangioma, bile passages; Bone: osteogenic sarcoma (osteosarcoma), fibrosarcoma, malignant fibrous histiocytoma, chondrosarcoma, Ewing's sarcoma, malignant lymphoma (reticular cell sarcoma), multiple myeloma, malignant chordoma, giant cell tumor, osteochondroma (osteocartilaginous exostoses), benign chondroma, chondroblastoma , chondromyxofibroma, osteoid osteoma and giant cell tumors; Nervous system: skull (osteoma, hemangioma, granuloma, xanthoma, osteitis deformans), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), brain (astrocytoma, medulloblastoma, glioma, ependymoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, congenital tumors), spinal cord neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma); Gynecological: uterus (endometrial carcinoma), cervix (cervical carcinoma, pretumor cervical dysplasia), ovaries (ovarian carcinoma [serous cystadenocarcinoma, cystadenocarcinomas, unclassified carcinoma], granulosa and theca cell tumors, tumors Sertoli-Leydig cell carcinoma, dysgerminoma, malignant teratoma), vulva (squamous cell carcinoma, intraepithelial carcinoma, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (clear cell carcinoma, squamous cell carcinoma, botryoid sarcoma (embryonic rhabdomyosarcoma), fallopian tubes fallopian (carcinoma), breast; Hematological: blood (myeloid leukemia [acute and chronic], acute lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, myeloproliferative diseases, multiple myelomas, myelodysplastic syndrome), Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphoma [malignant lymphoma] cells hair; Skin: malignant melanoma, basal cell carcinoma, squamous cell carcinoma, Kaposi's sarcoma, keratoacanthoma, dysplastic warts, lipoma, angioma, dermatofibroma, keloids, psoriasis; Thyroid gland: papillary thyroid carcinoma, follicular thyroid carcinoma, undifferentiated thyroid cancer, medullary thyroid carcinoma, multiple endocrine neoplasia type 2A, multiple endocrine neoplasia type 2B, familial medullary thyroid cancer, pheochromocytoma, paraganglioma; and Adrenal glands: neuroblastoma.

[00105] Em outras modalidades, o câncer é selecionado de câncer do pulmão, câncer da cabeça e pescoço, câncer pancreático, câncer da mama, câncer gástrico ou câncer cerebral. Em mais outras modalidades, o câncer é selecionado de câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas, câncer do pâncreas, câncer do trato biliar, câncer da cabeça e pescoço, câncer da bexiga, câncer colorretal, glioblastoma, câncer esofágico, câncer da mama, carcinoma hepatocelular, ou câncer do ovário. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado de um câncer do pulmão ou da mama. Em ainda outras modalidades, o câncer é selecionado de câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas e câncer da mama triplo negativo.[00105] In other embodiments, the cancer is selected from lung cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, breast cancer, gastric cancer or brain cancer. In further embodiments, the cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, head and neck cancer, bladder cancer, colorectal cancer, glioblastoma, cancer esophageal, breast cancer, hepatocellular carcinoma, or ovarian cancer. In some embodiments, the cancer is selected from lung or breast cancer. In still other embodiments, the cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, and triple negative breast cancer.

[00106] O termo "célula cancerosa" como aqui fornecido inclui uma célula afetada por qualquer uma das condições acima identificadas. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado de câncer colorretal, tiroide, pulmão ou mama.[00106] The term "cancer cell" as provided herein includes a cell affected by any of the conditions identified above. In some embodiments, the cancer is selected from colorectal, thyroid, lung, or breast cancer.

[00107] O termo "distúrbios mieloproliferativos" inclui distúrbios tais como policitemia vera, trombocitemia, metaplasia mieloide com mielofibrose, síndrome hipereosinofílica, leucemia mielomonocítica juvenil, doença de mastócitos sistêmicos e distúrbios hematopoiéticos, em particular a leucemia mieloide aguda (AML), a leucemia mieloide crônica (CML), a leucemia aguda promielocítica (APL) e leucemia linfocítica aguda (ALL).[00107] The term "myeloproliferative disorders" includes disorders such as polycythemia vera, thrombocythemia, myeloid metaplasia with myelofibrosis, hypereosinophilic syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, systemic mast cell disease and hematopoietic disorders, in particular acute myeloid leukemia (AML), leukemia chronic myeloid leukemia (CML), acute promyelocytic leukemia (APL) and acute lymphocytic leukemia (ALL).

Composições FarmacêuticasPharmaceutical Compositions

[00108] A presente invenção também fornece uma terapia de combinação compreendendo um composto ou composição útil para inibir a ATR cinase e um composto ou composição útil para inibir a Chk1 cinase.[00108] The present invention also provides a combination therapy comprising a compound or composition useful for inhibiting ATR kinase and a compound or composition useful for inhibiting Chk1 kinase.

[00109] Um aspecto desta invenção fornece uma terapia de combinação compreendendo uma composição útil para inibir a ATR cinase e uma composição útil para inibir a Chk1 cinase, como aqui descrito. Cada composição opcionalmente compreende um portador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável.[00109] One aspect of this invention provides a combination therapy comprising a composition useful for inhibiting ATR kinase and a composition useful for inhibiting Chk1 kinase, as described herein. Each composition optionally comprises a pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant or vehicle.

[00110] O portador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável, como aqui utilizado, inclui qualquer e todos os solventes, diluentes ou outros veículos líquidos, auxiliares de dispersão ou suspensão, agentes tensoativos, agentes isotônicos, agentes espessantes ou emulsificantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubrificantes e similares, conforme adequados para a forma de dosagem particular desejada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) divulga vários portadores utilizados na formulação de composições farmaceuticamente aceitáveis e técnicas conhecidas para a sua preparação. Exceto na medida em que qualquer meio portador convencional seja incompatível com os compostos da invenção, tal como através da produção de qualquer efeito biológico indesejável ou de outro modo interação de um modo prejudicial com qualquer outro componente da composição farmaceuticamente aceitável, o seu uso é contemplado de estar dentro do escopo desta invenção.[00110] The pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant or vehicle, as used herein, includes any and all solvents, diluents or other liquid carriers, dispersing or suspending aids, surfactants, isotonic agents, thickening or emulsifying agents, preservatives, solid binders , lubricants and the like, as suitable for the particular dosage form desired. Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) discloses various carriers used in the formulation of pharmaceutically acceptable compositions and known techniques for their preparation. Except to the extent that any conventional carrier medium is incompatible with the compounds of the invention, such as by producing any undesirable biological effect or otherwise interacting in a detrimental manner with any other component of the pharmaceutically acceptable composition, their use is contemplated to be within the scope of this invention.

[00111] Alguns exemplos de materiais que podem servir como portadores farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a estes, trocadores iônicos, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas de soro, tais como albumina de soro humano, substâncias tampão tais como fosfatos, glicina, ácido sórbico ou sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeo de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, fosfato de hidrogênio dissódico, fosfato de hidrogênio potássico, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trisilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloco de polietileno-polioxipropileno, gorduras de lã, açúcares tais como lactose, glicose e sacarose; amidos tais como amido de milho e amido de batata; celulose e seus derivados tais como carboximetil celulose sódica, etil celulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; óleos tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão; óleo de açafroa; óleo de gergelim; azeite; óleo de milho e óleo de soja; glicóis; tais como propileno glicol ou polietileno glicol; ésteres tais como oleato de etila e laurato de etila; ágar; agentes tamponantes tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água livre de pirógeno; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico, e soluções tamponantes de fosfato, assim como outros lubrificantes compatíveis não tóxicos tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, assim como agentes corantes, agentes de liberação, agentes de revestimento, adoçantes, aromatizantes e agentes perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem estar presentes na composição, de acordo com a avaliação do formulador.[00111] Some examples of materials that can serve as pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, ion exchangers, alumina, aluminum stearate, lecithin, serum proteins such as human serum albumin, buffer substances such as phosphates , glycine, sorbic acid or potassium sorbate, partial glyceride mixtures of saturated vegetable fatty acids, water, salts or electrolytes, such as protamine sulfate, disodium hydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, sodium chloride, zinc salts, colloidal silica, magnesium trisilicate, polyvinyl pyrrolidone, polyacrylates, waxes, polyethylene-polyoxypropylene block polymers, wool fats, sugars such as lactose, glucose and sucrose; starches such as corn starch and potato starch; cellulose and its derivatives such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; Tragacanth powder; malt; gelatin; baby powder; excipients such as cocoa butter and suppository waxes; oils such as peanut oil, cottonseed oil; safflower oil; Sesame oil; oil; corn oil and soybean oil; glycols; such as propylene glycol or polyethylene glycol; esters such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline solution; Ringer's solution; ethyl alcohol, and phosphate buffer solutions, as well as other compatible non-toxic lubricants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as coloring agents, releasing agents, coating agents, sweeteners, flavoring and perfuming agents, preservatives and antioxidants may also be present in the composition, according to the formulator's assessment.

[00112] Os inibidores da ATR e Chk1 cinase ou seus sais farmacêuticos podem ser formulados em composições farmacêuticas para administração em animais ou seres humanos. Estas composições farmacêuticas, que compreendem uma quantidade suficiente de inibidor de ATR e Chk1 eficaz para tratar ou prevenir as doenças ou condições aqui descritas e um portador farmaceuticamente aceitável, são descritas acima.[00112] ATR and Chk1 kinase inhibitors or their pharmaceutical salts can be formulated into pharmaceutical compositions for administration to animals or humans. These pharmaceutical compositions, which comprise a sufficient amount of ATR and Chk1 inhibitor effective to treat or prevent the diseases or conditions described herein and a pharmaceutically acceptable carrier, are described above.

[00113] A quantidade exata de composto necessário para o tratamento irá variar de paciente para paciente, dependendo da espécie, idade e estado geral do paciente, da gravidade da infecção, do agente particular, do seu modo de administração, e semelhantes. Os compostos da invenção são de preferência formulados na forma de unidade de dosagem para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A expressão "forma unitária de dosagem" como aqui utilizada refere-se a uma unidade fisicamente discreta de agente apropriada para o paciente a ser tratado. Ficará entendido, contudo, que a utilização diária total dos compostos e composições da presente invenção será decidida pelo médico assistente dentro do escopo da perfeita avaliação médica. O nível de dose eficaz específico para qualquer paciente ou organismo particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo o distúrbio sendo tratado e a gravidade do distúrbio; a atividade do composto específico empregado; a composição específica empregada; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, a via de administração e a taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento; medicamentos utilizados em combinação ou coincidentes com o composto específico empregado, e fatores semelhantes bem conhecidos nas técnicas médicas. O termo "paciente", como aqui utilizado, significa um animal, de preferência um mamífero, e mais preferivelmente um ser humano.[00113] The exact amount of compound required for treatment will vary from patient to patient, depending on the species, age and general condition of the patient, the severity of the infection, the particular agent, its mode of administration, and the like. The compounds of the invention are preferably formulated in unit dosage form for ease of administration and uniformity of dosage. The term "unit dosage form" as used herein refers to a physically discrete unit of agent appropriate for the patient being treated. It will be understood, however, that the total daily use of the compounds and compositions of the present invention will be decided by the attending physician within the scope of perfect medical evaluation. The specific effective dose level for any particular patient or organism will depend on a variety of factors including the disorder being treated and the severity of the disorder; the activity of the specific compound used; the specific composition used; the patient's age, body weight, general health, sex, and diet; the time of administration, the route of administration and the excretion rate of the specific compound used; the duration of treatment; medicines used in combination or coincident with the specific compound used, and similar factors well known in the medical arts. The term "patient" as used herein means an animal, preferably a mammal, and more preferably a human being.

[00114] Em algumas modalidades, estas composições opcionalmente ainda compreendem um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Por exemplo, agentes quimioterapêuticos ou outros agentes antiproliferativos podem ser combinados com os compostos desta invenção para tratar doenças proliferativas e câncer. Exemplos de agentes conhecidos com os quais estas composições podem ser combinadas estão listados acima sob a seção "Agentes Terapêuticos Adicionais", abaixo, e também ao longo do relatório descritivo. Algumas modalidades fornecem um uso simultâneo, separado ou sequencial de uma preparação combinada.[00114] In some embodiments, these compositions optionally further comprise one or more additional therapeutic agents. For example, chemotherapeutic agents or other antiproliferative agents can be combined with the compounds of this invention to treat proliferative diseases and cancer. Examples of known agents with which these compositions can be combined are listed above under the "Additional Therapeutic Agents" section below, and also throughout the specification. Some embodiments provide for simultaneous, separate, or sequential use of a combined preparation.

Agentes terapêuticos adicionaisAdditional therapeutic agents

[00115] Outro aspecto desta invenção é direcionado para um método de tratamento de câncer em um paciente com sua necessidade, compreendendo a administração de um composto útil para a inibição de ATR cinase; a administração de um composto útil para a inibição de Chk1 cinase e a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, dito método compreende a administração sequencial ou a coadministração dos compostos ou composições da terapia de combinação ATR/Chk1, e do agente terapêutico adicional.[00115] Another aspect of this invention is directed to a method of treating cancer in a patient in need thereof, comprising administering a compound useful for inhibiting ATR kinase; administering a compound useful for inhibiting Chk1 kinase and administering one or more additional therapeutic agents. In some embodiments, said method comprises sequentially administering or co-administering the compounds or compositions of the ATR/Chk1 combination therapy, and the additional therapeutic agent.

[00116] Como aqui utilizado, o termo "em combinação" ou "coadministração" pode ser utilizado alternadamente para se referir ao uso de mais de uma terapia (por exemplo, um ou mais agentes terapêuticos). O uso do termo não restringe a ordem na qual as terapias são administradas (por exemplo, agentes terapêuticos) a um paciente.[00116] As used herein, the term "in combination" or "coadministration" may be used interchangeably to refer to the use of more than one therapy (e.g., one or more therapeutic agents). Use of the term does not restrict the order in which therapies are administered (e.g., therapeutic agents) to a patient.

[00117] Em algumas modalidades, dito agente terapêutico adicional é um agente anticâncer. Em outras modalidades, dito agente terapêutico adicional é um agente de dano ao DNA. Deve ficar compreendido que o agente terapêutico adicional pode compreender uma ou mais terapias. Em mais outras modalidades, dito agente terapêutico adicional é selecionado de terapia por radiação, quimioterapia ou outros agentes tipicamente utilizados em combinação com a terapia de radiação ou quimioterapia, tais como radiossensibilizadores e quimiossensibilizadores. Em mais outras modalidades, o dito agente terapêutico adicional é a radiação ionizante. Em algumas modalidades, o dito agente terapêutico adicional compreende a radiação ionizante e um agente de dano ao DNA.[00117] In some embodiments, said additional therapeutic agent is an anti-cancer agent. In other embodiments, said additional therapeutic agent is a DNA damaging agent. It is to be understood that the additional therapeutic agent may comprise one or more therapies. In further embodiments, said additional therapeutic agent is selected from radiation therapy, chemotherapy, or other agents typically used in combination with radiation therapy or chemotherapy, such as radiosensitizers and chemosensitizers. In yet other embodiments, said additional therapeutic agent is ionizing radiation. In some embodiments, said additional therapeutic agent comprises ionizing radiation and a DNA damaging agent.

[00118] Como deve ser conhecido por uma pessoa de habilidade na técnica, os radiossensibilizadores são agentes que podem ser utilizados em combinação com a terapia de radiação. Os radiossensibilizadores funcionam de várias maneiras diferentes, incluindo, mas não limitadas a estas, tornar as células cancerosas mais sensíveis à terapia de radiação, trabalhar em sinergia com a terapia de radiação para fornecer um efeito sinérgico melhorado, atuar aditivamente com a terapia de radiação ou proteger as células saudáveis circundantes do dano provocado pela radioterapia. Do mesmo modo os quimiossensibilizadores são agentes que podem ser utilizados em combinação com a quimioterapia. De modo semelhante, os quimiossensibilizadores trabalham de várias maneiras diferentes, incluindo, mas não são limitados a estas, tornar as células cancerosas mais sensíveis à quimioterapia, trabalhar em sinergia com a quimioterapia para fornecer um efeito sinérgico melhorado, atuar aditivamente com a quimioterapia ou proteger as células saudáveis circundantes do dano provocado pela quimioterapia.[00118] As will be known by a person skilled in the art, radiosensitizers are agents that can be used in combination with radiation therapy. Radiosensitizers work in several different ways, including, but not limited to, making cancer cells more sensitive to radiation therapy, working synergistically with radiation therapy to provide an enhanced synergistic effect, acting additively with radiation therapy, or protect surrounding healthy cells from damage caused by radiotherapy. Likewise, chemosensitizers are agents that can be used in combination with chemotherapy. Similarly, chemosensitizers work in a number of different ways, including, but are not limited to, making cancer cells more sensitive to chemotherapy, working synergistically with chemotherapy to provide an enhanced synergistic effect, acting additively with chemotherapy, or protecting the surrounding healthy cells from the damage caused by chemotherapy.

[00119] Exemplos de agentes de dano ao DNA que podem ser utilizados com a terapia de combinação ATR/Chk1 desta invenção incluem, mas não são limitados a estes, Agentes de platina, tais como Carboplatina, Oxaliplatina, Cisplatina, Nedaplatina, Satraplatina, Lobaplatina, Triplatina, Tetranitrato, Picoplatina, Prolindac, Aroplatina e outros derivados; Inibidores de Topo I, tais como Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, Rubitecano, Belotecano e outros derivados; Inibidores de Topo II, tais como Etoposídeo (VP-16), Daunorrubicina, Doxorrubicina, Mitoxantrona, Aclarrubicina, Epirrubicina, Idarrubicina, Anrubicina, Ansacrina, Pirarrubicina, Valrubicina, Zorrubicina, Teniposídro e outros derivados; Antimetabólitos, tais como a família Folic (Metotrexato, Pemetrexed, Raltitrexed, Aminopterina, e os referentes); Antagonistas da purina (Tioguanina, Fludarabina, Cladribina, 6-Mercaptopurina, Pentostatina, clofarabina e os referentes) e Antagonistas de pirimidina (Citarabina, Floxuridina, Azacitidina, Tegafur, Carmofur, Capacitabina, Gencitabina, hidroxiureia, 5-Fluorouracila e os referentes); Agentes alquilantes, tais como mostardas de nitrogênio (por exemplo, ciclofosfamida, melfalano, clorambucila, mecloretamina, ifosfamida, mecloretamina, trofosfamida, prednimustina, bendamustina, uramustina, estramustina e os referentes); nitrosoureias (por exemplo, Carmustina, Lomustina, Semustina, Fotemustina, Nimustina, Ranimustina, Estreptozocina e os referentes); Triazenos (por exemplo, Dacarbazina, Altretamina, Temozolomida e os referentes); Sulfonatos de alquila (por exemplo, Bussulfan, Mannossulfan, Treossulfan, e os referentes); Procarbazina; Mitobronitol e Aziridinas (por exemplo, Carboquona, Triaziquona, ThioTEPA, trietilenemalamina e os referentes); Antibióticos, tais como hidroxiureia, antraciclinas (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, epirrubicina e outros derivados); Antracenodionas (por exemplo, Mitoxantrona e os referentes); Família Streptomyces (por exemplo, Bleomicina, Mitomicina C, Actinomicina, Plicamicina); e Luz ultravioleta.[00119] Examples of DNA damaging agents that can be used with the ATR/Chk1 combination therapy of this invention include, but are not limited to, Platinum Agents, such as Carboplatin, Oxaliplatin, Cisplatin, Nedaplatin, Satraplatin, Lobaplatin , Triplatin, Tetranitrate, Picoplatin, Prolindac, Aroplatin and other derivatives; Topo I inhibitors, such as Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, Rubitecan, Belotecan and other derivatives; Topo II inhibitors, such as Etoposide (VP-16), Daunorubicin, Doxorubicin, Mitoxantrone, Aclarrubicin, Epirubicin, Idarubicin, Anrubicin, Ansacrine, Pyrrubicin, Valrubicin, Zorubicin, Teniposidro and other derivatives; Antimetabolites, such as the Folic family (Methotrexate, Pemetrexed, Raltitrexed, Aminopterin, and the like); Purine antagonists (Thioguanine, Fludarabine, Cladribine, 6-Mercaptopurine, Pentostatin, Clofarabine and the related ones) and Pyrimidine antagonists (Cytarabine, Floxuridine, Azacitidine, Tegafur, Carmofur, Capacitabine, Gemcitabine, hydroxyurea, 5-Fluorouracil and the related ones); Alkylating agents, such as nitrogen mustards (for example, cyclophosphamide, melphalan, chlorambucil, mechlorethamine, ifosfamide, mechlorethamine, trofosphamide, prednimustine, bendamustine, uramustine, estramustine and the like); nitrosoureas (e.g., Carmustine, Lomustine, Semustine, Fotemustine, Nimustine, Ranimustine, Streptozocin and the like); Triazenes (for example, Dacarbazine, Altretamine, Temozolomide and the like); Alkyl sulfonates (for example, Busulfan, Mannosulfan, Treosulfan, and the like); Procarbazine; Mitobronitol and Aziridines (for example, Carboquone, Triaziquone, ThioTEPA, triethylenemalamine and the like); Antibiotics, such as hydroxyurea, anthracyclines (e.g. doxorubicin, daunorubicin, epirubicin and other derivatives); Anthracenediones (e.g. Mitoxantrone and the like); Streptomyces family (e.g. Bleomycin, Mitomycin C, Actinomycin, Plicamycin); and Ultraviolet Light.

[00120] Outras terapias ou agentes anticancerígenos que podem ser utilizados na terapia de combinação incluem cirurgia, radioterapia (em alguns exemplos, radiação gama, radioterapia com feixe de nêutrons, radioterapia com feixe de elétrons, terapia de prótons, braquiterapia e isótopos radioativos sistêmicos, para mencionar alguns), terapia endócrina, modificadores de resposta biológica (interferons, interleucinas e fator de necrose tumoral (TNF) para mencionar alguns), hipertermia e crioterapia, agentes para atenuar quaisquer efeitos adversos (por exemplo, antieméticos) e outros medicamentos quimioterapêuticos aprovados, incluindo, mas não são limitados a estes, os agentes de dano ao DNA aqui listado, venenos fusiformes (Vinblastina, Vincristina, Vinorelbina, Paclitaxel), podofilotoxinas (Etoposídeo, Irinotecano, Topotecano), nitrosoureias (Carmustina, Lomustina), íons inorgânicos (Cisplatina, Carboplatina), enzimas (Asparaginase), e hormônios (Tamoxifen, Leuprolide, Flutamide e Megestrol), Gleevec™, adriamicina, dexametasona e ciclofosfamida.[00120] Other therapies or anticancer agents that can be used in combination therapy include surgery, radiotherapy (in some examples, gamma radiation, neutron beam radiotherapy, electron beam radiotherapy, proton therapy, brachytherapy and systemic radioactive isotopes, to name a few), endocrine therapy, biological response modifiers (interferons, interleukins, and tumor necrosis factor (TNF) to name a few), hyperthermia and cryotherapy, agents to mitigate any adverse effects (e.g., antiemetics), and other approved chemotherapeutic drugs , including, but are not limited to, the DNA damaging agents listed here, spindle poisons (Vinblastine, Vincristine, Vinorelbine, Paclitaxel), podophyllotoxins (Etoposide, Irinotecan, Topotecan), nitrosoureas (Carmustine, Lomustine), inorganic ions ( Cisplatin, Carboplatin), enzymes (Asparaginase), and hormones (Tamoxifen, Leuprolide, Flutamide and Megestrol), Gleevec™, adriamycin, dexamethasone and cyclophosphamide.

