BR102016005548B1 - THERMOREVERSIBLE MICELLAR FORMULATION CONTAINING QUERCETIN AND VILDAGLIPTIN FOR ORAL ADMINISTRATION IN TYPE 1 DIABETES - Google Patents

Abstract

FORMULAÇÃO MICELAR TERMORREVERSÍVEL CONTENDO QUERCETINA E VILDAGLIPTINA PARA ADMINISTRAÇÃO ORAL EM DIABETES TIPO 1. Uma melhor compreensão do Diabetes mellitus (DM) levou ao desenvolvimento de novas estratégias de tratamento que tiveram como alvo melhorar a função do pâncreas, como os Inibidores da DPP-IV (Vildagliptina). Somado a isto, sabe-se que a Quercetina é capaz de melhorar o estado hiperglicêmico. Entretanto, um passo limitante no uso da quercetina como um agente antidiabético coadjuvante é a sua baixa absorção intestinal. Para contornar esta limitação desenvolvemos uma formulação oral contendo Quercetina em associação com Vildagliptina formando um sistema micelar termorreversível baseado no copolímero tribloco poloxâmero 407 (P-407). A administração da Quercetina com a Vildagliptina produzirá contribuições excelentes considerando que não há relatos de trabalhos sobre a exploração de uma estrutura micelar contendo ambos os constituintes no desenvolvimento de uma formulação oral para o tratamento do diabetes tipo 1. Utilizamos 40 ratos distribuídos em 4 grupos: Grupos Controle e Diabético, receberam o volume correspondente a 1,0mL de formulação contendo o veículo;Grupo Diabético Tratado, recebeu o volume correspondente a 1,0mL da formulação contendo a Quercetina (50mg/Kg) em associação à Vildagliptina (10mg/Kg); Controle Positivo, recebeu uma injeção intraperitoneal de insulina. Os resultados mostraram a eficácia da formulação (...).THERMOREVERSIBLE MICELLAR FORMULATION CONTAINING QUERCETIN AND VILDAGLIPTIN FOR ORAL ADMINISTRATION IN TYPE 1 DIABETES. A better understanding of Diabetes mellitus (DM) has led to the development of new treatment strategies aimed at improving pancreas function, such as DPP-IV inhibitors ( Vildagliptin). Added to this, it is known that Quercetin is able to improve the hyperglycemic state. However, a limiting step in the use of quercetin as an adjunctive antidiabetic agent is its poor intestinal absorption. To overcome this limitation, we developed an oral formulation containing Quercetin in association with Vildagliptin forming a thermoreversible micellar system based on the triblock copolymer poloxamer 407 (P-407). The administration of Quercetin with Vildagliptin will produce excellent contributions considering that there are no reports of works on the exploration of a micellar structure containing both constituents in the development of an oral formulation for the treatment of type 1 diabetes. We used 40 rats distributed in 4 groups: Control and Diabetic Groups received a volume corresponding to 1.0mL of formulation containing the vehicle; Treated Diabetic Group received a volume corresponding to 1.0mL of formulation containing Quercetin (50mg/Kg) in association with Vildagliptin (10mg/Kg) ; Positive Control, received an intraperitoneal injection of insulin. The results showed the effectiveness of the formulation (...).

Description

CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF THE INVENTION

[001] O Diabetes mellitus (DM) é um importante problema de saúde pública prevalente do ponto de vista social e econômico. Ao longo da última década, uma melhor compreensão do DM levou ao desenvolvimento de novas estratégias de tratamento que tiveram como alvo melhorar a função do pâncreas, tais como os medicamentos Inibidores da DPP-IV. Estes inibidores foram lançados no mercado com o intuito de promover um melhor controle sobre o diabetes mellitus tipo 2 (DM2), pois ao inibirem a enzima dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) e aumentar os níveis endógenos das incretinas, estimulam a secreção de insulina de maneira dose-dependente e inibem a produção de glucagon.[001] Diabetes mellitus (DM) is an important public health problem prevalent from a social and economic point of view. Over the past decade, a better understanding of DM has led to the development of new treatment strategies that have targeted improving pancreas function, such as the DPP-IV inhibitor drugs. These inhibitors were launched on the market with the aim of promoting better control over type 2 diabetes mellitus (DM2), because by inhibiting the enzyme dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) and increasing endogenous levels of incretins, they stimulate insulin secretion in a dose-dependent manner and inhibit glucagon production.

[002] Apesar de esses inibidores terem sido extremamente estudados no tratamento do DM2, pouco se sabe do seu potencial no tratamento do diabetes mellitus tipo 1 (DM1). Entretanto, diversos autores relataram a ineficiência dos inibidores da DPP-IV na redução da glicose sanguínea no modelo de DM1, sendo assim, existe ainda a necessidade em buscar terapias adicionais que possam promover um melhor controle glicêmico. Apesar de a Quercetina apresentar um potencial antidiabético, este só se faz presente quando a mesma é administrada através de injeção intraperitoneal, pois um passo limitante ao uso da quercetina como um agente antidiabético é a sua baixa absorção intestinal. A administração da quercetina através de injeção intraperitoneal não satisfaz nossa proposta de elaboração de agente terapêutico oral para o tratamento do DM1. Sendo assim, a formulação não é óbvia, pois a mesma é necessária para permitir a absorção adequada da quercetina. Além disto, a associação dos dois constituintes (Quercetina e Vildagliptina) conferem efeitos hipoglicemiantes quando administrados na formulação proposta, conforme resultados apresentados neste relatório.[002] Although these inhibitors have been extensively studied in the treatment of DM2, little is known of their potential in the treatment of type 1 diabetes mellitus (DM1). However, several authors have reported the inefficiency of DPP-IV inhibitors in reducing blood glucose in the DM1 model, therefore, there is still a need to seek additional therapies that can promote better glycemic control. Although Quercetin has an antidiabetic potential, this is only present when it is administered by intraperitoneal injection, since a limiting step to the use of quercetin as an antidiabetic agent is its low intestinal absorption. The administration of quercetin through intraperitoneal injection does not satisfy our proposal for the elaboration of an oral therapeutic agent for the treatment of DM1. Therefore, the formulation is not obvious, as it is necessary to allow adequate absorption of quercetin. In addition, the association of the two constituents (Quercetin and Vildagliptin) confer hypoglycemic effects when administered in the proposed formulation, according to the results presented in this report.

ESTADO DA TÉCNICASTATE OF THE TECHNIQUE

[003] O Diabetes mellitus (DM) é um importante problema de saúde pública prevalente do ponto de vista social e econômico (SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES. Diretrizes da Sociedade Brasileira de Diabetes, p. 1-329, 2009). Está associado a complicações que comprometem a qualidade de vida e sobrevida dos indivíduos, além de envolver altos custos no seu tratamento. Nos anos 70 vários hormônios intestinais, denominados de incretinas foram identificados, como o GLP-1 (Glucagon like peptide-1), que foi reconhecido como um importante contribuinte para o controle do diabetes (TAMBASCIA, M. A. O complexo insulina/glucagon/incretinas e seu papel no controle Glicêmico. Novas perspectivas para o tratamento do diabetes tipo 2: incretinomiméticos e inibidores da DPP-IV - Posicionamentos Oficiais SBD. Revista Brasileira de Medicina, São Paulo, n. 3, p. 4-7, 2007). Assim, foi entendido que o processo glicorregulatório no diabetes é, também, o resultado da interação dos hormônios pancreáticos (insulina e glucagon) com hormônios incretinas, fazendo o diabetes ser visto como uma doença multi-hormonal. Sabe-se que no diabetes, a secreção de GLP-1 fica comprometida ou mesmo ausente, contribuindo para a deficiência na secreção de insulina (NAUCK, M.A.; BALLER, B.; MEIER, J.J. Gastric inhibitory polypeptide and glucagon-like peptide-1 in the pathogenesis of type 2 diabetes. Diabetes, v. 53, suppl 3, p. 190-196, 2004). Entretanto, o uso terapêutico do GLP-1 como agente antidiabético o torna inviável devido à sua meia-vida curta como resultado de sua rápida inativação pela enzima dipeptidil peptidase-IV (DPP-IV) (DEACON, C. F.; CARR, R. D.; HOLST, J. J. DPP-IV inhibitor therapy: new directions in the treatment of type 2 diabetes. Front. Biosci. v. 13, p. 1780-1794, 2008). O GLP- 1 é rapidamente metabolizado pela DPPIV, com uma meia-vida ativa de apenas 1 a 2 minutos (ANDUKURI, R.; DRINCIC, A.; RENDELL, M. Alogliptin: a new addition to the class of DPP-4 inhibitors. Diabetes Metab. Syndr. Obes., v. 21, n. 2. P. 117-126, 2009), dificultando o seu emprego no tratamento do DM. Baseado nesta informação, ao longo da última década, uma melhor compreensão do DM levou ao desenvolvimento de novas estratégias de tratamento em relação às incretinas que tiveram como alvo melhorar a função do pâncreas, tais como os medicamentos Inibidores da Dipeptidil Peptidase-IV. Estes inibidores foram lançados no mercado com o intuito de promover um melhor controle sobre o diabetes mellitus tipo 2 (DM 2), pois ao inibirem a enzima DPP-IV e aumentar os níveis endógenos das incretinas, estimulam a secreção de insulina de maneira dose-dependente e inibem a produção de glucagon, promovendo um benéfico controle sobre a glicemia dos pacientes (ELIASCHEWITZ, F. G. Perfil terapêutico dos inibidores da enzima dipeptidil peptidase-IV (DPP-IV). Novas perspectivas para o tratamento do diabetes tipo 2: incretinomiméticos e inibidores da DPP-IV - Posicionamentos Oficiais SBD. Revista Brasileira de Medicina, São Paulo, n. 3, p. 11-15, 2007).[003] Diabetes mellitus (DM) is an important public health problem prevalent from the social and economic point of view (BRASILEIRA SOCIETY OF DIABETES. Guidelines of the Brazilian Society of Diabetes, p. 1-329, 2009). It is associated with complications that compromise the quality of life and survival of individuals, in addition to involving high costs in its treatment. In the 1970s, several intestinal hormones called incretins were identified, such as GLP-1 (Glucagon like peptide-1), which was recognized as an important contributor to the control of diabetes (TAMBASCIA, M. A. The insulin/glucagon/incretin complex and its role in glycemic control New perspectives for the treatment of type 2 diabetes: incretinomimetics and DPP-IV inhibitors - SBD Official Position Papers, Revista Brasileira de Medicina, São Paulo, n. 3, p. 4-7, 2007). Thus, it was understood that the glucoregulatory process in diabetes is also the result of the interaction of pancreatic hormones (insulin and glucagon) with incretin hormones, making diabetes to be seen as a multi-hormonal disease. It is known that in diabetes, GLP-1 secretion is impaired or even absent, contributing to insulin secretion deficiency (NAUCK, M.A.; BALLER, B.; MEIER, J.J. Gastric inhibitory polypeptide and glucagon-like peptide-1 in the pathogenesis of type 2 diabetes. Diabetes, v. 53, suppl 3, p. 190-196, 2004). However, the therapeutic use of GLP-1 as an antidiabetic agent makes it unfeasible due to its short half-life as a result of its rapid inactivation by the enzyme dipeptidyl peptidase-IV (DPP-IV) (DEACON, C. F.; CARR, R. D.; HOLST, J. J. DPP-IV inhibitor therapy: new directions in the treatment of type 2 diabetes. Front. Biosci. v. 13, p. 1780-1794, 2008). GLP-1 is rapidly metabolized by DPPIV, with an active half-life of only 1 to 2 minutes (ANDUKURI, R.; DRINCIC, A.; RENDELL, M. Alogliptin: a new addition to the class of DPP-4 inhibitors Diabetes Metab. Syndr. Obes., v. 21, n. 2. P. 117-126, 2009), hampering its use in the treatment of DM. Based on this information, over the past decade, a better understanding of DM has led to the development of new treatment strategies regarding incretins that have targeted improving pancreas function, such as the Dipeptidyl Peptidase-IV Inhibitors. These inhibitors were launched on the market with the aim of promoting better control over type 2 diabetes mellitus (DM 2), because by inhibiting the DPP-IV enzyme and increasing endogenous levels of incretins, they stimulate insulin secretion in a dose-dependent manner. dependent and inhibit the production of glucagon, promoting a beneficial control over the patients' glycemia (ELIASCHEWITZ, F. G. Therapeutic profile of dipeptidyl peptidase-IV enzyme inhibitors (DPP-IV). New perspectives for the treatment of type 2 diabetes: incretinomimetics and inhibitors from DPP-IV - SBD Official Positions, Brazilian Journal of Medicine, São Paulo, n. 3, p. 11-15, 2007).

[004] Poucos são os estudos que verificam o efeito da inibição de DPP-IV em modelos animais de DM1. Apesar de estes inibidores terem sido extremamente estudados no tratamento do DM2, pouco se sabe do seu potencial no tratamento do DM1 (DUPRE, J. Glycaemic effects of incretins in type 1 diabetes mellitus: a concise review, with emphasis on studies in humans. Regul. Pept., v. 128, n. 2, p. 149-57, 2005). Sendo assim, o dano progressivo na função das células beta e declínio na massa destas células resultam na deficiência relativa ou absoluta de insulina e hiperglicemia, a base primária de todas as manifestações diabéticas (PRENTKI, M.; NOLAN, C. J. Islet beta cell failure in type 2 diabetes. J Clin Invest., v. 116, n. 7, p. 1802-1812, 2006). Portanto, estratégias que possam induzir a regeneração de células beta teria o potencial de curar o diabetes (ANSARULLAH, LU, Y., HOLSTEIN, M.; DERUYTER, B. et al. Stimulating b-Cell Regeneration by Combining a GPR119 gonist with a DPP- IV Inhibitor. PLoS One, v. 8, n. 1, e53345, 2013).[004] There are few studies that verify the effect of DPP-IV inhibition in animal models of DM1. Although these inhibitors have been extensively studied in the treatment of DM2, little is known about their potential in the treatment of DM1 (DUPRE, J. Glycaemic effects of incretins in type 1 diabetes mellitus: a concise review, with emphasis on studies in humans. Regul Pept., v. 128, n.2, p.149-57, 2005). Thus, progressive damage to beta cell function and decline in beta cell mass result in relative or absolute insulin deficiency and hyperglycemia, the primary basis of all diabetic manifestations. type 2 diabetes. J Clin Invest., v. 116, no. 7, p. 1802-1812, 2006). Therefore, strategies that can induce beta cell regeneration would have the potential to cure diabetes (ANSARULLAH, LU, Y., HOLSTEIN, M.; DERUYTER, B. et al. Stimulating b-Cell Regeneration by Combining a GPR119 gonist with a DPP-IV Inhibitor, PLoS One, v.8, n.1, e53345, 2013).

[005] Considerando que a redução da população de células beta é um dos mecanismos responsáveis tanto pelo estabelecimento quanto pela progressão do diabetes, se for demonstrado que a terapia baseada em incretinas é capaz de deter a progressão da doença, em longo prazo, através da preservação das células beta, então essa classe de medicamentos poderá ser utilizada desde o estágio de pré-diabetes até as fases mais avançadas da doença. Sendo assim, os inibidores da DPP-IV constituem não somente uma classe inovadora de agentes orais para o tratamento do diabetes tipo 2 (GREEN, B. D.; FLATT, P. R.; BAILEY, C. J. Dipeptdyl peptidase IV (DPP-IV) inhibitors: a newly emerging drug class for the treatment of type 2 diabetes. Diab. Vasc. Dis. Res., v. 3, n. 3, p. 159-165, 2006), como também pode trazer novas perspectivas para o tratamento do diabetes tipo 1 (POSPISILIK, J.; MARTIN, J.; DOTY, T. et al. Dipeptidyl peptidase IV inhibitor stimulates beta-cell survival and islet neogenesis in streptozotocin-induced diabetic rats. Diabetes., v. 52, n. 3, p. 741-750, 2003).[005] Considering that the reduction in the population of beta cells is one of the mechanisms responsible for both the establishment and the progression of diabetes, if it is demonstrated that therapy based on incretins is capable of halting the progression of the disease, in the long term, through the preservation of beta cells, then this class of drugs can be used from the pre-diabetes stage to the most advanced stages of the disease. Thus, DPP-IV inhibitors are not only an innovative class of oral agents for the treatment of type 2 diabetes (GREEN, B. D.; FLATT, P. R.; BAILEY, C. J. Dipeptdyl peptidase IV (DPP-IV) inhibitors: a newly emerging drug class for the treatment of type 2 diabetes. Diab. Vasc. Dis. Res., v. 3, n. 3, p. 159-165, 2006), but it can also bring new perspectives for the treatment of type 1 diabetes ( POSPISILIK, J.; MARTIN, J.; DOTY, T. et al. Dipeptidyl peptidase IV inhibitor stimulates beta-cell survival and islet neogenesis in streptozotocin-induced diabetic rats. Diabetes., v. 52, n. 3, p. 741 -750, 2003).

[006] Recentes estudos têm demonstrado que a estimulação do crescimento, diferenciação e inibição de apoptose de células beta aumentam a lista de efeitos dos inibidores de DPP-IV. Estes achados providenciam uma razão inicial para investigar os efeitos, em longo prazo, dos inibidores de DPP-IV na homeostase da glicose e integridade das ilhotas pancreáticas (efeito citoprotetor) no modelo de DM1. Segundo Kim et al., o inibidor de DPP-IV MK0431 prolongou a sobrevivência de células beta em ratos DM1 induzidos por STZ (KIM, S.; NIAN, C.; DOUDET, D. et al. Dipeptidyl Peptidase IV Inhibition With MK0431 Improves Islet Graft Survival in Diabetic NOD Mice Partially via T-Cell Modulation. Diabetes, v. 58, p. 641-651, 2009). Nosso grupo de pesquisa verificou que o inibidor da DPP-IV apresentou resultados promissores na preservação e integridade de células beta, sem, no entanto, melhorar o quadro hiperglicêmico (AVILA, D. L.; ARAUJO, G. R.; MIRANDA, P. H. A. et al. Vildagliptin Ameliorates Oxidative Stress and Pancreatic Beta Cell Destruction in Type 1 Diabetic Rats. Archives of Medical Research, v. 44, p. 194-202, 2013). Sendo assim, outro parâmetro que necessita de novos estudos refere-se ao perfil glicêmico. Diversos autores relataram a ineficiência dos inibidores da DPP-IV na redução da glicose sanguínea no modelo de DM1 (MAEDA, S.; MATSUI, T.; YAMAGISHI, S. Vildagliptin inhibits oxidative stress and vascular damage in streptozotocin-induced diabetic rats. International Journal of Cardiology, v. 158, n. 1, p. 171-173, 2012). Portanto existe ainda a necessidade em buscar terapias adicionais que possam promover um melhor controle glicêmico. Neste sentido, sabe-se que a Quercetina apresenta um potencial antidiabético, melhorando o estado hiperglicêmico e reduzindo a incidência de complicações periféricas no diabetes (JEONG, S.; KANG, M.; CHOI, H. et al. Quercetin ameliorates hyperglycemia and dyslipidemia and improves antioxidant status in type 2 diabetic db/db mice. Nutr Res Pract., v. 6, n. 3, p. 201- 207. 2012). Entretanto, um passo limitante no uso da Quercetina como um agente antidiabético coadjuvante é a sua baixa absorção intestinal.[006] Recent studies have shown that stimulation of beta cell growth, differentiation, and inhibition of apoptosis add to the list of effects of DPP-IV inhibitors. These findings provide an initial reason to investigate the long-term effects of DPP-IV inhibitors on glucose homeostasis and pancreatic islet integrity (cytoprotective effect) in the T1D model. According to Kim et al., the DPP-IV inhibitor MK0431 prolonged the survival of beta cells in DM1 mice induced by STZ (KIM, S.; NIAN, C.; DOUDET, D. et al. Dipeptidyl Peptidase IV Inhibition With MK0431 Improves Islet Graft Survival in Diabetic NOD Mice Partially via T-Cell Modulation, Diabetes, v. 58, p. 641-651, 2009). Our research group verified that the DPP-IV inhibitor presented promising results in the preservation and integrity of beta cells, without, however, improving the hyperglycemic condition (AVILA, D. L.; ARAUJO, G. R.; MIRANDA, P. H. A. et al. Vildagliptin Ameliorates Oxidative Stress and Pancreatic Beta Cell Destruction in Type 1 Diabetic Rats. Archives of Medical Research, v. 44, p. 194-202, 2013). Therefore, another parameter that needs further studies refers to the glycemic profile. Several authors have reported the inefficiency of DPP-IV inhibitors in reducing blood glucose in the DM1 model (MAEDA, S.; MATSUI, T.; YAMAGISHI, S. Vildagliptin inhibits oxidative stress and vascular damage in streptozotocin-induced diabetic rats. International Journal of Cardiology, v. 158, no. 1, p. 171-173, 2012). Therefore, there is still a need to seek additional therapies that can promote better glycemic control. In this sense, it is known that Quercetin has an antidiabetic potential, improving the hyperglycemic state and reducing the incidence of peripheral complications in diabetes (JEONG, S.; KANG, M.; CHOI, H. et al. Quercetin ameliorates hyperglycemia and dyslipidemia and improves antioxidant status in type 2 diabetic db/db mice. Nutr Res Pract., v. 6, n. 3, p. 201-207, 2012). However, a limiting step in the use of quercetin as an adjunctive antidiabetic agent is its poor intestinal absorption.

[007] Um estudo comparativo da interação farmacocinética de quercetina e rutina após administração oral de uma formulação patenteada na Europa contendo extrato seco da planta Hipphophae rhamnoides e coadministração de quercetina e rutina foi realizado por Kammalla e colaboradores (2015). Os resultados do estudo demonstraram que existem diferenças na farmacocinética de quercetina e rutina quando estes fármacos foram administrados juntos a formulação fitoterápica. Na verdade, a biodisponibilidade de quercetina diminuiu e a biodisponibilidade da rutina aumentou a partir da formulação fitoterápica quando comparadas com a coadministração. Estes resultados provaram que existem interações farmacocinéticas inter e intra fitoterápica entre quercetina e rutina (Kammalla AK, et al. Comparative pharmacokinetic interactions of Quercetin and Rutin in rats after oral administration of European patented formulation containing Hipphophae rhamnoides and Co-administration of Quercetin and Rutin. Eur J Drug Metab Pharmacokinet. 2015.).[007] A comparative study of the pharmacokinetic interaction of quercetin and rutin after oral administration of a formulation patented in Europe containing dry extract of the plant Hipphophae rhamnoides and co-administration of quercetin and rutin was performed by Kammalla et al. (2015). The results of the study demonstrated that there are differences in the pharmacokinetics of quercetin and rutin when these drugs were administered together in the herbal formulation. Indeed, quercetin bioavailability decreased and rutin bioavailability increased from the herbal formulation when compared to co-administration. These results proved that there are inter and intra herbal pharmacokinetic interactions between quercetin and rutin (Kammalla AK, et al. Comparative pharmacokinetic interactions of Quercetin and Rutin in rats after oral administration of European patented formulations containing Hipphophae rhamnoides and Co-administration of Quercetin and Rutin. Eur J Drug Metab Pharmacokinet. 2015.).

[008] Para contornar esta limitação a maioria dos estudos que demonstram o efeito benéfico da Quercetina no controle glicêmico a administra através de injeção intraperitoneal, entretanto esta forma de administração não satisfaz nossa proposta de elaboração de agente terapêutico oral para o tratamento do DM1.[008] To circumvent this limitation, most studies that demonstrate the beneficial effect of Quercetin on glycemic control administer it through intraperitoneal injection, however this form of administration does not satisfy our proposal for the elaboration of an oral therapeutic agent for the treatment of DM1.

[009] Neste sentido, um dos aspectos importantes do desenvolvimento de uma formulação contendo concomitantemente Quercetina e Vildagliptina é a manutenção de concentrações adequadas destes fármacos no sítio de absorção no momento em que ocorre a liberação destes a partir da formulação. Neste contexto, um sistema polimérico de interesse são os géis aquosos termoreversíveis do copolímero polioxietileno-polioxipropileno-polioxietileno, ou poloxamero 407 (P-407). A baixas temperaturas (0~18°C), as cadeias individuais do polímero quando em concentrações superiores a 20%, se agregam em solução formando micelas esféricas consistuidas de um centro de óxido de polipropileno (hidrofóbico) circundado por camadas de óxido de polietileno (hidrofílica). A alta temperatura (18~40°C), as micelas se enovelam formando um gel homogêneo. Estes géis apresentam uma estrutura muito peculiar, a qual favorece a solubilização de fármacos e aditivos de baixa solubilidade em água.[009] In this sense, one of the important aspects of the development of a formulation containing Quercetin and Vildagliptin concomitantly is the maintenance of adequate concentrations of these drugs at the absorption site at the moment in which their release from the formulation occurs. In this context, a polymeric system of interest is the thermoreversible aqueous gels of polyoxyethylene-polyoxypropylene-polyoxyethylene copolymer, or poloxamer 407 (P-407). At low temperatures (0~18°C), the individual polymer chains, when in concentrations greater than 20%, aggregate in solution forming spherical micelles consisting of a polypropylene oxide center (hydrophobic) surrounded by layers of polyethylene oxide ( hydrophilic). At high temperature (18~40°C), the micelles fold together forming a homogeneous gel. These gels have a very peculiar structure, which favors the solubilization of drugs and additives with low solubility in water.

[0010] Existem relatos de estudos de desenvolvimento de formulações sólidas ou líquidas de quercetina sozinha ou associada a outros fármacos. Em um destes estudos foi relatado o encapsulamento de quercetina em P407 (Pluronic F127) utilizando a técnica antissolvente supercrítico. Variações morfológicas e estruturais dos cristais de quercetina foram obtidas por co-precipitadas com P407 a partir de soluções de acetona, melhorando o comportamento de dissolução da quercetina em simulação de fluídos gástrico e intestinal. Nestas misturas, as concentrações de quercetina variaram de 10 a 20 mg enquanto as concentrações de P407 variaram de 10 a 90 mg, tendo o P407, conforme mencionado pelos autores, atuado como agente estabilizante na co- precipitação de quercetina. As partículas com tamanho reduzido foram obtidas quando a relação de proporção de quercetina:P407 foi de 10:20 mg e 20:20~34 mg, respectivamente. Na invenção descrita nesse documento, não só a relação de proporção de quercetina:P407 (50:160 mg) foi diferente, como também a técnica de preparação, o solvente utilizado e o estado físico final da formulação diferem consideravelmente do trabalho descrito acima. (Fraile, M, et al. Enhanced Delivery of Quercetin by Encapsulation in Poloxamers by Supercritical Antisolvent Process. Ind. Eng. Chem. Res. 2014).[0010] There are reports of studies on the development of solid or liquid formulations of quercetin alone or associated with other drugs. In one of these studies, the encapsulation of quercetin in P407 (Pluronic F127) using the supercritical antisolvent technique was reported. Morphological and structural variations of quercetin crystals were obtained by co-precipitating with P407 from acetone solutions, improving quercetin dissolution behavior in simulated gastric and intestinal fluids. In these mixtures, quercetin concentrations ranged from 10 to 20 mg while P407 concentrations ranged from 10 to 90 mg, with P407, as mentioned by the authors, acting as a stabilizing agent in the co-precipitation of quercetin. The reduced size particles were obtained when the quercetin:P407 ratio ratio was 10:20 mg and 20:20~34 mg, respectively. In the invention described in this document, not only was the quercetin:P407 ratio (50:160 mg) different, but also the preparation technique, the solvent used and the final physical state of the formulation differed considerably from the work described above. (Fraile, M, et al. Enhanced Delivery of Quercetin by Encapsulation in Poloxamers by Supercritical Antisolvent Process. Ind. Eng. Chem. Res. 2014).

[0011] Em outro estudo foi descrito um sistema de entrega de fármaco auto- emulsificante sólido para melhorar a eficácia terapêutica de quercetina e tamoxifeno administrados concomitantemente pela via oral. Neste trabalho, a capacidade de óleos, surfactantes e cosurfactantes solubilizar os fármacos mencionados foram avaliados. A melhor formulação foi adicionada de um agente formador de carreador sólido e, subsequentemente, liofilizada para gerar um produto auto-emulsificante sólido. Os autores relataram que entre os óleos testados, o ácido oleico teve um desempenho insatisfatório, pois não conseguiu solubilizar a quercetina, que entre os surfactantes, P407 produziu uma emulsão com um bom tamanho e uma boa dispersão de tamanho, mas exigiu um tempo relativamente longo para auto-emulsificar a fase oleosa Capmul® MCM EP em água. Os autores mencionaram também que o surfactante Tween® 80 produziu uma emulsão translucente de Capmul® MCM EP em água, com tamanho médio de gotícula relativamente acima dos produzido por outros surfactantes. É importante destacar que a combinação ácido oleico/P407, com ou sem a adição de Tween® 80, relatadas na invenção descrita neste documento, não foram testadas concomitante na solubilização de quercetina no trabalho mencionado acima (Jain AK, Thanki K, Jain S. Solidified self-nanoemulsifying formulation for oral delivery of combinatorial therapeutic regimen: part I. Formulation development, statistical optimization, and in vitro characterization. Pharm Res. 2014).[0011] In another study a solid self-emulsifying drug delivery system was described to improve the therapeutic efficacy of quercetin and tamoxifen administered concomitantly by the oral route. In this work, the capacity of oils, surfactants and cosurfactants to solubilize the mentioned drugs was evaluated. The best formulation was added with a solid carrier forming agent and subsequently lyophilized to generate a solid self-emulsifying product. The authors reported that among the tested oils, oleic acid performed poorly as it failed to solubilize quercetin, which among the surfactants, P407 produced an emulsion with a good size and a good size dispersion, but required a relatively long time. to self-emulsify the Capmul® MCM EP oil phase in water. The authors also mentioned that the Tween® 80 surfactant produced a translucent emulsion of Capmul® MCM EP in water, with an average droplet size relatively higher than that produced by other surfactants. It is important to highlight that the oleic acid/P407 combination, with or without the addition of Tween® 80, reported in the invention described in this document, were not tested concomitantly in quercetin solubilization in the work mentioned above (Jain AK, Thanki K, Jain S. Solidified self-nanoemulsifying formulations for oral delivery of combinatorial therapeutic regimen: part I. Formulation development, statistical optimization, and in vitro characterization. Pharm Res. 2014).

[0012] Tran e colaboradores (2014) relataram a veiculação de quercetina num sistema de entrega de fármacos auto-emulsificante líquido. Dentre as formulações testadas, os autores destacaram a de composição óleo de castor/Tween®80/Cremophor® RH 40/PEG 400 como sendo a melhor na obtenção do sistema de entrega de quercetina auto-emulsificante. Os autores justificaram o uso de uma mistura binária de surfactantes (Tween® 80:Cremophor® RH 40; 2:1) dado ao fato de que o Tween® 80 sozinho não conseguiu produzir nanoemulsões estáveis, mas foi eficiente na emulsificação do óleo de castor. A relação de proporção de quercetina: Tween® 80 nas formulações descritas no trabalho variaram de 30:362~517 mg, respectivamente. Na invenção descrita neste documento, a relação de proporção quercetina:Tween® 80 na preparação final foi 50:76 mg por mL, respectivamente, evidenciando que a relação de proporções destes componentes entre os trabalhos foi distinta. Cabe destacar ainda que Tween® 80 foi primeiramente utilizado como agente solubilizante da vildagliptina, podendo ter participado da estabilização da formulação final, após a mistura das formulações 1 (quercetina) e 2 (vildagliptina) (Tran, T.H. et al. Quercetin- Containing Self-Nanoemulsifying Drug Delivery System for Improving Oral Bioavailability. Pharmaceutical Biotechnology, 2014).[0012] Tran et al. (2014) reported the delivery of quercetin in a self-emulsifying liquid drug delivery system. Among the tested formulations, the authors highlighted the castor oil/Tween®80/Cremophor® RH 40/PEG 400 composition as being the best in obtaining the self-emulsifying quercetin delivery system. The authors justified the use of a binary mixture of surfactants (Tween® 80:Cremophor® RH 40; 2:1) given the fact that Tween® 80 alone failed to produce stable nanoemulsions, but was efficient in emulsifying castor oil . The proportion ratio of quercetin: Tween® 80 in the formulations described in the work ranged from 30:362~517 mg, respectively. In the invention described in this document, the proportion ratio quercetin:Tween® 80 in the final preparation was 50:76 mg per mL, respectively, showing that the proportion ratio of these components between works was different. It should also be noted that Tween® 80 was first used as a solubilizing agent for vildagliptin, and may have participated in the stabilization of the final formulation, after mixing formulations 1 (quercetin) and 2 (vildagliptin) (Tran, T.H. et al. Quercetin- Containing Self -Nanoemulsifying Drug Delivery System for Improving Oral Bioavailability. Pharmaceutical Biotechnology, 2014).

[0013] A formulação que propomos é simples, de fácil preparação e não necessita de equipamentos sofisticados no seu desenvolvimento e avaliação. Estes fatores podem levar a redução do custo de produção do medicamento quando comparado a outras formas de tratamento, bem como nos gastos de prevenção e controle do SUS com o paciente diabético. Também deve melhorar a adesão do paciente ao tratamento por ser mais cômodo, por tratar- se de um produto oral, se comparado à dor da picada causada por injeções de insulina. Sabe-se que não há descrito na literatura o uso de uma formulação oral contendo Quercetina em associação à Vildagliptina obtido pelo método de dispersão a frio utilizando o polímero tribloco P407, para o controle glicêmico em um modelo experimental de diabetes tipo 1.[0013] The formulation we propose is simple, easy to prepare and does not require sophisticated equipment in its development and evaluation. These factors can lead to a reduction in the cost of producing the drug when compared to other forms of treatment, as well as in SUS prevention and control expenses with diabetic patients. It should also improve patient adherence to treatment because it is more comfortable, because it is an oral product, compared to the pain of the sting caused by insulin injections. It is known that there is no description in the literature of the use of an oral formulation containing Quercetin in association with Vildagliptin obtained by the cold dispersion method using the triblock polymer P407, for glycemic control in an experimental model of type 1 diabetes.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃOSHORT DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0014] A meta principal da invenção é o desenvolvimento e avaliação do potencial antidiabético de uma formulação oral micelar termorreversível contendo Quercetina (flavonóide) em associação à Vildagliptina (inibidor de DPP-IV) em ratos Fisher diabéticos tipo 1. A vantagem da presente invenção em relação ao tratamento utilizado atualmente para o diabetes tipo 1 refere-se ao fato de ser um tratamento oral, não necessitando da injeção diária de insulina, minizando o desconforto do paciente em relação à dor da picada e, consequentemente, aumentando a adesão do paciente ao tratamento. Sendo assim, atualmente, o tratamento convencional para o diabetes tipo 1 é a aplicação diária da injeção de insulina e o que estamos propondo é o uso de uma formulação oral contendo dois agentes (Quercetina e Vildagliptina) para o tratamento do diabetes tipo 1.[0014] The main goal of the invention is the development and evaluation of the antidiabetic potential of a thermoreversible micellar oral formulation containing Quercetin (flavonoid) in association with Vildagliptin (DPP-IV inhibitor) in type 1 diabetic Fisher rats. in relation to the treatment currently used for type 1 diabetes, it refers to the fact that it is an oral treatment, not requiring the daily injection of insulin, minimizing the patient's discomfort in relation to the pain of the bite and, consequently, increasing patient compliance to treatment. Thus, currently, the conventional treatment for type 1 diabetes is the daily application of insulin injection and what we are proposing is the use of an oral formulation containing two agents (Quercetin and Vildagliptin) for the treatment of type 1 diabetes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃODETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Preparo das FormulaçõesPreparation of Formulations

[0015] As formulações foram preparadas conforme segue:[0015] The formulations were prepared as follows:

Formulação 1 - Dispersão da Quercetina em sistema micelar polimérico de P-407Formulation 1 - Quercetin dispersion in P-407 polymeric micellar system

[0016] Uma quantidade precisamente pesada, em gramas, de Quercetina referente à 50mg/Kg de peso corpóreo para um volume final de 0,5mL foi adicionada lentamente a um tubo Falcon contendo um volume preciso de solução de hidróxido de sódio (NaOH 1,0M). A suspensão foi vortexada e sonicada até completa dispersão da Quercetina. Após a dispersão, um volume preciso de solução de ácido clorídrico (HCl 1,0M) foi adicionado à suspensão, e, sob agitação magnética constante, moderada e em banho de gelo (4-8°C), foi adicionado, moderadamente, uma quantidade precisamente pesada referente a 16% do polímero P-407. Após a completa dispersão do polímero, um volume preciso de ácido oleico (5%) foi adicionado à formulação e esta foi mantida sob agitação magnética constante.[0016] A precisely weighed amount, in grams, of Quercetin corresponding to 50mg/Kg of body weight for a final volume of 0.5mL was slowly added to a Falcon tube containing a precise volume of sodium hydroxide solution (NaOH 1, 0M). The suspension was vortexed and sonicated until complete dispersion of Quercetin. After dispersion, a precise volume of hydrochloric acid solution (HCl 1.0M) was added to the suspension, and, under constant, moderate magnetic stirring and in an ice bath (4-8°C), a moderate amount of precisely weighed amount referring to 16% of the P-407 polymer. After complete dispersion of the polymer, a precise volume of oleic acid (5%) was added to the formulation and this was maintained under constant magnetic stirring.

Formulação 2 - Dispersão da VildagliptinaFormulation 2 - Vildagliptin Dispersion

[0017] Inicialmente, duas suspensões devem ser preparadas separadamente. A primeira suspensão contém a quantidade, em gramas, de Vildagliptina referente à 10mg/Kg de peso corpóreo para um volume final de 0,5mL. O valor pesado de Vildagliptina foi colocado em um erlenmeyer ao qual foi adicionado o mesmo volume, em mL, de Tween 80. A segunda suspensão é composta por metilcelulose (76mg de metilcelulose para cada 400mg de Vildagliptina), e a mesma quantidade em volume, em μL, de Tween 80 e quantidade suficiente de água destilada para completar o volume total da solução. As duas suspensões foram sonicadas, separadamente, em um aparelho de ultrassom durante 15 minutos. Após serem sonicadas, a segunda solução foi mantida em um agitador magnético durante 15 minutos e posteriormente as duas suspensões foram misturadas e novamente sonicadas por 15 minutos. Para finalizar, a mistura final foi agitada por 30 minutos, visando garantir a total dissolução do medicamento.[0017] Initially, two suspensions must be prepared separately. The first suspension contains the amount, in grams, of Vildagliptin corresponding to 10mg/Kg of body weight for a final volume of 0.5mL. The weighed value of Vildagliptin was placed in an Erlenmeyer flask to which the same volume, in mL, of Tween 80 was added. The second suspension is composed of methylcellulose (76mg of methylcellulose for each 400mg of Vildagliptin), and the same amount in volume, in μL, of Tween 80 and sufficient amount of distilled water to complete the total volume of the solution. The two suspensions were sonicated separately in an ultrasound device for 15 minutes. After being sonicated, the second solution was kept on a magnetic stirrer for 15 minutes and then the two suspensions were mixed and sonicated again for 15 minutes. Finally, the final mixture was stirred for 30 minutes to ensure complete dissolution of the drug.

Formulação FinalFinal Formulation

[0018] Após o preparo das Formulações 1 e 2, ainda sob agitação magnética constante, a formulação de Vildagliptina foi adicionada, moderadamente, à formulação de Quercetina. Após a homogeneização de ambas as formulações, o pH foi avaliado e corrigido para o valor final de 7,0 - 7,2. Em seguida, a formulação foi mantida em repouso em geladeira.[0018] After preparing Formulations 1 and 2, still under constant magnetic stirring, the Vildagliptin formulation was moderately added to the Quercetin formulation. After the homogenization of both formulations, the pH was evaluated and corrected to the final value of 7.0 - 7.2. Then, the formulation was kept at rest in a refrigerator.

[0019] Estudo pré-clínico da atividade antidiabética da invenção descrita neste relatório foi realizado em fêmeas de ratos Fisher diabéticos. A comissão de ética no uso de animais (CEUA) da UFOP aprovou a realização deste estudo sob o protocolo no 2014/17 16. Foram utilizadas ratas albinas da linhagem Fisher, com peso médio de 200g, provenientes do Laboratório de Nutrição Experimental da Escola de Nutrição (ENUT) da Universidade Federal de Ouro Preto. Todos os animais foram mantidos em gaiolas com temperatura, luminosidade e umidade controladas e receberam água e comida “ad libitum”.[0019] Preclinical study of the antidiabetic activity of the invention described in this report was carried out in female diabetic Fisher rats. The UFOP ethics committee on the use of animals (CEUA) approved this study under protocol 2014/17 16. Albino female rats of the Fisher lineage were used, with an average weight of 200g, from the Experimental Nutrition Laboratory of the Escola de Nutrition (ENUT) of the Federal University of Ouro Preto. All animals were kept in cages with controlled temperature, light and humidity and received food and water “ad libitum”.

[0020] Quarenta ratos da linhagem Fisher foram distribuídos em 4 grupos de dez animais cada:[0020] Forty Fisher rats were distributed into 4 groups of ten animals each:

[0021] Grupo 1 - Grupo controle recebeu o volume correspondente a 1,0mL de formulação contendo o veículo;[0021] Group 1 - Control group received the volume corresponding to 1.0mL of formulation containing the vehicle;

[0022] Grupo 2 - grupo diabético (D) recebeu o volume correspondente a 1,0mL de formulação contendo o veículo;[0022] Group 2 - diabetic group (D) received the volume corresponding to 1.0mL of formulation containing the vehicle;

[0023] Grupo 3 - grupo diabético tratado (DT) recebeu o volume correspondente a 1,0mL da formulação contendo a Quercetina (50mg/Kg) em associação à Vildagliptina (10mg/Kg);[0023] Group 3 - treated diabetic group (DT) received a volume corresponding to 1.0mL of the formulation containing Quercetin (50mg/Kg) in association with Vildagliptin (10mg/Kg);

[0024] Grupo 4 - grupo controle positivo (DI), recebeu uma injeção intraperitoneal de insulina.[0024] Group 4 - positive control group (DI), received an intraperitoneal injection of insulin.

[0025] Nossos resultados mostram que a formulação foi eficaz na redução da glicemia e aumento da insulinemia em ratos diabéticos tipo 1 quando comparado aos ratos diabéticos não tratados, apresentando um efeito similar à injeção intraperitoneal de insulina e com a vantagem de ser um tratamento oral.[0025] Our results show that the formulation was effective in reducing glycemia and increasing insulinemia in type 1 diabetic rats when compared to untreated diabetic rats, presenting a similar effect to the intraperitoneal injection of insulin and with the advantage of being an oral treatment .

[0026] Sendo assim, podemos sumarizar que os resultados apresentados até agora demonstram que a formulação teste foi capaz de normalizar os níveis séricos de insulina e, consequentemente diminuir os níveis séricos de glicose em modelo experimental de diabetes tipo 1. Até o momento o único tratamento para o diabetes tipo 1 envolve a aplicação diária de injeção de insulina. A vantagem da formulação teste é que o tratamento seria administrado oralmente, evitando a dor da picada e o desconforto gerado ao paciente. Além disso, a formulação teste apresentou efeitos secundários em relação ao perfil lipídico, onde observamos um aumento da fração HDL e uma diminuição da fração não HDL (fração aterogênica), sugerindo uma melhora no perfil lipídico no grupo de animais tratado com a formulação teste.[0026] Therefore, we can summarize that the results presented so far demonstrate that the test formulation was able to normalize serum insulin levels and, consequently, decrease serum glucose levels in an experimental model of type 1 diabetes. Treatment for type 1 diabetes involves daily application of insulin injection. The advantage of the test formulation is that the treatment would be administered orally, avoiding the pain of the bite and the discomfort generated for the patient. In addition, the test formulation showed side effects in relation to the lipid profile, where we observed an increase in the HDL fraction and a decrease in the non-HDL fraction (atherogenic fraction), suggesting an improvement in the lipid profile in the group of animals treated with the test formulation.

LISTA DE FIGURASLIST OF FIGURES

[0027] Figura 1 - Níveis plasmáticos de glicose de jejum. Foi demonstrado que a formulação teste foi capaz de reduzir, de maneira estatisticamente significativa, a glicemia dos animais do grupo DT em relação ao grupo diabético não tratado. Os dados foram submetidos à de Análise de Variância (ANOVA) e os resultados expressos em média ± erro padrão da média. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0027] Figure 1 - Fasting plasma glucose levels. It was demonstrated that the test formulation was able to reduce, in a statistically significant way, the glycemia of the animals in the DT group in relation to the untreated diabetic group. Data were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and results expressed as mean ± standard error of mean. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0028] Figura 2 - Níveis séricos de insulina. Os resultados da figura 2 mostram que a formulação teste foi capaz de normalizar a insulinemia aos níveis do controle. A formulação teste foi estatisticamente igual ao grupo tratado com injeção de insulina. Os dados foram submetidos à de Análise de Variância (ANOVA) e os resultados expressos em média ± erro padrão da média. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0028] Figure 2 - Serum insulin levels. The results in Figure 2 show that the test formulation was able to normalize insulinemia to control levels. The test formulation was statistically equal to the group treated with insulin injection. Data were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and results expressed as mean ± standard error of mean. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0029] Figura 3 - Níveis séricos de uréia. Os resultados da figura 3 mostram que os níveis de uréia nos animais tratados com a formulação teste foi estatisticamente igual ao grupo controle. Vale ressaltar que a formulação teste foi mais eficaz do que a insulina no que diz respeito aos níveis séricos de ureia, sugerindo que houve uma menor degradação proteica no grupo tratado com a formulação teste. Os dados foram submetidos à de Análise de Variância (ANOVA) e os resultados expressos em média ± erro padrão da média. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0029] Figure 3 - Serum urea levels. The results in figure 3 show that the urea levels in the animals treated with the test formulation were statistically equal to the control group. It is noteworthy that the test formulation was more effective than insulin with regard to serum urea levels, suggesting that there was less protein degradation in the group treated with the test formulation. Data were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and results expressed as mean ± standard error of mean. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0030] Figura 4 - Níveis séricos de creatinina. Os resultados da figura 4 não mostram diferenças significativas entre os 4 grupos experimentais. Os dados foram submetidos à de Análise de Variância (ANOVA) e os resultados expressos em média ± erro padrão da média. Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0030] Figure 4 - Serum creatinine levels. The results in Figure 4 do not show significant differences between the 4 experimental groups. Data were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and results expressed as mean ± standard error of mean. Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0031] Figura 5 - Níveis séricos de colesterol HDL. Os resultados da figura 5 mostram que houve um aumento significativo na fração HDL no grupo tratado com a formulação teste em relação ao grupo diabético não tratado. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0031] Figure 5 - Serum levels of HDL cholesterol. The results in figure 5 show that there was a significant increase in the HDL fraction in the group treated with the test formulation in relation to the untreated diabetic group. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0032] Figura 6 - Níveis séricos da fração não HDL (aterogênica). Os resultados da figura 6 mostram que houve uma redução significativa da fração aterogênica no grupo de animais tratados com a formulação teste em comparação ao grupo diabético não tratado, e estes valores foram estatisticamente iguais ao grupo de animais controle. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0032] Figure 6 - Serum levels of the non-HDL fraction (atherogenic). The results in figure 6 show that there was a significant reduction in the atherogenic fraction in the group of animals treated with the test formulation compared to the untreated diabetic group, and these values were statistically equal to the group of control animals. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

[0033] Figuras 7 e 8 - Níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST), respectivamente. Os resultados mostram que os animais diabéticos apresentaram um aumento significativo nestas enzimas e a formulação teste e a insulina não alteraram os níveis desta enzima. Letras diferentes representam diferença estatística significativa (p < 0,05). Letras iguais representam que não houve diferença estatística (p > 0,05).[0033] Figures 7 and 8 - Serum levels of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), respectively. The results show that the diabetic animals showed a significant increase in these enzymes and the test formulation and insulin did not alter the levels of this enzyme. Different letters represent statistically significant difference (p < 0.05). Equal letters represent no statistical difference (p > 0.05).

Claims (7)

1. Formulação oral micelar termorreversível para ratos Fisher diabéticos tipo 1, caracterizada por conter quercetina em associação à vildagliptina.1. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic Fisher rats, characterized by containing quercetin in association with vildagliptin. 2. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por conter quercetina e vildagliptina nas concentrações de 50 mg e 10 mg por Kg, conforme peso corpóreo.2. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claim 1, characterized in that it contains quercetin and vildagliptin at concentrations of 50 mg and 10 mg per kg, according to body weight. 3. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizada por conter 16% de polímero P-407 na formulação de quercetina.3. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claims 1 and 2, characterized in that it contains 16% P-407 polymer in the quercetin formulation. 4. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com as reivindicações 1, 2 e 3, caracterizada por conter 5% de ácido oleico na formulação de quercetina.4. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claims 1, 2 and 3, characterized by containing 5% oleic acid in the quercetin formulation. 5. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com as reivindicações 1, 2, 3 e 4, caracterizada por conter 76 mg de metilcelulose para cada 400mg de vildagliptina.5. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claims 1, 2, 3 and 4, characterized in that it contains 76 mg of methylcellulose for each 400 mg of vildagliptin. 6. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4 e 5, caracterizada por conter 76 μL de Tween 80 para cada 400mg de vildagliptina e água destilada para completar o volume para 500 μL na formulação de vildagliptina.6. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claims 1, 2, 3, 4 and 5, characterized in that it contains 76 μL of Tween 80 for each 400mg of vildagliptin and distilled water to complete the volume to 500 μL in the formulation of vildagliptin. 7. Formulação oral micelar termorreversível para ratos diabéticos tipo 1, de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 e 6, caracterizada por adição da formulação de vildagliptina à formulação de quercetina com correção de pH final de 7-7,2.7. Thermoreversible micellar oral formulation for type 1 diabetic rats, according to claims 1, 2, 3, 4, 5 and 6, characterized by the addition of the vildagliptin formulation to the quercetin formulation with final pH correction of 7-7, two.

Images