BE1024312B1 - Erstellung von liposomal verkapselten lactoferrin - Google Patents
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Abstract
Vorliegend ist ein Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins angegeben, das nacheinander die folgenden Schritte umfasst: 1) Auflösen von Sojalecithin und Cholesterin in einem Massenverhältnis von 10-1: 1 in einem Lösungsmittel I, um eine Lösung I zu gewinnen; wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel I, 5-8 mg des Sojalecithin / 1 ml des Lösungsmittels I ist; Auflösen von Lactoferrin in einem Lösungsmittel II um eine Lösung II zu erhalten, wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel II, 8-18 mg des Sojalecithin / 1 ml des Lösungsmittels II ist; 2) Mischen der Lösungen I und II in einem Gefäß, anschließend Vakuumverdampfen, bis eine Liposom-Dünnfilmschicht ausgebildet ist; wobei das Massenverhältnis von Lactoferrin zu Sojalecithin 1:1.2-4 ist; 3) Zugabe eines Lösungsmittelgemisches, bestehend aus einem nichtionischen Tensid und einem Emulgator, und dem Lösungsmittel II, in einen Behälter entsprechend einem Verhältnis von 100 mg Sojalecithin zu 25-40 ml des Lösungsmittelgemisches, wobei das Volumenverhältnis des nichtionischen Tensids und des Emulgators zu dem Lösungsmittel II, 0.005-0.02:1 ist; 4) das Produkt aus Schritt 3) Vakuumverdampfen bei 0,07 bis 0,1 MPa, bis die Liposomen-Dünnfilmschicht in dem Lösungsmittelgemisch gelöst ist um liposomal verkapseltes Lactoferrin zu erhalten; wobei das Lösungsmittel I Trichlormethan und / oder Ethylether ist; und das Lösungsmittel III ein Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 7,4.
Description
(73) Inhaber :
CHINA JILIANG UNIVERSITY 310018, HANGZHOU China (72) Erfinder :
GUAN Rongfa 310018 HANGZHOU China
SHEN Haitao 310018 HANGZHOU China
LIU Donghong 310018 HANGZHOU China
LV Fei
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WANG Yan 310018 HANGZHOU China
LIU Mingqi
310018 HANGZHOU
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LUO Zisheng 310018 HANGZHOU China
JIAQiaojun 310018 HANGZHOU
China
WANG Yanho 310018 HANGZHOU China
YU Xiaoping 310018 HANGZHOU China (54) ERSTELLUNG VON LIPOSOMAL VERKAPSELTEN LACTOFERRIN (57) Vorliegend ist ein Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins angegeben, das nacheinander die folgenden Schritte umfasst: 1) Auflösen von Sojalecithin und Cholesterin in einem Massenverhältnis von 10-1: 1 in einem Lösungsmittel I, um eine Lösung I zu gewinnen; wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel I, 5-8 mg des
Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels I ist; Auflösen Tsii: von Lactoferrin in einem Lösungsmittel II um eine
Lösung II zu erhalten, wobei das Masse / VolumenVerhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel II, 818 mg des Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels II ist; 2) Mischen der Lösungen I und II in einem
Gefäß, anschließend Vakuumverdampfen, bis eine
Liposom-Dünnfilmschicht ausgebildet ist; wobei das
Massenverhältnis von Lactoferrin zu Sojalecithin
1:1.2-4 ist; 3) Zugabe eines
Lösungsmittelgemisches, bestehend aus einem Fig, ( nichtionischen Tensid und einem Emulgator, und dem Lösungsmittel II, in einen Behälter entsprechend einem Verhältnis von 100 mg
Sojalecithin zu 25-40 ml des
Lösungsmittelgemisches, wobei das
Volumenverhältnis des nichtionischen Tensids und des Emulgators zu dem Lösungsmittel II, 0.0050.02:1 ist; 4) das Produkt aus Schritt 3)
Vakuumverdampfen bei 0,07 bis 0,1 MPa, bis die
Liposomen-Dünnfilmschicht in dem
Lösungsmittelgemisch gelöst ist um liposomal verkapseltes Lactoferrin zu erhalten; wobei das
Lösungsmittel I Trichlormethan und / oder Ethylether ist; und das Lösungsmittel III ein
Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 7,4.
BELGISCHES ERFINDUNGSPATENT
FÖD Wirtschaft, K.M.B., Mittelstand & Nummer der Veröffentlichung : 1024312
Energie Einreichungsnummer : BE2016/5637
Amt für Geistiges Eigentum Internat. Klassifikation : A61K 38/40 A61K 9/127 A23P 10/35 A23L
13/40
Datum der Erteilung am : 24/01/2018
Der Minister für Unternehmen,
Aufgrund des Pariser Vertrags vom 20. März 1883 zum Schutz des Gewerbliches Eigentums ;
Aufgrund des Gezetzes vom 28. März 1984 über Erfindungspatente, Artikel 22, für die Anträgen vor dem 22. September 2014 eingeführt;
Aufgrund des Titels I “Erfindungspatente” des Buches XI des Wirtschaftsgesetzbuches, Artikel XI.24, für die Anträgen ab 22. September 2014 eingeführt ;
Aufgrund des königlichen Erlasses vom 2. Dezember 1986 über die Anmeldung, die Erteilung und die Aufrechterhaltung von Erfindungspatenten, Artikel 28;
Aufgrund des Protokolls aufgenommen am 16/08/2016 beim Amt für Geistiges Eigentum.
In Erwägung, dass für Patentanmeldungen, die unter den Anwendungsbereich des Titels 1, Buch XI, des Wirtschaftgesetzbuches fallen, in Übereinstimmung mit Artikel XI.19, § 4, zweiter Absatz, des Wirtschaftsgesetzbuches, wenn die Patentanmeldung Gegenstand eines Recherchenberichts ist, in dem eine mangelnde Einheitlichkeit der Erfindung im Sinne des Paragraphen 1 erwähnt wird, und wenn der Anmelder seine Anmeldung nicht beschränkt und keine Teilanmeldung einreicht in Übereinstimmung des Recherchenberichts, das erteilte Patent beschränkt sein wird auf die Patentansprüche wofür der Recherchenbericht erstellt wurde.
BESCHLIEßT :
Artikel 1. - Es wird ein Erfindungspatent erteilt an :
CHINA JILIANG UNIVERSITY, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018 HANGZHOU China;
vertreten von :
SCHMID Michael, Wilhelmstrasse 61, 90766, FUERTH;
für die Dauer von 20 Jahren, vorbehaltlich der Zahlung der Patentjahresgebühren erwähnt in Artikel XI.48, §1 des Wirtschaftsgesetzbuches, für : ERSTELLUNG VON LIPOSOMAL VERKAPSELTEN LACTOFERRIN.
ERFINDER :
GUAN Rongfa, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area Xueyuan Street,
Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
SHEN Haitao, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LIU Donghong, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LV Fei, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
WANG Yan, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LIU Mingqi, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LUO Zisheng, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
JIAQiaojun, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
WANG Yanho, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
YU Xiaoping, China Jiliang University Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
PRIORITÄT(EN) :
ABSPALTUNG :
Teilantrag des früheren Antrags : Anmeldetag des früheren Antrags :
Artikel 2. - Dieses Patent wird erteilt ohne jede vorherige Prüfung der Patentfähigkeit der Erfindung, ohne Garantie des Verdienstes der Erfindung oder der Genauigkeit derer Beschreibung und auf eigene Gefahr des Patentanmelders/der Patentanmelder.
Brüssel, den 24/01/2018, In besonderer Vertretung :
000652P18
ERSTELLUNG VON LIPOSOMAL VERKAPSELTEN LACTOFERRIN
BE2016/5637
TECHNISCHES GEBIET [0001] Die vorliegende Erfindung betrifft Lactoferrin und Phospholipide im technischen Gebiet der Chemie und insbesondere betrifft sie liposomal verkapselte Lactoferrine und deren Herstellungsverfahren.
HINTERGRUND [0002] Lactoferrin ist eine Art von Nicht-Häm-Eisen-Bindungsprotein, das zur Transferrin-Familie gehört. Lactoferrin kann nicht nur zur Ergänzung von Eisen und Aminosäuren, die für den menschlichen Körper benötigt werden, in
Ergänzungsnahrung verwendet werden, sondern es hat auch die biologische Aufgabe Bakterien, Viren und Tumore abzuwehren, und die körpereigene Immunantwort und dergleichen zu regulieren.
[0003] Lactoferrin liefert vor allem Eisen in den Darmkanal, zur effektiv Ergänzung von Eisen in Säugetieren. Um den Verbrauch und die Zerstörung von Lactoferrin durch Bakterien in anderen Geweben und Organen zu verringern, kann Lactoferrin durch Liposomen zum Schutz eingekapselt werden, um damit die nachhaltige Lactoferrin Freisetzung, die Zielfunktionen und die biologische Nutzungsrate im Säugetierkörper zu verbessern. Derzeit umfassen Herstellungsverfahren von Lactoferrin-Liposomen mehrfache Emulsionsverfahren. Die besten
Herstellungsbedingungen von Lactoferrin-Liposomen sind folgende: ein
Massenverhältnis von Lactoferrin zur Membran 1:15, das Massenverhältnis von Lecithin: Triolein: Cholesterol von 7:2: 1, ein Volumenverhältnis von Chloroform zu Ethylether von 1: 1 und ein Volumenverhältnis von Kolostrum zur Glukoselösung von 1:3.
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B E2016/5637
ZUSAMMENFASSUNG [0004] Die vorliegende Erfindung betrifft ein Herstellungsverfahren für liposomal verkapseltes Lactoferrin, um die antibakterielle Wirkung von Lactoferrin zu verbessern.
Die vorliegende Erfindung offenbart auch liposomal verkapseltes Lactoferrin nach obigem Verfahren hergestellt.
[0005] Die vorliegende Erfindung offenbart ein Herstellungsverfahren für liposomal verkapseltes Lactoferrin umfassend die folgenden Schritte:
[0006] 1) Auflösen von Sojalecithin und Cholesterin in einem Massenverhältnis von 10-1: 1 in einem Lösungsmittel I, um eine Lösung I zu gewinnen; wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel I, 5-8 mg des Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels I ist;
[0007] Auflösen von Lactoferrin in einem Lösungsmittel II um eine Lösung II zu erhalten, wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel II, 8-18 mg des Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels II ist;
[0008] 2) Mischen der Lösungen I und II in einem Gefäß, anschließend
Vakuumverdampfen, bis eine Liposom-Dünnfilmschicht ausgebildet ist; wobei das Massenverhältnis von Lactoferrin zu Sojalecithin 1:1.2-4 ist;
[0009] 3) Zugabe eines Lösungsmittelgemisches, bestehend aus einem nichtionischen Tensid und einem Emulgator, und dem Lösungsmittel II, in einen Behälter entsprechend einem Verhältnis von 100 mg Sojalecithin zu 25-40 ml des Lösungsmittelgemisches, wobei das Volumenverhältnis des nichtionischen Tensids und des Emulgators zu dem Lösungsmittel II, 0.005-0.02:1 ist;
[0010] 4) das Produkt aus Schritt 3) Vakuumverdampfen bei 0,07 bis 0,1 MPa, bis die
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Liposomen-Dünnfilmschicht in dem Lösungsmittelgemisch gelöst ist um liposomal verkapseltes Lactoferrin zu erhalten.
[0011] Das Lösungsmittel I kann Trichlormethan und / oder Ethylether sein.
[0012] Das Lösungsmittel II kann eine Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von
7,4 sein.
[0013] Ferner kann Schritt 2) eine Homogenisierungsschritt zum Homogenisieren einer Mischung, die die Lösungen I und II enthält, in einem Homogenisator für 2-5 Minuten umfassen, wodurch ein stabiles System gebildet wird.
[0014] Des weiteren kann das Vakuumverdampfen in Schritt 2) bei einem Vakuumgrad von 0.07-0.1 MPa durchgeführt werden.
[00015] Ferner kann bei der Vakuumverdampfung in Schritt 4), eine Druckreduktion durchgeführt werden bis zu 0.09 MPa.
[0016] Das nicht-ionische Tensid und der Emulgator können Tween 80 (Polysorbate 80) sein.
[0017] Gemäß der vorliegenden Erfindung, wird eine Lipidmatrix in Chloroform und anderen Lösungsmitteln gelöst, und dann zu einer Lactoferrin Phosphatpufferlösung mit einer bestimmten Konzentration zugegeben, wodurch das wasserlösliche Lactoferrin in die interne Wasserphase des Liposoms verkapselt wird.
[0018] Die analytischen Verfahren und die verwendeten Vorrichtungen, der vorliegenden Erfindung, umfassen folgende:
1. die mittlere Partikelgröße von Lactoferrin nano-Liposomen kann durch die Melvin 2000 Größenverteilungsvorrichtung charakterisiert werden; 2. die Einkapselungsrate
000652P18 von Lactoferrin nano-Liposomen kann durch UV-Spektroskopie bestimmt werden; uncf2016/5637
3. die Gesamtzahl der Bakterien wird geprüft nach Chinese National Standards
GB4789.2 Microbiological Examination of Foodhygiene—Detection of Aerobic
Bacterial Count.
[0019] Die vorliegende Erfindung hat die folgenden Vorteile:
[0020] 1. Das Lactoferrin-Liposom wird hergestellt durch die Verwendung des Liposomen Umkehrdampfungsverfahren, und durch die Homogenisierung eines gemischten Systems aus einer liposomalen bimolekularen Schicht und einer Phosphatpufferlösung, welche Lactoferrin enthält, mit Hilfe eines Homogenisators bis zur Bildung eines stabilen Systems. Diese Technik verbessert die Verkapselungsrate von Lactoferrin und auch die Stabilität der Lactoferrin-Liposomen.
[0021] 2. Durch die Verwendung des Lactoferrin-Liposoms, der vorliegende Erfindung, in der antimikrobiellen Konservierung von gefrorenen Enten, wird gezeigt, dass die liposomale Verkapselungstechnik die antibakterielle Fähigkeit von Lactoferrin wirksam verbessert und der dazugehörende Mechanismus auf der langsamen Freigabe des Lactoferrin aus der liposomalen Verkapselung beruht.
[0022] 3. Die vorliegende Erfindung, verwendet effektiv das Lactoferrin-Liposom zur antibakteriellen Konservierung von gefrorenen Enten und diskutiert den Mechanismus von Lactoferrin-Liposomen bei der Verbesserung der antibakteriellen
Konservierungswirkung. Das Lactoferrin-Liposom, der vorliegenden Erfindung, erweitert die Anwendung eines Liposom Trägers, die Verwendung von Liposomen als Träger für die Lactoferrin Verkapselung und zum ersten Mal die Verwendung auf dem Gebiet der Lebensmittelkonservierung.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
000652P18 [0023] FIG. 1 zeigt die durchschnittliche Partikelgrößenverteilung eines LactoferrinLiposoms, welches nach der vorliegenden Erfindung hergestellt wurde.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
Beispiel 1 [0024] Das Herstellungsverfahren von liposomal verkapselten Lactoferrin umfasst die folgenden Schritte:
[0025] 1) Vollständiges Auflösen von 100 mg Sojalecithin und 20 mg Cholesterin in 15 ml eines Lösungsmittelgemisches aus Chloroform und Ethylether (v: v = 2: 3), um die Lösung I zu erhalten;
[0026] Auflösen von 26,6 mg Lactoferrin in 3 ml Phosphatpufferlösung mit pH-Wert von 7,4, um die Lösung II zu erhalten;
[0027] 2) Mischen der Lösungen I und II in einem Gefäß, beispielsweise einem Rotationsverdampferkolben, durch magnetisches rühren für 2 h und anschließendes homogenisieren in einem Homogenisator für 2-5 Minuten, wodurch ein stabiles Einzelphasensystem aus den Lösungen I und II erhalten wird, und danach wird in einem Rotationsverdampfer mit ein Wasserbad bei einer Temperatur von 37°C und unter Vakuumdruck von 0,09 MPa verdampft, wodurch sich ein Liposomen Dünnfilm bildet (die Liposomen Dünnfilmschicht, haftet am Rotationsverdampfungskolben);
[0028] 3) Zugabe von 30 ml einer Phosphatpufferlösung (pH-Wert von 7,4) und eines Lösungsmittelgemisches, bestehend aus 282 pl eines nichtionischen Tensids und einem Emulgator in den Rotationsverdampferkolben, wobei das nichtionische Tensid und der Emulgator Tween 80 (Polysorbate 80) sein kann; und [0029] 4) Vakuumverdampfen des Produkts aus Schritt 3) (die mit Hilfe eines
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Rotationsverdampfer verdampft werden können), in einem Wasserbad bei einer Temperatur von 37°C und einem Vakuumdruck von 0,09 MPa, bis sich die Liposomen-Dünnfilmschicht die am Rotationsverdampfungskolben haftet sich im Lösungsmittelgemisch löst, um 10 ml des liposomal verkapselten Lactoferrins zu erhalten.
BE2016/5637 [0030] Es wird durch das Coomassie Brilliant Blue-Methode getestet, ob die Konzentration von Lactoferrin in liposomal verkapselten Lactoferrin 2 mg / ml ist, wobei das Massenverhältnis von Sojalecithin zu Cholesterin 5:1 ist.
[0031] Die durchschnittliche Partikelgrößenverteilung des hergestellten liposomal verkapselten Lactoferrins ist in FIG. 1 dargestellt.
Beispiel 2 [0032] Das Lactoferrin Liposom das im Beispiel 1 hergestellt wurde, wurde zu gefrorener Ente hinzugefügt um seine antibakterielle Wirkung auf die gefrorene Ente zu studieren, und um von Lactoferrin-Liposomen den verbesserten
Bioverfügbarkeitseffekt von Lactoferrin zu bestimmen.
[0033] Experimentelle Verfahren und Schritte:
[0034] 1. Die gefrorene Ente enthäuten und das Fleisch als Zwischenstufe in 25 g schwere Stücke schneiden, jedes Stück in einer Konservierungslösung (liposomal verkapseltes Lactoferrin mit einer Lactoferrin-Konzentration von 2 mg / ml, welches in Beispiel 1 hergestellt wurde,) für 2 min einweichen, herausnehmen und durch ein sauberes Scheibensieb für 3-5 min abtropfen lassen, um die Versuchsgruppe herzustellen.
[0035] Die Kontrollgruppen wurden jeweils wie folgt hergestellt:
000652P18 [0036] Blanko-Kontrollgruppe: die oben genannten Konservierungslösung wurde durch steriles destilliertes Wasser ersetzt, während die anderen
Behandlungsmethoden die gleichen wie in den Versuchsgruppen waren.
[0037] Kontrollgruppe 1 : die oben genannte Konservierungslösung wurde durch ein Gemisch von Lactoferrin und Phosphatpufferlösung mit pH-Wert von 7,4 (die durch Verdünnen von 2 mg Lactoferrin in 1 ml Phosphatpufferlösung erhalten wurde) ersetzt, während die anderen Behandlungsmethoden die gleichen wie in den
Versuchsgruppen waren.
[0038] Kontrollgruppe 2: die oben genannten Konservierungslösung wurde durch eine Mischung aus Lactoferrin, Sojalecithin, Cholesterin und Phosphatpufferlösung mit pH-Wert von 7,4 (die durch Verdünnen von 2 mg Lactoferrin, 10 mg Sojalecithin und 2 mg Cholesterin in 1 ml Phosphatpufferlösung erhalten wurde) ersetzt, während die anderen Behandlungsmethoden die gleichen wie in den Versuchsgruppen waren.
[0039] Kontrollgruppe 3: Eine Liposomensuspension wurde durch ein mehrfaches Emulsionsverfahren hergestellt, wie oben gezeigt, mit einer Lactoferrin-Konzentration von 2 mg / ml.
[0040] Für die Lagerung und Konservierung bei einer Temperatur von 4±1 °C wurde Frischhaltefolie verwendet.
[0041] 2. Verfahren zur Bestimmung der Gesamtzahl der Bakterien [0042] (1) Unter aseptischen Bedingungen wurden Fleischproben mit jeweils einem Gewicht von 25 g mit Hilfe einer sterilen Schere zerkleinert und in einen Erlenmeyerkolben gegeben, der mit 225 ml einer Schlaganfall-physiologischer Kochsalzlösung gefüllt war;
000652P18 [0043] (2) Der Erlenmeyerkolben wurde 30 min lang in einem Schüttler geschüttelt um eine verdünnte Lösung mit einem Volumenverhältnis von 1:10 zu erhalten;
[0044] (3) Davon wurde 1 ml der verdünnten Lösung mit einer 1 ml sterilen Pipette, langsam in ein Teströhrchen, in dem 9 ml der Schlaganfall-physiologische Kochsalzlösung vorlag, entlang der Rohrwandung eingespritzt, um eine verdünnte Lösung mit einem Verhältnis von 1:100 zu erhalten;
[0045] (4) Mit eine weitere 1 ml sterile Pipette, wurde eine verdünnte Lösung mit einem Verhältnis von 1:1000, hergestellt, gemäß dem oben erwähnten Verfahren, 1 ml der verdünnten Lösung wurde mit der Pipette auf einer sterilen Platte platziert, wobei jede verdünnte Lösungsprobe in zwei Teile geteilt wurde und auf zwei Platten platziert wurde.
[0046] (5) Nachdem die verdünnten Lösungsproben auf den Platten platziert wurden, wurde zeitnah etwa 15 ml Nähragar injiziert, welches auf 46°C abgekühlt wurde und für eine gleichmäßige Durchmischung wurden die Platten gedreht;
[0047] (6) Nachdem der Agar verfestigt ist, wurden die Platten umgedreht und in einem Inkubator bei 37°C für 24-48 h kultiviert; und [0048] (7) Die Bakterienkolonien wurden bestimmt und mit dem
Verdünnungsverhältnis multipliziert um die Gesamtzahl von Bakterienkolonien in der Proben pro Milliliter zu erhalten.
[0049] Testergebnisse zu den entsprechenden, verschiedenen Konservierungstagen sind in Tabelle 1 gezeigt.
000652P18 [0050] Tabelle 1 : Antibakterielle Wirkung von Lactoferrin-Liposomen auf gefrorene
Ente
| Gesamtzahl der Bakterien ( CFU/g ) | |||||
| 0 (Tage) | 3 (Tage) | 6 ( Tage ) | 9 (Tage) | 12 (Tage) | |
| Versuchsgruppe ( Beispiel 1 ) | 8600 | 210000 | 8060000 | 9050000 | 252000000 |
| Kontrollgruppe 1 | 9000 | 214000 | 11200000 | 23400000 | 343000000 |
| Kontrollgruppe 2 | 8900 | 213000 | 11000000 | 22800000 | 336000000 |
| Kontrollgruppe 3 | 8700 | 212500 | 9840000 | 13300000 | 312000000 |
| Blankokontroll- gruppe (steriles Wasser) | 11200 | 292000 | 15070000 | 77000000 | 4515000000 |
[0051] Wie aus der Tabelle 1 ersichtlich ist, hat das liposomal verkapselte Lactoferrin 5 der vorliegenden Erfindung eine optimale antibakterielle Wirkung auf die gefrorene
Ente, im Vergleich zu der sterilen Wasser Kontrollgruppe (der BlankoKontrollgruppe).
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Claims (4)
- PATENTANSPRÜCHEB E2016/56371. Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins, das nacheinander die folgenden Schritte umfasst:1) Auflösen von Sojalecithin und Cholesterin in einem Massenverhältnis von 10-1: 1 in einem Lösungsmittel I, um eine Lösung I zu gewinnen; wobei das Masse / Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel I, 5-8 mg des Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels I ist;Auflösen von Lactoferrin in einem Lösungsmittel II um eine Lösung II zu erhalten, wobei das Masse/Volumen-Verhältnis des Sojalecithin zum Lösungsmittel II, 8-18 mg des Sojalecithin /1 ml des Lösungsmittels II ist;
- 2) Mischen der Lösungen I und II in einem Gefäß, anschließend Vakuumverdampfen, bis eine Liposom-Dünnfilmschicht ausgebildet ist; wobei das Massenverhältnis von Lactoferrin zu Sojalecithin 1:1.2-4 ist;
- 3) Zugabe eines Lösungsmittelgemisches, bestehend aus einem nichtionischen Tensid und einem Emulgator, und dem Lösungsmittel II, in einen Behälter entsprechend einem Verhältnis von 100 mg Sojalecithin zu 25-40 ml des Lösungsmittelgemisches, wobei das Volumenverhältnis des nichtionischen Tensids und des Emulgators zu dem Lösungsmittel II, 0.005-0.02:1 ist;
- 4) das Produkt aus Schritt 3) Vakuumverdampfen bei 0,07 bis 0,1 MPa, bis die Liposomen-Dünnfilmschicht in dem Lösungsmittelgemisch gelöst ist um liposomal verkapseltes Lactoferrin zu erhalten;wobei das Lösungsmittel I Trichlormethan und / oder Ethylether ist; und das Lösungsmittel III ein Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 7,4.2. Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins nach Anspruch 1, wobei Schritt 2) umfasst: Homogenisieren einer Mischung, die die Lösungen I und II enthält, in einem Homogenisator für 2-5 Minuten.000652P18B E2016/56373. Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Vakuumverdampfen in Schritt 2) bei einem Vakuumgrad von 0.07-0.1 MPa durchgeführt wird.4. Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins nach Anspruch 1 bis 3, wobei die Vakuumverdampfung in Schritt 4), bei eine Druckreduktion bis zu 0.09 MPa durchgeführt wird.10 5. Herstellungsverfahren eines liposomal verkapselten Lactoferrins nach Anspruch 1 bis 4, wobei das nicht-ionische Tensid und der Emulgator Tween 80 (Polysorbate 80) sind.1/1000652P18B E2016/5637TeikherigröSe f ntn)
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| US20090285882A1 (en) * | 2008-04-22 | 2009-11-19 | Jochen Weiss | Stabilized Liposome Compositions and Related Methods of Use |
| CN102487990A (zh) * | 2011-11-14 | 2012-06-13 | 中国计量学院 | 包封乳铁蛋白脂质体的制备方法 |
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