BR112014028109B1 - NEW HA BINDING AGENTS - Google Patents

Abstract

MOLÉCULA DE ANTICORPO, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR RECOMBINANTE, CÉLULA ISOLADA, MÉTODO DE FABRICAÇÃO DA MOLÉCULA DE ANTICORPO, USO DA MOLÉCULA DE ANTICORPO, MÉTODO DE DETECÇÃO DE UM VÍRUS INFLUENZA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, KIT, VACINA OU IMUNÓGENO ISOLADO, USO DA VACINA OU DO IMUNÓGENO. Esta divulgação refere-se a novos agentes peptídicos, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, que se ligam a proteína hemaglutinina de vírus influenza e métodos para a sua utilização. O presente pedido também se refere à molécula de ácido nucleico isolada, vetor recombinante, célula isolada, método de fabricação da molécula de anticorpo, uso da molécula de anticorpo, método de detecção de um vírus influenza, composição farmacêutica, kit, vacina ou imunógeno isolado, e uso da vacina ou do imunógeno.ANTIBODY MOLECULE, ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULE, RECOMBINANT VECTOR, ISOLATED CELL, METHOD OF MANUFACTURE OF ANTIBODY MOLECULE, USE OF ANTIBODY MOLECULE, METHOD OF DETECTING AN INFLUENZA VIRUS, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, KIT, VACCINE OR IMMUNOGEN ISOLATED, USE OF VACCINE OR IMMUNOGEN. This disclosure relates to novel peptide agents, e.g., antibodies and antigen-binding fragments thereof, that bind to the hemagglutinin protein of influenza viruses, and methods for their use. The present application also relates to isolated nucleic acid molecule, recombinant vector, isolated cell, method of manufacturing the antibody molecule, use of the antibody molecule, method of detecting an influenza virus, pharmaceutical composition, kit, vaccine or isolated immunogen , and use of the vaccine or immunogen.

Description

REFERÊNCIAS CRUZADAS A PEDIDOS RELACIONADOSCROSS REFERENCES TO RELATED ORDERS

[01] Este pedido é uma continuação do Pedido dos EUA de No de série 13/830.367, depositado em 14 de março de 2013 e também reivindica a prioridade ao Pedido dos EUA de No de Série 61/645.554, depositado em 10 de maio de 2012 e do Pedido dos EUA de No de série 61/716.447, depositado em 19 de outubro de 2012. As divulgações das aplicações anteriores são consideradas parte (e são incorporadas por referência em) da divulgação deste pedido.[01] This application is a continuation of U.S. Application Serial No. 13/830,367, filed March 14, 2013, and also claims priority to U.S. Application Serial No. 61/645,554, filed May 10, 2013. 2012 and U.S. Application Serial No. 61/716,447, filed October 19, 2012. The disclosures in the foregoing applications are considered part of (and are incorporated by reference in) the disclosure in this application.

CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF INVENTION

[02] Esta divulgação refere-se a novos agentes de ligação, por exemplo, agentes peptídicos, por exemplo, moléculas de anticorpo, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação ao seu antígeno, que ligam proteína hemaglutinina do vírus influenza e em formas de realização que neutralizam o vírus e métodos para a sua utilização.[02] This disclosure relates to novel binding agents, e.g., peptide agents, e.g., antibody molecules, e.g., antibodies and antigen-binding fragments thereof, that bind influenza virus hemagglutinin protein and in forms of achievement that neutralize the virus and methods for their use.

FUNDAMENTOSFUNDAMENTALS

[03] Influenza é uma doença infecciosa causada por vírus de ARN da família Orthomyxoviridae (vírus influenza). Os vírus influenza são classificados com base na proteína do núcleo em três gêneros A, B e C que são ainda divididas em subtipos determinados por glicoproteínas de envelope viral hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA). Os vírus influenza A infectam uma variedade de espécies de mamíferos e aves, enquanto que os tipos B e C são infecções altamente restritas aos seres humanos. Apenas os tipos A e B causam doença humana de qualquer preocupação.[03] Influenza is an infectious disease caused by RNA viruses of the Orthomyxoviridae family (influenza virus). Influenza viruses are classified based on core protein into three genera A, B and C which are further divided into subtypes determined by viral envelope glycoproteins hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). Influenza A viruses infect a variety of mammal and bird species, while types B and C are infections that are highly restricted to humans. Only types A and B cause human disease of any concern.

[04] As altas taxas de mutação e rearranjos genéticos frequentes dos vírus influenza contribuem para uma grande variabilidade dos antígenos HA e NA. Mutações pontuais menores causando pequenas alterações ("variação antigênica") ocorrem com relativa frequência. A variação antigênica permite que o vírus escape do reconhecimento imunológico, resultando em surtos de influenza repetidas durante anos interpandêmicos. As alterações importantes no antígeno de HA ("deslocamento antigênico") são cautilizadas por rearranjo do material genético de diferentes subtipos de influenza A. As variações antigênicas resultando em novas estirpes pandêmicas são eventos raros, ocorrendo por meio de rearranjo entre os subtipos de animais e humanos, por exemplo, em suínos co-infectados.[04] The high mutation rates and frequent genetic rearrangements of influenza viruses contribute to the great variability of HA and NA antigens. Minor point mutations causing small changes ("antigenic variation") occur relatively frequently. Antigenic variation allows the virus to escape immune recognition, resulting in repeated influenza outbreaks during interpandemic years. Major changes in the HA antigen ("antigenic shift") are caused by rearrangement of the genetic material of different subtypes of influenza A. Antigenic variations resulting in new pandemic strains are rare events, occurring through rearrangement between animal subtypes and humans, for example, in co-infected pigs.

[05] A influenza A se espalha ao redor do mundo em epidemias sazonais resultando na morte de entre 250.000 e 500.000 pessoas a cada ano e até milhões em alguns anos de pandemia. Em média, 41.400 pessoas morreram a cada ano nos Estados Unidos entre 1979 e 2001 de influenza.[05] Influenza A spreads around the world in seasonal epidemics resulting in the deaths of between 250,000 and 500,000 people each year and up to millions in some pandemic years. On average, 41,400 people died each year in the United States between 1979 and 2001 from influenza.

RESUMOSUMMARY

[06] A divulgação é baseada, pelo menos em parte, na descoberta de anticorpos anti-HA humanos que compreendem as propriedades estruturais e funcionais aqui descritas, por exemplo, anticorpos que se ligam a uma região conservada ou epítopo em vírus influenza e suas utilizações.[06] The disclosure is based, at least in part, on the discovery of human anti-HA antibodies that comprise the structural and functional properties described herein, for example, antibodies that bind to a conserved region or epitope on influenza viruses and uses thereof .

[07] Por conseguinte, a divulgação apresenta agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, ou preparações, ou preparações isoladas dos mesmos, que ligam hemaglutinina (HA) a partir de vírus influenza. Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é de amplo alcance e liga-se a mais do que uma HA, por exemplo, uma HA de um ou ambas as estirpes do Grupo 1 ou Grupo 2 de vírus influenza A e/ou uma ou mais estirpes de vírus influenza B. Portanto, em algumas formas de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, caracterizada na memória descritiva, pode tratar ou prevenir infecção por um vírus influenza do Grupo 1 e um vírus influenza do Grupo 2. Em outras formas de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, caracterizada na memória descritiva, pode tratar ou prevenir a infecção por um vírus influenza A e um vírus influenza B. Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, compartilham uma semelhança estrutural suficiente com anticorpos ou regiões variáveis divulgadas no presente documento de modo a que eles possuem atributos funcionais dos anticorpos aqui descritos. Em formas de realização, a semelhança estrutural pode ser em termos de estrutura tridimensional ou sequência de aminoácidos de cadeia linear ou ambos.[07] Therefore, the disclosure presents binding agents, for example, antibody molecules, or preparations, or isolated preparations thereof, that bind hemagglutinin (HA) from influenza viruses. In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, is broad-ranging and binds to more than one HA, e.g., an HA from one or both Group 1 or Group 1 strains. 2 of influenza A virus and/or one or more strains of influenza B virus. Therefore, in some embodiments, a binding agent, for example, an antibody molecule, characterized in the specification, can treat or prevent infection by a Group 1 influenza virus and a Group 2 influenza virus. In other embodiments, a binding agent, for example, an antibody molecule, characterized in the specification, can treat or prevent infection by an influenza A virus and a influenza B virus. The binding agents, e.g., antibody molecules, share sufficient structural similarity with antibodies or variable regions disclosed herein so that they have functional attributes of the antibodies described herein. In embodiments, the structural similarity may be in terms of three-dimensional structure or straight-chain amino acid sequence or both.

[08] Em um aspecto, a divulgação apresenta um agente de ligação anti-hemaglutinina (anti-HA), por exemplo, um agente de ligação específico, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou preparação isolada do mesmo, compreendendo uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) não produzir quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; (b) produzir menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (a); (c) prevenir a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (d) inibir a atividade fusogênica do HA-alvo; (e) tratar ou prevenir a infecção por um vírus do Grupo 1, tal como onde o vírus é um vírus H1, H5 ou H9; e tratar ou prevenir a infecção por um vírus do Grupo 2, tal como onde o vírus é um vírus H3 ou H7; (f) tratar ou prevenir a infecção por estirpes de influenza A H3N2 e H1N1; (g) ser eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrados a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (h) tratar ou prevenir a infecção por influenza A estirpes H5N1; (i) ser eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1 quando administrados a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (j) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A ser inferior a 10 μg/mL; (k) tratar ou prevenir a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (l) ser eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, quando administrados a 10 mg/kg, 6 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (m) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização de vírus influenza B, por exemplo, o vírus B/Wisconsin/1/2010, ser inferior a 10 μg/mL; (n) prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (o) ser eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou os efeitos da mesma, em um indivíduo quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (p) ligar-se a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (q) ligar-se a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, como determinado por análise estrutural, por exemplo, por cristalografia de raios-X ou espectroscopia de RMN; (r) em uma forma de realização, ligar-se a um epítopo, por exemplo, ter um epítopo que se sobreponha com ou ser o mesmo que, de um anticorpo aqui descrito, por exemplo, como determinado por análise mutacional ou análise de estrutura cristalina.[08] In one aspect, the disclosure features an anti-hemagglutinin (anti-HA) binding agent, for example, a specific binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, comprising one or more or all of the following properties: (a) not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza A virus, e.g. a Group 1 strain, e.g. an H1N1 strain, e.g. A/South Carolina/1/1918, A /Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; (b) produce fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by the described method in (a); (c) prevent infection by at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and by at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 2 influenza subtypes; (d) inhibit the fusogenic activity of the target HA; (e) treating or preventing infection with a Group 1 virus, such as where the virus is an H1, H5 or H9 virus; and treating or preventing infection with a Group 2 virus, such as where the virus is an H3 or H7 virus; (f) treat or prevent infection with H3N2 and H1N1 influenza A strains; (g) be effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (h) treat or prevent infection with influenza A H5N1 strains; (i) be effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (j) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (k) treat or prevent infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (l) be effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010, when administered at 10 mg/kg, 6 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (m) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of influenza B virus, for example, the B/Wisconsin/1/2010 virus, is less than 10 μg/mL; (n) prevent or minimize secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (o) be effective in preventing or minimizing secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or the effects thereof, in an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (p) binding to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (q) binding to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, e.g., as determined by structural analysis, for example by X-ray crystallography or NMR spectroscopy; (r) in one embodiment, bind to an epitope, e.g., have an epitope that overlaps with, or is the same as, an antibody described herein, e.g., as determined by mutational analysis or structure analysis crystal clear.

[09] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, tem uma ou mais das seguintes características: a molécula de anticorpo anti-HA previne a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; a concentração da molécula de anticorpo anti-HA necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; ou a molécula de anticorpo anti-HA se liga a um epítopo que compreende ou consiste da interface do trímero de hemaglutinina.[09] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, has one or more of the following characteristics: the anti-HA antibody molecule prevents infection by at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 1 and at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 2; the concentration of the anti-HA antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; or the anti-HA antibody molecule binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface.

[010] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, caracterizada na divulgação trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, tal como onde o vírus é um vírus H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 ou H17; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, tal como onde o vírus é um vírus H3, H4, H7, H10 ou H15.[010] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, characterized in the disclosure treats or prevents infection by a Group 1 virus, such as where the virus is an H1 virus, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 or H17; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, such as where the virus is an H3, H4, H7, H10 or H15 virus.

[011] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, caracterizada na divulgação previne a infecção por, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 subtipos de influenza do Grupo 2.[011] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, characterized in the disclosure prevents infection by at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or 11 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4, 5 or 6 Group 2 influenza subtypes.

[012] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, caracterizada na divulgação trata ou previne a infecção por uma ou mais de H1N1, H2N2, H5N1 e H9N2 e também trata ou previne a infecção por uma ou mais de H3N2 e H7N7.[012] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, characterized in the disclosure treats or prevents infection by one or more of H1N1, H2N2, H5N1 and H9N2 and also treats or prevents infection with one or more of H3N2 and H7N7.

[013] Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do Grupo 1 H1, por exemplo, tipos H1 a ou H1 b, e pelo menos uma estirpe do Grupo 2 tipos H3 ou H7.[013] In one embodiment, a binding agent, e.g., antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one Group 1 H1 strain, e.g., types H1 a or H1 b , and at least one strain of Group 2 types H3 or H7.

[014] Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do Grupo 1 H1, por exemplo, tipos H1 a ou H1 b, e pelo menos uma estirpe de influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010.[014] In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one Group 1 H1 strain, for example, types H1 a or H1 b, and at least one influenza B strain, e.g., B/Wisconsin/1/2010.

[015] Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do Grupo 2 tipo H3 ou H7 e, pelo menos, uma estirpe de influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010.[015] In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one Group 2 type H3 or H7 strain and at least one influenza B strain, for example, B/Wisconsin/1/2010.

[016] Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do Grupo 1 H1, por exemplo, tipos H1 a ou H1 b, pelo menos, uma estirpe do Grupo 2 tipos H3 ou H7 e, pelo menos, uma estirpe de influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010.[016] In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one Group 1 H1 strain, for example, types H1 a or H1 b at least one strain of Group 2 types H3 or H7 and at least one influenza B strain, e.g. B/Wisconsin/1/2010.

[017] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, caracterizada na divulgação trata ou previne a infecção por um ou mais dos vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010.[017] In one embodiment, the binding agent, e.g., an anti-HA antibody molecule, characterized in the disclosure treats or prevents infection by one or more of the influenza B viruses, e.g., B/Wisconsin/1 /2010.

[018] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo anti-HA não é uma molécula de anticorpo anti-HA anteriormente descrita na arte. Por exemplo, a molécula de anticorpo anti-HA é outra de uma ou mais ou todas de Ab 6711 (Pedido Provisório dos EUA No 61/645.453), FI6 (FI6, tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer sequência FI6 especificamente divulgada no Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813, Pedido Publicado dos EUA No 2011/0274702, WO2013/011347 ou Corti et al., Science 333:850-856, 2011, publicado online em 28 de julho de 2011; Figuras 12A a 12C), FI28 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-1558, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 2012; 337(6100):1343-1348; publicado online em 09 de agosto de 2012) ou CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246-251, 2009; publicado online em 26 de fevereiro de 2009).[018] In one embodiment, the anti-HA antibody molecule is not an anti-HA antibody molecule previously described in the art. For example, the anti-HA antibody molecule is other than one or more or all of Ab 6711 (US Provisional Application No. 61/645,453), FI6 (FI6, as used herein, refers to any FI6 sequence specifically disclosed in U.S. Published Application No. 2010/0080813, U.S. Published Application No. 2011/0274702, WO2013/011347, or Corti et al., Science 333:850-856, 2011, published online July 28, 2011; Figures 12A to 12C ), FI28 (US Published Application No. 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-1558, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16 :265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 2012; 337(6100):1343-1348; published online August 9, 2012) or CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246-251, 2009 ; published online on February 26, 2009).

[019] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, neutraliza a infecção com H1N1 e H3N2 in vitro. Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, neutraliza a infecção com H1N1 e H3N2 in vivo.[019] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes infection with H1N1 and H3N2 in vitro. In another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes infection with H1N1 and H3N2 in vivo.

[020] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, neutraliza a infecção com H5N1 in vitro. Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, neutraliza a infecção com H5N1 in vivo.[020] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes H5N1 infection in vitro. In another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes H5N1 infection in vivo.

[021] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, neutraliza a infecção com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, in vitro. Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HÁ, neutraliza a infecção com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, in vivo.[021] In one embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes infection with an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010, in vitro. In another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, neutralizes infection with an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010, in vivo.

[022] Em uma outra forma de realização, a concentração do agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é de 10 μg/mL ou menos, tal como 9 μg/mL ou menos, 8 μg/mL ou menos, 7 μg/mL ou menos, 6 μg/mL ou menos, ou 5 μg/mL ou menos.[022] In another embodiment, the concentration of the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, necessary for 50% neutralization of the influenza A virus is 10 μg/mL or less, such as 9 μg/mL or less, 8 μg/mL or less, 7 μg/mL or less, 6 μg/mL or less, or 5 μg/mL or less.

[023] Em uma outra forma de realização, a concentração do agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, necessária para 60% de neutralização do vírus influenza A, 50% de neutralização do vírus influenza A, ou 40% de neutralização do vírus influenza A é de 10 μg/mL ou menos, tal como 9 μg/mL ou menos, 8 μg/mL ou menos, 7 μg/mL ou menos, 6 μg/mL ou menos, ou 5 μg/mL ou menos.[023] In another embodiment, the concentration of the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, necessary for 60% neutralization of the influenza A virus, 50% neutralization of the influenza A virus, or 40 % neutralization of influenza A virus is 10 μg/mL or less, such as 9 μg/mL or less, 8 μg/mL or less, 7 μg/mL or less, 6 μg/mL or less, or 5 μg/mL or less mL or less.

[024] Em ainda outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, tal como com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6,0 mg/kg, 5,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, 3,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 1,0 mg/kg ou menos.[024] In yet another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, is effective for preventing or treating infection, for example, in humans or mice, such as with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 2, 0 mg/kg, 1.0 mg/kg or less.

[025] Em ainda outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1, tal como quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6,0 mg/kg, 5,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, 3,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 1,0 mg/kg ou menos.[025] In yet another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, is effective for preventing or treating infection, for example, in humans or mice, with H5N1, such as when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 2.0 mg /kg, 1.0 mg/kg or less.

[026] Em uma outra forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, é eficaz para o tratamento ou prevenção de um vírus do Grupo 1, em que o vírus do Grupo 1 é H1, H5, ou H9 e, em outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, é eficaz para o tratamento ou prevenção de um vírus do grupo 2, em que o vírus do grupo 2 é H3 e H7.[026] In another embodiment, a binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, is effective for treating or preventing a Group 1 virus, wherein the Group 1 virus is H1, H5, or H9 and, in another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, is effective for treating or preventing a group 2 virus, wherein the group 2 virus is H3 and H7.

[027] Em uma outra forma de realização, a concentração do agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, necessária para 50% de neutralização do vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é de 10 μg/mL ou menos, tal como 9 μg/mL ou menos, 8 μg/mL ou menos, 7 μg/mL ou menos, 6 μg/mL ou menos, ou 5 μg/mL ou menos.[027] In another embodiment, the concentration of the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, necessary for 50% neutralization of the influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010, is 10 μg/mL or less, such as 9 μg/mL or less, 8 μg/mL or less, 7 μg/mL or less, 6 μg/mL or less, or 5 μg/mL or less.

[028] Em uma outra forma de realização, a concentração do agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, necessária para 60% de neutralização de vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, de 50% de neutralização do vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, ou 40% de neutralização do vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é de 10 μg/mL ou menos, tal como 9 μg/mL ou menos, 8 μg/mL ou menos, 7 μg/mL ou menos, 6 μg/mL ou menos, ou 5 μg/mL ou menos.[028] In another embodiment, the concentration of the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, necessary for 60% neutralization of influenza B viruses, for example, B/Wisconsin/1/2010, 50% neutralization of influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, or 40% neutralization of influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is 10 μg/mL or less , such as 9 μg/mL or less, 8 μg/mL or less, 7 μg/mL or less, 6 μg/mL or less, or 5 μg/mL or less.

[029] Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-HA, é um anticorpo tetramérico completo, um anticorpo de cadeia simples (scFv), um F(ab')2, um fragmento de Fab ou um fragmento de Fd. Em uma outra forma de realização, a cadeia pesada da molécula de anticorpo é uma cadeia pesada Y1 e em ainda uma outra forma de realização, a cadeia leve da molécula de anticorpo é uma cadeia leve K ou uma cadeia leve À. Ainda em outra forma de realização, a molécula de anticorpo anti-HA caracterizada na divulgação é um anticorpo IgG1.[029] In another embodiment, the binding agent, for example, an anti-HA antibody molecule, is a complete tetrameric antibody, a single chain antibody (scFv), an F(ab')2, a Fab fragment or an Fd fragment. In another embodiment, the heavy chain of the antibody molecule is a Y1 heavy chain and in yet another embodiment, the light chain of the antibody molecule is a K light chain or an A light chain. In yet another embodiment, the anti-HA antibody molecule characterized in the disclosure is an IgG1 antibody.

[030] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[030] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[031] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[031] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[032] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[032] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[033] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e c ou d.[033] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and c or d.

[034] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d.[034] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d.

[035] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b.[035] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b.

[036] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b.[036] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b.

[037] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[037] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[038] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e, e f.[038] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e, and f.

[039] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem uma KD para H3 de igual ou infer ior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduo T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduo A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[039] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residue T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residue A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[040] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[040] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2 or 5 times, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[041] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e I324 de H1 HA1 que estão ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[041] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) includes one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) includes one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and I324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[042] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[042] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[043] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[043] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[044] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[044] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[045] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[045] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[046] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[046] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[047] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[047] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[048] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[048] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[049] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[049] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[050] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduo T319, R322 e 1324 de H1 HA1; ou dd) resíduo A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[050] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) residue T319, R322 and 1324 of H1 HA1; or dd) residue A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[051] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[051] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2 or 5 times, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[052] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem uma, duas, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[052] In one embodiment, the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[053] Em uma forma de realização, a molécula tem propriedades c, cc, d e dd.[053] In one embodiment, the molecule has properties c, cc, d and dd.

[054] Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, um agente de ligação específico, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, ou mais do que, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com uma região variável de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, ou mais do que, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17.[054] In one embodiment the binding agent, for example, a specific binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least one or more than, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 90, 95, 98 or 99 percent homology with a heavy chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and a light chain variable region comprising at least, or more than, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 90, 95, 98 or 99 percent homology to the light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17.

[055] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada 25 (SEQ ID NO: 25), ou uma região variável de cadeia pesada estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[055] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain variable region 25 (SEQ ID NO: 25), or a structurally or functionally related heavy chain variable region, as described herein.

[056] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) ou 45 (SEQ ID NO: 45), ou uma região de cadeia leve variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[056] In one embodiment, the antibody molecule comprises a light chain variable region 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) or 45 (SEQ ID NO: 45), or a region structurally or functionally related variable light chain as described herein.

[057] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: uma região variável de cadeia pesada 25 (SEQ ID NO: 25), ou uma região variável de cadeia pesada estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito; e uma região variável de cadeia leve 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) ou 45 (SEQ ID NO: 45), ou uma região de cadeia leve variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[057] In one embodiment, the antibody molecule comprises: a heavy chain variable region 25 (SEQ ID NO: 25), or a structurally or functionally related heavy chain variable region, as described herein; and a light chain variable region 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) or 45 (SEQ ID NO: 45), or a structurally or functionally related variable light chain region, as described herein .

[058] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo um, dois ou todos de CDR1, CDR2 e CDR3, da região variável de cadeia pesada 25 (SEQ ID NO: 25), ou uma região de cadeia pesada variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[058] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain variable region comprising one, two or all of CDR1, CDR2 and CDR3, heavy chain variable region 25 (SEQ ID NO: 25), or a structurally or functionally related variable heavy chain region as described herein.

[059] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende um, dois ou todos de CDR1, CDR2 e CDR3, da região variável de cadeia leve 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) ou 45 (SEQ ID NO: 45), ou uma sequência estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[059] In one embodiment, the antibody molecule comprises a light chain variable region comprising one, two or all of CDR1, CDR2 and CDR3, of the light chain variable region 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) or 45 (SEQ ID NO: 45), or a structurally or functionally related sequence as described herein.

[060] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: uma região variável de cadeia pesada compreendendo um, dois ou todos de CDR1, CDR2 e CDR3, da região variável de cadeia pesada 25 (SEQ ID NO: 25), ou uma região de cadeia pesada variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito; e uma região variável de cadeia leve que compreende um, dois ou todos de CDR1, CDR2 e CDR3, da região variável de cadeia leve 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) ou 45 (SEQ ID NO: 45), ou uma região de cadeia leve variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[060] In one embodiment, the antibody molecule comprises: a heavy chain variable region comprising one, two or all of CDR1, CDR2 and CDR3, heavy chain variable region 25 (SEQ ID NO: 25), or a structurally or functionally related variable heavy chain region as described herein; and a light chain variable region comprising one, two or all of CDR1, CDR2 and CDR3, light chain variable region 52 (SEQ ID NO: 52), 155 (SEQ ID NO: 155) or 45 (SEQ ID NO: :45), or a structurally or functionally related variable light chain region as described herein.

[061] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada da Figura 2 ou Figura 13 ou uma região de cadeia pesada variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[061] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain variable region of Figure 2 or Figure 13 or a structurally or functionally related variable heavy chain region, as described herein.

[062] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve da Figura 3 ou Figura 14 ou uma região de cadeia leve variável estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[062] In one embodiment, the antibody molecule comprises a light chain variable region of Figure 3 or Figure 14 or a structurally or functionally related variable light chain region, as described herein.

[063] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um, dois ou todos de, uma CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável de cadeia pesada da Figura 2 ou Figura 13, ou uma sequência estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[063] In one embodiment, the antibody molecule comprises one, two or all of, a CDR1, CDR2 and CDR3 of a heavy chain variable region of Figure 2 or Figure 13, or a structurally or functionally related sequence, such as described here.

[064] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um, dois ou todos de, uma CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável de cadeia leve da Figura 3 ou Figura 14, ou uma sequência estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[064] In one embodiment, the antibody molecule comprises one, two or all of, a CDR1, CDR2 and CDR3 of a light chain variable region of Figure 3 or Figure 14, or a structurally or functionally related sequence, such as described here.

[065] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um, dois ou todos de, HC CDR1, HC CDR2 e HC CDR3 e um, dois ou todos de, LC CDR1, LC CDR2 e LC CDR3 de um anticorpo divulgado na Tabela 3, ou uma sequência estruturalmente ou funcionalmente relacionada, tal como aqui descrito.[065] In one embodiment, the antibody molecule comprises one, two or all of, HC CDR1, HC CDR2 and HC CDR3 and one, two or all of, LC CDR1, LC CDR2 and LC CDR3 of an antibody disclosed in Table 3, or a structurally or functionally related sequence as described herein.

[066] Em uma outra forma de realização, a molécula de anticorpo compreende a cadeia leve LC45 (SEQ ID NO: 45). Em ainda outra forma de realização, o anticorpo compreende a cadeia leve LC45 e a cadeia pesada HC25 (SEQ ID NO: 25) ou 24 (SEQ ID NO: 24). Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende a cadeia leve Ab032 (SEQ ID NO: 45) e a cadeia pesada 25 (SEQ ID NO: 25). Em ainda outra forma de realização, a molécula de anticorpo compreende a cadeia leve LC52 (SEQ ID NO: 52) e a cadeia pesada HC25 (SEQ ID NO: 25).[066] In another embodiment, the antibody molecule comprises the LC45 light chain (SEQ ID NO: 45). In yet another embodiment, the antibody comprises the light chain LC45 and the heavy chain HC25 (SEQ ID NO: 25) or 24 (SEQ ID NO: 24). In one embodiment, the antibody molecule comprises the light chain Ab032 (SEQ ID NO: 45) and the heavy chain 25 (SEQ ID NO: 25). In yet another embodiment, the antibody molecule comprises the LC52 light chain (SEQ ID NO: 52) and the HC25 heavy chain (SEQ ID NO: 25).

[067] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) da cadeia pesada aqui descrita. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências de FR que diferem individualmente ou coletivamente por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservadores, de uma cadeia pesada aqui divulgada; e b) uma ou mais regiões estruturais (FR) da cadeia leve aqui divulgada. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências de FR que diferem individualmente ou coletivamente por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservadores, da cadeia leve aqui divulgada.[067] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more framework regions (FRs) of the heavy chain described herein. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3, or FR4, or FR sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g. example, conservative residues, from a heavy chain disclosed herein; and b) one or more framework regions (FR) of the light chain disclosed herein. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3, or FR4, or FR sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g. example, conservative residues, from the light chain disclosed here.

[068] Em um aspecto, uma molécula de anticorpo anti-HA caracterizada na divulgação, ou a preparação, ou a preparação isolada da mesma, compreende: (a) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo uma sequência, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 87, 90, 95, 97, 98, ou 99, por exemplo 90%, homóloga, a uma sequência consenso da cadeia pesada aqui fornecida, por exemplo, a sequência consenso de cadeia pesada fornecida na Figura 2 ou Figura 13, por exemplo, a sequência consenso de cadeia pesada fornecida na Figura 2, SEQ ID NO: 161; e (b) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo uma sequência, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 87, 90, 95, 97, 98, ou 99, por exemplo 95%, homóloga, a uma sequência consenso de cadeia leve aqui fornecida, por exemplo, a sequência consenso de cadeia leve fornecida na Figura 3 ou Figura 14, por exemplo, a sequência consenso de cadeia leve fornecida na Figura 3, SEQ ID NO: 62.[068] In one aspect, an anti-HA antibody molecule characterized in the disclosure, or the preparation, or the isolated preparation thereof, comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable domain comprising a sequence at least 60 , 70, 80, 85, 87, 90, 95, 97, 98, or 99, e.g. 90%, homologous, to a heavy chain consensus sequence provided herein, e.g., the heavy chain consensus sequence provided in Figure 2 or Figure 13, for example, the heavy chain consensus sequence provided in Figure 2, SEQ ID NO: 161; and (b) a light chain immunoglobulin variable domain comprising a sequence at least 60, 70, 80, 85, 87, 90, 95, 97, 98, or 99, for example 95%, homologous to a sequence light chain consensus provided herein, e.g., the light chain consensus sequence provided in Figure 3 or Figure 14, e.g., the light chain consensus sequence provided in Figure 3, SEQ ID NO: 62.

[069] Por exemplo, em uma forma de realização, a molécula de anticorpo anti-HA caracterizada na divulgação compreende um ou ambos de: (a) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência SEQ ID NO: 161, ou uma sequência, pelo menos, 87% idêntica à SEQ ID NO: 161; e (b) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência SEQ ID NO: 62, ou uma sequência, pelo menos, 95% idêntica à SEQ ID NO: 62.[069] For example, in one embodiment, the anti-HA antibody molecule characterized in the disclosure comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable domain comprising the sequence SEQ ID NO: 161, or a sequence at least 87% identical to SEQ ID NO: 161; and (b) a light chain immunoglobulin variable domain comprising the sequence SEQ ID NO: 62, or a sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 62.

[070] Em uma outra forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência SEQ ID NO: 161, ou uma sequência, pelo menos, 87% idêntica à SEQ ID NO: 161; e (b) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência SEQ ID NO: 62, ou uma sequência, pelo menos, 95% idêntica à SEQ ID NO: 62, em que a referida molécula de anticorpo: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e a um vírus influenza (por exemplo, uma vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004 ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); e (ii) produz menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (i).[070] In another embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable domain comprising the sequence SEQ ID NO: 161, or a sequence at least 87% identical to SEQ ID NO: 161; and (b) an immunoglobulin light chain variable domain comprising the sequence SEQ ID NO: 62, or a sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 62, wherein said antibody molecule: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the molecule antibody and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/ 08/1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/ 2010); and (ii) produces fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, when tested by the method described in (i).

[071] Em uma forma de realização, a divulgação apresenta uma molécula de anticorpo que compreende um ou ambos de: (a) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência SEQ ID NO: 161, ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 161 por não mais do que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16, por exemplo por não há mais do que 2, 3, 4, 5 ou aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos; e (b) um domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência SEQ ID NO: 62, ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 62 por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos.[071] In one embodiment, the disclosure features an antibody molecule comprising one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region comprising the sequence SEQ ID NO: 161, or a sequence that differs from SEQ ID NO: 161 by no more than 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16, for example by no more than 2, 3, 4, 5 or amino acids, e.g. conservative amino acids; and (b) a light chain immunoglobulin variable domain comprising the sequence SEQ ID NO: 62, or a sequence that differs from SEQ ID NO: 62 by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. example, conservative amino acids.

[072] Em uma forma de realização, as diferenças de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 aminoácidos, por exemplo, diferenças de aminoácidos conservativos, na região variável de imunoglobulina de cadeia pesada estão nas regiões FR do domínio variável de imunoglobulina de cadeia pesada. Em uma outra forma de realização, as diferenças de 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, diferenças de aminoácidos conservativos, no domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve estão nas regiões FR do domínio variável da imunoglobulina de cadeia leve. Em uma forma de realização, as diferenças de aminoácidos na região variável da imunoglobulina de cadeia pesada, ou na região variável de imunoglobulina de cadeia leve, são as alterações de aminoácidos conservativos.[072] In one embodiment, differences of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16 amino acids, for example, conservative amino acid differences, in heavy chain immunoglobulin variable region are in the FR regions of the heavy chain immunoglobulin variable domain. In another embodiment, differences of 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acid differences, in the light chain immunoglobulin variable domain are in the FR regions of the light chain immunoglobulin variable domain. In one embodiment, the amino acid differences in the heavy chain immunoglobulin variable region, or the light chain immunoglobulin variable region, are conservative amino acid changes.

[073] Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga a um epítopo, por exemplo, tem um epítopo que se sobreponha com ou é o mesmo que, de um anticorpo aqui descrito, por exemplo, como determinado por análise mutacional ou análise de estrutura cristalina.[073] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, binds to an epitope, for example, has an epitope that overlaps with or is the same as, of an antibody described herein, e.g. example, as determined by mutational analysis or crystal structure analysis.

[074] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) da sequência consenso da cadeia pesada aqui descrita, por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da sequência consenso de cadeia pesada aqui divulgada; e b) uma ou mais regiões estruturais (FRs) da sequência consenso de cadeia leve aqui descrita, por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais do que 1, 2, 3, 4 de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da sequência consenso de cadeia leve aqui divulgada.[074] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more framework regions (FRs) of the heavy chain consensus sequence described herein, for example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3, or FR4, or sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, from the heavy chain consensus sequence herein disclosed; and b) one or more framework regions (FRs) of the light chain consensus sequence described herein, e.g., the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, e.g. no more than 1, 2, 3, 4 of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, of the light chain consensus sequence disclosed herein.

[075] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[075] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[076] Em um outro aspecto, a divulgação apresenta um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, compreendendo uma propriedade funcional ou estrutural de Ab 044.[076] In another aspect, the disclosure presents a binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, comprising a functional or structural property of Ab 044.

[077] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compete com uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui descrita, para a ligação a um substrato, por exemplo, uma HA. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo que compreende: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 52; ou c) 044 Ab.[077] In one embodiment, the antibody molecule competes with a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule described herein, for binding to a substrate, for example, an HA. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 52; or c) 044 Ab.

[078] A HA pode ser a partir de uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma das moléculas de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo.[078] HA can be from a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04 /2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one of the antibody molecules or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, e.g., HA, by example HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry.

[079] A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[079] The antibody molecule can compete with the reference antibody in such a way that the binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[080] Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência liga-se. Em uma forma de realização da molécula de anticorpo não se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência liga-se.[080] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds. In one embodiment the antibody molecule does not bind to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[081] Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, em HA, tal como uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo que compreende: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 52; ou c) 044 Ab.[081] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, on HA, as a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule disclosed herein. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 52; or c) 044 Ab.

[082] A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004 que se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, pode ser mostrada por um ou mais de: a) análise mutacional, por exemplo ligação a HA, ou afinidade de ligação a HA, é diminuída ou abolida se um resíduo é mutado; b) análise, por exemplo comparação, a estrutura cristalina da molécula de anticorpo e HA e a estrutura cristalina de um anticorpo de referência e HA, por exemplo, para determinar os pontos de toque de cada; c) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir, por exemplo de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; e d) (c) e um ou ambos de (a) e (b).[082] HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004 that binds the same epitope, or a portion thereof, can be shown by one or more of: a) mutational analysis , for example HA binding, or HA binding affinity, is decreased or abolished if a residue is mutated; b) analyzing, for example comparing, the crystal structure of the antibody molecule and HA and the crystal structure of a reference antibody and HA, for example, to determine the touch points of each; c) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; and d) (c) and one or both of (a) and (b).

[083] A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004.[083] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, for example, HA , for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004.

[084] A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais de: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; ou c) citometria de fluxo.[084] The reduction in the ability to bind can be evaluated by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; or c) flow cytometry.

[085] A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[085] The antibody molecule can compete with the reference antibody in such a way that the binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[086] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve compreendendo, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 52.[086] In one embodiment, the binding agent, for example an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 52.

[087] Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 52, em que, cada HC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, a partir do CDR correspondente de SEQ ID NO: 25 e cada LC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, a partir do CDR correspondente de SEQ ID NO: 52.[087] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 52, wherein, each HC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 25 and each LC CDR differs by no more than 1.2 , 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 52.

[088] Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 52, em que a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, ou todos de: (i) um HC CDR1 compreendendo: S na 1a posição e A na terceira posição em HC CDR1; (ii) um HC CDR2 compreendendo um ou ambos, por exemplo, um de: V na 2a posição; ou N na 7a posição e Q na 16a posição no HC CDR2; (iii) uma CDR3 compreendendo HC: R na 3a posição (e, opcionalmente, L na posição 3a posição); (iv) um LC CDR1 compreendendo um ou ambos, por exemplo, um de: I, na 3a posição; ou D na 6a posição em LC RDC1; (v) um LC CDR2 compreendendo um, dois, ou três de, por exemplo, um de: G na 2a posição; Y na 4a posição; ou L na 5a posição em LC CDR2; (vi) um LC CDR3 compreendendo: S na 9a posição em LC CDR3.[088] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 52, wherein the antibody molecule comprises 1, 2 , 3, 4, 5, or all of: (i) an HC CDR1 comprising: S in the 1st position and A in the third position in HC CDR1; (ii) an HC CDR2 comprising one or both, for example, one of: V in the 2nd position; or N in 7th position and Q in 16th position in HC CDR2; (iii) a CDR3 comprising HC: R in the 3rd position (and, optionally, L in the 3rd position); (iv) an LC CDR1 comprising one or both, for example, one of: I, in the 3rd position; or D in 6th position in LC RDC1; (v) an LC CDR2 comprising one, two, or three of, for example, one of: G in the 2nd position; Y in 4th position; or L in 5th position in LC CDR2; (vi) an LC CDR3 comprising: S in the 9th position in LC CDR3.

[089] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 52 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[089] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising SEQ ID NO: 52 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) .

[090] Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-WLSQ-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[090] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-WLSQ-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids , for example, conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence).

[091] Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: a) LC CDR1-3, que, em conjunto, difere da AB 044 LC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos; e b) HC CDR1-3, que, em conjunto, difere da AB 044 HC CDR1 -3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos.[091] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a) LC CDR1-3, which, together, differs from AB 044 LC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, for example, 1, 2, 3, or 4, amino acids, for example, conservative amino acids; and b) HC CDR1-3, which together differs from AB 044 HC CDR1 -3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, e.g. 1, 2, 3, or 4, amino acids, e.g., conservative amino acids.

[092] Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 52.[092] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (b) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 52.

[093] Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo compreendendo um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, ou 3, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, facultativamente desde que pelo menos 1 ou 2 dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, ambos S e A não são alterados); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, 1, 2, ou 3 dos resíduos realçados são sejam alterados, por exemplo, V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N e Q não estão alterados); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não seja alterado); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-u-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos 1 ou 2 dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, I ou D não é alterado); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos 1, 2 ou 3 dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, 1, 2 ou todos G, Y e L não são alterados); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, um ou ambos os resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, S não é alterado).[093] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, or 3, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence optionally provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, for example, both S and A are not changed); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally provided that at least 1, 2, or 3 of the highlighted residues are altered, e.g., V or both N and Q or all three of V, N, and Q are unchanged); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., amino acids conservative, hence, optionally, as long as R is not changed); and (b) a segment of the light chain variable region comprising a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-u-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5 , for example, 1 or 2 amino acids, for example, conservative amino acids, hence, optionally, provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, for example, I or D is not changed); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4 or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, provided that at least 1, 2 or 3 of the highlighted residues are not changed, e.g. 1, 2 or all of G, Y and L are not changed); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4 or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. amino acids conservative, hence optionally provided that at least one or both of the highlighted residues are not changed, e.g. S is not changed).

[094] Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR, (ou seja, enquanto que em outros resíduos CDR pode ser alterado, o resíduo realçado ou combinação de resíduos não são alterados). Por exemplo, em uma forma de realização, V ou ambos N e Q, para a CDR2 de cadeia pesada não são alterados.[094] In one embodiment, a light or heavy chain CDR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR, (i.e., while in other residues CDR may be changed, the residue highlighted or combination of residues are not changed). For example, in one embodiment, V or both N and Q for the heavy chain CDR2 are not changed.

[095] Em uma forma de realização, uma CDR da cadeia leve e uma CDR da cadeia pesada incluem, cada uma, os resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas de resíduos, para esta CDR.[095] In one embodiment, a light chain CDR and a heavy chain CDR each include the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[096] Em uma forma de realização, cada uma das duas CDR na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR. Em formas de realização, ambos estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambos estão na cadeia pesada.[096] In one embodiment, each of the two CDRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[097] Em uma forma de realização, cada uma das três CDR na cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[097] In one embodiment, each of the three CDRs in the heavy chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[098] Em uma forma de realização, cada uma das três CDR na cadeia leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[098] In one embodiment, each of the three CDRs in the light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[099] Em uma forma de realização, cada uma das seis CDRs na cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[099] In one embodiment, each of the six CDRs in the heavy and light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0100]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) ambos S e u no HC CDR1 estão inalterados; (b) V ou ambos N e u ou todos os três de V, N, e Q na HC CDR2 estão inalterados; (c) R na HC CDR3 está inalterado; (d) Um ou ambos de I e D na LC CDR1 estão inalterados. (e) 1, 2 ou 3 de G, Y e L na LC CDR2 estão inalterados; ou (f) S na LC CDR3 está inalterado.[0100] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or more or all of the following properties: (a) both S and u in the HC CDR1 are unchanged; (b) V or both N and u or all three of V, N, and Q in HC CDR2 are unchanged; (c) R in HC CDR3 is unchanged; (d) One or both of I and D in LC CDR1 are unchanged. (e) 1, 2 or 3 of G, Y and L in LC CDR2 are unchanged; or (f) S in LC CDR3 is unchanged.

[0101]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5 ou todas as 6 propriedades selecionadas a partir de (a) a (f).[0101] In one embodiment, the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5 or all 6 properties selected from (a) to (f).

[0102]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (a), (b) e (c) e uma cadeia leve tendo uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (d), (e) e (f).[0102] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain having one or more properties selected from (a), (b) and (c) and a light chain having one or more properties selected from (d), (e) and (f).

[0103]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F-D-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73).[0103] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and (b) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73).

[0104]Em algumas formas de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) incapacidade de produzir quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); e (ii) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, tal como Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, como quando testado pelo método descrito em (i).[0104] In some embodiments, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (i) inability to produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least , 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain , for example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/ 5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); and (ii) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, such as Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, as when tested by the method described in (i) .

[0105]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) da SEQ ID NO: 25, por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 25; e b) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 52. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 52.[0105] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 25, for example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, from SEQ ID NO: 25; and b) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 52. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, for example, conservative residues, of SEQ ID NO: 52.

[0106]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende ainda um ou mais ou todos de: uma FR1 compreendendo a sequência Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO: 74) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que T não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que W não esteja alterado, ou caso tenha sido alterado, é outro que não R); uma FR3 compreendendo a sequência R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que um, dois ou três de I, R ou L não estejam alterados, ou caso tenha sido alterado ele é diferente de G, se R for alterado ele é outro que não P ou se L for alterado ele é diferente de A); e uma FR4 compreendendo a sequência W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí) ou W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende um ou mais ou todos de: uma FR1 compreendendo a sequência D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R -S-S (SEQ ID NO: 78) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma FR3 compreendendo a sequência G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que C não seja alterado, ou caso tenha sido alterado, é diferente de P); e uma FR4 compreendendo a sequência F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0106] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment further comprising one or more or all of: an FR1 comprising the sequence Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO :74) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, as long as T is not altered ); an FR2 comprising the sequence W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, optionally, as long as W is not altered, or if it has been altered, it is something other than R); an FR3 comprising the sequence R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as one, two or three of I, R or L are not altered, or if it has been altered it is different from G, if R is altered it is other than P or if L is changed it is different from A); and an FR4 comprising the sequence W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4 or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) or W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (or a sequence that differs by not more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, so); and (b) a light chain immunoglobulin variable region segment comprising one or more or all of: an FR1 comprising the sequence D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R -S-S (SEQ ID NO: 78) (or a sequence that differs by no more than that, 1, 2, 3, 4, or 5, for example, 1 or 2 amino acids, for example, conservative amino acids, hence, optionally, as long as R is not altered); an FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); an FR3 comprising the sequence G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as C is not changed, or if it has been changed, it is different from P); and an FR4 comprising the sequence F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so).

[0107]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR, (ou seja, enquanto que em outros resíduos FR pode ser alterado, o resíduo realçado ou combinação de resíduos não são alterados). Por exemplo, em uma forma de realização, um, dois ou três de I, R, ou L para a cadeia pesada FR3 não são alterados.[0107] In one embodiment, a light or heavy chain FR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR, (i.e., while in other residues FR may be changed, the residue highlighted or combination of residues are not changed). For example, in one embodiment, one, two, or three of I, R, or L for the FR3 heavy chain are not changed.

[0108]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve e uma FR de cadeia pesada incluem cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0108] In one embodiment, a light chain FR and a heavy chain FR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0109]Em uma forma de realização, cada um de dois FRs na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR. Em formas de realização, ambos estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambos estão na cadeia pesada.[0109] In one embodiment, each of two FRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0110]Em uma forma de realização, cada um de FR2 e FR3 na cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0110] In one embodiment, each of FR2 and FR3 in the heavy chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0111]Em uma forma de realização, cada um de FR1 e FR2 na cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados para esta FR.[0111] In one embodiment, each of FR1 and FR2 in the heavy and light chain includes one of the residues highlighted for this FR.

[0112]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na cadeia pesada FR1-4 estão inalterados.[0112] In one embodiment, all highlighted residues in the FR1-4 heavy chain are unchanged.

[0113]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na cadeia leve FR1-4 estão inalterados.[0113] In one embodiment, all highlighted residues in the FR1-4 light chain are unchanged.

[0114]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados em ambas cadeias pesada e leve FRL-4 estão inalterados.[0114] In one embodiment, all highlighted residues in both FRL-4 heavy and light chains are unchanged.

[0115]Em uma forma de realização, a sequência FR1 do segmento e região variável de cadeia pesada é Q-V-Q-L-L-E- T-G-G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-r (SEQ ID NO: 74).[0115] In one embodiment, the FR1 sequence of the heavy chain segment and variable region is Q-V-Q-L-L-E- T-G-G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-r (SEQ ID NO: 74).

[0116]Em uma forma de realização, a sequência FR1 do segmento de região variável de cadeia pesada é E-V-Q-L-L-E- S-G-G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO: 173).[0116] In one embodiment, the FR1 sequence of the heavy chain variable region segment is E-V-Q-L-L-E- S-G-G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO: 173).

[0117]Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral para se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); (b) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (a); (c) liga-se com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (d) trata ou previne a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (e) inibe a atividade fusogênica do HA-alvo; (f) trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, em que o vírus é um vírus H1, H5, ou H9; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, em que o vírus é um vírus H3 ou H7; (g) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H1N1 e H3N2; (h) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (i) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza A estirpes H5N1; (j) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1 quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (k) se liga com alta afinidade a um hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (l) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (m) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (n) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; (o) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização de vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é inferior a 10 μg/mL; (p) evita ou minimiza a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (q) é eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou os efeitos da mesma em um indivíduo quando administrada a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (r) se liga a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (s) se liga a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui descrito, por exemplo, por competição, em um ensaio ELISA.[0117] In another embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or more or all of the following properties: (a) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus , for example, a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or a strain H5N1, e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); (b) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, or CR6261, for example, when tested by the method described in (a); (c) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 2; (d) treats or prevents infection with at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 2 influenza subtypes; (e) inhibits the fusogenic activity of the target HA; (f) treats or prevents infection with a Group 1 virus, wherein the virus is an H1, H5, or H9 virus; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, where the virus is an H3 or H7 virus; (g) treats or prevents infection with influenza A strains H1N1 and H3N2; (h) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (i) treats or prevents infection with influenza A virus strains H5N1; (j) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (k) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (l) treats or prevents infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (m) is effective for the prevention or treatment of infection, e.g., in humans or mice, with an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/ kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (n) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (o) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of influenza B viruses, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is less than 10 μg/mL; (p) prevents or minimizes secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (q) is effective in preventing or minimizing secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or the effects thereof on an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg , 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (r) binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (s) binds to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114, or CR6261, e.g., when tested by a method described here, for example, by competition, in an ELISA assay.

[0118]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[0118] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[0119]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[0119] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[0120]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[0120] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[0121]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[0121] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[0122]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e c ou d.[0122] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and c or d.

[0123]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d.[0123] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d.

[0124]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b.[0124] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b.

[0125]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b.[0125] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b.

[0126]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[0126] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[0127]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e, e f.[0127] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e, and f.

[0128]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em pelo menos 2, 5, 10, ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduos T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[0128] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10, or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residues T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[0129]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[0129] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[0130]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) não inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1 que são ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0130] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) does not include one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0131]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[0131] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[0132]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[0132] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[0133]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[0133] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[0134]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[0134] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[0135]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[0135] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[0136]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[0136] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[0137]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[0137] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[0138]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[0138] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[0139]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para a H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos, 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduos HI HA1 T319, R322 e 1324; ou dd) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0139] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) HI HA1 residues T319, R322 and 1324; or dd) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0140]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[0140] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[0141]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um, dois, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[0141] In one embodiment, the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[0142]Em uma forma de realização, a molécula tem propriedades, c, cc, d e dd.[0142] In one embodiment, the molecule has properties, c, cc, d and dd.

[0143]Em um outro aspecto, a divulgação apresenta, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, que compreende uma propriedade funcional ou estrutural de Ab 069.[0143] In another aspect, the disclosure presents a binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, which comprises a functional or structural property of Ab 069.

[0144]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compete com uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui descrita, para a ligação a um substrato, por exemplo, uma HA. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo compreendendo: 1) um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155; ou c) 069 Ab.[0144] In one embodiment, the antibody molecule competes with a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule described herein, for binding to a substrate, for example, an HA. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 155; or c) 069 Ab.

[0145]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A competição entre os anticorpos da molécula e os anticorpos da molécula de referência pode de ser determinada por avaliação da capacidade de um da molécula de anticorpo ou da molécula de anticorpo de referência em diminuir ligação do outro ao substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; c) citometria de fluxo.[0145] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Competition between the antibodies of the molecule and the antibodies of the reference molecule can be determined by evaluating the ability of one of the antibody molecule or the reference antibody molecule to decrease binding of the other to the substrate, e.g., HA, e.g. , HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; c) flow cytometry.

[0146]A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais. Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga. Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo não se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga.[0146] The antibody molecule can compete with the reference antibody in such a way that the binding of the reference antibody is decreased by 50% or more. In one embodiment, the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds. In one embodiment, the antibody molecule does not bind to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[0147]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, em HA, tal como uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo compreendendo: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo que compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155; ou c) 069 Ab.[0147] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, on HA, as a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule disclosed herein. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprising one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 155; or c) 069 Ab.

[0148]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A ligação ao mesmo epítopo ou a uma porção do mesmo, pode de ser mostrada por um ou mais de: a) análise mutacional, por exemplo, ligação ou falta dela ao mutante de HA, por exemplo, se um resíduo é mutado; b) análise, por exemplo, comparação, da estrutura cristalina da molécula de anticorpo e HA e a estrutura cristalina de um anticorpo de referência e HA, por exemplo, para determinar os pontos de toque de cada; c) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; ou d) (c) e um ou ambos de (a) e (b);[0148] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Binding to the same epitope, or a portion thereof, may be shown by one or more of: a) mutational analysis, for example, binding or lack thereof to the HA mutant, for example, if a residue is mutated; b) analyzing, for example comparing, the crystal structure of the antibody molecule and HA and the crystal structure of a reference antibody and HA, for example, to determine the touch points of each; c) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/ 1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; or d) (c) and one or both of (a) and (b);

[0149]A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; c) citometria de fluxo. A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[0149] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, for example, HA , for example, HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or a strain H5N1, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; c) flow cytometry. The antibody molecule may compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[0150]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 155.[0150] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 155.

[0151]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 155, em que cada HC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 25 e cada LC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 155.[0151] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 155, wherein each HC CDR differs by no more than that 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 25 and each LC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 155.

[0152]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 155; em que a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, ou todos de: (i) uma HC CDR1 que compreende: S na 1a posição e A na 3a posição na HC CDR1; (ii) uma HC CDR2 que compreende um ou ambos, por exemplo, um dos seguintes: V na 2a posição; ou N na 7a posição e Q na 16a posição na HC CDR2; (iii) uma HC CDR3 compreendendo: R na 3a posição (e, opcionalmente, L, na 3a posição); (iv) uma LC CDR1 que compreende um ou ambos, por exemplo, um de: I na 3a posição; ou E na 6a posição na LC RDC1; (v) uma LC CDR2 que compreende um, dois ou três de, por exemplo, um de: G na 2a posição; Y na 4a posição; ou G na 5a posição na LC CDR2; (vi) uma LC CDR3 que compreende: S na 9a posição na LC CDR3;[0152] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 155; wherein the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, or all of: (i) an HC CDR1 comprising: S in the 1st position and A in the 3rd position in the HC CDR1; (ii) an HC CDR2 comprising one or both, for example, one of the following: V in 2nd position; or N in 7th position and Q in 16th position in HC CDR2; (iii) an HC CDR3 comprising: R in the 3rd position (and, optionally, L, in the 3rd position); (iv) an LC CDR1 comprising one or both, for example, one of: I in the 3rd position; or E in 6th position in LC RDC1; (v) an LC CDR2 comprising one, two or three of, for example, one of: G in the 2nd position; Y in 4th position; or G in 5th position in LC CDR2; (vi) an LC CDR3 comprising: S at the 9th position in the LC CDR3;

[0153]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0153] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25 ( or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising SEQ ID NO: 155 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) .

[0154]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155.[0154] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (b) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 155.

[0155]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172) ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0155] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172) or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5 , for example, 1 or 2 amino acids, for example, conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence).

[0156]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: a) LC CDR1-3, que, em conjunto, difere de AB 069 LC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos; e b) HC CDR1-3, que, em conjunto, difere de AB 069 HC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos.[0156] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a) LC CDR1-3, which, together, differs from AB 069 LC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, for example, 1, 2, 3, or 4, amino acids, for example, conservative amino acids; and b) HC CDR1-3, which together differs from AB 069 HC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, e.g. 1, 2, 3, or 4, amino acids, e.g., conservative amino acids.

[0157]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, ou 3, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que pelo menos um ou dois dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, ambos S e A não estão alterados); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, 1, 2 ou 3 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N e Q não estão alterados); uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não seja alterado); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172) ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que pelo menos 1 ou 2 dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, I ou E não é alterado); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente desde que, pelo menos 1, 2, ou 3 dos resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, 1, 2 ou todos G, Y e L não são alterados); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos, conservadores, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, um ou ambos os resíduos realçados não sejam alterados, por exemplo, S não é alterado).[0157] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by not more than, 1, 2, or 3, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, provided that at least one or two of the highlighted residues are not changed, for example, both S and A are not changed); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally provided that at least 1, 2 or 3 of the highlighted residues are not changed, e.g. V or both N and Q or all three of V, N and Q are not changed); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, optionally, as long as R is not changed); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172) or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5 , for example, 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, optionally, provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, e.g. I or E is not changed); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , hence, optionally provided that at least 1, 2, or 3 of the highlighted residues are not changed, for example, 1, 2 or all of G, Y and L are not changed); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., amino acids, conservative, hence optionally as long as at least one or both of the highlighted residues are not changed, e.g. S is not changed).

[0158]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR, (ou seja, enquanto que outros resíduos nesta CDR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados).[0158] In one embodiment, a light or heavy chain CDR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR, (i.e., while other residues in this CDR may be altered, the residue highlighted or combination of residues, are not changed).

[0159]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve e uma CDR da cadeia pesada incluem cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0159] In one embodiment, a light chain CDR and a heavy chain CDR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0160]Em uma forma de realização, cada uma das duas CDR na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0160] In one embodiment, each of the two CDRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0161]Em uma forma de realização, cada uma das três CDR de cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0161] In one embodiment, each of the three heavy chain CDRs includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0162]Em uma forma de realização cada uma das três CDR na cadeia leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0162] In one embodiment each of the three CDRs in the light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0163]Em uma forma de realização cada uma das seis CDRs da cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0163] In one embodiment each of the six CDRs of the heavy and light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0164]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) ambos S e A, em HC CDR1 estão inalterados. (b) V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N, e Q na HC CDR2 de estão inalterados. (c) R na HC CDR3 está inalterado. (d) um ou ambos de I e E na LC CDR1 estão inalterados. (e) 1, 2 ou 3 de G, Y e L na LC CDR2 estão inalterados; (f) S na LC CDR3 está inalterado.[0164] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or more or all of the following properties: (a) both S and A in HC CDR1 are unchanged. (b) V or both N and Q or all three of V, N, and Q in HC CDR2 are unchanged. (c) R in HC CDR3 is unchanged. (d) one or both of I and E in LC CDR1 are unchanged. (e) 1, 2 or 3 of G, Y and L in LC CDR2 are unchanged; (f) S in LC CDR3 is unchanged.

[0165]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou todas as propriedades selecionadas a partir de (a) a (f).[0165] In one embodiment, the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all properties selected from (a) to (f).

[0166]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo um uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (a), (b) e (c) e uma cadeia leve tendo uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (d), (e) e (f).[0166] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain having one or more properties selected from (a), (b) and (c) and a light chain having one or more properties selected from of (d), (e) and (f).

[0167]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F-E-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73).[0167] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-E-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 172); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73).

[0168]Em algumas formas de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); e (ii) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, tal como Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, como quando testado pelo método descrito em (i).[0168] In some embodiments, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5 /2005 or A/Vietnam/1203/2004, or from an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); and (ii) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, such as Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, as when tested by the method described in (i) .

[0169]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 25. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 25; e b) uma ou mais regiões estruturais (FRs) da SEQ ID NO: 155. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 155.[0169] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more structural regions (FRs) of SEQ ID NO: 25. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, from SEQ ID NO: 25; and b) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 155. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more of 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, for example, conservative residues, of SEQ ID NO: 155.

[0170]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende ainda um ou mais ou todos de: uma FR1 compreendendo a sequência Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T (SEQ ID NO: 74) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que T não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2, os aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que W não esteja alterado ou caso alterado, seja outro que não R); uma FR3 compreendendo a sequência R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que um, dois ou três de I_, R ou L não estejam alterados, ou caso I esteja alterado ele é outro que não G, se R estiver alterado ele é outro que não P ou se L estiver alterado, ele é outro que não A); e (b) o segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreende uma ou mais ou todos de: uma FR1 compreendendo a sequência D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma FR3 compreendendo a sequência G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que C não esteja alterado, ou caso esteja alterado é outro que não P); e uma FR4 compreendendo a sequência F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0170] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment further comprising one or more or all of: an FR1 comprising the sequence Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T (SEQ ID NO :74) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, as long as T is not altered ); an FR2 comprising the sequence W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2, amino acids, e.g. example, conservative amino acids, hence, optionally, as long as W is not altered or, if altered, is something other than R); an FR3 comprising the sequence R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as one, two or three of I_, R or L are not altered, or if I is altered it is other than G, if R is altered it is other than P or if L is changed, it is something other than A); and (b) the light chain immunoglobulin variable region segment comprises one or more or all of: an FR1 comprising the sequence D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (or a sequence differing by no more than, 1 , 2, 3, 4 or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally, as long as R is not changed); an FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); an FR3 comprising the sequence G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as C is not altered, or if it is altered, it is something other than P); and an FR4 comprising the sequence F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so).

[0171]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR, (ou seja, enquanto que outros resíduos nesta FR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados). Por exemplo, em uma forma de realização, um, dois ou três de I, R, ou L para a FR3 de cadeia pesada não estão alterados.[0171] In one embodiment, a light or heavy chain FR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR, (i.e., while other residues in this FR may be altered, the residue highlighted or combination of residues, are not changed). For example, in one embodiment, one, two, or three of I, R, or L for the heavy chain FR3 are not changed.

[0172]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve e uma FR de cadeia pesada incluem cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0172] In one embodiment, a light chain FR and a heavy chain FR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0173]Em uma forma de realização, cada uma das duas FRs na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0173] In one embodiment, each of the two FRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0174]Em uma forma de realização, cada uma de FR2 e FR3 de cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0174] In one embodiment, each of heavy chain FR2 and FR3 includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0175]Em uma forma de realização, cada uma de FR1 e FR2 de cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados para esta FR.[0175] In one embodiment, each of heavy and light chain FR1 and FR2 includes one of the residues highlighted for this FR.

[0176]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na FR1-4 de cadeia pesada estão inalterados.[0176] In one embodiment, all highlighted residues in heavy chain FR1-4 are unchanged.

[0177]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na FR1-4 de cadeia leve estão inalterados.[0177] In one embodiment, all highlighted residues in light chain FR1-4 are unchanged.

[0178]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados em ambas FRL-4 de cadeia pesada e leve estão inalterados.[0178] In one embodiment, all highlighted residues in both heavy and light chain FRL-4 are unchanged.

[0179]Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral para recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/l/2010); (b) produz menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (a); (c) liga-se com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (d) trata ou previne a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (e) inibe a atividade fusogênica da HA-alvo; (f) trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, em que o vírus é um vírus H1, H5, ou H9; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, em que o vírus é um vírus H3 ou H7; (g) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H1N1 e H3N2; (h) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (i) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza A estirpes H5N1; (j) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1 quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (k) se liga com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (l) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (m) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (n) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; (o) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização de vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é inferior a 10 μg/mL; (p) evita ou minimiza a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (q) é eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou os efeitos da mesma, em um indivíduo quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (r) se liga a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (s) se liga a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui descrito, por exemplo, por competição, em um ensaio ELISA.[0179] In another embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or more or all of the following properties: (a) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, for example, a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain , e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or from an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/l/2010); (b) produces fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, or CR6261, for example, when tested by the method described in (a ); (c) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 2; (d) treats or prevents infection with at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 2 influenza subtypes; (e) inhibits the fusogenic activity of the target HA; (f) treats or prevents infection with a Group 1 virus, wherein the virus is an H1, H5, or H9 virus; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, where the virus is an H3 or H7 virus; (g) treats or prevents infection with influenza A strains H1N1 and H3N2; (h) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (i) treats or prevents infection with influenza A virus strains H5N1; (j) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (k) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010; (l) treats or prevents infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (m) is effective for the prevention or treatment of infection, e.g., in humans or mice, with an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/ kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (n) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (o) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of influenza B viruses, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is less than 10 μg/mL; (p) prevents or minimizes secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (q) is effective to prevent or minimize secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or the effects thereof, in an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (r) binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (s) binds to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114, or CR6261, e.g., when tested by a method described here, for example, by competition, in an ELISA assay.

[0180]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[0180] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[0181]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[0181] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[0182]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[0182] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[0183]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[0183] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[0184]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: um; e c ou d.[0184] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: one; and c or d.

[0185]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d.[0185] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d.

[0186]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b.[0186] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b.

[0187]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b.[0187] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b.

[0188]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[0188] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[0189]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e, e f.[0189] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e, and f.

[0190]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos, 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduos T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[0190] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residues T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[0191]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[0191] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[0192]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) não inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1 que são ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0192] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) does not include one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0193]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[0193] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[0194]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[0194] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[0195]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[0195] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[0196]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[0196] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[0197]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[0197] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[0198]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[0198] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[0199]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[0199] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[0200]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[0200] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[0201]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduos HI HA1 T319, R322 e 1324; ou dd) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0201] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) HI HA1 residues T319, R322 and 1324; or dd) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0202]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[0202] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[0203]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo tem um, dois, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[0203] In one embodiment the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[0204]Em uma forma de realização, a molécula tem propriedades, c, cc, d e dd.[0204] In one embodiment, the molecule has properties, c, cc, d and dd.

[0205]Em uma forma de realização, a molécula tem propriedades, c, cc, d e dd.[0205] In one embodiment, the molecule has properties, c, cc, d and dd.

[0206]Em um outro aspecto, a divulgação apresenta, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, que compreende uma propriedade funcional ou estrutural de Ab 032.[0206] In another aspect, the disclosure presents, a binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, which comprises a functional or structural property of Ab 032.

[0207]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compete com uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui descrita, para a ligação a um substrato, por exemplo, uma HA. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo que compreende: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45; ou c) Ab 032.[0207] In one embodiment, the antibody molecule competes with a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule described herein, for binding to a substrate, for example, an HA. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a light chain variable region segment comprising SEQ ID NO: 45; or c) Ab 032.

[0208]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A competição entre os anticorpos da molécula e os anticorpos da molécula de referência, pode de ser determinada por avaliação da capacidade de um da molécula de anticorpos ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro ao substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir da estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou da estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais de: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo.[0208] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Competition between the antibodies of the molecule and the antibodies of the reference molecule can be determined by evaluating the ability of one of the antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to the substrate, for example, HA, by for example, HA1 or HA5, for example, from the H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or from the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry.

[0209]A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[0209] The antibody molecule can compete with the reference antibody in such a way that the binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[0210]Em uma forma de realização, da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga. Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo não se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga.[0210] In one embodiment, the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds. In one embodiment, the antibody molecule does not bind to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[0211]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, em HA, tal como uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo que compreende: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45; ou c) Ab 32.[0211] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, on HA, as a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule disclosed herein. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 45; or c) Ab 32.

[0212]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A ligação ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, pode de ser mostrada por um ou mais dos seguintes: a) análise mutacional, por exemplo, ligação a HA, ou afinidade de ligação para HA, é diminuída ou abolida se um resíduo é mutado; b) análise, por exemplo, comparação, a estrutura cristalina da molécula de anticorpo e HA e a estrutura cristalina de um anticorpo de referência e HA, por exemplo, para determinar os pontos de toque de cada; c) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou da estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; e d) (c) e um ou ambos de (a) e (b);[0212] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Binding to the same epitope, or a portion thereof, may be shown by one or more of the following: a) mutational analysis, for example, binding to HA, or binding affinity for HA, is diminished or abolished if a residue is mutated; b) analyzing, for example comparing, the crystal structure of the antibody molecule and HA and the crystal structure of a reference antibody and HA, for example, to determine the touch points of each; c) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/ 1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; and d) (c) and one or both of (a) and (b);

[0213]A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais de: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo.[0213] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, for example, HA , for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. A Reduction in the ability to bind can be assessed, for example, by one or more of: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry.

[0214]A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[0214] The antibody molecule can compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[0215]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45.[0215] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45.

[0216]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45; em que cada HC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 25 e cada LC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 45.[0216] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45; wherein each HC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g., conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 25 and each LC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 45.

[0217]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende, pelo menos, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45; em que a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, ou todos de: (i) uma HC CDR1 que compreende: S na 1a posição e A na 3a posição na HC CDR1; (ii) uma HC CDR2 que compreende um ou ambos, por exemplo, um dos seguintes: V na 2a posição; ou N na 7a posição e Q na 16a posição na HC CDR2; (iii) uma HC CDR3 que compreende: R na 3a posição (e, opcionalmente, G, na 3a posição); (iv) uma LC CDR1 que compreende: I na 3a posição; (v) uma LC CDR2 que compreende um, dois, ou três dos, por exemplo, um de: G na 2a posição; Y na 4a posição; ou G na 5a posição na LC CDR2; (vi) uma LC CDR3 que compreende: S na 9a posição na LC CDR3;[0217] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95 , 98 or 99 percent homology with SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45; wherein the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, or all of: (i) an HC CDR1 comprising: S in the 1st position and A in the 3rd position in the HC CDR1; (ii) an HC CDR2 comprising one or both, for example, one of the following: V in 2nd position; or N in 7th position and Q in 16th position in HC CDR2; (iii) an HC CDR3 comprising: R in the 3rd position (and, optionally, G, in the 3rd position); (iv) an LC CDR1 comprising: I in 3rd position; (v) an LC CDR2 comprising one, two, or three of, for example, one of: G in the 2nd position; Y in 4th position; or G in 5th position in LC CDR2; (vi) an LC CDR3 comprising: S at the 9th position in the LC CDR3;

[0218]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0218] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25 ( or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising SEQ ID NO: 155 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) .

[0219]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 25; e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 155.[0219] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and (b) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 155.

[0220]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0220] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., amino acids conservatives, hence); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence).

[0221]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: a) LC CDR1-3, que, em conjunto, difere e AB 032 LC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos; e b) HC CDR1-3, que, em conjunto, difere da AB 032 HC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos.[0221] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a) LC CDR1-3, which together differs and AB 032 LC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, for example, 1, 2, 3, or 4, amino acids, for example, conservative amino acids; and b) HC CDR1-3, which together differs from AB 032 HC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, e.g. 1, 2, 3, or 4, amino acids, e.g., conservative amino acids.

[0222]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, ou 3, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que pelo menos um ou dois dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, ambos S e A não estão alterados); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, desde que, por exemplo, pelo menos, 1, 2, ou 3 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N e Q não estão alterados); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não esteja alterado); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência: Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente desde que, pelo menos, 1 ou 2 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, I não está alterado); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, 1, 2, ou 3 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, 1, 2 ou todos G, Y e L não estão alterados); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que pelo menos um ou ambos os resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, S não está alterado).[0222] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by not more than, 1, 2, or 3, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, provided that at least one or two of the highlighted residues are not changed, for example, both S and A are not changed); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, provided that, for example, at least 1, 2, or 3 of the highlighted residues are not changed, e.g., V or both N and Q or all three of V, N, and Q are not changed) ; a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., amino acids conservative, hence, optionally, as long as R is not changed); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence: Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) or a sequence differing by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, e.g. I is not changed); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , hence, optionally, provided that at least 1, 2, or 3 of the highlighted residues are not changed, for example, 1, 2 or all of G, Y and L are not changed); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally provided that at least one or both of the highlighted residues are not altered, e.g., S is not altered).

[0223]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR, (ou seja, enquanto outros resíduos nesta CDR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados).[0223] In one embodiment, a light or heavy chain CDR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR, (i.e., while other residues in this CDR may be altered, the highlighted residue or combination of residues, are not altered).

[0224]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve e uma CDR da cadeia pesada inclui cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0224] In one embodiment, a light chain CDR and a heavy chain CDR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0225]Em uma forma de realização, cada uma das duas CDR na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0225] In one embodiment, each of the two CDRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0226]Em uma forma de realização, cada uma das três CDR de cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0226] In one embodiment, each of the three heavy chain CDRs includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0227]Em uma forma de realização cada uma das três CDR na cadeia leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0227] In one embodiment each of the three CDRs in the light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0228]Em uma forma de realização cada uma das seis CDRs da cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0228] In one embodiment each of the six CDRs of the heavy and light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0229]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) ambos S e A, em HC CDR1 estão inalterados; (b) V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N, e Q na HC CDR2 estão inalterados; (c) R na HC CDR3 permanece inalterado; (d) I na LC CDR1 permanece inalterado; (e) 1, 2 ou 3 de G, Y e L em LC CDR2 estão inalterados; (f) S na LC CDR3 permanece inalterado.[0229] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or more or all of the following properties: (a) both S and A in HC CDR1 are unchanged; (b) V or both N and Q or all three of V, N, and Q in HC CDR2 are unchanged; (c) R in HC CDR3 remains unchanged; (d) I in LC CDR1 remains unchanged; (e) 1, 2 or 3 of G, Y and L in LC CDR2 are unchanged; (f) S in LC CDR3 remains unchanged.

[0230]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou todas as propriedades selecionadas a partir de (a) a (f).[0230] In one embodiment, the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all of the properties selected from (a) to (f).

[0231]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo um uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (a), (b) e (c) e uma cadeia leve tendo uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (d), (e) e (f).[0231] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain having one or more properties selected from (a), (b) and (c) and a light chain having one or more properties selected from of (d), (e) and (f).

[0232]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73).[0232] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73).

[0233]Em algumas formas de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); e (ii) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, tal como Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, como quando testado pelo método descrito em (i).[0233] In some embodiments, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5 /2005 or A/Vietnam/1203/2004, or from an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); and (ii) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, such as Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, as when tested by the method described in (i) .

[0234]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 25. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 25; e b) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 45. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 45.[0234] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 25. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, from SEQ ID NO: 25; and b) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 45. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more of 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, for example, conservative residues, of SEQ ID NO: 45.

[0235]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende ainda um ou mais ou todos de: uma FRL compreendendo a sequência Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-T (SEQ ID NO: 74) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que T não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2, os aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que W não esteja alterado ou caso alterado, seja outro que não R); uma FR3 compreendendo a sequência R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que um, dois ou três de I_, R ou L não estejam alterados, ou se caso I estiver alterado ele é outro que não L, se R estiver alterado ele é outro que não P ou se L estiver alterado ele é outro que não A); e uma FR4 compreendendo a sequência W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí) ou W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) o segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreende uma ou mais ou todos: uma FR1 compreendendo a sequência D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma FR3 compreendendo a sequência G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que C não esteja alterado, ou se caso alterado, seja outro que não P); e uma FR4 compreendendo a sequência F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0235] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment further comprising one or more or all of: an FRL comprising the sequence Q-V-Q-L-L-E-T-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-T (SEQ ID NO :74) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, as long as T is not altered ); an FR2 comprising the sequence W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2, amino acids, e.g. example, conservative amino acids, hence, optionally, as long as W is not altered or, if altered, is something other than R); an FR3 comprising the sequence R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as one, two or three of I_, R or L are not altered, or if I is altered it is other than L, if R is altered it is other than P or if L is changed it is something other than A); and an FR4 comprising the sequence W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , hence) or W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); and (b) the light chain immunoglobulin variable region segment comprises one or more or all of: an FR1 comprising the sequence D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (or a sequence differing by no more than, 1, 2, 3, 4 or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally, as long as R is not altered); an FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); an FR3 comprising the sequence G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence, optionally, as long as C is not altered, or if altered, is something other than P); and an FR4 comprising the sequence F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so).

[0236]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR, (ou seja, enquanto que outros resíduos nesta FR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados). Por exemplo, em uma forma de realização, um, dois ou três de I, R, ou L para a FR3 de cadeia pesada não está alterado.[0236] In one embodiment, a light or heavy chain FR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR, (i.e., while other residues in this FR may be altered, the residue highlighted or combination of residues, are not changed). For example, in one embodiment, one, two, or three of I, R, or L for the heavy chain FR3 is not changed.

[0237]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve e uma FR de cadeia pesada inclui cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0237] In one embodiment, a light chain FR and a heavy chain FR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0238]Em uma forma de realização, cada uma das duas FRs na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0238] In one embodiment, each of the two FRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0239]Em uma forma de realização, cada uma de FR2 e FR3 da cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0239] In one embodiment, each of FR2 and FR3 of the heavy chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0240]Em uma forma de realização, cada uma de FR1 e FR2 da cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados para esta FR.[0240] In one embodiment, each of FR1 and FR2 of the heavy and light chain includes one of the residues highlighted for this FR.

[0241]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na FR1-4 de cadeia pesada estão inalterados.[0241] In one embodiment, all highlighted residues in heavy chain FR1-4 are unchanged.

[0242]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados na FR1-4 de cadeia leve estão inalterados.[0242] In one embodiment, all highlighted residues in light chain FR1-4 are unchanged.

[0243]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados em ambos FRL-4 de cadeia pesada e leve estão inalterados.[0243] In one embodiment, all highlighted residues in both heavy and light chain FRL-4 are unchanged.

[0244]Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral para recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/l/2010); (b) produz menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (a); (c) liga-se com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (d) trata ou previne a infecção por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (e) inibe a atividade fusogênica da HA-alvo; (f) trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, em que o vírus é um vírus H1, H5, ou H9; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, em que o vírus é um vírus H3 ou H7; (g) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H1N1 e H3N2; (h) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (i) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza A estirpes H5N1; (j) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (k) se liga com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (l) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (m) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (n) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; (o) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização de vírus de influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é inferior a 10 μg/mL; (p) evita ou minimiza a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (q) é eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos, em um indivíduo quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (r) se liga a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (s) se liga a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui descrito, por exemplo, por competição, em um ensaio ELISA.[0244] In another embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or more or all of the following properties: (a) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, for example, a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain , e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or from an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/l/2010); (b) produces fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, or CR6261, for example, when tested by the method described in (a ); (c) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4 or 5 subtypes of Group 2 influenza; (d) treats or prevents infection with at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 2 influenza subtypes; (e) inhibits the fusogenic activity of the target HA; (f) treats or prevents infection with a Group 1 virus, wherein the virus is an H1, H5, or H9 virus; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, where the virus is an H3 or H7 virus; (g) treats or prevents infection with influenza A strains H1N1 and H3N2; (h) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (i) treats or prevents infection with influenza A virus strains H5N1; (j) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg /kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (k) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010; (l) treats or prevents infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (m) is effective for the prevention or treatment of infection, e.g., in humans or mice, with an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/ kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (n) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (o) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of influenza B viruses, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is less than 10 μg/mL; (p) prevents or minimizes secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (q) is effective to prevent or minimize secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects, in an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (r) binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (s) binds to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114, or CR6261, e.g., when tested by a method described here, for example, by competition, in an ELISA assay.

[0245]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[0245] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[0246]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro, ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[0246] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four, or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[0247]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[0247] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[0248]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[0248] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[0249]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: um; e c ou d.[0249] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: one; and c or d.

[0250]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d.[0250] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d.

[0251]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b.[0251] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b.

[0252]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b.[0252] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b.

[0253]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[0253] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[0254]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e e f.[0254] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e and f.

[0255]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduo T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduo A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[0255] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residue T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residue A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[0256]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[0256] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[0257]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) não inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1 que são ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0257] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) does not include one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0258]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[0258] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[0259]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[0259] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[0260]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[0260] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[0261]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[0261] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[0262]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[0262] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[0263]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[0263] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[0264]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[0264] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[0265]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[0265] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[0266]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um de: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduo T319, R322 e 1324 de H1 HA1; ou dd) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0266] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) residue T319, R322 and 1324 of H1 HA1; or dd) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0267]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[0267] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[0268]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo tem um, dois, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[0268] In one embodiment the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[0269]Em uma forma de realização, a molécula tem as propriedades c, cc, d e dd.[0269] In one embodiment, the molecule has the properties c, cc, d and dd.

[0270]Em um outro aspecto, a divulgação apresenta, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, que compreende uma propriedade funcional ou estrutural de Ab 031.[0270] In another aspect, the disclosure presents, a binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, which comprises a functional or structural property of Ab 031.

[0271]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compete com uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui descrita, para a ligação a um substrato, por exemplo, uma HA. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo compreendendo: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento da região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 24; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45; ou c) Ab 031.[0271] In one embodiment, the antibody molecule competes with a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule described herein, for binding to a substrate, for example, an HA. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 45; or c) Ab 031.

[0272]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A competição entre os anticorpos da molécula e os anticorpos da molécula de referência, pode ser determinada por avaliação da capacidade de uma da molécula de anticorpo ou da molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro ao substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir da estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou da estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo.[0272] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Competition between the antibodies of the molecule and the antibodies of the reference molecule can be determined by evaluating the ability of one of the antibody molecule or the reference antibody molecule to decrease the binding of the other to the substrate, e.g., HA, by for example, HA1 or HA5, for example, from the H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or from the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. Reduced binding capacity can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry.

[0273]A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[0273] The antibody molecule can compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[0274]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga.[0274] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[0275]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo não se liga ao mesmo epítopo, uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga.[0275] In one embodiment the antibody molecule does not bind to the same epitope, a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[0276]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, em HA, tal como uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo que compreende: 1) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D- G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e ii) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L- E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R- T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) uma molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (i) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 24; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45; ou c) Ab 031.[0276] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, on HA as a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule disclosed herein. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising: 1) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R- S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and ii) a light chain variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F- N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). b) an antibody molecule comprises one or both of: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24; and (ii) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 45; or c) Ab 031.

[0277]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A ligação ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, pode ser mostrada por um ou mais de: a) análise mutacional, por exemplo, a ligação a HA, ou afinidade de ligação a HA, é diminuída ou abolida se um resíduo é mutado; b) análise, por exemplo, comparação, estrutura cristalina da molécula de anticorpo e HA e estrutura cristalina de um anticorpo de referência e HA, por exemplo, para determinar os pontos de toque de cada; c) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; d) (c) e um ou ambos de (a) e (b).[0277] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Binding to the same epitope, or a portion thereof, can be shown by one or more of: a) mutational analysis, for example, HA binding, or HA binding affinity, is diminished or abolished if a residue is mutated ; b) analyzing, for example, comparing, crystal structure of the antibody molecule and HA and crystal structure of a reference antibody and HA, for example, to determine the touch points of each; c) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/ 1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; d) (c) and one or both of (a) and (b).

[0278]A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo.[0278] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, for example, HA , for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. Reduced binding capacity can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry.

[0279]A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais.[0279] The antibody molecule can compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more.

[0280]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 24; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45.[0280] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 24; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45.

[0281]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 24; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45, em que, opcionalmente, cada HC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 24 e cada LC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente da SEQ ID NO: 45.[0281] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 24; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45, wherein, optionally, each HC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 24 and each LC CDR differs by no more than 1, 2, 3 , 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g. conservative amino acids, from the corresponding CDR of SEQ ID NO: 45.

[0282]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 25; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a SEQ ID NO: 45, em que a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, ou a totalidade de: (i) um HC CDR1 que compreende: S na 1a posição e A na 3a posição na HC CDR1; (ii) uma HC CDR2 que compreende um ou ambos, por exemplo, um dos seguintes: V na 2a posição; ou N na 7a posição e Q na 16a posição na HC CDR2; (iii) uma HC CDR3 que compreende: R na 3a posição (e, opcionalmente, G, na 3a posição); (iv) uma LC CDR1 que compreende: I na 3a posição; (v) uma LC CDR2 que compreende um, dois, ou três dos, por exemplo, um de: G na 2a posição; Y na 4a posição; ou G na 5a posição na LC CDR2; (vi) uma LC CDR3 que compreende: S na 9a posição na LC CDR3;[0282] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 25; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to SEQ ID NO: 45, wherein the antibody molecule comprises 1, 2, 3 , 4, 5, or the entirety of: (i) an HC CDR1 comprising: S in 1st position and A in 3rd position in HC CDR1; (ii) an HC CDR2 comprising one or both, for example, one of the following: V in 2nd position; or N in 7th position and Q in 16th position in HC CDR2; (iii) an HC CDR3 comprising: R in the 3rd position (and, optionally, G, in the 3rd position); (iv) an LC CDR1 comprising: I in 3rd position; (v) an LC CDR2 comprising one, two, or three of, for example, one of: G in the 2nd position; Y in 4th position; or G in 5th position in LC CDR2; (vi) an LC CDR3 comprising: S at the 9th position in the LC CDR3;

[0283]Em uma forma de realização, o agente de ligação compreende uma molécula de anticorpo que compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 24 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0283] In one embodiment, the binding agent comprises an antibody molecule comprising: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24 (or a sequence that differs by not more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, for example, conservative amino acids, hence); and (b) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 45 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) .

[0284]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 24; e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45.[0284] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24; and (b) a segment of the light chain variable region comprising SEQ ID NO: 45.

[0285]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0285] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) (or a sequence differing by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. , conservative amino acids, hence).

[0286]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: a) LC CDR1-3, que, em conjunto, difere de AB 031 LC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos; e b) HC CDR1-3, que, em conjunto, difere de AB 031 HC CDR1-3 por não mais do que, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, por exemplo, 1, 2, 3, ou 4, aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos.[0286] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a) LC CDR1-3, which, together, differs from AB 031 LC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, for example, 1, 2, 3, or 4, amino acids, for example, conservative amino acids; and b) HC CDR1-3, which together differs from AB 031 HC CDR1-3 by no more than, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10, e.g. 1, 2, 3, or 4, amino acids, e.g., conservative amino acids.

[0287]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, ou 3, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente desde que, pelo menos, 1 ou 2 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, ambos S e A não estão alterados); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, desde que, por exemplo, pelo menos, 1, 2 ou 3 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N e Q não estão alterados); uma CDR3 que compreende a sequência D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, por exemplo, R não esteja alterado); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I.-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservadora, daí, opcionalmente desde que, pelo menos, 1 ou 2 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, I não está alterado); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que, pelo menos, 1, 2 ou 3 dos resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, 1, 2 ou todos G, Y e L não estão alterados); uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que pelo menos um ou ambos os resíduos realçados não estejam alterados, por exemplo, S não está alterado).[0287] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, or 3, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence optionally provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, for example, both S and A are not changed); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, provided that, for example, at least 1, 2 or 3 of the highlighted residues are not changed, e.g. V or both N and Q or all three of V, N and Q are not changed); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L- L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, optionally, provided that, for example, R is not altered); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I.-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71) or a sequence differing by no more than, 1, 2, 3 , 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally provided that at least 1 or 2 of the highlighted residues are not changed, e.g., I is not changed); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , hence, optionally, provided that at least 1, 2 or 3 of the highlighted residues are not changed, for example, 1, 2 or all of G, Y and L are not changed); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally provided that at least one or both of the highlighted residues are not altered, e.g., S is not altered).

[0288]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR, (ou seja, enquanto outros resíduos nesta CDR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados).[0288] In one embodiment, a light or heavy chain CDR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR, (i.e., while other residues in this CDR may be altered, the highlighted residue or combination of residues, are not altered).

[0289]Em uma forma de realização, uma CDR de cadeia leve e uma CDR da cadeia pesada inclui cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0289] In one embodiment, a light chain CDR and a heavy chain CDR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0290]Em uma forma de realização, cada uma das duas CDR na molécula de anticorpo inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0290] In one embodiment, each of the two CDRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0291]Em uma forma de realização, cada uma das três CDR de cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0291] In one embodiment, each of the three heavy chain CDRs includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0292]Em uma forma de realização cada uma das três CDR na cadeia leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0292] In one embodiment each of the three CDRs in the light chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0293]Em uma forma de realização cada uma das seis CDRs de cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta CDR.[0293] In one embodiment each of the six heavy and light chain CDRs includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this CDR.

[0294]Em uma forma de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compreende um ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) ambos S e A, na HC CDR1, estão inalterados. (b) V ou ambos N e Q ou todos os três de V, N, e Q na HC CDR2 estão inalterados. (c) R na HC CDR3 permanece inalterado. (d) I na LC CDR1 permanece inalterado. (e) 1, 2 ou 3 de G, Y e L, na LC CDR2, estão inalterados; (f) S na LC CDR3 permanece inalterado.[0294] In one embodiment, the binding agent is an antibody molecule comprising one or more or all of the following properties: (a) both S and A, in HC CDR1, are unchanged. (b) V or both N and Q or all three of V, N, and Q in HC CDR2 are unchanged. (c) R in HC CDR3 remains unchanged. (d) I in LC CDR1 remains unchanged. (e) 1, 2 or 3 of G, Y and L, in LC CDR2, are unchanged; (f) S in LC CDR3 remains unchanged.

[0295]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou todas as propriedades selecionadas a partir de (a) a (f).[0295] In one embodiment, the antibody molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all properties selected from (a) to (f).

[0296]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada tendo um uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (a), (b) e (c) e uma cadeia leve tendo uma ou mais propriedades selecionadas a partir de (d), (e) e (f).[0296] In one embodiment, the antibody molecule comprises a heavy chain having one or more properties selected from (a), (b) and (c) and a light chain having one or more properties selected from of (d), (e) and (f).

[0297]Na forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 que compreende a sequência V-V-S-Y-D-G-N- Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); e uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L- Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência Q-S-I-T-F-N-Y- K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); uma CDR2 que compreende a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); e uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P- P-S (SEQ ID NO: 73).[0297] In the embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); and a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and (b) a segment of the light chain variable region comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 71); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73).

[0298]Em algumas formas de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); e (ii) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (i).[0298] In some embodiments, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5 /2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); and (ii) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by the method described in (i).

[0299]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 24. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 24; e b) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de SEQ ID NO: 45. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais de 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da SEQ ID NO: 45.[0299] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 24. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g., conservative residues, from SEQ ID NO: 24; and b) one or more framework regions (FRs) of SEQ ID NO: 45. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively, by no more of 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, for example, conservative residues, of SEQ ID NO: 45.

[0300]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo ainda um ou mais ou todos de: uma FRL que compreende a sequência E-V-Q-L-L-E-S-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-T (SEQ ID NO: 82) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que T não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que W não esteja alterado, ou, caso tenha sido alterado, é outro que não R); uma FR3 compreendendo a sequência R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que um, dois ou três dos I, R ou G não estejam alterados, ou caso I tenha sido alterado é outro que não L, se R for alterado, ele é outro que não P, ou se L for alterado ele é outro que não A); e uma FR4 compreendendo a sequência W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí) ou W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (ou um sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (a) um segmento região variável da imunoglobulina de cadeia leve compreende ainda um ou mais ou todos de: uma FR1 que compreende a sequência D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4 ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que R não esteja alterado); uma FR2 que compreende a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); uma FR3 que compreende a sequência G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí, opcionalmente, desde que C não esteja alterado, ou caso tenha sido alterado, ele é outro que não P); e uma FR4 compreendendo a sequência F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (ou uma sequência que difere por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí).[0300] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment further comprising one or more or all of: an FRL comprising the sequence E-V-Q-L-L-E-S-G-G-G- L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-T (SEQ ID NO :82) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence, optionally, as long as T is not altered ); an FR2 comprising the sequence W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L- E-W-V-A (SEQ ID NO: 75) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence, optionally, as long as W is not altered, or, if it has been altered, it is something other than R); an FR3 comprising the sequence R-F-T-I-S-R-D-N-S-K- N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76) (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, then, optionally, as long as one, two or three of I, R or G are not altered, or if I has been altered, it is other than L, if R is altered, it is other than P, or if L is changed it is something other than A); and an FR4 comprising the sequence W-G-Q-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 77) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , hence) or W-G-Q-G-T- T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so); and (a) a light chain immunoglobulin variable region segment further comprises one or more or all of: an FR1 comprising the sequence D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S- L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4 or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence optionally, as long as R is not altered); an FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P- K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids, hence); an FR3 comprising the sequence G-V-P-S-R-F-S-G-S-G- S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g. example, conservative amino acids, hence, optionally, as long as C is not altered, or if it has been altered, it is something other than P); and an FR4 comprising the sequence F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81) (or a sequence that differs by no more than, 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids , so).

[0301]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve ou pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR, (ou seja, enquanto que outros resíduos nesta FR possam estar alterados, o resíduo realçado ou combinação de resíduos, não estão alterados). Por exemplo, em uma forma de realização, um, dois ou três dos I, R, ou L para a FR3 de cadeia pesada não estão alterados.[0301] In one embodiment, a light or heavy chain FR includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR, (i.e., while other residues in this FR may be altered, the residue highlighted or combination of residues, are not changed). For example, in one embodiment, one, two, or three of the I, R, or L for the heavy chain FR3 are not changed.

[0302]Em uma forma de realização, uma FR de cadeia leve e uma FR de cadeia pesada inclui cada um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0302] In one embodiment, a light chain FR and a heavy chain FR include each of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0303]Em uma forma de realização, cada uma das duas FRs, na molécula de anticorpo, inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR. Em formas de realização, ambas estão na cadeia leve. Em formas de realização, ambas estão na cadeia pesada.[0303] In one embodiment, each of the two FRs in the antibody molecule includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR. In embodiments, both are in the light chain. In embodiments, both are in the heavy chain.

[0304]Em uma forma de realização cada um de FR2 e FR3 da cadeia pesada inclui um dos resíduos realçados, ou uma das combinações realçadas dos resíduos, para esta FR.[0304] In one embodiment each of FR2 and FR3 of the heavy chain includes one of the highlighted residues, or one of the highlighted combinations of residues, for this FR.

[0305]Em uma forma de realização cada uma de FR1 e FR2 da cadeia pesada e leve inclui um dos resíduos realçados para esta FR.[0305] In one embodiment each of FR1 and FR2 of the heavy and light chain includes one of the residues highlighted for this FR.

[0306]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados em na FR1-4 de cadeia pesada estão inalterados.[0306] In one embodiment, all residues highlighted in heavy chain FR1-4 are unchanged.

[0307]Em uma forma de realização de todos os resíduos realçados na FR1-4 de cadeia leve estão inalterados.[0307] In one embodiment all residues highlighted in light chain FR1-4 are unchanged.

[0308]Em uma forma de realização, todos os resíduos realçados em ambas FR1-4 de cadeia pesada e leve estão inalterados.[0308] In one embodiment, all highlighted residues in both heavy and light chain FR1-4 are unchanged.

[0309]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) o segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreende um ou mais ou todos de: uma FR1 que compreende a sequence E-V-Q-L-L-E-S-G- G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO: 82); uma FR2 que compreende a sequência W-V-R-Q-P-P-G-K- G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO: 75); uma FR3 que compreende a sequência R-F-T-I-S-R-D-N- S-K-N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76); e uma FR4 que compreende a sequência W-G-Q-G-T-T-L-T- V-S-S (SEQ ID NO: 77) ou W-G-Q-G-T-T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171); e (b) o segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende um ou mais ou todos de: uma FR1 que compreende a sequência D-I-Q-M-T-Q-S-P- S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78); uma FR2 que compreende a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-K- A-P-K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79); uma FR3 que compreende a sequência G-V-P-S-R-F-S-G- S-G-S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80); e uma FR4 que compreende a sequência F-G-Q-G-T-K-V-E- I-K (SEQ ID NO: 81).[0309] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) the heavy chain immunoglobulin variable region segment comprises one or more or all of: an FR1 comprising the sequence E-V-Q-L-L-E-S-G- G-G-L-V-K-P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T (SEQ ID NO: 82); an FR2 comprising the sequence W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO: 75); an FR3 comprising the sequence R-F-T-I-S-R-D-N- S-K-N-T-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76); and an FR4 comprising the sequence W-G-Q-G-T-T-L-T- V-S-S (SEQ ID NO: 77) or W-G-Q-G-T-T-V-T-V-S-S (SEQ ID NO: 171); and (b) the light chain immunoglobulin variable region segment comprising one or more or all of: an FR1 comprising the sequence D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C-R-S-S (SEQ ID NO: 78); an FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-K-A-P-K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 79); an FR3 comprising the sequence G-V-P-S-R-F-S-G- S-G-S-G-T-D-F-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO: 80); and an FR4 comprising the sequence F-G-Q-G-T-K-V-E-I-K (SEQ ID NO: 81).

[0310]Em uma outra forma de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (a) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); (b) produz menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (a); (c) liga-se com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (d) trata ou previne a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (e) inibe a atividade fusogênica da HA-alvo; (f) trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, em que o vírus é um vírus H1, H5, ou H9; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, em que o vírus é um vírus H3 ou H7; (g) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H1N1 e H3N2; (h) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (i) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza A estirpes H5N1; (j) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1 quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, ou 1 mg/kg; (k) se liga com elevada afinidade a uma hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (l) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (m) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (n) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; (o) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é inferior a 10 μg/mL; (p) evita ou minimiza a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (q) é eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos em um indivíduo quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (r) se liga a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (s) se liga a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui divulgado, por exemplo, por competição, em um ensaio ELISA.[0310] In another embodiment, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (a) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least , 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain , for example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/ 5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); (b) produces fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by the described method in (a); (c) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of at least 1, 2, 3, 4 or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 2; (d) treats or prevents infection with at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 1 influenza subtypes and at least 1, 2, 3, 4, or 5 Group 2 influenza subtypes; (e) inhibits the fusogenic activity of the target HA; (f) treats or prevents infection with a Group 1 virus, wherein the virus is an H1, H5, or H9 virus; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, where the virus is an H3 or H7 virus; (g) treats or prevents infection with influenza A strains H1N1 and H3N2; (h) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (i) treats or prevents infection with influenza A virus strains H5N1; (j) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, or 1 mg/kg; (k) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010; (l) treats or prevents infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (m) is effective for the prevention or treatment of infection, e.g., in humans or mice, with an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/ kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (n) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (o) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is less than 10 μg/mL; (p) prevents or minimizes secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (q) is effective in preventing or minimizing secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (r) binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (s) binds to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114, or CR6261, e.g., when tested by a method disclosed herein, for example, by competition, in an ELISA assay.

[0311]Em outro aspecto, a divulgação apresenta uma molécula de anticorpo que compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a SEQ ID NO: 24 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí); e (b) um segmento de região variável de cadeia leve que compreende a SEQ ID NO: 45 (ou uma sequência que difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos, daí). Em algumas formas de realização, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral em se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; e (ii) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência o faz, tal como Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (i).[0311] In another aspect, the disclosure features an antibody molecule comprising: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24 (or a sequence that differs by no more than 1 , 2, 3, 4 or 5 amino acids, for example, conservative amino acids, hence); and (b) a light chain variable region segment comprising SEQ ID NO: 45 (or a sequence that differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g., conservative amino acids, hence) . In some embodiments, the antibody molecule comprises one or more or all of the following properties: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a viral titer to recover after at least 10.9 , 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A /South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; and (ii) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule does, such as Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by the described method in (i).

[0312]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[0312] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[0313]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[0313] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[0314]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[0314] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[0315]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[0315] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[0316]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e c ou d[0316] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and c or d

[0317]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d[0317] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d

[0318]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b[0318] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b

[0319]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[0319] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[0320]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e, e f.[0320] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e, and f.

[0321]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduos T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[0321] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residues T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[0322]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[0322] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[0323]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) não inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1 que são ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0323] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) does not include one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0324]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[0324] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[0325]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[0325] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[0326]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[0326] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[0327]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[0327] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[0328]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[0328] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[0329]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[0329] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[0330]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[0330] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[0331]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[0331] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[0332]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1; ou dd) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0332] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1; or dd) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0333]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[0333] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[0334]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo tem um, dois, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[0334] In one embodiment the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[0335]Em uma forma de realização da molécula tem propriedades c, cc, d e dd.[0335] In one embodiment the molecule has properties c, cc, d and dd.

[0336]Em um outro aspecto, a divulgação apresenta um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, que compreende uma propriedade funcional ou estrutural de uma ou ambas de uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve aqui divulgadas.[0336] In another aspect, the disclosure features a binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, which comprises a functional or structural property of one or both of a chain variable region. heavy and a light chain variable region disclosed herein.

[0337]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compete com uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui descrita, para a ligação a um substrato, por exemplo, uma HA. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo compreendendo as CDR pesadas e leves a partir de: uma região variável de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura2, Figura 13 ou Figura 17; e uma região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17. b) uma molécula de anticorpo que compreende: (i) um segmento região variável de imunoglobulina de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura2, Figura 13 ou Figura 17; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17; ou c) um anticorpo aqui descrito.[0337] In one embodiment, the antibody molecule competes with a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule described herein, for binding to a substrate, for example, an HA. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising heavy and light CDRs from: a heavy chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and a light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17. b) an antibody molecule comprising: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment of Table 3 , Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and (ii) a segment of the light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17; or c) an antibody described herein.

[0338]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A competição entre os anticorpos da molécula e os anticorpos da molécula de referência pode ser determinada por avaliação da capacidade de uma da molécula de anticorpos ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro ao substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir da estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou da estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo. A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais. Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga. Em uma forma de realização da molécula de anticorpo não se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, que a molécula de anticorpo de referência se liga.[0338] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Competition between the antibodies of the molecule and the antibodies of the reference molecule can be determined by evaluating the ability of one of the antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to the substrate, e.g., HA, e.g. HA1 or HA5, for example, from the H1N1 strain, e.g. A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or from the H5N1 strain, e.g. , A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. Reduced binding capacity can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry. The antibody molecule may compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more. In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds. In one embodiment the antibody molecule does not bind to the same epitope, or a portion thereof, that the reference antibody molecule binds.

[0339]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo se liga ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, em HA, tal como uma molécula de anticorpo de referência, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada. A molécula de anticorpo de referência pode ser: a) uma molécula de anticorpo compreendendo as CDR pesadas e leves a partir de: uma região variável de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17; e uma região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17. b) uma molécula de anticorpo que compreende: (i) um segmento região variável de imunoglobulina de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17; e (ii) um segmento da região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17; ou c) um anticorpo aqui descrito.[0339] In one embodiment the antibody molecule binds to the same epitope, or a portion thereof, on HA, as a reference antibody molecule, for example, an antibody molecule disclosed herein. The reference antibody molecule may be: a) an antibody molecule comprising heavy and light CDRs from: a heavy chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and a light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17. b) an antibody molecule comprising: (i) a heavy chain immunoglobulin variable region segment of Table 3 , Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and (ii) a segment of the light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17; or c) an antibody described herein.

[0340]A HA pode ser HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A ligação ao mesmo epítopo, ou uma porção do mesmo, pode ser mostrada por um ou mais de: a) análise mutacional, por exemplo, a ligação a HA, ou afinidade de ligação para HA, é diminuída ou abolida se um resíduo é mutado; b) análise, por exemplo, comparação, a estrutura cristalina da molécula de anticorpo e HA e a estrutura cristalina de um anticorpo de referência e HA, por exemplo, para determinar os pontos de toque de cada; c) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, por exemplo, a partir de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; e d) (c) e um ou ambos de (a) e (b);[0340] The HA can be HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009 , or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Binding to the same epitope, or a portion thereof, can be shown by one or more of: a) mutational analysis, for example, binding to HA, or binding affinity for HA, is diminished or abolished if a residue is mutated ; b) analyzing, for example comparing, the crystal structure of the antibody molecule and HA and the crystal structure of a reference antibody and HA, for example, to determine the touch points of each; c) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, for example, from an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; and d) (c) and one or both of (a) and (b);

[0341]A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada, por exemplo, por um ou mais dos seguintes: a) análise de BIAcore; b) ensaio ELISA; e c) citometria de fluxo. A molécula de anticorpo pode competir com o anticorpo de referência de tal modo que a ligação do anticorpo de referência seja diminuída em 50% ou mais. d) competição dos dois anticorpos para a ligação a HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou a estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004; e e) (c) e um ou ambos de (a) e (b).[0341] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, e.g., HA , for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art. Reduced binding capacity can be assessed, for example, by one or more of the following: a) BIAcore analysis; b) ELISA assay; and c) flow cytometry. The antibody molecule may compete with the reference antibody such that binding of the reference antibody is decreased by 50% or more. d) competition of the two antibodies for binding to HA, for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/ 1934 or A/California/04/2009, or the H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004; and e) (c) and one or both of (a) and (b).

[0342]A competição entre a molécula de anticorpo e uma molécula de anticorpo de referência pode ser determinada através da avaliação da capacidade de uma molécula de anticorpo ou molécula de anticorpo de referência em diminuir a ligação do outro a um substrato, por exemplo, HA, por exemplo, HA1 ou HA5, a partir de, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. A redução da capacidade de se ligar pode ser avaliada por métodos na arte.[0342] Competition between the antibody molecule and a reference antibody molecule can be determined by evaluating the ability of one antibody molecule or reference antibody molecule to decrease the binding of the other to a substrate, for example, HA , for example, HA1 or HA5, from, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. Reduction in the ability to bind can be assessed by methods in the art.

[0343]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com uma cadeia pesada de referência da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura2, Figura 13 ou Figura 17; e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a cadeia leve de referência da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura3, a Figura 14 ou Figura 17, em que, opcionalmente, cada HC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da HC CDR correspondente a partir da sua cadeia pesada de referência e cada LC CDR difere por não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, por exemplo, 1 ou 2, por exemplo, aminoácidos conservativos, da CDR correspondente em sua cadeia de leve de referência.[0343] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to a reference heavy chain from Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to the reference light chain of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17, wherein, optionally, each HC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4, or 5 amino acids, e.g., 1 or 2, e.g., conservative amino acids, from the corresponding HC CDR from the its reference heavy chain and each LC CDR differs by no more than 1, 2, 3, 4 or 5 amino acids, e.g. 1 or 2, e.g., conservative amino acids, from the corresponding CDR in its reference light chain.

[0344]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com uma cadeia pesada da Tabela 3 e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a cadeia leve correspondente da Tabela 3.[0344] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent of homology to a heavy chain of Table 3 and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to the corresponding light chain of Table 3.

[0345]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com uma cadeia pesada da Tabela 4A e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a cadeia leve correspondente da Tabela 4A.[0345] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent of homology to a heavy chain of Table 4A and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to the corresponding light chain of Table 4A.

[0346]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende: uma região variável de cadeia pesada que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com uma cadeia pesada da Tabela 4B e uma região variável de cadeia leve que compreende pelo menos 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 ou 99 por cento de homologia com a cadeia leve correspondente da Tabela 4B.[0346] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises: a heavy chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent of homology to a heavy chain of Table 4B and a light chain variable region comprising at least 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 or 99 percent homology to the corresponding light chain of Table 4B.

[0347]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: uma região variável de cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17; e uma região variável de cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17.[0347] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: a heavy chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and a light chain variable region of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17.

[0348]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende: uma região variável de cadeia pesada da Tabela 3 e a cadeia leve correspondente da Tabela 3; uma cadeia pesada da Tabela 4A e a cadeia leve correspondente da Tabela 4A; ou uma cadeia pesada da Tabela 4B e a cadeia leve correspondente da Tabela 4B.[0348] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises: a heavy chain variable region from Table 3 and the corresponding light chain from Table 3; a heavy chain from Table 4A and the corresponding light chain from Table 4A; or a heavy chain from Table 4B and the corresponding light chain from Table 4B.

[0349]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende uma CDR1, uma CDR2 e uma CDR3 de uma sequência cadeia pesada da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17 (ou CDRs que, individualmente ou coletivamente, diferem daí por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos); e (b) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende uma CDR1, uma CDR2 e uma CDR3 de uma sequência cadeia leve da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17 (ou CDRs que, individualmente ou coletivamente, diferem daí por não mais do que, 1, 2, 3, 4, ou 5, por exemplo, 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo, aminoácidos conservativos).[0349] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising a CDR1, a CDR2 and a CDR3 of a heavy chain sequence of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13, or Figure 17 (or CDRs that, individually or collectively, differ therefrom by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g. 1 or 2 amino acids, e.g. conservative amino acids); and (b) a light chain immunoglobulin variable region segment comprising a CDR1, a CDR2 and a CDR3 of a light chain sequence of Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17 (or CDRs which, individually or collectively, differ therefrom by no more than 1, 2, 3, 4, or 5, e.g., 1 or 2 amino acids, e.g., conservative amino acids).

[0350]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: CDRs de uma cadeia pesada da Tabela 3 e as CDRs da cadeia leve a partir da cadeia leve correspondente da Tabela 3.[0350] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: CDRs from a heavy chain of Table 3 and the light chain CDRs from the corresponding light chain of Table 3 .

[0351]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: CDR de uma cadeia pesada da Tabela 4A e as CDRs da cadeia leve a partir da cadeia leve correspondente da Tabela 4A.[0351] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: CDRs from a heavy chain of Table 4A and the light chain CDRs from the corresponding light chain of Table 4A .

[0352]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende um ou ambos de: CDR de uma cadeia pesada da Tabela 4B e as CDRs da cadeia leve a partir da cadeia leve correspondente da Tabela 4B.[0352] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or both of: CDRs from a heavy chain of Table 4B and the light chain CDRs from the corresponding light chain of Table 4B .

[0353]Em algumas formas de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende uma ou mais ou todas as seguintes propriedades: (i) não produz quaisquer mutantes de escape, tal como determinado pela incapacidade de um título viral de se recuperar após, pelo menos, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5 ciclos de infecções em série em cultura de células com uma mistura da molécula de anticorpo e um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010); (ii) produz menos mutantes de escape do que o faz uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testados pelo método descrito em (i); e (iii) é diferente de Ab 67-11 e FI6.[0353] In some embodiments, the binding agent, for example, an antibody molecule, comprises one or more or all of the following properties: (i) does not produce any escape mutants, as determined by the inability of a titer virus from recovering after at least 10, 9, 8, 7, 6, or 5 cycles of serial infections in cell culture with a mixture of the antibody molecule and an influenza virus (e.g., an influenza A virus, for example, a Group 1 strain, for example, an H1N1 strain, for example, A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain , e.g., A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010); (ii) produces fewer escape mutants than does a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by the described method in (i); and (iii) is different from Ab 67-11 and FI6.

[0354]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo uma CDR1, uma CDR2 e uma CDR3 a partir de uma sequência de cadeia pesada da Figura 2, Figura 13 ou Figura 17; e (b) um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende uma CDR1, uma CDR2 e uma CDR3 a partir de uma sequência de cadeia leve da Figura 3, Figura 14 ou Figura 17.[0354] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising a CDR1, a CDR2 and a CDR3 from a heavy chain sequence of the Figure 2, Figure 13 or Figure 17; and (b) a segment of the light chain immunoglobulin variable region comprising a CDR1, a CDR2 and a CDR3 from a light chain sequence of Figure 3, Figure 14 or Figure 17.

[0355]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende: (a) um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada da Figura 2 ou Figura 17; e (b) um segmento de cadeia de imunoglobulina da região variável de leve da Figura 3 ou Figura 17.[0355] In one embodiment, the antibody molecule comprises: (a) a segment of the heavy chain immunoglobulin variable region of Figure 2 or Figure 17; and (b) an immunoglobulin chain segment of the light variable region of Figure 3 or Figure 17.

[0356]Em uma forma de realização, a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreende ainda um dipeptídeo Isoleucina-Aspartato (Ile-Asp) no N-terminal. Em uma outra forma de realização, a região variável da imunoglobulina de cadeia leve compreende ainda um dipeptídeo Ile-Asp no N-terminal. Em ainda outra forma de realização, tanto a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve ou um anticorpo apresentado na divulgação compreende ainda um dipeptídeo Ile-Asp no N-terminal. Em outra forma de realização o dipeptídeo Ile-Asp está ausente de uma ou de ambas as cadeias pesada e leve.[0356] In one embodiment, the heavy chain immunoglobulin variable region further comprises an Isoleucine-Aspartate (Ile-Asp) dipeptide at the N-terminus. In another embodiment, the light chain immunoglobulin variable region further comprises an Ile-Asp dipeptide at the N-terminus. In yet another embodiment, both the heavy chain immunoglobulin variable region and the light chain immunoglobulin variable region or an antibody disclosed in the disclosure further comprises an Ile-Asp dipeptide at the N-terminus. In another embodiment the Ile-Asp dipeptide is absent from one or both of the heavy and light chains.

[0357]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, compreende ainda um ou mais ou todos os seguintes: (a) trata ou previne a infecção por pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 1 e por, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 subtipos de influenza do Grupo 2; (b) inibe a atividade fusogênica do HA-alvo; (c) trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 1, em que o vírus é um vírus H1, H5, ou H9; e trata ou previne a infecção por um vírus do Grupo 2, em que o vírus é um vírus H3 ou H7; (d) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H1N1 e H3N2; (e) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H1N1 e H3N2, quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (f) trata ou previne a infecção por influenza A estirpes H5N1; (g) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, com H5N1 quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (h) se liga com alta afinidade a uma hemaglutinina (HA) de um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (i) trata ou previne a infecção pelo vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010; (j) é eficaz para a prevenção ou tratamento de infecção, por exemplo, em seres humanos ou ratos, por um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010 quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (k) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza A é inferior a 10 μg/mL; (1) a concentração da molécula de anticorpo necessária para 50% de neutralização do vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010, é inferior a 10 μg/mL; (m) evita ou minimiza a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos sobre um indivíduo; (n) é eficaz para prevenir ou minimizar a infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou seus efeitos em um indivíduo quando administrado a 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg ou 1 mg/kg; (o) se liga a um epítopo que compreende ou consiste na interface do trímero de hemaglutinina; e (p) se liga a um epítopo diferente daquele ligado por uma molécula de anticorpo anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui divulgado, por exemplo, por competição, em um ensaio ELISA.[0357] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, further comprises one or more or all of the following: (a) treats or prevents infection by at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 1 and at least 1, 2, 3, 4 or 5 influenza subtypes from Group 2; (b) inhibits the fusogenic activity of the target HA; (c) treats or prevents infection with a Group 1 virus, wherein the virus is an H1, H5, or H9 virus; and treats or prevents infection with a Group 2 virus, where the virus is an H3 or H7 virus; (d) treats or prevents infection with influenza A strains H1N1 and H3N2; (e) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H1N1 and H3N2, when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (f) treats or prevents infection with influenza A H5N1 strains; (g) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, with H5N1 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (h) binds with high affinity to a hemagglutinin (HA) of an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (i) treats or prevents infection with influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010; (j) is effective for the prevention or treatment of infection, for example, in humans or mice, by an influenza B virus, for example, B/Wisconsin/1/2010 when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg , 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (k) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of the influenza A virus is less than 10 μg/mL; (1) the concentration of the antibody molecule required for 50% neutralization of influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010, is less than 10 μg/mL; (m) prevents or minimizes secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual; (n) is effective in preventing or minimizing secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or its effects on an individual when administered at 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg or 1 mg/kg; (o) binds to an epitope comprising or consisting of the hemagglutinin trimer interface; and (p) binds to an epitope other than that bound by a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by a method disclosed herein, for example, by competition, in an ELISA assay.

[0358]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo compreende um ou ambos de: a) uma ou mais regiões estruturais (FRs) de cadeia pesada aqui descritas. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, de cadeia pesada aqui descrita; e b) uma ou mais regiões estruturais (FR) de cadeia leve aqui divulgadas. Por exemplo, a molécula de anticorpo compreende um ou mais ou todos de FR1, FR2, FR3 ou FR4, ou sequências que diferem individualmente ou coletivamente, por não mais do que 1, 2, 3, 4, de 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, resíduos conservativos, da cadeia leve aqui divulgada.[0358] In one embodiment, the antibody molecule comprises one or both of: a) one or more heavy chain framework regions (FRs) described herein. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g. , conservative, heavy chain residues described herein; and b) one or more light chain framework regions (FR) disclosed herein. For example, the antibody molecule comprises one or more or all of FR1, FR2, FR3 or FR4, or sequences that differ individually or collectively by no more than 1, 2, 3, 4, of 5 amino acid residues, e.g. example, conservative residues, of the light chain disclosed herein.

[0359]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga especificamente ao antígeno HA.[0359] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, specifically binds to the HA antigen.

[0360]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: a) inclui um, dois ou todos os resíduos N38, 1278 e D291 de H3 HA1; b) inclui o resíduo N12 de H3 HA2; c) não inclui um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) inclui um, dois ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2.[0360] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: a) includes one, two or all residues N38, 1278 and D291 of H3 HA1; b) includes residue N12 of H3 HA2; c) does not include one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) includes one, two or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2.

[0361]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e b.[0361] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and b.

[0362]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e d.[0362] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and d.

[0363]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a; e c ou d.[0363] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a; and c or d.

[0364]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: b; e c ou d.[0364] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: b; and c or d.

[0365]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: c; e a ou b.[0365] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: c; and a or b.

[0366]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: d; e a ou b.[0366] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: d; and a or b.

[0367]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c e d.[0367] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c and d.

[0368]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: a, b, c, d, e, e f.[0368] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: a, b, c, d, e, and f.

[0369]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: a) resíduos N38, 1278, ou D291 de H3 HA1; b) resíduo N12 de H3 HA2; c) resíduos T318, R321, ou V323 de H3 HA1; ou d) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 ou E57 de H3 HA2.[0369] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: a) residues N38, 1278, or D291 of H3 HA1; b) residue N12 of H3 HA2; c) residues T318, R321, or V323 of H3 HA1; or d) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 or E57 of H3 HA2.

[0370]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H3 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: e) resíduos Q327, T328, ou R329 de H3 HA1; ou f) resíduos G1, L2, F3, G4 ou D46 de H3 HA2.[0370] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H3 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: e) residues Q327, T328, or R329 of H3 HA1; or f) residues G1, L2, F3, G4 or D46 of H3 HA2.

[0371]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou todas as seguintes propriedades a-f: aa) inclui um, dois ou todos os resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) inclui o resíduo G12 de H1 HA2; cc) não inclui um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; dd) não inclui um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ee) inclui um, dois ou todos os resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1 que são ligados por ambos Ab 044 e FI6; ou ff) inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, ou todos de, os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0371] In one embodiment, the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five or all of the following properties a-f: aa) includes one, two or all residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) includes residue G12 of H1 HA2; cc) does not include one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; dd) does not include one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; ee) includes one, two or all of residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1 that are bound by both Ab 044 and FI6; or ff) includes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all of, the residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0372]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e bb.[0372] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and bb.

[0373]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e dd.[0373] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and dd.

[0374]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa; e cc ou dd.[0374] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa; and cc or dd.

[0375]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: bb; e cc ou dd.[0375] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: bb; and cc or dd.

[0376]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: cc; e aa ou bb.[0376] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: cc; and aa or bb.

[0377]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: dd; e aa ou bb.[0377] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: dd; and aa or bb.

[0378]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc e dd.[0378] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc and dd.

[0379]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem as propriedades: aa, bb, cc, dd, ee e ff.[0379] In one embodiment, the antibody molecule has the properties: aa, bb, cc, dd, ee and ff.

[0380]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado em, pelo menos 2, 5, 10 ou 100 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: aa) resíduos H31, N279 e S292 de H1 HA1; bb) resíduo G12 de H1 HA2; cc) resíduos T319, R322 e 1324 de H1 HA1; ou dd) resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 de H1 HA2.[0380] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by at least 2, 5, 10 or 100 times, by a mutation or mutations in any of: aa) residues H31, N279 and S292 of H1 HA1; bb) residue G12 of H1 HA2; cc) residues T319, R322 and 1324 of H1 HA1; or dd) residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 and E57 of H1 HA2.

[0381]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo tem um KD para H1 de igual ou inferior a 10-6, em que o referido KD é aumentado por não mais do que 2 ou 5 vezes, por uma mutação ou mutações em qualquer um dos: cc) resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; ou dd) resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2;[0381] In one embodiment, the antibody molecule has a KD for H1 of equal to or less than 10-6, wherein said KD is increased by no more than 2- or 5-fold, by a mutation or mutations in any of: cc) residues Q328 and S329 of H1 HA1; or dd) residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2;

[0382]Em uma forma de realização da molécula de anticorpo tem um, dois, três ou todas as seguintes propriedades: a e aa; b e bb; c e cc; d e dd.[0382] In one embodiment the antibody molecule has one, two, three or all of the following properties: a and aa; b and bb; c and cc; d and dd.

[0383]Em uma forma de realização, a molécula tem as propriedades c, cc, d e dd.[0383] In one embodiment, the molecule has the properties c, cc, d and dd.

[0384]Em um aspecto, a divulgação apresenta um agente de ligação a anti-hemaglutinina (anti-HA), por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou preparação, ou a sua preparação isolada, que compreende: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo um ou mais ou todos de uma CDR1 que compreende a sequência G-F-T-F-[S/T]- [S/T]-Y-[A/G]-M-H (SEQ ID NO: 1), ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 1 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; uma CDR2 que compreende a sequência V-[I/V/L]-S-[Y/F]- D-G-[S/N]-[Y/N]-[K/R]-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 2) ou um sequência que difere da SEQ ID NO: 2 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; e uma CDR3 que compreende a sequência D-[S/T]-[R/K/Q]-L- R-[S/T]-L-L-Y-F-E-W-L-S-[Q/S]-G-[Y/L/V]-[F/L]-[N/D]-[P/Y] (ID SEQ NO: 3), ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 3 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; e (b) um segmento da região variável de cadeia leve que compreende um ou mais ou todos de uma CDR1 que compreende a sequência [K/R]—S-S-Q-[S/T]- [V/L/I]-[T/S]-[Y/F/W]-[N/S/D]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 4) ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 4 por não mais do que 1 ou 2 resíduos, ou que compreende a sequência [K/R]-S- S-Q-[S/T]-[V/L/I]-[T/S]-[Y/F/W]-[N/S/D/Q/R/E]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 170) ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 170 por não mais do que 1 ou 2 resíduos ou [K/R]-S-S-Q- [S/T]-[V/L/I]-[T/S]-[Y/F/W]-[N/S/D/E]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 4) ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 170 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; uma CDR2 que compreende a sequência W-[A/G]-S- [T/A/Y/H/K/D]-[R/L]-E-[S/T] (SEQ ID NO: 5) ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 5 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; uma CDR3 que compreende a sequência Q-Q-[Y/H]-Y-R-T-P- P-[T/S] (SEQ ID NO: 6) ou uma sequência que difere da SEQ ID NO: 6 por não mais do que 1 ou 2 resíduos; opcionalmente, desde que: se o segmento de região variável de cadeia leve compreender: uma CDR1 compreendendo a sequência K-S-S-Q-S- V-T-Y-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 83); uma CDR2 compreendendo a sequência W-A-S-T-R-E-S (SEQ ID NO: 84); e uma CDR3 compreendendo a sequência Q-Q-Y-Y-R-T-P-P-T (SEQ ID NO: 85); então, o segmento de região variável de cadeia pesada compreende um ou mais dos seguintes: (a) CDRs com exceção das seguintes: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-G-M- H (SEQ ID NO: 86); uma CDR2 que compreende a sequência V-I- S-Y-D-G-S-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 87); ou uma CDR3 que compreende a sequência D-S-E-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G- Y-F-N-P (SEQ ID NO: 88); ou (b) FRs com exceção das seguintes: uma FR1 diferente de E-V-Q-L-L-E-S-G-G-G-L-V-K- P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T SEQ ID NO: 82); uma FR2 diferente de W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO: 75); uma FR3 diferente de R-F-T-I-S-R-D-N-S-K-N-T-L-Y-L-Q-M-N-S- L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76); ou uma FR4 diferente de W-G-A-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 89); (c) uma CDR1 onde o resíduo amino na posição 5 da SEQ ID NO: 1 é um S, o resíduo de aminoácido na posição 6 da SEQ ID NO: 1 é um T, ou o resíduo de aminoácido na posição 8 da SEQ ID NO: 1 é um A; (d) uma CDR2 em que o resíduo amino na posição 2 da SEQ ID NO: 2 é um V ou um L, o aminoácido na posição 4 é um F, o aminoácido na posição 7 é um N, o aminoácido na posição 8 é um Y, ou o aminoácido na posição 9 é um R; (e) uma CDR3 em que o resíduo amino na posição 2 da SEQ ID NO: 3 é um T, o resíduo de aminoácido na posição 3 da SEQ ID NO: 3 é um R, K, ou um Q, o resíduo de aminoácido na posição 6 da SEQ ID NO: 3 é um T, o resíduo de aminoácido na posição 15 da SEQ ID NO: 3 é um S, o resíduo de aminoácido na posição 17 da SEQ ID NO: 3 é um L, ou um V, o resíduo de aminoácido na posição 18 da SEQ ID NO: 3 é um L, o resíduo de aminoácido na posição 19 da SEQ ID NO: 3 é um D, ou o resíduo de aminoácido na posição 20 da SEQ ID NO: 3 é um Y; (f) uma FR1 em que o resíduo amino na posição 11 da SEQ ID NO: 7 é um Q, ou o resíduo de aminoácido na posição 7 de SEQ ID NO: 7 é uma T; (g) uma FR4 em que o resíduo amino na posição 3 da SEQ ID NO: 10 é um Q, o resíduo de aminoácido na posição 5 da SEQ ID NO: 10 é um A; o resíduo de aminoácido na posição 6 da SEQ ID NO: 10 é um H, ou o resíduo de aminoácido na posição 7 de SEQ ID NO: 10 é um V; ou (h) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpos anti-HA de referência, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um método aqui divulgado e também desde que, se o segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência S-Y- G-M-H (SEQ ID NO: 86); uma CDR2 compreendendo a sequência V-I-S-Y-D-G-S-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 87); e uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-E-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S- Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 88), então, o segmento de região variável de cadeia leve compreende uma ou mais das seguintes características: (a) CDRs com exceção das seguintes: CDR1 K-S-S-Q-S-V-T-Y-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 83); CDR2 W-A-S-T-R-E-S (SEQ ID NO: 84); ou CDR3 Q-Q-Y-Y-R- T-P-P-T (SEQ ID NO: 85); (b) FRs com exceção das seguintes: FR1 compreendendo a sequência E-I-V-M-T-Q-S-P-D-S-L-A-V-S- L-G-E-R-A-T-I-N-C (SEQ ID NO: 90); FR2 compreendendo a sequência W-Y-Q-Q-K-P-G-Q-P-P-K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 91); FR3 compreendendo a sequência G-V-P-D-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D- F-T-L-T-I-S-S-L-Q-A-E-D-V-A-V-Y-Y-C (SEQ ID NO: 92); ou FR4 compreendendo a sequência F-G-G-G-T-K-L-D-I-K (SEQ ID NO: 93); (c) uma CDR1 em que o resíduo amino na posição 1 da SEQ ID NO: 4 é um R, o resíduo amino na posição 5 da SEQ ID NO: 4 é um T, o resíduo amino na posição 6 da SEQ ID NO: 4 é um L ou um I, o resíduo amino na posição 7 de SEQ ID NO: 4 é um S, o resíduo amino na posição 8 da SEQ ID NO: 4 é um F ou um W, ou o resíduo de amino na posição 9 de SEQ ID NO: 4 é um S ou um D; (d) uma CDR2 em que o resíduo amino na posição 2 da SEQ ID NO: 5 é um L, o resíduo amino na posição 4 da SEQ ID NO: 5 é um A, um Y, um H, um K, ou um D, o resíduo de amino na posição 5 da SEQ ID NO: 5 é um L, o resíduo amino na posição 7 de SEQ ID NO: 5 é um T; (e) uma CDR3 em que o resíduo amino na posição 3 da SEQ ID NO: 6 é um H; o resíduo de aminoácido na posição 9 da SEQ ID NO: 6 é um S; (f) uma FR1 em que o resíduo amino na posição 1 da SEQ ID NO: 11 é um D; o resíduo amino na posição 3 da SEQ ID NO: 11 é um Q, o resíduo amino na posição 9 da SEQ ID NO: 11 é um S, o resíduo amino na posição 10 da SEQ ID NO: 11 é um T, o amino resíduo na posição 11 da SEQ ID NO: 11 é um V, o resíduo amino na posição 12 da SEQ ID NO: 11 é um S, o resíduo amino na posição 13 da SEQ ID NO: 11 é um A, o resíduo amino na posição 14 da SEQ ID NO: 11 é um T, o resíduo amino na posição 15 da SEQ ID NO: 11 é um V ou um R, o resíduo de amino na posição 17 da SEQ ID NO: 11 é um D, o resíduo amino na posição 20 da SEQ ID NO: 11 é um S, o resíduo amino na posição 22 da SEQ ID NO: 11 é um T, um Q, um D, ou um R; (g) uma FR2 em que o resíduo amino na posição 8 da SEQ ID NO: 12 é um K; ou o resíduo de amino na posição 9 da SEQ ID NO: 12 é um A; (h) uma FR3 em que o resíduo amino na posição 4 da SEQ ID NO: 13 é um E ou um S; o resíduo amino na posição 24 da SEQ ID NO: 13 é um P, o resíduo amino na posição 27 da SEQ ID NO: 13 é um F, um K, ou um D, o resíduo amino na posição 29 da SEQ ID NO: 13 é um T; (i) uma FR4, em que o resíduo amino na posição 3 da SEQ ID NO: 14 é um Q, um T, um S, ou um N, o resíduo amino na posição 7 de SEQ ID NO: 14 é um V, ou o amino resíduo na posição 8 da SEQ ID NO: 14 é um E; ou (j) produz menos mutantes de escape do que uma molécula de anticorpo anti-HA de referência o faz, por exemplo, Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 ou CR6261, por exemplo, quando testado por um processo aqui descrito; e ainda desde que, se o segmento de região variável de cadeia leve compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência K-S-S-Q-S-V-T-F-N-Y-K-N-Y-L- A (SEQ ID NO: 146); uma CDR2 compreendendo a sequência W-A- S-A-R-E-S (SEQ ID NO: 147); e uma CDR3 compreendendo a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P-PT (SEQ ID NO: 148); então, o segmento de região variável de cadeia pesada compreende um ou mais dos seguintes: CDR diferente da CDR descrita na Figura 12B; ou outras FRs do que as FRs descritas na Figura 12C.[0384] In one aspect, the disclosure features an anti-hemagglutinin (anti-HA) binding agent, for example, an antibody molecule, or preparation, or isolated preparation thereof, comprising: (a) a segment of heavy chain immunoglobulin variable region comprising one or more or all of a CDR1 comprising the sequence G-F-T-F-[S/T]-[S/T]-Y-[A/G]-M-H (SEQ ID NO: 1) , or a sequence that differs from SEQ ID NO: 1 by no more than 1 or 2 residues; a CDR2 comprising the sequence V-[I/V/L]-S-[Y/F]-D-G-[S/N]-[Y/N]-[K/R]-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 2) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 2 by no more than 1 or 2 residues; and a CDR3 comprising the sequence D-[S/T]-[R/K/Q]-L- R-[S/T]-L-L-Y-F-E-W-L-S-[Q/S]-G-[Y/L/V] -[F/L]-[N/D]-[P/Y] (SEQ ID NO: 3), or a sequence that differs from SEQ ID NO: 3 by no more than 1 or 2 residues; and (b) a light chain variable region segment comprising one or more or all of a CDR1 comprising the sequence [K/R]—S-S-Q-[S/T]-[V/L/I]-[T /S]-[Y/F/W]-[N/S/D]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 4) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 4 by no more than 1 or 2 residues, or which comprises the sequence [K/R]-S- S-Q-[S/T]-[V/L/I]-[T/S]-[Y/F/W]-[N/S/D/Q /R/E]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 170) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 170 by no more than 1 or 2 residues or [K/R]-S-S-Q- [S/T]-[ V/L/I]-[T/S]-[Y/F/W]-[N/S/D/E]-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 4) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 170 for no more than 1 or 2 residues; a CDR2 comprising the sequence W-[A/G]-S- [T/A/Y/H/K/D]-[R/L]-E-[S/T] (SEQ ID NO: 5) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 5 by no more than 1 or 2 residues; a CDR3 comprising the sequence Q-Q-[Y/H]-Y-R-T-P- P-[T/S] (SEQ ID NO: 6) or a sequence that differs from SEQ ID NO: 6 by no more than 1 or 2 residues ; optionally, provided that: if the light chain variable region segment comprises: a CDR1 comprising the sequence K-S-S-Q-S-V-T-Y-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 83); a CDR2 comprising the sequence W-A-S-T-R-E-S (SEQ ID NO: 84); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-Y-Y-R-T-P-P-T (SEQ ID NO: 85); then, the heavy chain variable region segment comprises one or more of the following: (a) CDRs with the exception of the following: a CDR1 comprising the sequence S-Y-G-M-H (SEQ ID NO: 86); a CDR2 comprising the sequence V-I-S-Y-D-G-S-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 87); or a CDR3 comprising the sequence D-S-E-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 88); or (b) FRs with the exception of the following: an FR1 other than E-V-Q-L-L-E-S-G-G-G-L-V-K- P-G-Q-S-L-K-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-T SEQ ID NO: 82); an FR2 other than W-V-R-Q-P-P-G-K-G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO: 75); an FR3 other than R-F-T-I-S-R-D-N-S-K-N-T-L-Y-L-Q-M-N-S- L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-A-K (SEQ ID NO: 76); or an FR4 other than W-G-A-G-T-T-L-T-V-S-S (SEQ ID NO: 89); (c) a CDR1 wherein the amino acid residue at position 5 of SEQ ID NO: 1 is an S, the amino acid residue at position 6 of SEQ ID NO: 1 is a T, or the amino acid residue at position 8 of SEQ ID NO: 1 is an A; (d) a CDR2 in which the amino residue at position 2 of SEQ ID NO: 2 is a V or an L, the amino acid at position 4 is an F, the amino acid at position 7 is an N, the amino acid at position 8 is a Y, or the amino acid at position 9 is an R; (e) a CDR3 in which the amino acid residue at position 2 of SEQ ID NO: 3 is a T, the amino acid residue at position 3 of SEQ ID NO: 3 is an R, K, or a Q, the amino acid residue at position 6 of SEQ ID NO: 3 is a T, the amino acid residue at position 15 of SEQ ID NO: 3 is an S, the amino acid residue at position 17 of SEQ ID NO: 3 is an L, or a V , the amino acid residue at position 18 of SEQ ID NO: 3 is an L, the amino acid residue at position 19 of SEQ ID NO: 3 is a D, or the amino acid residue at position 20 of SEQ ID NO: 3 is a Y; (f) an FR1 in which the amino acid residue at position 11 of SEQ ID NO: 7 is a Q, or the amino acid residue at position 7 of SEQ ID NO: 7 is a T; (g) an FR4 in which the amino acid residue in position 3 of SEQ ID NO: 10 is a Q, the amino acid residue in position 5 of SEQ ID NO: 10 is an A; the amino acid residue at position 6 of SEQ ID NO: 10 is an H, or the amino acid residue at position 7 of SEQ ID NO: 10 is a V; or (h) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114, or CR6261, for example, when tested by a method herein disclosed and further provided that, if the heavy chain immunoglobulin variable region segment comprises: a CDR1 comprising the sequence S-Y-G-M-H (SEQ ID NO: 86); a CDR2 comprising the sequence V-I-S-Y-D-G-S-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 87); and a CDR3 comprising the sequence D-S-E-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S- Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 88), then the light chain variable region segment comprises one or more of the following features: (a) CDRs with the exception of the following: CDR1 K-S-S-Q-S-V-T-Y-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO : 83); CDR2 W-A-S-T-R-E-S (SEQ ID NO: 84); or CDR3 Q-Q-Y-Y-R-T-P-P-T (SEQ ID NO: 85); (b) FRs with the exception of the following: FR1 comprising the sequence E-I-V-M-T-Q-S-P-D-S-L-A-V-S- L-G-E-R-A-T-I-N-C (SEQ ID NO: 90); FR2 comprising the sequence W-Y-Q-Q-K-P-G-Q-P-P-K-L-L-I-Y (SEQ ID NO: 91); FR3 comprising the sequence G-V-P-D-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D- F-T-L-T-I-S-S-L-Q-A-E-D-V-A-V-Y-Y-C (SEQ ID NO: 92); or FR4 comprising the sequence F-G-G-G-T-K-L-D-I-K (SEQ ID NO: 93); (c) a CDR1 in which the amino residue in position 1 of SEQ ID NO: 4 is an R, the amino residue in position 5 of SEQ ID NO: 4 is a T, the amino residue in position 6 of SEQ ID NO: 4 is an L or an I, the amino residue in position 7 of SEQ ID NO: 4 is an S, the amino residue in position 8 of SEQ ID NO: 4 is an F or a W, or the amino residue in position 9 of SEQ ID NO: 4 is an S or a D; (d) a CDR2 in which the amino residue in position 2 of SEQ ID NO: 5 is an L, the amino residue in position 4 of SEQ ID NO: 5 is an A, a Y, an H, a K, or a D, the amino residue at position 5 of SEQ ID NO: 5 is an L, the amino residue at position 7 of SEQ ID NO: 5 is a T; (e) a CDR3 in which the amino residue at position 3 of SEQ ID NO: 6 is an H; the amino acid residue at position 9 of SEQ ID NO: 6 is an S; (f) an FR1 in which the amino residue in position 1 of SEQ ID NO: 11 is a D; the amino residue in position 3 of SEQ ID NO: 11 is a Q, the amino residue in position 9 of SEQ ID NO: 11 is an S, the amino residue in position 10 of SEQ ID NO: 11 is a T, the amino residue at position 11 of SEQ ID NO: 11 is a V, the amino residue at position 12 of SEQ ID NO: 11 is an S, the amino residue at position 13 of SEQ ID NO: 11 is an A, the amino residue at position 14 of SEQ ID NO: 11 is a T, the amino residue at position 15 of SEQ ID NO: 11 is a V or an R, the amino residue at position 17 of SEQ ID NO: 11 is a D, the residue amino at position 20 of SEQ ID NO: 11 is an S, the amino residue at position 22 of SEQ ID NO: 11 is a T, a Q, a D, or an R; (g) an FR2 in which the amino residue at position 8 of SEQ ID NO: 12 is a K; or the amino residue at position 9 of SEQ ID NO: 12 is an A; (h) an FR3 in which the amino residue at position 4 of SEQ ID NO: 13 is an E or an S; the amino residue at position 24 of SEQ ID NO: 13 is a P, the amino residue at position 27 of SEQ ID NO: 13 is an F, a K, or a D, the amino residue at position 29 of SEQ ID NO: 13 is a T; (i) an FR4, wherein the amino residue in position 3 of SEQ ID NO: 14 is a Q, a T, an S, or an N, the amino residue in position 7 of SEQ ID NO: 14 is a V, or the amino residue at position 8 of SEQ ID NO: 14 is an E; or (j) produces fewer escape mutants than a reference anti-HA antibody molecule does, e.g., Ab 67-11, FI6, FI28, C179, F10, CR9114 or CR6261, for example, when tested by a process described here; and further provided that, whether the light chain variable region segment comprises: a CDR1 comprising the sequence K-S-S-Q-S-V-T-F-N-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 146); a CDR2 comprising the sequence W-A-S-A-R-E-S (SEQ ID NO: 147); and a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-PT (SEQ ID NO: 148); then, the heavy chain variable region segment comprises one or more of the following: CDR other than the CDR described in Figure 12B; or other FRs than the FRs described in Figure 12C.

[0385]Em uma forma de realização, as sequências de CDR de cadeia pesada, coletivamente, diferem das sequências citadas por não mais do que 5, 4, 3, 2 ou 1 resíduo de aminoácido; e as sequências de CDR da cadeia leve, coletivamente, diferem das sequências citadas por não mais de 5, 4, 3, 2 ou 1 resíduos de aminoácido.[0385] In one embodiment, the heavy chain CDR sequences collectively differ from the cited sequences by no more than 5, 4, 3, 2 or 1 amino acid residue; and the light chain CDR sequences collectively differ from the cited sequences by no more than 5, 4, 3, 2 or 1 amino acid residues.

[0386]Em um aspecto, a divulgação apresenta uma molécula de ácido nucleico isolada compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica para um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada destacado na divulgação.[0386] In one aspect, the disclosure features an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a segment of the heavy chain immunoglobulin variable region highlighted in the disclosure.

[0387]Em outro aspecto, a divulgação apresenta uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica para um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve destacado na divulgação.[0387] In another aspect, the disclosure features an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region segment highlighted in the disclosure.

[0388]Em ainda outro aspecto, a divulgação apresenta uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica para um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada destacado na divulgação e um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia leve destacado na divulgação.[0388] In yet another aspect, the disclosure features an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a segment of the heavy chain immunoglobulin variable region highlighted in the disclosure and a segment of the light chain immunoglobulin variable region highlighted in the publicity.

[0389]Em ainda outro aspecto, a divulgação apresenta um vetor recombinante, tal como um vetor de expressão, que compreende uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica para um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada ou uma sequência de nucleotídeos que codifica para um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve apresentado na divulgação.[0389] In yet another aspect, the disclosure features a recombinant vector, such as an expression vector, comprising a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region segment or a nucleotide sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region segment set forth in the disclosure.

[0390]Em um aspecto, a divulgação apresenta um vetor recombinante, tal como um vetor de expressão, que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e uma sequência de nucleotídeos que codifica um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia leve apresentado na divulgação.[0390] In one aspect, the disclosure features a recombinant vector, such as an expression vector, comprising a nucleotide sequence encoding a segment of the heavy chain immunoglobulin variable region and a nucleotide sequence encoding a segment of the region light chain immunoglobulin variable shown in the disclosure.

[0391]Em uma forma de realização, as moléculas de ácido nucleico no vetor recombinante incluem uma sequência de nucleotídeos que codifica (a) um segmento da região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de: S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68) na CDR1; V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) na CDR2; e D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) na CDR3; e (b) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de: Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) na CDR1; W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) na CDR2; e Q-Q-H-Y-R-T- P-P-S (SEQ ID NO: 73) na CDR3.[0391] In one embodiment, the nucleic acid molecules in the recombinant vector include a nucleotide sequence encoding (a) a segment of the heavy chain immunoglobulin variable region comprising the amino acid sequence of: S-Y-A-M-H (SEQ ID NO : 68) in CDR1; V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69) in CDR2; and D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70) in CDR3; and (b) a light chain immunoglobulin variable region segment comprising the amino acid sequence of: Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145) in CDR1; W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72) in CDR2; and Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73) in CDR3.

[0392]Em um aspecto, a divulgação apresenta uma célula contendo um vetor recombinante apresentado na divulgação, tal como um vetor recombinante compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada, ou um vetor recombinante compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve. Em uma forma de realização, a célula contém um vetor recombinante compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e um vetor recombinante compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve. Em ainda outra forma de realização, a célula contém um vetor recombinante compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve.[0392] In one aspect, the disclosure features a cell containing a recombinant vector shown in the disclosure, such as a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region, or a recombinant vector comprising a sequence of nucleic acid encoding a light chain immunoglobulin variable region. In one embodiment, the cell contains a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region and a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region. In yet another embodiment, the cell contains a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region and a nucleic acid sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region.

[0393]Em um aspecto, a divulgação apresenta um método de fazer uma molécula de anticorpo apresentada na invenção, tal como pelo fornecimento de uma célula hospedeira compreendendo uma sequência de ácido nucleico que expressa um segmento de cadeia pesada e uma sequência de ácido nucleico que expressa um segmento de cadeia leve e que expressa os ácidos nucleicos na célula hospedeira.[0393] In one aspect, the disclosure features a method of making an antibody molecule set forth in the invention, such as by providing a host cell comprising a nucleic acid sequence that expresses a heavy chain segment and a nucleic acid sequence that expresses a light chain segment and expresses nucleic acids in the host cell.

[0394]Em uma forma de realização, a sequência de ácido nucleico que expressa o segmento de cadeia pesada e a sequência de ácido nucleico que expressa o segmento de cadeia leve estão no mesmo vetor de expressão recombinante. Em uma outra forma de realização, a sequência de ácido nucleico que expressa o segmento de cadeia pesada e a sequência de ácido nucleico que expressa o segmento de cadeia leve estão em vetores de expressão recombinantes separados.[0394] In one embodiment, the nucleic acid sequence expressing the heavy chain segment and the nucleic acid sequence expressing the light chain segment are in the same recombinant expression vector. In another embodiment, the nucleic acid sequence expressing the heavy chain segment and the nucleic acid sequence expressing the light chain segment are in separate recombinant expression vectors.

[0395]Em um aspecto, a divulgação apresenta uma composição farmacêutica contendo uma molécula de anticorpo apresentada na divulgação e um veículo farmaceuticamente aceitável.[0395] In one aspect, the disclosure presents a pharmaceutical composition containing an antibody molecule presented in the disclosure and a pharmaceutically acceptable carrier.

[0396]Em um outro aspecto, a divulgação apresenta um método de tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010), em um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, que compreende: a administração de um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, apresentada na divulgação, a um indivíduo, por exemplo, indivíduo humano, que dele necessite.[0396] In another aspect, the disclosure presents a method of treating or preventing infection by influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004 , or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010), in an individual, e.g., a human subject, comprising: administering a binding agent, e.g., an antibody molecule, presented in disclosure, to an individual, for example, a human individual, who needs it.

[0397]Em uma forma de realização, o vírus influenza A é uma estirpe de H1, H5, H9, H3 e H7, tal como uma estirpe H1N1, uma estirpe H3N2 ou uma estirpe H5N1 do vírus influenza A.[0397] In one embodiment, the influenza A virus is a strain of H1, H5, H9, H3 and H7, such as an H1N1 strain, an H3N2 strain or an H5N1 strain of the influenza A virus.

[0398]Em uma forma de realização, a administração resulta em, ou correlaciona-se com, uma ou mais de uma redução na incidência ou gravidade de um sintoma ou manifestação de uma infecção por influenza, ou atraso ou aparecimento de um sintoma ou manifestação de uma infecção de influenza.[0398] In one embodiment, administration results in, or correlates with, one or more of a reduction in the incidence or severity of a symptom or manifestation of an influenza infection, or delay or appearance of a symptom or manifestation of an influenza infection.

[0399]Em uma forma de realização, a administração resulta em, ou correlaciona-se com, uma ou mais de uma redução na incidência ou gravidade de um sintoma ou manifestação de uma infecção secundária, ou atraso ou aparecimento de um sintoma ou manifestação de uma infecção secundária.[0399] In one embodiment, administration results in, or correlates with, one or more of a reduction in the incidence or severity of a symptom or manifestation of a secondary infection, or delay or appearance of a symptom or manifestation of a secondary infection.

[0400]Em formas de realização, o indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, tem sido administrado com, ou o método compreende a administração de, ou recomenda a administração de, uma segunda terapia ou terapia adicional.[0400] In embodiments, the subject, e.g., a human subject, has been administered with, or the method comprises administering, or recommends administering, a second or additional therapy.

[0401]Em formas de realização, a molécula de anticorpo é administrada em combinação com um agente ou terapia suplementar ou adicional.[0401] In embodiments, the antibody molecule is administered in combination with a supplemental or additional agent or therapy.

[0402]Em formas de realização, a segunda ou adicional terapia compreende a administração de uma vacina ou uma terapia antiviral, por exemplo, uma terapia anti-NA ou uma anti-M2.[0402] In embodiments, the second or additional therapy comprises the administration of a vaccine or an antiviral therapy, for example, an anti-NA or an anti-M2 therapy.

[0403]Em uma forma de realização, a segunda ou adicional terapia compreende uma administração de uma vacina, por exemplo, uma vacina aqui descrita ou uma mistura (também conhecido como um coquetel) de peptídeos de Influenza para estimular o sistema imunitário do paciente para prevenir a infecção por estirpes particulares de Influenza A.[0403] In one embodiment, the second or additional therapy comprises an administration of a vaccine, e.g., a vaccine described herein or a mixture (also known as a cocktail) of Influenza peptides to stimulate the patient's immune system to prevent infection with particular strains of Influenza A.

[0404]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende a administração de um agente antiviral, um analgésico, um anti-inflamatório, um antibiótico, um agente esteroide, uma segunda molécula de anticorpo terapêutica (por exemplo, um anticorpo anti-HA), um adjuvante, uma protease ou glicosidase (por exemplo, sialidase).[0404] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises the administration of an antiviral agent, an analgesic, an anti-inflammatory, an antibiotic, a steroid agent, a second therapeutic antibody molecule (e.g., an anti-inflammatory antibody). -HA), an adjuvant, a protease or glycosidase (e.g. sialidase).

[0405]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende, aciclovir, ribavirina, amantadina, rimantidina, um inibidor da neuraminidase (por exemplo, zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir) ou rimantadina.[0405] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises, acyclovir, ribavirin, amantadine, rimantidine, a neuraminidase inhibitor (e.g., zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir) or rimantadine .

[0406]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende uma segunda molécula de anticorpo, por exemplo, Ab 67-11 (número de pedido provisório dos EUA 61/645.453, FI6 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), FI28 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16: 265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012), ou CR6261 (ver, por exemplo, Ekiert et al., Science 324: 246, 2009). Assim, Ab 044 não pode ser utilizado em combinação de qualquer um desses anticorpos.[0406] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises a second antibody molecule, e.g., Ab 67-11 (US Provisional Application Number 61/645,453, FI6 (US Published Application No. 2010/0080813) , FI28 (US Published Application No. 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16: 265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012), or CR6261 (see, for example, Ekiert et al., Science 324:246, 2009). Thus, Ab 044 cannot be used in combination of any of these antibodies.

[0407]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende um agente suplementar ou adicional de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, por exemplo, um anticorpo anti-HA, por exemplo, um aqui divulgado. Por exemplo, dois ou mais de Ab 044, Ab 069, Ab 032 e Ab 031 podem ser administrados. Por exemplo, Ab 044 pode ser administrado em combinação com Ab 069 ou 032 Ab.[0407] In one embodiment, the supplementary or additional agent comprises a supplementary or additional binding agent, for example, an antibody molecule, for example, an anti-HA antibody, for example, one disclosed herein. For example, two or more of Ab 044, Ab 069, Ab 032 and Ab 031 may be administered. For example, Ab 044 can be administered in combination with Ab 069 or Ab 032.

[0408]No caso de combinações, dois agentes podem ser administrados como parte da mesma unidade de dosagem ou administrados separadamente. Outros agentes exemplares úteis para tratar os sintomas associados com a infecção por influenza são acetaminofeno, ibuprofeno, aspirina e naproxeno.[0408] In the case of combinations, two agents can be administered as part of the same dosage unit or administered separately. Other exemplary agents useful for treating symptoms associated with influenza infection are acetaminophen, ibuprofen, aspirin, and naproxen.

[0409]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado a um indivíduo humano que sofre de ou é susceptível a uma infecção de influenza.[0409] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered to a human subject who suffers from or is susceptible to an influenza infection.

[0410]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado antes da exposição conhecida à influenza, ou para determinadas subtipos ou estirpes de influenza.[0410] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered prior to known exposure to influenza, or to certain subtypes or strains of influenza.

[0411]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado antes da manifestação de efeitos ou sintomas de infecção de influenza, ou para um ou mais manifestação de efeitos particulares de efeitos ou sintomas de infecção por influenza.[0411] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered prior to the manifestation of effects or symptoms of influenza infection, or for one or more particular manifestations of effects or symptoms of infection. for influenza.

[0412]Em uma forma de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado após a exposição conhecida à influenza, ou para determinadas subtipos ou estirpes de influenza.[0412] In one embodiment the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered after known exposure to influenza, or to certain subtypes or strains of influenza.

[0413]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado após a manifestação de efeitos ou sintomas de infecção de influenza, ou após a observação de uma ou mais manifestação de efeitos particulares de efeitos ou sintomas de infecção por influenza.[0413] In one embodiment, the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered after the manifestation of effects or symptoms of influenza infection, or after the observation of one or more manifestations of particular effects of effects. or symptoms of influenza infection.

[0414]Em uma forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado em resposta a, ou para tratar ou prevenir, uma manifestação de um efeito ou sintoma de infecção de influenza, por exemplo, inflamação, febre, náusea, perda de peso, perda de apetite, respiração rápida, aumento da frequência cardíaca, pressão arterial alta, dores no corpo, dor muscular, dor nos olhos, fadiga, mal-estar, tosse seca, coriza e/ou dor de garganta.[0414] In one embodiment, the binding agent, e.g., an antibody molecule, is administered in response to, or to treat or prevent, a manifestation of an effect or symptom of influenza infection, e.g., inflammation , fever, nausea, weight loss, loss of appetite, rapid breathing, increased heart rate, high blood pressure, body aches, muscle pain, eye pain, fatigue, malaise, dry cough, runny nose and/or pain of throat.

[0415]Em uma forma de realização, o método compreende ainda, testar o indivíduo humano para o vírus influenza, por exemplo, com um processo aqui descrito. Em formas de realização, a administração é responsiva a um teste positivo para a influenza.[0415] In one embodiment, the method further comprises testing the human subject for the influenza virus, for example, with a process described herein. In embodiments, administration is responsive to a positive test for influenza.

[0416]Em ainda outro aspecto, a divulgação apresenta um método de tratamento de um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, infectado por um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010) pela administração de um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, destacado na divulgação. Por exemplo, o vírus influenza A é uma estirpe de H1, H5, H9, H3 e H7, tal como uma estirpe H1N1, uma estirpe H3N2 ou uma estirpe H5N1 do vírus influenza A.[0416] In yet another aspect, the disclosure discloses a method of treating an individual, e.g., a human individual, infected by an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5/ 2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010) by administering a binding agent, e.g., an antibody molecule, highlighted in the disclosure. For example, the influenza A virus is a strain of H1, H5, H9, H3 and H7, such as an H1N1 strain, an H3N2 strain or an H5N1 strain of the influenza A virus.

[0417]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, um anticorpo anti-HA aqui descrito, é administrao em vez de uma vacina para a prevenção da influenza. Em uma outra forma de realização, o agente de ligação, por exemplo, molécula de anticorpo anti-HA, é administrado em combinação com (simultaneamente ou sequencialmente com) uma vacina para a prevenção da influenza.[0417] In one embodiment, a binding agent, for example, an anti-HA antibody described herein, is administered in place of a vaccine for the prevention of influenza. In another embodiment, the binding agent, e.g., anti-HA antibody molecule, is administered in combination with (simultaneously or sequentially with) a vaccine for the prevention of influenza.

[0418]Em ainda outro aspecto, a divulgação apresenta um método para detectar vírions de influenza (por exemplo, a influenza A ou influenza B) em uma amostra biológica, tal como por contato da amostra com um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, apresentada na divulgação, e, em seguida, a detecção da ligação da molécula de anticorpo com a amostra. Em uma forma de realização, o método de detecção do vírus influenza (por exemplo, vírus influenza A ou influenza B) é realizado in vitro.[0418] In yet another aspect, the disclosure features a method for detecting influenza virions (e.g., influenza A or influenza B) in a biological sample, such as by contacting the sample with a binding agent, e.g., a antibody molecule, shown in the disclosure, and then detecting the binding of the antibody molecule with the sample. In one embodiment, the method of detecting influenza viruses (e.g., influenza A or influenza B viruses) is performed in vitro.

[0419]Em um aspecto, a divulgação apresenta um método de (a) fornecer uma amostra de um paciente; (b) contatar a amostra com um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, destacado na divulgação e (c) determinar se o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, destacado na divulgação se liga a um polipeptídeo na amostra, onde se o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga a um polipeptídeo na amostra, então o paciente é determinado estando infectado com um vírus influenza (por exemplo, um vírus Influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe de H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010). Em uma forma de realização, o paciente é determinado estando infectado com um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010) e o paciente é administrado adicionalmente com um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, aqui divulgado, por exemplo, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, com o qual o teste foi realizado.[0419] In one aspect, the disclosure presents a method of (a) providing a sample from a patient; (b) contacting the sample with a binding agent, e.g., an antibody molecule, highlighted in the disclosure and (c) determining whether the binding agent, e.g., an antibody molecule, highlighted in the disclosure binds to a polypeptide in the sample, where if the binding agent, e.g., an antibody molecule, binds to a polypeptide in the sample, then the patient is determined to be infected with an influenza virus (e.g., an Influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g. , A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010). In one embodiment, the patient is determined to be infected with an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/ 1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus , e.g., B/Wisconsin/1/2010) and the patient is additionally administered with a binding agent, e.g., an antibody molecule, disclosed herein, e.g., the binding agent, e.g., an antibody molecule , with which the test was carried out.

[0420]Em um outro aspecto, a invenção apresenta um método de indução de imunidade para uma ou mais estirpes de influenza, ou prevenir, retardar ou reduzir a infecção por uma estirpe de influenza, ou seu sintoma, em um vertebrado, por exemplo, um ser humano. O método compreende a administração ao vertebrado, por exemplo, um ser humano, de uma vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, aqui descrito.[0420] In another aspect, the invention features a method of inducing immunity to one or more strains of influenza, or preventing, delaying or reducing infection by a strain of influenza, or its symptom, in a vertebrate, e.g. a human being. The method comprises administering to the vertebrate, for example, a human, a broad-range vaccine, or broad-range immunogen, described herein.

[0421]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, induz uma resposta imune contra, ou confere proteção contra, uma ou mais estirpes de influenza.[0421] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, induces an immune response against, or confers protection against, one or more strains of influenza.

[0422]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, induz uma resposta imune contra, ou confere proteção contra, duas estirpes de influenza.[0422] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, induces an immune response against, or confers protection against, two strains of influenza.

[0423]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, induz uma resposta imune contra, ou confere proteção contra, duas estirpes de influenza do Grupo 1.[0423] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, induces an immune response against, or confers protection against, two Group 1 influenza strains.

[0424]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, induz uma resposta imune contra, ou confere proteção contra, pelo menos, uma estirpe do Grupo 1 e uma segunda estirpe do Grupo 1, Grupo 2 ou uma estirpe de influenza B.[0424] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, induces an immune response against, or confers protection against, at least one Group 1 strain and a second Group 1, Group 2 strain or a strain of influenza B.

[0425]Em uma forma de realização, o vírus influenza A é uma estirpe de H1, H5, H9, H3 e H7, tal como uma estirpe H1N1, uma estirpe H3N2 ou uma estirpe H5N1 do vírus influenza A.[0425] In one embodiment, the influenza A virus is a strain of H1, H5, H9, H3 and H7, such as an H1N1 strain, an H3N2 strain or an H5N1 strain of the influenza A virus.

[0426]Em uma forma de realização a administração resulta em, ou se correlaciona com, um ou mais dos seguintes: uma redução na possibilidade de uma infecção, uma redução na incidência ou gravidade de um sintoma ou manifestação de uma infecção por influenza, ou atraso ou aparecimento de um sintoma ou manifestação de uma infecção de influenza.[0426] In one embodiment the administration results in, or correlates with, one or more of the following: a reduction in the possibility of an infection, a reduction in the incidence or severity of a symptom or manifestation of an influenza infection, or delay or appearance of a symptom or manifestation of an influenza infection.

[0427]Em uma forma de realização a administração resulta em, ou se correlaciona com, um ou mais dos seguintes: uma redução na incidência ou gravidade de um sintoma ou manifestação de uma infecção secundária, ou atraso ou aparecimento de um sintoma ou manifestação de uma infecção secundária.[0427] In one embodiment the administration results in, or correlates with, one or more of the following: a reduction in the incidence or severity of a symptom or manifestation of a secondary infection, or delay or appearance of a symptom or manifestation of a secondary infection.

[0428]Em formas de realização, o indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, tem sido administrado com, ou o método compreende a administração de, ou recomenda a administração de, uma segunda ou adicional terapia.[0428] In embodiments, the subject, e.g., a human subject, has been administered with, or the method comprises administering, or recommends administering, a second or additional therapy.

[0429]Em formas de realização, a vacina de amplo alcance é administrada em combinação com um agente ou terapia suplementar ou adicional.[0429] In embodiments, the broad-range vaccine is administered in combination with a supplemental or additional agent or therapy.

[0430]Em formas de realização, o agente suplementar ou adicional compreende a administração de uma outra vacina ou outra terapia antiviral, por exemplo, uma terapia anti-NA ou uma anti-M2.[0430] In embodiments, the supplementary or additional agent comprises the administration of another vaccine or other antiviral therapy, for example, an anti-NA or an anti-M2 therapy.

[0431]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende a administração de uma vacina que compreende uma mistura de (também conhecido como um coquetel) de peptídeos de influenza para estimular o sistema imunitário do paciente para prevenir a infecção por estirpes particulares de influenza A.[0431] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises administering a vaccine comprising a mixture of (also known as a cocktail) influenza peptides to stimulate the patient's immune system to prevent infection by particular strains. of influenza A.

[0432]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende a administração de um agente antiviral, um analgésico, um anti-inflamatório, um antibiótico, um agente esteroide, uma segunda molécula de anticorpo terapêutico (por exemplo, um anticorpo anti-HA), um adjuvante, uma protease ou glicosidase (por exemplo, sialidase).[0432] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises the administration of an antiviral agent, an analgesic, an anti-inflammatory, an antibiotic, a steroid agent, a second therapeutic antibody molecule (e.g., an anti-inflammatory antibody). -HA), an adjuvant, a protease or glycosidase (e.g. sialidase).

[0433]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende, aciclovir, ribavirina, amantadina, rimantidina, um inibidor da neuraminidase (por exemplo, zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir) ou rimantadina.[0433] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises, acyclovir, ribavirin, amantadine, rimantidine, a neuraminidase inhibitor (e.g., zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir) or rimantadine .

[0434]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende uma molécula de anticorpo, por exemplo, Ab 67-11 (número de pedido provisório dos EUA 61/645.453, FI6 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), FI28 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012) ou CR6261 (ver, por exemplo, Ekiert et al., Science 324:246, 2009).[0434] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises an antibody molecule, e.g., Ab 67-11 (US Provisional Application Number 61/645,453, FI6 (US Published Application No. 2010/0080813), FI28 (US Published Application No. 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265 , 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012) or CR6261 (see, for example, Ekiert et al., Science 324:246, 2009).

[0435]Em uma forma de realização, o agente suplementar ou adicional compreende uma molécula de anticorpo aqui descrita, por exemplo, uma molécula de anticorpo selecionada a partir de moléculas de anticorpo Ab-044, Ab 069, Ab 032 e Ab 031.[0435] In one embodiment, the supplemental or additional agent comprises an antibody molecule described herein, for example, an antibody molecule selected from antibody molecules Ab-044, Ab 069, Ab 032 and Ab 031.

[0436]No caso de combinações, dois agentes podem ser administrados como parte da mesma unidade de dosagem ou administrados separadamente.[0436] In the case of combinations, two agents can be administered as part of the same dosage unit or administered separately.

[0437]Outros agentes suplementares exemplares ou adicionais úteis para tratar os sintomas associados com a infecção por influenza são acetaminofeno, ibuprofeno, aspirina e naproxeno.[0437] Other exemplary or additional supplemental agents useful for treating symptoms associated with influenza infection are acetaminophen, ibuprofen, aspirin and naproxen.

[0438]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, é administrada a um indivíduo humano que sofre de ou, é susceptível a, uma infecção de influenza.[0438] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, is administered to a human subject who suffers from, or is susceptible to, an influenza infection.

[0439]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, é administrada antes da exposição conhecida à influenza, ou para determinados subtipos ou estirpes de influenza.[0439] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, is administered prior to known exposure to influenza, or to certain subtypes or strains of influenza.

[0440]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, é administrada antes da manifestação de efeitos ou sintomas de infecção de influenza, ou a uma ou mais manifestações de efeitos particulares de efeitos ou sintomas de infecção por influenza.[0440] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, is administered prior to the manifestation of effects or symptoms of influenza infection, or to one or more manifestations of particular effects of effects or symptoms of infection. for influenza.

[0441]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, é administrada após a exposição conhecida a influenza, ou a particulares subtipos ou estirpes de influenza.[0441] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, is administered following known exposure to influenza, or to particular subtypes or strains of influenza.

[0442]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance é administrada após a manifestação de efeitos ou sintomas de infecção de influenza, ou após a observação de uma ou mais manifestações de efeitos particulares de efeitos ou sintomas de infecção por influenza.[0442] In one embodiment, the broad-range vaccine is administered after the manifestation of effects or symptoms of influenza infection, or after the observation of one or more manifestations of particular effects of effects or symptoms of influenza infection.

[0443]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, é administrada em resposta a, ou para tratar ou prevenir, uma manifestação de um efeito ou sintoma de infecção de influenza, por exemplo, inflamação, febre, náusea, perda de peso, perda de apetite, respiração rápida, aumento da frequência cardíaca, pressão arterial alta, dores no corpo, dor muscular, dor nos olhos, fadiga, mal-estar, tosse seca, coriza e/ou dor de garganta.[0443] In one embodiment, the broad-range vaccine, or broad-range immunogen, is administered in response to, or to treat or prevent, a manifestation of an effect or symptom of influenza infection, e.g., inflammation, fever, nausea, weight loss, loss of appetite, rapid breathing, increased heart rate, high blood pressure, body aches, muscle pain, eye pain, fatigue, malaise, dry cough, runny nose and/or headache throat.

[0444]Em uma forma de realização, o método compreende ainda, testar o indivíduo humano para o vírus influenza, por exemplo, com um processo aqui descrito. Em formas de realização, a administração é responsiva a um teste positivo para a influenza.[0444] In one embodiment, the method further comprises testing the human subject for the influenza virus, for example, with a process described herein. In embodiments, administration is responsive to a positive test for influenza.

[0445]Em ainda outro aspecto, a divulgação apresenta um método de tratamento de um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, infectado por um vírus influenza (por exemplo, um vírus influenza A, por exemplo, uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, ou um vírus influenza B, por exemplo, B/Wisconsin/1/2010) pela administração de uma vacina de amplo alcance apresentada na divulgação. Por exemplo, o vírus influenza A é uma estirpe de H1, H5, H9, H3 e H7, tal como uma estirpe H1N1, uma estirpe H3N2, ou uma estirpe H5N1 do vírus influenza A.[0445] In yet another aspect, the disclosure discloses a method of treating an individual, e.g., a human individual, infected by an influenza virus (e.g., an influenza A virus, e.g., a Group 1 strain, e.g. example, an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A/Indonesia/5/ 2005 or A/Vietnam/1203/2004, or an influenza B virus, e.g., B/Wisconsin/1/2010) by administering a broad-range vaccine disclosed in the disclosure. For example, the influenza A virus is a strain of H1, H5, H9, H3, and H7, such as an H1N1 strain, an H3N2 strain, or an H5N1 strain of the influenza A virus.

[0446]Em um outro aspecto, a invenção apresenta um método de redução da gravidade da influenza em uma população. O método inclui a administração de uma vacina de amplo alcance, ou imunógeno de amplo alcance, a indivíduos na população suficiente para evitar ou diminuir a possibilidade de transmissão de vírus influenza para outro indivíduo da população.[0446] In another aspect, the invention presents a method of reducing the severity of influenza in a population. The method includes administering a broad-range vaccine, or broad-range immunogen, to individuals in the population sufficient to prevent or lessen the possibility of transmission of influenza virus to another individual in the population.

[0447]Em um outro aspecto, a invenção apresenta um kit compreendendo um ou mais recipientes tendo nele disposto um imunógeno de amplo alcance, um ácido nucleico que codifica o epítopo de amplo alcance, ou uma vacina de amplo alcance aqui descrita. Em uma forma de realização, o kit inclui um recipiente tendo adjuvante nele disposto. Em uma forma de realização, o kit compreende um dispositivo de fornecimento, por exemplo, um dispositivo de injeção ou inalador. Em uma forma de realização, o epítopo de amplo alcance aqui descrito, ou um ácido nucleico que codifica para o epítopo amplo alcance, ou vacina de amplo alcance, é disposto em um dispositivo de entrega.[0447] In another aspect, the invention presents a kit comprising one or more containers having therein arranged a broad-range immunogen, a nucleic acid encoding the broad-range epitope, or a broad-range vaccine described herein. In one embodiment, the kit includes a container having adjuvant disposed therein. In one embodiment, the kit comprises a delivery device, for example, an injection device or inhaler. In one embodiment, the broad-range epitope described herein, or a nucleic acid encoding the broad-range epitope, or broad-range vaccine, is disposed in a delivery device.

[0448]Em uma forma de realização, o kit compreende um dispositivo de fornecimento, por exemplo, um dispositivo de injeção ou inalador. Em uma forma de realização, a vacina é disposta em um dispositivo de entrega.[0448] In one embodiment, the kit comprises a delivery device, for example, an injection device or inhaler. In one embodiment, the vaccine is disposed in a delivery device.

[0449]Em um outro aspecto, a invenção apresenta uma composição, por exemplo, uma vacina, que compreende um epítopo de amplo alcance aqui descrito, embalada em um recipiente hermeticamente selado tal como uma ampola. Em uma forma de realização, a composição é um líquido. Em uma forma de realização, a composição é um pó liofilizado líquido esterilizado seco ou concentrado isento de água.[0449] In another aspect, the invention features a composition, for example, a vaccine, comprising a broad-range epitope described herein, packaged in a hermetically sealed container such as an ampoule. In one embodiment, the composition is a liquid. In one embodiment, the composition is a dry sterilized liquid lyophilized powder or water-free concentrate.

[0450]A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que vulgarmente entendido por um perito vulgar na arte à qual este invento pertence. Embora métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos aqui descritos possam ser utilizados na prática ou no teste da invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência na sua totalidade. Em caso de conflito, a presente especificação, incluindo definições, controlará. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitativos.[0450] Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by a person skilled in the art to which this invention belongs. Although similar or equivalent methods and materials to those described herein may be used in practicing or testing the invention, suitable methods and materials are described below. All publications, patent applications, patents and other references mentioned herein are incorporated by reference in their entirety. In the event of a conflict, this specification, including definitions, will control. Furthermore, the materials, methods and examples are illustrative only and are not intended to be limiting.

[0451]Os detalhes de uma ou mais formas de realização existentes na divulgação são estabelecidos nos desenhos acompanhantes e na descrição abaixo. Outras características, objetos e vantagens existentes na divulgação serão evidentes a partir da descrição e desenhos e a partir das reivindicações.[0451] Details of one or more embodiments in the disclosure are set forth in the accompanying drawings and description below. Other features, objects and advantages of the disclosure will be apparent from the description and drawings and from the claims.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOSBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0452]A Figura 1 representa as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e leve (SEQ ID NOs: 94 e 95, respectivamente) do anticorpo anti-HA A18. A sequência domínio constante é indicada por itálico. As CDR estão indicadas por sublinhado.[0452] Figure 1 represents the amino acid sequences of the heavy and light chain (SEQ ID NOs: 94 and 95, respectively) of the anti-HA A18 antibody. The constant domain sequence is indicated by italics. CDRs are indicated by underlining.

[0453]A Figura 2 é a sequência do domínio variável de cadeia pesada de anticorpos anti-HA exemplares. A SEQ ID NOs. para as sequências mostradas são como se segue: VH15 é a SEQ ID NO: 15; VH16 é a SEQ ID NO: 16; VH17 é a SEQ ID NO: 17; VH18 é a SEQ ID NO: 18; VH19 é a SEQ ID NO: 19; VH21 é a SEQ ID NO: 21; VH22 é a SEQ ID NO: 22; VH20 é a SEQ ID NO: 20; VH23 é a SEQ ID NO: 23; VH24 é a SEQ ID NO: 24; VH25 é a SEQ ID NO: 25; VH26 é a SEQ ID NO: 26; VH27 é a SEQ ID NO: 27; e VH161 é a SEQ ID NO: 161.[0453] Figure 2 is the sequence of the heavy chain variable domain of exemplary anti-HA antibodies. SEQ ID NOs. for sequences shown are as follows: VH15 is SEQ ID NO: 15; VH16 is SEQ ID NO: 16; VH17 is SEQ ID NO: 17; VH18 is SEQ ID NO: 18; VH19 is SEQ ID NO: 19; VH21 is SEQ ID NO: 21; VH22 is SEQ ID NO: 22; VH20 is SEQ ID NO: 20; VH23 is SEQ ID NO: 23; VH24 is SEQ ID NO: 24; VH25 is SEQ ID NO: 25; VH26 is SEQ ID NO: 26; VH27 is SEQ ID NO: 27; and VH161 is SEQ ID NO: 161.

[0454]A Figura 3 é a sequência de domínio variável de cadeia leve de anticorpos anti-HA exemplares. A SEQ ID NOs. para as sequências mostradas são como se segue: VL28 é a SEQ ID NO: 28; VL29 é a SEQ ID NO: 29; VL30 é a SEQ ID NO: 30; VL35 é a SEQ ID NO: 35; VL31 é a SEQ ID NO: 31; VL32 é a SEQ ID NO: 32; VL33 é a SEQ ID NO: 33; VL34-ID é a SEQ ID NO: 34; VL36 é a SEQ ID NO: 36; VL45 é a SEQ ID NO: 45; VL46 é a SEQ ID NO: 46; VL37 é a SEQ ID NO: 37; VL38 é a SEQ ID NO: 38; VL39 é a SEQ ID NO: 39; VL40 é a SEQ ID NO: 40; VL41 é a SEQ ID NO: 41; VL42 é a SEQ ID NO: 42; VL43 é a SEQ ID NO: 43; VL44 é a SEQ ID NO: 44; VL47 é a SEQ ID NO: 47; VL48 é a SEQ ID NO: 48; VL49 é a SEQ ID NO: 49; VL50 é a SEQ ID NO: 50; VL51 é a SEQ ID NO: 51; VL52 é a SEQ ID NO: 52; VL53 é a SEQ ID NO: 53; VL54 é a SEQ ID NO: 54; VL55 é a SEQ ID NO: 55; VL56 é a SEQ ID NO: 56; VL57 é a SEQ ID NO: 57; VL58 é a SEQ ID NO: 58; VL59 é a SEQ ID NO: 59; VL60 é a SEQ ID NO: 60; VL61 é a SEQ ID NO: 61; VL153 é a SEQ ID NO: 153; VL154 é a SEQ ID NO: 154; VL155 é a SEQ ID NO: 155; VL156 é a SEQ ID NO: 156; e VL62 é a SEQ ID NO: 62.[0454] Figure 3 is the light chain variable domain sequence of exemplary anti-HA antibodies. SEQ ID NOs. for sequences shown are as follows: VL28 is SEQ ID NO: 28; VL29 is SEQ ID NO: 29; VL30 is SEQ ID NO: 30; VL35 is SEQ ID NO: 35; VL31 is SEQ ID NO: 31; VL32 is SEQ ID NO: 32; VL33 is SEQ ID NO: 33; VL34-ID is SEQ ID NO: 34; VL36 is SEQ ID NO: 36; VL45 is SEQ ID NO: 45; VL46 is SEQ ID NO: 46; VL37 is SEQ ID NO: 37; VL38 is SEQ ID NO: 38; VL39 is SEQ ID NO: 39; VL40 is SEQ ID NO: 40; VL41 is SEQ ID NO: 41; VL42 is SEQ ID NO: 42; VL43 is SEQ ID NO: 43; VL44 is SEQ ID NO: 44; VL47 is SEQ ID NO: 47; VL48 is SEQ ID NO: 48; VL49 is SEQ ID NO: 49; VL50 is SEQ ID NO: 50; VL51 is SEQ ID NO: 51; VL52 is SEQ ID NO: 52; VL53 is SEQ ID NO: 53; VL54 is SEQ ID NO: 54; VL55 is SEQ ID NO: 55; VL56 is SEQ ID NO: 56; VL57 is SEQ ID NO: 57; VL58 is SEQ ID NO: 58; VL59 is SEQ ID NO: 59; VL60 is SEQ ID NO: 60; VL61 is SEQ ID NO: 61; VL153 is SEQ ID NO: 153; VL154 is SEQ ID NO: 154; VL155 is SEQ ID NO: 155; VL156 is SEQ ID NO: 156; and VL62 is SEQ ID NO: 62.

[0455]A Figura 4 é um gráfico que descreve a neutralização da H3N2 estirpe X-31 por anticorpos A18. Em contraste, a estirpe X-31 não foi neutralizada por anticorpos AB1.[0455] Figure 4 is a graph depicting the neutralization of H3N2 strain X-31 by A18 antibodies. In contrast, strain X-31 was not neutralized by AB1 antibodies.

[0456]A Figura 5 é um gráfico dos resultados de ELISA retratando ligação mais forte de A18 para H3 Brisbane A18/07 e ligação muito mais fraca para H3 Wyoming/03.[0456] Figure 5 is a graph of ELISA results depicting stronger binding of A18 to H3 Brisbane A18/07 and much weaker binding to H3 Wyoming/03.

[0457]A Figura 6 é um gráfico dos resultados de ELISA retratando ligação de A18 a H3 Bris07 HA, vírus H3N2 Bris07 e fraca ligação para o controle negativo, BSA (albumina sérica bovina).[0457] Figure 6 is a graph of ELISA results depicting binding of A18 to H3 Bris07 HA, H3N2 Bris07 virus and weak binding to the negative control, BSA (bovine serum albumin).

[0458]As Figuras 7A e 7B são gráficos que ilustram a capacidade do anticorpo A18 para proteger os ratos infectados de perda de peso. Os ratos foram infectados tanto com estirpes de influenza H1N1 (Figura 7A) quanto com H3N2 (Figura 7B).[0458] Figures 7A and 7B are graphs illustrating the ability of the A18 antibody to protect infected mice from weight loss. Mice were infected with both H1N1 (Figure 7A) and H3N2 (Figure 7B) influenza strains.

[0459]As Figuras 8A e 8B são gráficos que ilustram a percentagem de sobrevivência de ratos infectados com o vírus H1N1 (Figura 8A) ou H3N2 (Figura 8B) e tratados 48 horas mais tarde quer com anticorpos Ab 028, Ab 031 ou Ab 032.[0459] Figures 8A and 8B are graphs illustrating the percentage survival of mice infected with the H1N1 (Figure 8A) or H3N2 (Figure 8B) virus and treated 48 hours later with either Ab 028, Ab 031 or Ab 032 antibodies .

[0460]As Figuras 9A, 9B e 9C são gráficos que ilustram a percentagem de sobrevivência de ratos infectados com H1N1 (A/Porto Rico/8/34) (Figura 9A), H3N2 (A/Victoria/03/75) (Figura 9B) ou H1N1 (A/Califórnia/04/09) (Figura 9C). Os ratos foram tratados com várias doses de anticorpo Ab 032.[0460] Figures 9A, 9B and 9C are graphs illustrating the survival percentage of mice infected with H1N1 (A/Puerto Rico/8/34) (Figure 9A), H3N2 (A/Victoria/03/75) (Figure 9B) or H1N1 (A/California/04/09) (Figure 9C). Mice were treated with various doses of Ab 032 antibody.

[0461]As Figuras 10A a 10D são gráficos dos resultados de ELISA que descrevem a ampla especificidade de anticorpos Ab 014 e Ab 028. Ambos os anticorpos Ab são mostrados ligarem-se a subtipos de Influenza do Grupo 1 (subtipos H1, H5 e H9) e do Grupo 2 (subtipos H3 e H7).[0461] Figures 10A to 10D are graphs of ELISA results depicting the broad specificity of antibodies Ab 014 and Ab 028. Both Ab antibodies are shown to bind to Group 1 Influenza subtypes (subtypes H1, H5 and H9 ) and Group 2 (subtypes H3 and H7).

[0462]A Figura 11 é um gráfico que representa a incapacidade da estirpe de influenza PR8 (H1N1) em superar a neutralização por AB 1 após 5 ciclos (R5) de propagação na presença de AB 1. Por outro lado, PR8 desenvolve resistência ao anticorpo de controle neutralizantes C179, visto por recuperação de título após quatro ciclos de seleção na presença de C179.[0462] Figure 11 is a graph representing the inability of the influenza strain PR8 (H1N1) to overcome neutralization by AB 1 after 5 cycles (R5) of propagation in the presence of AB 1. On the other hand, PR8 develops resistance to neutralizing control antibody C179, seen by titer recovery after four cycles of selection in the presence of C179.

[0463]A Figura 12 mostra as sequências de aminoácidos das regiões variáveis de cadeia pesada de FI6 (SEQ ID NO: 175), FI370 (SEQ ID NO: 176), FI6 variante 1 (SEQ ID NO: 177), FI6 variante 3 (SEQ ID NO: 178), FI6/370 (SEQ ID NO: 179) e a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve kappa de FI6 (SEQ ID NO: 180).[0463] Figure 12 shows the amino acid sequences of the heavy chain variable regions of FI6 (SEQ ID NO: 175), FI370 (SEQ ID NO: 176), FI6 variant 1 (SEQ ID NO: 177), FI6 variant 3 (SEQ ID NO: 178), FI6/370 (SEQ ID NO: 179) and the amino acid sequence of the kappa light chain variable region of FI6 (SEQ ID NO: 180).

[0464]A Figura 13 é a sequência de domínio variável de cadeia pesada de anticorpos anti-HA exemplares como mostrado na Figura 2 e incluindo um dipeptídeo ID N- terminal. A SEQ ID NOs. para as sequências mostradas são como se segue: VH15-ID é a SEQ ID NO: 96; VH16-ID é a SEQ ID NO: 97; VH17-ID é a SEQ ID NO: 98; VH18-ID é a SEQ ID NO: 99; VH19-ID é a SEQ ID NO: 100; VH21-ID é a SEQ ID NO: 101; VH22-ID é a SEQ ID NO: 102; VH20-ID é a SEQ ID NO: 103; VH23-ID é a SEQ ID NO: 104; VH24-ID é a SEQ ID NO: 105; VH25-ID é a SEQ ID NO: 106; VH26-ID é a SEQ ID NO: 107; VH27-ID é a SEQ ID NO: 108; e VH161-ID é a SEQ ID NO: 109.[0464] Figure 13 is the heavy chain variable domain sequence of exemplary anti-HA antibodies as shown in Figure 2 and including an N-terminal ID dipeptide. SEQ ID NOs. for sequences shown are as follows: VH15-ID is SEQ ID NO: 96; VH16-ID is SEQ ID NO: 97; VH17-ID is SEQ ID NO: 98; VH18-ID is SEQ ID NO: 99; VH19-ID is SEQ ID NO: 100; VH21-ID is SEQ ID NO: 101; VH22-ID is SEQ ID NO: 102; VH20-ID is SEQ ID NO: 103; VH23-ID is SEQ ID NO: 104; VH24-ID is SEQ ID NO: 105; VH25-ID is SEQ ID NO: 106; VH26-ID is SEQ ID NO: 107; VH27-ID is SEQ ID NO: 108; and VH161-ID is SEQ ID NO: 109.

[0465]A Figura 14 é a sequência de domínio variável de cadeia leve de anticorpos anti-HA exemplares como mostrado na Figura 3 e incluindo um dipeptídeo ID N-terminal. A SEQ ID NOs. para as sequências mostradas são como se segue: ID- VL28 é a SEQ ID NO: 110; VL29-ID é a SEQ ID NO: 111; VL30- ID é a SEQ ID NO: 112; VL35-ID é a SEQ ID NO: 113; VL31-ID é a SEQ ID NO: 114; VL32-ID é a SEQ ID NO: 115; VL33-ID é a SEQ ID NO: 116; VL34-ID é a SEQ ID NO: 117; VL36-ID é a SEQ ID NO: 118; VL45-ID é a SEQ ID NO: 119; VL46-ID é a SEQ ID NO: 120; VL37-ID é a SEQ ID NO: 121; VL38-ID é a SEQ ID NO: 122; VL39-ID é a SEQ ID NO: 123; VL40-ID é a SEQ ID NO: 124; VL41-ID é a SEQ ID NO: 125; VL42-ID é a SEQ ID NO: 126; VL43-ID é a SEQ ID NO: 127; VL44-ID é a SEQ ID NO: 128; VL47-ID é a SEQ ID NO: 129; VL48-ID é a SEQ ID NO: 130; VL49-ID é a SEQ ID NO: 131; VL50-ID é a SEQ ID NO: 132; VL51-ID é a SEQ ID NO: 133; VL52-ID é a SEQ ID NO: 134; VL53-ID é a SEQ ID NO: 135; VL54-ID é a SEQ ID NO: 136; VL55-ID é a SEQ ID NO: 137; VL56-ID é a SEQ ID NO: 138; VL57-ID é a SEQ ID NO: 139; VL58-ID é a SEQ ID NO: 140; VL59-ID é a SEQ ID NO: 141; VL60-ID é a SEQ ID NO: 142; VL61-ID é a SEQ ID NO: 143; VL153-ID é a SEQ ID NO: 157; VL154-ID é a SEQ ID NO: 158; ID-VL155 é a SEQ ID NO: 159; VL156-ID é a SEQ ID NO: 160; e VL62-ID é a SEQ ID NO: 144.[0465] Figure 14 is the light chain variable domain sequence of exemplary anti-HA antibodies as shown in Figure 3 and including an N-terminal dipeptide ID. SEQ ID NOs. for sequences shown are as follows: ID-VL28 is SEQ ID NO: 110; VL29-ID is SEQ ID NO: 111; VL30- ID is SEQ ID NO: 112; VL35-ID is SEQ ID NO: 113; VL31-ID is SEQ ID NO: 114; VL32-ID is SEQ ID NO: 115; VL33-ID is SEQ ID NO: 116; VL34-ID is SEQ ID NO: 117; VL36-ID is SEQ ID NO: 118; VL45-ID is SEQ ID NO: 119; VL46-ID is SEQ ID NO: 120; VL37-ID is SEQ ID NO: 121; VL38-ID is SEQ ID NO: 122; VL39-ID is SEQ ID NO: 123; VL40-ID is SEQ ID NO: 124; VL41-ID is SEQ ID NO: 125; VL42-ID is SEQ ID NO: 126; VL43-ID is SEQ ID NO: 127; VL44-ID is SEQ ID NO: 128; VL47-ID is SEQ ID NO: 129; VL48-ID is SEQ ID NO: 130; VL49-ID is SEQ ID NO: 131; VL50-ID is SEQ ID NO: 132; VL51-ID is SEQ ID NO: 133; VL52-ID is SEQ ID NO: 134; VL53-ID is SEQ ID NO: 135; VL54-ID is SEQ ID NO: 136; VL55-ID is SEQ ID NO: 137; VL56-ID is SEQ ID NO: 138; VL57-ID is SEQ ID NO: 139; VL58-ID is SEQ ID NO: 140; VL59-ID is SEQ ID NO: 141; VL60-ID is SEQ ID NO: 142; VL61-ID is SEQ ID NO: 143; VL153-ID is SEQ ID NO: 157; VL154-ID is SEQ ID NO: 158; ID-VL155 is SEQ ID NO: 159; VL156-ID is SEQ ID NO: 160; and VL62-ID is SEQ ID NO: 144.

[0466]A Figura 15 é um gráfico que representa o número de sincícios observados após o tratamento de células HEK293 HA infectadas com anticorpo Ab 032. "Pré" e "Pós" indicam o tratamento das células com o anticorpo antes da indução de condições de fusão por pH baixo (5,0), ou após a indução por pH baixo.[0466] Figure 15 is a graph representing the number of syncytia observed after treatment of infected HEK293 HA cells with Ab 032 antibody. "Pre" and "Post" indicate treatment of cells with the antibody before induction of conditions of melting by low pH (5.0), or after induction by low pH.

[0467]A Figura 16 é um gráfico que descreve a percentagem de sobrevivência de ratos infectados com o vírus H1N1 e subsequentemente infectados com a bactéria S. pneumococcus. Os ratos foram tratados com o anticorpo ou antibiótico anti-HA.[0467] Figure 16 is a graph depicting the survival percentage of mice infected with the H1N1 virus and subsequently infected with the S. pneumococcus bacteria. Mice were treated with anti-HA antibody or antibiotic.

[0468]A Figura 17 mostra as sequências variáveis de cadeia leve e pesada de anticorpos anti-HA exemplares adicionais. A SEQ ID NOs. para as sequências mostradas são como se segue: VL165 é a SEQ ID NO: 165; VL166 é a SEQ ID NO: 166; VL167 é a SEQ ID NO: 167; VL168 é a SEQ ID NO: 168; VL169 é a SEQ ID NO: 169; VH164 é a SEQ ID NO: 164; VH162 é a SEQ ID NO: 162; VH163 é a SEQ ID NO: 163.[0468] Figure 17 shows the light and heavy chain variable sequences of additional exemplary anti-HA antibodies. SEQ ID NOs. for the sequences shown are as follows: VL165 is SEQ ID NO: 165; VL166 is SEQ ID NO: 166; VL167 is SEQ ID NO: 167; VL168 is SEQ ID NO: 168; VL169 is SEQ ID NO: 169; VH164 is SEQ ID NO: 164; VH162 is SEQ ID NO: 162; VH163 is SEQ ID NO: 163.

[0469]A Figura 18 é um gráfico que representa o número de sincícios observados após o tratamento de células HEK293 HA infectadas com anticorpo Ab 044. Barra da esquerda = pH 5,0; barra da direita = pH 7,0.[0469] Figure 18 is a graph representing the number of syncytia observed after treatment of HEK293 HA cells infected with Ab 044 antibody. Left bar = pH 5.0; right bar = pH 7.0.

[0470]A Figura 19A mostra as alterações de peso dos ratos após o desafio com a estirpe H1N1 PR8 e administração de veículo, ribavirina, profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg, profilaxia com Ab 044 de 2,5 mg/kg, ou profilaxia com Ab 044 de 0,6 mg/kg.[0470] Figure 19A shows the weight changes of mice after challenge with the H1N1 PR8 strain and administration of vehicle, ribavirin, prophylaxis with Ab 044 at 10 mg/kg, prophylaxis with Ab 044 at 2.5 mg/kg, or prophylaxis with Ab 044 at 0.6 mg/kg.

[0471]A Figura 19B mostra a alteração de peso dos ratos após o desafio com a estirpe H1N1 PR8 e administração de terapia de Ab 044 dois dias após a infecção a 10 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 0,6 mg/kg; ou terapia de Ab 044 três dias após a infecção a 20 mg/kg.[0471] Figure 19B shows the weight change of mice after challenge with the H1N1 PR8 strain and administration of Ab 044 therapy two days after infection at 10 mg/kg, 2.5 mg/kg, or 0.6 mg/kg; or Ab 044 therapy three days after infection at 20 mg/kg.

[0472]A Figura 20A mostra as alterações de peso dos ratos após o desafio com a estirpe H3N2 Victoria e administração de veículo, ribavirina, ou profilaxia com AB 044 a 10 mg/kg.[0472] Figure 20A shows the weight changes of mice after challenge with the H3N2 Victoria strain and administration of vehicle, ribavirin, or prophylaxis with AB 044 at 10 mg/kg.

[0473]A Figura 20B mostra as alterações de peso dos ratos após o desafio com H3N2 e administração de terapia de Ab 044 dois dias após a infecção a 10 mg/kg, 2,5 mg/kg, ou 0,6 mg/kg; ou terapia de Ab 044 três dias após a infecção em 20 mg/kg.[0473] Figure 20B shows the weight changes of mice after challenge with H3N2 and administration of Ab 044 therapy two days after infection at 10 mg/kg, 2.5 mg/kg, or 0.6 mg/kg ; or Ab 044 therapy three days after infection at 20 mg/kg.

[0474]A Figura 21A mostra carga viral pulmonar em ratos quatro dias após desafio viral com H1N1, conforme medido por ensaio de placas. Os ratos infectados foram tratados com veículo, ribavirina, profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg, profilaxia com Ab 044 a 2,5 mg/kg, profilaxia com Ab 044 a 0,6 mg/kg, terapia com Ab 044 a 10 mg/kg, terapia com Ab 044 a 2,5 mg/kg, terapia com Ab 044 a0,6 mg/kg, ou terapia com Ab 044 às 72 horas.[0474] Figure 21A shows lung viral load in mice four days after viral challenge with H1N1, as measured by plaque assay. Infected mice were treated with vehicle, ribavirin, Ab 044 prophylaxis at 10 mg/kg, Ab 044 prophylaxis at 2.5 mg/kg, Ab 044 prophylaxis at 0.6 mg/kg, Ab 044 therapy at 10 mg/kg, Ab 044 therapy at 2.5 mg/kg, Ab 044 therapy at 0.6 mg/kg, or Ab 044 therapy at 72 hours.

[0475]A Figura 21 mostra carga de pulmão viral em ratos quatro dias após o desafio viral com H3N2. Os ratos infectados foram tratados com veículo, ribavirina, profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg, terapia com Ab 044 a 10 mg/kg, terapia com Ab 044 a 2,5 mg/kg, terapia com Ab 044 a 0,6 mg/kg, ou terapia com Ab 044 a 72 h. Asterisco, p <0,05.[0475] Figure 21 shows lung viral load in mice four days after viral challenge with H3N2. Infected mice were treated with vehicle, ribavirin, Ab 044 prophylaxis at 10 mg/kg, Ab 044 therapy at 10 mg/kg, Ab 044 therapy at 2.5 mg/kg, Ab 044 therapy at 0.6 mg/kg, or therapy with Ab 044 at 72 h. Asterisk, p <0.05.

[0476]A Figura 22A mostra as curvas de sobrevivência de ratos após o desafio com o vírus H1N1 e administração de veículo, ribavirina, profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg, 2,5 mg/kg ou 0,6 mg/kg.[0476] Figure 22A shows the survival curves of mice after challenge with the H1N1 virus and administration of vehicle, ribavirin, prophylaxis with Ab 044 at 10 mg/kg, 2.5 mg/kg or 0.6 mg/kg .

[0477]A Figura 22B mostra as curvas de sobrevivência de ratos após desafio H1N1 e administração de veículo, terapia com Ab 044 a 48 h a 10 mg/kg, a 2,5 mg/kg, a 0,6 mg/kg, ou terapia com Ab 044 a 72 h a 20 mg/kg.[0477] Figure 22B shows the survival curves of mice after H1N1 challenge and administration of vehicle, Ab 044 therapy at 48 h at 10 mg/kg, at 2.5 mg/kg, at 0.6 mg/kg, or therapy with Ab 044 at 72 h at 20 mg/kg.

[0478]A Figura 23A mostra as curvas de sobrevivência de ratos após o desafio com H3N2 e administração de veículo, ribavirina, ou profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg.[0478] Figure 23A shows the survival curves of mice after challenge with H3N2 and administration of vehicle, ribavirin, or Ab 044 prophylaxis at 10 mg/kg.

[0479]A Figura 23B mostra as curvas de sobrevivência de ratos após o desafio com H3N2 e administração de veículo, terapia com Ab 044 a 48 h após-infecção a 10 mg/kg, a 2,5 mg/kg, a 0,6 mg/kg, ou terapia com Ab 044 a 72 h após a infecção a 20 mg/kg.[0479] Figure 23B shows survival curves of mice after H3N2 challenge and administration of vehicle, Ab 044 therapy at 48 h post-infection at 10 mg/kg, at 2.5 mg/kg, at 0. 6 mg/kg, or Ab 044 therapy at 72 h postinfection at 20 mg/kg.

[0480]A Figura 24 representa os efeitos da administração profilática e terapêutica de Ab 044 sobre o peso de ratos BALB/c infectados com o vírus influenza H5N1 A/Vietnam/1203/2004.[0480] Figure 24 represents the effects of prophylactic and therapeutic administration of Ab 044 on the weight of BALB/c mice infected with the H5N1 A/Vietnam/1203/2004 influenza virus.

[0481]A Figura 25 representa os efeitos da administração profilática e terapêutica de Ab 044 na sobrevivência de ratos BALB/c infectados com o vírus influenza H5N1 A/Vietnam/1203/2004.[0481] Figure 25 represents the effects of prophylactic and therapeutic administration of Ab 044 on the survival of BALB/c mice infected with the H5N1 A/Vietnam/1203/2004 influenza virus.

[0482]A Figura 26 é uma representação tridimensional de HA H3 com os resíduos de aminoácidos que são previstos como parte de epítopo de Ab044, mas não faz parte do epítopo de FI6 realçado. Isto é, os aminoácidos realçados são únicos ao epítopo de Ab044.[0482] Figure 26 is a three-dimensional representation of HA H3 with the amino acid residues that are predicted to be part of the Ab044 epitope, but not part of the FI6 epitope highlighted. That is, the highlighted amino acids are unique to the Ab044 epitope.

[0483]A Figura 27 é uma representação tridimensional de HA H3 com os resíduos de aminoácidos que fazem parte do epítopo de FI6 mas não são previstos para serem parte do epítopo de Ab044 realçado.[0483] Figure 27 is a three-dimensional representation of HA H3 with the amino acid residues that are part of the FI6 epitope but are not predicted to be part of the Ab044 epitope highlighted.

DESCRIÇÃO DETALHADADETAILED DESCRIPTION

[0484]A divulgação é baseada, pelo menos em parte, no desenho e síntese de moléculas de anticorpos que podem se ligar a um epítopo que é conservado entre vários subtipos de hemaglutinina do vírus influenza (por exemplo, vírus influenza A e influenza B). Por exemplo, as moléculas de anticorpos aqui descritas são úteis como terapia de amplo alcance contra a doença causada por, pelo menos, uma estirpe de Influenza A pertencente ao Grupo 1 e uma estirpe de Influenza A pertencente ao Grupo 2 para neutralizar a infectividade do vírus pertencentes a ambos Grupo 1 e Grupo 2 (pelo menos um subtipo de cada).[0484] The disclosure is based, at least in part, on the design and synthesis of antibody molecules that can bind to an epitope that is conserved among various influenza virus hemagglutinin subtypes (e.g., influenza A and influenza B viruses). . For example, the antibody molecules described herein are useful as broad-range therapy against disease caused by at least one strain of Influenza A belonging to Group 1 and one strain of Influenza A belonging to Group 2 to neutralize the infectivity of the virus. belonging to both Group 1 and Group 2 (at least one subtype of each).

[0485]As moléculas de anticorpo foram concebidas por uma abordagem baseada na estrutura racional para objetivar uma região do vírus que não é totalmente acessível ao sistema imunitário humano e, portanto, não passível de seleção de anticorpos através de abordagens de rastreio mais clássicas. Esta abordagem baseada em racional para a concepção e desenvolvimento de moléculas de anticorpos de amplo alcance permite o desenvolvimento de vacinas mais eficazes para Influenza pandêmica e sazonal. Essa abordagem também permite a preparação prévia de vacinas contra a pandemia de modo que elas estão prontas para serem empregues contra subtipos de vírus específicos (por exemplo, os subtipos de vírus aviários) que podem sofrer mutações para se tornarem adaptados a humanos e altamente transmissíveis. As vacinas (por exemplo, vacinas sazonais), que utilizam as moléculas de anticorpos aqui descritas, podem gerar uma resposta imunitária mais potente, sem o uso de adjuvantes, e fornecer uma proteção ampla contra a variação de estirpe viral.[0485] Antibody molecules were designed by a rational structure-based approach to target a region of the virus that is not fully accessible to the human immune system and therefore not amenable to antibody selection through more classical screening approaches. This rationale-based approach to the design and development of broad-range antibody molecules enables the development of more effective vaccines for pandemic and seasonal Influenza. This approach also allows for the advance preparation of pandemic vaccines so that they are ready for use against specific virus subtypes (e.g., avian virus subtypes) that can mutate to become human-adapted and highly transmissible. Vaccines (e.g., seasonal vaccines) that utilize the antibody molecules described here can generate a more potent immune response without the use of adjuvants and provide broad protection against viral strain variation.

DefiniçõesDefinitions

[0486] Tal como aqui utilizado, o termo "molécula de anticorpo" refere-se a um polipeptídeo que compreende a sequência suficiente a partir de uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e/ou a sequência suficiente de uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve, para proporcionar a ligação específica ao antígeno. Ela compreende anticorpos de comprimento completo, bem como os seus fragmentos, por exemplo, fragmentos de Fab, que suporta a ligação ao antígeno. Tipicamente, uma molécula de anticorpo vai compreender sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada e CDR1, CDR2 e CDR3 da de cadeia leve. As moléculas de anticorpos incluem anticorpos enxertados com CDR humanos, humanizados, e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Em formas de realização de uma molécula de anticorpo compreende uma proteína que compreende, pelo menos, um segmento de imunoglobulina de região variável, por exemplo, uma sequência de aminoácidos que proporciona um domínio variável de imunoglobulina ou uma sequência de domínio variável de imunoglobulina.[0486] As used herein, the term "antibody molecule" refers to a polypeptide comprising sufficient sequence from a heavy chain immunoglobulin variable region and/or sufficient sequence from a heavy chain immunoglobulin variable region. light chain, to provide specific binding to the antigen. It comprises full-length antibodies as well as their fragments, for example, Fab fragments, which support binding to the antigen. Typically, an antibody molecule will comprise heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 and light chain CDR1, CDR2 and CDR3 sequences. Antibody molecules include humanized, human CDR-grafted antibodies and antigen-binding fragments thereof. In embodiments an antibody molecule comprises a protein comprising at least one variable region immunoglobulin segment, for example, an amino acid sequence that provides an immunoglobulin variable domain or an immunoglobulin variable domain sequence.

[0487]A cadeia VH ou VL da molécula de anticorpo pode ainda incluir a totalidade ou parte de uma região constante de cadeia pesada ou leve, para assim formar uma cadeia pesada ou leve de imunoglobulina, respectivamente. Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo é um tetrâmero de duas cadeias pesadas de imunoglobulina e duas cadeias leves de imunoglobulina.[0487] The VH or VL chain of the antibody molecule may further include all or part of a heavy or light chain constant region, to thus form an immunoglobulin heavy or light chain, respectively. In one embodiment, the antibody molecule is a tetramer of two immunoglobulin heavy chains and two immunoglobulin light chains.

[0488]Uma molécula de anticorpo pode compreender um ou ambos segmentos de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada (ou leve). Tal como aqui utilizado, o termo "segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada (ou leve)" refere-se a uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada (ou leve) inteira, ou um fragmento do mesmo que é capaz de ligação ao antígeno. A capacidade de um segmento de cadeia pesada ou leve para ligar o antígeno é medida com o segmento emparelhado com uma cadeia leve ou pesada, respectivamente. Em algumas formas de realização, um segmento de cadeia pesada ou leve, que é menos do que uma região variável de comprimento completo irá, quando emparelhado com a cadeia apropriada, se ligar com uma afinidade que é, pelo menos, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 95% do que é visto quando a cadeia de comprimento completo é combinada com uma cadeia leve ou cadeia pesada, respectivamente.[0488] An antibody molecule may comprise one or both heavy (or light) chain immunoglobulin variable region segments. As used herein, the term "heavy (or light) chain immunoglobulin variable region segment" refers to an entire heavy (or light) chain immunoglobulin variable region, or a fragment thereof that is capable of binding to the antigen. The ability of a heavy or light chain segment to bind antigen is measured with the segment paired with a light or heavy chain, respectively. In some embodiments, a heavy or light chain segment that is less than a full-length variable region will, when paired with the appropriate chain, bind with an affinity that is at least 20, 30, 40 , 50, 60, 70, 80, 90, or 95% of what is seen when the full-length chain is combined with a light chain or heavy chain, respectively.

[0489]Um segmento de região variável de imunoglobulina pode diferir de uma sequência referência ou consenso. Como aqui utilizado, "diferir", significa que um resíduo na sequência de referência ou sequência consenso é substituído tanto por um resíduo diferente ou um resíduo ausente ou inserido.[0489] An immunoglobulin variable region segment may differ from a reference or consensus sequence. As used herein, "differ" means that a residue in the reference sequence or consensus sequence is replaced by either a different residue or a missing or inserted residue.

[0490]Uma molécula de anticorpo pode compreender uma região variável de cadeia pesada (H) (aqui abreviada como VH) e uma região variável de cadeia leve (L), (aqui abreviada como VL). Em outro exemplo, um anticorpo compreende duas regiões variáveis de cadeias pesadas (H) e duas regiões variáveis de cadeia leves (L) ou os fragmentos de anticorpos de ligação dos mesmos. As cadeias leves da imunoglobulina podem ser dos tipos kappa ou lambda. Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo é glicosilada. Uma molécula de anticorpo pode ser funcional para a citotoxicidade dependente de anticorpos e/ou citotoxicidade mediada pelo complemento, ou pode ser não funcional para uma ou ambas destas atividades. Uma molécula de anticorpo pode ser um anticorpo intacto ou um fragmento de ligação ao antígeno.[0490] An antibody molecule may comprise a heavy chain variable region (H) (abbreviated here as VH) and a light chain variable region (L) (herein abbreviated as VL). In another example, an antibody comprises two heavy chain variable regions (H) and two light chain variable regions (L) or antibody fragments binding thereto. Immunoglobulin light chains can be of the kappa or lambda types. In one embodiment, the antibody molecule is glycosylated. An antibody molecule may be functional for antibody-dependent cytotoxicity and/or complement-mediated cytotoxicity, or may be non-functional for one or both of these activities. An antibody molecule can be an intact antibody or an antigen-binding fragment.

[0491]As moléculas de anticorpos incluem "fragmentos de ligação ao antígeno" de um anticorpo de comprimento completo, por exemplo, um ou mais fragmentos de um anticorpo de comprimento completo que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um alvo HA de interesse. Exemplos de fragmentos de ligação englobados dentro do termo "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo de comprimento completo incluem: (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste dos domínios VL, VH, CL e CH1; (ii) um F(ab') ou F(ab')2, um fragmento bivalente incluindo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte DE dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste de um domínio VH; e (vi) uma região determinante de complementaridade isolada (CDR) que retém a funcionalidade. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser ligados, utilizando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que sejam feitos como uma cadeia de proteína única, em que as regiões VL e VH se emparelham para formar moléculas monovalentes conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv). Ver, por exemplo, Bird et al., (1988) Science 242:423-426; e Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 85:58795883. As moléculas de anticorpos incluem diacorpos.[0491] Antibody molecules include "antigen-binding fragments" of a full-length antibody, for example, one or more fragments of a full-length antibody that retain the ability to specifically bind to an HA target of interest. Examples of binding fragments encompassed within the term "antigen-binding fragment" of a full-length antibody include: (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) an F(ab') or F(ab')2, a bivalent fragment including two Fab fragments linked by a disulfide bond in the hinge region; (iii) an Fd fragment consisting of the VH and CH1 domains; (iv) an Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (v) a dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), consisting of a VH domain ; and (vi) an isolated complementarity determining region (CDR) that retains functionality. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are encoded by separate genes, they can be linked, using recombinant methods, by a synthetic linker that allows them to be made as a single protein chain, in which the regions VL and VH pair to form monovalent molecules known as single-chain Fv (scFv). See, for example, Bird et al., (1988) Science 242:423-426; and Huston et al., (1988) Proc. Natl. Academic. Sci. USA 85:58795883. Antibody molecules include diabodies.

[0492] Tal como aqui utilizado, um anticorpo refere-se a um polipeptídeo, por exemplo, um polipeptídeo de cadeia única ou tetramérico, compreendendo as características estruturais e funcionais, particularmente características de ligação do antígeno, de uma imunoglobulina. Tipicamente, um anticorpo humano compreende duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas. Cada cadeia compreende uma região variável.[0492] As used herein, an antibody refers to a polypeptide, for example, a single-chain or tetrameric polypeptide, comprising the structural and functional characteristics, particularly antigen-binding characteristics, of an immunoglobulin. Typically, a human antibody comprises two identical light chains and two identical heavy chains. Each chain comprises a variable region.

[0493]As regiões variáveis pesadas (VH) e leves (VL) podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, designadas "regiões determinantes de complementaridade" ("CDR"), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas "regiões-estrutirais" (FR). Os anticorpos humanos têm três CDR de VH e três CDR de VL separadas por regiões de estrutura FR1-FR4. A extensão das FRs e CDRs foi precisamente definida (ver, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Edição, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, Publicação NIH No 91-3242; e Chothia, C. et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917). AS definições de Kabat são aqui utilizadas. Cada VH e VL é tipicamente composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas a partir do terminal amino para o terminal carboxil na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.[0493] The heavy (VH) and light (VL) variable regions can be subdivided into regions of hypervariability, called "complementarity determining regions" ("CDR"), interspersed with regions that are more conserved, called "structural regions". (FR). Human antibodies have three VH CDRs and three VL CDRs separated by FR1-FR4 framework regions. The extent of the FRs and CDRs has been precisely defined (see, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No 91-3242; and Chothia, C. et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917). Kabat definitions are used here. Each VH and VL is typically composed of three CDRs and four FRs, arranged from the amino terminus to the carboxyl terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

[0494]As cadeias de imunoglobulina pesada e leve podem ser ligadas por ligações de dissulfeto. A região constante da cadeia pesada tipicamente compreende três domínios constantes, CH1, CH2 e CH3. A região constante da cadeia leve compreende, tipicamente, um domínio CL. A região variável de cadeia leve e pesada contém um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos tipicamente mediam a ligação do anticorpo a tecidos hospedeiros ou fatores, incluindo várias células do sistema imunitário (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico.[0494] Heavy and light immunoglobulin chains can be linked by disulfide bonds. The constant region of the heavy chain typically comprises three constant domains, CH1, CH2 and CH3. The constant region of the light chain typically comprises a CL domain. The light and heavy chain variable region contain a binding domain that interacts with an antigen. The constant regions of antibodies typically mediate binding of the antibody to host tissues or factors, including various cells of the immune system (e.g., effector cells) and the first component (Clq) of the classical complement system.

[0495]O termo "imunoglobulina" compreende diversas amplas classes de polipeptídeos que podem ser distinguidos bioquimicamente. Os peritos na arte apreciarão que as cadeias pesadas são classificadas como gama, mu, alfa, delta ou épsilon (y, μ, α, δ, ε) com algumas subclasses entre eles (por exemplo, y1-y4). É a natureza desta cadeia, que determina a "classe" do anticorpo como IgG, IgM, IgA IgD, ou IgE, respectivamente. As subclasses de imunoglobulina (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, etc., são bem caracterizadas e são conhecidas por conferir especialização funcional. Versões modificadas de cada uma destas classes e isotipos são facilmente perceptíveis para o perito na arte em vista da presente descrição e, em conformidade, estão dentro do âmbito da presente descrição. Todas as classes de imunoglobulinas estão claramente dentro do âmbito da presente divulgação. As cadeias leves são classificadas como kapa ou lambda (K, À). Cada classe de cadeia pesada pode ser ligada com qualquer uma cadeia leve kappa ou lambda.[0495] The term "immunoglobulin" comprises several broad classes of polypeptides that can be distinguished biochemically. Those skilled in the art will appreciate that heavy chains are classified as gamma, mu, alpha, delta or epsilon (y, μ, α, δ, ε) with some subclasses in between (e.g., y1-y4). It is the nature of this chain that determines the "class" of the antibody as IgG, IgM, IgA, IgD, or IgE, respectively. Immunoglobulin subclasses (isotypes), e.g., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, etc., are well characterized and are known to confer functional specialization. Modified versions of each of these classes and isotypes are readily apparent to one skilled in the art in view of the present description and, accordingly, are within the scope of the present description. All classes of immunoglobulins are clearly within the scope of the present disclosure. Light chains are classified as kappa or lambda (K, À). Each class of heavy chain can be linked with either a kappa or lambda light chain.

[0496]Os anticorpos adequados incluem, mas não estão limitados a, monoclonal, monoespecífico, policlonal, poliespecífico, anticorpos humanos, anticorpos primatizados, anticorpos quiméricos, anticorpos bi- específicos, anticorpos humanizados, anticorpos conjugados (ou seja, anticorpos conjugados ou fundidos com outras proteínas, marcadores radioativos, citotóxicos), Small Modular ImmunoPharmaceuticals (Imunofarmaceuticos Modulares Pequenos) ("SMIPs™"), anticorpos de cadeia simples, anticorpos camelídeos e fragmentos de anticorpos.[0496] Suitable antibodies include, but are not limited to, monoclonal, monospecific, polyclonal, polyspecific, human antibodies, primatized antibodies, chimeric antibodies, bispecific antibodies, humanized antibodies, conjugated antibodies (i.e., antibodies conjugated or fused to other proteins, radioactive labels, cytotoxics), Small Modular ImmunoPharmaceuticals ("SMIPs™"), single chain antibodies, camelid antibodies and antibody fragments.

[0497]Em formas de realização, um anticorpo é um anticorpo humanizado. Um anticorpo humanizado refere-se a uma imunoglobulina compreendendo uma região de estrutura humana e uma ou mais CDRs a partir de uma imunoglobulina não-humana, por exemplo, camundongo ou rato. A imunoglobulina que fornece o CDR é muitas vezes referida como "dadora" e a imunoglobulina humano que fornece a estrutura muitas vezes chamada "receptora", embora em formas de realização nenhuma fonte ou limitação processo estejam implícitas. Tipicamente, um anticorpo humanizado compreende uma imunoglobulina de cadeia leve humanizada e uma cadeia pesada humanizada.[0497] In embodiments, an antibody is a humanized antibody. A humanized antibody refers to an immunoglobulin comprising a human framework region and one or more CDRs from a non-human, e.g., mouse or rat, immunoglobulin. The immunoglobulin that provides the CDR is often referred to as "donor" and the human immunoglobulin that provides the structure is often called "recipient", although in embodiments no source or process limitations are implied. Typically, a humanized antibody comprises a humanized light chain immunoglobulin and a humanized heavy chain.

[0498]Um "domínio de imunoglobulina" refere-se a um domínio do domínio variável ou constante de moléculas de imunoglobulina. Domínios de imunoglobulina contêm tipicamente duas folhas β formadas de cerca de sete fios β e uma ligação de dissulfeto conservada (ver, por exemplo, A.F. Williams e A.N. Barclay (1988) Ann. Rev. Immunol. 6:381-405).[0498] An "immunoglobulin domain" refers to a domain of the variable or constant domain of immunoglobulin molecules. Immunoglobulin domains typically contain two β-sheets formed of about seven β-strands and a conserved disulfide bond (see, for example, A.F. Williams and A.N. Barclay (1988) Ann. Rev. Immunol. 6:381-405).

[0499] Tal como aqui utilizado, uma "sequência de domínio variável de imunoglobulina" refere-se a uma sequência de aminoácidos que pode formar a estrutura de um domínio variável de imunoglobulina. Por exemplo, a sequência pode incluir a totalidade ou parte da sequência de aminoácidos de um domínio variável de ocorrência natural. Por exemplo, a sequência pode omitir um, dois ou mais N- ou C-terminais de aminoácidos, os aminoácidos internos, pode incluir uma ou mais inserções ou aminoácidos terminais adicionais, ou pode incluir outras alterações. Em uma forma de realização, um polipeptídeo que compreende uma sequência de domínio variável de imunoglobulina pode associar-se com outra sequência do domínio variável de imunoglobulina para formar uma estrutura de ligação alvo (ou "local de ligação ao antígeno"), por exemplo, uma estrutura que interage com o antígeno alvo.[0499] As used herein, an "immunoglobulin variable domain sequence" refers to an amino acid sequence that can form the structure of an immunoglobulin variable domain. For example, the sequence may include all or part of the amino acid sequence of a naturally occurring variable domain. For example, the sequence may omit one, two or more N- or C-terminal amino acids, internal amino acids, may include one or more insertions or additional terminal amino acids, or may include other changes. In one embodiment, a polypeptide comprising an immunoglobulin variable domain sequence may associate with another immunoglobulin variable domain sequence to form a target binding structure (or "antigen binding site"), e.g. a structure that interacts with the target antigen.

[0500] Tal como aqui utilizado, o termo anticorpos compreende anticorpos monoclonais intactos, anticorpos policlonais, anticorpos de domínio único (por exemplo, anticorpos de domínio único de tubarão (por exemplo, IgNAR ou seus fragmentos)), anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos bi-específicos) formados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada. Os anticorpos para utilização na presente invenção podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM).[0500] As used herein, the term antibodies comprises intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, single domain antibodies (e.g., shark single domain antibodies (e.g., IgNAR or fragments thereof)), multispecific antibodies (e.g., bi-specific antibodies) formed from at least two intact antibodies and antibody fragments, provided that they exhibit the desired biological activity. Antibodies for use in the present invention may be of any type (e.g., IgA, IgD, IgE, IgG, IgM).

[0501]A molécula de anticorpo ou anticorpo pode ser derivada de um mamífero, por exemplo, um roedor, por exemplo, um camundongo ou rato, cavalo, porco ou cabra. Em formas de realização, uma molécula de anticorpo ou anticorpo é produzida utilizando uma célula recombinante. Em algumas formas de realização, uma molécula de anticorpo ou anticorpo é um anticorpo quimérico, por exemplo, de camundongo, rato, cavalo, porco, ou de outras espécies, tendo domínios de regiões constante e/ou variáveis humanas.[0501] The antibody or antibody molecule can be derived from a mammal, for example, a rodent, for example, a mouse or rat, horse, pig or goat. In embodiments, an antibody or antibody molecule is produced using a recombinant cell. In some embodiments, an antibody or antibody molecule is a chimeric antibody, for example, from mouse, rat, horse, pig, or other species, having human constant and/or variable region domains.

[0502]Um agente de ligação, tal como é aqui utilizado, é um agente que se liga, por exemplo, liga-se especificamente, um antígeno alvo, por exemplo, HA. Agentes de ligação da invenção compratilham relação estrutural suficiente com moléculas de anticorpo anti-HA aqui divulgadas para suportar a ligação específica a HA e em formas de realização, outras propriedades funcionais de uma molécula de anticorpo anti-HA aqui divulgada. Em formas de realização, um agente de ligação irá apresentar uma afinidade de ligação de pelo menos a 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, ou 90% de uma molécula de anticorpo aqui descrita, por exemplo, uma molécula de anticorpo com o qual partilha homologia estrutural significativa, por exemplo, sequências de CDR. Os agentes de ligação podem ser de ocorrência natural, por exemplo, como são alguns anticorpos, ou sintética. Em uma forma de realização, um agente de ligação é um polipeptídeo, por exemplo, uma molécula de anticorpo, por exemplo, um anticorpo. Embora alguns agentes ligantes sejam moléculas de anticorpos, outras moléculas, por exemplo, outros polipeptídeos, pode também funcionar como agentes de ligação. Os agentes de ligação polipeptídicos podem ser monoméricos ou multiméricos, por exemplo, diméricos, triméricos ou tetraméricos e podem ser estabilizados por ligações intraou inter-cadeias, por exemplo, ligações de dissulfeto. Eles podem conter resíduos de aminoácidos de ocorrência natural ou não natural. Em formas de realização, os agentes de ligação são moléculas de anticorpos, ou outros polipeptídeos, que apresentam uma ou mais CDRs de moléculas de anticorpo aqui descritas, ou que de outro modo imitam a estrutura de uma molécula de anticorpo aqui descrita. Os agentes de ligação podem também compreender aptômeros, ácidos nucleicos ou outras entidades moleculares. Um agente de ligação pode ser desenvolvido em uma variedade de maneiras, por exemplo, por imunização, pela concepção racional, rastreio de estruturas aleatórias, ou uma combinação destas ou de outras abordagens. Normalmente, um agente de ligação atuará fazendo contato com, substancialmente, o mesmo epítopo que uma molécula de anticorpo aqui descrita, por exemplo, uma molécula de anticorpo com a qual partilha a homologia estrutural significativa, por exemplo, sequências de CDR. Um agente de ligação pode interagir com aminoácidos, sacarídeos ou suas combinações. Os polipeptídeos diferentes de anticorpos podem ser utilizados como um esqueleto para apresentar a sequência, por exemplo, uma ou mais, ou de um conjunto completo de CDR de cadeia pesada e/ou de cadeia leve, aqui descrita. Esqueletos exemplares incluem adnectin, proteínas de ligação de DNA de dedos de zinco, proteína A, lipoclins, domínio de repetição de consenso ankryin, tioredoxin, anticalins, domínios centyrin, Avimer, ubiquitina, peptidomiméticos, peptídeos grampeados, miniproteínas nó de cistina e IgNARs. Em algumas formas de realização, um agente de ligação é ou compreende um ácido nucleico, por exemplo, ADN, ARN ou suas misturas. Em formas de realização, um agente de ligação, por exemplo, um ácido nucleico, mostra estrutura secundária, terciária, ou quaternária. Em algumas formas de realização, um agente de ligação, por exemplo, um ácido nucleico, forma uma estrutura que imita a estrutura de uma molécula de anticorpo aqui descrita.[0502] A binding agent, as used herein, is an agent that binds, for example, specifically binds, a target antigen, for example, HA. Binding agents of the invention share sufficient structural relationship with anti-HA antibody molecules disclosed herein to support specific binding to HA and in embodiments, other functional properties of an anti-HA antibody molecule disclosed herein. In embodiments, a binding agent will exhibit a binding affinity of at least 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, or 90% of an antibody molecule described herein, e.g., a antibody molecule with which it shares significant structural homology, e.g. CDR sequences. Binding agents can be naturally occurring, for example, as are some antibodies, or synthetic. In one embodiment, a binding agent is a polypeptide, e.g., an antibody molecule, e.g., an antibody. Although some binding agents are antibody molecules, other molecules, for example other polypeptides, can also function as binding agents. Polypeptide linkers may be monomeric or multimeric, for example, dimeric, trimeric or tetrameric, and may be stabilized by intra- or inter-chain linkages, for example, disulfide bonds. They may contain naturally occurring or non-naturally occurring amino acid residues. In embodiments, the binding agents are antibody molecules, or other polypeptides, which bear one or more CDRs of antibody molecules described herein, or which otherwise mimic the structure of an antibody molecule described herein. Binding agents may also comprise aptomeres, nucleic acids or other molecular entities. A binding agent can be developed in a variety of ways, for example, by immunization, by rational design, random structure screening, or a combination of these or other approaches. Typically, a binding agent will act by contacting substantially the same epitope as an antibody molecule described herein, e.g., an antibody molecule with which it shares significant structural homology, e.g., CDR sequences. A binding agent can interact with amino acids, saccharides, or combinations thereof. Polypeptides other than antibodies can be used as a backbone to display the sequence, for example, one or more or a complete set of heavy chain and/or light chain CDRs described herein. Exemplary scaffolds include adnectin, zinc finger DNA binding proteins, protein A, lipoclins, ankryin consensus repeat domain, thioredoxin, anticalins, centyrin domains, Avimer, ubiquitin, peptidomimetics, stapled peptides, cystine knot miniproteins, and IgNARs. In some embodiments, a binding agent is or comprises a nucleic acid, for example, DNA, RNA or mixtures thereof. In embodiments, a binding agent, for example, a nucleic acid, shows secondary, tertiary, or quaternary structure. In some embodiments, a binding agent, for example, a nucleic acid, forms a structure that mimics the structure of an antibody molecule described herein.

[0503]Um agente de ligação de amplo alcance, por exemplo, uma molécula de anticorpo, como aqui utilizado, liga uma pluralidade de diferentes moléculas de HA, e, opcionalmente, neutraliza vírus compreendendo as diferentes moléculas de HA. Em uma forma de realização, ele se liga a uma primeira HA e liga-se uma segunda HA de influenza A do Grupo 1, e, opcionalmente, neutraliza vírus compreendendo as primeiras ou segundas moléculas de HA. Em uma forma de realização, ele se liga a uma primeira HA de um vírus influenza A do Grupo 1 e liga-se uma segunda HA de um vírus influenza A Grupo 2, e, opcionalmente, neutraliza vírus compreendendo as diferentes moléculas de HA. Em uma forma de realização, ele se liga a uma primeira HA de um vírus influenza A do Grupo 1 ou 2 e se liga a uma HA de um vírus influenza B, e, opcionalmente, neutraliza vírus compreendendo as diferentes moléculas de HA. Em formas de realização, ele se liga e, em formas de realização, neutraliza, pelo menos, dois clades ou aglomerados de diferentes vírus, por exemplo, a partir de diferentes grupos. Em formas de realização, ele se liga e, em formas de realização neutraliza, todas ou substancialmente todas as estirpes do Grupo 1 um/ou Grupo 2 aqui descritas. Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe de aglomerado do Grupo 1 H1, por exemplo, H1a ou H1b, e pelo menos uma estirpe de aglomerado do Grupo 2 H3 e H7. Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do aglomerado do Grupo 1 H1, por exemplo, H1a ou H1b, e pelo menos uma estirpe de Influenza B. Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do aglomerado do Grupo 2 H3 ou e H7, pelo menos, uma estirpe de Influenza B. Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga e, em formas de realização, neutraliza: pelo menos uma estirpe do aglomerado do Grupo 1 H1, por exemplo, H1a ou H1b, e pelo menos uma estirpe do aglomerado do Grupo 2 H3 e H7 e pelo menos uma estirpe de influenza B. Em algumas forma de realização, agente de ligação, por exemplo, molécula de anticorpo, se liga, e, opcionalmente, neutraliza ou media a infecção de hospedeiros particulares, por exemplo, aviário, camelo, canino, gato, algália, equino, humano, rato, porco, tigre, ou outro mamífero ou pássaro.[0503] A broad-range binding agent, for example, an antibody molecule, as used herein, binds a plurality of different HA molecules, and optionally neutralizes viruses comprising the different HA molecules. In one embodiment, it binds to a first HA and binds to a second Group 1 influenza A HA, and optionally neutralizes viruses comprising the first or second HA molecules. In one embodiment, it binds to a first HA of a Group 1 influenza A virus and binds to a second HA of a Group 2 influenza A virus, and optionally neutralizes viruses comprising the different HA molecules. In one embodiment, it binds to a first HA of a Group 1 or 2 influenza A virus and binds to a HA of an influenza B virus, and optionally neutralizes viruses comprising the different HA molecules. In embodiments, it binds to and, in embodiments, neutralizes at least two clades or clusters of different viruses, e.g., from different groups. In embodiments, it binds to, and in embodiments neutralizes, all or substantially all of the Group 1 and/or Group 2 strains described herein. In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one Group 1 H1 cluster strain, e.g., H1a or H1b, and at least at least one cluster strain from Group 2 H3 and H7. In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one strain from the Group 1 H1 cluster, e.g., H1a or H1b, and at least one at least one strain of Influenza B. In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one strain from the Group 2 cluster H3 or and H7 at least one strain of Influenza B. In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to and, in embodiments, neutralizes: at least one strain from the Group 1 H1 cluster , for example, H1a or H1b, and at least one strain from the Group 2 cluster H3 and H7 and at least one strain of influenza B. In some embodiments, binding agent, e.g., antibody molecule, binds, and, optionally, neutralizes or mediates infection of particular hosts, e.g., avian, camel, canine, cat, civet, equine, human, rat, pig, tiger, or other mammal or bird.

[0504]O termo "terapia de combinação", tal como aqui utilizado, refere-se à administração de uma pluralidade de agentes, por exemplo, em que pelo menos um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo aqui divulgada, é administrado a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano. A introdução dos agentes ao indivíduo pode estar em diferentes tempos. Em formas de realização, os agentes são administrados em regimes de sobreposição, ou de tal modo que o indivíduo é exposto simultaneamente a ambos os agentes, ou de tal modo que a resposta do indivíduo é melhor do que seria vista com um ou outro agente administrado sozinho.[0504] The term "combination therapy", as used herein, refers to the administration of a plurality of agents, for example, wherein at least one binding agent, for example, an antibody molecule disclosed herein, is administered to an individual, for example, a human individual. The introduction of agents to the individual can occur at different times. In embodiments, the agents are administered in overlapping regimens, either in such a way that the individual is exposed simultaneously to both agents, or in such a way that the individual's response is better than would be seen with either agent administered. alone.

[0505] Tal como aqui utilizado, um "mutante de escape" é uma estirpe da influenza mutada que é resistente à neutralização por uma molécula de anticorpo anti-HA aqui descrita. Em formas de realização, um mutante de escape é resistente à neutralização com um agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, mas a sua estirpe progenitora é neutralizada pelo agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo.[0505] As used herein, an "escape mutant" is a mutated influenza strain that is resistant to neutralization by an anti-HA antibody molecule described herein. In embodiments, an escape mutant is resistant to neutralization with a binding agent, e.g., antibody molecules, but its parent strain is neutralized by the binding agent, e.g., an antibody molecule.

[0506] Tal como aqui utilizado, "uma pandemia de Influenza" refere-se a uma nova estirpe viral que surge devido à adaptação humana de uma estirpe da influenza, por mutação ou por aparecimento de uma estirpe por rearranjo de diferentes estirpes de influenza A. A estirpe pandêmica resultante é significativamente diferente das estirpes anteriores e a maioria das pessoas vai ter pouca ou nenhuma imunidade preexistente. Os sintomas e as complicações podem ser mais graves e mais frequentes do que aqueles típicos de Influenza sazonal. Exemplos de últimos vírus de Influenza pandêmica incluem, por exemplo, a 'influenza suína' H1N1 2009, a "influenza asiática" H2N2 1957-1958 e as estirpes de influenza H3N2 1968.[0506] As used herein, "an Influenza pandemic" refers to a new viral strain that arises due to human adaptation of an influenza strain, by mutation or by emergence of a strain by reassortment of different influenza A strains. The resulting pandemic strain is significantly different from previous strains and most people will have little or no pre-existing immunity. Symptoms and complications can be more serious and more frequent than those typical of seasonal influenza. Examples of recent pandemic influenza viruses include, for example, the 2009 H1N1 'swine influenza', the 1957-1958 H2N2 'Asian influenza' and the 1968 H3N2 influenza strains.

[0507]Os termos "purificado" e "isolado", tal como aqui utilizado, no contexto de uma molécula de anticorpo, por exemplo, um anticorpo, um imunógeno, ou geralmente um polipeptídeo, obtido a partir de uma fonte natural, refere- se a uma molécula que é substancialmente livre de materiais contaminantes da fonte natural, por exemplo, materiais celulares da fonte natural, por exemplo, restos de células, membranas, organelas, a maior parte dos ácidos nucleicos ou proteínas, presentes nas células. Assim, um polipeptídeo, por exemplo, uma molécula de anticorpo, que é isolado inclui preparações dos polipeptídeo possuindo menos do que cerca de 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, ou 1% (em peso seco) de materiais celulares e/ou materiais contaminantes. Os termos "purificado" e "isolado" quando utilizados no contexto de uma espécie quimicamente sintetizada, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou imunógeno, refere-se à espécie que é substancialmente isenta de precursores químicos ou outros produtos químicos que estão envolvidos na síntese da molécula.[0507] The terms "purified" and "isolated", as used herein, in the context of an antibody molecule, e.g., an antibody, an immunogen, or generally a polypeptide, obtained from a natural source, refer to is a molecule that is substantially free of contaminating materials from the natural source, e.g., cellular materials from the natural source, e.g., cell debris, membranes, organelles, most nucleic acids or proteins, present in cells. Thus, a polypeptide, e.g., an antibody molecule, that is isolated includes preparations of the polypeptide having less than about 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, or 1% (by dry weight) of cellular materials and/or contaminating materials. The terms "purified" and "isolated" when used in the context of a chemically synthesized species, e.g., an antibody molecule, or immunogen, refer to the species that is substantially free of chemical precursors or other chemicals that are involved in synthesis of the molecule.

[0508]A preparação de agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, como aqui utilizado, compreende uma pluralidade de moléculas de um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, aqui descrita. Em formas de realização, o agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, compensa, pelo menos, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 99,5 ou 99,9%, da preparação, ou dos ingredientes ativos da preparação, por peso ou número. Em formas de realização, agente de ligação é uma molécula de anticorpo que compensa, pelo menos, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 99,5 ou 99,9%, da preparação, ou dos ingredientes ativos, ou ingredientes de polipeptídeos ou moléculas de anticorpo, da preparação, por peso e em número. Em formas de realização, o agente de ligação é uma molécula de anticorpo e a preparação não contém mais do que 30, 20, 10, 5, 2, 1, ou 0,5%, em peso ou número, de um contaminante, por exemplo, um reagente, solvente, precursores ou outras espécies da fonte ou utilizadas na preparação da molécula de anticorpo, por exemplo, uma espécie de uma célula, a mistura de reação, ou outro sistema utilizado para produzir a molécula de anticorpo.[0508] The preparation of binding agents, for example, antibody molecules, as used herein, comprises a plurality of molecules of a binding agent, for example, an antibody molecule, described herein. In embodiments, the binding agent, e.g., antibody molecules, makes up at least 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 99.5, or 99.9% of the preparation or active ingredients of the preparation, by weight or number. In embodiments, binding agent is an antibody molecule that makes up at least 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 99.5 or 99.9% of the preparation or active ingredients. or polypeptide ingredients or antibody molecules, of the preparation, by weight and in number. In embodiments, the binding agent is an antibody molecule and the preparation contains no more than 30, 20, 10, 5, 2, 1, or 0.5%, by weight or number, of a contaminant, per example, a reagent, solvent, precursors or other species from the source or used in the preparation of the antibody molecule, for example, a species from a cell, the reaction mixture, or other system used to produce the antibody molecule.

[0509] Tal como aqui utilizado, o termo "prevenir a infecção" significa que um indivíduo (por exemplo, um ser humano) é menos susceptível de ser infectado por influenza se o indivíduo recebe o anticorpo antes (por exemplo, 1 dia, 2 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mês ou mais) de ser exposto a influenza.[0509] As used herein, the term "prevent infection" means that an individual (e.g., a human) is less likely to be infected by influenza if the individual receives the antibody earlier (e.g., 1 day, 2 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 1 month or more) of being exposed to influenza.

[0510] Tal como aqui utilizado, "influenza sazonal" é uma estirpe que é idêntica ou intimamente relacionada com as estirpes que têm circulado pela população humana nos últimos anos e, por conseguinte, a maioria das pessoas está pelo menos parcialmente imune a ela. Tal estirpe não é susceptível de causar doença grave. Os sintomas podem incluir febre, tosse, coriza e dor muscular e, em casos raros, a morte pode resultar de complicações, como a pneumonia. Surtos seguem padrões sazonais previsíveis, anualmente e geralmente no outono e inverno e em climas temperados. Infecção devido à influenza sazonal é comumente referido como a gripe.[0510] As used herein, "seasonal influenza" is a strain that is identical or closely related to the strains that have been circulating in the human population in recent years and, therefore, most people are at least partially immune to it. Such a strain is not likely to cause serious illness. Symptoms can include fever, cough, runny nose and muscle pain, and in rare cases, death can result from complications such as pneumonia. Outbreaks follow predictable seasonal patterns, annually and generally in autumn and winter and in temperate climates. Infection due to seasonal influenza is commonly referred to as the flu.

[0511] Tal como aqui utilizado, a ligação específica, significa que um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, se liga ao seu antígeno com um KD igual ou inferior a 10-5. Em formas de realização, o anticorpo liga-se ao seu antígeno com KD igual ou inferior a 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 ou 10-12.[0511] As used herein, specific binding means that a binding agent, for example, an antibody molecule, binds to its antigen with a KD equal to or less than 10-5. In embodiments, the antibody binds to its antigen with KD equal to or less than 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 or 10-12.

[0512] Tal como aqui utilizado, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um agente terapêutico, por exemplo, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, que resulta em um desfecho positivo para o indivíduo. Em formas de realização, pode ser estatisticamente correlacionado com efeito terapêutico ou benefício, por exemplo, a diminuição ou a prevenção de uma manifestação de um efeito ou sintoma, quando administrado a uma população de indivíduos. Em formas de realização, é uma quantidade que também proporciona um pré-selecionado, ou proporção razoável, benefício/risco. Em formas de realização, é uma quantidade eficaz para reduzir a incidência e/ou gravidade de e/ou para atrasar o aparecimento de uma ou mais aspectos, sintomas ou características de uma doença, distúrbio ou condição. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser administrada em um regime de dosagem que pode compreender uma ou várias doses unitárias.[0512] As used herein, the term "therapeutically effective amount" refers to an amount of a therapeutic agent, e.g., a binding agent, e.g., an antibody molecule, that results in a positive outcome for the individual. In embodiments, it may be statistically correlated with therapeutic effect or benefit, for example, the lessening or prevention of a manifestation of an effect or symptom, when administered to a population of individuals. In embodiments, it is an amount that also provides a pre-selected, or reasonable, benefit/risk ratio. In embodiments, it is an amount effective to reduce the incidence and/or severity of and/or to delay the onset of one or more aspects, symptoms or characteristics of a disease, disorder or condition. A therapeutically effective amount may be administered in a dosage regimen that may comprise one or more unit doses.

[0513] Tal como aqui utilizado, o termo "tratar infecção" significa que um indivíduo (por exemplo, um ser humano) que tenha sido infectado com influenza e sofre de sintomas da influenza (por exemplo, a gripe), irá em formas de realização, sofrer sintomas menos graves e/ou irá recuperar mais rapidamente quando a molécula de anticorpo é administrada do que se o anticorpo nunca é administrado. Em formas de realização, quando uma infecção é tratada, um ensaio para detectar vírus no indivíduo irá detectar menos de vírus após o tratamento eficaz para a infecção. Por exemplo, um ensaio de diagnóstico utilizando uma molécula de anticorpo, tal como uma molécula de anticorpo aqui descrita, irá detectar menos ou nenhum vírus em uma amostra biológica de um paciente após a administração de uma molécula de anticorpo para o tratamento eficaz da infecção viral. Outros ensaios, tais como PCR (por exemplo, qPCR) também podem ser utilizados para monitorar o tratamento de um paciente, para detectar a presença, por exemplo, diminuição da presença (ou ausência) após o tratamento de infecções virais no paciente. O tratamento pode, por exemplo, parcialmente ou completamente, aliviar, atenuar, reviver, inibir, reduzir a gravidade de e/ou reduz a incidência de e, opcionalmente, retardar o início de uma ou mais manifestações dos efeitos ou sintomas, características e/ou causas de uma doença, distúrbio e/ou estado particular (por exemplo, a gripe). Em formas de realização, o tratamento é de um indivíduo que não exibe sinais de doença em causa, distúrbio e/ou estado e/ou de um indivíduo que exibe apenas sinais precoces da doença, distúrbio e/ou estado. Em formas de realização, o tratamento é de um indivíduo que apresenta um ou mais sinais estabelecidos da doença, distúrbio e/ou estado em causa. Em formas de realização, o tratamento é de um indivíduo diagnosticado como sofrendo de Influenza.[0513] As used herein, the term "treating infection" means that an individual (e.g., a human being) who has been infected with influenza and suffers from symptoms of influenza (e.g., the flu), will in forms of achievement, suffer less severe symptoms and/or will recover more quickly when the antibody molecule is administered than if the antibody is never administered. In embodiments, when an infection is treated, an assay to detect virus in the individual will detect less virus after effective treatment for the infection. For example, a diagnostic assay utilizing an antibody molecule, such as an antibody molecule described herein, will detect less or no virus in a biological sample from a patient after administration of an antibody molecule for effective treatment of viral infection. . Other assays such as PCR (e.g., qPCR) can also be used to monitor a patient's treatment, to detect the presence, e.g., decreased presence (or absence) after treatment of viral infections in the patient. The treatment may, for example, partially or completely alleviate, attenuate, revive, inhibit, reduce the severity of and/or reduce the incidence of and, optionally, delay the onset of one or more manifestations of the effects or symptoms, characteristics and/or or causes of a particular disease, disorder and/or condition (e.g., the flu). In embodiments, the treatment is of an individual who does not exhibit signs of the underlying disease, disorder and/or condition and/or of an individual who exhibits only early signs of the disease, disorder and/or condition. In embodiments, the treatment is of an individual who exhibits one or more established signs of the disease, disorder and/or condition in question. In embodiments, the treatment is of an individual diagnosed as suffering from Influenza.

[0514]Os cálculos de "homologia" ou "identidade de sequência" ou "identidade" entre duas sequências (os termos são aqui utilizados alternadamente) podem ser realizados como se segue. As sequências estão alinhadas para fins de comparação ótima (por exemplo, podem ser introduzidas lacunas em uma ou ambas de uma primeira e uma segunda sequência de aminoácidos ou de ácido nucleico para o alinhamento ótimo e sequências não homólogas podem ser ignoradas para fins de comparação). O alinhamento ótimo é determinado como sendo a melhor pontuação utilizando o programa GAP no pacote de software GCG com uma matriz de pontuação Blossum 62 com uma penalidade de intervalo de 12, uma penalidade de lacuna de 4, e uma penalidade de intervalo de quadro de leitura 5. Os resíduos de aminoácido ou os nucleotídeos nas posições de aminoácido ou posições de nucleotídeos correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeos como a posição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas nessa posição (como aqui utilizado, o aminoácido ou ácido nucleico "identidade" é equivalente a amino ácido ou ácido nucleico "homologia"). A percentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas partilhadas pelas sequências.[0514] Calculations of "homology" or "sequence identity" or "identity" between two sequences (the terms are used interchangeably herein) can be performed as follows. Sequences are aligned for optimal comparison purposes (e.g., gaps may be introduced in one or both of a first and second amino acid or nucleic acid sequence for optimal alignment and non-homologous sequences may be ignored for comparison purposes) . The optimal alignment is determined to be the best score using the GAP program in the GCG software package with a Blossum 62 scoring matrix with a gap penalty of 12, a gap penalty of 4, and a reading frame gap penalty. 5. The amino acid residues or nucleotides at corresponding amino acid positions or nucleotide positions are then compared. When a position in the first sequence is occupied by the same amino acid residue or nucleotide as the corresponding position in the second sequence, then the molecules are identical at that position (as used herein, "identity" amino acid or nucleic acid is equivalent to amino acid or nucleic "homology"). The percentage of identity between the two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences.

Polipeptídeos de Hemaglutinina (HA) e InfluenzaHemagglutinin Polypeptides (HA) and Influenza

[0515]Os vírus influenza são vírus sense negativo, de fita simples, envelope de RNA segmentado. Duas glicoproteínas, um polipeptídeo de hemaglutinina (HA) e um polipeptídeo neuraminidase (NA), são exibidos na superfície externa do envelope viral. Existem vários subtipos de Influenza A, marcados de acordo com um número de H (para o tipo de hemaglutinina) e um número de N (para o tipo de neuraminidase). Existem 17 diferentes antígenos H (HI para H17) e nove antígenos N diferentes (NL a N9). Estirpes de Influenza são identificadas pela nomenclatura baseada no número de subtipos de polipeptídeos HA e polipeptídeos NA da estirpe, por exemplo, H1N1, H1N2, H1N3, H1N4, H1N5 e semelhantes.[0515] Influenza viruses are negative sense, single-stranded, segmented RNA envelope viruses. Two glycoproteins, a hemagglutinin polypeptide (HA) and a neuraminidase polypeptide (NA), are displayed on the outer surface of the viral envelope. There are several subtypes of Influenza A, marked according to an H number (for the hemagglutinin type) and an N number (for the neuraminidase type). There are 17 different H antigens (HI to H17) and nine different N antigens (NL to N9). Influenza strains are identified by nomenclature based on the number of HA polypeptide and NA polypeptide subtypes of the strain, e.g., H1N1, H1N2, H1N3, H1N4, H1N5 and the like.

[0516]HA é a glicoproteína de superfície viral principal que medeia a ligação e a entrada do vírus nas células hospedeiras e é um alvo primário de respostas de anticorpos neutralizantes. HA é um trímero de três monômeros idênticos. Cada monômero é sintetizado como um precursor, HA0, que é proteoliticamente processado em duas cadeias polipeptídicas ligadas por dissulfeto, HA1 e HA2. O ectodomínio desta proteína tem (i) um domínio de cabeça globular possuindo atividade de ligação ao receptor e os principais determinantes antigênicos, (ii) uma região de dobradiça e (iii) uma região de haste em que uma sequência crítica para a fusão, o peptídeo de fusão, está localizado. O ciclo de replicação viral é iniciado quando o vírion se liga através das suas proteínas de hemaglutinina de superfície aos receptores de glicano sialilados na célula hospedeira e entra na célula por endocitose. O ambiente ácido do endossoma induz alterações conformacionais na HA que expõem o peptídeo de fusão escondido dentro da região da haste do trímero. O peptídeo de fusão exposto medeia a fusão das membranas virais e celulares alvo, resultando na liberação da ribonucleoproteína viral no citoplasma da célula.[0516]HA is the main viral surface glycoprotein that mediates virus binding and entry into host cells and is a primary target of neutralizing antibody responses. HA is a trimer of three identical monomers. Each monomer is synthesized as a precursor, HA0, which is proteolytically processed into two disulfide-linked polypeptide chains, HA1 and HA2. The ectodomain of this protein has (i) a globular head domain possessing receptor-binding activity and major antigenic determinants, (ii) a hinge region, and (iii) a stem region in which a sequence critical for fusion, the fusion peptide, is located. The viral replication cycle is initiated when the virion binds through its surface hemagglutinin proteins to sialylated glycan receptors on the host cell and enters the cell by endocytosis. The acidic environment of the endosome induces conformational changes in HA that expose the fusion peptide hidden within the stem region of the trimer. The exposed fusion peptide mediates the fusion of the target viral and cellular membranes, resulting in the release of the viral ribonucleoprotein into the cell's cytoplasm.

[0517] Subtipos de hemaglutinina de Influenza A foram divididos em dois grupos principais e quatro clades menores e estes são divididos em tipos. Estirpes de influenza A do Grupo 1 são divididos em três subtipos: (i) H8, H9 e H12 ("tipo H9"); (ii) H1, H2, H5, H6 e H17 ("tipo H1a"); e (iii) H11, H13 e H16 ("tipo H1b"). As estirpes do Grupo 2 são divididas em dois clades: (i) H3, H4 e H14 ("tipo H3"); e (ii) H7, H10 e H15 ("tipo H7"). Os tipos H1b e H1a são classificados em conjunto como o tipo H1. Os diferentes subtipos de HA não compartilham necessariamente de forte identidade de sequência de aminoácidos, mas as suas estruturas globais 3D são semelhantes.[0517] Influenza A hemagglutinin subtypes have been divided into two main groups and four minor clades and these are divided into types. Group 1 influenza A strains are divided into three subtypes: (i) H8, H9 and H12 ("H9 type"); (ii) H1, H2, H5, H6 and H17 ("type H1a"); and (iii) H11, H13 and H16 ("type H1b"). Group 2 strains are divided into two clades: (i) H3, H4 and H14 ("H3 type"); and (ii) H7, H10 and H15 ("type H7"). Types H1b and H1a are classified together as type H1. The different HA subtypes do not necessarily share strong amino acid sequence identity, but their global 3D structures are similar.

[0518] Dos 17 subtipos de polipeptídeos de HA, apenas 3 (H1, H2 e H3) têm se adaptado para a infecção humana. Estes subtipos têm em comum a capacidade de se ligar a alfa 2,6 glicanos sialiladas. Em contraste, os seus homólogos aviários se ligam preferencialmente a alfa 2,3 glicanos sialilados. Polipeptídeos de HA que se adaptaram a infectar os seres humanos (por exemplo, de polipeptídeos HA dos subtipos H1N1 (1918) e H3N2 (1967-1968) de Influenza) foram caracterizados por uma capacidade para se ligar preferencialmente a α2,6 glicanos sialilados, em comparação com os seus progenitores aviários que preferencialmente se ligam a α2,3 glicanos sialilados (ver, por exemplo, Skehel & Wiley, Annu. Ver, Biochem,, 69:531, 2000; Rogers, & Paulson, Virology, 127:361, 1983; Rogers et al., Nature, 304: 76, 1983; Sauter et al., Biochemistry, 31: 9609, 1992.[0518] Of the 17 subtypes of HA polypeptides, only 3 (H1, H2 and H3) have adapted for human infection. These subtypes have in common the ability to bind alpha 2,6 sialylated glycans. In contrast, their avian counterparts preferentially bind alpha 2,3 sialylated glycans. HA polypeptides that have adapted to infect humans (e.g., HA polypeptides from the H1N1 (1918) and H3N2 (1967-1968) subtypes of Influenza) have been characterized by an ability to preferentially bind to α2,6 sialylated glycans, compared to their avian progenitors which preferentially bind α2,3 sialylated glycans (see, e.g., Skehel & Wiley, Annu. See, Biochem, 69:531, 2000; Rogers, & Paulson, Virology, 127:361 , 1983; Rogers et al., Nature, 304: 76, 1983; Sauter et al., Biochemistry, 31: 9609, 1992.

[0519]Além disso, polipeptídeos de HA que mediam a infecção de humanos, preferencialmente, se ligam a glicanos de topologia guarda-chuva sobre glicanos de topologia de cone (ver, por exemplo, dos EUA 2011/0201547). Sem querer estar limitado por qualquer teoria particular, tem sido proposto que a capacidade de infectar o hospedeiro humano correlaciona-se com a ligação a menos glicanos de uma ligação especial e mais glicanos com a ligação de uma topologia particular, apesar de glicanos de topologia de cone poderem ser α2,6 glicanos sialilados. Foi demonstrado que polipeptídeos de HA que mediam a infecção de humanos se ligam aos glicanos de topologia de guarda-chuva, muitas vezes mostrando preferência por glicanos de topologia guarda-chuva sobre glicanos de topologia de cone (ver, por exemplo, USSN 12/348.266 depositado em 02 de janeiro de 2009, USSN 12/301.126, depositado em 17 de novembro de 2008, USSN 61/018.783, depositado em 3 de janeiro de 2008, USSN 11/969.040, depositado em 3 de janeiro de 2008, USSN 11/893.171, depositado em 14 de agosto de 2007, USSN 60/837.868, apresentado em 14 de agosto de 2006, USSN 60/837.869, depositado em 14 de agosto e a aplicação PCT/US07/18160 depositada em 14 de agosto de 2007.[0519] Furthermore, HA polypeptides that mediate infection of humans preferentially bind to umbrella topology glycans over cone topology glycans (see, for example, US 2011/0201547). Without wishing to be bound by any particular theory, it has been proposed that the ability to infect the human host correlates with binding fewer glycans of a particular bond and more glycans binding of a particular topology, despite glycans of a particular topology. cone may be α2,6 sialylated glycans. HA polypeptides that mediate infection of humans have been shown to bind to umbrella topology glycans, often showing a preference for umbrella topology glycans over cone topology glycans (see, for example, USSN 12/348,266 filed Jan 2, 2009, USSN 12/301,126, filed Nov 17, 2008, USSN 61/018,783, filed Jan 3, 2008, USSN 11/969,040, filed Jan 3, 2008, USSN 11/ 893,171, filed Aug. 14, 2007, USSN 60/837,868, filed Aug. 14, 2006, USSN 60/837,869, filed Aug. 14, and application PCT/US07/18160 filed Aug. 14, 2007.

[0520] Polipeptídeos de HA maduros incluem três domínios: (i) um domínio globular (a.k.a., o domínio de cabeça) que consiste principalmente do peptídeo HA1 e contém a região de ligação ao receptor (glicoproteínas sialiladas), (ii) um domínio talo (HA1 e HA2) onde o peptídeo de fusão da membrana reside e (iii) um domínio transmembranar (HA2) que acopla a hemaglutinina do envelope viral. Um conjunto de aminoácidos na interface dos peptídeos HA1 e HA2 é altamente conservado em todos os subtipos de influenza. A região da membrana HA1/HA2 proximal (MPER), incluindo uma alfa-hélice canônica, também é altamente conservada entre os subtipos de influenza.[0520] Mature HA polypeptides include three domains: (i) a globular domain (a.k.a., the head domain) that consists mainly of the HA1 peptide and contains the receptor-binding region (sialylated glycoproteins), (ii) a stalk domain (HA1 and HA2) where the membrane fusion peptide resides and (iii) a transmembrane domain (HA2) that couples the hemagglutinin of the viral envelope. A set of amino acids at the interface of the HA1 and HA2 peptides is highly conserved across all influenza subtypes. The membrane proximal HA1/HA2 region (MPER), including a canonical alpha-helix, is also highly conserved among influenza subtypes.

[0521] Polipeptídeos de HA interagem com a superfície das células pela ligação a um receptor de glicoproteína, conhecido como o receptor de HA. A ligação de um polipeptídeode HA a um receptor de HA é predominantemente mediada por glicanos N-ligados sobre os receptores de HA. Os polipeptídeos de HA sobre a superfície de partículas de vírus influenza reconhecem glicanos sialilados que estão associados com os receptores de HA sobre a superfície do hospedeiro celular. Após a replicação de proteínas e genoma virais pela maquinaria celular, novas partículas virais brotam do hospedeiro para infectar as células vizinhas.[0521] HA polypeptides interact with the surface of cells by binding to a glycoprotein receptor, known as the HA receptor. The binding of an HA polypeptide to an HA receptor is predominantly mediated by N-linked glycans on the HA receptors. HA polypeptides on the surface of influenza virus particles recognize sialylated glycans that are associated with HA receptors on the surface of the host cell. After replication of viral proteins and genome by the cellular machinery, new viral particles sprout from the host to infect neighboring cells.

[0522]Atualmente, as vacinas são administradas a indivíduos, por exemplo, seres humanos, para prevenir a influenza, por exemplo, para prevenir a infecção ou para minimizar os efeitos de uma infecção com o vírus influenza. As vacinas tradicionais contêm uma mistura de antígenos de várias estirpes de influenza e são administradas a humanos para impedir o humano de ficar infectado com o vírus. HA é o alvo principal de anticorpos neutralizadores de influenza A e HA sofre uma evolução contínua impulsionada pela pressão seletiva da resposta de anticorpos, a qual é dirigida principalmente contra o subdomínio de ligação ao receptor de membrana distal do polipeptídeo de HA. O indivíduo, no entanto, é protegido apenas de tensões que são idênticas ou estreitamente relacionadas com as tensões de onde provêm os antígenos do coquetel. O ser humano é ainda mais vulnerável à infecção por outras estirpes de influenza que não foram incluídas no coquetel. Uma das vantagens dos anticorpos aqui proporcionados é a sua capacidade para se ligar a um epítopo de HA que é conservado entre várias estirpes de influenza A e, em formas de realização, da influenza B. Assim, a administração de um anticorpo anti-HA aqui descrito será mais eficaz para proteger um indivíduo da infecção de um espectro mais amplo da influenza (por exemplo, influenza A e, em formas de realização, influenza B) e condições associadas aos mesmos (por exemplo, infecções secundárias, por exemplo, infecções bacterianas secundárias). Além disso, os anticorpos são eficazes no tratamento de um indivíduo após a infecção ter ocorrido.[0522] Currently, vaccines are administered to individuals, for example, humans, to prevent influenza, for example, to prevent infection or to minimize the effects of an infection with the influenza virus. Traditional vaccines contain a mixture of antigens from various influenza strains and are administered to humans to prevent the human from becoming infected with the virus. HA is the primary target of influenza A neutralizing antibodies, and HA undergoes continuous evolution driven by the selective pressure of the antibody response, which is directed primarily against the distal membrane receptor-binding subdomain of the HA polypeptide. The individual, however, is protected only from strains that are identical or closely related to the strains from which the cocktail antigens originate. Human beings are even more vulnerable to infection by other influenza strains that were not included in the cocktail. One of the advantages of the antibodies provided herein is their ability to bind to an HA epitope that is conserved among various strains of influenza A and, in embodiments, influenza B. Thus, administration of an anti-HA antibody herein described will be more effective in protecting an individual from infection with a broader spectrum of influenza (e.g., influenza A and, in embodiments, influenza B) and conditions associated therewith (e.g., secondary infections, e.g., bacterial infections secondary). Additionally, antibodies are effective in treating an individual after infection has occurred.

Anticorpo anti-HA MoléculasAnti-HA Antibody Molecules

[0523]Agentes de ligação, e, em particular, as moléculas de anticorpo aqui descritas, podem ligar-se a partir de vírus influenza A, tanto do Grupo 1 qaunto Grupo 2 e, em formas de realização, também se ligam a vírus influenza B. Por exemplo, as moléculas de anticorpos aqui descritas podem ligar-se a um polipeptídeo de HA em, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 estirpes do Grupo 1 e pode também ligar-se a um polipeptídeo de HA em, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 estirpes do Grupo 2. Em outro exemplo, as moléculas de anticorpos aqui descritas podem ligar-se a um polipeptídeo de HA sobre uma estirpe da influenza a partir de, pelo menos, 1, 2 ou 3 clades do Grupo 1 e também se pode ligar a um polipeptídeo de HA sobre uma estirpe da influenza de um ou de ambos os subtipos do Grupo 2. As moléculas de anticorpos aqui descritas inibem a entrada nas células e, assim, objetivando um passo inicial no processo de infecção.[0523] Binding agents, and in particular the antibody molecules described herein, can bind from influenza A viruses, both Group 1 and Group 2, and, in embodiments, also bind to influenza viruses B. For example, the antibody molecules described herein can bind to an HA polypeptide in at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or 11 Group 1 strains and can also bind to an HA polypeptide in at least 1, 2, 3, 4, 5, or 6 Group 2 strains. In another example, the antibody molecules described herein can bind to a polypeptide of HA on an influenza strain from at least 1, 2 or 3 Group 1 clades and may also bind to an HA polypeptide on an influenza strain from one or both of the Group 2 subtypes. Antibody molecules described here inhibit entry into cells and thus provide an initial step in the infection process.

[0524]Os agentes de ligação, e, em particular, as moléculas de anticorpos existentes na divulgação, podem ser eficazes para tratar ou prevenir infecções por estirpes de influenza sazonal ou pandêmica. Os agentes de ligação, e em particular as moléculas de anticorpo aqui descritos, podem ser caracterizados pela sua capacidade em prevenir ou tratar uma estirpe do Grupo 1 ou Grupo 2de vírus Influenza A ou, em formas de realização, uma estirpe de vírus influenza B. Os agentes de ligação, e em particular as moléculas de anticorpos existentes na divulgação, são eficazes para prevenir ou tratar a infecção por uma ou mais estirpes do Grupo 1, um ou mais estirpes do Grupo 2 e também uma ou mais estirpes de vírus influenza B.[0524] The binding agents, and in particular the antibody molecules in the disclosure, may be effective for treating or preventing infections by seasonal or pandemic influenza strains. The binding agents, and in particular the antibody molecules described herein, can be characterized by their ability to prevent or treat a Group 1 or Group 2 strain of Influenza A virus or, in embodiments, an influenza B virus strain. The binding agents, and in particular the antibody molecules in the disclosure, are effective for preventing or treating infection by one or more Group 1 strains, one or more Group 2 strains and also one or more strains of influenza B virus. .

[0525]Os agentes de ligação, e em particular as moléculas de anticorpo, podem ser eficazes para tratar a infecção quando administrados no mesmo dia que o indivíduo é exposto, ou quando administrados, por exemplo, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias ou mais tarde, após a infecção, ou em cima de um primeiro sintoma experimentado pelo paciente.[0525] Binding agents, and in particular antibody molecules, may be effective in treating infection when administered on the same day that the individual is exposed, or when administered, for example, 1 day, 2 days, 3 days, 4 days or later, after infection, or upon a first symptom experienced by the patient.

EstirpesStrains

[0526]As moléculas de anticorpos aqui descritas são eficazes no tratamento de uma ou mais estirpes de influenza do Grupo 1, um ou mais estirpes de influenza do Grupo 2 e também uma ou mais estirpes de influenza B e isolados específicos dentro destas estirpes. Certas moléculas de anticorpos podem ser mais eficazes para o tratamento de certos isolados do que outros isolados. Exemplos de estirpes de Influenza e isolados estão descritos na Tabela 1 abaixo. TABELA 1. ESTIRPES E ISOLADOS DE INFLUENZA EXEMPLARES [0526] The antibody molecules described herein are effective in treating one or more Group 1 influenza strains, one or more Group 2 influenza strains and also one or more influenza B strains and specific isolates within these strains. Certain antibody molecules may be more effective for treating certain isolates than other isolates. Examples of Influenza strains and isolates are described in Table 1 below. TABLE 1. EXEMPLARY INFLUENZA STRAINS AND ISOLATES

[0527]A afinidade também pode ser em referência a um isolado particular de uma determinada estirpe do Grupo 1 ou Grupo 2 de vírus influenza A ou uma estirpe de vírus influenza B. Isolados exemplares são, tal como previsto na Tabela 1 acima.[0527] Affinity may also be in reference to a particular isolate of a particular strain of Group 1 or Group 2 influenza A virus or a strain of influenza B virus. Exemplary isolates are as provided in Table 1 above.

Mecanismos de InibiçãoInhibition Mechanisms

[0528]Embora não sendo limitados por um mecanismo específico, os anticorpos específicos de HA podem inibir a infecção por vários métodos, tais como, bloqueando a ligação viral para resíduos de ácido siálico em proteínas de superfície em células hospedeiras, por interferir com a transição estrutural da HA que desencadeia atividade de fusão na endosome, ou inibindo simultaneamente a ligação e fusão vírus-célula.[0528] Although not limited by a specific mechanism, HA-specific antibodies can inhibit infection by several methods, such as blocking viral binding to sialic acid residues on surface proteins on host cells, by interfering with the transition structural structure of HA that triggers fusion activity in the endosome, or simultaneously inhibiting virus-cell binding and fusion.

[0529]Em formas de realização, as moléculas de anticorpo aqui apresentadas se ligam a um epítopo na interface trímero de HA. As alterações estruturais na interface trímero são importantes para a fusão da membrana viral e a membrana endocítica e as moléculas de anticorpo aqui descritas interferem neste passo crítico da infecção. Os ensaios para medir a atividade fusogênica de HA são conhecidos na arte. Por exemplo, um ensaio mede a formação de sincícios de fusão, que ocorre nos eventos de fusão célula-célula. As células que expressam e mostram uma estirpe viral de influenza HA podem ser utilizadas no ensaio. A hemaglutinina acoplada por membrana nestas células é induzida para converter para a conformação de fusão por uma breve (por exemplo, 3 minutos) exposição a um pH baixo (por exemplo, pH 5). Um período de incubação de 2- 3-horas se segue para permitir que as células recuperem e fundem para formar sincícios. Um corante nuclear pode ser utilizado para auxiliar na visualização dos referidos produtos de fusão e a sua contagem é utilizada como um indicador da atividade de fusão. Um anticorpo anti-HA candidato pode ser adicionado antes ou depois do tratamento de baixo pH para determinar em que fase do processo de fusão o anticorpo interfere.[0529] In embodiments, the antibody molecules presented herein bind to an epitope at the HA trimer interface. Structural changes at the trimer interface are important for viral membrane fusion, and the endocytic membrane and antibody molecules described here interfere with this critical step of infection. Assays for measuring HA fusogenic activity are known in the art. For example, one assay measures the formation of fusion syncytia, which occurs in cell-cell fusion events. Cells that express and display an HA influenza viral strain can be used in the assay. The membrane-coupled hemagglutinin in these cells is induced to convert to the fusion conformation by brief (e.g., 3 minutes) exposure to a low pH (e.g., pH 5). A 2-3-hour incubation period follows to allow the cells to recover and fuse to form syncytia. A nuclear dye can be used to aid in the visualization of said fusion products and its count is used as an indicator of fusion activity. A candidate anti-HA antibody can be added before or after the low pH treatment to determine at which stage of the fusion process the antibody interferes.

[0530]Outro tipo de teste de fusão monitora o teor de conteúdo. Para medir o teor de mistura, as células hospedeiras (por exemplo, eritrócitos) são carregadas com um corante (por exemplo, amarelo Lucifer) para determinar se o conteúdo das células hospedeiras ligadas a HA poderiam ser entregues a células que expressam HA após exposição a condições de indução de fusão (por exemplo, pH baixo, como pH inferior a 6 ou pH inferior a 5). Se o corante não consegue misturar com o teor das células hospedeiras, então a conclusão pode ser feita que a fusão é inibida. Veja-se, por exemplo, Kemble et al., J. Virol. 66: 4940-4950, 1992.[0530] Another type of fusion test monitors content content. To measure mixture content, host cells (e.g., erythrocytes) are loaded with a dye (e.g., Lucifer yellow) to determine whether HA-bound host cell contents could be delivered to HA-expressing cells after exposure to melt-inducing conditions (e.g., low pH, such as pH less than 6 or pH less than 5). If the dye fails to mix with the content of the host cells, then the conclusion can be made that fusion is inhibited. See, for example, Kemble et al., J. Virol. 66: 4940-4950, 1992.

[0531]Em outro exemplo, um ensaio de fusão é realizado através da monitorização de mistura de lipídios. O ensaio de mistura de lipídio pode ser realizado por células hospedeiras de rotulagem (por exemplo, eritrócitos) com um corante fluorescente (por exemplo, R18 (octadecilrhodamine)) ou pares de corantes (por exemplo, CPT-PC/DABS-PC) (pela fluorescência de ressonância de transferência de energia), expondo as células hospedeiras e células que expressam HA a condições induzindo a fusão e teste para extinção de fluorescência (FDQ). A mistura lipídica leva a diluição do marcador no envelope viral e uma consequente extinção. Um atraso na extinção ou a ausência de extinção é indicativa de inibição da fusão da membrana. Veja-se, por exemplo, Kemble et al., J. Virol. 66: 4940-4950, 1992; e Carr et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 14306-14313, 1997.[0531] In another example, a fusion assay is performed by monitoring lipid mixtures. The lipid mixing assay can be performed by labeling host cells (e.g., erythrocytes) with a fluorescent dye (e.g., R18 (octadecylrhodamine)) or dye pairs (e.g., CPT-PC/DABS-PC) ( by energy transfer resonance fluorescence), exposing host cells and HA-expressing cells to conditions inducing fusion and testing for fluorescence quenching (FDQ). The lipid mixture leads to the dilution of the marker in the viral envelope and a consequent extinction. A delay in extinction or the absence of extinction is indicative of inhibition of membrane fusion. See, for example, Kemble et al., J. Virol. 66: 4940-4950, 1992; and Carr et al., Proc. Natl. Academic. Sci. 94: 14306-14313, 1997.

Mutantes de escapeEscape mutants

[0532]Em formas de realização, estirpes de influenza raramente, se alguma vez, produzem mutantes de escape quando contactadas com as moléculas de anticorpos em destaque.[0532] In embodiments, influenza strains rarely, if ever, produce escape mutants when contacted with the highlighted antibody molecules.

[0533]Mutantes de escape podem ser identificados através de métodos conhecidos na arte. Por exemplo, um anticorpo apresentado na divulgação não irá produzir um mutante de escape quando as células são infectadas com o vírus sob a exposição repetida ou prolongada aos anticorpos anti-HA existentes na divulgação.[0533] Escape mutants can be identified using methods known in the art. For example, an antibody disclosed in the disclosure will not produce an escape mutant when cells are infected with the virus under repeated or prolonged exposure to the anti-HA antibodies contained in the disclosure.

[0534]Um método exemplar inclui a infecção de células (por exemplo, células MDCK) com uma quantidade fixa de partículas virais da influenza A, na presença do anticorpo a uma concentração conhecida para atenuar as taxas de infecção em 50%. Progenitura viral recolhida após cada passagem é utilizada para infectar uma cultura fresca de células na presença da mesma ou uma maior concentração do anticorpo. Após múltiplos ciclos de infecção, por exemplo, após 15 ciclos, 12 ciclos, 11 ciclos, 10 ciclos, 9 ciclos, 8 ciclos, 7 ciclos, 6 ciclos, ou 5 ciclos de infecção, sob estas condições, a sequência de nucleotídeos de AH extraída a partir de 20 placas virais de colheita é avaliada por enriquecimento para as mutações que tornam o isolado viral resistente a neutralização pelo anticorpo (um mutante de escape). Se não forem detectados quaisquer mutantes com sensibilidade reduzida ao anticorpo após as múltiplas etapas de seleção, por exemplo, após 11 ciclos, 10 ciclos, ou 9 ciclos de seleção, o anticorpo é determinado ser resistente a escapar mutações (ver, por exemplo, Throsby et al., (2008) PLoS One, volume 3, e3942).[0534] An exemplary method includes infecting cells (e.g., MDCK cells) with a fixed amount of influenza A viral particles, in the presence of the antibody at a concentration known to attenuate infection rates by 50%. Viral progeny collected after each passage is used to infect a fresh cell culture in the presence of the same or a higher concentration of the antibody. After multiple cycles of infection, for example, after 15 cycles, 12 cycles, 11 cycles, 10 cycles, 9 cycles, 8 cycles, 7 cycles, 6 cycles, or 5 cycles of infection, under these conditions, the AH nucleotide sequence extracted from 20 viral harvest plaques is evaluated by enrichment for mutations that make the viral isolate resistant to neutralization by the antibody (an escape mutant). If no mutants with reduced sensitivity to the antibody are detected after multiple selection steps, e.g., after 11 cycles, 10 cycles, or 9 cycles of selection, the antibody is determined to be resistant to escape mutations (see, e.g., Throsby et al., (2008) PLoS One, volume 3, e3942).

[0535]Em outro exemplo, um ensaio que mede a concentração inibitória mínima (CIM) do anticorpo neutralizante pode ser utilizada para identificar mutantes de escape. A CIM de uma molécula de anticorpo é a mais baixa concentração de uma molécula de anticorpo que pode ser misturada com o vírus para prevenir a infecção da cultura de células com a influenza. Se mutantes de escape surgem dentro de uma população viral, em seguida, a CIM de um anticorpo particular será observada a aumentar com o aumento de ciclos de propagação sob a pressão seletiva do anticorpo, como a proporção das partículas virais que transportam a mutação de resistência na população aumentada. Mutantes de escape de influenza raramente evoluem em resposta a uma molécula de anticorpo anti-HA aqui descrita, e, portanto, a CIM permanecerá a mesma ao longo do tempo.[0535] In another example, an assay that measures the minimum inhibitory concentration (MIC) of the neutralizing antibody can be used to identify escape mutants. The MIC of an antibody molecule is the lowest concentration of an antibody molecule that can be mixed with the virus to prevent cell culture infection with influenza. If escape mutants arise within a viral population, then the MIC of a particular antibody will be observed to increase with increasing cycles of propagation under the selective pressure of the antibody, as the proportion of viral particles carrying the resistance mutation in the increased population. Influenza escape mutants rarely evolve in response to an anti-HA antibody molecule described here, and therefore the MIC will remain the same over time.

[0536]Outro ensaio adequado para controle para o desenvolvimento de mutantes de escape é um ensaio de Efeito citopático (ECP). Um ensaio de ECP monitora a capacidade de um anticorpo para neutralizar (ou seja, evitar a infecção por) uma estirpe da influenza. Um ensaio de ECP fornece a concentração mínima de anticorpo em cultura de células necessária para neutralizar o vírus. Se surgir mutantes de escape, o CPE de um anticorpo particular irá aumentar ao longo do tempo, como o anticorpo se torna menos eficaz para neutralizar o vírus. As estirpes virais raramente, se alguma vez, produzem mutantes de escape em resposta a uma molécula de anticorpo anti-HA aqui descrita, e, por conseguinte, o CPE vai ficar essencialmente o mesmo ao longo do tempo.[0536] Another suitable assay to control for the development of escape mutants is a Cytopathic Effect (ECP) assay. An ECP assay monitors the ability of an antibody to neutralize (that is, prevent infection by) an influenza strain. An ECP assay provides the minimum concentration of antibody in cell culture required to neutralize the virus. If escape mutants arise, the CPE of a particular antibody will increase over time, as the antibody becomes less effective at neutralizing the virus. Viral strains rarely, if ever, produce escape mutants in response to an anti-HA antibody molecule described herein, and therefore the CPE will remain essentially the same over time.

[0537]Reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) também pode ser utilizada para monitorar o desenvolvimento de mutantes de escape. qPCR é útil para monitorar a capacidade de um anticorpo para neutralizar (ou seja, evitar a infecção por) uma estirpe da influenza. Se um anticorpo neutraliza eficazmente um vírus, em seguida, qPCR realizado em amostras de cultura de células não irá detectar a presença do ácido nucleico genômico viral. Se surgirem mutantes, ao longo do tempo, qPCR vai amplificar o ácido nucleico genômico viral mais e mais. Os mutantes de escape raramente, se alguma vez, se desenvolvem em resposta a uma molécula de anticorpo anti-HA aqui descrita, e, por conseguinte, qPCR irá raramente, se alguma vez, detectar ácido nucleico genômico viral, mesmo após a passagem do tempo.[0537] Quantitative polymerase chain reaction (qPCR) can also be used to monitor the development of escape mutants. qPCR is useful for monitoring the ability of an antibody to neutralize (i.e., prevent infection by) an influenza strain. If an antibody effectively neutralizes a virus, then qPCR performed on cell culture samples will not detect the presence of the viral genomic nucleic acid. If mutants emerge, over time, qPCR will amplify the viral genomic nucleic acid more and more. Escape mutants rarely, if ever, develop in response to an anti-HA antibody molecule described here, and therefore qPCR will rarely, if ever, detect viral genomic nucleic acid, even after the passage of time. .

Ligação e AfinidadeConnection and Affinity

[0538]Em formas de realização, os agentes de ligação, particularmente moléculas de anticorpos, aqui existentes ligam-se a dois ou mais dos seguintes: pelo menos um polipeptídeo de HA a partir de uma estirpe da influenza do Grupo 1 (por exemplo, um polipeptídeo H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 ou H17); pelo menos um polipeptídeo de HA a partir de uma estirpe da influenza do Grupo 2 (por exemplo, um polipeptídeo H3, H4 e H14, H7, H10 ou H15); e pelo menos um polipeptídeo de HA a partir de uma estirpe de Influenza B.[0538] In embodiments, the binding agents, particularly antibody molecules, herein bind to two or more of the following: at least one HA polypeptide from a Group 1 influenza strain (e.g., an H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 or H17 polypeptide); at least one HA polypeptide from a Group 2 influenza strain (e.g., an H3, H4 and H14, H7, H10 or H15 polypeptide); and at least one HA polypeptide from an Influenza B strain.

[0539]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá um KD para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 1 (por exemplo, um polipeptídeo H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 ou H17) de igual ou inferior a 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 1011 ou 10-12.[0539] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have a KD for an HA of a Group 1 influenza strain (e.g., an H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 or H17) equal to or less than 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 1011 or 10-12.

[0540]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá um KD para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 2 (por exemplo, um polipeptídeo H3, H4 e H14, H7, H10 ou H15) de igual ou inferior de 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 ou 10-12.[0540] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have a KD for an HA of a Group 2 influenza strain (e.g., an H3, H4 and H14, H7, H10 or H15) equal to or less than 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 or 10-12.

[0541]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá um KD para uma HA de influenza B igual ou inferior a 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 ou 10-12.[0541] In one embodiment, a binding agent, for example, an antibody molecule, will have a KD for an influenza B HA equal to or less than 10-6, 10-7, 10-8, 10-9 , 10-10, 10-11 or 10-12.

[0542]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá: a) um primeiro KD (representando uma afinidade para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 1, por exemplo, um polipeptídeo H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 ou H17); e b) um segundo KD (representando uma afinidade para uma HA de uma estirpe de influenza do Grupo 2, por exemplo, um polipeptídeo H3, H4 e H14, H7, H10 ou H15), em que o primeiro e segundo KD são um ou ambos de: tanto igual ou inferior a 10-8; e dentro de 10 ou 100 vezes de cada um;[0542] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have: a) a first KD (representing an affinity for an HA of a Group 1 influenza strain, e.g., a polypeptide H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 or H17); and b) a second KD (representing an affinity for an HA of a Group 2 influenza strain, e.g., an H3, H4 and H14, H7, H10 or H15 polypeptide), wherein the first and second KD are one or both of: both equal to or less than 10-8; and within 10 or 100 times of each;

[0543]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá: a) um primeiro KD (representando uma afinidade para um H1, por exemplo, de um H1 de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia OMIA/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004); e b) um segundo KD (representando uma afinidade para um polipeptídeo H3, por exemplo, H3 de uma estirpe H3N2, por exemplo, A/Brisbane/59/2007), em que o primeiro e segundo KD são um ou ambos de: tanto igual ou inferior a 10-8; e dentro de 10 ou 100 vezes de cada um;[0543] In one embodiment, a binding agent, e.g. an antibody molecule, will have: a) a first KD (representing an affinity for an H1, e.g. an H1 of an H1N1 strain, e.g. , A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California OMIA/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203 /2004); and b) a second KD (representing an affinity for an H3 polypeptide, e.g. H3 from an H3N2 strain, e.g. A/Brisbane/59/2007), wherein the first and second KD are one or both of: both equal or less than 10-8; and within 10 or 100 times of each;

[0544]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá: a) um primeiro KD (representando uma afinidade para um H1, por exemplo, de um H1 de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia OMIA/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004); e b) um segundo KD (representando uma afinidade para um polipeptídeo H3, por exemplo, o H3 de uma estirpe H3N2, por exemplo, A/Brisbane/59/2007); em que o primeiro e segundo KD são um ou ambos de: tanto igual ou inferior a 10-8; e dentro de 10 ou 100 vezes de cada um.[0544] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have: a) a first KD (representing an affinity for an H1, e.g., of an H1 of an H1N1 strain, e.g. , A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California OMIA/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203 /2004); and b) a second KD (representing an affinity for an H3 polypeptide, e.g. the H3 of an H3N2 strain, e.g. A/Brisbane/59/2007); wherein the first and second KD are one or both of: both equal to or less than 10-8; and within 10 or 100 times of each.

[0545]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá: a) um primeiro KD (representando uma afinidade para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 1, por exemplo, um polipeptídeo H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 ou H17 e/ou uma afinidade para uma HA de uma estirpe de influenza do Grupo 2, por exemplo, um polipeptídeo H3, H4, H14, H7, H10, ou H15); e b) um segundo KD (representando uma afinidade para uma HA de influenza B, por exemplo, de B/Wisconsin/1/2010); em que o primeiro e segundo KD são um ou ambos de: tanto igual ou inferior a 10-8; e dentro de 10 ou 100 vezes de cada um.[0545] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have: a) a first KD (representing an affinity for an HA of a Group 1 influenza strain, e.g., a polypeptide H1, H2, H5, H6, H8, H9, H12, H11, H13, H16 or H17 and/or an affinity for an HA from a Group 2 influenza strain, e.g. an H3, H4, H14, H7 polypeptide , H10, or H15); and b) a second KD (representing an affinity for an influenza B HA, e.g., from B/Wisconsin/1/2010); wherein the first and second KD are one or both of: both equal to or less than 10-8; and within 10 or 100 times of each.

[0546]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, terá: a) um primeiro KD (representando uma afinidade para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 1, por exemplo, um H1, por exemplo, o H1 de uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004 e/ou uma afinidade para uma HA de uma estirpe da influenza do Grupo 2, por exemplo, um polipeptídeo H3, de uma estirpe H3N2, por exemplo, de A/Brisbane/59/2007); e b) um segundo KD (uma afinidade com uma HA de influenza B); em que o primeiro e segundo KD são: um ou ambos de: tanto igual qaunto inferior a 10-8; e dentro de 10 ou 100 vezes de cada um.[0546] In one embodiment, a binding agent, e.g., an antibody molecule, will have: a) a first KD (representing an affinity for an HA of a Group 1 influenza strain, e.g., an H1 , for example, the H1 of an H1N1 strain, for example, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A /Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004 and/or an affinity for an HA from a Group 2 influenza strain, e.g. an H3 polypeptide, from an H3N2 strain, e.g. from A/Brisbane /59/2007); and b) a second KD (an affinity with an influenza B HA); wherein the first and second KD are: one or both of: both equal to and less than 10-8; and within 10 or 100 times of each.

[0547]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo liga-se a pelo menos um polipeptídeo de HA de uma estirpe da influenza do Grupo 1 com uma maior afinidade do que um anticorpos anti-HA de referência e a, pelo menos, um polipeptídeo de HA de uma estirpe de influenza do Grupo 2, com uma maior afinidade do que um anticorpo anti-HA de referência. Em uma outra forma de realização, a molécula de anticorpo liga-se a pelo menos um polipeptídeo de HA de uma estirpe da influenza A, com uma maior afinidade do que um anticorpo anti-HA de referência e a, pelo menos, um polipeptídeo de HA de uma estirpe de Influenza B com uma maior afinidade do que um anticorpo anti-HA de referência. Os anticorpos de HA de referência exemplares incluem Ab 6711 (número de pedido provisório dos EUA 61/645.453, depositado na mesma data que o presente pedido de patente), FI6 (FI6, tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer sequência FI6 especificamente divulgada no Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813, Pedido Publicado dos EUA No 2011/0274702, WO2013/011347 ou Corti et al., Science 333:850-856, 2011, publicado online em 28 de julho de 2011; as Figuras 12A a 12C), FI28 (Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813) e C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-1558, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 2012; 337 (6100):1343-1348; publicado online em 09 de agosto de 2012) e CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246-251, 2009; publicado online em 26 de fevereiro de 2009).[0547] In one embodiment, the antibody molecule binds to at least one HA polypeptide from a Group 1 influenza strain with a greater affinity than a reference anti-HA antibody and to at least an HA polypeptide from a Group 2 influenza strain, with a higher affinity than a reference anti-HA antibody. In another embodiment, the antibody molecule binds to at least one HA polypeptide from an influenza A strain with greater affinity than a reference anti-HA antibody and to at least one HA polypeptide from HA from an Influenza B strain with a higher affinity than a reference anti-HA antibody. Exemplary reference HA antibodies include Ab 6711 (US provisional application number 61/645,453, filed on the same date as the present patent application), FI6 (FI6, as used herein, refers to any FI6 sequence specifically disclosed in U.S. Published Application No. 2010/0080813, U.S. Published Application No. 2011/0274702, WO2013/011347 or Corti et al., Science 333:850-856, 2011, published online July 28, 2011; Figures 12A to 12C), FI28 (US Published Application No. 2010/0080813) and C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-1558, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol . 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 2012; 337 (6100):1343-1348; published online August 9, 2012), and CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246-251 , 2009; published online on February 26, 2009).

[0548]A afinidade, ou afinidade relativa ou avidez, pode ser medida por métodos conhecidos na arte, tais como por ensaio ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), Surface Plasmon Resonance (SPR, por exemplo, por um ensaio Biacore™), ou ensaio KinExA® (Sapidyne, Inc.).[0548] Affinity, or relative affinity or avidity, can be measured by methods known in the art, such as by ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), Surface Plasmon Resonance (SPR, for example, by a Biacore™ assay), or KinExA® assay (Sapidyne, Inc.).

[0549]A afinidade de ligação relativa é expressa aqui de acordo com ensaio de ELISA. Tal como aqui utilizado, um anticorpo anti-HA que se liga com "alta afinidade" a uma HA de grupo 1, a uma HA de grupo 2 e a uma HA de influenza B, pode ligar-se a uma HA de Grupo 1 com um KD inferior ou igual a 200 pM, por exemplo, inferior ou igual a 100 pM, tal como medido por ELISA, pode ligar-se um HA de grupo 2 com um KD inferior ou igual a 200 pM, por exemplo, inferior ou igual a 100 pM, tal como medido por ELISA e pode ligar- se a uma HA de influenza B com um KD inferior ou igual a 200 pM, por exemplo, inferior ou igual a 100 pM, tal como medido por ELISA.[0549] Relative binding affinity is expressed here according to ELISA assay. As used herein, an anti-HA antibody that binds with "high affinity" to a group 1 HA, a group 2 HA, and an influenza B HA, can bind to a Group 1 HA with a KD of less than or equal to 200 pM, e.g., less than or equal to 100 pM, as measured by ELISA, a group 2 HA with a KD of less than or equal to 200 pM, e.g., less than or equal to to 100 pM, as measured by ELISA and can bind to an influenza B HA with a KD of less than or equal to 200 pM, for example, less than or equal to 100 pM, as measured by ELISA.

Moléculas de anticorpo anti-HA ExemplaresExemplary anti-HA antibody molecules

[0550] São aqui fornecidos anticorpos que possuem uma ou mais sequências de CDR e uma ou mais sequências de estrutura (FR) conforme apresentado na Tabela 2. TABELA 2. SEQUÊNCIAS DE CDR E FR DE CADEIA PESADA E LEVE PARA ANTICORPOS ANTI-HA [0550] Antibodies are provided herein that have one or more CDR sequences and one or more framework sequences (FR) as set forth in Table 2. TABLE 2. HEAVY AND LIGHT CHAIN CDR AND FR SEQUENCES FOR ANTI-HA ANTIBODIES

[0551]Em uma forma de realização, o anticorpo anti-HA compreende uma cadeia pesada e/ou uma cadeia leve como definido na Tabela 3 a seguir. As sequências de aminoácidos das cadeias leves e pesadas variáveis da Tabela 3 são fornecidas nas Figuras 2, 3, respectivamente, ou na Figura 17. TABELA 3. DESIGNAÇÕES DE SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DE CADEIAS PESADAS E LEVES PARA ANTICORPOS ANTI-HA [0551] In one embodiment, the anti-HA antibody comprises a heavy chain and/or a light chain as defined in Table 3 below. The variable light and heavy chain amino acid sequences of Table 3 are provided in Figures 2, 3, respectively, or Figure 17. TABLE 3. HEAVY AND LIGHT CHAIN AMINO ACID SEQUENCE DESIGNATIONS FOR ANTI-HA ANTIBODIES

[0552]Em uma forma de realização, o anticorpo anti-HA compreende uma cadeia pesada, tal como definida na Tabela 4A abaixo e/ou uma cadeia leve tal como definida na Tabela 4A abaixo. TABELA 4A. DESIGNAÇÕES DE SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DE CADEIA PESADA E LEVE [0552] In one embodiment, the anti-HA antibody comprises a heavy chain as defined in Table 4A below and/or a light chain as defined in Table 4A below. TABLE 4A. HEAVY AND LIGHT CHAIN AMINO ACID SEQUENCE DESIGNATIONS

[0553]Em uma forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação compreende uma sequência de cadeia pesada, tal como definido na Tabela 4A e uma sequência cadeia leve tal como definido na Tabela 4A.[0553] In one embodiment, an antibody disclosed in the disclosure comprises a heavy chain sequence as defined in Table 4A and a light chain sequence as defined in Table 4A.

[0554]Em uma forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação compreende uma sequência de cadeia pesada, tal como aqui definido, por exemplo, na Tabela 4A, onde um dipeptídeo é fundido com o N-terminal. Tipicamente, o dipeptídeo é o ácido aspártico-isoleucina (Ile-Asp). Em uma outra forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação compreende uma sequência de cadeia leve, tal como aqui definido, por exemplo, na Tabela 4A, onde um dipeptídeo é fundido com o N-terminal. Tipicamente, o dipeptídeo é Ile-Asp. Em ainda outra forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação compreende uma cadeia pesada compreendendo uma dipeptídeo Ile-Asp N-terminal e uma cadeia leve compreendendo um dipeptídeo Ile-Asp. Na sequência de propeptídeo do polipeptídeo de cadeia pesada ou cadeia leve, o dipeptídeo Ile-Asp ocorre entre a sequência sinal e FR1. Sequências variáveis da cadeia pesada e de cadeia leve compreendendo um dipeptídeo Ile-Asp no terminal-N são identificados na Tabela 4B. TABELA 4B. DESIGNAÇÕES DE SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DE CADEIA PESADA E LEVE, ONDE A SEQUÊNCIA INCLUI UM DIPEPTÍDEO DE ASP-ILE N-TERMINAL [0554] In one embodiment, an antibody presented in the disclosure comprises a heavy chain sequence, as defined herein, for example, in Table 4A, where a dipeptide is fused to the N-terminus. Typically, the dipeptide is aspartic acid-isoleucine (Ile-Asp). In another embodiment, an antibody disclosed in the disclosure comprises a light chain sequence, as defined herein, for example, in Table 4A, where a dipeptide is fused to the N-terminus. Typically, the dipeptide is Ile-Asp. In yet another embodiment, an antibody disclosed in the disclosure comprises a heavy chain comprising an N-terminal Ile-Asp dipeptide and a light chain comprising an Ile-Asp dipeptide. In the propeptide sequence of the heavy chain or light chain polypeptide, the Ile-Asp dipeptide occurs between the signal sequence and FR1. Heavy chain and light chain variable sequences comprising an Ile-Asp dipeptide at the N-terminus are identified in Table 4B. TABLE 4B. HEAVY AND LIGHT CHAIN AMINO ACID SEQUENCE DESIGNATIONS, WHERE THE SEQUENCE INCLUDES AN N-TERMINAL ASP-ILE DIPEPTIDE

[0555]Em uma outra forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação é diferente de um anticorpo conhecido na arte. Por exemplo, o anticorpo não é Ab 67-11 (Pedido Porvisório ds EUA número 61/645.453) FI6 (FI6, tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer sequência FI6 especificamente divulgada no pedido publicado dos EUA No 2010/0080813, pedido publicado dos EUA No 2011/0274702, WO2013/011347 ou Corti et al., Ciência 333: 850-856, 2011, publicado online em 28 de julho de 2011; as Figuras 12A a 12C) FI28 (Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552, 1993. ), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012), ou CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246, 2009).[0555] In another embodiment, an antibody presented in the disclosure is different from an antibody known in the art. For example, the antibody is not Ab 67-11 (US Provisional Application No. 61/645,453) FI6 (FI6, as used herein, refers to any FI6 sequence specifically disclosed in published US application No. 2010/0080813, application US Published Application No 2011/0274702, WO2013/011347 or Corti et al., Science 333: 850-856, 2011, published online July 28, 2011; Figures 12A to 12C) FI28 (US Published Application No 2010/ 0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552, 1993.), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al. , Science 337:1343, 2012), or CR6261 (Ekiert et al., Science 324:246, 2009).

[0556]Em uma forma de realização, um anticorpo apresentado na divulgação é diferente de Ab 67-11 (Pedido Provisório dos EUA número 61/645.453, apresentado na mesma data que o presente pedido).[0556] In one embodiment, an antibody disclosed in the disclosure is other than Ab 67-11 (US Provisional Application number 61/645,453, filed on the same date as the present application).

VariantesVariants

[0557]Em uma forma de realização, uma molécula de anticorpo, por exemplo, um anticorpo apresentado na divulgação, tem um domínio variável de imunoglobulina de cadeia pesada que é, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogo, ou, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntico, a uma cadeia pesada aqui descrita, por exemplo, da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 2, Figura 13 ou Figura 17, por exemplo, sequência consenso de SEQ ID NO: 161 e tem um domínio variável de imunoglobulina de cadeia leve que é, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogo, ou pelo menos 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntico, à cadeia leve aqui descrita, por exemplo, da Tabela 3, Tabela 4A, Tabela 4B, Figura 3, Figura 14 ou Figura 17, por exemplo, a sequência consenso de SEQ ID NO: 62. As sequências consenso foram determinadas através da análise das propriedades bioquímicas e biofísicas de várias centenas de combinações VH/VL concebidas computacionalmente. As sequências consenso representam as sequências de aminoácidos nas quais cada aminoácido é aquele que ocorre mais frequentemente neste local quando várias sequências compreendendo dados bioquímicos e biofísicos desejáveis estão alinhados.[0557] In one embodiment, an antibody molecule, e.g., an antibody disclosed in the disclosure, has a heavy chain immunoglobulin variable domain that is at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% counterpart, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a heavy chain described herein, for example, from Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 2, Figure 13 or Figure 17, e.g. , consensus sequence of SEQ ID NO: 161 and has a light chain immunoglobulin variable domain that is at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, or 99% homologous, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to the light chain described herein, for example, from Table 3, Table 4A, Table 4B, Figure 3, Figure 14 or Figure 17, for example, the consensus sequence of SEQ ID NO: 62. The consensus sequences were determined through analysis of the biochemical and biophysical properties of several hundred computationally designed VH/VL combinations. Consensus sequences represent amino acid sequences in which each amino acid is the one that occurs most frequently at this location when several sequences comprising desirable biochemical and biophysical data are aligned.

[0558]Um anticorpo de ligação anti-HA exemplar tem uma ou mais CDRs, por exemplo, todas as três CDRs de HC e/ou todas as três CDRs de LC de um anticorpo particular aqui descrito, ou CDRs que são, em suma, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogas, ou pelo menos 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas, ao tal anticorpo.[0558] An exemplary anti-HA binding antibody has one or more CDRs, e.g., all three HC CDRs and/or all three LC CDRs of a particular antibody described herein, or CDRs that are, in short, at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% counterparts, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to that antibody.

[0559]Em uma forma de realização, os “loops” hipervariáveis de H1 e H2 têm a mesma estrutura canônica que aqueles de um anticorpo aqui descrito. Em uma forma de realização, os loops hipervariáveis de L1 e L2 têm a mesma estrutura canônica que as de um anticorpo aqui descrito.[0559] In one embodiment, the hypervariable loops of H1 and H2 have the same canonical structure as those of an antibody described herein. In one embodiment, the L1 and L2 hypervariable loops have the same canonical structure as those of an antibody described herein.

[0560]Em uma forma de realização, a sequência de aminoácidos da sequência de domínio variável de HC e/ou LC é, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homóloga, ou, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica, com a sequência de aminoácidos fr domínio variável de HC e/ou LC de um anticorpo aqui descrito. A sequência de aminoácidos da HC e/ou a sequência de domínio variável de LC podem diferir em, pelo menos, um aminoácido, mas não mais do que dez, oito, seis, cinco, quatro, três ou dois aminoácidos da sequência correspondente de um anticorpo aqui descrito. Por exemplo, as diferenças podem ser, principalmente ou exclusivamente, nas regiões de estrutura.[0560] In one embodiment, the amino acid sequence of the HC and/or LC variable domain sequence is at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% homologous, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, or 99% identical, with the amino acid sequence of the HC and/or LC variable domain of an antibody described herein. The amino acid sequence of the HC and/or the variable domain sequence of the LC may differ by at least one amino acid, but not more than ten, eight, six, five, four, three or two amino acids from the corresponding sequence of a antibody described herein. For example, the differences may be mainly or exclusively in the structure regions.

[0561]Em certas formas de realização, as diferenças de aminoácidos são as diferenças entre aminoácidos conservativos (por exemplo, substituições conservativas de aminoácidos). Uma substituição de aminoácido "conservativa" é aquela em que o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido compreendendo uma cadeia lateral semelhante. As famílias de resíduos de aminoácidos que compreendem as cadeias laterais semelhantes foram definidas na arte. Estas famílias incluem, por exemplo, aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina).[0561] In certain embodiments, the amino acid differences are the differences between conservative amino acids (e.g., conservative amino acid substitutions). A "conservative" amino acid substitution is one in which the amino acid residue is replaced by an amino acid residue comprising a similar side chain. Families of amino acid residues comprising similar side chains have been defined in the art. These families include, for example, amino acids with basic side chains (e.g., lysine, arginine, histidine), acidic side chains (e.g., aspartic acid, glutamic acid), uncharged polar side chains (e.g., glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine), non-polar side chains (e.g. alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, tryptophan), beta-branched side chains (e.g. threonine, valine, isoleucine ) and aromatic side chains (e.g., tyrosine, phenylalanine, tryptophan, histidine).

[0562]As sequências de aminoácidos da HC e sequências de domínio variável de LC podem ser codificadas por uma sequência de ácido nucleico que hibridiza sob condições de elevado rigor para uma sequência de ácido nucleico aqui descrita ou uma que codifica um domínio variável ou uma sequência de aminoácidos aqui descrita. Em uma forma de realização, as sequências de aminoácidos de uma ou mais regiões estruturais (por exemplo, FR1, FR2, FR3 e/ou FR4) da HC e/ou domínio variável de LC são, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89 %, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogas, ou, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas, às regiões de esqueleto correspondentes da HC e domínios variáveis de LC de um anticorpo aqui descrito. Em uma forma de realização, uma ou mais regiões de estrutura de cadeias leves ou pesadas (por exemplo, HC FR1, FR2, FR3 e) são, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% homólogas, ou, pelo menos, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas, à sequência da região estrutural correspondente da linha germinativa dos anticorpos humanos.[0562] The HC amino acid sequences and LC variable domain sequences can be encoded by a nucleic acid sequence that hybridizes under high stringency conditions to a nucleic acid sequence described herein or one that encodes a variable domain or a sequence of amino acids described here. In one embodiment, the amino acid sequences of one or more structural regions (e.g., FR1, FR2, FR3 and/or FR4) of the HC and/or LC variable domain are at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% counterparts, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90 %, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to the corresponding framework regions of the HC and LC variable domains of an antibody described herein. In one embodiment, one or more light or heavy chain framework regions (e.g., FR1, FR2, and FR3) are at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% counterparts, or at least 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 92%, 94%, 95% , 96%, 97%, 98%, or 99% identical, to the sequence of the corresponding structural region of the germline of human antibodies.

Validação de epítoposEpitope validation

[0563]Em uma forma de realização, os anticorpos apresentados na divulgação são úteis para validar uma vacina com base em um epítopo particular. Por exemplo, um epítopo que é o alvo de um anticorpo apresentado na memória descritiva pode ser avaliado por métodos computacionais para identificar um peptídeo estrutural apropriado para suportar a conformação de epítopo, tal como para estabilizar um epítopo que é transiente ou minimamente acessível na natureza. A abstração computacional das propriedades e estrutura de epítopos permite a triagem automatizada de bases de dados para identificar esqueletos peptídicos aceptores candidatos. O esqueleto aceptor pode ter uma estrutura terciária particular, que inclui, por exemplo, uma ou mais de uma folha beta, um sanduíche beta, um loop, ou uma hélice alfa ou beta. Os antígenos de esqueleto de epítopo candidatos podem ser testados in vitro, tal como para identificar propriedades de ligação com um anticorpo apresentado na divulgação, por exemplo, afinidade de ligação ou análise de estrutura do complexo epítopo-esqueleto/anticorpo, ou neutralização in vitro. A capacidade do esqueleto de epítopo para gerar uma resposta imune (por exemplo, para gerar anticorpos) pode ser testada pela administração do esqueleto de epítopo para um animal (por exemplo, em um mamífero, tal como um rato, um camundongo, uma cobaia, ou um coelho), e, em seguida, testando os soros quanto à presença de anticorpos anti- esqueleto de epítopo, por exemplo, pelo ensaio ELISA. A capacidade do esqueleto de epítopo para induzir proteção contra a infecção por um vírus influenza A de estirpe do Grupo 1 ou Grupo 2, ou por ambos os tipos de estirpes de influenza, ou uma estirpe da influenza B, pode ser avaliada in vivo, tal como em um animal (por exemplo, em um mamífero). Assim, um anticorpo apresentado na memória descritiva pode fornecer a validação de que o epítopo é funcionalmente importante e que o epítopo alvo irá proporcionar uma proteção contra a infecção por uma estirpe do Grupo 1 ou Grupo 2 da influenza, ou ambos os tipos de estirpes, ou uma estirpe de Influenza B.[0563] In one embodiment, the antibodies presented in the disclosure are useful for validating a vaccine based on a particular epitope. For example, an epitope that is the target of an antibody presented in the specification can be evaluated by computational methods to identify an appropriate structural peptide to support the epitope conformation, such as to stabilize an epitope that is transient or minimally accessible in nature. Computational abstraction of epitope properties and structure allows automated screening of databases to identify candidate acceptor peptide backbones. The acceptor skeleton may have a particular tertiary structure, which includes, for example, one or more of a beta sheet, a beta sandwich, a loop, or an alpha or beta helix. Candidate epitope scaffold antigens can be tested in vitro, such as to identify binding properties with an antibody disclosed in the disclosure, e.g., binding affinity or structure analysis of the epitope-scaffold/antibody complex, or in vitro neutralization. The ability of the epitope backbone to generate an immune response (e.g., to generate antibodies) can be tested by administering the epitope backbone to an animal (e.g., in a mammal, such as a rat, mouse, guinea pig, or a rabbit), and then testing the sera for the presence of anti-epitope scaffold antibodies, for example, by the ELISA assay. The ability of the epitope backbone to induce protection against infection by a Group 1 or Group 2 strain influenza A virus, or by both types of influenza strains, or an influenza B strain, can be assessed in vivo, such as as in an animal (e.g., in a mammal). Thus, an antibody presented in the specification can provide validation that the epitope is functionally important and that the target epitope will provide protection against infection by a Group 1 or Group 2 strain of influenza, or both types of strains. or a strain of Influenza B.

Produção de Moléculas de AnticorposProduction of Antibody Molecules

[0564]Os ácidos nucleicos (por exemplo, os genes), que codificam uma molécula de anticorpo gerada por um método aqui descrito, podem ser sequenciados e a totalidade ou uma parte dos ácidos nucleicos podem ser clonados em um vetor que exprime a totalidade ou uma parte dos ácidos nucleicos. Por exemplo, os ácidos nucleicos podem incluir um fragmento do gene que codifica o anticorpo, tal como um anticorpo de cadeia simples (scFv), um fragmento F(ab')2, um fragmento Fab ou um fragmento Fd.[0564] Nucleic acids (e.g., genes) encoding an antibody molecule generated by a method described herein can be sequenced and all or a portion of the nucleic acids can be cloned into a vector that expresses all or a part of nucleic acids. For example, the nucleic acids may include a fragment of the gene encoding the antibody, such as a single-chain antibody (scFv), an F(ab')2 fragment, a Fab fragment, or an Fd fragment.

[0565]A divulgação também fornece células hospedeiras que compreendem os ácidos nucleicos que codificam um anticorpo ou um seu fragmento, tal como aqui descrito. As células hospedeiras podem ser, por exemplo, células procarióticas ou eucarióticas, por exemplo, células de mamífero ou células de levedura, por exemplo, Pichia (veja- se, por exemplo, Powers et al., (2001) J. Immunol. Methods 251:123-35), Hanseula, ou Saccharomyces.[0565] The disclosure also provides host cells that comprise nucleic acids encoding an antibody or a fragment thereof, as described herein. The host cells may be, for example, prokaryotic or eukaryotic cells, for example, mammalian cells or yeast cells, for example, Pichia (see, for example, Powers et al., (2001) J. Immunol. Methods 251:123-35), Hanseula, or Saccharomyces.

[0566]As moléculas de anticorpos, em especial as moléculas de anticorpo de comprimento completo, por exemplo, IgG, podem ser produzidas em células de mamíferos. Exemplos de células hospedeiras de mamífero para expressão recombinante incluem ovário de hamster chinês (CHO) (incluindo células dhfr- CHO, descritas em Urlaub e Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77: 4216-4220, utilizadas com um marcador selecionável de DHFR, por exemplo, como descrito em Kaufman e Sharp (1982) Mol. Biol. 159: 601 621), linhas de células linfocíticas, por exemplo, células de mieloma NS0 e células SP2, células COS, K562 e uma célula de um animal transgênico, por exemplo, um mamífero transgênico. Por exemplo, a célula é uma célula epitelial mamária.[0566] Antibody molecules, especially full-length antibody molecules, for example, IgG, can be produced in mammalian cells. Examples of mammalian host cells for recombinant expression include Chinese hamster ovary (CHO) (including dhfr-CHO cells, described in Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220, used with a DHFR selectable marker, e.g., as described in Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601621), lymphocytic cell lines, e.g., NS0 myeloma cells and SP2 cells, COS cells, K562 cells, and a of a transgenic animal, for example, a transgenic mammal. For example, the cell is a mammary epithelial cell.

[0567]Em adição à sequência de ácido nucleico que codifica para o domínio de imunoglobulina, os vetores de expressão recombinantes podem transportar sequências de ácido nucleico adicional, tais como sequências que regulam a replicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de replicação) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador selecionável facilita a seleção de células hospedeiras nas quais o vetor foi introduzido (ver, por exemplo, Patentes dos EUA Nos 4.399.216; 4.634.665; e 5179017). Exemplos de genes marcadores selecionáveis incluem o gene de diidrofolato redutase (DHFR) (para utilização em células hospedeiras dhfr- com seleção/amplificação de metotrexato) e o neo gene (para seleção com G418).[0567] In addition to the nucleic acid sequence encoding the immunoglobulin domain, recombinant expression vectors can carry additional nucleic acid sequences, such as sequences that regulate replication of the vector in host cells (e.g., origins of replication ) and selectable marker genes. The selectable marker gene facilitates the selection of host cells into which the vector has been introduced (see, for example, US Patent Nos. 4,399,216; 4,634,665; and 5179017). Examples of selectable marker genes include the dihydrofolate reductase (DHFR) gene (for use in dhfr- host cells with methotrexate selection/amplification) and the neo gene (for selection with G418).

[0568]Em um sistema exemplificativo para a expressão recombinante de uma molécula de anticorpo (por exemplo, um anticorpo de comprimento completo ou uma sua porção de ligação ao antígeno), um vetor de expressão recombinante que codifica tanto a cadeia pesada do anticorpo quanto a cadeia leve de anticorpo é introduzido em células CHO dhfr- por transfecção mediada por fosfato de cálcio. No vetor de expressão recombinante, os genes de anticorpo da cadeia pesada e leve estão, cada um, operacionalmente ligados a elementos reguladores potenciadores/promotores (por exemplo, derivados de SV40, CMV, adenovírus e semelhantes, tais como um elemento regulador potenciador de CMV/promotor de AdMLP ou um elemento regulador intensificador de SV40/promotor de AdMLP) para direcionar elevados níveis de transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinante também transporta um gene DHFR, que permite a seleção de células CHO que foram transfectadas com o vetor utilizando seleção/amplificação de metotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são cultivadas para permitir a expressão do anticorpo de cadeias pesadas e leves e moléculas de anticorpo intactas são recuperadas do meio de cultura. Técnicas de biologia molecular padrão são utilizadas para preparar o vetor de expressão recombinante, transfectar células hospedeiras, selecionar os transformantes, cultivar as células hospedeiras e recuperar o anticorpo do meio de cultura. Por exemplo, alguns anticorpos podem ser isolados por cromatografia de afinidade com um Proteína A ou proteína G. Por exemplo, os anticorpos purificados podem ser concentrados a cerca de 100 mg/mL até cerca de 200 mg/mL utilizando técnicas de concentração de proteínas que são conhecidas na arte.[0568] In an exemplary system for the recombinant expression of an antibody molecule (e.g., a full-length antibody or an antigen-binding portion thereof), a recombinant expression vector encoding both the antibody heavy chain and the Antibody light chain is introduced into CHO dhfr- cells by calcium phosphate-mediated transfection. In the recombinant expression vector, the heavy and light chain antibody genes are each operably linked to enhancer/promoter regulatory elements (e.g., derived from SV40, CMV, adenovirus, and the like, such as a CMV enhancer regulatory element). /AdMLP promoter or an SV40 enhancer regulatory element/AdMLP promoter) to direct high levels of gene transcription. The recombinant expression vector also carries a DHFR gene, which allows selection of CHO cells that have been transfected with the vector using methotrexate selection/amplification. Selected transforming host cells are cultured to allow heavy and light chain antibody expression and intact antibody molecules are recovered from the culture medium. Standard molecular biology techniques are used to prepare the recombinant expression vector, transfect host cells, select the transformants, culture the host cells, and recover the antibody from the culture medium. For example, some antibodies can be isolated by affinity chromatography with a Protein A or Protein G. For example, purified antibodies can be concentrated to about 100 mg/mL to about 200 mg/mL using protein concentration techniques that are known in the art.

[0569]As moléculas de anticorpos podem também ser produzidas por um animal transgênico. Por exemplo, a patente dos EUA No 5.849.992 descreve um método para a expressão de uma molécula de anticorpo na glândula mamária de um mamífero transgênico. Um transgene é construído que inclui um promotor específico do leite e sequências de ácidos nucleicos que codificam a molécula de anticorpo de interesse, por exemplo, um anticorpo aqui descrito, e uma sequência sinal para secreção. O leite produzido pelas fêmeas de tais mamíferos transgênicos inclui, nela secretado, o anticorpo de interesse, por exemplo, um anticorpo aqui descrito. A molécula de anticorpo pode ser purificada a partir do leite, ou para algumas aplicações, utilizada diretamente.[0569] Antibody molecules can also be produced by a transgenic animal. For example, US Patent No. 5,849,992 describes a method for expressing an antibody molecule in the mammary gland of a transgenic mammal. A transgene is constructed that includes a milk-specific promoter and nucleic acid sequences encoding the antibody molecule of interest, for example, an antibody described herein, and a signal sequence for secretion. Milk produced by females of such transgenic mammals includes, secreted therein, the antibody of interest, for example, an antibody described herein. The antibody molecule can be purified from milk, or for some applications, used directly.

[0570]As moléculas de anticorpos podem também ser expressas in vivo, após a administração de um vetor contendo ácidos nucleicos que codificam a cadeia pesada do anticorpo e a cadeia leve do anticorpo. Vetor mediado por transferência de gene é então utilizado para manipular a secreção do anticorpo anti-HA em circulação. Por exemplo, um anticorpo anti-HA de cadeia pesada e um anticorpo antiHA de cadeia leve como aqui descrito são clonados em um vetor baseado em vírus (AAV) adeno-associado e cada um do anticorpo anti-HA de cadeia pesada do e do anticorpo antiHA de cadeia leve estão sob controle de um promotor, tal como o citomegalovírus (CMV). A administração do vetor a um indivíduo, tal como a um paciente, por exemplo, um paciente humano, tal como por injeção intramuscular, resulta na expressão de um anticorpo anti-HA e secreção na circulação.[0570] Antibody molecules can also be expressed in vivo, after administration of a vector containing nucleic acids encoding the antibody heavy chain and the antibody light chain. Vector-mediated gene transfer is then used to manipulate the secretion of anti-HA antibody into circulation. For example, an anti-HA heavy chain antibody and an anti-HA light chain antibody as described herein are cloned into an adeno-associated virus (AAV)-based vector and each of the anti-HA heavy chain antibody and the light chain antiHA are under the control of a promoter, such as cytomegalovirus (CMV). Administration of the vector to an individual, such as a patient, e.g., a human patient, such as by intramuscular injection, results in the expression of an anti-HA antibody and secretion into the circulation.

Modificações dos Agentes de LigaçãoConnection Agent Modifications

[0571]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, podem ser modificados para ter numerosas propriedades, por exemplo, ter alterado, por exemplo, meia- vida prolongada, para ser associado com, por exemplo, ligado de forma covalente a porções detectáveis, por exemplo, marcadores, serem associados, por exemplo, ligados de forma covalente a toxinas, ou ter outras propriedades, por exemplo, funções imunes alteradas.[0571] Binding agents, for example, antibody molecules, can be modified to have numerous properties, for example, to have altered, for example, prolonged half-life, to be associated with, for example, covalently linked to detectable moieties, e.g. tags, be associated, e.g. covalently linked to toxins, or have other properties, e.g. altered immune functions.

[0572]As moléculas de anticorpos podem incluir modificações, por exemplo, modificações que alteram a função de Fc, por exemplo, para diminuir ou eliminar a interação com um receptor Fc ou com C1q, ou ambos. Em um exemplo, a região constante de IgG1 humana pode ser mutada em um ou mais resíduos.[0572] Antibody molecules may include modifications, for example, modifications that alter Fc function, for example, to decrease or eliminate interaction with an Fc receptor or with C1q, or both. In one example, the constant region of human IgG1 can be mutated at one or more residues.

[0573] Para algumas moléculas de anticorpos que incluem um domínio de Fc, o sistema de produção de anticorpo pode ser concebido para sintetizar moléculas de anticorpo em que a região Fc seja glicosilada. O domínio de Fc pode ser produzido em um sistema de expressão de mamífero que, apropriadamente, glicosila o resíduo correspondente a asparagina 297. O domínio Fc pode também incluir outras modificações pós-traducionais eucarióticas.[0573] For some antibody molecules that include an Fc domain, the antibody production system can be designed to synthesize antibody molecules in which the Fc region is glycosylated. The Fc domain can be produced in a mammalian expression system that appropriately glycosylates the residue corresponding to asparagine 297. The Fc domain can also include other eukaryotic post-translational modifications.

[0574]Outras modificações do domínio Fc adequadas incluem aquelas descritas em WO2004/029207. Por exemplo, o domínio Fc pode ser um Fc XmAb® (Xencor, Monrovia, CA). O domínio Fc, ou um fragmento do mesmo, pode ter uma substituição em um Receptor FCY (FCYR), região de ligação, tal como os domínios e fragmentos descritos em WO05/063815. Em algumas formas de realização, o domínio Fc, ou um fragmento do mesmo, tem uma substituição em uma região de ligação de receptor Fc (FcRn) neonatal, tal como os domínios e fragmentos descritos na WO05047327. Em outras formas de realização, o domínio Fc é uma única cadeia, ou um seu fragmento, ou uma versão modificada do mesmo, tal como os descritos em WO2008143954. Outras modificações Fc adequadas são conhecidas e descritas na arte.[0574] Other suitable Fc domain modifications include those described in WO2004/029207. For example, the Fc domain may be an XmAb® Fc (Xencor, Monrovia, CA). The Fc domain, or a fragment thereof, may have a substitution in an FCY Receptor (FCYR), binding region, such as the domains and fragments described in WO05/063815. In some embodiments, the Fc domain, or a fragment thereof, has a substitution in a neonatal Fc receptor (FcRn) binding region, such as the domains and fragments described in WO05047327. In other embodiments, the Fc domain is a single chain, or a fragment thereof, or a modified version thereof, such as those described in WO2008143954. Other suitable Fc modifications are known and described in the art.

[0575]As moléculas de anticorpo podem ser modificadas, por exemplo, com uma porção que melhora a sua estabilidade e/ou retenção em circulação, por exemplo, no sangue, soro, linfa, lavagem broncoalveolar, ou outros tecidos, por exemplo, por, pelo menos, 1,5, 2, 5, 10, ou 50 vezes.[0575] Antibody molecules can be modified, for example, with a moiety that improves their stability and/or retention in circulation, for example, in blood, serum, lymph, bronchoalveolar lavage, or other tissues, for example, by at least 1.5, 2, 5, 10, or 50 times.

[0576] Por exemplo, uma molécula de anticorpo gerada por um método aqui descrito pode ser associada com um polímero, por exemplo, um polímero substancialmente não antigênico, tal como um óxido de polialquileno ou um óxido de polietileno. Polímeros apropriados irão variar substancialmente em peso. Polímeros compreendendo pesos médios moleculares em número no intervalo de cerca de 200 a cerca de 35.000 daltons (ou cerca de 1.000 a cerca de 15.000 e de 2.000 a cerca de 12.500) podem ser utilizados.[0576] For example, an antibody molecule generated by a method described herein may be associated with a polymer, for example, a substantially non-antigenic polymer, such as a polyalkylene oxide or a polyethylene oxide. Suitable polymers will vary substantially in weight. Polymers comprising number average molecular weights in the range of about 200 to about 35,000 daltons (or about 1,000 to about 15,000 and from 2,000 to about 12,500) can be used.

[0577] Por exemplo, uma molécula de anticorpo gerada por um método aqui descrito pode ser conjugada com um polímero solúvel em água, por exemplo, um polímero hidrofílico de polivinila, por exemplo, álcool polivinílico ou polivinilpirrolidona. Uma lista não limitante de tais polímeros inclui homopolímeros de óxido de polialquileno tais como polietilenoglicol (PEG) ou polipropileno glicóis, polióis polioxietilenados, seus copolímeros e seus copolímeros de bloco, desde que a solubilidade na água dos copolímeros de bloco seja mantida. Polímeros úteis adicionais incluem polioxialquilenos, tais como polioxietileno, polioxipropileno e copolímeros de bloco de polioxietileno e polioxipropileno (Pluronics); polimetacrilatos; carbâmeros; polissacarídeos ramificados ou não ramificados que compreendem os monômeros de sacarídeos D-manose, D- e L-galactose, fucose, frutose, D- xilose, L-arabinose, ácido D-glucurônico, ácido siálico, ácido D-galacturônico, ácido D-manurônico (por exemplo, ácido polimanurônico, ou ácido algínico), D-glucosamina, D- galactosamina, D-glicose e ácido neuramínico incluindo homopolissacarídeos e heteropolissacarídeos tais como lactose, amilopectina, amido, hidroxietilamido, amilose, sulfato de dextrano, dextrano, dextrinas, glicogênio, ou a subunidade de polissacarídeo de mucopolissacarídeos ácidos, por exemplo, ácido hialurônico; polímeros de álcoois de açúcar tais como polisorbitol e polimanitol; heparina ou heparan.[0577] For example, an antibody molecule generated by a method described herein can be conjugated to a water-soluble polymer, for example, a hydrophilic polyvinyl polymer, for example, polyvinyl alcohol or polyvinylpyrrolidone. A non-limiting list of such polymers includes polyalkylene oxide homopolymers such as polyethylene glycol (PEG) or polypropylene glycols, polyoxyethylenated polyols, copolymers thereof and block copolymers thereof, provided that the water solubility of the block copolymers is maintained. Additional useful polymers include polyoxyalkylenes, such as polyoxyethylene, polyoxypropylene, and block copolymers of polyoxyethylene and polyoxypropylene (Pluronics); polymethacrylates; carbamers; branched or unbranched polysaccharides comprising the saccharide monomers D-mannose, D- and L-galactose, fucose, fructose, D-xylose, L-arabinose, D-glucuronic acid, sialic acid, D-galacturonic acid, D- mannuronic acid (e.g. polymannuronic acid, or alginic acid), D-glucosamine, D-galactosamine, D-glucose and neuraminic acid including homopolysaccharides and heteropolysaccharides such as lactose, amylopectin, starch, hydroxyethyl starch, amylose, dextran sulfate, dextran, dextrins , glycogen, or the polysaccharide subunit of acidic mucopolysaccharides, e.g., hyaluronic acid; polymers of sugar alcohols such as polysorbitol and polymannitol; heparin or heparan.

[0578]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, como aqui descritos, podem ser conjugados com outra entidade ou porção (por exemplo, a um agente citotóxico ou porção citostática, um marcador ou fração detectável, ou um grupo terapêutico). Exemplos de radicais incluem: um agente citotóxico ou citostático, por exemplo, um agente terapêutico, um fármaco, um composto emissor de radiação, moléculas de plantas, fungos, ou de origem bacteriana, ou uma proteína biológica (por exemplo, uma proteína de toxina) ou partícula (por exemplo, uma partícula viral recombinante, por exemplo, através de uma proteína de revestimento viral), um agente detectável; um agente farmacêutico e/ou uma proteína ou peptídeo que pode mediar a associação do anticorpo, ou porção de anticorpo com uma outra molécula (tal como uma região núcleo de estreptavidina ou um marcador de poli-histidina). Um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, como aqui revelado, pode ser funcionalmente ligado através de qualquer método adequado (por exemplo, acoplamento quimico, fusão genética, ligação covalente, associação não covalente ou de outra forma) a uma ou mais outras entidades moleculares.[0578] Binding agents, for example, antibody molecules, as described herein, can be conjugated to another entity or moiety (e.g., to a cytotoxic agent or cytostatic moiety, a label or detectable moiety, or a therapeutic group) . Examples of radicals include: a cytotoxic or cytostatic agent, e.g., a therapeutic agent, a drug, a radiation-emitting compound, molecules of plants, fungi, or bacterial origin, or a biological protein (e.g., a toxin protein). ) or particle (e.g., a recombinant viral particle, e.g., via a viral coat protein), a detectable agent; a pharmaceutical agent and/or a protein or peptide that can mediate the association of the antibody, or antibody portion, with another molecule (such as a streptavidin core region or a polyhistidine tag). A binding agent, e.g., an antibody molecule, as disclosed herein, may be functionally linked by any suitable method (e.g., chemical coupling, genetic fusion, covalent linkage, noncovalent association, or otherwise) to one or plus other molecular entities.

[0579]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, aqui descritos podem ser conjugados com uma porção detectável, por exemplo, um marcador ou um agente de imagem. Tais porções podem incluir enzimas (por exemplo, peroxidase de rábano, beta-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina, acetilcolinesterase, glicose-oxidase e semelhantes), marcadores radioativos (por exemplo, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I e semelhantes), haptenos, marcadores fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, lantanídeos fosforescentes, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloreto de 5-dimetilamina-1- naftalenossulfonila, ficoeritrina e semelhantes), moléculas fosforescentes, moléculas quimioluminescentes, cromóforos, moléculas luminescentes, moléculas de fotoafinidade, partículas coloridas ou ligantes de afinidade, tais como biotina, epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de pares de leucina zipper, ou sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação a metal, marcadores de epítopo). Em algumas formas de realização, uma porção, por exemplo, uma porção detectável, por exemplo, um marcador, é ligado por braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial de impedimento espacial.[0579] The binding agents, for example, antibody molecules, described herein can be conjugated with a detectable moiety, for example, a label or an imaging agent. Such moieties may include enzymes (e.g., horseradish peroxidase, beta-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase, acetylcholinesterase, glucose oxidase, and the like), radioactive labels (e.g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In , 125I, 131I and the like), haptens, fluorescent labels (e.g., FITC, rhodamine, phosphorescent lanthanides, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, 5-dimethylamine-1-naphthalenesulfonyl chloride, phycoerythrin and the like), phosphorescent molecules, molecules chemiluminescent, chromophores, luminescent molecules, photoaffinity molecules, colored particles or affinity ligands such as biotin, predetermined polypeptide epitopes recognized by a secondary reporter (e.g., leucine zipper pair sequences, or binding sites for secondary antibodies, metal-binding domains, epitope tags). In some embodiments, a portion, e.g., a detectable portion, e.g., a marker, is linked by spacer arms of various lengths to reduce the potential for spatial hindrance.

[0580]Em formas de realização, um agente de ligação, por exemplo uma molécula de anticorpo, aqui divulgado, é derivatizado com uma enzima detectável e é detectado adicionando reagentes adicionais que a enzima utiliza para produzir um produto de reação detectável. Por exemplo, quando o agente detectável peroxidase de rábano está presente, a adição de peróxido de hidrogênio e diaminobenzidina leva a um produto de reação colorido, que é detectável. Um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, aqui divulgada, pode também ser derivatizado com um grupo prostético (por exemplo, estreptavidina/biotina e avidina/biotina). Por exemplo, um anticorpo pode ser derivatizado com biotina e detectado através da medição indireta da ligação a avidina ou estreptavidina.[0580] In embodiments, a binding agent, for example an antibody molecule, disclosed herein, is derivatized with a detectable enzyme and is detected by adding additional reagents that the enzyme uses to produce a detectable reaction product. For example, when the detectable agent horseradish peroxidase is present, the addition of hydrogen peroxide and diaminobenzidine leads to a colored reaction product, which is detectable. A binding agent, e.g., an antibody molecule, disclosed herein, can also be derivatized with a prosthetic group (e.g., streptavidin/biotin and avidin/biotin). For example, an antibody can be derivatized with biotin and detected by indirectly measuring binding to avidin or streptavidin.

[0581]Em formas de realização a porção compreende íons paramagnéticos e substâncias detectáveis por RMN, entre outros. Por exemplo, em algumas formas de realização, um íon paramagnético é um ou mais de cromo (III), manganês (II), ferro (III), ferro (II), cobalto (II), níquel (II), cobre (II), neodímio (III), samário (III), itérbio (III), gadolínio (III), vanádio (II), térbio (III), disprósio (III), hólmio (III), érbio (III), lantânio (III), ouro (III), chumbo (II) e/ou bismuto (III).[0581] In embodiments, the portion comprises paramagnetic ions and substances detectable by NMR, among others. For example, in some embodiments, a paramagnetic ion is one or more of chromium (III), manganese (II), iron (III), iron (II), cobalt (II), nickel (II), copper (II ), neodymium (III), samarium (III), ytterbium (III), gadolinium (III), vanadium (II), terbium (III), dysprosium (III), holmium (III), erbium (III), lanthanum (III ), gold (III), lead (II) and/or bismuth (III).

[0582]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, como aqui revelados, podem ser modificados para serem associados com, por exemplo, conjugado a, um agente terapêutico, por exemplo, um agente que compreende atividade antiviral, atividade anti-inflamatória ou atividade citotóxica, etc. Em algumas formas de realização, os agentes terapêuticos podem tratar os sintomas ou causas de infecção de influenza (por exemplo, por exemplo, antiviral, alívio da dor, anti-inflamatórios, imunomodulador, atividades indutoras do sono, etc.).[0582] Binding agents, e.g., antibody molecules, as disclosed herein, may be modified to be associated with, e.g., conjugated to, a therapeutic agent, e.g., an agent comprising antiviral activity, antiviral activity, inflammatory or cytotoxic activity, etc. In some embodiments, therapeutic agents can treat symptoms or causes of influenza infection (e.g., antiviral, pain relief, anti-inflammatory, immunomodulatory, sleep-inducing activities, etc.).

Métodos de tratamento e AdministraçãoTreatment Methods and Administration

[0583]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, existentes na divulgação, podem ser utilizados para tratar um indivíduo, por exemplo, um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, infectado com, ou em risco de ser infectado com, um vírus influenza.[0583] The binding agents, e.g., antibody molecules, in the disclosure may be used to treat an individual, e.g., an individual, e.g., a human individual, infected with, or at risk of being infected with, , an influenza virus.

[0584]Qualquer humano é candidato para receber uma molécula de anticorpo apresentad na divulgação para o tratamento ou prevenção de uma infecção por um vírus influenza. Os seres humanos com elevado risco de infecção, tais como indivíduos imunocomprometidos e seres humanos que estão em alto risco de exposição ao vírus influenza são particularmente adequados para receberem tratamento com a molécula de anticorpo. Indivíduos imunocomprometidos incluem os idosos (65 anos ou mais) e crianças (por exemplo, seis meses a 18 anos) e pessoas com condições médicas crônicas. Pessoas com alto risco de exposição incluem os profissionais de saúde, professores e equipes de emergência (por exemplo, bombeiros, polícias).[0584] Any human is a candidate for receiving an antibody molecule disclosed in the disclosure for the treatment or prevention of an infection with an influenza virus. Humans at high risk of infection, such as immunocompromised individuals and humans who are at high risk of exposure to the influenza virus, are particularly suitable for receiving treatment with the antibody molecule. Immunocompromised individuals include the elderly (65 years and older) and children (e.g., six months to 18 years) and people with chronic medical conditions. People at high risk of exposure include healthcare workers, teachers, and emergency personnel (e.g., firefighters, police).

[0585]As moléculas de anticorpos aqui descritas também podem ser utilizadas para prevenir ou reduzir (por exemplo, minimizar) infecção secundária (por exemplo, infecção bacteriana secundária) ou um risco de infecção secundária compreendendo associada à influenza ou quaisquer efeitos (por exemplo, sintomas ou complicações) da mesma sobre um indivíduo. Infecções bacterianas secundárias oportunistas (por exemplo, pneumonia bacteriana secundária, por exemplo, principalmente com Streptococcus pneumonia) contribuem significativamente para a morbidade e a mortalidade associada a infecções de influenza sazonal e pandêmica. As moléculas de anticorpos aqui descritas podem ser utilizadas para prevenir ou reduzir (por exemplo, minimizar) as complicações de infecções oportunistas, secundárias (por exemplo, infecções bacterianas) em um indivíduo.[0585] The antibody molecules described herein can also be used to prevent or reduce (e.g., minimize) secondary infection (e.g., secondary bacterial infection) or a risk of secondary infection comprising associated with influenza or any effects (e.g., symptoms or complications) of the same on an individual. Opportunistic secondary bacterial infections (e.g., secondary bacterial pneumonia, e.g., primarily with Streptococcus pneumonia) contribute significantly to the morbidity and mortality associated with seasonal and pandemic influenza infections. The antibody molecules described herein can be used to prevent or reduce (e.g., minimize) complications of opportunistic, secondary infections (e.g., bacterial infections) in an individual.

[0586]Uma molécula de anticorpo pode ser administrada a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, por uma variedade de métodos. Para muitas aplicações, a via de administração é uma das seguintes: injeção intravenosa ou infusão, injeção subcutânea ou injeção intramuscular. Uma molécula de anticorpo pode ser administrada como uma dose fixa, ou em uma dose em mg/kg. A molécula de anticorpo pode ser administrada por via intravenosa (IV) ou subcutânea (SC). Por exemplo, a molécula de anticorpo pode ser administrada com uma dose fixa de unidade de entre cerca de 50-600 mg por via intravenosa, por exemplo, a cada 4 semanas, ou entre cerca de 50-100 mg SC (por exemplo, 75 mg), por exemplo, pelo menos uma vez por semana (por exemplo, duas vezes por semana). Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo é administrada IV a uma dose unitária fixa de 50 mg, 60 mg, 80 mg, 100 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 180 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg ou 600 mg ou mais. A administração da dose IV pode ser uma ou duas vezes ou três vezes ou mais por semana, ou uma vez a cada duas, três, quatro ou cinco semanas, ou com menor frequência.[0586] An antibody molecule can be administered to an individual, for example, a human individual, by a variety of methods. For many applications, the route of administration is one of the following: intravenous injection or infusion, subcutaneous injection, or intramuscular injection. An antibody molecule can be administered as a fixed dose, or in a mg/kg dose. The antibody molecule can be administered intravenously (IV) or subcutaneously (SC). For example, the antibody molecule can be administered as a fixed unit dose of between about 50-600 mg intravenously, e.g., every 4 weeks, or between about 50-100 mg SC (e.g., 75 mg), for example, at least once a week (e.g. twice a week). In one embodiment, the antibody molecule is administered IV at a fixed unit dose of 50 mg, 60 mg, 80 mg, 100 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 180 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg or 600 mg or more. Administration of the IV dose may be once or twice or three times or more per week, or once every two, three, four or five weeks, or less frequently.

[0587]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo é administrada SC em uma dose unitária fixa de 50 mg, 60 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 100 mg ou 120 mg ou mais. A administração da dose SC pode ser uma ou duas vezes ou três vezes ou mais por semana, ou uma vez a cada duas, três, quatro ou cinco semanas, ou com menor frequência.[0587] In one embodiment, the antibody molecule is administered SC in a fixed unit dose of 50 mg, 60 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 100 mg or 120 mg or more. Administration of the SC dose may be once or twice or three times or more per week, or once every two, three, four or five weeks, or less frequently.

[0588]Um anticorpo anti-HA apresentado na memória descritiva também podem ser administrado por inalação, tal como por via intranasal ou por inalação oral, tal como a uma unidade de dose fixa de 50 mg, 60 mg, 80 mg, 100 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 180 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg ou 600 mg ou mais.[0588] An anti-HA antibody set forth in the specification may also be administered by inhalation, such as intranasally or by oral inhalation, such as in a fixed dose unit of 50 mg, 60 mg, 80 mg, 100 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 180 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg or 600 mg or more.

[0589]Em uma forma de realização, um anticorpo anti-HA é administrado a um indivíduo por meio de transferência de genes mediada por vetor, tal como através da entrega de um vetor que codifica a cadeia pesada e a cadeia leve de um anticorpo anti-HA e o anticorpo é expresso a partir dos genes da cadeia pesada e da cadeia leve no corpo. Por exemplo, ácidos nucleicos que codificam uma cadeia pesada e uma cadeia leve podem ser clonados em um vetor de AAV, tal como um vetor de AAV auto-complementar, o vetor scAAV administrado a um ser humano por injeção, por exemplo, por injeção IM e o anticorpo é expressao e secretado para a circulação do ser humano.[0589] In one embodiment, an anti-HA antibody is administered to an individual via vector-mediated gene transfer, such as through delivery of a vector encoding the heavy chain and light chain of an anti-HA antibody. -HA and antibody is expressed from the heavy chain and light chain genes in the body. For example, nucleic acids encoding a heavy chain and a light chain can be cloned into an AAV vector, such as a self-complementary AAV vector, the scAAV vector administered to a human by injection, e.g., by IM injection. and the antibody is expressed and secreted into human circulation.

[0590]Uma molécula de anticorpo também pode ser administrada em bolus a uma dose de entre cerca de 1 e 50 mg/kg, por exemplo, entre cerca de 1 e 10 mg/kg, entre cerca de 1 e 25 mg/kg, ou cerca de 25 e 50 mg/kg, por exemplo, cerca de 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6,0 mg/kg, 5,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, 3,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 1,0 mg/kg ou menos. Os intervalos de doses modificadas incluem uma dose que é inferior a cerca de 3000 mg/indivíduo, cerca de 1500 mg/indivíduo, cerca de 1000 mg/indivíduo, cerca de 600 mg/indivíduo, cerca de 500 mg/indivíduo, cerca de 400 mg/indivíduo, cerca de 300 mg/indivíduo, cerca de 250 mg/indivíduo, cerca de 200 mg/indivíduo, ou cerca de 150 mg/indivíduo, tipicamente para administração a cada quarta semana ou uma vez por mês. A molécula de anticorpo pode ser administrada, por exemplo, a cada três a cinco semanas, por exemplo, cada quarta semana, ou mensalmente.[0590] An antibody molecule can also be administered as a bolus at a dose of between about 1 and 50 mg/kg, for example, between about 1 and 10 mg/kg, between about 1 and 25 mg/kg, or about 25 and 50 mg/kg, for example, about 50 mg/kg, 25 mg/kg, 10 mg/kg, 6.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 4.0 mg/kg , 3.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 1.0 mg/kg or less. Modified dose ranges include a dose that is less than about 3000 mg/subject, about 1500 mg/subject, about 1000 mg/subject, about 600 mg/subject, about 500 mg/subject, about 400 mg/subject, about 300 mg/subject, about 250 mg/subject, about 200 mg/subject, or about 150 mg/subject, typically for administration every fourth week or once a month. The antibody molecule may be administered, for example, every three to five weeks, for example, every fourth week, or monthly.

[0591]A dosagem pode ser ajustada de acordo com uma taxa do paciente de depuração de uma administração anterior do anticorpo. Por exemplo, um paciente pode não ser administrado com uma segunda ou seguida dose antes do nível de anticorpos no sistema do paciente cair abaixo de um nível pré-determinado. Em uma forma de realização, uma amostra de um paciente (por exemplo, plasma, soro, sangue, urina ou fluido cerebrospinal (CSF)) é ensaiada para a presença de anticorpos e se o nível de anticorpos está acima de um nível pré-determinado, o paciente não será administrado com uma segunda ou seguida dose. Se o nível de anticorpos no sistema do paciente está abaixo de um nível pré-determinado, então o paciente é administrado com uma segunda ou seguida dose. Um paciente, cujo níveis de anticorpos são determinados estando demasiado elevados (acima do nível pré-determinado) pode ser testado de novo depois de um ou dois ou três dias, ou uma semana e se o nível de anticorpo nas amostras dos pacientes desceu abaixo do nível predeterminado, o paciente pode ser administrado com uma segunda ou seguida dose de anticorpo.[0591] The dosage can be adjusted according to the patient's rate of clearance from a previous administration of the antibody. For example, a patient may not be administered a second or subsequent dose until the level of antibodies in the patient's system falls below a predetermined level. In one embodiment, a sample from a patient (e.g., plasma, serum, blood, urine, or cerebrospinal fluid (CSF)) is assayed for the presence of antibodies and whether the level of antibodies is above a predetermined level. , the patient will not be administered a second or consecutive dose. If the level of antibodies in the patient's system is below a predetermined level, then the patient is administered a second or consecutive dose. A patient whose antibody levels are determined to be too high (above the predetermined level) may be tested again after a day or two or three, or a week and if the antibody level in the patient's samples has fallen below the predetermined level, the patient can be administered a second or subsequent dose of antibody.

[0592]Em certas formas de realização, o anticorpo pode ser preparado com um veículo que irá proteger o fármaco contra a liberação rápida, tal como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de entrega microencapsulados. Polímeros biodegradáveis, biocompatíveis podem ser utilizados, tais como acetato de vinil etileno, poli anidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido poliláctico. Muitos métodos para a preparação de tais formulações estão patenteados ou são geralmente conhecidos. Veja-se, por exemplo, Controlled Drug Delivery (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), Segunda Edição, J. Robinson e Lee VHL, eds., Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1987.[0592] In certain embodiments, the antibody can be prepared with a carrier that will protect the drug against rapid release, such as a controlled release formulation, including implants and microencapsulated delivery systems. Biodegradable, biocompatible polymers can be used, such as ethylene vinyl acetate, poly anhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters and polylactic acid. Many methods for preparing such formulations are patented or generally known. See, for example, Controlled Drug Delivery (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), Second Edition, J. Robinson and Lee VHL, eds., Marcel Dekker, Inc., New York, 1987.

[0593]As composições farmacêuticas podem ser administradas com um dispositivo médico. Por exemplo, as composições farmacêuticas podem ser administradas com um dispositivo de injeção sem agulha hipodérmica, tal como os dispositivos descritos nas patentes dos EUA Nos 5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413; 4.941.880; 4.790.824; ou 4.596.556. Exemplos de implantes bem conhecidos e módulos são discutidos em, por exemplo, Patente dos EUA No 4487603, a qual descreve uma bomba de micro-infusão implantável para a distribuição de medicação a uma taxa controlada; a Patente dos EUA No 4.486.194, que descreve um dispositivo terapêutico para administrar medicamentos através da pele; a Patente dos EUA No 4.447.233, que descreve uma bomba de infusão de medicação para a entrega de medicação a uma taxa de infusão precisa; a Patente dos EUA No 4.447.224, que descreve um aparelho de infusão implantável de fluxo variável para entrega contínua de fármacos; a Patente dos Estados Unidos No 4.439.196, que divulga um sistema de administração de fármaco osmótico compreendendo compartimentos de câmaras múltiplas; e a Patente dos EUA No 4.475.196, que descreve um sistema de entrega osmótico de fármaco. É claro que muitos outros implantes, sistemas de distribuição e módulos também são conhecidos.[0593] The pharmaceutical compositions can be administered with a medical device. For example, the pharmaceutical compositions can be administered with a hypodermic needleless injection device, such as the devices described in U.S. Patent Nos. 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; or 4,596,556. Examples of well-known implants and modules are discussed in, for example, US Patent No. 4,487,603, which describes an implantable microinfusion pump for delivering medication at a controlled rate; US Patent No. 4,486,194, which describes a therapeutic device for administering medications through the skin; US Patent No. 4,447,233, which describes a medication infusion pump for delivering medication at a precise infusion rate; US Patent No. 4,447,224, which describes a variable-flow implantable infusion device for continuous drug delivery; United States Patent No. 4,439,196, which discloses an osmotic drug delivery system comprising multiple chamber compartments; and US Patent No. 4,475,196, which describes an osmotic drug delivery system. Of course, many other implants, delivery systems and modules are also known.

[0594]Em formas de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é administrado bucalmente, oralmente, ou por administração nasal, por exemplo, como um líquido, pulverizador, aerossol ou, por exemplo, por aplicação tópica, por exemplo, por um líquido ou gotas, ou por inalação.[0594] In embodiments the binding agent, for example, an antibody molecule, is administered buccally, orally, or by nasal administration, for example, as a liquid, spray, aerosol or, for example, by topical application, for example, by a liquid or drops, or by inhalation.

[0595]Uma molécula de anticorpo aqui descrita pode ser administrada com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, por exemplo, um segundo fármaco, para o tratamento de uma infecção viral, ou um sintoma de infecção. A molécula de anticorpo e os um ou mais agentes suplementares ou adicionais podem ser formulados em conjunto, na mesma formulação, ou podem estar em formulações separadas e administrados a um paciente simultaneamente ou sequencialmente, em qualquer ordem.[0595] An antibody molecule described herein can be administered with one or more additional therapeutic agents, for example, a second drug, for the treatment of a viral infection, or a symptom of infection. The antibody molecule and the one or more supplemental or additional agents may be formulated together in the same formulation, or may be in separate formulations and administered to a patient simultaneously or sequentially, in any order.

[0596]Os regimes de dosagem são ajustados para proporcionar a resposta desejada, tal como uma resposta terapêutica ou um efeito terapêutico combinatório. Geralmente, qualquer combinação das doses (ou separadas ou co-formuladas) de uma molécula de anticorpo e um agente suplementar ou adicional pode ser utilizada de modo a proporcionar ao indivíduo ambos os agentes em quantidades biodisponíveis.[0596] Dosage regimens are adjusted to provide the desired response, such as a therapeutic response or a combinatorial therapeutic effect. Generally, any combination of doses (either separate or co-formulated) of an antibody molecule and a supplemental or additional agent can be used to provide the individual with both agents in bioavailable amounts.

[0597]A forma de unidade de dosagem ou "dose fixa", tal como aqui utilizada, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para os indivíduos a serem tratados; cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico requerido e, opcionalmente, em associação com um outro agente.[0597] The dosage unit form or "fixed dose", as used herein, refers to physically discrete units suitable as unitary dosages for the individuals to be treated; each unit contains a predetermined amount of active compound calculated to produce the desired therapeutic effect in association with the required pharmaceutical carrier and, optionally, in association with another agent.

[0598]Uma composição farmacêutica pode incluir uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente aqui descrito. Em formas de realização em que a molécula de anticorpo é administrada em combinação com um agente suplementar ou adicional, tais quantidades eficazes podem ser determinadas com base no efeito combinatório do primeiro e agente suplementar ou adicional administrados. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente também pode variar de acordo com fatores tais como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo e a capacidade do composto para induzir uma resposta desejada no indivíduo, tal como a melhoria de pelo menos um parâmetro de infecção, ou a melhoria de pelo menos um sintoma da infecção, tal como calafrios, febre, garganta inflamada, dor muscular, dor de cabeça, tosse, fraqueza, fadiga e mal-estar em geral. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais da composição são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos.[0598] A pharmaceutical composition may include a "therapeutically effective amount" of an agent described herein. In embodiments in which the antibody molecule is administered in combination with a supplementary or additional agent, such effective amounts can be determined based on the combinatorial effect of the first and supplementary or additional agent administered. A therapeutically effective amount of an agent may also vary according to factors such as the disease state, age, sex and weight of the individual and the ability of the compound to induce a desired response in the individual, such as improvement of at least one parameter. of infection, or the improvement of at least one symptom of the infection, such as chills, fever, sore throat, muscle pain, headache, cough, weakness, fatigue and general malaise. A therapeutically effective amount is also one in which any toxic or harmful effects of the composition are offset by the therapeutically beneficial effects.

[0599]Em uma forma de realização, a administração de um agente de ligação, por exemplo, molécula de anticorpo, fornecida como, por exemplo, uma preparação farmacêutica, é por uma das seguintes vias: oral, intravenosa, intramuscular, intra-arterial, subcutânea, intraventricular, transdérmica, interdermal, retal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como através de pós, líquidos, pomadas, cremes, pulverizadores, ou gotas), mucosa, nasal, bucal, entérica, sublingual; instilação endotraqueal, instilação brônquica e/ou inalatória; e/ou como uma pulverização oral, oulverização nasal e/ou aerossol.[0599] In one embodiment, administration of a binding agent, e.g., antibody molecule, provided as, e.g., a pharmaceutical preparation, is by one of the following routes: oral, intravenous, intramuscular, intra-arterial , subcutaneous, intraventricular, transdermal, interdermal, rectal, intravaginal, intraperitoneal, topical (as through powders, liquids, ointments, creams, sprays, or drops), mucosal, nasal, buccal, enteral, sublingual; endotracheal instillation, bronchial and/or inhalation instillation; and/or as an oral spray, nasal spray and/or aerosol.

Tratamentos Combinados e Agentes Suplementares ou Adicionais ExemplaresCombination Treatments and Exemplary Supplemental or Additional Agents

[0600]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, por exemplo, fornecidos na forma de composições farmacêuticas, podem ser administrados isoladamente ou em combinação com uma ou mais outras terapias, por exemplo, a administração de um agente terapêutico suplementar ou adicional.[0600] Binding agents, for example, antibody molecules, for example, provided in the form of pharmaceutical compositions, can be administered alone or in combination with one or more other therapies, for example, the administration of a supplementary therapeutic agent or additional.

[0601]Em formas de realização a combinação pode resultar em uma dose mais baixa da molécula de anticorpo ou de outra terapia sendo necessária, o que, em formas de realização, pode reduzir efeitos colaterais. Em formas de realização, a combinação pode resultar em um aumento da entrega ou eficácia de um ou ambos os agentes. Os agentes ou terapias podem ser administrados ao mesmo tempo (por exemplo, como uma única formulação que é administrada a um paciente ou em duas formulações separadas administradas simultaneamente) ou sequencialmente em qualquer ordem.[0601] In embodiments the combination may result in a lower dose of the antibody molecule or other therapy being required, which, in embodiments, may reduce side effects. In embodiments, the combination may result in increased delivery or efficacy of one or both agents. The agents or therapies may be administered at the same time (e.g., as a single formulation that is administered to a patient or in two separate formulations administered simultaneously) or sequentially in any order.

[0602] Tais agentes suplementares ou adicionais incluem vacinas, agentes antivirais e/ou anticorpos adicionais. Em formas de realização típicas, o agente suplementar ou adicional não é co-formulado com o agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, embora em outras seja.[0602] Such supplementary or additional agents include vaccines, antiviral agents and/or additional antibodies. In typical embodiments, the supplemental or additional agent is not co-formulated with the binding agent, e.g., antibody molecules, although in others it is.

[0603]Em formas de realização, o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional são administrados de tal forma que um ou mais dos seguintes é conseguido: níveis terapêuticos, ou efeitos terapêuticos, de um sobrepondo ao outro; níveis detectáveis de ambos estão presentes ao mesmo tempo; ou o efeito terapêutico é maior do que o que seria observado na ausência de qualquer agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, ou o agente suplementar ou adicional. Em formas de realização cada agente irá ser administrado em uma dose e em uma programação de tempo determinado para esse agente.[0603] In embodiments, the binding agent, for example, an antibody molecule, and the supplemental or additional agent are administered in such a way that one or more of the following is achieved: therapeutic levels, or therapeutic effects, of an overlapping to the other; detectable levels of both are present at the same time; or the therapeutic effect is greater than that which would be observed in the absence of any binding agent, for example, an antibody molecule, or the supplementary or additional agent. In embodiments each agent will be administered at a dose and time schedule determined for that agent.

[0604]O agente suplementar ou adicional pode ser, por exemplo, para o tratamento ou prevenção da influenza. Por exemplo, os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, por exemplo, anticorpos terapêuticos aqui proporcionados, podem ser administrados em combinação com uma vacina, por exemplo, uma vacina aqui descrita ou uma mistura (também conhecida como um coquetel) de peptídeos da influenza para estimular o sistema imunitário do paciente para prevenir a infecção por estirpes particulares de influenza A. Em outros exemplos, o agente suplementar ou adicional é um agente antiviral (por exemplo, um anti-NA ou agente anti-M2), um analgésico, um anti-inflamatório, um antibiótico, um agente esteroide, uma segunda molécula de anticorpo terapêutico (por exemplo, um anticorpo anti-HA), um adjuvante, uma protease ou glicosidase (por exemplo, sialidase), etc.[0604] The supplementary or additional agent may be, for example, for the treatment or prevention of influenza. For example, the binding agents, e.g., antibody molecules, e.g., therapeutic antibodies provided herein, may be administered in combination with a vaccine, e.g., a vaccine described herein or a mixture (also known as a cocktail) of influenza peptides to stimulate the patient's immune system to prevent infection with particular strains of influenza A. In other examples, the supplemental or additional agent is an antiviral agent (e.g., an anti-NA or anti-M2 agent), an analgesic, an anti-inflammatory, an antibiotic, a steroid agent, a second therapeutic antibody molecule (e.g., an anti-HA antibody), an adjuvant, a protease or glycosidase (e.g., sialidase), etc.

[0605]Agentes antivirais exemplificativos incluem, por exemplo, vacinas, inibidores da neuraminidase ou análogos de nucleosídeos. Agentes antivirais exemplificativos podem incluir, por exemplo, zidovudina, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, foscarnet, aciclovir, ribavirina, amantadina, rimantidina, saquinavir, indinavir, ritonavir, alfa-interferons e outros interferons, um inibidor da neuraminidase (por exemplo, zanamivir (Relenza®), o oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir), rimantadina. Moléculas de anticorpos suplementares exemplares incluem, por exemplo Ab 67-11 (Pedido Provisório dos EUA número 61/645.453, FI6 (Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813), FI28 (Pedido publicado dos EUA No 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012), ou CR6261 (ver, por exemplo, Ekiert et al., Science 324:246, 2009). Assim, Ab 044 pode ser utilizado em combinação de qualquer um desses anticorpos. Em outras formas de realização, dois ou mais agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos aqui descritas, podem ser administrados em combinação, por exemplo, Ab 044 pode ser administrado em combinação com Ab 032. No caso de combinações, dois agentes podem ser administrados como parte da mesma unidade de dosagem ou administrados separadamente. Outros agentes exemplares úteis para o tratamento de sintomas associados com infecção por influenza são acetaminofeno, ibuprofeno, aspirina e naproxen.[0605] Exemplary antiviral agents include, for example, vaccines, neuraminidase inhibitors or nucleoside analogues. Exemplary antiviral agents may include, for example, zidovudine, gangciclovir, vidarabine, idoxuridine, trifluridine, foscarnet, acyclovir, ribavirin, amantadine, rimantidine, saquinavir, indinavir, ritonavir, alpha-interferons and other interferons, a neuraminidase inhibitor (e.g. zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir), rimantadine. Exemplary supplemental antibody molecules include, for example, Ab 67-11 (US Provisional Application No. 61/645,453, FI6 (US Published Application No. 2010/0080813), FI28 (US Published Application No. 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343 , 2012), or CR6261 (see, for example, Ekiert et al., Science 324:246, 2009). Thus, Ab 044 can be used in combination with any of these antibodies. In other embodiments, two or more agents binding agents, for example, antibody molecules described herein, can be administered in combination, for example, Ab 044 can be administered in combination with Ab 032. In the case of combinations, two agents can be administered as part of the same dosage unit or administered separately.Other exemplary agents useful for treating symptoms associated with influenza infection are acetaminophen, ibuprofen, aspirin, and naproxen.

[0606]Em uma forma de realização, a molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional são fornecidos como uma co-formulação e a formulação é co- administrada ao indivíduo. É ainda possível, por exemplo, pelo menos 24 horas antes ou após a administração da co- formulação, administrar separadamente uma dose da formulação de anticorpo e, em seguida, uma dose de uma formulação contendo um agente suplementar ou adicional. Em uma outra implementação, a molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional são fornecidos como formulações separadas e o passo de administração inclui a administração, sequencialmente, da molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional. As administrações sequenciais podem ser fornecidas no mesmo dia (por exemplo, dentro de uma hora ums da outra, ou, pelo menos, 3,6, ou 12 horas de intervalo) ou em dias diferentes.[0606] In one embodiment, the antibody molecule and the supplemental or additional agent are provided as a co-formulation and the formulation is co-administered to the individual. It is further possible, for example, at least 24 hours before or after administration of the co-formulation, to separately administer a dose of the antibody formulation and then a dose of a formulation containing a supplementary or additional agent. In another implementation, the antibody molecule and the supplemental or additional agent are provided as separate formulations and the administration step includes sequentially administering the antibody molecule and the supplemental or additional agent. Sequential administrations may be provided on the same day (e.g., within an hour of each other, or at least 3,6, or 12 hours apart) or on different days.

[0607]Em formas de realização, a molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional são um administrado como uma pluralidade de doses separadas no tempo. A molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional são geralmente cada um administrado de acordo com um regime. O regime para um ou ambos pode ter uma periodicidade regular. O regime para a molécula de anticorpo pode ter uma periodicidade diferente do regime para o agente suplementar ou adicional, por exemplo, pode ser administrada com maior frequência do que o outro. Em uma implementação, um da molécula de anticorpo e do agente suplementar ou adicional é administrado uma vez por semana e o outro uma vez por mês. Em uma outra execução, um da molécula de anticorpo e do agente suplementar ou adicional é administrado continuamente, por exemplo, ao longo de um período de mais de 30 minutos, mas inferior a 1, 2, 4 ou 12 horas e o outro é administrado como um bolus. Em formas de realização, administrações sequenciais são administradas. O tempo entre a administração de um agente e um outro agente pode ser minutos, horas, dias ou semanas. O uso de uma molécula de anticorpo aqui descrita também pode ser utilizado para reduzir a dosagem de outra terapia, por exemplo, para reduzir os efeitos colaterais associados com um outro agente que está sendo administrado. Consequentemente, uma combinação pode incluir a administração de um agente suplementar ou adicional a uma dosagem de pelo menos 10, 20, 30, ou 50% menor do que seria utilizada na ausência da molécula de anticorpo. A molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional podem ser administrados por qualquer método apropriado, por exemplo, por via subcutânea, por via intramuscular, ou via intravenosa.[0607] In embodiments, the antibody molecule and the supplemental or additional agent are administered as a plurality of time-separated doses. The antibody molecule and the supplemental or additional agent are generally each administered according to a regimen. The regime for one or both may have a regular frequency. The regimen for the antibody molecule may have a different frequency than the regimen for the supplemental or additional agent, for example, it may be administered more frequently than the other. In one implementation, one of the antibody molecule and the supplemental or additional agent is administered once a week and the other once a month. In another embodiment, one of the antibody molecule and the supplemental or additional agent is administered continuously, for example, over a period of more than 30 minutes but less than 1, 2, 4 or 12 hours, and the other is administered as a bolus. In embodiments, sequential administrations are administered. The time between administration of one agent and another agent can be minutes, hours, days or weeks. The use of an antibody molecule described herein can also be used to reduce the dosage of another therapy, for example, to reduce side effects associated with another agent being administered. Accordingly, a combination may include the administration of a supplemental or additional agent at a dosage at least 10, 20, 30, or 50% less than would be used in the absence of the antibody molecule. The antibody molecule and the supplemental or additional agent may be administered by any appropriate method, for example, subcutaneously, intramuscularly, or intravenously.

[0608]Em algumas formas de realização, cada um da molécula de anticorpo e do agente suplementar ou adicional é administrado na mesma dose que é prescrita para cada monoterapia. Em outras formas de realização, a molécula de anticorpo é administrada a uma dosagem que é igual ou menor do que uma quantidade necessária para a eficácia, se administrada isoladamente. Da mesma forma, o agente suplementar ou adicional pode ser administrado a uma dosagem que é igual ou menor do que uma quantidade necessária para a eficácia, se administrado isoladamente.[0608] In some embodiments, each of the antibody molecule and the supplemental or additional agent is administered in the same dose that is prescribed for each monotherapy. In other embodiments, the antibody molecule is administered at a dosage that is equal to or less than an amount necessary for efficacy if administered alone. Likewise, the supplemental or additional agent may be administered at a dosage that is equal to or less than an amount necessary for efficacy if administered alone.

[0609]Em alguns casos, as formulações aqui descritas, por exemplo, formulações contendo uma molécula de anticorpo apresentada na divulgação, incluem um ou mais agentes suplementares ou adicionais, ou são administrados em combinação com uma formulação contendo um ou mais agentes suplementares ou adicionais.[0609] In some cases, the formulations described herein, for example, formulations containing an antibody molecule presented in the disclosure, include one or more supplementary or additional agents, or are administered in combination with a formulation containing one or more supplementary or additional agents .

[0610]Em uma forma de realização, um agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, fornecidas como, por exemplo, uma preparação farmacêutica, é administrado por inalação ou entrega de aerossol de uma pluralidade de partículas, por exemplo, partículas que compreendem um tamanho de partícula médio de 4, 5, 6,7, 8,9,10, 11, 12 ou 13 micra.[0610] In one embodiment, a binding agent, e.g., antibody molecules, provided as, e.g., a pharmaceutical preparation, is administered by inhalation or aerosol delivery of a plurality of particles, e.g., particles that comprise an average particle size of 4, 5, 6.7, 8,9,10, 11, 12 or 13 microns.

As composições farmacêuticasPharmaceutical compositions

[0611]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, existentes na memória descritiva podem ser formulados na forma de composições farmacêuticas, tais como para o tratamento ou prevenção da influenza.[0611] Binding agents, for example, antibody molecules, existing in the specification can be formulated in the form of pharmaceutical compositions, such as for the treatment or prevention of influenza.

[0612] Tipicamente, uma composição farmacêutica inclui um veículo farmaceuticamente aceitável. Tal como aqui utilizado, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de retardamento da absorção e isotônicos e semelhantes que sejam fisiologicamente compatíveis.[0612] Typically, a pharmaceutical composition includes a pharmaceutically acceptable carrier. As used herein, "pharmaceutically acceptable carrier" includes any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, absorption delaying and isotonic agents and the like that are physiologically compatible.

[0613]Um "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal que retém a atividade biológica desejada do composto parental e não confere quaisquer efeitos toxicológicos indesejáveis (ver, por exemplo, Berge, SM, et al., (1977) J. Pharm Sci 66:1-19). Exemplos de tais sais incluem sais de adição de ácido e sais de adição de base. Os sais de adição de ácido incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos, tais como clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico e semelhantes, bem como a partir de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos mono-alifáticos e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil-substituídos, ácidos hidroxi alcanóicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos e outros semelhantes. Os sais de adição de base incluem aqueles derivados de metais alcalino-terrosos, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio e semelhantes, bem como a partir de aminas orgânicas não tóxicas, tais como N,N'- dibenziletilenodiamina, N-metilglucamina, cloroprocaa, colina, dietanolamina, etilenodiamina, procaína e semelhantes.[0613] A "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt that retains the desired biological activity of the parent compound and does not confer any undesirable toxicological effects (see, for example, Berge, SM, et al., (1977) J. Pharm Sci 66:1-19). Examples of such salts include acid addition salts and base addition salts. Acid addition salts include those derived from non-toxic inorganic acids such as hydrochloric, nitric, phosphoric, sulfuric, hydrobromic, hydroiodic and the like, as well as from non-toxic organic acids such as mono-aliphatic and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxy alkanoic acids, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids and the like. Base addition salts include those derived from alkaline earth metals such as sodium, potassium, magnesium, calcium and the like, as well as from non-toxic organic amines such as N,N'-dibenzylethylenediamine, N-methylglucamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, ethylenediamine, procaine and the like.

[0614]As composições que compreendem moléculas de anticorpo podem ser formuladas de acordo com métodos conhecidos na arte. (Ed.). A formulação farmacêutica é uma técnica bem estabelecida e é ainda descrita em Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a ed, Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a Ed., editores Lippincott Williams & Wilkins (1999) (ISBN: 0683305727); e Kibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3a ed. (2000) (ISBN: 091733096X).[0614] Compositions comprising antibody molecules can be formulated according to methods known in the art. (Ed.). Pharmaceutical formulation is a well-established technique and is further described in Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed, Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed., editors Lippincott Williams & Wilkins (1999) (ISBN: 0683305727); and Kibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X).

[0615]As composições farmacêuticas podem estar em uma variedade de formas. Estes incluem, por exemplo, formas de dosagem líquidas, sólidas e semi-sólidas, tais como soluções liquidas (por exemplo, soluções injetáveis e administráveis por infusão), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas, pós, lipossomas e supositórios. A forma pode depender do modo pretendido de administração e aplicação terapêutica. Tipicamente, as composições para os agentes aqui descritos são na forma de soluções injetáveis ou para infusão.[0615] Pharmaceutical compositions can be in a variety of forms. These include, for example, liquid, solid and semisolid dosage forms, such as liquid solutions (e.g., injectable and infusionable solutions), dispersions or suspensions, tablets, pills, powders, liposomes and suppositories. The form may depend on the intended mode of administration and therapeutic application. Typically, compositions for the agents described herein are in the form of injectable or infusion solutions.

[0616] Tais composições podem ser administradas por um modo parenteral (por exemplo, intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal ou intramuscular). As frases "administração parentérica" e "administrado parentericamente", tal como aqui utilizado, significa modos de administração diferentes da administração entérica e tópica, usualmente por injeção e incluem, sem limitação, injeção intravenosa, intramuscular (IM), intra-arterial, intratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnóide, intraespinal, epidural e intraesternal por injeção ou por infusão.[0616] Such compositions can be administered parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or intramuscularly). The phrases "parenteral administration" and "parenterally administered" as used herein mean modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection, and include, without limitation, intravenous, intramuscular (IM), intra-arterial, intrathecal injection. , intracapsular, intra-orbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, epidural and intrasternal by injection or infusion.

[0617]As composições farmacêuticas podem ser fornecidas em uma forma injetável estéril (por exemplo, uma forma que é adequada para injeção subcutânea ou infusão intravenosa). Em algumas formas de realização, as composições farmacêuticas são fornecidas em uma forma de dosagem líquida que é adequada para injeção ou aplicação tópica. Em algumas formas de realização, as composições farmacêuticas são fornecidas na forma seca como, por exemplo, na forma de pós (por exemplo, preparações liofilizadas e/ou esterilizadas). A composição farmacêutica pode ser fornecida sob condições que melhoram a estabilidade, por exemplo, sob nitrogênio ou sob vácuo. O material seco pode ser reconstituído com um diluente aquoso (por exemplo, água, tampão, solução salina, etc.) antes da injeção.[0617] The pharmaceutical compositions can be provided in a sterile injectable form (for example, a form that is suitable for subcutaneous injection or intravenous infusion). In some embodiments, the pharmaceutical compositions are provided in a liquid dosage form that is suitable for injection or topical application. In some embodiments, the pharmaceutical compositions are provided in dry form, for example, in the form of powders (e.g., lyophilized and/or sterilized preparations). The pharmaceutical composition may be supplied under conditions that improve stability, for example, under nitrogen or under vacuum. The dried material may be reconstituted with an aqueous diluent (e.g., water, buffer, saline, etc.) prior to injection.

[0618]Em uma forma de realização, a composição farmacêutica contendo um anticorpo anti-HA é administrada por via intranasal. Em uma outra forma de realização, a composição farmacêutica contendo um anticorpo anti-HA é administrada por inalação, tal como por via oral ou por inalação nasal.[0618] In one embodiment, the pharmaceutical composition containing an anti-HA antibody is administered intranasally. In another embodiment, the pharmaceutical composition containing an anti-HA antibody is administered by inhalation, such as orally or by nasal inhalation.

[0619]Em formas de realização a composição farmacêutica é adequada para administração bucal, entrega por via oral ou nasal, por exemplo, como um líquido, pulverizador, aerossol ou, por exemplo, por aplicação tópica, por exemplo, por um líquido ou gotas, ou por inalação. Em formas de realização, uma preparação farmacêutica compreende uma pluralidade de partículas adequadas, por exemplo, para a entrega por aerossol ou inalada. Em formas de realização, o tamanho médio de partícula é de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13 micra. Em formas de realização, uma preparação farmacêutica é formulada como um pó seco, adequado, por exemplo, para a entrega de aerossol ou inalada. Em formas de realização, uma preparação farmacêutica é formulada como um pó molhado, por meio da inclusão de um agente molhante, por exemplo, água, soro fisiológico ou outro líquido de pH fisiológico. Em formas de realização, uma preparação farmacêutica é fornecida na forma de gotas adequada, por exemplo, para entrega à cavidade nasal ou bucal.[0619] In embodiments the pharmaceutical composition is suitable for buccal administration, oral or nasal delivery, for example, as a liquid, spray, aerosol or, for example, by topical application, for example, by a liquid or drops , or by inhalation. In embodiments, a pharmaceutical preparation comprises a plurality of particles suitable, for example, for aerosol or inhaled delivery. In embodiments, the average particle size is 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 or 13 microns. In embodiments, a pharmaceutical preparation is formulated as a dry powder, suitable, for example, for aerosol delivery or inhalation. In embodiments, a pharmaceutical preparation is formulated as a wet powder by including a wetting agent, for example, water, saline or other liquid of physiological pH. In embodiments, a pharmaceutical preparation is provided in droplet form suitable, for example, for delivery to the nasal or oral cavity.

[0620]Em formas de realização a composição farmacêutica está disposta em um dispositivo de administração, por exemplo, uma seringa, um frasco conta-gotas ou um inalador conta-gotas, ou um dispositivo de dose medida, por exemplo, um inalador.[0620] In embodiments the pharmaceutical composition is disposed in an administration device, for example, a syringe, a dropper bottle or a dropper inhaler, or a metered dose device, for example, an inhaler.

[0621]Em uma forma de realização, uma composição farmacêutica contém um vetor, tal como um vetor baseado em vírus (AAV) associado à adenovírus, que codifica uma cadeia pesada de uma molécula de anticorpo anti-HA e uma cadeia leve de uma molécula de anticorpo anti-HA apresentada na divulgação. A composição contendo o vetor pode ser administrada a um indivíduo, tal como um paciente, tal como por injeção, por exemplo, injeção IM. Os genes que codificam o anticorpo anti-HA sob controle de, por exemplo, os promotores de citomegalovírus (CMV), são expressos no corpo e a molécula de anticorpo anti-HA recombinante é introduzida na circulação. Ver, por exemplo, Balazs et al., Nature. 30: 481: 81-84,2011.[0621] In one embodiment, a pharmaceutical composition contains a vector, such as an adenovirus-associated virus (AAV)-based vector, that encodes a heavy chain of an anti-HA antibody molecule and a light chain of an anti-HA antibody molecule. of anti-HA antibody presented in the disclosure. The vector-containing composition may be administered to an individual, such as a patient, such as by injection, e.g., IM injection. Genes encoding anti-HA antibody under control of, for example, cytomegalovirus (CMV) promoters, are expressed in the body and the recombinant anti-HA antibody molecule is introduced into the circulation. See, for example, Balazs et al., Nature. 30: 481: 81-84,2011.

[0622]As composições farmacêuticas devem ser tipicamente estéreis e estáveis sob as condições de fabricação e armazenamento. Uma composição farmacêutica também pode ser testada para garantir que ela atenda aos padrões regulamentares e de indústria para a administração.[0622] Pharmaceutical compositions must typically be sterile and stable under manufacturing and storage conditions. A pharmaceutical composition may also be tested to ensure that it meets regulatory and industry standards for administration.

[0623]A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, dispersão, lipossomas ou outra estrutura ordenada adequada para concentração elevada de fármaco. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas através da incorporação de um agente aqui descrito na quantidade requerida em um solvente apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumerados acima, como requerido, seguido de esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas por incorporação de um agente aqui descrito em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes requeridos a partir daqueles enumerados acima. No caso de pós-estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos típicos de preparação são secagem a vácuo e liofilização que produz um pó de um agente aqui descrito mais qualquer ingrediente adicional desejado de uma sua solução previamente esterilizada por filtração. A boa fluidez de uma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e pela utilização de surfactantes. A absorção prolongada de composições injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que atrasa a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.[0623] The composition can be formulated as a solution, microemulsion, dispersion, liposomes or other ordered structure suitable for high drug concentration. Sterile injectable solutions may be prepared by incorporating an agent described herein in the required amount in an appropriate solvent with one or a combination of the ingredients enumerated above, as required, followed by sterilization by filtration. Generally, dispersions are prepared by incorporating an agent described herein into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the required other ingredients from those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, typical preparation methods are vacuum drying and lyophilization which produces a powder of an agent described herein plus any desired additional ingredient from a solution thereof previously sterilized by filtration. Good fluidity of a solution can be maintained, for example, by the use of a coating such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of dispersion and by the use of surfactants. Prolonged absorption of injectable compositions can be achieved by including in the composition an agent that delays absorption, for example, monostearate salts and gelatin.

[0624]Uma composição farmacêutica pode ser fornecida, preparada, embalada e/ou vendida em massa, como uma dose unitária única e/ou como uma pluralidade de doses unitárias. Tipicamente, uma preparação de grandes quantidades irá conter, pelo menos, 2,5, 10, 20,50, ou 100 doses unitárias. Uma dose unitária é, tipicamente, a quantidade introduzida no paciente em uma única administração. Em formas de realização, apenas uma porção de uma dose unitária é introduzida. Em formas de realização, um pequeno múltiplo, por exemplo, tanto como 1,5, 2, 3, 5, ou 10 vezes uma dose unitária é administrada. A quantidade do ingrediente ativo é geralmente igual a uma dose que seria administrada a um indivíduo e/ou uma fração conveniente de uma tal dose, tal como, por exemplo, metade ou um terço de uma tal dose.[0624] A pharmaceutical composition can be supplied, prepared, packaged and/or sold in bulk, as a single unit dose and/or as a plurality of unit doses. Typically, a bulk preparation will contain at least 2.5, 10, 20,50, or 100 unit doses. A unit dose is typically the amount introduced into the patient in a single administration. In embodiments, only a portion of a unit dose is introduced. In embodiments, a small multiple, for example, as much as 1.5, 2, 3, 5, or 10 times a unit dose is administered. The amount of the active ingredient is generally equal to a dose that would be administered to an individual and/or a convenient fraction of such a dose, such as, for example, one-half or one-third of such a dose.

Imonógenos e VacinasImmonogens and Vaccines

[0625]Os anticorpos do invento têm elucidado epítopos que são úteis para a indução de imunidade e em formas de realização, fornecem proteção contra, um ou mais, por exemplo, pelo menos duas, estirpes de influenza. Estes epítopos são aqui referidos como "imunógenos de amplo alcance". Em uma forma de realização, o imunógeno de amplo alcance induz imunidade e, em formas de realização, confere proteção contra pelo menos uma estirpe do Grupo 1 e uma segunda estirpe selecionada a partir de uma estirpe do Grupo 1, uma estirpe Grupo 2 e uma estirpe de influenza B. Um imunógeno de amplo alcance, como o termo é aqui utilizado, compreende um polipeptídeo tendo a sequência suficiente e a estrutura tridimensional de uma HA, por exemplo, uma HA de uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/111918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004, para permitir a ligação de um anticorpo da invenção, por exemplo, a um dos Ab 044, Ab 069, Ab 032 e Ab 031, para a imunógeno de amplo alcance. Em formas de realização, o imunógeno de amplo alcance compreende o epítopo de um anticorpo aqui descrito, por exemplo, um de Ab 044, Ab 069, Ab 032 e Ab 031. Em formas de realização, um imunógeno de amplo alcance não se liga a um ou mais de Ab 67-11, FI6, FI28, C179 ou CR6261. Em uma forma de realização, Ab 044 liga-se aa imunógeno de amplo alcance com, pelo menos, 50, 60, 70, 80, 90, 95, ou 99% de afinidade com o qual se liga uma HA nativa, por exemplo, uma de HA de uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934 ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. Em uma forma de realização, CR6261 se liga ao imunógeno de amplo alcance com menos de 60, 50, 40, 30, 20, ou 10% de afinidade com o qual se liga uma HA nativa, por exemplo, uma HA de uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934, ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. Em uma forma de realização, o imunógeno de amplo alcance difere do tipo selvagem por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, ou 40 resíduos. Em uma forma de realização, o imunógeno de amplo alcance se liga a um ou mais de Ab 67-11, FI6, FI28, C179, ou CR6261 com menos de 60, 50, 40, 30, 20, ou 10% da afinidade com a qual ele se liga a uma HA nativa, por exemplo, uma HA de uma estirpe do Grupo 1, por exemplo, uma estirpe H1N1, por exemplo, A/Carolina do Sul/1/1918, A/Porto Rico/08/1934, ou A/Califórnia/04/2009, ou uma estirpe H5N1, por exemplo, A/Indonésia/5/2005 ou A/Vietnam/1203/2004. Em uma forma de realização, o imunógeno de amplo alcance liga-se ao Ab 044 com uma afinidade que é pelo menos 10, 30, 50, 100, ou 200% maior do que a sua afinidade para CR626. Em uma forma de realização, o epítopo de um dos Ab 044, Ab 069, Ab 032 e Ab 031, por exemplo, Ab 044, é o epítopo imunodominante no imunógeno de amplo alcance.[0625] The antibodies of the invention have elucidated epitopes that are useful for inducing immunity and in embodiments, provide protection against one or more, for example, at least two, strains of influenza. These epitopes are referred to herein as "broad-range immunogens." In one embodiment, the broad-range immunogen induces immunity and, in embodiments, confers protection against at least one Group 1 strain and a second strain selected from a Group 1 strain, a Group 2 strain, and a influenza B strain. A broad-range immunogen, as the term is used herein, comprises a polypeptide having the sufficient sequence and three-dimensional structure of an HA, e.g., an HA from a Group 1 strain, e.g., a strain H1N1, for example, A/South Carolina/111918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/ 1203/2004, to allow the binding of an antibody of the invention, for example, to one of Ab 044, Ab 069, Ab 032 and Ab 031, for the broad-range immunogen. In embodiments, the broad-range immunogen comprises the epitope of an antibody described herein, e.g., one of Ab 044, Ab 069, Ab 032, and Ab 031. In embodiments, a broad-range immunogen does not bind to one or more of Ab 67-11, FI6, FI28, C179 or CR6261. In one embodiment, Ab 044 binds to a broad-range immunogen with at least 50, 60, 70, 80, 90, 95, or 99% affinity with which it binds a native HA, e.g. an HA from a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or a H5N1, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. In one embodiment, CR6261 binds to the broad-range immunogen with less than 60, 50, 40, 30, 20, or 10% affinity with which it binds a native HA, e.g., an HA from a strain of Group 1, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/South Carolina/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934, or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, e.g., A /Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. In one embodiment, the broad-range immunogen differs from the wild type by at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, or 40 residues. In one embodiment, the broad-range immunogen binds to one or more of Ab 67-11, FI6, FI28, C179, or CR6261 with less than 60, 50, 40, 30, 20, or 10% of the affinity with which it binds to a native HA, e.g., an HA from a Group 1 strain, e.g., an H1N1 strain, e.g., A/Carolina do Sul/1/1918, A/Puerto Rico/08/1934 , or A/California/04/2009, or an H5N1 strain, for example, A/Indonesia/5/2005 or A/Vietnam/1203/2004. In one embodiment, the broad-range immunogen binds to Ab 044 with an affinity that is at least 10, 30, 50, 100, or 200% greater than its affinity for CR626. In one embodiment, the epitope of one of Ab 044, Ab 069, Ab 032 and Ab 031, e.g., Ab 044, is the immunodominant epitope in the broad-range immunogen.

[0626] Tal como aqui utilizado, o termo "vacina de amplo alcance" refere-se a uma preparação que compreende um imunógeno de amplo alcance, ou um ácido nucleico que codifica um imunógeno de amplo alcance, que pode induzir a formação de anticorpos ou imunidade contra o imunógeno de amplo alcance ou um organismo, por exemplo, um vírus influenza. O imunógeno de amplo alcance pode incluir vírus morto ou enfraquecido, ou determinantes antigênicos a partir do organismo, por exemplo, um vírus influenza. Tipicamente, a vacina de amplo alcance irá incluir um ou mais componentes adicionais, por exemplo, veículos, adjuvantes e semelhantes.[0626] As used herein, the term "broad-range vaccine" refers to a preparation comprising a broad-range immunogen, or a nucleic acid encoding a broad-range immunogen, which can induce the formation of antibodies or immunity against the broad-range immunogen or organism, for example, an influenza virus. The broad-range immunogen may include dead or weakened virus, or antigenic determinants from the organism, for example, an influenza virus. Typically, the broad-range vaccine will include one or more additional components, e.g., vehicles, adjuvants, and the like.

[0627]Em uma forma de realização, uma vacina de amplo alcance compreende dois imunógenos de amplo alcance, ou ácido nucleico que codifica dois imunógenos de amplo alcance.[0627] In one embodiment, a broad-range vaccine comprises two broad-range immunogens, or nucleic acid encoding two broad-range immunogens.

[0628]Um imunógeno de amplo alcance aqui divulgado e vacinas, incluindo um imunógeno de amplo alcance ou um ácido nucleico que codifica para um imunógeno de amplo alcance (vacinas de amplo alcance), podem ser utilizados para induzir uma resposta imune, em um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano, contra um ou mais vírus Influenza aqui descritos. Em formas de realização, a vacina de amplo alcance confere proteção contra um ou mais dos vírus influenza aqui descritos, por exemplo, diminui a probabilidade de desenvolver uma infecção ou sintoma de uma infecção, ou modera a gravidade de uma infecção. As vacinas de amplo alcance da invenção podem compreender um polipeptídeo de HA que compreende um imunógeno de amplo alcance, um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de HA que compreende um imunógeno de amplo alcance, uma partícula, por exemplo, uma VLP, lipossomas, nanopartículas ou micropartículas, compreendendo um imunógeno de amplo alcance, ou um ácido nucleico que codifica para um imunógeno de amplo alcance. As vacinas podem compreender vírus vivos ou inactivados, por exemplo, de replicação deficiente. Influenza, bem como outros vírus, pode ser utilizado em vacinas de amplo alcance.[0628] A broad-range immunogen disclosed herein and vaccines, including a broad-range immunogen or a nucleic acid encoding a broad-range immunogen (broad-range vaccines), can be used to induce an immune response, in an individual , for example, a human subject, against one or more Influenza viruses described herein. In embodiments, the broad-range vaccine confers protection against one or more of the influenza viruses described herein, for example, decreases the likelihood of developing an infection or symptom of an infection, or moderates the severity of an infection. The broad-range vaccines of the invention may comprise an HA polypeptide comprising a broad-range immunogen, a nucleic acid encoding an HA polypeptide comprising a broad-range immunogen, a particle, e.g., a VLP, liposomes, nanoparticles or microparticles, comprising a broad-range immunogen, or a nucleic acid encoding a broad-range immunogen. Vaccines may comprise live or inactivated, for example, replication-deficient viruses. Influenza, as well as other viruses, can be used in broad-range vaccines.

[0629] Tal como aqui utilizado, o termo "imunógeno" ou "formulação antigênica" ou "composição antigénica" refere- se a uma preparação que, quando administrada a um vertebrado, por exemplo, um mamífero, por exemplo, um ser humano, pode induzir uma resposta imune.[0629] As used herein, the term "immunogen" or "antigenic formulation" or "antigenic composition" refers to a preparation that, when administered to a vertebrate, e.g., a mammal, e.g., a human, can induce an immune response.

Formulação da VacinaVaccine Formulation

[0630]Um imunógeno de amplo alcance, por exemplo, um polipeptídeo, ou VLP, lipossomas, nanopartículas, ou micropartículas compreendendo um imunógeno de amplo alcance, podem ser formulados em composições que compreendem ainda um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Um ácido nucleico que codifica para um imunógeno de amplo alcance pode ser formulado em uma composição que compreende, adicionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Um veículo ou excipiente é um agente farmacêutico que não induz ele próprio a produção de uma resposta imunitária prejudicial para o animal que recebe a composição e que podem ser administrados como um componente de vacina, sem causar toxicidade indevida. Tal como aqui utilizado, o termo "componente de vacina farmaceuticamente aceitável" inclui componentes, por exemplo, um veículo, que tenha sido aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou de um governo estadual ou listado na Farmacopeia dos Estados Unidos, Farmacopeia Europeia, ou outra Farmacopeia geralmente reconhecida para uso em mamíferos, por exemplo, em seres humanos. Exemplos não limitativos de veículos farmaceuticamente aceitáveis são solução salina, solução salina tamponada, dextrose, água, glicerol, tampão aquoso isotónico estéril, manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio e suas combinações. Em uma forma de realização, a formulação pode ser utilizada para a administração da vacina aos seres humanos. Em algumas formas de realização, a formulação é esterilizada, isenta de partículas em suspensão e/ou não-pirogénica. A vacina pode também incluir um ou mais dos seguintes: um agente molhante, um agente emulsionante e um agente tampão. A vacina pode estar na forma sólida, por exemplo, um pó liofilizado, solução líquida, suspensão, emulsão, comprimido, pílula, cápsula, formulação de liberação controlada, ou pó.[0630] A broad-range immunogen, for example, a polypeptide, or VLP, liposomes, nanoparticles, or microparticles comprising a broad-range immunogen, can be formulated into compositions that further comprise a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. A nucleic acid encoding a broad-range immunogen can be formulated into a composition that further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. A carrier or excipient is a pharmaceutical agent that does not itself induce the production of a harmful immune response to the animal receiving the composition and that can be administered as a vaccine component without causing undue toxicity. As used herein, the term "pharmaceutically acceptable vaccine component" includes components, e.g., a vehicle, that have been approved by a federal government or state government regulatory agency or listed in the United States Pharmacopeia, European Pharmacopeia, or other Pharmacopoeia generally recognized for use in mammals, e.g., humans. Non-limiting examples of pharmaceutically acceptable carriers are saline, buffered saline, dextrose, water, glycerol, sterile isotonic aqueous buffer, mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, cellulose, magnesium carbonate and combinations thereof. In one embodiment, the formulation can be used to administer the vaccine to humans. In some embodiments, the formulation is sterilized, free of suspended particles and/or non-pyrogenic. The vaccine may also include one or more of the following: a wetting agent, an emulsifying agent and a buffering agent. The vaccine may be in solid form, for example, a lyophilized powder, liquid solution, suspension, emulsion, tablet, pill, capsule, controlled-release formulation, or powder.

[0631]Em algumas formas de realização, as vacinas de amplo alcance podem incluir um ou mais adjuvantes. Os adjuvantes são agentes que aumentam respostas imunitárias e a sua utilização é conhecida na arte (ver, por exemplo, "Vaccine design: The Subunit and Adjuvant Approach", Pharmaceutical Biotechnology, Volume 6, Eds Powell e Newman, Plenum Press, Nova Iorque e Londres, 1995). Exemplos de adjuvantes não-limitativos são adjuvantes de Freund (CFA), adjuvante incompleto de Freund (IFA), esqualeno, esqualano, hidróxido de alumínio, sais de alumínio, sais de cálcio e frações de saponina derivadas a partir da casca da árvore Quillaja Saponaria Molina da América do Sul (por exemplo, QS21). Em algumas formas de realização, o adjuvante pode ser uma emulsão que compreende óleo e água. A fase oleosa pode compreender esqualeno, esqualano e/ou um surfactante. O surfactante pode ser um surfactante não iônico, por exemplo, um mono-éster ou ácido di-Ci2-C24-graxo de sorbitano ou manido.[0631] In some embodiments, broad-range vaccines may include one or more adjuvants. Adjuvants are agents that enhance immune responses and their use is known in the art (see, for example, "Vaccine design: The Subunit and Adjuvant Approach", Pharmaceutical Biotechnology, Volume 6, Eds Powell and Newman, Plenum Press, New York and London, 1995). Examples of non-limiting adjuvants are Freund's adjuvant (CFA), incomplete Freund's adjuvant (IFA), squalene, squalane, aluminum hydroxide, aluminum salts, calcium salts and saponin fractions derived from the bark of the Quillaja Saponaria tree. Molina from South America (e.g. QS21). In some embodiments, the adjuvant may be an emulsion comprising oil and water. The oily phase may comprise squalene, squalane and/or a surfactant. The surfactant may be a non-ionic surfactant, for example, a monoester or di-C12-C24-fatty acid of sorbitan or mannide.

[0632]As variantes sintéticas de moléculas reconhecidas por Teceptors do tipo Toll (TLRs) também podem ser utilizadas como adjuvantes. TLRs ajudam o corpo a distinguir entre as moléculas de próprias e não-próprias, reconhecendo padrões moleculares associados a patógenos. As moléculas reconhecidas pelos TLR incluem ARN de cadeia dupla, lipopolissacarídeos, ARN de cadeia simples com modificações específicas virais ou específicas bacterianas, e ADN com modificações específicas virais ou específicas bacterianas. Moléculas sintéticas que imitam as propriedades destas moléculas que ocorrem naturalmente, reconhecidas por TLR, ajudam a desencadear uma resposta imune e, por conseguinte, podem ser utilizadas como adjuvantes. Exemplos não limitativos de tais moléculas sintéticas incluem ácido poliriboinosínico:poliribocitidílico (poli(I:C)), ácidos nucleicos de cadeia dupla com pelo menos um nucleósido de ácido nucleico bloqueado, derivados atenuados do lipídio A (ALDs) (por exemplo, lipídio monofosforil A e lipídio 3- deacil monofosforil A) e imiquimod.[0632] Synthetic variants of molecules recognized by Toll-like receptors (TLRs) can also be used as adjuvants. TLRs help the body distinguish between self and non-self molecules by recognizing pathogen-associated molecular patterns. Molecules recognized by TLRs include double-stranded RNA, lipopolysaccharides, single-stranded RNA with viral-specific or bacterial-specific modifications, and DNA with viral-specific or bacterial-specific modifications. Synthetic molecules that mimic the properties of these naturally occurring molecules recognized by TLR help trigger an immune response and can therefore be used as adjuvants. Non-limiting examples of such synthetic molecules include polyriboinosinic:polyribocytidylic acid (poly(I:C)), double-stranded nucleic acids with at least one locked nucleic acid nucleoside, attenuated lipid A derivatives (ALDs) (e.g., monophosphoryl lipid A and monophosphoryl 3-deacyl lipid A) and imiquimod.

[0633]As vacinas podem ser formuladas com ou administradas em combinação com a administração de estimuladores imunitários. Estimuladores imunitários são moléculas que aumentam a resposta do sistema imunitário. Exemplos não limitativos de estimuladores imunitários são citocinas, linfocinas e quimiocinas, que têm imunoestimulante, imunopotenciador e atividades pró- inflamatórias, tais como a interleucinas (por exemplo, IL- 1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-12, IL-13), fatores de crescimento (por exemplo, fator de estimulação de colônia (CSF) de granulócitos e macrófagos (GM)); e outras moléculas imunoestimuladoras, tais como o fator inflamatório de macrófagos, ligante FIt3, B7.1; B7.2, etc. Estimuladores imunitários podem ser administrados na mesma formulação que as VLP ou podem ser administrados separadamente. Estimuladores imunitários podem ser administrados na forma de proteínas ou de ácidos nucleicos a partir dos quais a proteína imunoestimulante pode ser expressa.[0633] Vaccines can be formulated with or administered in combination with the administration of immune stimulators. Immune stimulators are molecules that increase the response of the immune system. Non-limiting examples of immune stimulators are cytokines, lymphokines, and chemokines, which have immunostimulating, immunopotentiating, and pro-inflammatory activities, such as interleukins (e.g., IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL- 12, IL-13), growth factors (e.g., granulocyte-macrophage (GM) colony-stimulating factor (CSF); and other immunostimulatory molecules, such as macrophage inflammatory factor, FIt3 ligand, B7.1; B7.2, etc. Immune stimulants can be administered in the same formulation as VLPs or can be administered separately. Immune stimulators can be administered in the form of proteins or nucleic acids from which the immunostimulatory protein can be expressed.

AdministraçãoAdministration

[0634] Geralmente, as vacinas de amplo alcance serão administradas em uma quantidade eficaz ou quantidade suficiente para estimular uma resposta imune contra uma ou mais estirpes de influenza. A dosagem de vacina pode ser ajustada dentro deste intervalo com base em fatores clínicos, por exemplo, a idade, condição física, peso corporal, sexo, dieta e tempo de administração.[0634] Generally, broad-range vaccines will be administered in an effective amount or amount sufficient to stimulate an immune response against one or more strains of influenza. Vaccine dosage can be adjusted within this range based on clinical factors, for example, age, physical condition, body weight, sex, diet and administration time.

[0635]Os métodos de administração de um imunógeno de amplo alcance ou uma vacina de amplo alcance incluem a administração enteral e parenteral. Eles também podem ser fornecidos por administração epidural ou mucosa (por exemplo, vias intranasal e oral ou pulmonar, ou por supositórios). Eles podem ser fornecidos por inalação ou contato direto com as cavidades bucais ou nasais. Em formas de realização, um imunógeno de amplo alcance e uma vacina de amplo alcance são administrados por via intramuscular, por via intravenosa, por via subcutânea, por via transdérmica, ou por via intradérmica. As composições podem ser administradas por qualquer via conveniente, por exemplo por infusão ou injeção de bolus, absorção através de revestimentos epiteliais ou mucocutâneos (por exemplo, mucosa bucal, do cólon, da conjuntiva, nasofaringe, orofaringe, vagina, uretra, bexiga urinária e mucosa intestinal, etc.) e por quaisquer meios convenientes, por exemplo, através de injeção utilizando uma agulha e seringa ou um dispositivo de injeção sem agulha, em gotas, por meio de um aerossol que compreende partículas grandes, ou por pulverizador para o trato respiratório superior. Um imunógeno de amplo alcance ou vacina pode ser administrado em conjunto com outros agentes biologicamente ativos, por exemplo, agentes imunogênicos, por exemplo, antivirais e/ou antibióticos.[0635] Methods of administering a broad-range immunogen or a broad-range vaccine include enteral and parenteral administration. They may also be provided by epidural or mucosal administration (e.g., intranasal and oral or pulmonary routes, or by suppositories). They can be delivered by inhalation or direct contact with the oral or nasal cavities. In embodiments, a broad-range immunogen and a broad-range vaccine are administered intramuscularly, intravenously, subcutaneously, transdermally, or intradermally. The compositions may be administered by any convenient route, for example by infusion or bolus injection, absorption through epithelial or mucocutaneous linings (e.g., buccal mucosa, colon, conjunctiva, nasopharynx, oropharynx, vagina, urethra, urinary bladder, and intestinal mucosa, etc.) and by any convenient means, for example, by injection using a needle and syringe or a needleless injection device, in drops, by means of an aerosol comprising large particles, or by spray into the tract upper respiratory. A broad-range immunogen or vaccine may be administered in conjunction with other biologically active agents, e.g., immunogenic agents, e.g., antivirals and/or antibiotics.

[0636]Em algumas formas de realização, um imunógeno de amplo alcance e uma vacina de amplo alcance são administrados de modo a atingir tecidos das mucosas, a fim de provocar uma resposta imunitária no local de imunização. Por exemplo, os tecidos das mucosas podem ser direcionados para a imunização por meio da administração oral de composições que contêm adjuvantes com propriedades alvo particulares da mucosa. Exemplos de tecidos da mucosa que podem ser objetivados incluem, mas não estão limitados a, tecido linfóide associado ao intestino (GALT), tecido linfóide da nasofaringe (NALT) e tecido linfóide associado aos brônquios (BALT).[0636] In some embodiments, a broad-range immunogen and a broad-range vaccine are administered to target mucosal tissues in order to elicit an immune response at the site of immunization. For example, mucosal tissues can be targeted for immunization through oral administration of compositions containing adjuvants with particular mucosal target properties. Examples of mucosal tissues that can be targeted include, but are not limited to, gut-associated lymphoid tissue (GALT), nasopharyngeal lymphoid tissue (NALT), and bronchial-associated lymphoid tissue (BALT).

[0637]Um imunógeno de amplo alcance ou vacina de amplo alcance podem ser administrados em um esquema de dosagem, por exemplo, por parte das administrações sequenciais de indivíduo. Em algumas formas de realização, uma primeira dose da composição é seguida, após um período de tempo de uma segunda dose. O período de tempo entre a primeira e segunda doses podemestar em qualquer lugar a partir de duas semanas a um ano, por exemplo, cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5 a cerca de 6 meses. Em algumas formas de realização, a segunda dose da composição é seguida por uma terceira dose administrada em um período de tempo após a primeira dose. O período de tempo entre a primeira e terceira doses pode estar em qualquer lugar a partir de cerca de três meses a cerca de dois anos ou mais, por exemplo, cerca de 4, cerca de 5, ou cerca de 6 meses ou cerca de 7 meses a cerca de um ano. Em algumas formas de realização, a segunda, terceira ou mais dose é administrada quando os níveis de imunoglobulinas específicos no soro, urina e/ou secreções da mucosa do indivíduo cai abaixo de um limiar. Em uma forma de realização, o período de tempo entre a primeira e segunda dose é de cerca de um mês e o período de tempo entre a primeira e terceira doses é de cerca de seis meses. Em uma outra forma de realização, o período de tempo entre a primeira e segunda doses é de cerca de seis meses. Em algumas formas de realização, por exemplo, quando o indivíduo é um recém-nascido ou infante, as doses podem ser administradas durante toda a infância. Outros fatores que colocam o indivíduo em maior risco de infecção, por exemplo, pessoas que são profissionais de saúde, trabalhadores de creches, familiares de crianças pequenas, idosos e/ou indivíduos com função cardiopulmonar comprometida, podem influenciar a posologia, por exemplo, pode exigir que o indivíduo tenha mais doses ou doses mais frequentes. Quando são necessárias doses múltiplas, as doses podem ser administradas pelas mesmas ou diferentes vias.[0637] A broad-range immunogen or broad-range vaccine can be administered in a dosage schedule, for example, by individual sequential administrations. In some embodiments, a first dose of the composition is followed, after a period of time, by a second dose. The period of time between the first and second doses can be anywhere from two weeks to a year, for example, about 1, about 2, about 3, about 4, about 5 to about 6 months. . In some embodiments, the second dose of the composition is followed by a third dose administered at a period of time after the first dose. The period of time between the first and third doses can be anywhere from about three months to about two years or more, for example, about 4, about 5, or about 6 months, or about 7 months to about a year. In some embodiments, the second, third or more dose is administered when levels of specific immunoglobulins in the individual's serum, urine and/or mucosal secretions fall below a threshold. In one embodiment, the period of time between the first and second doses is about one month and the period of time between the first and third doses is about six months. In another embodiment, the period of time between the first and second doses is about six months. In some embodiments, for example, when the subject is a newborn or infant, doses may be administered throughout childhood. Other factors that place the individual at greater risk of infection, for example, people who are healthcare professionals, daycare workers, family members of young children, the elderly and/or individuals with compromised cardiopulmonary function, may influence the dosage, e.g. require the individual to have more doses or more frequent doses. When multiple doses are required, the doses may be administered by the same or different routes.

[0638]Um perito na arte pode facilmente determinar a dosagem do imunógeno de amplo alcance ou uma vacina de amplo alcance. Por exemplo, a dosagem pode ser determinada através da identificação de doses que provocam uma resposta imunitária protetora ou terapêutica, por exemplo, através da medição do nível de imunoglobulinas específica no soro ou medindo a razão inibidora de anticorpos em amostras de soro, urina, ou secreções mucosas a partir de um indivíduo. As dosagens podem ser determinadas a partir de estudos em animais, por exemplo, em cobaias, hamsters, ferrets, chinchilas, camundongos ou ratos. Um animal não necessita de ser um hospedeiro natural para um agente infeccioso particular para servir como um indivíduo em estudo da doença causada por infecção pelo referido agente. As dosagens também podem ser determinadas a partir de estudos clínicos em humanos, que são de rotina na arte. O perito na arte irá entender que a via de administração irá afetar a dosagem. As dosagens também podem ser calculadas a partir de curvas de dose-resposta obtidas a partir de estudos in vitro ou em estudos com modelos animais.[0638] One skilled in the art can easily determine the dosage of the broad-range immunogen or a broad-range vaccine. For example, dosage may be determined by identifying doses that elicit a protective or therapeutic immune response, e.g., by measuring the level of specific immunoglobulins in serum or by measuring the inhibitory ratio of antibodies in samples of serum, urine, or mucous secretions from an individual. Dosages can be determined from animal studies, for example in guinea pigs, hamsters, ferrets, chinchillas, mice or rats. An animal does not need to be a natural host for a particular infectious agent to serve as a study subject for disease caused by infection by said agent. Dosages can also be determined from human clinical studies, which are routine in the art. One skilled in the art will understand that the route of administration will affect the dosage. Dosages can also be calculated from dose-response curves obtained from in vitro studies or animal model studies.

[0639]Um imunógeno de amplo alcance ou vacina pode ser administrado a um indivíduo que não tem uma doença causada por infecção pelo vírus influenza ou que não tenha sido e não está atualmente infectado com uma infecção por vírus influenza, por exemplo, um imunógeno ou vacina de amplo alcance pode ser administrado a um indivíduo em risco de infecção. Um imunógeno ou vacina de amplo alcance pode ser administrado a um indivíduo infectado com uma primeira estirpe de influenza, por exemplo, para proteger contra a infecção com uma segunda estirpe. Em formas de realização, o imunógeno ou vacina de amplo alcance é protetor contra a primeira estirpe. Em formas de realização, o imunógeno ou vacina de amplo alcance não é protetor contra a primeira estirpe.[0639] A broad-range immunogen or vaccine can be administered to an individual who does not have a disease caused by influenza virus infection or who has not been and is not currently infected with an influenza virus infection, e.g., an immunogen or Broad-range vaccine can be administered to an individual at risk of infection. A broad-range immunogen or vaccine can be administered to an individual infected with a first strain of influenza, for example, to protect against infection with a second strain. In embodiments, the broad-range immunogen or vaccine is protective against the first strain. In embodiments, the broad-range immunogen or vaccine is not protective against the first strain.

[0640]Em formas de realização o indivíduo é um adulto, um adulto acima de 50 anos de idade, uma pessoa com menos de 18 anos de idade, uma pessoa com menos de 2 anos de idade, ou uma pessoa com menos de 6 meses de idade.[0640] In embodiments the individual is an adult, an adult over 50 years of age, a person under 18 years of age, a person under 2 years of age, or a person under 6 months of age. deity.

[0641]Em uma forma de realização, o indivíduo está em risco para uma doença do pulmão, por exemplo, a fibrose cística, enfisema, asma, ou infecções bacterianas, ou doença cardiovascular. Em uma forma de realização, o indivíduo é imuno-comprometido. Em uma forma de realização, o indivíduo é um prestador de cuidados de saúde, por exemplo, um médico, enfermeiro ou socorrista. Em uma forma de realização, o indivíduo trabalha em ou visita regularmente, ou vive em um hospital, lar de idosos, instalações de cuidado assistido, clínica ou consultório médico.[0641] In one embodiment, the individual is at risk for a lung disease, for example, cystic fibrosis, emphysema, asthma, or bacterial infections, or cardiovascular disease. In one embodiment, the individual is immunocompromised. In one embodiment, the individual is a health care provider, e.g., a doctor, nurse, or first responder. In one embodiment, the individual works at or regularly visits, or lives in, a hospital, nursing home, assisted care facility, clinic, or doctor's office.

[0642] Imunógenos de amplo alcance e vacinas de amplo alcance podem ser administrados isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes ou outra terapia, por exemplo, a administração de um segundo agente adicional ou, por exemplo, para prevenir ou retardar ou minimizar um ou mais sintomas ou efeitos de uma infecção de influenza.[0642] Broad-range immunogens and broad-range vaccines may be administered alone or in combination with one or more agents or other therapy, for example, the administration of a second additional agent or, for example, to prevent or delay or minimize a or more symptoms or effects of an influenza infection.

[0643]Em formas de realização a combinação pode resultar em uma dose mais baixa da vacina de amplo alcance ou da outra terapia sendo necessária, o que, em formas de realização, pode reduzir efeitos colaterais. Em formas de realização, a combinação pode resultar em um aumento da eficácia de entrega ou de um ou ambos os agentes. Os agentes ou terapias podem ser administrados ao mesmo tempo (por exemplo, como uma única formulação que é administrada a um paciente ou em duas formulações separadas administradas simultaneamente) ou sequencialmente em qualquer ordem.[0643] In embodiments the combination may result in a lower dose of the broad-range vaccine or other therapy being required, which, in embodiments, may reduce side effects. In embodiments, the combination may result in an increase in the delivery efficacy of either or both agents. The agents or therapies may be administered at the same time (e.g., as a single formulation that is administered to a patient or in two separate formulations administered simultaneously) or sequentially in any order.

[0644] Tais agentes suplementares ou adicionais incluem outras vacinas, agentes antivirais e/ou anticorpos. Em formas de realização típicas, o agente suplementar ou adicional não é co-formulado com o agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, embora em outros seja.[0644] Such supplementary or additional agents include other vaccines, antiviral agents and/or antibodies. In typical embodiments, the supplemental or additional agent is not co-formulated with the binding agent, e.g., antibody molecules, although in others it is.

[0645]Em formas de realização, a vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional são administrados de tal forma que um ou mais dos seguintes é conseguido: níveis terapêuticos ou efeitos terapêuticos, de um sobrepondo o outro; níveis detectáveis de ambos estão presentes ao mesmo tempo; ou efeito terapêutico é maior do que o que seria observado na ausência de qualquer vacina de amplo alcance, ou o agente suplementar ou adicional. Em formas de realização cada agente irá ser administrado em uma dose e em uma programação de tempo determinada para esse agente.[0645] In embodiments, the broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are administered in such a way that one or more of the following is achieved: therapeutic levels or therapeutic effects, of one overriding the other; detectable levels of both are present at the same time; or therapeutic effect is greater than that which would be observed in the absence of any broad-range vaccine, or supplemental or additional agent. In embodiments each agent will be administered at a dose and time schedule determined for that agent.

[0646]O agente suplementar ou adicional pode ser, por exemplo, para o tratamento ou prevenção da influenza. Por exemplo, uma vacina de amplo alcance aqui proporcionada pode ser administrada em combinação com outras vacinas, por exemplo, uma mistura (também conhecido como um coquetel) de peptídeos da influenza para estimular o sistema imunitário do paciente para prevenir a infecção por estirpes particulares de influenza A. Em outros exemplos, o agente suplementar ou adicional é um agente antiviral (por exemplo, um anti-nA ou agente anti-M2), um analgésico, um anti-inflamatório, um antibiótico, um agente esteroide, uma segunda molécula de anticorpo terapêutico (por exemplo, um anticorpo anti-HA), um adjuvante, uma protease ou glicosidase (por exemplo, sialidase), etc.[0646] The supplementary or additional agent may be, for example, for the treatment or prevention of influenza. For example, a broad-range vaccine provided herein may be administered in combination with other vaccines, e.g., a mixture (also known as a cocktail) of influenza peptides to stimulate the patient's immune system to prevent infection with particular strains of influenza. influenza A. In other examples, the supplemental or additional agent is an antiviral agent (e.g., an anti-nA or anti-M2 agent), an analgesic, an anti-inflammatory, an antibiotic, a steroid agent, a second molecule of therapeutic antibody (e.g., an anti-HA antibody), an adjuvant, a protease or glycosidase (e.g., sialidase), etc.

[0647]Agentes antivirais exemplificativos incluem, por exemplo, vacinas, inibidores de neuraminidase ou análogos de nucleósidos. Agentes antivirais exemplares podem incluir, por exemplo, zidovudina, gangcyclovir, vidarabine, idoxuridina, trifluridina, foscarneto, aciclovir, ribavirina, amantadina, remantidine, saquinavir, indinavir, ritonavir, alfa-interferons e outros interferons, um inibidor de neuraminidase (por exemplo, zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir), rimantadina. Moléculas de anticorpo exemplificativas incluem, por exemplo, Ab 67-11 (Pedido Provisório número 61/645.453, FI6 (Pedido Publicado dos EUA No 2010/0080813), FI28 (Pedido Publicado dos EUA N 2010/0080813), C179 (Okuno et al., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012) ou CR6261 (ver, por exemplo, Ekiert et al., Science 324:246, 2009). Outros anticorpos exemplares incluem aqueles aqui descritos, por exemplo, 044 Ab, Ab 069, 032 Ab ou Ab 031. No caso de combinações, dois agentes podem ser administrados como parte da mesma unidade de dosagem ou administrados separadamente. Outros agentes exemplares úteis para tratar os sintomas associados com a infecção por influenza são acetaminofeno, ibuprofeno, aspirina e naproxeno.[0647] Exemplary antiviral agents include, for example, vaccines, neuraminidase inhibitors or nucleoside analogues. Exemplary antiviral agents may include, for example, zidovudine, gangcyclovir, vidarabine, idoxuridine, trifluridine, foscarnet, acyclovir, ribavirin, amantadine, remantidine, saquinavir, indinavir, ritonavir, alpha-interferons and other interferons, a neuraminidase inhibitor (e.g., zanamivir (Relenza®), oseltamivir (Tamiflu®), laninamivir, peramivir), rimantadine. Exemplary antibody molecules include, for example, Ab 67-11 (Provisional Application No. 61/645,453, FI6 (U.S. Published Application No. 2010/0080813), FI28 (U.S. Published Application No. 2010/0080813), C179 (Okuno et al. ., J. Virol. 67:2552-8, 1993), F10 (Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16:265, 2009), CR9114 (Dreyfus et al., Science 337:1343, 2012 ) or CR6261 (see, e.g., Ekiert et al., Science 324:246, 2009). Other exemplary antibodies include those described herein, e.g., 044 Ab, Ab 069, 032 Ab, or Ab 031. In the case of combinations, two agents can be administered as part of the same dosage unit or administered separately.Other exemplary agents useful for treating symptoms associated with influenza infection are acetaminophen, ibuprofen, aspirin, and naproxen.

[0648]Em uma forma de realização, a vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional são fornecidos como formulações separadas, e o passo de administração inclui administrar sequencialmente a vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional. As administrações sequenciais podem ser fornecidas no mesmo dia (por exemplo, dentro de uma hora um do outro, ou, pelo menos, 3, 6, ou 12 horas de intervalo) ou em dias diferentes.[0648] In one embodiment, the broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are provided as separate formulations, and the administration step includes sequentially administering the broad-range vaccine and the supplemental or additional agent. Sequential administrations may be provided on the same day (e.g., within an hour of each other, or at least 3, 6, or 12 hours apart) or on different days.

[0649]Em formas de realização, a vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional são cada um deles administrados como uma pluralidade de doses separadas no tempo. A vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional são geralmente, cada um, administrados de acordo com um regime. O regime para um ou ambos pode ter uma periodicidade regular. O regime para as vacinas de amplo alcance pode ter uma periodicidade diferente do regime para o agente suplementar ou adicional, por exemplo, pode ser administrada com maior frequência do que o outro. Em uma implementação, uma vacina e amplo alcance e o agente suplementar ou adicional são administrados uma vez por semana e o outro uma vez por mês. Em uma outra implementação, uma vacina de amplo alcance e o o agente suplementar ou adicional são administrados continuamente, por exemplo, ao longo de um período de mais de 30 minutos, mas inferior a 1, 2, 4 ou 12 horas, e o outro é administrado como um bolus. Em formas de realização, administrações sequenciais são administradas. O tempo entre a administração do agente e um outro agente pode ser minutos, horas, dias ou semanas. A utilização de uma vacina de amplo alcance de aqui descrita também pode ser utilizada para reduzir a dosagem de outra terapia, por exemplo, para reduzir os efeitos colaterais associados com um outro agente que está sendo administrado. Consequentemente, uma combinação pode incluir a administração de um agente suplementar ou adicional a uma dosagem de pelo menos 10, 20, 30, ou 50% menor do que seria utilizada na ausência da vacina de amplo alcance. A vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional podem ser administrados por qualquer método apropriado, por exemplo, por via subcutânea, intramuscular ou intravenosa.[0649] In embodiments, the broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are each administered as a plurality of time-separated doses. The broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are generally each administered according to a regimen. The regime for one or both may have a regular frequency. The regimen for the broad-range vaccines may have a different frequency than the regimen for the supplemental or additional agent, for example, it may be administered more frequently than the other. In one implementation, one broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are administered once a week and the other once a month. In another implementation, one broad-range vaccine and the supplemental or additional agent are administered continuously, for example, over a period of more than 30 minutes but less than 1, 2, 4, or 12 hours, and the other is administered as a bolus. In embodiments, sequential administrations are administered. The time between administration of the agent and another agent can be minutes, hours, days, or weeks. The use of a broad-range vaccine described herein can also be used to reduce the dosage of another therapy, for example, to reduce side effects associated with another agent being administered. Accordingly, a combination may include administration of a supplemental or additional agent at a dosage at least 10, 20, 30, or 50% less than would be used in the absence of the broad-range vaccine. The broad-range vaccine and the supplemental or additional agent may be administered by any appropriate method, for example, subcutaneously, intramuscularly or intravenously.

[0650]Em algumas formas de realização, cada um da vacina de amplo alcance e o agente suplementar ou adicional é administrado na mesma dose que é prescrita para cada monoterapia. Em outras formas de realização, a vacina de amplo alcance é administrada em uma dosagem que é igual ou menor do que uma quantidade necessária para a eficácia caso fosse administrada sozinha. Da mesma forma, o agente suplementar ou adicional pode ser administrado a uma dosagem que é igual ou menor do que uma quantidade necessária para a eficácia, se administrado isoladamente.[0650] In some embodiments, each of the broad-range vaccine and the supplemental or additional agent is administered in the same dose that is prescribed for each monotherapy. In other embodiments, the broad-range vaccine is administered in a dosage that is equal to or less than an amount necessary for efficacy if it were administered alone. Likewise, the supplemental or additional agent may be administered at a dosage that is equal to or less than an amount necessary for efficacy if administered alone.

[0651]Em alguns casos, as formulações aqui descritas, por exemplo, formulações contendo uma vacina de amplo alcance apresentadas na divulgação, incluem um ou mais suplementares ou agentes suplementares ou adicionais, como por exemplo, um agente suplementar ou adicional, ou são administrados em combinação com uma formulação contendo um ou mais agentes suplementares ou adicionais.[0651] In some cases, the formulations described herein, for example, formulations containing a broad-range vaccine presented in the disclosure, include one or more supplementary or additional agents, such as a supplementary or additional agent, or are administered in combination with a formulation containing one or more supplementary or additional agents.

[0652]Em uma forma de realização, a administração de uma vacina de amplo alcance é por uma das seguintes vias: oral, intravenosa, intramuscular, intra-arterial, subcutânea, intraventricular, transdérmica, interdermal, retal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como por pós, líquidos, pomadas, cremes, pulverizadores ou gotas), mucosa, nasal, bucal, entérica, sublingual; instilação endotraqueal, instilação brônquica e/ou inalatória; e/ou como uma pulverização oral, pulverizador nasal, e/ou aerossol.[0652] In one embodiment, administration of a broad-range vaccine is by one of the following routes: oral, intravenous, intramuscular, intra-arterial, subcutaneous, intraventricular, transdermal, interdermal, rectal, intravaginal, intraperitoneal, topical ( as by powders, liquids, ointments, creams, sprays or drops), mucosal, nasal, buccal, enteric, sublingual; endotracheal instillation, bronchial and/or inhalation instillation; and/or as an oral spray, nasal spray, and/or aerosol.

[0653]Em uma forma de realização, uma vacina de amplo alcance é administrada por entrega de inalação ou aerossol de uma pluralidade de partículas, por exemplo, partículas que compreende uma média de tamanho de partícula de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13 micra.[0653] In one embodiment, a broad-range vaccine is administered by inhalation or aerosol delivery of a plurality of particles, e.g., particles comprising an average particle size of 4, 5, 6, 7, 8 , 9, 10, 11, 12 or 13 microns.

[0654]As vacinas da invenção podem ser combinadas com os agentes secundários e tratamentos discutidos no contexto do tratamento com os anticorpos da invenção noutras partes deste documento.[0654] The vaccines of the invention can be combined with the secondary agents and treatments discussed in the context of treatment with the antibodies of the invention elsewhere in this document.

Partículas do tipo VirusVirus-like particles

[0655]Um imunógeno de amplo alcance pode ser fornecido em uma partícula tipo vírus (VLP). Um VLP é uma estrutura que compartilha algumas componentes e similaridade estrutural com um vírus, mas geralmente não é infecciosa. VLP carecem tipicamente de um genoma viral e, por conseguinte não podem se reproduzir. As VLP podem ser produzidas através de clonagem e co-expressão de uma ou mais proteínas virais, incluindo, tipicamente, uma proteína antigênica de interesse, em uma célula, e recuperação das células VLP que incluem a proteína antigênica de interesse. Isto é descrito em mais detalhe abaixo.[0655] A broad-range immunogen can be delivered in a virus-like particle (VLP). A VLP is a structure that shares some components and structural similarity with a virus, but is generally non-infectious. VLP typically lack a viral genome and therefore cannot reproduce. VLPs can be produced by cloning and co-expressing one or more viral proteins, typically including an antigenic protein of interest, in a cell, and recovering VLP cells that include the antigenic protein of interest. This is described in more detail below.

ClonagemCloning

[0656]Os métodos de clonagem molecular são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Berger e Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vol. 152 Academic Press, Inc., San Diego, Calif., e Sambrook et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual (3a Ed.), Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 2000). Os métodos de clonagem molecular incluem técnicas para a engenharia de polipetídeo e mutagênese, que permitem a supressão, inserção, substituição, e outras alterações de aminoácidos no interior de um polipeptídeo. Os métodos de clonagem molecular também incluem as técnicas de isolamento e manipulação de ácidos nucleicos que codificam polipepetídeos ou este aumento, diminuição, regular ou de outro modo alteração da expressão de polipeptídeos. Os métodos de clonagem molecular ainda compreender vetores que facilitam a manipulação genética e expressão de polipeptídeos e ácidos nucleicos.[0656] Molecular cloning methods are known in the art (see, for example, Berger and Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vol. 152 Academic Press, Inc., San Diego, Calif., and Sambrook et al. al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual (3rd Ed.), Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 2000). Molecular cloning methods include techniques for polypeptide engineering and mutagenesis, which allow deletion, insertion, substitution, and other changes of amino acids within a polypeptide. Molecular cloning methods also include techniques for isolating and manipulating nucleic acids encoding polypeptides or increasing, decreasing, regulating or otherwise altering the expression of polypeptides. Molecular cloning methods further comprise vectors that facilitate genetic manipulation and expression of polypeptides and nucleic acids.

[0657]Um vetor é um veículo através do qual um ácido nucleico pode ser reproduzido ou transmitido entre as células ou organismos vivos. Um vetor pode ser, mas não está limitado a, um plasmídeo, vírus, bacteriófago, provírus, fagemídeo, transposon, ou cromossoma artificial. Um vetor pode replicar de forma autônoma ou através da maquinaria de uma célula ou organismo hospedeiro. Um vetor pode compreender ADN e/ou ARN, que podem existir em uma forma isolada ou em um complexo com outros componentes, por exemplo, proteínas. Os métodos de clonagem molecular podem ser utilizados para inserir ácidos nucleicos exógenos em vetores para criar construções para a expressão de ácidos nucleicos e/ou polipeptídeos, por exemplo, a Influenza HA.[0657] A vector is a vehicle through which a nucleic acid can be reproduced or transmitted between cells or living organisms. A vector may be, but is not limited to, a plasmid, virus, bacteriophage, provirus, phagemid, transposon, or artificial chromosome. A vector can replicate autonomously or through the machinery of a host cell or organism. A vector may comprise DNA and/or RNA, which may exist in an isolated form or in a complex with other components, for example, proteins. Molecular cloning methods can be used to insert exogenous nucleic acids into vectors to create constructs for the expression of nucleic acids and/or polypeptides, for example, Influenza HA.

ExpressãoExpression

[0658]Os métodos de expressão de ácidos e/ou polipeptídeos nucleicos exógenos são conhecidos na arte (ver, por exemplo, Sambrook). Tipicamente, expressão exógena implica a introdução de uma construção de expressão, criada utilizando os métodos descritos acima, em uma célula ou organismo hospedeiro e permitindo que a maquinaria bioquímica da célula hospedeira produza um ou mais dos ácidos e/ou polipeptídeos nucleicos estranhos. A célula hospedeira pode ser, mas não está limitado a, uma célula procariota, por exemplo, uma bactéria ou uma célula eucariótica, por exemplo, uma fúngica, vegetal, aviária, de anfíbios, de nemátodos, insetos, ou de mamíferos, por exemplo, uma célula de camundongo, hamster, macaco ou humano. Exemplos de células de inseto incluem Sf9, SfZl, células High Five e as células S2 de Drosophila. Exemplos de células hospedeiras de fungos (incluindo leveduras) são S. cerevisiae, Kluyveromyces lactis, espécies de Candida albicans, Candida glabrata, Aspergillus nidulans, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris e Yarrowia lipolitica. Exemplos de células de mamíferos incluem células COS, células de rim de hamster bebê, células L de camundongo, células LNCaP, células de ovário de hamster chinês (CHO), células (HEK) de rim embrionário humano, células de macaco verde africano, células CVI, células HeLa, células MDCK, Vero e células Hep-2. Um exemplo de uma célula de anfíbio é um oócito de Xenopus laevis. Os exemplos de células procarióticas incluem E. coli, B. subtilis e micobactérias. A célula hospedeira pode ser parte de um organismo multicelular ou pode ser cultivada in vitro, por exemplo, em uma cultura de um tecido, órgão, uma população mista de células, ou uma população clonal de células. A construção de expressão pode ser introduzida na célula hospedeira através de, por exemplo, transfecção, transdução, transformação, eletroporação, microinjeção, lipofecção ou infecção.[0658] Methods of expressing exogenous nucleic acids and/or polypeptides are known in the art (see, for example, Sambrook). Typically, exogenous expression entails introducing an expression construct, created using the methods described above, into a host cell or organism and allowing the host cell's biochemical machinery to produce one or more of the foreign nucleic acids and/or polypeptides. The host cell may be, but is not limited to, a prokaryotic cell, e.g., a bacterium, or a eukaryotic cell, e.g., a fungal, plant, avian, amphibian, nematode, insect, or mammalian cell, e.g. , a mouse, hamster, monkey or human cell. Examples of insect cells include Sf9, SfZl, High Five cells, and the Drosophila S2 cells. Examples of fungal (including yeast) host cells are S. cerevisiae, Kluyveromyces lactis, Candida albicans species, Candida glabrata, Aspergillus nidulans, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris, and Yarrowia lipolitica. Examples of mammalian cells include COS cells, baby hamster kidney cells, mouse L cells, LNCaP cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells, human embryonic kidney (HEK) cells, African green monkey cells, CVI, HeLa cells, MDCK cells, Vero and Hep-2 cells. An example of an amphibian cell is a Xenopus laevis oocyte. Examples of prokaryotic cells include E. coli, B. subtilis, and mycobacteria. The host cell may be part of a multicellular organism or may be cultured in vitro, for example, in a tissue culture, organ culture, a mixed population of cells, or a clonal population of cells. The expression construct can be introduced into the host cell through, for example, transfection, transduction, transformation, electroporation, microinjection, lipofection or infection.

[0659]As VLP podem ser produzidas por cultura de células hospedeiras nas quais uma ou mais construções que permitem a expressão de polipeptídeos exógenos foram introduzidas. As proteínas exógenas podem ser polipeptídeos idênticos ou derivados dos polipeptídeos do vírus influenza, por exemplo, M1, HA, NA, ou, fragmentos de M1, HA, ou NA, ou variantes de M1, HA, ou NA. A construção de expressão pode conter um ou mais elementos adicionais, por exemplo, um marcador, por exemplo, um marcador selecionável, ou uma origem de replicação. Métodos para cultivar células para a produção de VLP incluem, mas não estão limitados a técnicas de cultura de células, descontínuo, desocntínuo alimentado, contínuo e perfusão. Métodos e reagentes podem ser utilizados para aumentar a eficiência da produção de VLP. Por exemplo, uma sequência líder, por exemplo, uma sequência sinal, pode ser adicionada a um ou mais polipeptídeos exógenos, por exemplo, M1, HA e/ou NA, para facilitar o transporte do (s) polipeptídeo (s) exógeno (s) dentro da célula hospedeira.[0659] VLPs can be produced by culturing host cells into which one or more constructs that allow the expression of exogenous polypeptides have been introduced. Exogenous proteins may be polypeptides identical to or derived from influenza virus polypeptides, for example, M1, HA, NA, or fragments of M1, HA, or NA, or variants of M1, HA, or NA. The expression construct may contain one or more additional elements, e.g., a marker, e.g., a selectable marker, or an origin of replication. Methods for culturing cells for VLP production include, but are not limited to, batch, fed-batch, continuous, and perfusion cell culture techniques. Methods and reagents can be used to increase the efficiency of VLP production. For example, a leader sequence, e.g., a signal sequence, may be added to one or more exogenous polypeptides, e.g., M1, HA and/or NA, to facilitate transport of the exogenous polypeptide(s). ) inside the host cell.

Isolamento e purificação de VLPsIsolation and purification of VLPs

[0660]VLPs podem ser isolados e purificados utilizando métodos conhecidos na arte, tais como a centrifugação em gradiente de densidade, filtração, cromatografia de troca iônica e cromatografia de filtração em gel. Utilizando os métodos descritos acima, as VLPs são produzidas pelas células hospedeiras e segregadas para o meio de cultura. Um procedimento passo a passo típico para o isolamento e purificação de VLPs a partir do meio de cultura envolve (1) ultrafiltração do meio de cultura para concentrar as VLPs, (2) diafiltração das VLPs para remover componentes do meio de cultura, (3) a centrifugação das VLPs em uma densidade de sacarose gradiente para remover os detritos celulares e matéria particulada e (4) cromatografia de troxa aniônica de VLPs para remover os ácidos nucleicos.[0660] VLPs can be isolated and purified using methods known in the art, such as density gradient centrifugation, filtration, ion exchange chromatography and gel filtration chromatography. Using the methods described above, VLPs are produced by host cells and secreted into the culture medium. A typical step-by-step procedure for the isolation and purification of VLPs from culture medium involves (1) ultrafiltration of the culture medium to concentrate the VLPs, (2) diafiltration of the VLPs to remove components of the culture medium, (3) centrifugation of the VLPs in a sucrose density gradient to remove cellular debris and particulate matter and (4) anionic acid chromatography of VLPs to remove nucleic acids.

VesículasVesicles

[0661]Um imunógeno de amplo alcance pode ser incorporado, ou embalado em uma vesícula. Tipicamente, as vesículas têm um compartimento aquoso fechado por uma ou mais camadas duplas de moléculas anfipáticas, compreendendo (por exemplo, ácidos graxos, lipídios, esteroides, etc.). Um imunógeno de amplo alcance pode ser contido dentro do núcleo aquoso da vesícula ou pode ser localizado para a bicamada anfipática.[0661] A broad-range immunogen can be incorporated into, or packaged in, a vesicle. Typically, vesicles have an aqueous compartment enclosed by one or more bilayers of amphipathic molecules, comprising (e.g., fatty acids, lipids, steroids, etc.). A broad-range immunogen can be contained within the aqueous core of the vesicle or can be localized to the amphipathic bilayer.

[0662]Em algumas formas de realização, as moléculas anfipáticas da vesícula são não iônicas, por exemplo, um surfactante não iônico. Por exemplo, a molécula anfipática não iônica pode ser um surfactante ligado a éster à base de glicerol. Tais ésteres de glicerol podem compreender um dos dois maiores grupos acil alifáticos, por exemplo, um grupo acil contendo, pelo menos, dez átomos de carbono em cada porção acil. Os surfactantes baseados em tais ésteres de glicerol podem compreender mais do que uma unidade de glicerol, por exemplo, 2, 3, 4, ou 5 unidades de glicerol. Monoésteres de glicerol podem ser utilizados, por exemplo, aqueles que contêm uma porção alcanoíla ou alcenoíla C12C20, por exemplo, caproilo, lauroilo, miristoilo, palmitoílo, oleílo ou estearoílo. Um surfactante ligado a éster exemplar baseado em glicerol é 1-monopalmitoil glicerol.[0662] In some embodiments, the amphipathic molecules of the vesicle are nonionic, for example, a nonionic surfactant. For example, the nonionic amphipathic molecule may be a glycerol-based ester-linked surfactant. Such glycerol esters may comprise one of the two largest aliphatic acyl groups, for example, an acyl group containing at least ten carbon atoms in each acyl moiety. Surfactants based on such glycerol esters may comprise more than one glycerol unit, for example, 2, 3, 4, or 5 glycerol units. Glycerol monoesters may be used, for example those containing a C12C20 alkanoyl or alkenoyl moiety, for example caproyl, lauroyl, myristoyl, palmitoyl, oleyl or stearoyl. An exemplary glycerol-based ester-linked surfactant is 1-monopalmitoyl glycerol.

[0663]A molécula anfipática não iônica da bicamada das vesículas pode também ser um surfactante ligado a éter. Por exemplo, os surfactantes ligados a éter com base em glicerol ou um glicol alifático possuindo um glicol inferior com até 4 átomos de carbono, tais como etilenoglicol, pode ser utilizado. Os surfactantes baseados em tais glicóis podem compreender mais do que uma unidade de glicol, por exemplo, 2, 3, 4, ou 5 unidades de glicol (por exemplo, diglicolcetil éter e/ou polioxietileno-3- lauril éter). Monoéteres de glicol ou glicerol podem ser utilizados, incluindo aqueles que contêm uma porção alcanil ou alcenil C12-C20, por exemplo, caprilo, laurilo, miristilo, cetilo, estearilo ou oleilo. Para exemplos de produtos de condensação de óxido de etileno que podem ser utilizados como moléculas anfipáticas, ver Publicação PCT No W088/06882 (por exemplo, éter de polioxietileno alifáticos superiores e surfactantes de amina). Exemplos não limitativos de surfactantes ligados a éter são 1- monoacetil glicerol éter e diglicolcetil éter.[0663] The non-ionic amphipathic molecule of the vesicle bilayer can also be an ether-linked surfactant. For example, ether-linked surfactants based on glycerol or an aliphatic glycol having a lower glycol with up to 4 carbon atoms, such as ethylene glycol, can be used. Surfactants based on such glycols may comprise more than one glycol unit, for example, 2, 3, 4, or 5 glycol units (for example, diglycolcetyl ether and/or polyoxyethylene-3-lauryl ether). Glycol or glycerol monoethers may be used, including those containing a C12-C20 alkanyl or alkenyl moiety, for example, capryl, lauryl, myristyl, cetyl, stearyl or oleyl. For examples of ethylene oxide condensation products that can be used as amphipathic molecules, see PCT Publication No. W088/06882 (e.g., higher aliphatic polyoxyethylene ethers and amine surfactants). Non-limiting examples of ether-linked surfactants are 1-monoacetyl glycerol ether and diglycolcetyl ether.

[0664]Em algumas formas de realização, a vesícula compreendendo um surfactante não iônico pode também compreender uma molécula anfipática iônica. Por exemplo, um composto anfifílico iônico pode fazer com que as vesículas se tornem carregadas negativamente, que podem ajudar a estabilizar as vesículas e promover a dispersão. Moléculas anfipáticas iônicas que podem ser incorporados em vesículas incluem, mas não estão limitadas a, alcanóicos maiores e ácidos alquenóicos (por exemplo, ácido palmítico, ácido oleico) e outros compostos que contenham grupos ácidos, por exemplo, fosfatos, (por exemplo, fosfatos de dialquila, por exemplo, dicetilfosfato, ou ácidos fosfatídicos ou fosfatidil serina) e monoésteres de sulfato (por exemplo, sulfatos de alquila superiores, por exemplo, cetilsulfato). O composto anfifílico iônico pode estar presente entre 1% e 30%, entre 2% e 20%, ou entre 5% e 15% da quantidade, em peso, de surfactante não iônico.[0664] In some embodiments, the vesicle comprising a non-ionic surfactant may also comprise an ionic amphipathic molecule. For example, an ionic amphiphilic compound can cause vesicles to become negatively charged, which can help stabilize the vesicles and promote dispersal. Ionic amphipathic molecules that can be incorporated into vesicles include, but are not limited to, higher alkanoic and alkenoic acids (e.g., palmitic acid, oleic acid) and other compounds that contain acidic groups, e.g., phosphates, (e.g., phosphates). dialkyl, e.g., dicetyl phosphate, or phosphatidic acids or phosphatidyl serine) and sulfate monoesters (e.g., higher alkyl sulfates, e.g., cetyl sulfate). The ionic amphiphilic compound may be present between 1% and 30%, between 2% and 20%, or between 5% and 15% of the amount, by weight, of non-ionic surfactant.

[0665]Em algumas formas de realização, a vesícula pode compreender ainda uma molécula de alto peso molecular hidrófobo capaz de formar uma bicamada, por exemplo, um esteroide, por exemplo, colesterol. A presença do esteroide pode facilitar a formação da camada dupla, por exemplo, ao conferir propriedades físicas na bicamada. O esteroide pode estar presente entre 20% e 120%, entre 25% e 90%, ou entre 35% e 75% de quantidade, em peso, de surfactante não iônico[0665] In some embodiments, the vesicle may further comprise a hydrophobic high molecular weight molecule capable of forming a bilayer, for example, a steroid, for example, cholesterol. The presence of the steroid can facilitate the formation of the double layer, for example, by imparting physical properties to the bilayer. The steroid may be present between 20% and 120%, between 25% and 90%, or between 35% and 75% of the amount, by weight, of nonionic surfactant

[0666]Em algumas formas de realização, a vesícula pode ser uma bilosome (ver, por exemplo, Patente dos EUA No 5876721). Tal como aqui utilizado, "bilosomes" são vesículas que compreendem agentes surfactantes não iônicos e moléculas de melhoramento de transporte que facilitam o transporte de moléculas do tipo lipídicas através de membranas mucosas.[0666] In some embodiments, the vesicle may be a bilosome (see, for example, US Patent No. 5876721). As used herein, "bilosomes" are vesicles comprising non-ionic surfactant agents and transport enhancing molecules that facilitate the transport of lipid-like molecules across mucous membranes.

[0667]Os métodos para a preparação de vesículas que compreendem agentes surfactantes não iônicos são conhecidos na arte. O especialista na técnica irá compreender que tais métodos podem ser utilizados para preparar vesículas que compreendem um imunógeno de amplo alcance.[0667] Methods for preparing vesicles comprising nonionic surfactant agents are known in the art. One skilled in the art will understand that such methods can be used to prepare vesicles comprising a broad-range immunogen.

Vetores viraisViral vectors

[0668]Um imunógeno de amplo alcance pode ser fornecido em um vírus influenza. Em uma forma de realização, o imunógeno de amplo alcance é incorporado em um polipeptídeo de HA, por exemplo, um polipeptídeo de HA que difere do tipo selvagem. Em formas de realização, o polipeptídeo de HA que compreende o imunógeno de amplo alcance é outro que não uma sequência do tipo selvagem, por exemplo, uma sequência desenvolvida. Ela pode ser incorporada em um vírion, pelo fornecimento do polipeptídeo in trans durante a produção do vírion ou o genoma do vírus pode ser manipulado para produzí-lo. Em ambos os casos, as partículas virais que compreendem o imunógeno de amplo alcance são produzidas. Em uma forma de realização, o vírus é manipulao para ter um fenótipo atenuado, por exemplo, o vírus não pode ter nenhum, ou apenas muito baixos níveis de, replicação em células humanas. Em formas de realização, o vírus é inativado. Métodos de inativação incluem o contato com agentes desnaturantes, por exemplo, formalina, calor ou detergente. Um imunógeno de amplo alcance pode ser fornecido em um vírus que não de influenza, por exemplo, o vetor de vírus que não de influenza pode ser um vírus da doença de Newcastle, um vírus vaccinia, um adenovírus, vírus adeno-associado (AAV), retrovírus, ou lentivírus.[0668] A broad-range immunogen can be provided in an influenza virus. In one embodiment, the broad-range immunogen is incorporated into an HA polypeptide, for example, an HA polypeptide that differs from the wild type. In embodiments, the HA polypeptide comprising the broad-range immunogen is other than a wild-type sequence, e.g., an engineered sequence. It can be incorporated into a virion by supplying the polypeptide in trans during virion production or the virus genome can be manipulated to produce it. In both cases, viral particles comprising the broad-range immunogen are produced. In one embodiment, the virus is engineered to have an attenuated phenotype, for example, the virus may have no, or only very low levels of, replication in human cells. In embodiments, the virus is inactivated. Inactivation methods include contact with denaturing agents, for example formalin, heat or detergent. A broad-range immunogen may be delivered in a non-influenza virus, for example, the non-influenza virus vector may be a Newcastle disease virus, a vaccinia virus, an adenovirus, adeno-associated virus (AAV) , retrovirus, or lentivirus.

KitsKits

[0669]Em uma forma de realização, o imunógeno ou vacina de amplo alcance é embalado em um kit. Em algumas formas de realização, o kit compreende dois recipientes, um dos quais contém o imunógeno de amplo alcance e o outro dos quais contém um adjuvante. Em algumas formas de realização, o kit compreende dois recipientes, um dos quais contém imunógeno de amplo alcance como um pó liofilizado e o outro dos quais contém um líquido para ressuspender o imunógeno de amplo alcance. O kit pode conter um aviso conforme exigido pela agência governamental que regula a produção, uso e comercialização de produtos farmacêuticos ou biológicos, o aviso indicando que a composição tenha sido aprovada para produção, uso e/ou venda para administração a seres humanos.[0669] In one embodiment, the broad-range immunogen or vaccine is packaged in a kit. In some embodiments, the kit comprises two containers, one of which contains the broad-range immunogen and the other of which contains an adjuvant. In some embodiments, the kit comprises two containers, one of which contains broad-range immunogen as a lyophilized powder and the other of which contains a liquid for resuspending the broad-range immunogen. The kit may contain a notice as required by the government agency that regulates the production, use and marketing of pharmaceutical or biological products, the notice indicating that the composition has been approved for production, use and/or sale for administration to humans.

[0670]A vacina pode ser fornecida em um recipiente hermeticamente fechado. A vacina pode ser fornecida como um líquido ou como um pó liofilizado que pode ser reconstituído pela adição, por exemplo, de água ou de solução salina, a uma concentração adequada para administração a um indivíduo.[0670] The vaccine can be provided in a hermetically sealed container. The vaccine may be supplied as a liquid or as a lyophilized powder which may be reconstituted by adding, for example, water or saline to a concentration suitable for administration to an individual.

EpítopoEpitope

[0671]HAs existem na natureza como homotrímeros de subunidades maduras proteoliticamente processadas. Cada subunidade do trímero é sintetizada como um precursor. Uma molécula de precursor é proteoliticamente processada em duas cadeias polipeptídicas de dissulfeto ligados para formar um polipeptídeo de HA maduro. O polipeptídeo de HA maduro inclui dois domínios: (1) um núcleo de domínio de HA-1 que se estende a partir da base da molécula através da haste fibrosa à região da membrana distal de cabeça que contém o domínio de ligação ao receptor de glicano, retornando para a região fibrosa que termina no sítio de clivagem e (2) domínio HA-2 que inclui a região da haste e o domínio transmembranar de HA. HA-1 inclui um local de ligação de glicano. O local de ligação de glicano pode ser responsável por mediar a ligação de HA ao receptor de HA. O domínio de HA-2 atua de modo a apresentar o domínio de HA- 1. O trímero de HA pode ser estabilizado por interações polares e não-polares entre as três longas alfa-hélices HA da haste de monômeros de HA.[0671]HAs exist in nature as homotrimers of proteolytically processed mature subunits. Each subunit of the trimer is synthesized as a precursor. A precursor molecule is proteolytically processed into two disulfide linked polypeptide chains to form a mature HA polypeptide. The mature HA polypeptide includes two domains: (1) a core HA-1 domain that extends from the base of the molecule through the fibrous shaft to the head-distal membrane region that contains the glycan receptor-binding domain , returning to the fibrous region that ends at the cleavage site and (2) HA-2 domain that includes the stem region and the transmembrane domain of HA. HA-1 includes a glycan binding site. The glycan binding site may be responsible for mediating the binding of HA to the HA receptor. The HA-2 domain acts to present the HA-1 domain. The HA trimer can be stabilized by polar and nonpolar interactions between the three long HA alpha-helices of the HA monomer stem.

[0672] Sequências de todos os subtipos de HA de influenza compartilham um conjunto de aminoácidos na interface dos domínios HA-1 e HA-2 que estão bem conservadas. A região de epítopo proximal da membrana de interface HA-1/HÁ-2 (MPER) que inclui a αhelix canônica e os resíduos na sua vizinhança também são conservados em um amplo espectro de subtipos. (Ekiert et al., Science, 324 (5924):246, 2009; Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16 (3): 265, 2009).[0672] Sequences of all influenza HA subtypes share a set of amino acids at the interface of the HA-1 and HA-2 domains that are well conserved. The HA-1/HA-2 interface membrane proximal epitope region (MPER) that includes the canonical αhelix and residues in its vicinity are also conserved across a broad spectrum of subtypes. (Ekiert et al., Science, 324 (5924):246, 2009; Sui et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16 (3): 265, 2009).

[0673]Ab 044 tem alta afinidade por HAs a partir do Grupo 1 e Grupo 2. Ela se liga a um epítopo conformacional que é largamente conservado entre uma pluralidade de estirpes da influenza. Numerosos resíduos de aminoácidos distribuídos ao longo das sequências lineares de HA a partir de diferentes estirpes/subtipos contribuem para o epítopo conformacional Ab 044. A interação de Ab 044 com H3 foi analisada por estudos de docking e resíduos ligados por (ou não vinculada por) Ab 044 foram identificados.[0673]Ab 044 has high affinity for HAs from Group 1 and Group 2. It binds to a conformational epitope that is largely conserved among a plurality of influenza strains. Numerous amino acid residues distributed along the linear HA sequences from different strains/subtypes contribute to the Ab 044 conformational epitope. The interaction of Ab 044 with H3 was analyzed by docking studies and bound by (or unbound by) residues Ab 044 were identified.

[0674]O Fv de Ab 044 foi acoplado a HA do grupo I e II, utilizando estirpes ZDOCK. A estrutura do antígeno HA foi modelada utilizando o servidor de modelagem de homologia SWISS MODEL mantendo a estrutura cristalina resolvida de H1N1 como esqueleto. ZDOCK usa complementaridade de forma junto com dessolvatação e termos de energia eletrostática ('ZRANK') para classificar poses acopladas. Para assegurar que as poses acopladas não se desviam significativamente do complexo nativo, epítopos mapeados e resíduos de paratopo por varrimento de alanina são forçados a serem incluídos na interface de ligação.[0674] The Fv of Ab 044 was coupled to HA from group I and II, using ZDOCK strains. The structure of the HA antigen was modeled using the SWISS MODEL homology modeling server keeping the resolved crystal structure of H1N1 as the skeleton. ZDOCK uses shape complementarity along with desolvation and electrostatic energy ('ZRANK') terms to classify coupled poses. To ensure that docked poses do not deviate significantly from the native complex, alanine-scanning mapped epitopes and paratope residues are forced to be included in the binding interface.

[0675] Para os estudos de comparação, aminoácidos que se ligam (ou não se ligam) a FI6 foram retirados do Pedido de patente publicado dos EUA US 2011/0274702 A1, Neutralizing Anti-Influenza A Virus Antibodies and Uses Thereof, (Neutralização de Anti-anticorpos do vírus influenza A e suas utilizações), depositado em 18 de julho de 2011.[0675] For comparison studies, amino acids that bind (or do not bind) to FI6 were taken from published US patent application US 2011/0274702 A1, Neutralizing Anti-Influenza A Virus Antibodies and Uses Thereof, Influenza A virus antibodies and their uses), deposited on July 18, 2011.

[0676] ZDOCK é um programa de acoplamento de proteína baseado da Transformada Rápida de Fourier. Ele foi desenvolvido pela Zhiping Weng, da Universidade de Massachusetts Medical School. Em ZDOCK, dois arquivos de PDB são inseridos e a saída é a estrutura prevista de seu complexo. O programa pesquisa todos os possíveis modos de ligação na translação e rotação do espaço entre as duas proteínas e avalia cada por uma função de pontuação de energia. A estrutura da proteína é convertida para um sinal digital e uma técnica de Transformada Rápida de Fourier usada para reduzir o tempo computacional. ZDOCK é discutido em Pierce BG, Hourai Y, Z. Weng (2011) Accelerating Protein Docking in ZDOCK Using an Advanced 3D Convolution Librar.. PLoS One 6 (9):e24657, Pierce B, Tong W, Weng Z. (2005) M- ZDOCK: A Grid-based Approach for Cn Symmetric Multimer Docking. Bioinformatics 21 (8): 1472-1476; Mintseris J, Pierce B, Wiehe K, Anderson R, R Chen, Weng Z. (2007) Integrating Statistical Pair Potentials into Protein Complex Prediction. Proteins 69 (3): 511-520; Chen R, Li L, Weng Z. (2003) ZDOCK: An Initial-stage Protein Docking Algorithm. Proteins 52 (1): 80-7.[0676] ZDOCK is a Fast Fourier Transform-based protein docking program. It was developed by Zhiping Weng of the University of Massachusetts Medical School. In ZDOCK, two PDB files are input and the output is the predicted structure of their complex. The program searches for all possible binding modes in the translation and rotation space between the two proteins and evaluates each by an energy scoring function. The protein structure is converted to a digital signal and a Fast Fourier Transform technique used to reduce computational time. ZDOCK is discussed in Pierce BG, Hourai Y, Z. Weng (2011) Accelerating Protein Docking in ZDOCK Using an Advanced 3D Convolution Librar.. PLoS One 6(9):e24657, Pierce B, Tong W, Weng Z. (2005) M-ZDOCK: A Grid-based Approach for Cn Symmetric Multimer Docking. Bioinformatics 21 (8): 1472-1476; Mintseris J, Pierce B, Wiehe K, Anderson R, Chen R, Weng Z. (2007) Integrating Statistical Pair Potentials into Protein Complex Prediction. Proteins 69 (3): 511-520; Chen R, Li L, Weng Z. (2003) ZDOCK: An Initial-stage Protein Docking Algorithm. Proteins 52 (1): 80-7.

[0677] SWISS-MODEL é um servidor de modelagem de homologia de estrutura da proteína totalmente automatizado. É acessível através do servidor web ExPASy, ou a partir do programa DeepView (Swiss PDB-Viewer). Swiss-model é discutido em Arnold K., Bordoli L., J. Kopp e Schwede T. (2006). A SWISS-MODEL Workspace: A web-based environment for protein structure homology modelling. Bioinformatics, 22,195-201; Kiefer F, Arnold K, Ktinzli M, Bordoli L, Schwede T (2009). The SWISS-MODEL Repository and associated resources. Nucleic Acids Research. 37, D387-D392; e Peitsch, MC (1995) Protein modeling by E-mail Bio/Technology 13: 658-660.[0677] SWISS-MODEL is a fully automated protein structure homology modeling server. It is accessible via the ExPASy web server, or from the DeepView program (Swiss PDB-Viewer). Swiss-model is discussed in Arnold K., Bordoli L., J. Kopp, and Schwede T. (2006). The SWISS-MODEL Workspace: A web-based environment for protein structure homology modelling. Bioinformatics, 22,195-201; Kiefer F, Arnold K, Ktinzli M, Bordoli L, Schwede T (2009). The SWISS-MODEL Repository and associated resources. Nucleic Acids Research. 37, D387-D392; and Peitsch, MC (1995) Protein modeling by E-mail Bio/Technology 13: 658-660.

[0678]Os resíduos de H3 que se ligam a Ab 044 e resíduos de H3 que se ligam a FI6 são discutidos abaixo.[0678] The H3 residues that bind to Ab 044 and H3 residues that bind to FI6 are discussed below.

H3 HA1H3 HA1

[0679]A sequência de aminoácidos de H3 HA1 é fornecida abaixo, como SEQ ID NO: 173. Os resíduos N38, 1278, D291 e mostrado em caixas tracejadas são ligados por Ab 044, mas não por FI6; os resíduos Q327, T328 e R329 mostrados em caixas pontilhadas, estão ligapos por FI6, mas não por Ab 044; os resíduos T318, R321 e V323 mostrados em caixas sólidas, estão ligados tanto por Ab 044 qaunto FI6. [0679] The amino acid sequence of H3 HA1 is provided below, as SEQ ID NO: 173. Residues N38, 1278, D291 and shown in dashed boxes are bound by Ab 044, but not by FI6; residues Q327, T328 and R329 shown in dotted boxes are linked by FI6 but not by Ab 044; residues T318, R321 and V323 shown in solid boxes, are bound by both Ab 044 and FI6.

H3 HA2H3 HA2

[0680]A sequência de aminoácidos H3 HA21 é fornecida a seguir, como SEQ ID NO: 174. Resíduo N12 mostrado em uma caixa de traço está ligado por Ab 044, mas não por FI6; resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 mostrados em caixas pontilhadas, estão ligados por FI6, mas não por Ab 044; resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, 156 e E57, mostrados em caixas sólidas, estão ligados tanto por Ab 044 quanto FI6.[0680] The H3 HA21 amino acid sequence is provided to follow, as SEQ ID NO: 174. Residue N12 shown in a dash box is bound by Ab 044, but not by FI6; residues G1, L2, F3, G4 and D46 shown in dotted boxes, are bound by FI6 but not by Ab 044; residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, 156, and E57, shown in solid boxes, are bound by both Ab 044 and FI6 .

[0681]Os resíduos H1 que se ligam a Ab 044 e resíduos H1 que se ligam a FI6 são discutidos abaixo.[0681] The H1 residues that bind to Ab 044 and H1 residues that bind to FI6 are discussed below.

H1 HA1H1 HA1

[0682]A sequência de aminoácidos de H1 HA1 é fornecida abaixo, como SEQ 1D NO: 18I. Resíduos H31, N279 e S292 mostrados em caixas tracejadas, estão ligados por Ab 044, mas não por FI6. Os resíduos Q328 e S329 mostrados em caixas pontilhadas, estão ligados por FI6 mas não por Ab 044. Os resíduos T319, R322 e 1324 apresentadas em caixas sólidas, estão ligados tanto por Ab 044 quanto FI6. [0682] The amino acid sequence of H1 HA1 is provided below, as SEQ 1D NO: 18I. Residues H31, N279, and S292 shown in dashed boxes, are bound by Ab 044, but not by FI6. Residues Q328 and S329 shown in dotted boxes are bound by FI6 but not by Ab 044. Residues T319, R322 and 1324 shown in solid boxes are bound by both Ab 044 and FI6.

H1 HA2H1 HA2

[0683]A sequência de aminoácidos de H1 HA2 é fornecida a seguir, como SEQ 1D NO: 182. O resíduo G12 mostrado em uma caixa tracejada é ligado por Ab 044, mas não por FI6. Os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 mostrados em caixas pontilhadas, estão ligados por FI6, mas não por Ab 044. Os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43, I45, I48, T49, V52, N53, I56 e E57 mostrados em caixas sólidas, estão ligados tanto por Ab 044 quanto FI6. [0683] The amino acid sequence of H1 HA2 is provided below, as SEQ 1D NO: 182. The G12 residue shown in a dashed box is bound by Ab 044, but not by FI6. Residues G1, L2, F3, G4 and D46 shown in dotted boxes, are bound by FI6, but not by Ab 044. Residues A7, E11, I18, D19, G20, W21, Q38, K39, T41, Q42, N43 , I45, I48, T49, V52, N53, I56, and E57 shown in solid boxes, are bound by both Ab 044 and FI6.

[0684]A Figura 26 é uma representação tridimensional de HA H3 com os resíduos de aminoácidos que são previstos para ser parte de Ab044 epítopo, mas não fazer parte do FI6 epítopo em destaque. Isto é, os aminoácidos destacados são únicos de epítopo de Ab044.[0684] Figure 26 is a three-dimensional representation of HA H3 with the amino acid residues that are predicted to be part of the Ab044 epitope, but not part of the FI6 epitope highlighted. That is, the highlighted amino acids are unique to the Ab044 epitope.

[0685]A Figura 27 é uma representação tridimensional de H3 HA com os resíduos de aminoácidos que fazem parte do epítopo de FI6, mas não são previstos serem parte do epítopo de Ab044 destacado indicado.[0685] Figure 27 is a three-dimensional representation of H3 HA with the amino acid residues that are part of the FI6 epitope but are not predicted to be part of the highlighted Ab044 epitope indicated.

Métodos de diagnósticoDiagnostic methods

[0686]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, aqui fornecidos são úteis para identificar a presença da influenza em uma amostra biológica, por exemplo, uma amostra de paciente, tal como uma amostra de fluido, por exemplo, uma amostra de sangue, soro, saliva, muco, ou amostra de urina, ou uma amostra de tecido, tal como uma biópsia.[0686] The binding agents, e.g., antibody molecules, provided herein are useful for identifying the presence of influenza in a biological sample, e.g., a patient sample, such as a fluid sample, e.g., a of a blood, serum, saliva, mucus, or urine sample, or a tissue sample, such as a biopsy.

[0687]Em uma forma de realização, uma amostra do paciente é posta em contato com um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, apresentada na divulgação e a ligação é detectada. A ligação pode ser detectada com um número de formatos e meios de detecção, por exemplo, com um ensaio de captura de antígeno, tal como um ensaio de ELISA ou Western blot, ou um ensaio de imuno- histoquímica. Em formas de realização o agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, é fornecido, por exemplo, acoplado a uma matriz insolúvel, por exemplo, um cordão ou outro substrato e uma molécula de detecção utilizada para detectar a ligação de HA.[0687] In one embodiment, a patient sample is brought into contact with a binding agent, for example, an antibody molecule, presented in the disclosure and binding is detected. Binding can be detected with a number of detection formats and means, for example, with an antigen capture assay, such as an ELISA or Western blot assay, or an immunohistochemical assay. In embodiments the binding agent, e.g., an antibody molecule, is provided, e.g., coupled to an insoluble matrix, e.g., a bead or other substrate, and a detection molecule used to detect HA binding.

[0688]A ligação do agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, para HA, pode ser detectada com um reagente que compreende uma porção detectável, por exemplo, um reagente, por exemplo, um anticorpo, que se liga ao agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo. Em formas de realização, o agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpos, tem uma porção detectável. Porções detectáveis adequadas incluem enzimas (por exemplo, peroxidase de rábano, beta-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina, acetilcolinesterase, glicose oxidase e semelhantes), marcadores radioativos (por exemplo, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), haptenos, marcadores fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, lantanídeos substâncias fosforescentes, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloreto de 5-dimetilamina-1- naftalenossulfonila, ficoeritrina e semelhantes), moléculas fosforescentes, moléculas quimioluminescentes, cromóforos, moléculas luminescentes, moléculas de fotoafinidade, partículas coloridas ou ligantes de afinidade, tais como biotina, epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de pares de zíper de leucina, ou sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo). Em algumas formas de realização, os marcadores estão ligados por meio de braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial de impedimento espacial.[0688] The binding of the binding agent, for example, an antibody molecule, to HA, can be detected with a reagent that comprises a detectable moiety, for example, a reagent, for example, an antibody, that binds to the agent binding, for example, an antibody molecule. In embodiments, the binding agent, e.g., antibody molecules, has a detectable portion. Suitable detectable moieties include enzymes (e.g., horseradish peroxidase, beta-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase, acetylcholinesterase, glucose oxidase, and the like), radioactive labels (e.g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), haptens, fluorescent labels (e.g., FITC, rhodamine, lanthanide phosphors, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, 5-dimethylamine-1-naphthalenesulfonyl chloride, phycoerythrin and the like), phosphorescent molecules, chemiluminescent molecules, chromophores, luminescent molecules, photoaffinity molecules, colored particles or affinity ligands such as biotin, predetermined polypeptide epitopes recognized by a secondary reporter (e.g. leucine zipper pair sequences, or binding sites for secondary antibodies, domains metal binding tags, epitope tags). In some embodiments, the markers are linked via spacer arms of various lengths to reduce the potential for spatial hindrance.

[0689]Em formas de realização, um ser humano é testado quanto à presença de vírus da influenza por um método aqui descrito e se o teste for positivo, um agente de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, por exemplo, um anticorpo aqui proporcionado, é administrado.[0689] In embodiments, a human is tested for the presence of influenza viruses by a method described herein and if the test is positive, a binding agent, e.g., antibody molecules, e.g., an antibody herein proportionate, it is administered.

[0690]Os agentes de ligação, por exemplo, moléculas de anticorpo, por exemplo, um anticorpo, aqui fornecido pode ser utilizado para ensaios citológicos, tais como para identificar uma HA em uma célula. O ensaio pode ser um ensaio colorimétrico. Uma amostra biológica a partir de um (não infectado) indivíduo normal é utilizada como um controle. O ensaio de diagnóstico pode ser realizado in vitro.[0690] The binding agents, e.g., antibody molecules, e.g., an antibody, provided herein can be used for cytological assays, such as to identify an HA in a cell. The test may be a colorimetric test. A biological sample from a normal (uninfected) individual is used as a control. The diagnostic assay can be performed in vitro.

[0691]O ensaio de diagnóstico também pode ser realizado para determinar a infecção de células em cultura, por exemplo, de células de mamíferos em cultura. As moléculas de anticorpo podem ser utilizadas em ensaios in vitro.[0691] The diagnostic assay can also be performed to determine the infection of cells in culture, for example, mammalian cells in culture. Antibody molecules can be used in in vitro assays.

[0692] Porque as moléculas de anticorpo aqui existentes se ligam a um amplo espectro de subtipos de HA, os ensaios de diagnóstico existentes na divulgação podem detectar a presença do vírus influenza em pacientes infectados com uma variedade de estirpes diferentes de influenza. Uma amostra do paciente pode ser posteriormente testada com anticorpos específicos do subtipo, ou outros ensaios (por exemplo, RFLP (Restriction Fragment Length Polimorphism), PCR (Polimerase Chain Reaction), RT-PCR (transcrição reversa acoplada a Reação em Cadeia da Polimerase), transferência de Northern, Southern blot ou sequenciamento de DNA) para determinar ainda a estirpe particular de vírus.[0692] Because the antibody molecules herein bind to a broad spectrum of HA subtypes, the diagnostic assays in the disclosure can detect the presence of the influenza virus in patients infected with a variety of different strains of influenza. A patient sample can be further tested with subtype-specific antibodies, or other assays (e.g., RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), PCR (Polymerase Chain Reaction), RT-PCR (reverse transcription coupled Polymerase Chain Reaction) , Northern blot, Southern blot or DNA sequencing) to further determine the particular strain of virus.

[0693]Em uma forma de realização, um paciente determinado estando infectado com influenza A pode ser administrado com mais de uma molécula de anticorpo apresentada na divulgação, para tratar a infecção.[0693] In one embodiment, a patient determined to be infected with influenza A may be administered with more than one antibody molecule disclosed in the disclosure, to treat the infection.

[0694] Também são fornecidos substratos sólidos, por exemplo, grânulos, varetas de nível, matrizes e semelhantes, sobre os quais está disposto um agente de ligação, por exemplo, de moléculas de anticorpo.[0694] Solid substrates are also provided, for example, granules, dipsticks, matrices and the like, on which a binding agent, for example, of antibody molecules, is arranged.

[0695]Um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, aqui revelado, por exemplo, gerado pelos métodos aqui descritos, pode ser fornecido em um kit. O kit pode inlcuir um ou mais outros compoentents, por exemplo, recipientes, tampões ou outros diluentes, dispositivos de entrega e semelhantes.[0695] A binding agent, for example, an antibody molecule, disclosed herein, for example, generated by the methods described herein, may be provided in a kit. The kit may include one or more other components, for example, containers, buffers or other diluents, delivery devices, and the like.

[0696]Em uma forma de realização, o kit inclui materiais para a administração de uma molécula de anticorpo a um indivíduo, tal como para o tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus influenza. Por exemplo, o kit pode incluir um ou mais ou todos de: (a) um recipiente que contém uma composição que inclui uma molécula de anticorpo, opcionalmente (b) um recipiente que contém uma composição que inclui um segundo agente terapêutico e opcionalmente (c) material informativo.[0696] In one embodiment, the kit includes materials for administering an antibody molecule to an individual, such as for treating or preventing influenza virus infection. For example, the kit may include one or more or all of: (a) a container that contains a composition that includes an antibody molecule, optionally (b) a container that contains a composition that includes a second therapeutic agent, and optionally (c ) informative material.

[0697]Em uma outra forma de realização, o kit inclui materiais para a utilização de uma molécula de anticorpo em um ensaio de diagnóstico, tais como para a detecção de HA em uma amostra biológica. Por exemplo, o kit pode incluir um ou mais ou todos de: (a) um recipiente que contém uma composição que inclui uma molécula de anticorpo, opcionalmente (b) um recipiente que contém um reagente, por exemplo, marcado com uma porção detectável para detectar o anticorpo, por exemplo, para utilização em um ensaio ELISA ou de imuno-histoquímica, e, opcionalmente, (c) material informativo. Em outras formas de realização, o kit compreende um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo, que compreende uma porção detectável.[0697] In another embodiment, the kit includes materials for using an antibody molecule in a diagnostic assay, such as for detecting HA in a biological sample. For example, the kit may include one or more or all of: (a) a container containing a composition including an antibody molecule, optionally (b) a container containing a reagent, e.g., marked with a detectable moiety for detect the antibody, for example, for use in an ELISA or immunohistochemistry assay, and, optionally, (c) informative material. In other embodiments, the kit comprises a binding agent, for example, an antibody molecule, which comprises a detectable portion.

[0698]Em uma forma de realização, o kit compreende um substrato sólido, por exemplo, grânulo, vareta de nível, matriz e semelhantes, no qual está disposto um agente de ligação, por exemplo, uma molécula de anticorpo.[0698] In one embodiment, the kit comprises a solid substrate, for example, bead, dipstick, matrix and the like, on which a binding agent, for example, an antibody molecule, is arranged.

[0699]O material de informação pode ser descritivo, instrutivo, de comercialização ou outro material que se relaciona com os métodos descritos neste documento e/ou a utilização dos agentes para benefício terapêutico, ou para um ensaio de diagnóstico.[0699] The information material may be descriptive, instructive, marketing or other material that relates to the methods described herein and/or the use of the agents for therapeutic benefit, or for a diagnostic assay.

[0700]O material informativo dos kits não está limitado na sua forma. Em uma forma de realização, o material informativo pode incluir informação sobre a produção do anticorpo, concentração, data de validade, lote e informações do local de produção e assim por diante. Em uma forma de realização, o material informativo refere-se a métodos de administração do anticorpo, por exemplo, em uma dose adequada, forma de dosagem, ou o modo de administração (por exemplo, uma dose, forma de dosagem, ou o modo de administração aqui descrito), para tratar um indivíduo que tem uma infecção, por exemplo, infecções virais ou infecções secundárias (por exemplo, infecção bacteriana secundária).[0700] The informative material of the kits is not limited in its form. In one embodiment, the informational material may include information about antibody production, concentration, expiration date, batch and production site information, and so on. In one embodiment, the informational material relates to methods of administering the antibody, e.g., in a suitable dose, dosage form, or mode of administration (e.g., a dose, dosage form, or mode of administration described herein), to treat an individual who has an infection, e.g., viral infections or secondary infections (e.g., secondary bacterial infection).

[0701]Em uma outra forma de realização, o material informativo refere-se a métodos para a utilização da molécula de anticorpo para um ensaio de diagnóstico, por exemplo, para detectar a presença de vírus influenza em uma amostra biológica.[0701] In another embodiment, the informative material relates to methods for using the antibody molecule for a diagnostic assay, for example, to detect the presence of influenza viruses in a biological sample.

[0702]As informações podem ser fornecidas em uma variedade de formatos, incluindo texto impresso, material de leitura em computador, gravação de vídeo ou gravação de áudio, ou informações que fornecem um link ou endereço para o material substantivo.[0702]Information may be provided in a variety of formats, including printed text, computer reading material, video recording or audio recording, or information that provides a link or address to substantive material.

[0703]Em adição ao agente, a composição no kit pode incluir outros ingredientes, tais como um solvente ou tampão, um estabilizador, ou um conservante. O agente pode ser proporcionado em qualquer forma, por exemplo, um líquido, em pó ou forma liofilizada e substancialmente pura e/ou esterilizada. Quando os agentes são fornecidos em uma solução líquida, a solução líquida é geralmente uma solução aquosa. Quando os agentes são fornecidos como uma forma seca, em geral, a reconstituição é pela adição de um solvente adequado. O solvente, por exemplo, água estéril ou tampão, pode opcionalmente ser fornecido no kit.[0703] In addition to the agent, the composition in the kit may include other ingredients, such as a solvent or buffer, a stabilizer, or a preservative. The agent may be provided in any form, for example, a liquid, powder or lyophilized form and in substantially pure and/or sterilized form. When agents are provided in a liquid solution, the liquid solution is generally an aqueous solution. When agents are supplied in a dry form, reconstitution is generally by addition of a suitable solvent. Solvent, e.g. sterile water or buffer, may optionally be provided in the kit.

[0704]O kit pode incluir um ou mais recipientes para a composição ou composições que contêm os agentes. Em algumas formas de realização, o kit contém recipientes separados, divisórias ou compartimentos para a composição e o material informativo. Por exemplo, a composição pode estar contida em uma garrafa, frasco ou seringa e o material informativo pode estar contido em uma manga ou pacote de plástico. Em outras formas de realização, os elementos separados do kit estão contidos dentro de um recipiente único, não dividido. Por exemplo, a composição está contida em uma garrafa, frasco ou seringa que tem a ele ligado o material informativo na forma de um rótulo. Em algumas formas de realização, o kit inclui uma pluralidade (por exemplo, um pacote) de recipientes individuais, cada um contendo uma ou mais formas de dosagem unitária (por exemplo, uma forma de dosagem aqui descrita) dos agentes. Os recipientes podem incluir uma combinação de unidade de dosagem, por exemplo, uma unidade que inclui tanto a molécula de anticorpo e o agente suplementar ou adicional, tal como em uma proporção desejada. Por exemplo, o kit pode incluir uma pluralidade de seringas, ampolas, saquetas, embalagens de blisters de folha ou dispositivos médicos, cada um contendo, por exemplo, uma dose unitária de combinação única. Os recipientes dos kits podem ser selados ao ar, à prova de água (por exemplo, impermeável a mudanças na umidade ou evaporação) e/ou à prova de luz.[0704] The kit may include one or more containers for the composition or compositions containing the agents. In some embodiments, the kit contains separate containers, dividers or compartments for the composition and informational material. For example, the composition may be contained in a bottle, vial or syringe and the informative material may be contained in a plastic sleeve or package. In other embodiments, the separate elements of the kit are contained within a single, undivided container. For example, the composition is contained in a bottle, vial or syringe which has attached to it informative material in the form of a label. In some embodiments, the kit includes a plurality (e.g., a package) of individual containers, each containing one or more unit dosage forms (e.g., a dosage form described herein) of the agents. Containers may include a combination dosage unit, for example, a unit that includes both the antibody molecule and the supplemental or additional agent, such as in a desired proportion. For example, the kit may include a plurality of syringes, ampoules, sachets, foil blister packs or medical devices, each containing, for example, a single combination unit dose. Kit containers may be air-sealed, waterproof (e.g., impervious to changes in humidity or evaporation), and/or light-tight.

[0705]O kit inclui, opcionalmente, um dispositivo adequado para a administração da composição, por exemplo, uma seringa ou dispositivo para administrar partículas ou aerossóis, por exemplo, um inalador, um dispositivo de pulverização, ou um conta-gotas ou outro dispositivo de entrega adequado. O dispositivo pode ser fornecido pré- carregado com um ou ambos os agentes, ou pode estar vazio, mas adequado para o carregamento.[0705] The kit optionally includes a device suitable for administering the composition, for example, a syringe or device for administering particles or aerosols, for example, an inhaler, a spray device, or a dropper or other device appropriate delivery time. The device may be supplied pre-charged with one or both agents, or may be empty but suitable for charging.

[0706]A invenção é ainda ilustrada pelos exemplos que se seguem, os quais não devem ser interpretados como limitando ainda mais. TABELA 4C. SEQUÊNCIAS DE ÁCIDOS NUCLEICOS E AMINOÁCIDOS [0706] The invention is further illustrated by the following examples, which should not be interpreted as further limiting. TABLE 4C. SEQUENCES OF NUCLEIC ACIDS AND AMINO ACIDS

EXEMPLOSEXAMPLES Exemplo 1. Concepção dos anticorpos anti-HAExample 1. Design of anti-HA antibodies

[0707]Os anticorpos humanos (IgG) que objetivam hemaglutinina viral (HA) foram computacionalmente concebidos. HA medeia a ligação viral ao receptor da superfície da célula de acolhimento e a fusão da membrana celular para o envelope viral, resultando na entrada viral. As moléculas de anticorpos aqui descritas foram concebidas para bloquear a atividade fusogênica de HA.[0707] Human antibodies (IgG) that target viral hemagglutinin (HA) have been computationally designed. HA mediates viral binding to the host cell surface receptor and fusion of the cell membrane to the viral envelope, resulting in viral entry. The antibody molecules described here were designed to block the fusogenic activity of HA.

[0708] Todas as construções de anticorpo foram baseadas na estrutura de IgG1 humana (cadeia Y1 pesada e cadeia leve K). As mutações pontuais na VH (domínio pesado variável) e VL (domínio leve variável) foram computacionalmente projetadas. Estas mutações estão localizadas dentro ou fora das CDR (regiões determinantes de complementaridade). As mutações foram concebidas, por exemplo, para modificar as propriedades de ligação ao antígeno (por exemplo, para a afinidade de ligação mais forte ou mais fraca), ou para estabilizar a estrutura, ou para melhorar as propriedades de expressão, etc.[0708] All antibody constructs were based on the structure of human IgG1 (Y1 heavy chain and K light chain). Point mutations in VH (variable heavy domain) and VL (variable light domain) were computationally designed. These mutations are located inside or outside the CDRs (complementarity determining regions). Mutations have been designed, for example, to modify antigen-binding properties (e.g., for stronger or weaker binding affinity), or to stabilize the structure, or to improve expression properties, etc.

[0709]As sequências da cadeia pesada e leve de um anticorpo, chamadas A18 são fornecidas na Figura 1. Os emparelhamentos de cadeias pesadas e leves de anticorpos computacionalmente concebidos exemplares são mostrados na Tabela 3, na Descrição Detalhada acima.[0709] The heavy and light chain sequences of an antibody, called A18, are provided in Figure 1. Exemplary computationally designed antibody heavy and light chain pairings are shown in Table 3, in the Detailed Description above.

[0710]As sequências de ADN para a cadeia pesada variável e a cadeia leve variável para cada um dos anticorpos Ab A18, Ab 031, Ab 032, Ab 044, Ab 014 e Ab 028 são fornecidas abaixo. [0710] The DNA sequences for the variable heavy chain and the variable light chain for each of the antibodies Ab A18, Ab 031, Ab 032, Ab 044, Ab 014 and Ab 028 are provided below.

[0711] Cada uma das sequências acima pode ser modificada para incluir uma sequência ATCGAT de nucleotídeos na extremidade 5', que vai codificar uma cadeia pesada variável ou cadeia leve compreendendo polipeptídeo Ile-Asp no terminal amino.[0711] Each of the above sequences can be modified to include an ATCGAT nucleotide sequence at the 5' end, which will encode a variable heavy chain or light chain comprising Ile-Asp polypeptide at the amino terminus.

Exemplo 2. Ligação de Anticorpos Anti-HA a Hemaglutininas a partir de uma Variedade de Vírus influenza, Conforme Medido por ELISAExample 2. Binding of Anti-HA Antibodies to Hemagglutinins from a Variety of Influenza Viruses, as Measured by ELISA

[0712]Os anticorpos foram testados quanto à ligação a hemaglutininas (HAS) a partir de diferentes estirpes de influenza por ensaio ELISA. Os anticorpos também foram ensaiados quanto à ligação a BSA para testar para a ligação não específica. Não existe necessariamente uma correlação direta entre a afinidade de ligação e o grau de eficácia em estudos in vivo.[0712] Antibodies were tested for binding to hemagglutinins (HAS) from different influenza strains by ELISA assay. Antibodies were also assayed for binding to BSA to test for nonspecific binding. There is not necessarily a direct correlation between binding affinity and degree of efficacy in in vivo studies.

[0713]A afinidade de ligação de anticorpos foi medida por ELISA. Para realizar o teste ELISA, uma placa de 96 poços de fundo plano NUNC Maxisorp (Cat # 439454), foi revestida com as hemaglutininas indicadas (HAS) diluída para 2 μg/mL em 1x PBS, 100 μL por poço. A placa foi selada com uma tampa de placa e deixadaincubar durante a noite a 4°C estática. As placas foram então lavadas três vezes com 1x PBS + 0,05% Tween-20 (PBST). As placas revestidas com HA foram bloqueadas com 200 μL de 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology Cat # sc-2325) em 1x PBS e incubadas à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, as placas foram lavadas três vezes com PBST. Uma vez lavados, os anticorpos (descritos na divulgação) foram diluídos para a concentração de partida desejada em PBST e carregados sobre a placa com diluição em série. Nenhuma amostra foi adicionada ao último poço no conjunto para obter a leitura do branco de antígeno. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 2 horas, estáticas, e, em seguida, lavadas três vezes com PBST e viradas para secar. Anticorpo conjugado com HRP anti-humano foi diluído em PBST e 100 μl de anticorpo HRP foi carregado por poço para todos os poços. Após incubação durante 1 hora à temperatura ambiente, as placas foram lavadas três vezes com PBST. Solução de TMB (KPL, Gaithersburg, MD, Cat # 50-76-00) foi preparada antes de ser utilizada e deixada aquecer até à temperatura ambiente. A solução de TMB foi então adicionado à placa e desenvolvida até max OD estar entre 2 e 3 unidades de absorvância a 650 nm como lidas em um leitor de placas de 96 poços (SpectraMax M2e ou semelhante), ou 4 minutos, após realização da densidade óptica desejada, extinta a reação com H2SO4 1N e OD a 450 nm no mesmo leitor de placas foi lida na placa. O OD foi representado graficamente como uma função da concentração relativa e o KD foi calculado utilizando um ajuste de quarto paramétricos.[0713] Antibody binding affinity was measured by ELISA. To perform the ELISA test, a NUNC Maxisorp flat-bottom 96-well plate (Cat # 439454), was coated with the indicated hemagglutinins (HAS) diluted to 2 μg/mL in 1x PBS, 100 μL per well. The plate was sealed with a plate lid and allowed to incubate overnight at 4°C static. Plates were then washed three times with 1x PBS + 0.05% Tween-20 (PBST). HA-coated plates were blocked with 200 μL of 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology Cat# sc-2325) in 1x PBS and incubated at room temperature for 1 hour. Subsequently, the plates were washed three times with PBST. Once washed, the antibodies (described in the disclosure) were diluted to the desired starting concentration in PBST and loaded onto the serial dilution plate. No sample was added to the last well in the set to obtain the antigen blank reading. The plates were incubated at room temperature for 2 hours, static, and then washed three times with PBST and turned over to dry. Anti-human HRP-conjugated antibody was diluted in PBST and 100 μl of HRP antibody was loaded per well for all wells. After incubation for 1 hour at room temperature, the plates were washed three times with PBST. TMB solution (KPL, Gaithersburg, MD, Cat # 50-76-00) was prepared before use and allowed to warm to room temperature. The TMB solution was then added to the plate and developed until max OD was between 2 and 3 absorbance units at 650 nm as read on a 96-well plate reader (SpectraMax M2e or similar), or 4 minutes after performing density. desired optics, quenched the reaction with 1N H2SO4 and OD at 450 nm in the same plate reader was read on the plate. The OD was plotted as a function of relative concentration and the KD was calculated using a quarter parametric fit.

[0714] Anticorpo Ab 018. O anticorpo Ab 018 foi encontrado ter afinidade de ligação picomolar para as estirpes do Grupo 1 (H1 (A/Ilhas Salomão/3/2006), H5 (A/Vietnam/1203/2004) e H9 (A/Hong Kong/1073-1099 )) e pelo menos uma estirpe do Grupo 2 (H7 (A/Netherlands/219/2003), mas não pelo menos uma estirpe de H3 (A/Wyoming/03/2003)), quando medido por ELISA. Veja a Tabela 5. TABELA 5. ENSAIOS DE LIGAÇÃO DE ANTICORPO VLB = "Very Low Binding" (Ligação muito fraca).[0714] Ab 018 Antibody. Ab 018 antibody was found to have picomolar binding affinity for Group 1 strains (H1 (A/Solomon Islands/3/2006), H5 (A/Vietnam/1203/2004) and H9 ( A/Hong Kong/1073-1099 )) and at least one Group 2 strain (H7 (A/Netherlands/219/2003), but not at least one H3 strain (A/Wyoming/03/2003)), when measured by ELISA. See Table 5. TABLE 5. ANTIBODY BINDING ASSAYS VLB = "Very Low Binding".

[0715]Ab 018 também se liga com alta afinidade a H3 de A/Brisbane/10/2007. A afinidade de ligação era comparável à HA H7. Estendendo o intervalo de doses revelou baixa ligação de afinidade da A18 à A/Wyoming/03/2003 (Figura 5).[0715]Ab 018 also binds with high affinity to H3 of A/Brisbane/10/2007. The binding affinity was comparable to HA H7. Extending the dose range revealed low affinity binding of A18 to A/Wyoming/03/2003 (Figure 5).

[0716]Ab 018 também se liga com elevada afinidade a ambos HA0 e vírus intactos (Figura 6). O epítopo que Ab 018 liga-se é, portanto, presente em ambas HA clivada e não clivada.[0716]Ab 018 also binds with high affinity to both HA0 and intact viruses (Figure 6). The epitope that Ab 018 binds is therefore present on both cleaved and uncleaved HA.

[0717] Anticorpos Ab 004, Ab 005, Ab 031, Ab 032, Ab 037 e Ab 038. As afinidades de ligação para anticorpos selecionados (Ab 004, Ab 005, Ab 031, Ab 032, AB 037 e Ab 038), conforme determinado por ELISA, estão apresentados na Tabela 6 abaixo. TABELA 6. ENSAIOS DE LIGAÇÃO DE ANTICORPO [0717] Antibodies Ab 004, Ab 005, Ab 031, Ab 032, Ab 037 and Ab 038. The binding affinities for selected antibodies (Ab 004, Ab 005, Ab 031, Ab 032, AB 037 and Ab 038), as per determined by ELISA, are presented in Table 6 below. TABLE 6. ANTIBODY BINDING ASSAYS

[0718] Anticorpos Ab 014 e Ab 028. Os anticorpos Ab 014 e Ab 028 foram encontrados para ter uma ampla especificidade, tal como medido pelo ensaio de ELISA (ver Figuras 10A a 10D).[0718] Ab 014 and Ab 028 Antibodies. Ab 014 and Ab 028 antibodies were found to have broad specificity, as measured by the ELISA assay (see Figures 10A to 10D).

[0719] Anticorpo Ab 044. Anticorpo Ab 044 foi encontrado ter menos de 500 pM de afinidade de ligação (Kd) para hemaglutininas (HAS) a partir de uma variedade de estirpes de influenza de diferentes grupos, clades e subtipos, incluindo estirpes do Grupo 1 ("o tipo H1a"(H1 (A/Ilhas Salomão/20/1999, A/Porto Rico/8/34), H2 (A/chicken/PA/2004), H5 (A/Vietnam/1203/2004)); "o tipo H9" (H9 (A/Hong Kong/1073/1999, A/Guinea aves/HK/WF10/99)); "o tipo H1b" (H16 (A/Guincho/Mongolia/1756/2006))) e estirpes do Grupo 2 ("o tipo H3" (H3 (A/Brisbane/10/2007, A/New York/55/2004, A/Wyoming/3/2003, A/Wisconsin/67/2005, A/Moscow/1O/1999, A/Perth/16/2006, A/Uruguai/716/2007)); "o tipo H7" (H7 (A/Netherlands/219/2003))), quando medido por ELISA.[0719] Antibody Ab 044. Antibody Ab 044 was found to have less than 500 pM binding affinity (Kd) for hemagglutinins (HAS) from a variety of influenza strains from different groups, clades and subtypes, including strains from the 1 ("type H1a"(H1 (A/Solomon Islands/20/1999, A/Puerto Rico/8/34), H2 (A/chicken/PA/2004), H5 (A/Vietnam/1203/2004) ); "the H9 type" (H9 (A/Hong Kong/1073/1999, A/Guinea Aves/HK/WF10/99)); "the H1b type" (H16 (A/Guincho/Mongolia/1756/2006) )) and Group 2 strains ("the H3 type" (H3 (A/Brisbane/10/2007, A/New York/55/2004, A/Wyoming/3/2003, A/Wisconsin/67/2005, A /Moscow/1O/1999, A/Perth/16/2006, A/Uruguay/716/2007)); "the H7 type" (H7 (A/Netherlands/219/2003))), when measured by ELISA.

[0720]O anticorpo Ab 044 também foi encontrado ter menos do que 500 pM de afinidade de ligação (Kd) para uma HA de influenza B (B/Wisconsin/1/2010) tal como medido por ELISA.[0720] Antibody Ab 044 was also found to have less than 500 pM binding affinity (Kd) for an influenza B HA (B/Wisconsin/1/2010) as measured by ELISA.

Exemplo 3. A ligação do anticorpo Ab 032 anti-HA a Hemaglutininas a partir de várias estirpes da influenza, tal como medido pela Ressonância de Plasmon de superfície (SPR)Example 3. Binding of anti-HA Ab 032 antibody to Hemagglutinins from various influenza strains, as measured by Surface Plasmon Resonance (SPR)

[0721]O kit CAPtura de biotina Biacore™ GE (Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA) foi utilizado com sucesso para medir as taxas pontuais de associação (kon) e de dissociação (koff), a partir as quais a constante de dissociação (KD = koff/kon) foi obtida entre dois parceiros. Especificamente, a interação de Ab 032 contra o sub- estequiometricamente biotinilada e hemaglutininas H3 imobilizadas (A/Brisbane/1O/07), H7 (A/Netherlands/219/03), H1 (NCalifórnial07/09) e H5 (A/Vietnam/ 1203/2004) a partir de Protein Sciences (Meriden, CT) foram avaliadas utilizando ressonância de plasmon de superfície sobre um BIAcore® 3000 (Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA). O kit contém um chip cuja superfície é modificada de forma covalente com o ADN de cadeia simples. O kit também contém o ADN complementar modificado com estreptavidina, que é captado pela superfície através de hibridação. Hemaglutinina biotiniladas alvo que foram subcultivadas através de duas colunas spin de dessalinização Zeba e Dispositivos 7k PMCO (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) para remover a biotina não incorporada foram aplicadas no nível desejado RU (RU -100 de diferentes ligantes de hemaglutinina em células de fluxo 2, 3, ou 4). O ligante- alvo biotinilado foi imobilizado pela interação biotina- estreptavidina forte, não covalente e modificação de lisinas alvo com um éster NHS activado de biotina (# 21338 EZ-link Sulfo-NHS-LC-LC-biotina a partir de Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) foi realizada sub- estequiometricamente em relação ao monômero de hemaglutinina -72 kDa para ajudar na apresentação de ligante uniforme. Os parâmetros cinéticos foram baseados no encaixe global de 4 ou mais curvas geradas por injeções sequenciais de 30 μl/min de analito de anticorpo 032 Ab de concentração crescente (500 seg de dados de taxa de associação para caber) e acumulação de dados de decaimento quando a injeção foi parada (1200 seg. de dados de dessociação para caber), usando a subtração de referência dupla e uma ligação de 1:1 com o modelo de transferência de massa com um chip acoplado que foi normalizado com 40% de glicerol antes do experimento. Corrida de tampão e diluente para o Ab 032 foi de 1 x PBS (Gibco®, Life Technologies Corporation, Grand Island, NY) em EDTA 3 mM (pH 8,5) e 0,005% de Surfactant P-20 (GE # BR-1000-54, Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA). O software BIAevaluation (versão 4.1.1) foi utilizado no module Kinetics Simultaneous kaikd...', em que o índice de refração foi ajustado para 0, o Rmax foi encaixado localmente e a ligação de 1:1 com transferência de massa foi empregue. Os dados foram 'subtraídos de referência dupla' antes do processamento, no qual o sinal da célula de fluxo de referência (que contém a superfície de estreptavidina mas não hemaglutinina) foi subtraída da célula de fluxo contendo hemaglutinina de interesse; a partir das curvas dentro deste conjunto foram então subtraídos a partir da curva da corrida de injeção de tampão (sem anticorpo). A superfície foi regenerada por desnaturação de ADN com uma injeção de NaOH a 0,25 M e 6 M de guanidina-HCl antes do próximo ciclo de aplicação de DNA de estreptavidina fresco e alvo de hemaglutinina biotinilada para a próxima injeção de concentração de Ab 032. Três ciclos de execução total de injeção em branco foram realizados seguidos de baixo para altas concentrações de analitos de Ab 032, e a terceira injeção em branco foi utilizada para a referência de subtração dupla usando a célula de fluxo 1, que continha conjugado de DNA de estreptavidina hibridizado, mas sem ser carregado com material biotinilado.[0721] The Biacore™ GE biotin CAPtura kit (Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA) was successfully used to measure the point rates of association (kon) and dissociation (koff), from which the dissociation constant (KD = koff/kon) was obtained between two partners. Specifically, the interaction of Ab 032 against the sub-stoichiometrically biotinylated and immobilized hemagglutinins H3 (A/Brisbane/1O/07), H7 (A/Netherlands/219/03), H1 (NCalifornial07/09), and H5 (A/Vietnam /1203/2004) from Protein Sciences (Meriden, CT) were evaluated using surface plasmon resonance on a BIAcore® 3000 (Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA). The kit contains a chip whose surface is covalently modified with single-stranded DNA. The kit also contains streptavidin-modified complementary DNA, which is captured by the surface through hybridization. Biotinylated hemagglutinin targets that were subcultured through two Zeba desalting spin columns and 7k PMCO Devices (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) to remove unincorporated biotin were applied at the desired RU level (RU -100 of different hemagglutinin ligands in cells flow 2, 3, or 4). The biotinylated target ligand was immobilized by strong, non-covalent biotin-streptavidin interaction and modification of target lysines with an activated NHS ester of biotin (#21338 EZ-link Sulfo-NHS-LC-LC-biotin from Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) was performed substoichiometrically relative to the -72 kDa hemagglutinin monomer to aid in uniform ligand presentation. Kinetic parameters were based on global fitting of 4 or more curves generated by sequential injections of 30 μl/min of 032 Ab antibody analyte of increasing concentration (500 sec of association rate data to fit) and accumulation of decay data when injection was stopped (1200 sec of dissociation data to fit), using double reference subtraction and a 1:1 link with the mass transfer model with a coupled chip that was normalized with 40% glycerol prior to experiment. Running buffer and diluent for Ab 032 was 1x PBS (Gibco®, Life Technologies Corporation, Grand Island, NY) in 3 mM EDTA (pH 8.5) and 0.005% Surfactant P-20 (GE#BR- 1000-54, Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA). The BIAevaluation software (version 4.1.1) was used in the Kinetics Simultaneous kaikd...' module, where the refractive index was set to 0, the Rmax was locally fitted and 1:1 bonding with mass transfer was employed. . Data were 'double-reference subtracted' prior to processing, in which the signal from the reference flow cell (which contains surface streptavidin but not hemagglutinin) was subtracted from the hemagglutinin-containing flow cell of interest; from the curves within this set were then subtracted from the curve of the buffer injection run (no antibody). The surface was regenerated by DNA denaturation with an injection of 0.25 M NaOH and 6 M guanidine-HCl before the next cycle of application of fresh streptavidin DNA and biotinylated hemagglutinin target for the next injection of Ab 032 concentration. Three total blank injection run cycles were performed followed by low to high concentrations of Ab 032 analytes, and the third blank injection was used for double subtraction reference using flow cell 1, which contained DNA conjugate. of hybridized streptavidin, but without being loaded with biotinylated material.

[0722]A ligação do analito de anticorpo Ab 032 foi medida contra a hemaglutinina H7 Holanda alvo sub- estequiometricamente biotinilada e imobilizada. Duas diluições em série de Ab 032 de 8 nM a 0,5 nM foram utilizadas contra 85 RU H7 depositado.[0722] Ab 032 antibody analyte binding was measured against the sub-stoichiometrically biotinylated and immobilized target H7 Netherlands hemagglutinin. Two serial dilutions of Ab 032 from 8 nM to 0.5 nM were used against 85 RU H7 deposited.

[0723]Em uma experiência separada, a ligação do analitos de anticorpo Ab 032 foi medida contra hemaglutinina H1 Califórnia 07 alvo sub- estequiometricamente biotinilado e imobilizada. Duas diluições em série de Ab 032 de 8 nM a 0,5 nM foram utilizadas contra 111 RU HI depositado.[0723] In a separate experiment, binding of Ab 032 antibody analytes was measured against substoichiometrically biotinylated and immobilized target H1 California 07 hemagglutinin. Two serial dilutions of Ab 032 from 8 nM to 0.5 nM were used against 111 RU HI deposited.

[0724]Os resultados são mostrados na Tabela 7 abaixo. TABELA 7. AFINIDADE DE LIGAÇÃO DE AB 032 TA COMO MEDIDO POR [0724]The results are shown in Table 7 below. TABLE 7. BONDING AFFINITY OF AB 032 TA AS MEASURED BY

[0725]A taxa de dissociação (koff para Ab 032 interagindo com H5 Vietnã era tão lento que caiu fora da faixa de especificações de medição Biacore (<5x10-6 S-1), e, portanto, é designado como não disponível (NA) na Tabela 7. Uma vez que a constante de dissociação (KD) é determinada pela taxa de dissociação, dividido pela taxa de associação, ele também tem a designação de NA.[0725]The dissociation rate (koff for Ab 032 interacting with H5 Vietnam was so slow that it fell outside the range of Biacore measurement specifications (<5x10-6 S-1), and is therefore designated as not available (NA ) in Table 7. Since the dissociation constant (KD) is determined by the dissociation rate divided by the association rate, it also has the designation NA.

Exemplo 4. Atividade Antiviral In vitro de anticorpos antiHAExample 4. In vitro antiviral activity of antiHA antibodies Ensaio CIM, ensaio ECP e qRT-PCR.CIM assay, ECP assay and qRT-PCR.

[0726]Os anticorpos foram testados para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). Apesar dos resultados do ensaio ELISA (mostrado no Exemplo 2), indicando que A18 não se liga uma estirpe de H3 (A/Wyoming/03/2003), A18 neutralizou estirpes de ambos H1N1 (PR8) e uma estirpe diferente de H3N2 (X-31) in vitro em um ensaio de CIM. CIM de A18 com PR8 foi de cerca de 26 μg/mL e CIM da A18 com a X-31 foi de cerca de 421 μg/mL.[0726] Antibodies were tested to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). Despite the results of the ELISA assay (shown in Example 2) indicating that A18 does not bind a strain of H3 (A/Wyoming/03/2003), A18 neutralized strains of both H1N1 (PR8) and a different strain of H3N2 (X -31) in vitro in an MIC assay. MIC of A18 with PR8 was about 26 μg/mL and MIC of A18 with X-31 was about 421 μg/mL.

[0727]Os anticorpos descritos na Tabela 6 também neutralizaram os vírus H1N1 e H3N2 in vitro. Veja abaixo na Tabela 8. TABELA 8. RESULTADOS DE ENSAIOS DE CIM [0727] The antibodies described in Table 6 also neutralized the H1N1 and H3N2 viruses in vitro. See below in Table 8. TABLE 8. CIM TESTS RESULTS

[0728]Em um ensaio de efeito citopático (CPE), A18 a 10 μg/ml e 50 μg/mL demonstraram inibição próxima a completa de infecção de X-31 enquanto que o anticorpo de controle AB1 anti-HA a 10 μg/mL e 50 μg/mL apresentaram pouca ou nenhuma inibição da infecção por X-31 (A Figura 4). AB 1 liga-se a região de haste do trímero de HA.[0728] In a cytopathic effect assay (CPE), A18 at 10 μg/ml and 50 μg/mL demonstrated near-complete inhibition of X-31 infection while the control antibody AB1 anti-HA at 10 μg/mL and 50 μg/mL showed little or no inhibition of X-31 infection (Figure 4). AB 1 binds to the stem region of the HA trimer.

[0729]Um ensaio qPCR de quantificação de X-31 de RNA viral indicou ainda que o IC50 de A18 é provável ser significativamente menor do que 10 μg/mL. Experiências de RT-PCR revelaram que A18 poderia neutralizar várias estirpes de H3N2, incluindo Vic75 (IC50 = 2 μg/mL), X-31 (IC50 = 0,4 μg/mL) e Bris07 (IC50 = ~ 7 μg/mL).[0729] A qPCR assay quantifying X-31 viral RNA further indicated that the IC50 of A18 is likely to be significantly less than 10 μg/mL. RT-PCR experiments revealed that A18 could neutralize several H3N2 strains, including Vic75 (IC50 = 2 μg/mL), X-31 (IC50 = 0.4 μg/mL), and Bris07 (IC50 = ~7 μg/mL). .

Ensaios Visuais e Vermelho Neutro.Visual Rehearsals and Neutral Red.

[0730]A validação externa no potencial de neutralização in vitro de Ab 032 foi confirmado pelos ensaios visuais e vermelho neutro.[0730] External validation on the in vitro neutralization potential of Ab 032 was confirmed by visual and neutral red assays.

[0731]Resumidamente, os anticorpos foram preparados em solução MEM com 50 μg/mL de gentamicina. A partir de 500 μg/mL como a maior concentração, diluições semi-log foram preparadas e adicionadas a 5 poços cada um em uma placa de 96 poços com células MDCK em confluência. Três poços de cada diluição foram infectados com um título baixo de vírus e dois poços permaneceram não infectados como controles de toxicidade. As placas foram incubadas 3-6 dias até os poços de controle de vírus terem atingido o máximo efeito citopático (CPE). As placas foram avaliadas tanto por contagem visual de CPE ou coradas com corante vermelho neutro durante aproximadamente 2 horas, em seguida, o corante sobrenadante foi removido dos poços e o corante incorporado foi extraído em tampão de citrato de Sorensen 50:50/etanol, em seguida, a densidade óptica (O.D.) foi lida em um espectrofotômetro. A D.O. foi então convertida em percentagem de controles de células e normalizada para o controle de vírus, então a concentração do composto de teste necessária para inibir o CPE em 50% (EC50) foi calculada por análise de regressão. A concentração do composto que causa 50% de CPE na ausência de vírus foi calculada de forma semelhante (CC50). O índice de seletividade (SI) é o CC50 dividido pelo EC50.[0731] Briefly, antibodies were prepared in MEM solution with 50 μg/mL gentamicin. Starting from 500 μg/mL as the highest concentration, half-log dilutions were prepared and added to 5 wells each in a 96-well plate with confluent MDCK cells. Three wells of each dilution were infected with a low titer of virus and two wells remained uninfected as toxicity controls. Plates were incubated 3-6 days until virus control wells reached maximum cytopathic effect (CPE). Plates were evaluated by either visual CPE counting or stained with neutral red dye for approximately 2 hours, then the supernatant dye was removed from the wells and the incorporated dye was extracted in 50:50 Sorensen citrate/ethanol buffer in Then, the optical density (O.D.) was read on a spectrophotometer. The D.O. was then converted to percentage of cell controls and normalized to the virus control, then the concentration of test compound required to inhibit CPE by 50% (EC50) was calculated by regression analysis. The concentration of the compound causing 50% CPE in the absence of virus was calculated in a similar way (CC50). The selectivity index (SI) is the CC50 divided by the EC50.

[0732]Os resultados são apresentados na Tabela 9 abaixo. TABELA 9. RESULTADOS DOS ENSAIOS VISUAL E VERMELHO NEUTRO PARA AB 032 aSI é o índice de seletividade (CC50:EC50)[0732]The results are presented in Table 9 below. TABLE 9. RESULTS OF VISUAL AND NEUTRAL RED TESTS FOR AB 032 aSI is the selectivity index (CC50:EC50)

[0733]O efeito antiviral in vitro de Ab 044 foi também examinado pelo ensaio descrito acima. Os resultados são mostrados na Tabela 10. Ab 044, in vitro, mostrou inibição viral dependente da dose in vitro com uma EC50 no intervalo de 0,3-6,8 μg/mL contra todas as estirpes de vírus do Grupo 1 e Grupo 2 testadas. Tabela 10. Resultados do ensaio de Vemelho Neutro para Ab 044 aInoculum, 50% de dose infectada de cultura de células (CCID50) de vírus por poço bCC50 = 50% de concentração do composto tóxico sem vírus adicionado (μg/mL) cEC50 = 50% de concentração antiviral eficaz (μg/mL) dSI = CC50/EC50 eEstirpe de rato adaptada[0733] The in vitro antiviral effect of Ab 044 was also examined by the assay described above. The results are shown in Table 10. Ab 044, in vitro, showed dose-dependent viral inhibition in vitro with an EC50 in the range of 0.3-6.8 μg/mL against all Group 1 and Group 2 virus strains tested. Table 10. Neutral Red assay results for Ab 044 aInoculum, 50% cell culture infected dose (CCID50) of virus per well bCC50 = 50% concentration of toxic compound without added virus (μg/mL) cEC50 = 50% effective antiviral concentration (μg/mL) dSI = CC50/EC50 eAdapted mouse strain

Exemplo 5. Ensaio de Resistência de Fármacos In vitroExample 5. In vitro Drug Resistance Assay

[0734]O surgimento de resistência aos fármacos foi avaliado após a exposição contínua da estirpe da influenza H1N1 PR8 a anticorpos de anti-influenza HA-alvo aqui descritos. Em resumo, PR8 foi pré-incubado com um anticorpo no IC50 durante 40 minutos antes de infectar as células MDCK confluentes em um formato de placa de 96 poços. A infecção ocorreu durante 1 h, altura em que o anticorpo e meio contendo vírus foram removidos e substituídos com meio isento de vírus contendo o anticorpo no IC50. Após 48 horas de incubação a 37°C, 5% de CO2, o sobrenadante foi removido e título viral foi quantificado por PCR em tempo real utilizando iniciadores específicos para a proteína de vírus M. Uma vez titulados, os sobrenadantes virais foram diluídos e utilizados para re-infectar células MDCK ao mesmo UFP/mL após uma pré-incubação com a fármaco no IC50. À medida que cada rodada de re-infecção continua sob pressão de fármacos, há um aumento da probabilidade de seleção de populações resistentes. C179 foi avaliada como um agente de controle, uma vez que é um agente anti-influenza conhecido que tem como alvo a região de haste de HA (Okuna et al., J. Virol. 1993).[0734] The emergence of drug resistance was assessed following continuous exposure of the H1N1 PR8 influenza strain to the HA-targeted anti-influenza antibodies described here. Briefly, PR8 was preincubated with an antibody at IC50 for 40 minutes before infecting confluent MDCK cells in a 96-well plate format. Infection occurred for 1 h, at which time the antibody and virus-containing medium were removed and replaced with virus-free medium containing the antibody at IC50. After 48 hours of incubation at 37°C, 5% CO2, the supernatant was removed and viral titer was quantified by real-time PCR using primers specific for the M virus protein. Once titrated, the viral supernatants were diluted and used. to re-infect MDCK cells at the same PFU/mL after pre-incubation with the drug at IC50. As each round of re-infection continues under drug pressure, there is an increased likelihood of selection of resistant populations. C179 was evaluated as a control agent since it is a known anti-influenza agent that targets the HA stem region (Okuna et al., J. Virol. 1993).

[0735]Um exemplo utilizando dois anticorpos estaminais anti-HA de controle, AB1 e C179 (Takara), é mostrado na Figura 11. A concentração de ambos os anticorpos foi mantida a 1 μg/mL (níveis de IC50 de partida para ambos). Após 5 ciclos de passagem na presença de C179, mas não na presença de AB1, títulos virais de PR8 se recuperaram, o que sugere que sob determinadas condições PR8 é resistente ao escape de AB1, mas não àquela de C179.[0735] An example using two control anti-HA stem antibodies, AB1 and C179 (Takara), is shown in Figure 11. The concentration of both antibodies was maintained at 1 μg/mL (starting IC50 levels for both) . After 5 cycles of passage in the presence of C179, but not in the presence of AB1, PR8 viral titers recovered, suggesting that under certain conditions PR8 is resistant to escape from AB1, but not to that from C179.

[0736]Ambos AB1 e C179 inibiram a propagação de PR8 em células MDCK, porém esta inibição foi perdida ao longo de cinco rodadas de passagem com tratamento C179 enquanto estava retido durante um tratamento AB1. Fármacos que passaram PR8 foram purificados em placa para isolar dez placas que foram sequenciadas para HA para confirmar que AB1 não estava gerando populações resistentes minoritárias.[0736] Both AB1 and C179 inhibited the propagation of PR8 in MDCK cells, however this inhibition was lost over five rounds of passage with C179 treatment while it was retained during an AB1 treatment. Drugs that passed PR8 were plaque purified to isolate ten plaques that were sequenced for HA to confirm that AB1 was not generating minority resistant populations.

[0737]Estes resultados indicam que o tratamento de células com AB1 preveniu a produção de mutantes por, pelo menos, cinco rodadas de infecciosidade.[0737] These results indicate that treatment of cells with AB1 prevented the production of mutants for at least five rounds of infectivity.

Exemplo 6. Inibições de Fusão Celular Mediada por H5 por anticorpos Anti-HAExample 6. Inhibitions of H5-Mediated Cell Fusion by Anti-HA Antibodies

[0738]Ab 032 e Ab 044 foram avaliados quanto à sua capacidade de bloquear a fusão célula-célula. Resumidamente, o ensaio utiliza células HEK293 que expressam estavelmente e mostram H5 (Viet04). A hemaglutinina acoplada à membrana pode ser induzida para converter a sua conformação de fusão por uma breve (3 minutos) exposição a um pH baixo (5,0). Um período de incubação de 3 horas se segue para permitir que as células recuperem e fundem para formar sincícios. Um corante nuclear é utilizado para auxiliar na visualização dos referidos produtos de fusão e a sua contagem é utilizada como um indicador da atividade de fusão. O anticorpo de teste é adicionado quer antes ou depois do tratamento de baixo pH para determinar com que fases do processo de fusão ele interfere.[0738]Ab 032 and Ab 044 were evaluated for their ability to block cell-cell fusion. Briefly, the assay utilizes HEK293 cells that stably express and display H5 (Viet04). Membrane-coupled hemagglutinin can be induced to convert its fusion conformation by brief (3 minutes) exposure to low pH (5.0). A 3-hour incubation period follows to allow the cells to recover and fuse to form syncytia. A nuclear dye is used to aid in the visualization of said fusion products and its count is used as an indicator of fusion activity. The test antibody is added either before or after the low pH treatment to determine which phases of the fusion process it interferes with.

[0739]Ab 032 ou Ab 044 foi adicionado aos níveis indicados para culturas em placas de 96 poços de células HEK293 que exibem H5 superfície (Viet04) ou 1 hora antes ou imediatamente após a indução do AH, na sua conformação de fusão por um pH baixo de 3 minutos (5,0) ou pH neutro (7,0; controle). Após a indução de 3 minutos para estimular a fusão das células, o tampão foi substituído com meio de cultura completo (pH 7,4) e as células foram deixadas recuperar e fundir durante um período de incubação de 2-3 horas. As culturas celulares foram tratadas com Ab 032 a 0, 10 ou 100 μg/mL ou com o Ab 044 a 0, 0,2, 0,78, 3,13, 12,5, ou 50 μg/mL, antes ou após a indução de fusão por baixo pH ou tratamento com tampão de controle a pH neutro. As células foram então fixadas e coradas com os seus núcleos Hema-3. O grau de fusão celular foi medido pelo número de sincicios observados sob a lente do microscópio (20X) por campo (Figura 15).[0739] Ab 032 or Ab 044 was added at the indicated levels to cultures in 96-well plates of HEK293 cells displaying surface H5 (Viet04) or 1 hour before or immediately after induction of AH, in its fusion conformation by a pH low for 3 minutes (5.0) or neutral pH (7.0; control). After the 3 minute induction to stimulate cell fusion, the buffer was replaced with complete culture medium (pH 7.4) and the cells were allowed to recover and fuse over a 2-3 hour incubation period. Cell cultures were treated with Ab 032 at 0, 10, or 100 μg/mL or with Ab 044 at 0, 0.2, 0.78, 3.13, 12.5, or 50 μg/mL, before or after the induction of melting by low pH or treatment with control buffer at neutral pH. The cells were then fixed and stained with their Hema-3 nuclei. The degree of cell fusion was measured by the number of syncytia observed under the microscope lens (20X) per field (Figure 15).

[0740] Como mostrado na Figura 15, 032 Ab é eficaz na inibição da fusão de células apenas quando adicionado à cultura de células antes da ativação de HA por baixo pH.[0740] As shown in Figure 15, 032 Ab is effective in inhibiting cell fusion only when added to cell culture prior to HA activation by low pH.

[0741] Como mostrado na Figura 18, a formação de sincícios entre células expressando HA foi inibida com o pré-tratamento de Ab 044 de uma maneira responsiva a dose. O resultado indicou que o Ab 044 foi capaz de bloquear a fusão mediada por HA, se presentes, antes da exposição ao tampão de pH baixo, presumivelmente através da ligação a HA e prevenção da sua conversão para a conformação ativa/fusogênica. Ab 044 não inibe a aglutinação de tRBC por vírus H1N1.[0741] As shown in Figure 18, the formation of syncytia between HA-expressing cells was inhibited with Ab 044 pretreatment in a dose-responsive manner. The result indicated that Ab 044 was able to block HA-mediated fusion, if present, prior to exposure to low pH buffer, presumably by binding to HA and preventing its conversion to the active/fusogenic conformation. Ab 044 does not inhibit tRBC agglutination by H1N1 viruses.

Exemplo 7. Efeito profilático e terapêutico de anticorpos anti-HA em um modelo de Co-Infecção de murinoExample 7. Prophylactic and therapeutic effect of anti-HA antibodies in a murine Co-Infection model

[0742]A administração terapêutica de Ab 032 e Ab 028 resgatou ratos desafiados com H1N1 e H3N2.[0742]Therapeutic administration of Ab 032 and Ab 028 rescued rats challenged with H1N1 and H3N2.

[0743] Para testar o efeito de anticorpos anti-HA in vivo, foi utilizado um modelo de rato com co-infecção (McCullers, "Efeito do tratamento antiviral sobre o resultado da pneumonia bacteriana secundária após Influenza" Jour Infect Dis 190:519-526, 2004). Resumidamente, no dia zero, os ratos foram anestesiados sob isoflurano e desafiados por via intranasal com a influenza H1N1 a 100 PFU/head em um volume de 50 μL de PBS. No dia 7, após a infecção viral, os ratos foram anestesiados sob isoflurano e desafiados por via intranasal com Streptococcus pneumoniae a uma dose de 200 CFU/head em um volume de 50 μL de PBS. Os animais foram administrados por injeção intraperitoneal do fármaco (IP) de tratamento, em um volume de 200 μL nos dias indicados na Tabela 11. Uma vez que o regime de anestesia pode contribuir para o estado de doença, todos os ratos foram anestesiados em ambas as etapas de infecção. Os pulmões foram colhidos no dia quatro infecção pós-viral para a determinação da carga viral e no dia onze de infecção pós-viral para a determinação da carga bacteriana. Os pulmões foram armazenados a -80°C, até ao momento em que todas as amostras puderam ser analisadas para cargas virais e microbianas, respectivamente. Pontuação de peso e corpo dos animais foram registrados diariamente. Os animais foram sacrificados após a perda de peso considerável (> 20%) em conjunto com indicadores físicos da doença, tais como piloereção.[0743] To test the effect of anti-HA antibodies in vivo, a mouse model with co-infection was used (McCullers, "Effect of Antiviral Treatment on the Outcome of Secondary Bacterial Pneumonia after Influenza" Jour Infect Dis 190:519- 526, 2004). Briefly, on day zero, mice were anesthetized under isoflurane and challenged intranasally with H1N1 influenza at 100 PFU/head in a volume of 50 μL of PBS. On day 7, after viral infection, mice were anesthetized under isoflurane and challenged intranasally with Streptococcus pneumoniae at a dose of 200 CFU/head in a volume of 50 μL of PBS. Animals were administered by intraperitoneal injection of the treatment drug (IP) in a volume of 200 μL on the days indicated in Table 11. Since the anesthesia regimen may contribute to the disease state, all rats were anesthetized on both the infection stages. Lungs were harvested on day four post-viral infection to determine viral load and on day eleven post-viral infection to determine bacterial load. The lungs were stored at -80°C until all samples could be analyzed for viral and microbial loads, respectively. Animal weight and body scores were recorded daily. Animals were euthanized following considerable weight loss (>20%) in conjunction with physical indicators of disease such as piloerection.

[0744]Um esquema da concepção experimental é apresentado na Tabela 11 abaixo. O grupo controle negativo foi co-infectado, mas não recebeu agente PBS diferente. A ribavirina, um inibidor conhecido de H1N1, foi utilizado como controle positivo para a atividade antiviral. A azitromicina, um inibidor conhecido de Streptococcus pneumoniae, foi utilizado como controle positivo para a atividade antibacteriana. Ab 032 foi administrado como profilaxia em uma única dose de 24 h antes da infecção a 10 mg/kg ou como uma terapia de dose única de 48 h após a infecção a 10 mg/kg. Ab 028 a 10 mg/kg foi administrado como terapia de dose única de 48 h após a infecção. TABELA 11. CONCEPÇÃO EXPERIMENTAL PARA MODELO DE CO- INFECÇÃO EM MURINO [0744] A schematic of the experimental design is presented in Table 11 below. The negative control group was coinfected but did not receive a different PBS agent. Ribavirin, a known inhibitor of H1N1, was used as a positive control for antiviral activity. Azithromycin, a known inhibitor of Streptococcus pneumoniae, was used as a positive control for antibacterial activity. Ab 032 was administered as a single-dose prophylaxis 24 h before infection at 10 mg/kg or as a single-dose therapy 48 h after infection at 10 mg/kg. Ab 028 at 10 mg/kg was administered as single-dose therapy 48 h postinfection. TABLE 11. EXPERIMENTAL DESIGN FOR MURINE CO-INFECTION MODEL

[0745]As curvas de sobrevida foram geradas para descrever o resultado experimental. O tratamento de ribavirina falhou para resgatar a morte de animais, enquanto a terapia Ab 028 resultou em 100% de sobrevivência (Figura 16). Ab 032 tanto como profilaxia ou como terapia a 10 mg/kg protegeu 80% dos ratos de morte devido à infecção pneumocócica secundária, apesar de não compreender atividade inibitória antibacteriana direta (Figura 9A, 9B e 9C).[0745] Survival curves were generated to describe the experimental result. Ribavirin treatment failed to rescue animal death, while Ab 028 therapy resulted in 100% survival (Figure 16). Ab 032 either as prophylaxis or as therapy at 10 mg/kg protected 80% of mice from death due to secondary pneumococcal infection, despite not comprising direct antibacterial inhibitory activity (Figure 9A, 9B and 9C).

[0746] Tomados em conjunto, Ab 028 e Ac 032 não pode apenas ter impacto induzido pelo vírus, mas também a prevenção de complicações, a partir de infecções bacterianas secundárias oportunistas, tais como a partir de Streptococcus pneumoniae.[0746] Taken together, Ab 028 and Ac 032 can not only have virus-induced impact, but also prevent complications from opportunistic secondary bacterial infections, such as from Streptococcus pneumoniae.

Exemplo 8. Eficácia Profilática e Terapêutica de Anticorpos de anti-HA AB1 e A18 em Modelos de Ratos H1N1 e H3N2Example 8. Prophylactic and Therapeutic Efficacy of Anti-HA AB1 and A18 Antibodies in H1N1 and H3N2 Mouse Models

[0747]A eficácia profilática e terapêutica de anticorpos anti-HA AB 1 e A18 foi investigada nos modelos de ratos H3N2 e H1N1, essencialmente, da mesma forma como descrito no Exemplo 10.[0747] The prophylactic and therapeutic efficacy of anti-HA antibodies AB 1 and A18 was investigated in the H3N2 and H1N1 mouse models in essentially the same way as described in Example 10.

[0748]Os resultados são mostrados nas FiguraS 7A-7B. AB 1 e A18 foram eficazes a 10 mg/kg contra H1N1 (PR8) quando administrados a ratos de 48 h após a infecção (Figura 7A). A18 também foi eficaz a 10 mg/kg contra H3N2 (Vic75) quando administrado a ratos como profilaxia ou 48 h após a infecção (Figura 7B).[0748] The results are shown in Figures 7A-7B. AB 1 and A18 were effective at 10 mg/kg against H1N1 (PR8) when administered to mice 48 h postinfection (Figure 7A). A18 was also effective at 10 mg/kg against H3N2 (Vic75) when administered to mice as prophylaxis or 48 h postinfection (Figure 7B).

Exemplo 9. Eficácia Profilática e Terapêutica de Anticorpos de anti-HA Ab 028, Ab 031 e Ab 032 em Modelos de Ratos H1N1 e H3N2Example 9. Prophylactic and Therapeutic Efficacy of Anti-HA Antibodies Ab 028, Ab 031 and Ab 032 in H1N1 and H3N2 Mouse Models

[0749]A eficácia profilática e terapêutica de anticorpos anti-HA 028 Ab, Ab 031 e Ab 032 foi investigada em modelos de rato H1N1 e H3N2, essencialmente, da mesma forma como descrito no Exemplo 10.[0749] The prophylactic and therapeutic efficacy of anti-HA 028 Ab, Ab 031 and Ab 032 antibodies was investigated in H1N1 and H3N2 mouse models in essentially the same way as described in Example 10.

[0750]Os resultados são mostrados nas FiguraS 8A-8B. Figura 8A indica o tempo de sobrevivência de ratos H1N1 infectados que foram administrados com a terapia de anticorpo-HA 48 horas após a infecção. A Figura 8B indica o tempo de sobrevivência de ratos infectados com H3N2 administrados com terapia de anticorpo de HA 48 horas após a infecção.[0750] The results are shown in Figures 8A-8B. Figure 8A indicates the survival time of infected H1N1 mice that were administered HA-antibody therapy 48 hours after infection. Figure 8B indicates the survival time of H3N2-infected mice administered HA antibody therapy 48 hours post-infection.

Exemplo 10. Eficácia Profilática e a Terapêutica de Anticorpos anti-HA Ab 044 em Modelos de Ratos H1N1 e H3N2Example 10. Prophylactic and Therapeutic Efficacy of Anti-HA Ab 044 Antibodies in H1N1 and H3N2 Mouse Models

[0751]Experimentos In vivo foram realizados para investigar o potencial do agente Ab 044 tanto como terapia quanto profilaxia nos modelos de rato H1N1 e H3N2 letal. Um projeto de dose-resposta foi utilizado para discriminar as quantidades mínimas de fármaco necessárias para a eficácia terapêutica. Ab 044 é por vezes referido aqui como G044, G44 ou Ab044,[0751] In vivo experiments were performed to investigate the potential of the Ab 044 agent as both therapy and prophylaxis in the lethal H1N1 and H3N2 mouse models. A dose-response design was used to discriminate the minimum amounts of drug required for therapeutic efficacy. Ab 044 is sometimes referred to here as G044, G44 or Ab044,

[0752]Resumidamente, ambos os modelos de rato H1N1 e H3N2 foram letais, com uma dose de desafio de PR8 a 100 PFU/head e de Victoria a 10.000 PFU/head. Ratos foram anestesiados sob isoflurano e desafiados IN com 50 μl de suspensão viral. Os animais foram administrados com agente de IP em um volume de 200 μl, (a) como profilaxia um dia antes da infecção, (b) como terapia dois dias após a infecção, ou (c) como terapia três dias após a infecção. O peso e a aparência dos animais foram registados diariamente. Os animais foram sacrificados após a perda de peso considerável (> 20%) em conjunto com a pontuação mais alta do corpo, indicando doença. Os pulmões foram colhidos a partir de alguns animais a quatro dias após a infecção para a determinação da carga viral por ensaio de placas. Em adição, os pulmões no dia oito foram submetidos a exame histológico. O estudo foi realizado como se segue (Tabela 12). TABELA 12. CONCEPÇÃO EXPERIMENTAL [0752] Briefly, both H1N1 and H3N2 mouse models were lethal, with a challenge dose of PR8 at 100 PFU/head and Victoria at 10,000 PFU/head. Mice were anesthetized under isoflurane and challenged IN with 50 μl of viral suspension. Animals were administered with IP agent in a volume of 200 μl, (a) as prophylaxis one day before infection, (b) as therapy two days after infection, or (c) as therapy three days after infection. The weight and appearance of the animals were recorded daily. Animals were euthanized following considerable weight loss (>20%) in conjunction with the highest body score indicating disease. Lungs were collected from some animals four days after infection to determine viral load by plaque assay. In addition, the lungs on day eight were subjected to histological examination. The study was carried out as follows (Table 12). TABLE 12. EXPERIMENTAL DESIGN

RESUMO DOS RESULTADOSSUMMARY OF RESULTS

[0753]Em modelos de desafio letais contra a influenza H1N1 (A/Porto Rico/08/I934; vírus do Grupo I) ou H3N2 (A/Victoria/03/I975; Grupo 2 do vírus), uma única injeção de Ab 044 a 10 mg/kg (48 horas pós infecção) ou 20 mg/kg (72 horas após a infecção) conduz a 100% de sobrevivência dos ratos (n = 5 por braço) se for administrado terapeuticamente. Sobrevivência é correlacionada com métricas secundárias, incluindo queda de título viral e redução na perda de peso induzida por virus e pontuação corporal.[0753] In lethal challenge models against influenza H1N1 (A/Puerto Rico/08/I934; Group I virus) or H3N2 (A/Victoria/03/I975; Group 2 virus), a single injection of Ab 044 at 10 mg/kg (48 hours post infection) or 20 mg/kg (72 hours post infection) leads to 100% mouse survival (n = 5 per arm) if administered therapeutically. Survival is correlated with secondary metrics including drop in viral titer and reduction in virus-induced weight loss and body score.

[0754]Em modelos de desafio letais contra a influenza H1N1 (A/Porto Rico/08/I934) ou H3N2 (A/Victoria/03/I975), uma única injeção de Ab 044 a 10 mg/kg (24 horas infecção pré conduz a 100% de proteção de ratos (n = 5 por braço) se for administrado profilaticamente. A sobrevivência é correlacionada com as métricas secundárias, incluindo queda de título viral e redução na perda de peso induzida pelo vírus e pontuação corporal.[0754] In lethal challenge models against H1N1 (A/Puerto Rico/08/I934) or H3N2 (A/Victoria/03/I975) influenza, a single injection of Ab 044 at 10 mg/kg (24 hours pre-infection leads to 100% protection of mice (n = 5 per arm) if administered prophylactically.Survival is correlated with secondary metrics including drop in viral titer and reduction in virus-induced weight loss and body score.

[0755]Os resultados experimentais detalhados são apresentados abaixo.[0755] Detailed experimental results are presented below.

Resultados de H1N1H1N1 Results

[0756] Sugestões visuais. Os animais foram monitorados por sinais de doença (pele enrugada, curvando) diariamente. A pontuação visual reflete a média do grupo; aqui, as linhas sem marcadores de ponto refletem a média de recuperação de sobrevivente (s).[0756] Visual cues. Animals were monitored for signs of illness (wrinkled, bowing skin) daily. The visual score reflects the group average; here, lines without dot markers reflect the average recovery of survivor(s).

[0757]Os ratos que foram desafiados com H1N1 apareceram doentes três dias após a infecção e foram sacrificados no dia sete, como esperado. Ratos que foram desafiados com H1N1 e tratados com ribavirina exibiu sinal insignificante da doença e se recuperaram totalmente. Os ratos que foram tratados com Ab 044 um dia antes de desafiar a 2,5 mg/kg ou 10 mg/kg não exibiram nenhum sinal de doença. Os ratos que foram tratados com Ab 044 um dia antes do desafio a 0,6 mg/kg exibiu sinais de doença; 60% se recuperaram.[0757] Mice that were challenged with H1N1 appeared sick three days after infection and were sacrificed on day seven, as expected. Mice that were challenged with H1N1 and treated with ribavirin exhibited negligible sign of the disease and fully recovered. Mice that were treated with Ab 044 the day before challenge at 2.5 mg/kg or 10 mg/kg did not exhibit any signs of illness. Mice that were treated with Ab 044 the day before challenge at 0.6 mg/kg exhibited signs of illness; 60% recovered.

[0758]Agente Ab 044 foi administrado de um modo de resposta à dose dois dias após a infecção. Os animais que receberam 10 mg/kg exibiram pouco sinal de doença, enquanto os animais que receberam 2,5 mg/kg ou 0,6 mg/kg ficram muito doentes com algumas mortes contadas nos dois grupos. Agente Ab 044 também foram administrados a 20 mg/kg três dias após a infecção; os animais se beneficiaram de terapia, com uma clara diferença entre os animais tratados e não tratados em seis dias e recuperação total pelo dia sete.[0758] Agent Ab 044 was administered in a dose-response manner two days after infection. Animals receiving 10 mg/kg exhibited little sign of illness, while animals receiving 2.5 mg/kg or 0.6 mg/kg became very ill with some deaths reported in both groups. Agent Ab 044 were also administered at 20 mg/kg three days after infection; The animals benefited from therapy, with a clear difference between treated and untreated animals at six days and full recovery by day seven.

[0759]Os animais também foram monitorados quanto à perda de peso. A alteração reflete o peso médio do grupo; aqui, as linhas sem marcadores de ponto refletem a média de recuperação de sobrevivente (s).[0759]The animals were also monitored for weight loss. The change reflects the average weight of the group; here, lines without dot markers reflect the average recovery of survivor(s).

[0760]Os ratos que foram desafiados com H1N1 perderam> 20% de peso por dia e sete foram submetidos a eutanásia, como esperado. Os ratos que foram desafiados mas tratados com ribavirina a 75 mg/kg uma vez por dia durante três dias exibiram <10% de perda de peso e se recuperaram. Os ratos que foram tratados com Ab 044 um dia antes de desafiar a 2,5 mg/kg ou 10 mg/kg não exibiu nenhuma perda de peso ou ganho de peso ao longo do tempo. Os ratos que foram tratados com profilaxia de Ab 044 a 0,6 mg/kg perderam uma quantidade substancial de peso, com três de cinco animais perdendo > 16% do peso corporal; dois dos cinco animais foram sacrificados (Figura 19A).[0760] Mice that were challenged with H1N1 lost > 20% of weight per day and seven were euthanized, as expected. Mice that were challenged but treated with ribavirin at 75 mg/kg once daily for three days exhibited <10% weight loss and recovered. Mice that were treated with Ab 044 the day before challenge at 2.5 mg/kg or 10 mg/kg exhibited no weight loss or weight gain over time. Rats that were treated with Ab 044 prophylaxis at 0.6 mg/kg lost a substantial amount of weight, with three of five animals losing >16% of body weight; two of the five animals were sacrificed (Figure 19A).

[0761] Teraia com Ab 044 foi administrada de um modo de resposta à dose. Os animais que receberam 10 mg/kg exibiram 10% de perda de peso e se recuperaram. Os animais que receberam 2,5 mg/kg perderam peso de forma substancial com quatro dos cinco animais perdendo > 16% do peso corporal; três animais foram sacrificados. Todos, exceto um animal que recebeu 0,6 mg/kg, perderam > 20% do peso corporal e foram eutanasiados (Figura 19B).[0761] Ab 044 therapy was administered in a dose-response manner. Animals receiving 10 mg/kg exhibited 10% weight loss and recovered. Animals receiving 2.5 mg/kg lost substantial weight with four of five animals losing >16% of body weight; three animals were sacrificed. All but one animal receiving 0.6 mg/kg lost >20% of body weight and was euthanized (Figure 19B).

[0762]Em resumo, profilaxia com Ab 044 um dia antes do desafio previne a morte de infecção por H1N1 quando administrado a > 2,5 mg/kg. Terapia com Ab 044 dois dias após a infecção resgatou os ratos da morte quando administrado a 10 mg/kg, enquanto terapia de Ab 044 três dias após a infecção a 20 mg/kg foi totalmente eficaz.[0762] In summary, prophylaxis with Ab 044 one day before challenge prevents death from H1N1 infection when administered at > 2.5 mg/kg. Ab 044 therapy two days after infection rescued mice from death when administered at 10 mg/kg, while Ab 044 therapy three days after infection at 20 mg/kg was completely effective.

[0763] Carga viral. As cargas virais pulmonares quatro dias após a infecção H1N1 foram avaliadas em um ensaio de placa única (Tabela 13). As reduções na carga viral pulmonar foram mais substanciais do que o esperado em três grupos: ribavirina, Ab 044 na profilaxia a 10 mg/kg e Ab 044 na profilaxia a 2,5 mg/kg. As cargas virais nas amostras foram confirmadas por um ensaio de placa de repetição, em seguida, novamente por qPCR (dados não mostrados) e, portanto, aqui relatados. TABELA 13. CARGA VIRAL PULMONAR EM RATOS QUATRO DIAS APÓS O DESAFIO COM H1N1 [0763] Viral load. Lung viral loads four days after H1N1 infection were assessed in a single-plate assay (Table 13). Reductions in lung viral load were more substantial than expected in three groups: ribavirin, Ab 044 at 10 mg/kg prophylaxis, and Ab 044 at 2.5 mg/kg prophylaxis. Viral loads in the samples were confirmed by a repeat plaque assay then again by qPCR (data not shown) and therefore reported here. TABLE 13. LUNG VIRAL LOAD IN MICE FOUR DAYS AFTER H1N1 CHALLENGE

[0764]As comparações foram feitas entre os grupos de tratamento para avaliar a significância das reduções de pulmão carga viral. Significância (p <0,05) foi determinada por teste U Mann Whitney. A carga viral pulmonar em todos os grupos de tratamento foi significativamente diferente daquela, no grupo não tratado, com exceção da terapia Ab 044 a 0,6 a 48 h, o que não era diferente de não tratado.[0764] Comparisons were made between treatment groups to assess the significance of lung viral load reductions. Significance (p <0.05) was determined by Mann Whitney U test. The lung viral load in all treatment groups was significantly different from that in the untreated group, with the exception of Ab 044 therapy at 0.6 at 48 h, which was not different from untreated.

Resultados de H3N2H3N2 Results

[0765] Sugestões visuais. Os animais foram monitorados por sinais de doença (piloereção, curvando) diariamente.[0765] Visual cues. Animals were monitored for signs of illness (piloerection, bending) daily.

[0766]Os ratos que foram desafiados com H3N2 apareceram doentes três dias após a infecção e foram sacrificados no dia sete, como esperado. Os ratos que foram desafiados com H3N2 e tratados com ribavirina não exibiram nenhum sinal de doença e se recuperaram completamente, como esperado. Os ratos que foram tratados com Ab 044 um dia antes de desafiar a 10 mg/kg não exibiram nenhum sinal de doença.[0766] Mice that were challenged with H3N2 appeared sick three days after infection and were sacrificed on day seven, as expected. Mice that were challenged with H3N2 and treated with ribavirin exhibited no signs of illness and recovered completely, as expected. Mice that were treated with Ab 044 the day before challenge at 10 mg/kg did not exhibit any signs of illness.

[0767]Agente Ab 044 foi administrado de um modo de resposta à dose dois dias após a infecção. Os animais que receberam terapia a > 2,5 mg/kg exibiram doença negligenciável e se recuperaram totalmente. Os ratos que receberam a terapia a 0,6 mg/kg eram indistinguíveis dos ratos no grupo não tratado, com doença grave e necessária a eutanásia por dia sete. Agente Ab 044 também foi administrado a 20 mg/kg três dias após a infecção; os animais se beneficiaram de terapia, com uma clara diferença entre os animais tratados e não tratados no dia quatro e recuperação total no dia seis.[0767] Agent Ab 044 was administered in a dose response manner two days after infection. Animals receiving therapy at >2.5 mg/kg exhibited negligible disease and recovered fully. Rats receiving therapy at 0.6 mg/kg were indistinguishable from rats in the untreated group, with severe disease requiring euthanasia by day seven. Agent Ab 044 was also administered at 20 mg/kg three days postinfection; The animals benefited from therapy, with a clear difference between treated and untreated animals on day four and full recovery on day six.

[0768]Os animais também foram monitorados quanto à perda de peso (Figura 20A-20B).[0768] Animals were also monitored for weight loss (Figure 20A-20B).

[0769] Todos os ratos que foram desafiados com H3N2 perderam > 10% de peso por dia e cinco foram submetidos à eutanásia com > 20% de perda de peso no dia sete. Os ratos que foram desafiados, mas tratadas com ribavirina a 75 mg/kg uma vez por dia durante três dias exibiram <10% de perda de peso e se recuperaam. Os ratos que foram tratados com Ab 044 um dia antes do desafio com 10 mg/kg ganharam peso ao longo do tempo (Figura 20A).[0769] All mice that were challenged with H3N2 lost > 10% weight per day and five were euthanized with > 20% weight loss on day seven. Mice that were challenged but treated with ribavirin at 75 mg/kg once daily for three days exhibited <10% weight loss and recovered. Mice that were treated with Ab 044 the day before the 10 mg/kg challenge gained weight over time (Figure 20A).

[0770] Terapia com Ab 044 foi administrada de um modo de resposta à dose. Os animais que receberam 10 mg/kg exibiram < 10% de perda de peso e se recuperaram. Os animais que receberam 2,5 mg/kg perderam > 10% do peso, mas se recuperaram. Os animais que receberam 0,6 mg/kg perderam > 20% do peso corporal e foram sacrificados (Figura 20B).[0770] Ab 044 therapy was administered in a dose-response manner. Animals receiving 10 mg/kg exhibited <10% weight loss and recovered. Animals receiving 2.5 mg/kg lost > 10% of their weight but recovered. Animals receiving 0.6 mg/kg lost >20% of their body weight and were sacrificed (Figure 20B).

[0771] Carga viral. As cargas virais pulmonares quatro dias após a infecção com H3N2 foram avaliadas em um ensaio de placa única (Tabela 15). TABELA 15. CARGA VIRAL PULMONAR EM RATOS QUATRO DIAS APÓS O DESAFIO COM H3N2 [0771] Viral load. Lung viral loads four days after H3N2 infection were assessed in a single-plate assay (Table 15). TABLE 15. LUNG VIRAL LOAD IN MICE FOUR DAYS AFTER H3N2 CHALLENGE

[0772]As comparações foram feitas entre os grupos de tratamento para avaliar a significância das reduções de carga viral pulmonar. Significância (p <0,05) foi determinada pelo teste U Mann Whitney. A carga viral pulmonar em todos os grupos de tratamento foi significativamente diferente do que no grupo não tratado, com duas exceções. As cargas virais pulmonares após terapia de Ab 044 a 48 h a 2,5 mg/kg ou 0,6 mg/kg não eram diferentes dos tratados.[0772] Comparisons were made between treatment groups to assess the significance of lung viral load reductions. Significance (p <0.05) was determined by the Mann Whitney U test. Lung viral load in all treatment groups was significantly different than in the untreated group, with two exceptions. Lung viral loads after Ab 044 therapy at 48 h at 2.5 mg/kg or 0.6 mg/kg were not different from those treated.

Correlação entre atividades in vitro e in vivoCorrelation between in vitro and in vivo activities

[0773]Agente Ab 044 exibiu atividade in vitro reprodutível contra H1N1 PR8 e H3N2 X31 (Tabela 17). TABELA 17. ATIVIDADE IN VITRO DE AGENTE AB 044 MEDIDA POR CPE [0773] Agent Ab 044 exhibited reproducible in vitro activity against H1N1 PR8 and H3N2 X31 (Table 17). TABLE 17. IN VITRO ACTIVITY OF AGENT AB 044 MEASURED BY CPE

[0774]A atividade in vitro foi traduzida em atividade in vivo em ambos os modelos. A carga viral pulmonar no dia quatro forneceu um dado instantâneo do estado da infecção (Figura 21A-21B) e demonstrou uma (p <0,05) redução significativa da carga viral atribuível a diversas estratégias de tratamento com Ab 044.[0774] In vitro activity was translated into in vivo activity in both models. Lung viral load on day four provided a snapshot of infection status (Figure 21A-21B) and demonstrated a significant (p < 0.05) reduction in viral load attributable to various Ab 044 treatment strategies.

[0775]Um segundo dado instantâneo da infecção foi tirado quando os pulmões foram retirados para exame histológico no dia oito (Tabelas 14 e 16). A administração de Ab 044 a 10 mg/kg como profilaxia um dia antes do desafio diminuiu substancialmente a gravidade da necrose e inflamação atribuível a infecção H1N1. A administração terapêutica de Ab 044 a 10 mg/kg dois dias após a infecção não teve efeito claro sobre o rompimento da estrutura pulmonar bem atribuível a infecções H1N1 ou H3N2. A expectativa era de que tanto a a profilaxia quanto a terapia com Ab 044 iriam reduzir visivelmente a inflamação e necrose associada com a infecção por influenza. Em vez disso, parece haver um componente de temporização, de tal modo que a entrega de Ab 044 antes da infecção altera a cascata de citocina com o seu recrutamento de células brancas e inflamação e necrose resultante enquanto a entrega de Ab 044 após a infecção impacta minimamente no resultado.[0775] A second snapshot of infection was taken when the lungs were removed for histological examination on day eight (Tables 14 and 16). Administration of Ab 044 at 10 mg/kg as prophylaxis one day before challenge substantially decreased the severity of necrosis and inflammation attributable to H1N1 infection. Therapeutic administration of Ab 044 at 10 mg/kg two days after infection had no clear effect on disruption of the lung structure well attributable to H1N1 or H3N2 infections. The expectation was that both prophylaxis and therapy with Ab 044 would visibly reduce the inflammation and necrosis associated with influenza infection. Instead, there appears to be a timing component, such that delivery of Ab 044 before infection alters the cytokine cascade with its recruitment of white cells and resulting inflammation and necrosis while delivery of Ab 044 after infection impacts minimally in the result.

[0776] Curvas de sobrevida geradas para o modelo H1N1. A profilaxia com Ab 044 resultou em 100% de sobrevivência apesar do desafio letal quando administrada a > 2,5 mg/kg um dia antes da infecção (Figura 22A). 100% de sobrevivência de animais infectados letalmente foi observada com a terapia com Ab 044 dois dias após a infecção a 10 mg/kg ou terapia com Ab 044 três dias após a infecção a 20 mg/kg (Figura 22B).[0776] Survival curves generated for the H1N1 model. Ab 044 prophylaxis resulted in 100% survival despite lethal challenge when administered at >2.5 mg/kg one day before infection (Figure 22A). 100% survival of lethally infected animals was observed with Ab 044 therapy two days post-infection at 10 mg/kg or Ab 044 therapy three days post-infection at 20 mg/kg (Figure 22B).

[0777] Curvas de sobrevida geradas para o modelo de H3N2. A profilaxia com Ab 044 a 10 mg/kg resultou em 100% de sobrevivência (Figura 23A). 100% de sobrevivência dos animais infectados letalmente foi observada com terapia de Ab 044 dois dias após a infecção a > 2,5 mg/kg ou terapia de Ab 044 três dias após a infecção a 20 mg/kg (Figura 23B).[0777] Survival curves generated for the H3N2 model. Prophylaxis with Ab 044 at 10 mg/kg resulted in 100% survival (Figure 23A). 100% survival of lethally infected animals was observed with Ab 044 therapy two days post-infection at >2.5 mg/kg or Ab 044 therapy three days post-infection at 20 mg/kg (Figure 23B).

[0778]Em resumo, o Ab 044 foi eficaz em ambos os modelos de rato H1N1 e H3N2 (Tabela 18). A administração de profilaxia de Ab 044 mg/kg a 2,5 ou superior resultou em 100% de sobrevivência no modelo H1N1, uma dose que, provavelmente, também alcança 100% de sobrevivência no modelo H3N2. A administração de terapia de Ab 044 em 48 h após a infecção a 10 mg/kg contra a infecção H1N1 e a 2,5 mg/kg contra a infecção H3N2 atingiu 100% de sobrevivência. A administração de terapia de Ab 044 a 20 mg/kg três dias após a infecção resgatou 100% dos animais H1N1 e H3N2 infectados. TABELA 18. EFICÁCIA IN VIVO DO AGENTE AB 044 EM MODELOS DE RATO LETAL [0778] In summary, Ab 044 was effective in both the H1N1 and H3N2 mouse models (Table 18). Prophylaxis administration of Ab 044 mg/kg at 2.5 or higher resulted in 100% survival in the H1N1 model, a dose that likely also achieves 100% survival in the H3N2 model. Administration of Ab 044 therapy within 48 h after infection at 10 mg/kg against H1N1 infection and at 2.5 mg/kg against H3N2 infection achieved 100% survival. Administration of Ab 044 therapy at 20 mg/kg three days after infection rescued 100% of infected H1N1 and H3N2 animals. TABLE 18. IN VIVO EFFICACY OF AGENT AB 044 IN LETHAL MOUSE MODELS

Exemplo 11. Eficácia profilática e terapêutica do anticorpo anti-HA Ab 044 em um Modelo de Rato de vírus influenza A Aviária Altamente PatogênicaExample 11. Prophylactic and therapeutic efficacy of the anti-HA antibody Ab 044 in a Mouse Model of Highly Pathogenic Avian influenza A virus

[0779]Ab 044 foi testado para determinar a sua eficácia em um modelo de rato de influenza A H5N1 aviária altamente patogénica.[0779]Ab 044 was tested to determine its efficacy in a mouse model of highly pathogenic avian influenza A H5N1.

[0780]O objetivo deste estudo foi avaliar ambos regimes de dosagem profilático e terapêutico de Ab 044 para a eficácia. Os parâmetros/finalizações a serem avaliados incluíram: perda de peso (avaliado todos os dias por 21), redução título pulmonar de vírus no dia 4 após exposição ao vírus e mortalidade.[0780]The purpose of this study was to evaluate both prophylactic and therapeutic dosing regimens of Ab 044 for efficacy. Parameters/endpoints to be assessed included: weight loss (assessed every day for 21), reduction in pulmonary virus titer on day 4 after virus exposure, and mortality.

Materiais e métodosMaterials and methods

[0781]Animais: ratos BALB/c fêmeas de 17-20 g foram obtidos a partir de Charles River Laboratories (Wilmington, MA) para este estudo. Eles foram mantidos em Wayne Lab Blox e água da torneira ad libitum. Eles foram mantidos em quarentena durante 24 horas antes da utilização.[0781] Animals: 17-20 g female BALB/c mice were obtained from Charles River Laboratories (Wilmington, MA) for this study. They were maintained on Wayne Lab Blox and tap water ad libitum. They were kept in quarantine for 24 hours before use.

[0782]Vírus: Influenza A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) foi obtido a partir de Dr. Jackie Katz dos Centros de Controle de Doenças. Os ratos expostos a dose letal do vírus (5 MLD50, 5 UFP/rato) geralmente morrem dos dias 8-13.[0782]Virus: Influenza A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) was obtained from Dr. Jackie Katz of the Centers for Disease Control. Mice exposed to lethal dose of virus (5 MLD50, 5 PFU/mouse) generally die on days 8-13.

[0783] Concepçãp experimental: Grupos de ratos foram intraperitonealmente (ip) administrados com Ab 044 uma vez (qd) 24 h antes da exposição ao vírus, com doses de Ab 044 a 20, 10 ou 5 mg/kg. Cinco destes ratos foram sacrificados no dia 4 para determinar o grau de patologia pulmonar bruto observável, a medida do edema pulmonar sob a forma de um aumento de peso do pulmão e para determinar os títulos pulmonares de vírus. Os demais ratos foram observados para mortalidade ou eventos adversos até o dia 21, após a exposição do vírus. Treze ratos foram tratados com 20 mg/kg de Ab 044 a 24 h após a exposição ao vírus e 13 ratos foram tratados com 20 mg/kg de Ab 044 a 48 h após a exposição ao vírus com 4 ratos de cada grupo sendo sacrificados no dia 4 após a exposição do vírus tal como descrito acima de, o restante mantido para observação de morte ou eventos adversos até o dia 21, após a exposição ao vírus. Um 7 rato adicional recebeu oseltamivir a 30 mg/kg/d, duas vezes por dia, durante cinco dias (bid x 5) começando no tempo 0; sendo observado para a mortalidade ou eventos adversos até ao dia 21 após a exposição ao vírus. Vinte ratos também foram tratados com PSS 48 h após a exposição ao vírus e cinco deles foram sacrificados para os títulos de pulmão no dia 4. Estes ratos representatam os controles placebo. Os ratos foram pesados todos os dias até ao dia 21, ou até à morte, começando imediatamente antes da exposição ao vírus.[0783] Experimental design: Groups of mice were administered intraperitoneally (ip) with Ab 044 once (qd) 24 h before exposure to the virus, with doses of Ab 044 at 20, 10 or 5 mg/kg. Five of these mice were sacrificed on day 4 to determine the degree of gross lung pathology observable, the measurement of pulmonary edema in the form of an increase in lung weight, and to determine pulmonary virus titers. The remaining mice were observed for mortality or adverse events until day 21, after virus exposure. Thirteen mice were treated with 20 mg/kg Ab 044 at 24 h after virus exposure and 13 mice were treated with 20 mg/kg Ab 044 at 48 h after virus exposure with 4 mice from each group being sacrificed at the day 4 after virus exposure as described above, the remainder kept for observation of death or adverse events until day 21 after virus exposure. An additional 7 rat received oseltamivir at 30 mg/kg/d twice daily for five days (bid x 5) starting at time 0; being observed for mortality or adverse events until day 21 after exposure to the virus. Twenty mice were also treated with PSS 48 h after virus exposure and five of them were sacrificed for lung titers on day 4. These mice represent placebo controls. Mice were weighed every day until day 21, or until death, starting immediately before exposure to the virus.

[0784] Determinação do título de vírus pulmonar: Cada pulmão de rato foi homogeneizado em solução MEM e ensaiado em triplicado para vírus infecciosos nas células MDCK. As amostras de cada grupo de teste foram tituladas em triplicado.[0784] Determination of lung virus titer: Each mouse lung was homogenized in MEM solution and assayed in triplicate for infectious viruses in MDCK cells. Samples from each test group were titrated in triplicate.

[0785]Análise estatística: A normalidade dos pesos dos animais foi avaliada por teste de normalidade omnibus de D'Agostino & Pearson. Após a constatação de que os dados de peso caberiam em uma distribuição de Gauss, inferências estatísticas foram feitas por análises de duas maneiras de variância seguida por comparações pareadas utilizando pós- testes de Bonferroni para comparar cada grupo de tratamento com o tratamento placebo. A análise de sobrevida foi realizada utilizando o método gráfico de Kaplan-Meier e o teste de Logrank. Essa análise revelou diferenças significativas entre os grupos de tratamento. Por isso, comparações de pares de curvas de sobrevivência (PSS versus nenhum tratamento) foram analisadas pelo teste de Gehan- Breslow-Wilcoxon para se determinar qual o grupo de tratamento diferiu significativamente do grupo de placebo, bem como a importância relativa foi ajustada para um limite de significância de Bonferroni corrigido para o número de comparações de tratamento realizadas.[0785]Statistical analysis: The normality of the animals' weights was assessed using the D'Agostino & Pearson omnibus normality test. After determining that the weight data would fit a Gaussian distribution, statistical inferences were made by two-way analysis of variance followed by pairwise comparisons using Bonferroni post-tests to compare each treatment group with the placebo treatment. Survival analysis was performed using the Kaplan-Meier graphic method and the Logrank test. This analysis revealed significant differences between treatment groups. Therefore, pairwise comparisons of survival curves (PSS versus no treatment) were analyzed using the Gehan-Breslow-Wilcoxon test to determine which treatment group differed significantly from the placebo group, and the relative importance was adjusted to a Bonferroni significance threshold corrected for the number of treatment comparisons performed.

[0786]As taxas de risco (HR), que comparam a rapidez com que grupos de ratos tratados estão morrendo em relação ao grupo de ratos controle sem tratamento, foram determinadas pelos testes Mantel-Haenszel como parte do programa de análise de sobrevivência utilizado acima (GraphPad Prism® para MAC v5). O teste de Kruskal-Wallis, seguido por pós-teste de Dunn para avaliar significativas comparações de pares, foi usado para detectar diferenças significativas no dia médio de morte entre os grupos de tratamento e os ratos tratados com placebo. As diferenças nas proporções de ratos vivos/ratos totais para os grupos de tratamento foram analisadas por meio de análise de tabela de contingência e comparações de pares para o grupo tratado com placebo foram feitas pelo teste exato de Fisher.[0786] Hazard ratios (HR), which compare how quickly groups of treated mice are dying relative to the group of untreated control mice, were determined by Mantel-Haenszel tests as part of the survival analysis program used above (GraphPad Prism® for MAC v5). The Kruskal-Wallis test, followed by Dunn's post-test to assess significant pairwise comparisons, was used to detect significant differences in mean day of death between treatment groups and placebo-treated rats. Differences in the proportions of live rats/total rats for the treatment groups were analyzed using contingency table analysis, and pairwise comparisons for the placebo-treated group were made using Fisher's exact test.

[0787]Os títulos pulmonares de vírus de cada grupo de tratamento foram comparados com controles não tratados utilizando a análise de variância nos valores de log- transformados assumindo variâncias iguais e distribuição normal. Quando a significância de P <0,05 foi conseguida por análise de variância de todos os tratamentos, os valores individuais de tratamento foram então comparados com o controle PSS utilizando testes de comparação de pares de Newman-Keuls.[0787] Lung virus titers from each treatment group were compared to untreated controls using analysis of variance on log-transformed values assuming equal variances and normal distribution. When significance of P < 0.05 was achieved by analysis of variance of all treatments, individual treatment values were then compared with the PSS control using Newman-Keuls pairwise comparison tests.

Resumo dos resultadosSummary of results

[0788]Em um modelo de desafio letal da influenza contra H5N1 (A/Vietnam/1203/2004; vírus do 1 Grupo), uma única injeção de Ab 044 a 10-20 mg/kg (24 horas pré-infecção) ou 20 mg/kg (até 72 horas após a infecção) conduz a 100% de sobrevivência dos ratos (n = 5 por braço) se for administrado terapeuticamente. A sobrevivência é correlacionada com métricas secundárias, incluindo queda de título viral e redução na perda de peso induzida pelo vírus e pontuação corporal. Neste mesmo experimento, 30 mg/kg de oseltamivir, administrado duas vezes por dia durante 5 dias, resultou em apenas 60% de sobrevivência.[0788] In a lethal influenza challenge model against H5N1 (A/Vietnam/1203/2004; Group 1 virus), a single injection of Ab 044 at 10-20 mg/kg (24 hours pre-infection) or 20 mg/kg (up to 72 hours post-infection) leads to 100% mouse survival (n = 5 per arm) if administered therapeutically. Survival is correlated with secondary metrics including drop in viral titer and reduction in virus-induced weight loss and body score. In this same experiment, 30 mg/kg oseltamivir, administered twice a day for 5 days, resulted in only 60% survival.

[0789]Ratos tratados com Ab 044 a 10 mg/kg foram observados durante 14 dias. Ratos tratados com Ab 044 não perderam peso ou mostraram quaisquer sinais visíveis de estresse. A análise histológica foi executada em pulmões colhidaos no dia 8, em que os tecidos foram pontuados com base na necrose ou sinais de inflamação observados. Nem a necrose ou inflamação foi observada nos tecidos dos ratos tratados com Ab 044. Os resultados experimentais detalhados são apresentados abaixo.[0789] Rats treated with Ab 044 at 10 mg/kg were observed for 14 days. Rats treated with Ab 044 did not lose weight or show any visible signs of stress. Histological analysis was performed on lungs harvested on day 8, where tissues were scored based on necrosis or signs of inflammation observed. Neither necrosis nor inflammation was observed in the tissues of mice treated with Ab 044. Detailed experimental results are presented below.

RESULTADOSRESULTS

[0790]Os dados do peso mostrados na Figura 24 sugerem que o composto foi bem tolerado mesmo em ratos infectados, uma vez que os ratos tratados com Ab 044 não perderams quantidades significativas de peso em comparação com os pesos de partida de estes ratos tratados. Além disso, os ratos infectados tratados com Ab 044 foram significativamente protegidos contra a perda de peso devido à infecção por vírus em todas as concentrações utilizadas de Ab 044 a partir de dias 7 e 12 pós-exposição ao vírus, independentemente do regime de dosagem utilizado (FIG. 24, Tabela 19; P <0,01-P <0,001). A única exceção a esta generalização foi o grupo de ratos que foi tratado com Ab044 a 5 mg/kg/d (qd X 1, beg. -24 h) no dia 12 após exposição ao vírus. Especialmente notável sobre a falta de perda de peso foi o fato de que os ratos tratados com as doses de 20 mg/kg não perderam peso em todos os ratos e a maioria ainda tinha ganhado peso em relação ao seu peso inicial até o final do experimento. Isto se correlacionou bem com o fato de que os ratos que receberam Ab 044 a 20 mg/kg após exposição ao vírus todos sobreviveram à infecção (Figura 25). De fato, um número significativo (90-100%) de ratos sobreviveu à infecção em cada grupo de tratamento que recebe Ab 044, independentemente da dose e regime de tratamento utilizado (P <0,0001). TABELA 19. TABELA DE DIFERENÇAS DE PESO SIGNIFICATIVA ILUSTRADA NA FIGURA 24. aNão Significante (P>0,05)[0790] The weight data shown in Figure 24 suggests that the compound was well tolerated even in infected mice, as Ab 044-treated mice did not lose significant amounts of weight compared to the starting weights of these treated mice. Furthermore, infected mice treated with Ab 044 were significantly protected against weight loss due to virus infection at all used concentrations of Ab 044 from days 7 and 12 post-virus exposure, regardless of the dosing regimen used. (FIG. 24, Table 19; P <0.01-P <0.001). The only exception to this generalization was the group of mice that were treated with Ab044 at 5 mg/kg/d (qd Especially notable about the lack of weight loss was the fact that mice treated with the 20 mg/kg doses did not lose weight at all and most mice had still gained weight relative to their starting weight by the end of the experiment. . This correlated well with the fact that mice given Ab 044 at 20 mg/kg after exposure to the virus all survived the infection (Figure 25). Indeed, a significant number (90-100%) of mice survived infection in each treatment group receiving Ab 044, regardless of the dose and treatment regimen used (P < 0.0001). TABLE 19. TABLE OF SIGNIFICANT WEIGHT DIFFERENCES ILLUSTRATED IN FIGURE 24. aNot Significant (P>0.05)

[0791]Embora somente 60% dos ratos tratados com oseltamivir tenham sobrevido à infecção, esta taxa de sobrevivência foi significativamente diferente do grupo não tratado de ratos infectados (P = 0,0055). No passado, quando ratos infectados H5N1 foram tratados com oseltamivir a 30 mg/kg/d durante oito dias, em vez dos cinco dias, como foi feito no estudo corrente, 90-100% dos ratos tratados durante o período de tempo mais longo sobreviveu a infecção pelo vírus com pouca ou nenhuma perda de peso. A perda de peso em estudos anteriores foi significativamente menor do que para os ratos não tratados, infectados, ao contrário da perda de peso detectada nos dias 9, 10 e 12 após a exposição do vírus no presente estudo (Figura 24, Tabela 19).[0791] Although only 60% of mice treated with oseltamivir survived the infection, this survival rate was significantly different from the untreated group of infected mice (P = 0.0055). In the past, when H5N1-infected mice were treated with oseltamivir at 30 mg/kg/d for eight days rather than five days as was done in the current study, 90-100% of mice treated for the longer period of time survived. virus infection with little or no weight loss. Weight loss in previous studies was significantly less than for untreated, infected mice, unlike the weight loss detected on days 9, 10, and 12 after virus exposure in the present study (Figure 24, Table 19).

[0792] Curiosamente, foi durante o período de tempo de 9-12 dias de exposição após vírus que os ratos no grupo tratado com o oseltamivir de ratos sucumbiram à infecção por vírus no presente estudo (Figura 25). Não só o tratamento de ratos com Ab 044 protege ratos contra a morte de forma significativa, conforme medido por sobreviventes totais (Tabela 20, coluna Vivo/Total, P< 0,0019), como os tratamentos também profundamente afetadam a cinética da morte; ratos tratados com Ab 044 foram 11-38 vezes menos propensos a morrer mais rapidamente a partir de infecção por vírus, se em tudo, do que os ratos não tratados, infectados (Tabela 20, razão de riscos). Além disso, para a maioria dos regimes de tratamento Ab 044 o um rato que tenha sofrido a infecção em cada grupo, fizeram um a dois dias mais tarde, em comparação com os ratos que morreram no grupo de placebo (PSS) (Tabela 20, ver dia da morte médio). Tabela 20. Efeitos de Ab 044 em Vários parâmetros de Mortalidade medidos por rato BALB/c infectados com uma dose letal de vírus H5N1 de influenza A/Vietnam/1203/2004 aO tempo médio de morte entre os animais que sucumbem à infecção. bO tempo no qual a sobrevivência fracionada é igual a 50%. (ou seja, o tempo calculado para a qual metade dos indivíduos que morreram e metade ainda estão vivos.) CTaxas de risco são calculadas em relação ao placebo. Vivo/Total: *P = 0,02, **P = 0,0019 vs. Placebo, **P = 0,0014 vs. Placebo. Dia de Morte médio: ***P <0,001 vs. Placebo.[0792] Interestingly, it was during the time period of 9-12 days of post-virus exposure that mice in the rat oseltamivir-treated group succumbed to virus infection in the present study (Figure 25). Not only does treatment of mice with Ab 044 significantly protect mice from death, as measured by total survivors (Table 20, column Alive/Total, P< 0.0019), but the treatments also profoundly affect the kinetics of death; Ab 044-treated mice were 11-38 times less likely to die more quickly from virus infection, if at all, than untreated, infected mice (Table 20, hazard ratio). Furthermore, for most Ab 044 treatment regimens the one mouse that suffered infection in each group did so one to two days later compared to the mice that died in the placebo group (PSS) (Table 20, see average day of death). Table 20. Effects of Ab 044 on Various Mortality Parameters Measured by BALB/c Mice Infected with a Lethal Dose of H5N1 Influenza A/Vietnam/1203/2004 Virus aThe average time to death among animals that succumb to infection. bThe time at which fractional survival is equal to 50%. (i.e., the calculated time for which half of the individuals who died and half are still alive.) Risk rates are calculated relative to placebo. Alive/Total: *P = 0.02, **P = 0.0019 vs. Placebo, **P = 0.0014 vs. Placebo. Average Day of Death: ***P <0.001 vs. Placebo.

[0793]Nenhuma patologia pulmonar grave ou edema foi detectado no dia 4 após exposição ao vírus, porque esses fenômenos de infecção relacionados são geralmente observados no dia 8 ou mais tarde, após exposição ao vírus no modelo do rato H5N1. No entanto, os títulos pulmonares de vírus foram significativamente reduzidos em ratos para doses de Ab 044 tratadas a 10 mg/kg ou superior, independentemente de quando Ab 044 foi administrada (Tabela 21, P <0,05, P <0,01). Os títulos de vírus pulmonares a partir de ratos tratados com 5 mg/kg de Ab 044 eram mais baixos, mas estatisticamente semelhantes aos títulos pulmonares de vírus detectados nos pulmões dos ratos do grupo de placebo.[0793] No serious lung pathology or edema was detected on day 4 after exposure to the virus, because these related infection phenomena are generally observed on day 8 or later after exposure to the virus in the H5N1 mouse model. However, lung virus titers were significantly reduced in rats treated with Ab 044 doses at 10 mg/kg or higher, regardless of when Ab 044 was administered (Table 21, P < 0.05, P < 0.01). . Lung virus titers from mice treated with 5 mg/kg Ab 044 were lower but statistically similar to the lung virus titers detected in the lungs of mice in the placebo group.

[0794]Assim, a redução dos títulos pulmonares de vírus no início da infecção por Ab 044 de tratamento às 24 h pós- exposição ao vírus provavelmente reduziu a quantidade de antígeno produzido que era capaz de induzir uma resposta característica patogénica hiperinflamatória de infecções pulmonares H5N1 em ratos (qué et al., Am J Pathol 179: 230-239 (2011)). No entanto, os dados de titulação de vírus do tratamento com início às 48 h após exposição ao vírus aparentemente poderia contradizer essa hipótese, uma vez que os títulos do dia 4 para esse grupo de ratos estavam perto dos níveis dos ratos tratados com placebo. Pode ser que o tratamento às 48 h mantenha os títulos suficientemente baixo para as próximas 24 h, para se evitar uma resposta hiper-inflamatória para o insulto inicial. É também possível que o composto não tenha tido tempo suficiente para exercer o seu efeito antiviral entre 48 horas e o ensaio de título do vírus do dia 4, mas ele teve uma atividade suficiente pelo dia 9 quando as mortes começaram a proteger os ratos contra a morte. TABELA 21. EFEITOS DE AB 044 EM TÍTULOS DE VÍRUS PULMONAR MEDIDOS PARA RATOS BALB/C INFECTADOS COM UMA DOSE LETAL DE VÍRUS H5N1 DE INFLUENZA A/VIETNAM/1203/2004. *p<0,05, **P<0,01 vs. placebo[0794] Thus, the reduction of pulmonary virus titers at the onset of infection by Ab 044 treatment at 24 h post-virus exposure likely reduced the amount of antigen produced that was capable of inducing a hyperinflammatory pathogenic response characteristic of H5N1 pulmonary infections. in rats (qué et al., Am J Pathol 179: 230-239 (2011)). However, virus titer data from treatment starting 48 h after virus exposure would apparently contradict this hypothesis, since day 4 titers for this group of mice were close to the levels of placebo-treated mice. It may be that treatment at 48 h keeps titers low enough for the next 24 h to avoid a hyper-inflammatory response to the initial insult. It is also possible that the compound did not have enough time to exert its antiviral effect between 48 hours and the day 4 virus titer assay, but it had sufficient activity by day 9 when deaths began to protect the mice against virus. death. TABLE 21. EFFECTS OF AB 044 ON LUNG VIRUS TITERS MEASURED FOR BALB/C MICE INFECTED WITH A LETHAL DOSE OF H5N1 INFLUENZA VIRUS A/VIETNAM/1203/2004. *p<0.05, **P<0.01 vs. placebo

[0795]Em conclusão, a doses de 2,5 e 10 mg/kg, Ab 044 dá 100% de proteção contra a provocação letal de H1N1 e H3N2, respectivamente. Além disso, quando o anticorpo monoclonal foi administrado até 72 horas após a infecção, foi completamente eficaz no tratamento da infecção com 100% de sobrevivência, tanto para subtipos de vírus H1N1 quanto H3N2. Ab 044, independentemente da dose ou regime de dosagem utilizados (profilático ou terapêutico), foi extremamente eficaz na proteção de ratos BALB/c contra a morte devida a uma infecção extremamente letal com um vírus influenza Aviária A H5N1 altamente patogênica. Além disso, os mesmos regimes de tratamento de Ab 044 foram extremamente eficazes na prevenção da perda de peso devido a infecção por vírus e na redução significativa do dia 4 de títulos de vírus pulmonares.[0795] In conclusion, at doses of 2.5 and 10 mg/kg, Ab 044 gives 100% protection against lethal H1N1 and H3N2 challenge, respectively. Furthermore, when the monoclonal antibody was administered within 72 hours of infection, it was completely effective in treating the infection with 100% survival for both H1N1 and H3N2 virus subtypes. Ab 044, regardless of the dose or dosing regimen used (prophylactic or therapeutic), was extremely effective in protecting BALB/c mice against death due to an extremely lethal infection with a highly pathogenic Avian influenza A H5N1 virus. Furthermore, the same Ab 044 treatment regimens were extremely effective in preventing weight loss due to virus infection and in significantly reducing day 4 lung virus titers.

Exemplo 12. Os ensaios de competição para Mapeamento de Epítopo de AnticorpoExample 12. Competition Assays for Antibody Epitope Mapping

[0796]Competição ELISA é utilizada para testar se um anticorpo monoclonal (mabl) altera a capacidade de um outro anticorpo (por exemplo, mAb2, ou anticorpo de teste) para se ligar ao alvo. Para realizar o ensaio, uma placa de 96 poços de fundo plano NUNC Maxisorp (Cat # 439454) é revestida com a hemaglutinina (HA) desejada diluída para 2 μg/mL em 1x PBS, 100 μL por poço. A placa é selada com uma tampa de placa e deixada incubar durante a noite a 4ºC, estática. As placas são então lavadas três vezes com 1x PBS + 0,05% Tween-20 (PBST). As placas revestidas com HA são bloqueadas com 200 μL de 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology Cat # sc-2325) em 1x PBS e incubadas à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, as placas são lavadas três vezes com PBST. Cem microlitros de mAb1 são então adicionados aos poços a uma concentração de saturação (determinado previamente) e incubadas durante 2 horas à temperatura ambiente. Pós-incubação, as placas são lavadas para remover mAb1 não ligado e o anticorpo de teste (Acm2) é diluído até a concentração de partida desejada em PBST e carregado sobre a placa. As placas são incubadas à temperatura ambiente durante 2 horas, estáticas e, em seguida, lavas três vezes com PBST e viradas para secar. O anticorpo conjugado com HRP apropriado na concentração desejada é diluído em PBST e 100 μL de HRP-anticorpo é carregado por poço para todos os poços. Após incubação durante 1 hora à temperatura ambiente, as placas são lavadas três vezes com PBST. Solução de TMB (KPL Cat # 50 76-00) é preparada antes da sua utilização e deixada aquecer até à temperatura ambiente. A solução de TMB é então adicionada à placa e desenvolvida até max OD estar entre 2 e 3 unidades de absorvância a 650 nm como lidas em um leitor de placas de 96 poços (SpectraMax M2e ou semelhante). Após a realização da densidade óptica desejada, a reação é extinguidacom H2SO4 1N e a DO a 450 nm é lida. A OD é representada graficamente em função da concentração e o KD é calculado utilizando um ajuste de quatro paramétrico. A existência de um epítopo de sobreposição entre mAb1 e Acm2 será indicado por uma queda significativa na ligação de Acm2 para HA na presença de mAb1 relativamente ao observado na sua (mAb1) ausência em poços de controle.[0796] Competition ELISA is used to test whether a monoclonal antibody (mabl) alters the ability of another antibody (e.g., mAb2, or test antibody) to bind to the target. To perform the assay, a NUNC Maxisorp flat-bottom 96-well plate (Cat # 439454) is coated with the desired hemagglutinin (HA) diluted to 2 µg/mL in 1x PBS, 100 µL per well. The plate is sealed with a plate lid and allowed to incubate overnight at 4°C, static. Plates are then washed three times with 1x PBS + 0.05% Tween-20 (PBST). HA-coated plates are blocked with 200 µL of 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology Cat# sc-2325) in 1x PBS and incubated at room temperature for 1 hour. Subsequently, the plates are washed three times with PBST. One hundred microliters of mAb1 is then added to the wells at a saturation concentration (predetermined) and incubated for 2 hours at room temperature. Post-incubation, plates are washed to remove unbound mAb1 and the test antibody (Acm2) is diluted to the desired starting concentration in PBST and loaded onto the plate. Plates are incubated at room temperature for 2 hours, static, then washed three times with PBST and turned over to dry. The appropriate HRP-conjugated antibody at the desired concentration is diluted in PBST and 100 μL of HRP-antibody is loaded per well into all wells. After incubation for 1 hour at room temperature, the plates are washed three times with PBST. TMB solution (KPL Cat #50 76-00) is prepared before use and allowed to warm to room temperature. The TMB solution is then added to the plate and developed until max OD is between 2 and 3 absorbance units at 650 nm as read on a 96-well plate reader (SpectraMax M2e or similar). After achieving the desired optical density, the reaction is quenched with 1N H2SO4 and the OD at 450 nm is read. The OD is plotted against concentration and the KD is calculated using a four-parametric fit. The existence of an overlapping epitope between mAb1 and Acm2 will be indicated by a significant drop in the binding of Acm2 to HA in the presence of mAb1 relative to that observed in its (mAb1) absence in control wells.

Exemplo 13: Fabricação e Dosagem de Anticorpos CandidatosExample 13: Manufacturing and Dosing of Candidate Antibodies Expressão Recombinante de anticorpo:Recombinant Antibody Expression:

[0797] Para a expressão recombinante de uma IgG1, as regiões VH e VL do anticorpo podem ser isoladas a partir de células-B, hibridomas ou sintetizados e sub-clonados em plasmídeos contendo CH1-H2-H3 e CL, respectivamente. A expressão recombinante de anticorpos pode ser realizada em células de mamífero, tais como células HEK 293-F células em suspensão livres (Invitrogen, Carlsbad, CA) cultivadas em células 293-F de Expressão Médio Livres (Invitrogen, Carlsbad, CA), mantidas a 37°C, 80% humidade e 8% de CO2. As células (com > 95% de viabilidade) são transfectadas com Poli-etileno-imina Max (PEIMAX, PoliSciences) com quantidades equivalentes de plasmídeos contendo HC e LC. Sete dias após a infecção, as células são colhidas por centrifugação das células a 4000 rpm durante 15 min a 4°C e filtradas através de um sistema de filtro de 0,45 μm (Nalgene) e suplementadas com coquetel inibidor da protease diluído 1:1000 (Calbiochem).[0797] For recombinant expression of an IgG1, the VH and VL regions of the antibody can be isolated from B-cells, hybridomas or synthesized and sub-cloned into plasmids containing CH1-H2-H3 and CL, respectively. Recombinant expression of antibodies can be performed in mammalian cells, such as HEK 293-F cells free suspension cells (Invitrogen, Carlsbad, CA) cultured in Free Expression Medium 293-F cells (Invitrogen, Carlsbad, CA), maintained at 37°C, 80% humidity and 8% CO2. Cells (with >95% viability) are transfected with Polyethylene Imine Max (PEIMAX, PoliSciences) with equivalent amounts of HC and LC containing plasmids. Seven days after infection, cells are harvested by centrifuging the cells at 4000 rpm for 15 min at 4°C and filtered through a 0.45 μm filter system (Nalgene) and supplemented with diluted protease inhibitor cocktail 1: 1000 (Calbiochem).

[0798]O anticorpo é purificado do sobrenadante utilizando uma coluna preenchida com resina de Proteína A (Pierce) em um sistema purificador AKTA FPLC. O anticorpo é fluido com um tampão mM de Glicina-HCl 100 (pH 2,5) e tampão de pH neutralizado através da adição de 10% de Trisbase 1 M a 2,5 M de NaCl (pH 8,5). A amostra purificada é então trocada de tampão para 1x PBS (pH 7,4) e concentrada por ultrafiltração/diafiltração (UF/DF), utilizando um filtro de 30 kDa MWCO de centrifugação (Millipore). O anticorpo purificado foi quantificado utilizando espectrofotômetro NanoDrop.[0798] The antibody is purified from the supernatant using a column filled with Protein A resin (Pierce) in an AKTA FPLC purifier system. The antibody is eluted with 100 mM Glycine-HCl buffer (pH 2.5) and neutralized pH buffer by adding 10% 1 M Trisbase to 2.5 M NaCl (pH 8.5). The purified sample is then buffer exchanged to 1x PBS (pH 7.4) and concentrated by ultrafiltration/diafiltration (UF/DF) using a 30 kDa MWCO centrifuge filter (Millipore). The purified antibody was quantified using a NanoDrop spectrophotometer.

Ensaios de ligação de ELISAELISA binding assays

[0799]Hemaglutinina recombinante é diluída para 2 μg/mL em PBS e 100 μL são utilizados para revestir placas de 96 poços de microtitulação (Immuno Maxisorp™, Nunc). As placas são incubadas a 4°C durante a noite. As placas foram subsequentemente lavadas três vezes com PBS + 1x 0,05% de Tween-20 (PBST) e depois bloqueadas com 200 μL de 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology) em 1x PBS durante 1 hr. As placas são então lavadas três vezes com PBST e o anticorpo diluído em série em PBST é adicionado e incubado durante 2 horas à temperatura ambiente. Os poços são subsequentemente lavados com PBST e do IgG1 ligada é detectada usando 100 μL de anti-hIgG1 1:1000 conjugado com HRP. Após 1 hora de incubação, as placas são lavadas e a reação foi desenvolvida utilizando uma solução de TMB (KPL) e parado pela adição de H2SO4 1N. A absorvância a 450 nm é medida utilizando um TMB em um leitor de placas SpectraMax M2e.[0799] Recombinant hemagglutinin is diluted to 2 μg/mL in PBS and 100 μL is used to coat 96-well microtiter plates (Immuno Maxisorp™, Nunc). Plates are incubated at 4°C overnight. Plates were subsequently washed three times with PBS + 1x 0.05% Tween-20 (PBST) and then blocked with 200 μL of 5% Blotto (Santa Cruz Biotechnology) in 1x PBS for 1 hr. Plates are then washed three times with PBST and antibody serially diluted in PBST is added and incubated for 2 hours at room temperature. The wells are subsequently washed with PBST and the bound IgG1 is detected using 100 μL of 1:1000 HRP-conjugated anti-hIgG1. After 1 hour of incubation, the plates were washed and the reaction was developed using a TMB solution (KPL) and stopped by the addition of 1N H2SO4. Absorbance at 450 nm is measured using a TMB on a SpectraMax M2e plate reader.

Ensaios de microneutralizaçãoMicroneutralization assays

[0800]O ensaio de neutralização in vitro é realizado usando o protocolo descrito por Sidwell e Huffman para testar a capacidade do anticorpo para inibir a infecciosidade do vírus influenza em células MDCK. Resumidamente, o anticorpo é preparado em diluições half-log começando com 500 μg/mL em solução de MEM com 50 μg/mL de gentamicina. Cada diluição é adicionada a 5 cavidades de uma placa de 96 poços com células confluentes. Três poços de cada diluição são infectados com um vírus de título baixo e dois poços não ficam infectados como controles de toxicidade. A ribavirina é incluída como um controle. As placas são incubadas 3-6 dias até os poços de controle de vírus terem atingido o máximo efeito citopático (CPE). As placas são então coradas com corante vermelho neutro durante aproximadamente 2 horas, em seguida, corante sobrenadante é removido dos poços e o corante incorporado é extraído em tampão de citrato de Sorensen/ etanol 50:50 e a densidade óptica é lida em um espectrofotômetro. As densidades ópticas são convertidos em percentagem de controles de células e normalizadas para o controle de vírus e a concentração do composto de teste necessária para inibir o CPE em 50% (ECso) é calculado por análise de regressão. A concentração do composto que causa 50% de CPE na ausência de vírus foi calculado de forma semelhante (CC50). O índice seletivo (SI) é o CC50 dividido por EC50.[0800] The in vitro neutralization assay is performed using the protocol described by Sidwell and Huffman to test the ability of the antibody to inhibit the infectivity of the influenza virus in MDCK cells. Briefly, the antibody is prepared in half-log dilutions starting at 500 μg/mL in MEM solution with 50 μg/mL gentamicin. Each dilution is added to 5 wells of a 96-well plate with confluent cells. Three wells of each dilution are infected with a low-titer virus and two wells are left uninfected as toxicity controls. Ribavirin is included as a control. Plates are incubated 3-6 days until virus control wells have reached maximum cytopathic effect (CPE). The plates are then stained with neutral red dye for approximately 2 hours, then supernatant dye is removed from the wells and the incorporated dye is extracted into 50:50 Sorensen citrate/ethanol buffer and the optical density is read on a spectrophotometer. Optical densities are converted to percentage of cell controls and normalized to virus control and the concentration of test compound required to inhibit CPE by 50% (ECso) is calculated by regression analysis. The concentration of the compound causing 50% CPE in the absence of virus was calculated in a similar way (CC50). The selective index (SI) is CC50 divided by EC50.

Incorporação por ReferênciaIncorporation by Reference

[0801] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente aqui citados são incorporadas por referência na sua totalidade, como se cada aplicação de publicação, patente ou patente individual tenha sido especificamente e individualmente indicada para ser incorporada por referência. Em caso de conflito, o presente pedido, incluindo quaisquer definições neste documento, irá controlar.[0801] All publications, patents and patent applications cited herein are incorporated by reference in their entirety, as if each individual publication, patent or patent application had been specifically and individually indicated to be incorporated by reference. In the event of a conflict, this application, including any definitions in this document, will control.

EquivalentesEquivalents

[0802]Os peritos na arte reconhecerão, ou serão capazes de determinar utilizando não mais do que experimentação de rotina, muitos equivalentes das formas de realização específicas do invento aqui descrito. Tais equivalentes destinam-se a ser englobados pelas seguintes reivindicações.[0802] Those skilled in the art will recognize, or be able to determine using no more than routine experimentation, many equivalents of the specific embodiments of the invention described herein. Such equivalents are intended to be encompassed by the following claims.

Claims (14)

1. Molécula de anticorpo capaz de se ligar à hemaglutinina (HA), CARACTERIZADA por compreender: (a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR1 que compreende a sequência S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); uma CDR2 compreendendo a sequência V-V-S-Y-D-G-N-Y-K- Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); uma CDR3 compreendendo a sequência D-S-R-L-R-S-L-L-Y- F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); e (b) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR1 compreendendo a sequência Q-S-I-T-F-D-Y-K-N- Y-L-A (SEQ ID NO: 145); uma CDR2 compreendendo a sequência W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); uma CDR3 compreendendo a sequência Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73).1. Antibody molecule capable of binding to hemagglutinin (HA), CHARACTERIZED by comprising: (a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence S-Y-A-M-H (SEQ ID NO: 68); a CDR2 comprising the sequence V-V-S-Y-D-G-N-Y-K-Y-Y-A-D-S-V-Q-G (SEQ ID NO: 69); a CDR3 comprising the sequence D-S-R-L-R-S-L-L-Y-F-E-W-L-S-Q-G-Y-F-N-P (SEQ ID NO: 70); and (b) a light chain immunoglobulin variable region segment comprising: a CDR1 comprising the sequence Q-S-I-T-F-D-Y-K-N-Y-L-A (SEQ ID NO: 145); a CDR2 comprising the sequence W-G-S-Y-L-E-S (SEQ ID NO: 72); a CDR3 comprising the sequence Q-Q-H-Y-R-T-P-P-S (SEQ ID NO: 73). 2. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA por compreender um ou ambos de: a) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 25; e b) um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 52, opcionalmente em que a dita molécula de anticorpo compreende um tetrâmero de: dois segmentos de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada, cada um compreendendo SEQ ID NO: 25; e dois segmentos de região variável de imunoglobulina de cadeia leve, cada um compreendendo SEQ ID NO: 52.2. Antibody molecule according to claim 1, CHARACTERIZED by comprising one or both of: a) a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25; and b) a light chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 52, optionally wherein said antibody molecule comprises a tetramer of: two heavy chain immunoglobulin variable region segments, each comprising SEQ ID NO: 25; and two light chain immunoglobulin variable region segments, each comprising SEQ ID NO: 52. 3. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a molécula de anticorpo é um anticorpo de cadeia simples (scFv), um fragmento de F(ab')2, um fragmento de Fab ou um fragmento de Fd, um anticorpo IgG, um anticorpo de comprimento completo, um anticorpo humanizado, ou um anticorpo compreendendo duas regiões variáveis de cadeia pesada e duas regiões variáveis de cadeia leve.3. Antibody molecule according to claim 1 or 2, CHARACTERIZED by the fact that the antibody molecule is a single-chain antibody (scFv), an F(ab')2 fragment, a Fab fragment or a Fd fragment, an IgG antibody, a full-length antibody, a humanized antibody, or an antibody comprising two heavy chain variable regions and two light chain variable regions. 4. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelo fato de que a molécula de anticorpo se liga a um epítopo que tem um, dois, três, quatro, cinco, ou todas as seguintes propriedades a)-f): a) compreende um, dois ou todos os resíduos N38, I278, e D291 de H3 HA1; b) compreende resíduo N12 de H3 HA2; c) não compreende um, dois ou todos os resíduos Q327, T328 e R329 de H3 HA1; d) não compreende um, dois, três, quatro, ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H3 HA2; e) compreende um, dois, ou todos os resíduos T318, R321 e V323 de H3 HA1; ou f) compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou todos os resíduos A7, E11, I18, D19, G20, W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 e E57 de H3 HA2, opcionalmente em que o epítopo (i) possui as propriedades c) e d); (ii) não compreende um ou ambos de: cc) um ou ambos os resíduos Q328 e S329 de H1 HA1; e dd) um, dois, três, quatro ou todos os resíduos G1, L2, F3, G4 e D46 de H1 HA2; ou (iii) possui as propriedades a) ou b); e c) ou d).4. Antibody molecule according to any one of claims 1 to 3, CHARACTERIZED by the fact that the antibody molecule binds to an epitope that has one, two, three, four, five, or all of the following properties a) -f): a) comprises one, two or all of residues N38, I278, and D291 of H3 HA1; b) comprises residue N12 of H3 HA2; c) does not comprise one, two or all residues Q327, T328 and R329 of H3 HA1; d) does not comprise one, two, three, four, or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H3 HA2; e) comprises one, two, or all residues T318, R321 and V323 of H3 HA1; or f) comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or all residues A7, E11, I18, D19, G20 , W21, L38, K39, T41, Q42, A43, I45, I48, N49, L52, N53, I56 and E57 of H3 HA2, optionally wherein the epitope (i) has properties c) and d); (ii) does not comprise one or both of: cc) one or both residues Q328 and S329 of H1 HA1; and dd) one, two, three, four or all residues G1, L2, F3, G4 and D46 of H1 HA2; or (iii) has properties a) or b); and c) or d). 5. Molécula de ácido nucleico isolada, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeo que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve da molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a sequência nucleotídica compreende SEQ ID NO: 151 e SEQ ID NO: 149, respectivamente, ou suas sequências degeneradas.5. Isolated nucleic acid molecule, CHARACTERIZED by the fact that it comprises a nucleotide sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region and a light chain immunoglobulin variable region of the antibody molecule, as defined in any one of claims 1 to 4, wherein the nucleotide sequence comprises SEQ ID NO: 151 and SEQ ID NO: 149, respectively, or their degenerate sequences. 6. Vetor recombinante, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico, como definida na reivindicação 5.6. Recombinant vector, CHARACTERIZED by the fact that it comprises the nucleic acid molecule, as defined in claim 5. 7. Célula hospedeira microbiana isolada, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende: (a) um vetor recombinante que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e um vetor recombinante que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve; ou (b) um vetor recombinante que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada e uma sequência de ácido nucleico que codifica uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve.7. Isolated microbial host cell, CHARACTERIZED by the fact that it comprises: (a) a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region and a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region; or (b) a recombinant vector comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain immunoglobulin variable region and a nucleic acid sequence encoding a light chain immunoglobulin variable region. 8. Método de fabricação da molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende o fornecimento de uma célula hospedeira, como definida na reivindicação 7 e a expressão dos ácidos nucleicos na célula hospedeira, produzindo assim a molécula de anticorpo.8. Method of manufacturing the antibody molecule, as defined in any one of claims 1 to 4, CHARACTERIZED by the fact that it comprises providing a host cell, as defined in claim 7 and expressing the nucleic acids in the host cell, producing thus the antibody molecule. 9. Uso da molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO por ser na preparação de um medicamento para prevenir ou tratar uma infecção por vírus influenza em um indivíduo humano, opcionalmente em que o influenza é influenza A, opcionalmente em que o vírus influenza é: (i) uma estirpe do Grupo 1; (ii) uma estirpe do Grupo 2; (iii) uma estirpe H1, H3, H5 H7 ou H9; ou (iv) uma estirpe H1N1, H3N2 ou H5N1.9. Use of the antibody molecule, as defined in any one of claims 1 to 4, CHARACTERIZED by being in the preparation of a medicament for preventing or treating an influenza virus infection in a human subject, optionally wherein the influenza is influenza A, optionally wherein the influenza virus is: (i) a Group 1 strain; (ii) a Group 2 strain; (iii) an H1, H3, H5 H7 or H9 strain; or (iv) an H1N1, H3N2 or H5N1 strain. 10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo humano: (i) tem risco elevado de exposição ao vírus influenza; (ii) é imunocomprometido, tem 65 anos ou mais de idade, seis meses a 18 anos de idade ou tem uma condição médica crônica; (iii) tem ou está sob o risco de ter uma infecção bacteriana secundária; ou (iv) foi testado para o vírus influenza, e/ou em que a molécula de anticorpo é usada: (v) em uma dose entre 1 mg/kg e 50 mg/kg; (vi) em uma dose entre 25 mg/kg e 50 mg/kg; (vii) antes da exposição conhecida à infecção por vírus influenza; (viii) antes da manifestação de um efeito ou sintoma de infecção por vírus influenza; (ix) após exposição conhecida à infecção por vírus influenza; (x) após manifestação de um efeito ou um sintoma da infecção por vírus influenza.10. Use, according to claim 9, CHARACTERIZED by the fact that the human individual: (i) has a high risk of exposure to the influenza virus; (ii) is immunocompromised, 65 years of age or older, six months to 18 years of age, or has a chronic medical condition; (iii) you have or are at risk of having a secondary bacterial infection; or (iv) has been tested for the influenza virus, and/or in which the antibody molecule is used: (v) in a dose between 1 mg/kg and 50 mg/kg; (vi) at a dose between 25 mg/kg and 50 mg/kg; (vii) prior to known exposure to influenza virus infection; (viii) before the manifestation of an effect or symptom of influenza virus infection; (ix) after known exposure to influenza virus infection; (x) after manifestation of an effect or symptom of influenza virus infection. 11. Uso, de acordo com a reivindicação 9 ou 10, CARACTERIZADO por ser em combinação com um segundo agente, opcionalmente em que o segundo agente é selecionado a partir do grupo consistindo em uma vacina, um agente antiviral, um analgésico, um agente antiinflamatório, um antibiótico, um agente esteroide, um adjuvante, uma protease, uma glicosidase, um inibidor da neuraminidase, um análogo de nucleosídeo, aciclovir, ribavirina, amantadina, rimantadina, interferons alfa e outros interferons, zanamivir, oseltamivir, laninamivir, peramivir, ou um segundo anticorpo anti-HA, opcionalmente em que o segundo anticorpo anti-HA é selecionado a partir de uma molécula de anticorpo compreendendo um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 25 e um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 155, uma molécula de anticorpo compreendendo um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 25 e um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 45, ou uma molécula de anticorpo compreendendo um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 24 e um segmento de região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 45.11. Use according to claim 9 or 10, CHARACTERIZED by being in combination with a second agent, optionally wherein the second agent is selected from the group consisting of a vaccine, an antiviral agent, an analgesic, an anti-inflammatory agent , an antibiotic, a steroid agent, an adjuvant, a protease, a glycosidase, a neuraminidase inhibitor, a nucleoside analogue, acyclovir, ribavirin, amantadine, rimantadine, alpha interferons and other interferons, zanamivir, oseltamivir, laninamivir, peramivir, or a second anti-HA antibody, optionally wherein the second anti-HA antibody is selected from an antibody molecule comprising a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25 and an immunoglobulin variable region segment a light chain molecule comprising SEQ ID NO: 155, an antibody molecule comprising a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 25 and a light chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 45, or an antibody molecule comprising a heavy chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 24 and a light chain immunoglobulin variable region segment comprising SEQ ID NO: 45. 12. Método de detecção de um vírus influenza em uma amostra biológica ou determinação se um paciente está infectado com influenza, CARACTERIZADO por compreender a colocação da amostra ou uma amostra do paciente em contato com uma molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e a detecção da ligação da molécula de anticorpo com a amostra ou um polipeptídeo na amostra, deste modo detectando o vírus influenza na amostra ou determinando se o paciente está infectado com influenza.12. Method of detecting an influenza virus in a biological sample or determining whether a patient is infected with influenza, CHARACTERIZED by comprising placing the sample or a patient sample in contact with an antibody molecule, as defined in any one of the claims 1 to 4, and detecting binding of the antibody molecule to the sample or a polypeptide in the sample, thereby detecting the influenza virus in the sample or determining whether the patient is infected with influenza. 13. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA por compreender uma molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 e um veículo farmaceuticamente aceitável.13. Pharmaceutical composition, CHARACTERIZED by comprising an antibody molecule, as defined in any one of claims 1 to 4 and a pharmaceutically acceptable carrier. 14. Kit, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a molécula de anticorpo, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4; e um tampão ou veículo de entrega farmaceuticamente aceitável, um dispositivo de entrega, ou ambos.14. Kit, CHARACTERIZED by the fact that it comprises the antibody molecule, as defined in any one of claims 1 to 4; and a pharmaceutically acceptable buffer or delivery vehicle, a delivery device, or both.