BG63963B1 - Ferment for probiotic nutritive product and its application as imminomodulation means - Google Patents

Abstract

The invention relates to a ferment based on lactic acid bacteria and probiotic nutrirtive product of clearly expressed immunomodulation effect, in particular immunostimulation effect. The products are used as additives to the dialy diet for assisting the treatmernt of diseases or impairments as a result of acquired immune deficiency of different genesis, in particular in TB ill children, as well as for exercising prophylactic and protection effect of clinically healthy children, or in risky contingents, such as in patients subject to irradiation with ionization radiation and chemiotherapy. 6 claims

Description

Изобретението се отнася до пробиотичен хранителен продукт с имуномодулиращо действие, който може да намери приложение като добавка към ежедневното меню за подпомагане на лечението на заболявания или увреждания на лица, при които е налице придобит имунен дефицит с различен произход и за оказване на профилактично и протективно действие при рискови контингенти. Изобретението включва и нова закваска за получаване на млечнокисели продукти, по-специално за получаване на млечнокисел продукт с имуномодулиращо действие.The invention relates to a probiotic food product with immunomodulatory action, which can be used as an adjunct to the daily menu for the treatment of diseases or injuries of persons with acquired immune deficiency of different origin and for prophylactic and protective action for risky contingents. The invention also includes a new yeast for the production of lactic acid products, in particular for the preparation of an immunomodulatory action lactic acid product.

Предшестващо състояние на техникатаBACKGROUND OF THE INVENTION

През последните години пазарът предлага все повече т.нар. функционални храни -храни, включващи компоненти, които оказват ясно изразено профилактично или терапевтично въздействие върху човешкия организъм или друго благоприятно въздействие върху физическото и/или психическото състояние на човека. В употреба навлезнаха и т.нар. пробиотици. Пробиотикът може също да бъде и функционална храна, по-специално съдържаща живи полезни микроорганизми, хранителна добавка или хранителен продукт, които, включени в диетата, подобряват интестиналния баланс на организма. Също така пробиотикът може да окаже полезно въздействие чрез продуциране и отделяне в интестиналния тракт на полезен ензим, например лактаза, която често намалява или липсва при възрастните хора.In recent years, the market offers more and more so-called. functional foods - foods including components that have a pronounced prophylactic or therapeutic effect on the human body or other beneficial effects on the physical and / or mental state of the person. The so-called so-called probiotics. The probiotic may also be a functional food, in particular containing living beneficial microorganisms, a nutritional supplement or a nutritional product that, when included in the diet, improves the body's intestinal balance. The probiotic can also be beneficial by producing and secreting into the intestinal tract a useful enzyme, such as lactase, which is often reduced or absent in the elderly.

Най-много изследвания и разработки в тази насока са правени с млечнокисели бактерии, по-специално тези, които са присъщи на човешката храносмилателна система, Lactobacillus, Bifidobacterium Streptococcus или Enterococcus, поотделно или като смесена култура.Most research and development in this regard has been done with lactic acid bacteria, in particular those that are inherent in the human digestive system, Lactobacillus, Bifidobacterium Streptococcus or Enterococcus, individually or as a mixed culture.

Съгласно изследванията на много автори пробиотиците могат да повлияват бла гоприятно лактозния интолеранс, да понижават нивото на серумния холестерол, да стимулират имунната система, да оказват контрол върху инфекции, да действат като антибиотици, да потискат тумори и да предпазват от рак на дебелото черво и на пикочния мехур чрез реализиране на здравословен баланс на чревната микрофлора /Schenbach S., “Probiotics: Functionality and commercial status”, Biotechnology Advances, Vol. 16, No 3, pp. 581-608, 1998/. Други автори предупреждават, че в много случаи липсват достатъчно статистически достоверни експериментални данни за здравословния ефект на комерсиалните пробиотици и препоръчват извършването на по-прецизно охарактеризиране на щамовете и техните ефекти.According to many authors, probiotics can have a beneficial effect on lactose intolerance, lower serum cholesterol levels, stimulate the immune system, control infections, act as antibiotics, suppress tumors and prevent bowel cancer. the bladder by realizing a healthy balance of the intestinal microflora / Schenbach S., “Probiotics: Functionality and commercial status”, Biotechnology Advances, Vol. 16, No. 3, pp. 581-608, 1998 /. Other authors warn that in many cases there is a lack of statistically reliable experimental data on the health effects of commercial probiotics and recommend that strains and their effects be more accurately characterized.

