BR112016004671B1

BR112016004671B1 - compostos moduladores do fator b do complemento, composição compreendendo os referidos compostos e usos dos compostos ou da composição

Info

Publication number: BR112016004671B1
Application number: BR112016004671-4A
Authority: BR
Inventors: Tamar R. Grossman; Michael L. Mccaleb; Andrew T. Watt; Susan M. Freier
Original assignee: Ionis Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2013-09-13
Filing date: 2014-09-12
Publication date: 2020-12-29
Also published as: MX371518B; AU2014318580B2; EA201690582A1; WO2015038939A2; PT3043827T; JP7297112B2; US20160222389A1; HUE045109T2; US20220243209A1; US11926830B2; CN105744959A; JP2016533765A; CA2921842A1; WO2015038939A3; SI3043827T1; JP2022058784A; HK1225638A1; EA035433B1; EP3043827A4; CN112359042A

Abstract

COMPOSTOS MODULADORES DO FATOR B DO COMPLEMENTO, COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO OS REFERIDOS COMPOSTOS E USOS DOS COMPOSTOS OU DA COMPOSIÇÃO. As presentes modalidades fornecem métodos, compostos e composições para o tratamento, prevenção ou melhoramento de doenças associadas à desregulação da via alternativa do complemento através da administração de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB) em um sujeito.

Description

Listagem de Sequência

[001] O presente pedido está sendo depositado juntamente com uma Listagem de Sequências em formato eletrônico. A Listagem de Sequências é fornecida como um arquivo intitulado BIOL0183WOSEQ_ST25.txt criado em 11 de Setembro de 2014, que tem 225 Kb de tamanho. As informações no formato eletrônico da listagem de sequência são incorporadas a este documento por referência em sua totalidade.

Campo

[002] As presentes modalidades fornecem métodos, compostos e composições para o tratamento, prevenção ou melhoramento de doenças associadas à desregulação da via alternativa do complemento através da administração de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB) em um sujeito.

ANTECEDENTES

[003] O sistema do complemento é parte do sistema imunológico inato hospedeiro envolvido em lisar células estrangeiras, aumentando a fagocitose de antígenos, agentes de aglutinação do rolamento do antígeno, e atraindo os macrófagos e neutrófilos. O sistema complementar é dividido nas três vias de iniciação - a clássica, lectina, e vias alternativas-que convergem no componente C3 para gerar um complexo de enzima conhecido como convertase C3, que cliva C3 no C3a e C3b. Associados C3b com C3 convertase mediados por CFB e resulta na geração do C5 convertase, que cliva C5 em C5a e C5b, que inicia a via de ataque à membrana, resultando na formação do complexo de ataque à membrana (MAC) de componentes compreendendo um C5b, C6, C7, C8 e C9. O complexo de ataque à membrana (MAC) forma canais transmembranares e perturba a bicamada fosfolipídica de células alvo, que conduz à lise celular.

[004] No estado homeostático, a via alternativa é continuamente ativada a um nível baixo "tickover" como um resultado da ativação da via alternativa por hidrólise espontânea de C3 e a produção de C3b, que gera C5 convertase.

Sumário

[005] O sistema do complemento medeia a imunidade inata e desempenha um papel importante na resposta inflamatória normal à lesão, mas a sua desregulação pode causar ferimentos graves. A ativação da via alternativa do complemento além do seu nível constitutivo "tickover" pode levar a hiperatividade irrestrita e manifesta- se como doenças de desregulação do complemento.

[006] Certas modalidades aqui proporcionadas referem-se aos métodos de tratamento, prevenção, ou melhoramento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento num sujeito por administração de um complemento do Fator B (CFB) inibidor específico. Várias modalidades aqui proporcionadas são atraídas para um método de inibição da expressão do CFB num sujeito com, ou em risco de ter, uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento por administração de um inibidor de CFB específico para o sujeito. Em certas modalidades, um método de reduzir ou inibir a acumulação de depósitos de C3 no olho de um sujeito possuindo, ou em risco de ter, uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento compreende a administração de um inibidor de CFB específico para o sujeito. Em muitas modalidades, um método de reduzir ou inibir a acumulação de depósitos de C3 no rim de um sujeito possuindo, ou em risco de ter, uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento compreende a administração de um inibidor de CFB específico para o sujeito.

Descrição Detalhada

[007] Deve-se compreender que a descrição geral mencionada e a descrição detalhada a seguir são exemplificativas e explicativas, tão somente, e não restringem a invenção, conforme reivindicado. Aqui, o uso do singular inclui o plural, salvo quando houver outra especificação. Conforme aplicado aqui, o uso de "ou" significa "e/ou", salvo quando houver outra especificação. Ademais, o uso do termo "incluindo", bem como outras formas, como "que inclui" ou "incluído", não é limitativo. Além disso, termos como "elemento" ou "componente" abrangem elementos e componentes que compreendem uma unidade e elementos e componentes que compreendem mais de uma subunidade, salvo quando se estabelecer de outra forma.

[008] Os títulos das seções usados aqui são para fins organizacionais apenas e não devem ser interpretados como limitadores do objeto descrito. Todos os documentos, ou partes dos documentos, citados neste pedido, incluindo, mas não se limitando a, patentes, pedidos de patente, artigos, livros e tratados, são expressamente incorporados por meio deste para as partes do documento discutidas neste documento, bem como em sua totalidade.

[009] Salvo indicado de outra forma, os termos a seguir têm os seguintes significados:

[0010] “2’-O-metoxietila” (também 2’-MOE e 2’-O(CH2)2-OCH3) refere-se a uma modificação de O-metóxi-etil na posição 2’ de um anel de furanosila. Um açúcar modificado em 2’-O-metoxietila é um açúcar modificado.

[0011] "Nucleosídeo de 2’-MOE" (também chamado nucleosídeo de 2’-O-metoxietil) denota um nucleosídeo que compreende uma porção de açúcar modificada em 2'-MOE.

[0012] "Nucleosídeo substituído em 2'" denota um nucleosídeo que compreende um substituinte na posição 2' do anel de furanosila, que não H ou OH. Em certas modalidades, os nucleosídeos substituídos em 2' incluem nucleosídeos com modificações de açúcar bicíclicas.

[0013] "Local alvo 3'" refere-se ao nucleotídeo de um ácido nucleico alvo que é complementar ao nucleotídeo mais extremo em 3' de um composto antissenso particular.

[0014] "Local alvo 5'" refere-se ao nucleotídeo de um ácido nucleico alvo que é complementar ao nucleotídeo mais extremo em 5' de um composto antissenso particular.

[0015] "5-metilcitosina" denota uma citosina modificada com um grupo metil ligado à posição 5. Uma 5-metilcitosina é uma nucleobase modificada.

[0016] "Cerca de" significa dentro de ±10% de um valor. Por exemplo, se for afirmado que "os compostos afetaram pelo menos 70% a inibição do CFB", isso implica que os níveis do CFB são inibidos em uma faixa de 60% e 80%.

[0017] "Administração" ou "administrar" refere-se a vias de introdução de um composto antissenso fornecido aqui a um indivíduo para desempenhar sua função pretendida. Um exemplo de uma via de administração que pode ser utilizada inclui, mas não está limitado a, administração parentérica, tal como subcutânea, intravenosa, ou injeção intramuscular ou infusão.

[0018] "Melhora" refere-se a uma diminuição de pelo menos um indicador, sinal ou sintoma de uma doença, distúrbio ou condição associada. Em determinadas modalidades, melhora inclui um retardo ou diminuição da progressão de um ou mais indicadores de uma condição médica ou doença. A gravidade dos indicadores pode ser determinada por medidas subjetivas ou objetivas, que são conhecidas por aqueles versados na técnica.

[0019] "Animal" refere-se a um humano ou animal não humano, incluindo, mas não limitado a, camundongos, ratos, coelhos, cães, gatos, porcos e primatas não humanos, incluindo, mas não se limitando a, macacos e chimpanzés.

[0020] "Atividade antissenso" significa qualquer atividade detectável ou mensurável atribuível à hibridização de um composto antissenso a seu ácido nucleico alvo. Em determinadas modalidades, a atividade antissenso é uma diminuição da quantidade ou da expressão de um ácido nucleico alvo ou de uma proteína codificada por esse ácido nucleico alvo.

[0021] "Composto antissenso" significa um composto oligomérico que é capaz de sofrer hibridização em um ácido nucleico alvo através da ligação de hidrogênio. Exemplos de compostos antissenso incluem compostos de fita simples e de fita dupla, tais como, oligonucleotídeos antissenso, siRNAs, shRNAs, ssRNAs e compostos à base de ocupação.

[0022] "Inibição antissenso" significa a redução de níveis de ácido nucleico alvo na presença de um composto antissenso complementar a um ácido nucleico alvo em comparação a níveis de ácido nucleico alvo na ausência do composto antissenso.

[0023] "Mecanismos antissenso" são todos aqueles mecanismos que envolvem a hibridização de um composto com um ácido nucleico alvo, em que o resultado ou efeito da hibridização é ou degradação alvo ou ocupação alvo com retardamento concomitante da maquinaria celular envolvendo, por exemplo, a transcrição ou splicing.

[0024] "Oligonucleotídeo antissenso" significa um oligonucleotídeo de fita única tendo uma sequência de nucleobases que permite a hibridização em uma região ou segmento correspondente de um ácido nucleico alvo.

[0025] "Complementaridade da base" refere-se à capacidade de o pareamento de bases precisas de nucleobases de um oligonucleotídeo antissenso com correspondentes nucleobases de um ácido nucleico alvo (isto é, hibridização), e é mediada pela Watson-Crick, de Hoogsteen ou invertida de Hoogsteen hidrogênio ligação entre nucleobases correspondentes.

[0026] "Porção de açúcar bicíclico" significa uma porção de açúcar modificada compreendendo um anel de 4 a 7 membros (incluindo, mas não se limitando a um furanosil) compreendendo uma ponte que conecta dois átomos do anel de 4 a 7 membros para formar um segundo anel, resultando numa estrutura bicíclica. Em determinadas modalidades, o anel de 4 a 7 membros é um anel de açúcar. Em determinadas modalidades, o anel de 4 a 7 membros é um furanosila. Em certas modalidades, a ponte conecta o carbono 2' e o carbono 4' do furanosila.

[0027] "Ácido nucleico bicíclico" ou "BNA" ou "nucleosídeos de BNA" denotam monômeros de ácido nucleico possuindo uma ponte de ligação entre dois átomos de carbono entre o 4' e 2' posição da unidade de açúcar de nucleosídeo, formando assim um açúcar bicíclico. Exemplos desse tipo de açúcar bicíclico incluem, mas não estão limitados a A) a-L-metileno-óxi (4-CH2-O-2') LNA, (B) β-D- Metileno-óxi (4'-CH2-O-2') LNA, (C) Etilenoóxi (4'-(CH2)2-O-2') LNA, (D) Aminoóxi (4’-CH2-O-N (R) -2') LNA e (E) Oxiamino (4'-CH2-N (R) -O-2 '), LNA, tal como descrito abaixo.

[0028] Como utilizados aqui, os compostos de LNA incluem, mas não estão limitados a, compostos possuindo pelo menos uma ponte entre a posição 4' e 2' do açúcar, em que cada uma das pontes compreende independentemente 1 ou de 2 a 4 grupos ligados independentemente selecionados a partir de -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R1)2-, - S(=O)x- e -N(Ri)-; ∑ onde: x é 0, 1 ou 2; n é 1, 2, 3 ou 4; cada Ri e R2 são, de forma independente, H um grupo protetor, hidroxila, C1- C12 alquila, C1- C12 alquila substituída, C2- C12 alceno, C2- C12 alceno substituído, C2- C12 alceno, C2- C12 alceno substituído, C5- C20 arila, C5- C20 arila substituída, um radical heterocíclico, um radical heterocíclico substituído, heteroarila, heteroarila substituída, C5- C7 radical alicíclico, C5- C7 radical alicíclico substituído, halogênio, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), acila substituída, CN, sulfonil (S(=O)2-J1) ou sulfoxil (S(=O)-J1); e cada J1 e J2, de forma independente, H, C1- C12 alquila, C1-C12 alquila substituída, C2-C12 alquenila, C2-C12 alquenila substituída, C2-C12 alquinill, C2-C12 alquinila substituída, C5-C20 arila, C5-C20 arila substituída, acil (C(=O)-H), acila substituída, um radical heterocíclico, um radical heterocíclico substituído, C1-C12 aminoalquila, C1-C12 aminoalquila substituída ou um grupo protetor.

[0029] Exemplos de grupos ponte 4'-2' abrangidos pela definição do LNA incluem, mas não estão limitados a uma das fórmulas: -[C(R1)(R2)]n-, -[C(R1)(R2)]n-O-, -C(R1R2)-N(R1)-O- ou -C(R1R2)-O- N(R1)-. Por outro lado, outros grupos em ponte abrangidos pela definição de LNA são pontes 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'- CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R1)-2' and 4'-CH2-N(R1)-O-2'- , em que cada R1 e R2 é, independentemente, H, um grupo protetor ou C1-C12 alquila.

[0030] Também estão incluídos dentro da definição de LNA,de acordo com a invenção, LNAs em que o grupo 2'-hidroxil do anel de açúcar ribosila está ligado ao átomo de carbono 4' do anel de açúcar, formando assim um metileno-óxi (4'-CH2-O-2') da ponte, de modo a formar a porção de açúcar bicíclico. A ponte pode também ser um grupo metileno (-CH2-) conectando o átomo de oxigênio 2' e o átomo de carbono 4', em que o termo metileno-óxi (4'-CH2-O-2') LNA é usado. Além disso, no caso de a porção açúcar bicíclica tendo um grupo etileno da ponte nesta posição, o termo etilenóxi (4'-CH2CH2-O-2 ') LNA é usado. α -L- metileno-óxi (4'-CH2-O-2 '), um isômero de metileno-óxi (4'-CH2-O-2 ') LNA também está englobado no âmbito da definição de LNA, tal como aqui utilizado.

[0031] "Estrutura cap" ou "porção cap terminal" significa modificações químicas que foram incorporadas em qualquer terminal de um composto antissenso.

[0032] "cEt" ou "etil limitado" significa um a porção de açúcar bicíclico tendo uma porção de açúcar compreendendo uma ponte que liga o 4'-carbono e o grupo 2'-carbono, em que a ponte tem a fórmula: 4’-CH(CH3)-O-2’.

[0033] “Nucleosídeo de etila limitada” (também nucleosídeo de cEt) significa um nucleosídeo compreendendo uma porção de açúcar bicíclico compreendendo uma ponte de 4’-CH(CH3)-O-2’.

[0034] "Fator Complementar B (CFB)" entende-se qualquer ácido nucleico ou proteína de CFB. "Ácido nucleico CFB" significa qualquer ácido nucleico que codifica CFB. Por exemplo, em certas modalidades, um ácido nucleico de CFB inclui uma sequência de DNA que codifica CFB, uma sequência de RNA transcrita a partir de DNA que codifica CFB (incluindo DNA genômico compreendendo íntrons e éxons), incluindo uma não proteína que codifica (ou seja, uma sequência não codificadora) de RNA e uma sequência de mRNA que codifica CFB. "CFB mRNA" significa um mRNA que codifica uma proteína de CFB.

[0035] "Inibidor específico de CFB" refere-se a qualquer agente capaz de inibir especificamente o RNA de CFB e/ou a expressão ou atividade da proteína de CFB no nível molecular. Por exemplo, os inibidores específicos de CFB incluem ácidos nucleicos (incluindo compostos antissenso), peptídeos, anticorpos, moléculas pequenas, e outros agentes capazes de inibir a expressão do RNA de CFB e/ou da proteína de CFB.

[0036] "Região quimicamente distinta" refere-se a uma região de um composto antissenso que é, de alguma forma, quimicamente diferente de outra região do mesmo composto antissenso. Por exemplo, uma região tendo nucleotídeos de 2’-O-metoxietila é quimicamente distinta de uma região tendo nucleotídeos sem modificações de 2’-O-metoxietila.

[0037] "Compostos antissenso quiméricos" denota os compostos antissenso que têm pelo menos 2 regiões quimicamente distintas, cada posição tendo uma variedade de subunidades.

[0038] "Complementaridade" significa a capacidade para parear entre nucleobases de um primeiro ácido nucleico e um segundo ácido nucleico.

[0039] "Compreendem", "compreende" e "compreendendo" será entendido como implicando a inclusão de uma etapa referida ou elemento ou grupo de etapas ou elementos, mas não a exclusão de qualquer outra etapa ou elemento ou grupo de etapas ou elementos.

[0040] "Nucleobases contíguas" significam nucleobases imediatamente adjacentes uma a outra.

[0041] “Desoxirribonucleotídeo" significa um nucleotídeo tendo um hidrogênio na posição 2' da porção de açúcar do nucleotídeo. Desoxirribonucleotídeos podem ser modificados com qualquer um de uma variedade de substituintes.

[0042] "Projeção" ou "projetado para" referem-se ao processo de concepção de um composto oligomérico que hibrida especificamente com uma molécula de ácido nucleico selecionado.

[0043] "Quantidade eficaz" significa a quantidade de agente farmacêutico ativo suficiente para efetuar um resultado fisiológico desejado em um indivíduo em necessidade do agente. A quantidade eficaz pode varia dentre os indivíduos, dependendo da saúde e condição física do indivíduo a ser tratado, o grupo taxonômico dos indivíduos a serem tratados, a formulação da composição, avaliação da condição médica do indivíduo, e outros fatores relevantes.

[0044] "Eficácia" significa a capacidade para produzir um efeito desejado.

[0045] "Expressão" inclui todas as funções pelo qual a informação codificada de um gene é convertida em estruturas presentes e que operam numa célula. Essas estruturas incluem, mas não estão limitadas aos produtos de transcrição e tradução.

[0046] "Totalmente complementar" ou "100% complementar" significa que cada uma das nucleobases de um primeiro ácido nucleico tem uma nucleobase complementar em um segundo ácido nucleico. Em determinadas modalidades, um primeiro ácido nucleico é um composto antissenso e um ácido nucleico alvo é um segundo ácido nucleico.

[0047] "Gapmer" denota um composto antissenso químico em que uma região interna com uma variedade de nucleosídeos que sustentam a clivagem de H RNase é posicionada entre as regiões externas com um ou mais nucleosídeos, em que os nucleosídeos compreendendo a região interna são quimicamente distintos do nucleotídeo ou dos nucleosídeos que compreendem as regiões externas. A região interna pode ser referida como "gap" e as regiões externas podem ser referidas como as "wings".

[0048] "Hibridização" significa o anelamento de moléculas de ácido nucleico complementares. Em certas formas de realização, as moléculas de ácido nucleico complementares incluem, mas não estão limitados a, um composto antissenso e um ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, as moléculas de ácido nucleico complementares incluem, mas não se limitam a, um oligonucleotídeo antissenso e um alvo de ácido nucleico.

[0049] "Identificação de um animal tendo, ou em risco de ter, uma doença, distúrbio e/ou condição clínica" denota a identificação de um animal que foi diagnosticado com a doença, distúrbio e/ou condição médica ou a identificação de um animal pré-disposto a desenvolver a doença, distúrbio e/ou condição clínica. Essa identificação pode ser realizada por qualquer método incluindo a avaliação do histórico médico de um indivíduo e testes padrão ou avaliações clínicas.

[0050] "Imediatamente adjacente" significa que não há nenhum elemento interveniente entre os elementos imediatamente adjacentes.

[0051] "Indivíduo" significa um animal humano ou não humano selecionado para tratamento ou terapia.

[0052] "Inibir a expressão ou atividade" se refere a uma redução ou bloqueio da expressão ou atividade e não necessariamente indica uma eliminação total da expressão ou atividade.

[0053] "Ligação internucleosídica" refere-se à ligação química entre os nucleosídeos.

[0054] Olingonucleotídeos antissenso "alongados" são aqueles que têm um ou mais nucleosídeos relativos a um oligonucleotídeo antissenso divulgado aqui.

[0055] "Desoxinucleosídeo ligado" denota uma base de ácido nucleico (A, G, C, T, U) substituída por desoxirribose ligada por um éster de fosfato de modo a formar um nucleotídeo.

[0056] "Nucleosídeos ligados" denota nucleosídeos adjacentes ligados entre si por uma ligação internucleosídica.

[0057] "Incompatibilidade" ou "nucleobase não complementar" refere-se ao caso quando uma nucleobase de um primeiro ácido nucleico não é capaz de se parear com a nucleobase correspondente de um segundo ácido nucleico alvo.

[0058] "Ligação internucleosídica modificada" refere-se a uma substituição ou qualquer alteração de uma ligação internucleosídica de ocorrência natural (isto é, uma ligação internucleosídica fosfodiéster).

[0059] "Nucleobase modificada" significa qualquer nucleobase diferente de adenina, citosina, guanina, timidina ou uracila. Uma "nucleobase não modificada" significa as bases purínicas, adenina (A) e guanina (G), e as bases pirimidínicas, timina (T), citosina (C) e uracila (U).

[0060] "Nucleosídeo modificado" significa um nucleosídeo tendo, independentemente, uma porção de açúcar modificado e/ou uma nucleobase modificada.

[0061] "Nucleotídeo modificado" significa um nucleotídeo tendo, independentemente, uma porção de açúcar modificado, ligação internucleosídica modificada ou nucleobase modificada.

[0062] "Oligonucleotídeo modificado" significa um oligonucleotídeo que compreende pelo menos uma ligação internucleosídeos modificados, açúcar modificado e/ou de nucleobases modificadas.

[0063] "Açúcar modificado" denota a substituição e/ou qualquer alteração a partir de uma porção de açúcar natural.

[0064] "Modulação" refere-se à alteração ou ao ajuste de uma característica em uma célula, um tecido, um órgão ou um organismo. Por exemplo, modulação do mRNA de CFB significa aumentar ou diminuir o nível de mRNA de CFB e/ou a proteína de CFB em uma célula, um tecido, um órgão ou um organismo. Um "modulador" efetua a mudança na célula, tecido, órgão ou organismo. Por exemplo, um composto antissenso de CFB pode ser um modulador que diminui a quantidade de mRNA de CFB e/ou proteína de CFB em uma célula, tecido, órgão ou organismo.

[0065] "Monômero" refere-se a uma unidade única de um oligômero. Os monômeros incluem, mas não estão limitados aos nucleosídeos e nucleotídeos, quer ocorram naturalmente, quer sejam modificados.

[0066] "Motivo" significa o padrão de nucleotídeos modificados e não modificados em um composto antissenso.

[0067] "Porção de açúcar natural" significa um açúcar encontrado no DNA (2’-H) ou RNA (2’-OH).

[0068] "Ligação internucleosídica de ocorrência natural" significa uma ligação fosfodiéster 3' a 5'.

[0069] "Nucleobase não complementar" refere-se a um par de nucleobases que não formam ligações de hidrogênio umas com as outras ou de outro modo suportam a hibridização.

[0070] "Ácido nucleico" refere-se a moléculas compostas por nucleotídeos monoméricos. Um ácido nucleico inclui, mas não está limitado a, ácidos ribonucleicos (RNA), ácidos desoxirribonucleicos (DNA), ácidos nucleicos de fita simples e ácidos nucleicos de fita dupla.

[0071] "Nucleobase" significa uma porção heterocíclica capaz de se parear com uma base de outro ácido nucleico.

[0072] “Complementaridade da nucleobase” se refere a uma nucleobase que é capaz de realizar pareamento de base com outra nucleobase. Por exemplo, no DNA, a adenina (A) é complementar à timina (T). Por exemplo, no RNA, a adenina (A) é complementar à uracila (U). Em certas modalidades, a nucleobase complementar se refere a uma nucleobase de um composto antissenso que seja capaz de realizar pareamento de base com uma nucleobase de seu ácido nucleico alvo. Por exemplo, se uma nucleobase em uma determinada posição de um composto antissenso for capaz de fazer ligação de hidrogênio com uma nucleobase em uma determinada posição de um ácido nucleico alvo, então a posição da ligação de hidrogênio entre o oligonucleotídeo e o ácido nucleico alvo são considerados complementares nesse par de nucleobase.

[0073] "Sequência de nucleobases" significa a ordem de nucleobases contíguas independente de qualquer açúcar, ligação e/ou modificação de nucleobase.

[0074] "Nucleosídeo" significa uma nucleobase ligada a um açúcar.

[0075] "Nucleosídeo mimético" inclui aquelas estruturas usadas para substituir o açúcar ou o açúcar e a base, e não necessariamente a ligação em uma ou mais posições de um composto oligomérico, tais como, por exemplo, miméticos de nucleosídeo que têm morfolino, ciclohexenila, ciclohexila, tetrahidropiranila, biciclo ou triciclo miméticos de açúcar, por exemplo, unidades de açúcar de não furanose. Mimético de nucleotídeo inclui aquelas estruturas usadas para substituir o nucleosídeo e a ligação em uma ou mais posições de um composto oligomérico, tal como, por exemplo, ácidos nucleicos de peptídeos ou morfolinos (morfolinos ligados por -N(H)-C(=O)-O- ou outra ligação não fosfodiéster). Substituto do açúcar se sobrepõe com o mimético nucleosídeo ligeiramente mais largo, mas destina-se a indicar a substituição da unidade de açúcar (anel furanose) somente. Os anéis de tetra-hidropiranil aqui proporcionados são ilustrativos de um exemplo de um substituto de açúcar, em que o grupo açúcar furanose foi substituído com um sistema em anel tetra-hidropiranila. "Mimético" refere-se a grupos que são substituídos por um açúcar, uma nucleobase e/ou ligação internucleosídeo. Geralmente, um mimético é usado em lugar do conjunto de ligação de açúcar ou açúcar-internucleosídeos, e a nucleobase é mantida por hibridização para um alvo selecionado.

[0076] "Nucleotídeo" significa uma nucleosídeo tendo um grupo fosfato covalentemente ligado à porção de açúcar do nucleosídeo.

[0077] "Composto oligomérico" denota um polímero de subunidades monoméricas ligadas que seja capaz de hibridizar pelo menos uma região de uma molécula de ácido nucleico.

[0078] "Oligonucleosídeo" denota um oligonucleotídeo em que as ligações internucleosídicas não contêm um átomo de fósforo.

[0079] "Oligonucleotídeo" significa um polímero de nucleosídeos ligados, cada um dos quais pode ser modificado ou não modificado, independente um do outro.

[0080] "Administração parentérica" significa administração através de injeção ou infusão. A administração parentérica inclui administração subcutânea, administração intravenosa, administração intramuscular, administração intra-arterial, administração intraperitoneal, ou administração intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intracerebroventricular.

[0081] "Composição farmacêutica" significa uma mistura de substâncias adequadas para a administração a um indivíduo. Por exemplo, uma composição farmacêutica pode compreender um ou mais agentes farmacêuticos ativos e uma solução aquosa estérila.

[0082] "Sais farmaceuticamente aceitáveis" significam sais fisiologicamente e farmaceuticamente aceitáveis dos compostos antissenso, isto é, sais que mantêm a atividade biológica desejada do oligonucleotídeo de origem e não conferem efeitos toxicológicos indesejáveis aos mesmos.

[0083] "Ligação de fosforotioato" significa uma ligação entre nucleosídeos onde a ligação fosfodiéster é modificada pela substituição de um dos átomos de oxigênio que não fazem ponte por um átomo de enxofre. Uma ligação de fosforotioato é uma ligação internucleosídica modificada.

[0084] "Porção" significa um número definido de nucleobases contíguas (isto é, ligadas) de um ácido nucleico. Em determinadas modalidades, uma porção é um número definido de nucleobases contíguas de um ácido nucleico alvo. Em determinadas modalidades, uma porção é um número definido de nucleobases contíguas de um composto antissenso.

[0085] "Prevenir" refere-se ao retardamento ou antecipação do início, do desenvolvimento ou avanço de uma doença, de um distúrbio ou de uma condição clínica por um período de tempo que vai de minutos até um período indefinido. Prevenir também significa reduzir o risco de desenvolvimento de uma doença, distúrbio ou condição.

[0086] "Quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um agente farmacêutico que proporciona um benefício profiláctico ou preventivo de um animal.

[0087] “Região” é definida como uma porção do ácido nucleico alvo que tem pelo menos uma estrutura, função ou característica identificável.

[0088] "Ribonucleotídeo" significa um nucleotídeo tendo um hidróxi na posição 2' da porção de açúcar do nucleotídeo. Os ribonucleotídeos podem ser modificados por qualquer um de uma variedade de substituintes.

[0089] “Segmentos” são definidos como subporções ou menores de regiões dentro de um ácido nucleico.

[0090] "Efeitos colaterais" denota uma doença fisiológica e/ou condições clínicas passíveis de atribuição a um tratamento diferente dos efeitos desejados. Em determinadas modalidades, os efeitos colaterais incluem reações no local de injeção, anormalidades do teste de função hepática, anormalidades da função renal, toxicidade hepática, toxicidade renal, anormalidades do sistema nervoso central, miopatias e mal-estar. Por exemplo, níveis aumentados de aminotransferase no soro podem indicar toxicidade hepática ou anormalidade da função hepática. Por exemplo, a bilirrubina aumentada pode indicar toxicidade hepática ou anormalidade da função hepática.

[0091] "Sítios", tal como aqui utilizados, são definidos como as posições das bases nucleotídicas únicas dentro de um ácido nucleico alvo.

[0092] "Retarda a progressão" denota a diminuição no desenvolvimento da referida doença.

[0093] “Especificamente hibridizável" refere-se a um composto antissenso que tem um grau suficiente de complementaridade entre um oligonucleotídeo antissenso e um ácido nucleico alvo para induzir um efeito desejado, enquanto exibe efeitos mínimos ou nenhum efeito sobre ácidos nucleicos não alvos sob condições nas quais a ligação específica é desejada, isto é, sob condições fisiológicas no caso de ensaios in vivo e tratamentos terapêuticos. "Condições rigorosas de hibridização" ou "condições rigorosas" refere-se a condições sob as quais um composto oligomérico hibridará com a sua sequência alvo, mas para um número mínimo de outras sequências.

[0094] "Sujeito" significa um animal humano ou não humano selecionado para tratamento ou terapia.

[0095] "Alvo" refere- se a uma proteína, a modulação da qual é desejada.

[0096] "Gene alvo" refere-se a um gene que codifica um alvo.