[00121] Outras terapias de combinação da presente invenção podem utilizar qualquer um dos seguintes agentes terapêuticos: abarelix (Plenaxis depot®); aldesleucina (Prokine®); Aldesleucina (Proleukin®); Alemtuzumabb (Campath®); alitretinoína (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamina (Hexalen®); amifostina (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®); trióxido arsênico (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidina (Vidaza®); bevacuzimab (Avastin®); cápsulas de bexaroteno (Targretin®); gel de bexaroteno (Targretin®); bleomicina (Blenoxane®); bortezomib (Velcade®); bussulfano intravenoso (Busulfex®); bussulfano oral (Myleran®); calusterona (Methosarb®); capecitabina (Xeloda®); carboplatina (Paraplatin®); carmustina (BCNU®, BiCNU®); carmustina (Gliadel®); carmustina com Polifeprosan 20 Implant (Gliadel Wafer®); celecoxib (Celebrex®); cetuximab (Erbitux®); clorambucil (Leukeran®); cisplatina (Platinol®); cladribina (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabina (Clolar®); ciclofosfamida (Cytoxan®, Neosar®); ciclofosfamida (Cytoxan Injection®); ciclofosfamida (Cytoxan Tablet®); citarabina (Cytosar-U®); citarabina lipossomal (DepoCyt®); dacarbazina (DTIC-Dome®); dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen®); Darbepoetina alfa (Aranesp®); daunorrubicina lipossomal (DanuoXome®); daunorrubicina, daunomicina (Daunorubicin®); daunorrubicina, daunomicina (Cerubidine®); Denileucina diftitox (Ontak®); dexrazoxano (Zinecard®); docetaxel (Taxotere®); doxorrubicina (Adriamycin PFS®); doxorrubicina (Adriamycin®, Rubex®); doxorrubicina (Adriamycin PFS Injection®); doxorrubicin lipossomal (Doxil®); propionato de dromostanolona (dromostanolone®); propionato de dromostanolona (masterone injection®); solução B de Elliott (Elliott's B Solution®); epirrubicina (Ellence®); Epoetina alfa (epogen®); erlotinib (Tarceva®); estramustina (Emcyt®); fosfato de etoposídeo (Etopophos®); etoposídeo, VP-16 (Vepesid®); exemestano (Aromasin®); Filgrastim (Neupogen®); floxuridina (intraarterial) (FUDR®); fludarabina (Fludara®); fluorouracila, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinib (Iressa®); gencitabina (Gemzar®); gentuzumab ozogamicina (Mylotarg®); acetato de goserelina (Zoladex Implant®); acetato de goserelina (Zoladex®); acetato de histrelina (Histrelin implant®); hidroxiureia (Hydrea®); Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin®); idarrubicina (Idamycin®); ifosfamida (IFEX®); mêsilato de imatinib (Gleevec®); interferon alfa 2a (Roferon A®); Interferon alfa-2b (Intron A®); irinotecan (Camptosar®); lenalidomida (Revlimid®); letrozol (Femara®); leucovorina (Wellcovorin®, Leucovorin®); Acetato de Leuprolide (Eligard®); levamisol (Ergamisol®); lomustina, CCNU (CeeBU®); mecloretamina, mostarda de nitrogênio (Mustargen®); acetato de megestrol (Megace®); melfalano, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurina, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®); metotrexato (Methotrexate®); metoxsaleno (Uvadex®); mitomicina C (Mutamycin®); mitotano (Lysodren®); mitoxantrona (Novantrone®); fempropionato de nandrolona (Durabolin- 50®); nelarabina (Arranon®); Nofetumomab (Verluma®); Oprelvekin (Neumega®); oxaliplatina (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); partículas ligadas a proteína paclitaxel (Abraxane®); palifermina (Kepivance®); pamidronato (Aredia®); pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®); Pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexed dissódico (Alimta®); pentostatina (Nipent®); pipobroman (Vercyte®); plicamicina, mitramicina (Mithracin®); porfímero sódico (Photofrin®); procarbazina (Matulane®); quinacrina (Atabrine®); Rasburicase (Elitek®); Rituximab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); Sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); streptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinib (Sutent®); talco (Sclerosol®); tamoxifen (Nolvadex®); temozolomida (Temodar®); teniposídeo, VM-26 (Vumon®); testolactona (Teslac®); tioguanina, 6-TG (Thioguanine®); tiotepa (Thioplex®); topotecan (Hycamtin®); toremifeno (Fareston®); Tositumomab (Bexxar®); Tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®); Trastuzumab (Herceptin®); tretinoína, ATRA (Vesanoid®); Mostarda de Uracila (Uracil Mustard Capsules®); valrubicina (Valstar®); vinblastina (Velban®); vincristina (Oncovin®); vinorrelbina (Navelbine®); zoledronato (Zometa®) e vorinostat (Zolinza®).[00121] Other combination therapies of the present invention may use any of the following therapeutic agents: abarelix (Plenaxis depot®); aldesleukin (Prokine®); Aldesleukin (Proleukin®); Alemtuzumabb (Campath®); alitretinoin (Panretin®); allopurinol (Zyloprim®); altretamine (Hexalen®); amifostine (Ethyol®); anastrozole (Arimidex®); arsenic trioxide (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidine (Vidaza®); bevacuzimab (Avastin®); bexarotene capsules (Targretin®); bexarotene gel (Targretin®); bleomycin (Blenoxane®); bortezomib (Velcade®); intravenous busulfan (Busulfex®); oral busulfan (Myleran®); calusterone (Methosarb®); capecitabine (Xeloda®); carboplatin (Paraplatin®); carmustine (BCNU®, BiCNU®); carmustine (Gliadel®); carmustine with Polifeprosan 20 Implant (Gliadel Wafer®); celecoxib (Celebrex®); cetuximab (Erbitux®); chlorambucil (Leukeran®); cisplatin (Platinol®); cladribine (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabine (Clolar®); cyclophosphamide (Cytoxan®, Neosar®); cyclophosphamide (Cytoxan Injection®); cyclophosphamide (Cytoxan Tablet®); cytarabine (Cytosar-U®); liposomal cytarabine (DepoCyt®); dacarbazine (DTIC-Dome®); dactinomycin, actinomycin D (Cosmegen®); Darbepoetin alfa (Aranesp®); liposomal daunorubicin (DanuoXome®); daunorubicin, daunomycin (Daunorubicin®); daunorubicin, daunomycin (Cerubidine®); Denileukin diftitox (Ontak®); dexrazoxane (Zinecard®); docetaxel (Taxotere®); doxorubicin (Adriamycin PFS®); doxorubicin (Adriamycin®, Rubex®); doxorubicin (Adriamycin PFS Injection®); liposomal doxorubicin (Doxil®); dromostanolone propionate (dromostanolone®); dromostanolone propionate (masterone injection®); Elliott's B solution (Elliott's B Solution®); epirubicin (Ellence®); Epoetin alfa (epogen®); erlotinib (Tarceva®); estramustine (Emcyt®); etoposide phosphate (Etopophos®); etoposide, VP-16 (Vepesid®); exemestane (Aromasin®); Filgrastim (Neupogen®); floxuridine (intraarterial) (FUDR®); fludarabine (Fludara®); fluorouracil, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinib (Iressa®); gemcitabine (Gemzar®); gentuzumab ozogamicin (Mylotarg®); goserelin acetate (Zoladex Implant®); goserelin acetate (Zoladex®); histrelin acetate (Histrelin implant®); hydroxyurea (Hydrea®); Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin®); idarubicin (Idamycin®); ifosfamide (IFEX®); imatinib Mensylate (Gleevec®); interferon alpha 2a (Roferon A®); Interferon alfa-2b (Intron A®); irinotecan (Camptosar®); lenalidomide (Revlimid®); letrozole (Femara®); leucovorin (Wellcovorin®, Leucovorin®); Leuprolide Acetate (Eligard®); Levamisole (Ergamisol®); lomustine, CCNU (CeeBU®); mechlorethamine, nitrogen mustard (Mustargen®); megestrol acetate (Megace®); melphalan, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurine, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®); methotrexate (Methotrexate®); methoxsalen (Uvadex®); mitomycin C (Mutamycin®); mitotane (Lysodren®); mitoxantrone (Novantrone®); nandrolone fenpropionate (Durabolin-50®); Nelarabine (Arranon®); Nofetumomab (Verluma®); Oprelvekin (Neumega®); oxaliplatin (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); particles linked to paclitaxel protein (Abraxane®); palifermin (Kepivance®); pamidronate (Aredia®); pegademase (Adagen (Bovine Pegademase)®); pegaspargase (Oncaspar®); Pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexed disodium (Alimta®); pentostatin (Nipent®); pipobroman (Vercyte®); plicamycin, mithramycin (Mithracin®); sodium porfimer (Photofrin®); procarbazine (Matulane®); quinacrine (Atabrine®); Rasburicase (Elitek®); Rituximab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); Sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); streptozocin (Zanosar®); sunitinib maleate (Sutent®); talc (Sclerosol®); tamoxifen (Nolvadex®); temozolomide (Temodar®); teniposide, VM-26 (Vumon®); testolactone (Teslac®); thioguanine, 6-TG (Thioguanine®); thiotepa (Thioplex®); topotecan (Hycamtin®); toremifene (Fareston®); Tositumomab (Bexxar®); Tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®); Trastuzumab (Herceptin®); tretinoin, ATRA (Vesanoid®); Uracil Mustard (Uracil Mustard Capsules®); valrubicin (Valstar®); vinblastine (Velban®); vincristine (Oncovin®); vinorelbine (Navelbine®); zoledronate (Zometa®) and vorinostat (Zolinza®).

[00122] Para um exame abrangente de terapias de câncer atualizadas ver, http://www.nci.nih.gov/, uma lista dos medicamentos oncológicos aprovados pela FDA em http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe. htm, e The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999, cujos conteúdos totais são aqui incorporados por referência.[00122] For a comprehensive review of up-to-date cancer therapies see, http://www.nci.nih.gov/, a list of FDA-approved oncology drugs at http://www.fda.gov/cder/cancer/ druglistframe. htm, and The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

[00123] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional pode ser um composto ou composição que inibe ou modula uma proteína de reparação de excisão de base. Em algumas modalidades, a proteína de reparação de excisão de base é selecionada de UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glicosilases); APE1, APEX2 (AP endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I e III); XRCC1 (LIG3 acessório); PNK, PNKP (polinucleotídeo cinase e fosfatase); PARP1, PARP2 (Poli(ADP-Ribose) Polimerases); PolB, PolG (polimerases); FEN1 (endonuclease) ou Aprataxina. Em outras modalidades, a proteína de reparação de excisão de base é selecionada de PARP1, PARP2 ou PolB. Em mais outras modalidades, a proteína de reparação de excisão de base é selecionada de PARP1 ou PARP2. Em outras modalidades, o agente que inibe ou modula PARP1 ou PARP2 é selecionado de Olaparib (também conhecido como AZD2281 ou KU-0059436), Iniparib (também conhecido como BSI-201 ou SAR240550), Veliparib (também conhecido como ABT-888), Rucaparib (também conhecido como PF- 01367338), CEP-9722, INO-1001, MK-4827, E7016, BMN673 ou AZD2461.[00123] In another embodiment, the additional therapeutic agent may be a compound or composition that inhibits or modulates a base excision repair protein. In some embodiments, the base excision repair protein is selected from UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glycosylases); APE1, APEX2 (AP endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I and III); XRCC1 (accessory ON3); PNK, PNKP (polynucleotide kinase and phosphatase); PARP1, PARP2 (Poly(ADP-Ribose) Polymerases); PolB, PolG (polymerases); FEN1 (endonuclease) or Aprataxin. In other embodiments, the base excision repair protein is selected from PARP1, PARP2, or PolB. In further embodiments, the base excision repair protein is selected from PARP1 or PARP2. In other embodiments, the agent that inhibits or modulates PARP1 or PARP2 is selected from Olaparib (also known as AZD2281 or KU-0059436), Iniparib (also known as BSI-201 or SAR240550), Veliparib (also known as ABT-888), Rucaparib (also known as PF- 01367338), CEP-9722, INO-1001, MK-4827, E7016, BMN673 or AZD2461.

[00124] Outra modalidade fornece um método de tratamento de câncer compreendendo a administração de um composto útil para inibir a Chk1 cinase; a administração de um composto útil para inibir a ATR cinase; a administração de um composto útil para inibir ou modular PARP1 ou PARP2; e a administração de um agente de dano ao DNA. Em outra modalidade, o agente de dano ao DNA é selecionado de radiação ionizante ou cisplatina. Em algumas modalidades, o agente de dano ao DNA é a cisplatina. Em outras modalidades, o agente de dano ao DNA é a radiação ionizante. Em algumas modalidades, o agente que inibe ou modula PARP1 ou PARP2 é selecionado de Olaparib (também conhecido como AZD2281 ou KU-0059436), Iniparib (também conhecido como BSI-201 ou SAR240550), Veliparib (também conhecido como ABT-888), Rucaparib (também conhecido como PF-01367338), CEP-9722, INO- 1001, MK-4827, E7016, BMN673 ou AZD2461. Em outras modalidades, o agente que inibe ou modula PARP1 ou PARP2 é Veliparib (também conhecido como ABT-888) ou Rucaparib.[00124] Another modality provides a method of treating cancer comprising administering a compound useful for inhibiting Chk1 kinase; administering a compound useful for inhibiting ATR kinase; administering a compound useful for inhibiting or modulating PARP1 or PARP2; and the administration of a DNA damaging agent. In another embodiment, the DNA damaging agent is selected from ionizing radiation or cisplatin. In some embodiments, the DNA damaging agent is cisplatin. In other embodiments, the DNA damaging agent is ionizing radiation. In some embodiments, the agent that inhibits or modulates PARP1 or PARP2 is selected from Olaparib (also known as AZD2281 or KU-0059436), Iniparib (also known as BSI-201 or SAR240550), Veliparib (also known as ABT-888), Rucaparib (also known as PF-01367338), CEP-9722, INO-1001, MK-4827, E7016, BMN673, or AZD2461. In other embodiments, the agent that inhibits or modulates PARP1 or PARP2 is Veliparib (also known as ABT-888) or Rucaparib.

Modos de Administração e Formas de DosagemModes of Administration and Dosage Forms

[00125] As composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser administradas a seres humanos e outros animais por via oral, por via retal, por via parenteral, por via intracisternal, por via intravaginal, por via intraperitoneal, por via tópica (como por pós, pomadas ou gotas), por via bucal, como uma pulverização oral ou nasal, ou coisa parecida, dependendo da gravidade da infecção sendo tratada. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser administrados por via oral ou por via parenteral em níveis de dosagem de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 50 mg/kg e preferivelmente de cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, de peso corporal do paciente por dose para se obter o efeito terapêutico desejado.[00125] The pharmaceutically acceptable compositions of this invention can be administered to humans and other animals orally, rectally, parenterally, intracisternally, intravaginally, intraperitoneally, topically (such as by powders, ointments or drops), orally, as an oral or nasal spray, or the like, depending on the severity of the infection being treated. In certain embodiments, the compounds of the invention may be administered orally or parenterally at dosage levels of from about 0.01 mg/kg to about 50 mg/kg and preferably from about 1 mg/kg to about 25 mg/kg of the patient's body weight per dose to obtain the desired therapeutic effect.

[00126] As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, mas não são limitadas a estas, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além dos compostos ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente utilizados na técnica tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetilformamida, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, azeitona, mamona e gergelim), glicerol, álcool tetra-hidrofurfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e suas misturas. Além dos diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes tais como agentes umectantes, agentes emulsificantes e de suspensão, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes.[00126] Liquid dosage forms for oral administration include, but are not limited to, pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. In addition to the active compounds, liquid dosage forms may contain inert diluents commonly used in the art such as, for example, water or other solvents, solubilizing agents and emulsifiers such as ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, alcohol benzyl, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, dimethylformamide, oils (in particular, cottonseed, peanut, corn, germ, olive, castor and sesame oils), glycerol, tetrahydrofurfuryl alcohol, polyethylene sorbitan fatty acid glycols and esters, and mixtures thereof. In addition to inert diluents, oral compositions may also include adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening, flavoring and perfuming agents.

[00127] As preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida utilizando agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspensão. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução, suspensão ou emulsão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3- butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, a solução de Ringer, U.S.P. e a solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, os óleos estéreis fixos são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo suave pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, os ácidos gordos tais como ácido oléico, são utilizados na preparação de injetáveis.[00127] Injectable preparations, for example, sterile injectable aqueous or oleaginous suspensions, can be formulated according to the known technique using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable solution, suspension or emulsion in a parenterally acceptable non-toxic diluent or solvent, for example, as a solution in 1,3-butanediol. Acceptable vehicles and solvents that may be employed include water, Ringer's solution, U.S.P. and isotonic sodium chloride solution. Furthermore, fixed sterile oils are conventionally employed as a solvent or suspending medium. For this purpose, any bland fixed oil may be employed, including synthetic mono- or diglycerides. Furthermore, fatty acids such as oleic acid are used in the preparation of injectables.

[00128] As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, pela filtração através de um filtro de retenção de bactérias ou mediante a incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersas em água esterilizada ou outro meio injetável estéril antes do uso.[00128] Injectable formulations can be sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter or by incorporating sterilizing agents in the form of sterile solid compositions that can be dissolved or dispersed in sterile water or other sterile injectable medium before use.

[00129] De modo a prolongar o efeito de um composto da presente invenção, é muitas vezes desejável retardar a absorção do composto a partir de injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser efetuado através do uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com fraca solubilidade em água. A taxa de absorção do composto depende então da sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de uma forma de composto administrada por via parenteral é executada pela dissolução ou suspensão do composto em um veículo oleoso. As formas de depósito injetáveis são preparadas através da formação de matrizes microencapsuladas do composto em polímeros biodegradáveis tais como polilactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da relação do composto para polímero e da natureza do polímero particular empregado, a taxa de libertação de composto pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injetáveis de depósito também são preparadas através da captura do composto em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com os tecidos corporais.[00129] In order to prolong the effect of a compound of the present invention, it is often desirable to delay the absorption of the compound from subcutaneous or intramuscular injection. This can be accomplished through the use of a liquid suspension of crystalline or amorphous material with poor solubility in water. The rate of absorption of the compound then depends on its rate of dissolution which, in turn, may depend on the crystal size and crystal form. Alternatively, delayed absorption of a parenterally administered form of the compound is accomplished by dissolving or suspending the compound in an oily vehicle. Injectable depot forms are prepared by forming microencapsulated matrices of the compound in biodegradable polymers such as polylactide-polyglycolide. Depending on the ratio of compound to polymer and the nature of the particular polymer employed, the rate of compound release can be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly(orthoesters) and poly(anhydrides). Depot injectable formulations are also prepared by capturing the compound in liposomes or microemulsions that are compatible with body tissues.

[00130] As composições para a administração retal ou vaginal são preferivelmente supositórios que podem ser preparados mediante a mistura dos compostos desta invenção com excipientes ou portadores não irritantes adequados tais como manteiga de cacau, polietileno glicol ou uma cera de supositório que são sólidos na temperatura ambiente, mas líquidos na temperatura corporal e, portanto, derretem no reto ou na cavidade vaginal e liberam o composto ativo.[00130] Compositions for rectal or vaginal administration are preferably suppositories that can be prepared by mixing the compounds of this invention with suitable non-irritating excipients or carriers such as cocoa butter, polyethylene glycol or a suppository wax that are solid at the temperature ambient, but liquids at body temperature and therefore melt in the rectum or vaginal cavity and release the active compound.

[00131] As formas de dosagem sólidas para a administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou portador inerte farmaceuticamente aceitável tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou a) cargas ou diluentes tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido salicílico, b) aglutinantes tais como, por exemplo, carboximeetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarose e acácia, c) umectantes tais como glicerol, d) agentes desintegrantes tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio, e) agentes de retardo da solução tais como parafina, f) aceleradores de absorção tais como compostos de amônio quaternário, g) agentes umectantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, h) absorventes tais como caulim e argila de bentonita, e i) lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e suas misturas. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tamponantes.[00131] Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders and granules. In such solid dosage forms, the active compound is admixed with at least one inert pharmaceutically acceptable excipient or carrier such as sodium citrate or dicalcium phosphate and/or a) fillers or diluents such as starches, lactose, sucrose, glucose, mannitol and salicylic acid, b) binders such as, for example, carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidinone, sucrose and acacia, c) humectants such as glycerol, d) disintegrating agents such as agar-agar, calcium carbonate, potato starch or tapioca, alginic acid, certain silicates and sodium carbonate, e) solution retarding agents such as paraffin, f) absorption accelerators such as quaternary ammonium compounds, g) wetting agents such as, for example, cetyl alcohol and sodium monostearate glycerol, h) absorbents such as kaolin and bentonite clay, and i) lubricants such as talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate and mixtures thereof. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage form may also comprise buffering agents.

[00132] As composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina carregadas macias e sólidas utilizando tais excipientes como lactose ou açúcar de leite, assim como polietileno glicóis de elevado peso molecular e similares. As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e estruturas tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Elas podem opcionalmente conter agentes opacificadores e também podem ser de uma composição que liberam apenas os ingredientes ativos, ou preferencialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada. Exemplos de composições de incrustação que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. As composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina macias e sólidas utilizando tais excipientes como lactose ou açúcar de leite assim como polietileno glicóis de peso molecular elevado e similares.[00132] Solid compositions of a similar type can also be employed as fillers in soft and solid filled gelatin capsules using such excipients as lactose or milk sugar, as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like. Solid dosage forms of tablets, tablets, capsules, pills and granules can be prepared with coatings and structures such as enteric coatings and other coatings well known in the art of pharmaceutical formulation. They may optionally contain opacifying agents and may also be of a composition that releases only the active ingredients, or preferentially, in a certain part of the intestinal tract, optionally, in a delayed manner. Examples of inlay compositions that may be used include polymeric substances and waxes. Solid compositions of a similar type may also be employed as fillers in soft and solid gelatin capsules using such excipients as lactose or milk sugar as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like.

[00133] Os compostos ativos também podem estar na forma microencapsulada com um ou mais excipientes como acima mencionado. As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e estruturas tais como revestimentos entéricos, revestimentos de controle de liberação e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte tal como sacarose, lactose ou amido. Tais formas de dosagem também podem compreender, como é prática normal, substâncias adicionais diferentes de diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes para a formação de comprimidos e outros auxiliares de formação de comprimidos tais como estearato de magnésio e celulose microcristalina. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes. Elas podem opcionalmente conter agentes opacificadores e também podem ser de uma composição que libera apenas os ingredientes ativos, ou preferencialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada. Exemplos de composições de incrustação que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras.[00133] The active compounds can also be in microencapsulated form with one or more excipients as mentioned above. Solid dosage forms of tablets, tablets, capsules, pills and granules can be prepared with coatings and structures such as enteric coatings, release control coatings and other coatings well known in the art of pharmaceutical formulation. In such solid dosage forms, the active compound may be mixed with at least one inert diluent such as sucrose, lactose or starch. Such dosage forms may also comprise, as is normal practice, additional substances other than inert diluents, for example, tableting lubricants and other tableting aids such as magnesium stearate and microcrystalline cellulose. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage forms may also comprise buffering agents. They may optionally contain opacifying agents and may also be of a composition that releases only the active ingredients, or preferably, in a certain part of the intestinal tract, optionally, in a delayed manner. Examples of inlay compositions that may be used include polymeric substances and waxes.

[00134] As formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem unguentos, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, pulverizações, inalantes ou adesivos. O componente ativo é misturado sob condições estéreis com um portador farmaceuticamente aceitável e quaisquer conservantes ou tampões necessários visto que podem ser necessários. A formulação oftálmica, gotas auriculares e gotas oculares são também contempladas como estando dentro do escopo desta invenção. Adicionalmente, a presente invenção contempla o uso de emplastros transdérmicos, os quais possuem a vantagem adicional de fornecer liberação controlada de um composto no corpo. Tais formas de dosagem podem ser produzidas através da dissolução ou dispensação do composto no meio apropriado. Os intensificadores de absorção também podem ser utilizados para aumentar o fluxo do composto através da pele. A taxa pode ser controlada por fornecer uma membrana de controle da taxa ou por dispersar o composto em uma matriz polimérica ou gel.[00134] Dosage forms for topical or transdermal administration of a compound of this invention include ointments, pastes, creams, lotions, gels, powders, solutions, sprays, inhalants or patches. The active component is mixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and any necessary preservatives or buffers as may be necessary. Ophthalmic formulation, ear drops and eye drops are also contemplated as being within the scope of this invention. Additionally, the present invention contemplates the use of transdermal patches, which have the additional advantage of providing controlled release of a compound in the body. Such dosage forms can be produced by dissolving or dispensing the compound in the appropriate medium. Absorption enhancers can also be used to increase the flow of the compound through the skin. The rate can be controlled by providing a rate controlling membrane or by dispersing the compound in a polymeric matrix or gel.

[00135] As composições da presente invenção podem ser administradas por via oral, por via parenteral, através da pulverização por inalação, por via tópica, por via retal, por via nasal, por via bucal, por via vaginal ou através de um reservatório implantado. O termo "parenteral" tal como aqui utilizado inclui, mas não se limita às técnicas de injeção ou infusão subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intra-hepática, intralesional e intracraniana. De preferência, as composições são administradas por via oral, por via intraperitoneal ou por via intravenosa.[00135] The compositions of the present invention can be administered orally, parenterally, through inhalation spray, topically, rectally, nasally, buccally, vaginally or through an implanted reservoir . The term "parenteral" as used herein includes, but is not limited to, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraarticular, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intrahepatic, intralesional, and intracranial injection or infusion techniques. Preferably, the compositions are administered orally, intraperitoneally or intravenously.

[00136] As formas injetáveis estéreis das composições desta invenção podem ser suspensões aquosas ou oleaginosas. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas na especialidade utilizando agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspensão. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, os óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Os ácidos graxos, tais como o ácido oleico e os seus derivados de glicerídeo são úteis na preparação de injetáveis, assim como são os óleos naturais farmaceuticamente aceitáveis, tais como o azeite ou o óleo de rícino, especialmente nas suas versões polioxietiladas. Estas soluções ou suspensões de óleo também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de cadeia longa, tal como carboximetil celulose ou agentes dispersantes semelhantes que são comumente utilizados na formulação de formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis incluindo emulsões e suspensões. Outros tensoativos comumente utilizados, tais como Tweens, Spans e outros agentes emulsificantes ou intensificadores da biodisponibilidade que são comumente utilizados na fabricação de formas de dosagem sólidas, líquidas ou outras farmaceuticamente aceitáveis também podem ser utilizados para os propósitos de formulação.[00136] Sterile injectable forms of the compositions of this invention can be aqueous or oleaginous suspensions. These suspensions may be formulated according to techniques known in the art using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable solution or suspension in a parenterally acceptable non-toxic diluent or solvent, for example, as a solution in 1,3-butanediol. Among the acceptable vehicles and solvents that can be used are water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution. Furthermore, sterile fixed oils are conventionally employed as a solvent or suspending medium. For this purpose, any bland fixed oil can be employed including synthetic mono- or diglycerides. Fatty acids such as oleic acid and its glyceride derivatives are useful in the preparation of injectables, as are pharmaceutically acceptable natural oils such as olive oil or castor oil, especially in their polyoxyethylated versions. These oil solutions or suspensions may also contain a long-chain alcohol diluent or dispersant, such as carboxymethyl cellulose or similar dispersing agents that are commonly used in the formulation of pharmaceutically acceptable dosage forms including emulsions and suspensions. Other commonly used surfactants, such as Tweens, Spans and other emulsifying or bioavailability enhancing agents that are commonly used in the manufacture of solid, liquid or other pharmaceutically acceptable dosage forms can also be used for formulation purposes.

