WO2015151752A1 - 分析装置及び分析方法 - Google Patents
分析装置及び分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2015151752A1 WO2015151752A1 PCT/JP2015/057303 JP2015057303W WO2015151752A1 WO 2015151752 A1 WO2015151752 A1 WO 2015151752A1 JP 2015057303 W JP2015057303 W JP 2015057303W WO 2015151752 A1 WO2015151752 A1 WO 2015151752A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- pulse
- reference value
- pulse width
- substrate
- unit
- Prior art date
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 101
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 58
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 39
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 64
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 9
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000006087 Silane Coupling Agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920005668 polycarbonate resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004431 polycarbonate resin Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/06—Investigating concentration of particle suspensions
- G01N15/0606—Investigating concentration of particle suspensions by collecting particles on a support
- G01N15/0612—Optical scan of the deposits
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1429—Signal processing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1434—Optical arrangements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N2015/0038—Investigating nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N2015/1486—Counting the particles
Definitions
- the present invention relates to an analyzer and an analysis method for analyzing biological materials such as antibodies and antigens.
- An immunoassay is known in which a specific antigen or antibody associated with a disease is detected as a biomarker to quantitatively analyze the effect of disease discovery or treatment.
- An ELISA method Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
- an enzyme reaction for detecting an antigen or antibody labeled with an enzyme is one of immunoassays, and is widely used because of merit such as cost.
- the total time of pretreatment, antigen-antibody reaction, B / F (bond / free) separation, enzyme reaction, etc. is from several hours to one day, and requires a long time.
- the antibody fixed on the optical disk is bound to the antigen in the sample, the antigen and the particle having the antibody are bound, and the particles captured on the disk are scanned in a short time by scanning with an optical head.
- a technique for counting has been proposed (Patent Document 1). Further, a technique has been proposed in which a biological sample or particles are attached to the surface on which the tracking structure of an optical disk is formed, and a change in signal is detected by an optical pickup (Patent Document 2).
- Patent Documents 1 and 2 may not be able to obtain a detection signal corresponding to the particle depending on the type and arrangement of the particle. Then, the particle counting result becomes inaccurate, and there is a possibility that the quantitativeness with respect to the detection target is deteriorated.
- an object of the present invention is to provide an analysis apparatus and an analysis method that can improve the quantitativeness of a detection target.
- a pulse included in a detection signal obtained by optically scanning a substrate (100) having particles (66) fixed on a surface thereof and scanning the substrate (100). And detecting two pulse waves each having a pulse width (Ta) less than the first reference value (T2) from the detection signal twice in succession.
- the analysis method includes counting the number of particles (66) based on a pulse interval (Tb) of two pulse waves.
- FIG. 1 is a schematic block diagram illustrating a basic configuration of an analyzer according to an embodiment of the present invention.
- 2 (a) to 2 (f) are enlarged sectional views of typical substrates for explaining an example of a method for fixing antibodies, antigens, and beads to the substrate of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 3 is a simulation result showing the characteristics of the spot position and signal intensity when scanning the substrate for each number of adjacent beads.
- FIG. 4 is a diagram showing the number of adjacent beads for explaining the characteristics of the spot position and the signal intensity when scanning the substrate of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 1 is a schematic block diagram illustrating a basic configuration of an analyzer according to an embodiment of the present invention.
- 2 (a) to 2 (f) are enlarged sectional views of typical substrates for explaining an example of a method for fixing antibodies, antigens, and beads to the substrate of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 3 is a simulation result showing
- FIG. 5 is a diagram showing the number of adjacent beads for explaining the characteristics of the spot position and the signal intensity when scanning the substrate of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 6 is a diagram for explaining a method for determining a reference value stored in the storage unit of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 7 is a diagram for explaining a method for determining the reference value stored in the storage unit of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 8 is a flowchart for explaining the operation of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 9 is a diagram for explaining the operation of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 10 is a diagram for explaining the operation of the analyzer according to the embodiment of the present invention.
- FIG. 11 is a diagram comparing the characteristics of the biomarker concentration and the bead counting result in the analyzer according to the embodiment of the present invention with those of the conventional apparatus.
- the analyzer As shown in FIG. 1, the analyzer according to the embodiment of the present invention includes a substrate 100, a motor 2 that rotates the substrate 100, an optical scanning unit 3 that optically scans the substrate 100, a motor 2, and optical scanning. And a control unit 5 that controls the unit 3.
- the substrate 100 has a disk shape having the same dimensions as an optical disc such as a compact disc (CD), a digital versatile disc (DVD), and a Blu-ray disc (BD).
- the substrate 100 has a track structure that can be scanned by the optical scanning unit 3 on the surface.
- the track structure is composed of grooves, lands, pits, etc., and is formed in a spiral shape from the inner peripheral side to the outer peripheral side.
- the substrate 100 is made of, for example, a resin material having hydrophobicity such as polycarbonate resin or cycloolefin polymer used for general optical disks.
- the surface of the substrate 100 can be subjected to surface treatment with a thin film formation or a silane coupling agent as required.
- the substrate 100 has an antibody 61 that specifically binds to an antigen 62, which is a biological material to be detected, immobilized on the surface.
- the antigen 62 is labeled with a bead (particle) 66 on which an antibody 65 that specifically binds to the antigen 62 is immobilized on the surface, whereby the antigen 62 and the bead 66 are immobilized relative to the surface of the substrate 100. Is done.
- the antigen 62 is used as a biomarker that serves as an indicator of disease or the like by specifically binding to the antibody 61 and the antibody 65.
- the antibody 61 is fixed to the surface of the substrate 100 in advance.
- the antibody 61 is bound to the surface of the substrate 100 by a hydrophobic bond or a covalent bond.
- the antibody 61 may be fixed to the surface of the substrate 100 via a substance such as avidin.
- a sample solution 63 containing the antigen 62 is dropped on the surface of the substrate 100.
- the antigen 62 contacts with the antibody 61 by moving through the sample solution 63 by Brownian motion, and specifically binds to the antibody 61 by an antigen-antibody reaction.
- FIG. 2 (c) the sample liquid 63 dropped on the substrate 100 is subjected to spin cleaning using pure water or the like, so that the sample liquid 63 containing excess antigen 62 that does not bind to the antibody 61 is removed.
- a buffer solution 64 including beads 66 is dropped on the surface of the substrate 100.
- the buffer solution 64 may be dropped onto the substrate 100 while the sample solution 63 remains.
- the antibody 65 immobilized on the surface of the bead 66 specifically binds to the antigen 62 by an antigen-antibody reaction.
- the beads 66 bind to the antigen 62 to label the antigen 62.
- the bead 66 is formed in a substantially spherical shape by a synthetic resin such as polystyrene containing a magnetic material such as ferrite.
- the diameter of the bead 66 is about several tens nm to several hundreds nm, for example, a diameter of 200 nm.
- the beads 66 are quickly gathered on the surface of the substrate 100 when the buffer solution 64 is dropped, so that the reaction with the antigen 62 can be promoted. Further, by simultaneously loading the antigen 62 and the beads 66, the time required for labeling the antigen 62 fixed on the substrate 100 can be shortened to about several minutes.
- the antibody 61 and the antibody 65 may be a specific biological substance that specifically binds to the antigen 62, and a combination in which each binds to another site is selected.
- the target of detection is a membrane vesicle such as an exosome in which a plurality of types of antigens 62 are expressed on the surface
- the antibody 61 and the antibody 65 are different types, so that a biological sample having two types of antigens 62 is obtained. Can be detected.
- exosomes and the like are different from normal antigens, and a plurality of antigens that are the same kind of proteins exist on the surface. Therefore, the antibody 61 and the antibody 65 may be the same type.
- the buffer solution 64 containing excess beads 66 that do not bind to the antigen 62 is removed by washing the buffer solution 64 dropped onto the substrate 100 with pure water or the like.
- the substrate 100 is optically scanned by the optical scanning unit 3 and the beads 66 are detected, whereby the antigen 62 labeled on the beads 66 can be analyzed.
