BG60596B1 - Method for improving the enzymic activity and synthesis productivity of organism - Google Patents

Abstract

The method can be used in pharmaceutics and medicine. It improves the productivity of the synthesis of dyestuffs, antibiotics alkaloids or phytoalexin producing microorganisms or plants or the enzymic activity of steroid transformation -capable microorganisms is increased.

Description

(54) МЕТОД ЗА ПОВИШАВАНЕ ЕНЗИМНАТА АКТИВНОСТ И СИНТЕЗНАТА ПРОДУКТИВНОСТ НА ОРГАНИЗМИ(54) METHOD FOR INCREASING ENZYMIC ACTIVITY AND SYNTHETIC PRODUCTIVITY OF ORGANISMS

Изобретението се отнася до метод за повишаване ензимната активност и синтезната продуктивност на организми.The invention relates to a method for enhancing the enzymatic activity and synthesis productivity of organisms.

Известно е, че елициторите са микробна или растителни активни вещества, които при поставянето им в контакт с тъкани на повисши растения, повишават ензимните им активности и синтезните им продуктивности. Така акумулираните в тези растения съдържащи се вещества, се обозначават като фитоалексини, когато са противомикробни / Naturwissenschaften 68, 1981, 447 и следв.стр. Adv. Enzymol. 55, 1983, с.1 и следв. и Spektrum der Wissensehaft, 11, 1985, стр.85 и следв./.Elicitors are known to be microbial or plant-active substances which, when in contact with tissues of higher plants, increase their enzymatic activities and their synthesis productivity. The substances thus accumulated in these plants are referred to as phytoalexins when antimicrobial / Naturwissenschaften 68, 1981, 447 et seq. Adv. Enzymol. 55, 1983, p.1 et seq. and Spektrum der Wissensehaft, 11, 1985, p.85 et seq.

Понастоящем са изолирани повече от 100 съединения от различни растения, които отговарят на фитоалексинова дефиниция. Те спадат към различни групи естествени вещества, като терпеноиди, производни на линоленовата киселина, ацетилени и полиацетилени, бибензили, стилбени, фенантрени и дихидрофенантрени, бензофурани и фенолбензофурани, фурокумарини, авеналумини, флавани, фенилбензофурани, бензоксазинони, алкалоиди, изофлавоноиди /Brooks and Watson, Nat. Prod. Reports, 2, 1985, 427/.At present, more than 100 compounds from different plants that meet the phytoalexin definition have been isolated. They belong to different groups of natural substances, such as terpenoids, linolenic acid derivatives, acetylene and polyacetylene, bibenzyls, stilbenes, phenantrenes and dihydrophenanthenes, benzofurans and phenolbenzofurans, furocoumarins, avenalumines, flavanes, phenylbenzoisofurans, phenylbenzoisofurans, phenylbenzoisofurans, phenylbenzoisofurans, phenylbenzofuran and benzene Nat. Prod. Reports, 2, 1985, 427 /.

Техническото приложение на тази елициторна активност досега не е широко застъпено. Това се дължи на няколко причини: досега не е възможно, с малко изключения, да бъдат размножавани клетки на по-висши растения при икономически оправдани условия при дълбочинно култивиране. Приложението на елицитори при ферментациятя посредством микроорганизми по принцип изглежда безсмислено, тъй като съгласно съществуващото мнение на учените относно начина на действие на елициторите /Albersheim Р. und Darvill A.G., Spectrum der Wissenhaft, 11, 1985, 85/ би трябвало да се излиза от становището, че същите не влияят върху ензимната активност и процесите на обмяна на веществата в микроорганизмите.The technical application of this elicitory activity has not been widely used so far. This is due to several reasons: so far it is not possible, with few exceptions, to reproduce cells of higher plants under economically justified conditions under deep cultivation. The use of elicitors in fermentation by micro-organisms seems in principle pointless, since, according to the existing opinion of scientists on the action of elicitors / Albersheim P. und Darvill AG, Spectrum der Wissenhaft, 11, 1985, 85 /, should depart from the opinion that they do not affect the enzyme activity and metabolism processes of the micro-organisms.

Също така може да се отбележи, че съгласно съществуващото становище на учените бактериите могат да причинят образуването на фитоалексини у растенията само тогава, когато както например представителите на рода Erw inia, посредством определени ензими /пектинази/ освобождават от клетъчната стена на растението елицитори /олигогалактурониди/, които стимулират като ендогенни елицитори образуването на фитоалексин.It can also be noted that according to the scientists' opinion, bacteria can cause phytoalexins to form in plants only when, for example, representatives of the genus Erw inia, through certain enzymes / pectinases / release elicitors / oligogalacturonides from the cell wall of the plant which stimulate the formation of phytoalexin as endogenous elicitors.

Сега е установено, че съединения и клетъчни препарати от микроорганизми, които понататък се наричат “елицитори”, по изненадващ начин наистина са в състояние да повишат в микроорганизмите ензимните активности и тяхната синтезна продуктивност. Освен това е установено, че съществуват също така и бактерии, които съдържат елицитори, които не са ензими или хранителни фактори.It has now been found that compounds and cellular preparations of microorganisms, hereinafter referred to as "elicitors", are surprisingly indeed capable of enhancing enzyme activities and their synthesis productivity in microorganisms. In addition, bacteria have been found to contain elicitors that are not enzymes or nutritional factors.

Методът съгласно изобретението може по принцип да се провежда с помощта на изолирани или синтезирани елицитори, което по правило е много трудоемко. Достатъчно е да бъдат използвани инактивирани, съдържащи елицитори микроорганизми, или фрагменти от тези микроорганизми, като например фракции от клетъчната стена, клетъчни фрагменти от механично преработване или химическо, респ. ензимно лизиране на клетките или утаен с помощни вещества, като например етанол или ацетон, продукт с клетъчно съдържание. Инактивирани микроорганизми съгласно изобретението са клетки, които завинаги са изгубили жизнеспособността си.The process according to the invention can generally be carried out using isolated or synthesized elicitors, which is generally very laborious. It is sufficient to use inactivated elixirs containing microorganisms or fragments of these microorganisms, such as cell wall fractions, cellular fragments of mechanical processing or chemical, respectively. enzymatic cell lysis or precipitated with excipients, such as ethanol or acetone, a cell-containing product. Inactivated microorganisms according to the invention are cells that have lost their viability forever.

Когато микроорганизмът отделя елицитори в култиралния бульон или след лизис или стерилизация образува водоразтворим, съдържащ елицитори продукт с клетъчно съдържание, може този съдържащ елицитори продукт да секретира микроорганизми, които могат да се използват за провеждане на метода съгласно изобретението. Всяка форма на съдържащия елицитори продукт от микроорганизми е подходяща за провеждане на метода съгласно изобретението.When the microorganism releases elicitors into the culture broth or, after lysis or sterilization, forms a water soluble elicitor product with cellular content, this elicitor product may secrete microorganisms that can be used to carry out the process of the invention. Any form of elicitor containing product of microorganisms is suitable for carrying out the process according to the invention.

Таблица 1Table 1

Микроорганизми, за които е известно, че притежават елицитори, са описаните в следващата таблица 1 гъбни щамове и дрожди:Microorganisms known to possess elicitors are the fungal strains and yeasts described in the following Table 1:

Alternaria carthamiAlternaria carthami

Botrytis cinerea (ATCC 48345) Ceratocystis fimbriata Ceratocystis ulmi Chondrostereum purpureum Cladosporium fulvum (ATCC 44961) Colletotrichum lindemuthianum (ATCC 52471) Fusarium solaniBotrytis cinerea (ATCC 48345) Ceratocystis fimbriata Ceratocystis ulmi Chondrostereum purpureum Cladosporium fulvum (ATCC 44961) Colletotrichum lindemuthianum (ATCC 52471) Fusarium solani

Fusarium solanifspmori (ATCC 44934) Ganoderma applanatum Glomerella cingulataFusarium solanifspmori (ATCC 44934) Ganoderma applanatum Glomerella cingulata

Helminthsporium carbonum (ATTC 52471) Monilinia fructicolaHelminthsporium carbonum (ATTC 52471) Monilinia fructicola

Nectria haematococca Phoma exigua Phytophthora cannabivora Phytophthora capsici (ATCC 52771) Phytophthora infectans (ATCC 44776) Phytophthora megasperma var glycinea Phytophthora infectans Phytophthora megasperma Phytophthora nicotiansNectria haematococca Phoma exigua Phytophthora cannabivora Phytophthora capsici (ATCC 52771) Phytophthora infectans (ATCC 44776) Phytophthora megasperma var glycinea Phytophthora infectans Phytophthora megasperma Phytophthora nicotians

Puccinia coronataPuccinia coronata

Pyricuiaria oryzae (ATCC 15923) Saccharomyces cerevisiae Verticillium albo-atrumPyricuiaria oryzae (ATCC 15923) Saccharomyces cerevisiae Verticillium albo-atrum

Verticillium dahliae (ATCC 26289)Verticillium dahliae (ATCC 26289)

Arch. Bioch.Biop. 229,1984,136 Physiol. Plant Pathol.Ill, 1977, 287 Phytochemistry 23, 1984.759 Phytochemistry 23.1984,383Arch. Bioch.Biop. 229,1984,136 Physiol. Plant Pathol.Ill, 1977, 287 Phytochemistry 23, 1984,759 Phytochemistry 23,1984,383

J.Chem.Soc.Perkin Trans 1,1984,14341 Physiol. Plant Pathol. 16,1980, 391 Eur. J. Biochem. 129,1983,593 Plant Physiol. 76,1984,833 NatProd. Rep. 2, 1985, 439 Phytochemistry 22, 1983, 1039 Physiol.Plant.Pathol. 2L 1982,171 Z. Naturforsch. Sect. C 38, 1983, 899J.Chem.Soc.Perkin Trans 1,1984,14341 Physiol. Plant Pathol. 16,1980, 391 Eur. J. Biochem. 129,1983,593 Plant Physiol. 76,1984,833 NatProd. Rep. 2, 1985, 439 Phytochemistry 22, 1983, 1039 Physiol.Plant.Pathol. 2L 1982,171 Z. Naturforsch. Sect. C 38, 1983, 899