[00137] As composições farmacêuticas desta invenção podem ser administradas por via oral em qualquer forma de dosagem aceitável por via oral incluindo, mas não limitada a estas, cápsulas, comprimidos, suspensões ou soluções aquosas. No caso de comprimidos para uso oral, os portadores comumente utilizados incluem, mas não são limitados a estes, lactose e amido de milho. Os agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, também são tipicamente adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, os diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando as suspensões aquosas são requeridas para uso oral, o ingrediente ativo é combinado com agentes emulsificantes e de suspensão. Se desejável, certos agentes adoçantes, aromatizantes ou corantes também podem ser adicionados.[00137] The pharmaceutical compositions of this invention can be administered orally in any orally acceptable dosage form including, but not limited to, capsules, tablets, suspensions or aqueous solutions. In the case of tablets for oral use, commonly used carriers include, but are not limited to, lactose and corn starch. Lubricating agents, such as magnesium stearate, are also typically added. For oral administration in a capsule form, useful diluents include lactose and dry corn starch. When aqueous suspensions are required for oral use, the active ingredient is combined with emulsifying and suspending agents. If desired, certain sweetening, flavoring or coloring agents may also be added.

[00138] Alternativamente, as composições farmacêuticas desta invenção podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. Estes podem ser preparados através da mistura do agente com um excipiente não irritativo adequado que é sólido na temperatura ambiente, mas líquido na temperatura retal e, portanto, irá derreter no reto para libertar o medicamento. Tais materiais incluem, mas não são limitados a estes, manteiga de cacau, cera de abelha e polietileno glicóis.[00138] Alternatively, the pharmaceutical compositions of this invention can be administered in the form of suppositories for rectal administration. These can be prepared by mixing the agent with a suitable non-irritating excipient which is solid at room temperature but liquid at rectal temperature and will therefore melt in the rectum to release the medicine. Such materials include, but are not limited to, cocoa butter, beeswax and polyethylene glycols.

[00139] As composições farmacêuticas desta invenção também podem ser administradas por via tópica, especialmente quando o alvo de tratamento inclui áreas ou órgãos facilmente acessíveis mediante a aplicação tópica, incluindo doenças do olho, da pele ou do trato intestinal inferior. As formulações tópicas adequadas são facilmente preparadas para cada uma destas áreas ou órgãos.[00139] The pharmaceutical compositions of this invention can also be administered topically, especially when the treatment target includes areas or organs easily accessible through topical application, including diseases of the eye, skin or lower intestinal tract. Suitable topical formulations are easily prepared for each of these areas or organs.

[00140] A aplicação tópica para o trato intestinal inferior pode ser efetuada em uma formulação de supositório retal (ver acima) ou em uma formulação de enema adequada. Curativos topicamente transdérmicos também podem ser utilizados.[00140] Topical application to the lower intestinal tract can be carried out in a rectal suppository formulation (see above) or in a suitable enema formulation. Topically transdermal dressings can also be used.

[00141] Para as aplicações tópicas, as composições farmacêuticas podem ser formuladas em um unguento adequado contendo o componente ativo colocado em suspensão ou dissolvido em um ou mais portadores. Os portadores para a administração tópica dos compostos desta invenção incluem, mas não são limitados a estes, óleo mineral, vaselina líquida, vaselina líquida, propileno glicol, polioxietileno, composto de polioxipropileno, cera emulsificante e água. Alternativamente, as composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma loção ou creme adequado contendo os componentes ativos colocados em suspensão ou dissolvidos em um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis. Os portadores adequados incluem, mas não são limitados a estes, óleo mineral, monoestearato de sorbitano, polissorbato 60, cera de ésteres cetílicos, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água.[00141] For topical applications, pharmaceutical compositions can be formulated in a suitable ointment containing the active component suspended or dissolved in one or more carriers. Carriers for topical administration of the compounds of this invention include, but are not limited to, mineral oil, liquid petrolatum, liquid petrolatum, propylene glycol, polyoxyethylene, polyoxypropylene compound, emulsifying wax and water. Alternatively, the pharmaceutical compositions may be formulated into a suitable lotion or cream containing the active components suspended or dissolved in one or more pharmaceutically acceptable carriers. Suitable carriers include, but are not limited to, mineral oil, sorbitan monostearate, polysorbate 60, cetyl ester wax, cetearyl alcohol, 2-octyldodecanol, benzyl alcohol and water.

[00142] Para uso oftálmico, as composições farmacêuticas podem ser formuladas como suspensões micronizadas em solução salina estéril isotônica com pH ajustado, ou, de preferência, como soluções em solução salina estéril isotônica com pH ajustado, com ou sem um conservante tal como cloreto de benzilalcônio. Alternativamente, para utilizações oftálmicas, as composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma pomada tal como vaselina.[00142] For ophthalmic use, pharmaceutical compositions can be formulated as micronized suspensions in pH-adjusted isotonic sterile saline solution, or, preferably, as solutions in pH-adjusted isotonic sterile saline solution, with or without a preservative such as sodium chloride. benzylalkonium. Alternatively, for ophthalmic uses, the pharmaceutical compositions can be formulated into an ointment such as petroleum jelly.

[00143] As composições farmacêuticas desta invenção também podem ser administradas por aerossol nasal ou inalação. Tais composições são preparadas de acordo com técnicas bem conhecidas na especialidade de formulação farmacêutica e podem ser preparadas como soluções em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para aumentar a biodisponibilidade, fluorocarbonos e/ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes convencionais.[00143] The pharmaceutical compositions of this invention can also be administered by nasal aerosol or inhalation. Such compositions are prepared according to techniques well known in the art of pharmaceutical formulation and may be prepared as solutions in saline, employing benzyl alcohol or other suitable preservatives, absorption promoters to increase bioavailability, fluorocarbons and/or other solubilizing or dispersing agents. conventional.

[00144] A quantidade de inibidor de proteína cinase que pode ser combinada com os materiais portadores para produzir uma única forma de dosagem variará dependendo do hospedeiro tratado, do modo particular de administração. De preferência, as composições devem ser formuladas de modo que uma dosagem entre 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal/dose do inibidor possa ser administrada a um paciente que recebe estas composições.[00144] The amount of protein kinase inhibitor that can be combined with the carrier materials to produce a single dosage form will vary depending on the host treated, the particular mode of administration. Preferably, the compositions should be formulated so that a dosage of between 0.01 to 100 mg/kg body weight/dose of inhibitor can be administered to a patient receiving these compositions.

[00145] Deve também ficar entendido que uma dosagem específica e um regime de tratamento para qualquer doente particular dependerão de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, sexo, a dieta, o tempo de administração, a taxa de excreção, combinação medicamentosa e a avaliação do médico de tratamento e a gravidade da doença particular sendo tratada. A quantidade de inibidor dependerá também do composto particular na composição.[00145] It should also be understood that a specific dosage and treatment regimen for any particular patient will depend on a variety of factors, including the activity of the specific compound employed, age, body weight, general health, sex, diet , time of administration, rate of excretion, drug combination, and the treating physician's assessment and severity of the particular disease being treated. The amount of inhibitor will also depend on the particular compound in the composition.

Amostras BiológicasBiological Samples

[00146] Como inibidores da via de ATR, os compostos e composições desta invenção também são úteis em amostras biológicas. Um aspecto da invenção refere-se à inibição da atividade de ATR e Chk1 cinase em uma amostra biológica, cujo método compreende o contato de dita amostra biológica com um composto que inibe a atividade de ATR cinase e um composto que inibe a atividade de Chk1 cinase. Alternativamente, composições separadas compreendendo estes compostos podem ser utilizadas. O termo "amostra biológica" como aqui utilizado significa uma amostra in vitro ou ex vivo, incluindo, sem limitação, as culturas celulares ou seus extratos; material submetido a biópsia obtido de um mamífero ou seus extratos; e sangue, saliva, urina, fezes, sêmen, lágrimas ou outros fluidos corporais ou seus extratos. O termo "compostos" inclui compostos de fórmula I e fórmula II.[00146] As inhibitors of the ATR pathway, the compounds and compositions of this invention are also useful in biological samples. One aspect of the invention relates to the inhibition of ATR and Chk1 kinase activity in a biological sample, the method of which comprises contacting said biological sample with a compound that inhibits ATR kinase activity and a compound that inhibits Chk1 kinase activity. . Alternatively, separate compositions comprising these compounds can be used. The term "biological sample" as used herein means an in vitro or ex vivo sample, including, without limitation, cell cultures or extracts thereof; biopsied material obtained from a mammal or its extracts; and blood, saliva, urine, feces, semen, tears or other bodily fluids or extracts thereof. The term "compounds" includes compounds of formula I and formula II.

[00147] A inibição da atividade de ATR e Chk1 cinase em uma amostra biológica é útil para uma variedade de objetivos que são conhecidos de uma pessoa de habilidade na técnica. Exemplos de tais propósitos incluem, mas não são limitados a estes, transfusão de sangue, transplante de órgãos e armazenamento de espécimes biológicos.[00147] Inhibition of ATR and Chk1 kinase activity in a biological sample is useful for a variety of purposes that are known to a person of skill in the art. Examples of such purposes include, but are not limited to, blood transfusion, organ transplantation, and storage of biological specimens.

Estudo de Proteínas CinasesStudy of Protein Kinases

[00148] Outro aspecto desta invenção refere-se ao estudo de proteína cinases em fenômenos biológicos e patológicos; o estudo das vias de transdução de sinal intracelulares mediadas por tais proteína cinases; e a avaliação comparativa de novos inibidores da proteína cinase. Exemplos de tais utilizações incluem, mas não são limitados a estes, ensaios biológicos tais como ensaios enzimáticos e ensaios baseados na célula.[00148] Another aspect of this invention refers to the study of protein kinases in biological and pathological phenomena; the study of intracellular signal transduction pathways mediated by such protein kinases; and the comparative evaluation of new protein kinase inhibitors. Examples of such uses include, but are not limited to, biological assays such as enzymatic assays and cell-based assays.

[00149] A atividade dos compostos como inibidores da proteína cinase pode ser experimentada in vitro, in vivo ou em uma linhagem celular. Os ensaios in vitro incluem ensaios que determinam a inibição da atividade de cinase ou da atividade de ATPase da cinase ativada. Os ensaios in vitro alternativos quantificam a capacidade do inibidor de se ligar à proteína cinase e podem ser medidos por marcação radioativa do inibidor antes da ligação, isolamento do complexo inibidor/cinase e determinação da quantidade de marcador radioativo ligado, ou através da operação de uma experiência de competição onde novos inibidores são incubados com a cinase ligada aos radioligantes conhecidos. As condições detalhadas para o ensaio de um composto utilizado nesta invenção como um inibidor de ATR são apresentadas nos Exemplos abaixo.[00149] The activity of compounds as protein kinase inhibitors can be experimented in vitro, in vivo or in a cell line. In vitro assays include assays that determine inhibition of the kinase activity or ATPase activity of the activated kinase. Alternative in vitro assays quantify the ability of the inhibitor to bind to the protein kinase and can be measured by radiolabeling the inhibitor prior to binding, isolating the inhibitor/kinase complex and determining the amount of radioactive label bound, or by operating a competition experiment where new inhibitors are incubated with the kinase linked to known radioligands. Detailed conditions for testing a compound used in this invention as an ATR inhibitor are set forth in the Examples below.

Métodos de T ratamentoTreatment Methods

[00150] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de câncer em um paciente compreendendo a administração de um composto que inibe a proteína cinase ATR; e administração de um composto que inibe a proteína cinase Chk1 ("terapia de combinação ATR/Chk1").[00150] In one aspect, the present invention provides a method for treating cancer in a patient comprising administering a compound that inhibits ATR protein kinase; and administration of a compound that inhibits the Chk1 protein kinase ("ATR/Chk1 combination therapy").

[00151] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de câncer num paciente compreendendo a administração de um composto que inibe a proteína cinase ATR; a administração de um composto que inibe a proteína cinase Chk 1; e a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais independentemente selecionados de um agente de dano ao DNA, em que o agente terapêutico adicional é apropriado para a doença sendo tratada; e o agente terapêutico adicional é administrado em conjunto com os compostos como uma forma de dosagem única ou separadamente dos compostos como parte de uma forma de dosagem múltipla.[00151] In another aspect, the present invention provides a method for treating cancer in a patient comprising administering a compound that inhibits ATR protein kinase; administration of a compound that inhibits Chk 1 protein kinase; and administering one or more additional therapeutic agents independently selected from a DNA damaging agent, wherein the additional therapeutic agent is appropriate for the disease being treated; and the additional therapeutic agent is administered together with the compounds as a single dosage form or separately from the compounds as part of a multiple dosage form.

[00152] Em algumas modalidades, o agente de dano ao DNA é independentemente selecionado do tratamento por quimioterapia ou radiação.[00152] In some embodiments, the DNA damaging agent is selected independently of chemotherapy or radiation treatment.

[00153] Em outra modalidade, o agente de dano ao DNA é selecionado de radiação ionizante, neocarzinostatina radiomimética, um agente de platina, um inibidor Topo I, um inibidor Topo II, um antimetabólito, um agente alquilante, um sulfonato de alquila, um antimetabólito ou um antibiótico. Em outras modalidades, dito agente de danificação de DNA é selecionado de radiação ionizante, um agente de platina, um inibidor Topo I, um inibidor Topo II, um antimetabólito, um agente alquilante ou um sulfonato d e alquila.[00153] In another embodiment, the DNA damaging agent is selected from ionizing radiation, radiomimetic neocarzinostatin, a platinum agent, a Topo I inhibitor, a Topo II inhibitor, an antimetabolite, an alkylating agent, an alkyl sulfonate, an antimetabolite or an antibiotic. In other embodiments, said DNA damaging agent is selected from ionizing radiation, a platinum agent, a Topo I inhibitor, a Topo II inhibitor, an antimetabolite, an alkylating agent or an alkyl sulfonate.

[00154] Em mais outra modalidade, dito agente de platina é independentemente selecionado de Cisplatina, Oxaliplatina, Carboplatina, Nedaplatina, Lobaplatina, Tetranitrato de Triplatina, Picoplatina, Satraplatina, ProLindac e Aroplatina; dito inibidor de Topo I é selecionado de Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, Rubitecano e Belotecano; dito inibidor de Topo II é selecionado de Etoposídeo, Daunorrubicina, Doxorrubicina, Aclarrubicina, Epirrubicina, Idarrubicina, Anrubicina, Pirarrubicina, Valrubicina, Zorrubicina e Teniposídeo; dito antimetabólito é selecionado de Aminopterina, Metotrexato, Pemetrexed, Raltitrexed, Pentostatina, Cladribina, Clofarabina, Fludarabina, Tioguanina, Mercaptopurina, Fluorouracila, Capecitabina, Tegafur, Carmofur, Floxuridina, Citarabina, Gencitabina, Azacitidina e Hidroxiureia; dito agente de alquilação é selecionado de Mecloretamina, Ciclofosfamida, Ifosfamida, Trofosfamida, Clorambucial, Melfalano, Prednimustina, Bendamustina, Uramustina, Estramustina, Carmustina, Lomustina, Semustina, Fotemustina, Nimustina, Ranimustina, Estreptozocina, Bussulfan, Mannossulfan, Treossulfan, Carboquona, ThioTEPA, Triaziquona, Trietilenomelamina, Procarbazina, Dacarbazina, Temozolomida, Altretamina, Mitobronitol, Actinomicina, Bleomicina, Mitomicina e Plicamicina.[00154] In yet another embodiment, said platinum agent is independently selected from Cisplatin, Oxaliplatin, Carboplatin, Nedaplatin, Lobaplatin, Triplatin Tetranitrate, Picoplatin, Satraplatin, ProLindac and Aroplatin; said Topo I inhibitor is selected from Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, Rubitecan and Belotecan; said Topo II inhibitor is selected from Etoposide, Daunorubicin, Doxorubicin, Aclarrubicin, Epirubicin, Idarubicin, Anrubicin, Pyrrubicin, Valrubicin, Zorubicin and Teniposide; said antimetabolite is selected from Aminopterin, Methotrexate, Pemetrexed, Raltitrexed, Pentostatin, Cladribine, Clofarabine, Fludarabine, Thioguanine, Mercaptopurine, Fluorouracil, Capecitabine, Tegafur, Carmofur, Floxuridine, Cytarabine, Gemcitabine, Azacitidine and Hydroxyurea; said alkylating agent is selected from Mechlorethamine, Cyclophosphamide, Ifosfamide, Trofosfamide, Chlorambucial, Melphalan, Prednimustine, Bendamustine, Uramustine, Estramustine, Carmustine, Lomustine, Semustine, Fotemustine, Nimustine, Ranimustine, Streptozocin, Busulfan, Mannosulfan, Treosulfan, Carboquone, ThioTEPA , Triaziquone, Triethylenemelamine, Procarbazine, Dacarbazine, Temozolomide, Altretamine, Mitobronitol, Actinomycin, Bleomycin, Mitomycin and Plicamycin.

[00155] Em mais outras modalidades, o dito agente de platina é independentemente selecionado de Cisplatina, Oxaliplatina, Carboplatina, Nedaplatina ou Satraplatina; o dito inibidor de Topo I é selecionado de Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, rubitecano; o dito inibidor de Topo II é selecionado de Etoposídeo; o dito antimetabólito é selecionado de metotrexato, pemetrexed, tioguanina, fludarabina, cladribina, citarabina, gencitabina, 6- mercaptopurina ou 5-fluorouracila; o dito agente alquilante é selecionado de mostardas de nitrogênio, nitrosoureias, triazenos, sulfonatos de alquila, Procarbazina ou aziridinas; e o dito antibiótico é selecionado de hidroxiureia, antraciclinas, antracenedionas ou família Streptomyces.[00155] In further embodiments, said platinum agent is independently selected from Cisplatin, Oxaliplatin, Carboplatin, Nedaplatin or Satraplatin; said Topo I inhibitor is selected from Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, rubitecan; said Topo II inhibitor is selected from Etoposide; said antimetabolite is selected from methotrexate, pemetrexed, thioguanine, fludarabine, cladribine, cytarabine, gemcitabine, 6-mercaptopurine or 5-fluorouracil; said alkylating agent is selected from nitrogen mustards, nitrosoureas, triazenes, alkyl sulfonates, Procarbazine or aziridines; and said antibiotic is selected from hydroxyurea, anthracyclines, anthracenediones or Streptomyces family.

[00156] Em algumas modalidades, o agente de dano ao DNA é um agente de platina. Em outras modalidades, o agente de dano ao DNA é um agente de platina selecionado de Cisplatina. Em mais outras modalidades, o agente de dano ao DNA é um agente de platina selecionado de Carboplatina.[00156] In some embodiments, the DNA damaging agent is a platinum agent. In other embodiments, the DNA damaging agent is a platinum agent selected from Cisplatin. In yet other embodiments, the DNA damaging agent is a platinum agent selected from Carboplatin.

[00157] Em ainda outra modalidade, o agente de dano ao DNA é a radiação ionizante.[00157] In yet another modality, the DNA damaging agent is ionizing radiation.

[00158] Em mais outras modalidades, o agente de dano ao DNA é um antimetabólito selecionado de gencitabina.[00158] In yet other embodiments, the DNA damaging agent is an antimetabolite selected from gemcitabine.

[00159] Em algumas modalidades, o agente de dano ao DNA é um inibidor de Topo I selecionado de Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, Rubitecano ou Belotecano.[00159] In some embodiments, the DNA damaging agent is a Topo I inhibitor selected from Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, Rubitecan or Belotecan.

[00160] Em outras modalidades, o agente de dano ao DNA é um inibidor de Topo II selecionado de Etoposídeo.[00160] In other embodiments, the DNA damaging agent is a Topo II inhibitor selected from Etoposide.

[00161] Em ainda outras modalidades, o agente de dano ao DNA é um agente alquilante selecionado de Temozolomida.[00161] In still other embodiments, the DNA damaging agent is an alkylating agent selected from Temozolomide.

[00162] Em mais outras modalidades, o agente de dano ao DNA é selecionado de um ou mais dos seguintes: Cisplatina, Carboplatina, Gencitabina, Etoposídeo, Temozolomida ou radiação ionizante. Em outras modalidades, o agente terapêutico adicional é Cisplatina ou Carboplatina.[00162] In further embodiments, the DNA damaging agent is selected from one or more of the following: Cisplatin, Carboplatin, Gemcitabine, Etoposide, Temozolomide or ionizing radiation. In other embodiments, the additional therapeutic agent is Cisplatin or Carboplatin.

[00163] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ATR/Chk1 é combinada com quimiorradiação, quimioterapia e/ou terapia de radiação. Como seria compreendido por uma pessoa de habilidade na técnica, quimiorradiação refere-se a um regime de tratamento que inclui tanto quimioterapia (tal como cisplatina) quanto radiação. Em algumas modalidades, a quimioterapia é cisplatina.[00163] In some embodiments, ATR/Chk1 combination therapy is combined with chemoradiation, chemotherapy and/or radiation therapy. As would be understood by one of skill in the art, chemoradiation refers to a treatment regimen that includes both chemotherapy (such as cisplatin) and radiation. In some embodiments, the chemotherapy is cisplatin.

[00164] Em uma ou mais modalidades, o câncer é um tumor sólido selecionado dos seguintes cânceres: oral, pulmonar, gastrointestinal: trato geniturinário, fígado, osso, sistema nervoso, ginecológico, pele, glândula tireoide ou glândula adrenal.[00164] In one or more embodiments, the cancer is a solid tumor selected from the following cancers: oral, lung, gastrointestinal: genitourinary tract, liver, bone, nervous system, gynecological, skin, thyroid gland or adrenal gland.

[00165] Em algumas modalidades, o câncer é um tumor sólido selecionado a partir dos seguintes cânceres: Oral: cavidade bucal, lábio, língua, boca, faringe; Cardíaco: sarcoma (angiossarcoma, fibrossarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (células escamosas ou epidermoides, células pequenas indiferenciadas, células grandes indiferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, laringe, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma dutal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma), cólon, colorretal; reto, Trato geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transição, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiais, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiossarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma, passagens biliares; Osso: sarcoma osteogênico (osteossarcoma), fibrossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiplo, cordoma maligno, tumor de células gigantes, osteocondroma (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide e tumores de células gigantes; Sistema nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiossarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanoma, retinoblastoma, tumores congênitos), neurofibroma da medula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), colo do útero (carcinoma do colo do útero, displasia cervical pré-tumor), ovários (carcinoma de ovário [cistadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinomas, carcinoma não classificado], tumores de células da granulosa e teca, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrossarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiossarcoma embrionário), trompas de falópio (carcinoma), mama; Hematológico: sangue (leucemia mieloide [aguda e crônica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, doenças mieloproliferativas, múltiplos mielomas, síndrome mielodisplásica), doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin [linfoma maligno] células pilosas; Pele: melanoma maligno, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, queratoacantoma, verrugas displásicas, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; Glândula tiroide: carcinoma papilífero da tiroide, carcinoma folicular da tiroide, câncer da tiroide não diferenciada, carcinoma medular da tiroide, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2A, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2B, câncer da tiroide medular familiar, feocromocitoma, paraganglioma; e Glândulas suprarrenais: neuroblastoma.[00165] In some embodiments, the cancer is a solid tumor selected from the following cancers: Oral: oral cavity, lip, tongue, mouth, pharynx; Cardiac: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, liposarcoma), myxoma, rhabdomyoma, fibroma, lipoma and teratoma; Lung: bronchogenic carcinoma (squamous or epidermoid cells, undifferentiated small cells, undifferentiated large cells, adenocarcinoma), alveolar (bronchiolar) carcinoma, bronchial adenoma, sarcoma, lymphoma, chondromatous hamartoma, mesothelioma; Gastrointestinal: esophagus (squamous cell carcinoma, larynx, adenocarcinoma, leiomyosarcoma, lymphoma), stomach (carcinoma, lymphoma, leiomyosarcoma), pancreas (ductal adenocarcinoma, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, carcinoid tumors, vipoma), small intestine (adenocarcinoma, lymphoma , carcinoid tumors, Kaposi's sarcoma, leiomyoma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), large intestine (adenocarcinoma, tubular adenoma, villous adenoma, hamartoma, leiomyoma), colon, colorectum; rectum, Genitourinary tract: kidney (adenocarcinoma, Wilm's tumor [nephroblastoma], lymphoma, leukemia), bladder and urethra (squamous cell carcinoma, transitional cell carcinoma, adenocarcinoma), prostate (adenocarcinoma, sarcoma), testis (seminoma, teratoma, embryonal carcinoma, teratocarcinoma, choriocarcinoma, sarcoma, interstitial cell carcinoma, fibroma, fibroadenoma, adenomatoid tumors, lipoma); Liver: hepatoma (hepatocellular carcinoma), cholangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, hepatocellular adenoma, hemangioma, bile passages; Bone: osteogenic sarcoma (osteosarcoma), fibrosarcoma, malignant fibrous histiocytoma, chondrosarcoma, Ewing's sarcoma, malignant lymphoma (reticular cell sarcoma), multiple myeloma, malignant chordoma, giant cell tumor, osteochondroma (osteocartilaginous exostoses), benign chondroma, chondroblastoma , chondromyxofibroma, osteoid osteoma and giant cell tumors; Nervous system: skull (osteoma, hemangioma, granuloma, xanthoma, osteitis deformans), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), brain (astrocytoma, medulloblastoma, glioma, ependymoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, congenital tumors), spinal cord neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma); Gynecological: uterus (endometrial carcinoma), cervix (cervical carcinoma, pretumor cervical dysplasia), ovaries (ovarian carcinoma [serous cystadenocarcinoma, cystadenocarcinomas, unclassified carcinoma], granulosa and theca cell tumors, tumors Sertoli-Leydig cell carcinoma, dysgerminoma, malignant teratoma), vulva (squamous cell carcinoma, intraepithelial carcinoma, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (clear cell carcinoma, squamous cell carcinoma, botryoid sarcoma (embryonic rhabdomyosarcoma), fallopian tubes fallopian (carcinoma), breast; Hematological: blood (myeloid leukemia [acute and chronic], acute lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, myeloproliferative diseases, multiple myelomas, myelodysplastic syndrome), Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphoma [malignant lymphoma] cells hair; Skin: malignant melanoma, basal cell carcinoma, squamous cell carcinoma, Kaposi's sarcoma, keratoacanthoma, dysplastic warts, lipoma, angioma, dermatofibroma, keloids, psoriasis; Thyroid gland: papillary thyroid carcinoma, follicular thyroid carcinoma, undifferentiated thyroid cancer, medullary thyroid carcinoma, multiple endocrine neoplasia type 2A, multiple endocrine neoplasia type 2B, familial medullary thyroid cancer, pheochromocytoma, paraganglioma; and Adrenal glands: neuroblastoma.