Основните технически проблеми в тази насока се състоят в подбирането на такива щамове млечнокисели бактерии, с които да могат да се получават млечнокисели продукти, които да са приемливи като храна, т.е. с подходящи органолептични качества и същевременно да оказват ясно изразено имуномодулиращо въздействие при придобити имунодефицитни състояния.The main technical problems in this regard are the selection of such strains of lactic acid bacteria to be able to produce lactic acid products that are acceptable as food, i. with appropriate organoleptic properties and at the same time have a pronounced immunomodulatory effect in acquired immunodeficiency states.

Техническа същност на изобретениетоSUMMARY OF THE INVENTION

Съгласно изобретението е създаден пробиотичен хранителен продукт, който представлява млечнокисел продукт, получен чрез заквасване на пастьоризирано пълномаслено или обезмаслено мляко с 2% закваска, представляваща монокултура на щам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LBB.B120 или монокултура на щам Streptococcus thermophilus LBB.T60 или смесена култура - LBB.BY 120/60, състояща се от двата щама - щам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, щам LBB.B120 и щам Streptococcus thermophilus LBB.T60. Храната може да се използва в течна форма или да се подложи на лиофилизиране. Сухата лиофилна форма е за предпочитане, поради по-високата си трайност, възможността за стандартизиране и други.According to the invention, a probiotic food product is created which is a lactic acid product obtained by fermenting pasteurized whole or skimmed milk with 2% leaven, which is a monoculture of Lactobacillus delbrueckii subsp strain. bulgaricus LBB.B120 or monoculture of strain Streptococcus thermophilus LBB.T60 or mixed culture - LBB.BY 120/60, consisting of both strains - strain Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, strain LBB.B120 and strain Streptococcus thermophilus LBB.T60. The food can be used in liquid form or subjected to lyophilization. The dry lyophilic form is preferable because of its higher durability, the possibility of standardization and others.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам LBB.B120 има регистрационен № 2483 в НБПМКК и е познат от патент BG 61712, като компонент на закваска за българско кисело мляко, в комбинация с щамове Streptococcus thermophilus.Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus strain LBB.B120 has registration number 2483 in NBPMCK and is known by patent BG 61712, as a component of ferment for Bulgarian yogurt, in combination with strains of Streptococcus thermophilus.

Streptococcus thermophilus LBB.T60 e щам от LBB колекцията на фирма “Ел Би Булгарикум”, с регистрационен № 2790 в НБПМКК.Streptococcus thermophilus LBB.T60 is a strain from the LBB collection of LB Bulgaricum, with registration number 2790 in NBPCC.

Продуктите съгласно изобретението имат отлични органолептични качества, особено този, получен със смесена закваска. Проведените изпитания показват ясно изразено имуномодулиращо действие, по-специално имуностимулиращо действие, както при моделните изпитания, така и при приемане от болни от туберкулоза деца и от здрави деца. Подбраните щамове са особено подходящи за получаване на пробиотична функционална храна с благоприятни ефекти върху гастро-интестиналния тракт и върху други органи и системи на човешкия организъм. Високият резултат по отношение на преживяемостта след облъчване е особено предимство на тази функционална храна, тъй като тя може да се включва в храненето на онкоболни, подложени на химиотерапия и лъчетерапия за благоприятно повлияване не само на имунната система, но и на целия организъм.The products of the invention have excellent organoleptic properties, especially those obtained with mixed fermentation. The tests performed show a pronounced immunomodulatory effect, in particular immunostimulatory action, both in the model trials and in the administration of tuberculosis patients and healthy children. The selected strains are particularly suitable for the preparation of probiotic functional foods with beneficial effects on the gastrointestinal tract and on other organs and systems of the human body. The high outcome in terms of survival after irradiation is a particular advantage of this functional food, as it can be included in the nutrition of cancer patients undergoing chemotherapy and radiation therapy to benefit not only the immune system but also the whole body.

Устойчивостта на закваската при условията на лиофилилното сушене също е особено предимство, поради това, че едновременно с възможността да се получи стандартизиран продукт, се осигурява достатъчно висока концентрация на живи клетки в готовия за консумация хранителен продукт.The stability of the yeast under the conditions of freeze drying is also a particular advantage, because at the same time as the possibility of obtaining a standardized product, a sufficiently high concentration of living cells in the ready-to-eat food is provided.

Примерни изпълнения на изобретениетоEmbodiments of the invention

Пример 1. Получаване на млечнокисел продуктExample 1. Preparation of lactic acid product

Чиста култура Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам LBB.B120, поддържана в MRS бульон, се посява на твърда хранителна среда и се изолират подходящи колонии. Следва трикратно препосяване в обезΙθ маслено мляко, предварително стерилизирано при налягане 0,1 МРа за 5 min и охладено след това до температура на заквасване 43 ± 1°С. Чиста култура щам Streptococcus thermophilus LBB.T60, поддържана в М17 бульон, се пося15 ва на твърда хранителна среда, изолират се подходящи колонии, следва трикратно препосяване в обезмаслено мляко, стерилизирано, както е посочено по-горе. От подготвените щамове Lactobacillus delbrueckii subsp.Pure culture of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus strain LBB.B120, maintained in MRS broth, was seeded in solid culture medium and appropriate colonies were isolated. This was followed by a three-fold transfer of butter milk, pre-sterilized at a pressure of 0.1 MPa for 5 min and then cooled to a fermentation temperature of 43 ± 1 ° C. Pure culture of Streptococcus thermophilus LBB.T60 strain maintained in M17 broth was seeded in solid culture medium, appropriate colonies were isolated, followed by triplicate in skimmed milk, sterilized as indicated above. From the prepared strains of Lactobacillus delbrueckii subsp.

bulgaricus щам LBB.B120 и Streptococcus thermophilus LBB.T60 се създава смесена закваска LBB.BY 120/60, като монокултурите се смесват в съотношение 1:1. Изчислено като 2% количество от смесената закваска се ино25 кулира в пастьоризирано пълномаслено обезмаслено мляко. Термостатира се на 43 ± 1“С в продължение на 3 до 3,5 h. Охлажда се до 10°С. Съхранява се в хладилник при 4-6°С до 20 дни или след охлаждане до Ю°С се подла20 га на лиофилизационно сушене.bulgaricus strain LBB.B120 and Streptococcus thermophilus LBB.T60 create mixed yeast LBB.BY 120/60, mixing the monocultures in a 1: 1 ratio. Calculated as 2%, the amount of mixed leaven is inoculated into pasteurized whole milk skim milk. Thermostat at 43 ± 1 С C for 3 to 3.5 h. Cool to 10 ° C. Store in a refrigerator at 4-6 ° C for 20 days or after cooling to 10 ° C undergo 20 hectares of lyophilization drying.

Характеристика на течен и сух продукт, получен със закваска LBB.BY 120/60.Characteristics of liquid and dry product obtained with leaven LBB.BY 120/60.

ПоказателиIndicators

Течен СухLiquid Dry

Пълномаслен Обезмаслен ПълномасленFull-fat Non-fat Full-fat

1. Сухо вещество, % 1. Dry matter,% 11,00 11,00 95,46 95.46 97,24 97.24 2. Общ белтък, % 2. Total protein,% 3,00 3.00 35,59 35.59 28,85 28,85 3. Масленост, % 3. Fat content,% 3,30 3.30 1,83 1.83 30,07 30.07 4. Лактоза, % 4. Lactose,% 2,80 2.80 37,80 37,80 24,02 24.02 5. Галактоза, % 5. Galactose,% 0,55 0.55 6,87 6.87 4,79 4.79 6. Глюкоза, % 6. Glucose,% 0,00 0.00 0,00 0.00 0,00 0.00 7. L(+)млечна киселина, % 7. L (+) lactic acid,% 0,40 0.40 4,62 4,62 3,32 3,32 8. D(-)млечна киселина, % 8. D (-) lactic acid,% 0,20 0.20 1,95 1.95 1,20 1,20 9. Титруема киселинност, “Т 9. Titratable acidity, “T. 95,00 95,00 90,00 90,00 92,00 92,00 10. pH 10. pH 4,05 4.05 4,44 4,44 4,35 4,35 11. Пепел, % 11. Ash,% 0,75 0.75 7,50 7.50 5,63 5.63 12. Брой клетки (cfu/g) 12. Cell count (cfu / g) Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus bulgaricus не по-малко от 1 not less than 1 х 10⁶ в течния продуктx 10 ⁶ in the liquid product не по-малко от 1 not less than 1 х 10⁵ в сухия продуктx 10 ⁵ in the dry product Streptococcus thermophilus Streptococcus thermophilus не по-малко от 1 not less than 1 х 10⁷ x 10 ⁷

Пример 2. Имуностимулиращият ефект на млечнокиселия продукт е установен при моделни изследвания с опитни животни мъжки мишки-хибриди BDF1, които са подложени на облъчване с кобалтов гама- източник с мощност на дозата 101 rad/min. Скринирани са 12 щама млечнокисели бактерии, вкл. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам LBB.B120 и Streptococcus thermophilus LBB.T60, и смесена закваска LBB.BY 120/60. При изпитване на течните форми на щамове В 120, Т 60 и тяхната комбинация е установено, че те влияят благотворно върху възстановяването на кръвотворенето. При третирането на животните с щам В 120 се наблюдава по-слабо изразена левкопения и по-бързо възстановяване на левкоцитите, а прилагането на комбинацията от двата щама води до по-бързо и отчетливо възстановяване на лимфоцитите.Example 2. The immunostimulatory effect of the lactic acid product was detected in model studies with experimental animals of BDF1 male mice that were exposed to cobalt gamma source at a dose rate of 101 rad / min. 12 strains of lactic acid bacteria were screened, incl. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus strain LBB.B120 and Streptococcus thermophilus LBB.T60, and mixed leaven LBB.BY 120/60. When tested for the liquid forms of strains B 120, T 60 and their combination, they were found to have a beneficial effect on the restoration of hematopoiesis. Treatment of animals with strain B 120 showed less pronounced leukopenia and faster leukocyte recovery, and administration of the combination of the two strains resulted in faster and more distinct lymphocyte recovery.

По отношение на интегралния показател преживяемост, от течните форми само щам В 120 показа добър ефект. Третирането с лиофилните форми повишава преживяемостта, както при отделните щамове, така и при комбинацията, като ефектът на последната е най-висок.In terms of integral survival, only the B 120 strain showed good effect from the liquid forms. Treatment with the lyophilic forms increases the survival of both the individual strains and the combination, with the latter being the highest.

Пример 3. Клинично изпитванеExample 3. Clinical trial

Млечнокиселият продукт, получен със смесената закваска LBB.BY 120/60, се изпитва в клинични условия при деца с различни форми на първична туберкулоза по следния начин. Млечнокиселият продукт се предлага като хранителна добавка към ежедневното меню на 33 деца с различни форми на туберкулоза и контролна група от 18 здрави деца, в количество 180 g, два пъти дневно. Проследени са следните клинични показатели: пълна кръвна картина, диференциално броене на клетки в периферна кръв, скорост на утаяване на еритроцити, имуноглобулини в серум, имуноглобулин Г (ИгГ), имуноглобулин А (ИгА), имуноглобулин М (ИгМ), секреторен имуноглобулин А в слюнка и серум, фагоцитарен индекс и фагоцитарно число.The lactic acid product obtained with the mixed leaven LBB.BY 120/60 is tested in clinical settings in children with various forms of primary tuberculosis as follows. The lactic acid product is available as a dietary supplement to the daily menu of 33 children with various forms of tuberculosis and a control group of 18 healthy children, in an amount of 180 g, twice daily. The following clinical parameters were monitored: complete blood count, differential counting of cells in peripheral blood, erythrocyte sedimentation rate, serum immunoglobulins, immunoglobulin D (IgA), immunoglobulin A (IgA), immunoglobulin M (IgM), secretory immunoglobulin M (IgM) saliva and serum, phagocytic index and phagocytic number.

Получените резултати показват при болни деца следните имунологични ефекти. Имуномодулиращ ефект по отношение на ИгГ и ИгМ, имуностимулиращ ефект по отношение на секреторен ИгА, имуностимулиращ ефект по отношение на фагоцитоза и фагоцитарна активност. При контролната група здрави деца се получава имуностимулиращ ефект по отношение секреторен ИгА, имуностимулиращ ефект по отношение фагоцитоза и фагоцитарна активност, имуностимулиращ ефект по отношение лимфоцити в периферна кръв.The results show the following immunological effects in sick children. Immunomodulatory effect on IgG and IgM, immunostimulatory effect on secretory IgA, immunostimulatory effect on phagocytosis and phagocytic activity. The control group of healthy children obtained an immunostimulatory effect on secretory IgA, an immunostimulatory effect on phagocytosis and phagocytic activity, an immunostimulatory effect on lymphocytes in peripheral blood.

Проведените изследвания доказаха, че продуктът има значително проявен имуномодулиращ и имуностимулиращ ефект, както при болните от туберкулоза деца, така и при здравите деца.Studies have shown that the product has a significant immunomodulatory and immunostimulating effect, both in children with tuberculosis and in healthy children.

Патентни претенцииClaims

Claims (6)

1. Закваска за получаване на млечнокисел продукт, характеризираща се с това, , че се състои от Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам LBB.B120 (№ 2483 в. НБПМКК) и Streptococcus thermophilus; LBB.T60 (№ 2790 в НБПМКК) в съотношение 1:1 до 1:100.1. Yeast for the production of lactic acid product, characterized in that it consists of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus strain LBB.B120 (No. 2483 c. NBPCC) and Streptococcus thermophilus; LBB.T60 (No. 2790 in NBPCC) in a ratio of 1: 1 to 1: 100. 2. Пробиотичен хранителен продукт с имуномодулиращо действие при придобити имунодефицитни състояния, характеризиращ* се с това, че представлява пастьоризирано обезмаслено или пълномаслено мляко, заквасено с монокултура на щам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам LBB.B120 (№ 2483 в НБПМКК) или монокултура на Streptococcus thermophilus LBB.T60 (№ 2790 в НБПМКК), или със смесена култура от двата щама, в течна или суха форма, и съдържащ живи клетки Lactobacillus bulgaricus, не по-малко от 1 х 10⁶ cfu/g в течния продукт, и не по-малко от 1 х 10⁵ cfu/g в сухия продукт, и Streptococcus thermophilus, не помалко от 1 х 10’ cfu/g.2. Probiotic food product with immunomodulatory action under acquired immunodeficiency conditions, characterized in that it is pasteurized skimmed or whole milk, fermented with monoculture of Lactobacillus delbrueckii subsp. Strain. bulgaricus strain LBB.B120 (No 2483 in NBPMCC) or monoculture of Streptococcus thermophilus LBB.T60 (No 2790 in NBPMCC), or a mixed culture of the two strains, in liquid or dry form, and containing live Lactobacillus bulgaricus cells, not more less than 1 x 10 ⁶ cfu / g in the liquid product, and not less than 1 x 10 ⁵ cfu / g in the dry product, and Streptococcus thermophilus, not less than 1 x 10 'cfu / g. 3. Приложение на пробиотичен хранителен продукт съгласно претенция 2, в случаи на имунодефицитно състояние при деца с различна форма на първична туберкулоза.Use of a probiotic food product according to claim 2 in cases of immunodeficiency in children with a different form of primary tuberculosis. 4. Приложение на пробиотичен хранителен продукт съгласно претенция 2, в случаи на имунодефицитно състояние вследствие на облъчване с йонизиращи лъчения.Use of a probiotic food product according to claim 2, in cases of immunodeficiency due to irradiation with ionizing radiation. 5. Приложение на пробиотичен хранителен продукт съгласно претенция 2, в случаи на имунодефицитно състояние вследствие на химиотерапия.Use of a probiotic food product according to claim 2 in cases of immunodeficiency due to chemotherapy. 6. Приложение на пробиотичен хранителен продукт съгласно претенция 2, в случаи на имунодефицитно състояние вследствие на вирусно заболяване.Use of a probiotic food product according to claim 2 in cases of immunodeficiency due to a viral disease.