J.Am.Chem. Soc.,84,1962,1919 Phytochemistry 22,1983, 2291 Phytochem. 21,1982,1818 Z.Naturf. Sect. C. 39, 1984,217 Physiol.PlatPathol. 18,1981,379 Phytochem.23,1984,537 Arch.Bioch. Bioph.229,1984,136 Phytpathol. Z, 27, 1956, 237 J. Biol. Chem. 259, 1984,11341 Phytopathology 71,1981, 864 Physiol. Plant Pathol. 20.1982,189 Agric. Biol. Chem. 48,1984, 253 Plant Physiol. 62,1978,107 NatProd. Rep. 2. 1985,429 ATCC-Katalog, ~6. Aufl. 1984J.Am.Chem. Soc., 84,1962,1919 Phytochemistry 22,1983, 2291 Phytochem. 21,1982,1818 Z.Naturf. Sect. C. 39, 1984,217 Physiol.PlatPathol. 18,1981,379 Phytochem.23,1984,537 Arch.Bioch. Bioph.229,1984,136 Phytpathol. Z, 27, 1956, 237 J. Biol. Chem. 259, 1984.11341 Phytopathology 71.1981, 864 Physiol. Plant Pathol. 20.1982,189 Agric. Biol. Chem. 48,1984, 253 Plant Physiol. 62,1978,107 NatProd. Rep. 2. 1985,429 ATCC Catalog, ~ 6. Aufl. 1984

Съгласно изобретението са изследвани протеолитично пречистени посредством трипсин препарати от клетъчната стена от грамположителни бактериални щамове от родове Bacillus, Corynebacterium, Brevibacterium, Cellulomonas, Lactobacillus, Pimelobacter,According to the invention, proteolytically purified trypsin cell wall preparations of gram-positive bacterial strains of the genus Bacillus, Corynebacterium, Brevibacterium, Cellulomonas, Lactobacillus, Pimelobacter,

Rhodococcus u Staphylococcus, както и във вода стерилизирани горещо на микроорганизми от тези родове и техните филтрати по отношение на това дали притежават елицитори. В табли40 ца 2 са описани бактериалните щамове, в които са доказани елицитори.Rhodococcus u Staphylococcus, as well as hot-water sterilized microorganisms of these genera and their filtrates as to whether they have elicitors. Table 2 describes bacterial strains in which elicitors have been demonstrated.

Таблица 2Table 2

Bacillus licheniformis ATCC 9945Bacillus licheniformis ATCC 9945

Bacillus pumilus ATCC 7061Bacillus pumilus ATCC 7061

Brevibacterium butanicum ATCC 21196Brevibacterium butanicum ATCC 21196

Brevibacterium flavum ATCC 13826, ATCC 14067Brevibacterium flavum ATCC 13826, ATCC 14067

Brevibacterium lactofermentum ATCC 13655Brevibacterium lactofermentum ATCC 13655

Brevibacterium glutamingenes ATCC 13747Brevibacterium glutamingenes ATCC 13747

Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872

Corynebacterium hydrocarboclastum ATCC 15592Corynebacterium hydrocarboclastum ATCC 15592

Corynebacterium nephridii ATCC 11425Corynebacterium nephridii ATCC 11425

Corynebacterium paurometabolum ATCC 8368Corynebacterium paurometabolum ATCC 8368

Corynebacterium Illium ATCC 15990Corynebacterium Illium ATCC 15990

Corynebacterium striatum ATCC 6940Corynebacterium striatum ATCC 6940

Corynebacterium xerosis ATCC 373Corynebacterium xerosis ATCC 373

Corynebacterium diphtheriae (Stamm Mass. 8/Behring Werke)Corynebacterium diphtheriae (Stamm Mass. 8 / Behring Werke)

Corynebacterium melassecola ATCC 17965Corynebacterium melassecola ATCC 17965

Corynebacterium glutamicum ATCC 13032Corynebacterium glutamicum ATCC 13032

Corynebacterium uratoxidans ATCC 21749Corynebacterium uratoxidans ATCC 21749

Lactobacillus casei subsp. rhamnosus ATCC 7469Lactobacillus casei subsp. rhamnosus ATCC 7469

Lactobacillus plantarum DSM 20174Lactobacillus plantarum DSM 20174

Pimelobacter tumescens AJ 1460Pimelobacter tumescens AJ 1460

Rhodococcus fascians ATCC 12975Rhodococcus fascians ATCC 12975

Rhodococcus fascians 1 - Isolat von Prof. Dr. Stolp, Univ.BayreuthRhodococcus fascians 1 - Isolat von Prof. Dr. Tower, Univ.Bayreuth

Rhodococcus fascians 2- Isolat von Prof. Dr. Stolp, Univ.BayreuthRhodococcus fascians 2- Isolat von Prof. Dr. Tower, Univ.Bayreuth

Съгласно изобретението са изследвани бактериални щамове от малко родове на грамположителни еубактерии по отношение на това, дали притежават елицитори. Изследвани са също и гъбните щамове, включително и дрожди, доколкото може да се види от предварителните публикации в повечето случаи само такива, които притежават елициторни активности, за които е познато, че са фитопатогенни. Поради това може да се очаква, че допълнително още много микроорганизми, като например бактериите от рода Mycobacterium, Nocardia, Nocardioides или Pseudonocardia, също притежават елицитори.According to the invention, bacterial strains of few genera of gram-positive eubacteria have been tested for their presence of elicitors. Fungal strains, including yeasts, have also been investigated, as far as can be seen from previous publications, in most cases, only those that have elicitory activities known to be phytopathogenic. Therefore, it can be expected that many more microorganisms, such as bacteria of the genus Mycobacterium, Nocardia, Nocardioides or Pseudonocardia, also have elicitors.

Изпитването на микроорганизмите по отношение на елициторна активност може да бъде проведено безпроблемно с помощта на обичайни методи на скриниране, каквито са известни на специалистите.Testing of micro-organisms for elicitor activity can be performed smoothly using conventional screening methods known to those skilled in the art.

Така може например в серийни опити да се култивират при дълбочинно култивиране микроорганизмите, чиято ензимна активност или синтезна продуктивност подлежи да бъде повишена, като към отделните култури се при30 бавят инактивирани микроорганизми от различни видове или подвидове, като след ферментацията аналитично да се определя в кои култури се е постигнало повишение на ензимните активности или на синтезната продуктивност. Повишаването на ензимната активност при микроорганизмите може да се познае например по това, че при ферментативното превръщане на субстратите се получава повишена скорост на образуването -или повишена продуктивност - на продуктите съгласно метода. Съответно може да бъде отбелязана повишена синтезна продуктивност на микроорганизмите например по завишената скорост на образуване на - или завишена продуктивност - ингредиентите на микроорганизма.For example, micro-organisms whose enzymatic activity or synthetic productivity may be enhanced by in-culture cultivation can be cultured in series by deep cultivation, with inactivated micro-organisms of different species or subtypes being added to the individual cultures, and analytically determining after which fermentation increased enzyme activity or synthesis productivity was achieved. An increase in the enzyme activity of microorganisms can be recognized, for example, by the fact that the enzymatic conversion of the substrates results in an increased rate of formation - or increased productivity - of the products according to the method. Accordingly, increased synthesis productivity of micro-organisms can be noted, for example, by the increased rate of formation of - or increased productivity - the ingredients of the micro-organism.

Както показват проведените досега опити, които са описани в примерите за изпълнение, методът съгласно изобретението за повишаване ензимната активност или на синтезната продуктивност на микроорганизмите може да бъде прилаган многостранно. Така чрез прибавяне на препарати от клетъчни сте ни към посочените в таблица 2 микроорганизми може да бъде стимулирано образуването на багрилни вещества в Streptomyces lividans (Actinorhodin, Prodigiosin), както и образуването на багрилно вещество в Streptomyces coelicolor, в Streptomyces griseoruber, в Streptomyces latericius, в Streptomyces purpurascens и в Streptomyces violaceus. Освен това е възможно и стимулирането на образуването на беталактамови антибиотици при Streptomyces clavuligerus и алкалоидната синтеза на Claviceps paspali.As shown by the experiments performed so far, which are described in the embodiments, the method according to the invention for enhancing the enzyme activity or the synthesis productivity of microorganisms can be applied multifaceted. Thus, by the addition of our cellular preparations to the microorganisms listed in Table 2, the formation of dyestuffs in Streptomyces lividans (Actinorhodin, Prodigiosin), as well as the formation of a dye substance in Streptomyces coelicolor, in Streptomyces griseorubces, in Streptomyces griseorubces, later, can be stimulated in Streptomyces purpurascens and in Streptomyces violaceus. It is also possible to stimulate the formation of betalactam antibiotics in Streptomyces clavuligerus and the alkaloid synthesis of Claviceps paspali.

Подобно завишаване на синтезната продуктивност на микроорганизмите ще може да се постигне не само посредством клетъчните препарати от таблица 2 - посочените в нея бактерии, а също така и чрез съдържащите елицитори гъби и дрожди, които са посочени в таблица 1, ще може да се постигне повишение на ензимните активности и на синтезната продуктивност при микроорганизмите.Such an increase in the synthesis performance of micro-organisms can be achieved not only by the cell preparations of Table 2, the bacteria referred to therein, but also by the elixirs and yeasts listed in Table 1, an increase can be achieved. of enzyme activities and synthesis performance of microorganisms.