[00166] Em outra modalidade, o câncer é selecionado de câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas, câncer do pâncreas, câncer do trato biliar, câncer da cabeça e pescoço, câncer da bexiga, câncer colorretal, glioblastoma, câncer esofágico, carcinoma hepatocelular, ou câncer do ovário. Em outras modalidades, o câncer é selecionado de câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas e câncer da mama triplo negativo. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado de câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas, câncer do ovário seroso e câncer da mama triplo negativo.[00166] In another embodiment, the cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, head and neck cancer, bladder cancer, colorectal cancer, glioblastoma , esophageal cancer, hepatocellular carcinoma, or ovarian cancer. In other embodiments, the cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, and triple negative breast cancer. In some embodiments, the cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, serous ovarian cancer, and triple negative breast cancer.

[00167] Outra modalidade fornece um método de tratamento de câncer da mama utilizando a terapia de combinação ATR/Chk1 aqui descrita em combinação com um agente de platina. Em algumas modalidades, o câncer da mama é um câncer da mama triplo negativo. Em outras modalidades, o agente de platina é a cisplatina.[00167] Another modality provides a method of treating breast cancer using the ATR/Chk1 combination therapy described herein in combination with a platinum agent. In some embodiments, the breast cancer is triple negative breast cancer. In other embodiments, the platinum agent is cisplatin.

[00168] Outra modalidade fornece um método de tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas utilizando a terapia de combinação ATR/Chk1 aqui descrita em combinação com cisplatina e gencitabina. Em algumas modalidades, o câncer do pulmão de células não pequenas é o câncer de pulmão de células não pequenas escamosas. Em algumas modalidades, o composto é um composto de Fórmula I. Em outras modalidades, o composto é VE-822.[00168] Another modality provides a method of treating non-small cell lung cancer using the ATR/Chk1 combination therapy described herein in combination with cisplatin and gemcitabine. In some embodiments, non-small cell lung cancer is squamous non-small cell lung cancer. In some embodiments, the compound is a compound of Formula I. In other embodiments, the compound is VE-822.

[00169] Em mais outra modalidade, o agente terapêutico adicional é gencitabina ou cisplatina e o câncer é o subtipo escamoso de câncer do pulmão de células não pequenas. Outra modalidade fornece um método de tratamento de câncer de pulmão de pequenas células utilizando a terapia de combinação ATR/Chk1 aqui descrita em combinação com cisplatina e etoposídeo.[00169] In yet another embodiment, the additional therapeutic agent is gemcitabine or cisplatin and the cancer is the squamous subtype of non-small cell lung cancer. Another embodiment provides a method of treating small cell lung cancer utilizing the ATR/Chk1 combination therapy described herein in combination with cisplatin and etoposide.

[00170] Outro aspecto da presente invenção fornece um método para promover a morte celular em células de câncer compreendendo a administração de um composto que inibe a proteína cinase ATR; e a administração de um composto que inibe a proteína cinase Chk1. Em algumas modalidades, as células cancerosas possuem defeitos na cascata de sinalização de ATM. Em outra modalidade, o defeito é a expressão ou atividade alterada de um ou mais dos seguintes: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP ou SMC1. Em ainda outros aspectos, o defeito é a expressão ou a atividade alterada de um ou mais dos seguintes: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 ou H2AX.[00170] Another aspect of the present invention provides a method for promoting cell death in cancer cells comprising administering a compound that inhibits ATR protein kinase; and administration of a compound that inhibits the Chk1 protein kinase. In some embodiments, cancer cells have defects in the ATM signaling cascade. In another embodiment, the defect is the altered expression or activity of one or more of the following: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP or SMC1. In still other aspects, the defect is the altered expression or activity of one or more of the following: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 or H2AX.

[00171] Em algumas modalidades, a célula cancerosa está expressando oncogenes de dano do DNA.[00171] In some embodiments, the cancer cell is expressing DNA damage oncogenes.

[00172] Em outras modalidades, a célula cancerosa possui a expressão ou atividade alterada de um ou mais dos seguintes: K-Ras, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, Ciclina E, Ciclina A e Rb.[00172] In other embodiments, the cancer cell has altered expression or activity of one or more of the following: K-Ras, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, Cyclin E, Cyclin A and Rb.

[00173] Em outro aspecto, esta invenção fornece um método para tratar ou diminuir a gravidade de uma doença, condição ou distúrbio com uma terapia de combinação que inibe a atividade enzimática através da ligação de um composto à ATR cinase e ligação de um composto separado à Chk1 cinase.[00173] In another aspect, this invention provides a method for treating or lessening the severity of a disease, condition or disorder with a combination therapy that inhibits enzyme activity by binding a compound to ATR kinase and binding a separate compound to Chk1 kinase.

[00174] Outro aspecto desta invenção proporciona um método para tratar, prevenir ou diminuir a gravidade das doenças proliferativas ou hiperproliferativas em um paciente, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um primeiro composto útil para inibir a ATR cinase, ou uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo o primeiro composto; e a administração de uma quantidade eficaz de um segundo composto útil para inibir a Chk1 cinase, ou uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo o segundo composto. O termo "paciente", como aqui utilizado, significa um animal, de preferência um ser humano.[00174] Another aspect of this invention provides a method for treating, preventing or lessening the severity of proliferative or hyperproliferative diseases in a patient, comprising administering an effective amount of a first compound useful for inhibiting ATR kinase, or a pharmaceutically acceptable composition comprising the first compound; and administering an effective amount of a second compound useful for inhibiting Chk1 kinase, or a pharmaceutically acceptable composition comprising the second compound. The term "patient" as used herein means an animal, preferably a human being.

[00175] Em certas modalidades, uma "quantidade eficaz" do composto ou composição farmaceuticamente aceitável é aquela quantidade eficaz para tratar dita doença. Os compostos e composições, de acordo com o método da presente invenção, podem ser administrados utilizando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para tratar ou diminuir a gravidade de dita doença.[00175] In certain embodiments, an "effective amount" of the pharmaceutically acceptable compound or composition is that amount effective to treat said disease. The compounds and compositions according to the method of the present invention can be administered using any amount and any route of administration effective to treat or lessen the severity of said disease.

[00176] Em algumas modalidades, o composto útil para inibir a ATR cinase é um composto de Fórmula I. Em outras modalidades, o composto útil para inibir a ATR cinase é VE-821. Em outras modalidades, o composto útil para inibir a ATR cinase é VE-822.[00176] In some embodiments, the compound useful for inhibiting ATR kinase is a compound of Formula I. In other embodiments, the compound useful for inhibiting ATR kinase is VE-821. In other embodiments, the compound useful for inhibiting ATR kinase is VE-822.

[00177] Ainda outra modalidade fornece um método para impedir a reparação celular de danos ao DNA nas células de câncer compreendendo a administração a um paciente de um primeiro composto útil como um inibidor de ATR cinase, ou uma composição compreendendo o primeiro composto; e a administrar a um paciente de um segundo composto útil como um inibidor de Chk1 cinase, ou uma composição compreendendo o segundo composto.[00177] Yet another embodiment provides a method for preventing cellular repair of DNA damage in cancer cells comprising administering to a patient a first compound useful as an ATR kinase inhibitor, or a composition comprising the first compound; and administering to a patient a second compound useful as a Chk1 kinase inhibitor, or a composition comprising the second compound.

[00178] Outra modalidade fornece um método de sensibilização de células aos agentes de dano ao DNA compreendendo a administração a um paciente de um primeiro composto útil como um inibidor da ATR cinase, ou uma composição compreendendo o primeiro composto; e a administração a um paciente de um segundo composto útil como um inibidor da Chk1 cinase, ou uma composição compreendendo o segundo composto.[00178] Another embodiment provides a method of sensitizing cells to DNA damaging agents comprising administering to a patient a first compound useful as an ATR kinase inhibitor, or a composition comprising the first compound; and administering to a patient a second compound useful as a Chk1 kinase inhibitor, or a composition comprising the second compound.

[00179] De acordo com outra modalidade, a terapia de combinação ATR/Chk1 é utilizada em um câncer, célula de câncer ou célula que possui um defeito em uma proteína envolvida no reparo de excisão de base ("proteína de reparo de excisão de base"). Existem muitos métodos conhecidos na técnica para a determinação se um tumor possui um defeito no reparo da excisão de base. Por exemplo, o sequenciamento do DNA genômico ou dos produtos de mRNA de cada gene de reparo de excisão de base (por exemplo, UNG, PARP1 ou LIG1) pode ser executado em uma amostra do tumor para estabelecer se as mutações esperadas para modular a função ou expressão do produto genético estão presentes (Wang et al., Cancer Research 52:4824 (1992)). Além da inativação mutacional, as células tumorais podem modular um gene de reparo do DNA através da hipermetilação da sua região promotora, levando a uma expressão genética reduzida. Isto é mais comumente avaliado utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR) específica da metilação para quantificar os níveis de metilação nos promotores de genes de reparo de excisão de base de interesse. A análise da metilação do promotor do gene de reparação da excisão de base está disponível comercialmente (http://www.sabiosciences.com/dna methylation product/HTML/MEAH- 421A.html).[00179] According to another embodiment, ATR/Chk1 combination therapy is used in a cancer, cancer cell or cell that has a defect in a protein involved in base excision repair ("base excision repair protein "). There are many methods known in the art for determining whether a tumor has a base excision repair defect. For example, sequencing of the genomic DNA or mRNA products of each base excision repair gene (e.g., UNG, PARP1, or LIG1) can be performed on a tumor sample to establish whether mutations expected to modulate function or expression of the gene product are present (Wang et al., Cancer Research 52:4824 (1992)). In addition to mutational inactivation, tumor cells can modulate a DNA repair gene through hypermethylation of its promoter region, leading to reduced gene expression. This is most commonly assessed using methylation-specific polymerase chain reaction (PCR) to quantify methylation levels in the promoters of base excision repair genes of interest. Base excision repair gene promoter methylation analysis is commercially available (http://www.sabiosciences.com/dna methylation product/HTML/MEAH-421A.html).

[00180] Finalmente, os níveis de expressão de genes de reparo de excisão de base podem ser avaliados através da quantificação direta dos níveis dos produtos de mRNA e proteína de cada gene utilizando técnicas-padrão tais como reação em cadeia de polimerase acoplada à transcriptase reversa (RT-PCR) quantitativa e imunohistoquímica (IHC), respectivamente (Shinmura et al., Carcinogenesis 25: 2311 (2004), Shinmura et al., Journal of Pathology 225:414 (2011)).[00180] Finally, the expression levels of base excision repair genes can be assessed by directly quantifying the levels of the mRNA and protein products of each gene using standard techniques such as reverse transcriptase-coupled polymerase chain reaction. quantitative (RT-PCR) and immunohistochemistry (IHC), respectively (Shinmura et al., Carcinogenesis 25: 2311 (2004), Shinmura et al., Journal of Pathology 225:414 (2011)).

[00181] Em algumas modalidades, a proteína de reparo de excisão de base é UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glicosilases); APE1, APEX2 (APROPRIADAMENTE endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I e III); XRCC1 (LIG3 acessório); PNK, PNKP (polinucleotídeo cinase e fosfatase); PARP1, PARP2 (Poli(ADP-Ribose) Polimerases); PolB, PolG (polimerases); FEN1 (endonuclease) ou Aprataxina.[00181] In some embodiments, the base excision repair protein is UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glycosylases); APE1, APEX2 (PROPERLY endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I and III); XRCC1 (accessory ON3); PNK, PNKP (polynucleotide kinase and phosphatase); PARP1, PARP2 (Poly(ADP-Ribose) Polymerases); PolB, PolG (polymerases); FEN1 (endonuclease) or Aprataxin.

[00182] Em algumas modalidades, a proteína de reparo de excisão de base é PARP1, PARP2 ou PolB. Em outras modalidades, a proteína de reparo de excisão de base é PARP1 ou PARP2.[00182] In some embodiments, the base excision repair protein is PARP1, PARP2 or PolB. In other embodiments, the base excision repair protein is PARP1 or PARP2.

[00183] Os métodos descritos acima (sequência do gene, metilação do promotor e expressão de mRNA) também podem ser utilizados para caracterizar o estado (por exemplo, expressão ou mutação) de outros genes ou proteínas de interesse, tais como oncogenes de dano ao DNA expressos por um tumor ou defeitos na cascata de sinalização de ATM de uma célula.[00183] The methods described above (gene sequence, promoter methylation, and mRNA expression) can also be used to characterize the status (e.g., expression or mutation) of other genes or proteins of interest, such as organ damage oncogenes. DNA expressed by a tumor or defects in a cell's ATM signaling cascade.

Fabricação de MedicamentosMedicine Manufacturing

[00184] Outra modalidade fornece o uso de compostos ou composições aqui descritos para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer. Em algumas modalidades, o composto ou a composição é combinado com um agente terapêutico adicional, tal como um agente de dano ao DNA, aqui descrito. Em outra modalidade, o câncer possui um defeito em uma via aqui descrita.[00184] Another embodiment provides the use of compounds or compositions described herein for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer. In some embodiments, the compound or composition is combined with an additional therapeutic agent, such as a DNA damaging agent, described herein. In another embodiment, the cancer has a defect in a pathway described here.

[00185] Algumas modalidades fornecem o uso de um primeiro composto para a inibição de ATR cinase em combinação com um segundo composto para inibição de Chk1 cinase para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um paciente. Em outra modalidade, o primeiro composto e o segundo composto são combinados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais selecionados de um agente na secção intitulada "Agentes Terapêuticos Adicionais" do presente pedido. Em mais outra modalidade, o câncer é selecionado de um câncer na seção intitulada "Usos Terapêuticos" do presente pedido.[00185] Some embodiments provide the use of a first compound for inhibiting ATR kinase in combination with a second compound for inhibiting Chk1 kinase for the manufacture of a medicine for treating cancer in a patient. In another embodiment, the first compound and the second compound are combined with one or more additional therapeutic agents selected from an agent in the section entitled "Additional Therapeutic Agents" of the present application. In yet another embodiment, the cancer is selected from a cancer in the section entitled "Therapeutic Uses" of the present application.

[00186] Em outras modalidades, o composto para a inibição da ATR cinase é representado pela Fórmula I: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que as variáveis são como definidas na seção intitulada "Compostos" no relatório descritivo do presente pedido. Adicionalmente, outros compostos de Fórmula I úteis para a inibição da ATR cinase também são descritos na seção "Compostos" do pedido.[00186] In other embodiments, the compound for inhibiting ATR kinase is represented by Formula I: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the variables are as defined in the section entitled "Compounds" in the specification of the present application. Additionally, other compounds of Formula I useful for inhibiting ATR kinase are also described in the "Compounds" section of the application.

[00187] Em ainda outras modalidades, o composto para inibir a ATR cinase é representado pela Fórmula II: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que as variáveis são como definidas na seção intitulada "Compostos" do presente pedido. Adicionalmente, outros compostos de Fórmula II úteis para inibir a ATR cinase também são descritos na seção "Compostos" do pedido.[00187] In still other embodiments, the compound for inhibiting ATR kinase is represented by Formula II: or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the variables are as defined in the section entitled "Compounds" of the present application. Additionally, other compounds of Formula II useful for inhibiting ATR kinase are also described in the "Compounds" section of the application.

[00188] Outras modalidades fornecem o uso de um primeiro composto para a inibição da ATR cinase em combinação com um segundo composto para a inibição da Chk1 cinase para a fabricação de um medicamento para promover a morte celular nas células cancerosas.[00188] Other embodiments provide the use of a first compound for inhibiting ATR kinase in combination with a second compound for inhibiting Chk1 kinase for the manufacture of a medicament for promoting cell death in cancer cells.

AbreviaçõesAbbreviations

[00189] As seguintes abreviações são utilizadas: DMSO dimetilsulfóxido ATP trifosfato de adenosina 1HRMN ressonância magnética nuclear de prótons HPLC cromatografia líquida de alto desempenho LCMS cromatografia líquida-espectrometria de massa TLC cromatografia em camada fina RT tempo de retenção HATU hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-tria- zolo[4,5-b]piridínio 3-óxido TBTU tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrame- tilurônio T3P anidrido propilfosfônico COMU hexafluorofosfato de 1-[(1-(ciano-2-etóxi-2-oxoetilidenoamino- óxi)-dimetilamino-morfolino)]urônio TCTU tetrafluoroborato de [(6-clorobenzotriazol-1-il)óxi-(dimetila- mino)metileno]-dimetil-amônio HBTU O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametil-urônio-hexafluoro-fosfato DMF dimetilformamida PTSA ácido p-toluenossulfônico DIPEA N,N-diisopropiletilamina DCM diclorometano NMP N-metil-2-pirrolidona EDCI 1-Etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodiimida[00189] The following abbreviations are used: DMSO dimethyl sulfoxide ATP adenosine triphosphate 1HRMN proton nuclear magnetic resonance HPLC high performance liquid chromatography LCMS liquid chromatography-mass spectrometry TLC thin layer chromatography RT retention time HATU 1-[bis hexafluorophosphate (dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide TBTU 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3 tetrafluoroborate -tetramethyluronium T3P propylphosphonic anhydride COMU 1-[(1-(cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneamino-oxy)-dimethylamino-morpholino)]uronium hexafluorophosphate TCTU [(6-chlorobenzotriazol-1-yl)oxy tetrafluoroborate -(dimethylamino)methylene]-dimethyl-ammonium HBTU O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetramethyl-uronium-hexafluoro-phosphate DMF dimethylformamide PTSA p-toluenesulfonic acid DIPEA N,N-diisopropylethylamine DCM dichloromethane NMP N-methyl-2-pyrrolidone EDCI 1-Ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl)carbodiimide

ESQUEMAS E EXEMPLOSSCHEMES AND EXAMPLES

[00190] Os compostos podem ser preparados de acordo com os esquemas e exemplos descritos nos WO 2010/071837 e WO 2014089379, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência. Esses compostos podem ser analisados por métodos conhecidos, incluindo, mas não limitado a estes, LCMS (cromatografia líquida espectrometria de massa) e RMN (ressonância magnética nuclear). Os seguintes esquemas genéricos ilustram como preparar os compostos da presente divulgação. Todos os exemplos são apenas para os propósitos de ilustração e não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção de qualquer forma. Os espectros de 1H-RMN foram registrados em 400 MHz utilizando um instrumento Bruker DPX 400. As amostras de espec. de massa foram analisadas em um espectrômetro de massa MicroMass Quattro Micro operado em modo MS único com ionização por eletropulverização. Esquema I-A1: Preparação de Compostos em que -L-R1 é uma Amida Aromática [00190] The compounds can be prepared according to the schemes and examples described in WO 2010/071837 and WO 2014089379, the contents of which are incorporated herein by reference. These compounds can be analyzed by known methods, including, but not limited to, LCMS (liquid chromatography mass spectrometry) and NMR (nuclear magnetic resonance). The following generic schemes illustrate how to prepare the compounds of the present disclosure. All examples are for illustration purposes only and should not be construed as limiting the scope of the invention in any way. 1H-NMR spectra were recorded at 400 MHz using a Bruker DPX 400 instrument. mass spectrometers were analyzed on a MicroMass Quattro Micro mass spectrometer operated in single MS mode with electrospray ionization. Scheme I-A1: Preparation of Compounds in which -L-R1 is an Aromatic Amide

[00191] Compostos de amidas cíclicas da presente divulgação em que -L-R1 é uma amida aromática podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I- A1: Éster comercialmente disponível 1 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 2. O grupo de ácido carboxílico é empregado em uma reação de acoplamento com uma amina para levar aos compostos de amida cíclica da Fórmula IA- 1. Esquema I-A2: Preparação de Compostos em que -L-R1 é uma Amida Aromática [00191] Cyclic amide compounds of the present disclosure in which -L-R1 is an aromatic amide can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-A1: Commercially available ester 1 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 2. The carboxylic acid group is employed in a coupling reaction with an amine to lead to the cyclic amide compounds of Formula IA-1. Scheme I-A2: Preparation of Compounds in which -L-R1 is an Amide Aromatic

[00192] Alternativamente, os compostos da presente divulgação em que -L-R1 é um amida aromática podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I- A2, uma variação da sequência sintética representada no esquema I- A1 que consiste em iniciar a partir do éster metílico 1. O éster 1 é transformado em ácido carboxílico 3 que é empregado em uma reação de acoplamento com uma amina para fornecer amida 4. Esta é reagida com um ácido borônico sob condições Suzuki para levar aos compostos de fórmula IA-2. Esquema I-B1: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,3,4-oxadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00192] Alternatively, compounds of the present disclosure in which -L-R1 is an aromatic amide can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-A2, a variation of the synthetic sequence represented in Scheme I-A1 consisting in starting from methyl ester 1. Ester 1 is transformed into carboxylic acid 3 which is used in a coupling reaction with an amine to give amide 4. This is reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to lead to compounds of formula IA-2. Scheme I-B1: preparation of compounds where Ring A is a 1,3,4-oxadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00193] Os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,3,4-oxadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-B1: éster metílico 3 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 8. O ácido carboxílico em 8 é depois empregado em uma reação de acoplamento com uma hidrazida (X=O) ou tioidrazida (X=S) para formar 9. Finalmente, a acilidrazida em 9 sofre uma ciclo- desidratação para levar aos compostos da presente divulgação (fórmula I no Esquema I-B1). A transformação de intermediário 8 em compostos de fórmula IB-1 também foi executada em um procedimento de um só reator utilizando reagentes que servem dois propósitos (acoplamento e ciclo-desidratação). Esquema I-B2: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,3,4- oxadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00193] The compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,3,4-oxadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-B1: methyl ester 3 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 8. The carboxylic acid in 8 is then employed in a coupling reaction with a hydrazide (X=O) or thiohydrazide (X=S) to form 9. Finally, the acylhydrazide in 9 undergoes cyclodehydration to lead to the compounds of the present disclosure (formula I in Scheme I-B1). The transformation of intermediate 8 into compounds of formula IB-1 was also carried out in a single-reactor procedure using reagents that serve two purposes (coupling and cycle-dehydration). Scheme I-B2: preparation of compounds where Ring A is a 1,3,4-oxadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00194] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,3,4-oxadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I- B2, uma variação da sequência sintética representada no esquema I- B1. A hidrazida 5 é empregada em uma reação de acoplamento com um grupo funcional de ácido carboxílico para formar o intermediário 9 (X=O). Como no esquema I-B1 a acilidrazida depois sofre uma ciclo- desidratação para levar aos compostos de fórmula IB-2. Quando R5 for um componente ligado ao anel de oxadiazol através de uma ligação C-N, então um tioisocianato pode ser utilizado para gerar o intermediário 9 (X=S); a tioacilidrazida depois sofre uma ciclo- desidratação para levar aos compostos de fórmula IB-2. Esquema I-B3: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,3,4- oxadiazol em que R é –(L-NR1R2)p ou –(J2)q[00194] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,3,4-oxadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-B2, a variation of the synthetic sequence represented in Scheme I- B1. Hydrazide 5 is used in a coupling reaction with a carboxylic acid functional group to form intermediate 9 (X=O). As in scheme I-B1, acylhydrazide then undergoes cyclodehydration to lead to compounds of formula IB-2. When R5 is a component linked to the oxadiazole ring through a CN bond, then a thioisocyanate can be used to generate intermediate 9 (X=S); thioacylhydrazide then undergoes cyclodehydration to lead to compounds of formula IB-2. Scheme I-B3: preparation of compounds where Ring A is a 1,3,4-oxadiazole where R is –(L-NR1R2)p or –(J2)q

[00195] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é 1,3,4-oxadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-B3: o grupo funcional R em 10 ou 6 (ácido e hidrazida respectivamente, ambos preparados a partir de éster metílico 3 através da hidrólise e hidrazinólise respectivamente) é empregado no acoplamento com um par adequado (R5CXNHNH2 quando começando de 10; RÕCOOH/RÕ==S quando começando de 6) para formar o intermediário de acilidrazida 11. A subsequente ciclo-desidratação leva ao composto 12 onde o anel de 1,3,4-oxadiazol foi construído. A transformação do ponto de partida 10 ou 6 no intermediário 12 também foi executada em um procedimento de um só reator utilizando reagentes que servem dois propósitos (acoplamento e ciclo-desidratação). A manipulação de bromo em oxadiazol 12 é depois reagida com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos de fórmula IB-3. Quando o grupo R na Fórmula IB-3 contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. Esquema I-C1: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,2,4- oxadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00195] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is 1,3,4-oxadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-B3: the functional group R in 10 or 6 (acid and hydrazide respectively, both prepared from methyl ester 3 through hydrolysis and hydrazinolysis respectively) is employed in coupling with a suitable pair (R5CXNHNH2 when starting from 10; RÕCOOH/RÕ==S when starting from 6) to form the acylhydrazide intermediate 11. Subsequent cycle-dehydration leads to compound 12 where the 1,3,4-oxadiazole ring was constructed. The transformation of starting point 10 or 6 into intermediate 12 was also performed in a single-reactor procedure using reagents that serve two purposes (coupling and cycle-dehydration). The manipulation of bromine into oxadiazole 12 is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to provide compounds of formula IB-3. When the R group in Formula IB-3 contains a carboxylic acid component, it can be further transformed (e.g., into an amide) using conditions known in the art. Scheme I-C1: preparation of compounds where Ring A is a 1,2,4-oxadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00196] Os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,2,4-oxadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-C1: a nitrila 2 reage com hidroxilamina para fornecer o intermediário 13. O grupo de hidróxi em 13 reage com os cloretos ácidos para levar ao intermediário 14 que sofre ciclo-desidratação para proporcionar compostos de fórmula IC-1. Esquema I-C2: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,2,4- oxadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00196] The compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,2,4-oxadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-C1: nitrile 2 reacts with hydroxylamine to provide intermediate 13. The hydroxy group in 13 reacts with the acid chlorides to lead to intermediate 14 which undergoes cyclodehydration to provide compounds of formula IC-1. Scheme I-C2: preparation of compounds where Ring A is a 1,2,4-oxadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00197] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,2,4-oxadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema IC2: A nitrila comercialmente disponível 1 reage com hidroxilamina para fornecer o intermediário 15. O grupo de hidróxi em 15 reage com cloretos ácidos para levar ao intermediário 16 que sofre ciclo- desidratação para proporcionar o intermediário 17. A manipulação de bromo em 17 é depois utilizada para executar uma reação Suzuki com um par de acoplamento de ácido borônico para fornecer compostos de fórmula IC-2. Quando o grupo R na Fórmula IC-2 contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. Esquema I-D1: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,3,4- tiadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00197] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,2,4-oxadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme IC2: Commercially available nitrile 1 reacts with hydroxylamine to provide the intermediate 15. The hydroxy group in 15 reacts with acid chlorides to lead to intermediate 16 which undergoes cyclodehydration to provide intermediate 17. Manipulation of bromine in 17 is then used to perform a Suzuki reaction with a boronic acid coupling pair to provide compounds of formula IC-2. When the R group in Formula IC-2 contains a carboxylic acid component, it can be further transformed (e.g., into an amide) using conditions known in the art. Scheme I-D1: preparation of compounds where Ring A is a 1,3,4-thiadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00198] Os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,3,4-tiadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-D1: éster metílico 3 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 8. O ácido carboxílico em 8 é depois empregado em uma reação de acoplamento com uma tioidrazida para formar 18. Finalmente, a tioacilidrazida em 18 sofre uma ciclo-desidratação para levar aos compostos de Fórmula ID-1. A transformação de intermediário 8 em compostos de Fórmula I-D1 pode ser executada em um procedimento de um só reator utilizando reagentes que servem dois propósitos (acoplamento e ciclo-desidratação). Esquema I-D2: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,3,4- tiadiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00198] The compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,3,4-thiadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-D1: methyl ester 3 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 8. The carboxylic acid in 8 is then employed in a coupling reaction with a thiohydrazide to form 18. Finally, the thioacylhydrazide in 18 undergoes cyclodehydration to lead to compounds of Formula ID-1. The transformation of intermediate 8 into compounds of Formula I-D1 can be carried out in a single-reactor procedure using reagents that serve two purposes (coupling and cycle-dehydration). Scheme I-D2: preparation of compounds where Ring A is a 1,3,4-thiadiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00199] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é 1,3,4-tiadiazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-D2: o grupo funcional de ácido em 10 é empregado no acoplamento com um par adequado (R5CSNHNH2) para formar o intermediário de tioacilidrazida 19. A subsequente ciclo-desidratação leva ao composto 20 onde o anel de 1,3,4-tiadiazol foi construído. A transformação do ponto de partida 10 em 20 foi executada em um procedimento de um só reator utilizando reagentes que servem dois propósitos (acoplamento e ciclo-desidratação). A manipulação de bromo em tiadiazol 20 é depois reagida com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos de fórmula I-D2. Quando o grupo R na Fórmula I-D2 contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. Esquema I-E1: preparação de compostos onde o Anel A é um isoxazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00199] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is 1,3,4-thiadiazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-D2: the acid functional group in 10 is employed in the coupling with a suitable pair (R5CSNHNH2) to form the thioacylhydrazide intermediate 19. Subsequent cycle-dehydration leads to compound 20 where the 1,3,4-thiadiazole ring was constructed. The transformation from starting point 10 to 20 was performed in a single-reactor procedure using reagents that serve two purposes (coupling and cycle-dehydration). The manipulation of bromine into thiadiazole 20 is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to provide compounds of formula I-D2. When the R group in Formula I-D2 contains a carboxylic acid component, it can be further transformed (e.g., into an amide) using conditions known in the art. Scheme I-E1: preparation of compounds where Ring A is an isoxazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00200] Os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um isoxazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-E1: 2-amino-3,5- dibromo pirazina comercialmente disponível 21 sofre um acoplamento de Sonogashira com TMS-acetileno para fornecer o intermediário 22, o grupo de amino do qual pode ser completamente protegido como as espécies diBoc 23. Um acoplamento Suzuki com a manipulação de bromo remanescente, com desproteção de TMS concomitante proporciona o intermediário 24. A alquina 24 finalmente reage em uma ciclocondensação com cloreto de N-hidroxiaroíla para fornecer compostos de Fórmula I-E1. Esquema I-E2: preparação de compostos onde o Anel A é um isoxazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00200] Compounds of the present disclosure where Ring A is an isoxazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-E1: Commercially available 2-amino-3,5-dibromo pyrazine 21 undergoes a Sonogashira coupling with TMS-acetylene to provide intermediate 22, the amino group of which can be completely protected like the diBoc species 23. A Suzuki coupling with the remaining bromine manipulation, with concomitant TMS deprotection provides intermediate 24. Alkyne 24 finally reacts in a cyclocondensation with N-hydroxyaroyl chloride to provide compounds of Formula I-E1. Scheme I-E2: preparation of compounds where Ring A is an isoxazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00201] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um isoxazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-E2: O intermediário protegido por TMS 23, descrito no esquema I-E1 pode ser desprotegido para revelar o composto de alquina 25. A alquina 25 reage em uma ciclocondensação com cloreto de N-hidroxiaroíla para fornecer o intermediário 26 onde o anel de isoxazol foi construído. A manipulação de bromo em isoxazol 26 é depois reagida com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos 27. Uma desproteção final dos grupos de N-proteção em 27 pode revelar compostos de Fórmula I. Quando o grupo R na Fórmula I-E2 contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. Esquema I-E3: preparação de compostos onde o Anel A é um isoxazol [00201] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is an isoxazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-E2: The TMS-protected intermediate 23 described in Scheme I-E1 can be deprotected to reveal the alkyne compound 25. Alkyne 25 reacts in a cyclocondensation with N-hydroxyaroyl chloride to provide intermediate 26 where the isoxazole ring was constructed. The manipulation of bromine into isoxazole 26 is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to give compounds 27. A final deprotection of the N-protecting groups in 27 can reveal compounds of Formula I. When the R group in Formula I-E2 contains a carboxylic acid component, it can be further transformed (e.g., into an amide) using conditions known in the art. Scheme I-E3: preparation of compounds where Ring A is an isoxazole

[00202] Os compostos de Fórmula I-E3 podem ser produzidos de acordo com as etapas delineadas no Esquema I-E3. A aminação redutiva entre o composto 1 e uma amina (por exemplo, J5p1-NH2), leva ao composto 2. As condições para a aminação redutiva incluem, por exemplo, a combinação do composto 1 com J5p1-NH2 em metanol para formar uma imina intermediária que é reduzida com NaBH4 para formar o composto 2. O composto 2 pode então ser protegido com grupos de proteção de nitrogênio conhecidos daqueles versados na técnica. Por exemplo, o composto 2 pode ser combinado com (Boc)2O e Et3N em DCM para formar o composto 3 (em que PG = Boc).[00202] Compounds of Formula I-E3 can be produced according to the steps outlined in Scheme I-E3. Reductive amination between compound 1 and an amine (e.g., J5p1-NH2), leads to compound 2. Conditions for reductive amination include, for example, combining compound 1 with J5p1-NH2 in methanol to form an imine intermediate which is reduced with NaBH4 to form compound 2. Compound 2 can then be protected with nitrogen protecting groups known to those skilled in the art. For example, compound 2 can be combined with (Boc)2O and Et3N in DCM to form compound 3 (where PG = Boc).

[00203] O composto 3 pode ser combinado com cloridreto de hidroxilamina sob as condições de formação de oxima adequadas para formar o composto 4. As condições de formação de oxima adequadas incluem um procedimento de uma só etapa ou um procedimento de duas etapas. O procedimento de uma só etapa compreende agitar 1 equivalente de composto 3 com um 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em uma mistura de 10:1 v/v de THF/água. O procedimento de duas etapas compreende em primeiro lugar a desproteção do grupo ketal do composto 3 em um aldeído sob as condições de desproteção adequadas, e depois a formação de uma oxima sob as condições de formação de oxima de duas etapas adequadas para formar o composto 4.[00203] Compound 3 can be combined with hydroxylamine hydrochloride under suitable oxime-forming conditions to form compound 4. Suitable oxime-forming conditions include a one-step procedure or a two-step procedure. The one-step procedure comprises stirring 1 equivalent of compound 3 with 1.1 equivalents of NH2OH.HCl in a 10:1 v/v THF/water mixture. The two-step procedure comprises first deprotecting the ketal group of compound 3 to an aldehyde under suitable deprotection conditions, and then forming an oxime under suitable two-step oxime forming conditions to form compound 4. .

[00204] O composto 4 pode ser combinado com a aminopirazina protegida por BOC mostrada no Esquema I-E3 sob as condições de formação de isoxazol adequadas para formar o composto 5. O composto 4 é transformado e empregado em uma cicloadição [3+2] para formar o isoxazol 5. Esta transformação pode ser conduzida em um único reator, mas requer duas etapas distintas. A primeira etapa é uma oxidação do grupo funcional de oxima em uma nitrona, ou um intermediário semelhante com o mesmo grau de oxidação, por exemplo, uma clorooxima. Esta espécie reativa depois reage com uma alquina em uma cicloadição [3+2] para formar o aduto de isoxazol.[00204] Compound 4 can be combined with the BOC-protected aminopyrazine shown in Scheme I-E3 under suitable isoxazole-forming conditions to form compound 5. Compound 4 is transformed and employed in a [3+2] cycloaddition to form isoxazole 5. This transformation can be carried out in a single reactor, but requires two distinct steps. The first step is an oxidation of the oxime functional group to a nitrone, or a similar intermediate with the same degree of oxidation, for example, a chlorooxime. This reactive species then reacts with an alkyne in a [3+2] cycloaddition to form the isoxazole adduct.

[00205] Finalmente, o composto 5 sofre uma reação de acoplamento assistida por metal para formar o composto 6. Por exemplo, o composto 5 pode ser combinado com um ácido borônico sob as condições de acoplamento cruzado Suzuki para formar o composto de fórmula 6. Esquema I-F1: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,2,4- triazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00205] Finally, compound 5 undergoes a metal-assisted coupling reaction to form compound 6. For example, compound 5 can be combined with a boronic acid under Suzuki cross-coupling conditions to form the compound of formula 6. Scheme I-F1: preparation of compounds where Ring A is a 1,2,4-triazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00206] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,2,4-triazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-F1 partindo do éster metílico 3. O éster 3 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 4. Quando o grupo R contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado neste estágio (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. O grupo de éster metílico em 4 é depois transformado em uma hidrazida através da reação com hidrazina para fornecer 5. Finalmente, o grupo de hidrazida em 5 é empregado em uma reação de acoplamento com uma nitrila e subsequentemente sofre uma ciclo-desidratação para levar aos compostos de Fórmula I-F1. Esquema I-F2: preparação de compostos onde o Anel A é um 1,2,4- triazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00206] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,2,4-triazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-F1 starting from methyl ester 3. Ester 3 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 4. When the R group contains a carboxylic acid component, it can be further transformed at this stage (for example, into an amide) using conditions known in the art. The methyl ester group in 4 is then transformed into a hydrazide through reaction with hydrazine to give 5. Finally, the hydrazide group in 5 is employed in a coupling reaction with a nitrile and subsequently undergoes cyclodehydration to lead to the compounds of Formula I-F1. Scheme I-F2: preparation of compounds where Ring A is a 1,2,4-triazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00207] Alternativamente, os compostos da presente divulgação onde o Anel A é um 1,2,4-triazol podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-F2: o grupo funcional R em 1 ou 3 (nitrila e éster metílico respectivamente) é empregado no acoplamento (após a transformação apropriada de 3 em hidrazida 6) com um par de acoplamento adequado (R5CONHNH2 quando começa de 1; R5CN se utilizado 6). A subsequente ciclo- desidratação leva ao o intermediário 7 onde o anel de 1,2,4-triazol foi construído. A manipulação de bromo em triazol 7 é depois reagida com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos de fórmula I-F2. Quando o grupo R na Fórmula I-F2 contiver um componente de ácido carboxílico, ele pode ser ainda transformado (por exemplo, em uma amida) utilizando as condições conhecidas na técnica. Esquema I-G1: preparação de compostos onde o Anel A é um benzoxazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00207] Alternatively, compounds of the present disclosure where Ring A is a 1,2,4-triazole can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-F2: the functional group R in 1 or 3 (nitrile and methyl ester respectively) is used in coupling (after the appropriate transformation of 3 into hydrazide 6) with a suitable coupling pair (R5CONHNH2 when starting from 1; R5CN if used 6). Subsequent cyclodehydration leads to intermediate 7 where the 1,2,4-triazole ring was constructed. The manipulation of bromine into triazole 7 is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to provide compounds of formula I-F2. When the group R in Formula I-F2 contains a carboxylic acid component, it can be further transformed (for example, into an amide) using conditions known in the art. Scheme I-G1: preparation of compounds where Ring A is a benzoxazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00208] Compostos de benzoxazol de Fórmula VI podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-G1: a nitrila comercialmente disponível 1 é reagida com um amino fenol para fornecer o benzoxazol que é depois reagido com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos da Fórmula I-G1. Esquema I-H1: preparação de compostos onde o Anel A é um benzotiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00208] Benzoxazole compounds of Formula VI can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-G1: commercially available nitrile 1 is reacted with an amino phenol to provide benzoxazole which is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to supply Formula I-G1 compounds. Scheme I-H1: preparation of compounds where Ring A is a benzothiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00209] Compostos de benzotiazol de Fórmula VI podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-H1: a nitrila comercialmente disponível 1 é reagida com um aminobenzenotiol para fornecer o benzotiazol que é depois reagido com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos da Fórmula I-H1. Esquema I-H2: preparação de compostos onde benzotiazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00209] Benzothiazole compounds of Formula VI can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-H1: commercially available nitrile 1 is reacted with an aminobenzenethiol to provide the benzothiazole which is then reacted with a boronic acid under conditions Suzuki to supply Formula I-H1 compounds. Scheme I-H2: preparation of compounds where benzothiazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00210] Alternativamente, os compostos de benzotiazol de Fórmula VI podem ser preparados de acordo com o Esquema I-H2; éster metílico 3 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 8. A ciclização do intermediário 8 com um amino benzenotiol levará aos compostos da Fórmula I-H2. Esquema I-I1: preparação de compostos onde o Anel A é um imidazole em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00210] Alternatively, benzothiazole compounds of Formula VI can be prepared according to Scheme I-H2; Methyl ester 3 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 8. Cyclization of intermediate 8 with an amino benzenethiol will lead to compounds of Formula I-H2. Scheme I-I1: preparation of compounds where Ring A is an imidazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00211] Compostos de benzimidazol de Fórmula I podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-I1: éster metílico 3 reage com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer o intermediário 8. A ciclização do intermediário 8 com um benzeno 1,2-diamina levará aos compostos da Fórmula I-I1. Esquema I-I2: preparação de compostos onde o Anel A é um imidazol em que R é -(L-NR1R2)p ou -(J2)q[00211] Benzimidazole compounds of Formula I can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-I1: methyl ester 3 reacts with a boronic acid under Suzuki conditions to provide intermediate 8. Cyclization of intermediate 8 with a benzene 1,2-diamine will lead to compounds of Formula I-I1. Scheme I-I2: preparation of compounds where Ring A is an imidazole where R is -(L-NR1R2)p or -(J2)q

[00212] Alternativamente, os compostos de benzimidazol de Fórmula I podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema I-I2: a reação do grupo funcional de ácido de 3 reage com um benzeno 1,2-diamina para fornecer o intermediário de benzimidazol 9. O intermediário 9 é depois reagido com um ácido borônico sob condições Suzuki para fornecer compostos da Fórmula I-I2. Esquema IIa: Método geral para a preparação de compostos de fórmula II [00212] Alternatively, the benzimidazole compounds of Formula I can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme I-I2: the reaction of the acid functional group of 3 reacts with a 1,2-diamine benzene to provide the benzimidazole intermediate 9. Intermediate 9 is then reacted with a boronic acid under Suzuki conditions to provide compounds of Formula I-I2. Scheme IIa: General method for preparing compounds of formula II

[00213] Os compostos desta invenção podem ser sintetizados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema IIa.[00213] The compounds of this invention can be synthesized according to methods similar to those represented in Scheme IIa.

[00214] O ânion de cianoacetato de alila comercialmente disponível 28 pode reagir com tricloroacetonitrila para fornecer o intermediário 29. Na etapa de condensação de ânion, o ânion de cianoacetato de alila comercialmente disponível 28 pode ser gerado com uma base tal como acetato de potássio em um solvente apropriado tal como um álcool (por exemplo, álcool isopropílico). O ânion depois reage com tricloroacetonitrila na temperatura ambiente.[00214] Commercially available allyl cyanoacetate anion 28 can react with trichloroacetonitrile to provide intermediate 29. In the anion condensation step, commercially available allyl cyanoacetate anion 28 can be generated with a base such as potassium acetate in a suitable solvent such as an alcohol (e.g. isopropyl alcohol). The anion then reacts with trichloroacetonitrile at room temperature.

[00215] O intermediário 29 depois reage com hidrazina para formar o diaminopirazol 30. Na etapa de formação de pirazol, o intermediário 29 reage com hidrazina (ou seu hidrato) em um solvente aprótico, tal como DMF, para fornecer o diaminopirazol 30. A reação ocorre sob condições básicas (por exemplo, na presença de acetato de potássio ou AcONa) com aquecimento (por exemplo, 110°C) para garantir a ciclização completa.[00215] Intermediate 29 then reacts with hydrazine to form diaminopyrazole 30. In the pyrazole formation step, intermediate 29 reacts with hydrazine (or its hydrate) in an aprotic solvent, such as DMF, to provide diaminopyrazole 30. reaction occurs under basic conditions (e.g., in the presence of potassium acetate or AcONa) with heating (e.g., 110°C) to ensure complete cyclization.

[00216] O intermediário 30 pode ainda ser condensado com um par de acoplamento dieletrofílico para formar a pirimidina 31. Na etapa de formação de pirimidina, o intermediário 30 reage com uma espécie 1,3-dieletrofílica (por exemplo, um 1,3-dialdeído ou um 3-(dialquila- mino)-prop-2-enal) em vários tipos de solventes (por exemplo, DMF ou DMSO/água) para fornecer os núcleos bicíclicos 31. Quando um ou dois dos centros eletrofílicos são protegidos/mascarados (por exemplo, aldeído mascarado como um cetal), a introdução de um ácido sulfônico (por exemplo, PTSA) é requerida para liberar o grupo funcional reativo.[00216] Intermediate 30 can further be condensed with a dielectrophic coupling pair to form pyrimidine 31. In the pyrimidine formation step, intermediate 30 reacts with a 1,3-dielectrophilic species (e.g., a 1,3- dialdehyde or a 3-(dialkylamino)-prop-2-enal) in various types of solvents (e.g., DMF or DMSO/water) to provide the bicyclic nuclei 31. When one or two of the electrophilic centers are protected/masked (e.g., aldehyde masked as a ketal), the introduction of a sulfonic acid (e.g., PTSA) is required to release the reactive functional group.

[00217] A desproteção, por exemplo, através de hidrólise, do éster alílico leva aos ácidos carboxílicos 32. Na etapa de desproteção, o composto 31 é submetido às condições hidrolíticas que são conhecidas daqueles versados na técnica. Por exemplo, o tratamento de 31 com fenilsilano ou 4-metilbenzenossulfinato na presença de uma quantidade catalítica de paládio (por exemplo, Pd(PPh3)4) leva à formação do ácido carboxílico correspondente 32. Alternativamente, os compostos 31 podem ser tratados com alquila aquosa (por exemplo, NaOH, LiOH, ou KOH) para produzir ácidos 32.[00217] Deprotection, for example, through hydrolysis, of the allyl ester leads to carboxylic acids 32. In the deprotection step, compound 31 is subjected to hydrolytic conditions that are known to those skilled in the art. For example, treatment of 31 with phenylsilane or 4-methylbenzenesulfinate in the presence of a catalytic amount of palladium (e.g. Pd(PPh3)4) leads to the formation of the corresponding carboxylic acid 32. Alternatively, compounds 31 can be treated with alkyl aqueous (e.g., NaOH, LiOH, or KOH) to produce acids 32.

[00218] Na etapa de formação de éster ativada, os ácidos carboxílicos 32 são reagidos com agentes de acoplamento de amida conhecidos daqueles versados na técnica. Os pares de acoplamento de amida adequados incluem, mas não são limitados a estes, TBTU, TCTU, HATU, T3P e COMU. Quando o agente de acoplamento é selecionado apropriadamente, as reações podem prosseguir rapidamente (~1 h) na temperatura ambiente na presença de uma base orgânica (por exemplo, trietilamina, DIPEA) para fornecer os ésteres ativados 33. Por exemplo, quando os agentes de acoplamento de amida TBTU [J=H] ou TCTU [J=Cl] são utilizados, os compostos 33 são obtidos facilmente através da filtração da mistura de reação.[00218] In the activated ester formation step, carboxylic acids 32 are reacted with amide coupling agents known to those skilled in the art. Suitable amide coupling pairs include, but are not limited to, TBTU, TCTU, HATU, T3P and COMU. When the coupling agent is selected appropriately, reactions can proceed rapidly (~1 h) at room temperature in the presence of an organic base (e.g., triethylamine, DIPEA) to provide the activated esters 33. For example, when the coupling agents are amide coupling TBTU [J=H] or TCTU [J=Cl] are used, compounds 33 are easily obtained through filtration of the reaction mixture.

[00219] A formação dos ésteres ativados 33 antes da formação de ligação de amida para se preparar II é geralmente preferida, embora uma conversão direta de 32 nos compostos de fórmula II desta invenção também é possível. Os ésteres ativados alternativos também podem ser utilizados (isolados ou formados in situ) e serão conhecidos daqueles versados na técnica (por exemplo, utilizando os agentes de acoplamento TBTU, TCTU, HATU, T3P, COMU).[00219] The formation of activated esters 33 prior to amide bond formation to prepare II is generally preferred, although a direct conversion of 32 to the compounds of formula II of this invention is also possible. Alternative activated esters may also be used (isolated or formed in situ) and will be known to those skilled in the art (for example, using the coupling agents TBTU, TCTU, HATU, T3P, COMU).

[00220] Na etapa de formação da ligação de amida, os ésteres ativados 33 podem reagir com uma 3-aminopiridina substituída para fornecer compostos de fórmula II desta invenção. As condições de reação para o acoplamento de amida são geralmente em um solvente aprótico (por exemplo, NMP, piridina, DMF, etc ...) com aquecimento (por exemplo, > 90°C). A 3-aminopiridina pode ser ainda funcionalizada após a formação da ligação de amida.[00220] In the amide bond formation step, activated esters 33 can react with a substituted 3-aminopyridine to provide compounds of formula II of this invention. The reaction conditions for amide coupling are generally in an aprotic solvent (e.g. NMP, pyridine, DMF, etc...) with heating (e.g. > 90°C). 3-Aminopyridine can be further functionalized after amide bond formation.

[00221] Alternativamente, as duas etapas descritas acima podem ser combinadas: ácidos carboxílicos 32 podem ser utilizados como pontos de partida para a formação da ligação de amida, os ésteres ativados sendo gerados in situ, utilizando os mesmos agentes de acoplamento de amida como aqueles descritos acima. Os compostos II desta invenção são isolados de uma maneira semelhante àquela descrita acima. Esquema IIb: Método alternativo para a preparação de compostos de fórmula II [00221] Alternatively, the two steps described above can be combined: carboxylic acids 32 can be used as starting points for amide bond formation, the activated esters being generated in situ, using the same amide coupling agents as those described above. Compounds II of this invention are isolated in a manner similar to that described above. Scheme IIb: Alternative method for preparing compounds of formula II

[00222] Alternativamente, os compostos da presente divulgação podem ser preparados de acordo com os métodos semelhantes àqueles representados no Esquema IIb.[00222] Alternatively, the compounds of the present disclosure can be prepared according to methods similar to those represented in Scheme IIb.

Etapa 1Step 1

[00223] A amida 35 pode facilmente ser preparada a partir do ácido cianoacético comercialmente disponível 34. Na etapa de formação da ligação de amida, o ácido cianoacético 34 pode reagir com uma 3- aminopiridina substituída para fornecer compostos 35 desta invenção. As condições de reação para o acoplamento de amida estão geralmente em um solvente aprótico (por exemplo, DCM, NMP, DMF, etc), na presença de uma base orgânica, tal como uma amina alifática, (por exemplo, trietilamina ou DIPEA) e um agente de acoplamento de amida conhecido daqueles versados na técnica: por exemplo, EDCI, TBTU, COMU, T3P, etc.[00223] Amide 35 can easily be prepared from commercially available cyanoacetic acid 34. In the amide bond formation step, cyanoacetic acid 34 can react with a substituted 3-aminopyridine to provide compounds 35 of this invention. The reaction conditions for amide coupling are generally in an aprotic solvent (e.g. DCM, NMP, DMF, etc.), in the presence of an organic base, such as an aliphatic amine, (e.g. triethylamine or DIPEA) and an amide coupling agent known to those skilled in the art: for example, EDCI, TBTU, COMU, T3P, etc.

