<Desc/Clms Page number 1>
WERKWIJZE VOOR HET BEINVLOEDEN VAN DE VOEDSELOPNAME DOOR MENSEN EN DIEREN
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het beïnvloeden van de voedselopname door dieren.
In bepaalde gevallen kan het van belang zijn de groei van dieren te remmen. Dit is met name het geval in de veehouderij, zoals de slachtkuikenhouderij, waarbij moederdieren in tegenstelling tot slachtdieren, zoals slachtkippen, niet snel in gewicht mogin toenemen. Door genetische selectie hebben slachtkippen, en derhalve eveneens de toekomstige moederdieren, een sterke drang om erg veel te eten.
Door deze eigenschap zijn de slachtkippen snel panklaar. Een snelle gewichtstoename door een hoge voedselopname door toekomstige moederdieren kan echter onder andere leiden tot verminderde vruchtbaarheid, afwijkingen aan de poten en een toegenomen sterftecijfer. Teneinde deze nadelen te voorkomen en bovendien de eierproductie en het broedvermogen te verhogen en de kuikensterfte te verlagen worden de moederdieren op een streng voederbeperkingsregime gezet. Dit houdt bijvoorbeeld in dat de veehouder de dieren regelmatig moet wegen en ze naar aanleiding van de gewichtsontwikkeling voedsel moet toedienen en de dieren soms een of twee dagen achter elkaar moet laten vasten. Dit is niet slechts zeer arbeidsintensief voor de veehouder, maar tevens zeer onaangenaam voor de betreffende dieren.
Een dergelijke werkwijze stuit daarom ook op een groeiend verzet van dierenbeschermers.
Teneinde de bovengenoemde problemen bij het fokken van moederdieren voor slachtkippen te vermijden verschaft de onderhavige uitvinding een werkwijze voor het beïnvloeden van voederopname door dieren, zoals vissen, vogels en zoogdieren, door het aan de dieren toedienen van een geschikte dosis simmondsine en/of een of meer afgeleiden en/of een of meer analoga daarvan.
Uit uitgebreide proefnemingen is gebleken dat het bijmengen van slechts 4% met hexaan ontolied simmondsine-
<Desc/Clms Page number 2>
bevattend jojobameel aan het voeder reeds een groeicurve veroorzaakt, die overeenkomt met wat door de veehouder verlangd wordt.
De werking van simmondsine is gebaseerd op het verhogen van het verzadigingsgevoel door de vrijzetting van het hormoon cholecystokinine in de darm. Als gevolg van dit verhoogde verzadigingsgevoel ontstaat een sterke vermindering van de voedselopname met als gevolg een vermagering.
Daarnaast is gebleken dat zowel bij jonge dieren als bij jonge mensen (adolescenten) als gevolg van de simmondsine eveneens een hoger onderhoudsmetabolisme ontstaat, waardoor de vermagering sneller verloopt dan bij gewoon vasten. Het boven genoemde hormoon cholecystokinine stimuleert de enzymproductie door de pancreas. Deze verhoogde enzymproductie leidt tot een verlies van eiwitten, in het bijzonder van essentiële aminozuren. Als reactie hierop verhoogt het lichaam van groeiende dieren de productie van tri-joodthyronine (T3), een schildklierhormoon dat de verbranding in de weefsels stimuleert. Daardoor zal een extra snelle vermagering optreden.
De werkwijze volgens de uitvinding is geschikt voor het doen vermageren van alle soorten dieren, inclusief de mens, maar vindt met name praktische toepassing bij mestvee in het bijzonder mestkuiken-moederdieren.
Het simmondsine kan op diverse manieren aan de dieren worden toegediend, bijvoorbeeld in de vorm van zuiver simmondsine of als een bijmenging van ontolied jojoba-meel aan het voedsel. Daarnaast kan tevens aan het ontoliede jojoba-meel een extra simmondsine-extract uit de jojobaplant zijn toegevoegd.
Naast simmondsine zelf kunnen ook afgeleiden en/of analoga van simmondsine gebruikt worden, zoals simmondsine- 2'-ferulaat of agluconen van simmondsine.
Het simmondsine wordt bij voorkeur ontolied door middel van hexaan.
De uitvinding betreft verder een werkwijze voor het isoleren en zuiveren van simmondsine en/of afgeleiden en/of analoga daarvan, omvattende de stappen :
<Desc/Clms Page number 3>
a) het extraheren van ontolied jojobameel ter verkrijging van een extract ; b) het in fracties scheiden van het extract door middel van adsorptie chromatografie ; c) het filtreren van de simmondsine en/of afgeleiden en/of analoga daarvan bevattende fracties ter verkrijging van een filtraat ; d) het opnieuw door middel van adsorptie chromatografie in fracties scheiden van het filtraat ; en e) het kristalliseren van het simmondsine en/of afgeleiden en/of analoga daarvan.
Het is eveneens mogelijk om voor de chromatografie-stap het extract, respectievelijk het filtraat te concentreren.
In een voorkeurswerkwijze volgens de uitvinding wordt de extractie uitgevoerd met aceton, vindt de eerste chromatografie plaats op een silicagel-kolom met aceton als eluens, vindt de filtratie plaats over geactiveerde kool, en vindt de tweede chromatografie plaats op een silicagel-kolom met chloroform/methanol (95 : 5) als eluens. De concentratie vindt bij voorkeur plaats door middel van het in methanol oplossen van het extract, respectievelijk het filtraat en het vervolgens onder vacuüm verdampen van de methanol.
De uitvinding betreft verder het gebruik van simmondsine en/of analoga en/of afgeleiden daarvan als een middel voor het onderdrukken van de eetlust bij mensen.
Daarnaast betreft de uitvinding het gebruik van simmondsine en/of analoga en/of afgeleiden daarvan als een middel voor het stimuleren van vermagering bij adolescenten.
De onderhavige uitvinding zal verder worden verduidelijkt aan de hand van de onderstaande voorbeelden, welke echter niet de bedoeling hebben de uitvinding op enige wijze te beperken.
VOORBEELD 1 Invloed van simmondsine in voer op de schildklierhormoonconcentraties in volwassen ratten 1. De invloed van zuiver simmondsine
<Desc/Clms Page number 4>
1. 1. Testomstandigheden.
De invloed van 0, 5% simmondsine op 10% jojoba meel in voer op de schildklierhormoonconcentraties wordt bepaald in 30 volwassen mannelijke Wistar-ratten van z 350 g, welke worden opgedeeld in 3 groepen van 10 dieren. Groep C bestaat uit controledieren. De dieren uit groep S krijgen gedurende 11 dagen 0, 5% HPLC zuiver simmondsine in hun voer gemengd, groep PF krijgt precies evenveel gewoon voer als de S-groep opgeneemt (zogeheten "pair-fed" groep).
Bloedafname vindt plaats door het afknippen van een gedeelte van de staart. Het bloed wordt opgevangen in geheparinizeerde vaatjes en het plasma wordt onmiddellijk afgecentrifugeerd en bewaard in de diepvries tot hormoonbepalingen mogelijk zijn. Om 2,6, 10,14, 18 en 22 uur wordt bloed afgenomen voor de bepaling van het circadiaan-ritme van de hormoonconcentraties.
Hormoonbepalingen worden uitgevoerd door middel van RIA-testen op de schildklierhormonen T3 (trijoodthyronine), T4 en TSH. De 2 x 10 controles worden gepoold tot een groep.
1. 2. Resultaten.
De dieren uit groep S vertonen een voerderopnameremming van ongeveer 50%. Tabel l toont de plasma-concentratie (ng/ml) van T3 bij mannelijke Wistar-ratten na 11 dagen toedienen van 0, 5% zuiver simmondsine in het voer. De verschillende indices (a, b, c) duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, 05) Tabel l
EMI4.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 0, <SEP> 657a <SEP> 0, <SEP> 780a <SEP> 0, <SEP> 978a <SEP> 0, <SEP> 739a <SEP> 0, <SEP> 536a <SEP> 0, <SEP> 529a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 042 <SEP> 0, <SEP> 045 <SEP> 0, <SEP> 033 <SEP> 0, <SEP> 019 <SEP> 0, <SEP> 034 <SEP>
<tb> S <SEP> 0, <SEP> 367b <SEP> 0, <SEP> 286b <SEP> 0, <SEP> 338b <SEP> 0, <SEP> 388b <SEP> 0, <SEP> 290b <SEP> 0, <SEP> 444b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 027 <SEP> 0, <SEP> 013 <SEP> 0,
<SEP> 039 <SEP> 0, <SEP> 046 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0, <SEP> 460c <SEP> 0, <SEP> 444c <SEP> 0, <SEP> 419b <SEP> 0, <SEP> 481b <SEP> 0, <SEP> 380c <SEP> 0, <SEP> 490b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 027 <SEP> 0, <SEP> 044 <SEP> 0, <SEP> 030 <SEP> 0, <SEP> 025 <SEP> 0, <SEP> 013 <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
In tabel 2 worden de plasma concentraties (ng/ml) van T4 bij mannelijke Wistar-ratten na 11 dagen inmengen van 0, simmondsine in het voer getoond.
De verschillende indices (a, b, c) duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, Tabel 2
EMI5.2
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 64, <SEP> 50a <SEP> 54, <SEP> 02a <SEP> 53, <SEP> 38a <SEP> 55, <SEP> 38a <SEP> 49, <SEP> 99a <SEP> 53, <SEP> 02a <SEP>
<tb> 5, <SEP> 30 <SEP> 5, <SEP> 25 <SEP> 4, <SEP> 24 <SEP> 5, <SEP> 15 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 4, <SEP> 60 <SEP>
<tb> S <SEP> 28, <SEP> 56b <SEP> 23, <SEP> 07b <SEP> 23, <SEP> 02b <SEP> 32, <SEP> 44b <SEP> 36, <SEP> 28b <SEP> 31, <SEP> 39b <SEP>
<tb> 2, <SEP> 53 <SEP> 1, <SEP> 94 <SEP> 1, <SEP> 68 <SEP> 4, <SEP> 70 <SEP> 6, <SEP> 26 <SEP> 1, <SEP> 41 <SEP>
<tb> PF <SEP> 41, <SEP> 47c <SEP> 38, <SEP> 59c <SEP> 33, <SEP> 34c <SEP> 39, <SEP> 91c <SEP> 46, <SEP> 77a <SEP> 42, <SEP> 97c <SEP>
<tb> 4, <SEP> 54 <SEP> 3, <SEP> 40 <SEP> 2, <SEP> 50 <SEP> 4, <SEP> 27 <SEP> 5,
<SEP> 46 <SEP> 4, <SEP> 27 <SEP>
<tb>
EMI5.3
In tabel 3 worden de plasma TSH-concentraties (ng/ml) bij mannelijke Wistar-ratten na 11 dagen inmengen van 0, simmondsine in voer getoond. De verschillende indices (a, b, c) duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, Tabel 3
EMI5.4
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 1, <SEP> 616a <SEP> 1, <SEP> 741a <SEP> 2, <SEP> 499a <SEP> 2, <SEP> 745a <SEP> 1, <SEP> 906a <SEP> 1, <SEP> 269a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 301 <SEP> 0, <SEP> 364 <SEP> 0, <SEP> 321 <SEP> 0, <SEP> 182 <SEP> 0, <SEP> 101 <SEP>
<tb> S <SEP> 0, <SEP> 981b <SEP> 1, <SEP> 361b <SEP> 1, <SEP> 599b <SEP> 1, <SEP> 543b <SEP> 1, <SEP> 056b <SEP> 1, <SEP> 213a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 088 <SEP> 0, <SEP> 541 <SEP> 0, <SEP> 289 <SEP> 0, <SEP> 088 <SEP> 0, <SEP> 151 <SEP> 0, <SEP> 143 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0,
<SEP> 932b <SEP> 1, <SEP> 274b <SEP> 1, <SEP> 506b <SEP> 1, <SEP> 395b <SEP> 0, <SEP> 923b <SEP> 1, <SEP> 082a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 081 <SEP> 0, <SEP> 110 <SEP> 0, <SEP> 237 <SEP> 0, <SEP> 185 <SEP> 0, <SEP> 066 <SEP> 0, <SEP> 391 <SEP>
<tb>
EMI5.5
Uit bovenstaande tabellen blijkt dat er een daling van TSH, T3 en T4 is in vergelijking met de controles, wat te ver-
<Desc/Clms Page number 6>
wachten is omdat de dieren vasten. De T3- en T4-daling is evenwel sterker uitgesproken (hoewel niet steeds statistisch significant) bij de met simmondsine behandelde dieren. Dit kan verklaard worden door een licht eiwittekort. De TSHdaling is volledig te verklaren door het vasten. De behandeling met simmondsine heeft geen supplementair effect.
