BG112806A - Adamantane derivative with antiviral and anti-parkinson activity - Google Patents

Abstract

The invention relates to an adamantane derivative of formula I: to a method for its preparation and to its application as an antiviral and anti-parkinson agent.

Description

Адамантаново производно с противовирусна и антипаркинсонова активностAdamantan derivative with antiviral and antiparkinsonian activity

ОбластArea

Изобретението се отнася до адамантаново производно с противовирусна и антипаркинсонова активност, приложимо за превенция и лечение на заболявания, свързани с нарушение на биосинтеза и екскрецията на допамин.The invention relates to an adamantane derivative with antiviral and antiparkinsonian activity, useful for the prevention and treatment of diseases associated with impaired biosynthesis and dopamine excretion.

Ниво на техникатаPrior art

Известно е, че допаминът е съединение, което тялото продуцира по естествен път в мозъка и функционира като невротрансмитер. Това е критична компонента, използвана от мозъка да контролира движението на тялото, поради което всяко изменение на нивото й в мозъка води до много лоши резултати. Повишаването на нивото на допамина в мозъка се асоциира със състояния като пристрастяване към лекарства и психиатрични състояния като шизофрения, докато неговото понижаване води до депресия, Болестта на Паркинсон (БП) и Паркинсоноподобни разстройства.Dopamine is known to be a compound that the body naturally produces in the brain and functions as a neurotransmitter. This is a critical component used by the brain to control the movement of the body, which is why any change in its level in the brain leads to very poor results. Elevated levels of dopamine in the brain are associated with conditions such as drug addiction and psychiatric conditions such as schizophrenia, while its decrease leads to depression, Parkinson's disease (BP) and Parkinson's-like disorders.

Болестта на Паркинсон е прогресивно разстройство на централната нервна система, която поразява хиляди хора по света и се асоциира със загуба на допаминова продукция в специфична област на мозъка. Макар обичайно да засяга възрастните хора, напоследък с това заболяване биват диагностицирани все повече хора преди да достигнат 50 години. Това е хронично и прогресивно заболяване, симптомите на което все повече се влошават и са необратими във времето. Характерните симптоми включват намаляване на спонтанните движения, трудност при ходене, ортостатична нестабилност, скованост и тремор.Parkinson's disease is a progressive disorder of the central nervous system that affects thousands of people around the world and is associated with loss of dopamine production in a specific area of the brain. Although it usually affects the elderly, more and more people have recently been diagnosed with the disease before the age of 50. It is a chronic and progressive disease, the symptoms of which worsen and become irreversible over time. Typical symptoms include decreased spontaneous movements, difficulty walking, orthostatic instability, stiffness and tremor.

Както множество неврологични заболявания, истинската причина за Болестта на Паркинсон е неизвестна. Независимо от това, проучванията са доказали, че БП се проявява когато група от невронни клетки в област на мозъка, наречена substantia nigra pars compacta (SNc), са c понижена активност и евентуално са загинали, което води до понижаване в нивата на допамин в мозъка и което от своя страна води до нарушение в контрола на движението и координацията. Понастоящем се счита, че БП е нелечима. Прилаганите лекарствени средства са симптоматични и са насочени към повишаване на нивата на допамин в мозъка, но понякога се прибягва и до по- инвазивни хирургични методи за лечение чрез невронна аблация или дълбоко мозъчна стимулация. За съжаление, тези методи имат недостатъци, някои от които много сериозни и компрометиращи качеството на живот на пациентите.Like many neurological diseases, the true cause of Parkinson's disease is unknown. However, studies have shown that BP occurs when a group of neuronal cells in an area of the brain called the substantia nigra pars compacta (SNc) has reduced activity and eventually dies, leading to a decrease in dopamine levels in the brain. and which in turn leads to a violation of traffic control and coordination. BP is currently considered incurable. The drugs used are symptomatic and aimed at increasing dopamine levels in the brain, but more invasive surgical treatments by neuronal ablation or deep brain stimulation are sometimes used. Unfortunately, these methods have drawbacks, some of which are very serious and compromising the quality of life of patients.

Ето защо усилията на изследователите са насочени към намиране на нови пътища за разбиране и изучаване на допаминергичните заболявания и състояния, както и на нови пътища за лечението им без да бъде повлияна нормалната функция на невроните и качеството на живот на заболелите.Therefore, the researchers' efforts are focused on finding new ways to understand and study dopaminergic diseases and conditions, as well as new ways to treat them without affecting the normal function of neurons and the quality of life of patients.

Резултатите от изследванията на проф. James Surmeier, както и неговите изобретения, са основани на разбирането, че загиването на допаминергичните неврони е в пряка зависимост от калциевите йонни канали в клетките на бозайници, по-специално на Ca_v1.3a, както и на Kv3.1, Kv3.2, Kv3.3 и Kv3.4 йонните канали. Изобретателят предлага метод за превенция и лечение на Болестта на Паркинсон, включващ директно въздействие върху Ca_v1.3a калциевите йонни канали с блокери, по- специално с дихидропиридинов блокер на калциевите канали (US2018064697 А1; US2013345230 А1), което защитава увредените клетки и ги предпазва от по-нататъшна деградация и евентуална смърт. В някои варианти на изпълнение, в качеството на дихидропиридинов блокер на калциевите канали се използва нифидипин, нимодипин и/или израдипин, а в други освен блокер, допълнително се прилага терапевтично средство, избрано от групата, включваща леводопа, карбидопа, ентакапон, апоморфин хидрохлорид, бромокриптин, перголид, прамипексол, ропинерол, бензотропин мезилат, трихексифенидил HCI, селегилин, толкапон, амантадин, рилузол и/или L-допа етил етер.The results of Prof. James Surmeier's research, as well as his inventions, are based on the understanding that the death of dopaminergic neurons is directly dependent on calcium ion channels in mammalian cells, in particular Ca _v 1.3a and Kv3. .1, Kv3.2, Kv3.3 and Kv3.4 ion channels. The inventor proposes a method for the prevention and treatment of Parkinson's disease comprising direct action on Ca _v 1.3a calcium ion channels with blockers, in particular a dihydropyridine calcium channel blocker (US2018064697 A1; US2013345230 A1), which protects damaged cells and from further degradation and eventual death. In some embodiments, nifidipine, nimodipine, and / or izradipine are used as the dihydropyridine calcium channel blocker, and in others, in addition to a blocker, a therapeutic agent selected from the group consisting of levodopa, carbidopa, entacapone, apomorphine, hydrochloride bromocriptine, pergolide, pramipexole, ropinerol, benzotropin mesylate, trihexyphenidyl HCl, selegiline, tolcapone, amantadine, riluzole and / or L-dopa ethyl ether.

В патент US7629323 (В2) същият автор претендира, че манипулирането на активността на йонни канали от групата, включваща K_v3.1, Κ_ν3.2, Κ_ν3.3 и Κ_ν3.4 и свързани с БП и други неврологични заболявания и състояния, може да се осъществи посредством трансфекция на увредени невронни клетки, съдържащи тези йонни канали, чрез въвеждането на siRNA, която е способна да инхибира експресията на тези йонни канали в клетките.In US7629323 (B2), the same author claims that the manipulation of the activity of ion channels from the group comprising K _v 3.1, Κ _ν 3.2, Κ _ν 3.3 and Κ _ν 3.4 and associated with BP and other neurological diseases and conditions can be carried out by transfecting damaged neuronal cells containing these ion channels by introducing siRNA that is capable of inhibiting the expression of these ion channels in the cells.

От друга страна, известно е свойството на адамантина да инхибира репликацията на грипният вирус тип А посредством блокиране на М2-протеина в йонния канал. Освен това, наскоро са установени и други важни клинични приложения на амантадина като Болестта на Паркинсон, невралгия, депресия и др., които според последни изследвания се дължат на способността му да блокира серотонин активиращият йонен канал, йонният канал на никотин-ацетилхолиновите рецептори, както и йонният канал на N-метил-Оаспартатните рецептори. Доколкото е известно, става въпрос за способността на адамантина да блокира невромускулното предаване, оказващо влияние върху биосинтеза и екскрецията на допамин [1]. Биологичната активност на адамантина се дължи още и на симетрията и пространственото разположение на молекулата, както и на значителната й липофилност, благодарение на стабилната въглеводородна рамка, което позволява да проникне лесно през биологичните мембрани [2].On the other hand, the property of adamantine to inhibit the replication of influenza virus type A by blocking the M2 protein in the ion channel is known. In addition, other important clinical applications of amantadine have recently been identified, such as Parkinson's disease, neuralgia, depression, etc., which according to recent studies are due to its ability to block the serotonin activating ion channel, the ion channel of nicotine-acetylcholine receptors, as well as and the ion channel of N-methyl-Oaspartate receptors. As far as is known, it is the ability of adamantine to block neuromuscular transmission, which affects the biosynthesis and excretion of dopamine [1]. The biological activity of adamantine is also due to the symmetry and spatial arrangement of the molecule, as well as its significant lipophilicity, thanks to the stable hydrocarbon framework, which allows it to penetrate easily through biological membranes [2].

Задача на изобретението е да предложи съединение, което да проявява едновременно както противовирусна, така също антипаркинсонова активност и което да е приложимо за профилактика и лечение на заболявания, свързани с нарушение на биосинтеза и екскрецията на допамин [3].It is an object of the invention to provide a compound which exhibits both antiviral and anti-Parkinsonian activity and which is useful for the prevention and treatment of diseases associated with impaired biosynthesis and dopamine excretion [3].

I I I 4 1 MiSliI I I 4 1 Thoughts

Същност на изобретениетоSUMMARY OF THE INVENTION

По своята същност изобретението се отнася до адамантаново производно с Формула I:In essence, the invention relates to an adamantane derivative of Formula I:

ОНHE

(I)(I)

Химичното съединение се получава в следната последователност от синтези: найнапред трет-бутилоксикарбонил-О-трет-бутил-тирозин-ОН (Boc-Tyr(tBu)-OH) се разтваря в дихлорометан и се добавя триетиламин. При непрекъснато разбъркване към него се добавя 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламинов тетрафлуорборат (TBTU) [4]. Амантадин хидрохлорид се разтваря в дихлорметан и се добавя към реакционната смес. След приключване на реакцията, реакционната смес се промива с 4%-ен разтвор на МаНСОз, NaCI и вода. Органичният слой се суши с безводен Na₂SO4, разтворителят се изпарява и се получава продукт под формата на масло. Към полученият трет-бутилоксикарбонил-О-трет-бутил-тирозинил-амантадин, разтворен в дихлорметан при 0°С, се прибавя трифлуорооцетна киселина (TFA). След края на реакцията разтворителят се изпарява и се добавя диетилов етер. Получава се трифлуороцетна сол на тирозинил-амантадин.Към трифлуороцетна сол на тирозиниламантадин се добавя концентриран NH4OH и pH на разтвора се довежда до 7.0. Полученото съединение е с наименование по UPAC: 2-амино-3-(4хидроксифенил)пропаноил-1-адамантиламин.The compound was prepared in the following sequence of syntheses: first tert-butyloxycarbonyl-O-tert-butyl-tyrosine-OH (Boc-Tyr (tBu) -OH) was dissolved in dichloromethane and triethylamine was added. With stirring, 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylamine tetrafluoroborate (TBTU) is added thereto [4]. Amantadine hydrochloride was dissolved in dichloromethane and added to the reaction mixture. After completion of the reaction, the reaction mixture was washed with 4% NaHCO 3 solution, NaCl and water. The organic layer was dried over anhydrous Na ₂ SO4, the solvent was evaporated to give an oil product. To the resulting tert-butyloxycarbonyl-O-tert-butyl-tyrosinyl-amantadine dissolved in dichloromethane at 0 ° C was added trifluoroacetic acid (TFA). After completion of the reaction, the solvent was evaporated and diethyl ether was added. A trifluoroacetic salt of tyrosinyl-amantadine was obtained. Concentrated NH4OH was added to the trifluoroacetic salt of tyrosinylamantadine and the pH of the solution was adjusted to 7.0. The resulting compound is named UPAC: 2-amino-3- (4-hydroxyphenyl) propanoyl-1-adamantylamine.

¹H-NMR: (DMSO-d6) δ (ppm): 0.75. (d, J=6.7 Hz, 3H, H-2’, D2), 0.93 (d, J=6.7 Hz, 3H, H-2’, D1), 1,18 (3H, H-2’, D1), 1,26 (3H, H-2', D1), 1,45 (6H, H-2', D2), 1,49 (3H, H-4b’, D1), 1,57 (3H, H-4a’, D1). 1,57 (3H, H-4b’, D2), 1,65 (3H, H-4a’, D2), 1.84 (br, 3H, H-3, D1), 1.93 (br, 3H, H-3, D2), 2.87 (m, 2H, CH2, D1+D2), 3.44 (D1+D2) 3.93 (m, 1H, CH, D2), 3.99 (m, 1H, CH, D1), 6.69 (m, 2H, Ar, D1), 6.70 (m, 2H, Ar, D2), 7.04 (m, 2H, Ar, D1), 7.01 (m, 2H, Ar, D2), 7.78 (d, 1H, J=9.4 Hz, NH - амид, D2), 7.89 (d, 2H, J=9.4 Hz, NH - амид, D1), 8.12 (br., 1H, NH2, D2), 8.17 (br, 2H, NH2, D1); ¹³C-NMR: (DMSO-d6) δ (ppm): 13.6 (СНз, D2), 13.9 (СНз, D1), 36.3 (CH2, D1+D2), 37.5 (C-4, амантадин, D1), 37.6 (C-4, амантадин, D2), 37.5 (C-2, амантадин, D1), 37.6 (C-2, амантадин, D2), 52.7 (CH, D1), 52.6 (CH, D1), 53.6 (CH, D1), 53.5 (CH, D1), CQau амантадин. 115 (CH-Ar, D1+D2), 124,7 (Cquat, D1+D2) 130.4 (CH-Ar, D2) 130.2 (CH-Ar, D2), 156.5 (Cquat, D1), 156.4 (Cquat, D2), 167.1 (CO, D1), 167.1 (CO, D2); ESI-MS: 509 [M+K]+, 493 [M+Na]+, 471 [M+H]+. ¹ H-NMR: (DMSO-d 6) δ (ppm): 0.75. (d, J = 6.7 Hz, 3H, H-2 ', D2), 0.93 (d, J = 6.7 Hz, 3H, H-2', D1), 1.18 (3H, H-2 ', D1) , 1.26 (3H, H-2 ', D1), 1.45 (6H, H-2', D2), 1.49 (3H, H-4b ', D1), 1.57 (3H, H) -4a ', D1). 1.57 (3H, H-4b ', D2), 1.65 (3H, H-4a', D2), 1.84 (br, 3H, H-3, D1), 1.93 (br, 3H, H-3) , D2), 2.87 (m, 2H, CH2, D1 + D2), 3.44 (D1 + D2) 3.93 (m, 1H, CH, D2), 3.99 (m, 1H, CH, D1), 6.69 (m, 2H) , Ar, D1), 6.70 (m, 2H, Ar, D2), 7.04 (m, 2H, Ar, D1), 7.01 (m, 2H, Ar, D2), 7.78 (d, 1H, J = 9.4 Hz, NH-amide, D2), 7.89 (d, 2H, J = 9.4 Hz, NH-amide, D1), 8.12 (br., 1H, NH2, D2), 8.17 (br, 2H, NH2, D1); ¹³ C-NMR: (DMSO-d 6) δ (ppm): 13.6 (CH 3, D 2), 13.9 (CH 3, D 1), 36.3 (CH 2, D 1 + D 2), 37.5 (C-4, amantadine, D 1), 37.6 (C-4, amantadine, D2), 37.5 (C-2, amantadine, D1), 37.6 (C-2, amantadine, D2), 52.7 (CH, D1), 52.6 (CH, D1), 53.6 (CH, D1), 53.5 (CH, D1), CQau amantadine. 115 (CH-Ar, D1 + D2), 124.7 (Cquat, D1 + D2) 130.4 (CH-Ar, D2) 130.2 (CH-Ar, D2), 156.5 (Cquat, D1), 156.4 (Cquat, D2) ), 167.1 (CO, D1), 167.1 (CO, D2); ESI-MS: 509 [M + K] < + >, 493 [M + Na] < + >, 471 [M + H] < + >.

Етапите на синтеза на съединението с формула I, съгласно изобретението, са обобщени на Схема I по- долу:The steps of the synthesis of the compound of formula I according to the invention are summarized in Scheme I below:

Схема IScheme I

Постигнатата по този начин химична модификация на съществуващото противогрипно лекарствено средство амантадин води до получаването на ново адамантаново производно, което в условията на организма се хидролизира и се разделя на двете участващи компоненти: амантадин и прекурсора на допамин в организмааминокиселината тирозин, поради което новосинтезираното съединение действа както като инхибитор на вирусната невраминидаза, така и като прекурсор на допамина [5].The chemical modification of the existing anti-influenza drug amantadine thus obtained leads to the production of a new adamantane derivative, which in the body is hydrolyzed and divided into the two components: amantadine and the dopamine precursor in the body amino acid tyrosine, so the newly synthesized compound acts as an inhibitor of viral neuraminidase and as a precursor of dopamine [5].

По този начин е създадено ново средство, което от една страна е ефективно в преодоляване на развиваща се спрямо вирусни мутации резистентност, а от друга е ефективно при лечение на Болестта на Паркинсон. Полученото съединение е с висока стабилност: при pH =1 тя е 52 часа, а при pH = 7.4 е 73 часа.In this way, a new tool has been created which, on the one hand, is effective in overcoming resistance to viral mutations and, on the other hand, is effective in the treatment of Parkinson's disease. The resulting compound has high stability: at pH = 1 it is 52 hours, and at pH = 7.4 it is 73 hours.

Адамантановото производно съгласно изобретението, проявява значими невробиологични и биохимични ефекти върху мишки и плъхове в значително по-ниски дози (около 2.5 пъти) спрямо референта амантадин, умерена интраперитонеална токсичност и отсъствие на кожни лезии след третиране; приложено в много по-ниски дози в експериментален метод на плъхове с 6-хидрокси допамин, защитният ефект срещу БП показва съизмерим ефект, а в някои случаи превъзхожда този на референта.The adamantane derivative according to the invention exhibits significant neurobiological and biochemical effects on mice and rats at significantly lower doses (about 2.5-fold) compared to the reference amantadine, moderate intraperitoneal toxicity and absence of skin lesions after treatment; administered at much lower doses in an experimental method to rats with 6-hydroxy dopamine, the protective effect against BP showed a comparable effect, and in some cases superior to that of the reference.

Изобретението се илюстрира със следните примерни изпълнения без да ограничават неговият обхват.The invention is illustrated by the following embodiments without limiting its scope.

Пример 1: Получаване на съединение с формула I съгласно изобретениетоExample 1: Preparation of a compound of formula I according to the invention

За получаване на съединение с формула (I), при стайна температура 7.7 mmol (2.8 g) трет-бутилоксикарбонил-О-трет-бутил-тирозин-ОН се разтваря в дихлорометан и при непрекъснато разбъркване се добавят 7.7 mmol (1 ml) триетиламин и 10.8 mmol (3.5 g) 2(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламинов тетрафлуорборат (TBTU). След 30 минути към разтвора се добавя 8.5 mmol (1.6 g) амантадин хидрохлорид, разтворен в дихлорметан. След приключване на реакцията, реакционната смес се промива с 4%-ен разтвор на №НСОз, NaHSO4 и вода. Органичният слой се суши с безводен МагБОд. След филтруване, разтворителят се изпарява и се получава продукт под формата на масло.To give a compound of formula (I), at room temperature 7.7 mmol (2.8 g) of tert-butyloxycarbonyl-O-tert-butyl-tyrosine-OH was dissolved in dichloromethane and 7.7 mmol (1 ml) of triethylamine was added with continuous stirring and 10.8 mmol (3.5 g) 2 (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylamine tetrafluoroborate (TBTU). After 30 minutes, 8.5 mmol (1.6 g) of amantadine hydrochloride dissolved in dichloromethane was added to the solution. After completion of the reaction, the reaction mixture was washed with 4% solution of №HCO 3, NaHSO 4 and water. The organic layer was dried over anhydrous MagBod. After filtration, the solvent was evaporated to give an oil product.

I I il' ΙίτΙΙιίΗI I il 'ΙίτΙΙιίΗ

Към полученият трет-бутилоксикарбонил-О-трет-бутил-тирозинил-амантадин, разтворен в дихлорметан при 0°С, се прибавят 8.5 mmol (1.2 ml) трифлуороцетна киселина (TFA). След края на реакцията разтворителят се изпарява и се добавя диетилов етер. Получава се трифлуороцетна сол на тирозинил-амантадин. Към трифлуороцетна сол на тирозинил-амантадин се добавя концентриран NH4OH и pH на разтвора се довежда до 7.0. Добив - 1.4 g (59%).To the resulting tert-butyloxycarbonyl-O-tert-butyl-tyrosinyl-amantadine dissolved in dichloromethane at 0 ° C was added 8.5 mmol (1.2 ml) trifluoroacetic acid (TFA). After completion of the reaction, the solvent was evaporated and diethyl ether was added. The trifluoroacetate salt of tyrosinyl-amantadine is obtained. Concentrated NH4OH was added to the trifluoroacetate salt of tyrosinyl-amantadine and the pH of the solution was adjusted to 7.0. Yield 1.4 g (59%).

Полученото съединение е с наименование по UPAC: 2-амино-3-(4хидроксифенил)пропаноил-1-адамантиламин.The resulting compound is named UPAC: 2-amino-3- (4-hydroxyphenyl) propanoyl-1-adamantylamine.

¹H-NMR: (DMSO-d6) δ (ppm): 0.75. (d, J=6.7 Hz, 3H, H-2’, D2), 0.93 (d, J=6.7 Hz, 3H, H-2’, D1), 1,18 (3H, H-2’, D1), 1,26 (3H, H-2’, D1), 1,45 (6H, H-2’, D2), 1,49 (3H, H-4b’, D1), 1,57 (3H, H-4a’, D1). 1,57 (3H, H-4b’, D2), 1,65 (3H, H-4a’, D2), 1.84 (br, 3H, H-3, D1), 1.93 (br, 3H, H-3, D2), 2.87 (m, 2H, CH2, D1+D2), 3.44 (D1+D2) 3.93 (m, 1H, CH, D2), 3.99 (m, 1H, CH, D1), 6.69 (m, 2H, Ar, D1), 6.70 (m, 2H, Ar, D2), 7.04 (m, 2H, Ar, D1), 7.01 (m, 2H, Ar, D2), 7.78 (d, 1H, J=9.4 Hz, NH - амид, D2), 7.89 (d, 2H, J=9.4 Hz, NH - амид, D1), 8.12 (br., 1H, NH2, D2), 8.17 (br, 2H, NH2, D1); ¹³C-NMR: (DMSO-d6) δ (ppm): 13.6 (СНз, D2), 13.9 (СНз, D1), 36.3 (CH₂, D1+D2), 37.5 (C-4, амантадин, D1), 37.6 (C-4, амантадин, D2), 37.5 (C-2, амантадин, D1), 37.6 (C-2, амантадин, D2), 52.7 (CH, D1), 52.6 (CH, D1), 53.6 (CH, D1), 53.5 (CH, D1), CQau амантадин, 115 (CH-Ar, D1+D2), 124,7 (Cquat, D1+D2) 130.4 (CH-Ar, D2) 130.2 (CH-Ar, D2), 156.5 (Cquat, D1), 156.4 (Cquat, D2), 167.1 (CO, D1), 167.1 (CO, D2); ESI-MS: 509 [M+K]+, 493 [M+Na]+, 471 [M+H]+. ¹ H-NMR: (DMSO-d 6) δ (ppm): 0.75. (d, J = 6.7 Hz, 3H, H-2 ', D2), 0.93 (d, J = 6.7 Hz, 3H, H-2', D1), 1.18 (3H, H-2 ', D1) , 1.26 (3H, H-2 ', D1), 1.45 (6H, H-2', D2), 1.49 (3H, H-4b ', D1), 1.57 (3H, H) -4a ', D1). 1.57 (3H, H-4b ', D2), 1.65 (3H, H-4a', D2), 1.84 (br, 3H, H-3, D1), 1.93 (br, 3H, H-3) , D2), 2.87 (m, 2H, CH2, D1 + D2), 3.44 (D1 + D2) 3.93 (m, 1H, CH, D2), 3.99 (m, 1H, CH, D1), 6.69 (m, 2H) , Ar, D1), 6.70 (m, 2H, Ar, D2), 7.04 (m, 2H, Ar, D1), 7.01 (m, 2H, Ar, D2), 7.78 (d, 1H, J = 9.4 Hz, NH-amide, D2), 7.89 (d, 2H, J = 9.4 Hz, NH-amide, D1), 8.12 (br., 1H, NH2, D2), 8.17 (br, 2H, NH2, D1); ¹³ C-NMR: (DMSO-d 6) δ (ppm): 13.6 (CH 3, D 2), 13.9 (CH 3, D 1), 36.3 (CH ₂ , D 1 + D 2), 37.5 (C-4, amantadine, D 1), 37.6 (C-4, amantadine, D2), 37.5 (C-2, amantadine, D1), 37.6 (C-2, amantadine, D2), 52.7 (CH, D1), 52.6 (CH, D1), 53.6 , D1), 53.5 (CH, D1), CQau amantadine, 115 (CH-Ar, D1 + D2), 124.7 (Cquat, D1 + D2) 130.4 (CH-Ar, D2) 130.2 (CH-Ar, D2) ), 156.5 (Cquat, D1), 156.4 (Cquat, D2), 167.1 (CO, D1), 167.1 (CO, D2); ESI-MS: 509 [M + K] < + >, 493 [M + Na] < + >, 471 [M + H] < + >.

ЯМР спектрите на получените съединения са снети на спектрометър с висока разделителна способност Bruker DRX 500 (Германия) и са проведени в ИОХЦФ- БАН. ЯМР химичните отмествания на синтезираното адамантаново производно са измерени в стандартен разтвор на деутериран хлороформ и деутриран диметилсулфоксид (DMSO).NMR spectra of the obtained compounds were taken on a high-resolution spectrometer Bruker DRX 500 (Germany) and performed in IOHCF-BAS. NMR chemical shifts of the synthesized adamantane derivative were measured in a standard solution of deuterated chloroform and deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO).

Мас спектрите са снети с помощта на апарат Bruker Esquire 3000 Plus Ion Trap Mass Spectrometer (Германия), като е използвана мас спектрометрия с електроспрей йонизация и са проведени в Карловия Университет, Прага. Преди анализа за пробоподготовката е използван разтворител метанол.Mass spectra were recorded using a Bruker Esquire 3000 Plus Ion Trap Mass Spectrometer (Germany) using electrospray ionization mass spectrometry and performed at Charles University, Prague. Methanol solvent was used prior to analysis for sample preparation.

Пример 2: Изследване на противовирусната активност на съединението, съгласно изобретениетоExample 2: Study of the antiviral activity of the compound according to the invention

Изследване на противовирусната активност на съединението съгласно настоящото изобретение спрямо грипен вирус A/H3N2, щам Hong Kong/68 е проведено в Университета „Фридрих Шилер“, гр. Йена, Германия. Резултатите за цитотоксичност и противовирусна активност са сравнени с амантадин и оселтамивир и са представени в Таблица 1 по- долу.A study of the antiviral activity of the compound of the present invention against influenza virus A / H3N2, strain Hong Kong / 68 was performed at Friedrich Schiller University, Jena, Germany. Cytotoxicity and antiviral results were compared with amantadine and oseltamivir and are presented in Table 1 below.

i I 4 li Iand I 4 or I

Таблица 1Table 1

Съединение Compound СС50 (μΜ) MDCK клетки CC50 (μΜ) MDCK cells HNTC (μΜ) MDCK клетки HNTC (μΜ) MDCK cells ICso (μΜ) към А/Hong Kong/68 IC50 (μΜ) to A / Hong Kong / 68 средно average средно average средно average L-Tyr-Am L-Tyr-Am > 100 > 100 > 100 > 100 3,93 3.93 Амантадин Amantadine п/а n / a п/а n / a 0,39 0.39 Оселтамивир Oseltamivir п/а n / a п/а n / a 0,002 0.002

Където:Where:

вирус - грипен вирус A/H3N2 , щам А/Hong Kong/68 клетки: MDCK (Madin-Darby клетъчни култури от кучешки бъбрек)virus - influenza virus A / H3N2, strain A / Hong Kong / 68 cells: MDCK (Madin-Darby canine cell cultures)

L-Tyr-Am е съединението, съгласно изобретението;L-Tyr-Am is the compound of the invention;

ССбо обозначава цитотоксична концентрацияCCbo denotes cytotoxic concentration

HNTC обозначава най-висока нетоксична концентрацияHNTC indicates the highest non-toxic concentration

IC50 обозначава инхибираща концентрация η/а = неприложимоIC50 denotes inhibitory concentration η / a = not applicable

От получените данни за противовирусна активност на новосинтезираното адамантаново производно спрямо грипен вирус А/Hong Kong/68 става ясно, че съединението е с ниска цитотоксичност и проявява противовирусно действие. Неговата противовирусна активност in vitro е по-ниска от тази на амантадина, но показва висока стабилност при pH =1 (52 часа), съответстващо на гастроинтестиналния тракт, а при pH = 7.4 е 73 часа.From the obtained data on the antiviral activity of the newly synthesized adamantane derivative against influenza A / Hong Kong / 68 it is clear that the compound has low cytotoxicity and antiviral activity. Its antiviral activity in vitro is lower than that of amantadine, but shows high stability at pH = 1 (52 hours), corresponding to the gastrointestinal tract, and at pH = 7.4 is 73 hours.

Пример 3. Изследване на антиоксидантната (АО) активност на съединението съгласно изобретениетоExample 3. Study of the antioxidant (AO) activity of the compound according to the invention

Съединението, съгласно изобретението, е тествано в системи, генериращи активни форми на кислорода:The compound according to the invention has been tested in systems generating reactive oxygen species:

Система генерираща хидроксилни радикали - Използван е метода на Halliwell et al. (1988) [6], при който измереното количество субстанции, реагиращи с тиобарбитуровата киселина (TBARS), получени в резултат на деградацията на дезоксирибозата, служи като мярка за продукцията на хидроксилни (НО·) радикали. Абсорбцията на образуваните TBARS се отчита при 532 nm. Намаляването на продукцията на TBARS в присъствието на тестваното вещество е мярка за антиоксидантния му капацитет.Hydroxyl radical generating system - The method of Halliwell et al. (1988) [6], in which the measured amount of substances reacting with thiobarbituric acid (TBARS), resulting from the degradation of deoxyribose, serves as a measure of the production of hydroxyl (HO ·) radicals. The absorbance of the formed TBARS was recorded at 532 nm. The reduction in TBARS production in the presence of the test substance is a measure of its antioxidant capacity.

Система генерираща супероксидни анионни радикали - Използван е метода на Beauchamp и Fridovich [7]. Супероксидните анионни радикали (Or) се генерират фотохимично от съдържащия се в реакционната среда рибофлавин, чрез използване на живачна лампа. Образуваните радикали редуцират нитро-блутетразолиума (NBT) до син формазанов продукт, чиято абсорбция се измерва при 560 nm. Намаляването на интензитета на оцветяване на реакционната среда е мярка за антиоксидантният капацитет на изследваното вещество.System generating superoxide anionic radicals - The method of Beauchamp and Fridovich was used [7]. Superoxide anionic radicals (Or) are photochemically generated from the riboflavin contained in the reaction medium using a mercury lamp. The radicals formed reduce the nitro-blutetrazolium (NBT) to a blue formazan product, the absorption of which is measured at 560 nm. Reducing the color intensity of the reaction medium is a measure of the antioxidant capacity of the test substance.

I ιίι 4 ii iihiI ιίι 4 ii iihi

Резултатите от изследването показват че антиоксидантната активност на съединението, съгласно изобретението, в концентрации до 50 μΜ по отношение на DPPH радикали е незначителна (от 3% до 10%); по отношение на супероксидните анионни радикали, съединението в концентрации 50 μΜ предизвиква 12% инхибиране на редукцията на ΝΒΤ; двата деоксирибозни теста (в присъствието и в отсъствието на хелатор) са използвани, за да се оцени улавящия или хелатиращия потенциал на съединениеторезултатите показват, че те са незначителни - под 4%.The results of the study show that the antioxidant activity of the compound according to the invention at concentrations up to 50 μΜ against DPPH radicals is negligible (from 3% to 10%); with respect to superoxide anionic radicals, the compound at concentrations of 50 μΜ causes a 12% inhibition of the reduction of ΝΒΤ; both deoxyribose assays (in the presence and absence of a chelator) were used to assess the capture or chelating potential of the compound. The results showed that they were negligible - less than 4%.

В заключение, адамантановото производно съгласно изобретението, не показа висок антиоксидантен потенциал, но е с ниска цитотоксичност и показва противовирусна активност спрямо грипен вирус Α/Η3Ν2 , щам А/Hong Kong/68.In conclusion, the adamantane derivative according to the invention did not show high antioxidant potential, but had low cytotoxicity and showed antiviral activity against influenza virus Α / Η3Ν2, strain A / Hong Kong / 68.

Пример 4. Определяне токсичността на съединението in vivoExample 4. Determination of the toxicity of the compound in vivo

Използвани са бели мъжки полово зрели мишки ICR с начално телесно тегло 18-24 g отглеждани в помещенията на вивариума на Института по Невробиология, БАН, при стайна температура, свободен достъп до храна и вода и автоматично контролиран 12 часов цикъл светлина-тъмнина.White male sexually mature ICR mice with an initial body weight of 18-24 g were used in the vivarium of the Institute of Neurobiology, BAS, at room temperature, free access to food and water and automatically controlled 12-hour light-dark cycle.

Изследвани са следните основни токсикологични параметри: а) Праг на острото действие (Lim_ac)- това е минималната доза, предизвикваща биологичен ефект, регистриран по промените в поведенческите показатели на животните след еднократно въвеждане на веществата; Ь) Определяне нивото на липсващ ефект - това е дозата на веществото, приложена еднократно, при която липсва забележим ефект (No Observed Effect Level- NOEL). За целта на 5-6 мишки се въвежда веществото с начални дози над 1/20 LDso и 1/50 LD50, проследява се промяната в поведението на животните след въвеждане на еднократни, възходящи дози на тирзинил-амантадина- на 1-я, 2-я, 4-я, 6-я и 8-я час от въвеждането, като за сравнение паралелно внимателно се наблюдава контролна група животни; с) Определяне на острата токсичност- Средна смъртна (летална) доза (LD50), предизвикваща летален изход при 50% от животните, като при 1-ва група животни- началното разтваряне на съединението от изобретението се прави с Деутериран диметилсулфоксид (ДМСО), а следващите разреждания са с вода; при II група животни изходния разтвор и последващите разреждания са направени само с ДМСО; Дозите се изчисляват в милиграм активна субстанция на килограм телесно тегло, въвеждането е интраперитонеално в допустимите обеми за мишки (0.10 ml/10 g телесно тегло). Работните дози от веществото са: 10, 16, 32, 100, 150, 300, 320, 350, 500 и 1000 mg/kg. Смъртността в групите се проследява на 1-я, 24-ят и 48-ят час от прилагането на веществата. Контролната група получава същия обем разтворител. Определя се и ефективната доза ED50; d) Изследване на пролонгираната токсичност на съединението- Проследени са следните показатели: общо състояние, апетит, общо тегло, външен вид (настръхнала кожа, слюнкотечение, екзофталм (изпькване на очите), оцветяване на лигавиците (цианоза, зачервяване). Смъртността в групите е отчетена наThe following main toxicological parameters were studied: a) Threshold of acute action (Lim _a c) - this is the minimum dose causing a biological effect registered by the changes in the behavioral parameters of the animals after a single administration of the substances; B) Determination of the level of missing effect - this is the dose of the substance, applied once, at which there is no noticeable effect (No Observed Effect Level-NOEL). For this purpose, the substance was administered to 5-6 mice with initial doses above 1/20 LD50 and 1/50 LD50, the change in the behavior of the animals was monitored after the introduction of single, ascending doses of tirsinyl-amantadine on the 1st, 2nd i, 4th, 6th and 8th hour from the introduction, and for comparison, a control group of animals was carefully observed in parallel; c) Determination of acute toxicity - Mean lethal (lethal) dose (LD50), causing lethal outcome in 50% of animals, and in group 1 animals - the initial dissolution of the compound of the invention is done with Deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO), and subsequent dilutions are with water; in group II animals the stock solution and subsequent dilutions were made with DMSO only; Doses are calculated in milligrams of active substance per kilogram of body weight, administration is intraperitoneal within the allowable volumes for mice (0.10 ml / 10 g body weight). The working doses of the substance are: 10, 16, 32, 100, 150, 300, 320, 350, 500 and 1000 mg / kg. Mortality in the groups was monitored on the 1st, 24th and 48th hour of the administration of the substances. The control group received the same volume of solvent. The effective dose of ED50 is also determined; d) Study of prolonged toxicity of the compound - The following indicators were monitored: general condition, appetite, total weight, appearance, rough skin, salivation, exophthalmos (swelling of the eyes), mucosal discoloration (cyanosis, redness). reported on

I II ill № liluI II ill № lilu

5-ят и 7-ят ден след еднократното прилагане на веществото; е) Макроскопски оглед- В края на изследваните периоди (24-я и 48-я час и 5-я и 7-я ден) е направена дисекция на животните, като вътрешните им органи (черен дроб, бял дроб и стомах) са огледани макроскопски за евентуални поражения от прилаганите вещества; f) Реверзибилност на токсичните поражения- Проследява се също реверзибилността на токсичните поражения на 15-я ден след еднократното третиране.5th and 7th day after a single application of the substance; f) Macroscopic examination - At the end of the studied periods (24th and 48th hour and 5th and 7th day) the animals were dissected and their internal organs (liver, lungs and stomach) were examined macroscopically for possible damage by the applied substances; f) Reversibility of toxic lesions - The reversibility of toxic lesions on the 15th day after a single treatment is also monitored.

Резултатите от изследването за остра токсичност на съединението, съгласно настоящото изобретение показват че:The results of the acute toxicity study of the compound of the present invention show that:

LDsoe 320 mg/kg (интраперитонеално) при мишкиLDsoe 320 mg / kg (intraperitoneal) in mice

LDsoe 150 mg/kg (интраперитонеално) при плъховеLDsoe 150 mg / kg (intraperitoneally) in rats

Терапевтичен индекс- 20Therapeutic index - 20

NOEL - 5 mg/kg (интраперитонеално)NOEL - 5 mg / kg (intraperitoneally)

Limас - 8 mg/kg (интраперитонеално)Limass - 8 mg / kg (intraperitoneally)

EDso 16 mg/kg т.т. (интраперитонеално)ED50 16 mg / kg b.p. (intraperitoneally)

Резултатите от изследването за пролонгирана токсичност на съединението, съгласно изобретението показват известна пролонгирана токсичност, съчетана с невисока водна разтворимост, което предполага и забавен чернодробен метаболизъм.The results of the prolonged toxicity study of the compound according to the invention show some prolonged toxicity combined with low aqueous solubility, which also implies a slowed hepatic metabolism.

Резултатите от макроскопският оглед след прилагане на съединението, съгласно изобретението, показват слаби изменения във външния вид на черния дроб, липса на промени в белия дроб и реверзибилност на наблюдаваните изменения.The results of the macroscopic examination after administration of the compound according to the invention show slight changes in the appearance of the liver, no changes in the lungs and reversibility of the observed changes.

Пример 5. Изследване за неврофармакологична активност на съединението, съгласно изобретението, при здрави гризачиExample 5 Assay for neuropharmacological activity of a compound of the invention in healthy rodents

Всяка група съдържа по 6 бр. мъжки ICR полово зрели мишки (18-24 д) и по 6 бр. мъжки полово зрели плъхове Вистар (180- 230 д)- третирани еднократно с 16 mg/kg от съединението, съпоставяни с група от контролни животни. Животните са отглеждани в стандартните условия на Вивариума на Института по Невробиология на БАН. След едноседмична адаптация в условията на вивариума, животните са подложени на следните поведенчески тестове:Each group contains 6 pcs. male ICR sexually mature mice (18-24 g) and 6 pcs. male sexually mature Wistar rats (180-230 g) - treated once with 16 mg / kg of the compound compared to a group of control animals. The animals were bred in the standard conditions of the Vivarium of the Institute of Neurobiology of BAS. After one week of adaptation to the vivarium, the animals were subjected to the following behavioral tests:

а) Проследяване за промени в невромускулната координация при гризачи (Rotarod тест) по метода на Dunham и Miya [8]. Използван е апарат с диаметър на въртящия се лост 3.5 см и скорост на въртене 7 об/мин. Тестовия период е 3 мин, като в зависимост от нуждите на експеримента се отчита или продължителността на престой върху апарата или броя на паданията по време на наблюдавания период.a) Monitoring for changes in neuromuscular coordination in rodents (Rotarod test) by the method of Dunham and Miya [8]. An apparatus with a diameter of the rotating lever of 3.5 cm and a rotation speed of 7 rpm was used. The test period is 3 minutes, and depending on the needs of the experiment, either the length of stay on the device or the number of falls during the observed period is taken into account.

Ь) Проследяване за промени в ориентировъчното поведение при гризачи (“Hole board тест) по метода на Boissier и Simon [9]. За целта е използвана черна пластмасова плоскост с размери 50-50 см, на която има 16 симетрично разположени кръгли отвори с диаметър 3 см. Пластмасовата плоскост служи за под на кутия със стени с височина 25 см, а самата плоскост се намира на 10 см височина. Изследователското поведение наB) Monitoring for changes in rodent behavior (Hole board test) by the method of Boissier and Simon [9]. For this purpose, a black plastic panel with dimensions of 50-50 cm was used, on which there are 16 symmetrically arranged round holes with a diameter of 3 cm. The plastic panel serves as the floor of a box with walls 25 cm high, and the panel itself is 10 cm high . The research behavior of

ΗΗιΓΗι^ί.^ιΓΗι ^ ί.

мишките е проследявано в продължение на 3 мин от двама независими наблюдатели. Отчитан е броят на надничанията на поставеното в апарата животно.mice were monitored for 3 min by two independent observers. The number of peeks of the animal placed in the apparatus is reported.

с) Проследяване за промени в паметта и обучението при гризачи (step through тест; пасивно избягване с отрицателно подкрепление) по метода на Jarvik и Корр [10]. Апаратът е конструиран в Институт по Невробиология, БАН и се състои се от светла и тъмна камера, свързани помежду си с подвижна преграда. Подът в тъмната част на апарата е метална решетка, по която може да се подава токово дразнене със сила 1 мА и продължителност 1 секунда. Различаваме обучителна и тестова фаза на метода. По време на обучителната фаза животното се поставя върху платформа в светлата част на апарата след което се отваря подвижната преграда и то преминава в неговата тъмната част, където получава токово дразнение на лапите. В тази фаза се отчита времето (в секунди) за което животното е преминало от светлата в тъмната част на апарата. Животни престояли повече от една минута в светлата част на апарата се изключват от експеримента. Следва тестовата фаза. Степента на запаметяване на задачата да остане в светлата част на апарата се тества през различни периоди от време след обучителната тренировка. Отчита се времето (в секунди) за което животното остава върху платформата в осветената част. Теста се прави за период от 180 s.c) Tracking for changes in memory and training in rodents (step through test; passive avoidance with negative reinforcement) by the method of Jarvik and Corr [10]. The device was constructed at the Institute of Neurobiology, BAS and consists of a light and a dark chamber connected to each other by a movable barrier. The floor in the dark part of the device is a metal grid, through which a current irritation with a force of 1 mA and duration of 1 second can be applied. We distinguish between training and test phase of the method. During the training phase, the animal is placed on a platform in the light part of the apparatus, after which the movable barrier is opened and it passes into its dark part, where it receives current irritation of the paws. In this phase, the time (in seconds) for which the animal has passed from the light to the dark part of the apparatus is taken into account. Animals that have been in the light part of the apparatus for more than one minute are excluded from the experiment. The test phase follows. The degree of memorization of the task to stay in the light part of the device is tested in different periods of time after the training. The time (in seconds) for which the animal remains on the platform in the illuminated part is taken into account. The test is performed for a period of 180 s.

Ефектът от въздействието на еднократни дози от по 8, 16 и 32 mg/kg от съединението върху невромускулната координация при мишки на 3 часа (1А) и на 24 часа от прилагането (1В) е показан на Фиг. 1 по-долу.The effect of the effects of single doses of 8, 16 and 32 mg / kg of the compound on neuromuscular coordination in mice at 3 hours (1A) and 24 hours after administration (1B) is shown in Figs. 1 below.

А 3 час В 24 часAnd 3 o'clock In 24 o'clock

-7 150Ф 1002 Ф Q.-7 150F 1002 F Q.

CO БОКонтрола □ контролаCO BOCcontrol □ control

L-Tyr-AmL-Tyr-Am

Ф Q.Ф Q.

СО 50контрола мг/кг 16 мг/кг 32 мг/кг □ контрола i L-Tyr-AmCO 50 control mg / kg 16 mg / kg 32 mg / kg □ control i L-Tyr-Am

Р< 0.05 vs контролатаP <0.05 vs control

Фиг. 1FIG. 1

Въздействието на еднократни дози от съединението от по 8, 16 и 32 mg/kg върху паметта и обучението на мишки е показан на Фиг. 2 по- долу, където ефективността на дозата от 16 mg/kg е подчертано висока.The effect of single doses of the compound of 8, 16 and 32 mg / kg on memory and training of mice is shown in Figs. 2 below, where the dose efficacy of 16 mg / kg is markedly high.

I i iihtI i iiht

A. 3 часA. 3 hours

200200

* P< 0.05 vs контролата □ НЛ* P <0.05 vs control □ NL

M стлM stl

B. 24 часB. 24 hours

200200

* P< 0.05 vs контролата □ НЛ* P <0.05 vs control □ NL

I СТЛI STL

Фиг. 2FIG. 2

Където:Where:

НЛ - е начално латентно времеNL - is the initial latency

СТЛ - е степ тру латентно времеSTL - is step tru latent time

Ефектът на еднократна доза от 16 mg/kg от съединението върху ориентировъчното поведение на мишки е илюстриран с Фиг. 3, от която е видно, че този ефект е продължителен и се задържа до 24-тия час от началото на експеримента.The effect of a single dose of 16 mg / kg of the compound on the orientation behavior of mice is illustrated in FIG. 3, which shows that this effect is long-lasting and lasts until the 24th hour from the beginning of the experiment.

* Р< 0.05 vs базално нивото* P <0.05 vs basal level

Фиг. 3FIG. 3

Изследванията за неврофармакологична активност при 5- дневно третиране на здрави гризачи с доза 16 мг/кг от съединението, съгласно изобретението показват още, че подобно на амантадина, новосинтезираното съединение няма амнестичен ефект върху животните.Studies on neuropharmacological activity in a 5-day treatment of healthy rodents at a dose of 16 mg / kg of the compound of the invention further showed that, like amantadine, the newly synthesized compound had no amnestic effect on animals.

Пример 6. Изследване превантивните ефекти на съединението, съгласно изобретението, върху гризачи с модел на Болест на ПаркинсонExample 6. Study of the preventive effects of the compound according to the invention on rodents with a model of Parkinson's disease

Неврофармакологичната активност на съединението, съгласно изобретението, както и възможността той да има защитен ефект при заболяването е изследвана върху плъхове с модел на БП. Ефектът му е сравняван с този на утвърден лекарствен препарат от същата химична група- Амантадин, който се прилага превантивно като невропротектор в началото на лечението.The neuropharmacological activity of the compound according to the invention, as well as the possibility that it has a protective effect in the disease, was studied in rats with a BP model. Its effect was compared with that of an established drug from the same chemical group - Amantadine, which is used preventively as a neuroprotector at the beginning of treatment.

За създаването на експерименталният модел на Болестта на Паркинсон е използван невротоксина 6-хидрокси допамин (6-OHDA), който не преминава кръвно-мозъчната бариера и селективно уврежда катехоламинергичната невротрасмисия на ниво централна и периферна нервна система. За нуждите на експеримента са използвани мъжки, полово зрели плъхове от породата Вистар с тегло 250-300 гр, които се упояват с хлоралхидрат (400 мг/кг, и.п) и се фиксират на стереотаксичен апарат. Невротоксина 6OHDA (10 рд/ 2μΙ), се инжектира едностранно в десен стриатум при координати АР = 0 mm, LR = 3.5 mm, Н= 5 mm, спрямо брегмата и черепната повърхност [11]. При контролните животни се прави отвор с координати, отговарящи на striatum, като се инжектира 2 μΐ 0.9% NaCI. Във всички групи петдневните интраперитонеални инжектирания предшестват хирургичната интервенция и стереотаксичното прилагане на токсина 6-OHDA. Опитните животни са разделени в експериментални групи, показани на Таблица 2 по-долу:The neurotoxin 6-hydroxy dopamine (6-OHDA), which does not cross the blood-brain barrier and selectively impairs catecholaminergic neurotransmission at the central and peripheral nervous system, was used to create the experimental model of Parkinson's disease. For the purposes of the experiment, male, sexually mature Wistar rats weighing 250-300 g were used, which were anesthetized with chloral hydrate (400 mg / kg, i.p.) and fixed on a stereotactic apparatus. The neurotoxin 6OHDA (10 ppm / 2μΙ) was injected unilaterally into the right striatum at coordinates AP = 0 mm, LR = 3.5 mm, H = 5 mm, relative to the bregma and cranial surface [11]. In control animals, a striatum was made with coordinates corresponding to the striatum by injecting 2 μΐ 0.9% NaCl. In all groups, five-day intraperitoneal injections precede surgery and stereotactic administration of the toxin 6-OHDA. Experimental animals were divided into experimental groups shown in Table 2 below:

Таблица 2Table 2

Групи Groups Стереотаксично инжектиране (стриатум) Stereotactic injection (striatum) Интраперитонеално третиране (5 дни) Intraperitoneal treatment (5 days) SO (фалшиво оперирани) SO (falsely operated) 0.9% NaCI (2 μ|) 0.9% NaCl (2 μ |) 0.9% NaCI 0.9% NaCl 6-OHDA 6-OHDA 6-OHDA (10 μ9/2 μΙ) 6-OHDA (10 μ9 / 2 μΙ) 0.9% NaCI 0.9% NaCl 6-OHDA + амантадин 6-OHDA + amantadine 6-OHDA (10 pg/2 μΙ) 6-OHDA (10 pg / 2 μΙ) амантадин (40 mg/kg) amantadine (40 mg / kg) 6-OHDA + Съединение по изобретението 6-OHDA + Compound of the invention 6-OHDA (10 pg/2 μΙ) 6-OHDA (10 pg / 2 μΙ) Съединение по изобретението (16 mg/kg) Compound of the invention (16 mg / kg)

Приложените поведенчески и биохимични методи на изследване на третираните животни показват, че съединението, съгласно настоящото изобретение, намалява значимо броя на контралатералните ротации /при апомофиновия тест/ спрямо 6-OHDA група, което демонстрира убедително протективния ефект на веществото; подобрява също значимо паметовите процеси, нарушени от БП в групата с 6-OHDA /степ тру тест/; намалява оксидативния стрес чрез намаляване на липидна пероксидация в мозъка на плъхове с модел на ПБ и не повлиява мозъчната ацетилхолинестеразна активност. Освен това, новосинтезираното вещество не предизвиква кожни лезии, за разлика от третираните с референта Амантадин животни.The applied behavioral and biochemical methods of examination of the treated animals show that the compound according to the present invention significantly reduces the number of contralateral rotations (in the apomoffin test) compared to the 6-OHDA group, which convincingly demonstrates the protective effect of the substance; also significantly improves the memory processes disturbed by BP in the group with 6-OHDA / step tru test /; reduces oxidative stress by reducing lipid peroxidation in the brain of rats with a PB model and does not affect brain acetylcholinesterase activity. In addition, the newly synthesized substance did not cause skin lesions, unlike animals treated with the reference Amantadine.

Установените значими невробиологични и биохимични ефекти върху мишки и плъхове, са съизмерими с тези на референта Амантадин, но в значително по-ниски дози (около 2,5 пъти), което е предимство на новосинтезираното вещество; върху експериментален модел на плъхове с 6-OHDA защитните ефекти на съединението, съгласно изобретението, срещу БП също са много добри - те са съизмерими, а в някои случаи превъзхождат тези на референта Амантадин, но приложени в значително по-ниски дози.The observed significant neurobiological and biochemical effects on mice and rats are comparable to those of the reference Amantadine, but in significantly lower doses (about 2.5 times), which is an advantage of the newly synthesized substance; on an experimental model of rats with 6-OHDA the protective effects of the compound according to the invention against BP are also very good - they are comparable, and in some cases superior to those of the reference Amantadine, but administered at significantly lower doses.

Литература:Literature:

1. Grelak, R. Р., Clark, R., Stump, J. Μ., & Vernier, V. G. (1970). Amantadine-dopamine interaction: possible mode of action in Parkinsonism. Science, 169(3941), 203-204.1. Grelak, R. R., Clark, R., Stump, J. Μ., & Vernier, V. G. (1970). Amantadine-dopamine interaction: possible mode of action in Parkinsonism. Science, 169 (3941), 203-204.

2. Schwab, R. S„ Poskanzer, D. C„ England, A. C„ & Young, R. R. (1972). Amantadine in Parkinson's disease: review of more than two years' experience. Jama, 222(7), 792-795.2. Schwab, R. S „Poskanzer, D. C„ England, A. C „& Young, R. R. (1972). Amantadine in Parkinson's disease: a review of more than two years' experience. Pit, 222 (7), 792-795.

3. Stanicova, J., Miskovsky, P., & Sutiak, V. (2001). Amantadine: an antiviral and antiparkinsonian agent. Vet. Med. Czech, 46, 244-256.].Bak I., Hassler R., Kim J. and K. Kataoka (1972). Amantadine Actions on Acetylcholine and GABA in Striatum and Substantia Nigra of Rat in Relation to Behavioral Changes. Journal of Neural Transmission 33:45-61.3. Stanicova, J., Miskovsky, P., & Sutiak, V. (2001). Amantadine: an antiviral and antiparkinsonian agent. Vet. Med. Czech, 46, 244-256.]. Bak I., Hassler R., Kim J. and K. Kataoka (1972). Amantadine Actions on Acetylcholine and GABA in Striatum and Substantia Nigra of Rat in Relation to Behavioral Changes. Journal of Neural Transmission 33: 45-61.

4. Knor R., Arnold T., Bannwarth W., Gillessen D., (1989). New coupling reagents in peptide chemistry, Tetrahedron Letters, 30, 15, 1989, 1927-1930.4. Knorr R., Arnold T., Bannwarth W., Gillessen D., (1989). New coupling reagents in peptide chemistry, Tetrahedron Letters, 30, 15, 1989, 1927-1930.

5. Di Francisco-Donoghue J., Rabin E„ Lamberg E. M„ Werner G.W., Effects of tyrosine on Parkinson's disease: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, 2014, Clinical Practice, https://doi.org/10.1002/mdc3.12082.5. Di Francisco-Donoghue J., Rabin E „Lamberg E. M„ Werner GW, Effects of tyrosine on Parkinson's disease: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, 2014, Clinical Practice, https: // doi. org / 10.1002 / mdc3.12082.

6. Puppo, A. & Halliwell, B. (1988). Formation of hydroxyl radicals from hydrogen peroxide in the presence of iron. Is haemoglobin a biological Fenton reagent?. Biochemical Journal 249(1), 185-190.6. Puppo, A. & Halliwell, B. (1988). Formation of hydroxyl radicals from hydrogen peroxide in the presence of iron. Is hemoglobin a biological Fenton reagent ?. Biochemical Journal 249 (1), 185-190.

7. Beauchamp, C., & Fridovich, I. (1971). Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gels. Analytical biochemistry, 44^), 276-287.7. Beauchamp, C., & Fridovich, I. (1971). Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gels. Analytical Biochemistry, 44 ^), 276-287.

8. Dunham N. and T. Miya (1957). A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice. J Am Pharm Assoc Am Pharm Assoc., 46(3):208-209.8. Dunham N. and T. Miya (1957). A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice. J Am Pharm Assoc Am Pharm Assoc., 46 (3): 208-209.

9. Boissier J. and P. Simon (1964). “L¹ utilisation d' une reaction particulire de la souris (Methode de la planche a trous) pour 1' etude des medicaments psychotropes”Therapie XIX 571-589.9. Boissier J. and P. Simon (1964). “L ¹ utilization of a particular reaction of the sourdough (Method of the tropical plan) for the study of psychotropic drugs” Therapie XIX 571-589.

10. Jarvik M. and R. Kopp (1967). An improved one-trial passive avoidance learning situation. Psychol Rep., 21(1):221-224.10. Jarvik M. and R. Kopp (1967). An improved one-trial passive avoidance learning situation. Psychol Rep., 21 (1): 221-224.

11. Paxinos G. and C. Watson (1998). The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates Academic Press New York NY USA, ISBN: 9780125476126.11. Paxinos G. and C. Watson (1998). The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates Academic Press New York NY USA, ISBN: 9780125476126.

Claims (5)

ПретенцииClaims 1. Адамантаново производно c формула I:1. Adamantan derivative of formula I: OHOH (I)(I) 2. Метод за получаване на адамантановото производно с формула (I) съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че трет-бутилоксикарбонил-тирозинил(третбутил)-ОН се разтваря в дихлорометан и към полученият разтвор се добавя триетиламин, добавя се 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламинов тетрафлуорборат при непрекъснато разбъркване, този разтвор се смесва с предварително разтворен в дихлорметан амантадин хидрохлорид и след приключване на реакцията се извършва промиване с 4%-ен разтвор на NaHCOs, NaCI и вода; органичният слой се суши с безводен МагБОд, разтворителят се изпарява и към полученият трет-бутилоксикарбонил-О-трет-бутил-тирозинил-амантадин, разтворен в дихлорметан при 0°С, се прибавя трифлуорооцетна киселина; разтворителят се изпарява, добавя се диетилов етер и към получената кристална сол се добавя концентриран NH4OH, a pH на разтвора се довежда до 7.0.Process for the preparation of the adamantane derivative of formula (I) according to Claim 1, characterized in that tert-butyloxycarbonyl-tyrosinyl (tert-butyl) -OH is dissolved in dichloromethane and triethylamine is added to the resulting solution, 2- ( 1H-Benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylamine tetrafluoroborate with continuous stirring, this solution is mixed with pre-dissolved in dichloromethane amantadine hydrochloride and after completion of the reaction is washed with 4% NaHCOs solution. , NaCl and water; the organic layer was dried over anhydrous MagBOD, the solvent was evaporated and trifluoroacetic acid was added to the resulting tert-butyloxycarbonyl-O-tert-butyl-tyrosinyl-amantadine dissolved in dichloromethane at 0 ° C; the solvent was evaporated, diethyl ether was added and concentrated NH4OH was added to the resulting crystalline salt, and the pH of the solution was adjusted to 7.0. 3. Адамантаново производно съгласно претенции 1 и 2, приложимо за профилактика и лечение на заболявания, свързани с нарушение на биосинтеза и екскрецията на допамин.Adamantan derivative according to claims 1 and 2, useful for the prevention and treatment of diseases associated with impaired biosynthesis and dopamine excretion. 4. Адамантаново производно съгласно претенция 3, приложимо за профилактика и лечение на Болестта на Паркинсон.Adamantan derivative according to claim 3, useful for the prevention and treatment of Parkinson's disease. 5. Адамантаново производно съгласно претенции 1 и 2, приложимо за профилактика и лечение на вирусни заболявания.Adamantan derivative according to claims 1 and 2, useful for the prevention and treatment of viral diseases.