Etapa 2Step 2

[00224] Na etapa de formação de pirazol, o ânion de cianoamida 35 pode ser gerado com uma base (tal como acetato de potássio ou sódio) em um solvente apropriado tal como um álcool (por exemplo, etanol). O ânion depois reage com tricloroacetonitrila na temperatura ambiente. O sólido resultante, que pode ser coletado por filtração, é depois reagido com hidrazina (ou seu hidrato) em um solvente aprótico, tal como DMF ou NMP, para fornecer o diaminopirazol 36, este sendo ainda condensado com um par de acoplamento dieletrofílico para formar a porção de pirimidina dos compostos de fórmula II desta invenção.[00224] In the pyrazole formation step, the cyanoamide anion 35 can be generated with a base (such as potassium or sodium acetate) in an appropriate solvent such as an alcohol (for example, ethanol). The anion then reacts with trichloroacetonitrile at room temperature. The resulting solid, which can be collected by filtration, is then reacted with hydrazine (or its hydrate) in an aprotic solvent, such as DMF or NMP, to provide diaminopyrazole 36, this being further condensed with a dielectrophic coupling pair to form the pyrimidine portion of the compounds of formula II of this invention.

Etapa 3Step 3

[00225] Na etapa de formação de pirimidina, o intermediário 36 reage com uma espécie 1,3-dieletrofílica (por exemplo, um 1,3- dialdeído ou um 3-(dialquilamino)-prop-2-enal) em vários tipos de solventes (por exemplo, iPrOH/água, DMF, ou DMSO/água) para fornecer os produtos desejados II. Quando um ou dois dos centros eletrofílicos são protegidos/mascarados (por exemplo, aldeído mascarado como um cetal), a introdução de um ácido sulfônico (por exemplo, PTSA) é requerido para liberar o grupo funcional reativo.[00225] In the pyrimidine formation step, intermediate 36 reacts with a 1,3-dielectrophilic species (for example, a 1,3-dialdehyde or a 3-(dialkylamino)-prop-2-enal) in various types of solvents (e.g., iPrOH/water, DMF, or DMSO/water) to provide the desired products II. When one or two of the electrophilic centers are protected/masked (e.g., aldehyde masked as a ketal), the introduction of a sulfonic acid (e.g., PTSA) is required to release the reactive functional group.

Terapia de Combinação ATR/Chk1ATR/Chk1 Combination Therapy Exemplo 1: A inibição da inibição de Chk1 e ATR leva a níveis elevados de dano ao DNAExample 1: Chk1 and ATR inhibition leads to elevated levels of DNA damage

[00226] Conforme ilustrado na Figura 1, o impacto da inibição de Chk1 por AZD7762 nos níveis de dano ao DNA a partir do tratamento de células cancerosas com o inibidor de ATR VE-821 foi avaliado através da medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear, um marcador amplamente utilizado de danos no DNA. O YH2AX foi detectado por Western blot. As células de câncer U2OS foram incubadas durante a noite em placas de 96 reservatórios e tratadas durante 8 horas com DMSO AZD7762 (60 nM) e/ou VE-821 (10 uM). As células foram manchadas com anticorpo histona H2AX antifosforoso (serina 139) como primário e Alexa 555 como secundário. O microscópio de fluorescência Operetta foi utilizado para tirar imagens, que foram analisadas utilizando o software Columbus. Intensidade > 2000 UA foi considerada como célula positiva pan-nuclear YH2AX. Os dados são apresentados como média ± S.E.M.[00226] As illustrated in Figure 1, the impact of Chk1 inhibition by AZD7762 on DNA damage levels from treating cancer cells with the ATR inhibitor VE-821 was assessed by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation , a widely used marker of DNA damage. YH2AX was detected by Western blot. U2OS cancer cells were incubated overnight in 96-well plates and treated for 8 hours with DMSO AZD7762 (60 nM) and/or VE-821 (10 uM). Cells were stained with antiphosphorus histone H2AX antibody (serine 139) as primary and Alexa 555 as secondary. The Operetta fluorescence microscope was used to take images, which were analyzed using Columbus software. Intensity > 2000 AU was considered as YH2AX pan-nuclear positive cell. Data are presented as mean ± S.E.M.

[00227] O tratamento de células cancerosas U2OS com o inibidor de ATR VE-821 ou o inibidor de Chk1 AZD7762 isoladamente teve um impacto mínimo sobre a porcentagem de células positivas para YH2AX pan-nuclear (< 5 % de células eram positivas para pan-nuclear YH2AX). Ao contrário o tratamento com ambos os agentes levou a > 20 % de células com coloração positiva para pan-nuclear YH2AX. Isso é consistente com o aumento dos danos no DNA. Estes dados sustentam que a combinação de inibidores de Chk1 e inibidores de ATR pode levar a danos aumentados ao DNA nas células de câncer.[00227] Treatment of U2OS cancer cells with the ATR inhibitor VE-821 or the Chk1 inhibitor AZD7762 alone had a minimal impact on the percentage of cells positive for pan-nuclear YH2AX (< 5% of cells were positive for pan-nuclear YH2AX). nuclear YH2AX). In contrast, treatment with both agents led to >20% of cells staining positive for pan-nuclear YH2AX. This is consistent with increased DNA damage. These data support that the combination of Chk1 inhibitors and ATR inhibitors can lead to increased DNA damage in cancer cells.

Exemplo 2a: Inibição de Chk1 ou expressão de formas mutantes inativas de células cancerosas sensíveis a Chk1 para inibição de ATRExample 2a: Inhibition of Chk1 or expression of inactive mutant forms of Chk1-sensitive cancer cells for ATR inhibition

[00228] Com referência às Figuras 2a e 2b, o impacto da inibição de Chk1 ou expressão do mutante de Chk1 inativo na resposta celular ao inibidor de ATR VE-821 foi avaliado utilizando um ensaio de sobrevivência clonogênica em uma variedade de células de câncer. 500 células de U2OS, MCF-7, DLD-1, DLD-1 Chk-1S317A/-, DLD-1 Chk- 1+/-, DLD-1 ATRS/S e 1000 células de VH-10 foram laminadas na Placa de 10 cm. Após 5 h. de incubação (5 % de CO2 a 37°C) com de veículo (0,05 % de DMSO máx), várias concentrações de inibidor de ATR VE-821 foram adicionadas diretamente à placa contendo meios e incubadas durante 72 h. No final de 72 h. de incubação, o veículo e o meio contendo medicamento foram substituídos por meio fresco e incubados ainda durante mais 5 a 8 dias antes das placas serem fixadas e manchadas com azul de metileno a 4 % em MeOH e as colônias foram contadas manualmente. Cada ponto de dados representa um conjunto de dados triplicado ± SEM.[00228] With reference to Figures 2a and 2b, the impact of Chk1 inhibition or inactive Chk1 mutant expression on the cellular response to the ATR inhibitor VE-821 was evaluated using a clonogenic survival assay in a variety of cancer cells. 500 cells of U2OS, MCF-7, DLD-1, DLD-1 Chk-1S317A/-, DLD-1 Chk- 1+/-, DLD-1 ATRS/S and 1000 cells of VH-10 were laminated on the Plate 10 cm. After 5 h. After incubation (5% CO2 at 37°C) with vehicle (0.05% DMSO max), various concentrations of ATR inhibitor VE-821 were added directly to the plate containing media and incubated for 72 h. At the end of 72 h. After incubation, the vehicle and drug-containing medium were replaced with fresh medium and incubated for a further 5 to 8 days before the plates were fixed and stained with 4% methylene blue in MeOH and colonies were counted manually. Each data point represents a triplicate data set ± SEM.

[00229] A inibição de Chk1 por AZD7762 (20 nM) resultou em sensibilidade aumentada ao inibidor de ATR VE-821 nas células de câncer MCF-7 e U2OS, mas não teve nenhum impacto sobre as células VH10 não cancerosas. Por exemplo, o tratamento de células MCF-7 e U2OS com VE-821 1 μM isoladamente (uma concentração mostrada anteriormente de inibir cerca de 50 % da atividade de ATR {ref papel NCB}) resultou em 10 a 20 % de sobrevivência clonogênica. O tratamento adicional com o inibidor de Chk1, AZD7762, levou a 2 % ou menos de sobrevivência clonogênica em ambos os sistemas celulares. A expressão de uma forma mutante inativa de Chk1 igualmente sensibilizou as células para o inibidor de ATR VE-821. As células DLD-1 de origem não foram afetadas pelo tratamento com VE- 822 (~ 100 % de viabilidade celular a 1 μM VE-821), ao contrário o tratamento de células DLD-1 que expressam a forma mutante inativa de Chk1 (S317A/-) com VE-821 1 μM levou a menos do que 3 % de células viáveis remanescentes. Estes dados sustentam que a inibição de Chk1 (ou expressão de Chk1 inativo) pode sensibilizar as células cancerosas para a inibição de ATR, resultando na sobrevivência celular reduzida, mas que as células não cancerosas podem tolerar a combinação.[00229] Inhibition of Chk1 by AZD7762 (20 nM) resulted in increased sensitivity to the ATR inhibitor VE-821 in MCF-7 and U2OS cancer cells, but had no impact on non-cancerous VH10 cells. For example, treatment of MCF-7 and U2OS cells with 1 μM VE-821 alone (a concentration previously shown to inhibit about 50% of ATR activity {ref paper NCB}) resulted in 10 to 20% clonogenic survival. Additional treatment with the Chk1 inhibitor AZD7762 led to 2% or less clonogenic survival in both cell systems. Expression of an inactive mutant form of Chk1 also sensitized cells to the ATR inhibitor VE-821. Parent DLD-1 cells were not affected by treatment with VE-822 (~100% cell viability at 1 μM VE-821), unlike treatment of DLD-1 cells expressing the inactive mutant form of Chk1 (S317A /-) with 1 μM VE-821 led to less than 3% viable cells remaining. These data support that Chk1 inhibition (or expression of inactive Chk1) can sensitize cancer cells to ATR inhibition, resulting in reduced cell survival, but that non-cancer cells can tolerate the combination.

Exemplo 2b: Expressão do oncogene de cMYC sensibiliza as células para a combinação de inibição de ATR e Chk1.Example 2b: Expression of the cMYC oncogene sensitizes cells to the combination of ATR and Chk1 inhibition.

[00230] Com referência à Figura 2c, um par de linhagens celulares isogênicas que difere apenas na expressão do oncogene cMYC (células HA1EB-GFP de origem e transformadas com cMYC, HA1EB- GFP-cMYC) foi tratada com VE-821 isoladamente (em concentrações de até 5 μM), AZD7762 isoladamente (30 nM) ou a combinação de VE- 821 e AZD7762 durante 72 horas. A viabilidade celular foi avaliada através da coloração com resazurina. Nem VE-821 nem AZD7762 tiveram um efeito marcante sobre a viabilidade das células de origem. Adicionalmente, a AZD7762 isoladamente não afetou a viabilidade das células transformadas com cMYC. Em contraste, a VE-821 reduziu a viabilidade de células transformadas com cMYC (~ 40 % de células viáveis remanescentes) e a combinação reduziu significativamente a viabilidade celular das células transformadas com cMYC (<5 % de células viáveis remanescentes).[00230] Referring to Figure 2c, a pair of isogenic cell lines differing only in expression of the cMYC oncogene (parent and cMYC-transformed HA1EB-GFP cells, HA1EB-GFP-cMYC) were treated with VE-821 alone (in concentrations up to 5 μM), AZD7762 alone (30 nM) or the combination of VE-821 and AZD7762 for 72 hours. Cell viability was assessed by resazurin staining. Neither VE-821 nor AZD7762 had a marked effect on the viability of the parent cells. Additionally, AZD7762 alone did not affect the viability of cMYC-transformed cells. In contrast, VE-821 reduced the viability of cMYC-transformed cells (~40% viable cells remaining) and the combination significantly reduced the cell viability of cMYC-transformed cells (<5% viable cells remaining).

Exemplo 2c: Perda de função de p53 e RB e expressão do oncogene H-RAS sensibilizam as células para a combinação de inibição de ATR e Chk1.Example 2c: Loss of p53 and RB function and expression of the H-RAS oncogene sensitize cells to the combination of ATR and Chk1 inhibition.

[00231] Com referência à Figura 2d, um par de células isogênicas foi utilizado para avaliar o impacto da perda de p53 e RB na sensibilidade das células para a combinação de VE-821 e AZD7762 (células de origem BJ-hTERT vs células BJ-SV40T que expressam o Antígeno de Tumor Grande que inativa a função de p53 e RB). Além disso, o impacto da expressão do oncogene H-RAS foi avaliado nas células BJ-SV40T transformadas com H-RAS (G12V) (BJ RAS) ativado. As células foram tratadas com VE-821 isoladamente (em concentrações de até 5 μM), AZD7762 isoladamente (30 nM) ou a combinação de VE-821 e AZD7762 durante 72 horas. A viabilidade celular foi avaliada por coloração com resazurina. A AZD7762 isoladamente não teve um efeito marcante sobre a viabilidade de qualquer uma das linhagens celulares. A VE-821 isoladamente reduziu a viabilidade das células transformadas com H-RAS (~ 60 % de células viáveis remanescentes). Ao contrário, a combinação de VE-821 e AZD7762 reduziu acentuadamente a viabilidade de ambas as células p53 e RB inativadas (~ 30 % de células viáveis remanescentes) e as células transformadas com H-RAS (< 10 % de células viáveis remanescentes).[00231] With reference to Figure 2d, a pair of isogenic cells was used to evaluate the impact of loss of p53 and RB on cell sensitivity to the combination of VE-821 and AZD7762 (BJ-hTERT cells vs BJ- SV40T that express the Large Tumor Antigen that inactivates the function of p53 and RB). Furthermore, the impact of H-RAS oncogene expression was assessed in BJ-SV40T cells transformed with activated H-RAS (G12V) (BJ RAS). Cells were treated with VE-821 alone (at concentrations up to 5 μM), AZD7762 alone (30 nM), or the combination of VE-821 and AZD7762 for 72 hours. Cell viability was assessed by resazurin staining. AZD7762 alone did not have a marked effect on the viability of either cell line. VE-821 alone reduced the viability of H-RAS-transformed cells (~60% viable cells remaining). In contrast, the combination of VE-821 and AZD7762 markedly reduced the viability of both p53 and RB inactivated cells (~30% viable cells remaining) and H-RAS-transformed cells (<10% viable cells remaining).

Exemplo 3: Inibição de Chk1 sensibiliza os tumores para inibição de ATR.Example 3: Chk1 inhibition sensitizes tumors to ATR inhibition.

[00232] O impacto da inibição de Chk1 na resposta tumoral ao inibidor de ATR VE-821 foi avaliado em dois modelos de xenoenxerto de camundongo diferentes em camundongos nus Balb/C utilizando a linhagem celular de câncer da mama MX-1 (Figuras 3a e 3b) e a linhagem celular de câncer do pulmão H460 (Figuras 4a e 4b). No caso do modelo MX-1, 2 milhões de células em 50 % de matrigel foram injetados nos camundongos nus e para o modelo H460 5 milhões de células em PBS foram injetados em camundongos nus. Após 8 a 9 dias de implantação, os animais foram divididos em 4 grupos de 5 animais com base no tamanho do tumor; com volume tumoral médio de 130 mm3. O primeiro grupo foi administrado em doses de veículo (10 % succinato D-α-Tocoferol polietileno glicol 1000 (sigma) em água por sonda oral e 11,3 % (2-Hidroxipropil)-β ciclodextrina em solução salina normal por injeção intraperitoneal. O 2o grupo recebeu 25 Mg/kg de peso corporal do inibidor de Chk1, AZD7762, dissolvido em 11,3 % de (2-hidróxi propil)-β ciclodextrina em solução salina normal por injeção intraperitoneal. O 3o grupo recebeu 60 mg/kg de peso corporal do inibidor de ATR VE-822, dissolvido em succinato de D-α-tocoferol polietileno glicol 1000 a 10 % em água por sonda oral O 4o grupo recebeu igualmente: 25 mg/kg de peso corporal de AZD7762 dissolvida em 11,3 % (2-Hidroxi-propil)-β ciclodextrina em solução salina normal por injeção intraperitoneal e 60 mg/kg de peso corporal de VE-822 dissolvido em succinato de D-α-tocoferol polietileno glicol 1000 a 10 % em água por sonda oral. O peso corporal e o volume tumoral foram medidos duas vezes por semana. O volume do tumor foi medido com compasso de calibre e mostrado como média ± S.E.M. (comprimento x largura x largura x 0,52).[00232] The impact of Chk1 inhibition on tumor response to the ATR inhibitor VE-821 was evaluated in two different mouse xenograft models in Balb/C nude mice using the MX-1 breast cancer cell line (Figures 3a and 3b) and the lung cancer cell line H460 (Figures 4a and 4b). In the case of the MX-1 model, 2 million cells in 50% matrigel were injected into nude mice and for the H460 model, 5 million cells in PBS were injected into nude mice. After 8 to 9 days of implantation, animals were divided into 4 groups of 5 animals based on tumor size; with an average tumor volume of 130 mm3. The first group was administered in vehicle doses (10% D-α-Tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate (sigma) in water by oral gavage and 11.3% (2-Hydroxypropyl)-β cyclodextrin in normal saline by intraperitoneal injection. The 2nd group received 25 mg/kg body weight of the Chk1 inhibitor AZD7762 dissolved in 11.3% (2-hydroxypropyl)-β cyclodextrin in normal saline by intraperitoneal injection. The 3rd group received 60 mg/kg of body weight of the ATR inhibitor VE-822, dissolved in 10% D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate in water by oral gavage. The 4th group also received: 25 mg/kg of body weight of AZD7762 dissolved in 11, 3% (2-Hydroxy-propyl)-β cyclodextrin in normal saline by intraperitoneal injection and 60 mg/kg body weight of VE-822 dissolved in D-α-tocopherol succinate polyethylene glycol 1000 to 10% in water by gavage oral. Body weight and tumor volume were measured twice a week. Tumor volume was measured with calipers and shown as mean ± S.E.M. (length x width x width x 0.52).

[00233] No modelo de xenoenxerto de camundongo MX-1, o tratamento com o inibidor de ATR VE-822 teve impacto mínimo no tamanho do tumor (Figura 3a) ou sobrevivência (Figura 3b). O tratamento com o inibidor de Chk1, AZD7762, reduziu o crescimento tumoral, mas não teve qualquer impacto na sobrevivência. O tratamento com ambos os agentes em conjunto levou a uma melhora da inibição do crescimento tumoral, quando comparado com o agente isoladamente, e a uma melhora estatisticamente significativa na sobrevivência (P < 0,05). No modelo de xenoenxerto de camundongo H460, o tratamento com o inibidor de ATR VE-822 ou com o inibidor de Chk1 AZD7762 isoladamente teve um impacto mínimo sobre o tamanho do tumor (Figura 4a) ou sobre a sobrevivência (Figura 4b). Em contraste, a combinação de ambos os agentes resultou na inibição de crescimento tumoral quase completa e sobrevida prolongada. Para o crescimento tumoral, a diferença entre o grupo tratado com combinação e os grupos tratados com monoterapia atingiu significância estatística (P < 0,05). De forma semelhante para a sobrevivência, a diferença entre o grupo de combinação e os grupos tratados com monoterapia atingiu significância estatística (P < 0,01). Em ambos os modelos, a combinação foi bem tolerada sem perda de peso corporal observada. Estes dados sustentam que a combinação de inibidores de Chk1 e inibidores de ATR pode fornecer atividade antitumoral benéfica in vivo.[00233] In the MX-1 mouse xenograft model, treatment with the ATR inhibitor VE-822 had minimal impact on tumor size (Figure 3a) or survival (Figure 3b). Treatment with the Chk1 inhibitor AZD7762 reduced tumor growth but had no impact on survival. Treatment with both agents together led to an improvement in tumor growth inhibition, when compared with the agent alone, and a statistically significant improvement in survival (P < 0.05). In the H460 mouse xenograft model, treatment with the ATR inhibitor VE-822 or the Chk1 inhibitor AZD7762 alone had minimal impact on tumor size (Figure 4a) or survival (Figure 4b). In contrast, the combination of both agents resulted in almost complete tumor growth inhibition and prolonged survival. For tumor growth, the difference between the combination-treated group and the monotherapy-treated groups reached statistical significance (P < 0.05). Similarly for survival, the difference between the combination group and monotherapy-treated groups reached statistical significance (P < 0.01). In both models, the combination was well tolerated with no body weight loss observed. These data support that the combination of Chk1 inhibitors and ATR inhibitors can provide beneficial antitumor activity in vivo.

Exemplo 4: Inibição de Chk1 sensibiliza as células cancerosas para o tratamento combinado de um inibidor de ATR e um agente de dano ao DNA representativoExample 4: Inhibition of Chk1 sensitizes cancer cells to combined treatment of an ATR inhibitor and a representative DNA damaging agent

[00234] Com referência à Figura 5, o impacto da inibição de Chk1 por AZD7762 sobre a apoptose celular a partir do tratamento com o inibidor de ATR VE-821 e um agente de dano ao DNA representativo, hidroxil ureia (2 mM), foi avaliado medindo os níveis de caspase-3 clivada, um marcador amplamente utilizado de apoptose. As células U2OS foram tratadas durante 24 h. com o agente de dano ao DNA hidroxiureia e doses variadas de AZD7762 e/ou VE-821. As células foram subsequentemente manchadas com caspase 3 anticlivagem e anticorpos de β actina e microscopia confocal utilizada para tomar e quantificar as imagens. Os dados são apresentados como % de células positivas para caspase-3 clivada. O tratamento com hidroxiureia isoladamente levou à ativação mínima da caspase-3 (< 0,5 % de células positivas). A adição do inibidor de Chk1 AZD7762 ou do inibidor ATR VE-821 teve impacto mínimo sobre a clivagem da caspase-3 quando comparado com o tratamento de hidroxilureia isoladamente (< 1 % de células positivas). Ao contrário, a combinação de ambos os agentes levou à clivagem aumentada de caspase-3 (> 4 % de células positivas). Estes dados sustentam que o tratamento combinado com um inibidor de Chk1 e ATR pode sensibilizar as células para um agente de dano ao DNA.[00234] Referring to Figure 5, the impact of Chk1 inhibition by AZD7762 on cellular apoptosis from treatment with the ATR inhibitor VE-821 and a representative DNA damaging agent, hydroxyl urea (2 mM), was assessed by measuring levels of cleaved caspase-3, a widely used marker of apoptosis. U2OS cells were treated for 24 h. with the DNA damaging agent hydroxyurea and varying doses of AZD7762 and/or VE-821. Cells were subsequently stained with anti-cleavage caspase 3 and β-actin antibodies and confocal microscopy used to take and quantify images. Data are presented as % cells positive for cleaved caspase-3. Hydroxyurea treatment alone led to minimal caspase-3 activation (< 0.5% positive cells). Addition of the Chk1 inhibitor AZD7762 or the ATR inhibitor VE-821 had minimal impact on caspase-3 cleavage when compared to hydroxylurea treatment alone (< 1% positive cells). In contrast, the combination of both agents led to increased caspase-3 cleavage (>4% positive cells). These data support that combined treatment with a Chk1 and ATR inhibitor can sensitize cells to a DNA damaging agent.

Exemplo 5: Ativação de ATR por um inibidor de Chk-1 é elevada nas células de câncer, mas não em células normaisExample 5: ATR activation by a Chk-1 inhibitor is elevated in cancer cells but not in normal cells

[00235] Conforme ilustrado nas Figuras 6a e 6b, as células cancerosas U2OS (Figura 6a) e as células de fibroblastos normais VH- 10 (Figura 6b) foram tratadas durante 3 horas com DMSO, AZD7762 (300 nM), inibidor de ATR VE-821 (20 μM) e suas combinações. As células foram fixadas em PFA a 4 % e manchadas com anticorpo de histona H2AX antifósforo (serina 139) (anticorpo primário) e Alexa 555 (anticorpo secundário). Uma leitura de mais do que 9 focos de YH2AX por célula foi considerada uma célula positiva. Os histogramas mostram a média ± S.E.M. (n = 3). Isto mostra que a inibição de Chk1 pode levar à ativação de substratos de ATR nas células cancerosas, mas não nas células não cancerosas.[00235] As shown in Figures 6a and 6b, U2OS cancer cells (Figure 6a) and VH-10 normal fibroblast cells (Figure 6b) were treated for 3 hours with DMSO, AZD7762 (300 nM), ATR inhibitor VE -821 (20 μM) and combinations thereof. Cells were fixed in 4% PFA and stained with antiphosphorus (serine 139) histone H2AX antibody (primary antibody) and Alexa 555 (secondary antibody). A reading of more than 9 YH2AX foci per cell was considered a positive cell. Histograms show mean ± S.E.M. (n = 3). This shows that Chk1 inhibition can lead to activation of ATR substrates in cancer cells but not in non-cancer cells.

[00236] Em outro exemplo, ilustrado nas Figuras 6c e 6d, o impacto da inibição de Chk1 por AZD-7762 e inibição de ATR por VE-821 nos níveis de dano ao DNA nas células de câncer foi novamente avaliado através da medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear, um indicador amplamente utilizado de altos níveis de dano ao DNA (Figura 6c) e através do ensaio de cometa alcalino, que mede as rupturas de DNA (Figura 6d). As células de câncer U2OS foram tratadas durante 24 horas com DMSO, AZD-7762 (30 nM) e/ou VE-821 (10 uM). Para a avaliação de YH2AX, as células foram então manchadas com anticorpo de histona H2AX antifósforo (serina 139) como anticorpo primário e um anticorpo secundário fluorescente, e o microscópio de fluorescência Operetta foi utilizado para tirar as imagens que foram analisadas utilizando o software Columbus. As células com nove ou mais focos YH2AX foram consideradas YH2AX positivas. As células com YH2AX manchada e sem focos distinguíveis foram consideradas células pan-nucleares YH2AX positivas. Para a avaliação das quebras de DNA através do ensaio cometa, as células foram processadas por eletroforese em gel de agarose sob condições de desnaturação alcalina e o DNA foi manchado com tintura YOYO-1. O microscópio de fluorescência Operetta foi utilizado para tirar as imagens que foram analisadas utilizando o software Cometscore. Os dados são apresentados como média ± S.E.M.[00236] In another example, illustrated in Figures 6c and 6d, the impact of Chk1 inhibition by AZD-7762 and ATR inhibition by VE-821 on levels of DNA damage in cancer cells was again assessed by measuring accumulation of pan-nuclear YH2AX, a widely used indicator of high levels of DNA damage (Figure 6c) and through the alkaline comet assay, which measures DNA breaks (Figure 6d). U2OS cancer cells were treated for 24 hours with DMSO, AZD-7762 (30 nM) and/or VE-821 (10 uM). For the assessment of YH2AX, cells were then stained with antiphosphorus histone H2AX antibody (serine 139) as a primary antibody and a fluorescent secondary antibody, and the Operetta fluorescence microscope was used to take images that were analyzed using Columbus software. Cells with nine or more YH2AX foci were considered YH2AX positive. Cells with stained YH2AX and no distinguishable foci were considered YH2AX-positive pan-nuclear cells. To evaluate DNA breaks using the comet assay, cells were processed by agarose gel electrophoresis under alkaline denaturing conditions and DNA was stained with YOYO-1 dye. The Operetta fluorescence microscope was used to take images that were analyzed using Cometscore software. Data are presented as mean ± S.E.M.

