WO2016039422A1 - 点眼用懸濁製剤 - Google Patents

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WO2016039422A1
WO2016039422A1 PCT/JP2015/075745 JP2015075745W WO2016039422A1 WO 2016039422 A1 WO2016039422 A1 WO 2016039422A1 JP 2015075745 W JP2015075745 W JP 2015075745W WO 2016039422 A1 WO2016039422 A1 WO 2016039422A1
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compound
preparation
suspension
acceptable salt
physiologically acceptable
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PCT/JP2015/075745
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落合　康
佑香 加藤
真紀 佐々木
考史 松本
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大日本住友製薬株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to (R)-( ⁇ )-2- (4-bromo-2-fluorobenzyl) -1,2,3,4-tetrahydropyrrolo [1,2-a, which is particularly useful for posterior eye diseases.
  • the present invention relates to an ophthalmic suspension preparation containing pyrazine-4-spiro-3′-pyrrolidine-1,2 ′, 3,5′-tetraone.
  • the posterior ocular tissue such as the vitreous body, retina, choroid, sclera, etc. is a region that plays a central role in visual function. When this region is affected, there are many cases in which visual acuity is reduced or blindness occurs.
  • Typical posterior ocular diseases include age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic macular edema, macular edema, myopic choroidal neovascularization, retinal vein occlusion, choroidal neovascularization, uveitis, retinitis pigmentosa, proliferation Vitreal retinopathy, central serous chorioretinopathy, and the like.
  • age-related macular degeneration or diabetic retinopathy is a major cause of blindness in middle to old age in developed countries such as Europe and the United States and Japan, and is regarded as a serious problem in ophthalmic clinical and social aspects. It is considered a disease.
  • Patent Document 1 age-related macular degeneration or diabetic retinopathy is a major cause of blindness in middle to old age in developed countries such as Europe and the United States and Japan, and is regarded as a serious problem in ophthalmic clinical and social aspects. It is considered a disease.
  • Non-patent Document 1 drug delivery to the posterior segment of the retina such as the retina is significantly limited by the blood-retinal barrier (BRB) of the posterior segment when it is via blood.
  • BRB blood-retinal barrier
  • most of the drug is quickly discharged from the ocular surface due to the turnover of the lacrimal fluid, and further passes through the nasolacrimal duct to the systemic circulation (Non-patent Document 1). Therefore, the drug delivery in the eye drops is 0.1 to 0.5 in the cornea that migrates most in the tissue when the drug in the eye drops is 100, and 0.01 to 0.1 in the anterior aqueous humor / iris and ciliary body. It is known that the lens and vitreous body are extremely low as about 0.0001 (Non-patent Document 2).
  • Non-patent Document 3 since the posterior eye part exists further behind the crystalline lens or vitreous body, it is generally considered that almost no drugs can be delivered to the posterior eye part by eye drops.
  • suspension eye drops used due to the low solubility of drugs in water are generally difficult to be absorbed in the eye because the drugs are not dissolved in water (Non-patent Document 3).
  • drug delivery to the posterior segment of eye drops is more difficult than solution eye drops.
  • suspension eye drops exist, but are limited to application to anterior eye diseases such as conjunctivitis.
  • it is considered difficult for drug delivery to the posterior segment of the eye other than the route via systemic circulating blood Patent Document 4, Non-Patent Document 4).
  • Compound A is a potent aldose reductase inhibitory action and low toxicity compound, useful as a therapeutic agent for diabetic complications (Patent Document 2 and Patent Document 3).
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a stable ophthalmic preparation of compound A or a physiologically acceptable salt thereof which is useful for posterior ocular diseases, can avoid side effects due to high-concentration systemic exposure. It is to provide.
  • the inventors have suspended Compound A or a physiologically acceptable salt thereof in a dispersion medium and administered it by eye drops, while maintaining the stability of the drug. , Found that high migration required for treatment to the posterior eye area can be achieved while suppressing systemic exposure, and that compound A or a physiologically acceptable salt thereof is effective for ocular diseases such as age-related macular degeneration It has been found to have excellent pharmacological activity. That is, the present invention was completed by suspending Compound A or a physiologically acceptable salt thereof as an eye drop.
  • the gist of the present invention is as follows.
  • Compound A pyrazine-4-spiro-3′-pyrrolidine-1 , 2 ′, 3,5′-tetraone
  • [Section 2] Item 2.
  • the kit according to Item 17, wherein the compound A or a physiologically acceptable salt thereof in the preparation (1) has an average particle size of 10 nm to 20 ⁇ m.
  • the kit according to any one of Items 16 to 18, wherein the preparation (1) or the preparation (2) may contain a dispersant and / or a surfactant.
  • [Claim 21] A therapeutic agent for a disease associated with VEGF, comprising Compound A or a physiologically acceptable salt thereof.
  • Item 22 Item 22.
  • Item 5 The preparation according to any one of Items 2 to 4, wherein the suspension contains a dispersant and / or a surfactant.
  • suction 24 Item 24. The preparation according to Item 23, comprising a dispersant and a surfactant in the suspension.
  • the present invention has a therapeutic effect on not only anterior eye diseases but also posterior eye diseases, it is possible to avoid side effects due to high-level systemic exposure, and compound A or its physiologically acceptable A stable ophthalmic preparation of the obtained salt can be provided.
  • Compound A has low solubility in water, and a low-concentration formulation must be selected as a solution formulation. Administration of a number of times, for example, 1 to 6 times per day, can be expected to deliver a sufficient amount of drug to the affected area.
  • compound A has a very low stability in a solution state and has a problem of degradation in time units, the suspension is excellent in storage stability that can sufficiently withstand realistic storage by using a suspension preparation. Preparations can be provided.
  • This ophthalmic preparation can provide an epoch-making treatment in a form that places little burden on the patient even in posterior eye diseases for which only invasive treatment is mainly performed at present.
  • the storage stability of Compound A in the ophthalmic suspension formulation and the storage stability evaluation of the particle size of Compound A are shown.
  • the vertical axis of the upper figure shows the content (%) of Compound A in the suspension preparation, and the horizontal axis shows time (hr).
  • the vertical axis in the figure below shows the average particle size (nm) of Compound A in the suspension preparation, and the horizontal axis shows time (day). Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (I-1) is shown.
  • the vertical axis indicates the concentration of Compound A in each tissue (eye drops A1, eye drops Z, oral administration in order from the upper figure).
  • the unit of the vertical axis is ⁇ g / g for the retina and corneal concentrations, and ⁇ g / mL for the plasma concentrations.
  • the horizontal axis represents each tissue (retina, cornea, plasma) from the left.
  • the vertical axis shows the retina / plasma ratio
  • the horizontal axis shows the preparations administered in the order from the left (oral, eye drops Z, eye drops A1).
  • the retina / plasma ratio represents “retina compound A concentration ( ⁇ g / g) ⁇ plasma compound A concentration ( ⁇ g / mL)”. Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (I-2) is shown.
  • the vertical axis represents the concentration of Compound A in each tissue (retina, cornea, plasma in order from the top).
  • the unit of the vertical axis is ⁇ g / g for the retina and corneal concentrations, and ⁇ g / mL for the plasma concentrations.
  • the abscissa shows the administered preparations (eye drops Z, eye drops A1 in order from the left). Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (II) is shown.
  • the vertical axis represents the concentration of Compound A in each tissue (retina, cornea, plasma in order from the top).
  • the horizontal axis indicates the number of instillations (from the left, in order 1 time / eye, 3 times / eye, 5 times / eye).
  • the vertical axis represents the concentration of Compound A in each tissue (retina, cornea, and plasma in order from the upper diagram).
  • the abscissa indicates the administered suspension preparation and the average particle size (nm) of Compound A in the suspension preparation.
  • the vertical axis shows the retina / plasma ratio
  • the horizontal axis shows the administered suspension preparation and the average particle diameter (nm) of Compound A in the suspension preparation.
  • the retina / plasma ratio represents “retina compound A concentration ( ⁇ g / g) ⁇ plasma compound A concentration ( ⁇ g / mL)”.
  • the transferability evaluation (IV) to the posterior eye part using a rat is shown.
  • the vertical axis represents the concentration of Compound A in each tissue (retina, cornea, plasma in order from the top).
  • the unit of the vertical axis is ⁇ g / g for the retina and corneal concentrations, and ⁇ g / mL for the plasma concentrations.
  • the horizontal axis indicates the administered suspension formulation and the pH of the suspension formulation.
  • the transferability evaluation (V) to the posterior eye part using a rat is shown.
  • the vertical axis represents the concentration of each compound in the retina ( ⁇ g / g).
  • the abscissa indicates the administered suspension preparation and the average particle size (nm) of Compound A, B or C in the suspension preparation.
  • the vertical axis represents the migration distance of HREC (migration distance (%) relative to the length of the wound width immediately after the wound).
  • the horizontal axis shows each test condition (DMSO (%), added drug (aldose reductase inhibitor or Lucentis / Lucentis (registered trademark) (generic name: ranibizumab)), added amount, and VEGF concentration (ng / mL)).
  • DMSO DMSO
  • Lucentis / Lucentis registered trademark
  • VEGF concentration ng / mL
  • Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (III-2) is shown.
  • the vertical axis shows the concentration of Compound A in each tissue (retina, cornea, plasma in order from the top).
  • the horizontal axis indicates the concentration of the suspension formulation administered.
  • FIG. 2 FIG.
  • mean ⁇ se shown in the upper right of each group shows the mean (mean value) of the sample for each group, and se (standard error) as the error range. Represents that.
  • the n number indicates the number of specimens per group.
  • the preparation of the present invention is an ophthalmic preparation, and is characterized in that Compound A or a physiologically acceptable salt thereof (hereinafter sometimes collectively referred to as “the present drug”) is suspended in a dispersion medium.
  • the preparation is a suspension for eye drops containing Compound A or a physiologically acceptable salt thereof and a dispersion medium, or Compound A or a physiologically acceptable salt thereof and a dispersion medium when suspended.
  • a kit prepared at the time of turbidity may be a free form or a salt thereof with physiologically, ie, pharmaceutically acceptable inorganic and organic bases.
  • inorganic and organic bases include salts with alkali metals (for example, sodium, potassium), ammonium hydroxide, isopropylamine, diethylamine, ethanolamine, piperidine, lysine and the like.
  • alkali metals for example, sodium, potassium
  • ammonium hydroxide for example, sodium, potassium
  • isopropylamine diethylamine
  • ethanolamine ethanolamine
  • piperidine lysine and the like.
  • compound A or a physiologically acceptable salt thereof in the present invention may exist in the form of hydrates and solvates, these compounds are also compounds A or physiologically acceptable salts thereof in the present invention. Contained in the salt. Details thereof are described in Patent Document 2.
  • the method for producing Compound A or a physiologically acceptable salt thereof can be produced, for example, according to the method described in Patent Document 2.
  • “Suspension” in the present invention refers to a state in which Compound A or a physiologically acceptable salt thereof exists in a dispersion medium as a solid and can be dispersed, and the drug is partially dissolved in the dispersion medium. Including. If the drug settles or aggregates due to storage, it may be returned to its original suspended state by lightly shaking before use. It does not include those in which the drug is dispersed, emulsified or encapsulated in oil-based droplets, such as liposomes and emulsion preparations.
  • lipid or oil component for example, a suspension preparation in which the drug is encapsulated in liposomes, or the drug in an oil-based droplet.
  • Oil-in-water emulsion formulations that are included and in which the droplets are dispersed in water are not included in the present invention.
  • the proportion of dissolved Compound A or physiologically acceptable salt thereof is usually 0.001% to 10% of all Compound A or physiologically acceptable salt contained in the suspension formulation. , Preferably from 0.001% to 5%, more preferably from 0.001% to 2%, from the viewpoint of physical stability such as transfer to the posterior eye retina, chemical stability, particle size, etc.
  • the preparation of the present invention does not contain a component having a solubilizing effect that improves the solubility of the drug as an additive, but the solubilizing effect is an amount that does not affect the solubility of the drug.
  • the component which has this may be included.
  • the component having a solubilizing effect include cyclodextrin and the like.
  • Dispersion in the present invention refers to a state in which Compound A or a physiologically acceptable salt thereof is uniformly suspended in a dispersion medium, and is temporary unless used as an eye drop. Includes floating, partially agglomerated, or partially floating.
  • the average particle size of the solid compound A or a physiologically acceptable salt thereof suspended in the suspension preparation is not particularly limited, but from the viewpoint of ease of handling during manufacture and transferability to the posterior segment of the eye
  • the thickness is preferably 20 ⁇ m or less, more preferably 2 ⁇ m or less, further preferably 700 nm or less, further preferably 650 nm or less, further preferably 460 nm or less, further preferably 300 nm or less, and further preferably Is 230 nm or less, particularly preferably 200 nm or less.
  • the average particle size of the solid compound A or a physiologically acceptable salt thereof suspended in the suspension preparation is preferably 1 nm or more, more preferably 5 nm or more, and further preferably 10 nm.
  • the range of the average particle size is preferably 10 nm to 20 ⁇ m or 1 nm to 20 ⁇ m, more preferably 10 nm to 2 ⁇ m or 1 nm to 2 ⁇ m, and more preferably 10 nm to 700 nm or 1 nm to 700 nm.
  • nm or more and 650 nm or less More preferably, they are 1 nm or more and 460 nm or less, More preferably, they are 1 nm or more and 300 nm or less, More preferably, they are 10 nm or more and 300 nm or less, or 5 nm or more and 300 nm or less, More preferably, 1 nm It is not less than 230 nm, more preferably not less than 5 nm and not more than 230 nm, further preferably not less than 5 nm and not more than 200 nm, particularly preferably not less than 10 nm and not more than 200 nm or 10 n. More than 230nm is less than or equal to.
  • the average particle size in the present specification means that compound A or a physiologically acceptable salt thereof, compound A after pulverization or a physiologically acceptable salt thereof, or a suspended preparation is suspended.
  • the average particle size of the solid compound A or a physiologically acceptable salt thereof, and the average particle size of the drug in the suspension preparation is the value of the drug present in the solid state in the suspension.
  • the average particle size means a value of an average particle size calculated by the apparatus and method described below. When measuring in a suspension formulation, it can be diluted to a measurable concentration.
  • Compound A or a physiologically acceptable salt thereof satisfying the above particle diameter can be prepared by wet grinding or dry grinding.
  • wet pulverization it can be produced by stirring or dispersing in a suitable solvent (pulverization solvent) using a stirrer or a homogenizer.
  • pulverization solvent pulverization solvent
  • a pulverizer such as a wet jet mill such as Starburst.
  • a planetary ball mill LP-4 / 2 manufactured, the compound A or its physiologically acceptable salt content in the grinding solvent can be ground at 1 to 500 mg / mL and 30 to 370 rpm.
