BR112013033309B1

BR112013033309B1 - Uso de tazaroteno e método in vitro para inibição de ativação de células nkt tipo i

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Publication number: BR112013033309B1
Application number: BR112013033309-0A
Authority: BR
Inventors: Vipin Kumar Chaturvedi
Original assignee: Gri Bio, Inc
Priority date: 2011-06-24
Filing date: 2012-06-22
Publication date: 2022-07-05
Also published as: EP2723347A4; JP6441073B2; EP2723347B1; RU2678561C9; US20210169909A1; RU2678561C2; US10925886B2; DK2723347T3; BR112013033309A2; WO2012178108A1; CA2840272A1; BR112013033309A8; CN103732231A; AU2012272642A1; KR102055395B1; EP3616701A1; MX2013015441A; CN103732231B; CA2840272C; US20180193368A1

Abstract

USO DE UM AGONISTA DE RAR? ; USO DE UM AGONISTA DE RAR? E UM SULFATÍDEO OU ANÁLOGO DE SULFATÍDEO SINTÉTICO ; USO DE UM SULFATÍDEO OU ANÁLOGO DE SULFATÍDEO SINTÉTICO ; E MÉTODO IN VITRO PARA INIBIÇÃO DE ATIVAÇÃO DE CÉLULAS NKT T IPO I 5 Trata-se de métodos para a prevenção e para o tratamento de afecções inflamatórias, como doença hepática alcoólica (ALD). Mais especificamente, as presentes modalidades referem-se à prevenção e ao tratamento de ALD através da administração de um agonista de Receptor de Ácido 10 Retinoico (RAR). Algumas modalidades referem-se ao uso de tazaroteno na prevenção e tratamento de lesão hepática induzida por álcool, doença hepática relacionada a álcool, doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepa tite alcoólica ou cirrose alcoólica.

Description

ANTECEDENTES CAMPO DA TÉCNICA

[0001] As presentes modalidades referem-se a composições e métodos para modular Receptor de Ácido Retinoico (RAR) na prevenção e tratamento de afecções inflamatórias do fígado.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

[0002] O uso excessivo de álcool é uma das principais causas de doença hepática no mundo ocidental. Evidência de lesão hepática é observada em indivíduos que consomem quatro ou mais bebidas alcóolicas por dia (quatro cervejas de 340,95 ml (12 onças), quatro cálices de vinho ou 113,65 ml (4 onças) de bebida destilada para homens ou metade dessa quantidade para mulheres). Embora o modo como álcool danifica o fígado não seja totalmente compreendido, o consumo alcoólico crônico resulta na secreção de citocinas pró- inflamatórias (TNF-alfa, IL6 e IL8), tensão oxidativa, peroxidação de lipídio e toxicidade de acetaldeído, resultando em inflamação, apoptose e, por fim, fibrose das células hepáticas.

[0003] A doença hepática alcóolica (ALD) tem três fases principais: doença hepática alcóolica gordurosa, hepatite alcoólica e cirrose. A doença hepática alcóolica gordurosa, que é caracterizada por um acúmulo de ácidos graxos no fígado, é normalmente assintomática e reversível, se o indivíduo abster do consumo de álcool por algumas semanas. Em casos graves, fraqueza, náusea, dor abdominal, perda de apetite e indisposição podem ser experimentados. Embora a maioria dos indivíduos com consumo alto de álcool exiba algum nível de doença hepática gordurosa e, em alguns casos, o alto consumo de álcool precisa ter ocorrido apenas diariamente durante um período menor que uma semana, apenas um dentre cinco indivíduos com consumo alto de álcool desenvolve hepatite alcoólica e um dentre quatro desenvolve cirrose. A hepatite alcóolica é caracterizada pela inflamação de hepatócitos e é, em geral, reversível por abstinência. A cirrose, que é caracterizada por inflamação, fibrose (enrijecimento celular) e membranas danificadas, o que evita a desintoxicação de substancias químicas no copo e leva à cicatrização e necrose, é, em geral, irreversível.

[0004] Os mecanismos celulares e moleculares subjacentes às diferentes fases de dano ao tecido de fígado na doença hepática alcoólica são pouco compreendidos. Embora haja progresso em diversas áreas, ainda não há uma abordagem terapêutica eficaz para frear essa doença. Isso ocorre, em parte, devido ao fato de que o fígado é um órgão único tanto imunologicamente quanto anatomicamente. Por exemplo, embora células parenquimais hepáticas tenham funções metabólicas, células não parenquimais realizam funções imunológicas. Além de hepatócitos parenquimais, o fígado contém diversas células não parenquimais, como LSEC, células de Kupffer, células dendríticas, células NK e células NKT, que podem, todas, participar da imunidade. Como a resposta imune é orquestrada para fornecer ou tolerância ou imunidade a dano induzido por álcool não é conhecido.

SUMÁRIO

[0005] As presentes modalidades referem-se, em geral, a métodos e composições para modular o sistema imune inato para evitar e tratar danos ao tecido associados a afecções inflamatórias. Por exemplo, diversas modalidades descritas no presente documento referem-se à prevenção e tratamento de doença hepática alcoólica (ALD) ao modular o sistema imune inato.

[0006] Diversas modalidades descritas no presente documento referem-se a métodos e composições para manipular as atividades de células NKT tipo I e células NKT tipo II, interações entre células NKT tipo I e tipo II suas interações com outras células hepáticas para tratar, atenuar ou prevenir lesões hepáticas associadas à inflamação. Em algumas modalidades, a lesão associada à inflamação é uma lesão hepática induzida por álcool. Em algumas modalidades, a lesão hepática induzida por álcool é uma doença hepática relacionada a álcool, uma doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepatite alcoólica ou cirrose alcoólica.

[0007] Diversas modalidades referem-se a um método para evitar, atenuar ou tratar danos hepáticos induzidos por inflamação seguindo o consumo excessivo de álcool ao inibir a atividade de célula NKT tipo I. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória é inibida por um ou mais agonistas de RAR selecionados do grupo que consiste em ATRA, retinol, 9-cis-RA ou 13-cis-RA, tretinoína, AM580, AC55649, CD1530 e Tazaroteno. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró-inflamatória é inibida por um ou mais retinoides poliolefínicos, como isoretinoína e acitretina. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória é inibida por um ou mais agonistas de RAR selecionado do grupo que consiste em etretinato, acitretina e isotretinoína. Diversas modalidades referem-se à inibição de atividade de célula NKT tipo I pró-inflamatória por tazaroteno, ácido tazarotênico ou uma mistura dos mesmos. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória é inibida pela ativação de células NKT tipo 2. Em algumas modalidades, a atividade inflamatória de célula NKT tipo I é inibida por um ou mais sulfatídeos.

[0008] Algumas modalidades da presente descrição referem-se aos mecanismos imunes inatos que levam à lesão hepática seguindo, relacionada a ou causada por consumo de álcool. Algumas modalidades referem-se à manipulação das interações entre essas células que fornecem naturalmente tolerância a antígenos derivados do intestino ou de metabólito e, ao mesmo tempo, fornecer imunidade contra patógenos não autoidentificados.

[0009] Algumas modalidades referem-se a uma abordagem de terapia de combinação que alveja ambas as células NKT tipo I e do tipo II para o desenvolvimento de um terapia eficaz para tratar, prevenir ou atenuar danos ao tecido associados a afecções inflamatórias. Em algumas modalidades, um agonista de RAR é usado para inibir diretamente a atividade de células NKT do tipo I e um sulfatídeo é usado para ativar a atividade de células NKT do tipo II.

[0010] Algumas modalidades referem-se à prevenção e tratamento de danos ao tecido associados a ALD através da administração de ácido all-trans retinoico (ATRA). Diversas modalidades referem-se ao uso de ATRA na prevenção e tratamento de lesão hepática induzida por álcool, doença hepática relacionada a álcool, doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepatite alcoólica ou cirrose alcoólica.

[0011] Algumas modalidades referem-se à prevenção e tratamento de danos ao tecido associados a ALD através da administração de tazaroteno, ácido tazarotênico ou uma mistura dos mesmos. Diversas modalidades referem-se ao uso de tazaroteno, ácido tazarotênico ou uma mistura dos mesmos na prevenção e tratamento de lesão hepática induzida por álcool, doença hepática relacionada a álcool, doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepatite alcoólica ou cirrose alcoólica.

[0012] Algumas modalidades referem-se à prevenção e tratamento de danos ao tecido associados a inflamação através da administração de um ou mais sulfatídeos. Diversas modalidades referem-se ao uso de sulfatídeo na prevenção e tratamento de lesão hepática induzida por álcool, doença hepática relacionada a álcool, doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepatite alcoólica ou cirrose alcoólica. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0013] em que R1 é selecionado do grupo que consiste em a ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma alquenila substituída C1 a C30 e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionada do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionada do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquinila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a estrutura química:

[0014] Algumas modalidades referem-se à regulação de células NKT tipo I por células NKT do tipo II reativo por sulfatídeo ativadas. Diversas modalidades referem-se ao papel regulador das células NKT do tipo II reativo por sulfatídeo ativadas em células NKT tipo I na proteção de mediação a partir de uma doença autoimune e supressão de imunidade antitumoral.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0015] A Figura 1a mostra uma metodologia através da qual o efeito do sulfatídeo em NKT do tipo I no fígado é determinado. A Figura 1b mostra dados representativos de dois experimentos independentes que medem a proliferação celular em resposta a um desafio IN VITRO com αGalCer na presença ou ausência de 10 ng/ml de IL-2. A Figura 1c mostra os resultados de manchamento intracitoplasmático de populações de sulfatídeo/CD1d-tetrâmero+ e tetrâmero- no fígado para identificar células IFN-Y+ seguindo a injeção com 20 μg de sulfatídeo. Os números acima do colchetes indicam a % de células positivas em PBS ou camundongos injetados com sulfatídeo. A Figura 1d mostra micrógrafos (X200) de seções de fígado manchadas com hemtaoxilina e eosina (H&E) representativas dos camundongos em 12 a 96 horas seguindo o tratamento com apenas ConA (fileira de cima) ou ConA mais sulfatídeo de cérebro bovino (fileira de baixo). O inferior esquerdo mostra um micrografo representativo de uma seção de fígado manchada com H&E a partir de um camundongo controle injetado apenas com sulfatídeo. A Figura 1e mostra gráficos que mostram níveis de alanina amino transferase (ALT) e aspartato amino transferase (AST) em camundongos IL-12p40+/+ em pontos no tempo diferentes após a injeção de ConA (símbolos preenchidos) ou ConA mais sulfatídeo (símbolos abertos). Os valores são a média de ± SD de 5 camundongos por grupo. P < 0,001.

[0016] A Figura 2a mostra fluxogramas de células que expressam Gr-1/CD11b isoladas de lobos de fígado cefalados do tipo selvagem (WT), camundongos WT tratados com sulfatídeo e Jα18-/- mutante submetidos a cirurgia sham ou lesão de isquemia-reperfusão (IRI). As caixas mostram as populações de Gr-1high e Gr-1int analisadas na Figura 2b. Os números ao lado das caixas indicam o percentual de células positivas dentre leucócitos hepáticos. A Figura 2b mostra gráficos de barras que resumem a análise citométrica de fluxo. O painel esquerdo mostra o % e o painel direito mostra os números absolutos das populações de Gr-1high e Gr-1int. Os valores são médias ± SEM. * p < 0,005. A Figura 2c mostra um gráfico que mostra a % de células IFN-Y+ αGalCer/CD1d- tetrâmero+ nos fígados camundongos IRI, sham e tratados com sulfatídeo. Os valores são médios ± SEM. P<0,01.

[0017] A Figura 3 mostra um modelo para a mediação de sulfatídeo do Atividade de célula NKT do Tipo I e Tipo II. De acordo com o modelo, sulfatídeo promove a ativação de células NKT do tipo II, que, por sua vez, torna as células NKT tipo I inativas. A inibição de células NKT tipo I é exemplificada pela inibição da secreção de IFN-Y resultante no recrutamento hepático reduzido de células mieloides, granulócitos e, consequentemente, em lesão celular de hepatócito e endotelial reduzido.

[0018] A Figura 4 mostra os micrógrafos representativos de tecido manchado por H&E a partir dos lobos de fígado cefalados de camundongos submetidos a 90 minutos de isquemia hepática seguida por 24 horas de reperfusão (IRI) (fileira de cima) e camundongos submetidos a cirurgia sham (sham) (fileira de baixo) a uma magnificação de 100X. Da esquerda para a direita, os painéis mostram tecido de camundongos WT não tratados, Jα18-/- não tratados, WT tratados com sulfatídeo e camundongos Jα18-/- tratados com sulfatídeo.

[0019] A Figura 5 mostra gráficos que resumem a análise por citometria de fluxo de MNCs de fígado isoladas dos grupos (4 em cada) de camundongos macho BL/6 WT ou Jα18- /- seguindo 5 semanas de alimentação com uma dieta com líquido Lieber-Decarli que contém 5% de etanol ou dieta controle que contém um número similar de calorias. Os valores P <0,005. O acúmulo de células NKT tipo I ativadas e células mieloides CD11b+Gr-1+ foi observado nos fígados de camundongos WT, mas não Jα18-/-.

[0020] A Figura 6 mostra um gráfico de barras que mostra níveis de soro ALT em WT (B6) e camundongos Jα18-/- injetados (i.p.) com 20 microgramas/sulfatídeo de camundongo (d-1 & d10) (barras sombreadas com linhas horizontais (Sulfatídeo)), 0,3 miligramas/ATRA animal (d6 a d10) (barras sombreadas com linhas verticais (atRA)) ou veículo/DMSO (barras sombreadas sólidas (EtOH)) e alimentados com dieta líquida Lieber-DeCarli que contém álcool. Os grupos de controle (barras não sombreadas) foram alimentados com uma dieta de controle isocalórica. Valores P <0,05.

[0021] A Figura 7 mostra micrógrafos representativos (X200) de tecido de fígado colhido dos camundongos veículo/DMSO, tratados com sulfatídeo e ATRA seguindo a alimentação de etanol compulsiva e crônica. O tecido do fígado de camundongos veículo/DMSO mostra evidencia de esteatohepatite hepática (doença hepática gordurosa), enquanto o tecido de fígado obtido a partir de camundongos tratados com sulfatídeo e ATRA parece relativamente normal.

[0022] A Figura 8a mostra um gráfico de barras que mostra a proliferação (conforme medida pela incorporação de timidina [3H]) de células do baço NKT do tipo I isoladas recentemente incubadas em αGalCer apenas, ATRA apenas ou em αGalCer com níveis crescentes de ATRA. A Figura 8b mostra um gráfico que mostra o nível de secreção de citocina IL-2 por uma célula NKT do tipo I (Hy1.2) em resposta a u αGalCer apenas ou αGalCer e níveis de ATRA crescentes. A Figura 8c mostra gráficos que mostram os níveis de secreção de citocina IFN-y, IL-4, IL-13, IL-6, IL-10 e IL-12 por células hepáticas NKT tipo I colhidas de camundongos injetados com DMSO ou ATRA e incubados com αGalCer IN VITRO. Os dados mostrados são representativos de 2 experimentos individuais.