[0097] "Direcionamento" denota o processo de concepção e seleção de um composto antissenso que se hibridizará em um ácido nucleico alvo e induzir um efeito desejado.

[0098] "Ácido nucleico alvo", "RNA alvo", "transcrito de RNA alvo" e " ácido nucleico alvo" denota, um ácido nucleico capaz de ser alvejado pelos compostos antissensos.

[0099] "Região alvo" significa uma parte de um ácido nucleico alvo à qual um ou mais compostos antissenso se destinam.

[00100] "Segmento alvo" significa a sequência de nucleotídeos de um ácido nucleico alvo ao qual um composto antissenso é direcionado. "Local de alvo '5" refere-se ao nucleotídeo mais extremo em 5' de um segmento alvo. "Local alvo 3'" refere-se ao nucleotídeo mais extremo em 3' de um segmento alvo.

[00101] "Quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade de um agente farmacêutico que fornece um benefício terapêutico a um indivíduo.

[00102] "Tratar" refere-se à administração de uma composição farmacêutica a um animal para efetuar no animal uma alteração ou melhora de uma doença, distúrbio ou condição clínica. Em certas modalidades, uma ou mais composições farmacêuticas podem ser administradas ao animal.

[00103] "Nucleobase não modificada" denota as bases de purina adenina (A) e guanina (G) e as bases de pirimidina timina (T), citosina (C) e uracil (U).

[00104] "Nucleotídeo não modificado" denota um nucleotídeo composto de nucleobases de ocorrência natural, porções de açúcar e ligações de internucleosídeos. Em determinadas modalidades, um nucleotídeo não modificado é um nucleotídeo de RNA (isto é, β-D- ribonucleosídeos) ou um nucleotídeo de DNA (isto é, β-D- desoxirribonucleosídeo).

Determinadas Modalidades

[00105] Certas modalidades fornecem métodos, compostos e composições para a inibição da expressão do Fator B do Complemento (CFB).

[00106] Determinadas modalidades fornecem compostos antissenso direcionados a um ácido nucleico de CFB. Em certas modalidades, o ácido nucleico CFB tem a sequência estabelecida no GenBank n° de acesso NM_001710.5 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 1), GENBANK n° de acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31.852.000 a 31861000 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 2), GENBANK n° de acesso NW_001116486.1 truncado a partir do nucleotídeo 536000 a 545000 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 3), GENBANK n° de acesso: XM_001113553.2 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 4), ou GENBANK n° de acesso NM_008198.2 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 5).

[00107] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808.

[00108] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 9 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808.

[00109] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 10 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808.

[00110] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 11 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808.

[00111] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 12 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808.

[00112] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo consistindo em 10 a 30 nucleotídeos ligados e com uma sequência de nucleobase que compreende a sequência de nucleobase de qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808.

[00113] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo na sequência de nucleobase de qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808.

[00114] Certas modalidades fornecem um composto compre- endendo um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados complementares nas nucleobases, 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157- 176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153- 1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183- 1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355- 1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749- 1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195- 2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227-2246, 2238- 2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459- 2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553- 2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556- 2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559- 2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563- 2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568- 2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572- 2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575- 2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580- 2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583- 2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586- 2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588- 2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590- 2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593- 2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595- 2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597- 2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599- 2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601- 2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604- 2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606- 2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608- 2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610- 2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612- 2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631, ou 2616-2631 da SEQ ID NO: 1, em que o referido oligonucleotídeo modificado é, pelo menos, 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% complementar à SEQ ID NO: 1.

[00115] Certas modalidades proporcionam um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados com uma sequência de nucleobases que compreendem uma porção de pelo menos 8 nucleobases contíguas complementares a uma porção de comprimento igual de nucleobases, 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644- 663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150- 1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177- 1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349- 1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689- 1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195- 2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227- 2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457- 2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552- 2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556- 2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559- 2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562- 2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567- 2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571- 2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575- 2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580- 2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582- 2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585- 2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588- 2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590- 2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592- 2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595- 2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597- 2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599- 2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601- 2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603- 2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606- 2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608- 2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610- 2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612- 2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631, ou 2616- 2631 de SEQ ID NO: 1, em que a sequência de nucleobases do oligonucleotídeo modificado é pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou 100% complementar a SEQ ID NO: 1.

[00116] Certas modalidades fornecem um composto compre- endendo um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos complementares nas nucleobases, 1608-1627, 1685- 1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878- 1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831- 3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612- 4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295- 5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979- 6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353- 7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767- 7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789- 7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792- 7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796- 7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800- 7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805- 7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809- 7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812- 7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816- 7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819- 7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822- 7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824- 7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826- 7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829- 7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831- 7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833- 7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835- 7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837- 7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840- 7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842- 7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844- 7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861, ou 7846-7862 da SEQ ID NO: 2, em que o referido oligonucleotídeo modificado é, pelo menos, 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% complementar à SEQ ID NO: 2.

[00117] Certas modalidades fornecem um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados com uma sequência de nucleobase que compreende uma porção de pelo menos 8 nucleobases contíguas complementares a uma porção de comprimento idêntico das nucleobases 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769- 1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288- 2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843- 3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642- 4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890- 5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983- 7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688- 7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787- 7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790- 7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793- 7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797- 7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802- 7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806- 7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810- 7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813- 7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817- 7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820- 7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823- 7838, 7823-7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824- 7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827- 7843, 7827-7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829- 7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831- 7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834- 7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836- 7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838- 7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840- 7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842- 7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845- 7861, 7845-7862, 7846-7861, e 7846-7862 da SEQ ID NO: 2, em que a sequência de nucleobase do oligonucleotídeo modificado é, pelo menos, 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% complementar à SEQ ID NO: 2.

[00118] Em certas modalidades, os compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB. Em determinadas modalidades, tais compostos ou oligonucleotídeos direcionados a uma região de um ácido nucleico de CFB têm uma porção de nucleobase contígua que é complementar a uma porção de nucleobase de comprimento igual da região. Por exemplo, a porção pode ser, pelo menos uma porção de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ou nucleobases contíguas complementares a uma porção de comprimento igual de uma região enunciada aqui. Em determinadas modalidades, esses compostos ou oligonucleotídeos são direcionados às seguintes regiões de nucleotídeos da SEQ ID 1: 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644- 663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150- 1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177- 1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349- 1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689- 1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195- 2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227- 2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457- 2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552- 2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556- 2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559- 2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562- 2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567- 2586, 2568-2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571- 2590, 2572-2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575- 2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580- 2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582- 2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585- 2604, 2586-2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588- 2605, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590- 2608, 2590-2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592- 2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595- 2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597- 2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599- 2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601- 2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603- 2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606- 2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608- 2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610- 2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612- 2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631, e 2616- 2631.

[00119] Em determinadas modalidades, compostos antissenso ou oligonucleotídeos direcionam uma região de um ácido nucleico de CFB. Em determinadas modalidades, tais compostos ou oligonucleotídeos direcionados a uma região de um ácido nucleico de CFB têm uma porção de nucleobase contígua que é complementar a uma porção de nucleobase de comprimento igual da região. Por exemplo, a porção pode ser, pelo menos, um 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ou porção contígua de nucleobases complementares a uma porção de comprimento igual de uma região aqui recitadas. Em determinadas modalidades, tais compostos ou oligonucleotídeo direcionam as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO:2, 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871- 1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808- 2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151- 4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648- 4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904- 5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984- 7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690- 7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787- 7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790- 7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794- 7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797- 7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802- 7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806- 7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810- 7826, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814- 7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817- 7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820- 7838, 7820-7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823- 7839, 7823-7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825- 7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827- 7844, 7827-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829- 7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832- 7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834- 7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836- 7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838- 7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840- 7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843- 7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845- 7862, 7846-7861, e 7846-7862.

[00120] Em determinadas modalidades, compostos antissenso ou oligonucleotídeos direcionam o 3'UTR de um ácido nucleico de CFB. Em certas modalidades, os compostos antissenso ou oligonucleotídeos alvos dentro de nucleotídeos 2574-2626 de um ácido nucleico CFB tem a sequência de nucleobases da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, os compostos antissenso ou oligonucleotídeos têm pelo menos um 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ou porção contígua de nucleobases complementares a uma porção de comprimento igual dentro do nucleotídeo 2574-2626 de um ácido nucleico CFB possuindo a sequência de nucleobases da SEQ ID NO: 1.

[00121] Em certas modalidades, os compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico CFB com a sequência de nucleobases da SEQ ID NO: 1 dentro das nucleobases 2457-2631, 2457-2472, 2457-2474, 2457-2476, 2457- 2566, 2457-2570, 2457-2571, 2457-2572, 2457-2573, 2457-2574, 2457-2575, 2457-2576, 2457-2577, 2457-2578, 2457-2579, 2457- 2580, 2457-2581, 2457-2582, 2457-2583, 2457-2584, 2457-2585, 2457-2586, 2457-2587, 2457-2588, 2457-2589, 2457-2590, 2457- 2591, 2457-2592, 2457-2593, 2457-2594, 2457-2595, 2457-2596, 2457-2597, 2457-2598, 2457-2599, 2457-2600, 2457-2601, 2457- 2602, 2457-2603, 2457-2604, 2457-2605, 2457-2606, 2457-2607, 2457-2608, 2457-2609, 2457-2610, 2457-2611, 2457-2612, 2457- 2613, 2457-2614, 2457-2615, 2457-2616, 2457-2617, 2457-2618, 2457-2619, 2457-2620, 2457-2621, 2457-2622, 2457-2623, 2457- 2624, 2457-2625, 2457-2626, 2457-2627, 2457-2628, 2457-2629, 2457-2630, 2457-2631, 2459-2474, 2459-2476, 2459-2566, 2459- 2570, 2459-2571, 2459-2572, 2459-2573, 2459-2574, 2459-2575, 2459-2576, 2459-2577, 2459-2578, 2459-2579, 2459-2580, 2459- 2581, 2459-2582, 2459-2583, 2459-2584, 2459-2585, 2459-2586, 2459-2587, 2459-2588, 2459-2589, 2459-2590, 2459-2591, 2459- 2592, 2459-2593, 2459-2594, 2459-2595, 2459-2596, 2459-2597, 2459-2598, 2459-2599, 2459-2600, 2459-2601, 2459-2602, 2459- 2603, 2459-2604, 2459-2605, 2459-2606, 2459-2607, 2459-2608, 2459-2609, 2459-2610, 2459-2611, 2459-2612, 2459-2613, 2459- 2614, 2459-2615, 2459-2616, 2459-2617, 2459-2618, 2459-2619, 2459-2620, 2459-2621, 2459-2622, 2459-2623, 2459-2624, 2459- 2625, 2459-2626, 2459-2627, 2459-2628, 2459-2629, 2459-2630, 2459-2631, 2461-2476, 2461-2566, 2461-2570, 2461-2571, 2461- 2572, 2461-2573, 2461-2574, 2461-2575, 2461-2576, 2461-2577, 2461-2578, 2461-2579, 2461-2580, 2461-2581, 2461-2582, 2461- 2583, 2461-2584, 2461-2585, 2461-2586, 2461-2587, 2461-2588, 2461-2589, 2461-2590, 2461-2591, 2461-2592, 2461-2593, 2461- 2594, 2461-2595, 2461-2596, 2461-2597, 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2606-2629, 2606-2630, 2606-2631, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607- 2626, 2607-2627, 2607-2628, 2607-2629, 2607-2630, 2607-2631, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2608- 2628, 2608-2629, 2608-2630, 2608-2631, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2609-2629, 2609-2630, 2609- 2631, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2610-2630, 2610-2631, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611- 2629, 2611-2630, 2611-2631, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613- 2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631, ou 2616-2631. Em certas modalidades, os compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a pelo menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ou nucleobases contíguas dentro das regiões de nucleobases acima mencionadas.

[00122] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 1, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 50% de inibição, 30-49, 48- 63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738- 757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153- 1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183- 1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355- 1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749- 1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195- 2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227-2246, 2238- 2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459- 2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553- 2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556- 2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559- 2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2576, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563- 2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568- 2583, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2585, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2586, 2571-2588, 2571-2590, 2572- 2589, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2590, 2574-2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2591, 2575-2592, 2575- 2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580- 2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583- 2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2601, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586- 2601, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2602, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2605, 2588- 2606, 2588-2607, 2589-2604, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590- 2609, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2608, 2591-2609, 2591-2610, 2592-2607, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2610, 2592-2611, 2593- 2608, 2593-2609, 2593-2610, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595- 2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2612, 2597-2613, 2597- 2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599- 2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601- 2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604- 2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606- 2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608- 2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610- 2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612- 2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631, e 2616-2631.

[00123] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 50% de inibição, 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872- 1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846- 2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151- 4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686- 4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406- 6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985- 7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692- 7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787- 7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791- 7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794- 7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797- 7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802- 7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7821, 7806-7823, 7806- 7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7826, 7810- 7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815- 7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817- 7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820- 7839, 7821-7836, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823- 7839, 7823-7840, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7839, 7824-7840, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825- 7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7842, 7827-7843, 7827-7844, 7827- 7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7845, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830- 7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832- 7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834- 7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836- 7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838- 7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841- 7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843- 7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846- 7861, e 7846-7862.

[00124] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 1, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 60% de inibição, 48-63, 150- 169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 600-619, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1153-1172, 1171-1186, 1173-1188, 1175-1190, 1749-1768, 1763-1782, 1763-1782, 1912- 1931, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2197-2212, 2197-2216, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2238- 2257, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2550-2569, 2551- 2566, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2556- 2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559- 2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563- 2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2583, 2568- 2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2588, 2572-2590, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574- 2591, 2574-2593, 2575-2590, 2575-2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2595, 2577-2596, 2578-2594, 2578- 2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2598, 2581-2599, 2581-2600, 2582-2598, 2582- 2599, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2600, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2602, 2584-2603, 2585-2601, 2585- 2603, 2585-2604, 2586-2602, 2586-2604, 2586-2605, 2587-2603, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2603, 2588-2604, 2588-2606, 2588- 2607, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589-2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2608, 2590-2609, 2591-2607, 2591- 2609, 2591-2610, 2592-2608, 2592-2609, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2609, 2593-2612, 2594-2609, 2594-2610, 2594-2611, 2594- 2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2612, 2596-2613, 2596-2614, 2596- 2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599- 2614, 2599-2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601- 2617, 2601-2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603- 2620, 2603-2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605- 2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607- 2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609- 2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611- 2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614- 2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2630, 2615-2631, 2615-2631, e 2616-2631.

[00125] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 60% de inibição, 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784, 1871-1890, 1873-1892, 1875-1890, 1875- 1894, 1877-1892, 1877-1896, 1879-1894, 1879-1898, 2808-2827, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3837-3856, 4151-4166, 5890- 5909, 5904-5923, 5904-5923, 6406-6425, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6985-7000, 6985-7004, 7122- 7141, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7696-7711, 7696-7715, 7786-7801, 7787-7806, 7788- 7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791- 7810, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795- 7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799- 7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804- 7821, 7804-7823, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809- 7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813- 7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817- 7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820- 7838, 7820-7839, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7841, 7823- 7842, 7824-7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843, 7825-7844, 7826-7842, 7826- 7844, 7826-7845, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829- 7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849, 7831- 7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834- 7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836- 7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838- 7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840- 7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842- 7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845- 7861, 7845-7862, 7846-7861, 7846-7862, e 7847-7862.

[00126] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 1, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 70% de inibição, 48-63, 150- 169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1171-1186, 1173-1188, 1175- 1190, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2197-2212, 2197-2216, 2223-2238, 2225-2240, 2227- 2242, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2461-2476, 2461-2480, 2550-2569, 2551-2566, 2552-2571, 2553- 2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2555-2574, 2556-2573, 2556- 2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577, 2559-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560- 2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562-2579, 2562-2581, 2563-2578, 2563-2580, 2563-2582, 2564- 2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2566-2585, 2567-2582, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2569- 2588, 2570-2587, 2570-2589, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2591, 2574-2593, 2575- 2592, 2575-2594, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2579-2598, 2580-2596, 2580-2598, 2580-2599, 2581- 2597, 2581-2600, 2582-2598, 2582-2600, 2582-2601, 2583-2599, 2583-2601, 2583-2602, 2584-2600, 2584-2602, 2584-2603, 2585- 2601, 2585-2603, 2585-2604, 2586-2605, 2587-2606, 2588-2604, 2588-2606, 2588-2607, 2589-2605, 2589-2606, 2589-2607, 2589- 2608, 2590-2605, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2609, 2591-2607, 2591-2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2612, 2594-2609, 2594- 2610, 2594-2612, 2594-2613, 2595-2610, 2595-2611, 2595-2612, 2595-2613, 2595-2614, 2596-2611, 2596-2614, 2596-2615, 2597- 2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599- 2615, 2599-2616, 2599-2617, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2616, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601- 2618, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2617, 2602-2618, 2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603- 2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605-2624, 2606- 2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608- 2624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610- 2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612- 2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2630, 2615-2631, e 2616- 2631.

[00127] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 70% de inibição: 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784, 1871-1890, 1873-1892, 1875-1890, 1875- 1894, 1877-1892, 1877-1896, 1879-1894, 1879-1898, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 4151-4166, 5890-5909, 5904-5923, 5904- 5923, 6406-6425, 6983-6998, 6983-7002, 6985-7000, 6985-7004, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7696- 7711, 7696-7715, 7786-7801, 7787-7806, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790- 7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794- 7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798- 7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7820, 7803- 7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809- 7826, 7809-7828, 7810-7827, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7833, 7815- 7834, 7816-7832, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7837, 7819- 7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7840, 7822-7841, 7823-7839, 7823-7841, 7823-7842, 7824-7840, 7824-7841, 7824- 7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7844, 7826-7842, 7826-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7847, 7829- 7844, 7829-7845, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7849, 7831- 7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834- 7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836- 7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7854, 7838-7855, 7838- 7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840- 7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843- 7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845- 7862, 7846-7861, 7846-7862, e 7847-7862.

[00128] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 1, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 80% de inibição: 152-171, 154-169, 156-171, 158-173, 1135-1154, 1171-1186, 1173-1188, 1175- 1190, 1763-1782, 1912-1931, 2197-2212, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2457-2472, 2459-2474, 2461-2476, 2551-2566, 2553- 2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2573, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2574, 2557-2576, 2558- 2575, 2558-2576, 2559-2577, 2559-2578, 2560-2577, 2560-2578, 2560-2579, 2561-2578, 2561-2579, 2561-2580, 2562-2577, 2562- 2579, 2562-2581, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2564-2583, 2565-2584, 2566-2583, 2567-2584, 2567-2586, 2568-2585, 2568- 2587, 2569-2586, 2569-2588, 2570-2587, 2571-2588, 2571-2590, 2572-2589, 2572-2591, 2573-2590, 2573-2592, 2574-2591, 2574- 2593, 2575-2592, 2576-2593, 2576-2595, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2580-2598, 2580-2599, 2581-2597, 2581-2600, 2582- 2601, 2583-2602, 2584-2603, 2585-2604, 2586-2605, 2587-2606, 2588-2607, 2589-2608, 2590-2606, 2590-2607, 2590-2609, 2591- 2610, 2592-2611, 2593-2608, 2593-2612, 2594-2613, 2595-2611, 2595-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2614, 2597- 2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2613, 2598-2614, 2598-2615, 2598-2616, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2617, 2599-2618, 2600- 2615, 2600-2617, 2600-2618, 2600-2619, 2601-2616, 2601-2617, 2601-2619, 2601-2620, 2602-2618, 2602-2621, 2603-2620, 2603- 2621, 2603-2622, 2604-2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2623, 2605- 2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608- 2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2627, 2609-2624, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2628, 2610- 2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2629, 2611-2630, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613- 2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, e 2616-2631.

[00129] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 80% de inibição: 1685-1704, 1686-1705, 1873-1892, 1875-1890, 1877-1892, 1879-1894, 3819- 3838, 4151-4166, 5904-5923, 6406-6425, 6985-7000, 7692-7707, 7694-7709, 7696-7711, 7786-7801, 7788-7805, 7788-7806, 7788- 7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7794- 7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798- 7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804- 7823, 7805-7822, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7827, 7811- 7828, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7835, 7817-7836, 7818-7837, 7819-7838, 7820- 7839, 7821-7840, 7822-7841, 7823-7842, 7824-7843, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7844, 7826-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828- 7847, 7829-7848, 7830-7846, 7830-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833- 7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836- 7851, 7836-7852, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7853, 7837-7856, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839- 7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841- 7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7862, 7844- 7859, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7846-7862, e 7847-7862.

[00130] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 1, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 90% de inibição: 154-169, 156-171, 158-173, 1135-1154, 1171-1186, 1173-1188, 1763-1782, 1912-1931, 2223-2238, 2227-2242, 2459-2474, 2461-2476, 2554- 2573, 2555-2574, 2560-2577, 2561-2578, 2561-2579, 2562-2581, 2563-2580, 2563-2582, 2564-2581, 2566-2583, 2567-2584, 2568- 2585, 2568-2587, 2569-2586, 2570-2587, 2576-2593, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2580-2599, 2581-2600, 2582-2601, 2583- 2602, 2584-2603, 2586-2605, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2607, 2589-2608, 2590-2607, 2590-2609, 2592-2611, 2595-2614, 2596- 2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 2598-2613, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2618, 2600-2615, 2600- 2619, 2601-2617, 2601-2620, 2602-2621, 2603-2622, 2604-2623, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2624, 2606-2625, 2607-2626, 2608- 2623, 2608-2625, 2609-2628, 2611-2627, 2611-2630, 2612-2628, 2612-2631, 2613-2629, 2614-2629, 2615-2630, e 2616-2631.

[00131] Em determinadas modalidades, as seguintes regiões de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2, quando alvo de compostos antissenso ou oligonucleotídeos, exibem pelo menos 90% de inibição: 1685-1704, 1686-1705, 1875-1890, 1877-1892, 1879-1894, 3819-3838, 5904- 5923, 6406-6425, 7694-7709, 7696-7711, 7789-7808, 7790-7809, 7795-7812, 7795-7813, 7796-7813, 7796-7814, 7797-7814, 7797- 7816, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7801-7818, 7802-7819, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7805-7822, 7811-7828, 7812- 7829, 7812-7831, 7813-7832, 7815-7834, 7818-7837, 7819-7838, 7821-7840, 7822-7840, 7822-7841, 7825-7842, 7832-7847, 7832- 7848, 7832-7850, 7833-7848, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7853, 7835-7850, 7836-7852, 7836-7855, 7837-7856, 7838-7856, 7839- 7857, 7839-7858, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7859, 7843-7858, 7843-7860, e 7846-7862.

[00132] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 50% de um mRNA de CFB ISIS NOs: 516350 532614 532632 532635 532638, 532639, 532686, 532687, 532692, 532692, 532693, 532694, 532699, 532700, 532701, 532702, 532707, 532770, 532775, 532778, 532810, 532811, 532917, 532952, 588513, 588514, 588515, 588516, 588522, 588523, 588524, 588525, 588531, 588532, 588533, 588534, 588539, 588540, 588541, 588542, 588547, 588548, 588549, 588550, 588555, 588556, 588557, 588558, 588563, 588564, 588565, 588566, 588571, 588572, 588573, 588574, 588581, 588585, 588586, 588589, 588608, 588610, 588614, 588616, 588636, 588638, 588640, 588645, 588660, 588662, 588664, 588670, 588696, 588698, 588807, 588808, 588819, 588820, 588822, 588823, 588842, 588846, 588847, 588848, 588853, 588854, 588855, 588856, 588861, 588862, 588863, 588864, 588870, 588871, 588872, 588873, 588878, 588879, 588880, 588881, 599000, 599001, 599002, 599003, 599008, 599009, 599010, 599011, 599018, 599019, 599023, 599024, 532688, 532689, 532690, 532691, 532695, 532696, 532697, 532698, 532703, 532704, 532705, 532706, 532780, 532791, 532800, 532809, 588509, 588510, 588511, 588512, 588517, 588518, 588519, 588520, 588527, 588528, 588529, 588530, 588535, 588536, 588537, 588538, 588543, 588544, 588545, 588546, 588551, 588552, 588553, 588554, 588559, 588560, 588561, 588562, 588567, 588568, 588569, 588570, 588575, 588576, 588577, 588580, 588590, 588599, 588603, 588606, 588628, 588631, 588632, 588634, 588646, 588654, 588656, 588658, 588672, 588676, 588682, 588688, 588809, 588813, 588814, 588815, 588838, 588839, 588840, 588841, 588849, 588850, 588851, 588852, 588857, 588858, 588859, 588860, 588865, 588866, 588867, 588868, 588874, 588875, 588876, 588877, 588882, 588883, 588884, 598999, 599004, 599005, 599006, 599007, 599012, 599013, 599014, 599015, 599025, 599026, 599027, 599028, 599029, 599030, 599031, 599032, 599062, 599063, 599064, 599065, 599074, 599076, 599077, 599078, 599083, 599084, 599085, 599086, 599091, 599092, 599093, 599094, 599102, 599119, 599123, 599124, 599132, 599133, 599134, 599135, 599140, 599141, 599142, 599143, 599149, 599150, 599151, 599152, 599157, 599158, 599159, 599178, 599186, 599187, 599188, 599189, 599194, 599195, 599196, 599197, 599202, 599203, 599204, 599205, 599210, 599211, 599212, 599213, 599218, 599219, 599220, 599221, 599225, 599226, 599227, 599228, 599233, 599234, 599235, 599236, 599255, 599256, 599257, 599258, 599264, 599265, 599266, 599267, 599272, 599273, 599274, 599275, 599280, 599297, 599299, 599306, 599312, 599313, 599314, 599315, 599320, 599321, 599322, 599323, 599328, 599329, 599330, 599338, 599356, 599357, 599358, 599359, 599364, 599369, 599371, 599372, 599382, 599383, 599384, 599385, 599390, 599391, 599392, 599393, 599398, 599399, 599400, 599401, 599406, 599407, 599408, 599409, 599033, 599034, 599035, 599058, 599070, 599071, 599072, 599073, 599079, 599080, 599081, 599082, 599087, 599088, 599089, 599090, 599095, 599096, 599097, 599098, 599125, 599126, 599127, 599128, 599136, 599137, 599138, 599139, 599144, 599145, 599147, 599148, 599153, 599154, 599155, 599156, 599179, 599180, 599181, 599182, 599190, 599191, 599192, 599193, 599198, 599199, 599200, 599201, 599206, 599207, 599208, 599209, 599214, 599215, 599216, 599217, 599221, 599222, 599223, 599224, 599229, 599230, 599231, 599232, 599241, 599247, 599248, 599249, 599260, 599261, 599262, 599263, 599268, 599269, 599270, 599271, 599276, 599277, 599278, 599279, 599307, 599308, 599309, 599311, 599316, 599317, 599318, 599319, 599324, 599325, 599326, 599327, 599349, 599353, 599354, 599355, 599360, 599361, 599362, 599363, 599373, 599376, 599378, 599379, 599386, 599387, 599388, 599389, 599394, 599395, 599396, 599397, 599402, 599403, 599404, 599405, 599410, 599412, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599425, 599426, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599442, 599443, 599444, 599445, 599446, 599447, 599448, 599450, 599454, 599455, 599456, 599467, 599468, 599469, 599471, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599509, 599512, 599515, 599518, 599531, 599541, 599541, 599546, 599547, 599548, 599549, 599550, 599552, 599553, 599554, 599555, 599557, 599558, 599561, 599562, 599563, 599564, 599565, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599581, 599582, 599584, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601321, 601322, 601323, 601325, 601327, 601328, 601329, 601330, 601332, 601333, 601334, 601335, 601336, 601337, 601338, 601339, 601341, 601342, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601362, 601367, 601368, 601369, 601371, 601372, 601373, 601374, 601375, 601377, 601378, 601380, 601381, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, 601387, e 601388.

[00133] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 50% de um mRNA de CFB, SEQ ID NOs: 12, 30, 33, 36, 37, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 198, 203, 206, 208, 219, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 468, 472, 473, 475, 478, 479, 488, 492, 494, 495, 498, 499, 500, 502, 503, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 517, 518, 522, 523, 524, 525, 529, 530, 531, 534, 535, 537, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 563, 564, 565, 569, 570, 572, 573, 577, 588, 589, 590, 591, 592, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 623, 640, 641, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 700, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 758, 759, 760, 761, 762, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 850, 867, e 873.

[00134] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 60% de um mRNA de CFB, ISIS NOs: 516350, 532614, 532635, 532686, 532687, 532688, 532689, 532770, 532800, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 588512, 588513, 588514, 588515, 588516, 588517, 588518, 588519, 588522, 588523, 588524, 588525, 588527, 588528, 588529, 588530, 588531, 588532, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588541, 588542, 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588561, 588562, 588563, 588564, 588569, 588570, 588571, 588572, 588577, 588636, 588638, 588640, 588807, 588808, 588814, 588815, 588846, 588847, 588848, 588849, 588854, 588855, 588856, 588857, 588862, 588863, 588864, 588866, 588872, 588873, 588874, 588875, 588880, 588881, 588882, 588883, 599002, 599003, 599004, 599005, 599010, 599011, 599012, 599013, 599025, 599026, 599027, 599028, 599033, 599034, 599035, 599064, 599078, 599079, 599080, 599083, 599088, 599089, 599090, 599091, 599096, 599097, 599125, 599126, 599136, 599138, 599139, 599140, 599150, 599151, 599152, 599154, 599159, 599178, 599179, 599180, 599192, 599193, 599194, 599195, 599200, 599201, 599202, 599203, 599208, 599209, 599210, 599211, 599216, 599217, 599218, 599219, 599224, 599225, 599226, 599227, 599232, 599233, 599234, 599235, 599257, 599263, 599264, 599265, 599273, 599274, 599275, 599276, 599306, 599307, 599308, 599311, 599316, 599317, 599318, 599319, 588557, 588558, 588559, 588560, 588565, 588566, 588567, 588568, 588573, 588574, 588575, 588576, 588664, 588676, 588696, 588698, 588819, 588820, 588840, 588842, 588850, 588851, 588852, 588853, 588858, 588859, 588860, 588861, 588867, 588868, 588870, 588871, 588876, 588877, 588878, 588879, 588884, 598999, 599000, 599001, 599006, 599007, 599008, 599009, 599014, 599015, 599019, 599024, 599029, 599030, 599031, 599032, 599065, 599071, 599072, 599077, 599084, 599085, 599086, 599087, 599092, 599093, 599094, 599095, 599127, 599133, 599134, 599135, 599141, 599142, 599148, 599149, 599155, 599156, 599157, 599158, 599181, 599187, 599188, 599190, 599196, 599197, 599198, 599199, 599204, 599205, 599206, 599207, 599212, 599213, 599214, 599215, 599220, 599221, 599222, 599223, 599228, 599229, 599230, 599231, 599236, 599247, 599255, 599256, 599266, 599270, 599271, 599272, 599277, 599278, 599279, 599280, 599312, 599313, 599314, 599315, 599320, 599321, 599322, 599323, 599324, 599325, 599327, 599328, 599329, 599330, 599349, 599353, 599355, 599356, 599357, 599358, 599359, 599360, 599361, 599362, 599363, 599364, 599369, 599371, 599372, 599373, 599376, 599378, 599379, 599382, 599384, 599386, 599387, 599388, 599389, 599390, 599391, 599392, 599393, 599394, 599395, 599396, 599397, 599398, 599399, 599400, 599401, 599402, 599403, 599404, 599405, 599406, 599407, 599408, 599409, 599410, 599412, 599413, 599414, 599415, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599425, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599442, 599443, 599444, 599445, 599446, 599447, 599448, 599456, 599467, 599468, 599471, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599512, 599531, 599547, 599548, 599549, 599552, 599553, 599554, 599555, 599557, 599558, 599562, 599563, 599564, 599565, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599582, 599584, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601323, 601327, 601329, 601332, 601333, 601333, 601334, 601335, 601336, 601338, 601339, 601341, 601342, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601368, 601369, 601371, 601372, 601374, 601375, 601377, 601378, 601380, 601381, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, 601387, e 601388.