  • spiral pulverizers such as spiral jet mills, jet-o-mills, counter jet mills, jet mills, air-flow pulverizers, hammer mills, screen mills, sample mills, etc., ball mills, bead mills, etc.
  • the pulverized compound A or physiologically acceptable salt thereof used in the present invention is a build-up using spray drying, crystallization, or lyophilization in addition to a breakdown method in which particles are reduced by dispersion or pulverization. It can be manufactured by law.
  • the preparation of the present invention can be finally applied in the form of a suspension.
  • the above-mentioned pulverization apparatus is used to have compound A or a physiologically acceptable salt thereof having a necessary particle size, specifically the above-mentioned average particle size.
  • the preparation can be prepared by grinding into particles and suspending in a dispersion medium.
  • a compound A or a physiologically acceptable salt thereof and a dispersion medium are individually provided, and a compound A or a physiologically acceptable salt thereof is suspended in the dispersion medium at the time of use (that is, a kit) ) Is also included.
  • the preparation of the present invention is prepared using wet pulverization
  • Compound A or a physiologically acceptable salt thereof and a pulverization solvent are added to the above pulverizer to pulverize Compound A or a physiologically acceptable salt thereof.
  • the product can be made into a lyophilized product by removing the pulverized solvent by lyophilization or the like, and the lyophilized product is suspended in a dispersion medium to prepare a preparation.
  • a freeze-dried product and a dispersion medium are provided separately, and a use-prepared form (kit) in which the freeze-dried product is suspended in the dispersion medium at the time of use is included.
  • a lyophilized product of the composition containing the drug and (2) a kit containing the dispersion medium are also embodiments of the present invention.
  • compound A or a physiologically acceptable salt thereof is pulverized using a pulverizing solvent containing additives such as a surfactant and a dispersant as shown below, and the pulverizing solvent is removed by freeze drying
  • the lyophilized product of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof may contain an additive such as a surfactant or a dispersant, and may further contain a part of a grinding solvent.
  • a dispersion medium is added as a pulverization solvent, and the pulverized suspension is directly or as necessary diluted without lyophilization to prepare the preparation of the present invention. It can also be provided.
  • the preparations of the present invention include preparations that can be used once or for a week, and preparations that have a limited use period of one week or one month after suspension in use.
  • the dispersion medium in the present specification is a solvent that can be used in a living body and can disperse Compound A or a physiologically acceptable salt thereof in a liquid.
  • the solubility of Compound A is 0.4 mg /
  • the composition may be a single component or a mixture of multiple components as long as the solvent is not more than mL, more preferably not more than 0.1 mg / mL.
  • Specific examples include water and other solvents such as castor oil, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, and oil such as liquid paraffin. Also, a mixture of two or more of these solvents may be used.
  • the dispersion medium is preferably an aqueous dispersion medium.
  • the aqueous dispersion medium means that 90% by weight or more of the total amount of the solvent used as the dispersion medium is water, preferably 95% by weight or more of the total amount of the dispersion medium is water, and more preferably.
  • the solvent used as the dispersion medium is particularly preferably water.
  • the solvent other than water contained in the aqueous dispersion medium include ethanol, glycerin, propylene glycol, fennel oil, phenylethyl alcohol, monoethanolamine, acetic acid, glacial acetic acid, hydrochloric acid, benzyl alcohol, and polyethylene glycol.
  • the dispersion medium does not include those in which the present drug is contained in an oil-based droplet and the droplet is dispersed in water to form an oil-in-water emulsion formulation.
  • the dispersion medium may contain additives such as a dispersant, a surfactant, a wetting agent, a tonicity agent, a buffering agent, a preservative, and a pH adjusting agent.
  • the dispersion medium includes a surfactant and / or a dispersant.
  • a preferable dispersion medium includes water, more preferably, the dispersion medium contains either a surfactant or a dispersant in water, and more preferably, both the surfactant and the dispersant are contained in water.
  • preferable dispersion media include those in which either a surfactant or a dispersant is contained in an aqueous solvent, and those in which both a surfactant and a dispersant are contained in an aqueous solvent.
  • the pH of the dispersion medium is usually 3 to 9, preferably 3 to 8, more preferably 4 to 7, and particularly preferably 4 to 6.
  • the pH of the dispersion medium can be adjusted with the following pH adjuster.
  • the grinding solvent is a solvent used when wet grinding the compound A or a physiologically acceptable salt thereof, and the solubility of the compound A is preferably a solvent having a solubility of 0.4 mg / mL or less.
  • Specific examples include water, glycerin, polyalcohols such as propylene glycol or polyethylene glycol, heptane or hexane. Also, a mixture of two or more of these solvents may be used.
  • the mixed solvent is preferably an aqueous solvent in which 90% by weight or more of the total amount is water and appropriately contains the polyalcohol, and more preferably an aqueous solvent in which 95% by weight or more of the total amount is water.
  • an aqueous solvent in which 99% by weight or more of the total amount is water.
  • the grinding solvent is preferably water, and may contain additives such as a surfactant, a dispersant, and a salt as necessary to assist the grinding of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof. It is also possible to use the aforementioned dispersion medium as a grinding solvent.
  • the preparation of the present invention may be provided in a sterilized manner.
  • a suspension in which Compound A or a physiologically acceptable salt thereof is dispersed in a dispersion medium is subjected to filtration sterilization, radiation sterilization, or high-pressure steam sterilization.
  • Compound A or a physiologically acceptable salt thereof, a lyophilized product of a suspension or a dispersion medium, and if necessary, additives may be sterilized separately.
  • the whole manufacturing process or one part manufacturing process of the eye drop formulation of this invention can also be manufactured in an aseptic environment.
  • the measurement of the particle diameter in the present invention is not limited to these, but is performed by the following method, for example, in consideration of the state of the particles, the size of the particle diameter, and the like.
  • the particle size of the solid compound A or a physiologically acceptable salt thereof dispersed in the suspension preparation is 1 nm to 5 ⁇ m, preferably 10 nm to 5 ⁇ m
  • the compound in the suspension preparation A sample diluted with a dispersion medium so that the content of A or a physiologically acceptable salt thereof is about 200 to 500 ⁇ g / mL was measured using a measuring instrument; Zeta Sizer nano S (Malvern Instruments Ltd, Malvern UK).
  • Zeta Sizer nano S Zeta Sizer nano S (Malvern Instruments Ltd, Malvern UK).
  • As a calculation method using a dynamic light scattering method, Material RI and Dispersant RI were set to 1.33, and an average value of Z-average values of the calculated particle diameters was shown.
  • the content of the compound A in the suspension preparation is 10 to 50 ⁇ g when the particle diameter is 5 ⁇ m or more.
  • Samples diluted with a dispersion medium to about / mL are dispersed at a stirrer speed of 1200 rpm for 15 seconds using an ultrasonic diffraction particle size distribution analyzer; HEROS / BR-multi and wet dispersion unit CUVETTE (Sympatec GmbH). Using a 50 mL cell, the measurement was performed under trigger conditions (time base: 1000.00 ms, measurement: 10 s real time), and the X50 value of the particle diameter calculated in the calculation mode HRLD was shown.
  • the particle size of dry milled compound A or its physiologically acceptable salt is determined using the laser diffraction particle size distribution analyzer; HEROS / BR-multi and dry dispersion unit (Sympatec GmbH), range R3, trigger condition (start : Ch.25 ⁇ 0.5%, stop: ch.25 ⁇ 0.5% is 2 seconds or real time is 10 seconds), measured at a dispersion pressure of 2.0 bar, and X50 value of the particle diameter calculated in the calculation mode LD showed that.
  • Surfactants that can be used in this preparation are substances that have a hydrophilic group and a hydrophobic group (lipophilic group) in the molecule, and form micelles, vesicles, and lamellar structures at a certain concentration or higher. It is a substance having a molecular weight of 6000 or less that has a function of uniformly mixing and weakening the surface tension, and is an additive that contributes to wetting of the nano-sized particles of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof.
  • polysorbate 80 polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene castor oil, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride, polyoxyl 40 stearate, glycerin, propylene glycol, sodium chondroitin sulfate, aluminum monostearate, alkylallyl polyether alcohol , Cholesterol, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, sorbitan sesquioleate, squalane, stearyl alcohol, cetanol, cetomacrogol 1000, diethyl sebacate, sodium dodecylbenzenesulfonate, sorbitan trioleate, nonylphenoxy polyoxyethylene Ammonium ethane sulfate, polyoxyethylene oleylamine, polyoxyethylene ester Ryl ether, polyoxyethylene cetyl ether, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, polyoxyethylene sorbit beeswax, poly
  • polysorbate 80 polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene castor oil, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride, polyoxyl 40 stearate, glycerin, propylene glycol, sodium chondroitin sulfate and aluminum monostearate, macrogol 4000, macrogol 6000, more preferably polysorbate 80, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride and polyoxyethylene hydrogenated castor oil.
  • Two or more kinds, preferably 2 to 3 kinds of surfactants may be added.
  • the content of the surfactant is preferably 0.001 to 5% by weight of the total amount of the suspension.
  • the dispersant that can be used in this preparation is a polymer having a molecular weight exceeding 6000, and is an additive that enters between the nanoparticles and contributes to preventing aggregation.
  • carboxyvinyl polymer polyvinylpyrrolidone (povidone), methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose (hypromellose), hydroxyethylcellulose, hydroxypropylcellulose, polyvinyl alcohol, sodium carboxymethylcellulose (carmellose sodium), tyloxapol, gadhi gum, gum arabic, arabic
  • examples thereof include rubber powder, karaya gum, xanthan gum, aminoalkyl methacrylate polymer RS, propylene glycol alginate, sodium carboxymethyl starch, agar powder, dioctyl sodium sulfosuccinate, dextrin and the like.
  • carboxyvinyl polymer hydroxyethylcellulose, polyvinylpyrrolidone (povidone), methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose (hypromellose), polyvinyl alcohol, sodium carboxymethylcellulose (carmellose sodium) and tyloxapol, more preferably carboxyvinyl polymer, Examples include hydroxyethyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone (povidone), methyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose (hypromellose) and polyvinyl alcohol.
  • Two or more kinds of dispersants may be added.
  • the content of the dispersant is preferably 0.001 to 5% by weight of the total amount of the suspension.
  • wetting agent examples include ethanol, oleic acid, magnesium silicate, light anhydrous silicic acid, choline phosphate and the like.
  • tonicity agents include sodium chloride, potassium chloride, sorbitol, glucose, sucrose, D-mannitol, ethanol, oleic acid, magnesium silicate, light anhydrous silicic acid, choline phosphate and the like.
  • sodium chloride is used.
  • buffering agent include sodium phosphate, disodium hydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, sodium acetate, citric acid, sodium citrate, sodium hydrogen carbonate, trometamol and the like.
  • disodium hydrogen phosphate and citric acid are used.
  • quaternary ammonium salts such as benzalkonium chloride, benzethonium chloride, cetylpyridinium chloride, paraoxybenzoates such as methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and butyl paraoxybenzoate
  • the pH adjuster include hydrochloric acid, citric acid, glacial acetic acid, phosphoric acid, sodium dihydrogen phosphate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium hydrogen phosphate hydrate and the like.
  • the ophthalmic suspension preparation of the present invention containing the above-described additives as necessary usually contains 1 to 500 mg, preferably 5 to 300 mg, more preferably 5 to 300 mg of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof per 1 mL of the dispersion medium. Is added 10 to 300 mg, more preferably 10 to 200 mg, particularly preferably 20 to 300 mg, 25 to 300 mg, 10 to 150 mg, or 25 to 230 mg by adding Compound A or a physiologically acceptable salt thereof. Although prepared, it is not necessarily limited to this amount range.
  • the pH of the suspension of the preparation of the present invention is usually 3 to 9, preferably 3 to 8, more preferably 4 to 7, and particularly preferably 4 to 6.
  • the pH of the suspension can be adjusted with the above pH adjuster.
  • the osmotic pressure of the suspension of the preparation of the present invention is usually 20 to 1000 mOsm, preferably 100 to 700 mOsm, more preferably 180 to 500 mOsm, and particularly preferably 200 to 360 mOsm.
  • the osmotic pressure of the suspension can be adjusted with the isotonic agent described above.
  • the osmotic pressure of the suspension can be obtained by measuring the supernatant recovered by centrifuging the suspension.
  • the osmotic pressure measuring device “Osmostat OM-6040” manufactured by ARKRAY, Inc. Can be measured.
  • the preparation of the present invention can contain other active ingredients as long as the pharmacological effect is not inhibited.
  • Compound A or a physiologically acceptable salt thereof has an inhibitory effect on the cell migration enhancing action by VEGF stimulation. Therefore, since compound A or a physiologically acceptable salt thereof contained in the preparation of the present invention has an aldose reductase inhibitory action, a VEGF production inhibitory action, and a VEGF-stimulated action of cell migration enhancement, Expected to have a therapeutic effect on the disease.
  • the suspension preparation of the compound A of the present invention or a physiologically acceptable salt thereof is particularly excellent in posterior ocular mobility, it is age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic macular edema, macular edema, myopia Drugs must be administered to the posterior segment of the eye such as recurrent choroidal neovascularization, retinal vein occlusion, choroidal neovascularization, uveitis, retinitis pigmentosa, proliferative vitreoretinopathy, central serous chorioretinopathy Although it can be expected to be applied to diseases (posterior ocular diseases), it is not limited thereto.
  • the preparation of the present invention can be expected to be applied particularly to diseases associated with VEGF, diseases associated with VEGF, or post-onset diseases associated with VEGF.
  • the usage / dosage of the ophthalmic suspension preparation of the present invention is appropriately determined according to drug efficacy, administration route, symptom, age, body weight and the like.
  • a suspension preparation containing 1 to 500 mg / mL of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof is preferably instilled into each eye at a dose of 1 to 2 drops, 1 to 6 times a day.
  • the amount of eye drops per drop is 20 to 80 ⁇ L, preferably 30 to 50 ⁇ L.
  • the administration period of the preparation of the present invention varies depending on the degree of symptoms, etc., and is, for example, 1 week or more, preferably about 1 to 4 weeks, more preferably about 4 weeks or more.
  • preparation of the present invention can be used not only for humans but also for the treatment of eye diseases such as mammals such as monkeys, cows, horses, dogs and cats.
  • Reference Example 1 Production of Compound A Crude product (10 g) obtained by the method described in T. Negoro et. Al. J. Med. Chem. 1998, 41, 4118-4129 was added to activated carbon (50% wet, 0.8 g) and 2-propanol (101 g) were added and the reaction was heated to reflux (about 84 ° C.) and kept for 30 minutes. After filtration at the same temperature, washing with 2-propanol (13.8 g), the resulting solution was heated at 75 ° C. or higher, the reaction solution was cooled to 60 ° C., kept warm for 1 hour, and then cooled to 0 ° C. .
