RU2813752C1 - Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets - Google Patents
Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets Download PDFInfo
- Publication number
- RU2813752C1 RU2813752C1 RU2022129945A RU2022129945A RU2813752C1 RU 2813752 C1 RU2813752 C1 RU 2813752C1 RU 2022129945 A RU2022129945 A RU 2022129945A RU 2022129945 A RU2022129945 A RU 2022129945A RU 2813752 C1 RU2813752 C1 RU 2813752C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- oil
- piglets
- days
- calves
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 61
- 244000309466 calf Species 0.000 title claims abstract description 27
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 16
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 47
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 24
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 229940008099 dimethicone Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 150000003961 organosilicon compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 229910001679 gibbsite Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 23
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 13
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 13
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 12
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 12
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 11
- WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N dialuminum;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 5
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 206010051226 Campylobacter infection Diseases 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 201000004927 campylobacteriosis Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000009800 post vaccination immunity Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GFRHEOMWAJJZSF-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-chloroethyl)amino]-2-[4-[4-[1-[bis(2-chloroethyl)amino]-2-oxoethyl]phenyl]phenyl]acetaldehyde Chemical compound C1=CC(C(C=O)N(CCCl)CCCl)=CC=C1C1=CC=C(C(C=O)N(CCCl)CCCl)C=C1 GFRHEOMWAJJZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 101000693940 Centruroides noxius Beta-toxin Cn7 Proteins 0.000 description 1
- 241000223782 Ciliophora Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101001049890 Pandinus imperator Potassium channel toxin alpha-KTx 6.5 Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000003142 Retained Placenta Diseases 0.000 description 1
- 206010038758 Retained placenta or membranes Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010046793 Uterine inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при разработке вакцин предназначенных для профилактики эшерихиоза у животных.The invention relates to biotechnology and can be used in the development of vaccines intended for the prevention of escherichiosis in animals.
Установлено, что эффективными средствами специфической профилактики эшерихиоза у животных являются вакцины, содержащие в своем составе инактивированные экзотоксины патогенных Escherichia coli (Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных / М.К. Пирожков // Дисс. док. вет. наук. - Москва. 2002. - 298 с.).It has been established that effective means of specific prevention of escherichiosis in animals are vaccines containing inactivated exotoxins of pathogenic Escherichia coli (Biological preparations for the specific prevention and treatment of escherichiosis in animals / M.K. Pirozhkov // Doctoral dissertation of veterinary sciences. - Moscow 2002. - 298 pp.).
Известна вакцина против эшерихиоза животных Вероколивак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ-, ТС-, VT1 и VT2 анатоксины (организация-производитель ФГУП «Армавирская биофабрика», Россия). Вакцина изготавливается из 18 штаммов эшерихий серогрупп O8, O9, O15, O20, O26, O41, O55, O78, O86, О101, О115, O117, O119, O138, O139, O141, O147 с включением адгезивных антигенов К88, К99, 987Р, F41, а также термолабильного, термостабильного и веротоксинов, инактивированных формалином в количестве 0,4% с добавлением в качестве адъюванта геля гидрата окиси алюминия в количестве 25%. В 1 см3 вакцины содержится 10 млрд микробных тел эшерихий (Вакцинопрофилактика эшерихиоза сельскохозяйственных животных // http://www.armbio.info/verokolivak.html; Вакцина против эшерихиоза животных // http://www.armbio.info/catalog/1006-3).The known vaccine against animal escherichiosis is Verokolivac K88, K99, 987R, F41, TL-, TC-, VT1 and VT2 toxoids (manufacturer FSUE Armavir Biofactory, Russia). The vaccine is made from 18 strains of Escherichia serogroups O8, O9, O15, O20, O26, O41, O55, O78, O86, O101, O115, O117, O119, O138, O139, O141, O147 with the inclusion of adhesive antigens K88, K99, 987P, F41, as well as heat-labile, heat-stable and verotoxins inactivated by formaldehyde in an amount of 0.4% with the addition of aluminum oxide hydrate gel in an amount of 25% as an adjuvant. 1 cm 3 of the vaccine contains 10 billion microbial bodies of Escherichia (Vaccinal prevention of Escherichiosis in farm animals // http://www.armbio.info/verokolivak.html; Vaccine against Escherichiosis in animals // http://www.armbio.info/catalog/ 1006-3).
Недостатком данной вакцины является то, что в ней содержится очень большое количество балластных антигенов в виде целых клеток Е. coli, что негативно сказывается на формировании у животных иммунной защиты, а так же развития у привитых животных побочных реакций и осложнений.The disadvantage of this vaccine is that it contains a very large number of ballast antigens in the form of whole E. coli cells, which negatively affects the formation of immune defense in animals, as well as the development of adverse reactions and complications in vaccinated animals.
Кроме того, способ получения такой вакцины очень сложен, поскольку требует раздельного культивирования 18 штаммов эшерихий.In addition, the method of obtaining such a vaccine is very complex, since it requires separate cultivation of 18 strains of Escherichia.
Известен способ получения эшерихиозного анатоксина (патент РФ №2213575 от 10.10.2003), заключающийся в выдерживании односуточных мясопептонных бульонных культур Е. coli серотипов 0141:К88ас; 0138:К88ас; 0139:К88ас в присутствии 0,4% формалина при температуре 37-38°С в течение 25 суток и пропускании через фильтр Сальникова. Недостатком данного препарата является отсутствие сведений о токсинах, которые продуцируют используемые автором культуры Е. coli, и ограничение использования (только для поросят-отъемышей). Кроме того, мясо-пептонный бульон не обеспечивает высокую продукцию токсинов эшерихиями, а, следовательно, в предлагаемом препарате будет недостаточное количество антигенного материала, который без добавления адъювантных веществ будет мало эффективным.There is a known method for producing Escherichia toxoid (RF patent No. 2213575 dated 10.10.2003), which consists in maintaining one-day meat-peptone broth cultures of E. coli serotypes 0141:K88ac; 0138:K88ac; 0139:K88ac in the presence of 0.4% formaldehyde at a temperature of 37-38°C for 25 days and passing through a Salnikov filter. The disadvantage of this drug is the lack of information about the toxins that are produced by the E. coli cultures used by the author, and the limitation of use (only for weaned piglets). In addition, meat-peptone broth does not provide high production of toxins by Escherichia, and, therefore, the proposed preparation will have an insufficient amount of antigenic material, which without the addition of adjuvant substances will be ineffective.
Известен способ получения эшерихиозного анатоксина (патент РФ №2432174 от 27.10.2011). Согласно которому, отбирают и раздельно культивируют эпизоотические штаммы Е. coli, обладающие генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием. Инактивацию культур проводят путем добавления формалина до концентрации не более 0,4%, при температуре 37°С в течение 14 суток с ежедневным двукратным перемешиванием. После чего смешивают культуры в равных соотношениях, отделяют бактериальную массу с помощью стерилизующей фильтрации и получают комплексный препарат.There is a known method for producing Escherichia toxoid (RF patent No. 2432174 dated October 27, 2011). According to which, epizootic strains of E. coli, possessing genes for heat-labile, heat-stable and Shiga-like toxins, are selected and separately cultivated in a nutrient broth at a temperature of 37°C for 6-7 days with twice daily stirring. Inactivation of cultures is carried out by adding formalin to a concentration of no more than 0.4%, at a temperature of 37°C for 14 days with twice daily stirring. Then the cultures are mixed in equal proportions, the bacterial mass is separated using sterilizing filtration and a complex preparation is obtained.
Недостатком данного способа получения препарата для профилактики эшерихиоза у животных является отсутствие в его составе адъюванта, поскольку установлено, что инактивированные токсины эшерихий обладают низкой иммуногенной активностью, повысить которую можно за счет различных адъювантов (Караев Я. М. Иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. канд. вет. наук / Я.М. Караев. - Краснодар: КубГАУ, 2009. - 132 с).The disadvantage of this method of obtaining a drug for the prevention of Escherichiosis in animals is the absence of an adjuvant in its composition, since it has been established that inactivated Escherichia toxins have low immunogenic activity, which can be increased through various adjuvants (Karaev Ya. M. Immunogenic and protective properties of Escherichia toxoid: dis Candidate of Veterinary Sciences / Y.M. Karaev - Krasnodar: KubGAU, 2009. - 132 p.).
В связи с этим, были испытаны в качестве адъювантов для анатоксина гидрат окиси алюминия, минеральное масло, пирогенал и полиакриловая кислота (Терехов, В.И. Влияние различных адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина / В.И. Терехов, Я.М. Караев, А.С. Тищенко, А.В. Иванов // Тр. / КубГАУ. - 2009. - Вып. №1 45 (ч. 1) Серия: Ветеринарные науки. - С.100-102.; Тищенко А.С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. … канд. вет. наук / А.С. Тищенко. - Краснодар: КубГАУ, 2011. - 124 с). Результаты этих исследований в случае применения пирогенала и полиакриловой кислоты, гидрата окиси алюминия и минерального масла а качестве адъювантов для эшерихиозного анатоксина были апробированы и опубликованы в широкой печати (Тищенко А.С, Терехов В.И., Сердюченко И.В. Иммуногенность эшерихиозного анатоксина при использовании с пирогеналом и полиакриловой кислотой // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: Сб. ст.по материалам X Всерос. конф. молодых ученых. - Краснодар: КубГАУ, 2017. - С. 287-288; Тищенко А.С. Иммуногенные свойства эшерихиозного полианатоксина в сочетании с гидратом окиси алюминия / Итоги научно-исследовательской работы за 2016 год: сб. ст. по материалам 72-й науч. - практ. конф. преподавателей. - Краснодар: КубГАУ, 2017. - С. 199-200; Тищенко А.С., Терехов В.И., Мартыненко Я.Н. Влияние минерального и масляного адъювантов на иммуногенность комплексного эшерихиозного анатоксина / Инновационные технологии в сельском хозяйстве: материалы III Междунар. науч. конф. (г. Казань, май 2017 г.). - Казань: Бук, 2017. - С. 34-39; Киященко А.А., Белик А.Р., Тищенко А.С. Иммуногенные свойства эшерихиозного полианатоксина при совместном использовании с масляным адъювантом / В сборнике: Вестник научно-технического творчества молодежи Кубанского ГАУ. Краснодар: КубГАУ, 2017. - С.32-35.; Тищенко А.