BE1022950B1

BE1022950B1 - METHODS OF INDUCING AN IMMUNE RESPONSE

Info

Publication number: BE1022950B1
Application number: BE2015/5585A
Authority: BE
Inventors: William Ripley Ballou Jr; Katie Ewer; Adrian Hill; Alfredo Nicosia; Thomas Rampling; Johan Vekemans
Original assignee: Glaxosmithkline Biologicals S.A.; The Chancellor Masters And Scholars Of The University Of Oxford
Priority date: 2014-09-23
Filing date: 2015-09-21
Publication date: 2016-10-21
Also published as: WO2016046113A1; BE1022950A1; GB201416773D0

Abstract

L'invention concerne des procédés d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme, en particulier des procédés d'immunisation contre le paludisme comprenant l'administration de : i) un antigène circumsporozoïte (CS) , qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP), qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.The invention relates to methods of inducing an immune response against malaria, in particular methods of immunizing against malaria comprising the administration of: i) a circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS or protein. one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adhesion protein antigen (TRAP), which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments.

Description

NOUVEAUX PROCEDES D'INDUCTION D'UNE REPONSE IMMUNITAIRE Domaine techniqueNEW METHODS OF INDUCING AN IMMUNE RESPONSE Technical field

La présente invention concerne des procédés d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme, en particulier des procédés d'immunisation contre le paludisme comprenant l'administration de : i) un antigène circumsporozoïte (CS), qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) , qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.The present invention relates to methods of inducing an immune response against malaria, particularly methods of immunizing against malaria comprising administering: i) a circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adherence protein antigen (TRAP), which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof.

Contexte de 1'inventionBackground of the invention

Le paludisme est l'un des problèmes sanitaires majeurs dans le monde. Au cours du 20ème siècle, le développement économique et social, conjointement avec des campagnes antipaludisme, s'est traduit par l'éradication du paludisme dans de vastes régions du monde, réduisant la zone touchée de la surface du globe de 50 % à 21%. Néanmoins, la moitié de la population mondiale vit dans des zones où le paludisme est transmis. Il est estimé que 3,3 milliards de personnes sont à risque de contracter le paludisme. Pour l'année 2012, l'Organisation Mondiale de la Santé a rapporté une estimation globale de 207 millions de cas de paludisme. La maladie a tué approximativement 627 000 personnes, dont la vaste majorité était des enfants de moins de cinq ans vivant en Afrique subsaharienne. L'une des formes les plus aiguës de la maladie est provoquée par le parasite protozoaire Plasmodium falciparum qui est responsable de la majeure partie de la mortalité attribuable au paludisme. Le cycle de vie du parasite est complexe, requérant deux hôtes, l'homme et le moustique pour s'achever. L'infection de l'homme est initiée par l'inoculation de sporozoïtes par la salive d'un moustique infecté. Les sporozoïtes migrent vers le foie et là infectent les hépatocytes (stade hépatique) où ils se multiplient et se différencient, par l'intermédiaire du stade intracellulaire exoérythrocytaire, dans le stade des mérozoïtes qui infectent les érythrocytes pour initier la réplication cyclique dans le stade sanguin asexué. Le cycle est complété par la différenciation d'un certain nombre de mérozoïtes dans les érythrocytes en gamétocytes du stade sexué qui sont ingérés par le moustique, chez lequel ils se développent par l'intermédiaire de toute une série de stades dans l'intestin moyen pour produire les sporozoïtes qui migrent vers la glande salivaire.Malaria is one of the major health problems in the world. During the 20th century, economic and social development, together with anti-malaria campaigns, resulted in the eradication of malaria in large parts of the world, reducing the affected area of the Earth's surface from 50% to 21% . Nevertheless, half of the world's population lives in areas where malaria is transmitted. It is estimated that 3.3 billion people are at risk of contracting malaria. For the year 2012, the World Health Organization reported a global estimate of 207 million malaria cases. The disease killed approximately 627,000 people, the vast majority of whom were children under five living in sub-Saharan Africa. One of the most acute forms of the disease is caused by the protozoan parasite Plasmodium falciparum which is responsible for most of the mortality attributable to malaria. The life cycle of the parasite is complex, requiring two hosts, the man and the mosquito to complete. Human infection is initiated by the inoculation of sporozoites by the saliva of an infected mosquito. Sporozoites migrate to the liver and there infect hepatocytes (hepatic stage) where they multiply and differentiate, via the intracellular exoerythrocytic stage, into the stage of merozoites that infect erythrocytes to initiate cyclic replication in the blood stage. asexual. The cycle is complemented by the differentiation of a number of merozoites in erythrocytes into sexually mature gametocytes that are ingested by the mosquito, in which they develop through a range of midgut stages to produce sporozoites that migrate to the salivary gland.

Le stade sporozoïte a été identifié comme une cible potentielle pour un vaccin antipaludéen. La protéine de surface principale du sporozoïte est connue comme la protéine circumsporozoïte (protéine CS). Le vaccin antipaludéen RTS, S, à base de protéine CS, est en développement depuis 1987 et il est actuellement le vaccin candidat antipaludéen le plus avancé en étude. Ce vaccin cible spécifiquement le stade préérythrocytaire de P. falciparum. Le vaccin RTS,S est adjuvé avec l'ASOl, une formulation liposomiale contenant du QS21 et du 3D-MPL. Les données récentes provenant d'un essai clinique en Phase III à grande échelle, dans lequel le RTS, S a été administré en trois doses, à un intervalle d'un mois, ont montré que sur 18 mois de suivi, le RTS, S a presque réduit de moitié le nombre de cas de paludisme chez les jeunes enfants (âgés de 5 à 17 mois à la première vaccination) et a réduit d'à-peu-près un quart les cas de paludisme chez les nourrissons (âgés de '6 à 12 semaines à la première vaccination) (Otieno et al. (2013). Les résultats ont été présentés à la 6th Multilatéral Initiative on Malaria (MIM) Pan-African Conférence, Durban, et récemment publiés (The RTS, S Clinical Trial Partnership, July 2014, PLoS Medicine, 7:el001685) . En dépit du succès de ce vaccin RTS,S, une nouvelle génération de vaccins antipaludéens avec une efficacité plus proche de 100 % est encore nécessaire pour réduire la mortalité et aborder les objectifs d'élimination et d'éradication éventuelle du paludisme.The sporozoite stage has been identified as a potential target for an antimalarial vaccine. The main surface protein of the sporozoite is known as the circumsporozoite protein (CS protein). The RTS, S, CS-based malaria vaccine has been in development since 1987 and is currently the most advanced candidate malaria vaccine in the study. This vaccine specifically targets the pre-erythrocytic stage of P. falciparum. The RTS, S vaccine is adjuvanted with ASO1, a liposomal formulation containing QS21 and 3D-MPL. Recent data from a large-scale Phase III clinical trial, in which RTS, S was administered in three doses, at an interval of one month, showed that over 18 months of follow-up, the RTS, S almost halved the number of malaria cases in young children (aged 5 to 17 months at the first vaccination) and reduced by approximately one quarter the cases of malaria in infants (aged 6 to 12 weeks at first vaccination) (Otieno et al. (2013). Results were presented at the 6th Multilateral Initiative on Malaria (MIM) Pan-African Conference, Durban, and recently published (The RTS, S Clinical Trial Partnership, July 2014, PLoS Medicine, 7: el001685) Despite the success of this RTS, S vaccine, a new generation of malaria vaccines with an efficiency closer to 100% is still needed to reduce mortality and address elimination and possible eradication of malaria.

Un autre antigène qui est en cours de développement pour une utilisation dans la vaccination antipaludéenne est la protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) (également appelée protéine anonyme apparentée à la thrombospondine), un antigène également exprimé sur les sporozoïtes et au stade hépatique de l'infection. La TRAP a été testée dans des essais cliniques de vaccins sous la forme à la fois d'un vaccin à ADN et de plusieurs vaccins à base de vecteur viral (MVA, adénovirus du chimpanzé) codant pour une protéine de fusion avec une chaîne de plusieurs épitopes contenant des épitopes supplémentaires de lymphocytes B et de lymphocytes T CD8+ et CD4+ provenant de plusieurs antigènes paludéens, connue sous le nom de ME-TRAP (Gilbert et al. 1997 Nat Biotechnol. 15: 1280 ; Moorthy et al. 2003 Vaccine 21: 1995 ; Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi : 10.1038/ncomms3836). Le document WO 2008/122769 décrit des vecteurs recombinants d'adénovirus simiens défectueux pour la réplication codant pour la TRAP ou ses variants et l'utilisation de ces vecteurs dans la vaccination. Il a été trouvé que l'isolat d'adénovirus du chimpanzé ChAd63 (également connu par AdCh63) codant pour l'antigène ME-TRAP est immunogène et que l'immunogénicité peut être activée par l'administration subséquente d'un vecteur de MVA codant pour la ME-TRAP. Plus récemment, il a été trouvé qu'une immunisation par sensibilisation-rappel avec le ChAd63 ME-TRAP et le MVA ME-TRAP chez des adultes en bonne santé de Gambie et du Kenya était sans risque et immunogène (Ogwang et al. 2013 PLoS 8 :e57726) .Another antigen that is being developed for use in antimalarial vaccination is the thrombospondin-related adherence protein (TRAP) (also called anonymous thrombospondin-related protein), an antigen also expressed on sporozoites and at the hepatic infection. TRAP has been tested in clinical vaccine trials in the form of both a DNA vaccine and several viral vector vaccines (MVA, chimpanzee adenovirus) encoding a multi-chain fusion protein. epitopes containing additional B cell and CD8 + and CD4 + T cell epitopes from several malaria antigens, known as ME-TRAP (Gilbert et al., 1997 Nat Biotechnol 15: 1280; Moorthy et al. 2003 Vaccine 21: 1995, Ewer et al., 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038 / ncomms3836). WO 2008/122769 discloses recombinant simian adenovirus vectors defective for replication encoding TRAP or its variants and the use of these vectors in vaccination. It has been found that the ChAd63 chimeric adenovirus isolate (also known as AdCh63) encoding the ME-TRAP antigen is immunogenic and that the immunogenicity can be activated by the subsequent administration of a coding MVA vector. for the ME-TRAP. More recently, it has been found that booster-booster immunization with ChAd63 ME-TRAP and MVA ME-TRAP in healthy adults in Gambia and Kenya is safe and immunogenic (Ogwang et al., 2013 PLoS 8: e57726).

Les investigateurs ont exploré la combinaison du RTS,S avec d'autres cibles protéiniques et plates-formes vaccinales. Par exemple, le RTS, S a été combiné avec la protéine de surface 1 des mérozoïtes ou la protéine TRAP recombinante dans un adjuvant (Cummings et al. 2002 Safety, immunogenicity, and efficacy of candidate malaria vaccine containing CSP and MSP-1 antigens. Presented at : 51st Annual Meeting of the ASTMH,The investigators explored the combination of RTS, S with other protein targets and vaccine platforms. For example, RTS, S has been combined with merozoite surface protein 1 or recombinant TRAP protein in an adjuvant (Cummings et al., 2002 Safety, Immunogenicity, and Efficacy of Candidate Malaria Vaccinia Containing CSP and MSP-1 Antigens. Presented at: 51st Annual Meeting of the ASTMH,

Denver, CO, USA; Rester et al. Vaccine 2014, Jun 18) . Malheureusement, même si la combinaison de RTS, S + TRAP a été sans risque et immunogène (Walsh et al. 2004 Am J Trop Med Hyg 70: 499), il n'a pas été observé de protection amplifiée (Rester et al. 2014, ci-dessus). Ceci suggère qu'il n'est pas possible de se reposer sur les mécanismes immunologiques, pas complètement compris, lors de la combinaison de vaccins distincts qui théoriquement devraient fournir une protection supérieure comparativement à chaque antigène seul (Régulés et al. 2011 Expert Rev Vaccines 10: 589). En d'autres termes, il n'est pas toujours possible de prédire si la combinaison de deux vaccins antipaludéens partiellement protecteurs mènera à une efficacité amplifiée.Denver, CO, USA; Rester et al. Vaccine 2014, Jun 18). Unfortunately, although the combination of RTS, S + TRAP was safe and immunogenic (Walsh et al., 2004 Am J Trop Med Hyg 70: 499), no amplified protection was observed (Rester et al., 2014). , above). This suggests that it is not possible to rely on the immunological mechanisms, not fully understood, when combining separate vaccines that theoretically should provide superior protection compared to each single antigen (Regules et al., 2011 Expert Rev Vaccines 10: 589). In other words, it is not always possible to predict whether the combination of two partially protective antimalarial vaccines will lead to enhanced efficacy.

En conclusion, bien qu'il ait été réalisé des progrès dans le domaine de la recherche et du développement de vaccins contre le paludisme, il existe toujours un besoin de nouveaux procédés d'immunisation contre le paludisme qui sont hautement efficaces, à large spectre, sans risque et de longue durée. Résumé de l'inventionIn conclusion, although progress has been made in the area of malaria vaccine research and development, there is still a need for new, highly effective, broad-spectrum malaria immunization methods. safe and long-lasting. Summary of the invention

Il a été découvert à présent de façon surprenante qu'un régime d'immunisation comprenant l'administration à la fois d'un variant de la protéine CS et d'un vecteur nucléotidique codant pour un variant de la TRAP a produit des taux de protection très élevés. En outre, lorsque des infections tardives ont été incluses en tant que mesure reconnue de l'efficacité d'un vaccin, l'efficacité est passée à 100 %. A notre connaissance, il s'agit du premier régime vaccinal qui montre 100 % d'efficacité dans une étude quelconque de stimulation (« challenge ») paludéenne avec une taille d'échantillons appropriée, par exemple > 10 receveurs du vaccin par groupe. De façon la plus surprenante, l'efficacité de cette approche de combinaison a été bien maintenue durant six mois après la vaccination si bien que lorsque les receveurs du vaccin qui ont été protégés au cours du premier mois après la vaccination ont été à nouveau stimulés (« rechallenged ») six mois après la stimulation (« challenge »), il a été observé un niveau élevé sans précédent d'efficacité durable si bien que sept individus sur huit qui ont été à nouveau stimulés (« re-challenged ») étaient à nouveau protégés six mois après la vaccination. Ainsi, dans un mode de réalisation, le procédé de l'invention produit une efficacité six mois après la vaccination, ce qui est supérieur à l'efficacité obtenue avec un protocole autrement similaire qui ne comprend pas d'immunisation avec un vecteur codant pour un variant de la TRAP, comme un protocole tel que décrit dans les exemples ici, ne comprenant qu'une immunisation avec le RTS,S/AS01B. De façon spécifique, le taux d'efficacité de stérilisation à 6 mois avec le vaccin combiné utilisé ici est de 72 % (82 % d'efficacité de stérilisation initiale x 7/8 lors de la nouvelle stimulation (« re-challenge »)), tandis que le taux d'efficacité de stérilisation à six mois rapporté par Rester et al. ((2009) J Infect Dis 200, 337-346) n'a été que de 22 % (50 % d'efficacité de stérilisation initiale x 4/9 lors de la nouvelle stimulation (« re-challenge ») ) . Dans un autre mode de réalisation, l'efficacité globale six mois après la vaccination (déterminée selon l'exemple ici) est supérieure à 65 %, comme supérieure à 70 %. Dans un autre mode de réalisation, l'efficacité de stérilisation six mois après la vaccination (déterminée selon l'exemple ici) est supérieure à 50 %.Surprisingly, it has now been discovered that an immunization regimen comprising the administration of both a CS protein variant and a TRAP variant nucleotide vector has produced protection levels. very high. In addition, when late infections were included as a recognized measure of the effectiveness of a vaccine, the efficacy increased to 100%. To our knowledge, this is the first vaccine regimen that shows 100% efficacy in any malaria challenge study with appropriate sample size, for example> 10 vaccine recipients per group. Most surprisingly, the effectiveness of this combination approach was well maintained for six months after vaccination, so that when vaccine recipients who were protected in the first month after vaccination were stimulated again ( "Rechallenged") six months after the challenge, there was an unprecedented high level of sustainable efficacy, so that seven out of eight individuals who were re-challenged were protected six months after vaccination. Thus, in one embodiment, the method of the invention produces an efficacy six months after vaccination, which is greater than the efficacy achieved with an otherwise similar protocol that does not include immunization with a vector encoding a variant of TRAP, as a protocol as described in the examples herein, comprising only immunization with RTS, S / AS01B. Specifically, the sterilization efficacy rate at 6 months with the combined vaccine used here is 72% (82% initial sterilization efficiency x 7/8 during the new stimulation ("re-challenge")) , while the six-month sterilization efficacy rate reported by Rester et al. ((2009) J Infect Dis 200, 337-346) was only 22% (50% initial sterilization efficiency x 4/9 during the new stimulation ("re-challenge")). In another embodiment, the overall efficacy six months after vaccination (determined according to the example herein) is greater than 65%, as greater than 70%. In another embodiment, the sterilization efficacy six months after vaccination (determined according to the example herein) is greater than 50%.

Par conséquent, dans un premier aspect de l'invention, il est proposé un procédé d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain comprenant l'administration de : i) un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène plasmodial de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP), qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.Therefore, in a first aspect of the invention, there is provided a method of inducing an immune response against malaria in a human subject comprising administering: i) a circumsporozoite (CS) plasmodial antigen, which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adherence protein (TRAP) plasmodial antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic fragment thereof or variants.

Dans un autre aspect, il est proposé une ou plusieurs compositions immunogènes pour une utilisation dans un procédé d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain, où le procédé comprend l'administration de : i) un antigène CS plasmodial, qui est une protéine CS ou . l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.In another aspect, there is provided one or more immunogenic compositions for use in a method of inducing an immune response against malaria in a human subject, wherein the method comprises administering: i) a plasmodial CS antigen which is a CS or protein. one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodium TRAP antigen, which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments.

Dans encore un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de : i) un antigène CS plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, dans la fabrication d'un médicament destiné à l'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain, où i) et ii) sont administrés séquentiellement ou simultanément.In yet another aspect, the invention relates to the use of: i) a plasmodial CS antigen, which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodial TRAP antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof, in the manufacture of a medicament for inducing an immune response against malaria in a human subject, wherein i) and ii) are administered sequentially or simultaneously.

Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, comprenant : i) un antigène CS plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.In another aspect, the invention provides a composition, comprising: i) a plasmodial CS antigen, which is a CS protein or an immunogenic or variant fragment thereof and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodial TRAP antigen, which is a TRAP protein or one of its immunogenic fragments or variants.

Dans un autre aspect, l'invention concerne un kit comprenant : i) un antigène CS plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, éventuellement en combinaison avec un adjuvant (par exemple, un adjuvant AS01, tels que AS01B) et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.In another aspect, the invention relates to a kit comprising: i) a plasmodial CS antigen, which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments, optionally in combination with an adjuvant (for example, an AS01 adjuvant, such as AS01B) and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodium TRAP antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof.

Brève description des figuresBrief description of the figures

Figure la : Courbes de Kaplan-Meier : temps jusqu'à la patence. Le pourcentage de sujets demeurant aparasitémiques dans le temps à la suite d'une stimulation (« challenge ») avec des sporozoïtes.Figure la: Kaplan-Meier curves: time to patence. Percentage of subjects remaining aparasitic over time as a result of challenge with sporozoites.

Figure lb : Taux d'anticorps anti-CS.Figure lb: Anti-CS antibody level.

Figure 2a : Immunogénicité de la TRAP d'après les lymphocytes T mesurée par les cellules formant des taches (SFC) sécrétant des anticorps (ordonnée) en fonction des anticorps anti-TRAP (abscisse).Figure 2a: Immunogenicity of TRAP from T cells measured by antibody-secreting (OR) secretory staining cells (SFC) versus anti-TRAP antibodies (abscissa).

Figure 2b : Immunogénicité de la CS d'après les lymphocytes T (ordonnée) en fonction des anticorps anti-CS (abscisse) .Figure 2b: Immunogenicity of CS from T lymphocytes (ordinate) versus anti-CS antibodies (abscissa).

Figure 2c : Immunogénicité de la TRAP d'après les lymphocytes T (ordonnée) en fonction des anticorps anti-CS (abscisse).FIG. 2c: Immunogenicity of TRAP according to T lymphocytes (ordinate) as a function of anti-CS antibodies (abscissa).

Figure 2d : Comparaison des taux d'anticorps anti-TRAP observés dans diverses études.Figure 2d: Comparison of anti-TRAP antibody levels observed in various studies.

Figure 2e : Taux d'anticorps anti-CS (ordonnée) en fonction des jours jusqu'à la parasitémie (frottis sanguin).Figure 2e: Anti-CS antibody level (ordered) versus days to parasitaemia (blood smear).

Figure 2f : Taux d'anticorps anti-CS (ordonnée) en fonction des jours jusqu'à la parasitémie (20 parasites par ml par PCR).Figure 2f: Anti-CS antibody level (ordinate) as a function of days to parasitaemia (20 parasites per ml by PCR).

Figure 2g : Taux d'anticorps anti-CS (ordonnée) en fonction des jours jusqu'à la parasitémie (500 parasites par ml par PCR).Figure 2g: Anti-CS (ordinate) antibody level as a function of days to parasitaemia (500 parasites per ml by PCR).

Figure 3 : Courbes de Kaplan-Meier : temps jusqu'à la patence. Le pourcentage des sujets des groupes 1 et 2 demeurant aparasitémiques dans le temps à la suite d'une nouvelle stimulation (« re-challenge ») .Figure 3: Kaplan-Meier curves: time to patency. The percentage of subjects in groups 1 and 2 remaining unparasitic over time as a result of new stimulation ("re-challenge").

Figure 4 : La séquence d'acides aminés du RTS, dans laquelle les 194 premiers acides aminés sont la séquence polypeptidique de la CS de P. falciparum et les 230 derniers acides aminés sont la séquence de l'antigène S de l'hépatite B.Figure 4: The amino acid sequence of RTS, in which the first 194 amino acids are the polypeptide sequence of P. falciparum CS and the last 230 amino acids are the hepatitis B antigen S sequence.

Figure 5 : La séquence d'acides aminés de la ME-TRAP, avec la séquence de 559 acides aminés de la TRAP, débutant au niveau de l'acide aminé 232, soulignée.Figure 5: The amino acid sequence of ME-TRAP, with the 559 amino acid sequence of TRAP, starting at amino acid 232, underlined.

Figure 6 : Séquence nucléotidique codant pour la ME-TRAP.Figure 6: Nucleotide sequence encoding ME-TRAP.

Figure 7 : Réponse en anticorps dirigés contre la CS mesurée par un test ELISA. Le panel VAC59 présente les données issues de l'exemple 2. Le panel VAC55 présente les données issues de l'exemple 1.Figure 7: Antibody response to CS measured by ELISA. The panel VAC59 presents the data from example 2. The panel VAC55 presents the data from example 1.

Description détaillée DéfinitionsDetailed Description Definitions

Lorsqu'il est utilisé ici, le terme « fragment immunogène » comprend un fragment d'une protéine d'une longueur quelconque à condition qu'elle conserve des propriétés immunogènes. Par exemple, le fragment peut comprendre 5 acides aminés consécutifs ou plus, comme 10 acides aminés consécutifs ou plus, par exemple 20 acides aminés consécutifs ou plus, comme 50 acides aminés consécutifs ou plus, par exemple 100 acides aminés consécutifs ou plus d'une protéine.When used herein, the term "immunogenic fragment" includes a fragment of a protein of any length provided that it retains immunogenic properties. For example, the fragment may comprise 5 or more consecutive amino acids, such as 10 or more consecutive amino acids, for example, 20 or more consecutive amino acids, such as 50 consecutive amino acids or more, for example 100 consecutive amino acids or more than one protein.

Un « variant » d'un polypeptide peut contenir des substitutions d'acides aminés, de préférence des substitutions conservatives (par exemple, 1 à 50, comme 1 à 25, en particulier 1 à 10, et spécialement 1 résidu(s) d'acide aminé peut/peuvent être modifié(s)) comparativement à la séquence de référence. De façon appropriée, de telles substitutions ne surviennent pas dans la région d'un épitope, et, par conséquent, n'ont pas un impact significatif sur les propriétés immunogènes de l'antigène. Le terme « substitution conservative d'acide aminé » se rapporte à la substitution (de façon conceptuelle ou autre) d'un acide aminé d'un groupe par un acide aminé différent du même groupe. Une façon fonctionnelle pour définir des propriétés communes entre des acides aminés individuels est d'analyser les fréquences normalisées des changements d'acides aminés entre les protéines correspondantes d'organismes homologues (Schulz, G. E. and R. H. Schinner, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag) . Selon ces analyses, il peut être défini des groupes d'acides aminés dans lesquels les acides aminés au sein d'un groupe s'échangent de façon préférentielle les uns avec les autres, et par conséquent ressemblent les uns aux autres principalement dans leur impact sur la structure globale de la protéine (Schulz, G. E. and R. H. Schinner, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). Un exemple d'un ensemble de groupes d'acides aminés définis de cette façon comprend : (i) un groupe chargé, constitué de Glu et Asp, Lys, Arg et His, (ii) un groupe chargé positivement, constitué de Lys, Arg et His, (iii) un groupe chargé négativement, constitué de Glu et Asp, (iv) un groupe aromatique, constitué de Phe, Tyr et Trp, (v) un groupe à cycle azoté, constitué de His et Trp, (vi) un grand groupe non polaire aliphatique, constitué de Val, Leu et Ile, (vii) un groupe légèrement polaire, constitué de Met et Cys, (viii) un groupe à petit résidu, constitué de Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gin et Pro, (ix) un groupe aliphatique, constitué de Val, Leu, Ile, Met et Cys, et (x) un petit groupe hydroxylé, constitué de Ser et Thr. Les variants de protéines peuvent également comprendre ceux dans lesquels des acides aminés supplémentaires sont insérés comparativement à la séquence de référence, par exemple, de telles insertions peuvent survenir au niveau de 1 à 10 emplacements (comme 1 à 5 emplacements, de façon appropriée 1 ou 2 emplacements, en particulier 1 emplacement) et peuvent, par exemple, impliquer l'addition de 50 acides aminés ou moins au niveau de chaque emplacement (comme 20 ou moins, en particulier 10 ou moins, spécialement 5 ou moins). De façon appropriée, de telles insertions ne surviennent pas dans la région d'un épitope et, par conséquent, n'ont pas un impact significatif sur les propriétés immunogènes de l'antigène. Un exemple d'insertions comprend une courte séquence de résidus d'histidine (par exemple, 2 à 6 résidus) pour aider l'expression et/ou la purification de l'antigène en question. Les variants comprennent également des protéines où d'autres épitopes ont été ajoutés à un antigène. Par exemple, d'autres épitopes provenant d'antigènes paludéens peuvent avoir été ajoutés à un antigène particulier. Un exemple d'un tel variant est la ME-TRAP, qui est un variant de la TRAP contenant d'autres épitopes provenant d'autres antigènes plasmodiaux, voir ci-dessous. Les variants comprennent également ceux dans lesquels des acides aminés ont été délétés comparativement à la séquence de référence, par exemple, de telles délétions peuvent survenir au niveau de 1 à 10 emplacements (comme 1 à 5 emplacements, de façon appropriée 1 ou 2 emplacements, en particulier 1 emplacement) et peuvent, par exemple, impliquer la délétion de 50 acides aminés ou moins au niveau de chaque emplacement (comme 20 ou moins, en particulier 10 ou moins, spécialement 5 au moins). De façon appropriée, de telles ' délétions ne surviennent pas dans la région d'un épitope, et, par conséquent n'ont pas un impact significatif sur les propriétés immunogènes de l'antigène. L'homme du métier comprendra qu'un variant de protéine particulier peut comprendre des substitutions, des délétions et des additions (ou l'une quelconque de leurs combinaisons). Les variants présentent de préférence au moins environ 70 % d'identité, de manière davantage préférée au moins environ 80 % d'identité et de manière préférée entre toutes au moins environ 90 % d'identité (comme au moins environ 95 %, au moins environ 98 % ou au moins environ 99 %) avec la séquence de référence associée. Les exemples d'algorithmes qui sont appropriés pour déterminer le pourcentage d'identité de séquence et, de similarité de séquence sont les algorithmes BLAST et BLAST 2.0, et sont décrits dans Altschul et al., Nue. Acids Res. 25: 3389-3402 (1977) et Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403 410 (1990), respectivement.A "variant" of a polypeptide may contain amino acid substitutions, preferably conservative substitutions (for example, 1 to 50, such as 1 to 25, especially 1 to 10, and especially 1 residue (s) of amino acid can / may be modified (s)) compared to the reference sequence. Suitably, such substitutions do not occur in the region of an epitope, and, therefore, do not have a significant impact on the immunogenic properties of the antigen. The term "conservative amino acid substitution" refers to the substitution (conceptually or otherwise) of an amino acid of a group by a different amino acid of the same group. A functional way to define common properties between individual amino acids is to analyze the normalized frequencies of amino acid changes between the corresponding proteins of homologous organisms (Schulz, GE and RH Schinner, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag ). According to these analyzes, it is possible to define groups of amino acids in which the amino acids within a group are preferentially exchanged with one another, and therefore resemble each other mainly in their impact on the overall structure of the protein (Schulz, GE and RH Schinner, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). An example of a set of amino acid groups defined in this way comprises: (i) a charged group, consisting of Glu and Asp, Lys, Arg and His, (ii) a positively charged group consisting of Lys, Arg and His, (iii) a negatively charged group, consisting of Glu and Asp, (iv) an aromatic group, consisting of Phe, Tyr and Trp, (v) a nitrogen ring group, consisting of His and Trp, (vi) a large nonpolar aliphatic group consisting of Val, Leu and Ile, (vii) a slightly polar group consisting of Met and Cys, (viii) a small residue group consisting of Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gin and Pro, (ix) an aliphatic group, consisting of Val, Leu, Ile, Met and Cys, and (x) a small hydroxyl group, consisting of Ser and Thr. Protein variants may also include those in which additional amino acids are inserted relative to the reference sequence, for example, such insertions may occur at 1 to 10 locations (such as 1 to 5 locations, suitably 1 or 2 locations, particularly 1 location) and may, for example, involve the addition of 50 amino acids or less at each location (such as 20 or less, especially 10 or less, especially 5 or less). Conveniently, such insertions do not occur in the region of an epitope and, therefore, do not have a significant impact on the immunogenic properties of the antigen. An example of insertions includes a short sequence of histidine residues (eg, 2 to 6 residues) to aid the expression and / or purification of the antigen in question. The variants also include proteins where other epitopes have been added to an antigen. For example, other epitopes derived from malarial antigens may have been added to a particular antigen. An example of such a variant is ME-TRAP, which is a variant of TRAP containing other epitopes from other plasmodial antigens, see below. Variants also include those in which amino acids have been deleted compared to the reference sequence, for example, such deletions may occur at 1-10 locations (such as 1-5 locations, suitably 1 or 2 locations, particularly 1 location) and may, for example, involve deletion of 50 amino acids or less at each location (such as 20 or less, especially 10 or less, especially at least 5). Suitably, such deletions do not occur in the region of an epitope, and therefore do not have a significant impact on the immunogenic properties of the antigen. It will be understood by those skilled in the art that a particular protein variant may include substitutions, deletions, and additions (or any combination thereof). The variants preferably have at least about 70% identity, more preferably at least about 80% identity, and most preferably at least about 90% identity (such as at least about 95%, at least about 98% or at least about 99%) with the associated reference sequence. Examples of algorithms that are suitable for determining percent sequence identity and sequence similarity are the BLAST and BLAST 2.0 algorithms, and are described in Altschul et al., Nue. Acids Res. 25: 3389-3402 (1977) and Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403,410 (1990), respectively.

Autres aspects et modes de réalisation de l'inventionOther aspects and embodiments of the invention

Comme il a été décrit ci-dessus, dans un premier aspect, l'invention concerne un procédé d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain comprenant l'administration de : i) un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de la protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodiale, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.As described above, in a first aspect, the invention relates to a method of inducing an immune response against malaria in a human subject comprising administering: i) a circumsporozoite (CS) plasmodial antigen , which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding an antigen of the thrombospondin related thrombospondin related protein (TRAP), which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments.

De façon générale, le but du procédé de l'invention est d'induire une réponse immunitaire protectrice, c'est-à-dire d'immuniser ou de vacciner le sujet afin de prévenir l'infection et/ou la maladie paludéenne. Dans un mode de réalisation, l'efficacité vaccinale du procédé de l'invention est améliorée comparativement à un régime thérapeutique qui . comprend seulement le RTS,S. Par exemple, le taux de protection et/ou l'efficacité vaccinale y compris les retards dans le temps jusqu'à la patence (c'est-à-dire la condition de montrer une infection parasitaire détectable, déterminée selon les exemples ici) peut être amélioré au moins de 10 %, comme 25 % par rapport à un régime thérapeutique existant autrement mais partiellement efficace qui comprend seulement le RTS,S.In general, the purpose of the method of the invention is to induce a protective immune response, that is to say to immunize or vaccinate the subject to prevent infection and / or malarial disease. In one embodiment, the vaccine efficacy of the method of the invention is improved compared to a therapeutic regimen that. includes only the RTS, S. For example, the rate of protection and / or vaccine efficacy including time delays until patency (i.e. the condition of showing a detectable parasitic infection, as determined by the examples herein) may be improved by at least 10%, as 25% compared to an otherwise existing but partially effective therapeutic regimen that includes only RTS, S.

Dans un mode de réalisation, il est obtenu un taux de protection et/ou une efficacité vaccinale (y compris les retards de l'infection) de plus de 80 %, comme de plus de 90 %, déterminé selon les exemples ici.In one embodiment, a protection rate and / or vaccine efficacy (including delays in infection) of over 80%, as well as over 90%, determined according to the examples herein is obtained.

La protéine circumsporozoïte (CS) (voir par exempleThe circumsporozoite protein (CS) (see for example

UniProt No. Q7K740 pour la séquence de la CS de l'isolat 3D7) est présente sur les sporozoïtes de tous les Plasmodium et est la protéine de surface la plus abondante des sporozoïtes. La protéine CS est impliquée dans la motilité et l'invasion des sporozoïtes durant leur passage depuis le site d'inoculation dans la circulation, d'où ils migrent vers le foie et pénètrent dans les hépatocytes.UniProt No. Q7K740 for the CS sequence of isolate 3D7) is present on sporozoites of all Plasmodium and is the most abundant surface protein of sporozoites. CS protein is involved in sporozoite motility and invasion during passage from the inoculation site into the circulation, from where they migrate to the liver and enter the hepatocytes.

De nombreuses constructions recombinantes et synthétiques de CS et de variants ont été testées pour une utilité dans l'immunisation contre le paludisme. Dans un mode de réalisation, l'antigène CS plasmodial est une protéine CS de Plasmodium falciparum ou de Plasmodium vivax ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.Many recombinant and synthetic constructs of CSs and variants have been tested for utility in malaria immunization. In one embodiment, the plasmodial CS antigen is a CS protein of Plasmodium falciparum or Plasmodium vivax or an immunogenic or variant fragment thereof.

Un variant approprié de la protéine CS peut être un variant dans lequel des parties de la protéine CS sont sous la forme d'une protéine hybride avec l'antigène de surface S provenant du virus de l'hépatite B (Ag HBs). L'antigène variant de CS peut être, par exemple, sous la forme d'une protéine hybride comprenant substantiellement toute la partie C-terminale de la protéine CS, quatre répétitions en tandem ou plus de la région immunodominante de la protéine CS, et l'Ag HBs. La protéine hybride peut comprendre une séquence qui contient au moins 160 acides aminés et qui est substantiellement homologue à la partie C-terminale de la protéine CS, mais qui est dépourvue de la séquence d'ancrage hydrophobe. La protéine CS peut être dépourvue des 12 derniers acides aminés à partir de l'extrémité C-terminale. En outre, elle peut contenir 4 motifs répétitifs ou plus, par exemple 10 ou plus du tétrapeptide Asn-Ala-Asn-Pro (NANP).An appropriate variant of the CS protein may be a variant in which portions of the CS protein are in the form of a hybrid protein with the surface antigen S from the hepatitis B virus (HBs Ag). The CS variant antigen may be, for example, in the form of a hybrid protein comprising substantially the entire C-terminal portion of the CS protein, four or more tandem repeats of the immunodominant region of the CS protein, and HBs Ag. The hybrid protein may comprise a sequence that contains at least 160 amino acids and is substantially homologous to the C-terminal portion of the CS protein, but lacks the hydrophobic anchor sequence. The CS protein can be devoid of the last 12 amino acids from the C-terminus. In addition, it may contain 4 or more repeating units, for example 10 or more Asn-Ala-Asn-Pro tetrapeptide (NANP).

La protéine hybride pour une utilisation dans l'invention peut être une protéine qui comprend une partie de la protéine CS de P. falciparum correspondant substantiellement aux acides aminés 207 à 395 de la protéine CS dérivée du clone 3D7 de P. falciparum, dérivé de la souche NF54 fusionnée dans le cadre de lecture par l'intermédiaire d'un lieur (« linker ») linéaire à l'extrémité N-terminale de l'Ag HBs. Le lieur (« linker ») peut comprendre une partie de preS2 provenant de l'Ag HBs. Les constructions de CS appropriées pour une utilisation dans la présente invention sont présentées dans le document WO 93/10152, lesquelles octroyées aux Etats-Unis dans les brevets US No. 5 928 902 et 6 169 171.The hybrid protein for use in the invention may be a protein which comprises a portion of the P. falciparum CS protein substantially corresponding to amino acids 207 to 395 of the CS protein derived from P. falciparum clone 3D7, derived from NF54 strain fused in reading frame via a linear linker at the N-terminus of HBsAg. The linker may comprise a portion of preS2 from HBsAg. CS constructs suitable for use in the present invention are disclosed in WO 93/10152, which are granted in the United States in US Pat. Nos. 5,928,902 and 6,169,171.

Une protéine hybride particulière pour une utilisation dans 1'invention est la protéine hybride connue sous le nom de RTS (figure 4) (SEQ ID NO : 1) (décrite dans le document WO 93/10152 (où elle est appelée RTS* et dans le document WO 98/05355) qui est constituée de : . - un résidu de méthionine - trois résidus d'acides aminés, Met Ala Pro - une séquence de 189 acides aminés représentant les acides aminés 207 à 395 de la protéine CS de la souche 3D7 de P. falciparum - un résidu de glycine - quatre résidus d'acides aminés, Pro Val Thr Asn, représentant les quatre résidus carboxy-terminaux de la protéine preS2 du virus de l'hépatite B (sérotype adw), et - une séquence de 226 acides aminés, codée par les nucléotides 1653 à 2330, et spécifiant la protéine S du virus de l'hépatite B (sérotype adw). RTS peut être sous la forme de particules mixtes de RTS,S. Les particules de RTS,S comprennent deux polypeptides, RTS et S, qui peuvent être synthétisés simultanément et spontanément à partir de structures particulaires composites (RTS,S) .A particular hybrid protein for use in the invention is the hybrid protein known as RTS (Figure 4) (SEQ ID NO: 1) (described in WO 93/10152 (where it is called RTS *) and in WO 98/05355) which consists of: - a methionine residue - three amino acid residues, Met Ala Pro - a sequence of 189 amino acids representing amino acids 207 to 395 of the CS protein of the strain 3D7 of P. falciparum - a glycine residue - four amino acid residues, Pro Val Thr Asn, representing the four carboxy-terminal residues of the hepatitis B virus preS2 protein (serotype adw), and - a sequence of 226 amino acids, encoded by nucleotides 1653 to 2330, and specifying hepatitis B virus protein S (serotype adw) RTS may be in the form of mixed particles of RTS, S. The particles of RTS, S include two polypeptides, RTS and S, which can be synthesized sim laterally and spontaneously from composite particulate structures (RTS, S).

La protéine RTS peut être exprimée dans des levures, par exemple S. cerevisiae. Chez un tel hôte, RTS sera exprimé et s'assemblera spontanément en particules de lipoprotéine. La souche de levure receveuse peut déjà porter dans son génome plusieurs copies intégrées d'une cassette d'expression de l'antigène S de l'hépatite B. Par conséquent, la souche résultante synthétise deux polypeptides, S et RTS, qui se co-assemblent spontanément en particules mixtes (RTS,S). Ces particules peuvent présenter les séquences CSP de l'hybride à leur surface. Les RTS et S dans ces particules mixtes peuvent être présents dans un rapport particulier, par exemple 1/4. RTS, S a été décrit, par exemple, dans Vekemans et al. (2009) Vaccine 27: G67 et Régulés et al. (2011) Expert Rev.The RTS protein can be expressed in yeasts, for example S. cerevisiae. In such a host, RTS will be expressed and spontaneously assemble into lipoprotein particles. The recipient yeast strain may already carry in its genome several integrated copies of a Hepatitis B antigen S expression cassette. Therefore, the resulting strain synthesizes two polypeptides, S and RTS, which spontaneously assemble into mixed particles (RTS, S). These particles may have the CSP sequences of the hybrid on their surface. The RTS and S in these mixed particles may be present in a particular ratio, for example 1/4. RTS, S has been described, for example, in Vekemans et al. (2009) Vaccine 27: G67 and Regules et al. (2011) Expert Rev.

Vaccines 10: 589.Vaccines 10: 589.

Dans un autre mode de réalisation, l'antigène CS plasmodial est dérivé de la protéine CS de P. vivax (c'est-à-dire, CSV) . Des variants appropriés de la protéine CS de P. vivax ont été décrits. Par exemple, le document WO 2008/009652, lequel publié aux Etats-Unis dans le document US 20100150998, décrit des protéines appropriées pour une utilisation dans la présente invention, par exemple, des protéines de fusion hybrides comprenant : a. au moins une unité répétitive dérivée de la région répétitive d'une protéine circumsporozoïte de type I de P. vivax, b. au moins une unité répétitive dérivée de la région répétitive d'une protéine circumsporozoïte de type II de P. vivax, et c. l'antigène de surface S dérivé du virus de l'hépatite B, ou l'un de ses fragments. SEQ ID NO : 17 du document WO 2008/009652 décrit une protéine de fusion hybride spécifique, nommée CVS-S. Lorsqu'elles sont coexprimées avec l'antigène de surface S dérivé du virus de l'hépatite B, des particules de CSV-S,S de P. vivax, analogues aux particules de RTS, S de P. falciparum, se forment (WO 2008/009652) . De telles particules peuvent être également utilisées dans la présente invention.In another embodiment, the plasmodial CS antigen is derived from the P. vivax CS protein (i.e., CSV). Suitable variants of the P. vivax CS protein have been described. For example, WO 2008/009652, which is published in the US in US 20100150998, discloses suitable proteins for use in the present invention, for example, hybrid fusion proteins comprising: a. at least one repeating unit derived from the repetitive region of a P. vivax type I circumsporozoite protein, b. at least one repeating unit derived from the repetitive region of a P. vivax circumsporozoite type II protein, and c. surface antigen S derived from hepatitis B virus, or one of its fragments. SEQ ID NO: 17 of WO 2008/009652 discloses a specific hybrid fusion protein, named CVS-S. When coexpressed with hepatitis B virus-derived surface antigen S, P. vivax CSV-S, S particles, analogous to RTS, S particles of P. falciparum, are formed (WO 2008/009652). Such particles may also be used in the present invention.

Dans un autre mode de réalisation, l'antigène CS plasmodial est une particule mixte comprenant RTS et CSV-S, et éventuellement l'antigène S de l'hépatite B non fusionné. De telles particules ont été décrites dans le document WO 2008/009650, lequel publié aux Etats-Unis dans le document US 20100062028.In another embodiment, the plasmodial CS antigen is a mixed particle comprising RTS and CSV-S, and optionally the unfused Hepatitis B antigen S. Such particles have been described in WO 2008/009650, which is published in the US in US 20100062028.

Par conséquent, dans un mode de réalisation du procédé ou de l'utilisation de l'invention, l'antigène CS plasmodial est l'un ou plusieurs de ceux choisis dans le groupe constitué de : a. RTS, b. CSV-S, c. RTS,S ' d. CSV-S,S et e. particules mixtes comprenant RTS et CSV-S, et éventuellement l'antigène S du virus de l'hépatite B non fusionné. L'antigène CS plasmodial est administré dans une quantité suffisante pour générer une réponse immunitaire chez le sujet humain. Dans un mode de réalisation préféré, l'antigène CS plasmodial est RTS,S et la quantité de RTS,S se situe entre 25 et 75, comme 50, microgrammes par dose ou entre 12,5 et 37,5, comme 25, microgrammes par dose ou entre 5 et 20, comme 10 pg par dose.Therefore, in one embodiment of the method or use of the invention, the plasmodial CS antigen is one or more of those selected from the group consisting of: a. RTS, b. CSV-S, c. RTS, S 'd. CSV-S, S and e. mixed particles comprising RTS and CSV-S, and optionally the unfused Hepatitis B virus S antigen. The plasmodial CS antigen is administered in an amount sufficient to generate an immune response in the human subject. In a preferred embodiment, the plasmodial CS antigen is RTS, S and the amount of RTS, S is between 25 and 75, as 50, micrograms per dose or between 12.5 and 37.5, as 25, micrograms. per dose or between 5 and 20, as 10 μg per dose.

Dans un mode de réalisation préféré, l'antigène CS plasmodial est administré en combinaison avec un adjuvant.In a preferred embodiment, the plasmodial CS antigen is administered in combination with an adjuvant.

Dans un mode de réalisation, l'adjuvant comprend un agoniste de TLR (récepteur de type Toll). L'utilisation d'agonistes de TLR dans des adjuvants est bien connue de ' l'état de l'art et a été décrite, par exemple, par Lahiri et al. (2008) Vaccine 26: 6777. Les TLR qui peuvent être stimulés pour obtenir un effet adjuvant comprennent les TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 et TLR9. Les agonistes des TLR2, TLR4, TLR7 et TLR8, particulièrement les agonistes du TLR4, sont préférés.In one embodiment, the adjuvant comprises a TLR agonist (Toll-type receptor). The use of TLR agonists in adjuvants is well known in the state of the art and has been described, for example, by Lahiri et al. (2008) Vaccine 26: 6777. TLRs that can be stimulated to achieve adjuvant effect include TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 and TLR9. TLR2, TLR4, TLR7 and TLR8 agonists, particularly TLR4 agonists, are preferred.

Les agonistes du TLR4 appropriés comprennent des lipopolysaccharides, tels que le monophosphoryl-lipide A (MPL) et le monophosphoryl-lipide A 3-O-désacylé (3D-MPL). Le brevet US 4 436 727 divulgue un MPL et sa fabrication. Le brevet US 4 912 094 et le certificat de réexamen B1 4 912 094 divulguent un 3D-MPL et un procédé pour sa fabrication. Un autre agoniste du TLR4 est l'adjuvant glucopyranosyl-lipide (GLA), une molécule de type lipide A de synthèse (voir, par exemple, Fox et al. (2012) Clin. Vaccine Immunol 19: 1633) . Dans un autre mode de réalisation, l'agoniste du TLR4 peut être un agoniste de synthèse du TLR4 tel qu'une molécule de disaccharide de synthèse, similaire en structure au MPL et au 3D-MPL ou ce peut être des molécules de monosaccharides de synthèse, comme les composés d'aminoalkyl-glucosaminide phosphate (AGP) divulgués, par exemple, dans les documents WO 9850399, WO 0134617, WO 0212258, WO 3065806, WO 04062599, WO 06016997, WO 0612425, WO 03066065, et WO 0190129. De telles molécules ont été décrites dans la littérature scientifique et des brevets comme des mimétiques du lipide A. Les mimétiques du lipide A partagent de façon appropriée une certaine activité fonctionnelle et/ou structurale avec le lipide A, et dans un aspect, ils sont reconnus par les récepteurs TLR4. Les AGP tels que décrits ici sont parfois qualifiés de mimétiques du lipide A dans l’'état de l'art. Dans un mode de réalisation préféré, l’agoniste du TLR4 est le 3D-MPL. Les agonistes du TLR4, tels que le monophosphoryl-lipide A 3-O-désacylé (3D-MPL), et leur utilisation en tant qu'adjuvants dans des vaccins a été décrite, par exemple, dans les documents WO 96/33739 et WO 2007/068907 et décrite par Alving et al. (2012) Curr Opin in Immunol 24: 310.Suitable TLR4 agonists include lipopolysaccharides, such as monophosphoryl lipid A (MPL) and 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A (3D-MPL). U.S. Patent 4,436,727 discloses an MPL and its manufacture. U.S. Patent 4,912,094 and Reexamination Certificate B1,4912,094 disclose 3D-MPL and a method for its manufacture. Another TLR4 agonist is glucopyranosyl lipid adjuvant (GLA), a synthetic lipid A molecule (see, e.g., Fox et al (2012) Clin Immunol Vaccine 19: 1633). In another embodiment, the TLR4 agonist may be a TLR4 synthesis agonist such as a synthetic disaccharide molecule, structurally similar to MPL and 3D-MPL or it may be synthetic monosaccharide molecules. , such as aminoalkylglucosaminide phosphate (AGP) compounds disclosed, for example, in WO 9850399, WO0134617, WO0212258, WO3065806, WO04062599, WO06016997, WO0612425, WO03066065, and WO0190129. such molecules have been described in the scientific and patent literature as lipid A mimetics. The lipid A mimetics appropriately share some functional and / or structural activity with lipid A, and in one aspect they are recognized by TLR4 receptors. AGPs as described herein are sometimes referred to as lipid A mimetics in the state of the art. In a preferred embodiment, the TLR4 agonist is 3D-MPL. TLR4 agonists, such as 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A (3D-MPL), and their use as adjuvants in vaccines have been described, for example, in WO 96/33739 and WO 2007/068907 and described by Alving et al. (2012) Curr Opin in Immunol 24: 310.

Dans un autre mode de réalisation, l'adjuvant comprend une saponine immunologiquement active, comme le QS21. Des adjuvants comprenant des saponines ont été décrits dans l'état de l'art. Les saponines sont décrites dans : Lacaille-Dubois and Wagner (1996) A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2: 363. Les saponines sont connues comme des adjuvants dans les vaccins. Par exemple, Quil A (dérivé de l'écorce de l'arbre d'Amérique du Sud Quillaja Saponaria Molina), a été décrit par Dalsgaard et al. en 1974 ("Saponin adjuvants", Archiv. fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, 243) comme étant doté d'une activité d'adjuvant. Il a été isolé par CLHP des fractions purifiées de Quil A qui conservent l'activité d'adjuvant sans la toxicité associée à Quil A (Kensil (1991) J. Immunol. 146: 431. Des fractions de Quil A sont également décrites dans le brevet US 5 057 540 et dans "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2): 1-55.In another embodiment, the adjuvant comprises an immunologically active saponin, such as QS21. Adjuvants comprising saponins have been described in the state of the art. Saponins are described in: Lacaille-Dubois and Wagner (1996) A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2: 363. Saponins are known as adjuvants in vaccines. For example, Quil A (derived from the bark of the South American tree Quillaja Saponaria Molina), has been described by Dalsgaard et al. in 1974 ("Saponin Adjuvants", Archiv für die gesamte Virusforschung, Vol 44, Springer Verlag, Berlin, 243) as having an adjuvant activity. HPLC-purified fractions of Quil A that retain adjuvant activity have been isolated by HPLC without quil A-associated toxicity (Kensil (1991) J. Immunol 146: 431. Quil A moieties are also described in US Pat. U.S. Patent 5,057,540 and "Saponins as Vaccinia Adjuvants", Kensil, CR, Crit Rev. Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2): 1-55.

Deux de ces fractions, appropriées pour une utilisation dans la présente invention, sont QS7 et QS21 (également connues sous le nom de QA-7 et QA-21) . QS21 est une fraction de saponine immunologiquement active préférée pour une utilisation dans la présente invention. QS21 a été décrit par Kensil (2000) dans O'Hagan: Vaccine Adjuvants: préparation methods and research protocole. Homana Press, Totowa, New Jersey, chapitre 15. Des systèmes d'adjuvants particulaires comprenant des fractions de Quil A, comme QS21 et QS7, sont décrits, par exemple, dans les documents WO 96/33739, WO 96/11711 et WO 2007/068907.Two of these moieties, suitable for use in the present invention, are QS7 and QS21 (also known as QA-7 and QA-21). QS21 is a preferred immunologically active saponin moiety for use in the present invention. QS21 has been described by Kensil (2000) in O'Hagan: Vaccine Adjuvants: Preparation Methods and Research Protocol. Homana Press, Totowa, NJ, Chapter 15. Particulate adjuvant systems comprising Quil A moieties, such as QS21 and QS7, are described, for example, in WO 96/33739, WO 96/11711 and WO 2007. / 068907.

En plus du composant saponine, l'adjuvant comprend de préférence un stérol. La présence d'un stérol peut encore réduire la réactogénicité des compositions comprenant des saponines, voir, par exemple, le document EP 0822831. Les stérols appropriés comprennent le bêta-sitostérol, le stigmastérol, 1'ergostérol, 1'ergocalciférol et le cholestérol. Le cholestérol est particulièrement approprié. De façon appropriée, la fraction de saponine immunologiquement active est QS21 et le rapport QS21/stérol est de 1/100 à 1/1 p/p, comme de 1/10 à 1/1 p/p, par exemple de 1/5 à 1/1 p/p.In addition to the saponin component, the adjuvant preferably comprises a sterol. The presence of a sterol can further reduce the reactogenicity of compositions comprising saponins, see, for example, EP 0822831. Suitable sterols include beta-sitosterol, stigmasterol, ergosterol, ergocalciferol, and cholesterol. Cholesterol is particularly appropriate. Suitably, the immunologically active saponin fraction is QS21 and the ratio QS21 / sterol is 1/100 to 1/1 w / w, such as 1/10 to 1/1 w / w, for example 1/5 at 1/1 p / p.

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, l'adjuvant comprend du 3D-MPL et du QS21.In a preferred embodiment of the invention, the adjuvant comprises 3D-MPL and QS21.

Dans certains modes de réalisation, l'adjuvant se présente sous la forme d'une émulsion huile dans l'eau, par exemple, comprenant du squalène, de 1'alpha-tocophérol et un tensioactif (voir, par exemple, le document WO 95/17210) ou sous la forme d'un liposome. Une présentation liposomiale est préférée. Ainsi, dans un mode de réalisation préféré de l'invention, l'adjuvant comprend du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale.In some embodiments, the adjuvant is in the form of an oil-in-water emulsion, for example, comprising squalene, alpha-tocopherol and a surfactant (see, for example, WO 95 / 17210) or in the form of a liposome. A liposomal presentation is preferred. Thus, in a preferred embodiment of the invention, the adjuvant comprises 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation.

Le terme « liposome », lorsqu'il est utilisé ici, se rapporte à des structures lipidiques unilamellaires ou multilamellaires renfermant un intérieur aqueux. Les liposomes et les formulations liposomiales sont bien connus de l'état de l'art. Des présentations liposomiales sont décrites, par exemple, dans les documents WO 96/33739 et WO 2007/068907. Les lipides qui sont capables de former des liposomes comprennent toutes les substances dotées des propriétés des acides gras ou de type acide gras.The term "liposome", when used herein, refers to unilamellar or multilamellar lipid structures enclosing an aqueous interior. Liposomes and liposomal formulations are well known in the state of the art. Liposomal presentations are described, for example, in WO 96/33739 and WO 2007/068907. Lipids that are capable of forming liposomes include all substances with fatty acid or fatty acid properties.

La taille des liposomes peut varier de 30 nm à plusieurs pm selon la composition en phospholipides et le procédé utilisé pour leur préparation. Dans des modes de réalisation particuliers de l'invention, la taille des liposomes se situera dans la plage de 50 nm à 500 nm et dans d'autres modes de réalisation, de 50 nm à 200 nm. La diffusion dynamique de la lumière laser est un procédé utilisé pour mesurer la taille des liposomes bien connu de l'homme du métier.The size of the liposomes can vary from 30 nm to several μm depending on the composition of phospholipids and the process used for their preparation. In particular embodiments of the invention, the size of the liposomes will be in the range of 50 nm to 500 nm and in other embodiments from 50 nm to 200 nm. Dynamic scattering of laser light is a method used to measure the size of liposomes well known to those skilled in the art.

Dans un mode de réalisation particulièrement approprié, les liposomes utilisés dans l'invention comprennent de la DOPC et un stérol, en particulier le cholestérol. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, les compositions de l'invention comprennent du QS21 dans toute quantité décrite ici sous la forme d'un liposome, où ledit liposome comprend de la DOPC et un stérol, en particulier le cholestérol.In a particularly suitable embodiment, the liposomes used in the invention comprise DOPC and a sterol, especially cholesterol. Thus, in a particular embodiment, the compositions of the invention comprise QS21 in any amount herein described in the form of a liposome, wherein said liposome comprises DOPC and a sterol, especially cholesterol.

Dans un mode de réalisation, l'adjuvant comprend entre 25 et 75, comme 50 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 25 et 75, comme 50 microgrammes de QS21 par dose. Dans un autre mode de réalisation, l'adjuvant comprend entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes de QS21 par dose. Dans un autre mode de réalisation, l'adjuvant comprend entre 5 et 20, comme 10 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 5 et 20, comme 10 microgrammes de QS21 par dose.In one embodiment, the adjuvant comprises between 25 and 75, as 50 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 25 and 75, as 50 micrograms of QS21 per dose. In another embodiment, the adjuvant comprises between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms of QS21 per dose. In another embodiment, the adjuvant comprises between 5 and 20, as 10 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 5 and 20, as 10 micrograms of QS21 per dose.

Il est bien connu que pour une administration parentérale, les solutions devront être physiologiquement isotoniques (c'est-à-dire qu'elles devront présenter une osmolalité pharmaceutiquement acceptable) pour éviter la déformation ou la lyse des cellules. Un « agent d'isotonicité » est un composé qui est toléré physiologiquement et qui confère une tonicité appropriée à une formulation (par exemple, des compositions immunogènes de l'invention) pour empêcher le flux net d'eau à travers les membranes cellulaires qui sont en contact avec la formulation. 11 est connu des compositions adjuvantes aqueuses qui contiennent 100 mM ou plus de chlorure de sodium, par exemple le système d'adjuvant A (ASA) dans les documents WO 2005/112991 et WO 2008/142133 ou les adjuvants liposomiaux divulgués dans le document WO 2007/068907.It is well known that for parenteral administration the solutions will have to be physiologically isotonic (i.e., they will have to have a pharmaceutically acceptable osmolality) to avoid cell deformation or lysis. An "isotonicity agent" is a compound that is physiologically tolerated and that imparts appropriate tonicity to a formulation (eg, immunogenic compositions of the invention) to prevent the net flow of water through cell membranes that are in contact with the formulation. Aqueous adjuvant compositions are known which contain 100 mM or more of sodium chloride, for example adjuvant system A (ASA) in WO 2005/112991 and WO 2008/142133 or liposomal adjuvants disclosed in WO 2007/068907.

Dans certains modes de réalisation, l'agent d'isotonicité utilisé pour la composition est un sel. Toutefois, dans d'autres modes de réalisation, la composition comprend un agent d'isotonicité non ionique et la concentration de chlorure de sodium ou la force ionique dans la composition est inférieure à 100 mM, comme inférieure à 80 mM, par exemple inférieure à 30 mM, comme inférieure à 10 mM ou inférieure à 5 mM. Dans un mode de réalisation préféré, l'agent d'isotonicité non ionique est un polyol, comme le sorbitol. La concentration de sorbitol peut se situer, par exemple, entre environ 3 % et environ 15 % (p/v), comme entre environ 4 % et environ 10 % (p/v). Des adjuvants comprenant une fraction de saponine immunologiquement active et un agoniste du TLR4, dans lesquels l'agent d'isotonicité est un sel ou un polyol ont été décrits dans le document WO 2010/142685, voir, par exemple, les exemples 1 et 2 dans le document WO 2010/142685.In some embodiments, the isotonicity agent used for the composition is a salt. However, in other embodiments, the composition comprises a nonionic isotonicity agent and the concentration of sodium chloride or the ionic strength in the composition is less than 100 mM, as less than 80 mM, for example less than 30 mM, as less than 10 mM or less than 5 mM. In a preferred embodiment, the nonionic isotonicity agent is a polyol, such as sorbitol. The concentration of sorbitol may range, for example, from about 3% to about 15% (w / v), such as from about 4% to about 10% (w / v). Adjuvants comprising an immunologically active saponin fraction and a TLR4 agonist, wherein the isotonicity agent is a salt or a polyol have been described in WO 2010/142685, see, for example, Examples 1 and 2 in WO 2010/142685.

Comme il a été décrit ci-dessus, les procédés et les utilisations de l'invention comprennent l'administration d'un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP), qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.As described above, the methods and uses of the invention include administering a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adherence protein (TRAP) antigen, which is a TRAP protein or one of its immunogenic fragments or variants.

Dans un mode de réalisation du procédé et/ou de l'utilisation de l'invention, l'antigène TRAP plasmodial est un antigène TRAP de Plasmodium falciparum ou de Plasmodium vivax ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants (voir, par exemple, Robson et al. (1988) Nature 335: 79 pour la séquence de la TRAP provenant de l'isolat T9/96 ou le numéro d'ID UniProt Q94727 pour la TRAP de P. vivax) . Dans un autre mode de réalisation, l'antigène TRAP plasmodial est ME-TRAP, une protéine de fusion de TRAP comprenant une séquence de · plusieurs épitopes contenant des épitopes supplémentaires des lymphocytes B, et des lymphocytes T CD8+ et CD4+ provenant de plusieurs antigènes paludéens (SEQ ID NO : 2) (figure 5) (Gilbert et al. 1997 Nat Biotechnol. 15: 1280 ; Moorthy et al. 2003 Vaccine 21: 1995 ; WO 2008/122769). La figure 6 représente un insert de vecteur codant pour la ME-TRAP (SEQ ID NO : 3).In one embodiment of the method and / or the use of the invention, the plasmodial TRAP antigen is a Plasmodium falciparum TRAP antigen or Plasmodium vivax or an immunogenic or variant fragment thereof (see, for example Robson et al (1988) Nature 335: 79 for the TRAP sequence from the T9 / 96 isolate or the UniProt ID number Q94727 for the P. vivax TRAP). In another embodiment, the plasmodial TRAP antigen is ME-TRAP, a TRAP fusion protein comprising a sequence of several epitopes containing additional B cell epitopes, and CD8 + and CD4 + T cells from several malarial antigens. (SEQ ID NO: 2) (Figure 5) (Gilbert et al., 1997 Nat Biotechnol 15: 1280, Moorthy et al., 2003 Vaccine 21: 1995, WO 2008/122769). Figure 6 shows a vector insert encoding ME-TRAP (SEQ ID NO: 3).

Dans un mode de réalisation, le vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial est un vecteur d'adénovirus simien défectueux pour la réplication. Par exemple, un vecteur d'adénovirus simien qui comprend un génome d'adénovirus simien dans lequel il est intégré de façon stable un transgène qui code pour un antigène TRAP plasmodial lié de façon fonctionnelle à des séquences régulatrices qui dirigent l'expression de l'antigène TRAP plasmodial dans des cellules de mammifères. Dans un mode de réalisation, le génome adénoviral simien est le génome d'un vecteur d'adénovirus de chimpanzé. Dans un autre mode de réalisation, les séquences régulatrices qui dirigent l'expression du transgène comprennent un promoteur du CMV. Par exemple, les séquences régulatrices peuvent comprendre le promoteur du gène IE1 du HCMV et un fragment de la région non traduite en 5' du gène IEl du HCMV y compris 1'intron A.In one embodiment, the nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is a simian adenovirus vector defective for replication. For example, a simian adenovirus vector which comprises a simian adenovirus genome in which it is stably integrated a transgene that encodes a plasmodial TRAP antigen operably linked to regulatory sequences that direct expression of the Plasmodial TRAP antigen in mammalian cells. In one embodiment, the simian adenoviral genome is the genome of a chimpanzee adenovirus vector. In another embodiment, the regulatory sequences that direct the expression of the transgene include a CMV promoter. For example, the regulatory sequences may include the HCMV IE1 gene promoter and a fragment of the 5 'untranslated region of the HCMV IE1 gene including intron A.

Dans un autre mode de réalisation, le vecteur d'adénovirus simien est ChAd63 qui est dérivé de l'isolat 63 d'adénovirus de chimpanzé (déposé auprès de l'ECACC sous le numéro d'accession 05011210) (SEQ ID NO : 115 dans la demande de brevet US 2011/0217332) ou ChAd3, qui est dérivé de l'isolat 3 d'adénovirus de chimpanzé (SEQ ID NO : 1 dans le document WO 2005/071093) ou ChAdOxl (Antrobus et al. Molecular Therapy 22: 668 - 674, 2014 ; Dicks et al. PLoS One 2012 7| e40385 ; WO 2012/172277) . Le document WO 2008/122769 décrit des vecteurs recombinants d'adénovirus simiens défectueux pour la réplication codant pour la TRAP ou ses variants, y compris ChAd63 codant pour l'antigène ME-TRAP.In another embodiment, the simian adenovirus vector is ChAd63 which is derived from chimpanzee adenovirus isolate 63 (deposited with ECACC under accession number 05011210) (SEQ ID NO: 115 in US Patent Application 2011/0217332) or ChAd3, which is derived from Chimpanzee adenovirus isolate 3 (SEQ ID NO: 1 in WO 2005/071093) or ChAdOx1 (Antrobus et al., Molecular Therapy 22: 668-674, 2014; Dicks et al., PLoS One 2012 7 | e40385; WO 2012/172277). WO 2008/122769 discloses recombinant simian adenovirus vectors defective for replication encoding TRAP or variants thereof, including ChAd63 encoding the ME-TRAP antigen.

Le vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial est administré dans une quantité suffisante pour générer une réponse immunitaire chez le sujet humain. Dans un mode de réalisation, entre 1 x 1010 et 1 x 1011, comme 5 x 1010 particules virales sont administrées par dose.The nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is administered in an amount sufficient to generate an immune response in the human subject. In one embodiment, between 1 x 1010 and 1 x 1011, as 5 x 1010 viral particles are administered per dose.

Dans certains modes de réalisation, le procédé ou l'utilisation de l'invention comprend deux administrations d'un vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial. Dans de tels modes de réalisation, la seconde administration (rappel) peut activer la réponse immunitaire induite par la première administration (sensibilisation). Dans un mode de réalisation préféré, le procédé ou l'utilisation comprend : i) l'administration d'un vecteur adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial tel que décrit ci-dessus, et ii) l'administration d'un vecteur non adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.In some embodiments, the method or use of the invention comprises two administrations of a nucleotide vector encoding a plasmodial TRAP antigen. In such embodiments, the second (boost) administration may activate the immune response induced by the first administration (sensitization). In a preferred embodiment, the method or use comprises: i) administering an adenoviral vector that encodes a plasmodial TRAP antigen as described above, and ii) administering a non-vector. adenoviral which encodes a plasmodium TRAP antigen, which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments.

Dans un mode de réalisation, ledit vecteur non adénoviral est un vecteur recombinant de poxvirus, comme le virus de la vaccine Ankara (MVA). Le MVA est une souche hautement atténuée du virus de la vaccine qui a subi de multiples délétions spontanées, totalement caractérisées, durant plus de 570 repiquages dans des cellules de fibroblastes d'embryons de poulets (CEF). Celles-ci comprenaient des gènes de la plage d'hôtes et des gènes codant pour des récepteurs des cytokines. . Le virus est incapable de se répliquer efficacement chez l'être humain et dans la plupart des cellules d'autres mammifères mais l'anomalie de la réplication survient à un stade tardif de l'assemblage des virions si bien que l'expression des gènes viraux et recombinants est inchangée faisant du MVA un vecteur d'expression efficace en une seule série incapable de provoquer une infection disséminée chez les mammifères. La séquence d'ADN entière du MVA a été publiée (Antoine et al. (1998) Virology 244: 365).In one embodiment, said non-adenoviral vector is a recombinant poxvirus vector, such as vaccinia virus Ankara (MVA). MVA is a highly attenuated strain of vaccinia virus that has undergone multiple spontaneous, fully characterized deletions during more than 570 subcultures in chicken embryo fibroblast (CEF) cells. These included genes from the host range and genes encoding cytokine receptors. . The virus is unable to replicate effectively in humans and most cells of other mammals, but the abnormality of replication occurs at a late stage of virion assembly so that the expression of viral genes and recombinants is unchanged making MVA an effective expression vector in a single series unable to cause disseminated infection in mammals. The entire DNA sequence of MVA has been published (Antoine et al (1998) Virology 244: 365).

Dans un autre mode de réalisation, le vecteur adénoviral et le vecteur non adénoviral codent tous les deux pour la ME-TRAP. Le document WO 2008/1227 69 décrit un vecteur de MVA codant pour la ME-TRAP. Dans un mode de réalisation, le vecteur non adénoviral est le MVA et entre 1 x 108 et 1 x 109, comme 2 x 108 pfu sont administrées par dose.In another embodiment, the adenoviral vector and the non-adenoviral vector both encode ME-TRAP. WO 2008/1227 69 discloses an MVA vector encoding ME-TRAP. In one embodiment, the non-adenoviral vector is MVA and between 1x108 and 1x109, such that 2x108 pfu is administered per dose.

Dans certains modes de réalisation, le vecteur non adénoviral codant pour un antigène TRAP plasmodial, comme le MVA codant pour la ME-TRAP est administré plus d'une fois, comme 2 ou 3 fois ou plus. Régimes d'immunisationIn some embodiments, the non-adenoviral vector encoding a plasmodial TRAP antigen, such as MVA encoding ME-TRAP is administered more than once, such as 2 or 3 times or more. Immunization regimes

Dans certains modes de réalisation, le procédé de l'invention ou l'utilisation de l'invention comprend deux administrations ou plus, comme trois, de l'antigène CS plasmodial.In some embodiments, the method of the invention or the use of the invention comprises two or more administrations, such as three, of the plasmodial CS antigen.

Dans un mode de réalisation préféré, dans lequel le procédé ou l'utilisation comprend trois administrations de l'antigène CS plasmodial, où l'antigène CS plasmodial est le même dans les trois administrations et l'antigène CS plasmodial est adjuvé dans les trois administrations avec un adjuvant comprenant du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale. De façon préférée entre toutes, l'antigène CS plasmodial est le RTS,S.In a preferred embodiment, wherein the method or use comprises three administrations of the plasmodial CS antigen, wherein the plasmodial CS antigen is the same in all three administrations and the plasmodial CS antigen is adjuvanted in the three administrations with an adjuvant comprising 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation. Most preferably, the plasmodial CS antigen is RTS, S.

Dans un mode de réalisation, l'intervalle de temps entre chacune des administrations de l'antigène CS plasmodial se situe entre 1 semaine et 1 an, par exemple entre 2 semaines et 6 mois, comme entre 2 semaines et 6 semaines, par exemple 4 semaines. Un régime accéléré à trois doses pourrait être l'administration de l'antigène CS plasmodial avec des intervalles de 5 à 9 jours, comme une administration au jour 0, au jour 7 et au jour 14.In one embodiment, the time interval between each administration of the plasmodial CS antigen is between 1 week and 1 year, for example between 2 weeks and 6 months, such as between 2 weeks and 6 weeks, for example 4 weeks. weeks. A three-dose accelerated regimen could be administration of the plasmodial CS antigen with 5- to 9-day intervals, such as administration at day 0, day 7, and day 14.

Dans certains modes de réalisation, la dose d'antigène CS plasmodial et la dose d'adjuvant sont maintenues constantes dans toutes les administrations.In some embodiments, the dose of plasmodial CS antigen and the adjuvant dose are kept constant in all administrations.

Dans d'autres modes de réalisation, toutefois : a. la quantité d'antigène CS plasmodial est inférieure dans la deuxième administration, et/ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'antigène CS plasmodial dans la première administration et/ou b. la quantité d'adjuvant est inférieure dans la deuxième administration, et/ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'adjuvant dans la première administration.In other embodiments, however: a. the amount of plasmodial CS antigen is lower in the second administration, and / or one of the subsequent administrations, compared to the amount of plasmodial CS antigen in the first administration and / or b. the amount of adjuvant is lower in the second administration, and / or one of the subsequent administrations, compared to the amount of adjuvant in the first administration.

Par exemple, dans l'un de ces modes de réalisation, deux administrations ou plus de l'antigène CS plasmodial, comme le RTS,S, sont combinées avec un adjuvant comprenant du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, mais la quantité d'adjuvant est inférieure dans la deuxième administration, ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'adjuvant dans la première administration. Par exemple, la quantité inférieure est une quantité au moins de 10 % inférieure, comme au moins de 25 % inférieure, par exemple au moins deux fois inférieure, comme au moins trois fois inférieure, par exemple au moins quatre fois inférieure, comme au moins cinq fois inférieure, par exemple au moins six fois inférieure, comme au moins sept fois inférieure, par exemple au moins huit fois inférieure, comme au moins neuf fois inférieure, par exemple au moins dix fois inférieure, comme au moins 15 fois inférieure, par exemple au moins 20 fois inférieure.For example, in one such embodiment, two or more administrations of the plasmodial CS antigen, such as RTS, S, are combined with an adjuvant comprising 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, but the Adjuvant amount is lower in the second administration, or one of the subsequent administrations, compared to the amount of adjuvant in the first administration. For example, the lower amount is at least 10% lower, such as at least 25% lower, for example at least two times lower, as at least three times lower, for example at least four times lower, as at least five times lower, for example at least six times lower, as at least seven times lower, for example at least eight times lower, as at least nine times lower, for example at least ten times lower, as at least 15 times lower, by example at least 20 times lower.

Dans un autre mode de réalisation, la quantité inférieure d'adjuvant est une quantité située entre 2 et 50 fois inférieure, comme entre 2 et 20 fois inférieure, par exemple entre 2 et 15 fois inférieure, comme entre 2 et 10 fois inférieure, par exemple entre 3 et 7 fois inférieure, comme entre 4 et 6 fois inférieure.In another embodiment, the lower amount of adjuvant is between 2 and 50 times lower, as between 2 and 20 times lower, for example between 2 and 15 times lower, as between 2 and 10 times lower, by example between 3 and 7 times lower, as between 4 and 6 times lower.

Dans un mode de réalisation, la première administration comprend entre 25 et 75, comme 50 microgrammes, de 3D-MPL et entre 25 et 75, comme 50 microgrammes de QS21 dans une formulation liposomiale et une ou plusieurs des administrations subséquentes comprennent entre 5 et 15, comme 10 microgrammes de 3D-MPL et entre 5 et 15, comme 10 microgrammes de QS21 dans une formulation liposomiale.In one embodiment, the first administration comprises between 25 and 75, as 50 micrograms, of 3D-MPL and between 25 and 75, as 50 micrograms of QS21 in a liposomal formulation and one or more of the subsequent administrations comprise between 5 and 15 as 10 micrograms of 3D-MPL and between 5 and 15, as 10 micrograms of QS21 in a liposomal formulation.

Dans un autre mode de réalisation, la première administration comprend entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes, de 3D-MPL et entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes de QS21 dans une formulation liposomiale et une ou plusieurs des administrations subséquentes comprennent entre 2,5 et 7,5, comme 5 microgrammes de 3D-MPL et entre 2,5 et 7,5, comme 5 microgrammes de QS21 dans une formulation liposomiale.In another embodiment, the first administration comprises between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms, of 3D-MPL and between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms of QS21 in a liposomal formulation and one or several of the subsequent administrations comprise between 2.5 and 7.5, such as 5 micrograms of 3D-MPL and between 2.5 and 7.5, as 5 micrograms of QS21 in a liposomal formulation.

Dans d'autres modes de réalisation, la quantité d'antigène CS plasmodial est inférieure dans la deuxième administration, ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'antigène CS plasmodial dans la première administration. Par exemple, la quantité inférieure est une quantité au moins de 10 % inférieure, comme au moins de 25 % inférieure, par exemple au moins deux fois inférieure, comme au moins trois fois inférieure, par exemple au moins quatre fois inférieure, comme au moins cinq fois inférieure, par exemple au moins six fois inférieure, comme au moins sept fois inférieure, par exemple au moins huit fois inférieure, comme au moins neuf fois inférieure, par exemple au moins dix fois inférieure, comme au moins 15 fois inférieure, par exemple au moins 20 fois inférieure.In other embodiments, the amount of plasmodial CS antigen is lower in the second, or one of the subsequent administrations, compared to the amount of plasmodial CS antigen in the first administration. For example, the lower amount is at least 10% lower, such as at least 25% lower, for example at least two times lower, as at least three times lower, for example at least four times lower, as at least five times lower, for example at least six times lower, as at least seven times lower, for example at least eight times lower, as at least nine times lower, for example at least ten times lower, as at least 15 times lower, by example at least 20 times lower.

Dans un autre mode de réalisation, la quantité inférieure est une quantité entre 2 et 50 fois inférieure, comme entre 2 et 20 fois inférieure, par exemple entre 2 et 15 fois inférieure, comme entre 2 et 10 fois inférieure, par exemple entre 3 et 7 fois inférieure, comme entre 4 et 6 fois inférieure.In another embodiment, the lower amount is between 2 and 50 times lower, as between 2 and 20 times lower, for example between 2 and 15 times lower, as between 2 and 10 times lower, for example between 3 and 7 times lower, as between 4 and 6 times lower.

Dans des modes de réalisation comprenant l'administration d'un vecteur adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial tel que décrit ci-dessus, suivie de l'administration d'un vecteur non adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial, où l'antigène TRAP plasmodial est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, le vecteur non adénoviral peut être administré, par exemple, au moins deux semaines, par exemple entre 2 et 12 semaines, après le vecteur adénoviral, comme 8 semaines après le vecteur adénoviral.In embodiments comprising administering an adenoviral vector that encodes a plasmodial TRAP antigen as described above, followed by administration of a non-adenoviral vector that encodes a plasmodial TRAP antigen, wherein TRAP plasmodial antigen is a TRAP protein or one of its immunogenic fragments or variants, the non-adenoviral vector can be administered, for example, at least two weeks, for example between 2 and 12 weeks, after the adenoviral vector, like 8 weeks after the adenoviral vector.

Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation de l'invention comprend les administrations suivantes, éventuellement dans l'ordre spécifié : a. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale,In one embodiment, the method or use of the invention comprises the following administrations, possibly in the specified order: a. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation,

b. Administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale d. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale e. Administration de MVA codant pour la ME-TRAP.b. Administration of ChAd63 coding for ME-TRAP c. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation d. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation e. Administration of MVA coding for ME-TRAP.

Dans un autre mode de réalisation ici, l'intervalle de temps entre les étapes a. et b. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes b. et c. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes c. et d. se situe entre 1 et 8 semaines, comme 4 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes d. et e. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines.In another embodiment here, the time interval between steps a. and B. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks, and in which the time interval between steps b. and c. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks, and in which the time interval between steps c. and D. is between 1 and 8 weeks, like 4 weeks, and in which the time interval between steps d. summer. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks.

Dans d'autres modes de réalisation, l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP est effectuée simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration d'un antigène CS plasmodial. Dans ce contexte, « essentiellement simultanément » signifie une administration au cours de la même visite à la clinique, c'est-à-dire le même jour, comme à 1 heure l'un de l'autre, par exemple à 20 minutes, comme à 5 minutes l'un de l'autre.In other embodiments, administration of one or all of the TRAP coding vectors is carried out simultaneously, or substantially simultaneously, with administration of a plasmodial CS antigen. In this context, "essentially simultaneously" means an administration during the same visit to the clinic, that is to say the same day, as at 1 hour from each other, for example at 20 minutes, like 5 minutes from each other.

Dans des modes de réalisation particuliers, les vecteurs codant pour la TRAP sont coadministrés tous les deux essentiellement simultanément et au niveau du même site du corps que l'antigène CS plasmodial (par exemple, dans un bras).In particular embodiments, the TRAP coding vectors are coadministered both substantially simultaneously and at the same site of the body as the plasmodial CS antigen (e.g., in one arm).

Dans des variantes de modes de réalisation, l'invention exclut spécifiquement l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration de l'antigène CS plasmodial. A nouveau, dans ce contexte d'exclusion, « essentiellement simultanément » signifie une administration durant la même visite à la clinique, c'est-à-dire le même jour, comme à 1 heure l'un de l'autre.In alternative embodiments, the invention specifically excludes the administration of any or all of the TRAP-encoding vectors simultaneously, or substantially simultaneously, with the administration of the plasmodial CS antigen. Again, in this context of exclusion, "essentially simultaneously" means an administration during the same visit to the clinic, that is to say, the same day, as 1 hour apart.

Dans des modes de réalisation particuliers, l'invention exclut spécifiquement la coadministration du ou des vecteurs codant pour la TRAP et de l'antigène CS plasmodial au niveau du même site sur le corps (par exemple, dans un bras) et essentiellement en même temps. Ainsi, dans de tels modes de réalisation, les administrations sont réalisées au niveau de sites distincts du corps. L'administration au niveau d'un « site distinct du corps », lorsqu'elle est utilisée ici dans le contexte de l'administration de deux compositions ou plus à un sujet signifie que les compositions sont données au niveau de sites différents, généralement de façon controlatérale ou au niveau de membres différents ou dans tous les cas à une distance suffisante l'une de l'autre de façon à ce que les effets locaux quelconques des administrations n'interfèrent pas les uns avec les autres. Par exemple, la distance peut être d'au moins 0,5 cm, comme au moins 1 cm, par exemple au moins 5 cm.In particular embodiments, the invention specifically excludes the coadministration of the TRAP encoding vector (s) and the plasmodial CS antigen at the same site on the body (e.g., in one arm) and essentially at the same time. . Thus, in such embodiments, administrations are performed at distinct sites of the body. Administration to a "distinct body site" when used herein in the context of administering two or more compositions to a subject means that the compositions are given at different sites, typically contralateral way or at different limbs or in all cases at a sufficient distance from each other so that any local effects of administrations do not interfere with each other. For example, the distance may be at least 0.5 cm, such as at least 1 cm, for example at least 5 cm.

Ainsi, dans certains modes de réalisation du procédé et/ou de l'utilisation de l'invention, l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP n'est pas effectuée essentiellement simultanément avec l'administration d'un antigène CS plasmodial.Thus, in some embodiments of the method and / or the use of the invention, the administration of one or all of the TRAP coding vectors is not performed substantially concurrently with the administration of a plasmodial CS antigen.

Dans d'autres modes de réalisation, l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP est effectuée au niveau d'un site distinct du corps par rapport à ceux utilisés pour l'administration de l'antigène CS plasmodial.In other embodiments, administration of one or all of the TRAP coding vectors is performed at a site distinct from the body as compared to those used for administration of the plasmodial CS antigen. .

Dans d'autres modes de réalisation, tout vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial est administré au niveau d'un site distinct du corps, ou donné à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme 14 jours ou plus d'écart.In other embodiments, any nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is administered at a site distinct from the body, or given 1 day or more apart, from any administration of a plasmodial CS antigen. , as at more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, as 14 days or more apart.

Dans même d'autres modes de réalisation, si le procédé comprend deux administrations ou plus de vecteurs nucléotidiques codant pour un antigène TRAP plasmodial, la deuxième et les autres administrations sont données au niveau d'un site distinct du corps, ou données à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7, jours d'écart, comme 14 jours ou plus d'écart.In other embodiments, if the method comprises two or more administrations of nucleotide vectors encoding a plasmodial TRAP antigen, the second and the other administrations are given at a site distinct from the body, or given at 1 day or more, any administration of a plasmodial CS antigen, as at more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, such as 14 days or more gap.

Dans même d'autres modes de réalisation, si le procédé comprend une administration avec un vecteur non adénoviral codant pour un antigène TRAP plasmodial, ladite administration est donnée au niveau d'un site distinct du corps, ou donnée à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus dë 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme 14 jours ou plus d'écart.In still other embodiments, if the method comprises administration with a non-adenoviral vector encoding a plasmodial TRAP antigen, said administration is given at a site distinct from the body, or given at 1 day or more of deviation, from any administration of a plasmodial CS antigen, as at more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, as 14 days or more apart .

Dans même d'autres modes de réalisation, si le procédé comprend une administration avec un vecteur de MVA codant pour un antigène TRAP plasmodial, ladite administration est donnée au niveau d'un site distinct du corps, ou donnée à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme 14 jours ou plus d'écart.In still other embodiments, if the method comprises administration with an MVA vector encoding a plasmodial TRAP antigen, said administration is given at a site distinct from the body, or given at 1 day or more of deviation, from any administration of a plasmodial CS antigen, as at more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, such as 14 days or more apart .

Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation de l'invention comprend les administrations suivantes, éventuellement dans l'ordre spécifié : a. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, simultanément, ou essentiellement simultanément, avecIn one embodiment, the method or use of the invention comprises the following administrations, possibly in the specified order: a. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, simultaneously, or substantially simultaneously, with

l'administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP b. Administration de RTS, S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration of MVA codant pour la ME-TRAP, et c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration de MVA codant pour la ME-TRAP.administration of ChAd63 coding for ME-TRAP b. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, simultaneously, or substantially simultaneously, with the administration of MVA coding for ME-TRAP, and c. Administration of RTS, S adjuvated with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation simultaneously, or substantially simultaneously, with the administration of MVA encoding ME-TRAP.

Dans un autre mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation de . l'invention comprend les administrations suivantes, éventuellement dans l'ordre spécifié : a. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, simultanément, ou essentiellement simultanément, avecIn another embodiment, the method or the use of. the invention comprises the following administrations, possibly in the specified order: a. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, simultaneously, or substantially simultaneously, with

l'administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP b. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration de MVA codant pour la ME-TRAP, et c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale.administration of ChAd63 coding for ME-TRAP b. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation simultaneously, or substantially simultaneously, with the administration of MVA encoding ME-TRAP, and c. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation.

Dans un autre mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation de l'invention comprend les administrations suivantes, éventuellement dans l'ordre spécifié : a. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, simultanément, ou essentiellement simultanément, avecIn another embodiment, the method or the use of the invention comprises the following administrations, possibly in the specified order: a. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, simultaneously, or substantially simultaneously, with

l'administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP b. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, et c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale simultanément, ou essentiellement simultanément, avec l'administration de MVA codant pour la ME-TRAP.administration of ChAd63 coding for ME-TRAP b. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, and c. Administration of RTS, S adjuvated with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation simultaneously, or substantially simultaneously, with the administration of MVA encoding ME-TRAP.

l'administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP b. Administration de RTS, S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, et c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale.administration of ChAd63 coding for ME-TRAP b. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, and c. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation.

Dans certains modes de réalisation, un ou plusieurs vecteurs codant pour la TRAP sont mélangés avec l'antigène CS plasmodial avant l'administration. 'In some embodiments, one or more vectors encoding TRAP are mixed with the plasmodial CS antigen prior to administration. '

Par exemple, le RTS, S et le vecteur codant pour la ME-TRAP (comme ChAd63 codant pour la ME-TRAP) peuvent être fournis ensemble dans un flacon sous forme lyophilisée et être reconstitués avec la solution de l'adjuvant avant l'administration. En variante, les composants de la composition peuvent être fournis dans une formulation liquide et être mélangés avant l'administration.For example, the RTS, S and ME-TRAP coding vector (such as ChAd63 encoding ME-TRAP) can be provided together in a vial in lyophilized form and reconstituted with the adjuvant solution prior to administration. . Alternatively, the components of the composition may be provided in a liquid formulation and mixed prior to administration.

Ainsi, dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, comme une composition lyophilisée ou liquide, comprenant : i) un antigène circumsporozoite (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants ; et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.Thus, in another aspect, the invention relates to a composition, such as a lyophilized or liquid composition, comprising: i) a plasmodial circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS protein or an immunogenic or variant fragment thereof; and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodial thrombospondin-related adherence protein (TRAP) antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof.

Dans un mode de réalisation, l'antigène CS est le' RTS, S et le vecteur nucléotidique codant pour un antigène TRAP plasmodial est ChAd63 codant pour la ME-TRAP.In one embodiment, the CS antigen is the RTS, S, and the nucleotide vector encoding a plasmodial TRAP antigen is ChAd63 encoding ME-TRAP.

Le sujet humain à traiter en utilisant le procédé de l'invention peut être d'un âge quelconque. Le procédé de l'invention pourra être utilisé dans le contexte d'un programme d'élimination pour le' paludisme, en quel cas l'immunisation essentiellement de toute la population, c'est-à-dire de tous les groupes d'âges, pourra être utile. Toutefois, dans un mode de réalisation, le sujet humain est âgé de plus de 18 ans lorsque la première composition est administrée. Dans un autre mode de réalisation, le sujet humain est âgé de moins de cinq ans lorsque la première composition est administrée. Dans un autre mode de réalisation, le sujet est âgé de 6 à 12 semaines ou moins ou de 5 à 17 mois. Une autre population cible particulièrement appropriée comprend les voyageurs vers des régions où le paludisme est endémique.The human subject to be treated using the method of the invention may be of any age. The method of the invention may be used in the context of an elimination program for malaria, in which case immunization essentially of the entire population, i.e. all age groups. , may be useful. However, in one embodiment, the human subject is over the age of 18 when the first composition is administered. In another embodiment, the human subject is less than five years old when the first composition is administered. In another embodiment, the subject is 6 to 12 weeks old or younger or 5 to 17 months old. Another particularly appropriate target population includes travelers to areas where malaria is endemic.

Les antigènes peuvent être administrés par diverses voies appropriées, y compris une administration parentérale, comme intramusculaire, intradermique ou sous-cutanée.The antigens can be administered by a variety of appropriate routes, including parenteral, intramuscular, intradermal, or subcutaneous administration.

Dans un autre aspect, l'invention concerne un kit comprenant i) un premier récipient, comme un flacon, comprenant un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et . ii) un deuxième récipient, comme un flacon, comprenant un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, et iii) éventuellement, un troisième récipient séparé avec l'adjuvant pour l'administration de l'antigène CS et/ou des instructions pour l'utilisation du kit dans l'immunisation de sujets humains contre le paludisme selon l'un quelconque des procédés décrits ici.In another aspect, the invention relates to a kit comprising: i) a first container, such as a vial, comprising a circumsporozoite (CS) plasmodial antigen, which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments and. ii) a second container, such as a vial, comprising a nucleotide vector encoding a plasmodial thrombospondin-related adherence protein (TRAP) antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof, and iii ) optionally, a third container separated with the adjuvant for the administration of the CS antigen and / or instructions for the use of the kit in the immunization of human subjects against malaria according to any of the methods described herein .

Les compositions immunogènes utilisées dans l'invention peuvent être fabriquées en mélangeant l'antigène ou les antigènes et l'adjuvant. L'antigène ou les antigènes peuvent être fournis sous une forme lyophilisée ou dans une formulation liquide. Pour chaque composition, il peut être fourni un kit comprenant un premier récipient comprenant l'antigène ou les antigènes et un second récipient comprenant l'adjuvant. Dans un autre mode de réalisation, les deux composants sont fournis dans une seule formulation.The immunogenic compositions used in the invention can be made by mixing antigen or antigens and adjuvant. The antigen or antigens can be provided in a lyophilized form or in a liquid formulation. For each composition, there may be provided a kit comprising a first container comprising the antigen or antigens and a second container comprising the adjuvant. In another embodiment, both components are provided in a single formulation.

De façon appropriée, les compositions immunogènes selon la présente invention ont un volume de dose humaine situé entre 0,05 ml et 1 ml, comme entre 0,1 et 0,5 ml, en particulier un volume de dose d'environ 0,5 ml, ou 0,7 ml. Le volume de la seconde composition immunogène peut être réduit, et par exemple, se situer entre 0,05 ml et 0,5 ml, comme entre 0,1 et 0,2 ml. Les volumes des compositions utilisées peuvent dépendre de la voie d'administration avec des doses plus petites étant données par la voie intradermique.Suitably, the immunogenic compositions according to the present invention have a human dose volume of between 0.05 ml and 1 ml, such as between 0.1 and 0.5 ml, in particular a dose volume of about 0.5. ml, or 0.7 ml. The volume of the second immunogenic composition may be reduced, for example, from 0.05 ml to 0.5 ml, such as from 0.1 to 0.2 ml. The volumes of the compositions used may depend on the route of administration with smaller doses being given by the intradermal route.

Les enseignements de toutes les références dans la présente demande, y compris les demandes de brevet et les brevets attribués, sont incorporés ici en référence dans leur intégralité. Les termes « comprenant », « comprennent » et « comprend » ici sont éventuellement substitués par les termes « étant constitué de », « sont constitués de » et « est constitué de », respectivement. L'invention sera en outre décrite en référence aux exemples non limitatifs suivants.The teachings of all the references in this application, including the patent applications and the granted patents, are incorporated herein by reference in their entirety. The terms "comprising", "include" and "includes" herein are optionally substituted by the terms "consisting of", "consist of" and "consists of", respectively. The invention will be further described with reference to the following non-limiting examples.

Exemple 1 - Une étude en phase I/Ila de stimulation (« challenge ») par des sporozoïtes pour estimer l'innocuité et l'efficacité protectrice du régime du vaccin candidat antipaludéen combiné de RTS,S/AS01B + ChAd63 et MVA codant pour la ME-TRAP et également du RTS,S/AS01B seulExample 1 - A sporozoite challenge phase I / IIa study to estimate the safety and protective efficacy of the combined RTS, S / AS01B + ChAd63 and MVA combination vaccine candidate vaccine regimen ME-TRAP and also RTS, S / AS01B alone

Il a été effectué un essai clinique en phase I/IIa dans lequel l'innocuité, l'immunogénicité et l'efficacité protectrice de deux régimes candidats d'immunisation ont été testées.A Phase I / IIa clinical trial was conducted in which the safety, immunogenicity, and protective efficacy of two candidate immunization regimens were tested.

Le premier régime d'immunisation (groupe 1) consistait en 3 administrations de RTS,S/AS01B, une administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP et une administration de MVA codant pour la ME-TRAP. Le second régime d'immunisation (groupe 2) consistait en 3 administrations de RTS,S/AS01B seul. En outre, des témoins non vaccinés (groupe 3) ont été inclus. L'étude était une étude ouverte, partiellement randomisée, multicentrique en phase I/IIa portant sur une infection de paludisme humain contrôlée (CHMI). La population de l'étude consistait en des adultes en bonne santé âgés de 18 à 45 ans. Taille des groupes : les groupes 1, 2 et 3 contenaient 17, 16 et 6 volontaires au moment de la stimulation (« challenge »), respectivement.The first immunization regimen (group 1) consisted of 3 administrations of RTS, S / AS01B, a ChAd63 administration coding for ME-TRAP and a MVA administration coding for ME-TRAP. The second immunization regimen (group 2) consisted of 3 administrations of RTS, S / AS01B alone. In addition, unvaccinated controls (group 3) were included. The study was an open-label, partially randomized, multi-center Phase I / IIa study of a controlled human malaria infection (CHMI). The study population consisted of healthy adults aged 18 to 45 years old. Group size: Groups 1, 2 and 3 contained 17, 16 and 6 volunteers at the time of challenge, respectively.

Vaccins de l'étude RTS,S/AS01B : RTS, S a été produit dans des levures (S. cerevisiae) essentiellement comme il est décrit dans le document WO 93/10152. L'adjuvant liposomial 3D-MPL/QS21 (AS01) a été produit essentiellement comme il est décrit dans l'exemple II dans le document WO 2007/068907. 50 microgrammes (mcg) de RTS, S avec du saccharose en tant que cryoprotecteur, présenté sous la forme d'un culot lyophilisé dans un flacon à dose unique a été reconstitué avec de l'adjuvant AS01B sous forme liquide. L'adjuvant AS01B contenait 50 mcg de MPL et 50 mcg de QS21 avec des liposomes. Le volume injectable après reconstitution était de 0,5 ml. Chaque dose de RTS,S/AS01B a été donnée par voie intramusculaire.Vaccines from the RTS study, S / AS01B: RTS, S was produced in yeast (S. cerevisiae) essentially as described in WO 93/10152. Liposomal adjuvant 3D-MPL / QS21 (AS01) was produced essentially as described in Example II in WO 2007/068907. 50 micrograms (mcg) of RTS, S with sucrose as a cryoprotectant, presented as a freeze-dried pellet in a single dose vial was reconstituted with AS01B adjuvant in liquid form. AS01B adjuvant contained 50 mcg of MPL and 50 mcg of QS21 with liposomes. The volume for injection after reconstitution was 0.5 ml. Each dose of RTS, S / AS01B was given intramuscularly.

Le ChAd63 ME-TRAP a été fabriqué comme il a été décrit auparavant (O'Hara et al. 2012 J Infect Dis 205: 772 ; Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038/ncomms3836) . Le ChAd63 ME-TRAP a été donné par voie intramusculaire à une dose de 5 x 1010 pv. Le MVA ME-TRAP a été fabriqué comme il a été décrit auparavant (McConkey et al. 2003 Nat Med 9: 729 ; O'Hara et al. 2012 J Infect Dis 205: 772 ; Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038/ncomms3836). Le MVA ME-TRAP a été donné par voie intramusculaire à une dose de 2 x 108 pfu. Régimes de vaccinationChAd63 ME-TRAP was manufactured as previously described (O'Hara et al., 2012 J Infect Dis 205: 772, Ewer et al., 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038 / ncomms3836). ChAd63 ME-TRAP was given intramuscularly at a dose of 5 x 1010 pv. MVA ME-TRAP was manufactured as previously described (McConkey et al., 2003 Nat Med 9: 729, O'Hara et al., 2012 J Infect Dis 205: 772, Ewer et al., 2013 Nat Commun 4: 2836 doi: 10.1038 / ncomms3836). MVA ME-TRAP was given intramuscularly at a dose of 2 x 108 pfu. Vaccination regimes

Les régimes de vaccinations qui ont été utilisés sont indiqués dans le tableau suivant:The vaccination regimens that have been used are shown in the following table:

CHMICHMI

La CHMI par stimulation (« challenge ») avec des sporozoïtes (piqûres de moustiques) a été effectuée à la semaine 12. La CHMI a été effectuée comme il est décrit dans Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038/ncomms3836. Après la CHMI, des visites de deux fois par jour et de tous les jours ont été programmées pour permettre la mesure du temps jusqu'à un critère d'efficacité de 20 parasites P. falciparum/ml dans le sang périphérique par qPCR (effectuée comme il est décrit dans Andrews et al. 2005 Am J Trop Med Hyg 73: 191), 500 parasites/ml dans le sang périphérique par qPCR, et une infection au stade sanguin définie par un ensemble de symptômes, le résultat du frottis et la parasitémie.CHMI by stimulation ("challenge") with sporozoites (mosquito bites) was performed at week 12. CHMI was performed as described in Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038 / ncomms3836. After CHMI, twice daily and daily visits were scheduled to allow time measurement to a criterion of efficacy of 20 P. falciparum parasites / ml in peripheral blood by qPCR (performed as it is described in Andrews et al., 2005 Am J Trop Med Hyg 73: 191), 500 parasites / ml in peripheral blood by qPCR, and a blood stage infection defined by a set of symptoms, the result of smear and parasitaemia. .

Immunogénicitéimmunogenicity

Les réponses des lymphocytes T à la ME-TRAP ont été mesurées par des tests ELISpot et par cytométrie en flux comme il est décrit dans O'Hara et al. 2012 J Infect Dis 205: 772 et Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038/ ncomms3836. Les réponses en anticorps dirigés contre la CS ont été mesurées par un test ELISA comme il est décrit dans Rester et al. J Infect Dis 2009. RésultatsT-cell responses to ME-TRAP were measured by ELISpot and flow cytometric assays as described in O'Hara et al. 2012 J Infect Dis 205: 772 and Ewer et al. 2013 Nat Commun 4: 2836. doi: 10.1038 / ncomms3836. Antibody responses to CS were measured by ELISA as described in Rester et al. J Infect Dis 2009. Results

La figure la représente le pourcentage de sujets demeurant aparasitémiques par un frottis sanguin et par PCR dans le temps à la suite d'une stimulation (« challenge ») avec des sporozoïtes.Figure la represents the percentage of subjects remaining aparasitmic by blood smear and PCR over time following a challenge with sporozoites.

Protection - efficacité de stérilisationProtection - sterilization efficiency

Les sujets qui sont demeurés aparasitémiques par frottis sanguin et par PCR après 20 jours ont été considérés comme protégés.Subjects who remained parasitic by blood smear and PCR after 20 days were considered protected.

Les résultats pour les différents groupes ont été les suivants :The results for the different groups were as follows:

Groupe 1 : 14 volontaires sur 17 ont été protégés = 82,4 %Group 1: 14 out of 17 volunteers were protected = 82.4%

Groupe 2 : 12 volontaires sur 16 ont été protégés = 75 % Groupe 3 : 0 volontaire sur 6 a été protégé = 0 %Group 2: 12 volunteers out of 16 were protected = 75% Group 3: 0 volunteers out of 6 were protected = 0%

Signification statistique :Statistical significance:

Groupe 1 contre le groupe 2 contre les témoins (log-rank) P = 1 x 10“8Group 1 vs Group 2 against witnesses (log-rank) P = 1 x 10 "8

Groupe 1 contre les témoins : risque relatif (log-rank) = 0,065 [0,003-0,19] , P < 10“7Group 1 against controls: relative risk (log-rank) = 0.065 [0.003-0.19], P <10.7

Groupe 2 contre les témoins : risque relatif (log-rank) = 0,122 [0,004- 0,13], P < 10“3Group 2 against controls: relative risk (log-rank) = 0.122 [0.004-0.13], P <10-3

Groupe 1 contre le groupe 2 : risque relatif (log-rank) = 0,65 [0,15 -2,86], P = 0,57Group 1 vs group 2: relative risk (log-rank) = 0.65 [0.15 -2.86], P = 0.57

Efficacité du vaccin (protection + retards significatifs dans le temps jusqu'à la patence de l'infection de paludisme)Efficacy of the vaccine (protection + significant delays over time until the occurrence of the malaria infection)

Dans le groupe témoin (groupe 3), les 6 sujets sont devenus positifs par examen au microscope des lames de frottis sanguin au jour 11 (1 sujet), 11,5 (1 sujet), 12 (1 sujet), 12.5 (1 sujet) et 13 (2 sujets), respectivement. Ceci donne une moyenne de 12,17 +/- 0,8 jours (écart-type, ET) . Les receveurs du vaccin qui sont retardés à plus de la moyenne plus deux écarts-types du groupe témoin sont considérés comme « retardés dans le temps jusqu'à la patence » et montrent une efficacité partielle du vaccin. Dans cet essai, il s'agirait d'un retard à plus de 12,17 plus (2 x 0,8) jours = 13,77 j ours.In the control group (group 3), the 6 subjects became positive by microscopic examination of blood smear slides at day 11 (1 subject), 11.5 (1 subject), 12 (1 subject), 12.5 (1 subject ) and 13 (2 subjects), respectively. This gives an average of 12.17 +/- 0.8 days (standard deviation, SD). Vaccine recipients who are delayed more than the average plus two standard deviations from the control group are considered "delayed in time until patency" and show partial efficacy of the vaccine. In this trial, it would be a delay of more than 12.17 plus days (2 x 0.8) = 13.77 days.

Dans le groupe 1, les 3 sujets qui sont devenus positifs avant le jour 21 sont devenus positifs au jour 14 (1 sujet) , 14.5 (1 sujet) et 16 (1 sujet). Ainsi, chez les 3 sujets, il y a eu un retard significatif de cette moyenne (14,83 jours) comparativement à la moyenne du groupe 3 (12,17 jours) de 2,66 jours. Ce retard de 2,66 jours est de plus de 2 fois l'écart-type du groupe témoin (0,8 jour) et par conséquent, est considéré comme statistiquement significatif. Les trois sujets ont été retardés au-delà du jour 13,77.In group 1, the 3 subjects who became positive before day 21 became positive at day 14 (1 subject), 14.5 (1 subject) and 16 (1 subject). Thus, in the 3 subjects, there was a significant delay of this average (14.83 days) compared to the average of the group 3 (12.17 days) of 2.66 days. This delay of 2.66 days is more than 2 times the standard deviation of the control group (0.8 days) and therefore is considered statistically significant. The three subjects were delayed beyond day 13,77.

Dans le groupe 2, les 4 sujets qui sont devenus positifs avant le jour 21 sont devenus positifs au jour 11,5 (1 sujet), 12.5 (1 sujet), 14 (1 sujet) et 19 (1 sujet) . Ainsi, chez 2 sujets, il y a eu un retard significatif comparativement à la moyenne du groupe 3 parce que 2 sujets ont été retardés au-delà du jour 13,77.In group 2, the 4 subjects who became positive before day 21 became positive at day 11.5 (1 subject), 12.5 (1 subject), 14 (1 subject) and 19 (1 subject). Thus, in 2 subjects, there was a significant delay compared to the group 3 average because 2 subjects were delayed beyond day 13,77.

Ainsi, si des sujets chez lesquels un retard d'infection significatif est observé, sont ajoutés aux sujets protégés de façon stérile, figure la, les efficacités vaccinales deviennent les suivantes :Thus, if subjects in whom a significant delay of infection is observed, are added to the sterile protected subjects, figure la, the vaccinal efficiencies become the following ones:

Groupe 1 : 17/17 présentent une efficacité = 100 %Group 1: 17/17 have an efficiency = 100%

Groupe 2 : 14/16 présentent une efficacité = 87,5 %Group 2: 14/16 exhibit efficacy = 87.5%

Groupe 3:0/6 présente une efficacité = 0 % comme il était attenduGroup 3: 0/6 has an efficiency = 0% as expected

Signification statistique :Statistical significance:

Groupe 1 contre le groupe 2 contre les témoins (chi-carré) : P < 10-6Group 1 vs Group 2 against witnesses (chi-square): P <10-6

Groupe 1 contre le groupe 2 (chi-carré) : P = 0,066 (c'est-à-dire 0/17 contre 2/16). Une valeur P unilatérale est utilisée du fait que l'hypothèse antérieure testée était que le groupe 1 serait mieux protégé que le groupe 2.Group 1 vs. Group 2 (chi-square): P = 0.066 (ie 0/17 vs. 2/16). A one-sided P-value is used because the previous hypothesis tested was that group 1 would be better protected than group 2.

Immunogénicitéimmunogenicity

Le mécanisme pertinent le plus vraisemblable en ce qui concerne l'efficacité protectrice du vaccin RTS,S est l'induction d'anticorps à des titres élevés. Ils ont été induits jusqu'à un taux très similaire dans les groupes 1 et 2 (figure lb) et ces taux sont apparus similaires à ceux dans les essais antérieurs du RTS,S / AS01 aux Etats-Unis (Rester et al. (2008) Vaccine 26, 2191-2202 ; Rester et al. (2009) J. Infect. Dis. 200, 337-346). Les anticorps dirigés contre la TRAP ont été corrélé avec l'immunogénicité de la TRAP d'après les lymphocytes T dans le groupe 1 (figure 2a) ; mais le taux bien inférieur des lymphocytes T induits contre la CS n'a pas été corrélé avec les anticorps dirigés contre la CSThe most relevant relevant mechanism for the protective efficacy of the RTS, S vaccine is the induction of high titre antibodies. They were induced to a very similar level in groups 1 and 2 (Figure 1b) and these rates appeared similar to those in previous RTS trials, S / AS01 in the United States (Rester et al., 2008). Vaccine 26, 2191-2202, Rester et al (2009) J. Infect Dis 200, 337-346). Antibodies to TRAP were correlated with the immunogenicity of TRAP from T-cells in group 1 (Figure 2a); but the much lower level of T-cells induced against CS was not correlated with antibodies to CS

(figure 2b) . Les taux des anticorps dirigés contre la CS chez les receveurs individuels du vaccin n'ont pas été corrélés avec les taux des lymphocytes T dirigés contre la TRAP dans le groupe 1 (figure 2c). Les anticorps dirigés contre la TRAP dans le groupe 1 ont été trouvés à un taux similaire à ceux dans un essai de vaccin antérieur (Vac045, Hodgson et al. soumis) en utilisant la ME-TRAP dans les mêmes vecteurs utilisés seuls (figure 2d), ne suggérant aucune interférence avec l'immunogénicité de la TRAP selon les anticorps à partir de l'administration de RTS,S aux mêmes individus. Les anticorps dirigés contre la CS ont été corrélés positivement avec les trois mesures de l'efficacité du vaccin (figure 2e, 2f, 2g), c'est-à-dire au moment du diagnostic (figure 2e), le temps jusqu'à 20 parasites par ml mesuré par PCR (figure 2f) et le temps jusqu'à 500 parasites par ml mesuré par PCR (figure 2g). Ceci supporte un rôle protecteur des anticorps à titre élevé dirigés contre la CS induits par ces régimes de vaccination, cohérents avec des études antérieures. Les lymphocytes T dirigés contre la TRAP mesurés par ELISPOT le jour avant la stimulation (« challenge ») ont montré un taux moyen chez les receveurs du vaccin du groupe 1 de 1372 cellules formant des taches par million mais n'ont pas été corrélés avec l'efficacité (non présenté), bien que la possibilité de détecter une telle corrélation soit très ' faible.(Figure 2b). Levels of antibodies to CS in individual vaccine recipients were not correlated with TRAP levels in group 1 (Figure 2c). Antibodies to TRAP in group 1 were found at a similar rate to those in a previous vaccine trial (Vac045, Hodgson et al., Submitted) using ME-TRAP in the same vectors used alone (Figure 2d). , suggesting no interference with the immunogenicity of TRAP according to the antibodies from the administration of RTS, S to the same individuals. Antibodies to CS were positively correlated with the three measures of vaccine efficacy (Figure 2e, 2f, 2g), ie at the time of diagnosis (Figure 2e), the time to 20 parasites per ml measured by PCR (Figure 2f) and the time up to 500 parasites per ml measured by PCR (Figure 2g). This supports a protective role of the high titre antibodies directed against CS induced by these vaccination regimens, consistent with previous studies. TRAP T cells measured by ELISPOT the day before challenge ("challenge") showed an average level of 1372 cells per million in group 1 vaccine recipients but were not correlated with efficiency (not shown), although the possibility of detecting such a correlation is very low.

Conclusion principaleMain conclusion

Le pourcentage le plus élevé de protection stérile (82,4 %) a été obtenu dans le groupe 1. A notre connaissance, une protection à 82,4 % est le taux de protection le plus élevé jamais détecté dans un groupe quelconque d'essai sur un vaccin avec une taille d'échantillon > 10 dans une étude quelconque avec stimulation (« challenge ») du paludisme.The highest percentage of sterile protection (82.4%) was obtained in group 1. To our knowledge, protection at 82.4% is the highest level of protection ever detected in any test group on a vaccine with a sample size> 10 in any study with malaria challenge.

Lorsque des infections retardées ont été incluses dans l'efficacité vaccinale, l'efficacité dans le groupe 1 est passée à 100 %. A notre connaissance, c'est le premier groupe vaccinal montrant une efficacité de 100 % dans une étude quelconque avec stimulation (« challenge ») avec une taille de groupe de 10 ou plus.When delayed infections were included in vaccine efficacy, efficacy in group 1 increased to 100%. To our knowledge, this is the first vaccine group showing 100% efficacy in any challenge study with a group size of 10 or more.

Données de la nouvelle stimulation (« re-challenge »)Data of the new stimulation ("re-challenge")

La capacité à fournir une efficacité soutenue et durable est une caractéristique clé de l'immunisation. Ceci peut être une caractéristique limitante de l'efficacité globale d'un vaccin. Par exemple, chez des jeunes nourrissons dans l'essai en phase III du RTS,S/AS01, la réduction de l'incidence de paludisme clinique par période de 6 mois a été de 47 % (IC à 95 % de 39 % à 54 %) durant les mois 1 à 6, de 23 % (IC à 95 % de 15 % à 31 %) durant les mois 7 à 12, et de 12 % (IC à 95 % de 1 % à 21 %) durant les mois 13 à 18 à la suite de la dose 3. Ceci peut être lié à la réduction de l'efficacité du même vaccin lorsqu'il est utilisé dans des études de stimulation (« challenge ») aux Etats-Unis chez des adultes. L'efficacité du vaccin le premier mois après la vaccination (généralement à 3 semaines après la dernière dose) a été de 50 % dans l'essai de Rester et al. 2009. Mais lors d'une nouvelle stimulation (« re-challenge ») à 6 mois, seulement 4 individus sur 9 (44 %) ont été à nouveau protégés. Ceci peut être calculé pour représenter environ 22 % d'efficacité de stérilisation globale à six mois (50 % x 44 % = 22 %). Une étude antérieure avec une nouvelle stimulation (« re-challenge ») avec RTSS/AS02 (Stoute et al. 1997 N Engl J Med 336 (2) : 86, Stoute et al. 1998 J Infect Dis 178(4): 1139) a trouvé une efficacité globale à 6 mois de 17 %. De façon similaire, dans une étude en phase lia récente sur un vaccin à base de sporozoites irradiés par Sanaria, l'efficacité du vaccin le premier mois semble élevée avec 12/15 receveurs du vaccin ne montrant aucune infection lors de la stimulation (« challenge ») (Seder et al. 2013, Science 341, 1359-1365). A cause de l'échec de l'infection chez un témoin de la provocation, ceci a représenté une estimation globale du taux d'efficacité de stérilisation du vaccin global de 76 % (Seder et al. 2013 Science 341, 13591365, voir la légende de la figure 2) . Toutefois, lors de la nouvelle stimulation (« re-challenge ») de six de ces individus protégés à 5 mois, seulement 2 ont été à nouveau protégés (Richie et al., présenté au meeting ICOPA, Mexico City, August 2Q14) représentant un taux d'efficacité de stérilisation du vaccin global de (76 % x 33 % = 25 %) 25 %.The ability to provide sustained and sustained efficacy is a key feature of immunization. This may be a limiting characteristic of the overall effectiveness of a vaccine. For example, in young infants in the RTS phase III trial, S / AS01, the reduction in clinical malaria incidence per 6-month period was 47% (95% CI 39% to 54%). %) in months 1 to 6, 23% (95% CI 15% to 31%) in months 7 to 12, and 12% (95% CI 1% to 21%) in months 13 to 18 as a result of dose 3. This may be related to the reduced effectiveness of the same vaccine when used in US challenge studies in adults. The effectiveness of the vaccine in the first month after vaccination (usually at 3 weeks after the last dose) was 50% in the Rester et al. 2009. But during a new stimulation ("re-challenge") at 6 months, only 4 out of 9 (44%) were protected again. This can be calculated to represent approximately 22% overall sterilization efficacy at six months (50% x 44% = 22%). An earlier study with new stimulation ("re-challenge") with RTSS / AS02 (Stoute et al 1997 N Engl J Med 336 (2): 86, Stoute et al 1998 J Infect Dis 178 (4): 1139) found overall effectiveness at 6 months of 17%. Similarly, in a recent phase II study of a Sanaria-irradiated sporozoite vaccine, the efficacy of the vaccine in the first month seems high with 12/15 recipients of the vaccine showing no infection during stimulation ("challenge"). (Seder et al., 2013, Science 341, 1359-1365). Because of the failure of the infection in a provocation control, this represented a global estimate of the overall sterilization efficacy rate of 76% (Seder et al 2013 Science 341, 13591365, see legend of Figure 2). However, during the new stimulation ("re-challenge") of six of these protected individuals at 5 months, only 2 were again protected (Richie et al., Presented at the meeting ICOPA, Mexico City, August 2Q14) representing a overall sterilization efficacy rate of (76% x 33% = 25%) 25%.

Parmi les 14 volontaires protégés du groupe 1, 8 ont été soumis à une nouvelle stimulation (« re-challenge »). Parmi les 12 receveurs du vaccin protégés du groupe 2, 6 ont été soumis à une nouvelle stimulation (« re-challenge »). La nouvelle stimulation (« re-challenge ») a suivi le protocole standard de cinq piqûres (Ewer et al. Nat Communications 20134: 2836. doi : 10.1038/ncomms3836) avec P. falciparum et elle a été entreprise six mois après la dernière vaccination accompagnée de cinq nouveaux volontaires témoins.Of the 14 protected volunteers in Group 1, 8 were re-challenged. Of the 12 recipients of the protected group 2 vaccine, 6 were re-challenged. The new challenge ("re-challenge") followed the standard five-bite protocol (Ewer et al., Nat Communications 20134: 2836. doi: 10.1038 / ncomms3836) with P. falciparum and was initiated six months after the last vaccination. accompanied by five new volunteer witnesses.

Tous les volontaires témoins ont développé un paludisme avec un temps moyen jusqu'à la patence de 12,4 jours (figure 3). Les volontaires individuels ont été diagnostiqués aux jours 11,5, 11,5, 12,5, 13, 13,5, respectivement (écart-type = 0,76 jour). Pour le groupe 1, 7 receveurs du vaccin sur 8 ont été protégés (87,5 %) et le volontaire restant a été diagnostiqué au jour 17,5. Pour le groupe 2, 5/6 ont été protégés (83,3 %) et le volontaire restant a été diagnostiqué au j our 14,5. L'efficacité de stérilisation du vaccin globale à six mois peut être ainsi calculée pour le groupe 1 comme étant de 82,4 % x 87,5 % = 72,1 %. L'efficacité de stérilisation du vaccin globale à six mois peut être calculée pour le groupe 2 comme étant de 75 % x 83,3 % = 62,5 %.All control volunteers developed malaria with a mean time to patency of 12.4 days (Figure 3). Individual volunteers were diagnosed at days 11.5, 11.5, 12.5, 13, 13.5, respectively (standard deviation = 0.76 days). For group 1, 7 out of 8 vaccine recipients were protected (87.5%) and the remaining volunteer was diagnosed at day 17.5. For group 2, 5/6 were protected (83.3%) and the remaining volunteer was diagnosed at day 14.5. The sterilization efficacy of the global six-month vaccine can thus be calculated for group 1 as being 82.4% x 87.5% = 72.1%. The sterilization efficacy of the overall six-month vaccine can be calculated for group 2 as 75% x 83.3% = 62.5%.

Comparaison des taux de protection durableComparison of sustainable protection rates

Pour déterminer si ces taux améliorés d'efficacité durable sont significativement meilleurs que ceux rapportés auparavant, nous avons comparé les données du groupe 1 et du groupe 2 à celles rapportées par Rester et al. 2009 en utilisant le RTS,S/AS01 dans un essai antérieur.To determine whether these improved rates of sustainable efficacy are significantly better than those previously reported, we compared group 1 and group 2 data with those reported by Rester et al. 2009 using the RTS, S / AS01 in an earlier test.

Groupe 2 contre AS01 chez Rester et al. 2009Group 2 vs AS01 at Rester et al. 2009

Groupe 2 : -5 / (6x16/12) = 5/ 8 receveurs du vaccin à l'origine protégés AS01 Rester et al. :-4/ (9 x 36/18) =4/18 receveurs du vaccin à l'origine protégésGroup 2: -5 / (6x16 / 12) = 5/8 originally protected vaccine recipients AS01 Rester et al. : -4 / (9 x 36/18) = 4/18 originally protected vaccine recipients

Test du Chi au carré (http://www.openepi.com), valeur exacte mi-P, bilatérale, P = 0,07Chi square test (http://www.openepi.com), exact value half-P, bilateral, P = 0.07

Groupe 1 contre AS01 chez Rester et al. 2009Group 1 versus AS01 at Rester et al. 2009

Groupe 1:-7/ (8 x 17/14) = 7 / 9,71 receveurs du vaccin protégés AS01 Rester et al. :-4/ (9 x 36/18) =4/18 receveurs du vaccin à l'origine protégésGroup 1: -7 / (8 x 17/14) = 7 / 9,71 recipients of protected vaccine AS01 Rester et al. : -4 / (9 x 36/18) = 4/18 originally protected vaccine recipients

Test du Chi au carré, valeur exacte mi-P, bilatérale, P < 0,02Chi square test, exact value mid-P, bilateral, P <0.02

Cette analyse a indiqué que le groupe du RTS,S/AS01 seul n'a pas été significativement différent par rapport à l'utilisation du même régime vaccinal par Rester et al. Toutefois, le groupe 1 est significativement amélioré par rapport au RTS,S/AS01 utilisé par Rester et al. (2009).This analysis indicated that the RTS group, S / AS01 alone, was not significantly different from the use of the same vaccine regimen by Rester et al. However, group 1 is significantly improved compared to RTS, S / AS01 used by Rester et al. (2009).

Nous en concluons que le taux de protection stérile à 6 mois pour le groupe 1 est le plus élevé jamais rapporté à 72 % et ceci semble représenter une amélioration très précieuse par rapport au RTS,S utilisé seul. Nous notons également qu'à la fois à la première stimulation (« challenge ») et à la nouvelle stimulation (re-challenge »), chaque volontaire du groupe 1 a montré une efficacité significative du vaccin : 17/17 à la première stimulation (« challenge ») et 8/8 à la nouvelle stimulation (« rechallenge ») . A nouveau, à notre connaissance, ce taux d'efficacité durable est un résultat sans précédent en 30 ans d'essais en phase II sur des vaccins pour le paludisme.We conclude that the 6-month sterile protection rate for group 1 is the highest ever reported at 72% and this appears to be a very valuable improvement over RTS, S alone. We also note that at both the first challenge and the new challenge, each group 1 volunteer showed a significant efficacy of the vaccine: 17/17 at the first stimulation ( "Challenge") and 8/8 to the new stimulation ("rechallenge"). Again, to our knowledge, this sustainable efficacy rate is an unprecedented result in 30 years of Phase II trials of malaria vaccines.

Exemple 2 - Innocuité, immunogénicité et efficacité du régime vaccinal combiné contre le paludisme de RTS,S/AS01 administré simultanément avec des vecteurs viraux ChAd-MVA exprimant la ME-TRAPExample 2 - Safety, immunogenicity and efficacy of the combined RTS, S / AS01 malaria vaccine regimen administered simultaneously with ChAd-MVA viral vectors expressing ME-TRAP

Dans une autre étude, l'administration simultanée du ChAd63 ME-TRAP et du MVA ME-TRAP avec le RTS,S/AS01 a été testée. L'étude était une étude en phase I/IIa ouverte, partiellement randomisée, multicentrique, sur une infection de paludisme humain contrôlée (CHMI). La population de l'étude consistait en des adultes en bonne santé naïfs envers le paludisme âgés de 18 à 45 ans. Taille des groupes : les groupes 1, 2, 3, 4 et 5 contenaient 8, 9, 10, 9 et 4 volontaires au moment de la stimulation (« challenge »), respectivement.In another study, simultaneous administration of ChAd63 ME-TRAP and MVA ME-TRAP with RTS, S / AS01 was tested. The study was an open, partially randomized, multicentre, phase I / IIa study on a controlled human malaria infection (CHMI). The study population consisted of naïve healthy adults with malaria aged 18 to 45 years. Group size: Groups 1, 2, 3, 4 and 5 contained 8, 9, 10, 9 and 4 volunteers at the time of challenge, respectively.

Vaccins de l'étudeVaccines from the study

Les vaccins de l'étude étaient les mêmes que dans l'exemple 1, sauf que la 3ème dose du RTS,S/AS01 donnée à deux des groupes était de l/5ème de la dose standard. Les vaccins ont été administrés par voie intramusculaire dans le muscle deltoïde du bras gauche. Lorsque deux vaccins ont été administrés simultanément, ceux-ci ont été effectués essentiellement au même emplacement et une administration a suivi immédiatement l'autre. Régimes de vaccinationThe vaccines in the study were the same as in Example 1 except that the third dose of RTS, S / AS01 given to two of the groups was 1 / 5th of the standard dose. The vaccines were administered intramuscularly in the deltoid muscle of the left arm. When two vaccines were administered simultaneously, they were carried out essentially at the same location and one administration immediately followed the other. Vaccination regimes

Les régimes de vaccination qui ont été utilisés sont indiqués dans le tableau suivant :The vaccination regimens that have been used are shown in the following table:

CHMI et test d'immunogénicitéCHMI and immunogenicity test

La CHMI et les tests immunogénicité ont été effectués comme il a été décrit dans l'exemple 1. RésultatsCHMI and immunogenicity tests were performed as described in Example 1. Results

Participantsparticipants

Dix sujets ont été enrôlés dans le groupe 1, le groupe 2 et le groupe 4. Onze sujets ont été enrôlés dans le groupe 3. Au total, 5 sujets se sont retirés de l'étude après l'enrôlement, mais avant la stimulation (« challenge ») (2 sujets du groupe 1, et 1 sujet pour chacun des groupes 2, 3 et 4) .Ten subjects were enrolled in group 1, group 2 and group 4. Eleven subjects were enrolled in group 3. A total of 5 subjects withdrew from the study after enrollment, but before stimulation ( "Challenge") (2 subjects in group 1, and 1 subject for each of groups 2, 3 and 4).

EfficacitéEfficiency

Les nombres des sujets présentant une protection stérile dans chaque groupe'sont résumés ci-dessous.The numbers of subjects with sterile protection in each group are summarized below.

Protection stérile au jour 16/17 :Sterile protection at day 16/17:

Groupe 1 : 6/8 sujets (75 %)Group 1: 6/8 subjects (75%)

Groupe 2 : 8/9 sujets (88,9 %)Group 2: 8/9 subjects (88.9%)

Groupe 3 : 6/10 sujets (60 %)Group 3: 6/10 subjects (60%)

Groupe 4: 5/9 sujets (55,6 %) ,Group 4: 5/9 subjects (55.6%),

Groupes 1 et 2 groupés : 14/17 (82,4 %)Groups 1 and 2 grouped: 14/17 (82.4%)

Groupes 3 et 4 groupés : 11/19 (57,9 %)Groups 3 and 4 grouped: 11/19 (57.9%)

Groupe 5, temps moyen jusqu'au diagnostic du paludisme (+/-ET) = 11,63 jours (+/- 0,22)Group 5, mean time to diagnosis of malaria (+/- SD) = 11.63 days (+/- 0.22)

Comparaison des groupes :Comparison of groups:

Les données montrent que contrairement à l'augmentation d'efficacité observée dans l'exemple 1, l'administration simultanée de ChAd63 ME-TRAP et de MVA ME-TRAP avec le RTS,S/AS01 n'a pas entraîné d'augmentation d'efficacité par rapport au RTS,S/AS01 seul.The data show that, unlike the increase in efficiency observed in Example 1, the simultaneous administration of ChAd63 ME-TRAP and MVA ME-TRAP with RTS, S / AS01 did not result in an increase in compared to RTS, S / AS01 alone.

Innocuité du vaccinVaccine safety

Aucune inquiétude quant à l'innocuité n'a été soulevée durant l'essai. Aucune des règles définies d'arrêt ou de mise en attente du protocole n'a été activée. Au total, 2 évériements indésirables sérieux (EIS) sont survenus, mais ni l'un ni l'autre n'était associé à la vaccination. Aucune réaction indésirable sérieuse inattendue suspectée (RISIS) n'est survenue. Il a été rapporté une fréquence supérieure d'événements indésirables (El) dans les groupes 3 et 4, et la fréquence la plus élevée d'EI dans tous les groupes a été rapportée à la suite de la 2ème série de vaccinations. La fréquence des événements secondaires dans les groupes 3 et 4 étaient encore largement comparables aux essais antérieurs dans lesquels le RTS,S/AS01B et le ChAd63/MVA ME-TRAP ont été donnés seuls. Douleur, fébrilité, fatigue, myalgie, malaises ont été les El n'est plus couramment rapportés.No safety concerns were raised during the trial. None of the defined rules for stopping or stopping the protocol has been enabled. A total of 2 serious adverse events (SIEs) occurred, but neither was associated with vaccination. No unexpected serious suspected adverse reactions (RISIS) have occurred. A higher frequency of adverse events (EI) was reported in groups 3 and 4, and the highest frequency of AEs in all groups was reported following the 2nd series of vaccinations. The frequency of secondary events in groups 3 and 4 were still largely comparable to previous trials in which RTS, S / AS01B and ChAd63 / MVA ME-TRAP were given alone. Pain, feverishness, fatigue, myalgia, discomfort were the El is no longer commonly reported.

Immunogénicitéimmunogenicity

Les titres d'Ac dirigés contre la CS ne sont pas parvenus à une activation après la 3ème dose de vaccin (jour 56) dans les groupes 3 et 4 et les titres mesurés le jour avant la CHMI (P-l) ont été approximativement 2,5 fois supérieurs dans les groupes 1 et 2 par rapport aux groupes 3 et 4. (Figure 7 (panel VAC59)). Des titres d'Ac dirigés contre la CS significativement supérieurs ont été induits par le RTS,S/AS01 seul (exemple 2, groupes 1 et 2 (panel VAC59 sur la figure 7) et exemple 1, groupe 2 (panel VAC55 sur la figure 7) ) ou le RTS,S/AS01 et des vecteurs viraux décalés (exemple 1, groupe 1 (panel VAC55 sur la figure 7) par rapport à l'exemple 2, groupes 3 et 4 (panel VAC59, figure 7).Ac titres to CS did not achieve activation after the 3rd dose of vaccine (day 56) in groups 3 and 4 and titres measured the day before CHMI (Pl) were approximately 2.5 times higher in groups 1 and 2 compared to groups 3 and 4. (Figure 7 (panel VAC59)). Significantly higher CS titers against CS were induced by RTS, S / AS01 alone (Example 2, Groups 1 and 2 (panel VAC59 in Figure 7) and Example 1, Group 2 (panel VAC55 in Figure 7)) or RTS, S / AS01 and staggered viral vectors (Example 1, Group 1 (panel VAC55 in Figure 7) compared to Example 2, Groups 3 and 4 (Panel VAC59, Figure 7).

Il y a eu également une activation seulement très limitée des Ac dirigés contre la TRAP à la suite de la 3ème vaccination (jour 56) dans les groupes 3 et 4, comparativement à celle observée dans l'étude de l'exemple 1 (données non présentées). Les réponses des lymphocytes T contre la TRAP mesurées par un test ELISPOT pour 1'interféron-D n'ont pas été significativement différentes de celles mesurées chez les sujets du groupe 1 dans l'étude de l'exemple 1 qui ont reçu le RTS,S/AS01B avec le ChAd63/MVA ME-TRAP, mais avec des vaccinations décalées par opposition à une administration simultanée (données non présentées).There was also only a very limited activation of the ACs directed against TRAP following the 3rd vaccination (day 56) in groups 3 and 4, compared to that observed in the study of example 1 (non presented). The TRAP T cell responses measured by an ELISPOT assay for interferon-D were not significantly different from those measured in group 1 subjects in the study of Example 1 who received RTS, S / AS01B with ChAd63 / MVA ME-TRAP, but with staggered vaccinations as opposed to simultaneous administration (data not shown).

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain comprenant l'administration de : i) un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.A method of inducing an immune response against malaria in a human subject comprising administering: i) a circumsporozoite (CS) plasmodial antigen, which is a CS protein or an immunogenic or variant fragment thereof and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodial thrombospondin-related adherence protein (TRAP) antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof.

2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel l'antigène CS plasmodial est une protéine CS de Plasmodium falciparum ou de Plasmodium vivax ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.The method according to claim 1, wherein the plasmodial CS antigen is a CS protein of Plasmodium falciparum or Plasmodium vivax or an immunogenic or variant fragment thereof.

3. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'antigène CS plasmodial est choisi dans le groupe constitué de : a. RTS, b. CSV-S, c. RTS,S d. CSV-S,S et e. particules mixtes comprenant le RTS et le CSV-S, et éventuellement l'antigène S non fusionné du virus de l'hépatite B.The method according to any one of the preceding claims, wherein the plasmodial CS antigen is selected from the group consisting of: a. RTS, b. CSV-S, c. RTS, S d. CSV-S, S and e. mixed particles comprising RTS and CSV-S, and optionally the unfused S antigen of hepatitis B.

4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'antigène CS plasmodial est le RTS, S et la quantité de RTS, S se situe entre 25 et 75, comme 50, microgrammes par dose ou entre 12,5 et 37,5, comme 25, microgrammes par dose ou entre 5 et 20, comme 10 microgrammes per dose.A method according to any one of the preceding claims, wherein the plasmodial CS antigen is RTS, S and the amount of RTS, S is between 25 and 75, such as 50, micrograms per dose or between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms per dose or between 5 and 20, as 10 micrograms per dose.

5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'antigène CS plasmodial est administré en combinaison avec un adjuvant.The method according to any one of the preceding claims, wherein the plasmodial CS antigen is administered in combination with an adjuvant.

6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel l'adjuvant comprend un agoniste de TLR, comme un agoniste du TLR4, par exemple le 3D-MPL.The method of claim 5, wherein the adjuvant comprises a TLR agonist, such as a TLR4 agonist, for example 3D-MPL.

7. Procédé selon la revendication 5 ou 6, dans lequel l'adjuvant comprend une saponine immunologiquement active, comme le QS21, et comprend en outre éventuellement un stérol.The method of claim 5 or 6, wherein the adjuvant comprises an immunologically active saponin, such as QS21, and optionally further comprises a sterol.

8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, dans lequel l'adjuvant comprend du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale.The method of any one of claims 5 to 7, wherein the adjuvant comprises 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation.

9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel l'adjuvant comprend entre 25 et 75, comme 50 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 25 et 75, comme 50 microgrammes de QS21 par dose.The method of claim 8, wherein the adjuvant comprises between 25 and 75, as 50 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 25 and 75, as 50 micrograms of QS21 per dose.

10. Procédé selon la revendication 8, dans lequel l'adjuvant comprend entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 12,5 et 37,5, comme 25 microgrammes de QS21 par dose.The method of claim 8, wherein the adjuvant comprises between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 12.5 and 37.5, as 25 micrograms of QS21 per dose. .

11. Procédé selon la revendication 8, dans lequel l'adjuvant comprend entre 5 et 20, comme 10 microgrammes, de 3D-MPL par dose et entre 5 et 20, comme 10 microgrammes de QS21 par dose.The method of claim 8, wherein the adjuvant comprises between 5 and 20, as 10 micrograms, of 3D-MPL per dose and between 5 and 20, as 10 micrograms of QS21 per dose.

12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, le procédé comprenant deux administrations ou plus, comme trois, administration d'antigène CS plasmodial.The method of any one of the preceding claims, the process comprising two or more administrations, such as three, administration of plasmodial CS antigen.

13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, le procédé comprenant trois administrations d'antigène CS plasmodial, l'antigène CS plasmodial étant le même dans les, trois administrations et l'antigène CS plasmodial étant adjuvé dans les trois administrations avec un adjuvant comprenant du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale.A method according to any one of the preceding claims, the process comprising three administrations of plasmodial CS antigen, the plasmodial CS antigen being the same in the three administrations and the plasmodial CS antigen being adjuvanted in the three administrations with a adjuvant comprising 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation.

14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel l'intervalle de temps entre chacune des administrations se situe entre 1 semaine et 1 an, par exemple entre 2 semaines et 6 mois, comme entre 2 semaines et 6 semaines, par exemple 4 semaines.14. The method of claim 13, wherein the time interval between each of the administrations is between 1 week and 1 year, for example between 2 weeks and 6 months, such as between 2 weeks and 6 weeks, for example 4 weeks.

15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, dans lequel la dose d'antigène CS plasmodial et la dose d'adjuvant sont maintenues constantes dans toutes les administrations.The method according to any one of claims 12 to 14, wherein the dose of plasmodial CS antigen and the adjuvant dose are kept constant in all administrations.

16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, dans lequel : a. la quantité d'antigène CS plasmodial est inférieure dans la deuxième administration, et/ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'antigène CS plasmodial dans la première administration et/ou b. la quantité d'adjuvant est inférieure dans la deuxième administration, et/ou l'une des administrations subséquentes, comparativement à la quantité d'adjuvant dans la première administration.The method of any one of claims 12 to 14, wherein: a. the amount of plasmodial CS antigen is lower in the second administration, and / or one of the subsequent administrations, compared to the amount of plasmodial CS antigen in the first administration and / or b. the amount of adjuvant is lower in the second administration, and / or one of the subsequent administrations, compared to the amount of adjuvant in the first administration.

17. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'antigène TRAP plasmodial est un antigène TRAP de Plasmodium falciparum ou de Plasmodium vivax ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.The method according to any one of the preceding claims, wherein the plasmodial TRAP antigen is a Plasmodium falciparum TRAP antigen or Plasmodium vivax or an immunogenic or variant fragment thereof.

18. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'antigène TRAP plasmodial est la ME-TRAP.The method of any one of the preceding claims, wherein the plasmodial TRAP antigen is ME-TRAP.

19. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial est un vecteur recombinant d'adénovirus simien défectueux pour la réplication.The method of any of the preceding claims, wherein the nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is a recombinant simian adenovirus vector defective for replication.

20. Procédé selon la revendication 19, dans lequel le vecteur d'adénovirus simien est ChAd63, AdCh68, AdC3, AdC6, ChAdOxl ou AdC7.The method of claim 19, wherein the simian adenovirus vector is ChAd63, AdCh68, AdC3, AdC6, ChAdOx1 or AdC7.

21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel entre 1 x 1010 et 1 x 1011, comme 5 x 1010 particules virales sont administrées par dose.21. The method of claim 20, wherein between 1 x 1010 and 1 x 1011, as 5 x 1010 viral particles are administered per dose.

22. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, dans lequel le vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial est un vecteur non adénoviral, comme le vecteur de la vaccine modifié Ankara (MVA).The method of any one of claims 1 to 18, wherein the nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is a non-adenoviral vector, such as the Ankara modified vaccinia vector (MVA).

23. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, qui comprend i) l'administration d'un vecteur adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial tel que décrit dans l'une quelconque des revendications 19 à 21, et ii) l'administration d'un vecteur non adénoviral qui code pour un antigène TRAP plasmodial, l'antigène TRAP plasmodial étant une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.A method according to any one of the preceding claims, which comprises i) administering an adenoviral vector which encodes a plasmodial TRAP antigen as described in any one of claims 19 to 21, and ii) the administration of a non-adenoviral vector which codes for a plasmodial TRAP antigen, the plasmodial TRAP antigen being a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments.

24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel le vecteur non adénoviral est un vecteur recombinant de poxvirus, comme un MVA ou un vecteur d'ADN plasmidique.The method of claim 23, wherein the non-adenoviral vector is a recombinant poxvirus vector, such as an MVA or a plasmid DNA vector.

25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 23 à 24, dans lequel le vecteur adénoviral et le vecteur non adénoviral codent tous les deux pour la ME-TRAP.The method of any one of claims 23 to 24, wherein the adenoviral vector and the non-adenoviral vector both encode ME-TRAP.

26. Procédé selon la revendication 25, dans lequel le vecteur non adénoviral est le MVA et entre 1 x 108 et 1 x 109, comme 2 x 108 pfu sont administrées par dose.The method of claim 25, wherein the non-adenoviral vector is MVA and between 1 x 108 and 1 x 109, as 2 x 108 pfu are administered per dose.

27. Procédé selon l'une quelconque des revendications 23 à 26, dans lequel le vecteur non adénoviral est administré au moins deux semaines, par exemple entre 2 et 12 semaines, après le vecteur adénoviral, comme dans lequel le vecteur non adénoviral est administré 8 semaines après le vecteur adénoviral.27. A method according to any one of claims 23 to 26, wherein the non-adenoviral vector is administered at least two weeks, for example between 2 and 12 weeks, after the adenoviral vector, as in which the non-adenoviral vector is administered. weeks after the adenoviral vector.

28. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'intervalle de temps entre la première administration d'un antigène CS plasmodial et la première administration d'un vecteur nucléotidique codant pour l'antigène TRAP plasmodial se situe entre 1 jour et 4 semaines, comme entre 1 semaine et 3 semaines, comme 2 semaines.The method according to any of the preceding claims, wherein the time interval between the first administration of a plasmodial CS antigen and the first administration of a nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is between 1 day and 4 weeks, as between 1 week and 3 weeks, as 2 weeks.

29. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant les administrations suivantes : a. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale, b. Administration de ChAd63 codant pour la ME-TRAP c. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale d. Administration de RTS,S adjuvé avec du 3D-MPL et du QS21 dans une formulation liposomiale e. Administration de MVA codant pour la ME-TRAP.The method of any one of the preceding claims, comprising the following administrations: a. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation, b. Administration of ChAd63 coding for ME-TRAP c. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation d. Administration of RTS, S adjuvanted with 3D-MPL and QS21 in a liposomal formulation e. Administration of MVA coding for ME-TRAP.

30. Procédé selon la revendication 29, dans lequel les administrations sont réalisées dans l'ordre spécifié.30. The method of claim 29, wherein the administrations are performed in the specified order.

31. Procédé selon la revendication 30, dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes a. et b. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes b. et c. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes c. et d. se situe entre 1 et 8 semaines, comme 4 semaines, et dans lequel l'intervalle de temps entre les étapes d. et e. se situe entre 1 et 3 semaines, comme 2 semaines.31. The method of claim 30, wherein the time interval between steps a. and B. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks, and in which the time interval between steps b. and c. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks, and in which the time interval between steps c. and D. is between 1 and 8 weeks, like 4 weeks, and in which the time interval between steps d. summer. is between 1 and 3 weeks, like 2 weeks.

32. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, dans lequel l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP est effectuée essentiellement simultanément avec l'administration d'un antigène CS plasmodial.The method of any one of claims 1 to 27, wherein the administration of one or all of the TRAP coding vectors is carried out substantially simultaneously with the administration of a plasmodial CS antigen.

33. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 31, dans lequel l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP n'est pas effectuée essentiellement simultanément avec l'administration d'un antigène CS plasmodial.The method of any one of claims 1 to 31, wherein the administration of one or all of the TRAP coding vectors is not performed substantially concurrently with the administration of a plasmodial CS antigen.

34. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 33, dans lequel l'administration de l'un ou de tous les vecteurs codant pour la TRAP est réalisée au niveau d'un site distinct du corps par rapport à celui utilisé pour l'administration de l'antigène CS plasmodial.34. The method according to any of claims 1 to 33, wherein the administration of one or all of the TRAP coding vectors is performed at a site distinct from the body as compared to that used for the treatment. administration of the plasmodial CS antigen.

35. Procédé selon l'une des revendications 1 à 33, dans lequel tout vecteur nucléotidique codant pour 1·'antigène TRAP plasmodial est administré au niveau d'un site distinct du corps, ou donné à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme à 14 jours ou plus d'écart.The method according to one of claims 1 to 33, wherein any nucleotide vector encoding the plasmodial TRAP antigen is administered at a site distinct from the body, or given at least 1 day apart, from any administration of a plasmodial CS antigen, as at more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, as at 14 days or more apart.

36. Procédé selon l'une des revendications 1 à 33, où si le procédé comprend deux administrations ou plus de vecteurs nucléotidiques codant pour un antigène TRAP plasmodial, la deuxième et les autres administrations sont données au niveau d'un site distinct du corps, ou données à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme à 14 jours ou plus d'écart.36. Method according to one of claims 1 to 33, wherein if the method comprises two or more administrations of nucleotide vectors encoding a plasmodium TRAP antigen, the second and the other administrations are given at a site distinct from the body, or given at least 1 day apart from any administration of a plasmodial CS antigen, such as more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart as at 14 days or more away.

37. Procédé selon l'une des revendications 1 à 33, où si le procédé comprend une administration avec un vecteur non adénoviral codant pour un antigène TRAP plasmodial, ladite administration est donnée au niveau d'un site distinct du corps, ou donnée à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme à 14 jours ou plus d'écart.37. The method according to one of claims 1 to 33, wherein if the method comprises an administration with a non-adenoviral vector coding for a plasmodial TRAP antigen, said administration is given at a site distinct from the body, or given at 1 one or more days apart from any administration of a plasmodial CS antigen, such as more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, such as at 14 days or more away.

38. Procédé selon l'une des revendications 1 à 33, où si le procédé comprend une administration avec un vecteur de MVA codant pour un antigène TRAP plasmodial, ladite administration est donnée au niveau d'un site distinct du corps, ou donnée à 1 jour ou plus d'écart, de toute administration d'un antigène CS plasmodial, comme à plus de 2 jours d'écart, par exemple à plus de 3, 4, 5, 6, ou 7 jours d'écart, comme à 14 jours ou plus d'écart.38. The method according to one of claims 1 to 33, wherein if the method comprises an administration with an MVA vector coding for a plasmodial TRAP antigen, said administration is given at a site distinct from the body, or given at 1 one or more days apart from any administration of a plasmodial CS antigen, such as more than 2 days apart, for example at more than 3, 4, 5, 6, or 7 days apart, such as at 14 days or more away.

39. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le sujet humain est âgé de plus de 18 ans lorsque la première administration est effectuée.39. A method according to any one of the preceding claims, wherein the human subject is over 18 years old when the first administration is performed.

40. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 38, dans lequel le sujet humain est âgé de moins de cinq ans lorsque la première administration est effectuée.40. The method of any one of claims 1 to 38, wherein the human subject is less than five years old when the first administration is performed.

41. Composition immunogène pour une utilisation dans un procédé d'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain, le procédé comprenant l'administration de i) un antigène circumsporozoite (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.41. An immunogenic composition for use in a method of inducing an immune response against malaria in a human subject, the method comprising administering i) a circumsporozoite (CS) plasmodial antigen, which is a CS or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a nucleotide vector encoding a plasmodial thrombospondin-related adherence protein (TRAP) antigen, which is a TRAP protein or an immunogenic or variant fragment thereof.

42. Composition immunogène selon la revendication 41, comprenant une ou plusieurs des autres caractéristiques telles que citées dans les revendications 2 à 40.42. Immunogenic composition according to claim 41, comprising one or more of the other characteristics as cited in claims 2 to 40.

43. Utilisation de i) un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, dans la fabrication d'un médicament destiné à l'induction d'une réponse immunitaire contre le paludisme chez un sujet humain, où i) et ii) sont administrés séquentiellement ou simultanément.43. Use of i) a plasmodial circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS protein or an immunogenic or variant fragment thereof and ii) a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adherence protein antigen (TRAP) ) plasmodial, which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments, in the manufacture of a medicament for inducing an immune response against malaria in a human subject, wherein i) and ii) are administered sequentially or simultaneously.

44. Utilisation selon la revendication 43, comprenant une ou plusieurs des autres caractéristiques telles que citées dans les revendications 2 à 40.44. Use according to claim 43 comprising one or more of the other characteristics as recited in claims 2 to 40.

45. Composition comprenant i) un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ii) un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants.45. A composition comprising i) a plasmodial circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS protein or an immunogenic or variant fragment thereof and ii) a nucleotide vector encoding a thrombospondin-related adherence protein antigen (TRAP) ) Plasmodial, which is a TRAP protein or one of its immunogenic fragments or variants.

46. Kit comprenant i) un premier récipient comprenant un antigène circumsporozoïte (CS) plasmodial, qui est une protéine CS ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants et ' ii) un second récipient comprenant un vecteur nucléotidique codant pour un antigène de protéine d'adhérence apparentée à la thrombospondine (TRAP) plasmodial, qui est une protéine TRAP ou l'un de ses fragments immunogènes ou variants, et iii) éventuellement, des instructions pour l'utilisation du kit dans l'immunisation de sujets humains contre le paludisme.46. Kit comprising i) a first container comprising a plasmodial circumsporozoite (CS) antigen, which is a CS protein or one of its immunogenic or variant fragments and ii) a second container comprising a nucleotide vector encoding a protein antigen of thrombospondin-related (TRAP), which is a TRAP protein or one of its immunogenic or variant fragments, and iii) optionally, instructions for the use of the kit in the immunization of human subjects against malaria.