[0023] A Figura 9a mostra micrógrafos representativos (X200) de tecido de fígado manchado com H&E colhido de camundongos macho BL/6 e Jα18-/- seguindo a alimentação crônica (10 dias de 5% de etanol em dieta líquida Lieber-DeCarli) ou crônica mais compulsiva (dez dias de alimentação crônica de dieta líquida seguida por uma gavagem única de 5 g/kg de etanol). A Figura 9b mostra gráficos que mostram níveis de soro ALT em camundongos controle ou alimentados com etanol BL/6 ou Jα18-/- seguindo alimentação crônica ou crônica mais compulsiva.

[0024] A Figura 10 mostra um gráfico de barras que mostra a proliferação (conforme medida pela incorporação de [3H]-timidina) de células CD4+T reativas com proteína básica de mielina MBPAc1-9 recentemente isolada de camundongos transgênicos virgem B10.PL Vβ8.2 TCR em resposta ao estímulo com MBPAc1-9 apenas ou MBPAc1-9 e concentrações graduadas de ATRA (0,15, 1,2, 18,8 μg/ml).

[0025] A Figura 11 mostra um gráfico que mostra o nível de IL-2 secretado por Células NKT tipo I (Hy1.2) cultivadas IN VITRO com concentrações graduadas do antígeno de lipídio, αGalCer, e 0, 5, ou 10 μg/ml ATRA por 24 horas.

[0026] A Figura 12 mostra um gráfico que mostra a proliferação (como medida pela incorporação de [3H]) de células do baço NKT do tipo I isoladas recentemente cultivadas na presença de αGalCer e graduadas em concentrações de ATRA, um agonista de RARα (AM580), um agonista de RAR β 2 (AC55649) ou um agonista de RARY (CD1530).

[0027] A Figura 13 mostra um gráfico que mostra a proliferação (conforme medida pela incorporação de timidina [3H]) de células do baço NKT do tipo I isoladas recentemente cultivadas na presença de αGalCer e concentrações graduadas de um agonista de PPAR-y (rosiglitazona) ou um antagonista de PPAR-y (GW9662).

[0028] A Figura 14 mostra um gráfico que mostra a proliferação (conforme medida por incorporação de timidina [3H]) de células do baço NKT do tipo I isoladas recentemente cultivadas na presença de αGalCer e concentrações graduadas de ATRA, análogos de ácido retinoico diferentes, Retinol ou Vitamina A.

[0029] A Figura 15 mostra gráficos de barra que mostram a proliferação (conforme medido pela incorporação de timidina [3H]) de células do baço NKT do tipo I isoladas recentemente (esquerda) ou hibridoma de célula NKT do tipo I (1.2 Hyb) cultivado na presença de concentrações ótimas de αGalCer (10 ng /ml) e concentrações ótimas de ATRA, Tretinoína, um agonista de RARα (AM580), um agonista de RAR β 2 (AC55649) ou um agonista de RARy (CD1530). Os gráficos são representativos dos dados de 3 experimentos independentes.

[0030] A Figura 16 mostra os gráficos que mostram os resultados da proliferação IN VITRO de esplenócitos recentemente isolados (painel de cima) ou ensaios de liberação de citocina de hibridoma de célula NKT do tipo I (1.2 Hyb) (painel inferior) cultivada com concentrações ótimas de αGalCer (10 ng/ml) na presença de concentrações crescentes de ATRA ou o agonista Tazaroteno seletivo de RARY. Tazaroteno mostra uma melhor inibição de células NKT tipo I do que ATRA.

[0031] A Figura 17 mostra um gráfico que mostra os resultados de um ensaio EX VIVO de proliferação de células NKT tipo I isoladas de camundongos tratados com Tazaroteno, ATRA ou DMSO (controle) e estimuladas com concentrações tituladas de αGalCer.

[0032] A Figura 18 mostra a análise de células mononucleares isoladas de fígados de camundongos injetados com ATRA, Tazaroteno ou DMSO (controle) e manchadas com aGalCer/CD1d-tetrâmeros e anticorpos de cadeia pan-anti-TCRβ por citometria de fluxo. As células NKT tipo I são indicadas em uma caixa. Não houve diferença significativa nos números (mostrados ao lado da caixa) de células NKT tipo I nos animais controle vs. Administrados com ATRA ou Tazaroteno.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0033] O fígado abriga um número de células especializadas do sistema imune inato, incluindo células Kupffer, células exterminadoras naturais (NK), células exterminadoras naturais T (NKT) e células dendríticas. As células NKT são únicas no que compartilham os receptores de superfície celular de células NK (por exemplo, NK1.1) e, ademais, expressão os receptores de célula T (TCR), permitindo que as mesmas reconheçam antígenos de lipídio no contexto de moléculas CD1d e liguem as repostas imunológicas inatas à imunidade adaptadora. As células NKT têm a habilidade de regular a atividade de outras células que contribuem com a inflamação de tecido e o dano celular associado. Mediante a ativação, as células NKT secretam rapidamente grandes quantidades de IFN-Y, IL-4, fator estimulante de colônia de granulócito-macrófago, assim como múltiplas outras citocinas e quimosinas. Já que células NKT são capazes de secretar ambas as citocinas Th1 e Th2, é difícil prever as consequências de ativação celular de NKT IN VIVO. Dependendo do contexto, a ativação de célula NKT aciona cascatas de eventos que promovem ou suprimem diferentes respostas imunes. Em alguns contextos, a ativação de células NKT leva à ativação de células NK, células dendríticas (DCs) e células B.

[0034] Células NKT reconhecem antígenos de lipídio apresentados no contexto da molécula similar à classe I de MHC monomórfica, CD1d. Células NKT restritas a CD1d são categorizadas em tipo I e tipo II, que reconhecem antígenos de lipídio diferentes apresentados por moléculas CD1d. Embora ambos os subconjuntos de célula NKT sejam predominantemente NK1.1+ (camundongo) ou CD161+/CD56+ (humano), seus números relativos são diferentes em camundongos e humanos: portanto, enquanto células NKT tipo I são predominantes em camundongos, o subconjunto de célula NKT do tipo II é predominante em humanos.

[0035] Tipo I, também conhecido como células NKT não variantes, expressam um receptor de célula T semi não variante (TCR) caracterizado em camundongos por Vα14-Jα18 e Vβ8.2, Vβ7, ou Vβ2 ou em humanos por Vα24-JαQ e Vβ11, e são fortemente reativas com ceramida de α-galactosil de glicolipídio derivado de esponja marinha (αGalCer), e são identificadas por aGalCer/CD1d-tetrâmeros em citometria de fluxo. As células NKT tipo I também reconhecem antígenos à base de lipídio, como lipídios derivados de bactéria e um autoglicolipídio, isoglobotrihexosil ceramida (iGb3). Células NKT tipo I exibem marcadores de memória e são únicas no armazenamento de mRNA pré-formado para citocinas. Camundongos que não têm o gene Jα18 gene (camundongos Jα18) são deficientes apenas em células NKT tipo I.

[0036] Células NKT do tipo II, que são distintas das células NKT tipo I, são células regulatórias que podem modular a atividade de diversos outros subconjuntos, incluindo células NKT tipo I. Células NKT do tipo II reconhecem o autoglicolipídio, sulfatídeo (3’-sulfogalactosil ceramida) em ambos camundongos e humanos. Um subconjunto principal de células NKT do tipo II, que podem ser identificadas com o uso de sulfatídeo/CD1d-tetrâmeros em citometria de fluxo, utilizam, predominantemente os segmentos de gene Vβ8.1/Vβ3.1-Jβ2.7 e Vαl/Vα3-Jα7 e são reativos a sulfatídeos. A ativação de células NKT tipo II pode ser avaliada ao pela avaliação da resposta proliferativa IN VITRO de células NKT tipo II a um agente candidato, assim como pela avaliação da expressão de C069 e perfil de secreção de citocina por manchamento de citocina intracelular ou PCR em tempo real para IFN-Y, IL-4 ou IL-13. Ademais, a habilidade de células NKT do tipo II ativadas de energizar células NKT tipo I pode ser avaliada pela avaliação da resposta proliferativa de células NKT tipo I a αGalCer (um ativador potente de células NKT tipo I) com o uso de análise por diluição de CF8E manchamento de citocina intracelular de aGalCer/células de CO 1 d-tetrâmero.

ATIVIDADE DE CÉLULA NKT DO TIPO I E TIPO II NO FÍGADO, SEGUINDO LESÃO DE ISQUEMIA-REPERFUSÃO E HEPATITE INDUZIDA POR CONCANAVALINA A

[0037] Lesão por reperfusão ocorre quando o fornecimento de sangue é restaurado a um órgão ou tecido após um período de isquemia. A lesão de reperfusão hepática ocorre, em geral, em conexão com cirurgia ou trauma e tem um papel importante na qualidade e função de tecido de enxerto após o transplante de fígado. O desenvolvimento de lesão de isquemia-reperfusão (IRI) ocorre em pelo menos duas fases: um período inicial (seguindo cerca de 1 a cerca de 6 horas de reperfusão), que é dominado por ativação de célula Kupffer, liberação de espécies de oxigênio reativo, recrutamento de célula CD4+ e secreção de citocinas pró-inflamatórias e um período posterior (seguindo a fase inicial de cerca de 6 a cerca de 48 horas de reperfusão), que é caracterizado por acúmulo de neutrófila e indução de necrose. Conforme mostrado na Figura 2a, em camundongos do tipo selvagem (WT), um subconjunto de célula mieloide (CD11b+), CD11b+Gr-1int, que compreende células de precursor mieloide e monócitos, é recrutado em tecidos reperfundidos na fase precoce de lesão de isquemia-reperfusão. O recrutamento de células mieloides diferentes de neutrófilos, como o subconjunto CD11b+Gr-1int, sugere que a lesão é acentuada por recrutamento de monócitos inflamatórios em tecido reperfundido.

[0038] As células NKT tipo I também se tornam ativadas e secretam IFN-Y seguindo a reperfusão isquêmica. Consulte a Figura 2c. O papel de células NKT tipo I em IRI foi avaliado por comparação dos fígados do tipo selvagem (WT) e camundongos Jα18-/-, que não têm células NKT tipo I, mas têm níveis normais de células NKT tipo II. Conforme mostrado na Figura 4, seguindo 90 minutos de isquemia e 24 horas de reperfusão, os lobos de fígado cefalados de camundongos WT tinham grandes áreas necróticas, enquanto as áreas necróticas em camundongos deficientes em célula NKT do tipo I (camundongos Jα18-/-) foram notavelmente reduzidas por comparação. Isso indica um papel patogênico para células NKT tipo I na mediação de lesão de isquemia hepática e reperfusão. O EFEITO DE CÉLULAS NKT-2 ATIVADAS POR SULFATÍDEO EM CÉLULAS NKT-1

[0039] Conforme descrito na Patente n° U.S. 8044.029 e Pedido de Patente n° U.S. 12/938.315, que estão aqui incorporados a título de referência em suas totalidades, a administração de um autoligante de glicolipídio, sulfatídeo, assim como análogos de sulfatídeo sintéticos modula a atividade de células NKT tipo I e tipo II. O reconhecimento dependente de CD1d de sulfatídeo ativa células NKT tipo II e predominantemente células dendríticas plasmacitoides (pDC), mas não populações de célula dendrítica convencional (cDC) (que são normalmente ativadas por células NKT do tipo I), o que leva a um recrutamento rápido de células NKT tipo I no fígado de maneira dependente de IL-12 e MIP2. Entretanto, as células NKT tipo I recrutadas não são ativadas, não secretam citocinas e se tornam anérgicas.

[0040] Eventos celulares envolvidos nos mecanismos imunorregulatórios seguindo a administração de sulfatídeo IN VIVO são mostrados na Figura 1. A administração de sulfatídeo a) suprimi a proliferação IN VITRO de células NKT tipo I em resposta ao estímulo por αGalCer (Figura 1b) e b) aumenta o percentual de sulfatídeo/células CD1d-tetrâmero+ com manchamento de IFN-y intracitoplasmático (Figura 1c).

[0041] A secreção de IFN-y por células NKT tipo I hepáticas durante a fase precoce de lesão de isquemia e reperfusão é significativamente diminuída em camundongos que recebem sulfatídeo comparado com animais não tratados. Consulte a Figura 2c. Ademais, como com a ausência de células NKT tipo I em camundongos Jα18-/-, a lesão hepática seguindo isquemia/reperfusão é significativamente reduzida em camundongos tratados com sulfatídeo. Consulte a Figura 4. Isso indica um papel patogênico para células NKT tipo I na mediação de lesão de isquemia hepática e reperfusão. O papel da secreção de IFN-Y por células NKT tipo I pode ser uma característica comum de lesão de órgão isquêmica, já que lesão de isquemia e reperfusão dos rins também é atenuada em camundongos Jα18-/-, que não têm NKT do tipo I.

[0042] Similarmente à IRI, a administração de sulfatídeo protege contra hepatite induzida por concanavalina A (ConA), conforme indicado por necrose hepatocelular reduzida, consulte a Figura 1d, e níveis de soro reduzidos de alanina aminotransferase (ALT) e aspartato amino transferase (AST), marcadores de dano hepatocelular, consulte a Figura 1e. Isso indica um papel patogênico para células NKT tipo I em hepatite induzida por ConA.

[0043] Coletivamente, dados de ambos os modelos de danos hepáticos, IRI e hepatite induzida por ConA, são consistentes com uma trajetória imunorregulatória na qual células NKT tipo I têm um papel prejudicial e células NKT do tipo II reativas a sulfatídeo têm um papel protetor no surgimento de inflamação hepática de diversas causas. Tal proteção é associada à inibição da secreção de citocina por células NKT tipo I (fenótipo inibido) e uma redução significativa no recrutamento hepático de células mieloides imaturas (CD11b+Gr-1+) CD11b+Gr-1- e células NK. A inibição nas células NKT tipo I também é associada à tolerância ou modificação de células dendríticas convencionais (cDCs) e, junto com células NKT tipo I inibidas, inibem a ativação/expansão de células adaptativas Th1/Th17 CD4+/CD8+ T. Isso leva a um modelo em que a administração de sulfatídeo estimula a atividade de células NKT do tipo II, que, por sua vez, inibem a atividade de célula NKT tipo I e os danos hepáticos causados por inflamação mediada por célula NKT do tipo I. Consulte a Figura 3.

PAPEL DE CÉLULAS NKT NA DOENÇA HEPÁTICA ALCÓOLICA

[0044] A doença hepática alcóolica (ALD) desenvolve como uma consequência de danos a células hepáticas causadas por consumo alcoólico excessivo. Múltiplas lesões podem ser exigidas antes de manifestações clínicas de ALD serem observadas. Entretanto, conforme descrito no presente documento, número significativamente aumentados de células NKT tipo I (aGalCer/células CD1d-tetrâmero+) , células CD4+ e células mieloides CD11b+Gr-1+, mas não células NKT do tipo II ou células CD11b+Gr-1-, é observado no fígado seguindo o consumo de álcool crônico. Consulte o Exemplo 6 e a Figura 5. A expressão acentuada do marcador CD69 indica, ainda, que células NKT tipo I são parcialmente ativadas. Portanto, mesmo na ausência de quaisquer sinais clínicos de doença (fase pré- clínica), as células que realizam a mediação de uma resposta inflamatória se acumulam no fígado seguindo o consumo excessivo de álcool. Na ausência de células NKT tipo I (camundongos Jα18-/-), o acúmulo de células mieloides CD11b+Gr-1+ no fígado seguindo o consumo crônico de álcool é significativamente reduzido. Consulte o Exemplo 6 e a Figura 5. Esses dados sugerem que as células NKT tipo I estão envolvidas na mediação de fase pré-clínica de ALD.

[0045] Consistente com os dados que sugerem um papel para células NKT tipo I na fase pré-clínica de ALD, manifestações clínicas de danos hepáticos seguindo o consumo excessivo de álcool são significativamente reduzidas, conforme medido, por exemplo, por histologia e análise de enzima de fígado, em camundongos deficientes em célula NKT do tipo I (Jα18-/-). Consulte o Exemplo 6 e as Figuras 6 e 7. Esses dados sugerem que as células NKT tipo I têm um papel importante no dano alcoólico ao fígado.

[0046] Células NKT expressam receptores de célula T, que permitem que as mesmas reconheçam antígenos de lipídio no contexto de moléculas de CD1d. Sem desejar se ater a uma teoria particular, as células NKT tipo I são ativadas no fígado seguindo o consumo de etanol pela apresentação local de autolipídios oxidizados por células de apresentação ode antígeno que expressam CD1d (APCs). Células NKT tipo I ativadas iniciam, então, um processo de múltiplas etapas que resulta na ativação de célula Kupffer, recrutamento/ativação de granulócitos seguido por dano inflamatório a hepatócitos.

[0047] A interação entre subtipos de célula NKT segundo o consumo de álcool configura o estágio para danos hepáticos e, em casos graves, doença hepática alcoólica (ALD). Diversas modalidades descritas no presente documento referem-se a métodos e composições para manipular os papeis opostos de células NKT tipo I e células NKT tipo II e suas interações com outras células hepáticas para tratar, atenuar ou evitar lesões ao fígado seguindo o consumo de álcool.

[0048] Diversas modalidades descritas no presente documento referem-se à modulação da atividade de subtipos de célula NKT para tratar, atenuar ou evitar lesões ao fígado induzidos por álcool. Conforme descrito no presente documento, a administração de sulfatídeo ou agonistas de ácido retinoico (RAR) inibe danos hepáticos induzidos por álcool. Por exemplo, injeções de sulfatídeo ou agonista de receptor de ácido retinoico (RAR), ácido all-trans retinoico (ATRA), durante o consumo de álcool crônico e anterior ao consumo compulsivo de etanol, tiveram um efeito protetor, conforme mostrado por exame histológico e análise de níveis de enzima de fígado em soro. Consulte o exemplo 7 e as Figuras 6 e 7.

[0049] Diversas modalidades referem-se a um papel protetor em lesão hepática induzida por álcool para um subconjunto principal de células NKT tipo II, que são reativas a sulfatídeo. A ativação desse subconjunto de célula NKT por sulfatídeo inibe lesões mediadas por célula NKT do tipo I seguindo o consumo excessivo de álcool. A proteção mediada por sulfatídeo é associada à ativação de células NKT do tipo II e à inibição de secreção de IFN-Y por células hepáticas NKT tipo I e à supressão do recrutamento mediado por célula NKT do tipo I de células mieloides, por exemplo, os subconjuntos CD11b+Gr-1int e Gr-1-, e células NK para o fígado.

[0050] O tratamento com sulfatídeo resulta na proteção quase completa de danos hepáticos seguindo o consumo de álcool excessivo. Consulte as Figuras 6 e 7. Sem desejar se ater por uma teoria particular, o efeito protetor de sulfatídeo é mediado através da ativação direta de células NKT do tipo II, que exercem um efeito inibidor em células NKT tipo I e cDCs.

[0051] Linhagens de célula T de linfócitos de sangue periféricos (PBL) de dois doadores saudáveis foram geradas seguindo o estímulo IN VITRO ou com αGalCer ou sulfatídeo e analisadas por citometria de fluxo. Cerca de 2% da cepa de células T com sulfatídeo/hCD1d-tetrâmeros nessa linhagem celular segue dois ciclos de estímulo. Similar ao sistema murino, essas células não usam a invariante Vα24-Vα11 TCR. Esses dados mostram a presença de células NKT tipo II reativas a sulfatídeo em indivíduos saudáveis e indicam a eficácia de usar sulfatídeo/humanCD1d-tetrâmeros na caracterização de células NKT tipo II humanas em doença hepática alcoólica.

[0052] Em algumas modalidades, o sulfatídeo pode ser, por exemplo, sulfatídeo derivado de cérebro bovino, que é uma mistura de cerca de 20 espécies diferentes obtidas a partir de Sigma Inc. (Chicago, IL, EUA). Em outras modalidades, o sulfatídeo é semissintético e é uma espécie única de sulfatídeo, por exemplo, cis-tetracosenoil sulfatídeo ou lisosulfatídeo obtido junto à Maitreya Inc, (Pleasant Gap, PA, EUA). Em ainda outras modalidades, o sulfatídeo pode ser um sulfatídeo totalmente sintético.

[0053] O sulfatídeo derivado de mielina de cérebro bovino é composto de uma mistura de 2:1 de cadeias de acila principais saturadas/insaturadas (C24), sendo que instauração ocorre em C19. Diversas modalidades referem-se ao uso de análogos de sulfatídeo sintético, como análogos com cadeia acila saturada (C24) e cadeias insaturadas (C24: 1) assim como análogos compostos de comprimentos diferentes de cadeias de acila no ácido graxo ou porção química de esfingosina (mais curta, assim como mais longa, por exemplo, C18, C32) e isômeros posicionais com grupo 3’ vs. 4’-sulfatado na porção química de galactose (3’-803 vs. 4’-803).

[0054] Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte fórmula química I:

[0055] em que R1 pode ser uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, uma alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma alquenila substituída C1 a C30 ou um açúcar C5 a C12; R2 pode ser um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi ou um grupo alcóxi; R3 pode ser um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi ou um grupo alcóxi; R4 pode ser um hidrogênio, um grupo hidróxi ou um grupo alcóxi; R5 pode ser um hidrogênio, um grupo hidróxi, uma carbonila, um grupo alcóxi ou uma ligação; R6 pode ser uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 ou uma alquinila C1 a C40; R7 pode ser uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40, ou uma alquinila C1 a C40; e R8 pode ser um hidrogênio, um grupo hidróxi, uma carbonila, um grupo alcóxi ou uma ligação.

[0056] Em outras modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte fórmula química II:

[0057]em que R1 é selecionada do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação.

[0058] Em outra modalidade, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0059] Conforme usado no presente documento, o termo “alquila” significa qualquer hidrocarboneto saturado não ramificado ou ramificado. O termo “alquila substituída” significa qualquer hidrocarboneto saturado substituído não ramificado ou ramificado. Compostos cíclicos, ambos hidrocarbonetos cíclicos e compostos cíclicos que têm heteroátomos, estão no significado de “alquila”.

[0060] Conforme usado no presente documento, o termo “substituído” significa qualquer substituição de um átomo de hidrogênio por um grupo funcional.

[0061] Conforme usado no presente documento, o termo “grupo funcional” tem sua definição comum e refere-se a porções químicas selecionadas, de preferência, do grupo que consiste em um átomo de halogênio, alquila C1-C20, alquila substituída C1-C20, alquila peralogenada, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, benzila, heteroarila, heteroarila substituída, ciano e nitro.

[0062] Conforme usado no presente documento, os termos “halogênio” e “átomo de halogênio” referem-se a qualquer um dos átomos radioestáveis da coluna 17 da Tabela Periódica dos Elementos, de preferência flúor, cloro, bromo ou iodo, sendo que flúor e cloro são particularmente preferidos.

[0063] Conforme usado no presente documento, o termo “alquenila” significa qualquer hidrocarboneto insaturado, substituído ou não substituído, não ramificado ou ramificado. O termo “alquenila substituída” significa qualquer hidrocarboneto insaturado, substituído, não ramificado ou ramificado, substituído por um ou mais grupos funcionais, com aminas secundárias de alquenila C2-C6 não ramificadas, aminas secundárias de alquenila C2-C6 substituídas e aminas terciárias de alquenila C2-C6 não ramificadas que estão na definição de “alquila substituída”. Compostos cíclicos, ambos hidrocarbonetos cíclicos insaturados e compostos cíclicos que tem heteroátomos, estão no significado de “alquenila”.

[0064] Conforme usado no presente documento, o termo “alcóxi” refere-se a qualquer éter insaturado, ou ramificado, substituído ou não substituído, saturado ou insaturado.

[0065] Conforme usado no presente documento, o termo “sulfatídeo” retém seu significado geral comum e refere-se a um éster sulfúrico de cerebrosídeo que contém um ou mais grupos sulfato na porção de açúcar da molécula.

[0066] Conforme usado no presente documento, o termo “cerebrosídeo” refere-se a qualquer composto de lipídio que contém um açúcar, e, em geral, do tipo normalmente encontrado no tecido do cérebro e nervo.

[0067] Os compostos de fórmula (I), (II) e (III) podem estar na forma de sais não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Sais de fórmula (I), (II) e (III) incluem sais de adição ácida, como sais com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico e ácido fosfórico) ou com ácidos orgânicos (por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido maleico, ácido oleico, ácido palmítico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido glutâmico, ácido pantotênico, ácido laurilsulfônico, ácido metanossulfônico e ácido ftálico).

[0068] Os compostos de fórmula (I), (II) e (III) podem estar na forma de solvatos dos mesmos (por exemplo, hidratos).

[0069] Os compostos de fórmula (I), (II) e (III) podem ser produzidos por qualquer método que sirva o propósito de sintetizar sulfatídeos.

[0070] Os compostos de fórmulas (I), (II) e (III) também podem ser isolados de produtos naturais (por exemplo, organismos biológicos) e purificados por cromatografia em coluna ou similares.

[0071] Em uma modalidade, o sulfatídeo tem a fórmula química: (2S, 3R, 4E)-N-nervônico-1-[-D-(3-sulfato)- galactopiranosil]-2-amino-octadeceno-3-ol. Essa fórmula química também é chamada de sulfatídeo de cis-tetracosenoíla.

[0072] Em algumas modalidades, a quantidade específica de sulfatídeo administrada a um paciente variará, dependendo da doença ou afecção que está sendo tratada, assim como a idade, peso e sexo do paciente sendo tratado. Em geral, para alcançar tal concentração final, por exemplo, nos intestinos ou sangue, a quantidade de molécula de sulfatídeo em uma composição de dosagem única das presentes modalidades será, em geral, de cerca de 0,1 miligramas a cerca de 100 miligramas, de preferência cerca de 2,0 miligramas a cerca de 60 miligramas, com maior preferência, cerca de 20 miligramas a cerca de 50 miligramas. Da mesma forma, a quantidade de um composto terapêutico secundário em uma composição de dosagem oral única das presentes modalidades estará, em geral, na faixa de cerca de 0,01 miligramas a cerca de 1.000 miligramas, com maior preferência, cerca de 0,1 miligramas a cerca de 100 miligramas. Obviamente, a dosagem exata variará dependendo da doença ou distúrbio sendo tratados, sendo que as faixas preferidas são prontamente determináveis.

[0073] Em uma modalidade, 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal de sulfatídeo são administrados ao paciente. Com maior preferência, 1 a 10 mg/kg de peso corporal de sulfatídeo são administrados. De preferência, essa dosagem é repetida a cada dia, conforme necessário.

EFEITO DE AGONISTAS DE RECEPTOR DE ÁCIDO RETINOICO (RAR) NA ATIVIDADE DE CÉLULA NKT

[0074] Conforme descrito no presente documento, a administração do agonista de Receptor de Ácido Retinoico (RAR), ácido all-trans retinoico (ATRA), inibe significativamente danos hepáticos causados pelo consumo de álcool. A ingestão de etanol esgota os ésteres de retinila do fígado e altera os níveis fisiológicos de ácido all-trans retinoico (ATRA), uma forma biologicamente ativa de vitamina A que suporta muitas funções biológicas e pode acentuar a geração, estabilidade e função da diferenciação de célula T CD4+ virgem em FoxP3+ Tregs mesmo na presença de IL-6. Diversas modalidades descritas no presente documento referem- se à constatação de que ATRA inibe a função efetora da célula NKT do tipo I, incluindo a supressão de secreção de citocina por essas células. Consulte os Exemplos 8, 9 e 11 e as Figuras 8, 10 e 11. Ademais, ATRA tem um efeito inibitório direto sobre a atividade de célula NKT tipo I, exercendo seu efeito inibitório na ausência de células que apresentam antígeno. Consulte o Exemplo 11, Figura 11. Ademais, ATRA não inibe diretamente a atividade de células T CD4+ restritas a MHC convencionais que reconhecem antígenos de proteína, como proteína básica miélica ou MBPAc1-9. Sem desejar se ater a uma teoria particular, esses dados indicam que ATRA protege contra danos hepáticos causados pelo consumo de álcool excessivo ao inibir as células NKT tipo I.

[0075] Conforme descrito no presente documento, os agonistas de RAR induzem a inibição em células NKT tipo I. Consulte as Figuras 12, 14 e 15 a 17. Ademais, os danos hepáticos causados por Célula NKT do tipo I mediados por inflamação resultantes do consumo alcoólico excessivo podem ser evitados, reduzidos ou atenuados pela administração de um agonista de RAR. O fígado pode se tornar inflamado para uma variedade de razões diferentes. Por exemplo, a inflamação do fígado pode ser causada por infecção bacteriana ou viral, lesão ou ataque do sistema imune de um indivíduo. Embora a inflamação seja normalmente uma resposta protetora e uma etapa necessária do processo de cura, a inflamação prolongada ou crônica pode causar lesão. Diversas modalidades descritas no presente documento referem-se à modulação mediada por agonista de RAR dos mecanismos imunes inatos que leva à lesão hepática seguindo, relacionada a ou causada por inflamação. Algumas modalidades referem-se a métodos e composições para a inibição mediada por agonista de RAR de atividade de célula NKT tipo I que modula interações entre os componentes do sistema imune inato para fornecer tolerância a antígenos derivados do intestino ou derivados de metabólito sem afetar ou afetar minimamente a resposta imune inata a patógenos não autoidentificados.