  • Powder X-ray diffraction system XRD-6100 (Shimadzu Corp.) was used, the X-ray tube was CuK ⁇ (wavelength: 1.54 angstrom), the tube voltage was 30.0 kV, The tube current is 20.0 mA, the drive axis is ⁇ to 2 ⁇ , the measurement range is 5 to 40 degrees, the step width is 0.020 degrees, the speed is 2.00 (degrees / minute), and the counting time is 0.60 seconds.
  • DSC differential scanning calorimetry
  • Thermo Plus 2 (Rigaku Corporation) was used, and about 10 mg of a sample was weighed in an aluminum container, and the temperature was increased from 25 ° C. to 250 ° C. at a heating rate of 5 ° C. per minute. The measurement was performed under conditions up to ° C.
  • Compound A obtained by the above production method was pulverized with a jet mill under various conditions to obtain three sizes of Compound A having different average particle diameters.
  • the average particle diameter of the obtained compound A was 1.43 ⁇ m, 6.29 ⁇ m, and 21.98 ⁇ m, respectively.
  • the average particle diameter of Compound A pulverized (dry pulverized) by the jet mill was measured using the laser diffraction particle size distribution measuring apparatus and showed an X50 value of the particle diameter calculated in the calculation mode LD. .
  • a 1% hydroxypropylmethylcellulose solution was added to make the total amount 500 g, adjusted to pH 5.0 with 1 mol / L hydrochloric acid to obtain a dispersion medium (pH 5.0).
  • the composition of the dispersion medium (pH 5.0) prepared above is shown below.
  • Example 1 Preparation of ophthalmic suspension formulation 4 g of Compound A (average particle size: 1.43 ⁇ m) pulverized with a jet mill and 12 mL of the dispersion medium (pH 5.0) obtained in Reference Example 2 were added to a screw tube. Stir with a stirrer for 30 minutes. The total amount of the sample after stirring was added to the grinding pot, and the sample adhering to the screw tube was washed with 4 mL of the dispersion medium. 50 g of zirconia beads of each diameter size described below were added to the grinding pot. A grinding pot was set in a planetary ball mill (LP-4 / 2) manufactured by Ito Seisakusho, and pulverized at 300 rpm for 2 hours.
  • LP-4 / 2 planetary ball mill
  • Suspension formulation A1, A2, A3 Use bead diameter size of 0.5 mm
  • Suspension formulation B Use bead diameter size of 2.0 mm
  • Suspension formulation C Use bead diameter size of 3.0 mm
  • Suspension preparation D The diameter of the beads is 5.0 mm
  • Compound A (average particle diameter: 1.43 ⁇ m, 6.29 ⁇ m or 21.98 ⁇ m) 2.2 g and a dispersion medium (pH 5.0) 10 mL pulverized by a jet mill and 10 mL of a dispersion medium (pH 5.0) were added to the screw tube and stirred for 10 minutes with a stirrer. Suspension preparations E, F and G were obtained.
  • the average particle size of compound A suspended in the suspension preparations A1 to A3 and B to G was measured by the method described above.
  • the average particle diameter obtained was as follows.
  • Suspension preparation A1 209.0 nm
  • Suspension preparation A2 195.2 nm
  • Suspension preparation A3 227.0 nm
  • Suspension formulation B 451.2 nm
  • Suspension preparation C 609.9 nm
  • Suspension formulation D 801.2 nm
  • Suspension formulation E 1944 nm
  • Suspension preparation F 9560 nm
  • Suspension preparation G 20430 nm
  • Reference Example 3 Measurement of drug content of each ophthalmic suspension formulation
  • 100 ⁇ L, 1% HPMC 800 ⁇ L and acetonitrile 100 ⁇ L were added, and vortexed. 100 ⁇ L of this was placed in a 10 mL volumetric flask, 1% HPMC / acetonitrile (1: 1) was added and completely dissolved to make exactly 10 mL, and used as a sample for measuring the content of an ophthalmic suspension preparation.
  • Suspension formulation A1 200.1 mg / mL Suspension formulation A2: 216.2 mg / mL Suspension formulation A3: 207.1 mg / mL Suspension formulation B: 211.0 mg / mL Suspension formulation C: 195.6 mg / mL Suspension formulation D: 218.8 mg / mL Suspension formulation E: 135.4 mg / mL Suspension preparation F: 201.8 mg / mL Suspension preparation G: 224.5 mg / mL
  • the obtained pH 3.0-citrate-phosphate buffer solution was treated in the same manner as in the case of the above-mentioned pH 5.0-citrate-phosphate buffer solution to obtain a dispersion medium (pH 3.0).
  • the composition of the dispersion medium (pH 3.0) prepared above is shown below.
  • the obtained pH 8.0-citrate-phosphate buffer solution was treated in the same manner as in the case of the above-mentioned pH 5.0-citrate-phosphate buffer solution (however, 1 mol / L sodium hydroxide was used instead of 1 mol / L hydrochloric acid).
  • the dispersion medium (pH 8.0) was obtained.
  • the composition of the dispersion medium (pH 8.0) prepared above is shown below.
  • Example 2 Preparation of ophthalmic suspension formulation Dispersion medium having a diameter of 1.0 mm and pH 3.0 described in Reference Example 4, pH 5.0 described in Reference Example 2, or pH 8.0 described in Reference Example 5 Ophthalmic suspension preparations H, I, and J were obtained in the same manner as in Example 1. The pH of the obtained ophthalmic suspension preparation was as follows.
  • Suspension preparation H (pH 3): 3.09 Suspension formulation I (pH 5): 5.07 Suspension preparation J (pH 7): 7.10
  • the average particle size of Compound A suspended in ophthalmic suspension preparations H, I, and J was measured by the method described above.
  • the average particle diameter obtained was as follows.
  • Suspension preparation H (pH 3): 352.1 nm
  • Suspension formulation I (pH 5): 263.2 nm
  • Suspension preparation J (pH 7): 256.0 nm
  • the content of the compound A of the ophthalmic suspension preparations H, I, and J was measured by the method described above, it was as follows.
  • Suspension preparation H (pH 3): 217.9 mg / mL
  • Suspension formulation I (pH 5): 220.0 mg / mL
  • Suspension preparation J (pH 7): 222.4 mg / mL
  • Comparative Example 1 Preparation of ophthalmic dissolution preparation of Compound A 0.1 mol / L hydrogen phosphate was added to a 0.1 mol / L sodium dihydrogen phosphate aqueous solution containing 0.9% (w / v) sodium chloride. A solution obtained by adding 0.9% (w / v) sodium chloride to a disodium aqueous solution was added, pH was adjusted to 8.0, and diluted 1.25 times with purified water (hereinafter referred to as “dissolution of pH 8.0”). Liquid ”). 400 ⁇ g of Compound A pulverized with a jet mill and 0.08 mL of ethanol were added to 1 mL of the resulting solution to dissolve Compound A, and eye drop dissolution preparation Z was obtained.
  • Comparative Example 2 [5-[(1Z, 2E) -2-methyl-3-phenylarylidene] -4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl] acetic acid and (2S, 4S) -6-fluoro Preparation of ophthalmic suspension formulation of -2 ', 5'-dioxospiro [chroman-4,4'-imidazolidine] -2-carboxamide [ 5-[(1Z, 2E) -2-methyl-3-phenylallylidene ] 4-Oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl] acetic acid (hereinafter referred to as “Compound B”) 2 g and 6 mL of the dispersion medium (pH 5.0) described in Reference Example 2 were added to a screw tube.
  • Compound B Compound B
  • the average particle size of Compound B and Compound C suspended in the suspension preparations X1, Y1, X2 and Y2 was measured in the same manner as when the average particle size of Compound A was measured.
  • the average particle size was as follows.
  • Suspension formulation X1 555.7 nm
  • Suspension preparation Y1 290.8 nm
  • Suspension formulation X2 8970 nm
  • Suspension preparation Y2 5430 nm
  • Suspension formulation X1 215.4 mg / mL
  • Suspension preparation Y1 214.1 mg / mL
  • Suspension formulation X2 187.7 mg / mL
  • Suspension preparation Y2 196.8 mg / mL
  • Test Example 1 Evaluation of storage stability of ophthalmic suspension preparation of Compound A Regarding the ophthalmic suspension preparation, the change in the content of Compound A when stored at 37 ° C and the change in particle diameter when stored at 25 ° C are as follows: The procedure was evaluated.
  • an ophthalmic suspension preparation was prepared using a dispersion medium (pH 5.0) and beads having a diameter of 0.5 mm.
  • the content of Compound A in the obtained ophthalmic suspension preparation and the average particle size of the suspended Compound A were measured by the methods described above, and were 220.95 mg / mL and 170.2 nm, respectively.
  • the prepared ophthalmic suspension formulation was stored at 37 ° C. for a certain period of time, and then 800 ⁇ L of 1% HPMC and 100 ⁇ L of acetonitrile were added to 100 ⁇ L of the ophthalmic suspension formulation homogenized by ultrasonic irradiation, and shaken by vortexing.
  • an ophthalmic suspension preparation was prepared using a dispersion medium (pH 5.0) according to the procedure described in Example 1.
  • the beads were pulverized for 2 hours using a diameter of 0.5 mm, then changed to 0.02 mm beads and further pulverized for 2 hours.
  • the content of Compound A in the obtained ophthalmic suspension preparation and the average particle size of Compound A suspended were measured by the methods described above, and were 168.5 mg / mL and 180.5 nm, respectively.
  • the prepared suspension for eye drops was stored at 25 ° C., and the average particle size during storage was measured by the method described above. The results are shown in FIG.
  • the ophthalmic suspension preparation of the present invention did not show a significant decrease in the content of Compound A even after storage for 72 hours. In addition, no change in the average particle size was observed after 14 days of storage. From this, it was found that the ophthalmic preparation of the present invention is chemically and physically stable, can be stored at room temperature without the need for storage in a cold place.
  • Test Example 2 Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (I-1) and (I-2) An ophthalmic suspension formulation A1 (200 mg / mL) in which Compound A, which is generally administrable as a suspension, is suspended in both eyes of a diabetes model rat, and an ophthalmic dissolution formulation Z in which Compound A is dissolved (400 ⁇ g / mL) was instilled 5 times in total, 5 ⁇ L per eye (maximum amount that can be administered to rats) every 5 minutes. The concentration of Compound A in the cornea, retina and plasma 60 minutes after administration was measured.
  • an ophthalmic dissolution preparation since the solubility of Compound A in water is very low, an ophthalmic dissolution preparation Z is obtained by dissolving 400 ⁇ g / mL of Compound A, which is a higher concentration than the original solubility by the addition of an additive. Used as.
  • FIG. 2 shows the transfer amount (concentration) of Compound A into the plasma, cornea, and retina by ophthalmic administration of the ophthalmic suspension formulation A1, ophthalmic administration of the ophthalmic dissolution formulation Z, and repeated oral administration.
  • the rate of transfer of Compound A into plasma, cornea, and retina was as follows.
  • the retina / plasma ratio retinal compound A concentration ( ⁇ g / g) ⁇ plasma compound A concentration ( ⁇ g / mL)) in each administration group was as follows.
  • Retinal / plasma ratio of ophthalmic suspension A1 administration group 33.5
  • Retina / plasma ratio of ophthalmic dissolution preparation Z administration group 1.1
  • Retinal / plasma ratio of the oral repeat administration group 1.0
  • the retina / plasma ratio was 1.1, which was almost the same as the retina / plasma ratio (1.0) of the rat administered orally with compound A. It is presumed that most of the preparations for dissolution Z reached the retina from the general circulation blood flow through the nasolacrimal duct and the like.
  • the retinal / plasma ratio was 33.5, and the retinal / plasma ratio (1. 0) and the ophthalmic dissolution preparation Z were 30 times higher than the retina / plasma ratio (1.1). This suggests that the ophthalmic suspension preparation is transferred via the direct transfer route to the retina.
  • FIG. 3 shows the concentration of the compound A in the rat administered with the ophthalmic suspension formulation A1 and the ophthalmic dissolution formulation Z obtained in Test Example 2 for each tissue.
  • rats administered ophthalmic dissolution preparation Z the transfer to the retina was as low as 0.0473 ⁇ g / g despite the dissolution of a higher concentration (400 ⁇ g / mL) than the original solubility of Compound A, and the therapeutic effect was not expected.
  • the transferability to the retina (342 ⁇ g / g) that can be expected to have a sufficient therapeutic effect is generally shown at a content (200 mg / mL) that can be administered as a suspension. It was done.
  • the amount is 7200 times [(342 ⁇ g / mL) when dissolved in spite of being instilled 500 times [(200 mg / mL) / (400 ⁇ g / mL)] when dissolved when suspended. g) / (0.0473 ⁇ g / g)].
  • the cornea and plasma of the anterior eye part in the case of suspension, about 500 times as much as the case of dissolution is instilled. Only a transition was seen.
  • Test Example 3 Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (II) In both eyes of SD rats, 5 ⁇ L of ophthalmic preparation, 5 ⁇ L per eye, was administered once, three times or five times every 5 minutes, and after 60 minutes, compound A2 in the cornea, retina and plasma was administered. Concentration was measured. The result is shown in FIG.
  • FIG. 4 shows that in the ophthalmic suspension preparation, the plasma concentration increased with an increase in the number of administrations.
  • the effect of the number of administrations was not observed, and an amount of Compound A necessary for the drug effect was transferred to the retina after one administration. From this, it can be seen that the ophthalmic suspension preparation of Compound A or a physiologically acceptable salt thereof can avoid an increase in blood concentration with a small number of eye drops, while exhibiting sufficient migration in the retina. It was.
  • Test Example 4 Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (III) Eye drops A3 and eye drops B to G were administered to both eyes of SD rats once by 5 ⁇ L per eye, and the concentration of Compound A in the cornea, retina and plasma was measured 60 minutes later. . The result is shown in FIG. Further, the ophthalmic preparation A3 was diluted with a dispersion medium to prepare ophthalmic suspension preparations (20 mg / mL) having different concentrations and administered to SD rats in the same manner as described above, and after 60 minutes in the retina, cornea and The concentration of Compound A in plasma was measured (III-2). The result is shown in FIG.
  • FIG. 5 shows that the concentration of Compound A in the retina increased with increasing Compound A suspension concentration.
  • Test Example 5 Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (IV) Eye drops H (pH 3), eye drops I (pH 5), or eye drops J (pH 7) were once administered to both eyes of an SD rat once in 5 ⁇ L per eye, and after 60 minutes in the cornea, the retina The concentration of Compound A in the blood and plasma was measured. The result is shown in FIG.