- the optical scanning unit 3 includes a laser oscillator 31, a collimator lens 32, a beam splitter 33, an actuator 34, an objective lens 35, a condenser lens 36, and a light detection unit 37. .
- the optical scanning unit 3 is an optical pickup that optically scans the substrate 100.
- the laser oscillator 31 emits a laser beam toward the collimator lens 32 under the control of the control unit 5.
- the laser oscillator 31 is, for example, a semiconductor laser oscillator that emits a laser beam having a wavelength of 405 nm, which is the same as that for reproducing a BD, and an output of about 1 mW.
- the collimator lens 32 collimates the laser light emitted from the laser oscillator 31.
- the beam splitter 33 reflects the laser light collimated by the collimator lens 32 toward the objective lens 35.
- the objective lens 35 focuses the laser light that has passed through the beam splitter 33 on the surface of the substrate 100 on which the antibody 61 is fixed, and forms an image of the spot S by driving the actuator 34 according to the control of the control unit 5. .
- the objective lens 35 has a numerical aperture of 0.85, for example.
- the laser light focused on the objective lens 35 is reflected by the substrate 100 and enters the beam splitter 33.
- the incident laser light passes through the beam splitter 33 and enters the light detection unit 37 via the condenser lens 36.
- the condensing lens 36 condenses the laser light reflected on the substrate 100 on the light detection unit 37.
- the light detection unit 37 is made of, for example, a photodiode, and outputs a detection signal corresponding to the amount of laser light reflected from the substrate 100 to the control unit 5.
- the control unit 5 controls the driving of the motor 2 via the rotation control unit 21.
- the motor 2 rotates the substrate 100 by a constant linear velocity (CLV) system under the control of the control unit 5.
- the linear velocity is, for example, 4.92 m / s.
- the control unit 5 controls driving of the laser oscillator 31 and the actuator 34 via the optical system control unit 4.
- the actuator 34 moves the optical scanning unit 3 in the radial direction of the substrate 100 so as to scan the surface of the rotating substrate 100 in a spiral shape under the control of the control unit 5.
- the control unit 5 detects errors such as a focus error (FE) and a tracking error (TE) from the detection signal output from the light detection unit 37.
- the control unit 5 controls the actuator 34 and the like so as to appropriately scan the surface of the substrate 100 according to the detected error.
- the control unit 5 includes a pulse detection unit 51, a storage unit 52, and a counting unit 50.
- the pulse detection unit 51 receives the detection signal output from the light detection unit 37.
- the pulse detector 51 detects the pulse wave and the pulse width of the pulse wave included in the detection signal acquired from the optical scanning unit 3.
- the pulse detection unit 51 includes a signal processing device such as a digital signal processor (DSP).
- the storage unit 52 includes a storage device such as a semiconductor memory.
- the storage unit 52 stores a reference value or the like for the pulse wave and the pulse width detected by the pulse detection unit 51.
- the counting unit 50 counts the number of beads 66 fixed on the surface of the substrate 100 based on the pulse wave detected by the pulse detecting unit 51 and the reference value stored in the storage unit 52.
- the counting unit 50 includes a central processing unit (CPU) and the like.
- the counting unit 50 includes a first counter 501, a second counter 502, and a target counter 503 as a logical structure.
- the first counter 501 measures the pulse width Ta of the pulse wave detected by the pulse detector 51.
- the second counter 502 measures the pulse interval Tb between the next detected pulse wave according to the pulse width Ta of the pulse wave detected by the pulse detector 51.
- the target counter 503 counts the number of beads 66 based on the measurement results of the first counter 501 and the second counter 502 and the reference value stored in the storage unit 52.
- Three detection signals DS1 to DS3 shown in FIG. 3 are adjacent to each other assuming one convex pit assuming one bead on the substrate 100, two adjacent convex pits assuming two beads, and three adjacent beads. It is the result of having simulated the detection signal at the time of scanning 3 convex pits, respectively.
- the horizontal axis represents the position of the spot S relative to the first bead 66 in a certain section, and the vertical axis represents the signal intensity obtained by normalizing the detection signal with the detection signal when the bead 66 does not exist.
- the detection signals DS1 to DS3 are considered to increase in pulse width as the number of two or three beads 66 from one isolated bead 66 increases.
- the actual detection signal D2 when scanning the two adjacent beads 66 has a pulse width smaller than the detection signal D1 when scanning the isolated beads 66, respectively.
- Two pulse waves of the same degree are included.
- the detection signal D3 when actually scanning three beads 66 adjacent to each other is approximately equal to the pulse width of the detection signal D2, and two pulses having a larger pulse interval than the detection signal D2. Including waves.
- the detection signal when the four beads 66 are adjacent to each other includes two pulse waves that are substantially equal to the pulse width of the detection signal D2 and have a larger pulse interval than the detection signal D3.
- the diameter of the bead 66 is about 1 ⁇ 2 of the wavelength of the laser beam to be scanned and there are a plurality of adjacent beads 66, the number of beads 66 cannot be accurately counted, and the detection target There is a possibility that the quantitativeness of the will deteriorate.
- the inventors of the present invention have described the Maxwell's equation as a function of the finite difference time domain (FDTD) method for the action of light on structures (particles) having a size smaller than the wavelength of light, which is different from the pits of general optical discs as described above. It was clarified by solving for spatial variables.
- the counting unit 50 counts the number of beads 66 with high accuracy even when a plurality of adjacent beads 66 are present on the substrate 100 based on a reference value of the storage unit 52 set in advance when counting the beads 66. Can be counted.
- the storage unit 52 corresponds to the first pulse width T1 of the detection signals D2 and D3 and the first pulse width T1 when the optical scanning unit 3 scans a plurality of beads 66 adjacent to each other.
- the determined first reference value T2 is stored in advance.
- the first reference value T2 is, for example, the sum of the first pulse width T1 and a predetermined value.
- the predetermined value added to the first pulse width T1 may be a jitter value included in the detection signal.
- the predetermined value added to the first pulse width T1 may be about 100% to 130% of the jitter value.
- the first reference value T2 may be a predetermined ratio of the first pulse width T1.
- the ratio of the first reference value T2 is, for example, about 100% to 130% of the first pulse width T1.
- the storage unit 52 corresponds to the second pulse width T3 and the second pulse width T3 of the detection signal D1 when the optical scanning unit 3 scans the bead 66 isolated from the other beads 66.
- the determined second reference value T4 is stored in advance.
- the second reference value T4 is, for example, the sum of the second pulse width T3 and a predetermined value.
- the predetermined value added to the second pulse width T3 may be a jitter value included in the detection signal.
- the predetermined value added to the second pulse width T3 may be about 100% to 130% of the jitter value.
- the second reference value T4 may be a predetermined ratio of the second pulse width T3.
- the ratio of the second reference value T4 is, for example, about 100% to 130% of the second pulse width T3.
- the optical scanning unit 3 optically scans the substrate 100 so that the counting unit 50 counts the beads 66 fixed to the substrate 100. A method for analyzing the detection target labeled on the bead 66 will be described.
- the rotation control unit 21 and the optical system control unit 4 start driving the motor 2 and the optical scanning unit 3 by the operation of the operator, respectively.
- the substrate 100 on which the antigen 62 and the beads 66 are fixed on the surface by an antigen-antibody reaction or the like is rotated at a constant linear velocity by the motor 2 and optically scanned by the optical scanning unit 3.
- the optical scanning unit 3 detects the laser beam emitted from the laser oscillator 31 and reflected on the surface of the substrate 100 by the light detection unit 37.
- the light detection unit 37 outputs a detection signal corresponding to the detected amount of laser light to the pulse detection unit 51.
- step S1 the pulse detection unit 51 acquires the detection signal output from the light detection unit 37, and detects the falling edge of the acquired detection signal.
- the pulse detection unit 51 holds in advance a threshold set to an intensity that is about 1 ⁇ 2 of the peak value of the detection signal when the bead 66 is scanned, and the time when the detection signal falls below the threshold is regarded as the fall of the detection signal. To detect.
- step S2 the first counter 501 starts measuring the time Ta from the time point when the falling edge is detected in step S1.
- step S ⁇ b> 3 the pulse detection unit 51 detects the rising edge of the detection signal acquired from the light detection unit 37.
- the pulse detection unit 51 holds in advance a threshold value set to an intensity that is about 1 ⁇ 2 of the peak value of the detection signal when the bead 66 is scanned, and detects when the detection signal exceeds the threshold value as the rising edge of the detection signal. To do.
- step S4 the first counter 501 determines and resets the time Ta from the time when the falling edge is detected in step S1 to the time when the rising edge is detected in step S3.
- the target counter 503 acquires the time Ta determined by the first counter 501 and holds it as the pulse width (half-value width) Ta of the pulse wave detected in steps S1 to S3.
- step S5 the target counter 503 reads the first reference value T2 from the storage unit 52, and determines whether or not the pulse width Ta held in step S4 is less than the first reference value T2. If the pulse width Ta is less than the first reference value T2, the target counter 503 proceeds to step S6. If the pulse width Ta is greater than or equal to the first reference value T2, the target counter 503 proceeds to step S9.
- the target counter 503 determines in step S6 whether or not the adjacent flag is high (High: 1).
- the adjacent flag is a flag that is set in association with the second counter 502 in the target counter 503. If the adjacent flag is high in step S6, the target counter 503 proceeds to step S7. If the adjacent flag is low (Low: 0), the target counter 503 proceeds to step S12.
- step S3 the detection signal D3 is input to the pulse detection unit 51, and the pulse detection unit 51 detects the rising edge of the first pulse wave in step S3.
- the adjacent flag is low in step S6, and the counting unit 50 advances the process to step S12.
- step S12 the second counter 502 starts measuring the time Tb from the time when the rising edge is detected in step S3.
- the target counter 503 sets the adjacent flag to high from the time when the rising edge is detected in step S3, and proceeds to step S8.
- step S8 the control unit 5 determines whether or not the scanning by the optical scanning unit 3 in the track range of the substrate 100 set in advance has been completed. The control unit 5 ends the process when the scanning is finished, and returns the process to step S1 when the scanning is not finished yet.
- step S7 the detection signal D3 is input to the pulse detection unit 51, and the pulse detection unit 51 detects the rise of the second pulse wave in step S3.
- the adjacent flag is high in step S6, and the counting unit 50 advances the process to step S7.
- step S7 the second counter 502 resets after determining the time Tb from the time when the first rising edge is detected in step S3 to the time when the second rising edge is detected in the next step S3.
- the target counter 503 acquires the time Tb determined by the second counter 502, holds it as the pulse interval Tb of the two pulse waves detected in the two steps S1 to S3, and sets the adjacent flag to low.
- step S7 the target counter 503 determines that the optical scanning unit 3 has scanned a plurality of adjacent beads 66, reads the first pulse width T1 from the storage unit 52, and sets the number of beads 66 to 1+ ( Count as Tb / T1).
- the target counter 503 counts the number of beads 66 as 1+ (Tb / T1). To do.
- the target counter 503 advances the process to step S8 after step S7.
- the target counter 503 reads the second reference value T4 from the storage unit 52 in step S9, and the pulse width Ta held in step S4 is the second reference value T2. It is determined whether or not the value is less than T4. If the pulse width Ta is less than the second reference value T4, the target counter 503 proceeds to step S10. If the pulse width Ta is greater than or equal to the second reference value T4, the target counter 503 proceeds to step S11.
- the detection signal D1 is input to the pulse detection unit 51, and the pulse detection unit 51 detects the rising edge of the pulse wave in step S3.
- the pulse width Ta is greater than or equal to the first reference value T2 in step S5
- the pulse width Ta is less than the second reference value T4 in step S9
- the counting unit 50 advances the process to step S10.
- step S10 the target counter 503 determines that the optical scanning unit 3 has scanned one bead 66 isolated from the other beads 66, and counts the number of beads 66 as 1.
- the target counter 503 counts the number of beads 66 as 1 when a pulse wave is detected with a pulse width Ta that is greater than or equal to the first reference value T2 and less than the second reference value T4.
- the target counter 503 sets the adjacent flag to low and advances the processing to step S8.
- step S11 the target counter 503 converts the pulse wave having a pulse width greater than or equal to the second reference value T4 to noise caused by foreign matter, aggregates, or the like. Ignore it when counting.
- the target counter 503 sets the adjacent flag to low and advances the processing to step S8.
- a pulse wave having a pulse width Ta less than the first reference value T2 is detected.
- the second reference value T4 is greater than or equal to the first reference value T2. It is assumed that a pulse wave having a pulse width Ta of less than is detected. In this case, the target counter 503 determines that the previously detected pulse wave is noise caused by a foreign substance, an agglomerate, etc., and ignores it when counting.
- the target counter 503 adds a number based on the pulse width Ta and the first pulse width T1.
- the number of beads 66 is counted by going. Further, the target counter 503 counts the number of beads 66 by adding 1 when a pulse wave having a pulse width Ta that is equal to or greater than the first reference value T2 and less than the second reference value T4 is detected in the detection signal. To do.
- the curve P2 has a smaller count result regardless of the biomarker concentration, and a maximum difference of several tens of percent occurs. As indicated by the broken lines along the curves P1 and P2, ideally, if the biomarker content is 0, the counting result should also be 0. However, in the detection method using the antigen-antibody reaction, non-specific adsorption occurs on the substrate 100 in addition to the binding by the antigen-antibody reaction. For this reason, even if the concentration of the biomarker is 0, the beads 66 fixed on the surface of the substrate 100 due to non-specific adsorption are counted.
- the contact points (intersections) between the lower limit of error and the background noise level Q of the curves P1, P2 are referred to as minimum detection sensitivities R1, R2, respectively. It can be seen that the minimum detection sensitivity R1 of the analyzer according to the embodiment of the present invention is improved as compared with the minimum detection sensitivity R2 of the conventional method, and the sensitivity of biomarker detection is improved. Therefore, according to the analyzer according to the embodiment of the present invention, it is possible to improve the detection sensitivity of diseases and the like.
- the analyzer according to the embodiment of the present invention changes the number to be added according to the pulse width of the detection signal. Count the number. Therefore, according to the analyzer according to the embodiment of the present invention, even if an irregular pulse wave is detected in the detection signal due to the arrangement of the beads 66, the number of beads 66 can be counted with high accuracy. It is possible to improve the quantitativeness with respect to the detection target.
- the first reference value T2 and the second reference value T4 are determined in consideration of the jitter value of the detection signal, so that the jitter is classified when the pulse width Ta is classified.
- the number of beads 66 can be counted with higher accuracy.
- the combination of the biological material that is the detection target and the specific biological material that specifically binds to the detection target is the antigen 62, the antibody 61, and the antibody 65 fixed to the bead 66. It is not limited to the combination.
- the combination that specifically binds may be, for example, a combination of a ligand and a receptor (enzyme protein, lectin, hormone, etc.), a combination of nucleic acids having mutually complementary base sequences, and the like.
- a well-type well made of silicone rubber or the like is installed on the surface of the substrate 100, and the reaction of the target antibody 61, antigen 62, beads 66, etc., and unreacted substances are washed only in the region within the well.
- processes such as spin cleaning and drying can be simplified, and a plurality of wells can be set on the same radius as long as the area of the substrate 100 allows, so that a plurality of samples can be measured simultaneously.
- the present invention includes a program for causing a computer to execute the function of the notification device according to the embodiment described above.
- the program may be read from a recording medium and taken into a computer, or may be transmitted via an electric communication line and taken into a computer.
- the present invention includes various embodiments that are not described here, such as a configuration in which the above-described configurations are mutually applied. Therefore, the technical scope of the present invention is defined only by the invention specifying matters according to the scope of claims reasonable from the above description.
- the present invention it is possible to provide an analysis apparatus and an analysis method that can improve the quantitativeness of a detection target by changing the number to be added according to the pulse width of the detection signal.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Signal Processing (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
分析装置は、表面に粒子66が固定された基板100を光学的に走査し、光走査部3が基板100を走査することにより光走査部3から取得される検出信号に含まれるパルス波を検出し、光走査部3が互いに隣接する複数の粒子66を走査する場合の第1パルス幅T1に応じた第1基準値T2未満のパルス幅Taをそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、2つのパルス波のパルス間隔Tbに基づいて、粒子66の数を計数する。
Description
本発明は、抗体、抗原等の生体物質を分析するための分析装置及び分析方法に関する。
疾病に関連付けられた特定の抗原または抗体をバイオマーカーとして検出することで、疾病の発見や治療の効果等を定量的に分析する免疫検定法(immunoassay)が知られている。酵素により標識された抗原または抗体を検出するELISA法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)は、免疫検定法の一つであり、コスト等のメリットから広く普及している。ELISA法は、前処理、抗原抗体反応、B/F(bond/free)分離、酵素反応等を合計した時間が、数時間から1日程度であり、長時間を要する。
これに対して、光ディスクに固定された抗体と試料中の抗原を結合させ、抗原と抗体を有する粒子とを結合させ、光ヘッドで走査することにより、ディスク上に捕捉された粒子を短時間に計数する技術が提案されている(特許文献1)。また、光ディスクのトラッキング構造が形成される面に生体試料や粒子を付着させ、光ピックアップで信号の変化を検出する技術が提案されている(特許文献2)。
しかしながら、特許文献1及び2に記載の技術は、粒子の種類及び配置等により、粒子に対応した検出信号が得られない可能性がある。すると、粒子の計数結果が不正確となり、検出対象に対する定量性が悪化するおそれがある。
上記問題点を鑑み、本発明は、検出対象に対する定量性を向上できる分析装置及び分析方法を提供することを目的とする。
上記目的を達成するために、本発明の第1の態様は、表面に粒子(66)が固定された基板(100)を光学的に走査する光走査部(3)と、光走査部(3)が基板(100)を走査することにより光走査部(3)から取得される検出信号に含まれるパルス波及びパルス波のパルス幅を検出するパルス検出部(51)と、パルス検出部(51)により第1基準値(T2)未満のパルス幅(Ta)をそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、2つのパルス波のパルス間隔(Tb)に基づいて、粒子(66)の数を計数する計数部(50)とを備える分析装置であることを特徴とする。
本発明の第2の態様は、表面に粒子(66)が固定された基板(100)を光学的に走査することと、基板(100)を走査することにより取得される検出信号に含まれるパルス波及びパルス波のパルス幅を検出することと、前記検出信号から第1基準値(T2)未満のパルス幅(Ta)をそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、2つのパルス波のパルス間隔(Tb)に基づいて、粒子(66)の数を計数することとを含む分析方法であることを特徴とする。
次に、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。以下の図面の記載において、同一又は類似の部分には同一又は類似の符号を付し、重複する説明を省略している。
(分析装置)
本発明の実施の形態に分析装置は、図1に示すように、基板100と、基板100を回転させるモータ2と、基板100を光学的に走査する光走査部3と、モータ2及び光走査部3を制御する制御部5とを備える。
本発明の実施の形態に分析装置は、図1に示すように、基板100と、基板100を回転させるモータ2と、基板100を光学的に走査する光走査部3と、モータ2及び光走査部3を制御する制御部5とを備える。
基板100は、例えば、コンパクトディスク(CD)、デジタルバーサタイルディスク(DVD)、ブルーレイディスク(BD)等の光ディスクと同等の寸法を有する円盤状である。基板100は、表面に光走査部3が走査可能なトラック構造を有する。トラック構造は、グルーブ、ランド、ピット等からなり、内周側から外周側にスパイラル状に形成される。基板100は、例えば、一般の光ディスクに用いられるポリカーボネート樹脂やシクロオレフィンポリマー等の疎水性を有する樹脂材料からなる。また、基板100表面には必要に応じて、薄膜形成やシランカップリング剤などによる表面処理を施すこともできる。
基板100は、図2に示すように、検出対象の生体物質である抗原62と特異的に結合する抗体61が表面に固定される。抗原62が、表面に抗原62と特異的に結合する抗体65が固定されたビーズ(粒子)66によって標識されることにより、抗原62及びビーズ66は、基板100の表面に対して相対的に固定される。抗原62は、抗体61及び抗体65と特異的に結合することにより、疾病等の指標となるバイオマーカーとして用いられる。
図2(a)に示すように、基板100は、予め、表面に抗体61が固定される。抗体61は、疎水結合や共有結合により基板100の表面に結合される。抗体61は、アビジン等の物質を介して基板100の表面に固定されてもよい。次に、図2(b)に示すように、抗原62を含む試料液63が基板100の表面に滴下される。抗原62は、ブラウン運動により試料液63中を移動することにより抗体61と接触し、抗原抗体反応により、抗体61と特異的に結合する。図2(c)に示すように、基板100に滴下された試料液63を、純水等を用いてスピン洗浄することにより、抗体61と結合しない余剰の抗原62を含む試料液63が除去される。
図2(d)に示すように、ビーズ66を含む緩衝液64が基板100の表面に滴下される。緩衝液64は、試料液63が残存するまま基板100に滴下されてもよい。ビーズ66の表面に固定された抗体65は、抗原抗体反応により、抗原62と特異的に結合する。次に、ビーズ66は、抗原62と結合することにより、抗原62を標識する。
ビーズ66は、例えば、フェライト等の磁性材料を内包するポリスチレン等の合成樹脂により略球形に形成される。ビーズ66の直径は、数十nm~数百nm程度であり、例えば直径200nmである。ビーズ66は、緩衝液64が滴下される際に基板100の反対側に磁石が配置されることにより、迅速に基板100の表面に集合され、抗原62との反応を促進することができる。また、抗原62とビーズ66とが同時に投入されることにより、基板100に固定された抗原62を標識するまでの時間を数分程度に短縮することができる。
抗体61及び抗体65とは、抗原62と特異的に結合する特異性生体物質であればよく、それぞれが別の部位と結合する組み合わせを選択する。例えば、複数種類の抗原62が表面に発現しているエキソソーム等の膜小胞を検出対象とする場合は、抗体61及び抗体65は異なる種類とすることにより、2種類の抗原62を有する生体試料を検出することができる。これに限らず、エキソソーム等は通常の抗原とは異なり、表面に同種のたんぱく質である抗原が複数存在していることから、抗体61及び抗体65は、同じ種類とされてもよい。
図2(e)に示すように、基板100に滴下された緩衝液64を、純水等を用いて洗浄することにより、抗原62と結合しない余剰のビーズ66を含む緩衝液64が除去される。図2(f)に示すように、基板100が光走査部3により光学的に走査され、ビーズ66が検出されることにより、ビーズ66に標識された抗原62を分析することができる。
光走査部3は、図1に示すように、レーザ発振器31と、コリメータレンズ32と、ビームスプリッタ33と、アクチュエータ34と、対物レンズ35と、集光レンズ36と、光検出部37とを備える。光走査部3は、基板100を光学的に走査する光ピックアップである。
レーザ発振器31は、制御部5の制御に応じて、コリメータレンズ32に向けてレーザ光を出射する。レーザ発振器31は、例えば、波長がBDの再生用と同一の405nmであり、出力が1mW程度のレーザ光を出射する半導体レーザ発振器である。コリメータレンズ32は、レーザ発振器31から出射されたレーザ光を平行にする。ビームスプリッタ33は、コリメータレンズ32により平行にされたレーザ光を対物レンズ35に向けて反射する。
対物レンズ35は、制御部5の制御に応じたアクチュエータ34の駆動により、ビームスプリッタ33を経由したレーザ光を、抗体61が固定された基板100の表面に集光してスポットSを結像する。対物レンズ35は、例えば開口数が0.85である。対物レンズ35に集光されたレーザ光は、基板100において反射し、ビームスプリッタ33に入射する。ビームスプリッタ33は、入射したレーザ光は、ビームスプリッタ33を透過し、集光レンズ36を介して光検出部37に入射する。集光レンズ36は、基板100において反射したレーザ光を光検出部37に集光する。光検出部37は、例えばフォトダイオードからなり、基板100から反射したレーザ光の光量に対応する検出信号を制御部5に出力する。
制御部5は、回転制御部21を介して、モータ2の駆動を制御する。モータ2は、制御部5の制御により、線速度一定(CLV)方式で基板100を回転させる。線速度は、例えば4.92m/sである。
制御部5は、光学系制御部4を介して、レーザ発振器31及びアクチュエータ34の駆動を制御する。アクチュエータ34は、制御部5の制御により、回転する基板100の表面をスパイラル状に走査するように、光走査部3を基板100の半径方向に移動させる。その他、制御部5は、光検出部37から出力された検出信号から、フォーカスエラー(FE)やトラッキングエラー(TE)を等のエラーを検出する。制御部5は、検出したエラーに応じて、基板100の表面を適正に走査するようにアクチュエータ34等を制御する。
制御部5は、パルス検出部51と、記憶部52と、計数部50とを備える。パルス検出部51は、光検出部37により出力された検出信号を入力する。パルス検出部51は、光走査部3から取得される検出信号に含まれるパルス波及びパルス波のパルス幅を検出する。パルス検出部51は、デジタルシグナルプロセッサ(DSP)等の信号処理装置から構成される。記憶部52は、半導体メモリ等の記憶装置から構成される。記憶部52は、パルス検出部51が検出するパルス波及びパルス幅に対する基準値等を記憶する。
計数部50は、パルス検出部51により検出されたパルス波と、記憶部52が記憶する基準値に基づいて、基板100の表面に固定されたビーズ66の個数を計数する。計数部50は、中央演算処理装置(CPU)等から構成される。計数部50は、第1カウンタ501と、第2カウンタ502と、対象カウンタ503とを論理構造として有する。
第1カウンタ501は、パルス検出部51により検出されたパルス波のパルス幅Taを測定する。第2カウンタ502は、パルス検出部51により検出されたパルス波のパルス幅Taに応じて、次に検出されるパルス波との間のパルス間隔Tbを測定する。対象カウンタ503は、第1カウンタ501及び第2カウンタ502の測定結果と、記憶部52に記憶される基準値とに基づいて、ビーズ66の個数を計数する。
-基準値-
図3に示す3つの検出信号DS1~DS3は、基板100上のビーズ1個を想定した凸ピット1個、ビーズ2個を想定した隣接した凸ピット2個、隣接ビーズ3個を想定した隣接した凸ピット3個をそれぞれ走査する際の検出信号をシミュレーションした結果である。横軸はある区間における先頭のビーズ66に対するスポットSの位置、縦軸は検出信号をビーズ66が存在しないときの検出信号で正規化した信号強度である。検出信号DS1~DS3は、孤立する1個のビーズ66から、2個、3個とビーズ66の個数が増加する従い、パルス幅が大きくなると考えられる。
図3に示す3つの検出信号DS1~DS3は、基板100上のビーズ1個を想定した凸ピット1個、ビーズ2個を想定した隣接した凸ピット2個、隣接ビーズ3個を想定した隣接した凸ピット3個をそれぞれ走査する際の検出信号をシミュレーションした結果である。横軸はある区間における先頭のビーズ66に対するスポットSの位置、縦軸は検出信号をビーズ66が存在しないときの検出信号で正規化した信号強度である。検出信号DS1~DS3は、孤立する1個のビーズ66から、2個、3個とビーズ66の個数が増加する従い、パルス幅が大きくなると考えられる。
しかしながら、図4に示すように、互いに隣接する2個のビーズ66を走査する際の実際の検出信号D2は、パルス幅が、孤立するビーズ66を走査する際の検出信号D1よりもそれぞれ小さく、互いに同程度の2つのパルス波を含む。また、図5に示すように、実際に互いに隣接する3個のビーズ66を走査する際の検出信号D3は、検出信号D2のパルス幅とほぼ等しく、検出信号D2よりパルス間隔が大きい2つのパルス波を含む。なお、4個のビーズ66が互いに隣接する場合の検出信号も同様に、検出信号D2のパルス幅とほぼ等しく、検出信号D3よりパルス間隔が大きい2つのパルス波を含む。
このように、ビーズ66の直径が走査するレーザ光の波長の1/2程度であり、隣接する複数のビーズ66が存在する場合、ビーズ66の個数を正確に計数することができず、検出対象に対する定量性が悪化する可能性がある。発明者らは、以上のような、一般の光ディスクのピットと異なる、光の波長以下の大きさの構造体(粒子)に対する光の作用を、有限差分時間領域(FDTD)法によりマクスウェル方程式を時間と空間変数に関して解くことにより明らかにした。計数部50は、ビーズ66の計数に際して予め設定された記憶部52の基準値に基づいて、隣接する複数のビーズ66が基板100上に存在する場合であっても、高精度にビーズ66の個数を計数することができる。
記憶部52は、図6に示すように、光走査部3が互いに隣接する複数のビーズ66を走査する場合の検出信号D2,D3の第1パルス幅T1と、第1パルス幅T1に応じて決定される第1基準値T2とを予め記憶する。第1基準値T2は、例えば、第1パルス幅T1と所定値の和である。第1パルス幅T1に加算される所定値は、検出信号が有するジッタ値とすればよい。第1パルス幅T1に加算される所定値は、ジッタ値の100%~130%程度としてもよい。その他、第1基準値T2は、第1パルス幅T1の所定の比率としてもよい。第1基準値T2の比率は、例えば第1パルス幅T1の100%~130%程度である。
記憶部52は、図7に示すように、光走査部3が他のビーズ66から孤立するビーズ66を走査する場合の検出信号D1の第2パルス幅T3と、第2パルス幅T3に応じて決定される第2基準値T4とを予め記憶する。第2基準値T4は、例えば、第2パルス幅T3と所定値の和である。第2パルス幅T3に加算される所定値は、検出信号が有するジッタ値とすればよい。第2パルス幅T3に加算される所定値は、ジッタ値の100%~130%程度としてもよい。その他、第2基準値T4は、第2パルス幅T3の所定の比率としてもよい。第2基準値T4の比率は、例えば第2パルス幅T3の100%~130%程度である。
(分析方法)
図8のフローチャートを用いて、本発明の実施の形態に係る分析装置において、光走査部3が基板100を光学的に走査することにより、計数部50が基板100に固定されたビーズ66を計数し、ビーズ66に標識された検出対象を分析する方法を説明する。
図8のフローチャートを用いて、本発明の実施の形態に係る分析装置において、光走査部3が基板100を光学的に走査することにより、計数部50が基板100に固定されたビーズ66を計数し、ビーズ66に標識された検出対象を分析する方法を説明する。
先ず、オペレータの操作により、制御部5の制御に応じた回転制御部21及び光学系制御部4が、モータ2及び光走査部3の駆動をそれぞれ開始する。抗原抗体反応等により抗原62及びビーズ66が表面に固定された基板100は、モータ2により線速度一定に回転され、光走査部3により光学的に走査される。光走査部3は、レーザ発振器31から出射され基板100の表面において反射したレーザ光を、光検出部37において検出する。光検出部37は、検出したレーザ光の光量に応じた検出信号をパルス検出部51に出力する。
ステップS1において、パルス検出部51は、光検出部37から出力された検出信号を取得し、取得した検出信号の立ち下がりを検出する。パルス検出部51は、ビーズ66が走査される際の検出信号のピーク値の1/2程度の強度に設定された閾値を予め保持し、検出信号が閾値を下回る時点を検出信号の立ち下がりとして検出する。
次に、ステップS2において、第1カウンタ501は、図9に示すように、ステップS1において立ち下がりが検出された時点から、時間Taの測定を開始する。
次に、ステップS3において、パルス検出部51は、光検出部37から取得した検出信号の立ち上がりを検出する。パルス検出部51は、ビーズ66が走査される際の検出信号のピーク値の1/2程度の強度に設定された閾値を予め保持し、検出信号が閾値を上回る時点を検出信号の立ち上がりとして検出する。
次に、ステップS4において、第1カウンタ501は、ステップS1において立ち下がりが検出された時点からステップS3において立ち上がりが検出された時間までの時間Taを確定し、リセットする。対象カウンタ503は、第1カウンタ501により確定された時間Taを取得し、ステップS1~S3において検出されたパルス波のパルス幅(半値幅)Taとして保持する。
次に、ステップS5において、対象カウンタ503は、記憶部52から第1基準値T2を読み出し、ステップS4において保持したパルス幅Taが第1基準値T2未満であるか否かを判定する。対象カウンタ503は、パルス幅Taが第1基準値T2未満である場合、ステップS6に処理を進め、パルス幅Taが第1基準値T2以上である場合、ステップS9に処理を進める。
ステップS5においてパルス幅Taが第1基準値T2未満である場合、ステップS6において、対象カウンタ503は、隣接フラグがハイ(High:1)であるか否かを判定する。隣接フラグは、対象カウンタ503において、第2カウンタ502に連動して設定されるフラグである。対象カウンタ503は、ステップS6において隣接フラグがハイである場合、ステップS7に処理を進め、隣接フラグがロー(Low:0)である場合、ステップS12に処理を進める。
仮に、図9に示す例において、検出信号D3がパルス検出部51に入力され、1回目のパルス波の立ち上がりをステップS3においてパルス検出部51が検出したとする。この場合、ステップS6において隣接フラグはローであり、計数部50は、ステップS12に処理を進める。
ステップS12において、第2カウンタ502は、ステップS3において立ち上がりが検出された時点から、時間Tbの測定を開始する。対象カウンタ503は、第2カウンタ502に連動して、ステップS3において立ち上がりが検出された時点から隣接フラグをハイに設定し、ステップS8に処理を進める。
ステップS8において、制御部5は、予め設定された基板100のトラック範囲の光走査部3による走査が終了したか否かを判定する。制御部5は、走査が終了している場合、処理を終了し、未だ走査が終了していない場合、ステップS1に処理を戻す。
仮に、図9に示す例において、検出信号D3がパルス検出部51に入力され、2回目のパルス波の立ち上がりをステップS3においてパルス検出部51が検出したとする。この場合、ステップS6において隣接フラグはハイであり、計数部50は、ステップS7に処理を進める。
ステップS7において、第2カウンタ502は、ステップS3において1回目の立ち上がりが検出された時点から次のステップS3において2回目の立ち上がりが検出された時間までの時間Tbを確定した後、リセットする。対象カウンタ503は、第2カウンタ502により確定された時間Tbを取得し、2回のステップS1~S3において検出された2つのパルス波のパルス間隔Tbとして保持し、隣接フラグをローに設定する。
また、対象カウンタ503は、ステップS7において、光走査部3が互いに隣接する複数のビーズ66を走査したと判断し、記憶部52から第1パルス幅T1を読み出し、ビーズ66の個数を、1+(Tb/T1)として計数する。このとき、Tb/T1は、例えば四捨五入などにより、整数に丸められる。すなわち、図9に示す例において、検出信号D3がパルス検出部51に入力された場合、ビーズ66の個数は、1+2=3となる。このように、対象カウンタ503は、第1基準値T2未満のパルス幅Taをそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、ビーズ66の個数を1+(Tb/T1)として計数する。対象カウンタ503は、ステップS7の後、ステップS8に処理を進める。
ステップS5においてパルス幅Taが第1基準値T2以上である場合、ステップS9において、対象カウンタ503は、記憶部52から第2基準値T4を読み出し、ステップS4において保持したパルス幅Taが第2基準値T4未満か否かを判定する。対象カウンタ503は、パルス幅Taが第2基準値T4未満である場合、ステップS10に処理を進め、パルス幅Taが第2基準値T4以上である場合、ステップS11に処理を進める。
仮に、図10に示すように、検出信号D1がパルス検出部51に入力され、パルス波の立ち上がりをステップS3においてパルス検出部51が検出したとする。この場合、ステップS5においてパルス幅Taが第1基準値T2以上、ステップS9においてパルス幅Taが第2基準値T4未満であり、計数部50は、ステップS10に処理を進める。
ステップS10において、対象カウンタ503は、光走査部3が他のビーズ66から孤立する1個のビーズ66を走査したと判断し、ビーズ66の個数を1として計数する。このように、対象カウンタ503は、第1基準値T2以上第2基準値T4未満のパルス幅Taをパルス波が検出されると、ビーズ66の個数を1として計数する。また、対象カウンタ503は、隣接フラグをローに設定し、ステップS8に処理を進める。
ステップS9においてパルス幅Taが第2基準値T4以上である場合、ステップS11において、対象カウンタ503は、第2基準値T4以上のパルス幅を有するパルス波を、異物、凝集塊等に起因するノイズであると判断し、計数に際して無視する。また、対象カウンタ503は、隣接フラグをローに設定し、ステップS8に処理を進める。
また、一回目のステップS1~S3において第1基準値T2未満のパルス幅Taを有するパルス波が検出された次に、2回目のステップS1~S3において第1基準値T2以上第2基準値T4未満のパルス幅Taを有するパルス波が検出されたとする。この場合、対象カウンタ503は、先に検出されたパルス波を異物、凝集塊等に起因するノイズであると判断し、計数に際して無視する。
以上のように、対象カウンタ503は、検出信号に第1基準値T2未満のパルス幅Taを有するパルス波が検出されると、パルス幅Ta及び第1パルス幅T1に基づいた数を加算していくことにより、ビーズ66の個数を計数する。また、対象カウンタ503は、検出信号に第1基準値T2以上第2基準値T4未満のパルス幅Taをパルス波が検出されると、1を加算していくことにより、ビーズ66の個数を計数する。
(比較例)
図11を用いて、本発明の実施の形態に係る分析装置によるビーズ66の計数結果と、従来方法による計数結果との比較例を説明する。横軸は、検出対象となるバイオマーカーの濃度であり、縦軸はビーズ66の計数結果である。本発明の実施の形態に係る分析装置による計数結果を曲線P1に、従来方法による計数結果を曲線P2に示す。
図11を用いて、本発明の実施の形態に係る分析装置によるビーズ66の計数結果と、従来方法による計数結果との比較例を説明する。横軸は、検出対象となるバイオマーカーの濃度であり、縦軸はビーズ66の計数結果である。本発明の実施の形態に係る分析装置による計数結果を曲線P1に、従来方法による計数結果を曲線P2に示す。
曲線P1に対して、曲線P2はバイオマーカーの濃度に関わらず計数結果が少なくなっており、最大数十%の差が生じている。曲線P1及び曲線P2に沿う破線のように、理想的にはバイオマーカー含有量が0であれば計数結果も0となるべきである。しかしながら、抗原抗体反応を用いた検出方法では、基板100上に、抗原抗体反応による結合の他に非特異吸着が生じる。このため、バイオマーカーの濃度が0であっても、非特異吸着により基板100の表面に固定されたビーズ66が計数されてしまう。
曲線P1,P2において、誤差下限と曲線P1,P2のバックグラウンドノイズレベルQとの接点(交点)をそれぞれ最小検出感度R1,R2という。本発明の実施の形態に係る分析装置の最小検出感度R1は、従来方法の最小検出感度R2に比べて向上しており、バイオマーカー検出の感度が向上していることが分かる。よって、本発明の実施の形態に係る分析装置によれば、疾病等の検出感度を向上することができる。
本発明の実施の形態に係る分析装置は、基板100上にビーズ66が隣接して固定される場合であっても、検出信号のパルス幅に応じて、加算する数を変更してビーズ66の個数を計数する。よって、本発明の実施の形態に係る分析装置によれば、ビーズ66の配置により検出信号に不規則なパルス波が検出された場合であっても、ビーズ66の個数を高精度に計数することが可能となり、検出対象に対する定量性を向上することができる。
また、本発明の実施の形態に係る分析装置によれば、第1基準値T2及び第2基準値T4が検出信号のジッタ値を考慮されて決定されることにより、パルス幅Taの類別に際してジッタの影響を低減することができ、ビーズ66の個数を更に高精度に計数することができる。
(その他の実施の形態)
上記のように、本発明を実施の形態によって記載したが、この開示の一部をなす論述及び図面は本発明を限定するものであると理解すべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施の形態、実施例及び運用技術が明らかとなろう。
上記のように、本発明を実施の形態によって記載したが、この開示の一部をなす論述及び図面は本発明を限定するものであると理解すべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施の形態、実施例及び運用技術が明らかとなろう。
例えば、既に述べた実施の形態において、検出対象である生体物質と、検出対象と特異的に結合する特異性生体物質との組み合わせは、抗原62と、抗体61及びビーズ66に固定された抗体65との組み合わせに限るものでない。特異的に結合する組み合わせは、例えば、リガンドと受容体(酵素タンパク質、レクチン、ホルモン等)との組み合わせ、互いに相補的な塩基配列を有する核酸の組み合わせ等であってもよい。
さらに、基板100表面にシリコーンゴム等で作製された井戸型のウェルを設置し、そのウェル内のみの領域において、対象の抗体61、抗原62、ビーズ66などの反応、未反応物の洗浄を行うことで、スピン洗浄、乾燥などのプロセスを簡略化できたり、基板100の面積が許す範囲で複数のウェルを同一半径上に設置することにより、複数検体の同時計測も可能である。
また、本発明は、既に述べた実施の形態に係る通知装置の機能をコンピュータに実行させるためのプログラムを含む。プログラムは、記録媒体から読み取られコンピュータに取り込まれてもよく、電気通信回線を介して伝送されてコンピュータに取り込まれてもよい。
その他、上述の構成を相互に応用した構成等、本発明はここでは記載していない様々な実施の形態等を含むことは勿論である。したがって、本発明の技術的範囲は上記の説明から妥当な特許請求の範囲に係る発明特定事項によってのみ定められるものである。
特願2014-072536号(出願日:2014年3月31日)の全内容は、ここに援用される。
本発明によれば、検出信号のパルス幅に応じて、加算する数を変更することにより、検出対象に対する定量性を向上できる分析装置及び分析方法を提供することができる。
2 モータ
3 光走査部
4 光学系制御部
5 制御部
21 回転制御部
31 レーザ発振器
32 コリメータレンズ
33 ビームスプリッタ
34 アクチュエータ
35 対物レンズ
36 集光レンズ
37 光検出部
50 計数部
51 パルス検出部
52 記憶部
61 抗体
62 抗原
63 試料液
64 緩衝液
65 抗体
66 ビーズ(粒子)
100 基板
501 第1カウンタ
502 第2カウンタ
503 対象カウンタ
3 光走査部
4 光学系制御部
5 制御部
21 回転制御部
31 レーザ発振器
32 コリメータレンズ
33 ビームスプリッタ
34 アクチュエータ
35 対物レンズ
36 集光レンズ
37 光検出部
50 計数部
51 パルス検出部
52 記憶部
61 抗体
62 抗原
63 試料液
64 緩衝液
65 抗体
66 ビーズ(粒子)
100 基板
501 第1カウンタ
502 第2カウンタ
503 対象カウンタ
Claims (8)
- 表面に粒子が固定された基板を光学的に走査する光走査部と、
前記光走査部が前記基板を走査することにより前記光走査部から取得される検出信号に含まれるパルス波及び前記パルス波のパルス幅を検出するパルス検出部と、
前記パルス検出部により第1基準値未満のパルス幅をそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、前記2つのパルス波のパルス間隔に基づいて、前記粒子の数を計数する計数部と、
を備えることを特徴とする分析装置。 - 前記計数部は、前記検出部において、前記第1基準値未満のパルス幅をそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出された場合、2つのパルス波の前記パルス間隔を、前記光走査部が互いに隣接する複数の前記粒子を走査した場合に検出された第1パルス幅で割った数に基づいて、前記粒子の数を計数することを特徴とする請求項1に記載の分析装置。
- 前記第1基準値は、前記第1パルス幅と前記検出信号が有するジッタ値との和であることを特徴とする請求項1又は2に記載の分析装置。
- 前記計数部は、前記検出部において、前記第1基準値以上かつ第2基準値未満のパルス幅を有するパルス波が検出されると、前記粒子の数を1として計数することを特徴とする請求項1~3のいずれか1項に記載の分析装置。
- 前記第2基準値は、前記第2パルス幅と前記検出信号が有するジッタ値との和であることを特徴とする請求項4に記載の分析装置。
- 前記計数部は、前記検出部において、前記第1基準値未満のパルス幅を有するパルス波が検出された次に、前記第1基準値以上前記第2基準値未満のパルス幅を有するパルス波が検出された場合において、先に検出された前記第1基準値未満のパルス幅を有するパルス波を計数しないことを特徴とする請求項4又は5に記載の分析装置。
- 前記計数部は、前記検出部において、前記第2基準値以上のパルス幅を有するパルス波が検出された場合において、前記第2基準値以上のパルス幅を有するパルス波を計数しないことを特徴とする請求項4~6のいずれか1項に記載の分析装置。
- 表面に粒子が固定された基板を光学的に走査することと、
前記基板を走査することにより取得される検出信号に含まれるパルス波及び前記パルス波のパルス幅を検出することと、
前記検出信号から第1基準値未満のパルス幅をそれぞれ有する2つのパルス波が2回連続して検出されると、前記2つのパルス波のパルス間隔に基づいて、前記粒子の数を計数することと
を含むことを特徴とする分析方法。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201580014194.3A CN106332551B (zh) | 2014-03-31 | 2015-03-12 | 分析装置和分析方法 |
EP15772829.6A EP3128311B1 (en) | 2014-03-31 | 2015-03-12 | Analysis device and analysis method |
US15/271,328 US20170010260A1 (en) | 2014-03-31 | 2016-09-21 | Analysis device and analysis method |
US16/412,807 US10627398B2 (en) | 2014-03-31 | 2019-05-15 | Analysis device and analysis method |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014-072536 | 2014-03-31 | ||
JP2014072536A JP6237417B2 (ja) | 2014-03-31 | 2014-03-31 | 分析装置及び分析方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
US15/271,328 Continuation US20170010260A1 (en) | 2014-03-31 | 2016-09-21 | Analysis device and analysis method |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2015151752A1 true WO2015151752A1 (ja) | 2015-10-08 |
Family
ID=54240084
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2015/057303 WO2015151752A1 (ja) | 2014-03-31 | 2015-03-12 | 分析装置及び分析方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170010260A1 (ja) |
EP (1) | EP3128311B1 (ja) |
JP (1) | JP6237417B2 (ja) |
CN (1) | CN106332551B (ja) |
WO (1) | WO2015151752A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107367453A (zh) * | 2016-05-13 | 2017-11-21 | 上海纳衍生物科技有限公司 | 一种基于直流电阻抗测量的细胞粒子检测方法 |
JP7218788B2 (ja) * | 2018-06-06 | 2023-02-07 | 株式会社Jvcケンウッド | 分析用閾値生成装置及び分析用閾値生成方法 |
JP7000998B2 (ja) * | 2018-06-06 | 2022-01-19 | 株式会社Jvcケンウッド | 分析用閾値生成装置及び分析用閾値生成方法 |
JP6962276B2 (ja) * | 2018-06-06 | 2021-11-05 | 株式会社Jvcケンウッド | 分析用閾値決定装置及び分析用閾値決定方法 |
JP7208468B2 (ja) * | 2018-08-01 | 2023-01-19 | 株式会社Jvcケンウッド | 分析装置及び分析方法 |
EP4310497A1 (en) * | 2021-03-18 | 2024-01-24 | JVCKenwood Corporation | Analysis device and analysis method |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004309288A (ja) * | 2003-04-07 | 2004-11-04 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 分析装置 |
JP2005156538A (ja) * | 2003-10-30 | 2005-06-16 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 光学分析装置およびその粒子カウント方法 |
JP2012237711A (ja) * | 2011-05-13 | 2012-12-06 | Jvc Kenwood Corp | 光学的分析装置、光学的分析方法 |
JP2013064722A (ja) * | 2011-05-13 | 2013-04-11 | Jvc Kenwood Corp | 試料分析用ディスク |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4412175A (en) * | 1981-04-30 | 1983-10-25 | Coulter Electronics, Inc. | Debris alarm |
JPS57179728A (en) * | 1981-04-30 | 1982-11-05 | Toa Medical Electronics Co Ltd | Apparatus for analyzing particle |
JP2667867B2 (ja) * | 1988-03-30 | 1997-10-27 | 東亜医用電子株式会社 | 粒子解析装置 |
JP2899359B2 (ja) * | 1990-05-08 | 1999-06-02 | 興和株式会社 | 流体中の粒子計測方法及びその装置 |
JPH055741A (ja) | 1990-10-09 | 1993-01-14 | Idemitsu Petrochem Co Ltd | 免疫学的定量分析方法 |
US5561515A (en) * | 1994-10-07 | 1996-10-01 | Tsi Incorporated | Apparatus for measuring particle sizes and velocities |
DE19735066C1 (de) * | 1997-08-13 | 1999-01-28 | Hydac Filtertechnik Gmbh | Auswerteverfahren für einen Partikelzähler und Vorrichtung zum Durchführen des Verfahrens |
JP2002530786A (ja) | 1998-10-30 | 2002-09-17 | バースタイン・ラボラトリーズ・インコーポレイテッド | 同時読み取り可能な解析分析材料を備えたトラッキング可能な光ディスク |
AU6319800A (en) * | 1999-08-18 | 2001-03-13 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Optical disk reproducing method and reproducing device |
US7221632B2 (en) * | 2001-07-12 | 2007-05-22 | Burstein Technologies, Inc. | Optical disc system and related detecting methods for analysis of microscopic structures |
US20030129665A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-07-10 | Selvan Gowri Pyapali | Methods for qualitative and quantitative analysis of cells and related optical bio-disc systems |
EP1425696A2 (en) * | 2001-09-12 | 2004-06-09 | Burstein Technologies, Inc. | Methods for differential cell counts including related apparatus and software for performing same |
JP2005523684A (ja) * | 2001-10-24 | 2005-08-11 | バースタイン テクノロジーズ,インコーポレイティド | バイオドライブ用のセグメント領域検出器とその関連方法 |
JP4194787B2 (ja) * | 2002-03-14 | 2008-12-10 | パナソニック株式会社 | 分析装置とそれに使用する分析用ディスク |
JP4517145B2 (ja) * | 2004-09-02 | 2010-08-04 | 国立大学法人北海道大学 | 光散乱装置、光散乱測定法、光散乱解析装置および光散乱測定解析法 |
EP1875200A1 (en) * | 2005-04-29 | 2008-01-09 | Honeywell International Inc. | Cytometer cell counting and size measurement method |
JP2008071422A (ja) * | 2006-09-14 | 2008-03-27 | Sanyo Electric Co Ltd | トラックジャンプ制御回路 |
US7847923B2 (en) * | 2006-09-29 | 2010-12-07 | Millipore Corporation | Differentiation of flow cytometry pulses and applications |
TW201017149A (en) * | 2008-08-06 | 2010-05-01 | Invitrox Inc | Use of focused light scattering techniques in biological applications |
JP5877155B2 (ja) * | 2010-07-26 | 2016-03-02 | オリンパス株式会社 | 発光プローブを用いて溶液中の希薄粒子を検出する方法 |
US8691160B2 (en) * | 2011-05-13 | 2014-04-08 | JVC Kenwood Corporation | Sample analysis disc and method of producing sample analysis disc |
US9140638B2 (en) * | 2013-03-15 | 2015-09-22 | Particles Plus, Inc. | Pulse discriminator for particle counter |
-
2014
- 2014-03-31 JP JP2014072536A patent/JP6237417B2/ja active Active
-
2015
- 2015-03-12 EP EP15772829.6A patent/EP3128311B1/en active Active
- 2015-03-12 CN CN201580014194.3A patent/CN106332551B/zh active Active
- 2015-03-12 WO PCT/JP2015/057303 patent/WO2015151752A1/ja active Application Filing
-
2016
- 2016-09-21 US US15/271,328 patent/US20170010260A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-05-15 US US16/412,807 patent/US10627398B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004309288A (ja) * | 2003-04-07 | 2004-11-04 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 分析装置 |
JP2005156538A (ja) * | 2003-10-30 | 2005-06-16 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 光学分析装置およびその粒子カウント方法 |
JP2012237711A (ja) * | 2011-05-13 | 2012-12-06 | Jvc Kenwood Corp | 光学的分析装置、光学的分析方法 |
JP2013064722A (ja) * | 2011-05-13 | 2013-04-11 | Jvc Kenwood Corp | 試料分析用ディスク |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
KOJI TSUJITA ET AL.: "Ultrahigh-Sensitivity Biomarker Sensing System Based on the Combination of Optical Disc Technologies and Nanobead Technologies", JAPANESE JOURNAL OF APPLIED PHYSICS, vol. 52, no. 952, 2013, pages 09LB02 - 1- 09LB02-4, XP055228014, ISSN: 0021-4922 * |
MASAYUKI ONO ET AL.: "Hikari Disc Gijutsu o Oyo shita Biomarker Koseido Kenshutsu Gijutsu", SOCIETY FOR CHEMISTRY AND MICRO-NANO SYSTEMS DAI 27 KAI KENKYUKAI KOEN YOSHISHU, vol. 27 th, May 2013 (2013-05-01), pages 23, XP008183992 * |
See also references of EP3128311A4 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106332551A (zh) | 2017-01-11 |
CN106332551B (zh) | 2019-10-15 |
US10627398B2 (en) | 2020-04-21 |
US20190265237A1 (en) | 2019-08-29 |
EP3128311B1 (en) | 2021-10-20 |
EP3128311A1 (en) | 2017-02-08 |
US20170010260A1 (en) | 2017-01-12 |
EP3128311A4 (en) | 2017-04-19 |
JP6237417B2 (ja) | 2017-11-29 |
JP2015194403A (ja) | 2015-11-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10627398B2 (en) | Analysis device and analysis method | |
US20200088626A1 (en) | Analysis device and analysis method | |
CN107076662B (zh) | 分析装置以及分析方法 | |
JP5776433B2 (ja) | 光学的分析装置、光学的分析方法 | |
JP2015127691A (ja) | 分析用基板、分析用基板の製造方法及び基板分析装置 | |
EP3460473B1 (en) | Analysis method and analysis device | |
JP5899908B2 (ja) | 試料分析用ディスク | |
JP2017058242A (ja) | 検体検出用ユニット、分析装置、及び、分析方法 | |
US8691160B2 (en) | Sample analysis disc and method of producing sample analysis disc | |
CN112219107B (zh) | 分析用阈值生成装置以及分析用阈值生成方法 | |
JP5510388B2 (ja) | 光学的分析装置、光学的分析方法 | |
JP5939021B2 (ja) | 試料分析用ディスク | |
JP2018136297A (ja) | 分析装置及び分析方法 | |
JP5958066B2 (ja) | 試料分析用ディスク | |
JP6760508B2 (ja) | 分析方法及び分析装置 | |
WO2019235209A1 (ja) | 分析用閾値決定装置及び分析用閾値決定方法 | |
JP7208468B2 (ja) | 分析装置及び分析方法 | |
JP2012255773A (ja) | 試料分析用ディスクおよび試料分析用ディスク製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 15772829 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
REEP | Request for entry into the european phase |
Ref document number: 2015772829 Country of ref document: EP |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2015772829 Country of ref document: EP |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |