20 (S ) -原人参二醇在制备抗抑郁药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域, 具体地说, 涉及 20 ( S ) -原人参二醇在制备抗抑 郁药物中的应用。 背景技术
抑郁症是危害人类健康的常见病、 多发病, 其以情绪抑郁为主要表现的 疾病, 在精神疾病中, 属情感性精神障碍范畴。 抑郁症的发作表现可以概括 的称为 "三低", 即情绪低落、 思维迟缓和意志消沉。 其核心症状是情绪低落, 病人体验到情绪低、 悲伤, 在此基础上病人会感到绝望、 无助与无用, 并出 现兴趣缺乏和乐趣丧失; 其心理症状表现为焦虑、 自责自罪、 妄想或幻觉、 注意力和记忆力下降、 ***倾向等; 其躯体症状表现为睡眠紊乱、 食欲下降、 体重减轻、 ***减退、 神疲乏力等。
抑郁症发病一般较缓慢, 数周至数月不等。 少数因心理社会因素诱发者 则发病较急。 开始常表现为失眠、 食欲不振、 精神萎靡、 工作效率下降等症 状, 以后情绪低落、 悲观失望甚至消极***等症状逐渐突出。
在西方发达国家, 抑郁症是一种普遍的精神疾病, 其中终身抑郁症的发 病率在 6 ~ 8%之间, 随着人口的逐步老龄化,抑郁症在 60岁以上人群中的发 病率高达 20 ~ 50%, 统计资料显示, 美国抑郁症的发病率仅次于心脏病, 年 均治疗费在 440亿美元左右, 抑郁症正成为一个严重的全球问题。
在我国, 随着生活节奏的加快, 各种压力增强, 精神疾病的患病率呈逐 年上升的趋势, 抑郁症的诊断和治疗也日益为广大的社区和初级医疗机构的 医生所重视, 并普遍为广大患者接受。 目前, 抑郁症患者已经占到精神*** 科室门诊病房总人数的 20 ~ 30%, 另据专家估计, 中国抑郁症患者接受治疗 的比例将从现在的 25%上升到 2010年的 40%。其中女性高于男性, 可能与女 性生活负担较重, 面临应激时间较多有关。 抑郁症的发病率很高, 但现在对 它的发病原因仍不十分清楚, 可能与社会心里因素、 遗传、 人体的生化变化 及神经内分泌有关。 中国的抗抑郁药巿场规模还比较小, 但增长速度很快,
巿场潜力巨大。
现有治疗抑郁症手段主要仍为服用抗抑郁药物。 在 20世纪 50年代, 第 一个开发的治疗抑郁症的药物是单胺氧化酶抑制剂, 因严重毒副作用被三环 类抗抑郁药物取代,选择性血清素再摄取抑制剂(SSRIs )是目前的主流药物, 第二代抗抑郁药与第一代抗抑郁药物相比, 安全性大, 耐受性好。 三环类抗 抑郁药物有丙米嗪、 阿米替林、 多虑平、 氯丙米嗪、 去甲丙米嗪、 普罗替林 等, 虽然疗效肯定, 但其安全性较差, 过量时致死率较高, 这类药物不良反 应也较多, 主要表现为心血管毒性、 过渡镇静、 抗胆碱能副作用等等, 这类 药物起效慢且需每日多次给药, 因而病人的依从性差。 选择性血清素再摄取 抑制剂(SSRIs )患者的耐受性好, 副作用, 特别是心血管和抗胆碱能副作用 较少, 但胃肠症状和性功能障碍较突出。 镇静、 口干、 便秘等症状; 帕罗西 汀治疗时较多, 焦虑、 不安、 厌食、 失眠等症状氟西汀比较多, 腹泻舍取林 较多。 目前还没有一种理想的抗抑郁药物, 能够具有较低的副作用, 与其他 药物合用有最小的副作用, 并且过量使用也很安全。
目前最常使用的是 SSRI类药物,但患者用药后胃肠道不适主诉增多, 睡 眠障碍和性功能障碍亦比 TCA 类药物更为常见。 尤其引起高度重视的是 "5-HT综合征", 这是由于对脑干的 5-HT1A受体的超量刺激引起的, 临床表 现有肌阵挛、 高热、 高血压和死亡的危险。 还有报道某些抗抑郁药物引起患 者服药后***倾向增加。 因此, 开发一种较为安全有效、 来源自然的天然抗 抑郁药物已成为当务之急。
原人参二醇是二醇组人参皂甙的甙元, 分为 20- ( S )原人参二醇和 20- ( R )原人参二醇, 它们互为对映异构体, 其结构如下:
HO OH
人,丄、 X .、. ..,丄.、
Z
Her /;、 --"·"'" u HyO, 、 γvτ"—
20- ( S )原人参二醇 20- ( R )原人参二醇
20- ( S ) 原人参二醇是重要的人参皂甙的甙元之一, 中国专利申请 02146549.5和 200410002109.5公开了其抗肿瘤活性, 但本发明前国内外未曾 见到其抗抑郁活性方面的任何报道。 发明内容
本发明的目的在于提供 20- ( S )原人参二醇在制备抗抑郁型精神病药物 中的应用。
我们以含人参皂苷的人参属植物或叶的总皂甙提取物、 绞股蓝属植物的 绞股蓝提取物为原料, 在有机溶剂中进行氧化碱解反应, 经柱层析纯化, 可 以高收率的得到高纯度的原人参二醇, 此方法已经获得了中国发明专利 (专 利号为: 2004100180388 )。
本发明 20 ( S ) -原人参二醇在制备治疗抑郁型精神病药物中的应用。 所述的 20 ( S ) -原人参二醇用于制备治疗包括人在内的哺乳动物的抑郁 型精神药物中的应用。
其中, 本发明所述的抑郁型精神病, 其核心症状是情绪低落、 兴趣缺乏、 乐趣丧失,其心理症状群包括焦虑、 自责自罪、精神病性症状(妄想和幻觉)、 认知症状(注意力和记忆力下降)、 ***观念和行为、 精神运动性迟滞或激越 等, 其躯体症状群包括睡眠紊乱、 食欲紊乱、 性功能减退、 精力丧失、 晨重 夜轻等。
抑郁型精神病按《国际疾病分类》第 10版(ICD-10 )分为: 抑郁发作和 复发性抑郁障碍、 双向情感障碍、 持续性心境障碍。 所述的抑郁发作分为轻 度、 中度和重度三种类型。 按照情感障碍的基本表现, 抑郁型精神病可分为: 抑郁性障碍和双向障碍。
在对情感障碍分类所进行的研究过程中出现过一些概念, 有些尽管不再 出现在正式的诊断分类***中, 但在临床上仍有着广泛的应用。 这些概念包 括: 重性抑郁障碍、 心境恶劣、 环性心境障碍、 轻性抑郁障碍、 复发性短暂 抑郁障碍、 经前期心境恶劣障碍、 产后忧郁障碍, 精神***症后抑郁障碍、 季节性情感障碍、 双向 I型障碍、 双向 II型障碍、 不典型抑郁、 抑郁性木僵、 快速循环的双向障碍等; 单相 /双相障碍、 内源性 /反应性抑郁、 精神病性 /神
经性抑郁、 原发性 /继发性抑郁、 隐匿性抑郁、 双重抑郁、 更年期抑郁、 迟滞 性 /激越性抑郁、 躯体疾病伴发的情感障碍、 药物所致的情感障碍。
所述的躯体疾病伴发的情感障碍中的躯体疾病是指神经***疾病、 心血 管疾病(心肌病、 充血性心力衰竭、 心肌梗塞)、 局部或***性肿瘤、 感染性 疾病、 内分泌障碍、 炎性疾病、 维生素缺乏等。
为了实现本发明的目的, 将 20 ( S ) -原人参二醇与可药用辅料混合制成 药物制剂。
所述药物制剂可以是本领域任何剂型, 优选的是口服剂、 注射剂、 片剂、 胶嚢剂、 丸剂或颗粒剂。
所属的可药用辅料也是本领域技术人员已知的, 可以根据剂型的需要进 行选择和组合。 如口服液中可选择使用水作为溶剂并组合吐温等乳化剂, 还 可以加入蔗糖等甜味剂。
药物制剂中 20 ( S ) -原人参二醇的含量可以根据使用量来确定, 如单位 剂量中可以含有 10 ~ 100亳克的活性成分。
生物胺与抑郁型情感障碍密切相关, 情感障碍患者存在生物胺水平和生 物胺神经通路功能乃至结构的异常,去甲肾上腺素( NE )和五羟色胺( 5-HT ) 被认为和情感障碍的关系最为密切, NE和 /或 5-HT再摄取抑制剂是抗抑郁药 物的主体。
经过一系列的药理药效学试验表明, 本发明的 20 ( S ) -原人参二醇具有 抗抑郁作用。
抗抑郁模型动物试验, 表明①抗利血平致眼睑下垂抑郁模型试验显示, 15mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇多次给药 (10天)对小鼠利血平致眼睑下 垂具有明显的抑制作用。 ②抗利血平致运动不能抑郁模型试验显示, 15mg/kg20 ( S ) -原人参二醇多次给药( 10天)对小鼠利血平致运动不能具有 明显的抑制作用。 ③小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型试验显示, 15mg/kg剂 量 20 ( S ) -原人参二醇单次给药能明显缩短小鼠悬尾不动时间。 15、 7.5 和 3.75mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇多次给药 (10天)能显著或明显缩短小鼠悬 尾不动时间。 ④小鼠强迫游泳法获得性绝望抑郁模型试验显示, 15、 7.5 和
3.75mg/kg剂量 20( S )-原人参二醇单次给药能显著或明显缩短小鼠游泳 4min 内累计不动的时间。 15、 7.5、 3.75mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇多次给药 (10天)均能显著缩短小鼠游泳 4min内累计不动的时间。⑤慢性应激性大鼠抑 郁模型的行为学试验显示, 13.33和 6.67mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇能极 显著或显著增加动物垂直活动次数, 显著或明显增加动物水平活动次数。 ⑥ 夹具法大鼠抑郁模型试验显示: 13.33和 6.67mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇 皆能极显著增加动物垂直活动次数, 显著增加动物水平活动次数。 3.33mg/kg 剂量 20 ( S ) -原人参二醇能明显增加动物垂直活动次数。 6.67mg/kg20 ( S ) - 原人参二醇能明显升高模型大鼠脑内 NE含量, 333mg/kg20 ( S ) -原人参二 醇能明显升高模型大鼠脑内 NE、 5-HT、 HAV含量。
抗抑郁药理作用分析试验显示, 15和 7.5mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇 能明显加强 5-羟色氨酸震颤作用和明显加强左旋多巴行为效应的作用; 10、 1 和 0.1 g/ml20 ( S ) -原人参二醇分别能极显著、 显著和明显抑制 5- HT和 NA 的再摄取。
本发明的 20-(S)原人参二醇来源于植物原料, 生产工艺简单, 成本低, 疗效确切, 在抗抑郁方面具有很好的应用前景。 具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地理解本发明, 但 下述实施例不是对本发明的限定。 实施例 1
三七叶甙 5.0千克、 正丁醇 60千克、 乙醇钠 6.0千克, 加入反应釜, 搅拌, 通入氧气, 保持鼓泡计中有气泡连续冒出, 升温, 控温 95±5°C, 反应 72小时, 降温至 50°C , 加入正丁醇饱和的水洗涤两次, 第一次 70千克, 第二次 30千克, 分去水层, 正丁醇层减压浓缩回收至干, 回收正丁醇, 残渣加水 50千克, 搅 拌, 用乙酸乙酯提取三次, 分别为 25千克、 12千克和 12千克, 水层弃去, 合 并乙酸乙酯层, 用饱和食盐水洗涤二次, 每次 15千克, 分去水层。 在乙酸乙 酯层中加入 3千克无水硫酸钠, 干燥, 乙酸乙酯层减压浓缩至干, 回收乙酸乙
酯, 得到原人参二醇粗品,在粗品中加入乙酸乙酯 2.0千克, 混匀, 上硅胶柱, 进行柱层析, 依次用石油醚(60~90°C) -乙酸乙酯(3: 1) 200升和石油醚 (60~90°C ) -乙酸乙酯 (1: 1) 500升洗脱, 流速: 8±2升 /小时, 以 4.0±0.5升 为一份, 收集洗脱液, 以 TTLC监测每份洗脱液的成分, 单组分洗脱液减压浓 缩, 残渣在 70°C下真空干燥 16小时, 即得 20 (S) -原人参二醇。
实施例 2
10g 20 (S) -原人参二醇, 加乳糖适量, 混匀, 以 70%乙醇为黏合剂, 制粒, 装入胶囊, 即得, 每粒含 20 (S) -原人参二醇 50mg。
实施例 3
乳化剂 (吐温、 司盘等)适量, 溶于水中, 加入 10g 20 (S) -原人参二 醇, 研磨制成初乳, 再加水至 1000ml, 即得口服液。 以实施例 3中的乳剂,其中的水改用注射用水,经过过滤, 灭菌,灌封后, 即得注射液。
实施例 5
10g20 (S) -原人参二醇, 加乳糖适量, 混匀, 以 70%乙醇为黏合剂, 制粒, 干燥, 加入适量硬酯酸镁, 压片, 即得片剂, 每片含 20 (S) -原人参 二醇 50mgo
实施例 6
10g20 (S) -原人参二醇, 加蔗糖适量, 混匀, 以 70%乙醇为黏合剂, 制粒, 干燥, 即得颗粒剂。
实验例 1
通过本领域证明抗抑郁活性的典型试验模型来研究本发明的药理药效学 情况。
1.抗利血平眼睑下垂抑郁模型试验
(1)试验材料
①药品
20 (S) -原人参二醇, 由上海中药创新研究中心研制, 批号: 050501,
含量 93.62%。用量及服法: 临床上 60kg体重成人每日口服 50mg,计算成人 日用药量为: 50mg/24h ÷ 60kg体重 =0.83mg/kg体重。试验时配制方法: 20( S ) -原人参二醇, 加入适量 03%CMCNa+吐温 80溶液, 超声混匀, 配制成所需 浓度的混悬液使用。
氟西汀, 美国礼来公司出品, 20mg粒, 批号: A103400, 临用时用 0.3%CMCNa溶液配成所需浓度。
利血平注射液,广东邦民制药厂有限公司,规格: lmgml,批号: 050411。
0.3%CMCNa+吐温 80溶液, 按 0.3%CMCNa与吐温 80体积之比为 200: 1的比例混合而成。
表 1 20 ( S ) -原人参二醇给药方案
药物浓度 给药储 给药剂量 给药 给药 动物 组 别 药物
(mg/ml) (ml/kg) (mgkg) 倍数 途径 正常组 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 - - - - i-g 模型组 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 ― -一 - - i-g
, 氟西汀组 氟西汀胶囊 1.8 10 18 18 i-g ^ 舒乐安定组 舒乐*** 0.06 10 0.6 18 i-g '翻髓 20 (S) -原人参二醇 1.5 10 15 18 i-g 中剂量组 20 (S) -原人参二醇 0.75 10 7.5 9 i-g 低剂量组 20 (S) -原人参二醇 0.375 10 3.75 4.5 i-g 正常组 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 ― 10 - - i-g 模型组 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 -- 10 -- -- i-g 大氟西汀组 氟西汀胶囊 1.6 10 16 16 i-g 鼠翻影且 20 (S) -原人参二醇 1.33 10 13.33 16 i-g 中剂量组 20 (S) -原人参二醇 0.67 10 6.67 8 i-g 低剂量组 20 (S) -原人参二醇 0.33 10 3.33 4 i-g 注: 正常组为未进行造模的组, 模型组为造模后的组 £ 昆明种小鼠, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
(2)方法与结果
选取 50只昆明种小鼠, 皆为雄性, 鼠龄 8~9周龄, 体重 18~22g, 按 体重随机分为 5组,按表 3所列药物和剂量每日灌胃给药一次, 连续 10曰。
各组动物于末次给药后 60min,腹腔注射利血平注射剂 2mg/kg。注射后 60min 将小鼠放于支架上观察 2min, 观察各组动物中眼睑至少关闭一半以上的动物 个数。 对各组数据进行 Fisher精确检验。 结果见表 2。
表 2 20 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠利血平致眼睑下垂的影响
剂量 X次数 鼠数
组 别 眼睑至少关闭一半以上的动物数
(mg/kgxc) (只)
模型组 ― 10 10
氟西汀组 18x10 10 4*
20 (S) -原人参二醇高剂量组 15x10 10 5*
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x10 10 8
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x10 10 9
注: 各给药组与模型组比较 * P<0.05
表 2显示, 15mg/kg 20 (S) -原人参
下垂具有明显的抑制作用 (P<0.05)。
2.抗利血平致运动不能抑郁模型试验
( 1 )试验材料
①药 XL
ϊ¾
20 (S)-原人参二醇、 西汀和利血平注射液, 参见 1. (1)①项下。
②动物
昆明种小鼠, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06
(2)方法与结果
选取 50只昆明种小鼠,皆为雄性, 鼠龄 8~9周龄, 体重 18~22g, 按体 重随机分为 5组, 按表 5所列药物和剂量每日灌胃给药一次, 连续 10日。 各 组动物于末次给药后 60min,腹腔注射利血平注射剂 2.5mg/kg。注射后 60min 将小鼠放于直径 7.5cm的圆形滤纸中央, 观察 30sec内各组动物中仍然呆在 滤纸中的个数。 釆用 Fisher精确.捡验统计, 结果见表 3。
表 320 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠利血平致运动不能的影响
剂量 X次数
30sec内仍然呆在滤纸中的个数 ( mgkgxc )
模型组 ― 10 10 氟西汀组 18x10 10 3**
20 (S) -原人参二醇 ¾!l:KL 15x10 10 5*
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x10 10 7
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x10 10 8 注:各给药组与模型组比较 *P<0.05 ** P<0.01
表 3显示, 15mg/kg 20 ( S ) -原人参二醇多次给药对小鼠利血平致运动不能 具有明显的抑制作用 (P<0.05)。
3.小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型试验
( 1 )试验材料
①药品
20 (S) -原人参二醇、 氟西汀, 参见 1. (1)①项下。
②动物
昆明种小鼠实验动物生产许可证: SCXK川) 2003-06。
(2)方法与结果
① 20 (S) -原人参二醇单次给药对小鼠悬尾试验的影响
选取 50只昆明种小鼠,全雄, 鼠龄 9~10周龄, 体重 22~24g, 按体重随 机分为 5组,按表 6所列药物和剂量分别灌胃给药一次。各组动物给药后 60min, 将小鼠尾部距尖 1cm处用胶布粘贴于直径 1cm的 PVC管上, 勿使小鼠尾部 扭曲折叠, 然后架空 PVC管, 使小鼠呈倒悬状, 头部距台面 5cm, 每两只小 鼠间用隔板隔开,使其互不干扰,观察每只动物 6min内的累计不动的时间(不 动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动)。试验数据用 T检验统计, 结果见表 4。
20 (S) -原人参二醇单次给药对小鼠悬尾试验的影响
剂量 X次数 鼠数 6min内的累计不动的时间 组 别
( mg/kgxc ) (只) ( sec, x±SD ) 模型组 -- 10 108.40±27.45 氟西汀组 18x1 10 70.90±23.11**
20 (S) -原人参二醇敲 iJ¾E 15x1 10 85.40±20.21*
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x1 10 92.30±32.93
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x1 10 95.00±36.21 注:各给药组与模型组比较 *P<0.05 ** P<0.01
表 4显示, 15mgkg20 (S) -原人参二醇单次给药能明显缩短小鼠悬尾不 动时间 (P<0.05)。
② 20 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠悬尾试验的影响
选取 50只昆明种小鼠, 全雄, 鼠龄 8~9周龄, 体重 18~22g, 按体重随 机分为 5组, 按表 7所列药物和剂量每日灌胃给药一次, 连续 10天。 各组 动物于末次给药 60min后,将小鼠尾部距尖 1cm处用胶布粘贴于直径 1cm的 PVC管上, 勿使小鼠尾部扭曲折叠, 然后架空 PVC管, 使小鼠呈倒悬状, 头 部距台面 5cm,每两只小鼠间用隔板隔开,使其互不干扰,观察每只动物 6min 内的累计不动的时间(不动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动), 结果见表
20 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠悬尾试验的影响
剂量 X次数 鼠数 6min内的累计不动的时间 组 另 U
(mgkgxc) (只) ( sec, x±SD ) 模型组 ― 10 111.60±21.93 氟西汀组 18x10 10 59.10±35.40***
20 (S) -原人参二醇 15x10 10 69.90±25.71**
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x10 10 73.90±37.53*
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x10 10 83.60±35.52* 注: 各给药组与模型组比较 *P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001
表 5显示, 15、 7.5、 3.75mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇多次给药能显 著或明显缩短小鼠悬尾不动时间 (P<0.01, P<0.05 )o
4.小鼠强迫游泳法获得性绝望抑郁模型试验
( 1 )试验材料
①药品
20 (S) -原人参二醇、 氟西汀和利血平注射液, 参见 1. (1)①项下。
②动物
昆明种小鼠, 全雄, 实验动物生产许可证: SCXK(川) 2003-06。
(2)方法与结果
① 20 (S) -原人参二醇单次给药对小鼠强迫游泳试验的影响
选取 50只昆明种小鼠, 皆为雄性, 鼠龄 9~10周龄, 体重 22~24g, 按 体重随机分为 5组,按表 6所列药物和剂量分别灌胃给药一次。 各组动物给 药后 60min, 将小鼠单只放入 2500ml大烧杯中, 水温 25°C, 水深 10cm, 烧 杯壁高 20cm, 直径 14cm, 观察每只动物 6min内的后 4min内的累计不动的 时间 (不动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动)。 试验数据用 T检验统计, 结果见表 6。
20 (S) -原人参二醇单次给药对小鼠强迫游泳试验的影响
剂量 X次数 4min内累计不动的时间 组 别
( mg/kgxc ) ( sec, x±SD ) 模型组 ― 10 131.80±40.67 氟西汀组 18x1 10 86.20±32.56*
20 (S) -原人参二醇翻 ¾1 15x1 10 86.60±33.09**
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x1 10 88.10±24.84**
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x1 10 97.00±30.96* 注: 各给药组与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01
表 6显示, 15、 7.5mg/kg剂量 20(S)-原人参二醇单次给药能显著缩短 小鼠游泳 4min内累计不动的时间 (P<0.01)。 3.75mgkg 20 (S) -原人参二醇 单次给药能明显缩短小鼠游泳 4min内累计不动的时间 (P<0.05)。
② 20 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠强迫游泳试验的影响
选取 50只昆明种小鼠, 皆为雄性, 鼠龄 8~9周龄, 体重 18~22g, 按体 重随机分为 5组,按表 7所列药物和剂量每曰灌胃给药一次,连续 10天。 各 组动物于末次给药后 60min, 将小鼠单只放入 2500ml大烧杯中, 水温 25°C,
W 水深 10cm, 烧杯壁高 20cm, 直径 14cm, 观察每只动物 6min内的后 4min内 的累计不动的时间(不动指标为动物除呼吸外所有肢体均不动)。结果用 T检 验统计, 结果见表 7。
表 7 20 (S) -原人参二醇多次给药对小鼠强迫游泳试验的影响
剂量 X次数 鼠数 4min内的累计不动的时问 组 别
( mg/kgxc ) (只) ( sec, x±SD ) 模型组 ― 10 140.50±50.15 氟西汀组 18x10 10 81.50+36.77**
20 (S) -原人参二醇高剂量组 15x10 10 71.30±32.53**
20 (S) -原人参二醇中剂量组 7.5x10 10 79.30±33.70**
20 (S) -原人参二醇低剂量组 3.75x10 10 84.00+32.60** 注: 各给药组与模型组比较 ** Ρ<0.01
表 7显示, 15、 7.5、 3.75mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇多次给药均能 显著缩短小鼠游泳 4min内累计不动的时间 (P<0.01)。
5.慢性应激性大鼠抑郁模型的行为学试验
( 1 )试验材料
①药品
20 (S) -原人参二醇, 氟西汀, 参见 1. (1)①项下。
SD种大鼠, 全雄, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
(2)方法与结果
造模动物全部每笼一只孤养, 接受 21天各种不同的应激, 包括冰水游 泳(4°C, 5min)、 夹尾(3min)、 禁水 (40h)、 禁食(40h)、 配对饲养及潮湿、 束缚和通宵照明刺激, 平均每种刺激 2~3次。 正常组大鼠每笼 5只饲养, 不 予任何刺激。 各给药组于造模同时按表 8所示药物和剂量灌胃给药, 连续 21 天。 采用 Open-field法观察行为。 本实验所用敞箱为立方形, 高 40cm, 长宽 80cm, 周壁、 底面由面积相等的 25 块组成, 用白线划分。 以动物穿越底面 块数为水平活动 (crossing)得分, 以直立次数为垂直活动 (rearing)得分。
第 22天进行观察, 每只动物测定 1次, 每次测定时间为 3min, 计数水平活 动得分和垂直活动得分。 结果用 T检验统计, 结果见表 8。
20 ( S ) -原人参二醇对慢性应激性抑郁模型大鼠 Open-field法行为的影响 剂量 X次
鼠数 水平运动 垂直运动 组 别 数
(只) (次 /3min, x±SD) (次 /3min, x±SD)
(mg kgxc)
正常组 ― 10 55.70116.32 11.30±3.37 模型组 ― 10 22.60±10.45ΔΔΔ 4.40±2.12ΔΔΔ 氟西汀组 16x21 10 44.40±1.45*** 11.30±3.43***
20 ( S ) -原人参二醇 ¾!] 且 13.33x21 10 40.80±12.93** 9.50±3.34***
20 ( S ) -原人参二醇中剂量组 6.67x21 10 38.60±21.14* 8.90±4.18**
20 ( S ) -原人参二醇低剂量组 3.33x21 10 32.90±13.19 6.50±2.64 注:①模型组与正常组比较 AAAP<0.001
②各给药组与模型组比较 * Ρ<0.05 ** Ρ<0.01 *** Ρ<0.001
表 8结果显示, 模型大鼠垂直活动和水平活动都极显著减少(Ρ<0.001 ), 表明造模成功。 与模型组比较, 13.33和 6.67mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参二醇 能极显著或显著增加动物垂直活动次数 (P<0.001, P<0.01 ), 显著或明显增 加动物水平活动次数(P<0.01, P<0.05 )。
6.夹具法大鼠抑郁模型试验
( 1 )试验材料
①药品
20 ( S ) -原人参二醇, 氟西汀, 参见 1. ( 1 )①项下。
②试剂
高氯酸: 天津巿东方化工厂, 批号: 050617。
Na2EDTA: 汕头巿洗陇化工厂。 批号: 040204。
3, 4-二羟苯乙酸( 3,4-Dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) ), Fluka出品, 规格 lg/瓶, 纯度 98% , EC No.2030241, Lot&Filling code:48256/3 42932。
3 , 4-二轰苯氣 氢溴 ( 3,4-Dihydroxybenzylamine hydrobromide acid(DHBA) ) , Fluka 出品, 规格 250mg/瓶, 纯度≥98%, EC No.2403828,
Lot&Filling code:311612/l 52832。
5 -羟色氨酸(Serotonin hydrochloride(5-HT) ) ,Fluka 出品, 规格 lOOmg/ 瓶, 纯度≥98%, EC No.2444644, Lot&Filling code:357345/l 40808。
5-羟基 -3-吲哚乙酸( 5-Hydroxy-3-indoleacetic acid(5-fflAA) ) ,Fluka出品, 规格 250mg/瓶,纯度≥99%, EC No.2001954, Lot&Filling code:403262/l 22708。
高香草酸( 3-甲氧 -4-羟基苯乙酸)( Homovanillic acid(HVA) ) ,Fluka出品, 规格 250mg/瓶,纯度≥99%, EC No.2061767, Lot&Filling code:417865/l 62609。
去甲肾上腺素 (Noradrenalini Bitartras(NA) ), 中国药品生物制品鉴定所 出品, 纯度≥98%, 规格 lOOmg/瓶, 批号: 169-9402。
肾上腺素(Ad naline(Adr) ),中国药品生物制品鉴定所出品,纯度≥98%, 规格 50mg/瓶, 批号: 0154-9402。
③仪器
曰本岛津 HPLC LC-10AT, L-ECD-6A电化学检测器, N2000色谱工作站
(浙江大学智能信息研究所)。
④动物
SD种大鼠, 实验动物生产许可证: SCXK(川) 2003-06。
( 2 )方法和结果
① 造模方法:选取 60只 SD大鼠,全雄, 鼠龄 8 ~ 9周,体重 200 ~ 250g, 随机分为 6组, 按表 9所列药物与剂量各组分别灌胃每日一次。 给药当天开 始给各组 SD大鼠戴模具(单笼饲养) 21天, 模具为两块厚 0.2cm, 直径 4cm 的红色有机玻璃组成类似颈部枷锁形模具(模具可根据动物大小进行调节)。
②测试指标: 观察动物戴模具后前后情况(暴跳, 抓咬笼具、 模具, 不 断嘶叫, 反应迟钝, 行为迟缓, 动物眼睛眯小, 有眼屎, 毛色枯黄, 粪便小、 干、少、 尾呈棕红色并有鱗片出现, 消瘦等), 第 21天测定大鼠行为活动(测 定方法同慢性应激性大鼠模型), 结果见表 9。
③脑内神经递质测定:
脑组织制备: 股动脉放血致死后取出动物全脑, 去小脑后称重, 加预冷 的 0.1mol/L高氯酸(内含 0.05%Na2EDTA ) 950μ1, 2 g/ml DHBA 50μ1,超声波
匀浆, 高速离心 llOOOrpm/lOmin, 取上清液 ΙΟμΙ进样测定, 结果计算如下, 各神经递质以 ng/g脑组织湿重表示。
色谱条件:岛津 10AHPLC, L-BCD-6A电化学检测器,分离柱为 Hypersl, ODS色谱柱, 5 m, 200mmx4.6mm ID玻炭电极; 电化学检测器范围 0.1 ~ 500nA; 泵流速为 1.2ml/min, 工作电压为 +0.75V; 氧化法; 记录及数据处理 为 N2000色谱工作站 (浙江大学智能信息研究所), 参比电极与工作电极之 间电位差: 0.75V。 流动相: O.lmmol/L柠檬酸 -O.lmmol/L 醋酸钠缓冲液, pH43.7, 用去离子重蒸馏水配制, 内含甲醇 10%。 离子对 B81.2mmol/L, 二 正丁胺 1.3mmol/L, 混匀后 G4玻璃漏斗脱气后使用。
标准品配制:将 DHBA配制成 2 g/ml, NE、 DA、 DOPAC、 5-HT、 5-HIAA 和 HAV均配成 2(^g/ml。 分别取 NE、 DA、 DOPAC、 5-HT、 5- HIAA和 HAV 各 20μ1, 混合后加 0.1mmol/LHCLO4 8(^l为标准混合液六。 然后取标准混合 液六 50μ1 加 ΟΗΒΑ50μ1, 再加 0.1mmol/LHCLO4 900μ1 为标准混合液七 ( lOOng/ml ), 取 ΙΟμΙ进样。
样品递质/ DHBA lml(0.1mmol/L高氯酸) ,
X标准品进样量 X /组织重 (g ) 标准递质/ DHBA 样品进样体积
结果见表 10。
表 9 20 ( S ) -原人参二 .醇对模型大鼠 Open-field法行为的影响
剂量 X次数 鼠数 垂直活动得分 水平活动得分 组 另 (1
(mg kgxc ) (只) (次 /3min, x±SD) (次 /3min, x±SD) 正常组 ― 10 12.90±2.92 60·00±13·96 模型组 ― 10 4.60±1.84ΔΔΔ 27.60±11.34ΔΔΔ 氟西汀组 16x21 10 11.20±3.08*** 49.80±20.31** ( S ) -原人参二醇翻影且 13.33x21 10 10.10+2.60*** 46.20±10.58** ( S ) -原人参二醇中剂量组 6.67x21 10 9.30±2.00*** 44.10±13.30** ( S ) -原人参二醇低剂量组 3.33x21 10 7.00+2.05* 36.20±14.26 注:①模型组与正常组比较 ΔΔΔΡ<0.001
②各给药组与模型组比较 * Ρ<0.05 ** Ρ<0.01 *** Ρ<0.001
表 9显示, 模型大鼠垂直活动和水平活动都显著减少 (P<0.001), 表明 造模成功。 与模型组比较, 1333和 6.67mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇皆能 极显著增加模型动物垂直活动次数(P<0.001), 显著增加模型动物水平活动 次数(P<0.01)。 3.33mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇能明显增加模型动物垂 直活动次数(P<0.05)。
表 10 20 (S)-原 Λ参二醇对模型大鼠脑内单胺类神经递质及代谢产物含量的影响 (x±SD)
386.71 2Z9 Ώ2Α 14754 1236 5851 正常组
±87.00 ±226 ±ZQ5 ±3953 ±2.95 ±933
377.40 2052Λ 1030ΔΔ 99.98ΔΔ 8.13Δ 47.84Δ 模型组 ―
±39.41 ±231 ±1.77 ±14.95 ±1.11 ±8.09
406S7 2153 13.67*** 136^8*** 8.42 6217***± 氟西汀组 16x21
±4951 ±3.15 ±0.91 ±14.49 ±1.16 434
20 (S) -原人
394.41 20.68 11.04 10281 8.62 53.19 参二醇高剂量 13.33x21
±5027 ±336 ±1.49 +17.56 ±152 ±8.76 组
20 (S) -原人
401.67 2Z17 1213* 113.18 9.02 5657 参二醇中剂量 6.67x21
±34.93 ±183 ±1.67 ±18.12 ±233 ±1080 组
20 (S) -原人
37556 2157 1215* 114.98* 8.78 5730* 参二醇低剂量 3.33x21
±3211 ±235 ±131 ±1350 ±1.75 ±750 组
注: ①模型组与正常组比较 ΔΡ<0.05 ΔΔΡ<0.01
②各给药组与模型组比较 * Ρ<0.05 *** Ρ<0.001
表 10结果显示, 模型组与对照组比较, 脑内 DOPAC、 5-HIAA, HAV、 和 NE、 5-HT含量分别明显、 显著降低 (P<0.05、 P<0.01 )表明造模成功。 6.67mg/kg 20 (S) -原人参二醇连续给药 21天, 能明显升高模型大鼠脑内 NE 含量(P<0.05), 3.33 mg/kg20 (S) -原人参二醇连续给药 21天, 能明显升高 模型大鼠脑内 NE、 5-HT, HAV含量(P<0.05)。
7.抗抑郁药理作用分析
7.1 L-5-羟色氨酸所致小鼠震颤试验
①药品
20 (S) -原人参二醇和氟西汀, 参见 1. (1)①项下。
L-5-羟色氨酸, Sigma公司, Lot:112K1258。
②动物
昆明种小鼠, 全雄, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
(2)方法与结果
选用 70只昆明种小鼠, 雄性, 鼠龄 8 9周, 体重 18~22g, 按体重随 机分层分为 7组。 按表 13所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药 1次。 给药后 60min, 各鼠腹腔注射 5-羟色氨酸 200mg/kg (不引起小鼠震颤的最高剂量), 随后将小鼠单个放在笼内(16x27cm), 观察 20πώι内出现震颤的动物数。 结 果用 Fisher精确检验统计, 结果见表 11。
20 (S) -原人参二醇对 5-羟色氨酸震颤作用的影响
剂量 X次数 鼠数 震颤鼠数 组 别
( mgkgxc ) (只) (只) a3%C na+吐温 80溶夜 +5-羟色氨酸组 ― 10 0
氟西汀组 18x1 10 0
氟西汀 +5-羟色氨酸 18x1 10
20 (S) -原人参二醇组 15x1 10 0
20 (S) -原人参二醇 +5-羟色氨酸组 15x1 10 6*
20 (S) -原人参二醇 +5-羟色氨酸组 7.5x1 10 5*
20 (S) -原人参二醇 +5-羟色氨酸组 3.75x1 10 2
注: 各给药组与 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 +5-羟色氨酸组比较 * P<0.05 *** P<0.001 表 11结果显示, 仅给予小鼠 L-5-羟色氨酸或受试药, 动物不出现震颤, 而在给予受试药后再给 5-羟色氨酸, 则随着剂量的增大, 出现震颤的动物数 增多, 15和 7.5mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇能明显加强 5-羟色氨酸震颤 作用 (P<0.05)。
7.2 加强左旋多巴行为效应的试验
①药品
20 (S) -原人参二醇, 氟西汀参见 1. (1)①项下。
左旋多巴片, 北京曙光药业有限责任公司生产, 批号: 041120, 规格: 0.25gxl00片。 临用时用蒸馏水配成 20mg/ml药液, 2500rpm/min离心 20min 取上清备用。
②动物
昆明种小鼠, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
(2)方法与结果
选用 70只昆明种小鼠, 全雄, 鼠龄 8~9周, 体重 18~22g, 按体重和 性别随机分层分为 7组。 按表 14所示药物和剂量各组小鼠灌胃给药 1次。 给 药 60min后,各鼠腹腔注射左旋多巴 200mg/kg (不引起小鼠奔跑的最高剂量), 随后将小鼠单个放在笼内, 观察 30min内出现奔跑的动物数。 结果用 Fisher 精确检验统计, 结果见表 12。
20 (S) -原人参二醇对左旋多巴行为效应的影响
剂量 X次数 鼠数 奔跑动物数 组 别
(mgkgxc) (只) (只)
03¾CMC a+吐温 80溶液 +左旋多巴组 ― 10 0 氟西汀组 18x1 10 0 氟西汀 +左旋多巴组 18x1 10
20 (S) -原人参二醇组 15x1 10 0
20 (S) -原人参二醇 +左旋多巴组 15x1 10 5*
20 (S) -原人参二醇 +左旋多巴组 7.5x1 10 5*
20 (S) -原人参二醇 +左旋多巴组 3.75x1 10 2 注: 各给药组与 0.3%CMCNa+吐温 80溶液 +左旋多巴组比较 * P<0.05 ** P<0.01
表 12结果显示, 仅给予小鼠左旋多巴或受试药, 动物不出现震颤。 给予 受试药后再给予左旋多巴, 则随着剂量的增加, 15和 7.5mgkg剂量 20 (S) -原人参二醇有明显加强左旋多巴行为效应的作用 (P<0.05)。
7.3抑制 5-HT再摄取试验
( 1 )实验材料
①药品
20 (S) -原人参二醇, 由上海中药创新研究中心研制, 批号: 050501,
含量 93.62%。 配制方法: 20 ( S ) -原人参二醇, 用 0.9%氯化钠注射液稀释成 所需浓度, 超声混匀。
氟西汀, 美国礼来公司出品, 20mg/粒, 批号: A103400, 临用时用 0.9% 氯化纳注射液配成所需浓度, 超声混匀。
0.9%氯化钠注射液: 四川科伦药业股份有限公司生产, 规格: 500ml/瓶, 批号: B050925。
②试剂
NaHC03: 重庆东试化工有限公司。 批号: 20030624。
Na2C03: 成都科龙化工试剂厂。 批号: 20050811。
[ 14C ] -5-HT: 美国杜邦公.司产品。 规格: 250μα/瓶, 批号: 3167243, 比放活性 3.7MBq/ml。
③仪器
Beckman ls60000IC液体闪烁计数仪。
④动物
SD种大鼠, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
( 2 )方法和结果
雄性 SD大鼠 8只,断头,快速分离下丘脑,称重,加入 9倍体积的 0.32mol/L 冰冷蔗糖溶液匀浆, 然后将匀浆液于 0 ~ 4°C离心(3420r/min, 10分钟)。 取上 清液 200μ1, 加入 62.5nmol/L [ 14C ] -5-羟色胺(克-亨氏碳酸氢盐缓冲液配制) 800μ1和 20μ1药液(对照组为加 20μ1 0.9%氯化钠注射液), 每组制作 10管, 混 匀后置 C02箱中, 37°C孵育 5min。 另取一管加上清液 200μ1, 加入 62.5nmol/L [ 14C ] -5-HT(克-亨氏碳酸氢盐缓冲液配制)800μ1和 20μ1 0.9%氯化钠注射液, 混匀后置 C02箱中, 0°C孵育 5min。 取出离心 (7480r/min, 10分钟)。 吸出上 清液, 倾入闪烁杯中, 加 10ml闪烁液进行计数(闪烁 3次)。 37°C和 0°C时样品 dpm值之差代表重摄取量。
对照组重摄取量均值-给药组重摄取量均值
抑制百分率 == χ100%
正常组重摄取量均值
表 13 20 (S) -原人参二 .醇对 5-ΗΤ再摄取的影响
浓度 样本量 重摄取量 抑制百分率 组 别
(个) (dpm) (%) 对照组 ― 10 4959.7+877.1 - 氟西汀组 1 10 3286.9±526.2*** 33.7
20 )-原人参 组 10 10 3696.4±392.9*** 25.5
20 (S)-原人参二醇组 1 10 3963.5±459.4** 20.1
20 )-原人参 组 0.1 10 4117.3±532.0* 17.0
20 (S)-原人参二醇组 0.01 10 4377.8±479.7 11.7 注: 各给药组与对照组比较 *P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001
表 13显示: 10、 1和 0.1μ η120 (S)-原人参二醇分别能极显著、 »和明显 抑制 5-ΗΓ »( Ρ<0.05、 Ρ<0.01、 Ρ<0.001 ),抑制百分率分别为 25.5%、 20.1%、 17脈
7.4抑制 ΝΑ再摄取试验
( 1 )实验材料
①药品
20 (S)-原人参二醇、 氟西汀和 0.9%氯化钠注射液参见 7.3 (1)①项下。
②试剂
NaHC03: 重庆东试化工有限公司, 批号: 20030624。
Na2C03: 成都科龙化工试剂厂, 批号: 20050811。
[3H] -去甲肾上腺素: 美国杜邦公司产品。 规格: 250μα/瓶, 批号: 3242681, 比放活性 3.7MBq/ml。
③仪器
Beckman ls60000IC液体闪烁计数仪。
④动物
SD种大鼠, 实验动物生产许可证: SCXK (川) 2003-06。
(2)方法和结果
雄性 SD大鼠断头, 快速分离紋状体, 称重, 加入 9倍体积的 0.32mol/L
冰冷蔗糖溶液匀浆, 然后将匀浆液于 0~4°C离心(3420r/min, 10分钟)。 取 上清液 200μ1, 加入 62.5nmol/L [3H] -去甲肾上腺素 (克 -亨氏碳酸氢盐缓 冲液配制) 800μ1和 20μ1药液(对照组为加 20μ10.9%氯化钠注射液) , 每组 制作 10管, 混匀后置 C02箱中, 37°C孵育 5min。 另取一管加上清液 200μ1, 加入 62.5nmol/L [ 3H ] -去甲肾上腺素(克-亨氏碳酸氢盐缓冲液配制) 800μ1 和 20μ10.9%氯化钠注射液, 混匀后置 C02箱中, 0Ό孵育 5min。 取出离心 (7480r/min, 10分钟) 。 吸出上清液, 倾入闪烁杯中, 加 10ml闪烁液进行 计数 (闪烁 3次)。 37°C和 0°C时样品 dpm值之差代表重摄取量。 对照组重摄取量均值-给药组重摄取量均值
抑制百分率 = χ100%
正常重摄取量均值 ~~
表 14 20 (S) -原人参二醇对 NA再摄取的影响
浓度 样本量 重摄取量 抑制百分率 组 别
(个) (dpm) (%) 对照组 ― 10 5593.7±190.0 - 氟西汀组 1 10 4311.8±733.8*** 22.9
20 (S)-原人参 组 10 10 4690.1±332.1*** 16.2
20 (S)-原人参二醇组 1 10 4950.6±534.5** 11.5
20 (S)-原人参 ^组 0.1 10 5137.2±465.7* 8.2
20 (S)-原人参二醇组 0.01 10 5347.8±555.1 4.4 注: 各给药组与对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01 *** Ρ<0.001
表 14显示: 10、 1和 0.l gml20 (S)-原人参二醇 (1能 著、 显著和明显抑 制 ΝΑ¾¾:ΐαΡ<0.05、 Ρ<0.01、 Ρ<0.001 ), 抑制百分率分别为 16.2%、 11.5%、 8.2%。
结论:
(1)抗抑郁模型动物试验
①抗利血平致眼睑下垂抑郁模型试验显示, 15mg/kg剂量 20 (S) -原人 参二醇多次给药 (10天)对小鼠利血平致眼睑下垂具有明显的抑制作用。
②抗利血平致运动不能抑郁模型试验显示, 15mgkg 20 (S) -原人参二 醇多次给药 (10天)对小鼠利血平致运动不能具有明显的抑制作用。
③小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型试验显示, 15mg/kg剂量 20 (S) -原 人参二醇单次给药能明显缩短小鼠悬尾不动时间。 15、 7.5和 3.75mg/kg剂量
20 ( S )-原人参二醇多次给药( 10天)能显著或明显缩短小鼠悬尾不动时间。
④小鼠强迫游泳法获得性绝望抑郁模型试验显示, 15、 7.5和 3.75mg/kg 剂量 20 ( S ) -原人参二醇单次给药能显著或明显缩短小鼠游泳 4miii内累计不 动的时间。 15、 7.5、 3.75mg/kg剂量 20 (S) -原人参二醇多次给药 ( 10天) 均能显著缩短小鼠游泳 4min内累计不动的时间。
⑤慢性应激性大鼠抑都模型的行为学试验显示, 13.33和 6.67!^1 剂量 20 (S) -原人参二醇能极显著或显著增加动物垂直活动次数, 显著或明显增 加动物水平活动次数。
⑥夹具法大鼠抑郁模型试验显示: 1333和 6.67mg/kg剂量 20 ( S ) -原人 参二醇皆能极显著增加动物垂直活动次数, 显著增加动物水平活动次数。 3.33mg/kg 剂量 20 (S) -原人参二醇能明显增加动物垂直活动次数。 6.67mg/kg20 (S) -原人参二醇能明显升高模型大鼠脑内 NE含量, 3.33mgkg 20 (S) -原人参二醇能明显升高模型大鼠脑内 NE、 5-HT、 HAV含量。
( 2 )抗抑郁药理作用分析试验显示, 15和 7.5mg/kg剂量 20 ( S ) -原人参 二醇能明显加强 5-羟色氨酸震颤作用和明显加强左旋多巴行为效应的作用; 10、 1和 0.1 g/ml20 (S) -原人参二醇分别能极显著、 显著和明显抑制 5-HT 和 NA的再摄取。
由此可见, 20 (S) -原人参二醇具有抗抑郁作用, 可用于制备治疗抑郁 型精神病药物, 如用于制备治疗抑郁发作和复发性抑郁障碍、双向情感障碍、 持续性心境障碍的抑郁型精神病药物。 工业应用性
本发明提供了 20 (S) -原人参二醇在制备治疗抑郁型精神病药物中的 用途。 经过药理试验研究显示, 该化合物能明显升高抑郁模型模型大鼠脑内 NE、 5-HT, HAV含量, 能明显加强 5-羟色氨酸震颤作用和明显加强左旋多 巴行为效应的作用; 可以抑制 5-HT和 NA的再摄取。