BE1028802B1 - Développement d'une composition symbiotique comme un additif d'alimentation pour les porcelets ou les truies gestantes pour moduler le microbiote intestinal des porcelets au temps du sevrage - Google Patents

Abstract

Composition symbiotique administrable à l’animal, en particulier au mammifère, en particulier au porc, en particulier de l’animal en gestation et au nouveau-né, en particulier à la truie en gestation ou non et au porcelet comprenant au moins un probiotique et au moins un prébiotique pour le traitement ou la prévention de la dysbiose, caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique sont choisis de telle manière qu’ils génèrent ensemble un environnement anti-inflammatoire dans l’intestin dudit animal.

Description

DÉVELOPPEMENT D'UNE COMPOSITION SYMBIOTIQUE COMME UN ADDITIF D'ALIMENTATION POUR LES PORCELETS OU LES TRUIES GESTANTES POUR MODULER

LE MICROBIOTE INTESTINAL DES PORCELETS AU TEMPS DU SEVRAGE La présente invention se rapporte à une composition symbiotique administrable à l'animal, en particulier au mammifère, en particulier au porc, de préférence à l'animal en gestation et au nouveau- né, en particulier à la truie en gestation ou non et au porcelet comprenant au moins un probiotique et au moins un prébiotique pour le traitement ou la prévention de la dysbiose intestinale, ladite composition étant administrée dans le but d'améliorer les conditions de santé du nouveau- né.

La dysbiose intestinale est un déséquiliore du microbiote intestinal pouvant générer une prolifération de pathogènes (par ex E. coli) provoquant la diarrhée. Le microbiote est, quant à lui, défini comme l'ensemble des microorganismes présents dans un milieu déterminé (définition de l'office québécois de la langue française, 2008). Ce milieu determine est appelé microbiome. Le déséquiliore du microbiote intestinal se traduit par une réduction de la diversité des populations bactériennes et par un excès des bactéries pathogènes du microbiote. A l'inverse un microbiote équilioré dans la répartition des espèces de microorganismes qui le composent est dit en eubiose.

Le secteur de la production de viande grandit rapidement dans le monde, la production de porc augmente de manière régulière et représente l'un des plus gros consommateurs d'antibiotiques dans la production animale.

Dans les fermes porcines, le sevrage (interruption de l'allaitement et changement vers une alimentation sèche) est une période associée à Un risque pour les jeunes animaux. Une problématique récurrente lors du sevrage des animaux est le risque accru de diarrnées résultant de la transition abrupte de régime alimentaire. Cette transition abrupte peut engendrer une dysbiose intestinale.

Les diarrhées peuvent entraîner une perte de poids, voire la mort du nouveau-né dans des cas graves. Le traitement de routine ainsi que les procédures de prophylaxie appliquées pour la diarrnée détectée juste après la naissance du porcelet sont souvent peu efficaces.

Cette période de transition génère par ailleurs chez l'animal, en particulier chez le porcelet, un stress significatif au niveau comportemental, nutritionnel et environnemental, responsable d'une forte réduction dans la consommation de nourriture.

Il est donc crucial de maîtriser ce risque de diarrhées car elles occasionnent une perte considérable pour les éleveurs puisqu'elles sont souvent associées à un taux de mortalité élevé, une perte de poids, un retard de croissance, et des coûts liés aux traitements.

Actuellement ce risque de diarrhées est maîtrisé par l'ajout d'additifs minéraux bactériostatiques (ZnO, CuSOQ4) dans le régime des porcelets sevrés mais, au-delà de la résistance déjà observée à ces composés, la pratique d'ajout d'additifs minéraux bactériostatiques mène à des problèmes environnementaux (contamination des eaux par les minéraux lessivés et contenus dans les effluents d'élevage).

L’ajout d'antibiotiques thérapeutiques dans la nourriture des animaux autour du sevrage est également une pratique courante. Ce traitement reste problématique car il induit la résistance des bactéries aux antibiotiques. Chez les animaux d'élevage, une utilisation aveugle d'antibiotiques peut également favoriser la dysbiose intestinale. De plus, sachant que la résistance aux antibiotiques augmente de plus en plus et en particulier chez les animaux d'élevage, la commission européenne a interdit depuis le Ier janvier 2006 l'utilisation des antibiotiques comme facteurs de croissance dans les aliments pour animaux.

Compte tenu de la croissance de la démographie mondiale et de la demande croissante de viande dans le monde, il est donc crucial de trouver des solutions alternatives à l'usage des antibiotiques et des additifs minéraux pour réduire l'incidence et la sévérité des problèmes digestifs chez les animaux sevrés et, de manière plus générale, pour soutenir une croissance durable de l'industrie de la viande.

AU vu de ce qui précède, des solutions alternatives aux antibiotiques et minéraux bactériostatiques ont été développées impliquant une utilisation optimale de probiotiques en combinaison ou non avec des prébiotiques.

D'une manière générale, une combinaison d'au moins un probiotique avec au moins un prébiotique est appelée un symbiotique, lorsque le prébiotique agit comme substrat en synergie avec le probiotique pour procurer un effet positif sur la santé, en particulier sur la digestion.

La digestion des protéines, des sucres et des graisses chez les individus monogastriques, et en particulier chez les porcs et la volaille, repose d'abord sur une digestion s'effectuant au niveau de l'estomac qui constitue un environnement acide entraînant une dénaturation des macromolécules pour former un digesta.

Le digesta arrive ensuite dans l'intestin et y subi encore une hydrolyse par action du suc pancréatique qui contient plusieurs protéases et par action des aminopeptidases et des dipeptidases intestinales.

L'absorption des produits de ces hydrolyses a lieu dans la partie supérieure de l'intestin grêle et tous les produits non digérés dans l'intestin grêle gagnent le gros intestin où ils sont soumis à l'action des microorganismes (microbiote intestinal) en entraînant une fermentation.

Il existe de nombreuses publications qui confirment le rôle indispensable du microbiote intestinal sur la santé des animaux (et des humains). Le microbiote intestinal interagit aussi de manière permanente avec le système immunitaire présent dans la paroi intestinale. Certaines études ont aussi démontré la capacité des probiotiques et/ou des prébiotiques à rééquilibrer le microbiote intestinal et leur utilité sur la santé intestinale par effets généralement directs et à court-terme.

L'Organisation mondiale de la Santé (OMS) et l'Organisation des Nations unies pour l'alimentation et l'agriculture (FAO) ont définis les probiotiques comme étant des « micro-organismes vivants qui, lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur Ia santé, au-delà des effets nutritionnels traditionnels ». || existe des définitions plus lorges qui ne font pas référence à l'alimentation, et où le mot « ingérés » peut être remplacé par « administrés ».

Bien que ies gens pensent souvent aux bactéries et autres micro-organismes comme des « germes » nocifs, beaucoup sont en fait Utiles. Certaines bactéries aident à digérer les aliments, à détruire les cellules pathogènes ou à produire des vitamines. Beaucoup de micro- organismes dans les produits problotigues sont les mêmes que ou similaires aux micro-organismes qui Vivent naturellement, de manière endogène, dans notre corps.

Sans être exhaustif, les probiotiques comprennent différents microorganismes comme les bactéries Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, Bifidobacterium animalis lactis, Lactobacillus rhamnosus, Bacillus licheniformis, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium thermophilum, Clostridium butyricum, Enterococcus faecium, Bifidobacterium crudilactis, Bifidobacterium mongoliense, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus pontis, Lactobacillus johnsoni, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Collinsella tTanakaei, Pediococcus acidilacticiici, Faecalibacterium prausniizi, 5 Coprococcus catus, Roseburia intestinalis, Anaerostipes butyraticus. Les bactéries probiotiques les plus courantes étant celles du genre lactobacilus et Bifidobacierium. Les probiotiques comprennent également des levures comme Saccharomyces boulordii_ (Sanders M.E. « Probiotics, strains matter», Functional foods & nutraceuticais IO magazine, 2007, 36-41}.

Les prébiotiques, quant à eux, sont des substrats utilisés de manière sélective par les micro-organismes de l'hôte qui stimulent sélectiivement la croissance ou l'activité de micro-organismes souhdaitabies (Expert consensus document: The International Scientific Association for Probiotics and Prebiotics (ISAFP} consensus statement on the definition and scope of prebiotics, Nature Reviews (Gastroenterology & Hepatoiogy, 2017, 14, 491-502, https://doi.org/10.1038/nrgastro.201 7.75).

Sans être exhaustif, les prébiotiques comprennent entre autres l'inuline, le beta-glucane, le 2'-Fucosyllactose (2FL), des oligosaccharides comme les galactooligosaccharides (GOS), fructooligosaccharides (FOS), mannanoligosaccharide (MOS), xylooligosaccharide (XOS), acide gras polyinsaturés (polyunsaturated fatty acid: PUFA), acide linoléique conjugué (ALC).

Une formulation combinant au moins un probiotique en association avec au moins un prébiotique pour prévenir et traiter les infections bactériennes pouvant mener à la diarrhée, augmenter le poids de l'animal et promouvoir la croissance est connue du document WO2014049023. Le document WO2014049023 décrit des produits et compositions pouvant être bénéfiques en élevage. Lesdits produits et compositions qui y sont décrites comprennent des microorganismes, tels que des bactéries, en particulier des bactéries probiotiques. Les souches, ainsi que les compositions les comprenant, peuvent être administrées à des animaux, de préférence à des animaux d'élevage, tels que les porcs. L'administration peut avoir lieu dans les premiers jours de vie. Selon ce document, l'administration des produits ou des compositions favorise la croissance animale et la prise de poids de l'animal. Les infections bactériennes peuvent également être prévenues ou traitées par lesdits composés ou compositions.

Le document WO2018002671 divulgue une composition pour le traitement et/ou la nutrition de volailles telles que des poulets de chair comprenant (1) un probiotique commensal choisi parmi Bifidobacterium animalis, Collinsella Tanakaei, Lactobacillus reuteri, Anaerostipes, Lactobacillus crispatus, Pediococcus acidilacticiici, Lactobacillus pontis, Faecalibacterium prausnitzii, Coprococcus catus, Roseburia intestinalis, Anaerostipes butyraticus, Butyricicoccus, Lactobacillus johnsoni et Ruminococcus sp.; et (ii) un prébiotigue. Ce document divulgue également l'utilisation d'une telle composition pour le traitement des maladies entériques chez les volailles, telles que l'entérite nécrotique.

Le document WO20061334/72A1 concerne un additif alimentaire et/ou additif pour l'eau potable animale ou humaine favorisant la santé ou la croissance de probiotiques. Ce document concerne en outre une utilisation de l'additif alimentaire humain et animal et/ou de l'eau potable, notamment pour la prévention de l'effet néfaste d'un certain nombre de germes indésirables dans le système digestif des animaux et/ou des oiseaux domestiques.

Finalement, le document WO2017156548A1 concerne certains aliments comprenant un composant nutrittonnel fermentescible et un composant probiotique, où le composant probiotique est sélectionné, sur la base de critères génétiques et/ou métaboliques, pour métaboliser spécifiquement tout monomère de sucre libre (Free Sugar Monomers (FSM)) ou tout acide aminé libre (Free Amino Acids (FAA)) ou peptide qui s'accumulent dans l'intestin grêle et le gros intestin en raison de la composante nutritonnelle fermentescible, qui, sans cette métabolisation seraient fermentés et métabolisés par des bactéries moins adaptées / opportunistes, créant des efflorescences de bactéries intestinales délétères et déplaçant le microbiome vers un potentiel état de dysbiose.

Malheureusement, les formulations connues sont essentiellement utilisées comme agent thérapeutique de dysbiose ou de déséquiliore du microbiome chez l'animal d'élevage. Les effets démontrés in vivo par ces formulations restent très généraux comme la prise de poids ou le pourcentage de mortalité de l'animal. De nombreux probiotiques sont décrits en association avec n'importe quel prébiotique dans des bouts bien divers.

En outre, selon Barba-Vidal et col. Animal, 2018, 12, 2489-2498, DOI: 10.1017/S1751731118000873, il existe un manque criant de reproductibilité au niveau des expérimentations montrant l'effet bénéfique des probiotiques.

La présente invention vise donc à procurer une formulation symbiotique qui a un effet qui se maintient dans le temps en agissant spécifiquement sur la modulation du microbiote de manière précoce, favorisant ainsi une eubiose intestinale de manière fiable.

En effet, selon la présente invention, une composition symbiotique d'au moins un prébiotique et d'au moins un probiotique aurait non seulement un effet thérapeutique mais également un impact prophylactique sur la modulation du microbiote de l'hôte pour une action à plus long terme. Il est en effet décrit par Nauta et col. AM. J. Clin. Nutr. 2013, 98 :5865-935, DOI: 10.3945/cjon.112.039644 que la modulation du microbiote grâce à une alimentation adaptée durant la gestation et juste après la naissance peut en effet favoriser la digestion, l'homéostasie métabolique et le développement immunologique.

Les interventions à la fin de la gestation de la truie et/ou dès la naissance du porcelet devraient permettre par le principe de la programmation précoce d'influencer de manière optimale et durable le bon développement du microbiote du nouveau-né. Par conséquent, les effets positifs pour Ia santé de l'animal ne seraient pas observés seulement en début de vie et durant les 3-4 semaines après le sevrage mais ils resteraient aussi observables au long de la vie adulte.

La première colonisation intestinale du porcelet par le microbiote maternel au moment de la mise bas est cruciale pour l'établissement d'un microbiote intestinal favorable du nouveau-né, mais la composition du microbiote peut être influencée par de nombreux facteurs tels que des antibiotiques, la nourriture, l'environnement, les agents infectieux, etc.

La présente invention entend donc pallier les inconvénients précités en procurant une composition telle qu’'indiquée précédemment caractérisée en ce que ledit au Moins Un probiotique et ledit au moins Un prébiotique sont choisis de telle manière qu'ils génèrent ensemble un environnement anti-inflammatoire dans l'estomac et/ou l'intestin dudit animal, en particulier du mammifère, en particulier du porc, de préférence de l'animal en gestation et du nouveau-né, en particulier de la truie en gestation ou non et du porcelet, dans le but d'améliorer les conditions de santé du nouveau-né.

Selon la présente invention, il a en effet été mis en évidence qu'il était possible de mettre à disposition une formulation symbiotique qui génère de manière démontrée et reproductible Un environnement anti- inflammatoire dans le système digestif, tant de l'animal en gestation que plus tard du nouveau-né, lequel se maintient dans le temps pour protéger l'animal contre des dysbioses ultérieures.

La formulation symbiotique selon la présente invention permettant de moduler le microbiote du fœtus dans un animal en gestation ou du nouveau-né permettra d'avoir un effet prophylactique maximal et assurera une croissance et un développement optimal de l'animal.

En effet, la formulation selon la présente invention favorise une flore intestinale saine qui protège ainsi l'animal qui l'ingère, en particulier lorsque celle-ci est ingérée par la femelle en gestation par la génération démontrée et reproductible d'un environnement anti- inflammatoire dans l'estomac et/ou l'intestin, et ce de manière systématique.

En effet, il est crucial d'analyser l'impact des probiotiques à travers 3 critères importants : la concentration en cellules viables, l'effet bénéfique sur la croissance de l'hôte et l'effet bénéfique sur le fonctionnement du tube digestif grâce notamment à un impact anti- inflammatoire (Markowiak P. et Slizewska K., Gut Pathog. 2018, 10, 21, doi: 10.1186/s13099).

La formulation symbiotique selon la présente invention procure une solution efficace contre la dysbiose et le problème de diarrhée survenant lors du sevrage, dont le probiotique et le prébiotique sont choisis spécifiquement non pas uniquement sur la viabilité cellulaire, mais pour leurs effets associés sur la viabilité cellulaire et sur la réponse anti-inflammatoire du microbiote de l'hôte.

| a en effet été démontré selon la présente invention que la formulation symbiotique contenant un probiotique et un prébiotique produit une diminution de la production d'IL-8 en test in vitro, et une augmentation des acides gras à courtes chaînes « Short Chain Fatty Acids, SCFAs » ainsi qu’une amélioration de la diversité et de la quantité des populations bactériennes endogènes comme les Lactobacillus et les Bifidobacteria ainsi que les bactéries intervenant dans les voies métaboliques de production du butyrate ou d'autres acides gras à chaines courtes. Le probiotique et le prébiotique, ensemble, forment un microbiote intestinal équillioré, conduisant de cette manière à la génération ensemble d'un environnement anti-inflammatoire dans le système digestif de l'animal, en particulier du mammifère, en particulier du porc, de préférence de l'animal en gestation et du nouveau-né, en particulier de la truie en gestation ou non et du porcelet.

En effet, ces indicateurs sont importants car il a été montré qu'un environnement inflammatoire du tractus gasitrointestinal peut générer une dysbiose intestinale (Zeng et col., Mucosal Immunol., 2017, 10,18-26, doi: 10.1038/mi.2016.75). II a également été montré que les « Short Chain Fatty Acids, SCFA » peuvent avoir additionnellement un effet bénéfique de régulateurs immunologiques sur l'environnement gastro- intestinal (Parada Venegas et col. Frontiers in Immunology, 2019, 10, doi:10.3389/fimmu.2019.00277). Les SCFAs sont des acides gras à courtes chaînes, produits par le processus de fermentation dans le colon. L'acétate, le propionate et le butyrate sont les trois principaux SCFAs. Le butyrate est particulièrement important pour le bon fonctionnement du colon car il est la source d'énergie principale des colonocytes (cellules épithéliales du colon). Les SCFAs peuvent également réduire la réponse pro-inflammatoire des cellules épithéliales de l'intestin (Iraporda C. et col., Immunology, 2015 10:1161-1169. https://doi.org/10.1016/j.imbio.2015.06.004).

Administrée à l'animal, en particulier au mammifère, en particulier au porc, de préférence à l'animal en gestation, et au nouveau- né, en particulier à la truie en gestation ou non et au porcelet, la formulation symbiotique selon la présente invention favorise l'établissement d'un microbiote intestinal équilioré de manière très précoce, protégeant l'animal, le mammifère, le porc ou l’animal en gestation ou encore le nouveau-né, plus particulièrement la truie en gestation ou le porcelet de manière soutenue dans le temps contre la dysbiose par le probiotique et le prébiotique qu'elle contient, lesquels génèrent ensemble Un environnement anti-inflammatoire.

Dans une forme de réalisation préférentielle de la présente invention, ledit probiotique est choisi dans le groupe des bactéries Bifidobacterium thermophilum, Enterococcus faecium, Bifidobacterium animalis lactis, Clostridium butyricum, Bifidobacterium crudilactis.

Selon la présente invention, Bifidobacterium thermophilum provient de la Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM/LMG Gent) répertoriée sous le numéro 18892, Enterococcus faecium (LMG S-28935), Bifidobacterium animalis lactis est une souche déposée à la Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM/LMG Gent) ayant le numéro de dépôt LMG P-28149, Clostridium butyricum (LMG1217), Bifidobacterium crudilactis est une souche déposée à la Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes (CNCM, Institut Pasteur) ayant le numéro de dépôt (CNCM |-3342) dans le cadre du document WO2006122850.

Dans une forme particulière de la présente invention, ledit prébiotique est choisi dans le groupe comprenant l'inuline, le B-glucane, 2'Fucosyllactose, GOS/FOS, l'amidon résistant.

De préférence, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une augmentation des concentrations en populations bactériennes endogènes favorables au microbiote intestinal telles que les Lactobacillus et les Bifidobacteria. Avantageusement, cette augmentation des concentrations en populations bactériennes génère un meilleur équiliore du microbiote intestinal de l'hôte diminuant le risque de dysbiose intestinal. Avantageusement, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée, de préférence, en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une réduction de la concentration d'IL8 d'au moins 10% formant ledit environnement anti-inflammatoire. Dans le cadre de la présente invention, la concentration d'IL-8 a été mesurée grâce à des tests in vitro sur des cellules IPEC_J2 en présence du jus de fermentation (contenant ou non la composition symbiotique à tester).

Avaniageusement, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée, de préférence, en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une stabilisation ou une augmentation de la sécrétion d'acides gras à courte chaîne (SCFA's) par le microbiote intestinal. Les SCFAs ont en effet un rôle bénéfique multiple au niveau de l'intestin : le butyrate, notamment, a un rôle régulateur dans le transport de fluide transépithélial. II améliore également l'état oxydatif et l'inhibition de inflammation de la muqueuse de l'intestin, il renforce la barrière de défense épithéliale, il module la sensibilité viscérale et la mobilité instestinale (Canani, R.B. et col. World J.

Gastroenterol., 2011, 17 : 1519-1528, doi: 10.3748/wjg.v17.i12.1519).

De préférence, selon l'invention, lesdits SCFAs sont choisis parmi le butyrate, le propionate, l'acétate, le lactate ou leurs combinaisons.

Dans le cadre de la présente invention, la production desdits SCFAs est mesurée grâce au modèle in vitro fermentation statique détaillé plus en détails ci-après.

De préférence, selon l'invention, Ia composition symbiotique est caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique est choisi dans le groupe constitué de Bifidobacterium thermophilum et inuline, de Bifidobacterium crudilactis et beta-glucanes, de Bifidobacterium animalis lactis et 2'fucosyllactose, de Clostridium butyricum ei GOS/FOS, Enterococcus faecium et beta-glucanes et leur mélange.

En effet, selon la présente invention, une composition symbiotique comprenant Bifidobacterium thermophilum et inuline ou comprenant Bifidobacterium crudilactis et beta-glucanes, ou comprenant Bifidobacterium animalis lactis et 2'fucosyllactose ou comprenant Clostridium butyricum et GOS/FOS ou encore comprenant Enterococcus faecium et beta-glucanes a montré une capacité synergique à créer un environnement anti-inflammatoire, en réduisant la présence d'IL-8, en augmentant la production d'acide gras à courtes chaînes et en favorisant la croissance des populations bactérienne favorables au microbiote.

Avantageusement, selon l'invention, la composition symbiotique peut contenir plus de 1 probiotique, par exemple 2 probiotiques, ou par exemple 3 probiotiques, ou par exemple 4 probiotiques ou par exemple 5 probiotiques. Selon l'invention, la composition symbiotique poura également contenir plus de 1 prébiotique, par exemple 2 prébiotiques, ou par exemple 3 prébiotiques, ou par exemple 4 prébiotiques. Une composition symbiotique pouvant contenir une combinaison de plusieurs probiotiques et de plusieurs prébiotiques permet d'optimiser l'environnement anti-inflammatoire et d'améliorer la production des indicateurs de croissance du microbiote tels que les SCFASs.

Avaniageusement, selon l'invention, la composition symbiotique contient au moins 1 excipient conventionnel, et se présente sous forme liquide ou solide.

La forme solide peut-être une poudre, une poudre dans une gélule, un granulé ou un comprimé ou une autre forme quelconque.

D'autres formes de réalisation de la composition symbiotique suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.

La présente invention se rapporte également à un complément alimentaire administrable à l'animal, en particulier au mammifère, en particulier au porc, de préférence à l'animal en gestation et au nouveau-né, en particulier à la truie en gestation ou non et au porcelet pour le traitement préventif et/ou curatif de la dysbiose intestinale.

Ledit complément alimentaire, comprenant ladite composition, peut être sous forme liquide par exemple dans une base lactée ou huileuse ou sous forme solide comme une poudre, une poudre dans une gélule, un granulé ou un comprimé ou une autre forme quelconque.

D'autres formes de réalisation du complément alimentaire suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.

La présente invention se rapporte en outre à un aliment complet ou complémentaire pour animaux d'élevage comprenant ladite composition, ledit aliment étant sous forme de farine et/ou de granulés et/ou d'alimentations lactées et/ou toutes autres formes de conditionnement alimentaire.

D'autres formes de réalisation de l'aliment complet ou complémentaire pour animaux d'élevage suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées La présente invention se rapporte de plus à un aliment pour nouveau-né animal comprenant ladite composition selon la présente invention et une base lactée compatible avec l'alimentation du nouveau-né.

D'autres formes de réalisation de l'aliment pour nouveau-né animal suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.

La présente invention se rapporte enfin à une utilisation de ladite composition pour le traitement préventif et/ou curatif de la dysbiose intestinale de animal, en particulier du mammifère, en particulier du porc, de préférence de l'animal en gestation et du nouveau-né, en particulier de la truie en gestation ou non et du porcelet, comprenant au moins une administration de ladite composition à raison d'une quantité de préblotique comprise entre O1 et 1000 d/jour/animal, préférentiellement entre 05 et 100 gfouvonmal, de manière avantageuse entre | et 25 g/lour/animat, d'une quantité de probiotique comprise entre 1.00E+05 et 1.00E+015 CFU/jour/animal, préférentiellement entre 1.00E+06 et 1.00E+013 CFU/jour/animal, de manière avantageuse entre 1.00E+07 et 1.00E+011 CFU/jour/animal et au moins une administration d'une ration alimentaire quotidienne, ledit probiotique et ledit prébiotique de la composition étant administrés de manière simultanée, séparée ou échelonnée dans le temps.

D'autres formes d'Utilisation de ladite composition suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.

D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux dessins et aux exemples. La figure 1 montre le schéma du dispositif expérimental du système BabySPIME (Dufourny S. et col. Journal of Microbiological Methods, 2019, 167: 105735. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2019). Compartiment 1 : Estomac/duodenum/jejunum, compartiment 2 : iléon, compartiment 3: colon ascendant. A: Alimentation, B: probiotique, C: prébiotique.

La figure 2 illustre le niveau de production d'IL-8 (pg/MI) par des cellules IPEC-J2. Les cellules IPEC-J2 ont été mise en contact d'un jus de fermentation venant d'une fermentation avec uniquement un prébiotique, GOS/FOS (GF) ou Inuline (Inu) ou 2'FL (2FL) ou beta-glucane (BG) ou amidon résistant (RS), ou bien provenant d'une fermentation pendant laquelle une composition combinant un prébiotique et un probiotique selon l'invention a été testée. Les résultats montrent la moyenne du niveau de production d’IL-8 +/- l'écart-type. La ligne horizontale correspond au niveau d'IL-8 dans la condition contrôle (blanc- mucine). La signification statistique a été analysée par un test ANOVA unidirectionnel avec une comparaison multiple de type Dunnett de chaque prébiotique et symbiotique par rapport à la condition contrôle (indiqué par *), et entre les combinaisons symbiotiques et le prébiotique seul (indiqué par #). Lorsque p < 0.05: *, # ; lorsque p < 0.01 : **, ## ; lorsque p < 0.001 : ***, ### ; et lorsque p < 0.0001 : ****, #H###. BCO: Bacillus coagulans, BT: Bifidobacterium thermophilum, CB: Clostridium butyricum, EF: Enterococcus faecium, BAL: Bifidobacterium animalis lactis, BCU: Bifidobacterium crudilactis, BMO: Bifidobacterium mongoliense, LP: Lactobacillus plantarum.

La figure 3 montre une série temporelle indiquant l'accumulation de la production de gaz dans une fermentation in vitro en lot (fermentation statiques in vitro) d'un prébiotique seul ou en combinaison avec un probiotique (symbiotique). La fermentation in vitro en lot de la combinaison symbiotique se réalise avec 10E7 CFU/ml de probiotique et 0.1g de prébiotique (même quantité dans la condition où le prébiotique est présent seul), en présence d'un inoculat de 3% en fécès. Les résultats indiquent Ia Moyenne (ml/g de substrat) +/- l'écart type de 3 réplicats expérimentaux. Pour les prébiotiques, GF : GOS/FOS, Inu : inuline, 2FL:2'FL, BG : beta-glucane, amidon résistant : RS. Pour les probiotiques, BCO: Bacillus coagulans, BT: Bifidobacterium thermophilum, CB: Clostridium butyricum, EF: Enterococcus faecium, BAL: Bifidobacterium animalis lactis, BCU: Bifidobacterium crudilactis BMO: Bifidobacterium mongoliense, LP: Lactobacillus plantarum.

La figure 4 montre l'abondance relative de groupes de bactéries bénéfiques pour l'eubiose intestinale à 24h après le démarrage de la fermentation in vitro en lot (fermentation statiques in vitro) en présence du prébiotique seul ou en présence de combinaisons symbiotiques (prébiotique + probiotique). Les groupes de bactéries bénéfiques sélectionnés comprennent les bifidobacteria, les lactobacilli, les clostridium cluster IV, les clostridium cluster XIVa et le gène butyry!- CoA:acetyl-CoA transférase. La méthode de mesure par qPCR 2A(-AACT) a été utilisée pour établir l'abondance relative, les mesures ont été normalisées par rapport aux bactéries totales et un mélange d'échantillons d'ADN de tous les extraits a été utilisé comme calibrateur. La fermentation in vitro, en fermenteur individuel, des combinaisons symbiotiques a été effectuée à 10E7 CFU/ml de probiotique et de 0.1 g de prébiotique (même quantité pour la condition avec le prébiotique seul), en présence de 3% d'un inoculat de fécès. Les résultats indiquent la moyenne (ml/g de substrat) +/- l'écart type de 3 réplicats expérimentaux.

La signifiance statistique a été analysée par un test ANOVA unidirectionnel avec une comparaison multiple de type Dunnett et où * correspond à p < 0.05, ** à p < 0.01, *** à p < 0.01, et **** à p < 0.0001. Pour les prébiotiques, GF : GOS/FOS, Inu : inuline, 2FL : 2'FL, BG : beta-glucane, amidon résistant : RS. Pour les probiotiques, BCO : Bacillus coagulans, BT : Bifidobacterium thermophilum, CB: Clostridium butyricum, EF: Enterococcus faecium, BAL: Bifidobacterium animalis lactis, BCU: Bifidobacterium crudilactis, BMO: Bifidobacterium mongoliense, LP: Lactobacillus plantarum.

La figure 5 montre la capacité du probiotique à survivre et à s'établir dans une communauté microbiale complexe. La figure 5 montre l'abondance relative de chaque probiotique par rapport aux bactéries totales à 12h, 24h et 48h après le démarage de la fermentation pour différentes compositions symbiotiques. L'abondance relative de chaque probiotigue est normalisée par rapport à la quantité relative de probiotique obtenu dans l'échantillon où juste le probiotique a été ajouté. Pour les prébiotiques, GoF : GOS/FOS, Inu : inuline, 2FL : 2'FL, BG : beta- glucane, amidon résistant: RS. Pour les probiotiques, BCO : Bacillus coagulans, BT : Bifidobacterium thermophilum, CB : Clostridium butyricum, EF: Enterococcus faecium, BAL: Bifidobacterium animalis lactis, LP: Lactobacillus plantarum.

La figure 6 montre l'évolution de la population bactérienne entre la fin de la période de stabilisation et la fin de la semaine de traitement: Les résultats sont montrés avec les compositions symbiotiques suivantes Enterococcus faecium (EF) + beta-glucane (BG); Bifidobacterium thermophilum (BT) + inuline (Inu); Clostridium butyricum (CB) + GOS/FOS (G/F); Bifidobacterium animalis lactis (BAL) + 2’FL (2FL); Bifidobacterium crudilactis (BC) + beta-glucane (BG); et la condition contrôle. Les résultats sont des rapport d'expression génique par rapport aux bactéries totales.

Comme indiqué précédemment, la présente invention se rapporte à une formulation symbiotique comprenant au moins un prébiotique et au moins Un probiotique.

De préférence, ledit probiotique est choisi dans le groupe des micro-organismes comprenant Bifidobacterium i$hermophilum, Enferococcus faecium, Bifidobacterium animalis lactis, Clostridium butyricum, Bifidobacterium crudilactis.

Dans une forme particulière de la présente invention, ledit prébiotique est choisi dans le groupe comprenant l'inuline, le B-glucane, 2'Fucosyllactose, GOS/FOS, l'amidon résistant. | a en effet été démontré selon la présente invention que la formulation symbiotique contenant un probiotique et un prébiotique produit une diminution de la production d'IL-8 en test in vitro, et une augmentation des «Short Chain Fatty Acids, SCFAs» ainsi qu'une amélioration de la diversité et de la quantité des populations bactériennes endogènes comme les Lactobacillus, les bifidobactéries, les Clostridium clusters IV et XIVa ainsi que les bactéries intervenant dans les voies métaboliques de production du butyrate, formant un microbiote intestinal équilioré, conduisant de cette manière à la génération ensemble d'un environnement anti-inflammatoire dans le système digestif de l’animal, en particulier du mammifère, en particulier du porc, de préférence de l'animal en gestation et du nouveau-né, en particulier de la truie en gestation ou non et du porcelet.

Administrée à l'animal en gestation ou au nouveau-né, plus particulièrement à la truie en gestation ou au porcelet, la formulation symbiotique selon la présente invention favorise l'établissement d'un microbiote intestinal équilioré de manière très précoce, protégeant l'animal en gestation ou encore le nouveau-né, plus particulièrement la tuie en gestation ou le porcelet de manière soutenue dans le temps contre la dysbiose par le probiotique et le prébiotique qu'elle contient, lesquels génèrent ensemble un environnement anti-inflammatoire.

De préférence, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée en ce que ledit au moins Un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une augmentation des concentrations en populations bactériennes endogènes favorables au microbiote intestinal telles que les Lactobacillus et les Bifidobacteria.

Avantageusement, cette augmentation des concentrations en populations bactériennes génère un meilleur équiliore du microbiote intestinal de l'hôte diminuant le risque de dysbiose intestinal.

Avantageusement, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée, de préférence, en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une réduction de la concentration d’IL-8 d'au moins 10% formant ledit environnement antiinflammatoire.

Dans le cadre de la présente invention, la concentration d'IL-8 a été mesurée grâce à des tests in vitro sur des cellules IPEC-J2 en présence du jus de fermentation (contenant ou non la composition symbiotique à tester). Avantageusement, selon l'invention, ladite composition symbiotique est caractérisée, de préférence, en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une stabilisation ou une augmentation de la sécrétion d'acides gras à courte chaîne (SCFA's) par le microbiote intestinal, lesdits SCFAs, produits lors du processus de fermentation du microbiote, sont Un indicateur de l'équiliore et dela croissance du microbiote.

Les SCFAs comme le butyrate a en effet un rôle bénéfique multiole au niveau de l'intestin comme son rôle régulateur dans le transport de fluide transépithélial.

Il améliore également l'état oxydatif et inflammation de la muqueuse de l'intestin, il renforce la barrière de défense épithéliale, il module la sensibilité viscérale et la mobilité intestinale (Canani, R.B. et col. World J. Gastroenterol., 2011, 17: 1519-1528, doi: 10.3/48/wjg.v17.112.1519). De préférence, selon l'invention, lesdits SCFAs sont choisis parmi le butyrate, le propionate, l'acétate, le lactate ou leurs combinaisons.

Dans le cadre de la présente invention, la production desdits SCFAs est mesurée grâce au modèle de fermentation statiques in vitro.

De préférence, selon l'invention, la composition symbiotique est caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique est choisi dans le groupe constitué de Bifidobacterium thermophilum et inuline, de Bifidobacterium crudilactis et beta-glucanes, de Bifidobacterium animalis lactis et 2'fucosyllactose, de Clostridium butyricum ei GOS/FOS, Enterococcus faecium et beta-glucanes et leur mélange.

Avaniageusement, selon l'invention, la composition symbiotique peut contenir plus de 1 probiotique, par exemple 2 probiotiques, ou par exemple 3 probiotiques, ou par exemple 4 probiotiques ou par exemple 5 probiotiques. Selon l'invention, la composition symbiotique pourra également contenir plus de 1 prébiotique, par exemple 2 prébiotiques, ou par exemple 3 prébiotiques, ou par exemple 4 prébiotiques. Une composition symbiotique pouvant contenir une combinaison de plusieurs probiotiques et de plusieurs prébiotiques permet d'optimiser l'environnement anti-inflammatoire et d'améliorer la production des indicateurs de croissance du microbiote tels que les SCFASs.

Fermentation statique in vitro: La capacité de fermentation des différentes combinaisons symbiotiques a été testée dans un modèle statique de fermentation in vitro, suivant le protocole décrit par Bindelle et col. Journal of Animal Science 2010, 87, 583-93. nttps://doiorg/10.252//10s.2007-0717 et par Tran et col. FEMS Microbiology Ecology 2016, 92, 1-13. hips fgolorg/id.1093/femsec{iv145. En résumé, la fermentation in vitro aété réalisée dans des flacons contenant 15 ml d'une solution contenant 3% de matières fécales de porcelet en pré-sevrage; trois supports de microcosmes préalablement immergés dans de la gélose à la mucine; 100 mg de prébiotique et 1E07 CFU / ml de probiotique. Les flacons scellés ont été incubés à 39 ° C sous agitation pendant 48 h dans un bain-marie. Trois répétitions ont été réalisées par condition de test.

Production de gaz: La pression du gaz a été mesurée 2, 5, 8, 12, 16, 20, 24 et 48h après le début de la fermentation pour la détermination de la cinétique de fermentation en utilisant le modèle mathématique monophasique de Groot et col. Animal Feed Science and Technology 1996, 64, 77-89. https://doi.org/10.1016/S0377-8401(96)01012-7. Plusieurs paramètres ont été calculés avec ce modèle: A (volume de gaz maximal, ml/g substrat), B (temps pour atteindre A/2, h), C comme constante déterminant la pente du point d'inflexion du profil, Rmax (taux de fermentation maximum, ml/g de subsirat/heure) et Tmax (temps pour atteindre Rmax).

Acides gras à chaîne courte: Lactate et les acides gras à chaîne courte (SCFA) ont été dosés dans le jus de fermentation obtenu après 24h par HPLC isocratique. La courbe standard utilisée contenait de l'acétate, du propionate, du butyrate ainsi que des acides gras à chaîne ramifiée (BCFA): isobutyrate, valérate et isovalérate.

La mesure de SCFA a ensuite été calculée en tenant compte de la production basale dans les flacons témoins-mucine contenant les supports de microcosme avec de la mucine. Les valeurs sont données en mmol par g de substrat et comparées aux mesures dans le jus de fermentation ne contenant que le prébiotique correspondant.

Détermination des modifications du microbiote par qPCR lors d'un essai en modèle de fermentation statique in vitro en présence de différentes compositions symbiotiques.

Pour chaque essai dans le système de fermentation statique in vitro, l'analyse des modifications du microbiote intestinal a été réalisée par qPCR sur des échantillons prélevés après 24 heures de fermentation.

Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens utilisées pour mesurer l'expression par qPCR des gènes cibles correspondant aux populations bactériennes bénéfiques pour Ia communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1.- Séquences des amorces sens (F) et anti-sens (R) pour mesurer par qPCR des gènes cibles correspondant aux populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin. Population Séquence des amorces 5'—3' bactérienne/gèn | Gènes cibles q x . > Référence . des genes cibles es cibles

CGTGCCAGCCGCGGTAATAC Bactéries totales GGGITGCGCTCGITGCGGGA | Amit-Romach Unibac-R et col. (2004)

CTTAACCCAAC

CATCCAGTGCAAACCTAAGA Lactobacillus Wang et col. GATCCGCTTGCCTTCGC (1996) GGGTGGTAATGCCGGAT - Bifidobacterium Langendijk et Bif662-R CCACCGTTACACCGGGAA col. (1995) Clostridium Sg-Clept-F | GCACAAGCAGTGGAG Matsuki et cluster IV Sg-Clept-R | CTTCCTCCGTTTTGTCAA col. (2004) Clostridium AAATGACGGTACCTGACTA Matsuki et cluster XIVa CTTTGAGTTTCATTCTTGCG col. (2002) Butyryl- TGGACAGAAAGGTIGCGGA CoA:acetate- Uerlings et GTGTGTACGCCCAGATCCT col. (2019) COA transférase Les bactéries totales sont ciblées à l'aide des amorces décrites dans Amit- Romach E. et col. Poult Sci 2004, 83, 1093-1098, doi: 10.3382/ps/pey394. Les bactéries faisant partie du groupe lactobacillus sont ciblées à l'aide des amorces décrites dans Wang R.F. et col. Appl Environ Microbiol 1996, 62, 1242-1247, doi: 10.1128/AEM.62.4.1242-1247.1996.

Les bactéries faisant partie du groupe bifidobacterium sont ciblées à l'aide des amorces décrites dans Langendijk P.S. et col. Appl Environ Microbiol 1995, 61, 3069-3075, doi: 10.1128/AEM.61.8.3069-

3075.1995.

Les bactéries faisant partie du groupe clostridium cluster IV sont ciblées à l’aide des amorces décrites dans Matsuki T. et col. Appl

Environ Microbiol 2004, 70, 7220-7228, doi: 10.1128/AEM.70.12.7220-

7228.2004. Les bactéries faisant partie du groupe clostridium cluster XIVa sont ciblées à l'aide des amorces décrites dans Matsuki T. et col. Appl Environ Microbiol 2002, 68, 5445-5451, doi: 10.1128/gem.68.11.5445-

5451.2002. La Butyri-CoA:acetate-CoA transférase est ciblée à l'aide des amorces décrites dans Uerlings J. et col. J Sci Food Agric 2019, 99, 5720-5733, doi: 10.1002/jsfa.9837.

Détermination de la capacité des probiotiques de survivre et de s’établir dans un écosystème microbien complexe par qPCR lors d’un essai en modèle de fermentation statique in vitro en présence de différentes compositions symbiotiques.

Pour chaque essai dans le modèle de fermentation statique in vitro, l'analyse et suivi de la présence de chaque probiotique dans le jus de fermentation a été réalisée par qPCR sur des échantillons prélevés à 12, 24 et 48 heures après le début de la fermentation. Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens ufilisées pour mesurer par RT- qPCR l'abondance relative des probiotiques sont indiquées dans le Tableau 2 ci-dessous.

Tableau 2.- Séquences des amorces sens (F) et anti-sens (R) pour mesurer par qPCR l'abondance relative des probiotiques. ee a Bifidobacterium CCCTIT CCA CGG GTC CC Veiga et col animalis lactis IOR | AAG GGA AAC CGT GTC TCC AC (2010) GCATGGAGGAAAAAG- GAA Bacillus coagulans Hidaka et col. IOR CCCGGCAACAGAGITITA (2010) Bifidobacterium TTG CIT GCG GGT GAG AGT Mathys et thermophilum IOR CGC CAA CAA GCT GAT AGG AC | col. (2008) Clostridium ATGGGTTAGGCAAGCAGAAA Cremones et butyricum LR GCTGGATCTGCCTTCTCATC col. (2012) Enterococus GAA ACG ACG GTG TCA TCA Loquasto et faecium LR; TCC ATT TTG TCG TTA TCT G col. (2013)

TGG ATC ACC TCC TTT CTA AGG Lactobacillus F AAT Haarman et plantarum OR | TGTTCT CGG TTT CAT TAT GAA col. (2005)

AAA ATA Bifidobacterium TGACCGACGAGATCACCTAT Cette crudilactis (rpoB) IOR | ACCATCTGACGTGGAGAGA invention Bifidobacterium CCATCGAGCTTCGTCCTTT Cette crudilactis (rpIB) IOR | GCCTTACCGAGCTGAAGATT invention Références bibliographiques du Tableau 2: Veiga, P. et col. 2010. Proceedings of the National Academy of Sciences of The United States of America 2010, 107: 1813237, https://doi.org/10.1073/pnas.101 1737107.

Hidaka T. et col. Water Research 2010, 44, 2554-62, https://doi.org/10.1016/j.watres.2010.01.007.

Mathys S. et col. BMC Microbiology 2008, 8, 179, https://doi.org/10.1186/1471-2180-8-179. Cremonesi P. et col. Journal of Dairy Research 2012, 79,318-23, https://doi.org/10.1017/S002202991200026X.

Loquasto J.R. et col. Applied and Environmental Microbiology 2013, 79, 6903-10, https://doi.org/10.1128/AEM.01777-13. Haarman M. et col. Applied and Environmental Microbiology 2005, 71, 2318-24, hitps://doi.0rg/10.1128/AEM.71.5.2318.

Détermination de la réponse immunitaire causée par incubation du jus de fermentation obtenu lors d’un essai en modèle de fermentation statique in vitro en présence de différentes compositions symbiotiques.

Dans la cadre de la présente invention, la lignée IPEC-J2 (entérocytes intestinaux isolés du jéjunum d'un porcelet nouvellement né et non allaité (ou alimenté avec une formulation lactée) et appartenant à une lignée cellulaire ni transformée ni tumorigène) a été incubée dans le jus de fermentation produit par Ia combinaison symbiotique à tester ou contenant uniquement le prébiotique en question pendant 24h. A la suite de cette période d'incubation, la réponse immunitaire est évaluée par la production de cytokines induites (IL-8, IL-6, IL-1b) et TNF-alpha. Préalablement, la cytotoxicité des jus de fermentation sur les cellules IPEC-J2 a été évaluée car pour pouvoir observer une réponse immunitaire, il est important que la lignée cellulaire reste viable. Pour chaque combinaison sélectionnée, l'effet des différentes concentrations en jus de fermentation, préalablement filtré à 0.8 um, sur la viabilité des cellules IPEC-J2 a été mesurée par le test MTT (sel de tétrazolium MTT : bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium), qui est un test colorimétrique de numérotation des cellules viables. Le contact des cellules IPEC-J2 a été ensuite réalisé avec un taux d'inoculation du jus de fermentation de 0.8% (V/V).

Mesure de la concentration d'IL-8: Dans le cadre de la présente invention, la concentration d'IL- 8 a été mesurée grâce à des tests in vitro sur des cellules IPEC-J2 en présence du jus de fermentation (contenant ou non la composition symbiotique à tester) (voir Figure 2). Pour réaliser le test, un essai a été réalisé en comparant les concentrations de IL-8 (les autres marqueurs IL-6, IL-1 et TNF-alpha n’ont pas été détectés) produites en présence du jus de fermentation dans différentes conditions: témoin-mucine (ligne horizontale de la Figure 2), prébiotiques seules (conditions GOS/FOS (GF), 2FL,Inuline (Inu), amidon résistant (RS) et B-glucane (BG)), et symbiotiques (les autres conditions de la Figure 2). Cet essai indique que si le niveau de IL-8 est plus faible en présence du jus de fermentation contenant la composition prébiotique ou symbiotique comparé au jus de fermentation témoin-mucine, cela montre un effet anti-inflammatoire de la présence du pré- ou symbiotique. En plus, si le niveau de IL-8 est plus faible en présence du jus de fermentation contenant la composition symbiotique comparé au jus de fermentation contenant uniquement le prébiotique, cela montre que la combinaison spécifique dudit au moins un probiotique avec ledit au moins un prébiotique possède un effet anti-inflammatoire supplémentaire par rapport au prébiotique seul. La viabilité cellulaire des symbiotiques (résultats du test MTT) a été prise en compte pour ajuster les concentrations d'IL-8. Le niveau d'expression d'IL-8 est déterminé par ELISA (Porcine IL-8/CXCL8 DuoSet ELISA kit DY535: R&D Systems).

Modèle BabySPIME : Le modèle BabySPIME est un modèle scientifiquement validé (Dufourny S. et col. Journal of Microbiological Methods, 2019, 167: 105735. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2019) qui simule la dynamique et les conditions physiologiques d'un tractus gastrointestinal complet chez le porcelet dans un environnement in vitro (équipement dérivé du modèle

SHIME de ProDigest Bvba, Gent, Belgium). Le modèle comprend 2 fois 3 réacteurs qui simulent de manière séquentielle l'estomac (condition acide et digestion par la pepsine), Viléon (processus de digestion enzymatique) et le côlon proximal (processus de fermentation par le microbiote) (voir Figure 1). Ce système permet d'obtenir des communautés microbiennes complexes et stables dont la fonction et la structure sont fortement similaires aux communautés microbiennes retrouvées dans les différentes régions de l'intestin.

Des pompes péristaltiques permettent le transfert du milieu de culture, du jus pancréatique, de la bile, de l'acide (HCI 0.5M), de la base (NaOH 0.5M) et des liquides de fermentation d'un réacteur à l'autre au cours d'un cycle complet. En pratique, le réacteur 1 simule les fonctions de l’estomac, du duodenum et du jejunum, le réacteur 2 simule les fonctions de l'îleum, le réacteur 3 simule les fonctions du colon proximal.

Un essai complet dans le système babySPIME dure 3 semaines : 2 semaines de stabilisation du microbiote simule la phase de lactation suivie par une semaine de traitement avec la composition symbiotique. Une solution de 108 CFU/ml a été préparée pour inoculer une dose finale de 107 CFU/ml de contenu intestinal. La dose de prébiotique estde2g de prébiotique/jour pour atteindre une concentration de 1% de l'alimentation.

Les matières fécales de 6 porcelets âgé de 27 jours en allaitement et n'ayant pas subi de traitement antibiotique ont été utilisées pour préparer l'inoculat de l'étude. Les matières fécales ont été prélevées directement des porceleïs et maintenues sur glace dans des conditions anaérobies. Pour chaque essai, l'inoculat a été préparé et homogénéisé pendant 10 minutes en ajoutant les matières fécales de chaque porcelet à une solution tampon de phosphate en anaérobie. Après une filtration macroscopique pour éliminer les particules encore en suspension, le filtrat a été injecté de manière simultanée dans les réacteurs 2 et 3. Avant l'inoculation, ces deux réacteurs ont été remplis avec un milieu de culture non-acidifié et le pH a été ajusté de manière automatique dans chaque réacteur de manière à simuler au mieux les conditions physiologiques.

Le milieu de culture a été préparé et validé préalablement. Les bouteilles de milieu ont été stockées à 4°C et le pH a été ajusté à 3.0 avant l'utilisation dans le premier réacteur. Une solution mimant le jus pancréatique contenant du bicarbonate de sodium (2.5 g/L, VWR Chemicals, Radnol, Pennsylvania, USA), de la pancréatine (0.99/L, ProDigest) et Oxgall (4.0 g/L) a été ajouté au milieu.

Le cycle d'alimentation est planifié 3 fois par jour basé sur un temps total de rétention de 14h. Au cours de chaque cycle, le milieu de culture, maintenu à 4°C, passe dans le réacteur 1 pendant 1h30. Ensuite, le jus pancréatique/oxgall (60mI), aussi maintenu à 4°C, a été ajouté dans le même réacteur pour pendant Ih. Après ce temps, et de manière simultanée, le contenu du réacteurs 1, 2 et 3 a été transvasé respectivement dans les réacteurs 2, 3 et dans un conteneur biologique de déchet.

Les conditions anaérobiques de tous les réacteurs sont maintenues grâce à un flux d'azote (N2) une fois par jour pendant 10 minutes au niveau des réacteurs. Le contenu des réacteurs est agité de manière continue (300 rpm) et maintenu à 39.5°C. Le pH des réacteurs 2 et 3 est contrôlé en continu afin de stabiliser le pH de l'iléum et du colon proximal.

Des prélèvements ont été collectés dans le système babySPIME durant la phase de stabilisation, avant le traitement avec les formulations symbiotiques et en fin de traitement avec le symbiotique.

Pour chaque essai dans le système babySPIME, l'analyse des modifications du microbiote intestinal a été réalisée par qPCR sur des échantillons prélevés en fin de phase de stabilisation et à la fin d'une semaine de traitement par une composition symbiotique. Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens ufilisées pour mesurer par qPCR l'expression des gènes cibles correspondant aux populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1 mentionné plus haut.

Trois répétitions sur le modèle SHIME ont été réalisées pour chacune des combinaisons symbiotiques.

Exemples.- Exemple 1 : La capacité de fermentation de la composition symbiotique par modélisation de la production de gaz et la production de lactate et SCFA dans un modèle de fermentation statique in vitro Les courbes de la fermentation des pré- ou symbiotiques sont montrées dans la figure 3. Dans toutes les conditions de la Figure 3, il y a une augmentation de la capacité de fermentation mesurée par l'augmentation de la production de gaz. Dans toutes les conditions de la figure 3, cette production de gaz est plus importante en présence d'une composition symbiotigue par rapport à la présence du prébiotique seul.

Les paramètres issus de la modélisation de la production de goz pendant la fermentation statique des symbiotiques sont comparés par rapport aux paramètres des prébiotiques seules (tableau 3).

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La cinétique de production de gaz et les paramètres du modèle incluent : A: la production maximale de gaz ; B: le temps pour avoir 50% de la production maximale de gaz; C: la pente ; D: le taux maximal de production de gaz (Rmax) ; le temps à Rmax (Tmax). La fermentation statique des combinaisons symbiotiques a été réalisée à 10E7 CFU/ml de probiotique et 0.1 g de prébiotique (même quantité de prébiotique utilisée dans la condition où le prébiotique est seul) en présence de 3% d'un inoculat de fécès. Les résultats indiquent Ia moyenne +/- l'écart-type de 3 réplicats expérimentaux. Les p-valeurs ont été obtenues par une analyse statistique ANOVA unidirectionnel avec un test de comparaison multiple de type Dunnett. La significativité statistique est considérée lorsque p < 0.05.

Les SCFAs dans le jus de fermentation après 24h de fermentation sont montrés dans le tableau 4. Il n'y avait pas de production delactate après 24h de fermentation.

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La fermentation statique des combinaisons symbiotiques a été réalisée à 10E7 CFU/ml de probiotique et 0,1 g de prébiotique (même quantité de prébiotique utilisée dans la condition où le prébiotique est seul) en présence de 3% d'un inoculat de fécès.

Les résultats indiquent la moyemne +/- l'écart-type de 3 réplicats expérimentaux.

Les p-valeurs ont été obtenues par une analyse statistique ANOVA unidirectionnel avec un test de comparaison multiple de type Dunnett.

Lorsque p <005:*;p< 0,01 :**;p<0,001 : *** > p < 0,0007 : ****, Example 2 : Détermination des modifications du microbiote par gPCR lors d'un essai en modèle de fermentation statique in vitro en présence de différentes compositions symbiotiques L’abondance relative des bactéries bénéfiques après 24h de fermentation sont présentés dans la figure 4. La méthode de delta-delta CT a été utilsée pour exprimer les bactéries cibles par rapport aux bactéries totales.

Les résultats des symbiotiques sont comparés par rapport aux prébiotiques seuls.

Comme l'indique la figure 4, plusieurs compositions symbiotiques, comme BT-GF, CB-GF, BCO-GF, BCU-2FL, BMO-2FL, BAL-2FL, BAL-Inu, BT-Inu, CB-RS, BCU-RS, BAL-BG, LP-BG, ou BCU- BG, permettent d'augmenter de manière significative l'abondance relative des bactéries bénéfiques à 24h de fermentation.

Exemple 3 : Détermination de la capacité des probiotiques de survivre et de s'établir pendant la fermentation La figure 5 montre la présence des probiotiques dans le jus de fermentation après 12, 24 et 48h de fermentation.

Des compositions symbiotiques, comme BT-Inu, permettent une bon établissement et une bonne capacité de survie du probiotique.

Exemple 4 : Détermination de l'effet immunomodulateur de la composition symbiotique par quantification de la production d'IL-8 et NO par des cellules IPEC-J2.

La production d'IL-8 dans les cellules IPEC-J2 a été mesurée porun'est ELISA.

Après 24h d'incubation, la réponse immunitaire a été évaluée en mesurant la production d’IL-8 dans le mileu de culture cellulaire. Les cellules IPEC-J2 ont été iIncubées avec 0,8 % (V/V) de jus de fermentation préalablement stérilisé par filtration. De plus, le taux de survie des cellules IPEC-J2 est supérieur ou égal à 70% dans toutes les conditions testées de jus de fermentation.

Pour déterminer l'impact de la composition symbiotique contenue dans le jus de fermentation sur la production d'IL-8, le taux de production d’IL-8 a été mesuré dans une condition contrôle où le jus de fermentation contient un inoculat de fèces, de lo mucine (témoin- mucine), mais en absence de problotiques, de prébiotiques ou de symbiotiques. Dans cette condition conirôle, un niveau de base d'expression d'IL-8 est de 932 pg/ml! (représenté par la ligne horizontale à la figure 2}. Les pré- et symbiotiques ont été comparé par rapport au témoin-mucine. En plus les symbiotiques ont été comparé par rapport au prébiotique pour estimer l'effet additionnel de probiotique. Le tableau 5 montre les p-vaieurs de ces comparaisons, et la figure 2 montre les concentrations d'IL8.

Tableau 5.- Production d'IL-8 par les cellules IPEC-J2 dans le surnageant après 24h d'incubation avec 0,8% de jus de fermentation préalablement stérilisé par filtration produit par la composition symbiotique ou le prébiotique seul.

IL-8 (pg/ml) moyenne | ET (vs (vs blanc- prébiotique) mucine) GOS/FOS (GF) 10940 | 40,5 | | 0042 BCO-GF 897,3 0,0041 0,9207 BT-GF 1089,4 0,9999 0,0497 CB-GF 849,5 0,0006 0,3954 EF-GF 927,5 0,0138 0,9997 10412 |526| | 02193 BAL-2FL 581,3 <0,0001 <0,0001 BCU-2FL 570,8 <0,0001 <0,0001 BMO-2FL 715,1 <0,0001 0,0037 INULINE (Inu) 11164 | 409 | | 0028 BAL-Inu 1177,7 112,6 0,4075 0,004 1025,9 0,1816 0,3398 Amidon résistant (RS) | 753,3 | 509| | 0,0086 BCU-RS 1150,3 <0,0001 0,003 CB-RS 1195,6 <0,0001 0,0007 B-GLUCANE 8317 |405| | 01916 BAL-BG 393,6 <0,0001 <0,0001 BCU-BG 413,2 <0,0001 <0,0001 EF-BG 1128,9 <0,0001 0,0066 LP-BG 775,7 106,0 0,5405 0,0232 9371 [nos] | Les valeurs sont corrigées en fonction de la viabilité cellulaire. Les résultats sont des moyennes avec leurs écart-types. Les comparaisons sont réalisées entre les compositions symbiotiques et le prébiotique seul. Les significativités statistiques sont analysées par une ANOVA unidirectionnel avec un test de comparaison multiple de type Dunnett.

Lorsque p<0,05 : * ; p<0,01 : ** ; p<0,001 : *** ; p<O,0001 : ****,

Exemple 5 : Détermination des modifications du microbiote par qPCR lors d'un essai en modèle baby SPIME en présence de différentes compositions symbiotiques.

Les résultats globaux obtenus sur le système baby SPIME sont présentés dans la figure 6 et le tableau 6.

Tableau 6.- Synthèse de la régulation à la hausse ou à la baisse de groupes bactériens d'intérêt suite au traitement symbiotique dans le système SHIME après une semaine de traitement avec les différents symbiotiques.

Test Lactobacillus | Bifidobacterium | Cluster | Cluster XIV | Acetyl Wilcoxon IV CoA Control Baisse Tendance à la Stable Stable Stable SHIME p<0,01 baisse 0,05<p<0,1 EF + BG Stable Tendance à la Baisse Stable Hausse baisse p= p<0,05 0,05<p<0,1 0,01 BT + INU Stable Tendance à la | Hausse Baisse Stable hausse p<0,05 (p = 0,05) 0,05<p<0,1 CB + Baisse Stable Stable Stable Hausse GOS/FOS p<0,01 p<0,01 BAL + 2FL Baisse Hausse Stable Stable Stable p<0,01 p<0,05 BCU + BG Baisse Tendance à la | Hausse | Tendance | Stable p<0,01 hausse p<0,05 | à la baisse 0,05<p<0,1 0,05<p<0,1 Nous retrouvons soit une diminution de la population bactérienne, soit une augmentation de la population bactérienne ou soit une stabilisation de la population bactérienne. Le test statistique réalisé est un test de Wilcoxon.

Exemple 6: Composition symbiotique Cl comprenant au moins Clostridium butyricum et au moins GOS/FOS contre la dysbiose intestinale.

On a préparé la composition Cl en ajoutant 1E07 CFU/ml Clostridium butyricum et 0,1 g de GOS/FOS.

Plus particulièrement, au niveau du prébiotique, 0,19 de GOS/FOS a été ajouté dans chaque flacon de fermentation contenant 15ml de jus de fermentation.

Pour le mélange GOS/FOS, le prébiotique consiste en une solution liquide homogène de 80% (p/p) de GOS et 20% (p/p) de FOS.

AU niveau du probiotique, une poudre lyophilisée de bactérie a été pré-mixé dans une solution tampon à une concentration de 1,5E08 CFU/ml (solution stock). Avant d'être ajouté au flacon de fermentation, la solution pré-mixée de probiotique a subi un processus de revivification consistant en une incubation de 30 min, à 37°C sous agitation.

Ensuite, 1 ml de la solution pré-mixée (solution stock) a été ajouté au flacon menant à une concentration finale en probiotique de 1E07 CFU/ml dans le flacon.

La composition symbiotique comprenant au moins Clostridium butyricum et au moins GOS/FOS contre la dysbiose intestinale a montré un effet favorable sur la fermentation, en augmentant la valeur A (production maximale de gaz) par rapport au prébiotique seul (voir condition CB-GoF du Tableau 3, et en augmentant les concentrations de SCFAs totales et butyrate après 24 heures de fermentation statique in vitro (voir condition CB-GoF du Tableau 4). En plus, l'abondance relative des Bifidobacteria et Lactobacill a augmenté en comparaison avec le prébiotique seul (voir condition CB-GF de la Figure 4). Le probiotique Clostridium butyricum était encore présent dans le jus de fermentation après 48h de fermentation.

Un effet anti-inflammatoire est montré in vitro sur des cellules IPEC-J2 générant une diminution de la production d'IL-8 par rapport au GOS/FOS seul, tandis que la concentration d'IL-8 n'était pas différent par rapport au témoin-mucine (voir condition CB-GF de la Figure 2). De plus, la composition symbiotique Cl montre une amélioration du microbiote dans le modèle SHIME en augmentant les populations bactériennes impliquées dans les voies métaboliques de production de butyrate.

L'augmentation de ces populations bactériennes a été analysée par qPCR (voir condition CB + G/F de la Figure 6 et Tableau 6 présentés plus haut). Les séquences des amorces sens et des amorces antisens utilisées pour mesurer par qPCR l'abondance relative des populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1. Exemple 7: Composition symbiotique C2 comprenant au moins Bifidobacterium thermophilum et au moins l'inuline contre la dysbiose intestinale.

On a préparé la composition C2 en ajoutant 1E07 CFU/ml de Bifidobacterium thermophilum et 0,1 g d'inuline.

Plus particulièrement, au niveau du prébiotique, 0,1g d'inuline a été ajouté dans chaque flacon de fermentation contenant 15ml de jus de fermentation.

Au niveau du probiotigue Bifidobacterium thermophilum, une poudre lyophilisée de bactérie a été pré-mixé dans une solution tampon à une concentration de 1,5E08 CFU/ml (solution stock). Avant d'être ajouté au flacon de fermentation, la solution pré- mixée de probiotique a subi un processus de revivification consistant en uneincubation de 30 min, à 37°C sous agitation.

Ensuite, 1 ml de la solution pré-mixée (solution stock) a été ajouté au flacon menant à une concentration finale en probiotique de 1E07 CFU/ml dans le flacon.

La composition symbiotique C2 comprenant Bifidobacterium thermophilum (BT) et de l'inuline (Inu) contre la dysbiose intestinale a montré un effet bénéfique sur la fermentation, démontré par une augmentation de la valeur A (production maximale de gaz), une diminution de la valeur B (le temps pour atteindre 50% de la production maximale de gaz), une augmentation de la vitesse de fermentation (Rmax), et une diminution du temps pour atteindre la quantité maximale de gaz produite (Tmax) par rapport à l'inuline seule (voir condition BT-Inu du Tableau 3). En plus, une augmentation de la concentration de butyrate et l'abondance relative des bifidobactéries dans le jus de fermentation après 24h est démontré (voir condition BT-Inu de la Figure 4), Bifidobacterium thermophilum était bien présent jusqu'à la fin de la fermentation. Un effet anti-inflammatoire in vitro sur des cellules IPEC-J2 générant une diminution de la production d'IL-8 par rapport à l’inuline seule (pas de différence entre le symbiotique et le témoin-mucine) selon le protocole décrit à l'exemple 1 (voir condition BT-Inu de la Figure 2).

De plus, la composition symbiotique C2 montre une amélioration du microbiote dans le modèle SHIME en augmentant les populations bactériennes impliquées dans les voies métaboliques de production de butyrate et montrant une tendance à l'augmentation des bifidobactéries. L'augmentation de ces populations bactériennes a été mesurée par qPCR (voir condition BT + INU de la Figure 6 et Tableau 6). Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens utilisées pour mesurer par qPCR l'abondance relative des populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1.

Exemple 8: Composition symbiotique C3 comprenant au moins Bifidobacterium animalis lactis et au moins 2'FL contre la dysbiose intestinale.

On a préparé la composition C3 en ajoutant 1E07 CFU/ml de Bifidobacterium animalis lactis et 0,1 g de 2'FL.

Plus particulièrement, au niveau du prébiotique, 0,1g de 2'FL a été ajouté dans chaque flacon de fermentation contenant 15ml de jus de fermentation.

AU niveau du probiotique Bifidobacterium animalis lactis, une poudre lyophilisée de bactérie a été pré-mixé dans une solution tampon à une concentration de 1,5E08 CFU/ml (solution stock). Avant d'être ajouté au flacon de fermentation, la solution pré-mixée de probiotique a subi un processus de revivification consistant en une incubation de 30 min, à 37°C sous agitation.

Ensuite, 1 ml de la solution pré-mixée (solution stock) a été ajouté au flacon menant à une concentration finale en probiotique de 1E07 CFU/ml dans le flacon.

La composition symbiotique C3 contre la dysbiose intestinale a montré un effet bénéfique sur la fermentation, démontré par une augmentation de la valeur A (production maximale de gaz), une diminution de la valeur B (le temps pour atteindre 50% de la production maximale de gaz), une augmentation de la vitesse de fermentation (Rmax), et une diminution du temps pour atteindre la quantité maximale de gaz produite (Tmax) par rapport à 2'FL seule (voir condition Bal-2FL du Tableau 3). En plus, une augmentation de la concentration de butyrate (voir condition BAL-2FL du Tableau 4) et l'abondance relative des Clostridium clusters IV dans le jus de fermentation après 24h est démontré (voir condition BAL-2FL de la Figure 4), Bifidobacterium animalis lactis était bien présent jusqu'à la fin de la fermentation.

Un effet anti-inflammatoire in vitro sur des cellules IPEC-J2 générant une diminution de la production d'IL-8 (voir condition BAL-2FL de la Figure 2) par rapport à 2'FL seul et par rapport au témoin-mucine selon le protocole de l'exemple 1. De plus, la composition symbiotique C3 montre une amélioration du microbiote dans le modèle SHIME en augmentant les populations bactériennes de bifidobactéries. L'augmentation de ces populations bactériennes a été mesurée par qPCR (voir condition BAL + 2FL de la Figure 6 et Tableau 6). Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens utilisées pour mesurer par qPCR l'abondance relative des populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1.

Exemple 9: Composition symbiotique CA comprenant Bifidobacterium crudilactis et du beta-glucane contre la dysbiose intestinale.

On a préparé la composition C4 en ajoutant 1E07 CFU/ml de Bifidobacterium crudilactis et 0,1 g de beta-glucane.

Plus particulièrement, au niveau du prébiotique, 0,1g de beta-glucane a été ajouté dans chaque flacon de fermentation contenant 15ml de jus de fermeniation. Au niveau du probiotique Bifidobacterium animalis lactis, une poudre lyophilisée de bactérie a été pré-mixé dans une solution tampon à une concentration de 1,5E08 CFU/ml (solution stock). Avant d'être ajouté au flacon de fermentation, la solution pré-mixée de probiotique a subi un processus de revivification consistant en une incubation de 30 min, à 37°C sous agitation. Ensuite, 1 mlde la solution pré-mixée (solution stock) a été ajouté au flacon menant à une concentration finale en probiotique de 1E07 CFU/ml dans le flacon.

La composition symbiotique C4 comprenant Bifidobacterium crudilactis et du beta-glucane contre la dysbiose intestinale a montré un effet bénéfique sur Ia fermentation, démontré par une augmentation de la valeur A (production maximale de gaz) et une augmentation de la vitesse de fermentation (Rmax) par rapport au beta-glucane seul (voir condition BCU-BG du Tableau 3). En plus, après 24h de fermentation, une augmentation de la concentration des SCFAs totales et de butyrate (voir condition BCU-BG du Tableau 4) et l'abondance relative des Clostridium clusters XIVa dans le jus de fermentation est démontré (voir condition BCU- BG de la Figure 4). Un effet anti-inflammatoire est démontré in vitro sur des cellules IPEC-J2 générant une diminution de la production d'IL-8 par rapport au beta-glucane seule et par rapport au témoin-mucine selon le protocole décrit à l'exemple 1 (voir condition BCU-BG de la Figure 2).

De plus, la composition symbiotique CA montre une amélioration du microbiote dans le modèle SHIME en augmentant les populations bactériennes impliquées dans les voies métaboliques de production de butyrate et montrant une tendance à l'augmentation des bifidolbactéries. L'augmentation de ces populations bactériennes a été mesurée par qPCR (voir condition BC + BG de la Figure 6 et Tableau 6). Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens utilisées pour mesurer par qPCR l'abondance relative des populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1.

Exemple 10: Composition symbiotique C5 comprenant Enterococcus faecium et du beta-glucane contre la dysbiose intestinale.

La composition symbiotique C5 contre la dysbiose intestinale a montré un effet bénéfique sur la fermentation, démontré par une augmentation de la valeur A (production maximale de gaz) et une augmentation de la vitesse de fermentation (Rmax) par rapport au beta- glucane seul (voir condition EF-BG du Tableau 3). En plus, après 24h de fermentation, une augmentation de la concentration des SCFAs totales et de butyrate dans le jus de fermentation est démontré (voir condition EF-BG du Tableau 4).

De plus, la composition symbiotique C5 montre une amélioration du microbiote dans le modèle SHIME en augmentant les populations bactériennes impliquées dans les voies métaboliques de production de butyrate mais pas des bifidobactéries. L'augmentation de ces populations bactériennes a été mesurée par qPCR (voir condition EF + BG de la Figure 6 et Tableau 6). Les séquences des amorces sens et des amorces anti-sens utilisées pour mesurer par qPCR l'abondance relative des populations bactériennes bénéfiques pour la communauté microbienne de l'intestin sont indiquées dans le Tableau 1.

Exemple 11 : Composition symbiotique SYN 3 comprenant E. faecium, C. butyricum, du beta-glucane et de l'inuline contre la dysbiose intestinale et doses administrées in vivo à la truie avant mise bas et après mise bas.

Pour les probiotiques, la quantité administrée est indiquée en CFU/truie/jour, tandis que pour les prébiotiques, la quantité administrée est indiquée en g/truie/jour (voir Tableau 7).

L'administration in vivo de la composition symbiotique a été réalisée à 4 stades de développement différents : avant mise bas, une semaine après mise bas, 2 semaines après mise bas et 3 semaines après mise bas.

Tableau 7.- Composition symbiotique SYN3 comprenant E. faecium, C. butyricum, du beta-glucane et de l'inuline et quantité de chaque probiotique et prébiotique administrée par jour à 4 stades de développement. SYN3 E. faecium C. butyricum | Beta-glucane | Inuline G80-G107 EE lee le Le bas, MB) 1,60E+09 1,60E+09 1,60 9,60

MB : mise-bas ; G : jour de gestation Les 4 stades de développement sont G80-G107 (entre 80 jours et 107 jours de gestation, avant mise bas), 1 semaine après mise bas, 2 semaines après mise base et 3 semaines après mise bas.

Exemple 12 : Composition symbiotique SYN 4 comprenant E. faecium, B. animalis lactis, B. crudilactis, du beta-glucane et de l'inuline contre la dysbiose intestinale et doses administrées in vivo à la truie avant mise bas et après mise bas.

Pour les probiotiques, la quantité administrée est indiquée en CFU/truie/jour, tandis que pour les prébiotiques, la quantité administrée est indiquée en g/truie/jour (voir Tableau 8). L'administration in vivo de la composition symbiotique a été réalisée à 4 stades de développement différents : G80-G107 (entre 80 et 107 jours de gestation, avant mise bas, MB), une semaine après mise bas, 2 semaines après mise bas et 3 semaines après mise bas.

Tableau 8.- Composition symbiotique SYNA comprenant E. faecium, B. animalis lactis, B. crudilactis, du beta-glucane et de l’inuline et quantité de chaque probiotique et prébiotique administrée par jour à 4 stades de développement. | Probiotique Prébiotique E. B. animalis | Beta SYN4 faecium lactis B. crudilactis glucane Inuline (CFU/truie | (CFU/truie/jo (CFU/frvie/jo (g/truie/jo (a/frvie/] Esse G80-G107 (avant Wr a rs ie fire Le he MB) 1,07E+09 1,07E+09 1,07E+09 1,60 9,60 MB: mise-bas ; G : jour de gestation Exemple 13: Composition symbiotique contre la dysbiose intestinale et doses administrées in vivo au porcelet Dans un essai in vivo (première expérience), le symbiotique 1 est composé de Clostridium butyricum et GOS/FOS et le symbiotique 2 est composé de B. animalis lactis et 2'FL (voir Tableaux 9 et 10 ci-dessous). Les quantités distribuées aux porcelets, avec un pistolet d'administration sont indiquées dans le tableau 9. De manière contrôlée, les porcelets ont ingéré une quantité déterminée de symbiotique, qui a augmenté avec l’âge.

Dans un autre essai in vivo (deuxième expérience), les mêmes symbiotiques ont été testés. Cette fois, le symbiotique est distribué aux porcelets par le pistolet d'administration à la naissance et au jour 4-5, et ensuite dans le lait de remplacement et l'aiment ‘creep feed’

(alimentation sous la truie) distribué Uniquement aux porcelets (pas aux truies). Les quantités des symbiotiques distribués aux porcelets sont indiquées dans le tableau 10. Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.

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Claims (15)

«Revendications »

1. Composition symbiotique administrable à l'animal, en particulier au mammifère, en particulier au porc, en particulier de l'animal en gestation et au nouveau-né, en particulier à la truie en gestation ou non et au porcelet comprenant au moins Un probiotique et au moins un prébiotique pour le traitement ou la prévention de la dysbiose, caractérisée en ce que ledit au moins Un probiotique et ledit au moins Un prébiotique sont choisis de telle manière qu’ils génèrent ensemble un environnement antiinflammatoire dans l'intestin dudit animal, en particulier du mammifère, en particulier du porc, de préférence de l'animal en gestation et au nouveau-né, en particulier à la truie en gesiation ou non et au porcelet.

2. Composition selon la revendication 1, dans lequel ledit probiotique est choisi dans le groupe des micro-organismes comprenant Bifidobacterium Tthermophilum, Enterococcus faecium, Bifidobacterium animalis lactis, Clostridium butyricum, Bifidobacterium crudilactis.

3. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit prébiotique est choisi dans le groupe comprenant l'inuline, le B-glucane, 2'Fucosyllactose, GOS/FOS {galactoligosaccharide, fructoligosaccharide), l'amidon résistant.

4. Composition selon [lune des revendications précédentes 1 à 3, caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une augmentation des concentrations en populations bactériennes endogènes favorables au microbiote intestinal telles que les lactobacillus, et les bifidobacteria.

5. Composition selon [lune des revendications précédentes 1 à 4, caractérisée en ce que ledit au moins Un probiotique et ledit au moins Un prébiotique génèrent ensemble une réduction de la concentration d'IL-8 d'au moins 10 %, formant ledit environnement anti- inflammatoire.

6. Composition selon [lune des revendications précédentes 1 à 5, caractérisée en ce que ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique génèrent ensemble une stabilisation ou une augmentation de la sécrétion d'acides gras à courte chaîne (SCFA's) par le microbiote intestinal, lesdits SCFAs, produits lors du processus de fermentation du microbiote, sont un indicateur de l'équiliore et de la croissance du microbiote.

7. Composition selon la revendication 6, dans laquelle lesdits SCFAs sont choisis parmi le butyrate, le propionate, l'acétate, le lactate ou leurs combinaisons.

8. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit au moins un probiotique et ledit au moins un prébiotique est choisi dans le groupe constitué de Bifidobacterium t£hermophilum et inuline, de Bifidobacterium crudilactis et beta-glucanes, de Bifidobacterium animalis lactis et 2’fucosyllactose, de Clostridium butyricum ei GOS/FOS, Enterococcus faecium et beta- glucanes et leur mélange.

9. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, contenant plus de 1 probiotique, par exemple 2 probiotiques, ou par exemple 3 probiotiques, ou par exemple 4 probiotiques ou par exemple 5 probiotiques.

10. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, contenant plus de 1 prébiotique, par exemple 2 prébiotiques, ou par exemple 3 prébiotiques, ou par exemple 4 prébiotiques.

11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant au moins un excipient conventionnel, sous forme liquide ou solide.

12. Complément alimentaire pour le traitement préventif et/ou curatif de la dysbiose, comprenant ladite composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11.

13. Aliment complet ou complémentaire pour animaux d'élevage comprenant ladite composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, ledit aliment étant sous forme de farine et/ou de granulés et/ou d'alimentations lactées et/ou toutes autres formes de conditionnement alimentaire.

14. Aliment pour nouveau-né animal comprenant ladite composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 et une base lactée compatible avec l'alimentation du nouveau-né.

15. Utilisation dune composition selon l’une des revendications 1 à 11, pour le traitement préventif et/ou curatif de la dysbiose, comprenant au moins une administration de ladite composition selon l'une des revendications } à 11 à raison d'une quantité de prébiotique comprise entre 0,1 et 1000 g/iour/animal, préférentiellement entre 0,5 et 100 g/jour/animal, de manière avantageuse entre 1 et 25 g/our/animatl, d'une quantité de probiotique comprise entre 1,00E+05 et 1,00E+015 CFU/jour/animal, préférentiellement entre 1,00E+06 et 1,00E+013 CFU/jour/animal, de manière avantageuse entre 1,00E+07 et 1,00E+011 CFU/jour/animal et au moins une administration d'une ration alimentaire quotidienne, ledit probiotique et ledit prébiotique de la composition selon l'une des revendications 1 à 11 étant administrée de manière simultanée, séparée ou échelonnée dans le temps.