  • Test Example 6 Evaluation of transferability to the posterior segment using rats (V) Instillation of eye drops I, eye drops F, eye drops G, eye drops X1, eye drops X2, eye drops Y1, or eye drops Y2 into each eye of an SD rat once in 5 ⁇ L per eye. Each drug concentration in the retina 60 minutes after administration was measured. The result is shown in FIG.
  • the ophthalmic suspension preparation of Compound A has much higher transferability to the retina than the ophthalmic suspension preparations of Compound B and Compound C, which are aldose reductase inhibitors having the same medicinal effect mechanism. It was.
  • Compound A has an average particle size of 9560 nm even in an ophthalmic suspension formulation, whereas Compound A and Compound C reach the retina in an amount necessary for medicinal effects, while Compound A and Compound C have any average particle size. Only a few reached the retina.
  • Test Example 7 Inhibitory Action on the Cell Migration Enhancement Action of Compound A by VEGF Stimulation
  • HREC normal human retinal capillary endothelial cells
  • CS-C medium Cell System
  • Lucentis was diluted with 4 mL of cell culture medium per 50 ⁇ L of the stock solution.
  • HREC was seeded in a 6-well plate and cultured until the culture density reached 80-90%. 20-24 hours before the evaluation of cell migration by VEGF stimulation, the medium was replaced with a cell culture medium containing 0.1% fetal calf serum concentration. Thereafter, the monolayer cultured cell layer was wound with 200 ⁇ L of a pipette tip at one place for each well, and the length of the wound width was measured under a microscope. After wounding, the medium was replaced with a cell culture medium containing VEGF, various aldose reductase inhibitors (compound A, compound B, compound C) or Lucentis according to the respective test conditions. About 18 hours after the medium was changed, the length of the wound width was measured under a microscope, and the anti-VEGF action was evaluated by comparison with that immediately after the wound. The results are shown in FIG.
  • the enhancement of HREC migration by VEGF stimulation was confirmed, and the migration inhibitory action by Lucentis and aldose reductase inhibitors was confirmed.
  • the migration inhibitory action of HREC by addition of Compound A at 1 nM is similar to the migration inhibitory action by Compound C at 100 nM ((28 ng / mL) / L), and 1000 nM ((320 ng / ML) / L) was stronger than the migration inhibitory effect of Compound B.
  • the migration inhibitory action of Compound A was stronger than the action ratio inferred from the enzyme inhibitory action ratio of each aldose reductase shown in the table below.
  • the migration inhibitory effect of 1 nM compound A was comparable to Lucentis, which is an anti-VEGF antibody.
  • Diabetic Retinopathy INTECH, Phapter 15, “Prophylactic Medical Treatment of Diabetic Retinopathy”, Akihiro Kakehashi et al.
  • compound A When compound A is repeatedly administered orally to SDT rats, a non-obese type 2 diabetes model, retinal capillaries become weak And VEGF production in the retina has been shown to be suppressed.
  • VEGF-related diseases As a result, it is expected that the progression of VEGF-related diseases is expected to be suppressed to some extent by prophylactic administration before VEGF production is enhanced.
  • Compound A was effective for post-onset treatment by attenuating the action of VEGF already produced.
  • Non-Patent Document 1 only shows data on oral administration, and does not show the possibility of progression inhibition by eye drop administration. From this test, it is clear that Compound A or a physiologically acceptable salt thereof shows an inhibitory effect on the cell migration enhancing action by VEGF stimulation and also shows an anti-VEGF action on already produced VEGF. It became clear. That is, the possibility of treatment of age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, etc. after onset associated with VEGF was shown. This anti-VEGF action was stronger than other aldose reductase inhibitors and was as effective as Lucentis, an anti-VEGF antibody preparation.
  • Reference Example 6 Preparation of suspension preparation samples (1) to (4) Preparation of sample (1): In accordance with the procedure described in Example 1, using a dispersion medium (pH 5.0) and beads having a diameter of 0.5 mm An eye drop suspension preparation (250 mg / mL) containing Compound A was prepared. Preparation of sample (2): A polyoxyethylene hydrogenated castor oil was used instead of polysorbate 80, and a dispersion medium (pH 5.0) containing 0.3% polyoxyethylene hydrogenated castor oil was prepared according to Reference Example 2.
  • sample (3) 1 g of compound A pulverized with a jet mill was added to 10 g of glycerin and stirred for 1 hour with a stirrer to prepare a suspension preparation containing compound A.
  • sample (4) 1 g of compound A pulverized by a jet mill was added to 10 g of water and stirred for 1 hour with a stirrer to prepare a suspension preparation containing compound A.
  • Test Example 8 Compound A solubility measurement samples (1) to (4) 500 ⁇ L of each was centrifuged (150,000 rpm, 10 minutes, 5 ° C.) using a centrifuge HITACH-GX manufactured by Hitachi Koki Co., Ltd. To 100 ⁇ L of the obtained supernatant, 800 ⁇ L of 1% HPMC and 100 ⁇ L of acetonitrile or water were added, and the mixture was shaken by vortex to obtain a content measurement sample. The amount of Compound A dissolved was measured using an ultrahigh performance liquid chromatograph manufactured by SHIMADZU, column YMC-Pack Pro C18 5 ⁇ m 150 ⁇ 4.6 mm. The results are shown in Table 6.
  • the ratio of Compound A dissolved in the aqueous suspension was very small.
  • the average particle diameter of the compound A suspended in the samples (1) and (2) was measured by the method described above, it was 244.2 nm and 276.7 nm, respectively.
  • the sample (2) was stored at 25 ° C. for 1 month and 2 months, the particle sizes were 277.3 nm and 256.9 nm, respectively.
  • the ophthalmic preparation of the present invention has excellent posterior ocular segment migration and is suitable for treatment of ocular diseases including posterior ocular diseases. Used for

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Abstract

　本発明は、全身暴露による副作用を回避することが可能であり、後眼部疾患等に有用で安定性に優れた（Ｒ）－（－）－２－（４－ブロモ－２－フルオロベンジル）－１，２，３，４－テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－４－スピロ－３'－ピロリジン－１，２'，３，５'－テトラオン含有点眼用懸濁製剤に関する。

Description

点眼用懸濁製剤
　本発明は、特に後眼部疾患に対し有用な（Ｒ）－（－）－２－（４－ブロモ－２－フルオロベンジル）－１，２，３，４－テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－４－スピロ－３’－ピロリジン－１，２’，３，５’－テトラオン含有点眼用懸濁製剤に関する。
　硝子体、網膜、脈絡膜、強膜などといった後眼部組織は、視機能の中心を担う領域であり、この領域が侵されると、著しい視力の低下や失明に至るケースも少なくない。代表的な後眼部疾患としては加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、黄斑浮腫、近視性脈絡膜新生血管、網膜静脈閉塞症、脈絡膜新生血管、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、増殖性硝子体網膜症、中心性漿液性脈絡網膜症などが挙げられる。特に、加齢黄斑変性又は糖尿病網膜症は、欧米諸国や日本などの先進国での壮年から老年期における失明の主要原因疾患となっており、眼科臨床及び社会的にも非常に問題視される疾患とされている。（特許文献１）。
　一般に網膜などの後眼部への薬物送達は、血液経由の場合は後眼部の血液網膜関門（blood－retinal barrier；BRB）によって著しく制限されている。点眼した場合は、大部分が涙液のターンオーバーによって薬物は眼表面から速やかに排出されて、さらには鼻涙管を介して全身循環の血流に移行する（非特許文献１）。そのため、点眼剤における薬物送達は、点眼剤中の薬物を１００とすると組織中最も移行する角膜で０．１～０．５、前房水・虹彩および毛様体では０．０１～０．１、水晶体や硝子体では０．０００１程度と極めて低いことが知られている（非特許文献２）。そして、後眼部は水晶体や硝子体よりさらに奥に存在するため、一般にはほとんど点眼によって後眼部に薬物を送達させることは出来ないと考えられる。また、薬物の水への溶解性が低いために利用される懸濁点眼剤は、薬物が水に溶解されていないため一般的に眼内部に吸収されにくく（非特許文献３）、懸濁させた点眼剤における後眼部への薬物送達については、通常、溶液点眼剤に比べてさらに困難であると考えられる。臨床の場においても、懸濁点眼剤は存在するものの、結膜炎等の前眼部疾患への適用に限られている。また、後眼部への薬物送達のためには硝子体内注射や手術の他、全身循環血を介した経路以外は困難と考えられている（特許文献４、非特許文献４）。
　後眼部疾患は重篤な症状を引き起こす眼疾患にもかかわらず、有効な治療薬は乏しく、また後眼部という薬剤が到達しにくい部位がターゲットであることから投与手段も限定的で、現在抗血管内皮細胞増殖因子（抗ＶＥＧＦ）薬の硝子体内注射、ステロイドの硝子体内注射やテノン嚢下注射、光線力学療法（ＰＤＴ）、硝子体手術等による治療が行われている。しかし、これらいずれの治療方法においても、眼内への注射など患者にとって極めて侵襲的で苦痛を伴う方法が取られており、点眼投与のような新たな投与法の開発が切望されている。
　（Ｒ）－（－）－２－（４－ブロモ－２－フルオロベンジル）－１，２，３，４－テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－４－スピロ－３’－ピロリジン－１，２’，３，５’－テトラオン（ラニレスタット）（以下「化合物Ａ」と記載する）は強力なアルドースリダクターゼ阻害作用を有し、かつ毒性の低い化合物であり、糖尿病性合併症治療薬として有用である（特許文献２、特許文献３）。
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日本特許公開第２００９－１９６９７３号 日本特許第２５１６１４７号 国際公開第１９９９／２０２７６号 日本特許公開第２００５－９７２７５号