[00237] O tratamento de células cancerosas U2OS com o inibidor de ATR VE-821 ou com o inibidor de Chk1 AZD-7762 isoladamente, ou tratamento com ambos os agentes, teve impacto mínimo sobre a percentagem de células YH2AX positivas neste momento (24 h). O tratamento com VE-821 ou AZD-7762 isoladamente teve um impacto mínimo sobre a porcentagem de células positivas para pan-nuclear YH2AX (< 5 % de células positivas) ou apresentaram momentos da cauda de cometa indicativos de rupturas de DNA (<10 % células positivas). Em contraste, o tratamento com ambos os agentes levou a > 50 % de células com coloração positiva para pan-nuclear YH2AX (Figura 6c) e > 30 % células apresentando caudas de cometa (Figura 6d). Estes resultados indicam que a combinação de inibidores de Chk1 e inibidores de ATR pode levar a danos aumentados ao DNA nas células de câncer.[00237] Treatment of U2OS cancer cells with the ATR inhibitor VE-821 or the Chk1 inhibitor AZD-7762 alone, or treatment with both agents, had minimal impact on the percentage of YH2AX positive cells at this time point (24 h ). Treatment with VE-821 or AZD-7762 alone had minimal impact on the percentage of cells positive for pan-nuclear YH2AX (<5% positive cells) or showed comet tail moments indicative of DNA breaks (<10% positive cells). In contrast, treatment with both agents led to >50% cells staining positive for pan-nuclear YH2AX (Figure 6c) and >30% cells showing comet tails (Figure 6d). These results indicate that the combination of Chk1 inhibitors and ATR inhibitors can lead to increased DNA damage in cancer cells.

Exemplo 6: Combinação de um inibidor de ATR e um inibidor de Chk-1 induz a formação de DNA de filamento únicoExample 6: Combination of an ATR inhibitor and a Chk-1 inhibitor induces the formation of single-stranded DNA

[00238] Com referência às Figuras 7a e 7b, as células de câncer U2OS e as células de fibroblasto normais VH-10 foram tratadas durante 24 h com as doses mostradas nas figuras. Pós-tratamento as células foram pré-extraídas para extrair por lavagem a fração de RPA não ligada à cromatina e fixadas em PFA a 4 %. As células foram manchadas com anticorpo anti RPA 32; as imagens foram tiradas utilizando o microscópio confocal e foram analisadas utilizando o software Image J. A intensidade média > 70 UA por célula foi considerada como célula positiva. Os dados quantitativos de U2OS e VH-10 respectivamente, n = 3, média ± S.E.M. Isto mostra que a inibição de Chk1 leva a ssDNA elevado (um marcador de estresse de replicação), que é intensificado pela inibição de ATR, em células cancerosas, mas não em células não cancerosas.[00238] Referring to Figures 7a and 7b, U2OS cancer cells and VH-10 normal fibroblast cells were treated for 24 h with the doses shown in the figures. Post-treatment, cells were pre-extracted to extract the RPA fraction not bound to chromatin by washing and fixed in 4% PFA. Cells were stained with anti-RPA 32 antibody; Images were taken using the confocal microscope and were analyzed using Image J software. Average intensity > 70 AU per cell was considered as positive cell. The quantitative data of U2OS and VH-10 respectively, n = 3, mean ± S.E.M. This shows that Chk1 inhibition leads to elevated ssDNA (a marker of replication stress), which is enhanced by ATR inhibition, in cancer cells but not in non-cancerous cells.

Exemplo 7: Combinação de um inibidor de ATR e um inibidor de Chk1 sinergicamente mata as células cancerosas, mas não as células normaisExample 7: Combination of an ATR inhibitor and a Chk1 inhibitor synergistically kills cancer cells but not normal cells

[00239] Como ilustrado nas Figuras 8a a 8g, as linhagens celulares de múltiplos cânceres (células de câncer U2OS (a), H460 (c), MX-1 (d), HCT-116 (e), MCF7 (f) e HL60 (h)), assim como as células de fibroblastos normais e endoteliais (VH-10 (b) e HUVAC (g)), foram semeadas em placas de 96 reservatórios e tratadas durante 72 h com as doses indicadas nas figuras. O ensaio baseado em resazurina foi utilizado para medir a viabilidade de células após a introdução de VE- 821 e AZD7762 isoladamente ou em combinação. A interação do medicamento foi analisada mediante o uso do software Compusyn. O índice CI abaixo de 1 para ser considerado como interação sinérgica. Dados quantitativos n = 3, média ± S.E.M. As figuras mostram a viabilidade das linhagens celulares particulares contra os inibidores isoladamente ou em combinação. Referindo novamente às Figuras 8a a 8g, o gráfico de interação de medicamento anexo também é fornecido para cada linhagem celular após a administração de VE-821 e AZD7762. Como mostrado nos gráficos tanto da viabilidade celular quanto da interação medicamentosa, a combinação de inibidores de ATR e Chk1 possui citotoxicidade sinérgica em todas as linhagens celulares de câncer testadas, mas não em células não cancerosas. Isto sugere que a combinação de inibidores de ATR e Chk1 pode ser utilizada para matar as células tumorais enquanto poupa o tecido normal.[00239] As illustrated in Figures 8a to 8g, cell lines from multiple cancers (U2OS cancer cells (a), H460 (c), MX-1 (d), HCT-116 (e), MCF7 (f) and HL60 (h)), as well as normal fibroblast and endothelial cells (VH-10 (b) and HUVAC (g)), were seeded in 96-well plates and treated for 72 h with the doses indicated in the figures. The resazurin-based assay was used to measure cell viability after the introduction of VE-821 and AZD7762 alone or in combination. The drug interaction was analyzed using Compusyn software. The CI index below 1 to be considered as a synergistic interaction. Quantitative data n = 3, mean ± S.E.M. The figures show the viability of particular cell lines against the inhibitors alone or in combination. Referring again to Figures 8a to 8g, the attached drug interaction graph is also provided for each cell line after administration of VE-821 and AZD7762. As shown in the graphs of both cell viability and drug interaction, the combination of ATR and Chk1 inhibitors has synergistic cytotoxicity in all cancer cell lines tested, but not in non-cancer cells. This suggests that the combination of ATR and Chk1 inhibitors can be used to kill tumor cells while sparing normal tissue.

Exemplo 8: Inibição de Chk1 e ATR não leva a níveis elevados de dano ao DNA em células normaisExample 8: Inhibition of Chk1 and ATR does not lead to elevated levels of DNA damage in normal cells

[00240] Como ilustrado na Figura 9, o impacto da inibição de Chk1 através da inibição de AZD-7762 e ATR por VE-821 sobre os níveis de dano ao DNA em células normais foi avaliado mediante a medição do acúmulo de YH2AX pan-nuclear, um indicador amplamente utilizado de níveis elevados de dano ao DNA, e mediante a medição do acúmulo de focos discretos de YH2AX e 53BP1, que são marcadores de níveis mais baixos de dano ao DNA. Os fibroblastos normais VH-10 foram tratados durante 24 horas com DMSO, AZD-7762 (30 nM ou 60 nM) e/ou VE-821 (10 uM). As células foram então manchadas com anticorpo de histona H2AX e anti-53BP1 anti-fósforo (serina 139) como anticorpos primários, e anticorpos secundários fluorescentes, e o microscópio de fluorescência Operetta foi utilizado para tirar as imagens que foram analisadas utilizando o software Columbus. As células com nove ou mais focos YH2AX ou 53BP1 foram consideradas positivas de focos YH2AX ou 53BP1. Células com YH2AX manchada e sem focos distinguíveis foram consideradas células pan-nucleares YH2AX positivas. Os dados são apresentados como média ± S.E.M.[00240] As illustrated in Figure 9, the impact of Chk1 inhibition through VE-821 inhibition of AZD-7762 and ATR on DNA damage levels in normal cells was assessed by measuring pan-nuclear YH2AX accumulation , a widely used indicator of high levels of DNA damage, and by measuring the accumulation of discrete foci of YH2AX and 53BP1, which are markers of lower levels of DNA damage. Normal VH-10 fibroblasts were treated for 24 hours with DMSO, AZD-7762 (30 nM or 60 nM) and/or VE-821 (10 uM). The cells were then stained with histone H2AX antibody and anti-53BP1 anti-phosphorus (serine 139) as primary antibodies, and fluorescent secondary antibodies, and the Operetta fluorescence microscope was used to take images which were analyzed using Columbus software. Cells with nine or more YH2AX or 53BP1 foci were considered YH2AX or 53BP1 foci positive. Cells with stained YH2AX and no distinguishable foci were considered YH2AX-positive pan-nuclear cells. Data are presented as mean ± S.E.M.

[00241] O tratamento de células VH10 normais com o inibidor de ATR VE-821 ou com o inibidor de Chk1 AZD-7762 isoladamente, ou tratamento com ambos os agentes, teve impacto mínimo na porcentagem de células que colorem YH2AX foco positivo, 53BP1 foco positivo ou pan-nuclear YH2AX positivo. Especificamente, o tratamento com ambos os agentes levou a < 2 % de células de coloração positiva para pan-nuclear YH2AX (Figura 5b). Estes resultados sugerem que a combinação de inibidores de Chk1 e inibidores de ATR não leva ao aumento de dano ao DNA em células normais.[00241] Treatment of normal VH10 cells with the ATR inhibitor VE-821 or the Chk1 inhibitor AZD-7762 alone, or treatment with both agents, had minimal impact on the percentage of cells staining YH2AX focus positive, 53BP1 focus positive or pan-nuclear YH2AX positive. Specifically, treatment with both agents led to <2% cells staining positive for pan-nuclear YH2AX (Figure 5b). These results suggest that the combination of Chk1 inhibitors and ATR inhibitors does not lead to increased DNA damage in normal cells.

Exemplo 9: Inibidor de ATR VE-822 sinergiza com vários inibidores de ChkExample 9: ATR inhibitor VE-822 synergizes with multiple Chk inhibitors

[00242] Conforme ilustrado nas Figuras 10a-d, as células cancerosas HT29 foram tratadas em triplicata com VX-970 e os inibidores de Chk indicados durante 96 h, quando a viabilidade celular foi medida por ensaio MTS. A sinergia foi analisada no intervalo de 95 % utilizando o software MacSynergy II.[00242] As illustrated in Figures 10a-d, HT29 cancer cells were treated in triplicate with VX-970 and the indicated Chk inhibitors for 96 h, when cell viability was measured by MTS assay. Synergy was analyzed in the 95% range using MacSynergy II software.

[00243] Todos os inibidores de Chk testados apresentaram citotoxicidade sinérgica em combinação com o inibidor de ATR VE- 822, incluindo o inibidor duplo Chk1 e Chk2 AZD-7762 (a) e o inibidor seletivo de Chk1 SCH-900776 (d). Estes resultados sugerem que um inibidor de ATR pode sinergizar eficazmente com diferentes inibidores de Chk1 clínicos nas células de câncer.[00243] All Chk inhibitors tested showed synergistic cytotoxicity in combination with the ATR inhibitor VE-822, including the dual Chk1 and Chk2 inhibitor AZD-7762 (a) and the selective Chk1 inhibitor SCH-900776 (d). These results suggest that an ATR inhibitor can effectively synergize with different clinical Chk1 inhibitors in cancer cells.

EnsaiosEssay Exemplo 10: Ensaio de Inibição de ATR CelularExample 10: Cellular ATR Inhibition Assay

[00244] Os compostos podem ser submetidos à triagem quanto à sua capacidade de inibir a ATR intracelular utilizando um ensaio de microscopia de imunofluorescência para detectar a fosforilação do substrato de ATR histona H2AX nas células tratadas com hidroxiureia. As células HT29 são laminadas em 14000 células por reservatório em placas de formação de imagens preta de 96 reservatórios (BD 353219) em meio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado com soro bovino fetal a 10 % (JRH Biosciences 12003), solução de Penicilina/Estrepto- micina diluída 1:100 (Sigma P7539), e L-glumtamina 2 mM (Sigma G7513), e deixadas aderir durante a noite a 37°C em CO2 a 5 %. Os compostos são então adicionados ao meio celular a partir de uma concentração final de 25 M em diluições em série de 3 vezes e as células são incubadas a 37°C em CO2 a 5 %. Após 15 min, hidroxiureia (Sigma H8627) é adicionada até uma concentração final de 2 mM.[00244] Compounds can be screened for their ability to inhibit intracellular ATR using an immunofluorescence microscopy assay to detect phosphorylation of the ATR substrate histone H2AX in cells treated with hydroxyurea. HT29 cells are plated at 14000 cells per well in 96-well black imaging plates (BD 353219) in McCoy's 5A medium (Sigma M8403) supplemented with 10% fetal bovine serum (JRH Biosciences 12003), Penicillin solution /Streptomycin diluted 1:100 (Sigma P7539), and 2 mM L-glumtamine (Sigma G7513), and allowed to adhere overnight at 37°C in 5% CO2. The compounds are then added to the cell medium from a final concentration of 25 M in 3-fold serial dilutions and the cells are incubated at 37°C in 5% CO2. After 15 min, hydroxyurea (Sigma H8627) is added to a final concentration of 2 mM.

[00245] Após 45 min de tratamento com hidroxiureia, as células são lavadas em PBS, fixadas durante 10 min em formaldeído a 4 % diluído com PBS (Polysciences Inc 18814), lavadas em Tween-20 a 0,2 % com PBS (tampão de lavagem) e permeabilizadas durante 10 min em Triton X-100 a 0,5 % em PBS, todos na temperatura ambiente. As células são então lavadas uma vez em tampão de lavagem e bloqueadas durante 30 minutos na temperatura ambiente com 10 % de soro de cabra (Sigma G9023) diluído em tampão de lavagem (tampão de bloqueio). Para detectar os níveis de fosforilação de H2AX, as células são então incubadas durante 1 h na temperatura ambiente com anticorpo primário (anticorpo monoclonal antifosforilado de camundongo histona H2AX Ser139; Upstate 05-636) diluído a 1:250 em tampão de bloco. As células são então lavadas cinco vezes em tampão de lavagem antes da incubação durante 1 h na temperatura ambiente no escuro em uma mistura de anticorpo secundário (anticorpo conjugado de cabra anticamundongo Alexa Fluor 488, Invitrogen A11029) e mancha Hoechst (Invitrogen H3570); diluído 1:500 e 1:5000, respectivamente, em tampão de lavagem. As células são depois lavadas cinco vezes com tampão de lavagem e, finalmente 100 μl de PBS são adicionados a cada poço antes da formação de imagem.[00245] After 45 min of hydroxyurea treatment, the cells are washed in PBS, fixed for 10 min in 4% formaldehyde diluted with PBS (Polysciences Inc 18814), washed in 0.2% Tween-20 with PBS (buffer washing) and permeabilized for 10 min in 0.5% Triton X-100 in PBS, all at room temperature. The cells are then washed once in wash buffer and blocked for 30 minutes at room temperature with 10% goat serum (Sigma G9023) diluted in wash buffer (blocking buffer). To detect H2AX phosphorylation levels, cells are then incubated for 1 h at room temperature with primary antibody (mouse antiphosphorylated histone H2AX Ser139 monoclonal antibody; Upstate 05-636) diluted 1:250 in block buffer. Cells are then washed five times in wash buffer before incubation for 1 h at room temperature in the dark in a mixture of secondary antibody (goat anti-mouse Alexa Fluor 488-conjugated antibody, Invitrogen A11029) and Hoechst stain (Invitrogen H3570); diluted 1:500 and 1:5000, respectively, in wash buffer. The cells are then washed five times with wash buffer and finally 100 μl of PBS is added to each well before imaging.

[00246] As células são formadas imagens por Alexa Fluor 488 e intensidade Hoechst utilizando o software BD Pathway 855 Bioimager and Attovision (BD Biosciences, Version 1.6/855) para quantificar H2AX Ser139 fosforilado e coloração de DNA, respectivamente. A porcentagem de núcleos de H2AX-positivo fosforilados em uma montagem de 9 imagens na ampliação de 20x é então calculada para cada reservatório utilizando o software BD Image Data Explorer (BD Biosciences Version 2.2.15). Os núcleos H2AX-positivos fosforilados são definidos como regiões positivas da Hoechst de interesse contendo intensidade de Alexa Fluor 488 em 1,75 vezes a intensidade média de Alexa Fluor 488 nas células não tratadas com hidroxiureia. A porcentagem de núcleos positivos para H2AX é finalmente traçada em gráfico contra a concentração para cada composto e IC50s para a inibição intracelular de ATR são determinadas utilizando o software Prism (GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).[00246] Cells are imaged by Alexa Fluor 488 and Hoechst intensity using BD Pathway 855 Bioimager and Attovision software (BD Biosciences, Version 1.6/855) to quantify phosphorylated H2AX Ser139 and DNA staining, respectively. The percentage of phosphorylated H2AX-positive nuclei in a montage of 9 images at 20x magnification is then calculated for each reservoir using BD Image Data Explorer software (BD Biosciences Version 2.2.15). Phosphorylated H2AX-positive nuclei are defined as Hoechst-positive regions of interest containing Alexa Fluor 488 intensity at 1.75 times the average Alexa Fluor 488 intensity in cells not treated with hydroxyurea. The percentage of H2AX-positive nuclei is finally plotted against the concentration for each compound and IC50s for intracellular ATR inhibition are determined using Prism software (GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA ).

[00247] Os compostos aqui descritos também podem ser testados de acordo com outros métodos conhecidos na técnica (ver Sarkaria et al, "Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine: Cancer Research 59: 4375-5382 (1999); Hickson et al, "Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM" Cancer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al, "Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members" The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); e Chiang et al, "Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family" Methods Mol. Biol. 281:125-41 (2004)).[00247] The compounds described herein can also be tested according to other methods known in the art (see Sarkaria et al, "Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine: Cancer Research 59: 4375-5382 (1999) ; Hickson et al, "Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated ATM Kinase" Cancer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al, "Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members" The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); and Chiang et al, "Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family" Methods Mol. Biol. 281:125-41 (2004)).

Exemplo 11: Ensaio de Inibição de ATRExample 11: ATR Inhibition Assay

[00248] Os compostos podem ser submetidos à triagem quanto à sua capacidade de inibir a ATR cinase utilizando um ensaio de incorporação de fosfato radioativo. Os ensaios são realizados em uma mistura de Tris/HCl 50 mM (pH 7,5), MgCl2 10 mM e DTT 1 mM. As concentrações finais de substrato são 10 μM [y-33P]ATP (3mCi 33P ATP/mmol ATP, Perkin Elmer) e 800 μM de peptídeo alvo (ASELPASQPQPFSAKKK).[00248] Compounds can be screened for their ability to inhibit ATR kinase using a radioactive phosphate incorporation assay. The assays are performed in a mixture of 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 and 1 mM DTT. Final substrate concentrations are 10 μM [γ-33P]ATP (3mCi 33P ATP/mmol ATP, Perkin Elmer) and 800 μM target peptide (ASELPASQPQPFSAKKK).

[00249] Os ensaios são realizados a 25 ° C na presença de 5 nM de ATR de comprimento total. Uma solução tampão de estoque de ensaio é preparada contendo todos os reagentes listados acima, com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. 13,5 μL da solução de matéria-prima são colocados em uma placa de 96 reservatórios seguida pela adição de 2 μL de diluições em série contendo matéria-prima de DMSO do composto de teste (tipicamente a partir de uma concentração final de 15 μM com diluições em série de 3 vezes) em duplicata (concentração de DMSO final 7 %). A placa é pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada pela adição de 15 μL de [Y-33P]ATP (concentração final 10 μM).[00249] Assays are performed at 25 ° C in the presence of 5 nM full-length ATR. An assay stock buffer solution is prepared containing all of the reagents listed above with the exception of ATP and the test compound of interest. 13.5 μL of the starting material solution is placed in a 96-well plate followed by the addition of 2 μL of DMSO raw material-containing serial dilutions of the test compound (typically from a final concentration of 15 μM with 3-fold serial dilutions) in duplicate (final DMSO concentration 7%). The plate is pre-incubated for 10 minutes at 25°C and the reaction is started by adding 15 μL of [Y-33P]ATP (final concentration 10 μM).

[00250] A reação é interrompida após 24 horas pela adição de 30 μl de ácido fosfórico 0,1 M contendo ATP 2 mM. Uma placa de 96 reservatórios de filtro de fosfocelulose de múltiplas telas (Millipore, Cat no. MAPHN0B50) é pré-tratada com 100 μl de ácido fosfórico 0,2 M antes da adição de 45 μL da mistura de ensaio interrompida. A placa é lavada com 5 x 200 μl de ácido fosfórico 0,2 M. Após secagem, 100 μL de coquetel de cintilação líquida Optiphase ‘SuperMix’ (Perkin Elmer) são adicionados ao reservatório antes da contagem de cintilação (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).[00250] The reaction is stopped after 24 hours by the addition of 30 μl of 0.1 M phosphoric acid containing 2 mM ATP. A plate of 96 multi-screen phosphocellulose filter wells (Millipore, Cat no. MAPHN0B50) is pretreated with 100 μL of 0.2 M phosphoric acid before adding 45 μL of the quenched assay mixture. The plate is washed with 5 x 200 μl of 0.2 M phosphoric acid. After drying, 100 μL of Optiphase 'SuperMix' liquid scintillation cocktail (Perkin Elmer) is added to the reservoir before scintillation counting (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter , Wallac).

[00251] Após a remoção dos valores médios de formação para todos os pontos de dados, os dados de Ki(app) são calculados a partir da análise de regressão não linear dos dados de taxa inicial utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).[00251] After removing the formation mean values for all data points, Ki(app) data is calculated from nonlinear regression analysis of the initial rate data using the Prism software package (GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego, California, USA).

Exemplo 12: Ensaio de Sensibilização de CisplatinaExample 12: Cisplatin Sensitization Assay

[00252] Os compostos podem ser submetidos a triagem quanto à sua capacidade de sensibilizar as células de câncer colorretal HCT116 para Cisplatina utilizando um ensaio de viabilidade celular 96h (MTS). As células HCT116, que possuem um defeito na sinalização de ATM para Cisplatina (ver, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); ver também, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)), são laminadas em 470 células por reservatório nas placas de poliestireno de 96 reservatórios (Costar 3596) em 150 μl de meio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado com soro bovino fetal a 10 % (JRH Biosciences 12003), solução de penicilina/estreptomicina diluída a 1:100 (Sigma P7539) e 2 mM de L-glumtamina (Sigma G7513), e deixadas aderir durante a noite a 37°C em CO2 a 5 %. Os compostos e Cisplatina são então ambos adicionados simultaneamente ao meio celular em diluições em série de 2 vezes a partir de uma concentração final superior de 10 mM como uma matriz completa de concentrações em um volume celular final de 200 μl, e as células são então incubadas a 37°C em 5 % CO2. Após 96 h, 40 μl de reagente MTS (Promega G358a) são adicionados a cada reservatório e as células são incubadas durante 1 h a 37°C em CO2 a 5 %. Finalmente, a absorvância é medida a 490 nm utilizando uma leitora SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) e a concentração de composto necessária para reduzir a IC50 de Cisplatina sozinha em pelo menos 3 vezes (até 1 casa decimal) pode ser relatada.[00252] Compounds can be screened for their ability to sensitize HCT116 colorectal cancer cells to Cisplatin using a 96h cell viability assay (MTS). HCT116 cells, which have a defect in ATM to Cisplatin signaling (see, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); see also, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)), are laminated into 470 cells per well in 96-well polystyrene plates (Costar 3596) in 150 μl of McCoy's 5A medium (Sigma M8403) supplemented with 10% fetal bovine serum (JRH Biosciences 12003), penicillin/streptomycin solution diluted to 1: 100 (Sigma P7539) and 2 mM L-glumtamine (Sigma G7513), and allowed to adhere overnight at 37°C in 5% CO2. The compounds and Cisplatin are then both added simultaneously to the cell medium in 2-fold serial dilutions from an upper final concentration of 10 mM as a complete array of concentrations in a final cell volume of 200 μl, and the cells are then incubated. at 37°C in 5% CO2. After 96 h, 40 μl of MTS reagent (Promega G358a) is added to each well and the cells are incubated for 1 h at 37°C in 5% CO2. Finally, absorbance is measured at 490 nm using a SpectraMax Plus 384 reader (Molecular Devices) and the compound concentration required to reduce the IC50 of Cisplatin alone by at least 3-fold (to 1 decimal place) can be reported.