[00135] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 60% de um mRNA de CFB, SEQ ID NOs: 12, 33, 84, 85, 86, 87, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 531, 537, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 564, 565, 569, 570, 577, 590, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 700, 704, 706, 707, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 758, 759, 760, 761, 767, 768, 770, 772, 773, 774, 775, 775, 776, 776, 777, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 783, 784, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, e 850.

[00136] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 70% de um mRNA de CFB, ISIS NOs: 516350, 532614, 532686, 532687, 532688, 532770, 532800, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 588512, 588513, 588514, 588515, 588516, 588517, 588518, 588524, 588529, 588530, 588531, 588532, 588533, 588534, 588535, 588536, 588537, 588538, 588539, 588540, 588541, 588542, 588543, 588544, 588545, 588546, 588547, 588548, 588549, 588550, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588563, 588564, 588565, 588568, 588569, 588570, 588571, 588572, 588573, 588574, 588640, 588696, 588698, 588807, 588847, 588848, 588849, 588850, 588857, 588858, 588859, 588860, 588867, 588870, 588871, 588872, 588877, 588878, 588879, 588880, 599000, 599001, 599003, 599004, 599011, 599014, 599015, 599024, 599030, 599031, 599032, 599033, 599085, 599086, 599087, 599088, 599094, 599095, 599096, 599097, 599139, 599148, 599149, 599150, 599156, 599157, 599158, 599187, 599197, 599198, 599199, 599200, 599205, 599206, 599207, 599208, 599214, 599215, 599216, 599217, 599222, 599223, 599224, 599225, 599230, 599231, 599232, 599233, 599272, 599272, 599273, 599274, 599280, 599280, 599306, 599311, 599316, 599317, 599318, 599319, 599325, 599327, 599328, 599329, 599359, 599360, 599361, 599362, 599372, 599373, 599378, 599379, 599388, 599389, 599390, 599391, 599396, 599397, 599398, 599399, 599404, 599405, 599406, 599407, 599414, 599415, 599416, 599417, 599422, 599423, 599424, 599433, 599438, 599439, 599440, 599441, 588575, 588577, 588636, 588638, 588814, 588815, 588819, 588842, 588851, 588852, 588853, 588856, 588861, 588862, 588863, 588866, 588873, 588874, 588875, 588876, 588881, 588882, 588883, 588884, 599005, 599008, 599009, 599010, 599025, 599027, 599028, 599029, 599034, 599072, 599077, 599080, 599089, 599090, 599091, 599093, 599125, 599126, 599134, 599138, 599151, 599152, 599154, 599155, 599188, 599193, 599195, 599196, 599201, 599202, 599203, 599204, 599210, 599211, 599212, 599213, 599218, 599219, 599220, 599221, 599226, 599227, 599228, 599229, 599234, 599235, 599236, 599266, 599275, 599277, 599278, 599279, 599312, 599313, 599314, 599315, 599320, 599321, 599322, 599323, 599330, 599355, 599357, 599358, 599363, 599364, 599369, 599371, 599382, 599384, 599386, 599387, 599392, 599393, 599394, 599395, 599400, 599401, 599402, 599403, 599408, 599409, 599410, 599413, 599418, 599419, 599420, 599421, 599434, 599435, 599436, 599437, 599442, 599443, 599445, 599446, 599447, 599448, 599472, 599473, 599474, 599475, 599476, 599477, 599478, 599479, 599480, 599481, 599482, 599483, 599484, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599493, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599501, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599512, 599547, 599548, 599552, 599553, 599554, 599555, 599558, 599562, 599563, 599564, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599582, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601332, 601335, 601341, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601371, 601372, 601380, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, e 601387.

[00137] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 70% de um mRNA de CFB, SEQ ID NOs: 12, 84, 85, 86, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 402, 403, 404, 405, 407, 408, 410, 411, 412, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 565, 569, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 653, 654, 655, 656, 659, 660, 662, 663, 664, 665, 666, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 767, 768, 773, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 793, 794, 795, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 867, e 873.

[00138] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 80% de um mRNA de CFB, ISIS NOs: 532686, 532809, 532810, 532811, 532917, 532952, 599416, 599417, 599418, 599419, 599420, 599421, 599422, 599423, 599424, 599433, 599434, 599435, 599436, 599437, 599438, 599439, 599440, 599441, 599445, 599446, 599447, 599448, 599474, 599476, 599477, 599479, 599481, 599482, 599483, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599547, 599552, 599553, 599554, 599558, 599563, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599581, 599582, 599585, 599587, 599588, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 601332, 601344, 601345, 601382, 601383, e 601385.

[00139] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 80% de um mRNA de CFB, SEQ ID NOs: 84, 237, 238, 239, 317, 395, 397, 411, 412, 413, 414, 415, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 425, 426, 427, 429, 430, 431, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 595, 599, 600, 601, 602, 603, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 646, 655, 660, 662, 663, 666, 669, 670, 671, 672, 673, 675, 676, 677, 678, 679, 682, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 729, 730, 731, 732, 733, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 768, 775, 776, 778, 781, 782, 783, 784, 785, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 799, 813, 833, 834, 841, 849, 867, e 873.

[00140] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 90% de um mRNA de CFB, ISIS NOs: 532686, 532811, 532917, 588536, 588537, 588538, 588539, 588544, 588545, 588546, 588548, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588564, 588638, 588640, 588696, 588698, 588849, 588850, 588851, 588860, 588866, 588867, 588872, 588873, 588874, 588876, 588877, 588878, 588879, 588881, 588883, 599149, 599188, 599203, 599206, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599235, 599236, 599279, 599280, 599314, 599321, 599362, 599378, 599390, 599391, 599398, 599399, 599404, 599413, 599414, 599416, 599419, 599420, 599422, 599435, 599437, 599438, 599441, 599483, 599494, 599508, 599552, 599553, 599554, 599568, 599570, 599577, 599581, 599591, 599592, e 599593.

[00141] Em certas modalidades, os seguintes compostos antissenso ou oligonucleotídeos se direcionam a uma região de um ácido nucleico de CFB e efetuam, pelo menos uma inibição de 90% de um mRNA de CFB, SEQ ID NOs: 84, 238, 239, 317, 412, 413, 420, 421, 426, 434, 436, 437, 438, 439, 440, 442, 443, 444, 445, 446, 448, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 551, 553, 555, 556, 599, 600, 601, 602, 610, 616, 617, 618, 662, 666, 670, 676, 677, 678, 688, 689, 713, 723, 729, 730, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 755, 756, 768, 783, 793, 833, e 867.

[00142] Em certas modalidades, um composto compreende um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados complementares dentro dos nucleotídeos 2193-2212, 2195- 2210, 2457-2476, 2571-2590, 2584-2603, 2588-2607, 2592-2611, 2594- 2613, 2597-2616, 2600-2619, 2596-2611 ou da SEQ ID NO: 1.

[00143] Em certas modalidades, um composto que compreende um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados tendo uma sequência de nucleobase que compreende qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598.

[00144] Em certas modalidades, um composto compreende um oligonucleotídeo modificado possuindo uma sequência de nucleobases que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598.

[00145] Em certas modalidades, qualquer um dos compostos anteriores ou oligonucleotídeos compreende pelo menos uma ligação internucleosídeos modificados, pelo menos, um açúcar modificado, e/ou pelo menos uma nucleobase modificada.

[00146] Em certas modalidades, qualquer um dos compostos ou oligonucleotídeos supracitados compreende pelo menos um açúcar modificado. Em certas modalidades, pelo menos um açúcar modificado compreende um grupo 2'-O-metoxietila. Em certas modalidades, pelo menos um açúcar modificado é um açúcar bicíclico, tal como um grupo 4'-CH (CH3)-O-2', um grupo 4'-CH2-O-2’ ou um grupo 4'-(CH2)2-O-2’.

[00147] Em certas modalidades, o oligonucleotídeo modificado compreende pelo menos uma ligação de internucleosídeo modificado, como uma ligação de internucleosídeo de fosforotioato.

[00148] Em certas modalidades, qualquer um dos compostos ou oligonucleotídeos supramencionados compreende pelo menos uma nucleobase modificada, como 5-metilcitosina.

[00149] Em certas modalidades, qualquer um dos compostos ou oligonucleotídeos supramencionados compreende:

[00150] um segmento gap consistindo em desoxinucleosídeos ligados;

[00151] um segmento wing 5' consistindo em nucleosídeos ligados; e

[00152] um segmento wing 3' consistindo em nucleosídeos ligados;

[00153] em que o segmento gap é posicionado entre o segmento wing 5' e o segmento wing 3' e em que cada nucleosídeo de cada segmento wing compreende um açúcar modificado. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo consiste de 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende a sequência enunciada na SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 ou 598.

[00154] Em certas modalidades, o oligonucleotídeo modificado tem uma sequência de nucleobase que compreende a sequência enunciada nas SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 ou 455, em que o oligonucleotídeo modificado compreende

[00155] um segmento gap consistindo em dez desoxinucleosídeos ligados;

[00156] um segmento wing 5’ consistindo em cinco nucleosídeos ligados; e

[00157] um segmento wing 3’ consistindo em cinco nucleosídeos ligados;

[00158] em que o segmento gap é posicionado entre o segmento wing 5' e o segmento wing 3', em que cada nucleosídeo de cada segmento wing compreende um açúcar 2’-O-metoxietila; em que cada ligação internucleosídica é uma ligação de fosforotioato e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

[00159] Em certas modalidades, um composto compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado de fita simples que consiste em 20 nucleosídeos ligados com uma sequência de nucleobases que consiste na sequência especificada na SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, ou 455, em que o oligonucleotídeo compreende:

[00160] um segmento gap que consiste em dez desoxinucleosídeos ligados;

[00161] um segmento wing 5’ que consiste em cinco nucleosídeos ligados; e

[00162] um segmento wing 3' que consiste em cinco nucleosídeos ligados;

[00163] em que o segmento gap é posicionado entre o segmento wing 5' e o segmento wing 3', em que cada nucleosídeo de cada segmento wing compreende um açúcar 2’-O-metoxietila; em que cada ligação internucleosídica é uma ligação de fosforotioato e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

[00164] Em certas modalidades um composto compreende ISIS 588540. Em certas modalidades um composto consiste de ISIS 588540. Em certas modalidades, o ISIS 588540 tem a seguinte estrutura química:

[00165] Em certas modalidades, um composto compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado de fita simples que consiste em 16 nucleosídeos ligados com uma sequência de nucleobases que consiste na sequência especificada na SEQ ID NO: 549, em que o oligonucleotídeo modificado compreende

[00166] um segmento gap que consiste em dez desoxinucleosídeos ligados;

[00167] um segmento wing 5’ que consiste em três nucleosídeos ligados; e

[00168] um segmento wing 3' que consiste em três nucleosídeos ligados;

[00169] em que um segmento gap é posicionado entre o segmento wing 5' e o segmento wing 3'; em que cada nucleosídeo de cada segmento wing compreende um açúcar cEt; em que cada ligação internucleosídica é uma ligação de fosforotioato; e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

[00170] Em certas modalidades, um composto compreende ou consiste em um oligonucleotídeo modificado de fita simples que consiste em 16 nucleosídeos ligados com uma sequência de nucleobases que compreende a sequência especificada na SEQ ID NO: 598, em que o oligonucleotídeo modificado compreende

[00171] um segmento gap que consiste em dez desoxinucleosídeos ligados;

[00172] um segmento wing 5’ que consiste em três nucleosídeos ligados; e

[00173] um segmento wing 3' que consiste em três nucleosídeos ligados;

[00174] em que um segmento gap é posicionado entre o segmento wing 5' e o segmento wing 3'; em que o segmento wing 5' compreende um açúcar 2’-O-metoxietila, açúcar 2’-O-metoxietila e açúcar cEt no sentido 5' para 3'; em que o segmento wing 3' compreende um açúcar cEt, açúcar cEt e açúcar 2’-O-metoxietila no sentido 5' para 3'; em que cada ligação internucleosídica é uma ligação de fosforotioato; e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

[00175] Em qualquer uma das modalidades supramencionadas, o composto ou oligonucleotídeo pode ser pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% complementar a um ácido nucleico que codifica o CFB.

[00176] Em qualquer das modalidades supramencionadas, o composto ou oligonucleotídeo pode ser de fita simples.

[00177] Em certas modalidades, os compostos ou composições como aqui descritos são eficazes em virtude de ter, pelo menos, um de um in vitro IC50 de menos do que 250 nM, menos do que 200 nM, menos do que 150 nM, menos do que 100 nM, menos do que 90 nM, menos do que 80 nM, menos do que 70 nM, menos do que 65 nM, menos do que 60 nM, menos do que 55 nM, menos do que 50 nM, menos do que 45 nM, menos do que 40 nM, menos do que 35 nM, menos do que 30 nM, menos do que 25 nM, ou menos de 20 nM.

[00178] Em certas modalidades, os compostos ou composições, conforme aqui descritos são altamente toleráveis como demonstrado por ter pelo menos um de um aumento de um valor de ALT ou AST de não mais do que 4 vezes, 3 vezes ou 2 vezes em relação aos tratados com solução salina animais ou um aumento fígado, baço, rim ou o peso de não mais do que 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 5%, ou 2%. Em certas modalidades, os compostos ou composições como aqui descritos são altamente toleráveis como demonstrado por ter nenhum aumento dos níveis de ALT ou AST sobre os animais tratados com solução salina. Em certas modalidades, os compostos ou composições como aqui descritos são altamente toleráveis como demonstrado por ter nenhum aumento no fígado, no baço, nos rins ou em peso, mais de animais tratados com solução salina.

[00179] Certas modalidades fornecem uma composição compreendendo o composto de qualquer uma das modalidades supramencionadas ou um sal deste e pelo menos um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a composição tem uma viscosidade de menos de cerca de 40 centipoise (cP), menos do que cerca de 30 centipoise (cP), menos do que cerca de 20 centipoise (cP), menos do que cerca de 15 centipoise (cP) ou menos do que cerca de 10 centipoise (cP). Em certas modalidades, a composição possuindo qualquer uma das viscosidades supramencionadas compreende um composto fornecido aqui a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, cerca de 125 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 175 mg/mL, cerca de 200 mg/mL, cerca de 225 mg/mL, cerca de 250 mg/mL, cerca de 275 mg/mL ou cerca de 300 mg/mL. Em certas modalidades, a composição possuindo qualquer das viscosidades e/ou concentrações do composto mencionadas acima tem uma temperatura ambiente ou uma temperatura de cerca de 20°C, cerca de 21°C, cerca de 22°C, cerca de 23°C, cerca de 24°C, cerca de 25°C, cerca de 26°C, cerca de 27°C, cerca de 28°C, cerca de 29°C ou cerca de 30°C.

[00180] Em certas modalidades, um método de tratamento, prevenção ou melhoramento de uma doença associada à desregulação da via alternativa do complemento em um sujeito, compreende a administração no sujeito de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB), tratando, prevenindo ou melhorando, deste modo, a doença. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto antissenso direcionado para CFB, tal como um oligonucleotídeo antissenso direcionado para CFB. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de ISIS 588540, que tem a seguinte estrutura química:

[00181] Em certas modalidades, a doença é a degeneração macular, tal como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), que pode ser AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a doença é uma doença renal, tal como a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00182] Em certas modalidades, um método de tratamento, prevenção, ou melhoramento da degeneração macular, tal como relacionado com a idade degeneração macular (AMD) num sujeito que compreende a administração ao indivíduo de um inibidor específico de CFB, tratando assim, prevenir, ou melhorar a AMD, tal como AMD úmida e AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. A Atrofia Geográfica é considerada uma forma avançada de AMD seca envolvendo a degeneração da retina. Em certas modalidades, o sujeito tem uma via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, a administração do composto antissenso reduz ou inibe a acumulação de níveis C3 oculares, tais como os níveis de proteína C3. Em certas modalidades, a administração do composto antissenso diminui o nível de depósitos de C3 oculares ou inibe a acumulação de depósitos de C3 oculares. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto antissenso direcionado para CFB, tal como um oligonucleotídeo antissenso direcionado para CFB. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6- 808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o composto é administrado ao sujeito parentericamente.

[00183] Em certas modalidades, um método de tratamento, prevenção ou melhoramento de uma doença renal associada à desregulação da via alternativa do complemento em um sujeito, compreende a administração no sujeito de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB), tratando, prevenindo ou melhorando, deste modo, a doença renal. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto antissenso direcionado para CFB, tal como um oligonucleotídeo antissenso direcionado para CFB. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6- 808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o composto é administrado ao sujeito parentericamente. Em certas modalidades, a doença renal é a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos. Em certas modalidades, a doença renal está associada com depósitos de C3, tais como depósitos de C3 no glomérulo. Em certas modalidades, a doença renal está associada com níveis mais baixos do que C3 circulantes normais, tais como os níveis de soro ou de plasma C3. Em certas modalidades, a administração do composto reduz ou inibe a acumulação de níveis C3 no rim, tal como os níveis de proteína C3. Em certas modalidades, a administração do composto reduz o nível de depósitos de C3 renais ou inibe a acumulação de depósitos de C3 nos rins, tais como os níveis de C3 no glomérulo. Em certas modalidades, o indivíduo é identificado como tendo, ou em risco de ter uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento, por exemplo, através da detecção dos níveis de complemento ou os níveis de complexos de ataque à membrana no sangue do sujeito e/ou a realização de um teste genético para as mutações do gene de fatores do complemento associado com a doença.

[00184] Em certas modalidades, um método de inibição da expressão do Fator B do Complemento (CFB) em um sujeito que apresenta, ou está em risco de apresentar, uma doença associada à desregulação da via alternativa do complemento, compreende a administração de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB) no sujeito, inibindo assim a expressão do CFB no sujeito. Em certas modalidades, a administração do inibidor inibe a expressão do CFB no olho. Em certas modalidades, o sujeito tem, ou está em risco de ter, idade relacionada com a degeneração macular (AMD), tal como AMD úmida e seca AMD. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a administração do inibidor inibe a expressão do CFB no rim, tal como no glomérulo. Em certas modalidades, o sujeito tem, ou está em risco de ter a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6- 808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o composto é administrado ao sujeito parentericamente.

[00185] Em certas modalidades, um método de redução ou inibição da expressão de depósitos de C3 no olho de um sujeito que apresenta, ou está em risco de apresentar, uma doença associada à desregulação da via alternativa do complemento, compreende a administração de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB) no sujeito, reduzindo ou inibindo, assim, a acumulação de depósitos de C3 no olho do sujeito. Em certas modalidades, o sujeito tem, ou está em risco de ter, idade relacionada com a degeneração macular (AMD), tal como AMD úmida e AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, o inibidor é um composto antissenso direcionado para CFB. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o composto é administrado ao sujeito parentericamente.

[00186] Em certas modalidades, um método de redução ou inibição da expressão de depósitos de C3 no rim de um sujeito que apresenta, ou está em risco de apresentar, uma doença associada à desregulação da via alternativa do complemento, compreende a administração de um inibidor específico ao Fator B do Complemento (CFB) no sujeito, reduzindo ou inibindo, assim, a acumulação de depósitos de C3 no rim do sujeito. Em certas modalidades, o sujeito tem, ou está em risco de ter a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos. Em certas modalidades, o inibidor é um composto antissenso direcionado para CFB. Em determinadas modalidades, o inibidor específico de CFB é um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598. Em certas modalidades, o inibidor específico CFB é um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430. Em certas modalidades, o composto é administrado ao sujeito parentericamente.

[00187] Certas modalidades são atraídas a um composto ou composição aqui descrita, para utilização em terapia. Determinadas modalidades são atraídas para um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808 para utilização em terapia. Certas modalidades são atraídas para o composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6-808 para utilização em terapia. Certas modalidades são atraídas para o composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549, e 598, para utilização em terapia. Certas modalidades são atraídas para um composto que compreende ou consiste de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, 594430 ou para utilização em terapia.

[00188] Certas modalidades são atraídas a um composto ou composição aqui descrita, para utilização no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Determinadas modalidades são atraídas para um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808 para uso no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas para o composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6- 808 para uso no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas para o composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549, e 598, para utilização no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas a um composto compreendendo ou consistindo de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, 594430 ou para uso no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, a doença é a degeneração macular, tal como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), que pode ser AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a doença é uma doença renal, tal como a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00189] Certas modalidades são atraídas a um composto compreendendo ou consistindo de ISIS 588540, que tem a seguinte estrutura química:

para uso no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, a doença é a degeneração macular, tal como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), que pode ser AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a doença é uma doença renal, tal como a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00190] Certas modalidades são atraídas ao uso de um composto ou uma composição aqui descrita para a fabricação de um medicamento para o tratamento uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Determinadas modalidades são atraídas para uso de um composto que compreende ou consiste de um oligonucleotídeo modificado consistindo em 10 a 30 nucleosídeos ligados e tendo uma sequência de nucleobase que compreende pelo menos 8 nucleobases contíguas de qualquer uma das sequências de nucleobase das SEQ ID NOs: 6-808 para a fabricação de um medicamento para o tratamento doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas para uso do composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 6- 808 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas para uso do composto compreendendo ou consistindo de um oligonucleotídeo modificado que consiste em 10 a 30 nucleosídeos ligados, com uma sequência de nucleobases que compreende ou que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 e 598, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Certas modalidades são atraídas para o uso de um composto compreendendo ou consistindo de ISIS 532770, 532800, 532809, 588540, 588544, 588548, 588550, 588553, 588555, 588848, ou 594430 para uso no tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, a doença é a degeneração macular, tal como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), que pode ser AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a doença é uma doença renal, tal como a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00191] Certas modalidades são atraídas para o uso de um composto compreendendo ou consistindo de ISIS 588540, que tem a seguinte estrutura química:

[00192] para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento. Em certas modalidades, a via alternativa do complemento é ativada maior do que o normal. Em certas modalidades, a doença é a degeneração macular, tal como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), que pode ser AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Em certas modalidades, a doença é uma doença renal, tal como a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite por C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00193] Em qualquer uma das modalidades precedentes, o inibidor específico de PCC pode ser um composto antissenso direcionado para CFB. Em certas modalidades, o composto antissenso compreende um oligonucleotídeo antissenso, por exemplo, um oligonucleotídeo antissenso que consiste em 8 a 80 nucleosídeos ligados, de 12 a 30 nucleosídeos ligados, ou 20 nucleosídeos ligados. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% complementar a qualquer das sequências de bases nucleotídicas referidas na SEQ ID NOs: 1 -5. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso compreende, pelo menos, uma ligação de internucleosídeos modificada, pelo menos um açúcar modificado e/ou pelo menos uma nucleobase modificada. Em certas modalidades, a ligação de internucleosídeos modificada é uma ligação de internucleosídeos de fosforotioato, o açúcar é um açúcar modificado ou bicíclico um 2'-O-metoxietila, e a nucleobase modificada uma 5-metilcitosina. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo modificado compreende um segmento gap consistindo de desoxinucleosídeos ligados; um segmento 5' wing que consiste de nucleosídeos ligados; e um 3' segmento wing que consiste de nucleosídeos ligados, em que o segmento gap está posicionado imediatamente adjacente a, e entre as extremidades 5' e 3 segmento wing e 3' segmento wing e em que cada um nucleosídeo de cada segmento wing compreende um açúcar modificado. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso é administrado parentericamente. Por exemplo, em certas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso pode ser administrado através da injeção ou infusão. A administração parentérica inclui administração subcutÂnea, administração intravenosa, administração intramuscular, administração antra-arterial, administração intraperitoneal, ou administração intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intracerebroventricular.

Compostos antissenso

[00194] Compostos oligoméricos incluem, mas não estão limitados a, olignucleotídeos, oligonucleot'sideos, análogos de oligonucleotídeos, miméticos de oligonucleotídeos, compostos antisese, oligonucleotídeos antissenso, e siRNAs. Um composto oligomérico pode ser “antissenso” a um ácido nucleico alvo, significando que é capaz de sofrer hibridização em um ácido nucleico alvo através da ligação de hidrogênio.

[00195] Em certas modalidades, um composto antissenso tem uma sequência de nucleobase que, quando escrita na direção 5' para 3', compreende o complemento inverso do segmento alvo de um ácido nucleico alvo ao qual este é direcionado.

[00196] Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 10 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 12 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 12 a 22 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 14 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 14 a 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 15 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 15 a 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 16 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 16 a 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 17 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 17 a 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 18 a 30 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 18 a 21 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 18 a 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem de 20 a 30 subunidades de comprimento. Em outras palavras, estes compostos antissenso são de 12 a 30 subunidades ligadas, de 14 a 30 subunidades ligadas, de 14 a 20 subunidades, de 15 a 30 subunidades, de 15 a 20 subunidades, de 16 a 30 subunidades, de 16 a 20 subunidades, de 17 a 30 subunidades, 17 a 20 subunidades, de 18 a 30 subunidades, de 18 a 20 subunidades, de 18 a 21 subunidades, de 20 a 30 subunidades ou de 12 a 22 subunidades ligadas, respectivamente. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 14 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 16 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 17 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 18 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 19 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, um composto antissenso tem 20 subunidades de comprimento. Em certas modalidades, o composto antissenso é de 8 a 80, 12 a 50, 13 a 30, 13 a 50, 14 a 30, 14 a 50, 15 a 30, 15 a 50, 16 a 30, 16 a 50, 17 a 30, 17- 50, 18 a 22, 18 a 24,18 a 30, de 18 a 50,19 a 22, 19 a 30, de 19 a 50 ou de 20 a 30 subunidades ligadas. Em algumas dessas modalidades, os compostos antissenso têm 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 ou 80 subunidades ligadas de comprimento ou um intervalo definido por quaisquer dentre dois valores definidos acima. Em certas modalidades, o composto antissenso é um oligonucleotídeo antissenso e as subunidades ligadas são nucleotídeos.

[00197] Em certas modalidades, os oligonucleotídeos antissenso podem ser encurtados ou truncados. Por exemplo, uma única subunidade pode ser excluída da extremidade 5' (5' truncamento), ou, alternativamente, a partir da extremidade 3' (3' truncamento). Um composto antissenso encurtado ou truncado direcionado a um ácido nucleico de CFB pode ter duas subunidades eliminadas da terminação 5' ou alternativamente pode ter duas subunidades eliminadas da terminação 3' do composto antissenso. Alternativamente, os nucleosídeos deletados podem ser dispersos por todo o composto antissenso, por exemplo, em um composto antissenso possuindo um nucleosídeo excluído da extremidade 5' e um nucleosídeo excluído da extremidade 3'.

[00198] Quando uma única subunidade adicional está presente em um composto antissenso alongado, a subunidade adicional pode estar localizada na extremidade 5' ou 3' do composto antissenso. Quando duas ou mais subunidades adicionais estão presentes, as subunidades adicionadas podem ser adjacentes uns aos outros, por exemplo, em um composto antissenso possuindo duas subunidades adicionadas à extremidade 5' (5 adição), ou em alternativa, a extremidade 3' (3' adição), do composto antissenso. Alternativamente, as subunidades podem ser adicionadas dispersas por todo o composto antissenso, por exemplo, em um composto antissenso possuindo uma subunidade adicionada à 5' extremidade e uma subunidade adicionada a 3' extremidade.

[00199] É possível aumentar ou diminuir o comprimento de um composto antissenso, tal como um oligonucleotídeo antissenso, e/ou apresentar bases incompatíveis sem eliminar a atividade. Por exemplo, em Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), uma série de oligonucleotídeos antissenso de 13 a 25 nucleobases de comprimento foi testada quanto à sua capacidade de induzir a clivagem de um RNA alvo em um modelo de injeção de oócito. Os oligonucleotídeos antissenso de 25 nucleobases de comprimento com 8 ou 11 bases de incompatibilidade perto das extremidades dos oligonucleotídeos antissenso foram capazes de direcionar a clivagem específica do mRNA alvo, ainda que em uma menor extensão do que os oligonucleotídeos antissenso que não continham nenhuma incompatibilidade. De forma similar, a clivagem específica alvo foi obtida usando 13 oligonucleotídeos antissenso de nucleobase, incluindo aqueles com 1 ou 3 incompatibilidades.

[00200] Gautschi et al. (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) demonstrou a capacidade do oligonucleotídeo com 100% de complementaridade com o mRNA de bcl-2 e 3 incompatibilidades com o mRNA de bcl-xL para reduzir a expressão de bcl-2 e bcl-xL in vitro e in vivo. Além disso, este oligonucleotídeo demonstrou atividade antitumor potente in vivo.

[00201] Maher and Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358.1988) testou uma série de oligonucleotídeos antissenso de 14 nucleobases em tandem e oligonucleotídeos antissenso de 28 e 42 nucleobases compostos da sequência de dois ou três dos oligonucleotídeos antissenso em tandem, respectivamente, quanto à sua capacidade de suspender a tradução de DHFR humana em um ensaio com reticulócitos de coelho. Cada um dos três oligonucleotídeos antissenso de 14 nucleobases sozinho foi capaz de inibir a tradução, embora a um nível mais baixo do que os oligonucleotídeos antissenso de 28 ou 42 nucleobases.

Determinados motivos e mecanismos do composto antissenso

[00202] Em determinadas modalidades, os compostos antissenso têm subunidades quimicamente modificadas dispostas em padrões, ou motivos, para conferir às propriedades dos compostos antissenso, como atividade inibitória intensificada, afinidade de ligação aumentada para um ácido nucleico alvo, ou resistência à degradação por nucleases in vivo.

[00203] Compostos antissenso quiméricos normalmente contêm pelo menos uma região modificada com a finalidade de conferir resistência aumentada à degradação da nuclease, absorção celular aumentada, afinidade de ligação aumentada para o ácido nucleico alvo, e/ou atividade inibitória aumentada. Uma segunda região de um composto antissenso quimérico pode conferir outra propriedade desejada, por exemplo, servir como um substrato para a RNase H da endonuclease celular, que cliva a fita do RNA de um RNA:DNA duplex.

[00204] A atividade antissenso pode resultar de qualquer mecanismo envolvendo a hibridização do composto antissenso (por exemplo, oligonucleotídeos) com um ácido nucleico alvo, em qoe a hibridização resulta, em última análise, em um efeito biológico. Em certas modalidades, a quantidade e/ou a atividade do ácido nucleico alvo é modulada. Em certas modalidades, a quantidade e/ou a atividade do ácido nucleico alvo é reduzida. Em certas modalidades, a hibridização do composto antissenso para o ácido nucleico alvo resulta, em última análise, em uma degradação do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, a hibridização do composto antissenso para o ácido nucleico não resulta na degradação do ácido nucleico alvo. Em algumas dessas modalidades, a presença do composto antissenso hibridizado com o ácido nucleico alvo (ocupação) resulta em uma modulação da atividade antissenso. Em certas modalidades, os compostos antissenso com um motivo ou padrão químico particular de modificações químicas são particularmente adequados para explorar um ou mais mecanismos. Em determinadas modalidades, os compostos antissenso funcionam através de mais de um mecanismo e/ou através de mecanismos que não foram elucidados. Por conseguinte, os compostos antissenso descritos aqui não são limitados por um mecanismo particular.

[00205] Os mecanismos antissenso incluem, sem limitação, antissenso mediado por RNase H; mecanismos de RNAi, que utilizam vias de RISC e incluem, sem limitação, mecanismos de siRNA, ssRNA e microRNA; e mecanismos baseados em ocupação. Certos compostos antissenso podem atuar através de mais de um mecanismo desses e/ou através de mecanismos adicionais.

Antissenso mediado por RNase H

[00206] Em determinadas modalidades, a atividade antissenso resulta, pelo menos em parte, da degradação do RNA alvo pela Rase H. A RNase H é uma endonuclease que cliva a fita de RNA de um duplex RNA:DNA. É conhecido na técnica que os compostos antissenso de fita única que são "similares ao DNA" eliciam atividade de RNase H nas células de mamíferos. Por conseguinte, os compostos antissenso compreendendo pelo menos uma porção dos nucleosídeos de DNA ou semelhantes a DNA podem ativar a RNAse H, resultando na clivagem do ácido nucleico alvo. Em determinadas modalidades, os compostos antissenso que utilizam RNAse H compreendem um ou mais nucleosídeos modificados. Em certas modalidades, esses compostos antissenso compreendem pelo menos um bloco de 1-8 nucleosídeos modificados. Em certas modalidades, os nucleosídeos modificados não sustentam a atividade da RNAse H. Em certas modalidades, tais compostos formas de realização, tais compostos antissenso são gapmers, conforme descrito aqui. Em certas modalidades, o intervalo do gapmer compreende nucleosídeos de DNA. Em certas modalidades, o intervalo do gapmer compreende nucleosídeos semelhantes a DNA. Em certas modalidades, o intervalo do gapmer compreende nucleosídeos de DNA e nucleosídeos semelhantes a DNA.

[00207] Determinados compostos antissenso com um motivo de gapmer são considerados compostos antissenso quiméricos. Em um gapmer uma região interna que tem uma pluralidade de nucleotídeos que suporta a clivagem de RNaseH está posicionada entre as regiões externas que têm uma pluralidade de nucleotídeos que são quimicamente diferentes dos nucleosídeos da região interna. No caso de um oligonucleotídeo antissenso que tem um motivo de gapmer, o segmento de lacuna (gap) geralmente serve como o substrato para a clivagem da endonuclease, enquanto os segmentos de asa compreendem nucleosídeos modificados. Em certas modalidades, as regiões de um gapmer são diferenciadas pelos tipos de porções de açúcar compreendendo cada região distinta. Os tipos de porções de açúcar que são usados para diferenciar as regiões de um gapmer podem em algumas modalidades incluir β-D-ribonucleosideos, β-D- desoxirribonucleosídeos, nucleosídeos modificados em 2' (tais nucleosídeos modificados em 2' podem incluir 2'-MOE e 2'-O-CH3, entre outros) e nucleosídeos modificados pelo açúcar bicíclico (tais nucleosídeos modificados pelo açúcar bicíclico podem incluir aqueles que têm uma etila restrita). Em certas modalidades, os nucleosídeos nas asas podem incluir diversas porções de açúcar modificado, incluindo, por exemplo, porções de açúcar bicíclico e 2'-MOE, como etil limitado ou LNA. Em determinadas modalidades, as asas podem incluir várias porções de açúcar modificado e não modificado. Em certas modalidades, as asas podem incluir várias combinações de nucleosídeos de 2'-MOE, porções de açúcar bicíclico, como nucleosídeos de etil limitado ou nucleosídeos de LNA, e 2'-desoxinucleosídeos.

[00208] Cada região distinta pode compreender porções de açúcar uniformes, variantes, ou porções de açúcar alternadas. O motivo de wing-gap-wing é frequentemente descrito como "X-Y-Z", onde "X" representa o comprimento de 5'-wing, "Y" representa o comprimento da gap, e "Z" representa o comprimento de 3'- wing. "X" e "Z" podem incluir porções de açúcar uniformes, variantes, ou alternadas. Em determinadas modalidades, "X" e "Y" podem incluir um ou mais 2'- desoxinucleosídeos. "Y" pode compreender 2'-desoxinucleosídeos. Como usado neste documento, um gapmer descrito como "X-Y-Z" tem uma configuração de modo que o gap esteja posicionado imediatamente adjacente a cada 5'- wing e 3'- wing. Desse modo, não há nenhuma intervenção de nucleotídeos entre 5'-asa e a lacuna, ou a lacuna e 3'- wing. Qualquer um dos compostos antissenso descritos neste documento pode ter um motivo de gapmer. Em determinadas modalidades, "X" e "Z" são iguais; em outras modalidades, eles são diferentes. Em determinadas modalidades, "Y" tem entre 8 e 15 nucleosídeos. X, Y ou Z podem ter 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 ou mais nucleosídeos.

[00209] Em certas modalidades, o composto antissenso direcionado a um ácido nucleico de CFB tem um motivo de gapmer em que o intervalo consiste em 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ou 16 nucleosídeos ligados.

[00210] Em certas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso tem um motivo de açúcar descrito pela Fórmula A, conforme segue: (J)m- (B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z

[00211] onde:

[00212] cada A é independentemente um nucleosídeo substituído em 2';

[00213] cada B é independentemente um nucleosídeo bicíclico;

[00214] cada J representa, independentemente, um nucleosídeo substituído em 2' ou um 2'-desoxinucleosídeo;

[00215] cada D é um 2'-desoxinucleosídeo;

[00216] m é 0-4; n é 0-2; p é 0-2; r é 0-2; t é 0-2; v é 0-2; w é 0-4; x é 0-2; y é 0-2; Z é 0-4; g é 6-14; contanto que:

[00217] pelo menos um dentre m, n e r tenha outro valor que não 0;

[00218] pelo menos um dentre w e y seja diferente de 0;

[00219] a soma de m, n, p, r, e t seja de 2 a 5; e

[00220] a soma de v, w, x, y e z é de 2 a 5.

Compostos de RNAi

[00221] Em certas modalidades, os compostos antissenso são compostos de RNA interferente (RNAi), que incluem compostos de RNA de fita supla (também referidos como RNA de interferência breve ou siRNA) e compostos de RNAi de fira simples (ou ssRNA). Esses compostos funcionam, pelo menos em parte, através da via de RISC para degradar e/ou sequestrar um ácido nucleico alvo (e, assim, incluir compostos de microRNA/mímicos de microRNA). Em certas modalidades, os compostos antissenso compreendem modificações que os tornam particularmente apropriados para tais mecanismos.

i. Compostos de ssRNA

[00222] Em certas modalidades, os compostos antissenso, incluindo aqueles particularmente apropriados para uso como compostos de RNAi de fita simples (ssRNA), compreendem uma terminação modificada 5'-terminal. Em algumas dessas modalidades, a terminação 5'-terminal compreende uma porção de fosfato modificado. Em certas modalidades, tal fosfato modificado é estabilizado (por exemplo, resistente à degradação/clivagem em comparação ao 5'- fosfato não modificado). Em certas modalidades, esses nucleosídeos 5'-terminais estabilizam a porção de 5'-fosforosa. Certos nucleosídeos 5'-terminais podem ser encontrados na técnica, por exemplo, no documento WO/2011/139702.

[00223] Em certas modalidades, o 5'-nucleosídeo de um composto de ssRNA tem a fórmula IIc:

onde:

[00224] Ti é uma porção de fósforo opcionalmente protegido;

[00225] T2 é um grupo de ligação de internucleosídeos que liga o composto de Fórmula IIc ao composto oligomérico;

[00226] A tem uma das fórmulas:

[00227] Qi e Q2 são cada um, independentemente, H, halogênio, Ci-C6 alquila, Ci-C6 alquila substituída, Ci-C6 alcóxi, Ci-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila, C 2-C6 alquinila substituída ou N (R3) (R4);

[00228] Q3 é O, S, N(R5) ou C(R6)(R7);

[00229] cada R3, R4 R5, R6 e R7 é, independentemente, H, Ci-C6 alquila, Ci-C6 alquila substituída ou Ci-C6 alcoxi;

[00230] M3 é O, S, NRi4, C(Ri5)(Ri6), C(Ri5)(Ri6)C(Ri7)(Ri8), C(Ri5)=C(Ri7), OC(Ri5)(Ri6) ou OC(Ri5)(Bx2);

[0023i] Ri4 é H, Ci-C6 alquila, Ci-C6 alquila substituída, Ci-C6 alcóxi, Ci-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2-C6 alcenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00232] R15, R16, R17 e R18 são cada um, independentemente, H, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00233] Bx1 é uma porção de base heterocíclica;

[00234] ou se Bx2 estiver presente, então Bx2 é um radical de base heterocíclica e Bx1 é H, halogênio, C1-C6 alquila, C 1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2- C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00235] J4, J5, J6 e J7 são cada um, independentemente, H, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00236] ou J4 forma uma ponte com um dentre J5 ou J7, em que a referida ponte compreende de 1 a 3 grupos birradicais ligados selecionados dentre O, S, NR19, C (R20) (R21), C (R20) = C (R21), C [= C (R20) (R21)] e C (= O) e outros dois dentre J5, J6 e J7 são cada um, independentemente, H, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C2- C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00237] cada R19, R20 e R21 é, independentemente, H, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, C2-C6 alquenila, C 2-C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila substituída ou C2-C6 alquinila;

[00238] G é H, OH, halogênio ou O- [C (R8) (R9)]n- [(C = O)m-X1]j-Z;

[00239] cada R8 e R9 é, independentemente, H, halogênio, C1-C6 alquila ou C1-C6 alquila substituída;

[00240] X1 é O, S ou N (E1);

[00241] Z é H, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquenila substituída, C2-C6 alquinila, C2-C6 alquinila substituída ou N (E2) (E3);

[00242] E1, E2 e E3 são, cada um, independentemente, H, C1-C6 alquila ou C1-C6 alquila substituída;

[00243] n é de 1 a cerca de 6;

[00244] m é 0 ou 1;

[00245] j é 0 ou 1;

[00246] cada grupo substituído compreende um ou mais grupos substituintes opcionalmente protegidos, selecionados independentemente a partir de halogênio, OJ1, N (J1) (J2), = NJ1, SJ1, N3, CN, OC (= X2) J1, OC (= X2)N (J1) (J2) e C (= X2) N (J1) (J2);

[00247] X2 é O, S ou NJ3;

[00248] cada J1, J2 e J3 é, independentemente, H ou C1-C6 alquila;

[00249] quando j é 1, então Z é diferente de halogéneo ou N (E2) (E3); e

[00250] onde o referido composto oligomérico compreender de 8 a 40 subunidades monoméricas e for hibridizável em pelo menos uma porção de um ácido nucleico alvo.

[00251] Em certas modalidades, M3 é O, CH = CH, OCH2 ou OC (H) (Bx2). Em certas modalidades, M3 é O.

[00252] Em certas modalidades, J4, J5, J6 e J7 são, cada um, H. Em certas modalidades, J4 forma uma ponte com um dentre J5 ou J7.

[00253] Em certas modalidades, A tem uma das fórmulas:

onde:

[00254] Q1 e Q2 são cada um, independentemente, H, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6alcoxila ou C1-C6 alcóxi substituído. Em certas modalidades, Q1 e Q2 são, cada um, H. Em certas modalidades, Q1 e Q2 são, cada um, independentemente, H ou halogênio. Em certas modalidades, Q1 e Q2 são H e o outro dentre Q1 e Q2 são F, CH3 ou OCH3.

[00255] Em certas modalidades, T1 tem a fórmula:

onde:

[00256] Ra e Rc são, cada um, independentemente, hidroxil protegido, tiol protegido, C1-C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcóxi substituído, amino protegido ou amino substituído; e

[00257] Rb é O ou S. Em certas modalidades, Rb é O e Ra e Rc são cada um, independentemente, OCH3, OCH2CH3 ou CH(CH3)2.

[00258] Em determinadas modalidades, G é halogênio OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, OCH2CH3, O (CH2)2F, OCH2CHF2, OCH2CF3, OCH2-CH = CH2, O (CH2)2- OCH3, O (CH2)2- SCH3, O (CH2)2- OCF3, O (CH2)3-N (R10) (R11) , O(CH2)2-ON(R10)(R11), O(CH2)2-O(CH2)2- N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R12)-(CH2)2- N(R10)(R11) ou O(CH2)2-N(R12)-C(=NR13)[N(R10)(R11)], onde R10, R11, R12 e R13, cada um, são, independentemente, H ou C1- C6 alquila. Em certas modalidades, G é halogênio, OCH3, OCF3, OCH2CH3, OCH2CF3, OCH2-CH=CH2, O(CH2)2-OCH3, O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2, OCH2C(=O)-N(H)CH3, OCH2C(=O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2 ou OCH2- N(H)-C(=NH)NH2. Em certas modalidades, G é F, OCH3 ou O (CH2)2- OCH3. Em certas modalidades, G é O(CH2)2-OCH3.

[00259] Em certas modalidades, o nucleosídeo 5'-terminal tem a Fórmula IIe:

[00260] Em determinadas modalidades, os compostos antissenso, incluindo aqueles particularmente apropriados para o ssRNA, compreendem um ou mais tipos de porções de açúcar modificadas e/ou porções de açúcar de ocorrência natural dispostas ao longo do oligonucleotídeo ou da sua região em um padrão definido ou motivo de modificação do açúcar. Esses motivos podem incluir qualquer uma das modificações de açúcar discutidas neste documento e/ou outras modificações de açúcar conhecidas.

[00261] Em certas modalidades, os oligonucleotídeos compreendem ou consistem em uma região com modificações de açúcar uniforme. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região compreende a mesma modificação de açúcar semelhante a RNA. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região é um nucleosídeo 2'- F. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região é um nucleosídeo 2'-OMe. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região é um nucleosídeo 2'-MOE. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região é um nucleosídeo cEt. Em certas modalidades, cada nucleosídeo da região é um nucleosídeo de LNA. Em certas modalidades, a região uniforme constitui todos ou essencialmente todos os oligonucleotídeos. Em certas modalidades, a região constitui todos os oligonucleotídeos, exceto os nucleosídeos terminais 1-4.

[00262] Em certas modalidades, os oligonucleotídeos compreendem uma ou mais regiões de modificações de açúcar alternadas, em que os nucleotídeos alternam entre os nucleotídeos com uma modificação de açúcar de um primeiro tipo e nucleotídeos com uma modificação de açúcar de um segundo tipo. Em certas modalidades, os nucleotídeos de ambos os tipos são nucleosídeos semelhantes a RNA. Em certas modalidades, os nucleosídeos alternados são selecionados a partir de: 2’-OMe, 2’-F, 2’-MOE, LNA e cEt. Em certas modalidades, as modificações alternadas são 2’-F e 2’- OMe. Essas regiões podem ser contíguas ou podem ser interrompidas por nucleosídeos modificados de maneira diferente ou por nucleosídeos conjugados.

[00263] Em certas modalidades, a região alternada das modificações alternadas consistem em um único nucleosídeo (isto é, o padrão é (AB)xAy, onde A é um nucleosídeo com uma modificação de açúcar de um primeiro tipo e B é um nucleosídeo com uma modificação de açúcar de um segundo tipo; x é 1-20 e y é 0 ou 1). Em certas modalidades, uma ou mais regiões alternadas em um motivo alternado incluem mais de um único nucleosídeo de um tipo. Por exemplo, , os oligonucleotídeos podem incluir uma ou mais regiões de qualquer um dos seguintes motivos de nucleosídeos:

[00264] AABBAA;

[00265] ABBABB;

[00266] AABAAB;

[00267] ABBABAABB;

[00268] ABABAA;

[00269] AABABAB;

[00270] ABABAA;

[00271] ABBAABBABABAA;

[00272] BABBAABBABABAA; ou

[00273] ABABBAABBABABAA;

[00274] em que A é um nucleosídeo de um primeiro tipo e B é um nucleosídeo de um segundo tipo. Em certas modalidades, A e B são, cada um, selecionados a partir de 2’-F, 2’-OMe, BNA e MOE.

[00275] Em certas modalidades, os oligonucleotídeos com esse motivo alternado compreendem ainda um nucleosídeo terminal 5' modificado, como aqueles da fórmula IIc ou IIe.

[00276] Em certas modalidades, os oligonucleotídeos compreendem uma região com um motivo 2-2-3. Essas regiões compreendem o seguinte motivo: -(A)2-(B)x-(A)2-(C)y-(A)3-

[00277] onde: A é um primeiro tipo de nucleosídeo modificado;

[00278] B e C, são nucleosídeos que são modificados de maneira diferente do que A, no entanto, B e C podem ter a mesma ou diferentes modificações;

[00279] x e y são de 1 a 15.

[00280] Em certas modalidades, A é um nucleotídeo modificado em 2'-OMe. Em certas modalidades, B e C são, ambos, nucleosídeos modificados em 2'-F. Em certas modalidades, A é um nucleosídeo modificado em 2'OMe e B e C são, ambos, nucleosídeos modificados em 2'-F.

[00281] Em certas modalidades, os oligonucleosídeos têm o seguinte motivo de açúcar: 5’- (Q)- (AB)xAy-(D)z onde:

[00282] Q é um nucleosídeo que compreende uma porção de fosfato estabilizada. Em certas modalidade, Q é um nucleosídeo tendo uma Fórmula IIc ou IIe;

[00283] A é um primeiro tipo de nucleosídeo modificado;

[00284] B é um segundo tipo de nucleosídeo modificado;

[00285] D é um nucleosídeo modificado compreendendo uma modificação diferente do nucleosídeo adjacente a ela. Assim, se y for 0, então D deve ser modificado de forma diferente de B e, se y for 1, então D deve ser modificado de forma diferente de A. Em certas modalidades, D diferente de A e B.

[00286] X é 5-15;

[00287] y é 0 ou 1;

[00288] Z é 0-4.

[00289] Em certas modalidades, os oligonucleosídeos têm o seguinte motivo de açúcar:

[00290] 5’- (Q)- (A)x-(D)z

[00291] onde:

[00292] Q é um nucleosídeo que compreende uma porção de fosfato estabilizada. Em certas modalidade, Q é um nucleosídeo tendo uma Fórmula IIc ou IIe;

[00293] A é um primeiro tipo de nucleosídeo modificado;

[00294] D é um nucleosídeo modificado que compreende uma modificação diferente de A.

[00295] X é 11-30;

[00296] Z é 0-4.

[00297] Em certas modalidades, A, B, C e D nos motivos acima são selecionados a partir de: 2’-OMe, 2’-F, 2’-MOE, LNA e cEt. Em certas modalidades, D representa nucleosídeos terminais. Em certas modalidades, tais nucleosídeos terminais não são concebidos para hibridizar para o ácido nucleico alvo (embora um ou mais possam hibridizar por acaso). Em certas modalidades, a nucleobase de cada nucleosídeo D é adenina, independentemente da identidade da nucleobase na posição correspondente do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, a nucleobase de cada nucleosídeo D é timina.

[00298] Em certas modalidades, os compostos antissenso, incluindo aqueles particularmente apropriados para uso como ssRNA, compreendem ligações de internucleosídeos modificadas juntamente com oligonucleotídeos ou uma região sua em um padrão definido ou um motivo de ligação de internucleosídeos modificados. Em determinadas modalidades, os oligonucleotídeos compreendem uma região com um motivo de ligação de internucleosídeo alternado. Em determinadas modalidades, os oligonucleotídeos compreendem uma região de ligações de internucleosídeo uniformemente modificadas. Em algumas dessas modalidades, o oligonucleotídeo compreende uma região que é uniformemente ligada por ligações de internucleosídeo de fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo é uniformemente ligado por ligações de internucleosídeos de fosforotioato. Em determinadas modalidades, cada ligação de internucleosídeo do oligonucleotídeo é selecionada dentre fosfodiéster e fosforotioato. Em determinadas modalidades, cada liagação de internucleosídeo do oligonucleotídeo é selecionada dentre fosfodiéster e fosforotioato e pelo menos uma ligação de internucleosídeo é fosforotioato.

[00299] Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos 6 ligações de internucleosídeo de fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos 8 ligações de internucleosídeo fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos 10 ligações de internucleosídeo de fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos um bloco de pelo menos 6 ligações consecutivas de internucleosídeos de fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos um bloco de, pelo menos, 8 ligações consecutivas de internucleosídeo fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos um bloco de, pelo menos, 10 ligações consecutivas de internucleosídeo fosforotioato. Em determinadas modalidades, o oligonucleotídeo compreende pelo menos um bloco de pelo menos 12 ligações consecutivas de internucleosídeos de fosforotioato. Nestas determinadas modalidades, pelo menos um destes blocos está localizado na extremidade 3' do oligonucleotídeo. Em determinadas modalidades, pelo menos um destes blocos está localizado em 3 nucleosídeos da extremidade 3' do oligonucleotídeo.

[00300] Os oligonucleotídeos com um de vários motivos de açúcar descritos aqui podem ter qualquer motivo de ligação. Por exemplo, osoligonucleotídeos, incluindo mas não se limitando aos descritos acima, podem ter um motivo de ligação selecionado a partir da tabela não limitativa abaixo:

ii.Compostos de siRNA

[00301] Em certas modalidades, os compostos antissenso são compostos de RNAi de fita dupla (siRNA). Nessas modalidades, uma ou ambas as fitas podem compreender qualquer motivo de modificação descrito acima para o ssRNA. Em certas modalidades, os compostos de ssRNA podem ser RNA não modificado. Em certas modalidades, os compostos de siRNA podem compreender nucleosídeos de RNA não modificado, mas ligações de internucleosídeos modificados.

[00302] Várias modalidades se relacionam a composições de fita dupla, onde cada fita compreende um motivo definido pelo local de um ou mais nucleosídeos modificados ou não modificados. Em certas modalidades, composições são fornecida compreendendo um primeiro e um segundo composto oligomérico que são completamente ou pelo menos parcialmente hibridizados de modo a formar uma região duplex e compreendendo ainda uma região que é complementar ao e hibridiza um alvo de ácido nucleico. É apropriado que essa composição compreende um primeiro composto oligomérico que seja uma fita antissenso com complementaridade total ou parcial a um alvo de ácido nucleico e um segundo composto oligomérico que seja uma fita senso com uma ou mais regiões de complementaridade a e que forme pelo menos uma região duplex com o primeiro composto oligomérico.

[00303] As composições de várias modalidades modulam a expressão do gene hibridizando a um alvo de ácido nucleico que resulta na perda de sua função normal. Em certas modalidades, a degradação do CFB alvo é facilitada por um complexo de RISC ativado que é formado com as composições da invenção.

[00304] Diversas modalidades são direcionadas a composições de fita dupla, onde uma das fitas é útila, por exemplo, influenciando o carregamento preferencial da fita oposta no complexo de RISC (ou clivagem). As composições são úteis para direcionar a moléculas de ácido nucleico selecionadas e para modular a expressão de um ou mais genes. Em algumas modalidades, as composições da presente invenção hibridizam para uma porção de um RNA alvo, resultando na perda da função normal do RNA alvo.

[00305] Certas modalidades são atraídas a composições de fita dupla, onde ambas as fitas compreendem um motivo de hemímero, um motivo completamente modificado, um motivo modificado posicionalmente ou um motivo alternado. Cada fita das composições da presente invenção pode ser modificada para preencher uma função particular, por exemplo, na via de siRNA. O uso de um motivo diferente em cada fita ou o mesmo motivo com diferentes modificações químicas em cada fita permite direcionar a fita antissenso para o complexo de RISC, ao mesmo tempo em que inibe a incorporação da fita senso. Neste modeli, cada fita pode ser modificada de maneira independente, de modo que seja potencializada para essa função particular. A fita antissenso pode ser modificada na terminação 5' para potencializar sua função em uma região do RISC, enquanto 3' pode ser modificado de maneira diferente, de modo a potencializar sua função em uma região diferente do RISC.

[00306] As moléculas de fita dupla de oligonucleotídeos podem ser uma molécula de polinucleotídeo de fita dupla que compreende regiões antissenso e senso auto-complementar, onde a região antissenso compreende a sequência de nucleotídeos que é complementar à sequência de nucleotídeos em uma molécula de ácido nucleico alvo ou uma porção sua e a região senso com uma sequência de nucleotídeos correspondente à sequência de ácido nucleico alvo ou uma porção sua. As moléculas de fita dupla de oligonucleotídeos podem ser montadas a partir de dois oligonucleótidos separados, em que uma cadeia é a cadeia senso e a outra é a cadeia antissenso, em que os antissensos e cadeias senses são auto-complementares (isto é, cada cadeia compreende uma sequência de nucleotídeos que é complementar a sequência de nucleotídeos na outra cadeia, tais como, onde a cadeia antissenso e cadeia senso formam um duplex ou estrutura de fita dupla, por exemplo em que a região da fita dupla é de cerca de 15 a cerca de 30, por exemplo, cerca de 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 pares de bases; a cadeia antissenso compreende sequência dos nucleotídeos que é complementar à sequência de nucleotídeos numa molécula do ácido nucleico alvo ou uma parte dele e da cadeia senso direta compreende a sequência de nucleotídeos correspondendo à sequência de ácido nucleico alvo ou uma sua porção (por exemplo, cerca de 15 a cerca de 25 ou mais nucleotídeos da molécula de fita dupla do oligonucleotídeo são complementares para o ácido nucleico alvo ou uma sua porção). Alternativamente, o oligonucleotídeo de fita dupla é montado a partir de um único oligonucleotídeo, onde as regiões de antissensos e senso auto-complementar do siRNA estão ligadas por meio de um ligante à base de ácido nucleico ou não à base ácido não nucleico.

[00307] O oligonucleotídeo de fita dupla pode ser um polinucleotídeo com um duplex, duplex assimétrico, estrutura em grampo (“hairpin”) ou uma estrutura secundária em grampo assimétrico, tendo regiões antissenso e senso auto-complementar, em que a região antissenso compreende uma sequência de nucleotídeos que é complementar a sequência de nucleotídeos em uma molécula do ácido nucleico alvo separado ou uma porção deste e a sequência de nucleotídeos possuindo região senso correspondendo à sequência do ácido nucleico alvo ou uma sua porção. Olinucleotídeos de fita dupla podem ser um polinucletídeo de cadeia única circular tendo duas ou mais estrutura em alça e uma haste compreendendo as regiões autocomplementares senso e antissenso, em que a região antissenso compreende uma sequência nucleotídica que é complementar à sequência nucleotídica numa molécula de ácido nucleico alvo ou uma porção desta e a região senso tendo uma sequência nucleotídica correspondente à sequência do ácido nucleico alvo ou uma porção desta, e em que o polinucleotídeo circular pode ser processado in vivo ou in vitro para gerar uma molécula de ácido nucleico siRNA ativa capaz de mediar o RNAi.

[00308] Em certas modalidades, o oligonucleotídeo de fita dupla compreende sequências ou regiões com senso e antissenso específicas, em que as regiões senso e antissenso são covalentemente ligados por moléculas ligantes nucleotídicas ou não nucleotídicas, como é conhecido na técnica, ou são alternadamente ligados não covalentemente por interações iônicas, ligações de hidrogênio, interações de van der Waals, interações hidrofóbicas, e/ou interações de empilhamento. Em certas modalidades, o oligonucleotídeo de fita dupla compreende a sequência de nucleotídeos que é complementar à sequência de nucleotídeos de um gene alvo. Em outra modalidade, o oligonucleotídeo de fita dupla interage com a sequência de um gene alvo de um modo que causa a inibição da expressão do gene alvo.

[00309] Tal como aqui utilizado, os oligonucleotídeos de fita dupla não necessitam de serem limitados a essas moléculas contendo apenas RNA, mas engloba ainda os nucleotídeos modificados quimicamente e não nucleotídeos. Em certas modalidades, os curtos interferentes das moléculas de ácido nucleico não possuem 2'-hidróxi (2'-OH) contendo os nucleotídeos. Em certas modalidades os curtos interferentes dos ácidos nucleicos opcionalmente não incluem quaisquer ribonucleotídeos (por exemplo, nucleotídeos tendo um grupo 2'-OH). Tais oligonucleotídeos de fita dupla que não requerem a presença de ribonucleotídeos no interior da molécula para suportar RNAi pode, contudo, ter um ligante ou ligante ligado ou outros grupos ligados ou grupos associados, porções, ou cadeias contendo um ou mais nucleotídeos com grupos 2'-OH. Opcionalmente, os oligonucleotídeos de fita dupla podem compreender ribonucleotídeos a cerca de 5, 10, 20, 30, 40, ou 50% das posições de nucleotídeos. Tal como aqui utilizado, o termo siRNA pretende ser equivalente a outros termos utilizados para descrever as moléculas do ácido nucleico que são capazes de mediar a sequência de RNAi específico, por exemplo RNA de interferência curta (siRNA), RNA de fita dupla (dsRNA), micro- RNA (miRNA), RNA de grampo curto (shRNA), oligonucleotídeo de interferência curta, ácido nucleico de interferência curta, oligonucleotídeo modificado de interferência curta, siRNA quimicamente modificado, gene de pós-transcrição do RNA de silenciamento (ptgsRNA), e outros. Além disso, tal como aqui utilizado, o termo RNAi pretende ser equivalente a outros termos utilizados para descrever a sequência de RNA de interferência específica, tal como o silenciamento pós-transcricional de genes, a inibição de translação, ou epigenética. Por exemplo, os oligonucleotídeos de fita dupla podem ser utilizados para silenciar genes epigeneticamente tanto ao nível pós-transcricional e o nível pré-transcricional. Num exemplo não limitativo, regulação epigenética da expressão do gene por moléculas de siRNA da invenção pode resultar a partir da modificação siRNA mediada da estrutura da cromatina ou padrão de metilação para alterar a expressão de genes (ver, por exemplo,Verdel et al., 2004, Science, 303, 672-676; Pal-Bhadra et al., 2004, Science, 303, 669- 672; Allshire, 2002, Science, 297, 1818-1819; Volpe et al., 2002, Science, 297, 1833-1837; Jenuwein, 2002, Science, 297, 2215-2218; and Hall et al., 2002, Science, 297, 2232-2237).

[00310] É contemplado que os compostos e as composições de diversas modalidades aqui proporcionadas podem alvejar CFB por um silenciamento de genes mediado por dsRNA ou mecanismo de RNAi, incluindo, por exemplo, "grampo" ou alça pedunculada são moléculas de fita dupla de RNA efetoras em que uma única cadeia de RNA com sequências autocomplementares é capaz de assumir uma conformação de fita dupla, ou moléculas efetoras dsRNA duplex compreendendo duas cadeias separadas de RNA. Em várias modalidades, o dsRNA consiste inteiramente de ribonucleotídeos ou é constituído por uma mistura de ribonucleotídeos e desoxirribonucleotídeos, tais como as de RNA/DNA híbridos descritos, por exemplo, pelo documento WO 00/63364, depositado em abril 19, 2000, ou US Ser. No. 60/130.377, depositado em Abril 21, 1999. A molécula efetora de dsRNA ou dsRNA pode ser uma única molécula com uma região de autocomplementaridade tal que nucleotídeos de um segmento da molécula de pares de bases com nucleotídeos num outro segmento da molécula. Em várias modalidades, um dsRNA que consiste de uma única molécula consiste inteiramente de ribonucleotídeos ou inclui uma região de ribonucleotídeos que é complementar a uma região de desoxirribonucleotídeos. Alternativamente, o dsRNA pode incluir duas fitas diferentes que têm uma região de complementaridade uma com a outra.

[00311] Em várias modalidades, ambas as cadeias são inteiramente constituídas por ribonucleotídeos, uma cadeia consiste inteiramente de ribonucleotídeos e uma cadeia de desoxirribonucleotídeos consiste inteiramente, ou uma ou ambas as cadeias contêm uma mistura de ribonucleotídeos e desoxirribonucleotídeos. Em certas modalidades, as regiões de complementaridade são, pelo menos, 70, 80, 90, 95, 98, ou 100% complementares um ao outro e a uma sequência do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, a região do dsRNA que está presente numa conformação de fita dupla inclui, pelo menos, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 50, 75,100, 200, 500, 1000, 2000 ou 5000 nucleotídeos ou inclui todos os nucleotídeos de um cDNA ou sequência de ácido nucleico alvo a ser representado outro no dsRNA. Em algumas modalidades, o dsRNA não contém quaisquer regiões de fita simples, tais como as extremidades de fita simples, ou o dsRNA é um grampo. Em outras modalidades, o dsRNA tem uma ou mais regiões ou saliências de cadeia única. Em certas modalidades, o RNA/DNA híbridos incluem uma cadeia de DNA ou região que é uma cadeia ou região antissenso (por exemplo, tem, pelo menos, 70, 80, 90, 95, 98, ou 100% de complementaridade de um ácido nucleico alvo) e uma cadeia ou região RNA que é uma cadeia de sentido ou região (por exemplo, tem, pelo menos, 70, 80, 90, 95, 98, ou 100% de identidade com um ácido nucleico alvo), e vice-versa.

[00312] Em várias modalidades, o RNA/DNA híbrido é feito in vitro utilizando métodos sintéticos químicos ou enzimáticos, tais como os aqui descritos ou os descritos em WO 00/63364, depositado em 19 de abril de 2000, ou US Ser. No. 60/130.377, depositado em 21 de abril de 1999. Em outras modalidades, uma cadeia de DNA sintetizada in vitro é complexada com uma cadeia de RNA feito in vivo ou in vitro antes, depois, ou em simultâneo com a transformação da cadeia de DNA na célula. Em ainda outras modalidades, o dsRNA é um único ácido nucleico circular contendo uma região antissenso ou senso, ou o dsRNA inclui um ácido circular nucleico e quer um segundo ácido nucleico circular ou um ácido nucleico linear (ver, por exemplo, o documento WO 00/63364, depositado em 19 abril de 2000, ou US Ser. No. 60/130.377, depositado em 21 de abril de 1999.) Ácidos nucleicos exemplares incluem estruturas circulares lariats em que o grupo fosforil 5' livre de um nucleotídeo se torna ligado à posição do grupo hidroxil 2' de outro nucleotídeo em forma de loop de volta.

[00313] Em outras modalidades, o dsRNA inclui um ou mais nucleotídeos modificados na qual a posição 2' do açúcar contém um átomo de halogênio (tal como um grupo flúor) ou contém um grupo alcóxi (tal como um grupo metoxi), o que aumenta a meia-vida do dsRNA in vivo ou in vitro em comparação com o dsRNA correspondente no qual a posição correspondente 2' contém um átomo de hidrogênio ou um grupo hidroxila. Em ainda outras modalidades, o dsRNA inclui uma ou mais ligações entre outros de uma ligação fosfodiéster de ocorrência natural de nucleotídeos adjacentes. Exemplos de tais ligações incluem ligações fosforamida, fosforotioato e fosforoditioato. O dsRNA pode também ser moléculas de ácido nucleico quimicamente modificados, como ensinado na Pat. U.S. No. 6,673,661. Em outras modalidades, o dsRNA contém uma ou duas cadeias tampadas, como descrito, por exemplo, documento WO 00/63364, depositado em 19 de abril de 2000, ou US Ser. No. 60/130.377, depositado em 21 de abril de 1999.

[00314] Em outras modalidades, o dsRNA pode ser qualquer uma das moléculas de, pelo menos, parcialmente de dsRNA em WO 00/63364 divulgados, bem como qualquer uma das moléculas de dsRNA descritos no Pedido Provisório 60/399,998; e Pedido Provisório US 60/419.532, e documento PCT/US2003/033466, cujo ensinamento é aqui incorporado por referência. Qualquer um dos dsRNA podem ser expressos in vitro ou in vivo utilizando os métodos aqui descritos ou métodos padrão, tais como os descritos em WO 00/63364.

Ocupação

[00315] Em certas modalidades, os compostos antissensos não são esperados para resultar na clivagem ou o ácido nucleico alvo através de RNase H ou para resultar na clivagem ou sequestro através da via RISC. Em certas modalidades, a atividade antissenso pode resultar a ocupação, em que a presença do composto antissenso hibridizado interrompe a atividade do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, o composto antissenso pode ser modificado de modo uniforme ou podem compreender uma mistura de modificações e/ou nucleosídeos modificados e não modificados.

Ácidos Nucleicos Alvo, Regiões alvo e Sequências Nucleotídicas

[00316] As sequências de nucleotídeos que codificam o fator B do complemento (CFB) incluem, sem limitação, o seguinte: No de acesso GENBANK NM_001710.5 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 1), No. de Acesso GENBANK NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000-31861000 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 2), No de Acesso GENBANK NW_001116486.1 truncado de nucleotídeos 536000 para 545000 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 3), No de Acesso GENBANK: XM_001113553.2 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 4), ou No. de acesso GENBANK NM_008198.2 (aqui incorporado como SEQ ID NO: 5).

Hibridização

[00317] Em algumas modalidades, a hibridização ocorre entre um composto antissenso divulgado neste documento e um ácido nucleico de CFB. O mecanismo mais comum de hibridização envolve a ligação de hidrogênio (por exemplo, ligação de hidrogênio de Watson-Crick, de Hoogsteen ou de Hoogsteen invertida) entre as nucleobases complementares das moléculas de ácido nucleico.

[00318] A hibridização pode ocorrer sob condições variáveis. As condições rigorosas são dependentes da sequência e são determinadas pela natureza e composição das moléculas de ácido nucleico a serem hibridizadas.

[00319] Os métodos para determinar se uma sequência é especificamente hibridizável para um ácido nucleico alvo são bem conhecidos na técnica. Em determinadas modalidades, os compostos antissenso fornecidos neste documento são especificamente hibridizáveis com um ácido nucleico de CFB.

Complementaridade

[00320] Um composto antissenso e um ácido nucleico alvo são complementares uns aos outros quando um número suficiente de nucleobases do composto antissenso pode fazer uma ligação de hidrogênio com as nucleobases correspondentes do ácido nucleico alvo, de modo que ocorra um efeito desejado (por exemplo, inibição antissenso de um ácido nucleico alvo, tal como um ácido nucleico de CFB).

[00321] Nucleobases não complementares entre um composto antissenso e um ácido nucleico de CFB podem ser toleradas desde que o composto antissenso permaneça capaz de hibridizar especificamente para um ácido nucleico alvo. Além disso, um composto antissenso pode hibridizar em um ou mais segmentos de ácido nucleico de CFB de modo que os segmentos adjacentes ou intermediários não estejam envolvidos no evento de hibridização (por exemplo, uma estrutura de loop, incompatibilidade ou estrutura de grampo).

[00322] Em determinadas modalidades, os compostos antissenso fornecidos neste documento, ou uma porção especificada dos mesmos, são, são pelo menos, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% complementares a um ácido nucleico de CFB, uma região alvo, segmento alvo, ou porção especificada dos mesmos. A complementaridade percentual de um composto antissenso com um ácido nucleico alvo pode ser determinada usando os métodos de rotina.

[00323] Por exemplo, um composto antissenso, no qual 18 de 20 nucleobases do composto antissenso são complementares para uma região alvo e, portanto, se hibridizaria especificamente, representaria 90 por cento de complementaridade. Neste exemplo, as nucleobases não complementares restantes podem ser agrupadas ou intercaladas com nucleobases complementares e não precisam ser contíguas umas às outras ou às nucleobases complementares. Como tal, um composto antissenso o qual tem 18 nucleobases de comprimento, com quatro nucleobases não complementares que são flanqueadas por duas regiões de complementaridade completa com o ácido nucleico alvo teria 77,8% de complementaridade geral com o ácido nucleico alvo e, assim, estaria dentro do escopo da presente invenção. A complementaridade percentual de um composto antissenso com uma região de um ácido nucleico alvo pode ser determinada rotineiramente, usando os programas BLAST (ferramentas de busca de alinhamento local básico) e os programas PowerBLAST conhecidos na técnica (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang e Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). A homologia percentual, a identidade de sequência ou a complementaridade podem ser determinadas, por exemplo, pelo programa Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), usando as configurações padrão, que usa o algoritmo de Smith e Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489).

[00324] Em certas modalidades, os compostos antissenso aqui fornecidos, ou porções dos mesmos especificado, são completamente complementares (isto é. 100% complementares) a um ácido nucleico alvo, ou porção especificada do mesmo. Por exemplo, um composto antissenso pode ser totalmente complementar a um ácido nucleico de CFB, ou uma região alvo, ou a um segmento alvo ou a uma sequência alvo deste. Conforme usado neste documento, "totalmente complementar" significa que cada nucleobase de um composto antissenso é capaz de parear a base precisamente com as nucleobases correspondentes de um ácido nucleico alvo. Por exemplo, um composto antissenso de 20 nucleobases é totalmente complementar a uma sequência alvo que tem 400 nucleobases de comprimento, desde que haja uma porção correspondente de 20 nucleobases correspondente do ácido nucleico alvo que seja totalmente complementar ao composto antissenso. Totalmente complementar também pode ser usado em referência a uma porção especificada do primeiro e/ou do segundo ácido nucleico. Por exemplo, uma porção de 20 nucleobases de um composto antissenso de 30 nucleobases pode ser "totalmente complementar" a uma sequência alvo que tem 400 nucleobases de comprimento. A porção de 20 nucleobases do oligonucleotídeo de 30 nucleobases é totalmente complementar à sequência alvo, se a sequência alvo tiver uma porção correspondente de 20 nucleobases, em que cada nucleobase é complementar à porção de 20 nucleobases do composto antissenso. Ao mesmo tempo, o composto antissenso de 30 nucleobases inteiro pode ou não ser totalmente complementar à sequência alvo, dependendo de se as 10 nucleobases restantes do composto antissenso também forem complementares à sequência alvo.

[00325] A localização de uma nucleobase não complementar podem estar na extremidade 5' ou na extremidade 3' do composto antissenso. Alternativamente, a nucleobase ou nucleobases não complementar pode estar numa posição interna do composto antissenso. Quando duas ou mais nucleobases não complementares estão presentes, elas podem ser contíguas (isto é, ligada) ou não contíguas. Em uma modalidade, uma nucleobase não complementar está localizada no segmento wing de um oligonucleotídeo antissenso de gapmer.

[00326] Em certas modalidades, os compostos antissenso que têm, ou têm até 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 nucleobases de comprimento compreendem não mais que 4, não mais que 3, não mais que 2 ou não mais que 1 nucleobase(s) não complementar(es) em relação a um ácido nucleico alvo, como um ácido nucleico de CFB ou sua porção especificada.

[00327] Em certas modalidades, os compostos antissenso que têm, ou têm até 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 nucleobases de comprimento compreendem não mais do que 6, não mais do que 5, não mais do que 4, não mais do que 3, não mais do que 2, ou não mais do que 1 nucleobase(s) não complementar(es) em relação a um ácido nucleico alvo, tal como um ácido nucleico de CFB, ou porção especificada do mesmo.

[00328] Os compostos antissenso fornecidos também incluem aqueles que são complementares a uma porção de um ácido nucleico alvo. Conforme usado neste documento, "porção" se refere a um número definido de nucleobases contíguas (ou seja, ligadas) dentro de uma região ou segmento de um ácido nucleico alvo. Uma "porção" também pode se referir a um número definido de nucleobases contíguas de um composto antissenso. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 8 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 9 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 10 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 11 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 12 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 13 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 14 nucleobases de um segmento alvo. Em certas modalidades, os compostos antissenso são complementares a pelo menos uma porção de 15 nucleobases de um segmento alvo. Também são contemplados os compostos antissenso que são complementares a pelo menos uma porção de 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, ou mais nucleobases de um segmento alvo, ou uma faixa definida por quaisquer dois desses valores.

Identidade

[00329] Os compostos antissenso fornecidos neste documento também podem ter uma identidade percentual definida para uma sequência nucleotídica particular, SEQ ID NO, ou composto representado por um número de Isis específico, ou porção dele. Conforme usado neste documento, um composto antissenso é idêntico à sequência divulgada neste documento se tiver a mesma capacidade de pareamento de nucleobase. Por exemplo, um RNA que contém uracila no lugar de timidina em uma sequência de DNA divulgada seria considerado idêntico à sequência de DNA, uma vez que ambos, uracila e timidina, pareiam com a adenina. Versões encurtadas e alongadas dos compostos antissenso descritos neste documento, bem como compostos tendo bases não idênticas em relação aos compostos antissenso fornecidos neste documento, também são contempladas. As bases não idênticas podem ser adjacentes umas às outras ou dispersas por todo o composto antissenso. A identidade percentual de um composto antissenso é calculada de acordo com o número de bases que têm pareamento de bases idêntico em relação à sequência a qual está sendo comparado.

[00330] Em certas modalidades, os compostos antissenso, ou porções dos mesmos, ou são pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idênticos a um ou mais dos compostos antissenso ou SEQ ID NOs, ou uma porção dos mesmos, divulgados neste documento.

[00331] Em certas modalidades, uma porção do composto antissenso é comparada com uma porção de igual comprimento do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, uma porção de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 nucleobases é comparada a uma porção de comprimento igual do ácido nucleico alvo.

[00332] Em certas modalidades, uma porção do oligonucleotídeo antissenso é comparada a porção de comprimento igual do ácido nucleico alvo. Em certas modalidades, uma porção de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 nucleobases é comparada a uma porção de comprimento igual do ácido nucleico alvo.

Modificações

[00333] Um nucleosídeo é uma combinação de base-açúcar. A porção de nucleobase (também conhecida como base) do nucleosídeo é normalmente uma porção de base heterocíclica. Os nucleotídeos são nucleosídeos que incluem adicionalmente um grupo fosfato covalentemente ligado à porção de açúcar do nucleosídeo. Para os nucleosídeos que incluem um açúcar de pentofuranosila, o grupo fosfato pode ser ligado à porção de hidroxila em 2', 3' ou 5' do açúcar. Os oligonucleotídeos são formados através da ligação covalente dos nucleosídeos adjacentes um ao outro, para formar um oligonucleotídeo polimérico linear. Dentro da estrutura do oligonucleotídeo, os grupos fosfato são comumente referidos como formadores das ligações internucleosídeos do oligonucleotídeo.

[00334] As modificações dos compostos antissenso englobam substituições ou mudanças das ligações internucleosídeos, porções de açúcar, ou nucleobases. Os compostos antissenso modificados são frequentemente preferidos sobre as formas nativas devido a propriedades desejáveis, tais como, por exemplo, maior absorção celular, maior afinidade para o ácido nucleico alvo, maior estabilidade na presença de nucleases, ou maior atividade inibitória.

[00335] Os nucleosídeos quimicamente modificados também podem ser empregados para aumentar a afinidade de ligação de um oligonucleotídeo anisense encurtado ou truncado a seu ácido nucleico alvo. Consequentemente, resultados comparáveis podem ser frequentemente obtidos com compostos antissenso menores que possuem esses nucleosídeos quimicamente modificados.

Ligações Internucleosídeos Modificadas

[00336] A ligação internucleosídeos de ocorrência natural de RNA e DNA é uma ligação de fosfodiéster 3' para 5'. Os compostos antissenso que têm uma ou mais ligações internucleosídeos modificadas, ou seja, de ocorrência não natural, são frequentemente selecionados sobre os compostos antissenso que têm ligações internucleosídeos de ocorrência natural, devido às propriedades desejáveis, tais como, por exemplo, maior absorção celular, maior afinidade para os ácidos nucleicos alvos, e maior estabilidade na presença de nucleases.

[00337] Os oligonucleotídeos tendo ligações internucleosídeos modificadas incluem ligações internucleosídeos que mantêm um átomo de fósforo, bem como as ligações internucleosídeos que não têm um átomo de fósforo. As ligações internucleosídeos representativas contendo fósforo incluem, mas não estão limitadas a, fosfodiésteres, fosfotriésteres, metilfosfonatos, fosforamidato, e fosforotioatos. Os métodos de preparação das ligações contendo fósforo e não contendo fósforo são bem conhecidos.

[00338] Em certas modalidades, os compostos antissenso direcionados para um ácido nucleico de CFB compreendem uma ou mais ligações internucleosídeos modificadas. Em certas modalidades, as ligações internucleosídeos modificadas são ligações de fosforotioato. Em certas modalidades, cada ligação internucleosídeos de um composto antissenso é uma ligação internucleosídeos de fosforotioato.

Porções de Açúcar Modificadas

[00339] Os compostos antissenso podem opcionalmente conter um ou mais nucleosídeos, em que o grupo de açúcar foi modificado. Esses nucleosídeos de açúcar modificado podem conferir maior estabilidade à nuclease, maior afinidade de ligação, ou alguma outra propriedade biológica benéfica para os compostos antissenso. Em certas modalidades, os nucleosídeos compreendem porções de anel de ribofuranose quimicamente modificado. Exemplos de anéis de ribofuranose quimicamente modificados incluem, sem limitação, a adição de grupos substituintes (incluindo grupos substituintes em 5' e 2', ligações em ponte de átomos de anéis não geminais para formar ácidos nucleicos bicíclicos (BNA), a substituição do átomo de oxigênio do anel de ribosila por S, N(R), ou C(R1)(R2)(R, R1e R2 são cada um independentemente H, C1-C12 alquila ou um grupo protetor) e suas combinações. Exemplos de açúcares quimicamente modificados incluem, nucleosídeo 2'-F-5'-metila substituída (vide, Pedido Internacional PCT WO 2008/101157, publicado em 21/08/08 para outros nucleosídeos 5',2'-bis substituídos divulgados) ou substituição do átomo de oxigênio do anel ribosila por S com uma substituição adicional na posição 2' (vide, Pedido de Patente U.S. publicado US2005-0130923, publicado em 16 de junho de 2005), ou alternativamente, substituição 5' de um BNA (vide, Pedido Internacional PCT WO 2007/134181, publicado em 22/11/07, em que o LNA é substituído, por exemplo, por um grupo 5'-metila ou 5'-vinil).

[00340] Os exemplos de nucleosídeos que têm porções de açúcar modificadas incluem, sem limitação, nucleosídeos que compreendem 5'- vinila, 5'-metil(R ou S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2’-OCH2CH3, 2’-OCH2CH2F e grupos substituintes de 2'-O(CH2)2OCH3. O substituinte na posição 2' pode também ser selecionado a partir de alila, amino, azido, tio, O-alila, alquila de O-C1-C10, OCF3, OCH2F, O (CH2)2SCH3, O (CH2)2-ON (Rm) (Rn), O-CH2-C (= O) -N (Rm) (Rn), E O-CH2-C (= O) -N (R1) - (CH2)2-N (Rm) (Rn), em que cada Rl, Rm e Rn é, independentemente, alquila de H ou C1-C10 substituído ou não substituído.

[00341] Conforme usado neste documento, os "nucleosídeos bicíclicos" se referem aos nucleosídeos modificados que compreendem uma porção de açúcar bicíclico. Exemplos de nucleosídeos bicíclicos incluem, sem limitação, os nucleosídeos que compreendem uma ponte entre os átomos 4' e 2' do anel de ribosila. Em certas modalidades, os compostos antissenso fornecidos neste documento incluem um ou mais nucleosídeos bicíclicos compreendendo uma ponte em 4' para 2'. Exemplos desses nucleosídeos bicíclicos em ponte 4' para 2' incluem, mas não estão limitados a, um das fórmulas: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'- (CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2'(também referido como etil restrita ou cEt) e 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (e respectivos análogos ver Patente U.S. 7.399.845, emitido em 15 de julho de 2008); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (e respectivos análogos ver Pedido Internacional publicado WO/2009/006478, publicado em 8 de janeiro de 2009); 4'-CH2- N(OCH3)-2' (e análogos respectivos ver Pedido Internacional publicado WO/2008/150729, publicado a 11 de dezembro de 2008); 4'- CH2-O-N(CH3)-2' (ver Pedido de Patente Publicado US2004-0171570, publicado a 2 de setembro de 2004); 4'-CH2-N(R)-O-2', onde R é H, C1- C12alquila ou grupo de proteção (veja Patente U.S. 7.427.672, emitido em 23 de setembro de 2008); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (see Chattopadhyayaet al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); and 4'-CH2- C(=CH2)-2' (e seus análogos ver Pedido Internacional PCT WO 2008/154401, publicado em 8 de dezembro de 2008).

[00342] Relatórios adicionais relacionados aos nucleosídeos bicíclicos podem também ser encontrados na literatura publicada (vide, por exemplo: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558- 561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; and Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; Patentes U.S. Nos. 6.268.490; 6.525.191; 6.670.461; 6.770.748; 6.794.499; 7.034.133; 7.053.207; 7.399.845; 7.547.684; e 7.696.345; Publicações de Patente U.S. US2008-0039618; US2009-0012281; Patentes U.S. Nos. de Série. 60/989.574; 61/026.995; 61/026.998; 61/056.564; 61/086.231; 61/097.787; e 61/099.844; Pedidos Internacionais PCT Publicados WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; e WO 2009/006478. Cada um dos nucleosídeos bicíclicos anteriores pode ser preparado tendo uma ou mais configurações de açúcar estereoquímico, incluindo, por exemplo, α-L-ribofuranose e β-D-ribofuranose (vide pedido internacional PCT PCT/DK98/00393, publicado em 25 de Março de 1999 como WO 99/14226).

[00343] Em certas modalidades, porções de açúcar bicíclicos de nucleosídeos BNA incluem, mas não estão limitados aos compostos possuindo pelo menos uma ponte entre o 4' e da posição 2' da porção de açúcar pentofuranosila em que essas pontes compreende independentemente 1 ou de 2 a 4 ligados grupos independentemente selecionados a partir de -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, - C(=O)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, e-N(Ra)-; onde:

[00344] x é 0, 1 ou 2;

[00345] n é 1, 2, 3 ou 4;

[00346] cada Ra e Rb são, de forma independente, H, um protegendo o grupo hidroxila, alquila de C1- C12, alquila substituída de C1- C12, alquenila de C2- C12, alquenila substituída de C2- C12, alquinila de C2- C12, alquinila substituída de C2- C12, arila de C5- C20, arila substituída de C5- C20, radical heteroarila, radical heterociclo substituído, heteroarila, heteroarila substituída, radical alicíclico substituído de C5- C7 , C5- C7 , halogênio, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), acila substituída, CN, sulfonil (S(=O)2-J1) ou sulfoxil (S(=O)-J1); e

[00347] cada J1 e J2 é, independentemente, alquila de H, C1-C12 , alquila substituída de C1-C12, alquenila de C2-C12, alquenila substituída de C2-C12, alquinila de C2-C12, aalquinila substituída de C2-C12, arila de C5-C20, arila substituída de C5-C20, aquila de (C (= O) -H), aquila substituída, um radical heterocíclico, um radical heterociclo substituído, aminoalquila de C1-C12, aminoalquila substituída de C1-C12 ou um grupo protetor.

[00348] Em certas modalidades, a ponte de uma porção de açúcar é bicíclico -[C (Ra) (Rb)]n-, -[C (Ra) (Rb)]n-O-, -C (RaRb) -N (R) -O- ou -C (RaRb) -O-N (R) -. Em certas modalidades, a ponte é 4'-CH2-2 ', 4' - (CH2)2-2 ', 4' - (CH2)3-2 ', 4'-CH2-O-2 ', 4' - (CH2)2-O-2 ', 4'-CH2-O-N (R) -2 'e 4'-CH2-N (R) -O-2' em que cada um R- é, independentemente, H, um grupo protetor ou alquila de C1-C12.

[00349] Em certas modalidades, os nucleosídeos bicíclicos são definidos ainda pela configuração isomérica. Por exemplo, um nucleosídeo compreendendo uma ponte de 4’-2’ metileno-óxi, pode estar na configuração α-L ou na configuração β-D. Anteriormente, o BNA de a-L-metileno-óxi (4'-CH2-O-2‘) foram incorporados aos oligonucleotídeos antissenso que mostraram atividade antissenso (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).

[00350] Em certas modalidades, nucleosídeos bicíclicos incluem, mas não estão limitados a, (A) a-L-metileno-óxi (4'-CH2-O-2 ') BNA, (B) D-e-metileno-óxi (4'-CH2-O-2 ') BNA, (C) etileno-óxi (4' - (CH2>O-2 ') BNA, (D) amino-óxi (4'-CH2-O-N (R) -2 ') BNA, (E) oxiamino (4'-CH2-N (R) -O-2 ') BNA, e (F) metil (metileno-oxi) (4'-CH (CH3) -O-2 ') BNA, (G) metileno-tio (4'-CH2-S-2 ') BNA, (H) metileno-amino (4'-CH2-N (R) -2 ') BNA, (I) carbocíclico de metil (4'-CH2-CH (CH3) -2 ') BNA, (J) carbocíclico propileno (4' - (CH2)3-2 ') BNA e (K) vinil BNA como representado abaixo:

em que Bx é a porção base e o símbolo R representa, independentemente, H, um grupo protetor, alquila de C1-C12 ou alcóxi de C1-C12.

[00351] Em certas modalidades, nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula I:

onde:

[00352] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00353] -Qa-Qb-Qc- é -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O- N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- ou -N(Rc)-O-CH2;

[00354] Rc é C1-C12 alquila ou um grupo protetor de amino; e

[00355] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00356] Em certas modalidades, nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula II:

onde:

[00357] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00358] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00359] Za é alquila de C1-C6 , alquenila de C2-C6 , alquinila de C2- C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila substituída de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 , aquila, aquila substituída, amida substituída, tiol ou tio substituído.

[00360] Numa modalidade, cada um dos grupos substituídos é, independentemente, mono ou poli substituído com grupos substituintes independentemente selecionados a partir de halogênio, oxo, hidroxila, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC (= X) Jc, E NJeC (= X) NJcJd, em que cada símbolo Jc, Jd e Je é, independentemente, alquila de H, C1-C6 , ou alquila substituída de C1-C6 e X é O ou NJc.

[00361] Em certas modalidades, os nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula III:

onde:

[00362] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00363] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00364] Zb é alquila de C1-C6 , alquenila de C2-C6 , alquinila de C2- C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila substituída de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 ou aquila substituída (C (= O) -).

[00365] Em certas modalidades, os nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula IV:

[00366] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00367] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00368] Rd é alquila de C1-C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila de C2-C6, alquenila substituída de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 ou alquinila de C2-C6 ;

[00369] cada qa, qb, qc e qd é, independentemente, H, halogênio, alquila de C1-C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila de C2-C6 , alquenila substituída de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 ou alquila de C2-C6 , alcoxila de C1-C6 , alcoxila substituída de C1-C6 , aquila, aquila substituída, aminoalquila substituída de C1-C6 ou aminoalquila de C1-C6 ;

[00370] Em certas modalidades, os nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula V:

onde:

[00371] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00372] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00373] qa, qb, qe e qf são cada um, independentemente, hidrogênio, halogênio, alquila C1-C12, alquila substituída C1-C12, alquenila C2-C12, alquenila substituída C2-C12, alquinila C2-C12, alquinila substituída C2- C12, alcóxi C1-C12, alcóxi substituído C1-C12, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(= O)OJj, C (= O) NJjJk, C (= O) Jj, O-C (= O)NJjJk, N (H) C (= NH) NJjJk, N (H) C (= O)NJjJkou N (H) C (= S) NJjJk;

[00374] ou qe e qf em conjunto são = C(Qg)(qh);

[00375] qg e qh são cada um, independentemente, alquila de H, halogênio, C1-C12 ou alquila substituída de C1-C12.

[00376] A síntese e a preparação de monômeros de adenina, citosina, guanina, 5-metil-citosina, timina e uracila de BNA de metileno- óxi (4’-CH2-O-2’), juntamente com sua oligomerização, e propriedades de reconhecimento de ácido nucleico têm sido descritos (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). Os BNAs e a preparação dos mesmos também são descritos no WO 98/39352 e WO 99/14226.

[00377] Os análogos do BNA de metileno-óxi (4’-CH2-O-2’) e BNAs de 2'-tio, também foram preparados (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). A preparação de análogos de nucleosídeos bloqueados compreendendo duplexes de oligodesoxirribonucleotídeo como substratos para as polimerases de ácido nucleico também foi descrita (Wengel et al., WO 99/14226). Além disso, a síntese de 2'- amino-BNA, um novo análogo de oligonucleotídeo de alta afinidade conformacionalmente restrito, foi descrita na técnica (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Além disso, 2'-amino - e 2'- metilamino-BNA's foram preparados e a estabilidade térmica dos seus duplexes com fitas de RNA e DNA complementares foi relatada anteriormente.

[00378] Em certas modalidades, os nucleosídeos bicíclicos são fornecidos tendo a Fórmula VI:

em que:

[00379] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00380] Ta e Tb são, cada um, independentemente, H, um grupo de proteção de hidroxila, um grupo conjugado, um grupo de fósforo reativo, uma porção de fósforo ou uma ligação covalente a um meio de suporte;

[00381] cada qi, qj, qk e ql é, independentemente, H, halogênio, alquila C1-C12, alquila substituída C1-C12, alquenila C2-C12, alquenila substituída C2-C12, alquinila C2-C12, alquinila substituída C2-C12, alcóxi C1-C12, alcóxi substituído C1-C12, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(= O)NJjJk, N (H) C (= NH) NJjJk, N (H) C (= O)NJjJk ou N (H) C (= S) NJjJk; e

[00382] qi e qj ou ql e qk em conjunto são = C(qg)(qh), em que qg e qh são cada um, independentemente, H, halogênio, alquila C1-C12 ou alquila substituída C1-C12.

[00383] Um nucleosídeo carbocíclico bicíclico tendo uma ponte 4'- (CH2)3-2' e uma análoga de alquenil 4'-CH=CH-CH2-2' foram descritos (Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 e Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). A síntese e a preparação dos nucleosídeos bicíclicos carbocíclicos juntamente com seus estudos bioquímicos e de oligomerização também foram descritos (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362- 8379).

[00384] Conforme usado neste documento, "nucleosídeo bicíclico 4'-2'" ou "nucleosídeo bicíclico 4' para 2'" se refere a um nucleosídeo bicíclico compreendendo um anel de furanose compreendendo uma ponte que conecta dois átomos de carbono do anel de furanose conecta o átomo de carbono 2' e o átomo de carbono 4' do anel de açúcar.

[00385] Conforme usado neste documento, "nucleosídeos monocíclicos" se refere aos nucleosídeos que compreendem porções de açúcar modificado que não sejam porções de açúcar bicíclico. Em certas modalidades, a porção de açúcar, ou análogo da porção de açúcar, de um nucleosídeo pode ser modificado ou substituído em qualquer posição.

[00386] Conforme usado neste documento, "açúcar modificado 2'" significa um açúcar de furanosila modificado na posição 2'. Em certas modalidades, tais modificações incluem substituintes selecionados a partir de: um haleto, incluindo, mas não se limitando a alcóxi substituído e não substituído, tioalquila substituída e não substituída, amino alquila substituída e não substituída, alquila substituída e não substituída, alila substituída e não substituída, e alquinila substituída e não substituída. Em certas modalidades, as modificações 2' são selecionadas a partir de substituintes incluindo, mas não se limitando a: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, e O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, onde n e m são de 1 a cerca de 10. Outros grupos de substituinte 2' também podem ser selecionados a partir de: alquila, alquila substituída, alquenila, alquinila, alcarila, aralquila, O-alcarila ou O-aralquila C1-C12 , SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, heterocicloalquila, heterocicloalcarila, aminoalquilamino, polialquilamino, silila substituída, um grupo de clivagem do RNA, um grupo repórter, um intercalador, um grupo para melhorar as propriedades farmacocinéticas, ou um grupo para melhorar as propriedades farmacocinéticas de um composto antissenso, e outros substituintes tendo propriedades semelhantes. Em certas modalidades, os nucleosídeos modificados compreendem uma cadeia lateral 2'-MOE ((Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Essa substituição de 2'-MOE foi descrita como tendo melhor afinidade de ligação em comparação com os nucleosídeos não modificados e com outros nucleosídeos modificados, tais como 2'-O-metila, O- propila, e O-aminopropila. Os oligonucleotídeos tendo o substituinte 2'- MOE também foram mostrados como sendo inibidores antissenso da expressão do gene com características promissoras para uso in vivo (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; e Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917- 926).

[00387] Conforme usado neste documento, um "nucleosídeo de tetra-hidropirano modificado" ou "nucleosídeo de THP modificado" significa um nucleosídeo tendo um "açúcar" de tetra-hidropirano de seis membros substituído pelo resíduo de pentofuranosila nos nucleosídeos normais (um substituto do açúcar). Os nucleosídeos de THP modificados incluem, mas não estão limitados a o que é referido na técnica como ácido nucleico de hexitol (HNA), ácido nucleico de anitol (ANA), ácido nucleico de manitol (MNA) (vide Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854) ou flúor HNA (F-HNA) possuindo um sistema de anel de tetra-hidropirano, como ilustrado abaixo:

[00388] Em certas modalidades, substitutos de açúcar são selecionados com a Fórmula VII:

em que independentemente para cada um do referido pelo menos um análogo de nucleosídeo de tetraidropirano de Fórmula VII:

[00389] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00390] Ta e Tb são, independentemente, um grupo de ligação internucleosídica que liga o análogo de nucleosídeo de tetrahidropirano ao composto antissenso ou Ta e Tb são um grupo de ligação internucleosídica que liga o análogo de nucleosídeo de tetrahidropirano ao composto antissenso e outros Ta e Tb são H, um grupo protetor de hidroxila, um grupo de conjugado ligado, ou um grupo terminal 5' ou 3';

[00391] q1, q2, q3, q4, q5, q6 e q7 são cada um, independentemente, alquila de H, C1-C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila de C2-C6 , alquenila substituída de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 ou alquinila de C2-C6; e cada um de R1 e R2 é selecionado a partir de hidrogênio, hidroxila, halogênieo, alcóxi substituído ou não substituído, NJ1J2, SJ1, N3, OC (= X) J1, OC (= X) NJ1J2, NJ3C (= X) NJ1J2 e CN, em que X é O, S ou NJ1 e cada símbolo J1, J2 e J3 é, independentemente, alquila de H ou C1-C6.

[00392] Em certas modalidades, os nucleosídeos THP modificados da Fórmula VII em que são fornecidos q1, q2, q3, q4, q5, q6 e q7 são cada um H. Em certas modalidades, pelo menos um de q1, q2, q3, q4, q5, q6 e q7 é outro que não H. Em certas modalidades, pelo menos um de q1, q2, q3, q4, q5, q6 e q7 é metila. Em certas modalidades, nucleosídeos THP da Fórmula VII são proporcionados em que um de R1 e R2é flúor. Em certas modalidades, R1 é flúor e R2é H; R1 é metóxi e R2 é H, e R1 é metoxietóxi e R2 é H.

[00393] Em determinadas modalidades, os substitutos de açúcar compreendem anéis com mais de 5 átomos e mais de um heteroátomo. Por exemplo, os nucleosídeos que compreendem porções de açúcar de morfolino e seu uso em compostos oligoméricos foram mencionados (ver, por exemplo: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; e U.S. Patents 5.698.685; 5.166.315; 5.185.444; e 5.034.506). Como usado neste documento, o termo "morfolino" se refere a um substituto de açúcar com a seguinte fórmula:

[00394] Em determinadas modalidades, os morfolinos podem ser modificados, por exemplo, pelo acréscimo ou alteração de vários grupos substituintes da estrutura do morfolino acima. Esses substitutos do açúcar são mencionados neste documento como "morfolinos modificados"

[00395] As combinações das modificações também são fornecidas, sem limitação, como nucleosídeos 2'-F-5'-metila substituídas (vide, Pedido Internacional PCT WO 2008/101157, publicado em 21/08/08 para outros nucleosídeos 5',2'-bis substituídos divulgados) e substituição do átomo de oxigênio do anel ribosil por S e outra substituição adicional na posição 2' (vide, Pedido de Patente U.S. publicado US2005-0130923, publicado em 16 de junho de 2005), ou alternativamente, substi tuição 5' de um ácido nucleico bicíclico (vide, Pedido Internacional PCT WO 2007/134181, publicado em 22/11/07, em que o nucleosideo bicíclico 4'-CH2-O-2' é ainda substituído na posição 5' por um grupo 5'-metila ou 5'-vinil). A síntese e preparação de nucleosídeos bicíclicos carbocíclicos juntamente com seus estudos bioquímicos e de oligomerização também foram descritos ( ver, por exemplo, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362- 8379).

[00396] Em certas modalidades, os compostos antissensos compreendem um ou mais nucleosídeos ciclohexenil modificados, que é um nucleosídeo possuindo um ciclohexenil seis membros no lugar do resíduo pentofuranosila em nucleosídeos que ocorrem naturalmente. Nucleosídeos ciclohexenil modificados incluem, mas não estão limitados aos descritos na técnica (ver, por exemplo, de propriedade comum, pedido PCT publicado WO 2010/036696, publicado em 10 de Abril, 2010, Robeyns et al., J. Am. Chem. Soc., 2008, 130(6), 1979-1984; Horváth et al., Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al.,, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang et al., J. Org. Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al., J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; Published PCT application, WO 06/047842; e Publicação PCT WO 01/049687; o texto de cada um é aqui incorporado por referência, na sua totalidade). nucleosídeos de ciclohexenil modificados têm a Fórmula X.

em que, independentemente, para cada um dentre dito pelo menos um análogo de nucleosídeo de ciclohexenil da Fórmula X:

[00397] Bx é uma porção de base heterocíclica;

[00398] T3 e T4 são cada um, independentemente, um grupo de ligação de internucleosídeo ligando o análogo de nucleosídeo de ciclohexenil a um composto antissenso ou um dentre T3 e T4 é um grupo de ligação de internucleosídeo ligando o análogo de nucleosídeo de tetrahidropirano a um composto antissenso e o outro dentre T3 e T4 é H, um grupo protetor de hidroxila, um grupo conjugado ligado, ou um grupo 5'- ou 3'-terminal; e

[00399] q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 e q9 são cada um, independentemente, alquila de H, C1-C6 , alquila substituída de C1-C6 , alquenila de C2-C6 , alquenila substituída de C2-C6 , alquinila de C2-C6 , alquinila substituída de C2-C6 ou outro grupo substituinte de açúcar.

[00400] Conforme usado neste documento, "modificado em 2'" ou "substituído em 2'" se refere a um nucleosídeo compreendendo um açúcar compreendendo um substituinte na posição 2' diferente de H ou OH. Nucleosídeos 2'-modificados, incluem, mas não estão limitados a, nucleosídeos bicíclicos em que a ponte de ligação de dois átomos de carbono do anel de açúcar liga o carbono 2' e do outro carbono do anel de açúcar; e nucleosídeos com 2' substituíntes sem ponte, como alila, amino, azido, tio, O-alila, alquila de O-C1-C10 , -OCF3, O- (CH2)2- O-CH3, 2'-O- (CH2)2SCH3, O- (CH2)2-O-N (Rm) (Rn), ou O-CH2-C (= O) - N (Rm) (Rn), em que cada Rm e Rn é, independentemente, alquila de H ou C 1-C10substituído ou não substituído. Os nucleosídeos modificados em 2' podem compreender ainda outras modificações, por exemplo, em outras posições do açúcar e/ou na nucleobase.

[00401] Conforme usado neste documento, "2'-F" se refere a um nucleosídeo compreendendo um açúcar compreendendo um grupo flúor na posição 2' do anel de açúcar.

[00402] Conforme usado neste documento, "2'-OMe" ou "2'-OCH3” ou 2'-O-metila”, cada um se refere a um nucleosídeo compreendendo um açúcar compreendendo um grupo -OCH3 na posição 2' do anel de açúcar.

[00403] Como usado neste documento, "MOE" ou "2'- MOE" ou “2’- OCH2CH2OCH3” ou " 2'-O-metoxietila”, cada um, refere-se a um nucleosídeo compreendendo um açúcar compreendendo um grupo - OCH2CH2OCH3 na posição 2’ do anel de açúcar.

[00404] Como usado neste documento, "oligonucleotídeo" se refere a um composto compreendendo uma pluralidade de nucleosídeos ligados. Em certas modalidades, um ou mais da pluralidade de nucleosídeos são modificados. Em certas modalidades, um oligonucleotídeo compreende um ou mais ribonucleosídeos (RNA) e/ou desoxirribonucleosídeos (DNA).

[00405] Muitos outros sistemas de anel de substituto de açúcar biciclo e triciclo também são conhecidos na técnica que podem ser usados para modificar os nucleosídeos para a incorporação nos compostos antissenso (vide, por exemplo, artigo de revisão: Leumann, Bioorg.. Med. Chem., 2002, 10, 841-854). Tais sistemas de anel podem se submeter a várias substituições adicionais para intensificar a atividade.

[00406] Os métodos para as preparações de açúcares modificados são bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Algumas patentes U.S. representantes que ensinam a preparação de tais açúcares modificados incluem, sem limitação, U.S.: 4.981.957; 5.118.800; 5.319.080; 5.359.044; 5.393.878; 5.446.137; 5.466.786; 5.514.785; 5.519.134; 5.567.811; 5.576.427; 5.591.722; 5.597.909; 5.610.300; 5.627.053; 5.639.873; 5.646.265; 5.670.633; 5.700.920; 5.792.847 e 6.600.032 e Pedido Internacional PCT/US2005/019219, depositado em 2 de junho de 2005 e publicado como WO 2005/121371 em 22 de dezembro de 2005, e cada uma das quais é neste documento incorporada por referência na sua totalidade.

[00407] Nos nucleotídeos tendo porções de açúcar modificado, as porções de nucleobase (natural, modificada ou uma combinação destas) são mantidas para a hibridização com um alvo de ácido nucleico apropriado.

[00408] Em certas modalidades, os compostos antissenso compreendem um ou mais nucleosídeos tendo porções de açúcar modificado. Em certas modalidades, a porção de açúcar modificado é 2'-MOE. Em certas modalidades, os nucleosídeos modificados em 2'- MOE são dispostos em um motivo de gapmer. Em certas modalidades, a porção de açúcar modificado é um nucleosídeo bicíclico tendo um grupo de ponte (4'-CH (CH3)- O-2'). Em certas modalidades, os nucleosídeos modificados de (4’-CH(CH3)-O-2’) são dispostos ao longo das asas de um motivo de gapmer.

Nucleobases Modificadas

[00409] As modificações ou substituições de nucleobase (ou base) são estruturalmente distinguíveis, e funcionalmente permutáveis com, nucleobases não modificadas sintéticas ou de ocorrência natural. As nucleobases naturais e modificadas são capazes de participar da ligação de hidrogênio. Essas modificações de nucleobase podem conferir estabilidade à nuclease, afinidade de ligação ou alguma outra propriedade biológica benéfica para os compostos antissenso. As nucleobases modificadas incluem nucleobases sintéticas e naturais, tal como, por exemplo, 5-metilcitosina (5-me-C). Determinadas substituições de nucleobase, incluindo substituições de 5-metilcitosina, são particularmente úteis para aumentar a afinidade de ligação de um composto antissenso por um ácido nucleico alvo. Por exemplo, as substituições de 5-metilcitosina mostraram aumentar a estabilidade do duplex de ácido nucleico em 0,6-1,2° C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antissenso Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).

[00410] As nucleobases modificadas adicionais incluem 5- hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metila e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-propila e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-tiouracila, 2-tiotimina e 2- tiocitosina, 5-halouracila e citosina, 5-propinil (-C=C-CH3) uracila e citosina e outros derivados de alquinila de bases de pirimidina, 6-azo uracila, citosina e timina, 5-uracil(pseudouracila), 4-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquila, 8-hidroxila e outras adeninas e guaninas 8- substituídas, 5-halo, particularmente, 5-bromo, 5-trifluorometila e outras uracilas e citosinas 5-substituídas, 7-metilguanina e 7- metiladenina, 2-F-adenina, 2-amino-adenina, 8-azaguanina e 8-aza- adenina, 7-deazaguanina e 7-deaza-adenina e 3-deazaguanina e 3- deaza-adenina.

[00411] As porções de base heterocíclicas também podem incluir aquelas em que a base purina ou pirimidina é substituída por outros heterocíclicos, por exemplo, 7-deaza-adenina, 7-deazaguanosina, 2- aminopiridina e 2-piridona. As nucleobases que são particularmente úteis para aumentar a afinidade de ligação dos compostos antissenso incluem pirimidinas 5-substituídas, 6-azapirimidinas e purinas substituídas N-2, N-6 e O-6, incluindo 2 aminopropiladenina, 5- propiniluracila e 5-propinilcitosina.

[00412] Em certas modalidades, os compostos antissenso direcionados para um ácido nucleico de CFB compreendem uma ou mais nucleobases modificadas. Em certas modalidades, os oligonucleotídeos antissenso de lacuna ampliada ou encurtada ou direcionados para um ácido nucleico de CFB compreendem uma ou mais nucleobases modificadas. Em certas modalidades, a nucleobase modificada é uma 5-metilcitosina. Em certas modalidades, cada citosina é uma 5-metilcitosina.

Compostos Antissenso Conjugados

[00413] Os compostos antissenso podem estar covalentemente ligados a uma ou mais porções ou conjugados que intensificam a atividade, a distribuição celular ou a absorção celular dos oligonucleotídeos antissenso resultantes. Os grupos conjugados típicos incluem porções de colesterol e porções de lipídio. Os grupos conjugados adicionais incluem carboidratos, fosfolipídios, biotina, fenazina, folato, fenantridina, antraquinona, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas e corantes.

[00414] Os compostos antissenso também podem ser modificados para ter um ou mais grupos de estabilização que estão geralmente ligados a um ou a ambos os terminais dos compostos antissenso para intensificar as propriedades, tal como, por exemplo, a estabilidade à nuclease. Incluídas nos grupos de estabilização estão as estruturas de revestimento. Estas modificações terminais protegem o composto antissenso tendo um ácido nucleico terminal a partir da degradação pela exonuclease, e podem ajudar na distribuição e/ou localização dentro de uma célula. O revestimento pode estar presente no 5'- terminal (5'-revestimento), ou no 3'-terminal (3'-revestimento), ou pode estar presente em ambos os terminais. As estruturas de revestimento são bem conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, revestimentos abásicos de desóxi invertido. Além disso, os grupos de estabilização 3' e 5' que podem ser usados para revestir uma ou ambas as extremidades de um composto antissenso para transmitir estabilidade de nuclease, incluem aqueles divulgados em WO 03/004602 publicado em 16 de janeiro de 2003.

[00415] Em certas modalidades, os compostos antissensos, incluindo, mas não limitados aos particularmente adequado para utilização como ssRNA, são modificados por ligação de um ou mais grupos conjugados. Em geral, grupos conjugados modificam uma ou mais propriedades do composto oligonucleotídeo fixado incluindo, entre outros, propriedades de farmacodinâmica, farmacocinética, estabilidade, ligação, absorção, distribuição celular, absorção celular, carga e/ou depuração. Grupos conjugados são rotineiramente usados nas técnicas químicas e estão ligados diretamente ou por uma porção de ligação conjugada opcional ou um grupo de ligação conjugado a um composto de origem como um oligonucleotídeo. Os grupos conjugados incluem, entre outros, intercaladores, moléculas repórter, poliaminas, poliamidas, polietilenoglicois, tioéteres, poliéteres, colesterois, tiocolesterois, porções de ácido cólico, folato, lipídios, fosfolipídios, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas e corantes. Determinados grupos conjugados foram descritos anteriormente, por exemplo: porção de colesterol (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553- 6556), cholic acid (Manoharan et al., BioorgChem. Let., 1994, 4, 1053- 1060), a thioether, e.g., hexyl-S-tritylthiol (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci, 1992, 660, 306-309.; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), um tiocolesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res, 1992, 20, 533-538), uma cadeia alifática, por exemplo, resíduos de dodecandiol ou undecil (Saison-Behmoaras et al, EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al, FEBS Lett. ., 1990, 259, 327-330;. Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75, 49-54), um fosfolípido, por exemplo, di-hexadecil-rac-glicerol ou trietilamônia 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato (Manoharan et al, Tetrahedron Lett, 1995, 36, 3651-3654;. Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), uma cadeia de poliamina ou de polietilenoglicol (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), ou ácido acético de adamantano (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), uma porção de palmitil (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), ou uma porção de octadecilamina ou hexilamina-carbonil-oxicolesterol (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp.Ther., 1996, 277, 923-937).

[00416] Para conjugados adicionais, tais como aqueles que são úteis para ssRNA e sua colocação dentro de compostos antissenso, ver por exemplo, Pedido US No .; 61/583.963.

Testes in vitro de oligonucleotídeos antissenso

[00417] São descritos neste documento os métodos para o tratamento de células com oligonucleotídeos antissenso que podem ser modificados apropriadamente para o tratamento com outros compostos antissenso.

[00418] As células podem ser tratadas com oligonucleotídeos antissenso quando as células atingem aproximadamente 60-80% de confluência na cultura.

[00419] Um reagente comumente usado para introduzir os oligonucleotídeos antissenso nas células cultivadas inclui o reagente de transfecção lipídica catiônica LIPOFECTIN (Invitrogen, Carlsbad, CA). Oligonucleotídeos antissenso podem ser misturados com LIPOFECTIN em OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para se atingir a concentração final desejada de oligonucleotídeo antissenso e uma concentração LIPOFECTIN que pode variar de 2 a 12 ug/ml por 100 nM de oligonucleotídeo antissenso.

[00420] Outro reagente usado para introduzir os oligonucleotídeos antissenso nas células cultivadas inclui LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Carlsbad, CA). Oligonucleotídeo antissenso é misturado com LIPOFECTAMINE em meio de soro reduzido OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para atingir a concentração desejada de oligonucleotídeo antissenso uma concentração de LIPOFECTAMINE que pode variar de 2 a 12 ug/ml por 100 nM de oligonucleotídeo antissenso.

[00421] Outra técnica usada para introduzir os oligonucleotídeos antissenso nas células cultivadas inclui a eletroporação.

[00422] Ainda outra técnica usada para introduzir oligonucleotídeos antissenso em células cultivadas inclui a livre absorção dos oligonucleotídeos pelas células.

[00423] As células são tratadas com os oligonucleotídeos antissenso por métodos de rotina. As células são normalmente colhidas 16-24 horas após o tratamento de oligonucleotídeo antissenso, no momento em o RNA ou os níveis de proteína de ácidos nucleicos alvo são medidos por métodos conhecidos na técnica e descritos neste documento. Em geral, quando os tratamentos são executados em múltiplas réplicas, os dados são apresentados como a média dos tratamentos replicados.

[00424] A concentração do oligonucleotídeo antissenso usada varia de linhagem celular para linhagem celular. Os métodos para determinar a concentração de oligonucleotídeo antissenso ideal para uma linhagem celular particular são bem conhecidos na técnica. Oligonucleotídeos antissenso são normalmente usados em concentrações variando de 1 nM a 300 nM quando transfectados com LIPOFECTAMINE. Os oligonucleotídeos antissenso são usados em concentrações superiores variando de 625 a 20.000 nM, quando transfectados usando eletroporação.

Isolamento de RNA

[00425] A análise de RNA pode ser executada no RNA celular total ou poli(A) + mRNA. Os métodos de isolamento de RNA são bem conhecidos na técnica. O RNA é preparado usando métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, usando o Reagente TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com os protocolos recomendados pelo fabricante.

Certas Indicações

[00426] Certas modalidades aqui proporcionadas referem-se aos métodos de tratamento, prevenção, ou melhoramento de uma doença associada com a desregulação da via alternativa do complemento num sujeito por administração de um CFB inibidor específico, tal como um composto antissenso alvo para CFB.

[00427] Exemplos de doenças renais associadas com a desregulação da via alternativa do complemento tratável, prevenida, e/ou melhorável com os métodos aqui proporcionados incluem glomerulopatia por C3, síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), doença de depósito denso (DDD; também conhecida como tipo GNMP II ou C3Neph), e nefropatia CFHR5.

[00428] Doenças renais adicionais associadas com a desregulação da via alternativa do complemento tratável, prevenida, e/ou melhorada com os métodos aqui proporcionados incluem nefropatia por IgA; mesangiocapilar (membranoproliferativa) glomerulonefrite (MPGN); doenças autoimunes, incluindo lúpus e nefrite lúpus eritematoso sistêmico (SLE); glomerulonefrite induzida por infecção (também conhecido como pós-infecciosa glomerulonefrite); e lesão de reperfusão de isquemia renal, por exemplo pós-transplante de lesão de reperfusão de isquemia renal.

[00429] Exemplos de distúrbios não renais associados com a desregulação do complemento da via alternativa tratável e/ou evitáveis com os métodos aqui proporcionados, incluem doenças oculares, tais como a degeneração macular, para relacionada com a idade exemplo degeneração macular (AMD), incluindo a AMD exsudativa e AMD seca, tais como Atrofia Geográfica; neuromielite óptica; doenças da córnea, tais como a inflamação da córnea; uveíte autoimune; e retinopatia diabética. Tem sido relatado que o sistema do complemento é envolvido em doenças oculares. Jha P, et al., Mol Immunol (2007) 44(16): 3901-3908. Outros exemplos de distúrbios não renal associados com a desregulação da via alternativa do complemento tratável e/ou evitáveis com os métodos aqui proporcionados incluem vasculite ANCA associados, síndrome antifosfolipídeo (também conhecido como SAF anticorpo (APS)), asma, artrite reumatoide, miastenia grave e esclerose múltipla.

[00430] Certas modalidades aqui fornecidas referem-se aos métodos de tratamento, prevenção, ou melhoramento de uma doença renal associada com a desregulação da via alternativa do complemento num sujeito por administração de um CFB inibidor específico, tal como um composto antissenso alvo para CFB. Em certas modalidades, a doença renal é a nefrite do lúpus, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), ou qualquer combinação dos mesmos.

[00431] Certas modalidades aqui fornecidas referem-se aos métodos de tratamento, prevenção, ou melhoramento da degeneração macular, tais como a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), num sujeito por administração de um inibidor específico de CFB, tal como um composto antissenso direcionado para CFB. Em certas modalidades, a AMD é AMD úmida ou AMD seca. Em certas modalidades, a AMD seca pode ser Atrofia Geográfica. Estudos têm demonstrado a associação de complemento desregulação via alternativa e AMD. Componentes do complemento são constituintes comuns de drusas oculares, o material extracelular que se acumula na mácula de pacientes AMD. Além disso, tem sido relatado que CFH e CFB variantes representam quase 75% dos casos de AMD no norte da Europa e América do Norte. Além disso, verificou-se que um polimorfismo específico CFB confere proteção contra a AMD. Patel, N. et al., Eye (2008) 22(6):768-76. Além disso, camundongos nulos homozigotos CFB têm menor atividade do complemento pela via, apresentam lesões oculares menores, e neovascularização de coroide (CNV) após fotocoagulação a laser. Rohrer, B. et al.,Invest Ophthalmol Vis Sci. (2009) 50(7):3056-64. Além disso, o tratamento com siRNA CFB protege camundongos de CNV induzido por laser. Bora, NS et al., J Immunol. (2006) 177(3):1872-8. Estudos também têm demonstrado que as vias de desenvolvimento nos rins e compartilhamento no olho e características estruturais, incluindo composição e vascularização do protomer da membrana basal colágeno IV. Savige et al., J Am Soc Nephrol. (2011) 22(8):1403-15. Há evidências de que a via do complemento está envolvido em doenças renais e oculares. Por exemplo, a deficiência de proteína reguladora herdada provoca a predisposição à síndrome hemolítico-urêmica atípica e AMD. Richards A et al., Adv Immunol. (2007) 96:141-77. Além disso, a doença renal crônica tem sido associada com a AMD. Nitsch, D. et al., Ophthalmic Epidemiol. (2009) 16(3):181-6; Choi, J. et al, Ophthalmic Epidemiol. (2011) 18(6):259-63. Doença densa do depósito (DDD), uma doença renal associada com a desregulação da via alternativa do complemento, é caracterizada pela síndrome nefrótica aguda e drusas oculares. Cruz e Smith, GeneReviews (2007) Jul 20. Além disso, os camundongos albergando a eliminação genética de um componente da via alternativa do complemento têm coexistindo fenótipos da doença renal e ocular. Tem sido relatado que os camundongos homozigóticos nulos CFH desenvolvem DDD e apresentam anormalidades da retina e disfunção visual. Pickering et al., Nat Genet. (2002) 31(4):424-8. Camundongos modelos de doenças renais associadas à desregulação da via alternativa do complemento também são aceitos como modelos da AMD. Pennesi ME et al., Mol Apects Med (2012) 33:487-509. CFH camundongos nulos, por exemplo, é um modelo aceito para doenças renais, tais como DDD, e AMD. Além disso, tem sido relatado que a AMD está associada com a fonte sistêmica de fatores do complemento, que se acumulam no sítio no olho para direcionar a ativação do complemento pela via alternativa. Loyet et al., Invest Ophthalmol Vis Sci. (2012) 53(10):6628-37.

EXEMPLOS Divulgação não limitante e incorporação por referência

[00432] Embora certos compostos, composições e métodos descritos neste documento tenham sido descritos com especificidade em conformidade com certas modalidades, os seguintes exemplos servem apenas para ilustrar os compostos descritos neste documento e não se destinam a limitar o mesmo. Cada uma das referências relatadas no presente pedido está incorporada neste documento por referência em sua totalidade.

[00433] Entende-se que a sequência estabelecida em cada SEQ ID NO nos Exemplos contidos neste documento é independente de qualquer modificação de uma porção de açúcar, uma ligação internucleosídeos, ou uma nucleobase. Como tal, os compostos antissenso definidos por uma SEQ ID NO podem compreender, independentemente, uma ou mais modificações para uma porção de açúcar, uma ligação internucleosídeos, ou uma nucleobase. Os compostos antissenso descritos pelo Número de Isis (N° de Isis) indicam uma combinação da sequência de nucleobase e motivo. Exemplo 1: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2 por gapmers MOE

[00434] Oligonucleotídeos antissenso foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados em uma série de experimentos que tinham condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 4,500 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. Um conjunto de sonda do primer humano RTS3459 (sequência forward AGTCTCTGTGGCATGGTTTGG, aqui designado como SEQ ID NO: 810; GGGCGAATGACTGAGATCTTG sequência reverse, aqui designado como SEQ ID NO: 811; sequência da sonda TACCGATTACCACAAGCAACCATGGCA, aqui designado como SEQ ID NO: 812) foi usada para medir níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00435] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos designados novamente nas Tabelas abaixo foram concebidos como gapmers 5-10- 5 MOE. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento wing de 5' e cada nucleosídeo no segmento wing 3' tem uma modificação de 2'-MOE. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P = S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas. "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK n° de acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK n° de acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 1

Tabela 2 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 e 2

Tabela 3 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 e 2

Tabela 4 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 e 2

Tabela 5 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 e 2

Exemplo 2: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2 por gapmers MOE

[00436] Os oligonucleotídeos antissenso adicionais foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 4,500 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto da sonda do primer humano RTS3460_MGB (sequência forward CGAAGCAGCTCAATGAAATCAA, aqui designada como SEQ ID NO: 813; TGCCTGGAGGGCCTTCTT sequência reverse, aqui designada como SEQ ID NO: 814; sequência da sonda AGACCACAAGTTGAAGTC, aqui designada como SEQ ID NO: 815) foi usada para medir níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00437] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos designados novamente nas Tabelas abaixo foram concebidos como gapmers 5-10- 5 MOE. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento wing de 5' e cada nucleosídeo no segmento wing 3' tem uma modificação de 2'-MOE. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P = S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas. "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK n° de acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK n° de acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 6 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 e 2

Exemplo 3: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2 por gapmers MOE

[00438] Os oligonucleotídeos antissenso adicionais foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados em uma série de experimentos que tinham condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 5.000 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00439] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos designados novamente nas Tabelas abaixo foram concebidos como gapmers 5-10- 5 MOE. Os gapmers têm 20 nucleosídeos de comprimento, em que o segmento gap central compreende dez 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento wing de 5' e cada nucleosídeo no segmento wing 3' tem uma modificação de 2'-MOE. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P = S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas. "Sítio de partida" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK n° de acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK n° de acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. No caso do alinhamento da sequência de um gene alvo numa tabela em particular não é mostrado, entende-se que nenhum dos oligonucleotídeos apresentados na tabela que se alinham com 100% de complementaridade com o gene alvo. Tabela 7 Inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1

Tabela 8 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Exemplo 4: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2 por gapmers MOE

[00440] Oligonucleotídeos antissenso foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados em uma série de experimentos que tinham condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 3.000 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00441] Os oligonucleotídeos anti-quiméricos recém-concebidos nas tabelas abaixo foram concebidos como 4-8-5 MOE, 5-9-5 MOE, 5- 10-5 MOE, 3-10-4 MOE, 3-10-7 MOE, 6-7-6- MOE, 6-8-6 MOE, ou 5-7- 5 MOE gapmers, ou como desóxi, MOE, e oligonucleotídeos cEt.

[00442] Os gapmers 4-8-5 MOE têm 17 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo quatro e cinco nucleosídeos respectivamente. Os gapmers 5-9-5 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende nove 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-7-5 MOE têm 17 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende sete 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 3-10-4 MOE têm 17 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo três nucleosídeos e quatro nucleosídeos, respectivamente. Os gapmers 3-10-7 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo três nucleosídeos e sete nucleosídeos, respectivamente. Os gapmers 6-7-6 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, em que o segmento gap central compreende sete 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. Os gapmers 6-8-6 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P = S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas.

[00443] Os oligonucleotídeos cEt, MOE e desóxi são 16 nucleosídeos de comprimento, nos quais o nucleosídeo tem uma modificação de açúcar MOE, uma modificação de açúcar cEt, ou uma modificação desoxi. A coluna de "Química" descreve as modificações de açúcar de cada oligonucleotídeo. 'k' indica uma modificação açúcar cEt; 'd' indica desoxirribose; e 'e' indica uma modificação MOE.

[00444] "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK No. de Acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK No. de Acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 9 Inibição de mRNA CFB por desóxi, MOE e oligonucleotídeos cEt alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 10 A inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 11 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 12 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 13 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 14 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Exemplo 5: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2 por gapmers MOE

[00445] Os oligonucleotídeos antissenso adicionais foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados em uma série de experimentos que tinham condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 2.000 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00446] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos recém- concebidos nas tabelas abaixo foram concebidos como 4-8-5 MOE, 5- 8-5 MOE, 5-9-5 MOE, 5-10-5 MOE, 6-7-6- MOE, 3-10-5 MOE, ou 6-8-6 MOE gapmers.

[00447] Os gapmers 4-8-5 MOE têm 17 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo quatro e cinco nucleosídeos respectivamente. Os gapmers 5-8-5 MOE têm 18 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende nove 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 3-10-5 MOE têm 18 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo três nucleosídeos e cinco nucleosídeos, respectivamente. Os gapmers 6-7-6 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, em que o segmento gap central compreende sete 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. Os gapmers 6-8-6 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento wing de 5' e cada nucleosídeo no segmento wing 3' tem uma modificação de 2'-MOE. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P = S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas.

[00448] "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK No. de Acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK No. de Acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 15 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 16 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 17 A inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Exemplo 6: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2

[00449] Os oligonucleotídeos antissenso adicionais foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 1.000 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00450] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos designados recentemente nas Tabelas abaixo foram concebidos como oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt. Os oligonucleotídeos cEt, MOE e desóxi são 16 nucleosídeos de comprimento, nos quais o nucleosídeo tem uma modificação de açúcar MOE, uma modificação de açúcar, açúcar cEt, ou uma modificação desoxi. A coluna de "Química" descreve as modificações de açúcar de cada oligonucleotídeo. 'k' indica uma modificação açúcar cEt; 'd' indica desoxirribose; e 'e' indica uma modificação MOE.

[00451] "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK No. de Acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK No. de Acesso NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 18 Inibição de mRNA CFB por desóxi, MOE e oligonucleotídeos cEt alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Exemplo 7: Inibição antissenso do Fator humano B (CFB) em células HepG2

[00452] Os oligonucleotídeos antissenso adicionais foram concebidos visando complemento do ácido nucleico do Fator humano B (CFB) e foram testados quanto aos seus efeitos sobre CFB mRNA in vitro. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados em uma série de experimentos que tinham condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células HepG2 cultivadas em uma densidade de 20.000 células por poço foram transfectadas usando eletroporação com 500 nM do oligonucleotídeo antissenso. Após um período de tratamento de aproximadamente 24 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido por RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00453] Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos recém- concebidos nas tabelas abaixo foram concebidos como desóxi, MOE e cEt oligonucleotídeos, ou como 5-8-5 MOE, 5-9-5 MOE, 5-10-5 MOE, 6-7-6- MOE, 3-10-5 MOE, ou 6-8-6 MOE gapmers.

[00454] Os oligonucleotídeos cEt, MOE e desóxi são 16 nucleosídeos de comprimento, nos quais o nucleosídeo tem uma modificação de açúcar MOE, uma modificação de açúcar cEt, ou uma modificação desoxi. A coluna de "Química" descreve as modificações de açúcar de cada oligonucleotídeo. 'k' indica uma modificação açúcar cEt; 'd' indica desoxirribose; e 'e' indica uma modificação MOE.

[00455] Os gapmers 5-8-5 MOE têm 18 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-9-5 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende nove 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 5-10-5 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo cinco nucleosídeos cada. Os gapmers 3-10-5 MOE têm 18 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende dez 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo três nucleosídeos e cinco nucleosídeos, respectivamente. Os gapmers 6-7-6 MOE têm 19 nucleosídeos de comprimento, em que o segmento gap central compreende sete 2'-desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e na direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. Os gapmers 6-8-6 MOE têm 20 nucleosídeos de comprimento, nos quais o segmento gap central compreende oito 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado por segmentos wing na direção 5' e a direção 3' compreendendo seis nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento wing de 5' e cada nucleosídeo no segmento wing 3' tem uma modificação de 2'-MOE. As ligações dos internucleosídeos ao longo de cada gapmer são ligações de fosforotioato (P=S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas.

[00456] "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. "Sítio de parada" indica o 3'- nucleosídeos a mais ao qual o gapmer é direcionado na sequência do gene humano. Cada gapmer listado nas tabelas abaixo é direcionado ou para mRNA de CFB humano, designado neste documento como SEQ ID NO: 1 (GENBANK n° de acesso NM_001710.5) ou a sequência genômica humana CFB, aqui designada como SEQ ID NO: 2 (GENBANK No. de adesão NT_007592.15 truncado de nucleotídeos 31852000 a 31861000), ou ambos. 'n/a' indica que o oligonucleotídeo antissenso não tem como alvo aquela determinada sequência genética com 100% de complementaridade. Tabela 19 Inibição de mRNA CFB por desóxi, MOE e oligonucleotídeos cEt alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 20 Inibição de mRNA CFB por desóxi, MOE e oligonucleotídeos cEt alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 21 Inibição de mRNA CFB por desóxi, MOE e oligonucleotídeos cEt alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 22 Inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 23 Inibição do mRNA CFB por gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Tabela 24 Inibição do mRNA CFB por 5-10-5 gapmers MOE alvo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2

Exemplo 8: Inibição antissenso dependente da dose de CFB humano em células HepG2 por 5-10-5 gapmers MOE

[00457] Gapmers a partir dos estudos descritos acima apresentam inibição in vitro de mRNA CFB foram selecionados e testados em diversas doses em células HepG2. As células foram banhadas em uma densidade de 20,000 por poço e transfectadas com eletroporação 0,313 μM, 0,625 μM, 1,25 μM, 2,50 μM, 5,00 μM, ou 10,00 μM concentrações do oligonucleotídeo antissenso, conforme especificado na Tabela abaixo. Após um período de tratamento de aproximadamente 16 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustadas de acordo com o teor total de RNA, tal como medido pelo RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00458] A metade da concentração máxima inibitória (IC50) de cada oligonucleotídeo também é apresentada. Os níveis de mRNA de CFB foram reduzidos de maneira dependente de dose em células tratadas com o oligonucleotídeo antissenso. Tabela 25

Exemplo 9: Inibição antissenso dependente de dose do humano CFB nas células HepG2

[00459] Gapmers a partir dos estudos descritos acima apresentam inibição in vitro de mRNA de CFB foram selecionados e testados em diversas doses em células HepG2. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados numa série de exprimentos com as condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células foram banhadas em uma densidade de 20,000 por poço e transfectadas com eletroporação 0.08 μM, 0.25 μM, 0.74 μM, 2.22 μM, 6.67 μM, e 20.00 μM concentrações do oligonucleotídeo antissenso, conforme especificado na tabela abaixo. Após um período de tratamento de aproximadamente 16 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido pelo RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00460] A metade da concentração máxima inibitória (IC50) de cada oligonucleotídeo também é apresentada. Os níveis de mRNA de CFB foram reduzidos de maneira dependente de dose em células tratadas com o oligonucleotídeo antissenso. Tabela 26

Tabela 27

Tabela 28

Tabela 29

Tabela 30

Tabela 31

Exemplo 10: Inibição antissenso dependente de dose do humano CFB nas células HepG2

[00461] Gapmers a partir dos estudos descritos acima apresentam inibição in vitro de mRNA de PKK foram selecionados e testados em diversas doses em células HepG2. Os oligonucleotídeos antissenso foram testados numa série de experiências com as condições de cultura semelhantes. Os resultados para cada experimento são apresentados em tabelas separadas mostradas abaixo. As células foram banhadas em uma densidade de 20,000 por poço e transfectadas com eletroporação 0.06 μM, 0.25 μM, 1.00 μM, e 4.00 μM concentrações do oligonucleotídeo antissenso, conforme especificado nas tabelas abaixo. Após um período de tratamento de aproximadamente 16 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustadas de acordo com o teor total de RNA, tal como medido pelo RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00462] A metade da concentração máxima inibitória (IC50) de cada oligonucleotídeo também é apresentada. Os níveis de mRNA de CFB foram reduzidos de maneira dependente de dose em células tratadas com o oligonucleotídeo antissenso. Tabela 32

Tabela 33

Tabela 34

Tabela 35

Tabela 36

Exemplo 11: Inibição antissenso dependente de dose do humano CFB nas células HepG2

[00463] Gapmers dos estudos descritos acima que apresentam inibição in vitro de mRNA de CFB foram selecionados e testados em diversas doses em células HepG2. Além disso, um desóxi, MOE e cEt oligonucleotídeo, ISIS 594430, foi concebido com a mesma sequência (CTCCTTCCGAGTCAGC, SEQ ID NO: 549) e região alvo (sítio de partida alvo 2195 de SEQ ID NO: 1 e sítio de partida alvo de 6983 SED ID NO: 2) como ISIS 588870, outro desóxi, MOE e cEt oligonucleotídeo. ISIS 594430 é uma gapmer 3-10-3 cEt.

[00464] As células foram postas em placas em uma densidade de 20.000 células por poço e transfectadas usando eletroporação com concentrações de 0,01 μM, 0,04 μM, 0,12 μM, 0,37 μM, 1,11 μM, 3,33 μM, e 10,00 μM do oligonucleotídeo antissenso, conforme especificado na Tabela abaixo. Após um período de tratamento de aproximadamente 16 horas, o RNA foi isolado das células e os níveis de mRNA de CFB foram medidos por PCR quantitativa em tempo real. O conjunto de sonda de primer humano RTS3459 foi usado para medir os níveis de mRNA. Os níveis de mRNA de CFB foram ajustados de acordo com o teor total de RNA, tal como medido pelo RIBOGREEN®. Os resultados são apresentados como porcentagem de inibição do CFB, em relação às células de controle não tratadas.

[00465] A metade da concentração máxima inibitória (IC50) de cada oligonucleotídeo também é apresentada. Os níveis de mRNA de CFB foram reduzidos de maneira dependente de dose em células tratadas com o oligonucleotídeo antissenso. Tabela 37

Exemplo 12: Tolerabilidade do gapmers MOE que se direcionam a CFB humano em camundongos CD1

[00466] Os camundongos CD1® (Charles River, MA) são um modelo de camundongos para múltiplas finalidades, frequentemente utilizado para testes de segurança e eficácia. Os camundongos foram tratados com oligonucleotídeos antissenso ISIS, selecionados a partir dos estudos descritos acima e avaliados para alterações nos níveis de diversos marcadores químicos do plasma.

Estudo 1 (com gapmers 5-10-5 MOE)

[00467] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com sete semanas de idade, 100 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo de camundongos CD1 machos. Um grupo de camundongos foi injetado por via subcutânea com uma vez por semana durante 6 semanas com 100 mg/kg de oligonucleotídeo de controle ISIS 141923 (CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC, aqui designados como SEQ ID NO: 809, 5-10-5 MOE gapmer sem destino conhecido de murino). Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00468] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 38 Marcadores de química de plasma em camundongos do plasma CD1 no dia 40

Pesos

[00469] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 40 antes de sacrificar os camundongos. Os pesos de órgãos, fígado, rim, baço e também foram medidos após os camundongos serem sacrificados. Os resultados são apresentados na tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 39 Pesos (g) de camundongos CD1 no dia 40

Estudo 2 (com gapmers 5-10-5 MOE)

[00470] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com seis a oito semanas de idade, 100 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos de camundongos CD1 machos. Um grupo de camundongos foi injetado por via subcutânea com uma vez por semana durante 6 semanas com 100 mg/kg de oligonucleotídeo de controle ISIS 141923. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00471] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 40 Marcadores de química de plasma em camundongos no plasma CD1 no dia 45

Pesos

[00472] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 42. Os pesos de órgãos, fígado, rim, baço e também foram medidos após os ratinhos foram sacrificados no dia 45. Os resultados são apresentados na tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 41 Pesos (g) de camundongos CD1 no dia 40

Estudo 3 (com gap mers 5-10-5 MOE)

[00473] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com seis a oito semanas de idade, 100 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00474] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 42 Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 42

Pesos

[00475] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 42. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 42. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 43 Pesos (g) de camundongos CD1 no dia 40

Estudo 4 (com gapmers (S) cEt e oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00476] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com dez semanas de idade, 50 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS dos estudos descritos acima. Além disso, dois oligonucleotídeos, ISIS 594431 e ISIS 594432, foram designados como gapmers 3-10-3 cEt e também foram testados neste estudo. ISIS 594431(ACCTCCTTCCGAGTCA, SEQ ID NO: 550) se direciona para a mesma região que o ISIS 588871, um desóxi, gapmer MOE e cEt (sítio inicial alvo 2197 da SEQ ID NO: 1 e sítio inicial alvo 6985 da SEQ ID NO: 2). ISIS 594432 (TGGTCACATTCCCTTC, SEQ ID NO: 542) se direciona para a mesma região que o ISIS 588872, um desóxi, gapmer MOE e cEt (sítio inicial alvo 154 da SEQ ID NO: 1 e sítio inicial alvo 1875 da SEQ ID NO: 2).

[00477] Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00478] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina, creatinina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 44 Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 42

Pesos

[00479] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 39. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 42. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 45 Pesos (g) dos camundongos CD1

Estudo 5 (com gapmers MOE, gapmers (S) cEt e oligonuc eotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00480] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com oito a nove semanas de idade, 50 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00481] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina, creatinina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 46

[00482] Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 42

Pesos

[00483] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 40. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 42. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 47 Pesos (g) dos camundongos CD1

Estudo 6 (com oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00484] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com oito a nove semanas de idade, 50 mg/kg de oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00485] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina, creatinina, bilirrubina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 48

[00486] Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 45

Pesos

[00487] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 40. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 45. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 49 Pesos (g) dos camundongos CD1

Estudo 7 (com gapmers MOE e oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00488] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com oito a nove semanas de idade, 100 mg/kg de oligonucleotídeo ISIS. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00489] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina, creatinina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática ou renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 50 Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 45

Pesos

[00490] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 44. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 49. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 51 Pesos (g) dos camundongos CD1

Estudo 8 (com gapmers MOE, oligonucleotíd eos desóxi, MOE e cEt, e gapmers cEt)

[00491] Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de camundongos CD1 machos com oito a nove semanas de idade, 100 mg/kg de gapmers MOE, ou 50 mg/kg de oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt ou gapmers cEt. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo de camundongos CD1 machos. Os camundongos sofreram eutanásia 48 horas após a última dose, e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Marcadores plasmáticos químicos

[00492] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática e renal, os níveis plasmáticos de transaminases, albumina, creatinina e BUN foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Tabela 52 Marcadores plasmáticos químicos no plasma de camundongos CD1 no dia 43

Pesos

[00493] Os pesos corporais dos camundongos foram medidos no dia 36. Os pesos dos órgãos, fígado, rins e baço também foram medidos após os camundongos serem sacrificados no dia 43. Os resultados para os pesos dos órgãos foram expressos como uma razão entre os pesos corporal e normalizado e a razão do controle com PBS. Tabela 53 Pesos dos órgãos/Peso corporal (BW) dos camundongos CD1

Ensaios de citocinas

[00494] O sangue obtido de todos os grupos de camundongos foi enviado para Antech Diagnostics para medições dos níveis de diversas citocinas, tais como IL-6, MDC, MIP1β, IP-10, MCP1, MIP-1α e RANTES. Os resultados são apresentados na Tabela 54. Tabela 54 Níveis de citocinas (pg/mL) no plasma de camundongos CD1

Ensaios de Hematologia

[00495] O sangue obtido de todos os grupos de camundongos foi enviado para Antech Diagnostics para medições do hematócrito (HCT), bem como medições das diversas células sanguíneas, tais como WBC, RBC, e plaquetas, e o conteúdo de hemoglobina (hb) total. Os resultados são apresentados na Tabela 55. Tabela 55 Marcadores hematológicos no plasma de camundongos CD1

Exemplo 13: Tolerabilidade dos oligonucleotídeos antissenso que se direcionam para o CFB humano em ratos Sprague-Dawley

[00496] Os ratos Sprague-Dawley são um modelo para múltiplas finalidades usado para avaliações de segurança e eficácia. Os ratos foram tratados com oligonucleotídeos antissenso ISIS a partir dos estudos descritos nos Exemplos acima e avaliados para alterações nos níveis de diversos marcadores plasmáticos químicos. Estudo 1 (com gapmers 5-10-5 MOE)

[00497] Ratos Sprague-Dawley machos com sete a oito semanas de idade foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos Sprague-Dawley, 100 mg/kg de gapmers 5-10-5 MOE. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo controle com 6 ratos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00498] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo expressos em IU/L. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 56 Marcadores de função hepática em ratos Sprague-Dawley

Função renal

[00499] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis plasmáticos do nitrogênio ureico no sangue (BUN) e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em mg/dL. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 57 Marcadores de função renal (mg/dL) em ratos Sprague Dawley

Pesos

[00500] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 58 Pesos (g)

Estudo 2 (com oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00501] Ratos Sprague-Dawley machos com nove a dez semanas de idade foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos Sprague-Dawley, 100 mg/kg de oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em dois grupos controle com 3 ratos cada. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00502] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos no dia 42 usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) e albumina foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 59 Marcadores de função hepática em ratos Sprague-Dawley

Função renal

[00503] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis plasmáticos do nitrogênio ureico no sangue (BUN) e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em mg/dL. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 60 Marcadores de função renal (mg/dL) em ratos Sprague Dawley

Pesos

[00504] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 61 Pesos (g)

Estudo 3 (com gapmers MOE)

[00505] Ratos Sprague-Dawley machos com nove a dez semanas de idade foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos Sprague-Dawley, 100 mg/kg de gapmers MOE. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo controle com 6 ratos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00506] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos no dia 43 usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo expressos em IU/L. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 62 Marcadores de função hepática em ratos Sprague-Dawley

Função renal

[00507] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis plasmáticos do nitrogênio ureico no sangue (BUN) e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em mg/dL. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 63 Marcadores de função renal (mg/dL) em ratos Sprague Dawley

Pesos

[00508] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 64 Pesos (g)

Estudo 4 (com gapmers MOE)

[00509] Ratos Sprague-Dawley machos com nove a dez semanas de idade foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos Sprague-Dawley, 100 mg/kg de gapmers MOE. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo controle com 6 ratos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00510] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos no dia 42 usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo expressos em IU/L. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 65 Marcadores de função hepática em ratos Sprague-Dawley

Função renal

[00511] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis plasmáticos do nitrogênio ureico no sangue (BUN) e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em mg/dL. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 66 Marcadores de função renal (mg/dL) em ratos Sprague Dawley

Pesos

[00512] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 67

Pesos (g) Estudo 5 (com gapmers MOE e oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt)

[00513] Ratos Sprague-Dawley machos com nove a dez semanas de idade foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos Sprague-Dawley, 100 mg/kg de gapmer MOE ou 50 mg/kg de oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo controle com 4 ratos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00514] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos no dia 42 usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo expressos em IU/L. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 68 Marcadores de função hepática em ratos Sprague-Dawley

Função renal

[00515] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis plasmáticos e urinários do nitrogênio ureico no sangue (BUN) e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados nas Tabelas abaixo, expressos em mg/dL. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 69 Marcadores de função renal (mg/dL) no plasma de ratos Sprague Dawley

Tabela 70

[00516] Marcadores de função renal (mg/dL) na urina de ratos Sprague Dawley

Pesos

[00517] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram quaisquer alterações nos pesos dos órgãos fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 71

Pesos (g) Estudo 6 (com gapmers MOE, oligonucleotíd eos desóxi, MOE e cEt, e gapmers cEt)

[00518] Os ratos machos foram mantidos em um ciclo de claro/escuro de 12 horas e alimentados ad libitum com Purina chow de rato normal, dieta 5001. Injetou-se, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em grupos de 4 ratos cada, 100 mg/kg de gapmer MOE ou 50 mg/kg de oligonucleotídeos desóxi, MOE e cEt ou gapmer cEt. Injetou-se PBS, por via subcutânea uma vez por semana durante 6 semanas, em um grupo controle com 4 ratos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos ratos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior.

Função hepática

[00519] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, os níveis plasmáticos das transaminases foram medidos no dia 42 usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os níveis plasmáticos de ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo expressos em IU/L. Tabela 72 Marcadores de função hepatica

Função renal

[00520] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, os níveis urinários de proteína total e creatinina foram medidos usando um analisador de química clínica automatizado (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. Os oligonucleotídeos ISIS que provocaram as alterações nos níveis de qualquer um dos marcadores de função renal fora da faixa esperada para os oligonucleotídeos antissenso foram excluídos em estudos posteriores. Tabela 73 Razão de proteína total/creatinina na urina dos ratos

Pesos

[00521] As medições do peso corporal foram feitas no dia 39. Os pesos do fígado, coração, baço e rins foram medidos no final do estudo no dia 42, e são apresentados na Tabela abaixo. Os resultados para os pesos dos órgãos foram expressos como uma razão entre os pesos corporal e normalizado e a razão do controle com PBS. Tabela 74 Razão de peso dos órgãos/peso corporal (BW)

Exemplo 14: Eficácia de oligonucleotídeos antissenso contra mRNA de CFB em camundongos transgênicos para hCFB

[00522] Os compostos selecionados foram testados para a eficácia em camundongos transgênicos para CFB humano, linha do fundador #6. O gene de CFB humano está localizado no cromossomo 6: posição 31913721- 31919861. Um fosmídeo (ABC14-50933200C23) contendo a sequência de CFB foi selecionado para produzir camundongos transgênicos que expressam o gene de CFB humano. As enzimas de restrição Cla I (31926612) e Age I (31926815) foram usadas para gerar um fragmento de 22.127 bp que contém o gene de CFB para injeção pró-nuclear. O DNA foi confirmado pela análise com enzima de restrição usando a Pvu I. O fragmento de DNA de 22.127 bp foi injetado em embriões C57BL/6NTac. 6 fundadores positivos foram criados. O fundador #6 expressou o mRNA de CFB humano no fígado e foi cruzado para a 3a geração. A progênie dos camundongos da 3a geração foi usada para avaliar as ASOs de CFB humano para a redução do mRNA de CFB humano.

Tratamento

[00523] Injetou-se, por via subcutânea duas vezes por semana pela primeira semana, em grupos com 3 camundongos cada, 50 mg/kg de oligonucleotídeos ISIS, seguido por uma dosagem de uma vez por semana de 50 mg/kg de oligonucleotídeos ISIS por três semanas adicionais. Injetou-se PBS, por via subcutânea duas vezes por semana por 2 semanas pela primeira semana por três semanas adicionais, em um grupo controle com 4 camundongos. Quarenta e oito horas após a última dose, realizou-se a eutanásia dos camundongos e os órgãos e o plasma foram colhidos para análise posterior. Análise de RNA

[00524] No final do período de dosagem, o RNA foi extraído do fígado e rins para análise de PCR em tempo real dos níveis de mRNA de CFB. Os níveis de mRNA de CFB humano foram medidos usando o conjunto de sonda do primer humano RTS3459. Os níveis de mRNA de CFB foram normalizados para RIBOGREEN®, e também para o gene constitutivo (housekeeping), Ciclofilina. Os resultados foram calculados como o percentual de inibição da expressão de mRNA de CFB em comparação ao controle. Todos os oligonucleotídeos antissenso efetuaram a inibição dos níveis de mRNA de CFB humano no fígado. Tabela 75 A redução percentual dos níveis de mRNA de CFB em camundongos hCFB

Exemplo 15: Inibição antissenso in vivo de CFB murino

[00525] Foram projetados vários oligonucleotídeos antissenso que foram direcionados para o mRNA de CFB murino (GENBANK n° de acesso NM_008198.2, incorporado neste documento como SEQ ID NO: 5). Os sítios iniciais alvo e as sequências de cada oligonucleotídeo são descritos na tabela abaixo. Os oligonucleotídeos antissenso quiméricos na Tabela abaixo foram projetados como gapmers 5-10-5 MOE. Os gapmers têm 20 nucleosídeos de comprimento, em que o segmento gap central é composto por 10 2'- desoxinucleosídeos e é flanqueado em ambos os lados (nos sentidos 5' e 3') por wings compreendendo 5 nucleosídeos cada. Cada nucleosídeo no segmento 5' wing e cada nucleosídeo no segmento 3' wing tem uma modificação em 2'-MOE. As ligações internucleosídicas ao longo de cada gapmer são ligações fosforotioato (P=S). Todos os resíduos de citosina ao longo de cada gapmer são 5-metilcitosinas. Tabela 76 Gapmers direcionados ao CFB murino

Tratamento

[00526] Grupos de quatro camundongos C57BL/6 cada foram injetados com 50 mg/kg de ISIS 516269, ISIS 516272, ISIS 516323, ISIS 516330, ou ISIS 516341 administrados semanalmente por 3 semanas. Um grupo controle de camundongos foi injetado com salina tamponada com fosfato (PBS) administrado semanalmente por 3 semanas. Análise do RNA de CFB

[00527] No final do estudo, o RNA foi extraído do tecido hepático para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430 (sequência forward GGGCAAACAGCAATTTGTGA, designada neste documento como SEQ ID NO: 816; sequência reverse TGGCTACCCACCTTCCTTGT, designada neste documento como SEQ ID NO: 817; sequência da sonda CTGGATACTGTCCCAATCCCGGTATTCCX, designada neste documento como SEQ ID NO: 818). Os níveis de mRNA foram normalizados usando RIBOGREEN®. Como mostrado na Tabela abaixo, alguns dos oligonucleotídeos antissenso atingiram a redução do CFB murino sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 77 Inibição percentual de mRNA de CFB murino em camundongos C57BL/6

Análise de Proteínas

[00528] Os níveis de proteína CFB foram medidos nos rins, fígado, plasma e no olho por Western Blot usando anticorpo de cabra anti-CFB (Sigma Aldrich). Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle com PBS. ‘n/a’ indica que as medições não foram feitas para aquela amostra. Como mostrado na Tabela abaixo, a inibição antissenso de CFB pelos oligonucleotídeos ISIS resultou em uma redução da proteína CFB em diversos tecidos. Como mostrado na Tabela abaixo, a administração sistêmica dos oligonucleotídeos ISIS foi eficaz na redução dos níveis de CFB no olho. Tabela 78 Inibição percentual da proteína CFB murina em camundongos C57BL/6

Exemplo 16: Inibição antissenso dependente da dose de CFB murino

[00529] Grupos de quatro camundongos C57BL/6 cada foram injetados com 25 mg/kg, 50 mg/kg, ou 100 mg/kg de ISIS 516272, e ISIS 516323 administrados semanalmente por 6 semanas. Outros dois grupos de camundongos foram injetados com 100 mg/kg de ISIS 516330 ou ISIS 516341 administrados semanalmente por 6 semanas. Dois grupos controle de camundongos foram injetados com salina tamponada com fosfato (PBS) administrados semanalmente por 6 semanas. Análise do RNA de CFB

[00530] O RNA foi extraído dos tecidos hepático e renal para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Os níveis de mRNA foram normalizados usando RIBOGREEN®. Como mostrado na Tabela abaixo, os oligonucleotídeos antissenso atingiram a redução dependente da dose do CFB murino sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 79 Inibição percentual de mRNA de CFB murino em camundongos C57BL/6

Análise de Proteínas

[00531] Os níveis da proteína CFB foram medidos no plasma por Western Blot usando anticorpo de cabra anti-CFB (Sigma Aldrich). Como mostrado na Tabela abaixo, a inibição antissenso de CFB pelos oligonucleotídeos ISIS resultou em uma redução da proteína CFB. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle com PBS. ‘n/a’ indica que as medições não foram feitas para aquela amostra.

[00532] Os níveis da proteína CFB também foram medidos no olho por Western Blot. Todos os grupos de tratamento demonstraram uma inibição de CFB em 95%, com algumas medições de amostra estando abaixo dos níveis de detecção do ensaio. Tabela 80 Inibição percentual da proteína CFB murina em camundongos C57BL/6

Exemplo 17: Efeito da inibição antissenso de CFB no modelo de camundongo NZB/W F1

[00533] O NZB/W F1 é o modelo clássico mais antigo de lúpus, em que os camundongos desenvolvem fenótipos semelhante ao lúpus grave comparáveis aos de pacientes com lúpus (Theofilopoulos, A.N. e Dixon, F.J. Advances in Immunology, vol. 37, pp. 269-390, 1985). Esses fenótipos semelhantes ao lúpus incluem linfoadenopatia, esplenomegalia, autoanticorpos antinuclear séricos elevados (ANA), incluindo IgG anti-dsDNA, cuja maior parte são IgG2a e IgG3, e glomerulonefrite mediada por complexo imune (GN) que se torna evidente aos 5-6 meses de idade, levando à insuficiência renal e morte aos 10-12 meses de idade.

Estudo 1

[00534] Um estudo foi realizado para demonstrar que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso que visam melhorar a patologia seria CFB renal no modelo de ratinho. Camundongos fêmeas NZB/W F1, com 17 semanas de idade, foram comprados da Jackson Laboratories. Grupos de 16 camundongos cada receberam doses de 100 μg/kg/semanas de ISIS 516272 ou ISIS 516323 por 20 semanas. Outro grupo de 16 camundongos recebeu doses de 100 μg/kg/semana do oligonucleotídeo controle ISIS 141923 por 20 semanas. Outro grupo de 10 camundongos recebeu doses de PBS por 20 semanas e serviu como o grupo controle aos qual todos os outros grupos foram comparados. Os pontos de avaliação terminais foram coletados 48 horas após a última dose ser injetada. Análise do RNA de CFB

[00535] O RNA foi extraído dos tecidos hepático e renal para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Os níveis de mRNA foram normalizados usando RIBOGREEN®. Como mostrado na Tabela abaixo, alguns dos oligonucleotídeos antissenso atingiram a redução do CFB murino sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 81 Inibição percentual de mRNA de CFB em camundongos NZB/W F1

Proteinúria

[00536] Espera-se proteinúria em 60% dos animais neste modelo de camundongo. A incidência cumulativa da proteinúria grave foi medida pelo cálculo da razão entre proteína total e creatinina usando um analisador clínico. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB atingiram uma redução da proteinúria nos camundongos em comparação ao controle com PBS e aos camundongos tratados com oligonucleotídeo controle. Tabela 82 Incidência cumulativa percentual de proteinúria grave em camundongos NZB/W F1

Sobrevida

[00537] A sobrevida dos camundongos foi monitorada, mantendo- se a contagem dos camundongos no início do tratamento e então novamente na semana 20. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB aumentaram a sobrevida nos camundongos em comparação ao controle com PBS e aos camundongos tratados com oligonucleotídeo controle. Tabela 83 Número de camundongos sobreviventes e % de sobrevida

Deposição glomerular

[00538] A quantidade de deposição de C3, bem como a deposição de IgG, nos glomérulos renais foram medidas por imuno-histoquímica com um anticorpo anti-C3. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB atingiram uma redução das deposições de C3 e de IgG nos glomérulos renais em comparação ao controle com PBS e aos camundongos tratados com oligonucleotídeo controle. Tabela 84 Inibição percentual da deposição glomerular em camundongos NZB/W F1

Estudo 2

[00539] Camundongos fêmeas NZB/W F1, com 16 semanas de idade, foram comprados da Jackson Laboratories. Um grupo de 10 camundongos recebeu doses de 100 μg/kg/semana de ISIS 516323 por 12 semanas. Outro grupo de 10 camundongos recebeu doses de 100 μg/kg/semana do oligonucleotídeo controle ISIS 141923 por 12 semanas. Outro grupo de 10 camundongos recebeu doses de PBS por 12 semanas e serviu como o grupo controle aos qual todos os outros grupos foram comparados. Os pontos de avaliação terminais foram coletados 48 horas após a última dose ser injetada. Análise do RNA de CFB

[00540] O RNA foi extraído dos tecidos hepático e renal para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Como mostrado na tabela abaixo, o tratamento com ISIS 516323 atingiu uma redução de CFB murino sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 85 Inibição percentual de mRNA de CFB em camundongos NZB/W F1

Proteinúria

[00541] A incidência cumulativa da proteinúria grave foi avaliada pela medição da razão entre proteína total e creatinina, bem como pela medição dos níveis totais de microalbumina. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB reduziram a proteinúria nos camundongos em comparação ao controle com PBS e aos camundongos tratados com oligonucleotídeo controle. Tabela 86 Proteinúria em camundongos NZB/W F1 medida como os níveis de microalbumina urinária (mg/dL)

Tabela 87 Proteinúria em camundongos NZB/W F1 medida como a razão entre proteína total e creatinina

Sobrevida

[00542] A sobrevida dos camundongos foi monitorada, mantendo- se a contagem dos camundongos no início do tratamento e então novamente na semana 12. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB aumentaram a sobrevida nos camundongos em comparação ao controle com PBS e aos camundongos tratados com oligonucleotídeo controle. Tabela 88 Número de camundongos sobreviventes

Exemplo 18: Efeito da inibição antissenso de CFB no modelo de camundongo MRL

[00543] O modelo de camundongo com nefrite por lúpus MRL/lpr desenvolve um fenótipo semelhante a SLE caracterizado por linfoadenopatia devido ao acúmulo de células T duplamente negativas (CD4- CD8-) e B220+. Esses camundongos exibem uma taxa de mortalidade acelerada. Além disso, os camundongos têm altas concentrações de imunoglobulinas circulantes, o que incluía níveis elevados de autoanticorpos, tais como ANA, anti-ssDNA, anti-dsDNA, anti-Sm, e fatores reumatoides, resultando em grandes quantidades de complexos imunes (Andrews, B. et al., J. Exp. Med. 148: 1198-1215, 1978).

Tratamento

[00544] Foi realizado um estudo para investigar se o tratamento com os oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB reverteriam a patologia renal no modelo de camundongo. Camundongos fêmeas MRL/lpr, com 14 semanas de idade, foram comprados da Jackson Laboratories. Um grupo de 10 camundongos recebeu doses de 50 μg/kg/semana de ISIS 516323 por 7 semanas. Outro grupo de 10 camundongos recebeu doses de 50 μg/kg/semana do oligonucleotídeo controle ISIS 141923 por 7 semanas. Outro grupo de 10 camundongos recebeu doses de PBS por 7 semanas e serviu como o grupo controle aos qual todos os outros grupos foram comparados. Os pontos de avaliação terminais foram coletados 48 horas após a última dose ser injetada. Análise do RNA de CFB

[00545] O RNA foi extraído do tecido hepático para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Como mostrado na Tabela abaixo, o ISIS 516323 reduziu o CFB sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 89 Inibição percentual de mRNA de CFB murino em camundongos MRL/lpr

Patologia renal

[00546] A patologia renal foi avaliada por dois métodos. Os cortes histológicos dos rins foram corados com Hematoxilina & Eosina. O controle com PBS demonstrou a presença de cilindros tubulares crescentes multiglomerulares, o que é um sintoma da glomeruloesclerose. Em contraste, os cortes de camundongos tratados com ISIS 516323 mostraram cilindros tubulares crescentes ausentes com alterações fibróticas mínimas da cápsula de Bowman, expansão de células mesangiais segmentares de moderada a grave e espessamento da membrana basal glomerular.

[00547] O acúmulo de C3 nos rins também foi avaliado por imuno- histoquímica com anticorpos anti-C3. Toda a pontuação de intensidade da imuno-histoquímica de C3 renal foi calculada pelo sistema de pontuação por intensidade, que foi calculado pela captação de 10 glomérulos por rim e cálculo da intensidade da coloração positiva para C3. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com o ISIS 516323 reduziu o acúmulo de C3 renal em comparação aos grupos controle. Tabela 90 Acúmulo de C3 renal em camundongos MRL/lpr

Níveis plasmáticos de C3

[00548] A redução do CFB inibe a ativação da via do complemento alternativa, impedindo o consumo de C3 e levando a uma elevação evidente dos níveis plasmáticos de C3. Os níveis plasmáticos de C3 a partir do sangramento terminal foram medidos por um analisador clínico. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com o ISIS 516323 aumentou os níveis de C3 (p< 0,001) no plasma em comparação aos grupos controle. Tabela 91 Níveis plasmáticos de C3 (mg/dL) em camundongos MRL/lpr

[00549] Os resultados indicam que o tratamento com os oligonucleotídeos antissenso direcionados ao CFB reverte a patologia renal no modelo de camundongo com lúpus. Exemplo 19: Efeito da inibição antissenso de CFB no modelo de camundongo CFH Het

[00550] O modelo de camundongo heterozigoto para CFH (CFH Het, CFH+/-) expressa uma proteína Fator H mutante em combinação com a proteína de camundongo de comprimento total (Pickering, M.C. et al., J. Exp. Med. 2007. 204: 1249-56). A histologia renal permanece normal nesses camundongos até seis meses de idade.

Estudo 1

[00551] Grupos de 8 camundongos 8 CFH+/-, com 6 semanas de idade, cada um, recebeu doses de 75 mg/kg/semana de ISIS 516323 ou ISIS 516341 por 6 semanas. Outro grupo de 8 camundongos recebeu doses de 75 μg/kg/semana do oligonucleotídeo controle ISIS 141923 por 6 semanas. Outro grupo de 8 camundongos recebeu doses de PBS por 6 semanas e serviu como o grupo controle aos qual todos os outros grupos foram comparados. Os pontos de avaliação terminais foram coletados 48 horas após a última dose ser injetada. Análise do RNA de CFB

[00552] O RNA foi extraído dos tecidos hepático e renal para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Como mostrado na Tabela abaixo, os oligonucleotídeos antissenso reduziu o CFB sobre o controle com PBS. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 92 Inibição percentual de mRNA de CFB murino em camundongos CFH+/-

Níveis plasmáticos de C3

[00553] A redução do CFB inibe a ativação da via do complemento alternativa, impedindo o consumo de C3 e levando a uma elevação evidente dos níveis plasmáticos de C3. Os níveis plasmáticos de C3 a partir da coleta de plasma terminal foram medidos por um analisador clínico. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com ISIS 516323 aumentou o C3 para níveis normais no plasma. Tabela 93 Níveis plasmáticos de C3 (mg/dL) em camundongos CFH+/-

Estudo 2

[00554] Grupos de 5 camundongos CFH+/-, cada um, receberam doses de 12,5 mg/kg/semana, 25 mg/kg/semana, 50 mg/kg/semana, 75 mg/kg/semana, ou 100 mg/kg/semana de ISIS 516323 ou ISIS 516341 por 6 semanas. Outro grupo de 5 camundongos recebeu doses de 75 μg/kg/semana do oligonucleotídeo controle ISIS 141923 por 6 semanas. Outro grupo de 5 camundongos recebeu doses de PBS por 6 semanas e serviu como o grupo controle aos qual todos os outros grupos foram comparados. Os pontos de avaliação terminais foram coletados 48 horas após a última dose ser injetada. Análise do RNA de CFB

[00555] O RNA foi extraído dos tecidos hepático e renal para análise de PCR em tempo real de CFB, usando o conjunto de sonda do primer RTS3430. Como mostrado na Tabela abaixo, os oligonucleotídeos antissenso reduziram o CFB sobre o controle com PBS de uma forma dependente de dose. Os resultados são apresentados como inibição percentual de CFB, em relação ao controle. Tabela 94 Inibição percentual de mRNA de CFB murino no fígado de camundongos CFH+/-

Níveis plasmáticos de C3

[00556] A redução do CFB inibe a ativação da via do complemento alternativa, impedindo o consumo de C3 e levando a uma elevação evidente dos níveis plasmáticos de C3. Os níveis plasmáticos de C3 a partir da coleta de plasma terminal foram medidos por um analisador clínico. Os resultados são apresentados na tabela abaixo e demonstram que o tratamento com os oligonucleotídeos ISIS direcionados ao CFB aumentaram os níveis de C3 no plasma. Tabela 95 Níveis plasmáticos de C3 (mg/dL) em camundongos CFH+/-

Exemplo 20: Efeito dos oligonucleotídeos antissenso ISIS direcionados ao CFB humano em macacos cynomolgus

[00557] Os macacos cynomolgus foram tratados com os oligonucleotídeos antissenso ISIS selecionados dos estudos descritos nos Exemplos acima. A eficácia e a tolerabilidade do oligonucleotídeo antissenso, bem como seu perfil farmacocinético no fígado e rins, foram avaliados.

[00558] Na época em que este estudo foi realizado, a sequência genômica de macaco cynomolgus não estava disponível no banco de dados do National Center for Biotechnology Information (NCBI); portanto, a reatividade cruzada com a sequência gênica de macaco cynomolgus não poderia ser confirmada. Em vez disso, as sequências dos oligonucleotídeos antissenso ISIS usadas em macacos cynomolgus foram comparadas com uma sequência de macaco rhesus para a homologia. Os oligonucleotídeos antissenso humano testados abaixo são reativos cruzadamente (com 0 ou 1 incompatibilidade) com a sequência genômica de rhesus (GENBANK n° de acesso NW_001116486.1 truncado a partir dos nucleotídeos 536000 a 545000, designado neste documento como SEQ ID NO: 3). Os sítios de iniciação e parada de cada oligonucleotídeo direcionado à SEQ ID NO: 3 estão apresentados na Tabela abaixo. "Sítio de iniciação" indica o nucleosídeo mais extremo em 5' para o qual o gapmer é direcionado na sequência gênica de macaco rhesus. 'Incompatibilidades' indicam o número de nucleobases no oligonucleotídeo humano que é incompatível com a sequência genômica de rhesus. Tabela 96 Oligonucleotídeos antissenso complementares à sequência genômica de CFB rhesus (SEQ ID NO: 3)

Tratamento

[00559] Antes do estudo, os macacos foram mantidos em quarentena por pelo menos um período de 30 dias, durante o qual os animais foram observados diariamente para a saúde geral. Os macacos tinham 2-4 anos de idade e pesavam entre 2 e 4 kg. Onze grupos de 4-6 macacos cynomolgus machos distribuídos aleatoriamente cada foram injetados, por via subcutânea, com o oligonucleotídeos ISIS ou PBS em quatro locais nas costas em uma rotação horária (isto é, esquerda, parte superior, direita e parte inferior), um local por dose. Aos macacos foram dadas quatro doses de carga de 40 mg/kg de ISIS 532800, ISIS 532809, ISIS 588540, ISIS 588544, ISIS 588548, ISIS 588550, ISIS 588553, ISIS 588555, ISIS 588848, ou ISIS 594430 pela primeira semana (dias 1, 3, 5 e 7), e foram subsequentemente dosados uma vez por semana por 12 semanas (dias 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77 e 84) com PBS ou 40 mg/kg do oligonucleotídeo ISIS. O ISIS 532770 foi testado num estudo separado com condições semelhantes com dois macacos cynomolgus machos e duas fêmeas no grupo.

Redução no Alvo Hepático Análise de RNA

[00560] No dia 86, amostras de fígado e rins foram coletadas em duplicatas (aproximadamente 250 mg cada) para análise de mRNA de CFB. As amostras foram rapidamente congeladas em nitrogênio líquido dentro de aproximadamente 10 minutos de sacrifício.

[00561] O RNA foi extraído do fígado e rins para análise de PCR em tempo real da medição da expressão de mRNA de CFB. Os resultados são apresentados como alteração percentual do mRNA, em relação ao controle com PBS, normalizados com RIBOGREEN®. Os níveis de RNA também foram normalizados com o gene constitutivo, Ciclofilina A. Os níveis de RNA foram medidos com os conjuntos de sonda do primer RTS3459, descrito acima, ou RTS4445_MGB (sequência forward CGAAGAAGCTCAGTGAAATCAA, designada neste documento como SEQ ID NO: 819; sequência reverse TGCCTGGAGGGCCCTCTT, designada neste documento como SEQ ID NO: 820; sequência da sonda AGACCACAAGTTGAAGTC, designada neste documento como SEQ ID NO: 815).

[00562] Como mostrado nas Tabelas abaixo, o tratamento com os oligonucleotídeos antissenso ISIS resultou na redução do mRNA de CFB em comparação ao controle com PBS. A análise dos níveis de mRNA de CFB revelou que vários dos oligonucleotídeos ISIS reduziram os níveis de CFB no fígado e/ou rins. Aqui '0' indica que os níveis de expressão não foram inibidos. '*' indica que o oligonucleotídeo foi testado em um estudo separado com condições semelhantes. Tabela 97 Inibição percentual do mRNA de CFB no fígado de macacos cynomolgus em relação ao controle com PBS

Tabela 98 Inibição percentual do mRNA de CFB nos rins de macacos cynomolgus em relação ao controle com PBS

Análise de proteínas

[00563] Aproximadamente 1 mL de sangue foi coletado de todos os animais disponíveis no dia 85 e colocado em tubos contendo o sal de potássio de EDTA. As amostras de sangue foram colocadas em gelo úmido ou em Kryorack imediatamente e centrifugadas (3000 rpm por 10 min a 4oC) para obter o plasma (aproximadamente 0,4 mL) dentro de 60 minutos de coleção. Os níveis plasmáticos de CFB foram medidos no plasma por imunodifusão radial (RID), usando um anticorpo policlonal anti-Fator B. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo. O ISIS 532770 foi testado num estudo separado e os níveis plasmáticos de proteína foram medidos no dia 91 ou 92 nesse grupo.

[00564] A análise do CFB plasmático revelou que vários oligonucleotídeos ISIS reduziram os níveis de proteína de uma forma sustentada. O ISIS 532770, que foi testado em um estudo separado, reduziu os níveis de proteína CFB no dia 91/92 em 50% em comparação com os valores de base de referência. A redução dos níveis plasmáticos de proteína CFB se correlaciona bem com a redução do nível de mRNA de CFB no fígado nos grupos correspondentes de animais. Tabela 99 Os níveis plasmáticos de proteína (valores de base de referência %) nos macacos cynomolgus

Estudos de tolerabilic ade Medidas de peso corporal

[00565] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS sobre a saúde geral dos animais, pesos corporais e dos órgãos foram medidos e são apresentados na Tabela abaixo. '*' indica que o oligonucleotídeo foi testado em um estudo separado com condições semelhantes e é a média das medições dos macacos machos e fêmeas. Os resultados indicam que o efeito do tratamento com os oligonucleotídeos antissenso nos pesos corporais e dos órgãos estava dentro do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso. Tabela 100 Pesos corporais finais (g) em macacos cynomolgus

Tabela 101 Pesos dos órgãos finais (g) em macacos cynomolgus

Função hepática

[00566] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função hepática, amostras de sangue foram coletadas de todos os grupos de estudo. As amostras de sangue foram coletadas das veias cefálica, safena ou femoral 48 horas após a dosagem. Os macacos foram deixados em jejum durante a noite antes da coleta de sangue. O sangue (1,5 mL) foi coletado em tubos sem anticoagulante para a separação do soro. Os tubos foram mantidos em temperatura ambiente por um período mínimo de 90 min e então centrifugados (aproximadamente 3.000 rpm por 10 minutos) para obter o soro. Os níveis de diversos marcadores de função hepática foram medidos, usando um analisador de química Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Japão).

[00567] Os níveis plasmáticos de ALT e AST foram medidos e os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em IU/L. A bilirrubina, um marcador de função hepática, foi medido de forma semelhante e é apresentado na Tabela abaixo, expresso em mg/dL. '*' indica que o oligonucleotídeo foi testado em um estudo separado com condições semelhantes e é a média das medições dos macacos machos e fêmeas. Os resultados indicam que a maioria dos oligonucleotídeos antissenso não tiveram efeito na função hepática fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso. Tabela 102 Os níveis do marcador de química do fígado no plasma de macacos cynomolgus no dia 86

Função renal

[00568] Para avaliar o efeito dos oligonucleotídeos ISIS na função renal, amostras de sangue foram coletadas de todos os grupos de estudo. As amostras de sangue foram coletadas das veias cefálica, safena ou femoral 48 horas após a dosagem. Os macacos foram deixados em jejum durante a noite antes da coleta de sangue. O sangue foi coletado em tubos sem anticoagulante para a separação do soro. Os tubos foram mantidos em temperatura ambiente por um período mínimo de 90 min e então centrifugados (aproximadamente 3.000 rpm por 10 minutos) para obter o soro. Os níveis de BUN e creatinina foram medidos usando um analisador de química Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Japão). Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos em mg/dL. '*' indica que o oligonucleotídeo foi testado em um estudo separado com condições semelhantes e é a média das medições dos macacos machos e fêmeas.

[00569] Para a urinálise, urina fresca de todos os animais foi coletada pela manhã usando uma bandeja de gaiola limpa em gelo úmido. O alimento foi removido durante a noite do dia antes da coleta de urina, mas água foi fornecida. Amostras de urina (aproximadamente 1 mL) foram analisadas para a razão entre proteína e creatinina (P/C) usando um analisador de química automatizado Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Japão). 'n.d.' indica que o nível de proteína na urina estava abaixo do limite de detecção do analisador.

[00570] Os dados químicos do plasma e da urina indicam que a maioria dos oligonucleotídeos ISIS não tem qualquer efeito sobre a função renal fora do intervalo esperado para oligonucleotídeos antissenso. Tabela 103 Níveis de marcador de química renal (mg/dL) no plasma de macaco cynomolgus no dia 86

Tabela 104 Razão entre proteína total/creatinina na urina de macacos cynomolgus

Hematologia

[00571] Para avaliar qualquer efeito dos oligonucleotídeos ISIS nos macacos cynomolgus sobre os parâmetros hematológicos, amostras de sangue de aproximadamente 0,5 mL de sangue foram coletadas de cada um dos animais do estudo disponíveis em tubos contendo K2- EDTA. As amostras foram analisadas para a contagem de células vermelhas sanguíneas (RBC), contagem de células brancas sanguíneas (WBC), contagens de células brancas sanguíneas individuais, tais como de monócitos, neutrófilos, linfócitos, bem como a contagem de plaquetas, conteúdo de hemoglobina e hematócrito, usando um analisador hematológico ADVIA120 (Bayer, EUA). Os dados são apresentados nas Tabelas abaixo. '*' indica que o oligonucleotídeo foi testado em um estudo separado com condições semelhantes e é a média das medições dos macacos machos e fêmeas.

[00572] Os dados indicam que os oligonucleotídeos não provocaram quaisquer alterações nos parâmetros hematológicos fora do intervalo esperado para os oligonucleotídeos antissenso nesta dose. Tabela 105 Contagens de células sanguíneas em macacos cynomolgus

Tabela 106 Parâmetros hematológicos em macacos cynomolgus

Medição da concentração do oligonucleotídeo

[00573] A concentração do oligonucleotídeo de comprimento total foi medida nos tecidos renal e hepático. O método usado é uma modificação dos métodos anteriormente publicados (Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999) que consiste em uma extração (líquido- líquido) de fenol-clorofórmio seguida por uma extração de fase sólida. As concentrações da amostra do tecido foram calculadas usando curvas de calibração, com um limite inferior de quantificação (LLOQ) de aproximadamente 1,14 μg/g. Os resultados são apresentados na Tabela abaixo, expressos como μg/g do tecido hepático ou renal. Tabela 107 Distribuição do oligonucleotídeo antissenso

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 20 nucleosídeos ligados e apresentando uma sequência de nucleobase consistindo na sequência citada nas SEQ ID NO: 440, 198, 228, 237, 444, 448, 450, 453, ou 455, em que o oligonucleotídeo modificado apresenta: um segmento de lacuna consistindo em dez desoxinucleosídeos ligados; um segmento de asa 5' consistindo em cinco nucleosídeos ligados; e um segmento de asa 3' consistindo em cinco nucleosídeos ligados; em que o segmento de lacuna está posicionado entre o segmento de asa 5' e o segmento de asa 3', em que cada nucleosídeo de cada segmento de asa compreende um açúcar de 2'-O-metoxietila; em que cada ligação internucleosídica do oligonucleotídeo modificado é uma ligação fosforotioato e em que cada citosina é uma 5- metilcitosina.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o oligonucleotídeo modificado consiste em 20 nucleosídeos ligados e apresenta uma sequência de nucleobases consistindo na sequência citada na SEQ ID NO: 440, em que o oligonucleotídeo modificado apresenta: um segmento de lacuna constituído por dez desoxinucleosídeos ligados; um segmento de asa 5' constituído por cinco nucleosídeos ligados; e um segmento de asa 3' constituído por cinco nucleosídeos ligados; em que o segmento de lacuna está posicionado entre o segmento de asa 5' e o segmento de asa 3', em que cada nucleosídeo de cada segmento de asa compreende um açúcar de 2'-O-metoxietila; em que cada ligação internucleosídica do oligonucleotídeo modificado é uma ligação fosforotioato e em que cada citosina é uma 5- metilcitosina.

3. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Composto caracterizado pelo fato de que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 16 nucleosídeos ligados e apresentando uma sequência de nucleobases consistindo na sequência citada na SEQ ID NO: 598, em que o oligonucleotídeo modificado apresenta: um segmento de lacuna consistindo em dez desoxinucleosídeos ligados; um segmento de asa 5' consistindo em três nucleosídeos ligados; e um segmento de asa 3' consistindo em três nucleosídeos ligados; em que o segmento de lacuna está posicionado entre o segmento de asa 5' e o segmento de asa 3'; em que o segmento de asa 5' compreende um açúcar de 2'-O-metoxietila, açúcar de 2'-O- metoxietila e açúcar cEt na direção 5' a 3'; em que o segmento de asa 3' compreende um açúcar cEt, açúcar cEt e açúcar de 2'-O-metoxietila na direção 5' a 3'; em que cada ligação internucleosídica do oligonucleotídeo modificado é uma ligação fosforotioato; e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

5. Composto, caracterizado pelo fato de que compreende um oligonucleotídeo modificado consistindo em 16 nucleosídeos ligados e apresentando uma sequência de nucleobase consistindo na sequência citada na SEQ ID NO: 549, em que o oligonucleotídeo modificado apresenta: um segmento de lacuna consistindo em dez desoxinucleosídeos ligados; um segmento de asa 5' consistindo em três nucleosídeos ligados; e 1. segmento de asa 3' consistindo em três nucleosídeos ligados; em que o segmento de lacuna está posicionado entre o segmento de asa 5' e o segmento de asa 3'; em que cada nucleosídeo de cada segmento de asa compreende um açúcar cEt; em que cada ligação internucleosídica do oligonucleotídeo modificado é uma ligação fosforotioato; e em que cada citosina é uma 5-metilcitosina.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que consiste no oligonucleotídeo modificado.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o oligonucleotídeo modificado compreende ainda um grupo conjugado.

8. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

9. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição como definida na reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para tratar uma doença associada à desregulação da via alternativa do complemento.

10. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a via alternativa do complemento é ativada mais do que o normal.

11. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a doença é degeneração macular, degeneração macular relacionada à idade (AMD), AMD úmida, AMD seca, ou Atrofia Geográfica.

12. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a doença é uma doença renal, nefrite lúpica, lúpus eritematoso sistêmico (LES), doença de depósito denso (DDD), glomerulonefrite C3 (C3GN), nefropatia CFHR5, ou síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS).