BG61830B1 - Antiherpetic formulation - Google Patents

Abstract

The formulation can be used for the treatment of infectionscaused by virus herpes simplex. It is in the form of isoquinolinealkaloid - thalimonine isolated from the Mongolian plantThalictrum simplex. The antiherpetic effect is irreversible andhas been proven in noncytotoxic doses. The thalimonine has noeffect on the infectious activity of the extracellular virions andspecifically suppresses the replication of virus herpes simplex inthe host cell.

Description

Област на техникатаTechnical field

Изобретението се отнася до средство с антихерпесно действие с приложение в медицината и фармацевтичната промишленост.The invention relates to an anti-herpes agent for use in the medical and pharmaceutical industries.

Предшестващо състояние на техникатаBACKGROUND OF THE INVENTION

Известни са продукти от растителен произход с антихерпесно действие - тотален екстракт от чесън Bohlmann F. et al., Naturally occuriug acetylenes. Acad.Press, NY, 1973, извлек от надземни части на Chrisanthemum indiсшп L (Compositae), BG 65802.There are known herbal products with anti-herpes action - total garlic extract Bohlmann F. et al., Naturally occuriug acetylenes. Acad.Press, NY, 1973, extracted from aboveground parts of Chrisanthemum Ind. L (Compositae), BG 65802.

Недостатък на тези средства е, че представляват тотални екстракти и се прилагат във високи концентрации.The disadvantage of these agents is that they are total extracts and are administered in high concentrations.

В литературата няма публикувани данни за антихерпесно действие на алкалоиди.There are no published data on the anti-herpes action of alkaloids in the literature.

Установено е антихерпесно действие на изохинолиновия алкалоид - талимонин.The anti-herpes effect of isoquinoline alkaloid - talimonin has been established.

Алкалоидът талимонин е изолиран от надземни части на растението Thalictrum simplex, разпространено в Монголия. Структурата на алкалоидаThe thalimonin alkaloid is isolated from the aerial parts of the Thalictrum simplex plant, common in Mongolia. The structure of the alkaloid

е определена със спектрални методи ЯМР, массспектрометрия и ъгъл на въртене и е описана по-рано, Velcheva, М. et al., J.Nat.was determined by spectral methods NMR, mass spectrometry and rotation angle and was described previously, Velcheva, M. et al., J. Nat.

¹⁰ Prod.55,679-680,1992. ¹⁰ Prod.55,679-680,1992.

Техническа същност на изобретениетоSUMMARY OF THE INVENTION

Съгласно изобретението е приготвено противохерписно средство, което съдържа като активен компонент талимонин, изохинолинов алкалоид, изолиран от Thalictrum simplex, в концентрация от 0,007 до 10 иМ.According to the invention, an anti-herpes agent is prepared which contains, as an active ingredient, thalimonin, an isoquinoline alkaloid isolated from Thalictrum simplex, at a concentration of 0.007 to 10 µM.

Противохерпесният ефект на талимони20 на е определен в клетъчни култури от бъбречни клетки на теле (MDBK) и в диплоиден щам от човешки ембрионални белодробни фибробласти.The anti-herpes effect of talimony20 is determined in cell cultures of calf kidney cells (MDBK) and in the diploid strain of human embryonic lung fibroblasts.

(F) на модел вирус херпес симплекс тип 1 (ВХС-1). Талимонинът е използван в концен25 трации, които не са токсични за клетките.(F) of the model herpes simplex virus type 1 (VHS-1). Thalimonin has been used in concentrations that are non-toxic to cells.

Алкалоидът не променя инфекциозната активност на извънклетъчните ВХС-1 вириони (табл.1).The alkaloid did not alter the infectious activity of extracellular HCV-1 virions (Table 1).

Таблица 1Table 1

Ефект на талимонин, 10 иМ върху инфекциозната активност на извънклетъчни вирус херпес симплекс тип 1 вириони’Effect of thalimonin, 10 µM on the infectious activity of extracellular herpes simplex virus type 1 virions'

Продължителност на контакта, в min Contact duration, in min 15 15 30 30 60 60 90 90 120 120 Талимонин Talimonin 5,5 5.5 5,5 5.5 4,5 4.5 4,5 4.5 3,5 3.5 ВХС-1 VHS-1 5,5 5.5 5,5 5.5 4,4 4.4 4,5 4.5 3,5 3.5

* - данните са в lg ед./0,1 ml* - data are in mg / 0.1 ml

Талимонинът потиска репликацията на ВХС-1 в клетката-гостоприемник в концентрации 0,007 - 10 иМ (табл.2).Thalimonin inhibited HCV-1 replication in the host cell at concentrations of 0.007 - 10 µM (Table 2).

Таблица 2.Table 2.

Ефект на талимонин върху репликацията на вирус херпес симплекс тип 1Effect of talimonin on the replication of herpes simplex virus type 1

Концентрация, в иМ Concentration, in IM lg ед./O.l ml lg units / O.l ml % инхибиция % inhibition 10 10 5,66 5.66 97,8 97.8 1 1 6,25 6.25 94,4 94,4 0,1 0.1 6,66 6.66 85,0 85.0 0,01 0.01 7,0 7.0 70,0 70,0 0,007 0.007 7,23 7.23 50,0 50.0 BXCJ BXCJ 7.54 7.54 0 0

Инхибиращият ефект е необратим (табл.З). Ефективната доза, инхибираща производството на инфекциозно вирусно потомство с 50% <ЕД₅₀) е 0,007 иМ.The inhibitory effect is irreversible (Table 3). The effective dose inhibiting the production of infectious viral offspring by 50% <ED ₅₀ ) was 0.007 µM.

Таблица 3.Table 3.

Обратимост на антихерпесния ефект на талимонинReversibility of the anti-herpes effect of talimonin

Концентрация, в иМ Concentration, in IM lg ед./O.l ml lg units / O.l ml % инхибиция % inhibition 10 10 3,83 3.83 99,7 99.7 1 1 4,23 4.23 98,6 98.6 0,1 0.1 4,5 4.5 97,3 97.3 0,01 0.01 5,0 5.0 93,3 93,3 ВХС-1 VHS-1 6,16 6.16 0 0

Предимство на предлаганото антихерпесно средство е, че талимонинът специфично и необратимо потсикта репликацията на вирус херпес симплекс.An advantage of the anti-herpes remedy is that talimonin specifically and irreversibly inhibits the replication of the herpes simplex virus.

Примери за изпълнение на изобретениетоExamples of carrying out the invention

Пример 1. Равни обеми вирусна суспензия, съдържаща 106 инфекциозни единици в 0.1 ml и растежна среда, съдържаща 10 иМ талимонин, се инкубират при 37°С в продължение на 15, 30, 60, 90 и 120 min. Количеството на инфекциозните вируси в пробите е определено по Риид и Менч и микроплаки. Резултатите са сравнени с тези от вирусната контрола равни обеми вирусна суспензия и растежна среда без талимонин, инкубирани както е посочено по-горе.Example 1. Equal volumes of viral suspension containing 106 infectious units in 0.1 ml and growth medium containing 10 µM thalimonin were incubated at 37 ° C for 15, 30, 60, 90 and 120 min. The amount of infectious viruses in the samples was determined by Reed and Manch and microplates. The results were compared with those of the viral control equal volumes of viral suspension and thalimonin-free growth medium incubated as above.

Пример 2. Клетки от монослой се заразяват с ВХС-1 суспензия в десетократни разреждания и се инкубират в продължение на 1 h на стайна температура. Средата се отстранява и клетките се покриват с растежна среда, съдържаща талимонин в концентрации от 0.01 до 10 иМ. Инфекциозните вирусни титри са определени на 48 h от култивирането. Резултатите са сравнени с вирусна контрола - заразени клетки, култивирани в среда без талимонин.Example 2. Monolayer cells were infected with HCV-1 suspension at ten-fold dilutions and incubated for 1 h at room temperature. The medium was removed and the cells were coated with growth medium containing talimonin at concentrations of 0.01 to 10 µM. Infectious viral titers were determined at 48 h of cultivation. The results were compared with viral control - infected cells cultured in thalimonin-free medium.

Пример 3. Клетки от монослой се заразяват с ВХС-1 и се култивират в среда с талимонин в продължение на 24 h (вж. пример 2). Средата се отстранява и следващите 24 h клетките се култивират в среда без талимонин. Инфекциозните вирусни титри се отчитат на 48 h след заразяването, респ. на 24 h след отстраняването на талимонина. Резултатите се сравняват с вирусната контрола (вж. пример 2).Example 3. Monolayer cells were infected with HCV-1 and cultured in thalimonin medium for 24 h (see Example 2). The medium was removed and the cells were cultured in thalimonin-free medium for the next 24 h. Infectious viral titers were recorded 48 h after infection, respectively. 24 h after the removal of talimonin. The results were compared with the viral control (see example 2).

Талимонинът може да се използва като антихерпесно средство при инфекции, причинени от ВХС.Thalimonin can be used as an antihypertensive agent for HCV infections.

Claims (1)

Патентни претенцииClaims 1. Противохерпесно средство, характеризиращо се с това, че като активен компонент съдържа чист изохинолинов алкалоид талимонин с ефективна концентрация от 0,007 до 10 иМ.An anti-herpes agent, characterized in that, as active ingredient, it contains pure isoquinoline alkaloid talimonin with an effective concentration of 0.007 to 10 µM. Експерт: О.Накова Expert: O.Nakova Издание на Патентното ведомство на Република България 1113 София, бул. Д-р Г. М. Димитров 52-Б Редактор: Е.Синкова Publication of the Patent Office of the Republic of Bulgaria 1113 Sofia, 52-B Dr. GM Dimitrov Blvd. Editor: E. Sinkova Пор. N: 39155 Cf. N: 39155 Тираж: 40 MB Circulation: 40 MB