Exemplo 13: Atividade do Agente Único HCT116Example 13: HCT116 Single Agent Activity

[00253] Os compostos podem ser submetidos à triagem quanto à atividade de um único agente contra células de câncer colorretal HCT116 utilizando um ensaio de viabilidade celular 96h (MTS). HCT116 são laminadas em 470 células por reservatório nas placas de poliestireno de 96 reservatórios (Costar 3596) em 150 μl de meio McCoy 5A (Sigma M8403) suplementado com soro bovino fetal a 10% (JRH Biosciences 12003), solução de penicilina/estreptomicina diluída 1:100 Sigma P7539), e 2 mM de L-glumtamina (Sigma G7513), e deixadas aderir durante a noite a 37°C em CO2 a 5 %. Os compostos são então adicionados ao meio celular em diluições em série de 2 vezes a partir de uma concentração final superior de 10 μM como uma matriz completa de concentrações em um volume celular final de 200 μl, e as células são então incubadas a 37°C em CO2 a 5 %. Após 96 h, 40 μl de reagente MTS (Promega G358a) são adicionados a cada reservatório e as células são incubadas durante 1 h a 37°C em CO2 a 5 %. Finalmente, a absorvância é medida em 490 nm utilizando uma leitora SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) e os valores de IC50 podem ser calculados.[00253] Compounds can be screened for single-agent activity against HCT116 colorectal cancer cells using a 96h cell viability assay (MTS). HCT116 are plated at 470 cells per well in 96-well polystyrene plates (Costar 3596) in 150 μl of McCoy 5A medium (Sigma M8403) supplemented with 10% fetal bovine serum (JRH Biosciences 12003), diluted penicillin/streptomycin solution 1:100 Sigma P7539), and 2 mM L-glumtamine (Sigma G7513), and allowed to adhere overnight at 37°C in 5% CO2. The compounds are then added to the cell medium in 2-fold serial dilutions from an upper final concentration of 10 μM as a complete array of concentrations in a final cell volume of 200 μl, and the cells are then incubated at 37°C. in CO2 at 5%. After 96 h, 40 μl of MTS reagent (Promega G358a) is added to each well and the cells are incubated for 1 h at 37°C in 5% CO2. Finally, absorbance is measured at 490 nm using a SpectraMax Plus 384 reader (Molecular Devices) and IC50 values can be calculated.

Exemplo 14: Ensaio de Inibição do Complexo de ATRExample 14: ATR Complex Inhibition Assay

[00254] Os compostos foram submetidos à triagem com relação à sua capacidade de inibir a ATR cinase, na presença de proteínas parceiras ATRIP, CLK2 e TopBP1, utilizando um ensaio de incorporação de fosfato radioativo. Os ensaios foram realizados em uma mistura de Tris/HCl 50 mM (pH 7,5), MgCl2 10 mM e DTT 1 mM. As concentrações finais do substrato foram de 10 μM [g-33P]ATP (3,5 μCi 33P ATP/nmol ATP, Perkin Elmer, Massachusetts, USA) e 800 μM peptídeo alvo (ASELPASQPQPFSAKKK, Isca Biochemicals, Cambridgeshire, UK).[00254] The compounds were screened for their ability to inhibit ATR kinase, in the presence of partner proteins ATRIP, CLK2 and TopBP1, using a radioactive phosphate incorporation assay. The assays were performed in a mixture of 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 and 1 mM DTT. Final substrate concentrations were 10 μM [g-33P]ATP (3.5 μCi 33P ATP/nmol ATP, Perkin Elmer, Massachusetts, USA) and 800 μM target peptide (ASELPASQPQPFSAKKK, Isca Biochemicals, Cambridgeshire, UK).

[00255] Os ensaios foram realizados a 25°C na presença de 4 nM de ATR de comprimento total, 40 nM de ATRIP de comprimento total, 40 nM de CLK2 de comprimento total e 600 nM de TopBP1 (A891- S1105). Uma solução tampão de carga enzimática foi preparada contendo todos os reagentes listados acima, com a exceção do peptídeo alvo, ATP e do composto de teste de interesse. Esta carga enzimática foi pré-incubada durante 30 minutos a 25°C. 8,5 μL da solução de carga enzimática foram colocados em uma placa de 96 reservatórios seguido pela adição de 5 μl de peptídeo alvo e 2 μL de matéria-prima de DMSO contendo diluições em série do composto de teste (tipicamente começando de uma concentração final de 1,5 μM com diluições em série de 2,5 vezes) em duplicata (concentração final de DMSO 7 %). A placa foi pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada através da adição de 15 μL de [g-33P]ATP (concentração final 10 μM).[00255] Assays were performed at 25°C in the presence of 4 nM full-length ATR, 40 nM full-length ATRIP, 40 nM full-length CLK2 and 600 nM TopBP1 (A891-S1105). An enzyme loading buffer solution was prepared containing all reagents listed above with the exception of the target peptide, ATP, and the test compound of interest. This enzyme load was pre-incubated for 30 minutes at 25°C. 8.5 μL of the enzyme loading solution was placed in a 96-well plate followed by the addition of 5 μL of target peptide and 2 μL of DMSO feedstock containing serial dilutions of the test compound (typically starting from a final concentration of 1.5 μM with 2.5-fold serial dilutions) in duplicate (final DMSO concentration 7%). The plate was pre-incubated for 10 minutes at 25°C and the reaction was started by adding 15 μL of [g-33P]ATP (final concentration 10 μM).

[00256] A reação foi interrompida após 20 horas pela adição de 30 μL de ácido fosfórico a 0,3 M contendo ATP 2 mM. Uma placa de 96 reservatórios com filtro de fosfocelulose (Multiscreen HTS MAPHNOB50, Merck-Millipore, Massachusetts, USA) foi pré-tratada com 100 μl de ácido fosfórico a 0,1 M antes da adição de 45 μL da mistura de ensaio interrompida. A placa foi lavada com 5 x 200 μL de ácido fosfórico a 0,1 M. Após a secagem, 50 μL de coquetel de cintilação líquida Optiphase "SuperMix" (Perkin Elmer, Massachusetts, USA) foram adicionados ao reservatório antes da contagem de cintilação (Wallac 1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Perkin Elmer, Massachusetts, USA).[00256] The reaction was stopped after 20 hours by adding 30 μL of 0.3 M phosphoric acid containing 2 mM ATP. A 96-well plate with phosphocellulose filter (Multiscreen HTS MAPHNOB50, Merck-Millipore, Massachusetts, USA) was pretreated with 100 μL of 0.1 M phosphoric acid before adding 45 μL of the stopped assay mixture. The plate was washed with 5 x 200 μL of 0.1 M phosphoric acid. After drying, 50 μL of Optiphase "SuperMix" liquid scintillation cocktail (Perkin Elmer, Massachusetts, USA) was added to the reservoir before scintillation counting. (Wallac 1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Perkin Elmer, Massachusetts, USA).

[00257] Após a remoção dos valores médios de formação para todos os pontos de dados, os dados de Ki(app) foram calculados a partir da análise de regressão não linear dos dados iniciais das medidas utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism version 6.0c for Macintosh, GraphPad Software Inc., San Diego, USA). [00258] Enquanto temos descrito as várias modalidades desta invenção, fica evidente que os nossos exemplos básicos podem ser alterados para fornecer outras modalidades que utilizam os compostos, métodos e processos desta invenção. Portanto, será observado que o escopo desta invenção deve ser definido pelas reivindicações anexas ao invés das modalidades específicas que foram representadas por meio de exemplo neste documento.[00257] After removing the mean formation values for all data points, Ki(app) data were calculated from non-linear regression analysis of the initial measurement data using the Prism software package (GraphPad Prism version 6.0c for Macintosh, GraphPad Software Inc., San Diego, USA). [00258] While we have described the various embodiments of this invention, it is evident that our basic examples can be altered to provide other embodiments that utilize the compounds, methods and processes of this invention. Therefore, it will be noted that the scope of this invention should be defined by the appended claims rather than the specific embodiments that have been represented by example herein.

Claims (24)

1. Uso de um primeiro composto que é um inibidor de proteína quinase ATR e um segundo composto que é um inibidor de proteína quinase Chk1, Caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um paciente, em que o medicamento compreende uma única composição farmacêutica ou composições farmacêuticas separadas do inibidor de proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1, e em que o primeiro composto que inibe proteína quinase ATR é ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.1. Use of a first compound that is an ATR protein kinase inhibitor and a second compound that is a Chk1 protein kinase inhibitor, characterized by the fact that it is for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer in a patient, in that the medicament comprises a single pharmaceutical composition or separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor, and wherein the first compound that inhibits ATR protein kinase is or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 2. Uso de um primeiro composto que é um inibidor de proteína quinase ATR e um segundo composto que é um inibidor de proteína quinase Chk1, Caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um paciente, em que o medicamento compreende uma única composição farmacêutica ou composições farmacêuticas separadas do inibidor de proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1, e em que o primeiro composto que inibe proteína quinase ATR é representado pela estrutura: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.2. Use of a first compound that is an ATR protein kinase inhibitor and a second compound that is a Chk1 protein kinase inhibitor, characterized by the fact that it is for the manufacture of a medicine for the treatment of cancer in a patient, in that the medicament comprises a single pharmaceutical composition or separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor, and wherein the first compound that inhibits ATR protein kinase is represented by the structure: or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o câncer tem um ou mais defeitos na via de sinalização ATM.3. Use according to claim 1 or 2, characterized by the fact that the cancer has one or more defects in the ATM signaling pathway. 4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende composições farmacêuticas separadas do inibidor da proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1.4. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the medicament comprises separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor. 5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto e o segundo composto são combinados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais independentemente selecionados dentre um agente de dano ao DNA; em que o referido agente terapêutico adicional é adequado para o paciente a ser tratado; e o referido agente terapêutico adicional é administrado juntamente com os referidos compostos como uma forma de dosagem única ou separadamente dos referidos compostos como parte de uma forma de dosagem múltipla.5. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the first compound and the second compound are combined with one or more additional therapeutic agents independently selected from a DNA damaging agent; wherein said additional therapeutic agent is suitable for the patient to be treated; and said additional therapeutic agent is administered together with said compounds as a single dosage form or separately from said compounds as part of a multiple dosage form. 6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido agente de dano ao DNA é selecionado dentre tratamento por quimioterapia ou radioterapia; preferencialmente em que o referido agente de dano ao DNA é radiação ionizante, neocarzinostatina radiomimética, um agente de platina, um inibidor de Topo I, um inibidor de Topo II, um antimetabólito, um agente alquilante, um alquil sulfonato ou um antibiótico.6. Use, according to claim 5, characterized by the fact that said DNA damaging agent is selected from chemotherapy or radiotherapy treatment; preferably wherein said DNA damaging agent is ionizing radiation, radiomimetic neocarzinostatin, a platinum agent, a Topo I inhibitor, a Topo II inhibitor, an antimetabolite, an alkylating agent, an alkyl sulfonate or an antibiotic. 7. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido agente de dano ao DNA é Cisplatina, Oxaliplatina, Carboplatina, Nedaplatina, Lobaplatina, Tetranitrato de Triplatina, Picoplatina, Satraplatina, ProLindac, Aroplatina, Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, Rubitecano, Belotecano, Etoposídeo, Daunorrubicina, Doxorrubicina, Aclarrubicina, Epirrubicina, Idarrubicina, Amrubicina, Pirarrubicina, Valrrubicina, Zorrubicina e Teniposídeo, Aminopterina, Metotrexato, Pemetrexede, Raltitrexede, Pentostatina, Cladribina, Clofarabina, Fludarabina, Tioguanina, Mercaptopurina, Fluorouracila, Capecitabina, Tegafur, Carmofur, Floxuridina, Citarabina, Gencitabina, Azacitidina Hidroxiureia, Mecloretamina, Ciclofosfamida, Ifosfamida, Trofosfamida, Clorambucil, Melfalan, Prednimustina, Bendamustina, Uramustina, Estramustina, Carmustina, Lomustina, Semustina, Fotemustina, Nimustina, Ranimustina, Estreptozocina, Busulfano, Manosulfano, Treosulfano, Carboquona, TioTEPA, Triaziquona, Trietilenomelamina, Procarbazina, Dacarbazina, Temozolomida, Altretamina, Mitobronitol, Actinomicina, Bleomicina, Mitomicina ou Plicamicina.7. Use, according to claim 6, characterized by the fact that said DNA damaging agent is Cisplatin, Oxaliplatin, Carboplatin, Nedaplatin, Lobaplatin, Triplatinum Tetranitrate, Picoplatin, Satraplatin, ProLindac, Aroplatin, Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, Rubitecan, Belotecan, Etoposide, Daunorubicin, Doxorubicin, Aclarrubicin, Epirubicin, Idarubicin, Amrubicin, Pyrrubicin, Valrubicin, Zorubicin and Teniposide, Aminopterin, Methotrexate, Pemetrexed, Raltitrexed, Pentostatin, Cladribine, Clofarabine, Fluda rabina, Thioguanine, Mercaptopurine, Fluorouracil, Capecitabine, Tegafur, Carmofur, Floxuridine, Cytarabine, Gemcitabine, Azacitidine Hydroxyurea, Mechlorethamine, Cyclophosphamide, Ifosfamide, Trophosphamide, Chlorambucil, Melphalan, Prednimustine, Bendamustine, Uramustine, Estramustine, Carmustine, Lomustine, Semustine, Fotemustine, Nimustine, Ranimustine, Estre ptozocin , Busulfan, Manosulfan, Treosulfan, Carboquone, TioTEPA, Triaziquone, Triethylenemelamine, Procarbazine, Dacarbazine, Temozolomide, Altretamine, Mitobronitol, Actinomycin, Bleomycin, Mitomycin or Plicamycin. 8. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido agente de platina é Cisplatina, Oxaliplatina, Carboplatina, Nedaplatina ou Satraplatina; o dito inibidor de Topo I é Camptotecina, Topotecano, Irinotecano/SN38, ou Rubitecano; o referido inibidor de Topo II é Etoposídeo; o dito antimetabólito é Metotrexato, Pemetrexede, Tioguanina, Fludarabina, Cladribina, Citarabina, Gencitabina, 6-Mercaptopurina ou 5-Fluorouracila; o dito agente alquilante são Mostardas de Nitrogênio, Nitrosoureias, Triazenos, Sulfonatos de Alquila, Procarbazina ou Aziridinas; e o dito antibiótico são Antraciclinas, Antracenodionas ou a família Streptomyces.8. Use according to claim 6, characterized by the fact that said platinum agent is Cisplatin, Oxaliplatin, Carboplatin, Nedaplatin or Satraplatin; said Topo I inhibitor is Camptothecin, Topotecan, Irinotecan/SN38, or Rubitecan; said Topo II inhibitor is Etoposide; said antimetabolite is Methotrexate, Pemetrexed, Thioguanine, Fludarabine, Cladribine, Cytarabine, Gemcitabine, 6-Mercaptopurine or 5-Fluorouracil; said alkylating agent are Nitrogen Mustards, Nitrosoureas, Triazenes, Alkyl Sulfonates, Procarbazine or Aziridines; and said antibiotic are Anthracyclines, Anthracenediones or the Streptomyces family. 9. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o agente de dano ao DNA é um ou mais dos seguintes: Cisplatina, Carboplatina, Gencitabina, Etoposídeo, Temozolomida ou radiação ionizante.9. Use, according to claim 6, characterized by the fact that the DNA damaging agent is one or more of the following: Cisplatin, Carboplatin, Gemcitabine, Etoposide, Temozolomide or ionizing radiation. 10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o câncer ou as células cancerosas tem um defeito em uma proteína de reparo de excisão de base.10. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the cancer or cancer cells have a defect in a base excision repair protein. 11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a proteína de reparo de excisão de base é UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glicosilases); APE1, APEX2 (AP endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I e III); XRCC1 (LIG3 acessório); PNK, PNKP (quinase de polinucleotídeo e fosfatase); PARP1, PARP2(Poli(ADP- Ribose) Polimerases); PolB, PolG (polimerases); FEN1 (endonuclease) ou Aprataxina; preferencialmente em que a proteína de reparo de excisão de base é PARP1 ou PARP2.11. Use according to claim 10, characterized by the fact that the base excision repair protein is UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNA glycosylases) ; APE1, APEX2 (AP endonucleases); LIG1, LIG3 (DNA ligases I and III); XRCC1 (accessory ON3); PNK, PNKP (polynucleotide kinase and phosphatase); PARP1, PARP2(Poly(ADP-Ribose) Polymerases); PolB, PolG (polymerases); FEN1 (endonuclease) or Aprataxin; preferably wherein the base excision repair protein is PARP1 or PARP2. 12. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um agente terapêutico adicional, em que o agente inibe ou modula uma proteína de reparo de excisão de base; preferencialmente em que a proteína de reparo de excisão de base é PARP1 ou PARP2.12. Use according to claim 10, characterized by the fact that it further comprises an additional therapeutic agent, wherein the agent inhibits or modulates a base excision repair protein; preferably wherein the base excision repair protein is PARP1 or PARP2. 13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido câncer é um tumor sólido selecionado dentre os seguintes cânceres: oral, pulmonar, gastrintestinal: trato geniturinário, fígado, osso, sistema nervoso, ginecológico, pele, glândula tiroide ou glândula adrenal.13. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized by the fact that said cancer is a solid tumor selected from the following cancers: oral, lung, gastrointestinal: genitourinary tract, liver, bone, nervous system, gynecological , skin, thyroid gland or adrenal gland. 14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o referido câncer é um tumor sólido selecionado dentre os seguintes cânceres: Oral: cavidade bucal, lábio, língua, boca, faringe; Cardíaco: sarcoma (angiossarcoma, fibrossarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (células escamosas ou epidermoides, células pequenas indiferenciadas, células grandes indiferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, laringe, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma dutal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma), cólon, colorretal; Reto, trato geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transição, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiais, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiossarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma, passagens biliares; Osso: sarcoma osteogênico (osteossarcoma), fibrossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiplo, cordoma maligno, tumor de células gigantes, osteocondroma (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide e tumores de células gigantes; Sistema nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiossarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanoma, retinoblastoma, tumores congênitos), neurofibroma da medula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), colo do útero (carcinoma do colo do útero, displasia cervical pré-tumor), ovários (carcinoma de ovário [cistadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinomas, carcinoma não classificado], tumores de células da granulosa e teca, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrossarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiossarcoma embrionário), trompas de falópio (carcinoma), Mama; pele: melanoma maligno, basal carcinoma, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, queratoacantoma, nevos displásicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; Glândula tiroide: carcinoma papilífero da tiroide, carcinoma folicular da tiroide; carcinoma medular da tiroide, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2A, neoplasia endócrina múltipla de tipo 2B, câncer da tiroide medular familiar, feocromocitoma, paraganglioma; e Glândulas adrenais: neuroblastoma.14. Use, according to claim 13, characterized by the fact that said cancer is a solid tumor selected from the following cancers: Oral: oral cavity, lip, tongue, mouth, pharynx; Cardiac: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, liposarcoma), myxoma, rhabdomyoma, fibroma, lipoma and teratoma; Lung: bronchogenic carcinoma (squamous or epidermoid cells, undifferentiated small cells, undifferentiated large cells, adenocarcinoma), alveolar (bronchiolar) carcinoma, bronchial adenoma, sarcoma, lymphoma, chondromatous hamartoma, mesothelioma; Gastrointestinal: esophagus (squamous cell carcinoma, larynx, adenocarcinoma, leiomyosarcoma, lymphoma), stomach (carcinoma, lymphoma, leiomyosarcoma), pancreas (ductal adenocarcinoma, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, carcinoid tumors, vipoma), small intestine (adenocarcinoma, lymphoma , carcinoid tumors, Kaposi's sarcoma, leiomyoma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), large intestine (adenocarcinoma, tubular adenoma, villous adenoma, hamartoma, leiomyoma), colon, colorectum; Rectum, genitourinary tract: kidney (adenocarcinoma, Wilm's tumor [nephroblastoma], lymphoma), bladder and urethra (squamous cell carcinoma, transitional cell carcinoma, adenocarcinoma), prostate (adenocarcinoma, sarcoma), testis (seminoma, teratoma, embryonal carcinoma, teratocarcinoma, choriocarcinoma, sarcoma, interstitial cell carcinoma, fibroma, fibroadenoma, adenomatoid tumors, lipoma); Liver: hepatoma (hepatocellular carcinoma), cholangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, hepatocellular adenoma, hemangioma, bile passages; Bone: osteogenic sarcoma (osteosarcoma), fibrosarcoma, malignant fibrous histiocytoma, chondrosarcoma, Ewing's sarcoma, malignant lymphoma (reticular cell sarcoma), multiple myeloma, malignant chordoma, giant cell tumor, osteochondroma (osteocartilaginous exostoses), benign chondroma, chondroblastoma , chondromyxofibroma, osteoid osteoma and giant cell tumors; Nervous system: skull (osteoma, hemangioma, granuloma, xanthoma, osteitis deformans), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), brain (astrocytoma, medulloblastoma, glioma, ependymoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, congenital tumors), spinal cord neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma); Gynecological: uterus (endometrial carcinoma), cervix (cervical carcinoma, pretumor cervical dysplasia), ovaries (ovarian carcinoma [serous cystadenocarcinoma, cystadenocarcinomas, unclassified carcinoma], granulosa and theca cell tumors, tumors Sertoli-Leydig cell carcinoma, dysgerminoma, malignant teratoma), vulva (squamous cell carcinoma, intraepithelial carcinoma, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (clear cell carcinoma, squamous cell carcinoma, botryoid sarcoma (embryonic rhabdomyosarcoma), fallopian tubes fallopian carcinoma (carcinoma), Breast; skin: malignant melanoma, basal carcinoma, squamous cell carcinoma, Kaposi's sarcoma, keratoacanthoma, dysplastic nevi, lipoma, angioma, dermatofibroma, keloids, psoriasis; Thyroid gland: papillary thyroid carcinoma, follicular carcinoma thyroid; medullary thyroid carcinoma, multiple endocrine neoplasia type 2A, multiple endocrine neoplasia type 2B, familial medullary thyroid cancer, pheochromocytoma, paraganglioma; and Adrenal glands: neuroblastoma. 15. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido câncer é selecionado dentre câncer de pulmão de não pequenas células, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pâncreas, câncer de trato biliar, câncer de cabeça e pescoço, câncer de bexiga, câncer colorretal, glioblastoma, câncer de esôfago, câncer de mama, carcinoma hepatocelular e câncer de ovário; preferencialmente em que o referido câncer é selecionado dentre câncer de pulmão de não pequenas células, câncer de pulmão de pequenas células e câncer da mama triplo negativo.15. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, head and neck cancer, bladder cancer, colorectal cancer, glioblastoma, esophageal cancer, breast cancer, hepatocellular carcinoma and ovarian cancer; preferably wherein said cancer is selected from non-small cell lung cancer, small cell lung cancer and triple negative breast cancer. 16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é gencitabina ou cisplatina e o câncer é câncer de pulmão de não pequenas células.16. Use according to claim 15, characterized by the fact that the additional therapeutic agent is gemcitabine or cisplatin and the cancer is non-small cell lung cancer. 17. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto que inibe a proteína quinase Chk1 é AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 ou PF- 477736.17. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the compound that inhibits the Chk1 protein kinase is AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 or PF-477736. 18. Uso de um primeiro composto que é um inibidor da proteína quinase ATR e de um segundo composto que é um inibidor da proteína quinase Chk1, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para promover a morte celular em células cancerosas, em que o medicamento compreende uma única composição farmacêutica ou composições farmacêuticas separadas do inibidor da proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1, e em que o inibidor da proteína quinase ATR é o composto como definido na reivindicação 1 ou 2.18. Use of a first compound that is an inhibitor of the ATR protein kinase and of a second compound that is an inhibitor of the Chk1 protein kinase, characterized by the fact that it is in the manufacture of a medicine to promote cell death in cancer cells, in that the medicament comprises a single pharmaceutical composition or separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor, and wherein the ATR protein kinase inhibitor is the compound as defined in claim 1 or 2. 19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que as células cancerosas têm defeitos na cascata de sinalização ATM; de preferência, em que o defeito é expressão ou atividade alterada de um ou mais dos seguintes: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP e SMC1.19. Use according to claim 18, characterized by the fact that cancer cells have defects in the ATM signaling cascade; preferably, wherein the defect is altered expression or activity of one or more of the following: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP and SMC1. 20. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a célula cancerosa expressa oncogenes que danificam o DNA; de preferência em que a referida célula cancerosa tem expressão ou atividade alterada de um ou mais dos seguintes: KRas, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, Ciclina E, Ciclina A e Rb.20. Use according to claim 18, characterized by the fact that the cancer cell expresses oncogenes that damage DNA; preferably wherein said cancer cell has altered expression or activity of one or more of the following: KRas, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, Cyclin E, Cyclin A and Rb. 21. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende composições farmacêuticas separadas do inibidor da proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1.21. Use according to claim 18, characterized in that the medicament comprises separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor. 22. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o composto que inibe a proteína quinase Chk1 é AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 ou PF-477736.22. Use according to claim 18, characterized in that the compound that inhibits the Chk1 protein kinase is AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 or PF-477736. 23. Uso de um primeiro composto que é um inibidor da proteína quinase ATR e de um segundo composto que é um inibidor da proteína quinase Chk1, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para sensibilizar células cancerosas a um agente de dano ao DNA em um paciente, em que o inibidor de A proteína quinase ATR é o composto como na reivindicação 1 ou 2, em que o medicamento compreende uma única composição farmacêutica ou composições farmacêuticas separadas do inibidor da proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1.23. Use of a first compound that is an inhibitor of the ATR protein kinase and a second compound that is an inhibitor of the Chk1 protein kinase, characterized by the fact that it is in the manufacture of a medicine to sensitize cancer cells to an agent of damage to the DNA in a patient, wherein the ATR protein kinase inhibitor is the compound as in claim 1 or 2, wherein the medicament comprises a single pharmaceutical composition or separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor . 24. Uso, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende composições farmacêuticas separadas do inibidor da proteína quinase ATR e do inibidor da proteína quinase Chk1; preferencialmente em que o composto que inibe a proteína quinase Chk1 é AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 ou PF-477736.24. Use according to claim 23, characterized in that the medicament comprises separate pharmaceutical compositions of the ATR protein kinase inhibitor and the Chk1 protein kinase inhibitor; preferably wherein the compound that inhibits the Chk1 protein kinase is AZD7762, LY2603618, MK-8776, CHIR-124 or PF-477736.