С, Мусатова Н.С Изменение показателей крови у кроликов после применения комплексного эшерихиозного анатоксина в сочетании с адъювантами / В сборнике: Проблемы и перспективы развития науки и образования в XXI веке. Материалы Международной (заочной) научно-практической конференции. - 2017. - С.69-73).In this regard, aluminum oxide hydrate, mineral oil, pyrogenal and polyacrylic acid were tested as adjuvants for the toxoid (Terekhov, V.I. The influence of various adjuvants on the immunogenic properties of Escherichia toxoid / V.I. Terekhov, Ya.M. Karaev , A.S. Tishchenko, A.V. Ivanov // Tr. / KubGAU. - 2009. - Issue No. 1 45 (part 1) Series: Veterinary Sciences. - P. 100-102.; Tishchenko A.S. The influence of adjuvants on the immunogenic properties of Escherichia toxoid: dissertation ... candidate of veterinary sciences / A. S. Tishchenko - Krasnodar: KubGAU, 2011. - 124 pp.). The results of these studies in the case of the use of pyrogenal and polyacrylic acid, aluminum hydroxide and mineral oil as adjuvants for Escherichia toxoid were tested and published widely (Tishchenko A.S., Terekhov V.I., Serdyuchenko I.V. Immunogenicity of Escherichia toxoid when used with pyrogenal and polyacrylic acid // Scientific support of the agro-industrial complex: Collection of articles based on the materials of the X All-Russian Conference of Young Scientists. - Krasnodar: KubGAU, 2017. - P. 287-288; Tishchenko A.S. Immunogenic properties of Escherichia polyanatoxin in combination with aluminum oxide hydrate / Results of research work for 2016: collection of articles based on the materials of the 72nd scientific - practical conference of teachers. - Krasnodar: KubSAU, 2017. - pp. 199-200; Tishchenko A.S., Terekhov V.I., Martynenko Ya.N. The influence of mineral and oil adjuvants on the immunogenicity of complex Escherichia toxoid / Innovative technologies in agriculture: materials of the III International Scientific Conference. (Kazan, May 2017). - Kazan: Buk, 2017. - pp. 34-39; Kiyashchenko A.A., Belik A.R., Tishchenko A.S. Immunogenic properties of Escherichia polyanatoxin when used together with an oil adjuvant / In the collection: Bulletin of scientific and technical creativity of the youth of the Kuban State Agrarian University. Krasnodar: KubGAU, 2017. - pp. 32-35.; Tishchenko A.S., Musatova N.S. Changes in blood parameters in rabbits after the use of complex Escherichia toxoid in combination with adjuvants / In the collection: Problems and prospects for the development of science and education in the 21st century. Materials of the International (correspondence) scientific and practical conference. - 2017. - P.69-73).
Однако, применение по отдельности данных адъювантов не обеспечило желаемый эффект, так как формируемый у животных поствакцинальный иммунитет был недостаточно продолжительным.However, the use of these adjuvants separately did not provide the desired effect, since the post-vaccination immunity formed in animals was not long enough.
Известно техническое решение (патент РФ №2644654, кл. А61К 39/105, 2018 г.) заключающееся в получении вакцины против кампилобактериоза содержащей в качестве адъюванта 2%-ную суспензию AL(ОН)3 и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5%) и вспомогательные компоненты.A known technical solution (RF patent No. 2644654, class A61K 39/105, 2018) consists in obtaining a vaccine against campylobacteriosis containing as an adjuvant a 2% suspension of AL(OH) 3 and an oil adjuvant consisting of an emulsifier (biologically inert organosilicon compound cetyl-PEG/PPG-10/1-dimethicone) - 1.5% and oil base - vaccine oil "M" according to TU 381011224 - 98.5%) and auxiliary components.
Известную вакцину используют для кампилобактериоза у КРС, свиней, овец и птиц, который сопровождается поражением репродуктивных органов, вагинитами, частыми перекрытиями, временным бесплодием, массовыми абортами, метритами, задержанием последа, рождением нежизнеспособного приплода; у кур - снижением приростов массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падежом цыплят.The well-known vaccine is used for campylobacteriosis in cattle, pigs, sheep and birds, which is accompanied by damage to the reproductive organs, vaginitis, frequent overlaps, temporary infertility, mass abortions, metritis, retained placenta, and the birth of non-viable offspring; in chickens - a decrease in the weight gain of broilers, egg production of laying hens and mortality of chickens.
Недостатком известного технического решения является то, что его не возможно использовать для лечения эшерихиоза у молодняка сельскохозяйственных животных, т.к. для получения культуральной среды применяют культуру (колонии) возбудителя кампилобактериоза и для смыва культуры возбудителя и для инактивации биомассы используют вспомогательные компоненты: 0,9%-ный раствор NaCl и теотропин, которые могут вызвать побочные явления.The disadvantage of the known technical solution is that it cannot be used for the treatment of escherichiosis in young farm animals, because To obtain a culture medium, a culture (colonies) of the causative agent of campylobacteriosis is used, and to wash off the culture of the pathogen and to inactivate the biomass, auxiliary components are used: 0.9% NaCl solution and teotropin, which can cause side effects.