[0076] Já que agonistas de RAR pode energizar diretamente células NKT tipo I, agonistas de RAR podem ser usados para tratar qualquer indicação na qual células NKT tipo I têm um papel patogênico. Alguns exemplos de doenças que podem ser tratadas pelas modalidades da presente descrição incluem hepatite induzida por álcool, esteato- hepatite não alcoólica, cirrose, cirrose fulminante, hepatite idiopática, hepatite induzida por vírus (A, B, C e outras), hepatite inflamatória associada a carcinoma hepatobiliar, esclerose múltipla, diabetes tipo I, lesão de isquemia- reperfusão, transplante de órgão sólido, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, esclerose lateral amiotrófica, e doença inflamatória intestinal (colite e de Crohn).

[0077] Em algumas modalidades, há várias indicações de doenças ou distúrbios autoimunes ou imunes que são tratadas, prevenidas ou atenuadas por inibição mediada por agonista de RAR da atividade de célula NKT tipo I. Em particular, um aspecto da presente modalidade é relacionado a um método para tratar um paciente que sofre de sintomas de uma doença ou distúrbio autoimune ou imune, como, por exemplo, esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, AIDS, doença de Alzheimer, artrite reumatoide, diabetes mellitus dependente de insulina, hepatite autoimune, asma e doença celíaca com uma quantidade eficaz de um agonista de RAR. Em algumas modalidades, a inibição mediada por agonista de RAR da atividade de célula NKT tipo I trata, previne ou atenua os sintomas da asma.

[0078] Algumas modalidades referem-se a um método para inibir ou prevenir a inflamação mediada por célula NKT do tipo I seguindo a reperfusão isquêmica ao administrar um agonista de RAR. As células NKT tipo I têm um papel patogênico em condições como lesão de isquemia e reperfusão. A lesão de reperfusão pode ocorrer em uma variedade de tecidos quando o abastecimento de sangue é restaurado após um período de isquemia. Exemplos incluem o tecido muscular esquelético seguindo uma lesão por compressão, músculo cardíaco em conexão com um infarto do miocárdio ou cirurgia cardíaca, ou cardiopatia isquêmica, tecido neural em conexão a um derrame ou traumatismo cerebral e tecido hepático e renal em conexão com cirurgia ou trauma. A lesão de isquemia-reperfusão também um papel importante na qualidade e função de tecido de enxerto no transplante de órgão. A lesão de isquemia-reperfusão é uma causa principal para um período prolongado de hospitalização e sobrevivência de enxerto a longo prazo diminuída. Em algumas modalidades, a inibição mediada por agonista de RAR da atividade de célula NKT tipo I inibe ou evita a lesão de isquemia-reperfusão hepática em conexão com cirurgia ou trauma.

[0079] As modalidades descritas no presente documento referem-se à inibição de atividade de célula NKT tipo I por um ou mais agonistas de receptor de ácido retinoico (RAR). Receptores de ácido retinoico compreendem três subtipos principais: RARα, RAR β e RARY. Algumas modalidades referem-se à inibição da atividade de célula NKT tipo I por um ou mais agonistas de RAR pan-ativos, precursores de tais agonistas de RAR pan-ativos e misturas dos mesmos. Conforme usado no presente documento, o termo “agonista de RAR pan-ativo” refere-se a um agonista de RAR que afeta, por exemplo, ativa, RARα, RARβ e RARY substancialmente igualmente ou não seletivamente. Algumas modalidades referem-se à inibição de atividade de célula NKT tipo I por um ou mais agonistas de RAR ativos eficazes para afetar seletivamente, ou até especificamente, por exemplo, ativar, pelo menos um, e de preferência ambos, dentre RARβ e RARy em relação a RARα, precursores de tais agonistas de RAR ativos e misturas dos mesmos. Conforme usado nesse contexto, o termo “seletivamente” significa que os precursores de agonista de RAR do agonista de RAR e misturas dos mesmos são mais eficazes, de preferência pelo menos cerca de 10 ou cerca de 100 vezes a cerca de 1.000 vezes ou mais eficaz, para afetar pelo menos um e, de preferência, ambos dentre RAR β e RARy em relação a RARα. Algumas modalidades referem-se à inibição da atividade de célula NKT tipo I por um ou mais agonistas de RAR seletivos de subtipo, precursores de tais agonistas de RAR seletivos de subtipo e misturas dos mesmos. Conforme usado no presente documento, o termo “agonista de RAR seletivos de subtipo” refere-se a um agonista de RAR que afeta seletivamente, por exemplo, ativa um subtipo de RAR. Compostos de retinoide que têm seletividade de RARα, RAR β e RARY são conhecidos na técnica e apresentados, por exemplo, nas Patentes nos U.S. 6.534.544 e 6.025.388 que estão aqui incorporadas a título de referência em sua totalidade.

[0080] Diversas modalidades referem-se a um método para inibir a atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória ao administrar um ou mais agonistas de receptor de ácido retinoico (RAR). Exemplos de agonistas de RAR incluem, mas sem limitação, os agonistas de RAR listados na Tabela 1.

[0081] Tabela 1: agonistas de RAR

[0082] Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró-inflamatória é inibida por um ou mais agonistas de RAR selecionados do grupo que consiste em ATRA, retinol, 9-cis-RA ou 13-cis-RA, tretinoína, AM580, AC55649, CD1530 ou Tazaroteno. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró-inflamatória é inibida por um ou mais retinoides poliolefínicos, como isoretinoína e acitretina. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória é inibida por um ou mais agonistas de RAR selecionados do grupo que consiste em etretinato, acitretina e isotretinoína.

[0083] Diversas modalidades referem-se à inibição de atividade de célula NKT tipo I pró-inflamatória por tazaroteno, ácido tazarotênico ou uma mistura dos mesmos. Tazaroteno é um profármaco de éster etílico que é metabolizado ao ácido livre correspondente, ácido tazarotênico. Tazaroteno tem uma estrutura travada de anel rígida que oferece flexibilidade conformacional limitada, se comparada ao ácido all-trans retinoico, o ligante natural para os receptores de ácido retinoico (RARs). Essa mudança estrutural confere ao ácido tazarotênico especificidade para os RARs e seletividade para RARβ e RARY.

[0084] Exemplos de agonistas de RAR incluem, ainda, ésteres de ácidos cis e trans-retinoicos, por exemplo, ésteres alquílicos, como álcoois primário, secundário ou terciário, incluindo, mas sem limitação: metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, hexila, heptila, etilhexila, octila, nonila, laurila, oleíla, estearila, hidroxietila, hidroxipropila, benzila, alfa-metilbenzila, alfa-propilfenila, amila, isoamila, anisila, cetila, mentila, cinamila, pinacol, furila ou miristila.

[0085] Sais farmaceuticamente aceitáveis de agonistas de RAR também podem ser usados para inibir a atividade de célula NKT tipo I. Os compostos apresentados no presente documento que possuem um grupos funcionais suficientemente ácidos, suficientemente básicos ou ambos e, em conformidade, podem reagir com qualquer número de bases orgânicas ou inorgânicas e ácidos inorgânicos e orgânicos, para formar um sal.

[0086] Exemplos de ácidos que podem ser usados para formar sais de adição ácida a partir de agonistas de RAR com grupos básicos incluem ácidos inorgânicos, como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e similares, e ácidos orgânicos, como ácido p-toluenossulfônico, ácido metanossulfônico, ácido oxálico, ácido p-bromofenil-sulfônico, ácido carbônico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético e similares. Exemplos de tais sais incluem o sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, fosfato, monoidrogenfosfato, diidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butino-1,4- dioate, hexina-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenossulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, gama-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato e similares.

[0087] Exemplos de bases que podem ser usadas para formar sais de adição básica a partir de agonistas de RAR com grupos ácidos incluem, mas sem limitação, hidróxidos de metais álcali, como sódio, potássio e lítio; hidróxidos de metais alcalinos terrosos, como cálcio e magnésio; hidróxidos de outros metais, como alumínio e zinco; amônia e aminas orgânicas, como mono, di ou trialquilaminas não substituídas ou substituídas por hidróxi; ciciclohexilamina; tributil amina; piridina; N-metila, N-etilamina; dietilamina; trietilamina; mono, bis ou tris-(2-hidroxi-alquil aminas inferiores), como mono, bis ou tris-(2-hidroxietil)amina, 2- hidroxi-terc-butilamina, ou tris-(hidroximetil)metilamina, N,N-di-alquila inferior-N-(hidróxi alquila inferior)-aminas, como N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina ou tri-(2- hidroxietil) amina; N-metil-D-glucamina; e aminoácidos, como arginina, lisina e similares.

[0088] Conforme usado no presente documento, o termo “paciente” refere-se ao recipiente de um tratamento terapêutico e inclui todos os organismos no reino animal. Em modalidades preferidas, o animal está na família dos mamíferos, como humano, bovino, ovino, porcino, felino, búfalo, canino, cabra, equino, burro, veado e primatas. O animal mais preferido é o ser humano.

[0089] Conforme usado no presente documento, os termos “tratar”, “que trata” e “tratamento” incluem “prevenir”, “que previne” e “prevenção”, respectivamente.

[0090] Conforme usado no presente documento, o termo “uma quantidade eficaz” de um agente é a quantidade suficiente para tratar, inibir ou prevenir danos hepáticos resultantes de atividade de célula NKT tipo I pró- inflamatória.

[0091] Algumas modalidades referem-se ao pré- tratamento de pacientes com um sulfatídeo e/ou um agonista de RAR anteriormente à manifestação clínica de ALD. Em diversas modalidades, pacientes são tratados com uma quantidade eficaz de sulfatídeo e/ou um agonista de RAR anteriormente ao consumo compulsivo de álcool. Em algumas outras modalidades, pacientes são tratados com uma quantidade eficaz de sulfatídeo e/ou um agonista de RAR de cerca de 0,5 hora a cerca de 18 horas anteriormente ao consumo compulsivo de álcool. Em algumas outras modalidades, pacientes são tratados com uma quantidade eficaz de sulfatídeo e/ou um agonista de RAR durante um período de consumo crônico de álcool.

[0092] Em algumas modalidades, a quantidade específica de agonista de RAR administrado a um paciente variará dependendo da doença ou afecção sendo tratada, assim como da idade, peso e sexo do paciente sendo tratado. Em geral, para alcançar tal concentração final, por exemplo, nos intestinos ou no sangue, a quantidade de agonista de RAR em uma única composição de dosagem das presentes modalidades será, em geral, de cerca de 0,1 miligrama a cerca de 100 miligramas, de preferência cerca de 2,0 miligramas a cerca de 60 miligramas, com maior preferência, cerca de 20 miligramas a cerca de 50 miligramas. Exemplos de doses adequadas incluem: entre cerca de 0,1 a cerca de 10 mg/dia; entre cerca de 0,5 a cerca de 2 mg/dia; entre cerca de 0,01-100 mg/dia; entre cerca de 1 a cerca de 50 mg/dia; entre cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 1,0 mg/dia; entre cerca de 1,0 mg/dia e cerca de 5,0 mg/dia; entre cerca de 5,0 mg/dia e cerca de 10,0 mg/dia; entre cerca de 10,0 mg/dia e cerca de 15 mg/dia; entre cerca de 15,0 mg/dia e cerca de 20,0 mg/dia; entre cerca de 20,0 mg/dia e cerca de 25,0 mg/dia; entre cerca de 30,0 mg/dia e cerca de 35,0 mg/dia; entre cerca de 35,0 mg/dia e cerca de 40,0 mg/dia; entre cerca de 40,0 mg/dia e cerca de 45,0 mg/dia; entre cerca de 45,0 mg/dia e cerca de 50,0 mg/dia; entre cerca de 50,0 mg/dia e cerca de 55,0 mg/dia; entre cerca de 55,0 e cerca de 60,0 mg/dia; entre cerca de 60,0 mg/dia e cerca de 65,0 mg/dia; entre cerca de 65,0 mg/dia e cerca de 70,0 mg/dia; entre cerca de 70,0 mg/dia e cerca de 75,0 mg/dia; entre cerca de 75,0 mg/dia e cerca de 80,0 mg/dia; entre cerca de 80,0 mg/dia e cerca de 85,0 mg/dia; entre cerca de 85,0 e cerca de 90,0 mg/dia; entre cerca de 85,0 mg/dia e cerca de 90,0 mg/dia; entre cerca de 90,0 mg/dia e cerca de 95,0 mg/dia; e entre cerca de 95,0 mg/dia e cerca de 100,0 mg/dia. Obviamente, a dosagem exata variará de acordo com a doença ou distúrbio sendo tratado, sendo que as faixas preferidas são prontamente determináveis.

[0093] Quando tazaroteno é oralmente administrado para realizar uma redução na atividade de célula NKT tipo I, a dosagem diária de tazaroteno está, de preferência, em uma faixa de cerca de 0,3 mg/dia a cerca de 7 mg/dia ou cerca de 8 mg/dia, com maior preferência em uma faixa de cerca de 0,6 mg/dia a cerca de 6,5 mg/dia ou cerca de 7 mg/dia. Em algumas modalidades, tazaroteno administrado oralmente é administrado em dosagens diárias de tazaroteno, incluindo 0,4 mg/dia, 0,75 mg/dia, 1,5 mg/dia, 2,8 mg/dia, 3 mg/dia, 4,5 mg/dia, 6 mg/dia e 6,3 mg/dia.

[0094] De acordo com as modalidades, o agonista de RAR pode ser administrado para atenuar os sintomas de um paciente ou pode ser administrado para agir contra um mecanismo do distúrbio em si. Em certas modalidades, o agonista de RAR pode ser administrado como uma medida profalática. Em algumas modalidades múltiplas doses de agonista de RAR são administradas. Será constatado por aqueles versados na técnica que esses propósitos do tratamento são frequentemente relacionados e que tratamentos podem ser personalizados para pacientes particulares com base em vários fatores. Esses fatores podem incluir a idade, gênero ou saúde do paciente e a progressão da doença ou distúrbio relacionado autoimune ou imune. A metodologia do tratamento para um paciente pode ser personalizada, em conformidade, para a dosagem, o tempo de administração, a rota de administração por administração simultânea ou sequencial de outra terapias.

[0095] Em algumas modalidades, um ou mais compostos de agonista de RAR podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outro composto terapêutico. Por exemplo, um ou mais compostos de agonista de RAR podem ser administrados em combinação com um sulfatídeo. Qualquer composto terapêutico conhecido atualmente usado no tratamento da doença hepática alcoólica, doença inflamatória, doença autoimune ou lesão de reperfusão pode ser usado. Em algumas modalidades, o agonista de RAR pode ser administrado em combinação com sulfeto hidrogênio (H2S). Em algumas modalidades, o agonista de RAR pode ser administrado em combinação com antioxidantes. Em algumas modalidades, o agonista de RAR pode ser administrado em combinação com, por exemplo, corticosteroides, biologias (por exemplo, anti-TNF- alfa e anti-IL-6), imunomoduladores (por exemplo, RU-486), fármacos antirreumáticos modificadores de doença (DMARDS, como leflunomida), inibidores de COX-2 (celecoxib), fármacos anti-inflamatórios não esteroides (NSAIDS, como naproxeno), antidiabético oral (OAD, como metformina ou sitaglipten), agonistas de GLP-1, insulina, agonistas/antagonistas de PPAR, mediadores de EGF (agentes anticâncer), outros agentes eficazes para tratar canceres hepáticos, terapias à base de célula para cânceres de fígado; interferonas (IFN) para Hepatite C, esclerose múltipla ou lúpus eritematoso; e antagonistas de LFA-1.

[0096] Os compostos de agonista de RAR e os compostos de sulfatídeo descritos no presente documento podem ser usados como um ingrediente ativo incorporado em uma composição farmacêutica. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode compreender um único ingrediente ativo. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode compreender dois, três, quatro, cinco ou mais ingredientes ativos. Todos os modos de administração são contemplados, por exemplo, oralmente, retalmente, parenteralmente, topicamente ou por injeção intravenosa, intramuscular, intrasternal ou subcutânea ou em uma forma adequada por inalação. As formulações podem, onde apropriado, ser convenientemente apresentadas em unidades de dosagem distintas e podem ser preparados por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Os ingredientes ativos serão formulados ordinariamente com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, de acordo com a prática conhecida e estabelecida. Portanto, a composição farmacêutica pode ser formulada como um líquido, pó, elixir, solução injetável, suspensão, supositório etc.

[0097] Os ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração para administração oral, como tabletes, cápsulas de gelatina rígidas, cápsulas de gelatina moles, que compreendem o ativo na forma de um pó, uma mistura com excipientes, um líquido ou solução, uma suspensão, uma solução sólida. Os ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração para a administração intraoral (sublingual ou bucal) como uma forma de dosagem sólida que dissolve rapidamente ou tabletes efervescentes, filmes finos, pastilhas bucais ou como um liquido ou forma semissólida, como um gel, solução, emulsão, suspensão. Ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração para a injeção como uma solução aquosa ou não aquosa, suspensa ou emulsão. Soluções à base de óleo e suspensões compreende misturas de óleos naturais e sintéticos, como óleo de feijão soja, óleo de semente de algodão, óleo mineral, óleo de gergelim, óleo de rícino, óleos vegetais hidrogenados, cera de abelha. Ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração transdérmica, como um creme, um gel, uma emulsão, uma solução de base aquosa, uma solução à base de óleo, uma suspensão, um filme, um emplastro, uma espuma. Os ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração para a administração intranasal como um pó, suspensão, solução, emulsão. Ingredientes ativos, de acordo com algumas modalidades, podem ser formulados para a administração para a entrega pulmonar como um pó micronizado. A administração oral está associada ao metabolismo de primeira passagem, assim como à indução de enzimas metabolizantes. Portanto, a força da dosagem e o regime da dosagem de ácidos retinoicos administrados oralmente podem ser personalizados para um efeito ótimo. Rotas alternativas de entrega, por exemplo, sublingual, bucal, injeção, pulmonar e transdérmica, podem ser preferíveis em relação à administração oral. Rotas alternativas de administração, como aquelas descritas, evitam o metabolismo de primeira passagem e a absorção de GI, demonstram menos indução de enzima e fornecem famarcocinética de dose de repetição estável.

[0098] As formulações farmacêuticas de acordo com as presentes modalidades podem ser liberação imediata ou liberação modificada (por exemplo, liberação contínua, liberação pulsátil, liberação controlada, liberação retardada, liberação lenta). Devido ao fato de ser imediatamente ativo, quantidades farmocológicas de isômeros de Retinoide administrados oralmente podem ter efeitos colaterais. Esses efeitos colaterais vêm sendo uma limitação séria ao uso de retinoides orais em terapia. Apesar de retinoides aplicados topicamente transportarem desvantagem teratogênica, existem outras toxicidades associadas a essa via de administração que limitam seu uso, incluindo irritação de pele. Uma grande razão para toxicidade tanto oral quanto topical é que os retinoides estão total e imediatamente disponíveis mediante administração. Um processo por meio do qual um retinoide pode ser disponibilizado IN VIVO mais lentamente e mais continuamente evitaria picos e vales na disponibilidade do retinoide, fornecendo, dessa forma um nível IN VIVO eficaz do composto em um período mais prolongado de tempo e evitando ou substancialmente reduzindo também as toxicidades que geralmente resultam da disponibilidade repentina de quantidades excessivas da substância. Uma formulação injetável a base de óleo, éster de retinol e, em particular, um éster de retinol graxo, ácido retinoico ou um éter de ácido retinoico pode ser administrada de modo intramuscular semanalmente e fornecer uma entrega de liberação lenta sistêmica, de acordo com tais princípios.

[0099] Em algumas modalidades, a preparação de éster de terc-butila de ácido all-trans retinoico é conforme segue. A uma solução de ácido all-trans retinoico (100 mg, 0,33 mmol) em éter anidro foi adicionado cloreto de oxalila (42,3 mg, 0,333 mmol) a 0 grau C. e agitada nessa temperatura por 30 minutos e piridina (28,7 mg, 0,363 mmol), 2-metil-2- propanol (26,8 mg, 0,363 mmol) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente no escuro e após isso a reação estava completa conforme indicado pelo TLC. A mistura de reação foi, então, resfriada rapidamente com água e extraída com éter (3.vezes.10 ml), solução de bicabornato de sódio saturada (3.vezes.5 ml) e novamente com água (3.vezes.5 ml), seca (MgSO.sub.4) e evaporada. O resíduo espesso foi redissolvido em hexano e aplicado em cartucho de sílica Sep-Pak (2 g). Eluição com hexano/acetato de etila (9,7:0,3) forneceu o éster butílico de ácido retinoico. A purificação final foi alcançada por HPLC (10 mm.vezes.25 cm coluna Zorbax-Sil, 4 ml/min) com uso de sistema de solvente de hexano/isopropanol (90:10). Butirato de all-trans retinoíla puro 2 (98 mg, 82,6%) foi submetido à eluição como um óleo espesso.

[0100] Algumas modalidades se referem à formulação de éster butílico-retinoico para injeção conforme descrito abaixo. 10 g de solução éster butílico-retinoico são dissolvidas em uma mistura de 73g de óleo de algodão que contém 0,1 g de hidroxianisol butilado e 10 g de álcool benzílico em temperatura levemente elevada e com mistura de alto cisalhamento em condições assépticas. A mistura é filtrada de modo estéril e colocada em uma seringa para uso posterior. Para ser administrada por injeção intramuscular. Algumas modalidades se referem à formulação de palmitato de retinol em óleo de algodão como acima para injeção intramuscular.

[0101] Algumas modalidades se referem à formulação de um forma de dosagem oral de um ou mais ingredientes ativos das presentes modalidades conforme descrito abaixo. 10 g de ácido retinoico são dissolvidas em uma mistura de cera de abelha, hidroxianisol butilado, edetato dissódico, flocos de óleo de soja hidrogenados, óleos vegetais hidrogenados e álcool de óleo de soja em temperatura levemente elevada e com mistura de alto cisalhamento. A mistura é vedada em capsulas de gelatina mole em dosagens de 2 mg, 5 mg e 10 mg para administração oral.

[0102] Algumas modalidades se referem à formulação de um tablete bocal bioadesivo que contém um ou mais ingredientes ativos das presentes modalidades. Uma mescla de excipientes é preparada contendo 24% de ingrediente ativo, 21% de HPMC, 18% de Amido de Milho, 24% de Lactose, 1% de Sílica, 2,5% de Policarbofila (Noveon), 7,5% de Carbômero 974P, 1,2% de Talco e 0,7% de Estearato de Magnésio. A mescla foi prensada em tabletes de 1 cm de diâmetro.

[0103] Algumas modalidades se referem à formulação de uma película sublingual que contém um ou mais ingredientes ativos das presentes modalidades. Os ingredientes seguintes são misturados em 50 g de água: 3 g de Methocel E5, 5 g de Methocel E50, 1 g de Klucel, 1 g Maltodextrina, 1 g de ácido cítrico, 3 g de sucralose, 5 g de sabor Laranja, 0,2 g de parabeno, 0,1 de edato de sódio e 5 g de Sorbitol. 1 g de ácido retinoico é adicionada à mistura é desgaseificada com agitação. A composição é espalhada de modo ralo ao longo de um suporte de película de poliéster e permitida secar ao ar livre na ausência de qualquer luz direta para evitar degradação. A película é cortada, então, em tamanho para gerar doses de 2 a 10 mg.

[0104] Algumas modalidades se referem a um kit, que pode incluir um ou mais sulfatídeos, agonistas de RAR ou qualquer combinação dos mesmos, preferencialmente como uma composição farmacêutica. Em algumas modalidades, cis- tetracosanol é fornecido em um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o ATRA é fornecido em um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, tazaroteno é fornecido em um carreador farmaceuticamente aceitável. Em várias modalidades, sulfeto de hidrogênio (H2S) pode ser opcionalmente fornecido. Em várias modalidades, um ou mais antioxidantes podem ser opcionalmente fornecidos. Em várias modalidades, os kits podem compreender adicionalmente empacotamento e/ou instruções adequadas para uso. Os Kits podem compreender também um meio para entrega dos um ou mais sulfatídeos, agonistas de RAR ou qualquer combinação dos mesmos, tal como um inalador, dispensador de pulverização (por exemplo, pulverização nasal), seringa para injeção, agulha, bolsa IV ou pacote de pressão para capsulas, tabletes, supositórios. Os um ou mais sulfatídeos, agonistas de RAR ou qualquer combinação dos mesmos podem estar em uma forma seca ou liofilizada ou em uma solução, particularmente uma solução estéril. Quando em uma forma seca, o kit pode compreender um diluente farmaceuticamente aceitável para preparação de uma formulação líquida. O kit pode conter um dispositivo para administração ou para distribuição das composições, incluindo, porém sem limitação, seringa, pipeta, emplastro transdérmico ou inalante. Algumas modalidades se referem a kits que contêm dosagens suficientes dos compostos ou composição para fornecer tratamento eficaz para um individual por um período estendido, tal como uma semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 6 semanas ou 8 semanas ou mais.

[0105] Em uma modalidade exemplificativa, um paciente adulto de 70 kg com risco de danos hepáticos químicos de drogas prescritas ou drogas de abuso é dado uma injeção i.m. diária de 7 mg de tazaroteno em 1,0 ml de solução salina tamponada de fosfato para tratar os danos hepáticos. Essa dosagem pode ser ajustada com base nos resultados do tratamento e no julgamento do médico responsável. O tratamento é preferencialmente continuado por pelo menos cerca de 1 ou 2 semanas, preferencialmente pelo menos cerca de 1 ou 2 meses e pode ser continuado em uma base crônica.

[0106] Em outra modalidade exemplificativa, um paciente adulto de 70 kg com risco de danos hepáticos químicos de drogas prescritas ou drogas de abuso é dado uma dose oral de um agonista de RAR suficiente para inibir a atividade de células NKT tipo I. Os danos hepáticos podem ser monitorados mediante análise de níveis de enzima hepática em soro. A dosagem de agonista de RAR pode ser ajustada com base nos resultados do teste de funcionamento hepático e no julgamento do médico responsável. O tratamento é preferencialmente continuado por pelo menos cerca de 1 ou 2 semanas, preferencialmente pelo menos cerca de 1 ou 2 meses e pode ser continuado em uma base crônica. Em algumas modalidades, a duração do tratamento coincide com a duração do comportamento que coloca o paciente em risco de danos hepáticos químicos. Em algumas modalidades, o agonista de RAR é selecionado do grupo que consiste em ATRA e tazaroteno. Em algumas modalidades, o paciente recebe adicionalmente uma dose de sulfatídeo suficiente para ativar as células NKT tipo II.

[0107] Embora a descrição escrita anterior habilite aquele de habilidade comum a fazer e utilizar o que é considerado presentemente ser o melhor modo da mesma, aquele de habilidade comum irá compreender e apreciar a existência de variações, combinações e equivalentes da modalidade, método e exemplos específicos no presente documento. As presentes modalidades não devem, portanto, serem limitadas pela modalidade, método e exemplos descritos acima, e sim por todas as modalidades e métodos no escopo e espírito das presentes modalidades.

[0108] Os Exemplos seguintes são apresentados com o propósito de ilustração e não devem ser interpretados como limitações.

EXEMPLO 1 O SULFATÍDEO MEDIA A INIBIÇÃO DE CÉLULAS NKT TIPO I ENQUANTO ATIVA CÉLULAS DE SULFATÍDEO/CD1d-TETRÂMERO+

[0109] Uma dose de 20 μg sulfatídeo foi injetada de modo intraperitoneal em camundongos. Seguindo a injeção de sulfatídeo, MNCs hepáticos foram isoladas e marcadas com CFSE. As células foram colocadas em cultura com αGalCer (10 ng/ml) por 96 horas na presença ou ausência de 10 ng/ml citocina IL-2. As células foram colocadas em cultura com 10 ng/ml de IL-12 sozinhas como um controle. Seguindo a cultura, as células foram colhidas, manchadas com mAb anti-TCRβ e aGalCer/CD1d-tetrâmeros, classificadas por FACs e análise de diluição de CFSE foi realizada em células (NKT tipo I) aGalCer/CD1d-tetrâmero+. Consulte a Figura 1A. Conforme mostrado na Figura 1B, após a administração de sulfatídeo, as células NKT tipo I falham em proliferar em resposta a um desafio IN VITRO com αGalCer.

[0110] As células hepáticas isoladas de PBS ou camundongos injetados com 20 μg de sulfatídeo foram classificadas em populações de sulfatídeo/CD1d-tetrâmero+ e tetrâmero- e manchadas para IFN—Y+ intracitoplasmático. Conforme mostrado na Figura 1C, camundongos injetados cm sulfatídeo têm a maior porcentagem de células positivas para IFN-y.

[0111] A administração de sulfatídeo resulta tanto na inibição da proliferação de célula NKT tipo I quanto no aumento na porcentagem de células positivas para IFN-Y. Sem comprometimento com uma teoria particular, é sugerido que a administração de sulfatídeo ativa tanto células NKT tipo II quanto pDC que secretam citocinas e quimiocinas e essa interação resulta na indução de inibição mediada por cDC em células NKT tipo I.

EXEMPLO 2 A ADMINISTRAÇÃO DE SULFATÍDEO PROTEGE CONTRA HEPATITE INDUZIDA POR ConA

[0112] Camundongos C57BL/6 fêmeas foram tratadas com 8,5 mg/kg de Concavalina A (ConA) (dissolvida em solução salina tamponada de fosfato sem pirogênio, PBs) de modo intravenoso (i.v.), o que induz danos hepáticos similares àqueles causados por hepatite. Imediatamente após a injeção de ConA, os camundongos foram injetados de modo intraperitonial (i.p.) com 20 μg (1 mg/kg/m) de sulfatídeo de cérebro bovino ou PBs.

[0113] Os danos hepáticos dão origem a anormalidades indicativas (que sugerem doença hepática) detectáveis por testes de funcionamento hepático. Por exemplo, a hepatite viral pode fazer com que as enzimas alanina amino transferase (ALT) e aspartato amino transferase (AST) em células hepáticas lesado se dividam na corrente sanguínea e aumentem seu nível no sangue. Para testar pela presença de danos hepáticos, o soro foi coletado e níveis de enzima no soro, ALT e AST, foram medidos em 0, 6, 12, 24, 48 e 72 horas em seguida a injeção de Con A ou Con A + sulfatídeo. Os níveis de enzima no soro foram medidos com a ajuda da Laboratory Corporation of America, San Diego, CA. Conforme mostrado na Figura 1e, os níveis comparáveis de enzima em soro foram observados 6 horas após a injeção de Con A ou Con A + sulfatídeo, no entanto, os níveis no soro de ambas ALT e AST estavam mais baixos em 12, 24, e 48 horas em camundongos injetados tanto com ConA quanto sulfatídeo. Nos camundongos injetados com Con A (À) , as ALT e AST em soro alcançaram o pico por volta de 12 horas (ALT«15, 8x103 de IU/L e AST=22,7x103 de IU/L) e voltaram para linha de base em 48 horas. Em contraste, seguindo a injeção de combinação de Con A + sulfatídeo (μ), uma diminuição significativa no nível em soro de ALT e AST (ALT«2,5 x103 de IU/L e AST=5,4x103 de IU/L) em 12 horas foi registrada e o mesmo voltou à linha de base em 24 horas. Os valores são média ± de SD de 5 camundongos por grupo. P < 0,001.

[0114] Os camundongos foram sacrificados em 12, 24, 48, 72 e 96 horas após o tratamento e seus fígados foram coletados. O tecido do fígado foi fixo em 10% de solução de formaldeído e mantido em temperatura ambiente até o uso. O exame histológico com uso de manchamento com hematoxilina e eosina (H&E) foi realizado em Pacific Pathology Inc., San Diego, CA.

[0115] Conforme mostrado na Figura 1d, o manchamento com H&E demonstrou histologia hepática significativamente aprimorada nos camundongos tratados com Con A + sulfatídeo de cérebro bovino em relação aos camundongos tratados somente com Con A. O exame histológico mostrou infiltração massiva e difusa e necrose severa nos pontos de tempo indicados que seguem os camundongos injetados com Con A injeção, Figura 1d, painéis superiores. Em contraste, a injeção de sulfatídeo + Con A foi associada a lesão média em termos de menos infiltração e menos necroso nos cortes hepáticos de 12 horas a 48 horas e a histologia voltou para o normal em 72 horas, Figura 1d, painéis inferiores.

[0116] Juntos, os resultados obtidos nos Exemplo 1 e Exemplo 2 indicam que (a) o sulfatídeo media a inibição de células NKT tipo I no fígado e (b) a administração de sulfatídeo ativa células de sulfatídeo/CD1d-tetrâmero+ e protege contra hepatite induzida por ConA. Isso indica que células NKT tipo I anérgicas e cDCs toleradas levam coletivamente a uma inibição significativa de uma série de inflamações prejudiciais.

EXEMPLO 3 ANÁLISE DO EFEITO DA RESPOSTA IMUNE À LESÃO DE ISQUEMIA E REPERFUSÃO HEPÁTICA NA COMPOSIÇÃO DA POPULAÇÃO CELULAR CD11b+Gr-1+

[0117] O modelo de lesão de isquemia e reperfusão hepática foi estabelecido conforme descrito em Shen XD, Ke B, Zhai Y, ET AL, CD154-CD40 a trajetória de coestimulação de célula T é necessária no mecanismo de lesão de isquemia hepática/reperfusão e seu bloquei facilita e depende de citoproteção mediada por heme oxigenase-1. Transplantation 2002, 74:315 a 319, incorporado ao presente documento, com poucas modificações.

[0118] Camundongos WT e camundongos Jα18-/-, que não têm células NKT tipo I porém tem níveis normais de células NKT tipo II, (3 a 5 camundongos/grupo) ou os camundongos WT (2-3 camundongos/grupo) tratados 3 horas antes com 20 μg de sulfatídeo/camundongo foram anestesiados por injeção intraperitoneal de 60 mg/kg de pentobarbital sódico. Após laparotomia de linha média, um grampo atraumático foi aplicado à tríade hepática (artéria hepática, veia porta, ducto biliar) dos três lobos hepáticos cefálicos. Os lobos caudais retiveram a circulação de sangue intacta para prevenir a congestão venosa intestinal. O peritôneo foi fechado e os camundongos foram colocados em uma almofada de aquecimento (~37 °C). A temperatura do meio ambiente se encontrou na faixa de 25 e 26 °C. Após 90 minutos de isquemia aquecida hepática, o grampo foi removido, iniciando a reperfusão, e a parede abdominal foi suturada. Os camundongos foram submetidos à eutanásia após 6 horas de reperfusão e lobos hepáticos cefálicos e sangue foram coletados. Os controles simulados passaram pelo menos procedimento, porém sem oclusão vascular.

[0119] Preparação celular. Os leucócitos foram isolados dos lobos hepáticos cefálicos dos camundongos com uso de esmagamento mecânico seguido por separação de gradiente Percoll e lise de RBC conforme descrito em Halder RC, Aguilera C, Maricic I, ET AL, Type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2.302 a 2.312.

[0120] Citometria de fluxo. Os leucócitos foram suspensos em tampão de FACS (PBS que contém 0,02% NaN3 e 2% de FCS), bloqueados (FcR-Y anti-camundongo, BD Pharmingen, San Diego, CA) e manchados com anticorpos anti-camundongo marcados com PE-Cy5, FITC ou PE ou mCD1d-tetrâmero-PE carregado (BD Pharmingen, San Diego, CA ou eBioscience Inc., San Diego, CA) conforme indicado. O manchamento de citocina Intracelular (ICCS) de células mononucleares hepáticas (MNCs) foi executado conforme descrito em Halder RC, Aguilera C, Maricic I, ET AL., Type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2.302 a 2.312. A análise foi realizada em um instrumento FACSCalibur com uso de software CellQuest (versão 4.0.2, BD, Franklin Lakes, NJ). As populações Gr-1high e Gr- 1int foram sincronizadas. Consulte a Figura 2a.

[0121] Estatísticas. Os dados são expressados como média ± de SEM para cada grupo. P<0,005. As diferenças estatísticas entre grupos foram avaliadas por teste t de Student unilateral não pareado com uso de software GraphPad Prism (versão 5.0a, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA).

[0122] Resultados. O Subconjunto Gr-1int de células é compreendido predominantemente de monócitos e precursores mieloides. Seguindo a lesão de isquemia e reperfusão (IRI), as células de Gr-1int foram aumentadas por volta de 3,5 vezes (p<0,005) em comparação com o controle simulado nos fígados de camundongos WT, enquanto que nenhum aumento foi observado seguindo lesão de isquemia e reperfusão em camundongos Jα18-/-. Consulte a Figura 2b, painéis superiores. Portanto, o recrutamento hepático de subconjunto de células mieloides durante a lesão de isquemia e reperfusão depende da presença de células NKT tipo I, que estão ausentes em camundongos Jα18-/-.

[0123] Quando comparado com camundongos não tratados, o subconjunto de células Gr-1int foi reduzido em camundongos tratados com sulfatídeo em ~50% seguindo a IRI. Isso sugere que a atividade de recrutamento de célula mieloide de células NKT tipo I foi reduzida seguindo o tratamento com sulfatídeo.

[0124] O subconjunto de células Gr-1high, que consiste principalmente em granulócitos, não diferiu significativamente entre fígados de controles simulados e camundongos com indução de lesão de isquemia e reperfusão. Figura 2b, painéis inferiores.

EXEMPLO 4 A ADMINISTRAÇÃO DE SULFATÍDEO ANTES DA LESÃO DA INDUÇÃO DE ISQUEMIA E REPERFUSÃO INIBE SIGNIFICATIVAMENTE A SECREÇÃO DE IFN-Y POR CÉLULAS NKT TIPO I.

[0125] Um grupo de camundongos WT (n=3) foi injetado com sulfatídeo (20 μg/camundongo i.p.) 3 horas antes da indução de isquemia (IRI com sulf.), os outros grupos (IRI (n=3), simulado (n=2)) não foram tratados previamente. A lesão de isquemia e reperfusão hepática (90 minutos de isquemia e 6 horas de reperfusão) e cirurgia simulada foram realizadas conforme descrito no Exemplo 3.

[0126] Preparação celular. Os leucócitos foram isolados de lobos hepáticos cefálicos de murinos, com uso de esmagamento mecânico seguir por separação de gradiente Percoll e lise de RBC conforme descrito em Halder RC, Aguilera C, Maricic I, ET AL, Type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2.302 a 2.312.

[0127] Citometria de fluxo. Os leucócitos foram suspensos em tampão de FACS (PBS que contém 0,02% NaN3 e 2% de FCS), bloqueados (anti-camundongo FcR-y, BD Pharmingen, San Diego, CA) e manchados com anticorpos anti-camundongo mCD1d-tetrâmero-PE carregado com αGalCer (BD Pharmingen, San Diego, CA ou eBioscience Inc., San Diego, CA). A análise foi realizada em um instrumento FACSCalibur com uso de software CellQuest software (versão 4.0.2, BD, Franklin Lakes, NJ).

[0128] Estatísticas. Os dados são expressados como média ± de SEM para cada grupo. P<0,01. As diferenças estatísticas entre os grupos foram avaliadas por teste t de Student unilateral não pareado com uso do software GraphPad Prism (versão 5.0a, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA).

[0129] Resultados. Após a indução de lesão de isquemia e reperfusão, as células NKT tipo I mostram produção de IFN-Y aumentada em comparação com as células NKT tipo I da cirurgia simulada, enquanto a administração de sulfatídeo 3 horas antes da lesão de isquemia e reperfusão reduziu significativamente a secreção de IFN-y por células NKT tipo I. Consulte a Figura 2c.

EXEMPLO 5 A SUPRESSÃO DE CÉLULAS NKT TIPO I RESULTA EM NECROSE HEPÁTICA SEGUINDO A IRI

[0130] Sulfatídeo derivado de mielina bovina purificado (>90% puro), adquirido junto à Matreya Inc., Pleasant Gap, PA, foi dissolvido em veículo (0,5% de polissorbato-20 (Tween-20) e 0,9% de solução de NaCl) e diluído em PBS. Os grupos de camundongos BL/6 (sulfatídeo WT) e camundongos Jα18-/-(sulfatideo Jα18-/-) foram tratados com sulfatídeo (20 μg/camundongo) de modo intraperitoneal 3 a 48 horas antes da indução de isquemia ou cirurgia simulada. A lesão de isquemia e reperfusão hepática e a cirurgia simulada foram conduzidas conforme descrito no Exemplo 3 em camundongos WT e Jα18-/-tratados e não tratados com sulfatídeo. Seguindo 90 minutos de isquemia e 24 horas de reperfusão, tecidos hepáticos (lobos cefálicos) foram fixos em 10% de formalina, embebidos em parafina e seções foram manchadas com hematotoxilina e eosina para análise histológica (IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, Maine).

[0131] Os camundongos WT tratados previamente com sulfatídeo (sulfatídeo WT) e os camundongos Jα18-/- desenvolveram necrose hepática somente mínima ou nenhuma após a IRI, enquanto que grandes áreas necróticas foram encontradas nos lobos hepáticos cefálicos dos camundongos (WT) não tratados. Consulte a Figura 4, painéis superiores. Os controles simulados não mostraram necrose. Consulte a Figura 4, painéis inferiores. A análise histológica indicou que a necrose seguindo a IRI é reduzida nos fígados de camundongos que não têm células NKT tipo 1 (camundongos Jα18- /-) e camundongos em que a atividade das células NKT tipo 1 é suprimida por tratamento de sulfatídeo.

EXEMPLO 6 INDUÇÃO DE DOENÇA HEPÁTICA ALCOÓLICA EM CAMUNDONGOS WT E COM CARÊNCIA DE CÉLULA NKT TIPO 1 (Jα18-/-)

[0132] Seguindo a aclimatização com dieta líquida de Lieber-DeCarli nutricionalmente adequada para uma semana, camundongos (B6) C57BL/6J e camundongos Jα18-/- machos de 6 a 8 semanas de idade, que não têm as células NKT tipo 1 mas têm as células NKT tipo 2, foram dados acesso livre a uma dieta líquida que contém 5% de etanol ou uma dieta que contém maltose e dextrina isocalóricas (Bio-Serv, NJ). As precauções foram tomadas para preparar a dieta fresca todo dia com uso de água autoclavada em células alimentadoras esterilizadas, mudando a alimentação diariamente.

[0133] Os camundongos B6 e Jα18-/-que recebem a dieta que contém etanol foram separados em dois grupos, o grupo de alimentação de etanol crônica e o grupo de alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Os camundongos no grupo de alimentação de etanol crônica foram alimentados com dieta liquida que continha 5% de etanol por até 4 a 5 semanas. Os camundongos no grupo de alimentação de etanol compulsiva mais crônica foram alimentados com dieta líquida que continha 5% de etanol por 10 dias seguido por (no dia 11) uma única dose alta de etanol administrado por gavagem (5 g/kg de peso corporal). Os camundongos no grupo de controle foram alimentados com dextrina e maltose isocalóricas administradas por gavagem. Seguindo a gavagem, os camundongos foram mantidos em uma almofada aquecida com temperatura controlada e monitorados. Apesar de incialmente de modo lento, a maioria dos camundongos que recebiam a dose alta de etanol administrado por gavagem recuperaram comportamento normal em horas. Os camundongos foram submetidos à eutanásia 8 a 9 horas após a gavagem.

[0134] O manchamento com H&E foi realizado no tecido de lobo hepático obtido de camundongos B6 e Jα18-/- machos alimentados com etanol seguindo ou 10 dias ou 4 a 5 semanas de alimentação de etanol crônica ou alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Conforme mostrado na Figura 9a (painéis superiores), a análise histopatológica não mostrou danos hepáticos nem nos camundongos B6 ou nem nos camundongos Jα18-/- submetidos à alimentação de etanol crônica por 10 dias. Adicionalmente, nenhum dano hepático foi observado pela análise histopatológica do tecido hepático de Camundongos B6 e Jα18-/- submetidos à alimentação de etanol crônica por 4 a 5 semanas (os dados não são mostrados). A análise histopatológica de tecido hepático de camundongos B6 submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica mostrou, no entanto, danos significativos. Consulte a Figura 9a, painel esquerdo inferior. Enquanto o tecido hepático de camundongos Jα18-/- submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica mostraram poucos danos. Consulte a Figura 9a, painel direito inferior.

[0135] Os níveis de ALT em soro foram medidos em Camundongos B6 e Jα18-/- de controle e Camundongos B6 e Jα18-/- alimentados com etanol seguindo ou 10 dias ou 4 a 5 semanas de alimentação de etanol crônica e alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Conforme mostrado na Figura 9b, painel esquerdo, a alimentação de etanol crônica não levou a elevação significativa de níveis de ALT em soro. Os níveis de ALT em soro foram aumentados significativamente em camundongos B6 submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica e foram aumentados em uma extensão menor em camundongos Jα18-/- submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica em comparação com o controle. Consulte a Figura 9b, painel direito.

[0136] O máximo de danos hepáticos (em comparação com controles sem etanol), conforme exemplificado pela histologia ou níveis em soro de ALT/AST, foi observado em Camundongos B6 e Jα18-/- 6 a 8 horas seguindo a gavagem de etanol em dose alta. Entre os grupos que recebem alimentação de etanol compulsiva mais crônica, camundongos Jα18-/-, que não têm as células NKT tipo 1 exibiram menos danos hepáticos.

[0137] Visto que a alimentação de etanol crônica por 10 dias ou por 4 a 5 semanas não levou a qualquer dano hepático significativo conforme exemplificado pela análise histopatológica e nenhuma mudança significativa em níveis de ALT/AST em soro, isso é referido à ALD de fase pré ou subclínica de. A ALD de fase clínica foi induzida seguindo uma segunda etapa de alimentação de álcool compulsiva- crônica.

[0138] As células mononucleares hepáticas (MNCs) foram isoladas dos grupos (4 em cada) de Camundongos B6 e Jα18-/- machos seguindo 5 semanas de alimentação ou com uma dieta de Lieber-Decarli líquida que continha 5% de etanol (alimentação de etanol crônica) ou uma dieta de controle que continha um número similar de calorias. As MNCs hepáticas isoladas foram manchadas com vários anticorpos de superfície celular e analisadas por citometria de fluxo. Uma acumulação de células NKT tipo I ativadas e células mieloides CD11b+Gr- 1+ foi observada nos fígados de camundongos B6, mas não em fígados de camundongos Jα18-/-, na fase de ALD pré-clínica. Consulte a Figura 5.

EXEMPLO 7 PREVENÇÃO DE LESÃO EM FÍGADO INDUZIDA POR ÁLCOOL POR SULFATÍDEO OU ÁCIDO ALL-TRANS RETINOICO (ATRA)

[0139] Os grupos de camundongos machos B6 (WT) e Jα18-/- de sete semanas de idade foram injetados (i.p.) com: 20 microgramas/camundongo de sulfatídeo nos dias 1 e 10; 0,3 miligramas/camundongo de ATRA nos dias 6 a 10 ou veículo/DMSO e foram alimentados ou com uma dieta líquida que continha 5% de etanol por 10 dias seguido por (no dia 11) uma única dose alta de etanol administrado por gavagem (5 g/kg de peso corporal) (grupo de alimentação de etanol compulsiva mais crônica) ou uma dieta que continha maltose e dextrina isocalóricas seguida por uma gavagem isocalórica de dextrina e maltose (grupo de controle). Os camundongos foram submetidos à eutanásia 6 a 8 horas seguindo a gavagem e soro e tecido hepático foram coletados.

[0140] Os níveis de ALT em soro foram determinados para cada grupo de camundongos. Conforme mostrado na Figura 6, os níveis de ALT em soro foram significativamente aumentados em camundongos B6 injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica (barra preta), enquanto os níveis de ALT em soro em camundongos B6 alimentados com etanol compulsivamente mais cronicamente que receberam injeções ou de sulfatídeo (barra listrada horizontalmente) ou de ATRA (barra listrada verticalmente) foram similares àqueles camundongos B6 alimentados com o controle (barra sem sombra). Os níveis de ALT em soro foram aumentados em camundongos Jα18-/- injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica (barra preta) em comparação com camundongos Jα18-/- alimentados com o controle (barra sem sombra), no entanto, os camundongos Jα18-/- injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica tiveram níveis de ALT em soro reduzidos em comparação com camundongos B6 injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Consulte a Figura 6.

[0141] O exame histológico para esteatohepatite hepática (doença hepática gordurosa) foi realizado no tecido hepático colhido dos camundongos B6 injetados com veículo/DMSO, sulfatídeo ou ATRA segundo a alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Conforme mostrado na Figura 7, o tecido hepático do camundongos B6 injetados com veículo/DMSO mostrou sinais significativos de danos seguindo a alimentação de etanol compulsiva mais crônica. O tecido hepático obtido dos camundongos B6 injetados com sulfatídeo ou ATRA, no entanto, mostra poucos sinais de doença hepática gordurosa.

[0142] A análise de enzima hepática em soro e histológica sugere que a administração ou de sulfatídeo ou do agonista de receptor de ácido retinoico (RAR), ATRA, pode proteger contra danos hepáticos causados por consumo de álcool excessivo.

EXEMPLO 8 INIBIÇÃO DE PROLIFERAÇÃO DE CÉLULA NKT TIPO I POR ATRA

[0143] As células NKT tipo I foram isoladas dos baços de camundongos B6 virgens e colocadas em cultura IN VITRO com [3H]-timidina e uma concentração ótima de αGalCer sozinho, uma concentração ótima de αGalCer mais 0,15 μg/ml, 1,2 μg/ml ou 18,8 μg/ml de ATRA ou ATRA sozinho. A proliferação das células NKT tipo 1 foi medida por incorporação de [3H]-timidina. Conforme mostrado na Figura 8a, a proliferação celular foi similar para células NKT tipo 1 cultivadas em 0,15 μg/ml de ATRA e αGalCer ou αGalCer sozinho, enquanto que, por comparação, a proliferação foi reduzida para células NKT tipo 1 cultivadas em 1,2 μg/ml ou 18,8 μg/ml de ATRA e αGalCer. A maior inibição de proliferação de célula NKT tipo 1 induzida por αGalCer foi observada em 18,8 μg /ml de ATRA. Nenhuma proliferação ou uma proliferação mínima foi observada para células NKT tipo 1 cultivadas somente em ATRA.

EXEMPLO 9 INIBIÇÃO DE ATIVIDADE DE CÉLULA NKT TIPO I POR ATRA

[0144] O efeito de ATRA em secreção de citocina IL-2 por células NKT tipo I em resposta a um desafio IN VITRO com αGalCer foi testado ao colocar em cultura células NKT (Hy1.2) e células apresentadoras de antígeno (APCs) irradiadas IN VITRO com uma concentração ótima de αGalCer na presença ou ausência de ATRA (0,15 μg/ml, 1,2 μg/ml, ou 18,8 μg/ml) por um período de 16 horas. Os sobrenadantes foram coletados e os níveis de IL-2 secretado foram medidos com uso de ELISA sanduíche de IL-2.

[0145] Os níveis de secreção de IL-2 não foram significativamente afetados por 0, 15 μg/ml de ATRA, no entanto, reduções significativas na secreção de IL-2 foi observada para células NKT tipo I em cultura na presença de 1,2 μg/ml ou 18,8 μg/ml de ATRA. A maior redução na secreção de IL-2 foi alcançada com 18,8 μg/ml de ATRA. Consulte a Figura 8b.

[0146] As mudanças funcionais em células NKT tipo I seguindo a administração de ATRA foram adicionalmente testadas. Em dois experimentos independentes, grupos de camundongos Black 6 (WT) foram injetados de modo intraperitoneal com 0,3 mg/animal (~ 15 mg/Kg de peso corporal) de ATRA ou veículo (DMSO) diariamente por um período de 5 dias. As células NKT tipo I foram purificadas e colocadas em cultura IN VITRO com concentrações crescentes de αGalCer. A proliferação celular foi medida e sobrenadantes foram coletados. A resposta de citocina da NKT tipo I isolada após o desafio IN VITRO com αGalCer foi determinada por ELISA sanduíche para IFN-y, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 e IL-13. As células NKT tipo I isoladas dos camundongos injetados com ATRA não proliferaram em resposta ao estímulo de αGalCer (os dados não são mostrados). Conforme mostrado na Figura 8c, as células NKT tipo I isoladas dos camundongos injetadas com veículo (DMSO) secretaram IFN-y, IL-4, e IL-13 em resposta ao estímulo de αGalCer, porém não secretaram IL-6, IL-10 ou IL- 12. Nenhuma secreção de IFN-y, IL-6, IL-10, IL-12 ou IL-13 em resposta ao estímulo de αGalCer foi detectada a partir das células NKT tipo I isoladas dos camundongos injetados com ATRA. Os níveis reduzidos de secreção de IL-4 foram observados a partir de células NKT tipo I isoladas dos camundongos injetados com ATRA em resposta ao estímulo de αGalCer. Consulte a Figura 8c.

EXEMPLO 10 ATRA NÃO INIBE CÉLULAS T CD4 CONVENCIONAIS RESTRINGIDAS POR MHC DE CLASSE II

[0147] O efeito de ATRA em células T CD4 convencionais restringidas por MHC de classe II foi testado ao isolar células T CD4+ reativas à proteína básica mielina MBPAc1-9 de camundongos transgênicos virgens B10.PL Vβ8.2 TCR e colocar as células em cultura IN VITRO com [3H]-timidina e uma concentração ótima de MBPAc1-9 na presença ou ausência de concentrações graduadas de ATRA (0,15, 1,2, 18.8 μg/ml). A proliferação das células T CD4+ reativas a MBPAc1-9 foi medida por incorporação de [3H]-timidina. Nenhuma inibição de proliferação estimulada por MBPAc1-9 foi observada em culturas tratadas com ATRA. Consulte a Figura 10. Isso sugere que ATRA não inibe diretamente a atividade de células T CD4+ restringidas por MHC.

EXEMPLO 11 TRATAMENTO COM ATRA NA AUSÊNCIA DE CÉLULAS APRESENTADORAS DE ANTÍGENO INIBE A FUNÇÃO DE CÉLULA NKT TIPO 1

[0148] O efeito de tratamento com ATRA nas células NKT tipo I na ausência de células apresentadoras de antígeno foi medido também. As células de hibridoma (Hy1.2) NKT tipo I foram colocadas em cultura IN VITRO ou sem ATRA ou com 5 μg/ml, 10 μg/ml ou 20 μg/ml de ATRA por 24 horas. As células foram lavadas, então, três vezes e colocadas em cultura com esplenócitos irradiados (APCs) na presença de concentrações graduadas do antígeno lipídio, αGalCer. Os sobrenadantes foram coletados 16 horas depois e os níveis de IL-2 foram medidos com uso de ELISA sanduíche de IL-2. Conforme mostrado na Figura 11, o tratamento de células de hibridoma (Hy1.2) NKT tipo I com ATRA inibe a secreção de IL- 2. Isso sugere que tratamento com ATRA na ausência de células apresentadoras de antígeno inibe a função efetora de células NKT tipo I.

EXEMPLO 12 INIBIÇÃO DE ATIVIDADE DE CÉLULA NKT TIPO I AGONISTAS DE RAR DE SUBTIPO ESPECÍFICO

[0149] Os receptores de ácido retinoico (RARs) compreendem três subtipos maiores: RARα, RARβ, e RARY. O agonista de RAR ATRA não é seletivo para um subtipo específico. A contribuição de subtipos de RAR para a inibição de atividade de célula NKT tipo I foi testada com agonistas de RAR seletivos de subtipo conforme se segue. As células do baço foram isoladas dos camundongos B6 (WT) virgens e colocadas em cultura IN VITRO na presença de [3H]-timidina, uma concentração ótima de αGalCer e concentrações graduadas do agonista de pan-RAR ATRA, o agonista de RARα AM580, o agonista de RARβ 2 AC55649 ou o agonista de RARY CD1530. A proliferação das células NKT tipo I em resposta ao estímulo de αGalCer foi medida por incorporação de [3H]-timidina.

[0150] As células NKT tipo I em cultura na presença de ATRA, AM580 e CD1530 exibiram níveis similares de proliferação celular até uma concentração de 101 μg/ml. Consulte a Figura 12. As células em cultura na presença de 101 μg/ml de ATRA ou CD1530 exibiram profileração baixa ou mínima, enquanto a proliferação foi mantida para células em cultura em 101 μg/ml de AM580. A proliferação celular reduzida comparada com os outros agonistas de RAR foi observada para o agonista de RARβ 2, AC55649, em todas as concentrações testadas, com a exceção de 101 μg/ml, em que a concentração 10 w ou proliferação mínima foi observada para células em cultura em AC55649, ATRA ou CD1530.

[0151] Esses resultados sugerem que o agonista de RARβ 2, AC55649, é um inibidor eficaz de atividade de célula NKT tipo I e que a trajetória de sinalização do ácido retinoico receptor-β2 (RAR-β 2) está envolvida na inibição de células NKT tipo I.

EXEMPLO 13 EFEITO DE MODULAÇÃO DE TRAJETÓRIA de PPAR-Y EM CÉLULAS NKT TIPO I

[0152] Os receptores ativados por proliferador de peroxissomo (PPARs) são fatores de transcrição induzíveis por ligante que pertencem à superfamília de receptor de hormônio nuclear, que inclui também os receptores para hormônio de tiroide, retinoides, hormônios esteroide e vitamina D. Os PPARs regulam expressão de gene ao se ligar com o Receptor X de Retinoide (RXR) como um parceiro heterodimérico a Elementos Responsivos a Proliferador de Peroxissomo (PPREs) no DNA. Os PPARs foram implicados no desempenho de um papel no metabolismo de energia e lipídio, inflamação, implantação de embrião, diabetes e câncer.

[0153] O papel da trajetória de PPAR-Y na inibição de células NKT tipo I foi testado ao colocar em cultura células NKT tipo I esplênicas recentemente isoladas com [3H]-timidina e uma concentração ótima de αGalCer na presença ou ausência de concentrações graduadas do agonista de PPAR-Y rosiglitazona ou o agonista de PPAR-Y GW9662. A proliferação das células NKT tipo I esplênicas em resposta ao estímulo de αGalCer foi quantificada por incorporação de [3H]-timidina. Níveis similares de proliferação foram observados para células em cultura ou no agonista de PPAR-Y, rosiglitazona, ou no agonista de PPAR-Y, GW9662, em todas as concentrações. Consulte a Figura 13. Esses resultados sugerem que a inibição ou ativação da trajetória de PPAR-Y não inibe diretamente a proliferação de célula NKT tipo I.

EXEMPLO 14 EXAME DO EFEITO DE ANÁLOGOS DE RETINOL NA ATIVIDADE DE CÉLULA NKT TIPO I

[0154] As células esplênicas foram isoladas de camundongos B6 virgens e colocados em cultura IN VITRO com [3H]-timidina e uma concentração ótima de αGalCer na presença ou ausência de concentrações graduadas de ATRA, Retinol, 9- cis-RA ou 13-cis-RA. A proliferação das células NKT tipo I esplênicas em resposta ao estímulo de αGalCer foi quantificada por incorporação de [3H]-timidina. Conforme mostrado na Figura 14, nenhuma proliferação ou proliferação mínima foi observada para células em cultura em 10 μg/ml de ATRA, enquanto o mesmo nível de inibição de proliferação de célula NKT tipo I foi observado somente em concentrações de Retinol, 9-cis-RA ou 13-cis-RA que excederam 101 μg/ml.

EXEMPLO 15 EXAME DE EFEITO DE AGONISTAS DE RAR NA ATIVIDADE DE CÉLULA NKT TIPO I

[0155] Ensaios de liberação de citocina e proliferação in vitro foram realizados em esplenócitos recentemente isolados e hibridomas (1.2 Hyb) de célula NKT tipo I. As células foram colocadas em cultura na presença de [3H]-timidina e uma concentração ótima de αGalCer (10 ng /ml) com concentrações de titulação de ATRA, Tretinoína, o agonista de RARα AM580, o agonista de RARβ AC55649 ou o agonista de RARγ CD1530. A proliferação das células NKT tipo I em resposta ao estímulo de αGalCer foi quantificada por incorporação de [3H]-timidina. Os níveis de IL-2 foram medidos com uso de ELISA sanduíche de IL-2. Ótimas concentrações dos agonistas de RAR foram determinadas. Uma comparação do efeito dos agonistas de RAR em suas melhores concentrações é mostrada na Figura 15. Os níveis mais baixos de proliferação foram observados para células em cultura na presença de ATRA, Tretinoína, o agonista de RARY CD1530. As células em cultura na presença do agonista de RARY CD1530 mostraram os níveis mais baixos de secreção de IL-2. Esses resultados indicam que o agonista de RARy CD1530 é um inibidor eficaz de atividade de célula NKT tipo I.

EXEMPLO 16 COMPARAÇÃO DE INIBIÇÃO DE CÉLULAS NKT TIPO I COM TAZAROTENO E COM ATRA

[0156] O efeito do agonista de RARy seletivo, Tazaroteno, na atividade de célula NKT tipo I foi examinada através de ensaios de liberação de citocina e proliferação IN VITRO.

[0157] Os ensaios de liberação de citocina e proliferação IN VITRO foram realizados em esplenócitos recentemente isolados e hibridomas (1.2 Hyb) de célula NKT tipo I. As células foram colocadas em cultura na presença de [ H]-timidina e uma concentração ótima de αGalCer (10 ng /ml) com concentrações crescentes de ATRA ou Tazaroteno. A proliferação das células NKT tipo I em resposta ao estímulo de αGalCer foi quantificada por incorporação de [3H]- timidina. Os níveis de IL-2 foram medidos com uso de ELISA sanduíche de IL-2. Uma comparação de inibição de célula NKT tipo I por ATRA e Tazaroteno é mostrada na Figura 16. Enquanto agonistas de RAR inibem a proliferação célula NKT tipo I e a secreção de IL-2, Tazaroteno alcança seus efeitos de inibição em concentrações mais baixas. Consulte a Figura 16.

EXEMPLO 17 INIBIÇÃO DE CÉLULAS NKT TIPO I SEGUINDO A

[0158] As mudanças funcionais em células NKT tipo I seguindo a administração IN VIVO de Tazaroteno ou ATRA foram testadas. Os grupos de camundongos foram injetados de modo intraperitoneal com 300 μg de ATRA (15 mg/kg), 300 μg de Tazaroteno (15 mg/kg) ou veículo (DMSO) diariamente por um período de 5 dias. As Células NKT tipo I esplênicas foram purificadas e colocadas em cultura IN VITRO com concentrações crescentes de αGalCer. A proliferação celular foi medida por quantificação de incorporação de [3H]-timidina e os resultados são mostrados na Figura Fig. 17. Uma comparação da resposta proliferativa de células isoladas de camundongos injetados com ATRA, injetados com Tazaroteno ou injetados com veículo (DMSO) ao estímulo de αGalCer indica que a administração IN VIVO de ou ATRA ou Tazaroteno inibi a atividade de célula NKT tipo I. Os níveis mais baixos de proliferação, no entanto, foram observados para células NKT tipo I isoladas de camundongos injetados com Tazaroteno. Consulte a Figura 17.

[0159] Células mononucleares foram isoladas de fígados de camundongos injetados ou com ATRA, ou com Tazaroteno ou com veículo (DMSO) e manchados com aGalCer/CD1d-tetrâmero e anticorpos de pan anti-TCRβ. Citometria de fluxo foi realizada e a população de células (células NKT tipo I) que expressam αGalCer/CD1d- tetrâmero/TCRe foi quantidade conforme mostrado na Figura 18. Nenhuma diferença significativa nos números de células NKT tipo I nos fígados de animais administrados com controle vs. ATRA ou Tazaroteno foi observada. Consulte a Figura 18. Esses resultados indicam que a administração de ATRA ou Tazaroteno não esgota células NKT tipo I hepáticas. EXEMPLO TEÓRICO 18 PREVENÇÃO DE ALD POR ADMINISTRAÇÃO DE AGONISTA DE RAR

[0160] A eficácia de Agonistas de RAR na prevenção ou mitigação de doença hepática alcoólica é testada mediante a injeção de grupos de camundongos com uma quantidade eficaz de: ATRA, Tazaroteno, Tretinoína, o agonista de RARα AM580, o agonista de RARβ AC55649, o agonista de RARY CD1530 ou veículo/DMSO diariamente por um período de 5 dias durante o qual os camundongos estão ou em uma dieta líquida que contém 5% de etanol por 10 dias seguida por (no dia 11) uma única dose alta de etanol administrada por gavagem (5 g/kg de peso corporal) (grupo de alimentação de etanol compulsiva mais crônica) ou uma dieta que contém maltose e dextrina isocalóricas seguida por uma gavagem isocalórica com dextrina e maltose (grupo de controle). Os camundongos são submetidos à eutanásia 6 a 8 horas seguindo a gavagem e o soro e tecido hepático são coletados.

[0161] Os níveis de ALT em soro são determinados para cada grupo de camundongos. Os níveis de ALT em soro são esperados ser significativamente aumentados em camundongos injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica em comparação com camundongos alimentados com o controle. Os camundongos alimentados com etanol compulsivamente mais cronicamente que recebem injeções de ATRA, Tazaroteno, Tretinoína, AM580, AC55649, CD1530 são esperados ter níveis de ALT em soro reduzidos em comparação com os camundongos injetados com veículo/DMSO submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Os níveis de ALT em soro de camundongos injetados com ATRA, Tazaroteno ou Tretinoína submetidos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica são esperado serem similares àqueles observados em camundongos alimentados com o controle. O exame histológico para esteatohepatite hepática (doença hepática gordurosa) é esperado mostrar danos significativos no tecido hepático colhido dos camundongos injetados com veículo/DMSO seguindo a alimentação de etanol compulsiva mais crônica, enquanto dano reduzido ou nenhum dano é esperado para o tecido hepático colhido dos camundongos injetados com ATRA, Tazaroteno, Tretinoína, AM580, AC55649 ou CD1530 seguindo a alimentação de etanol compulsiva mais crônica. EXEMPLO TEÓRICO 19

[0162] Os experimentos de transferência adotiva são utilizados com células NKT tipo I purificadas de aGalCer/CD1d-tetrâmero de camundongos BL/6 tratados com ATRA ou tratados com Tazaroteno para examinar se um número graduado dessas células quando transferidas para recipientes BL/6 virgens podem inibir lesão hepática seguindo a alimentação de etanol compulsiva mais crônica.

[0163] As células T de sulfatídeo-CD1d- tetrâmero+ purificadas (classificadas) são testadas para determinar se as mesmas podem prevenir ALD mediante transferência adotiva para camundongos CD1d+/+ e CD1d-/-. Os camundongos nocaute para citocina são utilizados como doadores de células T reativas a sulfatídeo para determinar diretamente o papel de secreção de IFN-Y, IL-4 e IL-10 pelas células NK T tipo II na regulação de ALD. As células T reativas a sulfatídeo são isoladas com uso de tetrâmeros e números graduados (0,5 a 1 milhão) são transferidas de modo adotivo em recipientes CD1d+/+ e CD1d-/- C57BL/6. Por volta de 1,5 milhão de células de sulfatídeo-CD1d-tetrâmero+ são isoladas de 18 camundongos C57BL/6 virgens. Um dia depois, os recipientes são expostos à alimentação de etanol compulsiva mais crônica. Para analisar os papeis de secreção de citocina por células NKT tipo II, incialmente as IFN-Y, IL-4-/- ou IL- 10-/- são utilizadas nos camundongos de background genético BL/6 (Jackson Lab). Os grupos de tipo selvagem de BL/6, ou camundongos nocautes, são injetados com sulfatídeo (20 μg/animal) e então induzidos com ALD. Na ausência dessas citocinas tipo 2, a administração de sulfatídeo é esperada prevenir ALD. Os experimentos de transferência adotiva de célula são realizados adicionalmente células de sulfatídeo- CD1d-tetrâmero+ de camundongos nocautes para citocina, em que números graduados (0,5 a 1 milhão) são transferidos para camundongos CD1d-/- C57BL/6. Um dia depois camundongos recipientes são mantidos em alimentação de etanol. Em paralelo, as células T sulfatídeo-CD1d-tetrâmero+ são transferidas de camundongos de tipo selvagem para camundongos CD1d+/+ BL/6 como um controle positivo. Esses experimentos são esperados confirmar diretamente o papel dessas citocinas secretadas por células T reativas a sulfatídeo no controle de ALD.

EQUIVALENTES

[0164] O relatório específico escrito anterior é considerado ser suficiente para habilitar aquele versado na técnica para praticar as presentes modalidades. A descrição anterior detalha certas modalidades preferenciais e descreve o melhor modo contemplado pelos inventores. Deve-se observar, no entanto, que não importa o quão detalhado o relatório anterior possa aparecer em texto, as presentes modalidades podem ser praticadas de várias maneiras e deve ser interpretada de acordo com as reivindicações anexas e qualquer equivalente das mesmas.

[0165] De acordo com algumas modalidades, um método para tratar ou prevenir pelo menos uma afecção inflamatória em um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade de um retinoide suficiente para inibir a ativação de células NKT tipo I para o paciente. Em algumas modalidades, a afecção inflamatória é selecionada do grupo que consiste em: doença hepática gordurosa, hepatite induzida por álcool, esteato-hepatite não alcoólica, cirrose, cirrose fulminante, hepatite idiopática, hepatite induzida por vírus (A, B, C e outros), hepatite inflamatória associada a carcinoma hepatobiliar, esclerose múltipla, diabetes tipo I, lesão de isquemia-reperfusão, transplante de órgão sólido, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, esclerose lateral amiotrófica e doença inflamatória intestinal (Crohn e colite). Em algumas modalidades, o retinoide é ATRA ou isotretinoína. Em algumas modalidades, o retinoide é tazaroteno. Em algumas modalidades, o retinoide é retinol ou um éster de retinol. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar uma quantidade de sulfatídeo suficiente para ativar células NKT tipo II. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0166] em que R1 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma C1 a C30 alquenila substituída e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0167] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir danos hepáticos em um paciente em risco de danos hepáticos químicos provenientes de drogas prescritas ou drogas de abuso é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de um ou mais agonistas de RAR, um ou mais sulfatídeos ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o agonista de RAR é selecionado do grupo que consiste em tazaroteno, ATRA ou isotretinoína. Em algumas modalidades, os um ou mais sulfatídeos têm a seguinte estrutura química:

[0168] em que R1 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma C1 a C30 alquenila substituída e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação.

[0169] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir danos de tecido mediados por célula NKT tipo I em um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de um agonista de RAR para o paciente, em que uma atividade de células NKT tipo I é reduzida. Em algumas modalidades, o tecido é tecido de fígado. Em algumas modalidades, a atividade de célula NKT tipo I é secreção de IL-4. Em algumas modalidades, o agonista de RAR é selecionado do grupo que consiste em tazaroteno, ATRA ou isotretinoína. Em algumas modalidades, o agonista de RAR é um agonista de RAR-β2.

[0170] De acordo com algumas modalidades um método para inibir danos de tecido mediados por célula NKT tipo I em um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade de sulfatídeo suficiente para ativar células NKT tipo II para o paciente, em que uma atividade de células NKT tipo I é reduzida. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0171] em que R1 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma C1 a C30 alquenila substituída e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação. Em algumas modalidades, o sulfatídeo tem a seguinte estrutura química:

[0172] De acordo com algumas modalidades, um método para tratar ou prevenir pelo menos uma afecção inflamatória em um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz da combinação de sulfatídeo e um retinoide.

[0173] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir a ativação de células NKT tipo I é fornecido. O método pode compreender colocar uma quantidade eficaz de um retinoide em contato com as células NKT tipo I.

[0174] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir a ativação de células NKT tipo I em um paciente com uma doença inflamatória é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de uma combinação de um sulfatídeo e um retinoide para o paciente.

[0175] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir a liberação de células mieloides no fígado de um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de um retinoide para o paciente.

[0176] De acordo com algumas modalidades, um método para inibir a liberação de células mieloides no fígado de um paciente é fornecido. O método pode compreender administrar uma quantidade eficaz de uma combinação de sulfatídeo e um retinoide para o paciente.

Claims

1. USO DE TAZAROTENO, opcionalmente em combinação com um sulfatídeo tendo uma estrutura química selecionada do grupo que consiste em:

em que R1 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma C1 a C30 alquenila substituída e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação; e a estrutura química:

caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de pelo menos uma condição inflamatória do fígado.

2. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser selecionada do grupo que consiste em: doença hepática gordurosa, hepatite induzida por álcool, esteato-hepatite não alcoólica, cirrose, cirrose fulminante, hepatite idiopática, hepatite induzida por vírus (A, B, C), hepatite inflamatória associada a carcinoma hepatobiliar, lesão de isquemia- reperfusão e transplante de órgão sólido.

3. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser uma lesão hepática induzida por álcool selecionada do grupo que consiste em: doença hepática relacionada a álcool, doença hepática gordurosa, esteatose hepática, hepatite alcoólica ou cirrose alcoólica.

4. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser esteato-hepatite não alcoólica.

5. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser doença hepática alcoólica ou lesão de reperfusão hepática.

6. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser esteatose hepática.

7. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela condição inflamatória do fígado ser hepatite autoimune.

8. USO DE TAZAROTENO, opcionalmente em combinação com um sulfatídeo tendo uma estrutura química selecionada do grupo que consiste em:

em que R1 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, um hidrogênio, uma alquila C1 a C30, alquila substituída C1 a C30, uma alquenila C1 a C30, uma C1 a C30 alquenila substituída e um açúcar C5 a C12; R2 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi e um grupo alcóxi; R3 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi, um grupo metóxi, um grupo etóxi e um grupo alcóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidróxi e um grupo alcóxi; R5 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, uma hidroxila, uma carbonila, um alcóxi e uma ligação; R6 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; R7 é selecionado do grupo que consiste em uma alquila C1 a C40, uma alquila substituída C1 a C40, uma alquenila C1 a C40, uma alquenila substituída C1 a C40 e uma alquinila C1 a C40; e R8 é selecionado do grupo que consiste em um hidrogênio, um grupo hidroxila, uma carbonila, um grupo alcóxi e uma ligação; e

caracterizado por ser na preparação de um medicamento para inibir lesões hepáticas em um paciente em risco de lesões hepáticas químicas provenientes de drogas prescritas ou drogas de abuso.

9. MÉTODO IN VITRO PARA INIBIÇÃO DE ATIVAÇÃO DE CÉLULAS NKT TIPO I, sendo o método caracterizado por compreender colocar em contato tazaroteno.