Nouveaux agents r�diodiagnostiques marqués au technétium-99m
pour l'exploration du foie et de la moelle osseuse et leur procédé
de préparation.
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pour l'exploration du foie et de la moelle osseuse, ainsi que leur préparation. L'invention concerne en particulier des agents radiodiagnostiques marqués au technétium qui contiennent du phytate de sodium et l'ion stanneux chélaté avec un oxalate, ainsi que des procédés permettant de les obtenir. Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne des agents radiodiagnostiques non radio-actifs contenant du phytate de sodium et l'ion stanneux chélaté avec un oxalate, ces agents radiodiagnostiques pouvant être utilisés pour l'exploration du foie et de la moelle osseuse lorsqu'ils sont marqués avec du technétium-99m, ainsi qu'un procédé permettant de les obtenir.
Le technétium-99m est devenu un outil extrêmement intéressant à utiliser dans des applications médicales, notamment comme radio-élément traceur dans la recherche médicale et pour le diagnostic. La période du technétium-99m (6 heures) réduit l'exposition des organes à l'irradiation ; son énergie de rayonnement gamma (140 KeV) permet non seulement une pénétration suffisante des tissus, mais est également facile à collimater ; l'absence de rayonnement bêta permet d'administrer des quantités du radio-élément de l'ordre du millicurie par voie orale ou par injection au patient sans atteindre la dose nocive de rayonnement.
En raison de ces caractéristiques physiques, le technétium-
99m est souvent utilisé comme radiocolloide ou sous une forme complexée ou en association avec des supports convenables pour le diagnostic in vivo, par exemple pour des examens par scintigraphie du foie, du poumon, du sang en circulation, des os et des tumeurs. Du fait que le diagnostic ne requiert aucune opération, la popularité de cette méthode n'a fait que croître au cours des dernières années.
Du point de vue chimique, le technétium appartient au groupe VII-A du Tableau Périodique des Eléments et il y a
de nombreuses analogies entre sa chimie et celle du manganèse
et du rhénium. En solution aqueuse, la forme la plus stable du
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technétium à se combiner avec d'autres éléments lorsqu'il est réduit aux degrés inférieurs d'oxydation le rend intéressant à utiliser aussi bien sous la forme chélatée avec un support convenable pour des études de la fonction du rein ou du sang et aussi lorsqu'il est emprisonné physiquement sous la forme d'un colloïde pour des études du foie et sous la forme de particules pour l'exploration des poumons. Le technétium est généralement utilisé sous la forme du pertechnétate de sodium en solution saline isotonique, pour le marquage d'agents destinés au diagnostic.
Des complexes marqués au technétium-99m, contenant plusieurs composants choisis entre le chlorure et le gluconate stanneux, un mercaptan et un thiocétal, le citrate de sodium, ont été utilisés dans la scintigraphie rénale. En outre, on a utilisé pour l'exploration.du foie des colloïdes radioactifs tels que des colloïdes au soufre marqués au 99mTc, préparés à partir de thiosulfate de sodium ou d'hydrogène sulfuré,
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au chlorure stanneux marqués au 99mTc et des colloïdes au phytate de 99m Te, préparés à partir de phytate de sodium et de chlorure stanneux. Des colloïdes à l'oxyde stanneux préparés à partir de chlorure stanneux, tamponnés au phosphate de sodium, ont été utilisés pour la visualisation de la moelle osseuse.
L'un des buts de la présente invention-est de trouver des agents radiodiagnostiques marqués au technétium-99m qui puissent être utilisés comme agents bivalents de visualisation du foie et de la moelle osseuse, ainsi qu'un procédé permettant de les obtenir. L'invention concerne aussi un colloïde stable contenant de l'oxalate stanneux et du phytate de sodium et un procédé de préparation de ce colloïde. Elle a aussi pour but d'offrir un réactif à l'oxalate stanneux et au phytate de sodium sous emballage, pour la préparation de colloïdes à stabilité dimensionnelle, marqués au technétium-99m, qui puisse être utilisé de façon simple avec des solutions salines classiques de <EMI ID=5.1>
tages de la présente invention ressortiront de la description détaillée, donnée ci-après, de formes préférées de réalisation des colloïdes, du réactif sous emballage et des procédés permettant leur préparation.
L'invention est basée sur la découverte de l'aptitude de l'oxalate stanneux et du phytate de sodium à produire, en mélange dans les proportions convenables, un colloïde radioactif stable qui peut être lyophilisé. Bien que la nature de
ce mécanisme ne soit pas entièrement élucidée, on suppose que
le colloïde radio-actif est formé in vitro et non in vivo. Lorsque le produit lyophilisé est reconstitué avec des solutions salines de technétium-99m, il est formé un colloïde radio-actif en particules inférieures à environ 5 microns. Ce colloïde radioactif, injecté par voie intraveineuse à un patient, est emprisonné dans les cellules phagocytaires de Kupffer contenues dans le foie. Ce même produit lyophilisé peut être reconstitué avec de petites quantités de solution saline ou de solution aqueuse et autoclave. Le colloïde autoclave est en particules de diamètre réduit à moins d'environ 1 micron, il peut être marqué au technétium-99m et on peut l'utiliser pour la visualisation de la moelle osseuse par emprisonnement des particules réduites dans les cellules réticulo-endothéliales de la moelle osseuse.
On a découvert que l'oxalate stanneux forme un colloïde supérieur qui est plus stable à l'oxydation à l'air et
à l'autoclavage que ne le sont des colloïdes au phytate d'étain pour lesquels on a utilisé le chlorure stanneux. En général, les composés stanneux sont facilement oxydés en composés stanniques en solution aqueuse. En outre, en l'absence d'anions fortement complexants, l'étain au degré d'oxydation +2 est largement hydrolysé en solution aqueuse. Les composés d'étain hydrolysés et oxydés en solution aqueuse donnent des- composés insolubles. Ces composés insolubles empêchent la réaction de l'étain dans la préparation d'un agent radiodiagnostique. On a remédié à ce problème en utilisant un ion stanneux chélaté avec un ion oxalate. Par chélation avec l'étain, l'ion oxalate empêche sensiblement une oxydation nuisible de l'étain et la formation d'ions stanniques en solution.
Sinon, des agents oxydants tels que des peroxydes, des radicaux hydroxyde , etc. formés comme conséquence de la radiolyse, consommeraient de l'étain ionisé. Toutefois, conformément à l'invention, le phénomène est empêché par l'utilisation d'oxalate stanneux qui n'est pas fortement ionisé en solution aqueuse, contrairement au chlorure stanneux.
Conformément'à la présente invention, un agent radiodiagnostique qui convient pour l'exploration du foie lorsqu'il est marqué au technétium-99mTc peut être préparé par le procédé qui consiste à dissoudre une première quantité prédéterminée de phytate de sodium dans une solution aqueuse sensiblement exempte d'oxygène entraîné ; à dissoudre une seconde quantité prédéterminée d'oxalate stanneux dans un acide non oxydant, la première quantité prédéterminée étant au moins équivalente, en poids, à la seconde quantité prédéterminée ; à faire entrer la solution de phytate de sodium en contact avec la solution d'oxalate stanneux pour former une solution contenant un oxalate-phytate ; et à ajuster le pH de la solution d'oxalatephytate à une valeur comprise entre environ 4 et environ 7, de préférence à environ 6.
La seconde quantité prédéterminée doit être au moine suffisante pour réduire chimiquement la quantité totale présente de technétium.
Il peut être désirable d'ajuster la concentration de la solution à une concentration prédéterminée en phytate de sodium-oxalate stanneux par ml de solution. Il peut aussi être désirable de lyophiliser la solution en une matière solide à une température inférieure à environ 30[deg.]C, de préférence comprise entre environ 30 et environ -10[deg.]C lorsqu'il est désirable de conserver cette solution pendant des mois avant usage, ou bien la solution peut être utilisée sous la forme liquide pendant une plus courte période. Lorsqu'on désire obtenir une solution utilisable dans l'exploration du foie, le résidu lyophilisé peut être redissous dans une solution aqueuse.
Il est désirable que l'oxygène entraîné ou dissous éliminé de la solution aqueuse dans une proportion suffisante
-pour empêcher l'oxydation de l'étain stanneux en étain stannique. Comme on l'a déjà indiqué, cette oxydation empêcherait la réduction complète du technétium. Par conséquent, une solution aqueuse peut être purgée avec un gaz non oxydant qui remplace et élimine l'oxygène gazeux entraîné. Le gaz non oxydant ne doit pas être absorbé en quantité appréciable par la solution aqueuse et il ne doit pas non plus être toxique. Des gaz non oxydants convenables comprennent l'azote, l'anhydride carbonique, les gaz nobles, etc.
Des acides non oxydants convenables comprennent les acides chlorhydrique, acétique, sulfurique, phosphorique, etc.
Conformément à l'invention, du phytate de sodium est présent en une quantité qui équivaut au moins sensiblement, en poids, à l'oxalate stanneux. De préférence, le rapport en poids du phytate de sodium à l'oxalate stanneux est au moins égal à environ 3:1, notamment au moins égal à 13:1 et très avantageusement compris entre environ 3:1 et environ 20:1. Pour des rapports en poids du phytate de sodium à l'oxalate stanneux de moins d'environ 1:1, la stabilité du colloïde radio-actif produit conformément au procédé de l'invention est réduite, ce qui entraîne des fluctuations indésirables du diamètre des particules et du technétium non lié.
Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne un colloïde qui convient pour l'exploration de la moelle osseuse
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paré par autoclavage de la solution ou du produit lyophilisé reconstitué d'oxalate stanneux et de phytate de sodium à une température prédéterminée pendant une période également prédéterminée, pour former un colloïde dont les particules ont des diamètres inférieurs à environ 1 micron et dont le pH est compris entre environ 3 et environ 7.
Dans une forme avantageuse de réalisation du procédé de l'invention, du phytate de sodium est dissous dans de l'eau purgée à l'azote. L'oxalate stanneux est dissous^dans un acide non oxydant, de préférence l'acide chlorhydrique concentré, <EMI ID=7.1>
sodium. On ajuste le pH entre environ 4 et environ 7, de préférence à environ 6, par addition d'une base forte, de préférence une solution normale d'hydroxyde de sodium. On ajuste le volume de la solution à une valeur prédéterminée avec de l'eau purgée
à l'azote et filtrée. La solution est distribuée en portions aliquotes de 1 cm<3> dans des fioles à sérum et on peut l'utili- ser sous la forme liquide, mais il est préférable de la lyophiliser à une température inférieure à environ 30[deg.]C et de préférence comprise entre environ 30 et environ -10[deg.]C.
Dans une autre forme de réalisation de l'invention, une solution ou un produit lyophilisé reconstitué d'oxalate stanneux et de phytate de sodium peut être autoclave et on peut
y ajouter jusqu'à environ 5 ml de solution saline de technétium-
99m. Ce colloïde marqué peut être utilisé pour la visualisation de la moelle osseuse. Dans cette forme de réalisation du procédé de l'invention, la solution d'oxalate stanneux et de phytate
de sodium ou le produit lycphilisé reconstitué d'oxalate stanneux et de phytate de sodium (qui a été reconstitué avec environ 0,5 à environ 1 ml de solution saline) est autoclave à une température d'environ 116 à environ 143[deg.]C, de préférence à environ
132[deg.]C pendant environ 1 à environ 6 heures, mais de préférence pendant environ 2 heures et à des pressions d'environ 0,7 à environ 3,0 bars, de préférence à environ 1,95 bar.
Pour préparer l'agent radiodiagnostique destiné à la moelle osseuse. on peut ajouter au colloïde autoclave un volume allant jusqu'à environ 5 ml de technétium-99m sous la forme du pertechnétate de sodium en solution saline. Le volume de solution injecté au patient dépend de la concentration en activité
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L'invention est illustrée par les exemples suivants.
Exemple 1
On prépare de la manière indiquée ci-après un colloïde à l'oxalate stanneux : On dissout 200 mg d'oxalate stanneux
(SnC204) dans 100 ml d'eau qui a été purgée à l'azote. 10 ml de <EMI ID=9.1>
la solution formée en dissolvant l'oxalate stanneux dans de l'eau purgée à l'azote sont dilués à 100 ml avec de l'eau qui
a aussi été purgée à l'azote. De cette manière, le pH de la solu-
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trée sur un filtre de 0,22 micron et 1 ml de la solution filtrée est introduit dans une ampoule à sérum de 10 cm . De même, des échantillons de la solution filtrée sont également lyophilisés.
Les échantillons liquides et les échantillons lyophilisés sont marqués avec 3 cm<3> de 99mTc à faible concentration que l'on utilise dans une épreuve biologique chez la souris et dans des analyses chromatographiques. On détermine le pourcentage de rendement de liaison du procédé de marquage chimique et la stabilité de la préparation par chromatographie ascendante sur papier, en utilisant des bandes de papier "Whatman" N[deg.] 1 dans
du méthanol à 85 % et en examinant les résultats sur un analyseur radiochromatographique. Le titre biologique chez la souris est déterminé par injection de 0,2 ml de solution dans les veines caudales de souris qu'on sacrifie ensuite après des périodes d'absorption de 30 minutes. Les résultats sont reproduits sur
le tableau I suivant :
TABLEAU I
Distribution de l'oxalate stanneux marqué au 99m�c
dans les tissus, avant et après la lyophilisation
Titre biologique chez
la souris,
Activité injectée, %
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de 30 minutes.
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Comme le montrent les résultats donnés sur le tableau I, après la lyophilisation, un colloïde à l'oxalate stanneux ne se prête pas à une utilisation satisfaisante comme agent d'investigation du foie parce qu'il y a une agglomération de particules qui provoque une absorption accentuée dans le poumon.
Exemple 2
On ajoute du phytate de sodium pour stabiliser un colloïde à l'oxalate stanneux conformément au mode opératoire suivant : On purge 90 ml d'eau à l'azote pendant 1 heure. On ajuste le pH de l'eau purgée à 3,0 par addition d'acide chlorhydrique décinormal. On dissout 400 mg de phytate de sodium dans l'eau purgée à l'azote, ce qui élève le pH à environ 10. On réajuste le pH de la solution à 3,0 par addition d'acide chlo-
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corpore en agitant à la solution jusqu'à ce qu'il y soit dissous. On introduit ensuite 1 ml de la solution, à travers un filtre
de 0,22 micron, dans une ampoule à sérum de 10 cm<3> qu'on lyophilise ensuite.
La préparation de phytate de sodium et d'oxalate stanneux décrite ci-dessus est expérimentée par une épreuve biologique chez la souris. L'absorption par le poumon est très faible et l'absorption par le foie est satisfaisante. Comparative-
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pas été utilisé, on peut remarquer que l'addition de phytate de sodium stabilise le diamètre des particules du colloïde à l'oxalate et empêche une forte absorption par le poumon. La prépara-
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concentration et injectée à 4 souris. Les résultats d'une épreuve biologique portant sur des souris sont récapitulés sur le Tableau II suivant :
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Distribution de l'oxalate stanneux-phytate de
sodium dans les tissus
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* Moyenne de 4 souris, durée d'absorption de 30 minutes.
Exemple 3
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3 lots, on maintient toutefois constante la concentration en phytate de sodium à 400 mg par 100 ml, tandis qu'on fait varier la concentration utilisée en oxalate stanneux entre 10 et 40 mg par 100 ml. Les trois concentrations éprouvées sont de 10, 20
et 40 mg d'oxalate stanneux par 100 ml. Ces trois concentrations donnent toutes des résultats similaires dans l'épreuve biologique chez la souris après une période d'absorption de 30 minutes. Toutefois, les résultats chromatographiques montrent que la concentration de 10 mg d'oxalate stanneux par 100 ml ne donne qu'un
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sant, tandis que la concentration à 40 mg d'oxalate stanneux par
100 ml donne un rendement de liaison de 91 % de 99mTc, ce qui est préférable. Par conséquent, une quantité d'au moins 10 mg d'oxalate stanneux est nécessaire pour réduire chimiquement la quantité totale du technétium présent.
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loïde à l'oxalate stanneux
En suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple
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marqué au 99mTc. Dans la préparation de ces trois lots, la concentration en oxalate stanneux est toutefois maintenue constante
à 20 mg par 100 ml, tandis que la concentration du phytate de sodium (hexaphosphate d'inositol) varie entre 100 et 600 mg/100 ml. On utilise des concentrations de 100, 400 et 600 mg de phytate
de sodium par 100 ml. Des autoradiographies auxquelles on soumet des souris montrent une excellente absorption par le foie ; les résultats d'une épreuve biologique effectuée sur des souris après une période d'absorption de 30 minutes sont reproduits sur le tableau III suivant :
TABLEAU III
Variation de la concentration en phytate d'un
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Titre biologique chez la souris, % de l'activité injectée
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<EMI ID=25.1>
Exemple 5
En utilisant le mode opératoire décrit dans l'exemple 2, on prépare six lots de colloïde à l'oxalate stanneux et au phytate de sodium marqué au 99mTc. Toutefois, dans la préparation de ces lots, on utilise de l'acide chlorhydrique normal pour ajuster le pH des produits finals à 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 et, respectivement, 8,0 avant la lyophilisation. Ensuite, des portions aliquotes de chacun des lots sont introduites dans des ampoules et lyophilisées. Des autoradiographies des souris montrent une excellente absorption par le foie et donnent des résultats comparables, à ces divers pH. Les résultats d'une épreuve biologique chez la souris après 30 minutes d'absorption sont ré-
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TABLEAU IV
Effet du pH sur le colloïde à l'oxalate stanneux
Titre biologique chez
la souris, % de l'activité injectée
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Exemple 6
En utilisant le mode opératoire suivant, on prépare un lot de 200 ml de colloïde au phytate de sodium et à l'oxalate stanneux. On purge 200 ml d'eau avec de l'azote pendant 45 minutes dans un ballon de 250 ml- à trois tubulures. On pèse 800 mg de phytate de sodium et on l'introduit dans le ballon en agitant,
ce qui donne un pH d'environ 10. On agite la solution pendant
10 minutes ou jusqu'à ce que le phytate se soit dissous. On ajuste
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2,7 ml). On pèse 80 mg d'oxalate stanneux et on l'ajoute au ballon en agitant constamment la solution. Au bout d'environ 20 minutes, <EMI ID=29.1>
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La solution entière est filtrée sur une membrane filtrante "millipore" de 0,22 micron. Des portions aliquotes de 1 cm<3> du réactif final sont introduites dans des ampoules à sérum de 10 cm<3> qui sont placées dans un appareil de lyophilisation,puis lyophilisées
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heures. Le produit lyophilisé contient 4 mg de phytate de sodium, 0,4 mg d'oxalate stanneux et du chlorure de sodium qui est formé lorsqu'on ajuste le pH.
On-fait incuber le réactif final pendant 30 minutes. Un agent radiodiagnostique au technétium-99m qui convient pour l'investigation du foie est préparé par addition de 3 ml
de 99mTc à faible concentration (30 mCi de 99mTc) au réactif final. On injecte 0,2 cm<3> de solution à 20 souris et après divers intervalles de temps, on sacrifie les souris et on effectue une épreuve biologique. Les résultats du tableau V suivant prouvent que l'agent radiodiagnostique est encore dans le foie au bout de 6 heures, ce qui est comparable aux autres prépara-
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biologique chez la souris sont récapitulés sur le tableau V suivant :
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dant 6 heures sur des souris, en utilisant le phytate de sodium-
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centration. La matière a été testée par chromatographie dans du méthanol à 85 % et elle a montré un rendement de liaison supérieur à 99 %. Le sang a été recueilli dans les capillaires-, pesé, soumis à un comptage et comparé avec une solution étalon
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En outre, on a effectué une étude de clairance sanguine de 6 heures sur un lapin en utilisant l'oxalate stanneuxphytate de sodium reconstitué avec 3 cm de 99mTc à faible concentration. On a injecté au lapin 0,4 cm du colloïde marqué au 99mTc. Des échantillons de sang ont été recueillis à divers intervalles de temps et comparés avec une solution étalon de
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prélevés, pesés puis l'activité par g de tissu a été déterminée. Le rapport rate:foie était égal à 1,1:1, ce qui constitue un rapport favorable pour la visualisation de ces organes. Les résultats de la clairance sanguine chez les souris et un lapin sont récapitulés sur le tableau VI suivant :
TABLEAU VI
Clairance sanguine du phytate de sodium-oxalate stanneux*
chez des souris et un lapin
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* reconstitué à un pH égal à 6,0.
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Dans un autre test, l'oxalate stanneux-phytate de sodium préparé et marqué au 99mTc comme décrit ci-dessus a été injecté à six souris. Les souris ont été placées dans une cage
à métabolisme et des échantillons collectifs d'urine ont été périodiquement soumis à des comptages et la clairance urinaire de l'activité de 99mTc a été comparée à l'activité injectée. Les résultats sont récapitulés sur le tableau VII suivant :
TABLEAU VII
Clairance urinaire du phytate de sodium-oxalate
stanneux chez la souris*
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* Reconstitué à un pH égal à 6,0.
Une ampoule d'oxalate stanneux-phytate de sodium
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Le composé marqué a été analysé par chromatographie. Au bout de 30 minutes, le taux de fixation était de 99 % ; au bout de 6 heures, il était de 98 % ; et après 24 heures, 90 % du 99mTc étaient encore liés. Au bout de 24 heures, on a effectué un titrage biologique chez la souris sur le composé reconstitué. Les résultats indiquent que le colloïde d'oxalate stanneuxphytate de sodium peut être utilisé au moins jusqu'à 24 heures
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sultats sont récapitulés sur le tableau VIII suivant :
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TABLEAU VIII
Test de stabilité après 24 heures sur l'oxalate
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* Moyenne de deux souris, durée d'absorption de 30 minutes.
Exemple 7
On prépare un lot important de production d'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal en suivant le mode opératoire indiqué ci-après. On introduit un poids de 373 mg d'oxalate stanneux dans une fiole de 5 cm<3> contenant un petit barreau magnétique d'agitation. On ajoute 3,0 cm<3> d'acide chlorhydrique concentré et on agite la solution jusqu'à ce que l'oxalate stanneux se soit dissous. On introduit à la pipette 2,0 ml de cette solution dans un ballon de 1 litre contenant 2,4 g de phytate de sodium dissous dans 500 ml d'eau que l'on a purgée à l'azote gazeux. On ajuste le pH de la solution à 6,0 par addition d'hydroxyde de sodium 1N (environ 15 ml). On dilue la solution à 600 ml avec de l'eau purgée à l'azote et on agite jusqu'à ce qu'elle devienne limpide. La solution limpide est filtrée sur un filtre "millipore" de 0,22 micron et répartie en portions aliquotes
de 1 cm<3> dans 10 ampoules à sérum. Les ampoules sont placées dans un congélateur puis lyophilisées. On effectue un titrage biologique chez la souris pendant une période d'absorption de 30 minutes et on obtient des résultats satisfaisants, les analyses chromatographiques montrant un taux de fixation du 99mTc de 94 %. Les résultats sont récapitulés sur le tableau IX suivant :
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Lot de production à grande échelle d'oxalate
stanneux-phytate de sodium colloïdal
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Exemple 8
En utilisant le mode opératoire décrit dans l'exemple
7, on prépare un lot d'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal en vue d'une comparaison avec un réactif non radio-actif destiné à l'investigation du foie et un phytate stanneux du commerce
(produit par la firme England Nuclear,Radiopharmaceutical Division, Atomlight Place, North Bellerica, Massachusetts 01862) contenant
20 mg de phytate de sodium et 2 mg de chlorure stanneux par ampoule. Chaque produit est reconstitué avec 4 ml de 99mTc à faible concentration (10 mCi/ml). Une analyse chromatographique
et des épreuves biologiques après une période d'absorption de
30 minutes sont effectuées sur les deux réactifs. Le taux de fixation du 99mTc est satisfaisant pour les deux réactifs. Toutefois, les résultats de l'épreuve biologique montrent une plus grande stabilité et une faible absorption dans les poumons et le rein après l'injection dans le cas de l'agent d'investigation du foie marqué au technétium-99m, c'est-à-dire l'oxalate stanneux-phytate de sodium au 99m.Tc, comparativement à la forte absorption dans les poumons et le rein lorsque l'agent d'investigation du foie marqué au technétium-99m, à savoir le phytate stanneux produit par la firme New England Nuclear, est utilisé. L'épreuve biologique indique qu'il y a moins de pertechnétate libre lorsque l'ion stanneux a été chélaté avec un oxalate. La forte absorption dans le rein et le poumon est indésirable de la part d'un agent d'in-� � � " ,
<EMI ID=49.1>
l'exploration de cet organe. Les résultats de ces essais sont récapitulés sur le tableau X suivant
TABLEAU X
Etude comparative entre deux produits radiodiagnostiques destinés à l'investigation du
foie
Titre biologique chez
la souris, % de recouvrement de l'activité
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Exemple 9
En utilisant le mode opératoire décrit ci-dessus dans l'exemple 7 pour la préparation d'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal, le produit colloïdal est reconstitué avec
3 ml de 99mTc à faible concentration (30 mCi de 99mTc) et autoclavé pendant 1 heure. On obtient de meilleurs résultats lorsqu'on effectue une reconstitution avec 0,5 cm<3> de solution saline puis un autoclavage pendant 1 heure. Le produit autoclave est ensuite
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qu'un plus faible volume pendant l'autoclavage produit un colloïde plus petit. Par conséquent, il est préférable de marquer le colloïde après son autoclavage. En outre, les problèmes éventuels de contamination et d'irradiation associés à l'autoclavage d'une solution radio-active sont évités. Une comparaison des titres biologiques chez la souris après absorption pendant 1 heure est récapitulée sur le tableau XI ci-dessous :
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Etude comparative de l'oxalate stanneux-phytate de
sodium autoclave par les deux procédés
Titre biologique chez
<EMI ID=53.1>
tivité totale
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En utilisant le mode opératoire décrit ci-dessus dans l'exemple 7 pour la préparation d'un oxalate stanneuxphytate de sodium colloïdal, on prépare plusieurs lots. Dans l'un de ces lots, le colloïde est reconstitué avec 0,5 ml de solution saline et autoclave pendant une heure. On ajoute 3 ml de 99mTc de faible concentration à l'ampoule et on injecte 1,0 ml à un lapin..Après une période d'absorption de 1 heure, on sacrifie le lapin et on en dissèque le fémur. On sépare la moelle osseuse par congélation de l'os dans de l'azote liquide et on l'extirpe après l'enlèvement des deux extrémités du fémur. On mesure ensuite la radio-activité de l'os et de la moelle osseuse et on compare les résultats sur une base pondérale. On détermine un rapport moelle osseuse:os égal à 7:1.
Dans une réplique du mode opératoire décrit ci-dessus sur un second lot, on obtient un rapport moelle osseuse;os de 12:1.
Dans un troisième lot, on reconstitue le colloïde avec 0,5 ml de solution saline et on le traite par autoclavage
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a faible concentration au colloïde autoclave. On effectue une épreuve biologique chez la souris. Le produit a une excellente stabilité après autoclavage. Les résultats de l'épreuve biologique chez la souris sont reproduits sur le tableau XII suivant :
TABLEAU XII
Stabilité de l'oxalate stanneux-phytate de
<EMI ID=56.1>
<EMI ID=57.1>
* Moyenne de deux souris, durée d'absorption de <1> heure.
Analyse chromatographique taux de liaison
d'environ 99 %
Dans un quatrième lot, le colloïde est reconstitué avec 0,5 ml de solution saline et autoclave pendant des périodes différentes. Le tableau XIII suivant indique les résultats d'une épreuve biologique chez la souris après absorption pendant 1 heure et après autoclavage pendant 1, 4,5 et 9 heures :
TABLEAU XIII
Effet de la durée de l'autoclavage sur l'oxalate
stanneux-phytate de sodium
Titre biologique chez la souris, % de l'activité
totale, durée d'autoclavage
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
On prépare plusieurs échantillons d'oxalate stanneuxphytate de sodium colloïdal en suivant le mode opératoire décrit
<EMI ID=60.1>
tion saline puis on autoclave sous pression de 1,5 bar et à 121[deg.]C pendant 1 heure. L'examen microscopique du colloïde montre qu'aucune particule n'est supérieure à environ 5 microns. En outre, on constate que le colloïde n'est pas toxique et est apyrogène. De même, l'analyse de l'étain stanneux dans le colloïde autoclave montre que la concentration en étain stanneux des échantillons autoclaves est la même que celle des échantillons de colloïdes non autoclaves. Aucune oxydation n'a lieu pendant l'autoclavage.
On effectue une étude comparative avec deux produits du commerce contenant du phytate de sodium et du chlorure stanneux, ces produits étant préparés par la firme New England Nuclear, Radiopharmaceutical Division,Atomlight Place, North Bellerica, Massachusetts 01862 et par la firme Diagnostic Isotopes, Inc., 123 Pleasant Avenue, Upper Saddle River, New Jersey
07458. Les deux produits sont reconstitués avec 0,5 cm<3> de solution saline et autoclavés pendant 1 heure, afin de les comparer avec le phytate stanneux colloïdal de l'invention qui utilise
de l'oxalate stanneux. Un échantillon du lot de phytate stanneux colloïdal autoclave préparé en utilisant de l'oxalate stanneux, comme décrit ci-dessus, est utilisé à des fins de comparaison.
Les deux produits contenant le chlorure stanneux
se décomposent pendant l'autoclavage et ont une couleur jaune.
Il n'y a pas de fixation de 99mTc et un titrage biologique chez la souris après une période d'absorption de 1 heure montre une forte absorption intestinale indiquant la présence de pertechnétate libre. On effectue un second test sur le produit du commerce de la firme Diagnostic Isotopes, Inc., dans lequel une quantité équivalente d'oxalate de sodium est ajoutée à l'ampoule avant l'autoclavage. Il n'y a pas de fixation de 99mTc. Cela indique que l'étain stanneux doit être présent sous la forme de l'oxalate pour assumer la fonction de réactif radiodiagnostique selon l'invention. Les résultats des comparaisons avec les deux produits du commerce sont récapitulés sur le tableau XIV suivant :
1
<EMI ID=61.1>
Comparaison du phytate stanneux autoclave préparé en utilisant de l'oxalate stanneux avec des produits
préparés en utilisant du chlorure stanneux
Titre biologique chez
<EMI ID=62.1>
tivité totale
<EMI ID=63.1>
Exemple 12
On prépare un échantillon autoclave de phytate stanneux comme décrit dans l'exemple 11 et on le marque au techné-
<EMI ID=64.1>
effectuée sur des souris en utilisant l'échantillon autoclave. On injecte à chaque souris 0,2 cm<3> d'échantillon renfermant une
<EMI ID=65.1>
ceux que l'on obtient avec l'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal non autoclave de l'exemple 5 ci-dessus. Les résultats sont récapitulés sur le tableau XV suivant :
TABLEAU XV
Clairance sanguine de l'oxalate stanneux-phytate de sodium
<EMI ID=66.1>
<EMI ID=67.1>
<EMI ID=68.1>
bution dans les organes en fonction du temps dans le cas de
<EMI ID=69.1>
du produit autoclave et,après divers intervalles de temps, on a sacrifié les souris et effectué une épreuve biologique. Au bout de 24 heures, le colloïde est encore dans le foie, tout
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
<EMI ID=72.1>
<EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
<EMI ID=75.1>
échantillon autoclave d'oxalate stanneux-phytate de sodium col-
<EMI ID=76.1>
on les a testées en une période de 24 heures.Les résultats montrent que la clairance urinaire est bien plus rapide lorsqu'on utilise l'oxalate stanneux-phytate de sodium autoclave colloïdal que lorsqu'on utilise un produit non autoclave. Les résultats sont reproduits sur le tableau XVII suivant :
TABLEAU XVII
Clairance urinaire de l'oxalate stanneux-phytate
de sodium autoclave
<EMI ID=77.1>
Un autre échantillon d'oxalate stanneux-phytate
<EMI ID=78.1>
clavé avec 0,5 ml de solution saline. On a ajouté au produit
<EMI ID=79.1>
épreuve biologique chez la souris donne des résultats comparables à ceux qui sont représentés dans les exemples 11 et 12 et le taux de fixation de 99mTc est à peu près égal à 99 %. Cela dé-
<EMI ID=80.1>
6 ml donne un comportement satisfaisant avec l'agent radiodiagnostique de l'invention, dectiné à la moelle osseuse.
<EMI ID=81.1>
Deux échantillons d'oxalate stanneux-phytate de sodium préparé comme décrit dans l'exemple 7 sont reconstitués avec 0,5 ml de solution saline et autoclavés pendant 1 heure.
On ajoute à l'un des échantillons 6 ml de pertechnétate à forte concentration et à l'autre échantillon 3 ml de pertechnétate à concentration faible. Après repos pendant 24 heures et, respectivement, pendant 1 heure, on effectue une épreuve biologique sur <EMI ID=82.1>
<EMI ID=83.1>
<EMI ID=84.1>
Cela apparaît également dans l'épreuve biologique qui montre une plus grande absorption intestinale d'activité en 24 heures. Toutefois, la formulation constitue encore un agent satisfaisant pour l'investigation de la moelle osseuse. Les résultats sont récapitulés sur le tableau XVIII suivant :
TABLEAU XVIII
Test de stabilité en 24 heures sur l'oxalate
stanneux-phytate de sodium autoclave
Titre biologique chez
la souris*, % de l'ac-
tivité totale
<EMI ID=85.1>
* Moyenne de deux souris, durée d'absorption de 1 heure.
<EMI ID=86.1>
Exemple 14
Plusieurs ampoules d'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal préparé comme décrit dans l'exemple 7 sont reconstituées avec 0,5 ml de solution saline et autoclavées pendant 1 heure. Chaque jour pendant 7 jours, une ampoule est testée par addition de 3 ml de 99mTc à faible concentration et en effectuant une épreuve biologique chez des souris. Le taux de fixation de 99mTc reste supérieur à 99 % dans tous les cas et le réactif doit être considéré comme un agent satisfaisant d'investigation de la moelle osseuse. Un utilisateur pourrait autoclaver plusieurs ampoules d'oxalate stanneux-phytate de sodium au début de 1 semaine et utiliser une ampoule par jour au moins pendant 7 jours. Les
*� � .
<EMI ID=87.1> résultats sont récapitulés sur le tableau XIX suivant :
TABLEAU XIX
Test de 7 jours sur l'oxalate stanneux-phytate de
sodium autoclave destiné à être utilisé comme
agent d'investigation de la moelle osseuse
Titre biologique chez la souris*, % de l'activité totale
<EMI ID=88.1>
<EMI ID=89.1>
* Moyenne de deux souris, durée d'absorption de 1 heure.
Exemple 15
<EMI ID=90.1>
sodium colloïdal préparé conformément au mode opératoire décrit dans l'exemple 7 sont reconstituées avec 0,5 ml de solution saline et autoclavées pendant 1 heure. Pour éprouver l'effet du volume et de l'activité totale, on injecte dans quatre ampoules
<EMI ID=91.1>
effectue une épreuve biologique sur des souris. Le volume de 1 ml
<EMI ID=92.1>
<EMI ID=93.1>
utilisé doit être d'au moins environ 2,-0 ml. On peut ajouter
<EMI ID=94.1>
l'épreuve biologique chez la souris sont reproduits sur le tableau XX suivant :
<EMI ID=95.1>
TABLEAU XX
Effet du volume de pertechnétate sur l'oxalate stanneuxphytate de sodium utilisé comme agent d'inves____________fixation de la moelle osseuse
Titre biologique chez la souris*,
<EMI ID=96.1>
<EMI ID=97.1>
tration (ml)
<EMI ID=98.1>
* Moyenne de deux souris, durée d'absorption de 1 heure.
<EMI ID=99.1>
Exemple 16
Plusieurs fioles d'oxalate stanneux-phytate de sodium lyophilisé colloïdal préparé conformément au mode opératoire décrit dans l'exemple 7 sont reconstituées avec 0,5 ml de solution saline et autoclavées à diverses pressions d'autoclavage et pendant diverses périodes. Les produits autoclavés sont
<EMI ID=100.1>
gique après une période d'absorption de 1 heure. A mesure que la pression et la température de l'autoclavage s'élèvent, il y a
une augmentation correspondante de l'absorption dans la carcasse. Le taux de liaison reste supérieur à 99 % dans tous les cas. Les pressions moyennes ordinairement utilisées sont d'environ 1,1 bar. Une durée d'autoclavage d'environ 2 heures permet d'obtenir le même effet, c'est-à-dire une plus forte absorption par la carcasse. Une forte absorption par la carcasse est l'indice d'une quantité accrue de moelle osseuse s'il n'y a pas de pertechnétate libre. Les résultats de l'épreuve biologique chez la souris sont récapitulés sur le tableau XXI suivant :
<EMI ID=101.1>
Effet de la durée et de la pression d'autoclavage sur l'oxalate stanneux-phytate de sodium
Titre biologique chez la
souris
% de l'activité totale
<EMI ID=102.1>
Exemple 17
Plusieurs ampoules d'oxalate stanneux-phytate de sodium colloïdal lyophilisé préparé - conformément au mode opératoire de l'exemple 7 sont reconstituées avec 0,5 ml de solution saline et autoclavées pendant 2 heures sous pression de 1,05 bar.
On effectue un test biologique chez des souris. Les résultats montrent que le colloïde autoclave peut être utilisé pendant
au moins 8 jours. Les résultats sont récapitulés sur le tableau XXII suivant
TABLEAU XXII
Essai de 8 jours sur l'oxalate stanneux-phytate de sodium autoclave* utilisé pour l'investigation de la moelle
osseuse
Titre biologique chez
la souris**
% de l'activité totale
<EMI ID=103.1>
<EMI ID=104.1>
* Autoclavage sous pression de 1,05 bar pendant 2 heures
** Moyenne de deux souris, durée d'absorption de 1 heure Analyse chromatographique = taux de liaison supérieur à 99 % <EMI ID=105.1>
Plusieurs ampoules d'oxalate stanneux-phytate de sodium lyophilisé préparé par le mode opératoire de l'exemple
7 sont reconstituées avec 0,5 ml-de solution saline et autoclavées pendant 2 heures sous pression de 1,05 bar. Les échantillons autoclaves sont ensuite lyophilisés de nouveau. Les échantillons sont testés par addition de pertechnétate et une épreuve biologique est effectuée sur des souris après une période d'absorption de 1 heure. Les résultats indiquent que les échantillons autoclavés et relyophilisés doivent pouvoir encore être utilisés de manière satisfaisante comme agent d'investigation de la moelle osseuse, ces résultats sont récapitulés sur le tableau XXIII suivant :
TABLEAU XXIII
Essai sur un oxalate stanneux-phytate de sodium
autoclave et lyophilisé
<EMI ID=106.1>
Exemple 19
Un lot d'oxalate stanneux-phytate de sodium est préparé en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 7. La solution brute de 250 ml est ensuite autoclavée pendant 2 heures dans un ballon fermé, sous atmosphère d'azote. Cette solution est ensuite distribuée dans des ampoules à sérum et lyophilisée. Le produit est ensuite reconstitué avec 3,0 ml de
<EMI ID=107.1>
une période d'absorption de 1 heure et par chromatographie. Les <EMI ID=108.1>
faisant en tant qu'agent d'investigation de la moelle osseuse et sont récapitulas sur le tableau XXIV suivant :
TABLEAU XXIV
Essais sur un oxalate stanneux-phytate de sodium
_________autoclave en masse
<EMI ID=109.1>
Exemple 20
Des ampoules d'oxalate stanneux-phytate de sodium lyophilisé préparé par le mode opératoire décrit dans l'exemple
<EMI ID=110.1>
pendant 225 jours à 70[deg.]C. Des échantillons de ces ampoules conservées sont évalués par chromatographie et par épreuve biologique sur des souris après une période d'absorption de 30 minutes.
Les échantillons conservés à 70[deg.]C sont plus fortement absorbés par la carcasse et le taux de liaison de 99mTc est encore supé-
<EMI ID=111.1>
suivant : ....... 1
<EMI ID=112.1>
Essais de vieillissement accéléré sur l'oxalate
stanneux-phytate de sodium
Titre biologique chez la
souris
<EMI ID=113.1>
<EMI ID=114.1>
Exemple 21
Des échantillons d'oxalate stanneux-phytate de sodium préparé en suivant le mode opératoire de l'exemple 7
<EMI ID=115.1>
pendant 2 heures sous pression de 1,05 bar. Des échantillons sont ensuite évalués par chromatographie et par une épreuve biologique sur des souris (durée d'absorption de 1 heure) après l'addition
<EMI ID=116.1>
en vue d'une évaluation 84 jours plus tard. Après conservation pendant 84 jours, les résultats obtenus pour l'oxalate stanneuxphytate de sodium pré-autoclavé sont satisfaisants, comparés aux résultats obtenus pour le réactif au phytate stanneux éprouvé au bout de 4 jours. Les résultats sont reproduits sur le tableau XXVI suivant :
<EMI ID=117.1>
Titre biologique chez la
souri
<EMI ID=118.1>
<EMI ID=119.1>
Exemple 22
Des échantillons d'oxalate stanneux-phytate de sodium sont préparés en suivant le mode opératoire de l'exemple 7, à la différence que la concentration en phytate de sodium varie entre 0,1 et 20 mg/ml avant la lyophilisation. Des échantillons de la préparation finale sont éprouvés avec et sans autoclavage. Le pourcentage d'absorption dans la moelle osseuse chez la souris est déterminé en observant l'absorption dans la car-
<EMI ID=120.1>
tivité se situe dans les os et dans la moelle osseuse. Les résultats (durée d'absorption de 1 heure) des essais effectués indiquent qu'il n'y a pas d'amélioration de l'absorption par la carcasse dans la gamme expérimentée. Les résultats sont reproduits sur le tableau XXVII suivant :
<EMI ID=121.1>
Effet de la concentration en phytate de sodium sur
l'absorption dans la moelle osseuse
Absorption dans la carcasse,
<EMI ID=122.1>
<EMI ID=123.1>
Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre.
<EMI ID=124.1>
1. Support non radio-actif stable,de pH compris entre environ 3 et environ 7, qui convient pour l'investigation
<EMI ID=125.1>
qu'il comprend du phytate de sodium et l'ion stanneux chélaté avec un oxalate, le rapport en poids du phytate au chélate étant au moins égal à environ 1:1.