Освен това с помощта на препарати от клетъчни стени съгласно изброените в таблица 2 микроорганизми от клетъчни култури на по-висши растения, като Eschscholtzia califomiса или Rauvolfia serpentina, може да се постигне значимо завишение на образуване на алкалоиди.In addition, a significant increase in alkaloid formation can be achieved by using cell wall preparations according to the microorganisms from higher plant plants, such as Eschscholtzia califomiisa or Rauvolfia serpentina, listed in Table 2.

Също така успешно е постигнато с помощта на тези препарати от клетъчни стени да бъде завишена способността на Bacillus lentus, да дехидрира стероидите в 1,2-позиция, и способността на Rhodotorula glutinis, да редуцира селективно 17-кетостероидите, както и способността на Penicillium raistrickii да хидроксилира стероидите в 15а позиция. Безуспешен остава досега само опитът да бъде завишена с помощта на тези препарати от клетъчни стени способността на Curvularia lunata за 11- β -хидроксилиране на стероиди.These cell wall preparations have also been successfully enhanced by the ability of Bacillus lentus to dehydrate steroids in the 1,2-position, and the ability of Rhodotorula glutinis to selectively reduce 17-ketosteroids, as well as the ability of Penicillium raistrickii to hydroxylate the steroids at position 15a. The attempt to elevate the ability of Curvularia lunata to produce 11- β -hydroxylation of steroids has been unsuccessful so far with the use of these cell wall preparations.

Тези опити дават основание, да се смята че ще бъде възможно с помощта на метода съгласно изобретението да се завиши още и образуването на многобройни други полезни за промишлеността микробиални компоненти и да се завишат и други ензимни активности на микроорганизмите, които са технически полезни.These experiments give grounds for believing that it will be possible to increase, by the method of the invention, the formation of numerous other microbial components useful for the industry and to enhance other enzymatic activities of microorganisms that are technically useful.

Подобни микробиални компоненти са например антибиотици, като пеницилините, цефалоспорини, циклоспорини, актиномицини, грамицидини, неомицини, гентамицини, ниста тини, тетрациклини. никомицини илилинкомицинът, аритромицинът, хлорамфенико.тьт, гризеофулвинът или фузидиновата киселина, както и алкалоидите на моравото рогче, като ергокриптин, ерготаминът, ергозинът, ергокристинът, агроклавин, каноклавин, фестуклавин, паспалиновата киселина или производните на лизерговата киселина, витамини като например витамин В_|2, рибофлавин или бетакаротинът, ензими като амилазите, глюкозоизомерази, протеази, пектинази, целулази, липази, пеницилинацилази, хитиназа или лактаза, нуклеозиди като например гуаниловата киселина или инозиловата киселина, а също така и аминокиселини като цистеинът, глутаминовата киселина, триптофанът или лизинът.Such microbial components are, for example, antibiotics, such as penicillins, cephalosporins, cyclosporins, actinomycin, gramicidins, neomycin, gentamycin, nystatin, tetracyclines. nikkomycins ililinkomitsinat, aritromitsinat, hloramfeniko.tyt, grizeofulvinat or fusidic acid, as well as ergot alkaloids, such ergocryptine, ergotaminat, ergozinat, ergokristinat, agroklavin, kanoklavin, festuklavin, paspalinovata acid or derivatives lizergovata acid, vitamins such as vitamin B _{| 2,} riboflavin or beta-carotene, enzymes such as amylases, glucose isomerases, proteases, pectinases, cellulases, lipases, penicillin acylase, chitinase or lactase, nucleosides such as Guanylic acid or in benzylic acid, and also amino acids such as cysteine, glutamic acid, tryptophan or lysine.

По принцип трябва да е възможно при генетично изменените микроорганизми да се повиши ендогенното или екзогенно образуване на протеин. Такива използваеми протеини са не само споменатите ензими и антибиотици, а също така например и интерферон, инсулин и TNF.In general, it must be possible for genetically modified micro-organisms to increase endogenous or exogenous protein formation. Such useful proteins are not only the enzymes and antibiotics mentioned, but also, for example, interferon, insulin and TNF.

Ензими, които поради ензимната им активност се прилагат при технически условия, са например описани в следните публикации: W. Charney and Н. Herzog: Microbial Transformations of Steroids; Academic Press, New York etc. 1967.Enzymes, which due to their enzymatic activity are applied under technical conditions, are, for example, described in the following publications: W. Charney and H. Herzog: Microbial Transformations of Steroids; Academic Press, New York etc. 1967.

K. Kieslich: Microbial Transformations of Non-steroidal Cyclic Compounds; Georg Thieme Publ. Stuttgart (DE), 1976 undK. Kieslich: Microbial Transformations of Non-Steroidal Cyclic Compounds; Georg Thieme Publ. Stuttgart (DE), 1976 und

K. Kieslich: Biotransformations; in HJ.Rehm und G. Reed (Herausgeber): Biotechnology; Weinheim (DE) etc. Vol 6a, 1984.K. Kieslich: Biotransformations; and HJ.Rehm und G. Reed (Herausgeber): Biotechnology; Weinheim (DE) etc. Vol 6a, 1984.

Подобни микроорганизми са и такива, които причиняват стероидни трансформации, като 11-а- или ll-β или 15-а хидроксилиране, Δ'-дехидриране, 17α, 17β-кеторедуциране или разграждането на страничната верига на стерини или трансформации на антибиотици, като отцепване на пеницилин.Similar microorganisms are also those that cause steroid transformations, such as 11-a- or 11-β or 15-a hydroxylation, Δ'-dehydrogenation, 17α, 17β-ketoreduction or degradation of the sterol side chain or transformation of antibiotics, such as cleavage of penicillin.

С помощта на метода съгласно изобретението може да се открият нови технически оползотворими компоненти като например нови антибиотици, като към изпитваните микроорганизми се прибавят инактивни, съдържащи елицитори, микроорганизми. Основание за подобно приложение дава обстоятелството, че е известно, че многобройни по-висши растения образуват фитоалексин само тогава в заслужаващо отбелязване количество, когато са за5 разени със съдържащи елицитори микроорганизми.Using the method of the invention, new technically usable components such as new antibiotics can be detected by adding inactive, elicitor-containing, micro-organisms to the test microorganisms. This application is justified by the fact that numerous higher plants are known to form phytoalexin only in a noteworthy amount when they are infested with elixirs containing microorganisms.

Определянето, кои съдържащи елицитори микроорганизми повишават ензимната активност или синтезната продуктивност на определен микроорганизъм, се извършва с помощта на общоприети методи, които са добре познати на специалистите.The determination of which elicitor microorganisms enhance the enzyme activity or synthesis performance of a particular microorganism is made using conventional methods well known to those skilled in the art.

Провеждането на метода съгласно изобретението не е проблем за специалиста, доколкото се касае до ферментация с помощта на микроорганизми. Микроорганизмът, чиято ензимна активност или синтезна продуктивност подлежи на повишение, се култивира при познатите условия; тогава към културите се прибавят инактивираните, съдържащи елицитори микроорганизми, фрагменти на същите, клетъчни екстракти от същите или екскреции от същите, след което ферментацията продължава по обичайния начин. Прибавянето на инактивирани микроорганизми, на фрагменти или екстракти от тези организми или на екскреции от съдържащи елицитори микроорганизми може да се извърши още в началото на ферментацията. Оптималното време за прибавянето им е съобразно с природата в зависимост от вида на култивирания организъм, по-специално от протичането на експоненциалната фаза на растеж и трябва за всеки отделен случай да бъде проучено. Така при бактериите например е целесъобразно това прибавяне да се извърши 4 до 30 h след започване на ферментацията. При добавяне на инактивирани микроорганизми или фрагменти от същите се използва на кубически метър ферментационен бульон обикновено 1 до 1000 g /предимно 10 до 200 g/ от инактивирания микроорганизъм или 0,1 до 100 g /предимно 1 до 30 g/ от фрагмента на този организъм. Ако се използват екскреции от съдържащи елицитори микроорганизми, то по правило е достатъчно да се приложи на кубически метър ферментационен обем 1 до 50 1 от екскреционния разтвор. Ако методът съгласно изобретението се използва за повишаване ензимната активност на един микроорганизъм, който се прилага за ензимно превръщане на субстрати, се започва с прибавянето на субстрата по правило 0 до 10 h след приключване добавянето на съдържащия елицитори инактивиран микроорганизъм, или на неговите фрагменти или екскреции.Carrying out the process according to the invention is not a problem for the person skilled in the art as it relates to fermentation by means of microorganisms. The micro-organism, whose enzymatic activity or synthesis productivity is subject to increase, is cultured under known conditions; then inactivated micro-organisms containing fragments, fragments of the same, cell extracts from the same or excretions thereof, are added to the cultures, then fermentation is continued in the usual way. The addition of inactivated micro-organisms, fragments or extracts of these organisms, or excretion of elicitor-containing micro-organisms may take place as early as the start of fermentation. The optimal time for addition is consistent with nature, depending on the type of organism cultivated, in particular the exponential growth phase and needs to be studied on a case-by-case basis. For example, in bacteria, it is appropriate to perform this addition 4 to 30 hours after the start of fermentation. When adding inactivated microorganisms or fragments of the same, a fermentation broth is usually used per cubic meter, typically 1 to 1000 g / preferably 10 to 200 g / of the inactivated microorganism or 0.1 to 100 g / mainly 1 to 30 g / of the fragment of that organism . If excretions of ejector-containing micro-organisms are used, it is generally sufficient to apply a fermentation volume of 1 to 50 l of the excretion solution per cubic meter. If the method of the invention is used to increase the enzyme activity of a microorganism that is used for the enzymatic conversion of substrates, the addition of the substrate as a rule 0 to 10 hours after completion of the addition of the elicited inactivated microorganism or its fragments or excretions is completed .

Оптималните условия за ферментация за висят от вида на прилагания микроорганизъм, от използваната хранителна среда, от времето на ферментация, от вида и количеството на съдържащия елицитори материал и др.п. Те трябва за всеки единичен случай да бъдат проучени в предварителни опити, каквито са познати на всеки специалист.The optimal fermentation conditions depend on the type of microorganism used, the nutrient used, the fermentation time, the type and amount of elicitor material, and the like. They should be examined on a case-by-case basis in advance trials, as known to each specialist.

За получаването на инактивираните, съдържащи елицитори микроорганизми, същите се култивират при обичайните условия, след което чрез центрофугиране или филтриране се отделят от културалния бульон, по желание се промиват и повторно се изолират. За инактивиране на микроорганизмите могат да бъдат прилагани различни методи.For the preparation of inactivated elicitor-containing micro-organisms, they are cultured under normal conditions, then separated by culture by centrifugation or filtration, optionally washed and re-isolated. Different methods can be used to inactivate microorganisms.

Възможните методи за инактивиране се състоят в следното-върху тези организми да се въздейства с типични клетъчни отрови, като етиленови оксиди, формалдехид, озон, живачни съединения, органични разтворители, като метанол, етанол или ацетон или пък микроорганизмите да се инактивират чрез загряване от 90 до 140°С посредством въздействие на крайни разлики в налягането /дезинтеграция/, чрез въздействие на високофреквентни електрически полета или чрез УВ-облъчване, облъчване с гама-лъчи или въздействие с ултразвук. Условията, при които може да бъде проведено инактивирането, са добре известни на всеки специалист /K.H.Wallhauser, H.Schmidt: Sterilisation, Desinfektion, Konservierung, Chemotherapie, Georg Thieme Verlag, Stuttgart /DE, 1967/.Possible methods of inactivation are to treat such organisms with typical cellular poisons, such as ethylene oxides, formaldehyde, ozone, mercury compounds, organic solvents such as methanol, ethanol or acetone, or inactivate the microorganisms 90 up to 140 ° C by the effects of extreme pressure differences (disintegration), by exposure to high-frequency electric fields or by UV irradiation, gamma rays or ultrasound. The conditions under which the inactivation can be carried out are well known to any person skilled in the art (K. H. Wallhauser, H. Schmidt: Sterilization, Desinfektion, Konservierung, Chemotherapie, Georg Thieme Verlag, Stuttgart (DE, 1967).

Фрагменти от съдържащи елицитори микроорганизми могат например да се получат чрез лизиране на микроорганизмите посредством въздействие на осмотичен шок или температурен шок, чрез автолиза на микроорганизмите, чрез обработка на клетките с ултразвук или чрез стриване на микроорганизмите със стъклени перли, стъклен прах или кварцов пясък и последващо диференцирано центрофугиране /Hughes, D.E.Wimpenny, J.W.T. and Lloyd, D: The disintegration of micro-organisms. In: Methods in Microbiology, vol 13 (Norris, J.R.and Ribbons. D.W., eds) /pp.154, Academic Press, New York, London 1971/.Fragments of elicitor-containing microorganisms may, for example, be obtained by lysis of the microorganisms by osmotic shock or temperature shock, by autolysis of the microorganisms, by treating the cells with ultrasound, or by grinding the microorganisms with glass beads, glass powder or quartz differentiated centrifugation / Hughes, DEWimpenny, JWT and Lloyd, D: The disintegration of micro-organisms. In: Methods in Microbiology, vol 13 (Norris, J.R.and Ribbons. D.W., eds) /pp.154, Academic Press, New York, London 1971 /.

От тези клетъчни фрагменти могат например да се изготвят чрез обработка с трипсин пречистени фракции от клетъчни стени. Споменатите вече и използваните в следващите по-долу примерни изпълнения са изгот вени по описаните от Schleifer u Kandler методи /Arch. Microbiol. 57, 1967, 335-365/.For example, these cell fragments can be prepared by treatment with trypsin purified cell wall fractions. The embodiments mentioned above and those used in the following are prepared by the methods described by Schleifer and Kandler / Arch. Microbiol. 57, 1967, 335-365 /.

От друга страна също така е възможно получаването на съдържащи елицитори преципитати от водоразтворими клетъчни съставки чрез утаяване например с етанол или ацетон /Kocourek, J.and Ballou, С.Е., J. Bacteriol, 100, 1969, 1175-1181/.On the other hand, it is also possible to obtain elicitor-containing precipitates from water-soluble cellular constituents by precipitation with, for example, ethanol or acetone (Kocourek, J. and Ballou, C. E., J. Bacteriol, 100, 1969, 1175-1181).

Екскрекции на съдържащи елицитори микроелементи са активно отделени чрез лизиране, екстрахиране с надкритични втечнени газове /напр.въглероден диоксид/ или гореща стерилизация на клетки в съдържащи вода клетъчни съставки, водоразтворими или получени чрез филтриране или центрофугиране на съдържащия организмите културален бульон. Същите могат при нужда да бъдат пречистени по-нататък, например чрез екстрахиране на липофилни вещества, адсорбция на силно багрещи вещества и пр.Excretions of trace elements containing elicitors are actively separated by lysis, extraction with supercritical liquefied gases (eg carbon dioxide) or hot sterilization of cells into water-containing cellular constituents, water-soluble or obtained by filtration or centrifugation of the organism-containing organisms. They may, if necessary, be further purified, for example by extraction of lipophilic substances, adsorption of highly dyestuffs, and the like.

Приложението на свободните от ензими, съдържащи елицитори продукти от бактерии за повишаване продуктивността на синтезиране на ингредиенти от по-висши растения е доказано експериментално. Това може да бъде от полза евентуално за приложението на растителни клетъчни култури за изготвяне на активни лекарствени вещества /M.H.Zenk в: Pharmazie heute, 103, 1982, vol 3, 131-138/. По принцип може съдържащият елицитори продукт от бактерии да служи и за повишаване продуктивността на синтезата на ингредиенти в култури от животински или човешки тъкани или клетки, или би могло да намери приложение в терапията - като например при лечение на рани.The use of enzyme-free bacteria products to increase the productivity of synthesizing ingredients from higher plants has been proven experimentally. This may possibly be useful for the use of plant cell cultures for the preparation of active drugs (M.H. Zenk in: Pharmazie heute, 103, 1982, vol. 3, 131-138). In principle, the elicitor product of bacteria may also serve to increase the productivity of the synthesis of ingredients in cultures of animal or human tissues or cells, or it may find application in therapy - such as in the treatment of wounds.

Примери за изпълнение на изобретениетоExamples of carrying out the invention

Следващите примери поясняват изобретението.The following examples illustrate the invention.

Пример 1. Стимулиране на синтезата на багрилни компоненти /актинородин, продигиозин/ при Streptomyces lividans /ATCC 19844/ чрез препарати от клетъчната стена.Example 1. Stimulation of the synthesis of dye components (actinorodin, prodigyosin) in Streptomyces lividans (ATCC 19844) by cell wall preparations.

ml от хранителна среда, състояща се от: 103 g захароза, 10g глюкоза, 10,12 g магнезиев хлорид хексахидрат, 0,25 g калиев сулфат, 0,1 g casaminoacids /Difco Labs, Detroit, USA/ иml of culture medium consisting of: 103 g sucrose, 10 g glucose, 10.12 g magnesium chloride hexahydrate, 0.25 g potassium sulfate, 0.1 g casaminoacids (Difco Labs, Detroit, USA) and

800 ml дестилирана вода, се стерилизират /20 min, 120°С/ и се добавя към следните прясно приготвени разтвори: 1 ml 0,5 %-ен разтвор на калиев дихидрогенфосфат, 8 ml 3,68 %-ен разтвор на калциев хлориддихидрат, 1,5 ml 20 %-ен разтвор на L-пролин, 10 ml 5,73 %-ен TES-буферен разтвор /рН 7,2/, 0,2 ml разтвор от микроелементи, съдържащ на литър 40 mg цинк /П/-хлорид, 200 mg железен /111/-хлоридхексахидрат, 10 mg меден /П/-хлориддихидрат, 10 mg манганов /П/-хлоридтетрахидрат, 10 mg дихидрат на динатриев тетраборат, 10 mg тетрахидрат на хексаамониев хептамолибдат, 0,5 ml ΙΝ-натриев хидроксид.800 ml of distilled water are sterilized (20 min, 120 ° C) and added to the following freshly prepared solutions: 1 ml of a 0.5% solution of potassium dihydrogen phosphate, 8 ml of a 3.68% solution of calcium chloride dihydrate, 1.5 ml 20% L-proline solution, 10 ml 5.73% TES buffer solution (pH 7.2), 0.2 ml trace element solution containing 40 mg of zinc per liter (N) -chloride, 200 mg of iron (111) -chloride hexahydrate, 10 mg of copper (N) -chloride dihydrate, 10 mg of manganese (N) -chloride tetrahydrate, 10 mg of disodium tetraborate dihydrate, 10 mg of hexammonium heptamolybdate tetrahydrate, 0.5 ml sodium hydroxide.

По 1,8 ml от тази хранителна среда се поставят при стерилни условия в 24 ямки с вместимост съответно по 3 ml на полистиролово блюдо /Multidish, Fa. Nunc, 6200 Wiesbaden 12/. По 2 mg от изпитваните за съдържание на елицитори препарати от клетъчната стена се дестилират в двойно дестилирана вода 20 min при 120°С и получените суспензии се прибавят към ямките. В две от ямките не се прибавят тези добавки, като същите служат за контрола. Във всички ямки обемът се регулира еднакво с двойно дестилираната вода, стерилно, до 2 ml. Всяка ямка се заразява идентично с 5 ml от суспензия на Streptomyces lividans /ATCC 19844/ при стерилни условия. Инкубацията на заложените опити се извършва аеробно / Клатачна машина на Tablar, 100 оборота в минута/ при 26°С.1.8 ml of this culture medium were sterilized in 24 wells with a capacity of 3 ml per polystyrene dish / Multidish, Fa. Nunc, 6200 Wiesbaden 12 /. 2 mg of elicitor cell test preparations were distilled in double-distilled water for 20 min at 120 ° C and the resulting suspensions were added to the wells. In two of the wells these additives are not added, and they are used as controls. In all wells the volume was adjusted equally with double-distilled water, sterile, to 2 ml. Each well was infected identically with 5 ml of a suspension of Streptomyces lividans (ATCC 19844) under sterile conditions. Incubation of the assays was performed aerobically / Tablar shaking machine, 100 rpm / at 26 ° C.

След 96 h клетките се центрофугират, промиват се с физиологичен разтвор на готварска сол, изсушават се над калциев хлорид във вакуум и по този начин се получава посоченият в таблицата добив на клетки. Получените при центрофугирането горни слоеве се нагласят до pH-стойност 7, разреждат се до 4 ml с вода и се определят абсорбционните им спектри между 180 и 800 nm. Относителните количества на синтезираните разтворени вторични вещества актинородин и продигиозин се определят приблизително чрез премерване на абсорбционния връх на автоматично зарегистрираните спектри.After 96 h, the cells were centrifuged, washed with brine, dried over calcium chloride in vacuo to give the cell yield indicated in the table. The top layers obtained by centrifugation were adjusted to pH 7, diluted to 4 ml with water and their absorption spectra between 180 and 800 nm determined. The relative amounts of the synthesized dissolved secondary substances actinorodin and prodigiosin are estimated approximately by measuring the absorption peak of the automatically recorded spectra.

В следващата таблица 3 са показани получените в тази опитна поредица резултати.The following table 3 shows the results obtained in this experimental series.

Таблица 3Table 3

Изпитвани клетъчни стени на бактерии от Tested bacterial cell walls from Добив на сухи клетки /mg/ Dry Cell Yield / mg / Съдържание на багрила-относит.абсорбционни единици Content of dye-relative absorption units ohne (Kontrolle) ohne (Controls) 22 22 1 1 В. ammoniagenes (ATCC 6872) B. ammoniagenes (ATCC 6872) 25 25 38 38 В. glutamingenes (ATCC 13747) V. glutamingenes (ATCC 13747) 32 32 24 24 Ba. pumilus (ATCC 7061) Ba. pumilus (ATCC 7061) 34 34 2 2 B. linens (ATCC 19391) B. linens (ATCC 19391) 23 23 1 1 C. diphtheriae (Mass. 8) C. diphtheriae (Mass. 8) 24 24 34 34 C. melassecola (ATCC 17965) C. melassecola (ATCC 17965) 26 26 34 34 C. glutamicum (ATCC 13032) C. glutamicum (ATCC 13032) 43 43 50 50 C. lilium (ATCC 15990) C. lilium (ATCC 15990) 33 33 40 40 Ce. cellasea (ATCC 14359) Ce. cellasea (ATCC 14359) 36 36 2 2 L plantarum (DSM 20174) L plantarum (DSM 20174) 32 32 31 31 S. aureus Stamm H S. aureus Stamm H 44 44 1 1 B = Brevibacterium Ba= Bacillus C = Corynebacterium Ce= Cellulomonas L = Lactobacillus S = Staphylococcus B = Brevibacterium Ba = Bacillus C = Corynebacterium Ce = Cellulomonas L = Lactobacillus S = Staphylococcus

Пример 2. Стимулиране синтезата на багрилни компоненти /актинородин, продигиозин/ при Streptomyces lividans /ATCC 19844/ чрез екстракти от клетъчни стени.Example 2. Stimulation of the synthesis of dye components (actinorodin, prodigyosin) in Streptomyces lividans (ATCC 19844) by cell wall extracts.

При условията, посочени в пример 1, но при употреба на стерилни филтрати от стерилизирани в двойно дестилирана вода 20 min при 120°С-2 mg препарати от клетъчни стени, се постига почти еднакво силно стимулиране на образуването на багрилни вещества при Streptomyces lividans /ATCC 19844/, както при използването на суспензии от тези стерилизирани клетъчни стени.Under the conditions of Example 1, but using sterile filtrate from sterilized in double-distilled water for 20 min at 120 ° C-2 mg cell wall preparations, almost equally strong stimulation of the formation of dye substances was achieved with Streptomyces lividans / ATCC 19844 /, as in the use of suspensions from these sterilized cell walls.

Пример 3. Стимулиране на синтезата на багрилни компоненти /актинородин, продигиозин/ при Streptomyces lividans /ATCC 19844/ чрез клетъчни екстракти.EXAMPLE 3 Stimulation of the Synthesis of Dye Components (Actinorodin, Prodigyosin) in Streptomyces lividans (ATCC 19844) by Cell Extracts.

При условията, на пример 2, но при употреба на по 20 mg клетъчна маса вместо 2 mg препарати от клетъчна стена се постига почти същата стимулация на образуването на багрилни вещества, както при употреба на суспензии от стерилизирани клетъчни стени.Under the conditions of Example 2, but using 20 mg of cell mass instead of 2 mg of cell wall preparations, almost the same stimulation of dye formation was achieved as using suspensions of sterilized cell walls.

Пример 4. Стимулиране на синтеза на багрилни компоненти при Streptomyces coelicolor АЗ/2/, респ. /АТСС 13 405/.Example 4. Stimulation of the synthesis of dye components in Streptomyces coelicolor A3 / 2 /, respectively. / ATCC 13 405 /.

При условията на пример 1, но при употреба на Streptomyces coelicolor АЗ/2/ се постига значителна стимулация на образуването на багрилни вещества /вероятно също така актинородин/ при тези бактерии.Under the conditions of Example 1, but with the use of Streptomyces coelicolor A3 (2), significant stimulation of the formation of coloring agents (probably also actinorodin) in these bacteria is achieved.

Пример 5. Стимулиране на синтеза на багрилни компоненти при Streptomyces griseoruber /DSM 40275/.Example 5. Stimulation of the synthesis of dye components in Streptomyces griseoruber / DSM 40275 /.

При условията на пример 1, но при употреба на Streptomyces griseoruber /DSM 40275/ се постига също така значително повишение на образуването на багрилни вещества /вероятно антрациклин-антибиотика/.Under the conditions of Example 1, but with the use of Streptomyces griseoruber (DSM 40275), a significant increase in the formation of coloring agents (possibly an anthracycline antibiotic) was also achieved.

Пример 6. Стимулиране на синтеза на багрилни компоненти при Streptomyces purpurascens /DSM 40310/.Example 6. Stimulation of the synthesis of dye components in Streptomyces purpurascens (DSM 40310).

При условията на пример 1, но при употреба на Streptomyces purpurascens /DSM 40310/ се постига също така силно повишение на образуването на багрилни вещества / вероятно антрациклин-антибиотика/.Under the conditions of Example 1, but with the use of Streptomyces purpurascens (DSM 40310), a strong increase in the formation of coloring agents (possibly an anthracycline antibiotic) was also achieved.

Пример 7. Стимулиране на синтеза на багрилни компоненти при Streptomyces latericius /DSM 40163/.Example 7. Stimulation of the synthesis of dye components in Streptomyces latericius (DSM 40163).

При условията на пример 1, но при употреба на Streptomyces latericius /DSM 40163/ се постига също така значително повишение на образуването на багрилно вещество.Under the conditions of Example 1, but with the use of Streptomyces latericius (DSM 40163), a significant increase in the formation of a dye was also achieved.

Пример 8. Стимулиране на синтеза на багрилни компоненти при Streptomyces violaceus /DSM 40082/.Example 8. Stimulation of the synthesis of dye components in Streptomyces violaceus (DSM 40082).

При условията на пример 1, но при употреба на Streptomyces violaceus /DSM 40082/ се постига също така значително повишение на образуването на багрилно вещество.Under the conditions of Example 1, but with the use of Streptomyces violaceus (DSM 40082), a significant increase in the formation of a dye was also achieved.

Пример 9. Стимулиране образуването на бета-лактамни антибиотици /цефалоспорини, пеницилин N/ чрез Streptomyces clavuligerus / ATCC 27064/.Example 9. Stimulation of beta-lactam antibiotics (cephalosporins, penicillin N) by Streptomyces clavuligerus (ATCC 27064).

g 3-/1Ч-морфолино/-пропансулфонова киселина /MOPS/, 3,5 g дикалиев хидрогенфосфат, 0,6 g хептахидрат на магнезиев сулфат, g L-аспарагин, 10 g глицерин, 1 g екстракт от дрожди /Oxid, Wesen, DE/, 1 ml разтвор на соли на микроелементи - съдържащи на литър 1 g железен /II/ сулфат хептахидрат, 1 g манганов /П/-хлорид тетрахидрат, 1 g цинкхлорид хептахидрат, 1 g калциев хлорид, се доливат с вода до 1 1 и се стерилизират /20 min, 120°С/.g 3- (N-morpholino) -propanesulfonic acid (MOPS), 3.5 g dicalium hydrogen phosphate, 0.6 g magnesium sulfate heptahydrate, g L-asparagine, 10 g glycerol, 1 g yeast extract / Oxid, Wesen, DE /, 1 ml solution of trace element salts - containing 1 g of iron (II) sulfate heptahydrate, 1 g manganese (N) -chloride tetrahydrate, 1 g zinc chloride heptahydrate, 1 g calcium chloride, add to water 1 liter and sterilized (20 min, 120 ° C).

По 1,8 ml от този хранителен разтвор се поставят при стерилни условия в ямки с обем ml на стерилно полистиролово блюдо /Multidish; Fa Nunc, 62 Wiesbaden 12/. Прибавят се по 2 mg от изпитваните за елициторна активност препарати на клетъчни стени или 10 mg от изпитваните клетки във вид на стерилизирани в двойно дестилирана вода / 20, респ. 45 min при 120°С/ хомогенна суспензия. В две от ямките, които служат за контрола, не се поставят добавки. Във всички ямки след това обемът се нагласява еднакво с двойно дестилирана вода стерилно на 2 ml. Всяка ямка се инокулира идентично с 5 ml от суспензия със спори от Streptomyces clavuligerus /АТСС 27064/.1.8 ml of this nutrient solution are placed under sterile conditions in wells with a volume of ml per sterile polystyrene dish / Multidish; Fa Nunc, 62 Wiesbaden 12 /. Add 2 mg of cell wall preparations for elicitor activity or 10 mg of cells tested as sterilized in double-distilled water / 20, respectively. 45 min at 120 ° C / homogeneous suspension. No additives were placed in two of the wells for control. In all wells the volume was then adjusted equally with double-distilled water sterile to 2 ml. Each well was inoculated identically with 5 ml of Streptomyces clavuligerus spore suspension (ATCC 27064).

Инкубацията на опитната поредица се провежда при аеробни условия /Клатачна ма шина на Tablar, 160 оборота в минута/ при 26°С. Инкубационното време е 24-48 h.Incubation of the test sequence was performed under aerobic conditions / Tablar shaker, 160 rpm / at 26 ° C. The incubation time is 24-48 h.

Образуването на антибиотик се изпитва в сравнение с контролите с помощта на пластинков дифузионен тест. Суспендираните в софт-хранителен агар детекторни организми са Micrococcus luteus, респ.Bacillus subtilis /10⁶ клетки на ml/. Върху стандартни филтрови пластинки /0,9 cm диаметър/ се прилагат съответно по 25 ml центрофугиран /48.000 х g/ културален бульон от опитните камери. След дифузионно време от 4 h при 4°С биотестът се инкубира за 24 h при 30°С.Antibiotic formation was tested in comparison to controls using a plate diffusion test. Soft-agar-suspended detector organisms are Micrococcus luteus or Bacillus subtilis (10 ⁶ cells per ml). On standard filter plates (0.9 cm in diameter), 25 ml of centrifuged (48,000 x g) culture broth from the test chambers were applied accordingly. After a diffusion time of 4 h at 4 ° C, the bioassay was incubated for 24 h at 30 ° C.

При културите, които са инокулирани при прибавяне на умъртвени Brevibacterium flavum АТСС 13826, или от препарати от клетъчни стени на тази бактерия, респ. от препарати от клетъчни стени на Corynebacterium diphtheriae/ щам Mass.8/, показват недвусмислено увеличени инхибирани площи, в сравнение с контролите, увеличено образуване на бета-лактамния антибиотик /пеницилин N, цефалоспорини/ чрез Streptomyces clavuligerus.In cultures inoculated with the addition of killed Brevibacterium flavum ATCC 13826, or from cell wall preparations of this bacterium, respectively. of cell wall preparations of Corynebacterium diphtheriae (strain Mass.8), showed unambiguously increased inhibited areas compared to controls, increased beta-lactam antibiotic / penicillin N, cephalosporins / via Streptomyces clavuligerus.

Пример 10. Стимулиране образуването на алкалоиди /сангвинарин, маркапин и хелеритрин/ чрез Eschscholtzia californica.Example 10. Stimulation of the formation of alkaloids (sanguinarin, marcapine and chelerythrin) by Eschscholtzia californica.

В 24 1-милиметрови ямки на полистиролово блюдо /Fa.Nunc, 6200 Wiesbaden 12/ се инокулират, при описаните от J.Berlin et al./Z.Naturforsch., 38 с, 1983, 346-352/ като оптимални, условия съответно тъканни култури от Eschscholtzia californica. Една от ямките се оставя без прибавка и служи като контрола, в една от камерите се поставят 266 ml/1 екстрахиран на горещо и утаен с етанол дрождев елицитор /получен по Kocourek J.and Ballou, С.Е., J.Bacteriol. 100, 1969, 1175-1181/, в останалите се поставят по 266 mg/1 препарати от клетъчни стени на бактериите, които са посочени в таблица 3. След това културите се инкубират в продължение на 72 h при 24°С и тогава се определя съдържанието на алкалоиди в културите фотометрично, при което индуцираното от дрождевия елицитор алкалоидни съдържание се определя като 100 %.24 24 mm wells of a polystyrene dish (FA.Nunc, 6200 Wiesbaden 12) were inoculated under the optimum conditions described by J. Berlin et al./Z.Naturforsch., 38 s, 1983, 346-352, respectively. tissue cultures of Eschscholtzia californica. One well was left unaddressed and used as a control, 266 ml / l of hot and ethanol-precipitated yeast elicitor / Kocourek obtained by J. and Ballou, S.E., J. Bacteriol were placed in one of the chambers. 100, 1969, 1175-1181 /, the rest were given 266 mg / l of bacterial cell wall preparations, which are listed in Table 3. The cultures were then incubated for 72 h at 24 ° C and then determined the alkaloid content of the cultures is photometric, whereby the alkaloid-induced alkaloid content is defined as 100%.

В следващата таблица 4 са показани получените в тази поредица от опити резултати.The following Table 4 shows the results obtained in this series of experiments.

Таблица 4Table 4

Изпитвани бактериални клетъчни стени Bacterial cell wall tested Елициторна активност в % Excitatory activity in% Brevibacterium butanicum ATCC 21196 Brevibacterium butanicum ATCC 21196 19 19 Brevibacterium flavum ATCC 13826 Brevibacterium flavum ATCC 13826 16 16 Brevibacterium flavum ATCC 14067 Brevibacterium flavum ATCC 14067 30 30 Brevibacterium glutamingenes ATCC 137 Brevibacterium glutamingenes ATCC 137 113 113 Brevibacterium lactofermentum ATCC 13655 Brevibacterium lactofermentum ATCC 13655 43 43 Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872 Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872 40 40 Corynebacterium hydrocarboclasturn ATCC 15592 Corynebacterium hydrocarboclasturn ATCC 15592 8 8 Corynebacterium nephridii ATCC 11425 Corynebacterium nephridii ATCC 11425 123 123 Corynebacterium paurometabolum ATCC 8368 Corynebacterium paurometabolum ATCC 8368 16 16 Corynebacterium lilium ATCC 15990 Corynebacterium lilium ATCC 15990 108 108 Corynebacterium striatum ATCC 6940 Corynebacterium striatum ATCC 6940 17 17 Corynebacterium petrophilum ATCC 19080 Corynebacterium petrophilum ATCC 19080 0 0 Corynebacterium xerosis ATCC 373 Corynebacterium xerosis ATCC 373 102 102 Corynebacterium diphtheriae Stamm Mass. 8 Corynebacterium diphtheriae Stamm Mass. 8 137 137 Rhodococcus fascians ATCC 12975 Rhodococcus fascians ATCC 12975 27 27 Rhodococcus fascians 1 Rhodococcus fascians 1 11 11 Isolat von Prof. Dr. Stolp,Univ.Bayreuth Isolat von Prof. Dr. Tower, Univ.Bayreuth Rhodococcus fascians 2 Rhodococcus fascians 2 7 7

Пример 11. Стимулиране образуването на индолови алкалоиди /валезиакотамин/ в култури от Rauvolfia serpentina.EXAMPLE 11 Stimulation of Indole Alkaloid (Valeziacotamine) Formation in Rauvolfia serpentina Cultures.

Суспензия на култура от Rauvolfia serpentina /Stockigt, J., A.Pfitzner and J.Firl, Plant Cell Rep.l, 36-39 /1981/ се култивира в среда Linsmaier u Skoog /LS/-cpefla /Physiol. Plantarum 18, 100-127 /1965/ в ротационни клатачни апарати /100 оборота в минута/ при 23°С и постоянна светлина /600 1х/. За образуването на елицитори се инокулират 200 g клетъчно прясно тегло /на литър LS-среда. Като съдържащи елицитори фрагменти от микроорганизми се използват препарати от клетъчни стени на посочените в таблица 4 бактерии в концентрация от 130 mg/ί среда.A culture suspension of Rauvolfia serpentina / Stockigt, J., A. Pfitzner and J. Firl, Plant Cell Rep.l, 36-39 / 1981 / was cultured in Linsmaier u Skoog / LS / -cpefla / Physiol medium. Plantarum 18, 100-127 / 1965 / in rotary shaker / 100 rpm / at 23 ° C and constant light / 600 1x /. 200 g of cell fresh weight / liter of LS medium are inoculated for elicitor formation. As elicitor fragments of microorganisms, cell wall preparations of the bacteria listed in Table 4 at a concentration of 130 mg / ί medium are used.

След инкубационно време от 5 дни както в елициторните култури, така и в контролите, клетъчната маса се е удвоила. Клетките се събират и се екстрахират с метанол.After an incubation time of 5 days in both elicitor cultures and controls, the cell mass doubled. The cells were harvested and extracted with methanol.

Количеството на индоловия алкалоид валезиакотамин се определя при HPLC-разделяне на екстрактите. Докато нетретираните контролни култури съдържат само 1,16 mg/1 среда, добивът на елицитираните култури е максимално 58 mg/ί. Това отговаря на 50 пъти повишение посредством елициторите.The amount of indole alkaloid valeziacotamine was determined by HPLC separation of the extracts. While untreated control cultures contain only 1.16 mg / l of medium, the yield of the elicited cultures is a maximum of 58 mg / ί. This corresponds to a 50x increase through elicitors.

Пример 12. Стимулиране активността на 17-кетостероид-редуктазата на Rhodotorula glutinis 1FO 0389.Example 12. Stimulation of 17-ketosteroid reductase activity by Rhodotorula glutinis 1FO 0389.

а/ 2-литрова ерленмайерова колба, съдържаща 500 ml стерилна хранителна среда, съдържаща 5 % глюкозо-монохидрат, 2 % царевичен екстракт, нагласена до pH 6,5, се посява на щрих върху полегат агар от култура на Rhodotorula glutinis IFO 0389 и се отглежда h при 30°C със 190 оборота в минута.a / 2-liter Erlenmeyer flask containing 500 ml of sterile culture medium containing 5% glucose monohydrate, 2% corn extract, adjusted to pH 6.5, was seeded on a culture broth agar of Rhodotorula glutinis IFO 0389 and grows h at 30 ° C at 190 rpm.

б/ 500 - милилитрова ерленмайерова колба със 100 ml стерилна хранителна среда, съдържаща 1 % царевичен екстракт, 5 % Nurupan R /производител Nurupan GmbH, 4000 Dusseldorf 1 DE/, нагласена при pH 6,2, се инокулира с 10 ml от получената съгласно пример 12а Rhodotorula-посевна култура и се отглежда Ί h при 30°С и 180 оборота в минута.b / 500 ml Erlenmeyer flask containing 100 ml of sterile culture medium containing 1% corn extract, 5% Nurupan R / manufacturer Nurupan GmbH, 4000 Dusseldorf 1 DE /, adjusted to pH 6.2, is inoculated with 10 ml of the obtained according to Example 12a Rhodotorula-seed culture and grown Ί h at 30 ° C and 180 rpm.

След това към културата се прибавят 10 mg 3-хидрокси-1,3,5/ 10/,7-естратетраен-17-он и се оставя още 210 h да ферментира. След това културата се екстрахира с метилизобутилкетон, екстрактът се сгъстява и полученият суров продукт се пречиства чрез хроматография на колона от силикагел. По този начин се получават 5,9 mg 1,3,5/10/,7-естратетраен-3,17алфа-диол, което е 59 % от теоретичното.Then, 10 mg of 3-hydroxy-1,3,5 (10), 7-estratetraen-17-one was added to the culture and allowed to ferment for another 210 h. The culture was then extracted with methyl isobutyl ketone, the extract was concentrated and the crude product obtained was purified by chromatography on a silica gel column. In this way 5.9 mg of 1,3,5 (10), 7-estratetraene-3,17-alpha-diol is obtained, which is 59% of theory.

с/ При условията на пример 126 ферментират 10 mg 3-хидрокси-1,3,5/10/,7-естратетраен-17-он с култура от Rhodotorula glutinis, но с тази разлика, че към тази култура непосредствено преди прибавянето на субстрата, се добавят 5 ml стерилна суспензия от 50 mg препарати от клетъчни стени от Bacillus licheniformis /АТСС 9945/ във вода. След обработването на културата се получават 6,8 mg 1,3,5/10/,7-естратетраен-3,17-диол=68 % от теоретичното.c) Under the conditions of Example 126, they ferment 10 mg of 3-hydroxy-1,3,5 (10), 7-estratetraen-17-one with a culture of Rhodotorula glutinis, except that to this culture immediately before the substrate is added , add 5 ml of a sterile suspension of 50 mg cell wall preparations of Bacillus licheniformis (ATCC 9945) in water. After culture, 6.8 mg of 1.3.5 (10), 7-estratetraene-3,17-diol = 68% of theory were obtained.

Пример 13. Стимулиране активността на стероид-Δ '-дехидраза от Bacillus lentus /АТСС 13805/.Example 13. Stimulation of the activity of steroid-Δ'-dehydrate by Bacillus lentus (ATCC 13805).

а/ Двулитрова ерленмайерова колба с 500 ml стерилен хранителен разтвор, съдържащ 0,5 % царевичен екстракт, 0,05 % монохидрат на глюкоза, 0,1 % екстракт от дрожди, нагласен до pH 7,0, се инокулира с измит чрез декантиране Bacillus lentus /АТСС 13805/ и разклащан в продължение на 48 h при 30°С със 190 оборота в минута.a / Two-liter Erlenmeyer flask with 500 ml sterile nutrient solution containing 0.5% corn extract, 0.05% glucose monohydrate, 0.1% yeast extract adjusted to pH 7.0 was inoculated with Bacillus decantation lentus (ATCC 13805) and shaken for 48 h at 30 ° C at 190 rpm.

б/ 500 милилитрова ерленмайерова колба със 100 ml стерилен хранителен разтвор, съдържащ 3 % соя на прах, 0,5 % царевичен екстракт, 0,1 % дрождев екстракт, 0,05 % монохидрит на глюкозата, нагласен до pH 7,3, се инокулира с 10 ml от Bacillus lentus-предварителна култура и се разклаща в продължение на 7 h при 30®С със 180 оборота в минута. Тогава към културата се прибавя стерилно-филтриран разтвор от 40 mg 6α, 9а-дифлуор-11Р,18а-дихидрокси-16-а-метил-4-прегнен-3,20-дион в 4 ml диметилформамид и инкубирането продъл жава още 41 h.b / 500 ml Erlenmeyer flask with 100 ml sterile nutrient solution containing 3% soybean powder, 0.5% corn extract, 0.1% yeast extract, 0.05% glucose monohydrite, adjusted to pH 7.3, inoculated with 10 ml of Bacillus lentus pre-culture and shaken for 7 h at 30 ° C at 180 rpm. Then, a sterile-filtered solution of 40 mg of 6α, 9α-difluoro-11P, 18α-dihydroxy-16-α-methyl-4-pregn-3,20-dione in 4 ml of dimethylformamide was added to the culture and the incubation continued for 41 h .

След това културата се екстрахира с метилизобутилкетон, сгъстява се екстрактът във вакуум и остатъкът се пречиства чрез хроматография на колона от силикагел. Така се получават 16 mg 6α, 9а-дифлуор-11β, 17а-дихидрокси-16а-метил,1,4-прегнадиен-3,20-дион /=40 % от теоретичното/.The culture was then extracted with methyl isobutyl ketone, the extract was concentrated in vacuo and the residue was purified by chromatography on a silica gel column. 16 mg of 6α, 9α-difluoro-11β, 17α-dihydroxy-16α-methyl, 1,4-pregnadiene-3,20-dione (= 40% of theory) are thus obtained.

с/ При условията на пример 136 ферментират 40 mg 6α, 9а-дифлуор-11β, 17а-дихидрокси-16а-метил-4-прегнен-3, 20-дион с култура от Bacillus lentus, но с тази разлика, че тази култура непосредствено преди прибавянето на субстрата към нея се прибавят във вода 5 ml стерилна суспензия от 50 mg препарат от клетъчни стени на Corynebacterium diphtheriae /щам Mass.8/. След отработването на културата се получават 21 mg 6α, 9а-дифлуор-11β, 17а-дихидрокси-16а-метил-1,4-прегнадиен3,20-дион /=52,5 % от теоретичното/.c) Under the conditions of Example 136, 40 mg of 6α, 9a-difluoro-11β, 17a-dihydroxy-16a-methyl-4-pregn-3, 20-dione was fermented with a Bacillus lentus culture, except that this culture directly 5 ml of sterile suspension of 50 mg of cell wall preparation of Corynebacterium diphtheriae (strain Mass.8) were added to the substrate before adding the substrate. After culture, 21 mg of 6α, 9α-difluoro-11β, 17α-dihydroxy-16α-methyl-1,4-pregnadiene, 3,20-dione (= 52.5% of theory) are obtained.

Пример 14. Стимулиране образуването на алкалоиди /амид на лизерговата киселина и амид на изолизерговата киселина/ от Claviceps paspali /АТСС 13895/.EXAMPLE 14 Stimulation of the Formation of Alkaloids (Lyseric Acid Amide and Isoleric Acid Amide) by Claviceps paspali (ATCC 13895)

а/ 500 милилитрова ерленмайерова колба с 50 ml стерилен хранителен разтвор, съдържащ 4 % сорбит /технически чист/, 1 % глюкозо-монохидрат, 2 % янтарна киселина, 0,6 % амониев сулфат, 0,5 % дрождев екстракт /Difco® на Difco Labs. Detroit, USA/, 0,1 % калиев дихидрогенфосфат, 0,03 % магнезиевсулфат хептахидрат, нагласени с натриев хидроксид до pH 5,2, се инокулира с дълбокозамразена до -70°С култура от Claviceps paspali /АТСС 13895/ и се разклаща в продължение на 5 дни при 24°С и 240 оборота в минута.a / 500 ml Erlenmeyer flask with 50 ml sterile nutrient solution containing 4% sorbitol (technically pure), 1% glucose monohydrate, 2% succinic acid, 0.6% ammonium sulfate, 0.5% yeast extract / Difco® Difco Labs. Detroit, USA /, 0.1% potassium dihydrogen phosphate, 0.03% magnesium sulfate heptahydrate, adjusted with sodium hydroxide to pH 5.2, is inoculated with deep-frozen to -70 ° C Claviceps paspali culture (ATCC 13895) and shaken for 5 days at 24 ° C and 240 rpm.

б/ 500 милилитрова ерленмайерова колба с 50 ml стерилен хранителен разтвор, съдържащ 8 % сорбит /технически чист/, 6 % янтарна киселина, 0,9 % амониев сулфат, 0,1 % калиево-нитратен тетрахидрат, 0,05 % дикалиев хидрогенфосфат, 0,03 % магнезиевсулфат хептахидрат, 0,02 % дрождев екстракт /Difco * на Difco Labs, Detroit, USA/,0,0007 % хептохидрат на железен /П/-сулфат, 0,0006 % хептахидрат на цинков сулфат, нагласен с натриев хидроксид до pH 5,2, се инокулира с 5 ml предкултура от Claviceps paspali и се разклаща в продължение на 250 h при 24°С при 240 оборота в минута.b / 500 ml Erlenmeyer flask with 50 ml sterile nutrient solution containing 8% sorbitol (technically pure), 6% succinic acid, 0.9% ammonium sulfate, 0.1% potassium nitrate tetrahydrate, 0.05% dical sodium hydrogen phosphate, 0.03% magnesium sulphate heptahydrate, 0.02% yeast extract / Difco * by Difco Labs, Detroit, USA /, 0.0007% ferric heptahydrate / N / sulphate, 0.0006% zinc sulphate heptahydrate adjusted with sodium hydroxide to pH 5.2 was inoculated with 5 ml of Claviceps paspali preculture and shaken for 250 h at 24 ° C at 240 rpm.

След това към културата се прибавя толкова натриев хидроксид докато се получи ми11 нимум pH-стойност 10, екстрахира се с метилизобутилкетон, сгъстяват се екстрактите под вакуум и се пречистват чрез хроматографията на колона от кизелгел.Sodium hydroxide was then added to the culture until a minimum pH value of 10 was obtained, extracted with methyl isobutyl ketone, the extracts were concentrated in vacuo, and purified by chromatography on a silica gel column.

Получават се по този начин смес от амид на лизерговата киселина и амид на изолизерговата киселина /добив 700 mg/1 култура/.In this way, a mixture of ammonium acid and isomeric acid amide is obtained (yield 700 mg (1 culture)).

с/ При условията на пример 14б се инокулира култура от Claviceps paspali, но е тази разлика, че към културата се прибавят след 72 h, 5 ml стерилна суспензия от 25 mg препарат от клетъчни стени от Lactobacillus casei subsp. rhamnosus /ATCC 7469/ във вода. След обработка на културата се получават 45 mg смес от амид на лизерговата киселина и амид на изолизерговата киселина /добив 900 mg/1 култура/.c / Under the conditions of Example 14b, a culture of Claviceps paspali is inoculated, but the difference is that after 72 h, 5 ml of a 25 mg sterile suspension of cell wall preparation of Lactobacillus casei subsp is added to the culture. rhamnosus / ATCC 7469 / in water. After culture, 45 mg of a mixture of amber of acid and an isomer of acid is obtained (yield 900 mg (1 culture)).

Пример 16. Стимулиране активността на 15а-хидроксилаза на Penicillium raistrickii /ATCC 10490/.Example 16. Stimulation of Penicillium raistricky 15a-hydroxylase activity (ATCC 10490).

Двулитрова ерленмайерова колба с 500 ml стерилна хранителна среда, съдържаща 3 % монохидрат на глюкоза, 1 % царевичен екстракт, 0,2 % натриев нитрат, 0,05 % магнезиевсулфат хептахидрат, 0,05 % калиев хлорид, 0,002 % хексахидрат на железен /П/-сулфат, 0,1 % калиев дихидрогенфосфат, 0,2 % дикалиев хидрогенфосфат, нагласени до pH 6,0, се посява на щрих върху полегат агар от култура на Penicillium raistrickii /ATCC 10490/ и се култивира в продължение на 48 h при 30°С със 180 оборота в минута.Two-liter Erlenmeyer flask with 500 ml sterile culture medium containing 3% glucose monohydrate, 1% corn extract, 0.2% sodium nitrate, 0.05% magnesium sulphate heptahydrate, 0.05% potassium chloride, 0.002% ferric hexahydrate / -sulphate, 0.1% potassium dihydrogen phosphate, 0.2% dicalium hydrogen phosphate, adjusted to pH 6.0, was seeded on a gentle culture agar of Penicillium raistrickii (ATCC 10490) and cultured for 48 h at 30 ° C at 180 rpm.

б/ 500 милилитрова ерленмайерова колба със 100 ml стерилна хранителна среда, съдържаща 1 % царевичен екстракт, 3 % монохидрит на глюкоза, 0,1 % калиев дихидрогенфосфат, 0,2 % дикалиев хидрогенфосфат, 0,05 % магнезиевсулфат хептахидрат, нагласен до pH 6,0, се инокулира с 10 ml е приготвената съгласно а/ пеницилинова предкултура.b / 500 ml Erlenmeyer flask with 100 ml sterile culture medium containing 1% corn extract, 3% glucose monohydrite, 0.1% potassium dihydrogen phosphate, 0.2% dical sodium hydrogen phosphate, 0.05% magnesium sulfate heptahydrate, adjusted to pH , 0, is inoculated with 10 ml prepared according to the a / penicillin preculture.

След това към културата се прибавят 300 mg 13-етил-4-гонен-3,17-дион и ферментира 120 h при 30°С със 180 оборота в минута.300 mg of 13-ethyl-4-gon-3,17-dione were then added to the culture and fermented for 120 h at 30 ° C at 180 rpm.

После културата се екстрахира с метилизобутилкетон, сгъстява се екстрактът и полученият суров продукт се пречиства чрез хроматография на колона от силикагел. Получават се по този начин 100 mg 1 З-етил-15а-хидрокси-4-гонен-3,17-дион.The culture was then extracted with methyl isobutyl ketone, the extract was concentrated, and the crude product obtained was purified by chromatography on a silica gel column. Thus, 100 mg of 1 3-ethyl-15α-hydroxy-4-gon-3,17-dione are obtained.

с/ При условията на пример б/ ферментират 300 mg 13-етил-4-гонен-3,17-дион с култура от Penicillum raistrickii, но с тази разлика, че към тази култура се прибавят непосредст вено преди прибавянето на субстрата 5 ml от стерилна суспензия, която съдържа 50 mg от препарат на клетъчни стени от Corynebacterium diphtheriae /щам Mass.8/ във вода. След обработването на културата се получават 210 mg 1 З-етил-15а-хидрокси-4-гонен-3,17-дион.c) Under the conditions of Example b, they ferment 300 mg of 13-ethyl-4-chloro-3,17-dione with a culture of Penicillum raistrickii, but with the exception that 5 ml of the medium are added to this culture immediately before the substrate is added. a sterile suspension containing 50 mg of cell wall preparation of Corynebacterium diphtheriae (strain Mass.8) in water. After culture, 210 mg of 1 3-ethyl-15α-hydroxy-4-gon-3,17-dione are obtained.

Claims (6)

Патентни претенцииClaims 1. Метод за повишаване ензимните активности и синтезната продуктивност на организми, характеризиращ се с това, че същите се поставят в контакт с инактивирани, съдържащи елицитори, микроорганизми, фрагменти от същите или екстракти от съдържащи елицитори микроорганизми, при условие, че за повишаване ензимната активност и синтезната продуктивност се използват немикробиални организми на инактивирани, съдържащи елицитори, бактерии, фрагменти от същите или екскреции от съдържащи елицитори бактерии.1. A method for increasing the enzymatic activity and synthesis productivity of organisms, characterized in that they are contacted with inactivated, containing elicitors, microorganisms, fragments thereof or extracts of elicitor-containing microorganisms, provided that they increase the enzyme activity and synthesis productivity non-microbial organisms of inactivated, containing elicitors, bacteria, fragments of the same or excretions of elicitor-containing bacteria are used. 2. Метод за повишаване ензимните активности и синтезната продуктивност на микроорганизми съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че същите се поставят в контакт с инактивирани съдържащи елицитори микроорганизми, фрагменти от същите или екскреции от съдържащи елицитори микроорганизми.2. A method for enhancing the enzyme activities and synthesis productivity of microorganisms according to claim 1, characterized in that they are contacted with inactivated elicitor-containing microorganisms, fragments thereof, or excretion from elicitor-containing microorganisms. 3. Метод за повишаване синтезната продуктивност на микроорганизми съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че способни да образуват багрилно вещество, алкалоиди или антибио-тици, бактерии, гъби или дрожди се поставят в контакт с инактивирани, съдържащи ели-цитори, бактерии, гъби или дрожди, фрагменти от същите или екскреции от тези микро-организми.3. A method for increasing the synthesis performance of microorganisms according to claim 2, characterized in that they are capable of forming dye, alkaloids or antibiotics, bacteria, fungi or yeast, inactivated, containing elicitors, bacteria, mushrooms or yeasts, fragments of the same or excreted by these micro-organisms. 4. Метод за повишаване ензимната активност на микроорганизми съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че способни да трансформират стероидите бактерии, гъби или дрожди се поставят в контакт с инактивирани, съдържащи елицитори, бактерии, гъби или дрожди, фрагменти от същите или екскреции от тези микроорганизми.A method for increasing the enzymatic activity of microorganisms according to claim 2, characterized in that the bacteria, fungi or yeast capable of transforming the steroids are contacted with inactivated, containing elicitors, bacteria, fungi or yeast, fragments thereof or excreted from these microorganisms. 5. Метод за повишаване синтезната продуктивност на организми съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че клетъчни култури от способни за синтез на багрилни вещества, алкалоиди или фитоалексини по-висши расте12 алкалоиди или фитоалексини по-висши растения сс поставят в контакт с инактивирани, съдържащи елицитори, бактерии, фрагменти от същите или екскреции от тези бактерии.5. A method for enhancing the synthesis productivity of organisms according to claim 1, characterized in that the cell cultures of higher-growth dye, alkaloids or phytoalexins higher alkaloids or phytoalexins higher plants are contacted with inactivated, inactivated cells. containing elicitors, bacteria, fragments thereof, or excretions of these bacteria. 6. Метод за повишаване ензимните активности и синтезната продуктивност на мик роорганизми съгласно претенция 1 до 5, характеризиращ се с това, че същите се поставят в контакт със стерилизирани на горещо във вода, съдържащи елицитори, микрооргани5 зми, или с филтрати от същите.6. A method for increasing the enzymatic activities and synthesis productivity of micro-organisms according to claims 1 to 5, characterized in that they are contacted with hot-water sterilized containing elicitors, micro-organisms, or filtrates thereof.