2. De invloed van 10% met hexaan ontolied jojoba meel in voer 2. 1. Testomstandigheden
30 volwassen mannelijke Wistar-ratten van z 350 g worden opgedeeld in groepen van 10 dieren. Groep C bestaat uit controle-dieren, de dieren uit groep JJ krijgen gedurende 11 dagen 10% jojoba meel door hun voer gemengd, de dieren uit groep PF krijgen precies evenveel gewoon voer als de JJgroep opgeneemt (pair-fed groep).
De bloedafnames en hormoonbepalingen worden op dezelfde wijze uitgevoerd als onder 1. 1. boven.
2. 2. Resultaten
De voederopnameremming bedraagt bij de S-groep ongeveer 50%. De vermagering is dezelfde als bij dieren die 0, 5% simmondsine toegediend krijgen. Tabel 4 toont de plasma T3-concentratie (ng/ml) bij mannelijk Wistar-ratten na 11 dagen inmengen van 10% ontolied jojoba meel. De verschillende indices (a, b, c) duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, 05).
Tabel 4
EMI6.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 0, <SEP> 657a <SEP> 0, <SEP> 780a <SEP> 0, <SEP> 678a <SEP> 0, <SEP> 739a <SEP> 0, <SEP> 536a <SEP> 0, <SEP> 529a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 042 <SEP> 0, <SEP> 045 <SEP> 0, <SEP> 033 <SEP> 0, <SEP> 019 <SEP> 0, <SEP> 034 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 0, <SEP> 471b <SEP> 0, <SEP> 445b <SEP> 0, <SEP> 547b <SEP> 0, <SEP> 599b <SEP> 0, <SEP> 415b <SEP> 0, <SEP> 504b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 026 <SEP> 0, <SEP> 031 <SEP> 0, <SEP> 049 <SEP> 0, <SEP> 052 <SEP> 0, <SEP> 024 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0, <SEP> 519b <SEP> 0, <SEP> 622c <SEP> 0, <SEP> 581a, <SEP> b <SEP> 0, <SEP> 668a, <SEP> b <SEP> 0, <SEP> 491c <SEP> 0, <SEP> 556a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 034 <SEP> 0, <SEP> 035 <SEP> 0, <SEP> 035 <SEP> 0, <SEP> 046 <SEP> 0, <SEP> 024 <SEP> 0,
<SEP> 020 <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 7>
In tabel 5 wordt de plasma T4-concentratie (ng/ml) bij mannelijke Wistar-ratten na 11 dagen inmengen van 10% ontolied jojoba meel getoond. De verschillende indices (a, b, c) duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, 05).
Tabel 5
EMI7.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 64, <SEP> 50a <SEP> 54, <SEP> 02a <SEP> 53, <SEP> 38a <SEP> 55, <SEP> 84a <SEP> 49, <SEP> 99a <SEP> 53, <SEP> 02a <SEP>
<tb> 5, <SEP> 30 <SEP> 5, <SEP> 25 <SEP> 4, <SEP> 24 <SEP> 5, <SEP> 15 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 4, <SEP> 60 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 47, <SEP> 75b <SEP> 44, <SEP> 75b <SEP> 55, <SEP> 42a <SEP> 59, <SEP> 25a, <SEP> b <SEP> 51, <SEP> 72a <SEP> 48, <SEP> 60a, <SEP> b <SEP>
<tb> 4, <SEP> 20 <SEP> 2, <SEP> 91 <SEP> 5, <SEP> 19 <SEP> 6, <SEP> 17 <SEP> 2, <SEP> 62 <SEP> 4, <SEP> 10 <SEP>
<tb> PF <SEP> 47, <SEP> 20b <SEP> 55, <SEP> 27a <SEP> 55, <SEP> 96a <SEP> 63, <SEP> 38b <SEP> 49, <SEP> 51a <SEP> 54, <SEP> 36a <SEP>
<tb> 7, <SEP> 77 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 6, <SEP> 37 <SEP> 5, <SEP> 88 <SEP> 6, <SEP> 12 <SEP> 4,
<SEP> 39 <SEP>
<tb>
Tabel 6 toont de plasma TSH-concentraties (ng/ml) in mannelijke Wistar-ratten na 11 dagen bijmengen van 10% ontolied jojoba meel. De verschillende indices duiden statistisch significante verschillen aan (p < 0, 05).
Tabel 6
EMI7.2
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 1, <SEP> 161a <SEP> 1, <SEP> 741a <SEP> 2, <SEP> 499a <SEP> 2, <SEP> 745a <SEP> 1, <SEP> 906a <SEP> 1, <SEP> 269a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 301 <SEP> 0, <SEP> 364 <SEP> 0, <SEP> 321 <SEP> 0, <SEP> 182 <SEP> 0, <SEP> 101 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 1, <SEP> 304b <SEP> 1, <SEP> 496b <SEP> 2, <SEP> 014b <SEP> 1, <SEP> 759b <SEP> 1, <SEP> 129b <SEP> 1, <SEP> 204a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 111 <SEP> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 174 <SEP> 0, <SEP> 154 <SEP> 0, <SEP> 107 <SEP> 0, <SEP> 087 <SEP>
<tb> PF <SEP> 1, <SEP> 271b <SEP> 1, <SEP> 407b <SEP> 1, <SEP> 847b <SEP> 1, <SEP> 720b <SEP> 1, <SEP> 192b <SEP> 1, <SEP> 224a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 067 <SEP> 0, <SEP> 107 <SEP> 0, <SEP> 146 <SEP> 0, <SEP> 116 <SEP> 0, <SEP> 091 <SEP> 0, <SEP> 097 <SEP>
<tb>
EMI7.3
Er is een daling van TSH,
T3- T4-concentratie ten opzichte van de controles, wat te verwachten was omdat de dieren vasten. De T3-en T4-daling is sterker uitgesproken bij de met jojoba meel behandelde groep, hoewel dit niet overal statistisch significant is. De daling van het TSH-
<Desc/Clms Page number 8>
gehalte is volledig te verklaren door het vasten. De behandeling met jojoba meel heeft er geen invloed op.
3. Conclusie
Bij volwassen ratten heeft het toedienen van 0. 5% zuiver simmondsine of 10% hexaan ontolied jojoba meel een voederopname vermindering, vermagering en een daling van het T3- en T4-gehalte tot gevolg ten opzichte van de controles.
De schildklierhormoon-daling is meestal sterker uitgesproken bij de behandelde dieren dan bij de pair-fed ratten. De daling ten opzichte van de controles kan verklaard worden door de lagere voedselopname, de sterkere daling bij de behandelde dieren zou kunnen worden verklaard door een relatief eiwittekort, wat bij volwassen dieren normaal een lichte daling van T3 en T4 veroorzaakt (de Mello, M. A. R. et al., Circulating thyroid hormone levels in young pregnant rats and their fetuses : effect of malnutrition. Ann. Nutr.
Metab., 1989,33, 181-187).
Het TSH-gehalte daalt onder invloed van het vasten, maar er is geen invloed van de behandeling met simmondsine of jojoba meel als dusdanig te zien.
VOORBEELD 2 Vergelijking van het effect van 0. 15% simmondsine en 3% ontolied jojoba meel op de groei, voederopname en voedselconversie bij groeiende vrouwelijke ratten 1. Inleiding
0, 15% simmondsine, dat in voer gemengd is, wordt vergeleken met 3% met hexaan ontolied jojoba meel dat 3, 6% simmondsine bevat en 0, 8% simmondsine-2'-ferulaat (wat in het meel 0, 108% simmondsine en 0, 024% ferulaat geeft). Uit andere proeven is bekend dat simmondsine-2'ferulaat ongeveer 50% van de voederopnameremming van simmondsine veroorzaakt (eigen onderzoek van de uitvinders). Dit betekent dus dat 3% jojoba meel het equivalent van 0, 12% actief simmondsine bevat. Uit voorbereidende proeven bleek dat de voederopnameremming in beide toestanden ongeveer 20% bedraagt, ondanks
<Desc/Clms Page number 9>
het verschil in actieve simmondsines.
Bijgevolg moeten er in het meel nog elementen aanwezig zijn die een rol spelen in de voederopnameremming. Bekend zijn de trypsine-inhibitoren van eiwitaard, complexe tannines, bittere smaakstoffen en dergelijke. Deze proeven willen het effect van beide inmengingen op de groeiprestatie nagaan.
2. Testomstandigheden
50 pas verspeende vrouwelijke wistar-ratten ingedeeld in 5 groepen van 10 dieren, worden gedurende 8 weken gevolgd. Dagelijks wordt de voeropname en de gewichtstoename gemeten. Hieruit worden dan wekelijks de relatieve groei (gewicht week 2 - gewicht week 1/gewicht week 2 * 100) en de voederconversie (gram voer nodig per gram gewichtstoename) berekend. Groep C bestaat uit controles, groep S bestaat uit dieren, die behandeld zijn met 0, 15% simmondsine in voer, groep JJ bevat dieren, die behandeld zijn met 3% met hexaan ontolied jojoba meel in voer, groep PFS bestaat uit ratten, die ge"pair-fed" zijn aan S, en groep PFJ bevat de ratten, die ge"pair-fed" zijn aan JJ. PFS- en PFJ-proeven starten 1 week later op dieren die 1 week later geboren zijnn zodat zij bij de start even oud zijn en even veel wegen als C, S en JJ.
3. Resultaten
De resultaten worden getoond in de volgende tabellen. Tabel 7 toont de gewichtsevolutie in gram (alleen gemiddelde gewichten). De verschillende indices (a, b, c) geven statistisch significante verschillen aan.
Tabel 7
EMI9.1
<tb>
<tb> start <SEP> week <SEP> 4 <SEP> week <SEP> 8
<tb> C <SEP> 91, <SEP> la <SEP> 171, <SEP> 3a <SEP> 203, <SEP> 6a <SEP>
<tb> S'93, <SEP> 6a <SEP> 138, <SEP> 2b <SEP> 161, <SEP> 8b <SEP>
<tb> JJ <SEP> 93, <SEP> 9a <SEP> 138, <SEP> lb <SEP> 164, <SEP> 7b <SEP>
<tb> PFS <SEP> 93, <SEP> 4a <SEP> 149, <SEP> 5c <SEP> 178, <SEP> 5c <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 93, <SEP> Oa <SEP> 147, <SEP> 9c <SEP> 176, <SEP> 7c <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 10>
Tabel 8 toont de voedselopname (gram/week/dier) (alleen gemiddelde waarden).
Tabel 8
EMI10.1
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP>
<tb> C <SEP> 92 <SEP> 102 <SEP> 102 <SEP> 107 <SEP> 108 <SEP> 112 <SEP> 107 <SEP> 102
<tb> S <SEP> 75 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 86 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 84
<tb> JJ <SEP> 75 <SEP> 85 <SEP> 80 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 81
<tb> PFS <SEP> 75 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 86 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 84
<tb> PFJ <SEP> 75 <SEP> 85 <SEP> 80 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 81
<tb>
Tabel 9 laat de relatieve groei zien. De verschillende indices (a, b, c) geven statistisch significante verschillen aan.
Tabel 9
EMI10.2
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> gem. <SEP> gem.
<tb>
1-4 <SEP> 5-6
<tb> C <SEP> 21, <SEP> 5 <SEP> 12, <SEP> 8 <SEP> 14, <SEP> 0 <SEP> 9, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 6 <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 4 <SEP> 14, <SEP> 5a <SEP> 3, <SEP> 65a <SEP>
<tb> S <SEP> 16, <SEP> 1 <SEP> 7, <SEP> 2 <SEP> 8, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 5 <SEP> 1, <SEP> 7 <SEP> 9, <SEP> 2b <SEP> 3, <SEP> 4a <SEP>
<tb> JJ <SEP> 14, <SEP> 1 <SEP> 7, <SEP> 0 <SEP> 6, <SEP> 9 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 9 <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> 3, <SEP> 8 <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> 8, <SEP> 4b <SEP> 3, <SEP> 7a <SEP>
<tb> PFS <SEP> 14, <SEP> 3 <SEP> 13, <SEP> 9 <SEP> 9, <SEP> 4 <SEP> 6, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 6 <SEP> 4, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 11, <SEP> Oc <SEP> 3, <SEP> 9a <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 15, <SEP> 5 <SEP> 12, <SEP> 5 <SEP> 9, <SEP> 0 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 9 <SEP> 2,
<SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 8 <SEP> 10, <SEP> 4c <SEP> 3, <SEP> 7a <SEP>
<tb>
Tabel 10 laat de voedselconversie zien. De verschillende indices (a, b, c) geven statistisch significante verschillen aan.
Tabel 10
EMI10.3
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> gem. <SEP> gem.
<tb>
1-4 <SEP> 5-8
<tb> C <SEP> 3, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 4 <SEP> 9, <SEP> 3 <SEP> 23, <SEP> 3 <SEP> 16, <SEP> 7 <SEP> 18, <SEP> 3 <SEP> 4, <SEP> 9a <SEP> 16, <SEP> 9a <SEP>
<tb> S <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> 9, <SEP> 6 <SEP> 7, <SEP> 3 <SEP> 12, <SEP> 2 <SEP> 10, <SEP> 7 <SEP> 18, <SEP> 8 <SEP> 15, <SEP> 0 <SEP> 25, <SEP> 1 <SEP> 8, <SEP> 4b <SEP> 17, <SEP> 4a <SEP>
<tb> JJ <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 10, <SEP> 1 <SEP> 8, <SEP> 8 <SEP> 11, <SEP> 1 <SEP> 9, <SEP> 5 <SEP> 22, <SEP> 7 <SEP> 13, <SEP> 7 <SEP> 16, <SEP> 5 <SEP> 8, <SEP> 7b <SEP> 15, <SEP> 6a <SEP>
<tb> PFS <SEP> 5, <SEP> 1 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> 8, <SEP> 7 <SEP> 9, <SEP> 7 <SEP> 12, <SEP> 6 <SEP> 15, <SEP> 9 <SEP> 15, <SEP> 6 <SEP> 6, <SEP> 2c <SEP> 13, <SEP> 5b <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 4, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 6, <SEP> 6 <SEP> 11, <SEP> 6 <SEP> 11, <SEP> 6 <SEP> 10,
<SEP> 8 <SEP> 21, <SEP> 6 <SEP> 12, <SEP> 9 <SEP> 7, <SEP> 0c <SEP> 14, <SEP> 3b <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 11>
Het effect van 0, 15% simmondsine en 3% jojoba meel is gelijk voor voederopnameremming, groei, relatieve groei en voederconversie. De voeropname bedraagt z 80% van die van de controlegroep C. Relatieve groei en voederconversie bij groep S en groep JJ zijn slechter dan bij groep C in de eerste helft van de proef maar gelijk aan de controles in de tweede helft. De relatieve groei en de voederconversie van de pair-feds is de eerste helft beter dan bij de groepen S en JJ, maar komt eraan gelijk in de tweede helft.
De relatieve groei en voederconversie bij de pair-feds is de eerste 4 weken slechter dan bij de controles, maar de relatieve groei komt gelijk en de voederconversie wordt zelfs beter dan bij de controles op het einde van de proef.
Uit voorgaand werk weten we dat er in het begin van deze proeven geen T3-daling te zien is bij groep JJ (zodat de T3-concentratie op het niveau van de controles blijft), terwijl er wel een daling is bij groep PFJ. Op het einde van de proef daalt de T3-concentratie bij groep JJ weer naar het niveau van de pair-feds (Cokelaere et al., 1993a). Bij voederbeperkte groeiende dieren bemerkt men steeds een slechtere voederconversie dan bij normaal gevoede dieren. Dit valt te verklaren doordat de energie en de bouwstoffen die gebruikt worden voor de groei eigenlijk alleen deze zijn die overschieten nadat aan de behoeften van het onderhoudsmetabolisme voldaan is. Dit overschot is steeds kleiner bij voederbeperkte dieren dan bij de controles. Bij voederbeperking daalt het onderhoudsmetabolisme echter onder andere door een dalen van de T3-concentratie.
De slechte voederconversie en slechtere relatieve groei bij groep JJ zijn daarom gedeeltelijk te verklaren door het vasten zelf. De slechtere resultaten in de eerste helft van de proef, in vergelijking met de pair-feds, zijn te verklaren door de hogere T3-waarden in groep JJ. Op het einde valt dit T3-gehalte samen met dat van de pair-feds waardoor de dieren even snel gaan groeien met eenzelfde voederconversie als de pair-feds. Aangezien we dezelfde resultaten zien bij groep S als bij groep JJ en we uit inleidende proeven (niet gepubliceerd) weten dat er eveneens
<Desc/Clms Page number 12>
een T3-stijging te zien is bij jonge dieren die simmondsine toegediend krijgen, mogen we aannemen dat dezelfde verklaring als bij groep JJ ook voor groep S geldt.
4. Conclusie
Geconcludeerd kan worden dat ondanks de verschillen in simmondsine-actieve equivalenten in groep S en groep JJ de resultaten voor voeropname en groeiperformantie dezelfde zijn.
VOORBEELD 3 Invloed van 0, 15% simmondsine en 3% met hexaan ontolied jojoba meel op het pancreasgewicht 1. Testomstandigheden
50 volwassen vrouwelijke Wistar-ratten van ongeveer 220 gram worden gekoppeld (gecontroleerd door copulatie-proef) met normale Wistar mannetjes. De dieren worden ingedeeld in 5 x 10 ratten.
Tijdens 16 dagen dracht worden de dieren op 5 verschillende manieren gevoed. Groep C, welke bestaat uit controles, worden gewoon gevoed, groep S krijgt voer met 0, 15% simmondsine, groep JJ krijgt voer met 3% met hexaan
EMI12.1
ontolied jojoba meel, groep PFS wordt dagelijks ge"pair-fed" aan de S-groep, en groep PFJ wordt dagelijks ge"pair-fed" aan de JJ-groep.
Hier wordt alleen het lichaamsgewicht (BW), gewicht van de pancreas en gewicht van de pancreas uitgedrukt in % van het BW, weergegeven.
2. Resultaten
Tabel 11 toont het gemiddeld lichaamsgewicht, pancreasgewicht en pancreasgewicht in % van het lichaamsgewicht. Iedere groep telt 10 dieren. De verschillende indices (a, b, c) geven statistisch significante verschillen aan (p < 0, 05)
<Desc/Clms Page number 13>
Tabel 11
EMI13.1
<tb>
<tb> gewicht <SEP> (g) <SEP> pancreas-pancreasgewicht
<tb> gewicht <SEP> (g) <SEP> in <SEP> % <SEP> van <SEP> BW
<tb> C <SEP> 252a <SEP> 0, <SEP> 795a <SEP> 0, <SEP> 315a <SEP>
<tb> S <SEP> 229b <SEP> 0, <SEP> 900b <SEP> 0, <SEP> 393b <SEP>
<tb> JJ <SEP> 220b <SEP> 0, <SEP> 948b <SEP> 0, <SEP> 341b <SEP>
<tb> PFS <SEP> 235b <SEP> 0, <SEP> 684c <SEP> 0, <SEP> 299a <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 212b <SEP> 0, <SEP> 680c <SEP> 0,
<SEP> 321a <SEP>
<tb>
Er is een duidelijke vergroting van de pancreas te zien bij de groepen S en JJ ten opzichte van de groepen PFS en PFJ, maar er is tevens een lichte stijging ten opzichte van de controles.
VOORBEELD 4 Invloed van puur simmondsine op de voederopname bij kippen en effect van toedieningswijze 1. Testomstandigheden
20 mestkuikens van ongeveer 400 gram krijgen ad libitum voer. Ze zijn ingedeeld in 5 groepen van 4 dieren en hun voederopname wordt na 1, 2,4, 6,8 en 24 uur gecontroleerd.
Groep C bestaat uit controledieren, groep IT krijgt 250 mg/kg simmondsine geintubeerd in de maag, groep IV krijgt 250 mg/kg intraveneus toegediend, groep IP krijgt 250 mg/kg intraperitoneaal toegediend, groep IVO krijgt 140 mg/dier berekend per dag in het voer gemengd.
2. Resultaten
Tabel 12 toont de gemiddelde voederopname uitgedrukt per kg lichaamsgewicht bij groeiende slachtkippen.
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
Tabel 12
EMI14.2
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 24
<tb> C <SEP> 30, <SEP> 49a <SEP> 11, <SEP> 63b <SEP> 26, <SEP> 36a <SEP> 24, <SEP> 80b <SEP> 22, <SEP> 97b <SEP> 92, <SEP> 51a <SEP>
<tb> IT <SEP> 20, <SEP> 98b <SEP> 8, <SEP> 05b <SEP> 17, <SEP> 97b <SEP> 21, <SEP> 26b <SEP> 16, <SEP> 28b <SEP> 83, <SEP> 99b <SEP>
<tb> IP <SEP> 27, <SEP> 86a <SEP> 7, <SEP> 72b <SEP> 17, <SEP> 42b <SEP> 35, <SEP> 40c <SEP> 16, <SEP> 17b <SEP> 87, <SEP> 33a <SEP>
<tb> IV <SEP> 18, <SEP> 13b <SEP> 11, <SEP> OSb <SEP> 16, <SEP> 95b <SEP> 27, <SEP> 51c <SEP> 24, <SEP> 2Sa <SEP> 70, <SEP> 61d <SEP>
<tb> IVO <SEP> 23, <SEP> 95b <SEP> 13, <SEP> 14b <SEP> 17, <SEP> 99b <SEP> 18, <SEP> 13b <SEP> 25, <SEP> 96a <SEP> 73,
<SEP> 02d <SEP>
<tb>
Het simmondsine vertoont een duidelijk effect op de voederopname bij IT, IV en IVO. Bij IT werkt het zeker 8 uur, bij IV maximaal 4 uur, bij IVO blijvend. Wanneer de controles minder eten (door verzadigingsgevoel) is een minder uitgesproken bijkomende invloed van simmondsine zichtbaar, wat eens te meer op een verzadiging verhogend effect van simmondsine wijst.
VOORBEELD 5 Invloed van jojobameel op de groei, voederconsumptie en plasmahormoonconcentraties van kuikens.
1. Bepaling van jojobameeldosis 1. 1 Testomstandigheden
80 kuikens van 3 weken oud werden individueel gewogen en verdeeld in 8 groepen van elk 10 kuikens. Het gemiddelde aanvangslichaamsgewicht van deze groepen was gelijk. Bij een van de groepen (R) werd de voederopname beperkt volgens de aanbevelingen van de fokker (weken 4 en 5 : 45 g/kuiken per dag ; weken 6 en 7 : 47 g kuiken/per dag).
De andere groepen hadden ad libitum toegang tot commercieel beschikbaar voedsel dat gesupplementeerd was met 0 (controle), 2, 4, 6, 8, 10 of 12% met hexaan ontolied jojobameel (0-12% JO). Het ontoliede jojobameel bevatte 4, 15% simmondsine en 0, 7% simmondsine-2'-ferulaat. Elke week tot week 7, werden alle kuikens individueel gewogen en werd de wekelijkse voedselopname per groep opgenomen. Op weken 4 en 7 werd een bloedmonster verzameld door een punctie in de vleugelader van alle kuikens. Van de R kuikens werd bloed afgenomen
<Desc/Clms Page number 15>
nadat hun dagelijks voederrantsoen aan hen beschikbaar gesteld was. Bloedmonsters werden verzameld in gehepariniseerde buizen, gecentrifugeerd en het plasma opgeslagen bij-20 C tot de bepaling van het hormoongehalte.
1. 2. Resultaten
De effecten van jojobameelsupplementatie op lichaamsgewicht en op wekelijkse voederopname worden getoond in de fig. 1A en 1B. In deze grafiek worden de gemiddelde waarden van 10 kuikens voor 0% JO (0), 2% JO (0), 4% JO 6% JO (A), 8% JO (V), 10% JO (, & ), 12% JO (V) en voedselbeperking (N) getoond. Een significant effect (p < 0, 0001) van de dieetbehandeling op het lichaamsgewicht werd waargenomen vanaf week 4. De 0% JO kuikens waren significant zwaarder dan de 2% JO kuikens, gevolgd door de 4% JO en R kuikens. Er konden geen significante verschillen tussen de lichaamsgewichten van de 6, 8, 10 en 12% JO kuikens worden waargenomen.
Tussen weken 3 en 7 consumeerde de R en 4% JO kuikens respectievelijk 1, 288 en 2, 862 g per dier, hetgeen 35 en 78% van de totale voederopname van de 0% JO kuikens was. De toevoeging van 6% of meer jojobameel aan het voedsel drukte de voederopname verder. Er was ten minste 12% jojobameel nodig om de voederopname te laten dalen tot het niveau van de R kuikens. Tussen weken 3 en 7 consumeerden de 2, 4, 6, 8, 10 en 12 JO kuikens respectievelijk 64, 3, 114, 5, 121, 6, 145, 3, 141, 0 en 145, 1 g JO meel per kuiken.
De groeihormoon, insulinegroeifactor-I, T4 en T3niveaus in plasma op weken 4 en 7 worden weergegeven in tabel 13.
<Desc/Clms Page number 16>
TABEL 13
EMI16.1
<tb>
<tb> Week <SEP> 4 <SEP> Week <SEP> 7 <SEP>
<tb> Behandeling <SEP> GH <SEP> IGF- <SEP> T3 <SEP> T4 <SEP> GH <SEP> IGF-I <SEP> T3 <SEP> T4 <SEP>
<tb> ng/m1
<tb> OX <SEP> JO <SEP> 32,4c <SEP> 24,4a <SEP> 2,22a <SEP> 5.7d <SEP> 16,1d <SEP> 29,9a <SEP> 1,39b <SEP> 8,2b
<tb> 2X <SEP> JO <SEP> 60,3bc <SEP> 18,3b <SEP> 2,01ab <SEP> 8,7c <SEP> 25,6d <SEP> 24,9b <SEP> 2,13a <SEP> 12,1a
<tb> 4X <SEP> JO <SEP> 92, <SEP> 9ab <SEP> 16,1bc <SEP> 2,08ab <SEP> 8,6c <SEP> 31,1cd <SEP> 21,5b <SEP> 1,80ab <SEP> 8,6ab
<tb> 6X <SEP> JO <SEP> 124,0a <SEP> 14,0c <SEP> 1,82bc <SEP> 8,6c <SEP> 76,8ab <SEP> 16,2c <SEP> 1,71ab <SEP> 7,4b
<tb> 8X <SEP> jo <SEP> 83,7abc <SEP> 10,0d <SEP> 1,47cd <SEP> 10,8ab <SEP> 61 <SEP> 9bc <SEP> 16,6c <SEP> 1,76ab <SEP> 7,1b
<tb> 10X <SEP> JO <SEP> 85,8abc <SEP> 10,5d <SEP> 1,31d <SEP> 9,1bc <SEP> 86,5ab <SEP> 11,0cd <SEP> 1,30b <SEP> 8,
7ab
<tb> 12X <SEP> JO <SEP> 123,6a <SEP> 10,6d <SEP> 1,44cd <SEP> 8,2c <SEP> 105,7a <SEP> 13,3d <SEP> 1,47b <SEP> 6,3b
<tb> Restricted <SEP> 79,4abc <SEP> 6,4e <SEP> ,92e <SEP> 12,1a <SEP> 29,1cd <SEP> 16,3c <SEP> 1,48b <SEP> 9,1ab
<tb> SEM <SEP> 6,46 <SEP> ,333 <SEP> ,045 <SEP> ,212 <SEP> 3,97 <SEP> ,555 <SEP> ,065 <SEP> ,418
<tb>
Gemiddelden binnen een kolom zonder gemeenschappelijk superscript verschillen significant (P < . 05)
Elke waarde is het gemiddelde van 10 waarden
<Desc/Clms Page number 17>
Op week 4 en in vergelijking met 0% JO waarden waren de gemiddelde plasmagroeihormoonconcentraties toegenomen na supplementatie met jojobameel, hoewel een significant effect slechts waargenomen werd voor de 4, 6 en 12% JO kuikens.
De plasma IGF-I concentraties van JO meelkuikens waren significant lager in vergelijking met die van de 0% JO kuikens en bereikten een minimaal niveau bij 8% JO supplementatie.
Vergeleken met 0% JO waarde, deed supplementatie van 6% JO of meer het plasma T3-niveau sterk dalen, terwijl circulerende plasma T4-concentraties reeds significant verhoogd werden wanneer 2% JO toegevoegd werd aan het voedsel. De gemiddelde plasmagroeihormoonconcentraties van R kuikens weken niet af van die van alle andere groepen. De plasma IGF-I en T3-niveaus van de R kuikens waren echter significant lager dan van alle andere groepen, terwijl het tegenover gestelde waar was voor circulerende plasma T4-concentraties.
Uit bovenstaande experimenten blijkt dat een vermindering van de groeisnelheid reeds verkregen werd met 4% JO supplementatie.
2. Vergelijking van JO kuikens met een pair-fed groep 2. 1 Testomstandigheden
40 kuikens van 3 weken oud werden individueel gewogen en gelijkelijk verdeeld in twee groepen die het commerciële voedsel te eten kregen met 0% of 4% jojobameel.
Een week later werden opnieuw 40 kuikens van 3 weken oud individueel gewogen en in twee groepen verdeeld. De voedselopname van 1 groep werd beperkt volgens de aanbevelingen van de fokker. De andere groep (PF groep) ontving op een dagelijkse basis dezelfde hoeveelheid van het niet gesupplementeerde dieet zoals dat geconsumeerd werd door de 4% JO kuikens. Op intervallen van een week tot 7 weken, werden alle kuikens individueel gewogen en de voederopname per groep opgenomen. Bloedmonsters werden genomen op week 4 en verwerkt zoals beschreven onder 1. 1. boven.
2. 2. Resultaten
<Desc/Clms Page number 18>
Ondanks de gelijke leeftijd verschilde het gemiddeld aanvangslichaamsgewicht op 3 weken significant tussen de 2 series van elk 40 kuikens (fig. 2A). 0% JO = D ; 4% JO = #; pair-feeding = 0 en voedselbeperking = t. De waarden zijn gemiddelden van 17 tot 20 kuikens per behandeling. Niettegenstaande de gelijke voederconsumptie van de 4% JO en de pair-fed (PF) kuikens (fig. 2B), wonnen de 4% JO kuikens minder aan lichaamsgewicht tussen 3 en 7 weken dan hun PF tegenvoeters (4% JO : 615 g/kuiken ; PF : 796 g/kuiken). Zoals reeds waargenomen in het experiment beschreven onder 1. 1. volgden R en 4% JO kuikens een gelijk groeitraject (fig.
2A).
Plasmagroeihormoon, insulinegroeifactor-I, T4 en T3-concentraties op week 4 worden weergegeven in tabel 14.
TABEL 14
EMI18.1
<tb>
<tb> Variabele <SEP> 0% <SEP> JO <SEP> 4% <SEP> JO <SEP> PF <SEP> R
<tb> Plasmaniveaus <SEP> 1
<tb> GH, <SEP> ng/mL <SEP> 319 <SEP> 4,7b <SEP> 51,7 <SEP> ¯ <SEP> 4,8a <SEP> 35,5¯2,2b <SEP> 57,4¯6,6a
<tb> IGF-I, <SEP> ng/mL <SEP> 25, <SEP> 0 <SEP> a <SEP> 14,2 <SEP> ¯ <SEP> ,6b <SEP> 11,1 <SEP> ¯ <SEP> ,8c <SEP> 6,2 <SEP> ¯ <SEP> ,3d
<tb> T4, <SEP> ng/mL <SEP> 11,4 <SEP> ¯ <SEP> ,8c <SEP> 12,2 <SEP> ¯ <SEP> ,7c <SEP> 22,2 <SEP> ¯ <SEP> 1,82 <SEP> 16,7 <SEP> ¯ <SEP> 1,6b
<tb> T3, <SEP> ng/mL <SEP> 1,43 <SEP> ¯ <SEP> ,07a <SEP> 1,33 <SEP> ¯ <SEP> ,09a <SEP> ,77 <SEP> ¯ <SEP> ,07b <SEP> ,61 <SEP> ¯ <SEP> ,05b
<tb> Voederdoorlooptijd
<tb> min <SEP> 208 <SEP> t <SEP> 12 <SEP> a <SEP> 192 <SEP> :
<SEP> t <SEP> 15a <SEP> 177 <SEP> 14ab <SEP> 147 <SEP> Bb
<tb> min/kg <SEP> BW <SEP> 199 <SEP> 16 <SEP> b <SEP> 293 <SEP> 31a <SEP> 203 <SEP> 16b <SEP> 212 <SEP> ¯ <SEP> 13b
<tb>
script verschillen significant (p < . 05).
1waarden zijn middelen SEM, n = 17 tot 20 voor elke behandeling.
2waarden zijn middelen í SEM, n = 8 voor elke behandeling.
Jojobameelsupplementatie en voederbeperking verhoogden het circulerende plasmagroeihormoön vergeleken met 0% JO waarde.
Pair-feeding had geen significant effect op plasmagroeihor- moon vergeleken met 0% JO. Vergeleken met 0% JO waarde verlaagde alle dieetbehandelingen het plasma IGF-I signifi- cant. De laagste plasma IGF-I waarden werden waargenomen in
<Desc/Clms Page number 19>
R kuikens. Plasma T3 hoeveelheden van 4% JO kuikens waren vergelijkbaar met die van 0% JO kuikens en significant hoger dan die van de PF en R vogels. De hoogste plasma T4-concen- traties werden waargenomen in de PF kuikens. Plasma T4 verschilde niet tussen 0% JO en 4% JO kuikens, terwijl plasma T4 van de R kuikens lagen tussen die van de 0% JO en de PF kuikens.
VOORBEELD 6 Isolatie en zuivering van simmondsine
Jojobameel werd verkregen van EMEC Agro Industries (Antwerpen, België).
Jojobameel werd eerst geëxtraheerd met hexaan voor het verwijderen van restolie. 1 kg ontolied meel werd ge- extraheer met aceton gedurende 12 uren door middel van een soxhlet apparaat. Na verdamping van het oplosmiddel werd 40 g van een bruin residu verkregen. Het residu werd opgelost in methanol en geabsorbeerd op 100 g silicagel (0, 2-0, 5 mm). Het methanol werd verwijderd onder vacuum en de silica- ) gel boven op een silicagelkolom (lengte 30 cm, doorsnede 6 cm) geplaatst, welke een suspensie van 1 kg silicagel (0, 040-0, 063 mm) in chloroform bevatte. De kolom werd eerst geëlueerd met 1 liter chloroform en het organisch oplosmid- del weggegooid, gevolgd door elutie met aceton.
Fracties van i 100 ml werden verzameld en geanalyseerd door middel van TLC totdat simmondsine en analoge verbindingen volledig geëlu- eerd waren. De eerste fracties bevatten vooral simmondsine-
2'-ferulaat, gevolgd door mengsels van afnemende hoeveelhe- den simmondsine en simmondsine analoga. Simmondsine-rijke ) fracties werden verzameld en gefilterd over geactiveerde koolstof resulterend in een lichtgele oplossing. Na verdam- ping van het aceton werd het ruwe extract (29 g) verder gezuiverd op een andere silicagelkolom (lengte 60 cm, door- snede 6 cm), welke een suspensie van 2 kg silicagel (0, 04- 5 0 ; 063 mm in chloroform bevatte. Een oplossing van het onge- zuiverde simmondsine in methanol werd eerst geadsorbeerd op silicagel (0, 2-0, 5 mm) en na verdamping van het oplosmid- del boven op de kolom gebracht.
Elutie werd uitgevoerd met
<Desc/Clms Page number 20>
een mengsel van methanol en chloroform (5/95, v/v). De eluaten werden door een UV cel geleid voor het direct vaststellen van de eluerende verbindingen en overeenkomende fracties afzonderlijk verzameld. Alle pieken werden onderzocht op de aanwezigheid van simmondsine en analoga door HPLC. De fracties die slechts simmondsine bevatten werden verzameld en het oplosmiddel onder vacuum verdampt. Het residue (22 g) werd gekristalliseerd uit ethylacetaat/methanol (1 : 3).
De opbrengst van zuiver simmondsine bedroeg 1, 8% gebaseerd op het jojobameel. De zuiverheid van simmondsine werd gecontroleerd door middel van een TLC en een HPLC procedure. De TLC toonde slechts een violet kleurige vlek en de HPLC analyse slechts een piek. Het simmondsine werd verkregen als kleurloze kristallen uit ethylacetaat.
De NMR resultaten staan weergegeven in de tabellen 15 en 16.
<Desc/Clms Page number 21>
EMI21.1
TABEL 15 NMR gegevens voor simmondsine (400 MHz in CD30D)
EMI21.2
EMI21.3
<tb>
<tb> :'HH1 <SEP> 4.. <SEP> 87 <SEP> t <SEP> J <SEP> = <SEP> 4 <SEP> Hz <SEP>
<tb> H3 <SEP> 4. <SEP> 72 <SEP> dd <SEP> J3, <SEP> 4 <SEP> = <SEP> 9 <SEP> ; <SEP> J3,1 <SEP> = <SEP> 2
<tb> H4 <SEP> 3. <SEP> 12 <SEP> dd <SEP> J4, <SEP> 3 <SEP> = <SEP> 9 <SEP> ; <SEP> J <SEP> 4,5 <SEP> = <SEP> 3
<tb> H5 <SEP> 3. <SEP> 90 <SEP> q <SEP> J5,4 <SEP> = <SEP> 3
<tb> H6-H7 <SEP> 1. <SEP> 68-2. <SEP> 5 <SEP> m <SEP> J6, <SEP> 1 <SEP> = <SEP> 3 <SEP>
<tb> H10 <SEP> 5. <SEP> 71 <SEP> d <SEP> J7, <SEP> 3 <SEP> = <SEP> 2
<tb> 3H8 <SEP> 3. <SEP> 43 <SEP> s
<tb> 3H9 <SEP> 3. <SEP> 47 <SEP> s
<tb> H1'4. <SEP> 38 <SEP> d <SEP> J1'2'= <SEP> 7, <SEP> 7
<tb> H2'3. <SEP> 22 <SEP> dd <SEP> J2'1'= <SEP> 7, <SEP> 7 <SEP> ; <SEP> J2'3'= <SEP> 9
<tb> H3'3. <SEP> 35 <SEP> dd <SEP> J3'2'= <SEP> 9 <SEP> ;
<SEP> J3'4' <SEP> = <SEP> 9
<tb> H4'3. <SEP> 28 <SEP> dd <SEP> J4'3'= <SEP> 9 <SEP> ; <SEP> J4'5' <SEP> = <SEP> 9
<tb> H5'3. <SEP> 22 <SEP> ddd
<tb> H6'3. <SEP> 62 <SEP> dd <SEP> J6'5'= <SEP> 5 <SEP> J6'7'= <SEP> 11 <SEP>
<tb> H7'3. <SEP> 82 <SEP> dd <SEP> J7'6'= <SEP> 11 <SEP> ; <SEP> J7'5'= <SEP> 2 <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 22>
TABEL 16 :
13 C NMR gegevens voor simmondsine (100 MHz in CD30D)
EMI22.1
EMI22.2
<tb>
<tb> C1 <SEP> 76. <SEP> 8 <SEP> C1' <SEP> 104.1
<tb> C2 <SEP> 166. <SEP> 4 <SEP> C2'74. <SEP> 6 <SEP>
<tb> C3 <SEP> 70. <SEP> 8 <SEP> C3'78. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C4 <SEP> 86. <SEP> 4 <SEP> C4'71. <SEP> 5 <SEP>
<tb> C5 <SEP> 76. <SEP> 5 <SEP> C5'78. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C6 <SEP> 32. <SEP> 1 <SEP> C6'62. <SEP> 8 <SEP>
<tb> C7 <SEP> 95. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C8 <SEP> 58. <SEP> 2
<tb> C9 <SEP> 58. <SEP> 5 <SEP>
<tb> C10 <SEP> 117. <SEP> 6 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 1>
METHOD FOR INFLUENCING FOOD INTAKE BY HUMANS AND ANIMALS
The present invention relates to a method for influencing food intake by animals.
In certain cases it may be important to inhibit animal growth. This is particularly the case in livestock farming, such as broiler farming, where dams, unlike animals for slaughter, do not gain weight quickly. Due to genetic selection, broilers, and therefore also future dams, have a strong urge to eat a lot.
Due to this property, the broilers are ready to cook. Rapid weight gain due to high food intake by future dams can, among other things, lead to reduced fertility, abnormalities of the legs and an increased death rate. In order to prevent these drawbacks and, in addition, to increase egg production and breeding ability and to reduce chick mortality, the dams are put on a strict feed restriction regime. This means, for example, that the farmer must weigh the animals regularly and give them food as a result of the weight development and sometimes have the animals fasted for one or two days in a row. This is not only very labor-intensive for the farmer, but also very unpleasant for the animals in question.
Such a method therefore also meets with a growing resistance from animal protectors.
In order to avoid the above-mentioned problems in breeding dams for broilers, the present invention provides a method for influencing feed intake by animals, such as fish, birds and mammals, by administering to the animals an appropriate dose of simmondsin and / or one or more derivatives and / or one or more analogues thereof.
Extensive experiments have shown that admixing only 4% hexane de-oiled simmondsin-
<Desc / Clms Page number 2>
Containing jojoba flour on the feed already causes a growth curve corresponding to what is required by the farmer.
Simmondsin works by increasing the feeling of satiety due to the release of the hormone cholecystokinin in the gut. As a result of this increased feeling of satiety, a sharp reduction in food intake occurs, resulting in a loss of weight.
In addition, it has been shown that as a result of the simmondsin both young animals and young people (adolescents) also have a higher maintenance metabolism, as a result of which the slimming proceeds faster than with normal fasting. The above-mentioned hormone cholecystokinin stimulates enzyme production by the pancreas. This increased enzyme production leads to a loss of proteins, especially essential amino acids. In response, the body of growing animals increases the production of triiodothyronine (T3), a thyroid hormone that stimulates combustion in the tissues. This will result in an extra fast weight loss.
The method according to the invention is suitable for slimming all kinds of animals, including humans, but it finds particular practical application in fattening cattle, in particular broiler dams.
The simmondsin can be administered to the animals in various ways, for example in the form of pure simmondsin or as an addition of deoiled jojoba flour to the food. In addition, an extra simmondsin extract from the jojoba plant may also have been added to the de-oiled jojoba flour.
In addition to simmondsin itself, derivatives and / or analogs of simmondsin can also be used, such as simmondsin 2'-ferulate or agmcones of simmondsin.
The simmondsin is preferably deoiled by hexane.
The invention further relates to a method of isolating and purifying simmondsin and / or derivatives and / or analogs thereof, comprising the steps of:
<Desc / Clms Page number 3>
a) extracting de-oiled jojoba flour to obtain an extract; b) separating the extract into fractions by adsorption chromatography; c) filtering the fractions containing simmondsin and / or derivatives and / or analogues thereof to obtain a filtrate; d) separating the filtrate in fractions again by means of adsorption chromatography; and e) crystallizing the simmondsin and / or derivatives and / or analogues thereof.
It is also possible to concentrate the extract or the filtrate before the chromatography step.
In a preferred method according to the invention, the extraction is carried out with acetone, the first chromatography is carried out on a silica gel column with acetone as the eluent, the filtration is carried out on activated carbon, and the second chromatography is carried out on a silica gel column with chloroform / methanol (95: 5) as eluent. The concentration is preferably effected by dissolving the extract or the filtrate in methanol and then evaporating the methanol in vacuo.
The invention further relates to the use of simmondsin and / or analogs and / or derivatives thereof as an appetite suppressant in humans.
In addition, the invention relates to the use of simmondsin and / or analogs and / or derivatives thereof as a means of stimulating weight loss in adolescents.
The present invention will be further elucidated by the examples below, which, however, are not intended to limit the invention in any way.
EXAMPLE 1 Influence of simmondsin in food on thyroid hormone concentrations in adult rats 1. The influence of pure simmondsin
<Desc / Clms Page number 4>
1. 1. Test conditions.
The influence of 0.5% simmondsin on 10% jojoba flour in food on thyroid hormone concentrations is determined in 30 adult male Wistar rats of z 350 g, which are divided into 3 groups of 10 animals. Group C consists of control animals. The animals in group S receive 0.5% HPLC pure simmondsin in their feed for 11 days, group PF receives exactly the same amount of ordinary food as the S group absorbs (so-called "pair-fed" group).
Blood collection takes place by cutting off part of the tail. The blood is collected in heparinized vials and the plasma is immediately centrifuged and stored in the freezer until hormone determinations are possible. Blood is drawn at 2.6, 10.14, 18 and 22 hours to determine the circadian rhythm of the hormone concentrations.
Hormone assays are performed by RIA tests on the thyroid hormones T3 (triiodothyronine), T4 and TSH. The 2 x 10 controls are pooled into a group.
1. 2. Results.
Group S animals exhibit a feed uptake inhibition of about 50%. Table 1 shows the plasma concentration (ng / mL) of T3 in male Wistar rats after administration of 0.5% pure simmondsin in the feed for 11 days. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0.05) Table 1
EMI4.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 0, <SEP> 657a <SEP> 0, <SEP> 780a <SEP> 0, <SEP> 978a <SEP> 0, <SEP> 739a <SEP> 0, <SEP> 536a <SEP> 0, <SEP> 529a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 042 <SEP> 0, <SEP> 045 <SEP> 0, <SEP> 033 <SEP> 0, <SEP> 019 <SEP> 0, <SEP> 034 <SEP>
<tb> S <SEP> 0, <SEP> 367b <SEP> 0, <SEP> 286b <SEP> 0, <SEP> 338b <SEP> 0, <SEP> 388b <SEP> 0, <SEP> 290b <SEP> 0, <SEP> 444b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 027 <SEP> 0, <SEP> 013 <SEP> 0,
<SEP> 039 <SEP> 0, <SEP> 046 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0, <SEP> 460c <SEP> 0, <SEP> 444c <SEP> 0, <SEP> 419b <SEP> 0, <SEP> 481b <SEP> 0, <SEP> 380c <SEP> 0, <SEP> 490b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 027 <SEP> 0, <SEP> 044 <SEP> 0, <SEP> 030 <SEP> 0, <SEP> 025 <SEP> 0, <SEP> 013 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 5>
EMI5.1
Table 2 shows plasma concentrations (ng / ml) of T4 in male Wistar rats after 11 days of mixing 0, simmondsin into the feed.
The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0, Table 2
EMI5.2
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 64, <SEP> 50a <SEP> 54, <SEP> 02a <SEP> 53, <SEP> 38a <SEP> 55, <SEP> 38a <SEP> 49, <SEP> 99a <SEP> 53, <SEP> 02a <SEP>
<tb> 5, <SEP> 30 <SEP> 5, <SEP> 25 <SEP> 4, <SEP> 24 <SEP> 5, <SEP> 15 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 4, <SEP> 60 <SEP>
<tb> S <SEP> 28, <SEP> 56b <SEP> 23, <SEP> 07b <SEP> 23, <SEP> 02b <SEP> 32, <SEP> 44b <SEP> 36, <SEP> 28b <SEP> 31, <SEP> 39b <SEP>
<tb> 2, <SEP> 53 <SEP> 1, <SEP> 94 <SEP> 1, <SEP> 68 <SEP> 4, <SEP> 70 <SEP> 6, <SEP> 26 <SEP> 1, <SEP> 41 <SEP>
<tb> PF <SEP> 41, <SEP> 47c <SEP> 38, <SEP> 59c <SEP> 33, <SEP> 34c <SEP> 39, <SEP> 91c <SEP> 46, <SEP> 77a <SEP> 42, <SEP> 97c <SEP>
<tb> 4, <SEP> 54 <SEP> 3, <SEP> 40 <SEP> 2, <SEP> 50 <SEP> 4, <SEP> 27 <SEP> 5,
<SEP> 46 <SEP> 4, <SEP> 27 <SEP>
<tb>
EMI5.3
Table 3 shows plasma TSH concentrations (ng / ml) in male Wistar rats after mixing simulondsin in food for 11 days. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0, Table 3
EMI5.4
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 1, <SEP> 616a <SEP> 1, <SEP> 741a <SEP> 2, <SEP> 499a <SEP> 2, <SEP> 745a <SEP> 1, <SEP> 906a <SEP> 1, <SEP> 269a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 301 <SEP> 0, <SEP> 364 <SEP> 0, <SEP> 321 <SEP> 0, <SEP> 182 <SEP> 0, <SEP> 101 <SEP>
<tb> S <SEP> 0, <SEP> 981b <SEP> 1, <SEP> 361b <SEP> 1, <SEP> 599b <SEP> 1, <SEP> 543b <SEP> 1, <SEP> 056b <SEP> 1, <SEP> 213a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 088 <SEP> 0, <SEP> 541 <SEP> 0, <SEP> 289 <SEP> 0, <SEP> 088 <SEP> 0, <SEP> 151 <SEP> 0, <SEP> 143 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0,
<SEP> 932b <SEP> 1, <SEP> 274b <SEP> 1, <SEP> 506b <SEP> 1, <SEP> 395b <SEP> 0, <SEP> 923b <SEP> 1, <SEP> 082a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 081 <SEP> 0, <SEP> 110 <SEP> 0, <SEP> 237 <SEP> 0, <SEP> 185 <SEP> 0, <SEP> 066 <SEP> 0, <SEP> 391 <SEP>
<tb>
EMI5.5
The above tables show that there is a decrease in TSH, T3 and T4 compared to the controls, which is
<Desc / Clms Page number 6>
waiting is because the animals are fasting. However, the T3 and T4 decreases are more pronounced (although not always statistically significant) in the animals treated with simmondsin. This can be explained by a slight protein deficiency. The TSH decline can be fully explained by fasting. Simmondsin treatment has no additional effect.
2. The influence of 10% with hexane deoiled jojoba flour in feed 2. 1. Test conditions
30 adult male Wistar rats of z 350 g are divided into groups of 10 animals. Group C consists of control animals, the animals from group JJ receive 10% jojoba flour mixed in their food for 11 days, the animals from group PF receive exactly the same amount of ordinary food as the JJ group consumes (pair-fed group).
The blood samples and hormone tests are carried out in the same way as under 1. 1. above.
2. 2. Results
The feed intake inhibition in the S group is approximately 50%. The weight loss is the same as in animals receiving 0.5% simmondsin. Table 4 shows the plasma T3 concentration (ng / ml) in male Wistar rats after mixing in 10% deoiled jojoba flour for 11 days. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0.05).
Table 4
EMI6.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 0, <SEP> 657a <SEP> 0, <SEP> 780a <SEP> 0, <SEP> 678a <SEP> 0, <SEP> 739a <SEP> 0, <SEP> 536a <SEP> 0, <SEP> 529a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 020 <SEP> 0, <SEP> 042 <SEP> 0, <SEP> 045 <SEP> 0, <SEP> 033 <SEP> 0, <SEP> 019 <SEP> 0, <SEP> 034 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 0, <SEP> 471b <SEP> 0, <SEP> 445b <SEP> 0, <SEP> 547b <SEP> 0, <SEP> 599b <SEP> 0, <SEP> 415b <SEP> 0, <SEP> 504b <SEP>
<tb> 0, <SEP> 026 <SEP> 0, <SEP> 031 <SEP> 0, <SEP> 049 <SEP> 0, <SEP> 052 <SEP> 0, <SEP> 024 <SEP> 0, <SEP> 028 <SEP>
<tb> PF <SEP> 0, <SEP> 519b <SEP> 0, <SEP> 622c <SEP> 0, <SEP> 581a, <SEP> b <SEP> 0, <SEP> 668a, <SEP> b <SEP> 0, <SEP> 491c <SEP> 0, <SEP> 556a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 034 <SEP> 0, <SEP> 035 <SEP> 0, <SEP> 035 <SEP> 0, <SEP> 046 <SEP> 0, <SEP> 024 <SEP> 0,
<SEP> 020 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 7>
Table 5 shows the plasma T4 concentration (ng / ml) in male Wistar rats after mixing in 10% deoiled jojoba flour for 11 days. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0.05).
Table 5
EMI7.1
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 64, <SEP> 50a <SEP> 54, <SEP> 02a <SEP> 53, <SEP> 38a <SEP> 55, <SEP> 84a <SEP> 49, <SEP> 99a <SEP> 53, <SEP> 02a <SEP>
<tb> 5, <SEP> 30 <SEP> 5, <SEP> 25 <SEP> 4, <SEP> 24 <SEP> 5, <SEP> 15 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 4, <SEP> 60 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 47, <SEP> 75b <SEP> 44, <SEP> 75b <SEP> 55, <SEP> 42a <SEP> 59, <SEP> 25a, <SEP> b <SEP> 51, <SEP> 72a <SEP> 48, <SEP> 60a, <SEP> b <SEP>
<tb> 4, <SEP> 20 <SEP> 2, <SEP> 91 <SEP> 5, <SEP> 19 <SEP> 6, <SEP> 17 <SEP> 2, <SEP> 62 <SEP> 4, <SEP> 10 <SEP>
<tb> PF <SEP> 47, <SEP> 20b <SEP> 55, <SEP> 27a <SEP> 55, <SEP> 96a <SEP> 63, <SEP> 38b <SEP> 49, <SEP> 51a <SEP> 54, <SEP> 36a <SEP>
<tb> 7, <SEP> 77 <SEP> 3, <SEP> 16 <SEP> 6, <SEP> 37 <SEP> 5, <SEP> 88 <SEP> 6, <SEP> 12 <SEP> 4,
<SEP> 39 <SEP>
<tb>
Table 6 shows plasma TSH concentrations (ng / ml) in male Wistar rats after admixing 10% deoiled jojoba flour for 11 days. The different indices indicate statistically significant differences (p <0.05).
Table 6
EMI 7.2
<tb>
<tb> 2 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 22 <SEP> u
<tb> C <SEP> 1, <SEP> 161a <SEP> 1, <SEP> 741a <SEP> 2, <SEP> 499a <SEP> 2, <SEP> 745a <SEP> 1, <SEP> 906a <SEP> 1, <SEP> 269a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 301 <SEP> 0, <SEP> 364 <SEP> 0, <SEP> 321 <SEP> 0, <SEP> 182 <SEP> 0, <SEP> 101 <SEP>
<tb> JJ <SEP> 1, <SEP> 304b <SEP> 1, <SEP> 496b <SEP> 2, <SEP> 014b <SEP> 1, <SEP> 759b <SEP> 1, <SEP> 129b <SEP> 1, <SEP> 204a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 111 <SEP> 0, <SEP> 158 <SEP> 0, <SEP> 174 <SEP> 0, <SEP> 154 <SEP> 0, <SEP> 107 <SEP> 0, <SEP> 087 <SEP>
<tb> PF <SEP> 1, <SEP> 271b <SEP> 1, <SEP> 407b <SEP> 1, <SEP> 847b <SEP> 1, <SEP> 720b <SEP> 1, <SEP> 192b <SEP> 1, <SEP> 224a <SEP>
<tb> 0, <SEP> 067 <SEP> 0, <SEP> 107 <SEP> 0, <SEP> 146 <SEP> 0, <SEP> 116 <SEP> 0, <SEP> 091 <SEP> 0, <SEP> 097 <SEP>
<tb>
EMI7.3
There is a drop in TSH,
T3- T4 concentration relative to the controls, which was to be expected because the animals are fasting. The T3 and T4 decreases are more pronounced in the jojoba flour treated group, although this is not statistically significant everywhere. The decline of the TSH
<Desc / Clms Page number 8>
content can be fully explained by fasting. Treatment with jojoba flour does not affect it.
3. Conclusion
In adult rats, administration of 0.5% pure simmondsin or 10% hexane deoiled jojoba flour results in a feed absorption reduction, slimming and a decrease in T3 and T4 content compared to controls.
Thyroid hormone decline is usually more pronounced in the treated animals than in the pair-fed rats. The decrease compared to controls can be explained by the lower food intake, the stronger decrease in the treated animals could be explained by a relative protein deficiency, which normally causes a slight decrease in T3 and T4 in adult animals (de Mello, MAR et al., Circulating thyroid hormone levels in young pregnant rats and their fetuses: effect of malnutrition. Ann. Nutr.
Metab., 1989, 33, 181-187).
The TSH level decreases under the influence of fasting, but no influence of the treatment with simmondsin or jojoba flour can be seen as such.
EXAMPLE 2 Comparison of the effect of 0.15% simmondsin and 3% deoiled jojoba flour on growth, feed intake and food conversion in growing female rats 1. Introduction
0.15% simmondsine, which is mixed in feed, is compared to 3% hexane deoiled jojoba flour containing 3.6% simmondsin and 0.8% simmondsin-2'-ferulate (which in the flour is 0.18% simmondsin and gives 0.024% ferulate). From other tests it is known that simmondsin-2'ferulate causes about 50% of the feed absorption inhibition of simmondsin (own research of the inventors). This means that 3% jojoba flour contains the equivalent of 0.12% active simmondsin. Preliminary tests showed that the feed uptake inhibition in both states is approximately 20%, despite
<Desc / Clms Page number 9>
the difference in active simmondsines.
Consequently, there must still be elements present in the flour that play a role in the feed uptake inhibition. The trypsin inhibitors of protein nature, complex tannins, bitter flavors and the like are known. These tests aim to investigate the effect of both interferences on growth performance.
2. Test conditions
50 newly weaned female wistar rats, divided into 5 groups of 10 animals, are monitored for 8 weeks. Feed intake and weight gain are measured daily. The relative growth (weight week 2 - weight week 1 / weight week 2 * 100) and the feed conversion (grams of feed required per gram of weight gain) are then calculated weekly. Group C consists of controls, group S consists of animals treated with 0.15% simmondsin in food, group JJ contains animals treated with 3% hexane deoiled jojoba flour in food, group PFS consists of rats, which pair-fed to S, and group PFJ includes the rats pair-fed to JJ. PFS and PFJ experiments start 1 week later on animals born 1 week later so that they are the same age at the start and weigh as much as C, S and JJ.
3. Results
The results are shown in the following tables. Table 7 shows the weight evolution in grams (average weights only). The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences.
Table 7
EMI9.1
<tb>
<tb> start <SEP> week <SEP> 4 <SEP> week <SEP> 8
<tb> C <SEP> 91, <SEP> la <SEP> 171, <SEP> 3a <SEP> 203, <SEP> 6a <SEP>
<tb> S'93, <SEP> 6a <SEP> 138, <SEP> 2b <SEP> 161, <SEP> 8b <SEP>
<tb> JJ <SEP> 93, <SEP> 9a <SEP> 138, <SEP> lb <SEP> 164, <SEP> 7b <SEP>
<tb> PFS <SEP> 93, <SEP> 4a <SEP> 149, <SEP> 5c <SEP> 178, <SEP> 5c <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 93, <SEP> Oa <SEP> 147, <SEP> 9c <SEP> 176, <SEP> 7c <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 10>
Table 8 shows food intake (grams / week / animal) (mean values only).
Table 8
EMI10.1
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP>
<tb> C <SEP> 92 <SEP> 102 <SEP> 102 <SEP> 107 <SEP> 108 <SEP> 112 <SEP> 107 <SEP> 102
<tb> S <SEP> 75 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 86 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 84
<tb> JJ <SEP> 75 <SEP> 85 <SEP> 80 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 81
<tb> PFS <SEP> 75 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 86 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 84
<tb> PFJ <SEP> 75 <SEP> 85 <SEP> 80 <SEP> 84 <SEP> 83 <SEP> 84 <SEP> 81 <SEP> 81
<tb>
Table 9 shows the relative growth. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences.
Table 9
EMI10.2
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> avg. <SEP> avg.
<tb>
1-4 <SEP> 5-6
<tb> C <SEP> 21, <SEP> 5 <SEP> 12, <SEP> 8 <SEP> 14, <SEP> 0 <SEP> 9, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 6 <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 4 <SEP> 14, <SEP> 5a <SEP> 3, <SEP> 65a <SEP>
<tb> S <SEP> 16, <SEP> 1 <SEP> 7, <SEP> 2 <SEP> 8, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 5 <SEP> 1, <SEP> 7 <SEP> 9, <SEP> 2b <SEP> 3, <SEP> 4a <SEP>
<tb> JJ <SEP> 14, <SEP> 1 <SEP> 7, <SEP> 0 <SEP> 6, <SEP> 9 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 9 <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> 3, <SEP> 8 <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> 8, <SEP> 4b <SEP> 3, <SEP> 7a <SEP>
<tb> PFS <SEP> 14, <SEP> 3 <SEP> 13, <SEP> 9 <SEP> 9, <SEP> 4 <SEP> 6, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 6 <SEP> 4, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 11, <SEP> Oc <SEP> 3, <SEP> 9a <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 15, <SEP> 5 <SEP> 12, <SEP> 5 <SEP> 9, <SEP> 0 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 9 <SEP> 2,
<SEP> 3 <SEP> 2, <SEP> 8 <SEP> 10, <SEP> 4c <SEP> 3, <SEP> 7a <SEP>
<tb>
Table 10 shows the food conversion. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences.
Table 10
EMI10.3
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> avg. <SEP> avg.
<tb>
1-4 <SEP> 5-8
<tb> C <SEP> 3, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 4 <SEP> 9, <SEP> 3 <SEP> 23, <SEP> 3 <SEP> 16, <SEP> 7 <SEP> 18, <SEP> 3 <SEP> 4, <SEP> 9a <SEP> 16, <SEP> 9a <SEP>
<tb> S <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> 9, <SEP> 6 <SEP> 7, <SEP> 3 <SEP> 12, <SEP> 2 <SEP> 10, <SEP> 7 <SEP> 18, <SEP> 8 <SEP> 15, <SEP> 0 <SEP> 25, <SEP> 1 <SEP> 8, <SEP> 4b <SEP> 17, <SEP> 4a <SEP>
<tb> JJ <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 10, <SEP> 1 <SEP> 8, <SEP> 8 <SEP> 11, <SEP> 1 <SEP> 9, <SEP> 5 <SEP> 22, <SEP> 7 <SEP> 13, <SEP> 7 <SEP> 16, <SEP> 5 <SEP> 8, <SEP> 7b <SEP> 15, <SEP> 6a <SEP>
<tb> PFS <SEP> 5, <SEP> 1 <SEP> 4, <SEP> 7 <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> 8, <SEP> 7 <SEP> 9, <SEP> 7 <SEP> 12, <SEP> 6 <SEP> 15, <SEP> 9 <SEP> 15, <SEP> 6 <SEP> 6, <SEP> 2c <SEP> 13, <SEP> 5b <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 4, <SEP> 5 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 6, <SEP> 6 <SEP> 11, <SEP> 6 <SEP> 11, <SEP> 6 <SEP> 10,
<SEP> 8 <SEP> 21, <SEP> 6 <SEP> 12, <SEP> 9 <SEP> 7, <SEP> 0c <SEP> 14, <SEP> 3b <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 11>
The effect of 0.15% simmondsine and 3% jojoba flour is equal for feed uptake inhibition, growth, relative growth and feed conversion. The feed intake is z 80% of that of the control group C. Relative growth and feed conversion in group S and group JJ are worse than in group C in the first half of the experiment, but equal to the controls in the second half. The relative growth and feed conversion of the pair feds is better in the first half than in groups S and JJ, but it will be the same in the second half.
The relative growth and feed conversion in the pair feds is worse in the first 4 weeks than in the controls, but the relative growth is equal and the feed conversion becomes even better than in the controls at the end of the trial.
From previous work, we know that at the beginning of these tests no T3 drop is seen in group JJ (so that the T3 concentration remains at the level of controls), while there is a drop in group PFJ. At the end of the experiment, the T3 concentration in group JJ drops again to the level of the pair feds (Cokelaere et al., 1993a). Feed-restricted growing animals are increasingly experiencing poorer feed conversion than normal-fed animals. This can be explained by the fact that the energy and building materials used for growth are actually only those that are left over after the needs of maintenance metabolism are met. This surplus is smaller in feed-restricted animals than in controls. With feed restriction, the maintenance metabolism decreases, among other things, due to a decrease in the T3 concentration.
The poor feed conversion and poorer relative growth in group JJ can therefore be partly explained by the fast itself. The poorer results in the first half of the trial, compared to the pair feds, can be explained by the higher T3 values in group JJ. In the end, this T3 level coincides with that of the pair feds, which means that the animals grow just as fast with the same feed conversion as the pair feds. Since we see the same results in group S as in group JJ and we know from preliminary tests (unpublished) that there are also
<Desc / Clms Page number 12>
a T3 increase can be seen in young animals receiving simmondsin, we can assume that the same explanation as in group JJ also applies to group S.
4. Conclusion
It can be concluded that despite the differences in simmondsin-active equivalents in group S and group JJ, the feed intake and growth performance results are the same.
EXAMPLE 3 Influence of 0.15% Simmondsin and 3% Hexane Deoiled Jojoba Flour on Pancreatic Weight 1. Test Conditions
50 adult female Wistar rats of approximately 220 grams are paired (checked by copulation test) with normal Wistar males. The animals are divided into 5 x 10 rats.
During 16 days of gestation, the animals are fed in 5 different ways. Group C, which consists of controls, are fed as usual, group S is fed with 0.15% simmondsin, group JJ is fed with 3% with hexane
EMI12.1
deoiled jojoba flour, group PFS is pair-fed to the S-group daily, and group PFJ is pair-fed to the JJ-group daily.
Here only body weight (BW), pancreas weight and pancreas weight expressed in% BW is shown.
2. Results
Table 11 shows the mean body weight, pancreatic weight and pancreatic weight in% of body weight. Each group has 10 animals. The different indices (a, b, c) indicate statistically significant differences (p <0.05)
<Desc / Clms Page number 13>
Table 11
EMI13.1
<tb>
<tb> weight <SEP> (g) <SEP> pancreatic pancreatic weight
<tb> weight <SEP> (g) <SEP> in <SEP>% <SEP> from <SEP> BW
<tb> C <SEP> 252a <SEP> 0, <SEP> 795a <SEP> 0, <SEP> 315a <SEP>
<tb> S <SEP> 229b <SEP> 0, <SEP> 900b <SEP> 0, <SEP> 393b <SEP>
<tb> JJ <SEP> 220b <SEP> 0, <SEP> 948b <SEP> 0, <SEP> 341b <SEP>
<tb> PFS <SEP> 235b <SEP> 0, <SEP> 684c <SEP> 0, <SEP> 299a <SEP>
<tb> PFJ <SEP> 212b <SEP> 0, <SEP> 680c <SEP> 0,
<SEP> 321a <SEP>
<tb>
There is a marked enlargement of the pancreas in groups S and JJ over groups PFS and PFJ, but there is also a slight increase over controls.
EXAMPLE 4 Influence of pure simmondsin on feed intake in chickens and effect of route of administration 1. Test conditions
20 broilers of about 400 grams are fed ad libitum feed. They are divided into 5 groups of 4 animals and their feed intake is checked after 1, 2.4, 6.8 and 24 hours.
Group C consists of control animals, group IT receives 250 mg / kg simmondsin intubated in the stomach, group IV receives 250 mg / kg intravenously, group IP receives 250 mg / kg intraperitoneally, group IVO receives 140 mg / animal per day in the feed mixed.
2. Results
Table 12 shows the average feed intake expressed per kg body weight in growing broilers.
<Desc / Clms Page number 14>
EMI14.1
Table 12
EMI14.2
<tb>
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 24
<tb> C <SEP> 30, <SEP> 49a <SEP> 11, <SEP> 63b <SEP> 26, <SEP> 36a <SEP> 24, <SEP> 80b <SEP> 22, <SEP> 97b <SEP> 92, <SEP> 51a <SEP>
<tb> IT <SEP> 20, <SEP> 98b <SEP> 8, <SEP> 05b <SEP> 17, <SEP> 97b <SEP> 21, <SEP> 26b <SEP> 16, <SEP> 28b <SEP> 83, <SEP> 99b <SEP>
<tb> IP <SEP> 27, <SEP> 86a <SEP> 7, <SEP> 72b <SEP> 17, <SEP> 42b <SEP> 35, <SEP> 40c <SEP> 16, <SEP> 17b <SEP> 87, <SEP> 33a <SEP>
<tb> IV <SEP> 18, <SEP> 13b <SEP> 11, <SEP> OSb <SEP> 16, <SEP> 95b <SEP> 27, <SEP> 51c <SEP> 24, <SEP> 2Sa <SEP> 70, <SEP> 61d <SEP>
<tb> IVO <SEP> 23, <SEP> 95b <SEP> 13, <SEP> 14b <SEP> 17, <SEP> 99b <SEP> 18, <SEP> 13b <SEP> 25, <SEP> 96a <SEP> 73,
<SEP> 02d <SEP>
<tb>
The simmondsin shows a clear effect on feed intake in IT, IV and IVO. With IT it works at least 8 hours, with IV a maximum of 4 hours, with IVO permanently. When the controls eat less (due to a feeling of satiety), a less pronounced additional influence of simmondsin is visible, which once again indicates a satiety enhancing effect of simmondsin.
EXAMPLE 5 Influence of jojoba flour on growth, feed consumption and plasma hormone concentrations of chickens.
1. Determination of jojoba melamine dose 1. 1 Test conditions
80 3 week old chicks were individually weighed and divided into 8 groups of 10 chicks each. The mean starting body weight of these groups was the same. In one of the groups (R), feed intake was limited according to the breeder's recommendations (weeks 4 and 5: 45 g / chick per day; weeks 6 and 7: 47 g chick / per day).
The other groups had ad libitum access to commercially available foods supplemented with 0 (control), 2, 4, 6, 8, 10 or 12% hexane deoiled jojoba flour (0-12% JO). The de-oiled jojoba flour contained 4.15% simmondsin and 0.7% simmondsin-2'-ferulate. Every week to week 7, all chicks were weighed individually and weekly food intake per group was recorded. At weeks 4 and 7, a blood sample was collected by a puncture in the wing vein of all chicks. Blood was taken from the R chicks
<Desc / Clms Page number 15>
after their daily feed ration was made available to them. Blood samples were collected in heparinized tubes, centrifuged and the plasma stored at -20 ° C until hormone determination.
1. 2. Results
The effects of jojoba flour supplementation on body weight and on weekly feed intake are shown in Figures 1A and 1B. In this graph, the average values of 10 chicks for 0% JO (0), 2% JO (0), 4% JO 6% JO (A), 8% JO (V), 10% JO (, &), 12% JO (V) and food restriction (N) shown. A significant effect (p <0.001) of the diet regimen on body weight was observed from week 4. The 0% JO chicks were significantly heavier than the 2% JO chicks, followed by the 4% JO and R chicks. No significant differences between the body weights of the 6, 8, 10 and 12% JO chicks could be observed.
Between weeks 3 and 7, the R and 4% JO chicks consumed 1,288 g and 2,862 g per animal, which was 35 and 78% of the total feed intake of the 0% JO chicks. The addition of 6% or more jojoba flour to the food further reduced feed intake. At least 12% jojoba flour was required for the feed intake to drop to the level of the R chicks. Between weeks 3 and 7, the 2, 4, 6, 8, 10, and 12 JO chicks consumed 64, 3, 114, 5, 121, 6, 145, 3, 141, 0, and 145.1 g of JO flour per chick, respectively.
The plasma growth hormone, insulin growth factor-I, T4 and T3 levels at weeks 4 and 7 are shown in Table 13.
<Desc / Clms Page number 16>
TABLE 13
EMI16.1
<tb>
<tb> Week <SEP> 4 <SEP> Week <SEP> 7 <SEP>
<tb> Treatment <SEP> GH <SEP> IGF- <SEP> T3 <SEP> T4 <SEP> GH <SEP> IGF-I <SEP> T3 <SEP> T4 <SEP>
<tb> ng / m1
<tb> OX <SEP> JO <SEP> 32.4c <SEP> 24.4a <SEP> 2.22a <SEP> 5.7d <SEP> 16.1d <SEP> 29.9a <SEP> 1.39b <SEP> 8.2b
<tb> 2X <SEP> JO <SEP> 60.3bc <SEP> 18.3b <SEP> 2.01ab <SEP> 8.7c <SEP> 25.6d <SEP> 24.9b <SEP> 2.13a <SEP> 12.1a
<tb> 4X <SEP> JO <SEP> 92, <SEP> 9ab <SEP> 16.1bc <SEP> 2.08ab <SEP> 8.6c <SEP> 31.1cd <SEP> 21.5b <SEP> 1.80ab <SEP> 8.6ab
<tb> 6X <SEP> JO <SEP> 124.0a <SEP> 14.0c <SEP> 1.82bc <SEP> 8.6c <SEP> 76.8ab <SEP> 16.2c <SEP> 1.71ab <SEP> 7.4b
<tb> 8X <SEP> jo <SEP> 83.7abc <SEP> 10.0d <SEP> 1.47cd <SEP> 10.8ab <SEP> 61 <SEP> 9bc <SEP> 16.6c <SEP> 1.76ab <SEP> 7.1b
<tb> 10X <SEP> JO <SEP> 85.8abc <SEP> 10.5d <SEP> 1.31d <SEP> 9.1bc <SEP> 86.5ab <SEP> 11.0cd <SEP> 1.30b <SEP> 8,
7ab
<tb> 12X <SEP> JO <SEP> 123.6a <SEP> 10.6d <SEP> 1.44cd <SEP> 8.2c <SEP> 105.7a <SEP> 13.3d <SEP> 1.47b <SEP> 6.3b
<tb> Restricted <SEP> 79.4abc <SEP> 6.4e <SEP>, 92nd <SEP> 12.1a <SEP> 29.1cd <SEP> 16.3c <SEP> 1.48b <SEP> 9.1ab
<tb> SEM <SEP> 6.46 <SEP>, 333 <SEP>, 045 <SEP>, 212 <SEP> 3.97 <SEP>, 555 <SEP>, 065 <SEP>, 418
<tb>
Averages within a column without common superscript differ significantly (P <. 05)
Each value is the average of 10 values
<Desc / Clms Page number 17>
At week 4 and compared to 0% JO values, mean plasma growth hormone concentrations were increased after jojoba meal supplementation, although a significant effect was observed only for the 4, 6 and 12% JO chicks.
Plasma IGF-I concentrations of JO chickens were significantly lower compared to those of the 0% JO chickens and reached a minimum level with 8% JO supplementation.
Compared to 0% JO value, supplementation of 6% JO or more significantly decreased plasma T3 levels, while circulating plasma T4 concentrations were already significantly increased when 2% JO was added to the food. The mean plasma growth hormone concentrations of R chicks did not differ from those of all other groups. However, the plasma IGF-I and T3 levels of the R chicks were significantly lower than all other groups, whereas the opposite was true for circulating plasma T4 concentrations.
The above experiments show that a reduction in growth rate has already been achieved with 4% JO supplementation.
2. Comparison of JO chicks with a pair-fed group 2. 1 Test conditions
40 3-week-old chicks were weighed individually and divided equally into two groups fed the commercial food with 0% or 4% jojoba flour.
A week later, again 40 3-week-old chicks were individually weighed and divided into two groups. The food intake of 1 group was limited according to the breeder's recommendations. The other group (PF group) received on a daily basis the same amount of the non-supplemented diet as consumed by the 4% JO chicks. At one week to 7 week intervals, all chicks were weighed individually and the feed intake per group was recorded. Blood samples were taken at week 4 and processed as described under 1.1 above.
2. 2. Results
<Desc / Clms Page number 18>
Despite the same age, the mean baseline body weight at 3 weeks differed significantly between the 2 series of 40 chicks each (Fig. 2A). 0% JO = D; 4% JO = #; pair-feeding = 0 and food restriction = t. Values are averages from 17 to 20 chicks per treatment. Notwithstanding the equal feed consumption of the 4% JO and the pair-fed (PF) chicks (Fig. 2B), the 4% JO chicks gained less body weight between 3 and 7 weeks than their PF counterparts (4% JO: 615 g / chick; PF: 796 g / chick). As already observed in the experiment described under 1.1., R and 4% JO chicks followed an equal growth trajectory (fig.
2A).
Plasma growth hormone, insulin growth factor-I, T4 and T3 concentrations at week 4 are shown in Table 14.
TABLE 14
EMI18.1
<tb>
<tb> Variable <SEP> 0% <SEP> JO <SEP> 4% <SEP> JO <SEP> PF <SEP> R
<tb> Plasma levels <SEP> 1
<tb> GH, <SEP> ng / mL <SEP> 319 <SEP> 4.7b <SEP> 51.7 <SEP> ¯ <SEP> 4.8a <SEP> 35.52.2b <SEP> 57.4-6.6a
<tb> IGF-I, <SEP> ng / mL <SEP> 25, <SEP> 0 <SEP> a <SEP> 14.2 <SEP> ¯ <SEP>, 6b <SEP> 11.1 <SEP> ¯ <SEP>, 8c <SEP> 6.2 <SEP> ¯ <SEP>, 3d
<tb> T4, <SEP> ng / mL <SEP> 11.4 <SEP> ¯ <SEP>, 8c <SEP> 12.2 <SEP> ¯ <SEP>, 7c <SEP> 22.2 <SEP> ¯ <SEP> 1.82 <SEP> 16.7 <SEP> ¯ <SEP> 1.6b
<tb> T3, <SEP> ng / mL <SEP> 1.43 <SEP> ¯ <SEP>, 07a <SEP> 1.33 <SEP> ¯ <SEP>, 09a <SEP>, 77 <SEP> ¯ <SEP>, 07b <SEP>, 61 <SEP> ¯ <SEP>, 05b
<tb> Feed lead time
<tb> min <SEP> 208 <SEP> t <SEP> 12 <SEP> a <SEP> 192 <SEP>:
<SEP> t <SEP> 15a <SEP> 177 <SEP> 14ab <SEP> 147 <SEP> Bb
<tb> min / kg <SEP> BW <SEP> 199 <SEP> 16 <SEP> b <SEP> 293 <SEP> 31a <SEP> 203 <SEP> 16b <SEP> 212 <SEP> ¯ <SEP> 13b
<tb>
script differences are significant (p <. 05).
1 values are means SEM, n = 17 to 20 for each treatment.
2values are means í SEM, n = 8 for each treatment.
Jojoba flour supplementation and feed restriction increased circulating plasma growth hormone compared to 0% JO value.
Pair feeding had no significant effect on plasma growth hormone compared to 0% JO. Compared to 0% JO value, all dietary treatments significantly reduced plasma IGF-I. The lowest plasma IGF-I values were observed in
<Desc / Clms Page number 19>
R chicks. Plasma T3 amounts of 4% JO chicks were comparable to those of 0% JO chicks and significantly higher than those of the PF and R birds. The highest plasma T4 concentrations were observed in the PF chicks. Plasma T4 did not differ between 0% JO and 4% JO chicks, while plasma T4 of the R chicks was between that of the 0% JO and PF chicks.
EXAMPLE 6 Isolation and Purification of Simmondsin
Jojoba flour was obtained from EMEC Agro Industries (Antwerp, Belgium).
Jojoba flour was first extracted with hexane to remove residual oil. 1 kg of de-oiled flour was extracted with acetone for 12 hours using a soxhlet apparatus. After evaporation of the solvent, 40 g of a brown residue was obtained. The residue was dissolved in methanol and absorbed on 100 g of silica gel (0.2-0.5 mm). The methanol was removed under vacuum and the silica gel placed on top of a silica gel column (length 30 cm, diameter 6 cm) containing a suspension of 1 kg silica gel (0.040-0.063 mm) in chloroform. The column was first eluted with 1 liter of chloroform and the organic solvent discarded, followed by elution with acetone.
100 ml fractions were collected and analyzed by TLC until simmondsin and analogs were completely eluted. The first fractions mainly contained simmondsin
2 'ferulate, followed by mixtures of decreasing amounts of simmondsin and simmondsin analogs. Simmondsin-rich fractions were collected and filtered over activated carbon resulting in a pale yellow solution. After evaporation of the acetone, the crude extract (29 g) was further purified on another silica gel column (length 60 cm, diameter 6 cm), which had a suspension of 2 kg of silica gel (0.04-0.0.063 mm in chloroform A solution of the crude simmondsin in methanol was first adsorbed on silica gel (0.2-0.5 mm) and applied to the top of the column after evaporation of the solvent.
Elution was performed with
<Desc / Clms Page number 20>
a mixture of methanol and chloroform (5/95, v / v). The eluates were passed through a UV cell to directly determine the eluting compounds and corresponding fractions collected separately. All peaks were examined for the presence of simmondsin and analogs by HPLC. The fractions containing only simmondsin were collected and the solvent evaporated in vacuo. The residue (22 g) was crystallized from ethyl acetate / methanol (1: 3).
The yield of pure simmondsin was 1.8% based on the jojoba flour. The purity of simmondsin was checked by a TLC and an HPLC procedure. The TLC showed only a violet stain and the HPLC analysis peaked. The simmondsin was obtained as colorless crystals from ethyl acetate.
The NMR results are shown in Tables 15 and 16.
<Desc / Clms Page number 21>
EMI21.1
TABLE 15 NMR data for simmondsin (400 MHz in CD30D)
EMI21.2
EMI21.3
<tb>
<tb>: 'HH1 <SEP> 4 .. <SEP> 87 <SEP> t <SEP> J <SEP> = <SEP> 4 <SEP> Hz <SEP>
<tb> H3 <SEP> 4. <SEP> 72 <SEP> dd <SEP> J3, <SEP> 4 <SEP> = <SEP> 9 <SEP>; <SEP> J3.1 <SEP> = <SEP> 2
<tb> H4 <SEP> 3. <SEP> 12 <SEP> dd <SEP> J4, <SEP> 3 <SEP> = <SEP> 9 <SEP>; <SEP> J <SEP> 4.5 <SEP> = <SEP> 3
<tb> H5 <SEP> 3. <SEP> 90 <SEP> q <SEP> J5.4 <SEP> = <SEP> 3
<tb> H6-H7 <SEP> 1. <SEP> 68-2. <SEP> 5 <SEP> m <SEP> J6, <SEP> 1 <SEP> = <SEP> 3 <SEP>
<tb> H10 <SEP> 5. <SEP> 71 <SEP> d <SEP> J7, <SEP> 3 <SEP> = <SEP> 2
<tb> 3H8 <SEP> 3. <SEP> 43 <SEP> s
<tb> 3H9 <SEP> 3. <SEP> 47 <SEP> s
<tb> H1'4. <SEP> 38 <SEP> d <SEP> J1'2 '= <SEP> 7, <SEP> 7
<tb> H2'3. <SEP> 22 <SEP> dd <SEP> J2'1 '= <SEP> 7, <SEP> 7 <SEP>; <SEP> J2'3 '= <SEP> 9
<tb> H3'3. <SEP> 35 <SEP> dd <SEP> J3'2 '= <SEP> 9 <SEP>;
<SEP> J3'4 ' <SEP> = <SEP> 9
<tb> H4'3. <SEP> 28 <SEP> dd <SEP> J4'3 '= <SEP> 9 <SEP>; <SEP> J4'5 ' <SEP> = <SEP> 9
<tb> H5'3. <SEP> 22 <SEP> ddd
<tb> H6'3. <SEP> 62 <SEP> dd <SEP> J6'5 '= <SEP> 5 <SEP> J6'7 '= <SEP> 11 <SEP>
<tb> H7'3. <SEP> 82 <SEP> dd <SEP> J7'6 '= <SEP> 11 <SEP>; <SEP> J7'5 '= <SEP> 2 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 22>
TABLE 16:
13 C NMR data for simmondsine (100 MHz in CD30D)
EMI22.1
EMI22.2
<tb>
<tb> C1 <SEP> 76. <SEP> 8 <SEP> C1 ' <SEP> 104.1
<tb> C2 <SEP> 166. <SEP> 4 <SEP> C2'74. <SEP> 6 <SEP>
<tb> C3 <SEP> 70. <SEP> 8 <SEP> C3'78. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C4 <SEP> 86. <SEP> 4 <SEP> C4'71. <SEP> 5 <SEP>
<tb> C5 <SEP> 76. <SEP> 5 <SEP> C5'78. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C6 <SEP> 32. <SEP> 1 <SEP> C6'62. <SEP> 8 <SEP>
<tb> C7 <SEP> 95. <SEP> 2 <SEP>
<tb> C8 <SEP> 58. <SEP> 2
<tb> C9 <SEP> 58. <SEP> 5 <SEP>
<tb> C10 <SEP> 117. <SEP> 6 <SEP>
<tb>