「網膜へのドラッグデリバリーの現状と課題」高島由季、薬剤学、７２（２）、１１７－１２１（２０１２） スタンダード薬学シリーズ７「製剤化のサイエンス」日本薬学会編、東京化学同人出版、第４章「代表的な製剤」２２・２点眼剤、１０３頁－１０５頁 「点眼剤の適正使用ハンドブック－Ｑ＆Ａ－」 社団法人東京医薬品工業協会 点眼剤研究会他 作成、社団法人日本眼科医会 監修、平成２３年９月初版、５頁 「網膜疾患治療剤の開発を指向した経口投与可能なカルパイン阻害剤の探索研究」白崎仁久、金沢大学大学院自然科学研究科、博士学位論文要旨 論文内容の要旨および論文審査結果の要旨、６０５頁－６１０頁、２００７年９月発行
　全身循環血を介して後眼部に有効濃度の薬物を送達するためには、血液網膜関門（ＢＲＢ）の存在から非常に高投与量で全身循環する血中の薬物濃度を高める必要があると考えられる。従って、本発明が解決しようとする課題は、後眼部疾患に対し有用で、高濃度全身暴露による副作用を回避でき、かつ化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の安定な点眼用製剤を提供することにある。
　発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を分散媒中に懸濁させ、点眼投与することで、薬物の安定性を保持しながら、全身暴露量を抑制しつつ、後眼部への治療に必要な高い移行性を達成できることを見出し、更に化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が加齢黄斑変性などの眼疾患に有効な薬理活性を有することを見出した。すなわち、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を点眼剤として懸濁させることで、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
[項１]
　（Ｒ）－（－）－２－（４－ブロモ－２－フルオロベンジル）－１，２，３，４－テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－４－スピロ－３’－ピロリジン－１，２’，３，５’－テトラオン（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理的に許容される塩を含有する点眼用懸濁製剤。
[項２]
　化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が分散媒中に懸濁している懸濁液である項１に記載の製剤。
[項３]
　懸濁液中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が、１ｎｍ以上２０μｍ以下である項２に記載の製剤。
[項４]
　懸濁液中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が、１０ｎｍ以上２０μｍ以下である項３に記載の製剤。
[項５]
　分散媒が水系の分散媒である項２～４のいずれかに記載の製剤。
[項６]
　分散媒が分散剤及び／又は界面活性剤を含む項２～５のいずれかに記載の製剤。
[項７]
　分散媒が分散剤及び界面活性剤を含む項６に記載の製剤。
[項８]
　懸濁液のｐＨが３～９である項２～７のいずれかに記載の製剤。
[項９]
　懸濁液の浸透圧が２０～１０００ｍＯｓｍである項２～８のいずれかに記載の製剤。
[項１０]
　懸濁液１ｍＬ中に化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を１～５００ｍｇ含む項２～９のいずれかに記載の製剤。
[項１１]
　懸濁液中に溶解している化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の割合が製剤に含まれる全ての化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の０．００１％～１０％である項２～１０のいずれかに記載の製剤。
[項１２]
　懸濁液中に溶解している化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の割合が製剤に含まれる全ての化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の０．００１％～１％である項２～１１のいずれかに記載の製剤。
[項１３]
　前眼部疾患及び／又は後眼部疾患を治療するための項１～１２のいずれかに記載の製剤。
[項１４]
　疾患が、ＶＥＧＦが関連する疾患である、項１３に記載の製剤。
[項１５]
　疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、近視性脈絡膜新生血管、網膜静脈閉塞症及び／又は白内障である項１３又は１４に記載の製剤。
[項１６]
　（１）化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を含有する製剤と、（２）分散媒を含む製剤を組み合わせてなるキット。
[項１７]
　製剤（１）における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が１ｎｍ以上２０μｍ以下である項１６に記載のキット。
[項１８]
　製剤（１）における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が１０ｎｍ以上２０μｍ以下である項１７に記載のキット。
[項１９]
　製剤（１）または製剤（２）が、分散剤及び／又は界面活性剤を含んでもよい項１６～１８のいずれかに記載のキット。
[項２０]
　前眼部疾患及び／又は後眼部疾患を治療するための項１６～１９のいずれかに記載のキット。
[項２１]
　化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を含有する、ＶＥＧＦが関連する疾患の治療剤。
[項２２]
　疾患が加齢黄斑変性及び／又は糖尿病網膜症である項２１に記載の治療剤。
[項２３]
　懸濁液中に分散剤及び／又は界面活性剤を含む項２～４のいずれかに記載の製剤。
[項２４]
　懸濁液中に分散剤及び界面活性剤を含む項２３に記載の製剤。
　本発明によれば、前眼部疾患だけでなく後眼部疾患に対しても治療効果を有し、高濃度全身暴露による副作用を回避することが可能となり、かつ化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の安定な点眼用製剤を提供できる。また、化合物Ａは水への溶解性は低く、溶液製剤としては低い濃度の製剤を選択せざるを得ないが、懸濁製剤とすることで、高濃度の製剤が可能となり、現実的な投与回数、たとえば１日あたり１回から６回の投与で治療に十分な量の患部への薬物送達が期待できる。更に、化合物Ａは溶液状態での安定性が非常に低く時間単位での分解という課題があったが、懸濁製剤とすることで現実的な保存に十分耐えられる保存安定性にも優れた点眼用製剤を提供できる。この点眼用製剤により、現在、主に侵襲的な治療法しか行われていない後眼部疾患においても、患者に負担の少ない形態での画期的な治療を提供することができる。
点眼用懸濁製剤中の化合物Ａの保存安定性および化合物Ａの粒子径の保存安定性評価を示す。上図の縦軸は懸濁製剤中の化合物Ａの含量（％）を、横軸は時間（ｈｒ）を示す。下図の縦軸は懸濁製剤中の化合物Ａの平均粒子径（ｎｍ）を、横軸は時間（ｄａｙ）を示す。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（Ｉ－１）を示す。４つの図のうち、上の３つの図について、縦軸は、各組織中の化合物Ａ濃度を示す（上図から順に点眼剤Ａ１、点眼剤Ｚ、経口投与）。縦軸の単位は、網膜及び角膜中濃度についてはμｇ／ｇ、血漿中濃度についてはμｇ／ｍＬである。横軸は各組織（左から順に網膜、角膜、血漿）を示す。４つの図のうち、最も下の図では、縦軸は網膜／血漿比率を、横軸は投与した製剤を示す（左から順に経口、点眼剤Ｚ、点眼剤Ａ１）。なお、網膜／血漿比率は、「網膜中化合物Ａ濃度（μｇ／ｇ）÷血漿中化合物Ａ濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（Ｉ－２）を示す。図中、縦軸は各組織中の化合物Ａ濃度（上図から順に網膜、角膜、血漿）を示す。縦軸の単位は、網膜及び角膜中濃度についてはμｇ／ｇ、血漿中濃度についてはμｇ／ｍＬである。横軸は投与した製剤を示す（左から順に点眼剤Ｚ、点眼剤Ａ１）。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＩ）を示す。図中、縦軸は各組織中の化合物Ａ濃度（上図から順に網膜、角膜、血漿）を示す。横軸は点眼回数を示す（左から順に１回／眼、３回／眼、５回／眼）。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＩＩ）を示す。４つの図のうち、上の３つの図について、縦軸は各組織中の化合物Ａ濃度（上図から順に網膜、角膜、血漿）を示す。横軸は投与した懸濁製剤と、懸濁製剤中の化合物Ａの平均粒子径（ｎｍ）を示す。４つの図のうち、最も下の図では、縦軸は網膜／血漿比率を、横軸は投与した懸濁製剤と、懸濁製剤中の化合物Ａの平均粒子径（ｎｍ）を示す。なお、網膜／血漿比率は、「網膜中化合物Ａ濃度（μｇ／ｇ）÷血漿中化合物Ａ濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＶ）を示す。図中、縦軸は各組織中の化合物Ａ濃度（上図から順に網膜、角膜、血漿）を示す。縦軸の単位は、網膜及び角膜中濃度についてはμｇ／ｇ、血漿中濃度についてはμｇ／ｍＬである。横軸は投与した懸濁製剤と、懸濁製剤のｐＨを示す。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（Ｖ）を示す。図中、縦軸は網膜中の各化合物濃度を示す（μｇ／ｇ）。横軸は投与した懸濁製剤と懸濁製剤中の化合物Ａ、ＢまたはＣの平均粒子径（ｎｍ）を示す。 化合物Ａの抗ＶＥＧＦ作用の効果を示す。図中、縦軸はＨＲＥＣの遊走距離（創傷直後の創傷幅の長さに対する遊走距離（％））を示す。横軸は各試験条件（ＤＭＳＯ（％）、添加した薬物（アルドース還元酵素阻害剤またはＬｕｃｅｎｔｉｓ／ルセンティス（登録商標）（一般名：ラニビズマブ））と添加量、ＶＥＧＦ濃度（ｎｇ／ｍＬ））を示す。 ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＩＩ－２）を示す。縦軸は各組織中の化合物Ａ濃度（上図から順に網膜、角膜、血漿）を示す。横軸は投与した懸濁製剤の濃度を示す。　なお、図２、図３、図４～図９の図面の右上に示すｍｅａｎ±ｓｅは、各群の値は検体のｍｅａｎ（平均値）を、また、誤差範囲としてｓｅ（標準誤差）を示すことを表している。ｎ数は１群当たりの検体数を示す。
　本発明の製剤は、点眼用製剤であり、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩（以下、まとめて「本薬物」と言う場合がある）が分散媒中に懸濁していることを特徴とする。該製剤は、化合物Ａ又はその生理的に許容される塩と分散媒を含有する点眼用懸濁液、又は化合物Ａ又はその生理的の許容される塩と分散媒とを使用時に分散媒に懸濁させる用時調製型のキットなどである。
　本発明の製剤において、活性成分として含有する化合物Ａは、フリー体であっても、その生理的に、すなわち薬学的に許容される無機及び有機塩基との塩であってもよい。無機及び有機塩基の具体例としては、アルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム）、水酸化アンモニウム、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ピペリジン、リジン等との塩が挙げられる。また、本発明における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩は、水和物および溶媒和物の形で存在することもあるので、それらの化合物も本発明における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩に含まれる。それらの詳細については、特許文献２に記載される。化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の製造方法は、例えば、特許文献２に記載の方法に従って製造することができる。
　本発明における「懸濁」とは、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が分散媒中に固体で存在して分散できる状態をいい、本薬物が一部分散媒中に溶解しているものも含む。保存により、本薬物が沈降や凝集した場合に、使用前に軽く振とうすることにより元の懸濁状態に戻るものも含む。リポソームやエマルジョン製剤のような、油脂系の液滴に薬物を分散、乳化あるいは封入させたものは含まない。詳しくは発明の製剤において、本薬物の粒子を脂質もしくは油成分で被覆（コーティング）する必要はなく、例えば本薬物がリポソーム中に封入された懸濁製剤、本薬物が油脂系の液滴中に包含され、当該液滴が水中に分散された水中油型エマルジョン製剤は本発明に含まれない。
　溶解している化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の割合は、懸濁製剤中に含まれる全ての化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の通常０．００１％～１０％であり、後眼網膜への移行性、化学的安定性、粒子径等の物理的安定性の観点から好ましくは０．００１％～５％であり、更に好ましくは０．００１％～２％であり、より好ましくは０．００１％～１％であり、更に好ましくは０．００１％～０．５％であり、特に好ましくは０．００１％～０．１％である。すなわち、好ましくは本発明の製剤は、添加剤として、本薬物の溶解度を向上させる溶解補助効果を有する成分を含まないが、本薬物の溶解度に影響を与えない程度の量であれば溶解補助効果を有する成分を含んでいても良い。当該溶解補助効果を有する成分として、例えばシクロデキストリン等を挙げることができる。
　本発明における「分散」とは、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が分散媒中に均一に浮遊している状態をいい、点眼剤として使用する際に支障のない限り、一時的な浮遊や、一部凝集しているもの、又は一部浮遊しているものも含む。
　懸濁製剤中に懸濁している固体の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径は、特に限定はないが、製造時の取扱いの容易性および後眼部移行性の観点から、好ましくは２０μｍ以下であり、より好ましくは２μｍ以下であり、さらに好ましくは７００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは６５０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは４６０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは３００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは２３０ｎｍ以下であり、特に好ましくは２００ｎｍ以下である。
　また、本懸濁製剤中に懸濁している固体の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径は、好ましくは１ｎｍ以上であり、より好ましくは５ｎｍ以上であり、更に好ましくは１０ｎｍ以上である。平均粒子径の範囲は、好ましくは１０ｎｍ以上２０μｍ以下もしくは１ｎｍ以上２０μｍ以下であり、より好ましくは１０ｎｍ以上２μｍ以下もしくは１ｎｍ以上２μｍ以下であり、より好ましくは１０ｎｍ以上７００ｎｍ以下もしくは１ｎｍ以上７００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１ｎｍ以上６５０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１ｎｍ以上４６０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１ｎｍ以上３００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１０ｎｍ以上３００ｎｍ以下もしくは５ｎｍ以上３００ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１ｎｍ以上２３０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは５ｎｍ以上２３０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは５ｎｍ以上２００ｎｍ以下であり、特に好ましくは１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下もしくは１０ｎｍ以上２３０ｎｍ以下である。
なお、本明細書中における平均粒子径とは、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩、粉砕後の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩、あるいは懸濁製剤中に懸濁している固体の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径の値であり、懸濁製剤中の本薬物の平均粒子径とは、懸濁液中に固体の状態で存在する本薬物の平均粒子径を意味する。本明細書において、平均粒子径は、以下に記載する装置および方法で算出された平均粒子径の値を意味する。懸濁製剤中で測定する場合は、測定できる程度の濃度に希釈して測定することができる。
　上記粒子径を満たす化合物Ａまたはその生理的に許容される塩は、湿式粉砕または乾式粉砕により調製することができる。
　湿式粉砕の場合、攪拌機やホモジナイザー等を用い、適当な溶媒（粉砕溶媒）中で撹拌または分散して製造することができる。また、ボールミル、ビーズミル、ホモミキサー、ホモジナイザーのほか、スターバースト等の湿式ジェットミル等の粉砕機を用いて適当な溶媒（粉砕溶媒）中で粉砕して製造することができ、例えば、伊藤製作所社製の遊星ボールミル（ＬＰ－４／２）を用いて、粉砕溶媒中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の含量が１～５００ｍｇ／ｍＬ、３０～３７０ｒｐｍで粉砕することができる。
　乾式粉砕の場合、スパイラルジェットミル、ジェット・オー・ミル、カウンタージェットミル、ジェットミル等の気流粉砕機、ハンマーミル、スクリーンミル、サンプルミル等のせん断型粉砕機、ボールミル、ビーズミル等の転動ボールミル類等で製造することができる。
　また、本発明で使用する粉砕した化合物Ａまたはその生理的に許容される塩は、分散や粉砕等により粒子を小さくするブレイクダウン法の他、スプレードライや晶析、凍結乾燥を用いたビルドアップ法等により製造することができる。
　本発明の製剤は、最終的に懸濁液剤の形態で点眼できればよい。例えば、乾式粉砕を用いて本発明の製剤を作る場合、上記の粉砕装置を用いて化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を必要な粒子径、具体的には上述の平均粒子径を有する粒子に粉砕し、分散媒に懸濁させて製剤を調製することができる。化合物Ａまたはその生理的に許容される塩と分散媒を個々に提供し、使用時に化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を分散媒に懸濁させる用時調製型の形態（すなわち、キット）も含む。
　湿式粉砕を用いて本発明の製剤を作る場合、上記の粉砕装置に化合物Ａまたはその生理的に許容される塩と粉砕溶媒を添加して化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を粉砕したものを、凍結乾燥等で粉砕溶媒を除いて凍結乾燥品とし、分散媒に凍結乾燥品を懸濁させて製剤を調製することができる。凍結乾燥品と分散媒を個々に提供し、使用時に凍結乾燥品を分散媒に懸濁させる用時調製型の形態（キット）も含む。すなわち、（１）本薬物を含む組成物の凍結乾燥品、および（２）分散媒を含むキットも又、本発明の態様である。下記に示すように化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を界面活性剤、分散剤等の添加剤を含んだ粉砕溶媒を用いて粉砕し、凍結乾燥等で粉砕溶媒を除いた場合は、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の凍結乾燥品が界面活性剤、分散剤等の添加剤を含む場合もあり、更に粉砕溶媒の一部を含む場合もある。
　また、上記の場合、実施例の様に、粉砕溶媒として分散媒を加え、粉砕した後の懸濁液を凍結乾燥せずに、そのまま、または必要に応じて希釈して、本発明の製剤を提供することもできる。
　本発明の製剤には、１回や１週間等の単位で使い切る製剤や、用時懸濁後の使用期間が１週間や１か月等に限られている製剤も含む。
　本明細書における分散媒とは、生体で使用でき、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を液中に分散させることができる溶媒であり、好ましくは、化合物Ａの溶解度が０．４ｍｇ／ｍＬ以下、さらに好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以下の溶媒であれば、その組成は一成分でも複数成分の混合物でもよい。具体的には水の他、ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、流動パラフィンのような油等の溶媒が挙げられる。またこれら溶媒の２種類以上の混合物でもよい。
　分散媒は好ましくは水系の分散媒である。ここで水系の分散媒とは、分散媒として用いられる溶媒の総量のうち９０重量％以上が水であるものをいい、好ましくは分散媒の総量のうち９５重量％以上が水であり、更に好ましくは総量のうち９９重量％以上が水である水系の溶媒である。分散媒として用いられる溶媒は、特に好ましくは水である。
　尚、水系の分散媒に含まれる水以外の溶媒としては、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ウイキョウ油、フェニルエチルアルコール、モノエタノールアミン、酢酸、氷酢酸、塩酸、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール等が挙げられるが、前述のとおり、ここでいう分散媒には、本薬物が油脂系の液滴中に包含され、当該液滴が水中に分散された水中油型エマルジョン製剤となるものは含まれない。
　分散媒は、分散剤、界面活性剤、湿潤剤、等張化剤、緩衝化剤、防腐剤、ｐＨ調整剤等の添加剤を含んでもよい。好ましくは、分散媒は界面活性剤及び又は分散剤を含む。
　好ましい分散媒としては、水が挙げられ、より好ましくは、分散媒は水に界面活性剤または分散剤のいずれかを含むものであり、さらに好ましくは、水に界面活性剤及び分散剤の両方を含むものである。
　また、好ましい分散媒として、水系の溶媒に界面活性剤または分散剤のいずれかを含むもの、水系の溶媒に界面活性剤及び分散剤の両方を含むものも挙げられる。
　また、分散媒のｐＨは、通常３～９であり、好ましくは３～８、さらに好ましくは４～７、特に好ましくは４～６である。分散媒のｐＨは、下記のｐＨ調整剤により調整することができる。
　本明細書における粉砕溶媒とは、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を湿式粉砕する際に用いる溶媒であり、化合物Ａの溶解度が好ましくは０．４ｍｇ／ｍＬ以下の溶媒である。具体的には水、グリセリン、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール等のポリアルコール等、ヘプタンまたはヘキサン等が挙げられる。またこれら溶媒の２種類以上の混合物でもよい。混合溶媒として好ましくは総量のうち９０重量％以上が水であり、適宜前記のポリアルコールを含んでいる水系の溶媒であり、より好ましくは総量のうち９５重量％以上が水である水系の溶媒であり、特に好ましくは総量のうち９９重量％以上が水である水系の溶媒である。粉砕溶媒は、好ましくは水であり、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の粉砕を助けるため、必要に応じて界面活性剤、分散剤、塩等の添加剤を含んでいてもよい。また、前述の分散媒を粉砕溶媒として用いることも可能である。
　本発明の製剤は、滅菌して提供してもよく、例えば、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を分散媒に分散させた懸濁液をろ過滅菌または放射線滅菌または高圧蒸気滅菌することができる。必要に応じて、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩、懸濁液の凍結乾燥品または分散媒、必要に応じて添加剤を、それぞれ別々に滅菌してもよい。また、本発明の点眼用製剤の全製造工程または一部製造工程を無菌環境下で製造することもできる。
　本発明における粒子径の測定は、これらに限定されないが、粒子の状態、粒子径の大きさ等を考慮し、例えば以下の方法で行った。
　懸濁製剤中に分散している固体の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の粒子径は、１ｎｍ～５μｍ、好ましくは１０ｎｍ～５μｍの粒子径のものについては、懸濁製剤中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の含量を２００～５００μｇ／ｍＬ程度になるように分散媒で希釈したサンプルを測定器；Zeta Sizer nano S (Malvern Instruments Ltd, Malvern UK)を用いて行った。算出法としては、動的光散乱法を用いて、Material RI及びDispersant RIを１．３３とし、算出した粒子径のZ-average値の平均値を示した。
　懸濁製剤中に分散している固体の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の粒子径は、５μｍ以上の粒子径のものについては、懸濁製剤中の化合物Ａの含量を１０～５０μｇ／ｍＬ程度に分散媒で希釈したサンプルを超音波１５秒間、スターラー速度１２００ｒｐｍで分散させ、レーザー回折式粒度分布測定装置；HEROS/BR-multi及び湿式分散ユニットCUVETTE（Sympatec GmbH）にて、レンジＲ３、５０ｍＬセルを用い、トリガー条件（タイムベース：１０００．００ｍｓ、測定：１０ｓ実時間）で測定し、計算モードＨＲＬＤで算出した粒子径のＸ５０値を示した。
　乾式粉砕した化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の粒子径は、レーザー回折式粒度分布測定装置；HEROS/BR-multi及び乾式分散ユニット（Sympatec GmbH）を用い、レンジＲ３、トリガー条件（開始：ｃｈ．２５≧０．５％、停止：ｃｈ．２５≦０．５％が２秒間または実時間１０秒間）、分散圧２．０ｂａｒで測定し、計算モードＬＤで算出した粒子径のＸ５０値を示した。
　本製剤に使用できる界面活性剤としては、分子内に親水基および疎水基（親油基）を持つ物質で、一定濃度以上でミセルやベシクル、ラメラ構造を形成し、極性物質と非極性物質を均一に混合させ、表面張力を弱める作用を持つ分子量６０００以下の物質で、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩のナノ化粒子の湿潤に寄与する添加剤である。具体的にはポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、ステアリン酸ポリオキシル４０、グリセリン、プロピレングリコール、コンドロイチン硫酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、アルキルアリルポリエーテルアルコール、コレステロール、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタンセスキオレイン酸エステル、スクワラン、ステアリルアルコール、セタノール、セトマクロゴール１０００、セバシン酸ジエチル、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、トリオレイン酸ソルビタン、ノニルフェノキシポリオキシエチレンエタン硫酸エステルアンモニウム、ポリオキシエチレンオレイルアミン、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビットミツロウ、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、マクロゴール４００、マクロゴール４０００、マクロゴール６０００、モノオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、ラウリルジメチルアミンオキシド液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ジエタノールアミド、ラウロイルサルコシンナトリウム、ラウロマクロゴール、リン酸ナトリウムポリオキシエチレンラウリルエーテル、リン酸ポリオキシエチレンオレイルエーテルなどが挙げられる。
　好ましくは、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、ステアリン酸ポリオキシル４０、グリセリン、プロピレングリコール、コンドロイチン硫酸ナトリウムおよびモノステアリン酸アルミニウム、マクロゴール４０００、マクロゴール６０００が挙げられ、より好ましくはポリソルベート８０、塩酸アルキルジアミノエチルグリシンおよびポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が挙げられる。また、２種以上、好ましくは２～３種類の界面活性剤を添加してもよい。
　界面活性剤の含量は、懸濁液の総量の０．００１～５重量％が好ましい。
　本製剤に使用できる分散剤としては、分子量６０００を超える高分子で、ナノ粒子の間に入って凝集防止に寄与する添加剤である。具体的にはカルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロースナトリウム）、チロキサポール、ガディガム、アラビアゴム、アラビアゴム末、カラヤガム、キサンタンガム、アミノアルキルメタクリレートポリマーＲＳ、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルスターチナトリウム、カンテン末、ジオクチルソジウムスルホサクシネート、デキストリンなどが挙げられる。
　好ましくは、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロースナトリウム）およびチロキサポールが挙げられ、より好ましくは、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）およびポリビニルアルコールが挙げられる。また、２種以上の分散剤を添加してもよい。
　分散剤の含量は、懸濁液の総量の０．００１～５重量％が好ましい。
　湿潤剤としてはエタノール、オレイン酸、ケイ酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、コリンリン酸塩などが挙げられる。
　等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ソルビトール、ブドウ糖、ショ糖、Ｄ-マンニトール、エタノール、オレイン酸、ケイ酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、コリンリン酸塩などが挙げられる。好ましくは塩化ナトリウムが挙げられる。
　緩衝化剤としては、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタモールなどが挙げられる。好ましくは、リン酸水素二ナトリウム及びクエン酸が挙げられる。
　防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウムなどの第４級アンモニウム塩、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸およびその塩、グルコン酸クロルヘキシジン液などが挙げられる。
　ｐＨ調整剤としては、塩酸、クエン酸、氷酢酸、リン酸、リン酸二水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム水和物などが挙げられる。
　必要に応じて上記添加剤を含む本発明の点眼用懸濁製剤は、通常分散媒１ｍＬに対して化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を１～５００ｍｇ、好ましくは５～３００ｍｇ、さらに好ましくは１０～３００ｍｇ、さらに好ましくは１０～２００ｍｇ、特に好ましくは２０～３００ｍｇ、２５～３００ｍｇ、１０～１５０ｍｇ、又は２５～２３０ｍｇ含有するように、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を加えて調製されるが、必ずしもこの量の範囲に限定されるものではない。
　本発明の製剤の懸濁液のｐＨは、通常３～９であり、好ましくは３～８、さらに好ましくは４～７、特に好ましくは４～６である。懸濁液のｐＨは、上記のｐＨ調整剤により調整することができる。
　本発明の製剤の懸濁液の浸透圧は、通常２０～１０００ｍＯｓｍであり、好ましくは１００～７００ｍＯｓｍであり、より好ましくは１８０～５００ｍＯｓｍであり、特に好ましくは２００～３６０ｍＯｓｍである。懸濁液の浸透圧は、上記の等張化剤により調整することができる。
　上記懸濁液の浸透圧は、懸濁液を遠心分離等して回収した上澄み液を測定することで得ることができ、例えば、アークレイ株式会社製の浸透圧測定装置「オズモスタットＯＭ－６０４０」を用いて測定することができる。
　本発明の製剤は、薬理効果を阻害しない範囲で、他の有効成分を含有することができる。
　本発明によれば、以下の試験例で示すように、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が、ＶＥＧＦ刺激による細胞遊走亢進作用に対して抑制作用を有することが判明した。従って、本発明の製剤に含まれる化合物Ａまたはその生理的に許容される塩は、アルドースリダクターゼ阻害作用、ＶＥＧＦ産生抑制作用およびＶＥＧＦ刺激による細胞遊走亢進作用の抑制作用を有することから、種々の眼疾患に対して治療効果を有することが期待される。そして、本発明の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の懸濁製剤は、特に後眼部移行性に優れるため、加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、黄斑浮腫、近視性脈絡膜新生血管、網膜静脈閉塞症、脈絡膜新生血管、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、増殖性硝子体網膜症、中心性漿液性脈絡網膜症などの後眼部に薬物を投与する必要がある疾患（後眼部疾患）に適用することも期待できるが、これらに限定されない。
　本発明の製剤は、特にＶＥＧＦが関連する疾患、ＶＥＧＦが関連して発症する疾患、またはＶＥＧＦが関連する発症後の疾患に適用することが期待できる。
　また、角膜炎、結膜炎、血管新生緑内障、ドライアイ、白内障など、前眼部に薬物を投与する必要がある疾患または血液房水関門（blood－aqueous barrier；BAB）や角膜を透過させる必要がある疾患に本発明の製剤を適用しても、十分な治療効果が期待できる。
　本発明の点眼用懸濁製剤の用法・用量は、薬効、投与経路、症状、年齢、体重などによって適宜定められる。例えば、１～５００ｍｇ／ｍＬの化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を含む懸濁製剤を１回量１～２滴、１日１～６回程度、各眼ごとに点眼することが好ましい。通常、一滴あたりの点眼量は２０～８０μＬ、好ましくは３０～５０μＬである。また、本発明の製剤の投与期間は、症状の程度等により異なるが、例えば、1週間以上、好ましくは約１～４週間、より好ましくは約４週間以上である。
　また、本発明の製剤は、ヒトに限らず、サル、ウシ、ウマ、イヌ、ネコなどの哺乳類などの眼疾患の治療にも用いることができる。
　以下、本発明を実施例、参考例、比較例、試験例等により説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
参考例１：化合物Ａの製造
　T. Negoro et. al. J. Med. Chem. 1998, 41, 4118-4129に記載の方法により得られた化合物Ａの粗生成物（１０ｇ）に活性炭（５０％ｗｅｔ、０．８ｇ）および２－プロパノール（１０１ｇ）を加え、反応液を還流温度（約８４℃）まで加熱し、３０分間保温した。同温度でろ過後、２－プロパノール（１３．８ｇ）で洗浄し、得られた溶液を７５℃以上で加温し、反応液を６０℃まで冷却し、１時間保温後、０℃まで冷却した。析出した固体をろ取、減圧乾燥し、化合物Ａの白色結晶を得た（９．３ｇ）。ＸＲＤ　；　２θ＝１１．５，　１５．４，　１５．７，　１６．３，　１６．９，　１８．２，　１９．３，　２０．１，　２０．９，　２１．６，　２２．２，　２３．３，　２４．０，　２４．７，　２５．１，　２６．４，　２７．５，　２８．４，　２８．８，　２９．６，　２９．９，　３０．９，　３１．９，　３２．４　示差走査熱量測定（ＤＳＣ）において、補外融解開始温度が１８６．７℃である吸熱ピークを示した。
　なお、上記粉末Ｘ線回折測定には、Powder X-ray diffraction system XRD-6100 (Shimadzu Corp.)を用い、Ｘ線管球をＣｕＫα（波長：１．５４オングストローム）、管電圧を３０．０ｋＶ、管電流を２０．０ｍＡ、駆動軸をθ～２θ、測定範囲を５～４０度、ステップ幅を０．０２０度、速度を２．００（度/分）、計数時間を０．６０秒間の条件で測定した。また、上記示差走査熱量測定（ＤＳＣ）には、Thermo Plus 2 (Rigaku Corporation)を用い、アルミニウム製容器に試料約１０ｍｇを秤量し、空気気流下、昇温速度毎分５℃で２５℃～２５０℃までの条件で測定した。
　上記製法で得られた化合物Ａをジェットミルにて種々の条件で粉砕し、平均粒子径の異なる３サイズの化合物Ａを得た。得られた化合物Ａの平均粒子径は、それぞれ、１．４３μｍ、６．２９μｍ、２１．９８μｍであった。
　なお、上記ジェットミルにて粉砕（乾式粉砕）した化合物Ａの平均粒子径は、前記のレーザー回折式粒度分布測定装置を用いて測定し、計算モードＬＤで算出した粒子径のＸ５０値を示した。
参考例２：分散媒（ｐＨ５．０）の調製
　０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ａ）に、０．０１ｍｏｌ／Ｌクエン酸水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ｂ）をｐＨ＝５．０になるまで添加し（添加割合：（ａ）：（ｂ）＝約１：１）、ｐＨ５．０－クエン酸－リン酸緩衝液を得た。ヒドロキシプロピルメチルセルロース２０ｇを精製水３８０ｇに溶解させて５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液を４００ｇ調製し、これにｐＨ５．０－クエン酸－リン酸緩衝液１６００ｇを加えて２０００ｇとし、１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液を得た。１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液４００ｇに２７～３３％塩酸アルキルジアミノエチルグリシン水溶液を５００ｍｇ加えて溶解させ、さらにポリソルベート８０を２．５ｇ加えて溶解させた。１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液を加えて全量を５００ｇとし、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸でｐＨ５．０に調整し、分散媒（ｐＨ５．０）を得た。上記で調製した分散媒（ｐＨ５．０）の組成を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
実施例１：点眼用懸濁製剤の調製
　ジェットミルで粉砕した化合物Ａ（平均粒子径：１．４３μｍ）４ｇおよび参考例２で得られた分散媒（ｐＨ５．０）１２ｍＬをスクリュー管に加え、スターラーで３０分間撹拌した。粉砕ポットに撹拌後のサンプル全量を加え、スクリュー管に付着したサンプルを分散媒４ｍＬで洗い込んだ。粉砕ポットに以下に記載した各直径サイズのジルコニア製ビーズを５０ｇ加えた。伊藤製作所社製の遊星ボールミル（ＬＰ－４／２）に粉砕ポットをセットし、３００ｒｐｍで２時間粉砕した。篩で粉砕液をろ過してビーズを取り除いた後、シンキー社製の撹拌・脱泡機「あわとり練太郎ＡＲ―２５０」で３０秒間撹拌、３０秒間脱泡し、懸濁製剤Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ｂ～Ｄを得た。
懸濁製剤Ａ１、Ａ２、Ａ３：ビーズの直径サイズは０．５ｍｍを使用
懸濁製剤Ｂ：ビーズの直径サイズは２．０ｍｍを使用
懸濁製剤Ｃ：ビーズの直径サイズは３．０ｍｍを使用
懸濁製剤Ｄ：ビーズの直径サイズは５．０ｍｍを使用
　ジェットミルで粉砕した化合物Ａ（平均粒子径：各１．４３μｍ、６．２９μｍまたは２１．９８μｍ）２．２ｇおよび分散媒（ｐＨ５．０）１０ｍＬをスクリュー管に添加し、スターラーで１０分間撹拌して懸濁製剤Ｅ、Ｆ、Ｇを得た。
　懸濁製剤Ａ１～Ａ３、Ｂ～Ｇ中に懸濁している化合物Ａの平均粒子径を上記に記載の方法でそれぞれ測定した。得られた平均粒子径は、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ａ１：２０９．０ｎｍ
懸濁製剤Ａ２：１９５．２ｎｍ
懸濁製剤Ａ３：２２７．０ｎｍ
懸濁製剤Ｂ：４５１．２ｎｍ
懸濁製剤Ｃ：６０９．９ｎｍ
懸濁製剤Ｄ：８０１．２ｎｍ
懸濁製剤Ｅ：１９４４ｎｍ
懸濁製剤Ｆ：９５６０ｎｍ
懸濁製剤Ｇ：２０４３０ｎｍ
参考例３：各点眼用懸濁製剤の薬物含量測定
　点眼用懸濁製剤Ａ１～Ａ３、Ｂ～Ｇ各１００μＬに１％ＨＰＭＣ８００μＬとアセトニトリル１００μＬを加え、ボルテックスで振とうした。その１００μＬを１０ｍＬ容メスフラスコにとり、１％ＨＰＭＣ／アセトニトリル（１：１）を加え完全に溶解させ正確に１０ｍＬとし、点眼用懸濁製剤の含量測定サンプルとした。ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製の超高速液体クロマトグラフ、カラムＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８ ５μｍ １５０×４．６ｍｍを用いて点眼用懸濁製剤Ａ１～Ａ３、Ｂ～Ｇの化合物Ａ含量（溶解している化合物Ａおよび懸濁している化合物Ａを合わせた含量）を測定したところ、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ａ１：２００．１ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ａ２：２１６．２ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ａ３：２０７．１ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｂ：２１１．０ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｃ：１９５．６ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｄ：２１８．８ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｅ：１３５．４ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｆ：２０１．８ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｇ：２２４．５ｍｇ／ｍＬ
参考例４：分散媒（ｐＨ３．０）の調製
　０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ｃ）に、０．０１ｍｏｌ／Ｌクエン酸水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ｄ）をｐＨ＝３．０になるまで添加し（添加割合：（ｃ）：（ｄ）＝約２：８）、ｐＨ３．０－クエン酸－リン酸緩衝液を得た。得られたｐＨ３．０－クエン酸－リン酸緩衝液を上記ｐＨ５．０－クエン酸－リン酸緩衝液場合と同様の方法により処理し、分散媒（ｐＨ３．０）を得た。上記で調製した分散媒（ｐＨ３．０）の組成を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
参考例５：分散媒（ｐＨ８．０）の調製
　０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ｅ）に、０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した水溶液（ｆ）をｐＨ＝８．０になるまで添加し（添加割合：（ｅ）：（ｆ）＝約１９：１）、ｐＨ８．０－リン酸緩衝液を得た。得られたｐＨ８．０－クエン酸－リン酸緩衝液を上記ｐＨ５．０－クエン酸－リン酸緩衝液場合と同様の方法（ただし、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸の代わりに１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムを用いた）により処理し、分散媒（ｐＨ８．０）を得た。上記で調製した分散媒（ｐＨ８．０）の組成を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
実施例２：点眼用懸濁製剤の調製
　直径１．０ｍｍのビーズおよび参考例４に記載のｐＨ３．０、参考例２に記載のｐＨ５．０又は参考例５に記載のｐＨ８．０の分散媒を用い、実施例１と同様の方法で点眼用懸濁製剤Ｈ、Ｉ、Ｊを得た。得られた点眼用懸濁製剤のｐＨはそれぞれ、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ｈ(ｐＨ３)：３．０９
懸濁製剤Ｉ(ｐＨ５)：５．０７
懸濁製剤Ｊ(ｐＨ７)：７．１０
　点眼用懸濁製剤Ｈ、Ｉ、Ｊ中に懸濁している化合物Ａの平均粒子径を上記に記載の方法でそれぞれ測定した。得られた平均粒子径は、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ｈ(ｐＨ３)：３５２．１ｎｍ
懸濁製剤Ｉ(ｐＨ５)：２６３．２ｎｍ
懸濁製剤Ｊ(ｐＨ７)：２５６．０ｎｍ
　また、点眼用懸濁製剤Ｈ、Ｉ、Ｊの化合物Ａの含量を上記に記載の方法でそれぞれ測定したところ、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ｈ（ｐＨ３）：２１７．９ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｉ（ｐＨ５）：２２０．０ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｊ（ｐＨ７）：２２２．４ｍｇ／ｍＬ
比較例１：化合物Ａの点眼用溶解製剤の調製
　０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した溶液に、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液に塩化ナトリウムを０．９％（ｗ／ｖ）添加した溶液を加え、ｐＨを８．０に調整し、精製水で１．２５倍に希釈した（以下、「ｐＨ８．０の溶解液」と記載）。得られた溶液１ｍＬに対してジェットミルで粉砕した化合物Ａを４００μｇ、エタノールを０．０８ｍＬ添加して化合物Ａを溶解させ、点眼用溶解製剤Ｚを得た。
比較例２：［５－［（１Ｚ，２Ｅ）－２－メチル－３－フェニルアリリデン］－４－オキソ－２－チオキソチアゾリジン－３－イル］酢酸および（２Ｓ，４Ｓ）－６－フルオロ－２’，５’－ジオキソスピロ［クロマン－４，４’－イミダゾリジン］－２－カルボアミドの点眼用懸濁製剤の調製
　［５－［（１Ｚ，２Ｅ）－２－メチル－３－フェニルアリリデン］－４－オキソ－２－チオキソチアゾリジン－３－イル］酢酸（以下「化合物Ｂ」と記載する）２ｇおよび参考例２に記載の分散媒（ｐＨ５．０）６ｍＬをスクリュー管に加え、スターラーで３０分間撹拌した。粉砕ポットに撹拌後のサンプル全量を加え、スクリュー管に付着したサンプルを分散媒２ｍＬで洗い込んだ。粉砕ポットに直径１．０ｍｍのビーズを５０ｇ加えた。伊藤製作所社製の遊星ボールミル（ＬＰ－４／２）に粉砕ポットをセットし、３００ｒｐｍで６時間粉砕した。篩で粉砕液をろ過してビーズを取り除いた後、シンキー社製の撹拌・脱泡機「あわとり練太郎ＡＲ―２５０」３０秒間撹拌、３０秒間脱泡し、点眼用懸濁製剤Ｘ１を得た。また、（２Ｓ，４Ｓ）－６－フルオロ－２’，５’－ジオキソスピロ［クロマン－４，４’－イミダゾリジン］－２－カルボアミド（以下「化合物Ｃ」と記載する）１．８４ｇおよび参考例２に記載の分散媒(ｐＨ５．０）６ｍＬをスクリュー管に加え、スターラーで３０分間撹拌した。得られた撹拌後のサンプルを上記化合物Ｂと同様に取り扱い点眼用懸濁製剤Ｙ１を得た。
　化合物Ｂ　１．１ｇおよび参考例２に記載の分散媒（ｐＨ５．０）５ｍＬをスクリュー管に添加し、スターラーで１０分間撹拌して点眼用懸濁製剤Ｘ２を得た。化合物Ｃについても同様の手順で撹拌し、点眼用懸濁製剤Ｙ２を得た。
　懸濁製剤Ｘ１、Ｙ１、Ｘ２およびＹ２中に懸濁している化合物Ｂおよび化合物Ｃの平均粒子径を化合物Ａの平均粒子径を測定した場合と同様の方法で測定した。平均粒子径は、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ｘ１：５５５．７ｎｍ
懸濁製剤Ｙ１：２９０．８ｎｍ
懸濁製剤Ｘ２：８９７０ｎｍ
懸濁製剤Ｙ２：５４３０ｎｍ
　また、懸濁製剤Ｘ１、Ｙ１、Ｘ２、Ｙ２の化合物Ｂおよび化合物Ｃ含量を上記に記載の方法で測定したところ、以下のとおりであった。
懸濁製剤Ｘ１：２１５．４ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｙ１：２１４．１ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｘ２：１８７．７ｍｇ／ｍＬ
懸濁製剤Ｙ２：１９６．８ｍｇ／ｍＬ
　本明細書中に記載の実施例および比較例のまとめを下記に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
試験例１：化合物Ａの点眼用懸濁製剤の保存安定性評価
　点眼用懸濁製剤について、３７℃で保存したときの化合物Ａの含量推移及び２５℃で保存したときの粒子径の推移を以下の手順で評価した。
　実施例１に記載した手順に従い、分散媒（ｐＨ５．０）及び直径０．５ｍｍのビーズを用いて、点眼用懸濁製剤を調製した。得られた点眼用懸濁製剤中の化合物Ａの含量及び懸濁している化合物Ａの平均粒子径を上記に記載の方法で測定したところ、それぞれ２２０．９５ｍｇ／ｍＬ、１７０．２ｎｍであった。調製した点眼用懸濁製剤を３７℃で一定時間保存後、超音波照射して均一化した点眼用懸濁製剤１００μＬに１％ＨＰＭＣ８００μＬとアセトニトリル１００μＬを加え、ボルテックスで振とうした。その１００μＬを１０ｍＬ容メスフラスコにとり、１％ＨＰＭＣ／アセトニトリル（１：１）で正確に１０ｍＬとし、点眼用懸濁製剤中の化合物Ａの含量測定サンプルとした。ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製の超高速液体クロマトグラフ、カラムＹＭＣ-Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８ ５μｍ １５０×４．６ｍｍを用いてそれぞれのサンプルを測定した。結果を図１に示す。
　次に、実施例１に記載した手順に従い、分散媒（ｐＨ５．０）を用いて、点眼用懸濁製剤を調製した。なお、ビーズは直径０．５ｍｍを用いて２時間粉砕した後、０．０２ｍｍのビーズに変えてさらに２時間粉砕した。得られた点眼用懸濁製剤中の化合物Ａの含量及び懸濁している化合物Ａの平均粒子径を上記に記載の方法で測定したところ、それぞれ１６８．５ｍｇ／ｍＬ、１８０．５ｎｍであった。調製した点眼用懸濁製剤を２５℃で保存し、保存中の平均粒子径を上記に記載の方法で測定した。結果を図１に示す。
　図１より、本発明の点眼用懸濁製剤は７２時間保存後も化合物Ａの含量の大きな低下は見られなかった。また、１４日間保存後も平均粒子径の変化は見られなかった。このことから、本発明の点眼用製剤は、化学的にも物理的にも安定であり、冷所保存の必要もなく、常温で保存が可能であることが分かった。
試験例２：ラットを用いた後眼部への移行性評価（Ｉ－１）および（Ｉ－２）
　糖尿病モデルラットの両眼に、一般に懸濁剤として投与可能な含有量である化合物Ａを懸濁させた点眼用懸濁製剤Ａ１（２００ｍｇ/ｍＬ）および化合物Ａを溶解させた点眼用溶解製剤Ｚ（４００μｇ/ｍＬ）を、５分間おきに片眼５μＬ（ラットに点眼投与可能な最大量）ずつ、計５回点眼投与した。投与６０分後の角膜中、網膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した。
　なお、他の剤形と異なり、点眼剤では、１回に点眼投与可能な液量に制限があり、点眼可能な最大量での薬物の組織への移行量が重要である。その液量は動物種によって異なるが、ラットの場合、最大で片眼５μＬである。
　点眼用溶解製剤としては、化合物Ａの水に対する溶解度は非常に低いため、添加剤の添加により本来の溶解度よりも高い濃度である４００μｇ／ｍＬの化合物Ａを溶解させたものを点眼用溶解製剤Ｚとして用いた。
　また、Diabetic Retinopathy, INTECH, Phapter 15 「Prophylactic Medical Treatment of Diabetic Retinopathy」, Akihiro Kakehashi et al.に記載のＳＤＴラットへの経口反復投与で網膜毛細血管の脆弱化及び網膜でのＶＥＧＦ産生抑制が確認された投与量である１．０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを１日１回、２１日間経口反復投与した。最終投与６０分後の角膜中、網膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した。結果を図２および図３に示す。
　図２に、点眼用懸濁製剤Ａ１の点眼投与、点眼用溶解製剤Ｚの点眼投与および経口反復投与による血漿中、角膜中、網膜中への化合物Ａの移行量（濃度）を示す。血漿中、角膜中、網膜中への化合物Ａの移行の割合は以下の通りであった。
　点眼用懸濁製剤Ａ１の点眼投与による化合物Ａの各組織中濃度は、およそ血漿中：角膜中：網膜中＝１：１０１：３３．５
　点眼用溶解製剤Ｚの点眼投与による化合物Ａの各組織中濃度は、およそ血漿中：角膜中：網膜中＝１：１６８９：１
　また、経口反復投与による化合物Ａの各組織中濃度は、およそ血漿中：角膜中：網膜中＝１：１：１
　また、各投与群における網膜／血漿比率（網膜／血漿比率＝網膜中化合物Ａ濃度（μｇ／ｇ）÷血漿中化合物Ａ濃度（μｇ／ｍＬ））は以下の通りであった。
点眼用懸濁製剤Ａ１投与群の網膜／血漿比率＝３３．５
点眼用溶解製剤Ｚ投与群の網膜／血漿比率＝１．１
経口反復投与群の網膜／血漿比率＝１．０
　点眼用溶解製剤Ｚを点眼投与したラットでは、網膜／血漿比率は１．１であり、化合物Ａを経口投与したラットの網膜／血漿比率（１．０）とほぼ同じであったことから、点眼用溶解製剤Ｚではほとんどが鼻涙管などを介して全身循環血流から網膜に到達したと推測される。
　一方、本発明の点眼用懸濁製剤Ａ１を投与したラットでは、網膜／血漿比率は３３．５であり、ＳＤＴラットにおける糖尿病網膜症の薬効用量を経口投与した場合の網膜／血漿比率（１．０）や点眼用溶解製剤Ｚを投与した場合の網膜／血漿比率（１．１）の３０倍以上高かった。このことから、点眼用懸濁製剤では、網膜への直接的な移行経路による移行が示唆された。
　試験例２で得られた、点眼用懸濁製剤Ａ１および点眼用溶解製剤Ｚを投与したラットの化合物Ａの濃度を、各組織別に並べると図３のようになった。
点眼用溶解製剤Ｚを点眼投与したラットでは、化合物Ａ本来の溶解度に比べて高い濃度（４００μｇ／ｍＬ）を溶解させたにも関わらず網膜への移行は０．０４７３μｇ／ｇと低く、治療効果は期待できない程度であった。一方、点眼用懸濁製剤Ａ１を投与したラットでは、一般に懸濁剤として投与可能な含量（２００ｍｇ／ｍＬ）で、治療効果が十分に期待できる高い網膜への移行性（３４２μｇ／ｇ）が示された。
　また、その量は、懸濁した場合が溶解した場合の５００倍［（２００ｍｇ／ｍＬ）／（４００μｇ／ｍＬ）］を点眼しているにもかかわらず、溶解した場合の７２３０倍［（３４２μｇ／ｇ）／（０．０４７３μｇ／ｇ）］と非常に大きいものであった。一方、前眼部の角膜中および血漿中へは、懸濁した場合が溶解した場合の５００倍量を点眼したにもかかわらず、懸濁した場合はそれぞれ溶解した場合の１４倍および２３２倍程度しか移行が見られなかった。
　化合物Ａの点眼用懸濁製剤は、全身循環血流を介する経口投与や点眼用溶解製剤の点眼投与の場合よりも、治療に十分な濃度の化合物Ａが移行することが明らかとなった。したがって、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の点眼用懸濁製剤は、効果と副作用を乖離し、安全に網膜を含む後眼部疾患の治療を可能にすると考えられる。
試験例３：ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＩ）
　ＳＤラットの両眼に、点眼用製剤Ａ２を、片眼５μＬずつ、５分間おきに１回または３回または５回点眼投与し、６０分間後の角膜中、網膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した。その結果を図４に示す。
　図４より、点眼用懸濁製剤において、投与回数の増加に伴い、血漿中濃度の増加が見られた。一方、網膜では、投与回数の影響は見られず、１回の投与で薬効に必要な量の化合物Ａが網膜へ移行した。このことから、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の点眼用懸濁製剤は、少ない点眼回数で血中濃度の上昇を回避できる一方、網膜中には十分な移行性を示すことがわかった。
試験例４：ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＩＩ）
　ＳＤラットの両眼に、点眼用製剤Ａ３、点眼用製剤Ｂ～Ｇを、片眼５μＬずつ１回点眼投与し、６０分間後の角膜中、網膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した。その結果を図５に示す。
　また、点眼用製剤Ａ３を分散媒で希釈し、濃度の異なる点眼用懸濁製剤（２０ｍｇ／ｍＬ）を調製し、上記と同様にＳＤラットに投与し、６０分間後の網膜中、角膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した（ＩＩＩ－２）。その結果を図９に示す。
　図５より、平均粒子径が小さくなるに従い、網膜中の化合物Ａの濃度の上昇が見られるが、角膜中および血漿中では平均粒子径が９５６０ｎｍ以下の場合は大きな違いは見られなかった。また、いずれの平均粒子径の点眼用懸濁製剤でも経口投与あるいは溶液の点眼投与の場合の網膜／血漿比率（経口投与：１．０、溶液の点眼投与：１．１）に比べて高い網膜／血漿比率（約４～１２）を示した。さらに７００ｎｍ以下の平均粒子径の化合物Ａ点眼用懸濁製剤では、網膜中濃度と血漿中濃度の乖離がより大きくなった。この結果より、高い効果の発現と副作用の軽減の両立がより可能となると考えられる。
　図９より、化合物Ａの懸濁濃度の増加に伴い、網膜中の化合物Ａの濃度の上昇が見られた。通常、後眼部への薬物送達は、水に溶解している成分量に依存していると考えられていたが、驚くべきことに、化合物Ａの網膜移行量は、溶解している成分量にかかわらず、懸濁状態として存在する化合物Ａの濃度に伴い増加した。また、懸濁濃度によらず、経口投与あるいは溶液の点眼投与の場合の網膜／血漿比率（経口投与：１．０、溶液の点眼投与：１．１）に比べて高い網膜／血漿比率（約１２）を示した。
試験例５：ラットを用いた後眼部への移行性評価（ＩＶ）
　ＳＤラットの両眼に、点眼用製剤Ｈ（ｐＨ３）、点眼用製剤Ｉ（ｐＨ５）または点眼用製剤Ｊ（ｐＨ７）を、片眼５μＬずつ１回点眼投与し、６０分間後の角膜中、網膜中および血漿中の化合物Ａの濃度を測定した。その結果を図６に示す。
　図６より、点眼用製剤Ｉ（ｐＨ５）、点眼用製剤Ｈ（ｐＨ３）および点眼用製剤Ｊ（ｐＨ７）のいずれにおいても、後眼疾患の治療が可能と考えられる程度の網膜への移行が見られた。特に、点眼用製剤Ｉ（ｐＨ５）では、非常に高い網膜移行性が見られた。一方、角膜および血漿中への移行はｐＨによって大きな違いは見られなかった。
試験例６：ラットを用いた後眼部への移行性評価（Ｖ）
　ＳＤラットの両眼に、点眼用製剤Ｉ、点眼用製剤Ｆ、点眼用製剤Ｇ、点眼用製剤Ｘ１、点眼用製剤Ｘ２、点眼用製剤Ｙ１または点眼用製剤Ｙ２を、片眼５μＬずつ１回点眼投与し、６０分間後の網膜中のそれぞれの薬物濃度を測定した。その結果を図７に示す。
　図７より、化合物Ａの点眼用懸濁製剤は、薬効メカニズムが同様のアルドースリダクターゼ阻害剤である化合物Ｂ及び化合物Ｃの点眼用懸濁製剤と比較して、網膜への移行性が格段に高かった。化合物Ａは９５６０ｎｍの平均粒子径の点眼用懸濁製剤においても、薬効に必要な量の化合物Ａが網膜へ到達しているのに対し、化合物Ｂ及び化合物Ｃでは、いずれの平均粒子径においても、僅かしか網膜へ到達しなかった。
試験例７：化合物ＡのＶＥＧＦ刺激による細胞遊走亢進作用に対する抑制作用
　化合物Ａによる抗ＶＥＧＦ作用について、J Diabetes Complications. 2012 ;26(5):369-77に記載された、細胞遊走能の実験方法に準じて検討した。実験には、Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍ社より購入した正常ヒト網膜毛細血管内皮細胞（ＨＲＥＣ）を使用し、細胞培養液はＣＳ－Ｃ培地（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍ社）を使用した。化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるように細胞培養液で希釈して使用した。ルセンティスは製剤原液５０μＬあたり４ｍＬの細胞培養液で希釈して使用した。ＨＲＥＣを６ウェルプレートに播種し、培養密度が８０－９０％になるまで培養した。ＶＥＧＦの刺激による細胞遊走能評価の２０－２４時間前に、ウシ胎児血清濃度を０．１％含む細胞培養液に交換した。その後、単層培養細胞層を各ウェルにつき１か所、２００μＬのピペットチップで創傷させ、創傷幅の長さを顕微鏡下で測定した。創傷後、それぞれの試験条件に応じて、ＶＥＧＦ、各種アルドース還元酵素阻害剤（化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ）またはルセンティスを含む細胞培養液に交換した。培地を交換して約１８時間後に、創傷幅の長さを顕微鏡下で測定し、創傷直後との比較により抗ＶＥＧＦ作用を評価した。結果を図８に示す。
　図８に示すように、ＶＥＧＦ刺激によるＨＲＥＣの遊走亢進が確認され、ルセンティス及びアルドース還元酵素阻害剤による遊走抑制作用が確認された。１ｎＭ（（０．４２ｎｇ／ｍＬ）Ｌ）の化合物Ａ添加によるＨＲＥＣの遊走抑制作用は、１００ｎＭ（（２８ｎｇ／ｍＬ）／Ｌ）の化合物Ｃによる遊走抑制作用と同程度であり、１０００ｎＭ（（３２０ｎｇ／ｍＬ）／Ｌ）の化合物Ｂによる遊走抑制作用より強かった。さらに、この化合物Ａの遊走抑制作用は、下表に示す各アルドース還元酵素の酵素阻害作用比から類推される作用比よりも強かった。また、１ｎＭ化合物Ａの遊走抑制作用は、抗ＶＥＧＦ抗体であるルセンティスと同程度であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　Diabetic Retinopathy, INTECH, Phapter 15, 「Prophylactic Medical Treatment of Diabetic Retinopathy」, Akihiro Kakehashi et alによると、化合物Ａを非肥満２型糖尿病モデルであるＳＤＴラットへ経口で反復投与すると、網膜毛細血管の脆弱化及び網膜でのＶＥＧＦ産生が抑制されたことが示されており、これにより、ＶＥＧＦが関連する疾患に対して、ＶＥＧＦ産生が亢進する前からの予防投与によって、ある程度進行抑制が期待されることが示唆されている。しかしながら、化合物Ａがすでに産生されたＶＥＧＦの作用を減弱することにより、発症後の治療に有効であることは明らかではなかった。また、非特許文献１は経口投与におけるデータが示されているのみであり、点眼投与による進行抑制の可能性は示されていなかった。
　本試験より、化合物Ａまたはその生理的に許容される塩は、ＶＥＧＦ刺激による細胞遊走亢進作用に対して抑制作用を示し、すでに産生されたＶＥＧＦに対しても抗ＶＥＧＦ作用を示すことが明確に明らかとなった。すなわち、ＶＥＧＦが関連する発症後の加齢黄斑変性や糖尿病網膜症等の治療の可能性が示された。なお、この抗ＶＥＧＦ作用は他のアルドース還元酵素阻害剤に比べ強力であり、抗ＶＥＧＦ抗体製剤であるルセンティスと同程度の効力であった。
参考例６：懸濁製剤サンプル(１)～(４)の調製
　サンプル(１)の調製：実施例１に記載した手順に従い、分散媒（ｐＨ５．０）及び直径０．５ｍｍのビーズを用いて、化合物Ａを含有する点眼用懸濁製剤（２５０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。
　サンプル(２)の調製：ポリソルベート８０の代わりにポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を用いて、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．３％を含む分散媒（ｐＨ５．０）を参考例２に従い調製した。この分散媒１５ｍＬと化合物Ａ ５ｇをスクリュー管に加え、５分間超音波照射し、スギノマシン製スターバーストミニの粉砕用シリンジに全量を加えた。スクリュー管に付着したサンプルは分散媒５ｍＬで洗い込んだ。粉砕圧２４５ＭＰaで３０分間粉砕し、化合物Ａを含有する点眼用懸濁製剤（２５０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。
　サンプル(３)の調製：ジェットミルで粉砕した化合物Ａ１ｇをグリセリン１０ｇに添加し、スターラーで1時間撹拌し、化合物Ａを含有する懸濁製剤を調製した。
　サンプル(４)の調製：ジェットミルで粉砕した化合物Ａ１ｇを水１０ｇに添加し、スターラーで1時間撹拌し、化合物Ａを含有する懸濁製剤を調製した。
試験例８：化合物Ａの溶解度測定
　サンプル(１)～(４)各５００μＬを日立工機社製の遠心分離機ＨＩＴＡＣＨ－ＧＸを用いて遠心分離（１５０,０００ｒｐｍ、１０分、５℃）し、得られた上澄み１００μＬに１％ＨＰＭＣ８００μＬとアセトニトリルまたは水１００μＬを加え、ボルテックスで振とうし、含量測定サンプルとした。ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製の超高速液体クロマトグラフ、カラムＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８ ５μｍ １５０×４．６ｍｍを用いて溶解している化合物Ａの量を測定した。その結果を表６に示す。表６より、水系の懸濁液中で溶解している化合物Ａの割合は、極僅かであった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
 　なお、サンプル(１)、(２)に懸濁している化合物Ａの平均粒子径を上記に記載の方法で測定したところ、それぞれ２４４．２ｎｍ、２７６．７ｎｍであった。またサンプル(２)を２５℃で１ヶ月および２ヶ月保存した時の粒子径はそれぞれ２７７．３ｎｍ、２５６．９ｎｍであった。
　これらの実施例、参考例、比較例、試験例等により、本発明の点眼用製剤は、優れた後眼部移行性を有し、後眼部疾患を初めとする眼疾患への治療に好適に利用される。

Claims (24)

  1. 　（Ｒ）－（－）－２－（４－ブロモ－２－フルオロベンジル）－１，２，３，４－テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－４－スピロ－３’－ピロリジン－１，２’，３，５’－テトラオン（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理的に許容される塩を含有する点眼用懸濁製剤。
  2. 　化合物Ａまたはその生理的に許容される塩が分散媒中に懸濁している懸濁液である請求項１に記載の製剤。
  3. 　懸濁液中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が、１ｎｍ以上２０μｍ以下である請求項２に記載の製剤。
  4. 　懸濁液中の化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が、１０ｎｍ以上２０μｍ以下である請求項３に記載の製剤。
  5. 　分散媒が水系の分散媒である請求項２～４のいずれかに記載の製剤。
  6. 　分散媒が分散剤及び／又は界面活性剤を含む請求項２～５のいずれかに記載の製剤。
  7. 　分散媒が分散剤及び界面活性剤を含む請求項６に記載の製剤。
  8. 　懸濁液のｐＨが３～９である請求項２～７のいずれかに記載の製剤。
  9. 　懸濁液の浸透圧が２０～１０００ｍＯｓｍである請求項２～８のいずれかに記載の製剤。
  10. 　懸濁液１ｍＬ中に化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を１～５００ｍｇ含む請求項２～９のいずれかに記載の製剤。
  11. 　懸濁液中に溶解している化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の割合が製剤に含まれる全ての化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の０．００１％～１０％である請求項２～１０のいずれかに記載の製剤。
  12. 　懸濁液中に溶解している化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の割合が製剤に含まれる全ての化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の０．００１％～１％である請求項２～１１のいずれかに記載の製剤。
  13. 　前眼部疾患及び／又は後眼部疾患を治療するための請求項１～１２のいずれかに記載の製剤。
  14. 　疾患が、ＶＥＧＦが関連する疾患である、請求項１３に記載の製剤。
  15. 　疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、近視性脈絡膜新生血管、網膜静脈閉塞症及び／又は白内障である請求項１３又は１４に記載の製剤。
  16. 　（１）化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を含有する製剤と、（２）分散媒を含む製剤を組み合わせてなるキット。
  17. 　製剤（１）における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が１ｎｍ以上２０μｍ以下である請求項１６に記載のキット。
  18. 　製剤（１）における化合物Ａまたはその生理的に許容される塩の平均粒子径が１０ｎｍ以上２０μｍ以下である請求項１７に記載のキット。
  19. 　製剤（１）または製剤（２）が、分散剤及び／又は界面活性剤を含んでもよい請求項１６～１８のいずれかに記載のキット。
  20. 　前眼部疾患及び／又は後眼部疾患を治療するための請求項１６～１９のいずれかに記載のキット。
  21. 　化合物Ａまたはその生理的に許容される塩を含有する、ＶＥＧＦが関連する疾患の治療剤。
  22. 　疾患が加齢黄斑変性及び／又は糖尿病網膜症である請求項２１に記載の治療剤。
  23. 　懸濁液中に分散剤及び／又は界面活性剤を含む請求項２～４のいずれかに記載の製剤。
  24. 　懸濁液中に分散剤及び界面活性剤を含む請求項２３に記載の製剤。
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