Известен способ получения вакцины против эшерихиоза животных (патент РФ №2753410 от 16.08.21 - прототип), включающий отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивирование на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, инактивирование формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток с последующим смешиванием в равных объемах и отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации с добавлением адъювантов.There is a known method for producing a vaccine against escherichiosis in animals (RF patent No. 2753410 dated 08.16.21 - prototype), including the selection of epizootic Escherichia coli strains possessing genes for thermolabile, thermostable and Shiga-like toxins, their cultivation in a nutrient broth at a temperature of 37°C for 6- 7 days with daily double mixing, inactivation with formaldehyde to its final concentration of 0.4% for 14 days, followed by mixing in equal volumes and separation of the bacterial mass using sterilizing filtration with the addition of adjuvants.
Недостатком этого способа является слабая иммуногенная активность препарата, выражающаяся в низкой продолжительности поствакцинальной защиты у животных против токсинов кишечной палочки.The disadvantage of this method is the weak immunogenic activity of the drug, which is expressed in the low duration of post-vaccination protection in animals against E. coli toxins.
Техническим результатом изобретения является повышение иммуногенности для обеспечения специфической профилактики эшерихиоза животных и расширения ассортимента вакцинных препаратов.The technical result of the invention is to increase immunogenicity to ensure specific prevention of escherichiosis in animals and expand the range of vaccine preparations.
Технический результат достигается тем, что в способе получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят, включающем отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивировании на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток, смешиванием культур в равных соотношениях и отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесение адъювантов, согласно изобретению в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию AL(ОН)3 и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора, в качестве которого используют биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" - 98,5%) при следующих соотношениях компонентов, об %:The technical result is achieved by the fact that in the method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against Escherichiosis in calves and piglets, including the selection of epizootic strains of Escherichia coli possessing genes for heat-labile, heat-stable and Shiga-like toxins, their cultivation in a nutrient broth at a temperature of 37°C for 6-7 days with daily double mixing, subsequent inactivation with formalin to its final concentration of 0.4% for 14 days, mixing cultures in equal proportions and separating the bacterial mass using sterilizing filtration and adding adjuvants, according to the invention, a 2% suspension is used as adjuvants AL(OH) 3 and an oil adjuvant consisting of an emulsifier, which is used as a biologically inert organosilicon compound cetyl-PEG/PPG-10/1-dimethicone) - 1.5% and an oil base - vaccine oil "M" - 98, 5%) at the following ratios of components, vol.%:
Новизна технического решения состоит в том, что за счет ввода минерального и масляного адъювантов в бесклеточную и инактивированную формалином культуру эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, обеспечивается повышение иммуногенной активности вакцинного препарата.The novelty of the technical solution lies in the fact that by introducing mineral and oil adjuvants into a cell-free and formaldehyde-inactivated culture of epizootic Escherichia coli strains producing heat-labile, heat-stable and Shiga-like toxins, an increase in the immunogenic activity of the vaccine preparation is ensured.
В патентной и научно-технической литературе не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.No set of features similar to the claimed one has been found in the patent and scientific and technical literature, which makes it possible to judge the inventive level of the proposed proposal.
Предложенный способ получения вакцины соответствует критерию «промышленная применимость» поскольку легко воспроизводим, не требует сложного технологического оборудования и условий.The proposed method for producing a vaccine meets the criterion of “industrial applicability” because it is easily reproducible and does not require complex technological equipment and conditions.
Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза животных осуществляют следующим образом.The method of obtaining aluminum hydroxide oil vaccine against Escherichiosis in animals is carried out as follows.
Предварительно осуществляют отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Затем их культивируют на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием с последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток. Далее смешивают культуры в равных соотношениях и отделяют бактериальную массу с помощью стерилизующей фильтрации. Вносят адъюванты, в качестве которых используют 2%-ную суспензию AL(OH)3 и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора в виде биологически инертного кремнийорганического соединения цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5% при следующих соотношениях компонентов, об %:A preliminary selection of epizootic Escherichia coli strains possessing genes for heat-labile, heat-stable and Shiga-like toxins is carried out. Then they are cultured in nutrient broth at a temperature of 37°C for 6-7 days with daily twice stirring, followed by inactivation with formaldehyde to its final concentration of 0.4% for 14 days. Next, the cultures are mixed in equal proportions and the bacterial mass is separated using sterilizing filtration. Adjuvants are added, which include a 2% suspension of AL(OH) 3 and an oil adjuvant consisting of an emulsifier in the form of a biologically inert organosilicon compound cetyl-PEG/PPG-10/1-dimethicone - 1.5% and an oil base - vaccine oil "M" according to TU 381011224 - 98.5% with the following component ratios, vol%:
Количественные значения ввода адъювантов подобраны экспериментальным путем, при этом учитывалась иммуногенная активность гидроокись алюминиевой масляной вакцины. При вводе гидрата окиси алюминия в объеме 18% и масляного адъюванта 48% иммуногенная активность снижалась, и была не достаточной для длительного сохранения поствакцинального иммунитета. При вводе минерального адъюванта в объеме 22%, а масляного 52% увеличения продукции специфических антител более значения, чем при их вводе в объеме 19-21% и 49-51% соответственно, не происходило, а экономические затраты возрастали. Кроме того, вслед за повышением ввода гидрата окиси алюминия возрастала опасность развития местной воспалительной реакции из-за раздражения тканей.Quantitative values for the introduction of adjuvants were selected experimentally, taking into account the immunogenic activity of the aluminum hydroxide oil vaccine. When aluminum hydroxide was introduced in a volume of 18% and an oil adjuvant of 48%, the immunogenic activity decreased and was not sufficient for long-term preservation of post-vaccination immunity. When introducing a mineral adjuvant in a volume of 22%, and an oil adjuvant of 52%, there was no increase in the production of specific antibodies more than when they were introduced in a volume of 19-21% and 49-51%, respectively, and economic costs increased. In addition, following an increase in the input of aluminum oxide hydrate, the risk of developing a local inflammatory reaction due to tissue irritation increased.
Пример конкретного осуществления способа получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза животныхAn example of a specific implementation of a method for producing aluminum hydroxide oil vaccine against animal escherichiosis
Предварительно эпизоотические штаммы Е. coli изучались на наличие у них генов термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Для этого использовали тест-системы «АмплиСенс E. coli-tox» (Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии МЗ РФ, г. Москва). Подтверждение токсинообразования на искусственной питательной среде осуществляли с помощью биотеста на инфузориях-стилонихиях по патенту РФ на изобретение №2262529 от 20.10.2005. Отобранные штаммы по отдельности засевали в пробирки с 10 мл питательного бульона для накопления токсинов кишечной палочки, в состав которого входят кислотный гидролизат крови (9-11%), аутолизат пекарских дрожжей (9-11%), пептон (0,9-1,1%), нария хлорид (0,4-0,6%), двузамещенный фосфорнокислый натрий (0,05-0,15%) и калия хлорид (0,01-0,03%) (патент РФ на изобретение №2342425 от 27.12.2008). После чего пробирки помещали в термостат и культивировали при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносили в колбы с 200-300 мл аналогичного питательного бульона и инкубировали при 37°С.Pre-epizootic strains of E. coli were studied for the presence of genes for heat-labile, heat-stable, and Shiga-like toxins. For this purpose, the AmpliSens E. coli-tox test systems were used (Central Research Institute of Epidemiology, Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow). Confirmation of toxin formation on an artificial nutrient medium was carried out using a biotest on ciliates-stylonychia according to the Russian Federation patent for invention No. 2262529 dated October 20, 2005. Selected strains were individually inoculated into test tubes with 10 ml of nutrient broth to accumulate E. coli toxins, which included acidic blood hydrolysate (9-11%), baker's yeast autolysate (9-11%), peptone (0.9-1. 1%), sodium chloride (0.4-0.6%), disubstituted sodium phosphate (0.05-0.15%) and potassium chloride (0.01-0.03%) (RF patent for invention No. 2342425 dated December 27, 2008). After that, the tubes were placed in a thermostat and cultured at 37°C for 6-8 hours until a slight turbidity appeared, indicating the growth of microorganisms. Then the resulting cultures were transferred into flasks with 200-300 ml of a similar nutrient broth and incubated at 37°C.
Культуры продуцирующие термолабильный и термостабильный инкубировали 6 суток, а продуцирующие шигаподобный токсин - 7 суток. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивали. Перед окончанием инкубирования из каждой колбы отобрали по 10 мл культуральной жидкости, центрифугировали при 10 тыс.об./мин в течение 30 мин и определяли методом биотестирования на инфузориях наличие токсинов.Cultures producing heat-labile and heat-stable were incubated for 6 days, and those producing Shiga-like toxin - 7 days. The flasks were shaken twice daily. Before the end of incubation, 10 ml of culture liquid was taken from each flask, centrifuged at 10 thousand rpm for 30 minutes, and the presence of toxins was determined by biotesting on ciliates.
При наличии токсинов в культуры добавляли формалин до концентрации 0,3-0,4% и инактивировали в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием. После завершения инактивации, равные объемы культур объединяли и с помощью стерилизующей фильтрации отделили микробную массу от среды культивирования, получая, таким образом, бесклеточную культуральную среду Е. coli (эшерихиозный токсоидный компонент). Далее в нее поочередно вносили 2%-ную суспензию AL(ОН)3 и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/1 IIII -10/1 - диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 -98,5% (патент РФ №2510845)) при следующем соотношении компонентов, об %:In the presence of toxins, formalin was added to the cultures to a concentration of 0.3-0.4% and inactivated for 14 days at a temperature of 37°C with twice daily stirring. After inactivation was completed, equal volumes of the cultures were combined and the microbial mass was separated from the culture medium using sterilizing filtration, thus obtaining a cell-free culture medium of E. coli (Escherichia toxoid component). Next, a 2% suspension of AL(OH) 3 and an oil adjuvant consisting of an emulsifier (biologically inert organosilicon compound cetyl-PEG/1 IIII -10/1 - dimethicone) - 1.5% and an oil base - vaccine were added to it alternately oil "M" according to TU 381011224 -98.5% (RF patent No. 2510845)) with the following ratio of components, vol%:
Полученную вакцину фасуют по 100 мл в стерильные флаконы, укупоривают и проверяют на стерильность и безвредность. По внешнему виду готовый препарат представляет собой прозрачную опалесцирующую жидкость соломенного цвета с выпадающим беловато-сероватым осадком на дне, который при встряхивании флакона легко разбивается, образуя равномерную взвесь. Срок хранения в сухом и темном помещении при температуре 4-10°С - 1 год.The resulting vaccine is packaged in 100 ml sterile vials, sealed and checked for sterility and harmlessness. In appearance, the finished product is a transparent, opalescent, straw-colored liquid with a whitish-grayish sediment that falls out at the bottom, which easily breaks when the bottle is shaken, forming a uniform suspension. Shelf life in a dry and dark place at a temperature of 4-10°C is 1 year.
При контрольных высевах на МПА, МПБ, среду Китта-Тароцци, Сабуро, Эндо рост бактериальной и грибной флоры отсутствовал, что свидетельствовало о стерильности препарата.During control inoculations on MPA, MPB, Kitta-Tarozzi, Sabouraud, and Endo medium, there was no growth of bacterial and fungal flora, which indicated the sterility of the drug.
При внутрибрюшинном введении в дозе 0,3 мл белым мышам массой 20-22 г угнетения и гибели их в течение 10 дней не отмечали, что является показателем безвредности препарата.When administered intraperitoneally at a dose of 0.3 ml to white mice weighing 20-22 g, no depression or death was observed within 10 days, which is an indicator of the harmlessness of the drug.
Для подтверждения достижения технического результата были проведены опыты, для которых были сформированы 4 группы белых крыс по 6 гол в каждой, которым внутримышечно однократно инъецировали по 0,15 мл препарата, в первой группе использовали вакцину против эшерихиоза без адьюванта (ВЭ), во второй - вакцину против эшерихиоза с гидратом окиси алюминия (ВЭ+ГОА), в третьей - вакцину против эшерихиоза с масляным адъювантом (ВЭ+МА), в четверной - вакцину против эшерихиоза с гидратом окиси алюминия и масляным адъювантом (ВЭ+ГОА+МА). Спустя 7, 14, 28, 56, 90 и 120 дней в реакции непрямой гемагглютинации определяли титр антител к токсинам Е. coli результаты опыта отражены в таблице.To confirm the achievement of the technical result, experiments were carried out, for which 4 groups of white rats, 6 animals each, were formed, which were injected intramuscularly with a single dose of 0.15 ml of the drug; in the first group, a vaccine against escherichiosis was used without an adjuvant (VE), in the second - vaccine against escherichiosis with aluminum oxide hydrate (VE+GOA), in the third - vaccine against escherichiosis with oil adjuvant (VE+MA), in the fourth - vaccine against escherichiosis with aluminum oxide hydrate and oil adjuvant (VE+GOA+MA). After 7, 14, 28, 56, 90 and 120 days, the titer of antibodies to E. coli toxins was determined in the indirect hemagglutination reaction; the results of the experiment are shown in the table.
Из данных таблицы 1 видно, что у животных всех групп после ввода им вакцины в течение 7 дней вырабатываются антитела. Однако, в группах 2 и 3 где она вводилась с адъювантами, уровень антител был в 1,6 раза выше, чем у животных, которым вакцина вводилась без гидрата окиси алюминия и масляного адъюванта, а у животных группы 4 уровень антител был в 1,8 раза более высоким. В последующие дни у животных 1 группы уровень антител снижался, а вот у животных из опытных групп он повышался, во 2-й - до 14 дня, 3-й и 4-й группе - до 28 дня, превысив показатели 1 группы в 2,1, 2,4 и 2,8 раза соответственно. На 56 день исследования титр антител в опытных группах оставался по-прежнему высоким, максимальное значение регистрировали в группе 4 - 6,2±0,5, что в 3,4 раза превышало значение в 1 группе, и 1,2-1,3 раза значений опытных групп 2 и 3. В последующем во всех группах установили постепенное снижение антител к 120 дню до значения 1,2±0,7, 2,2±0,6, 2,4±0,7 и 3,6±0,4 log2 соответственно. У животных 4 группы уровень антитоксических антител оставался самым высоким даже спустя 120 дней после иммунизации и был достаточным для защитного действия от токсинов Е. coli.From the data in Table 1 it can be seen that animals of all groups develop antibodies within 7 days after the vaccine is administered. However, in groups 2 and 3 where it was administered with adjuvants, the antibody level was 1.6 times higher than in animals to which the vaccine was administered without alumina hydrate and oil adjuvant, and in animals in group 4 the antibody level was 1.8 times higher. In the following days, in animals of group 1, the level of antibodies decreased, but in animals from experimental groups it increased, in the 2nd - up to 14 days, in the 3rd and 4th groups - up to 28 days, exceeding the indicators of group 1 in 2, 1, 2.4 and 2.8 times respectively. On the 56th day of the study, the antibody titer in the experimental groups remained high, the maximum value was recorded in group 4 - 6.2 ± 0.5, which was 3.4 times higher than the value in group 1, and 1.2-1.3 times the values of experimental groups 2 and 3. Subsequently, in all groups, a gradual decrease in antibodies was established by day 120 to a value of 1.2 ± 0.7, 2.2 ± 0.6, 2.4 ± 0.7 and 3.6 ± 0.4 log2 respectively. In animals of group 4, the level of antitoxic antibodies remained the highest even 120 days after immunization and was sufficient for a protective effect against E. coli toxins.
Таким образом, гидроокись алюминиевая масляная вакцина, полученная по предлагаемому способу, оказалась более иммуногенной, она позволила после однократного введения обеспечить сохранение защитного уровня антитоксических антител в течение 120 дней, в то время как применение ее с отдельными адъювантами - 90 дней, а без адъювантов - до 14 дней.Thus, the aluminum hydroxide oil vaccine obtained by the proposed method turned out to be more immunogenic; after a single administration, it made it possible to ensure the preservation of the protective level of antitoxic antibodies for 120 days, while its use with individual adjuvants - 90 days, and without adjuvants - up to 14 days.
Для подтверждения эффективности использования заявляемого технического решения были приведены производственные опыты над телятами и поросятами (примеры 1и 2).To confirm the effectiveness of using the proposed technical solution, production experiments were carried out on calves and piglets (examples 1 and 2).
При использовании способа получения вакцины, защита телят и поросят от эшерихиозной инфекции обеспечивалась продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).When using the method of obtaining the vaccine, protection of calves and piglets from Escherichia infection was ensured for a duration of at least 6 months (observation period).
Пример 1.Example 1.
В хозяйстве Краснодарского края, неблагополучном по эшерихиозу телят. По данным ветеринарной лаборатории этого хозяйства, диарею у молодняка крупного рогатого скота в данном хозяйстве вызывают патогенные штаммы кишечной палочки. Эффективность вакцины, изготовленной по заявляемому способу, сравнивали с эффективностью прототипа, для этого было сформировано 3 группы стельных коров по 25 голов в каждой.On a farm in the Krasnodar region, which is unfavorable for calves due to escherichiosis. According to the veterinary laboratory of this farm, diarrhea in young cattle on this farm is caused by pathogenic strains of Escherichia coli. The effectiveness of the vaccine produced according to the claimed method was compared with the effectiveness of the prototype; for this purpose, 3 groups of pregnant cows of 25 heads each were formed.
Первую группу коров иммунизировали заявляемой вакциной первый раз за 45 дней до отела в дозе 5 мл, второй раз за 15 дней до отела в дозе 10 мл. Полученных от этих коров телят также иммунизировали заявляемой вакциной первый раз в возрасте 13-15 дней в дозе 1 мл, а второй через 19-21 день в дозе 2 мл соответственно. Вакцину вводили подкожно в область верхней трети шеи.The first group of cows was immunized with the claimed vaccine for the first time 45 days before calving at a dose of 5 ml, and for the second time 15 days before calving at a dose of 10 ml. The calves obtained from these cows were also immunized with the claimed vaccine for the first time at the age of 13-15 days at a dose of 1 ml, and the second time after 19-21 days at a dose of 2 ml, respectively. The vaccine was administered subcutaneously into the upper third of the neck.
Вторую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с гидратом окиси алюминия по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The second group of cows and the calves obtained from them were immunized with Escherichia vaccine with aluminum oxide hydrate according to the scheme and in doses similar to those in the first group.
Третью группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с масляным адъювантом по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The third group of cows and the calves obtained from them were immunized with Escherichia vaccine with an oil adjuvant according to the scheme and in doses similar to those in the first group.
Четвертую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной без адъювантов по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The fourth group of cows and calves obtained from them were immunized with Escherichia vaccine without adjuvants according to a scheme and in doses similar to those in the first group.
Пятая группа коров была контрольной, они и полученные от них телята не иммунизировались.The fifth group of cows was a control; they and the calves obtained from them were not immunized.
Эффективность вакцины полученной заявляемым способом оценивали по достижении телятами 3-месячного возраста и перевода их другой корпус на групповое содержание. Критериями оценки служили показатели заболеваемости и летальности.The effectiveness of the vaccine obtained by the claimed method was assessed when the calves reached 3 months of age and were transferred to another building for group housing. The evaluation criteria were morbidity and mortality rates.
Результаты опыта отражены в таблице 2, из материалов которой, видно, что в первой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 3 телят, при этом диарею у них удалось купировать в течение 3 дней, а на 5 день телята полностью выздоровели. Таким образом, профилактическая эффективность вакцины полученной заявляемым способом составила 88%, сохранность 100%.The results of the experiment are reflected in Table 2, from the materials of which it is clear that in the first group, escherichiosis infection was registered in 3 calves, while their diarrhea was stopped within 3 days, and on the 5th day the calves completely recovered. Thus, the preventive effectiveness of the vaccine obtained by the claimed method was 88%, safety 100%.
Во 2-ой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 4 телят, причем у одного теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животного. Профилактическая эффективность аналога составила 74%, сохранность 96%.In the 2nd group, Escherichia infection was registered in 4 calves, and in one calf it was very severe and ended in the death of the animal. The prophylactic effectiveness of the analogue was 74%, safety 96%.
В третьей группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 5 телят, у 1 теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Профилактическая эффективность аналога составила 80%, сохранность 96%.In the third group, Escherichia infection was registered in 5 calves; in 1 calf it was very severe and ended in the death of the animals. The prophylactic effectiveness of the analogue was 80%, safety 96%.
В четвертой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 9 телят, из них у троих телят она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Профилактическая эффективность прототипа составила 65%, сохранность 88%.In the fourth group, Escherichia infection was registered in 9 calves, of which in three calves it was very severe and ended in the death of the animals. The prophylactic effectiveness of the prototype was 65%, safety 88%.
В контрольной группе заболеваемость телят острой кишечной инфекцией составила 68%, а сохранность 72%.In the control group, the incidence of acute intestinal infection in calves was 68%, and survival rate was 72%.
Иммуногенные свойства эшерихиозной вакцины изучали у телят, полученных от вакцинированных стельных коров. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.The immunogenic properties of the Escherichia vaccine were studied in calves obtained from vaccinated pregnant cows. Blood serum to determine the presence of antitoxic antibodies in the diffuse precipitation reaction was collected 7, 14, 28 and 56 days after the last vaccination.
Влияние применения вакцин на титр антител у телят представлены в таблице 3.The effect of vaccine use on antibody titer in calves is presented in Table 3.
Из материалов таблицы 3 видно, что иммунизация коров и телят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции.From the materials in Table 3 it is clear that immunization of cows and calves using the claimed method provides more intense and long-lasting specific immunity against Escherichia infection.
Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у телят, которых у животных первой группы в 1,1-1,8 раз больше, чем у животных из второй и третьей группы, и 1,5-7,3 раза больше, чем у животных четвертой и пятой групп.This is evidenced by the number of antibodies to E. coli toxins in calves, which in animals of the first group are 1.1-1.8 times more than in animals from the second and third groups, and 1.5-7.3 times more than in animals of the fourth and fifth groups.
Пример 2.Example 2.
Обоснование эффективности использования вакцины для профилактики эшерихиоза у поросят.Justification of the effectiveness of using the vaccine for the prevention of escherichiosis in piglets.
В хозяйстве длительно неблагополучном по эшерихиозу поросят сформировали 5 групп супоросных свиноматок по 5 животных в каждой.On a farm that had been unfavorably affected by Escherichiosis in piglets for a long time, 5 groups of pregnant sows of 5 animals each were formed.
В первой группе свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали предлагаемой вакциной (ВЭ+ГОА+МА). Свиноматок иммунизировали первый раз за 40 дней до опороса в дозе 5 мл, второй раз - за 15 дней в дозе 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины. Поросят иммунизировали дважды первый раз в возрасте 10-12 дней в дозе 0,25 мл, а второй за 5 дней до отъема поросят от свиноматок в дозе 0,5 мл внутримышечно в области внутренней поверхности бедра.In the first group, sows and piglets obtained from them were immunized with the proposed vaccine (VE+GOA+MA). Sows were immunized for the first time 40 days before farrowing at a dose of 5 ml, and for the second time 15 days before at a dose of 5 ml intramuscularly in the area of the base of the auricle. The piglets were immunized twice, the first time at the age of 10-12 days at a dose of 0.25 ml, and the second time 5 days before weaning the piglets from sows at a dose of 0.5 ml intramuscularly in the area of the inner thigh.
Вторую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с гидратом окиси алюминия (ВЭ+ГОА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The second group of sows and the piglets obtained from them were immunized with the Escherichiasis vaccine with aluminum oxide hydrate (VE+GOA) according to the schedule and in doses similar to those in the first group.
Третью группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с масляным адъювантом (ВЭ+МА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The third group of sows and piglets obtained from them were immunized with Escherichia vaccine with oil adjuvant (VE+MA) according to the schedule and in doses similar to those in the first group.
Четвертую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной против эшерихиоза без адъювантов (ВЭ) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.The fourth group of sows and piglets obtained from them were immunized with the vaccine against escherichiosis without adjuvants (VE) according to the schedule and in doses similar to those in the first group.
Пятая группа свиноматок была контрольной, они и полученные от них поросята не иммунизировались.The fifth group of sows was a control; they and the piglets obtained from them were not immunized.
За поросятами в течение 90 дней вели клиническое наблюдение, учитывали количество заболевших и павших животных. Результаты проведенного исследования представлены в таблице 4.The piglets were clinically monitored for 90 days, and the number of sick and dead animals was taken into account. The results of the study are presented in Table 4.
Из материалов таблицы 4 видно, что в 1-й группе от 5 свиноматок было 5 получено 55 поросят, из которых заболело 8 голов и пало 2. Заболеваемость по группе составила 14,5%, смертность 3,6%. Следовательно, профилактическая эффективность заявляемого способа составила 85,5% при сохранности поросят в группе 96,4%.From the materials in Table 4 it is clear that in the 1st group, 5 sows produced 55 piglets, of which 8 got sick and 2 died. The morbidity rate for the group was 14.5%, mortality 3.6%. Consequently, the preventive effectiveness of the proposed method was 85.5% with the safety of piglets in the group being 96.4%.
Во 2-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с гидратом окиси алюминия, родилось 54 поросенка, из которых 12 заболело и 5 пало. Заболеваемость по этой группе составила 22,2%, смертность 9,2%, профилактическая эффективность 77,8%, при сохранности 90,8%.In the 2nd group, where sows were immunized with a vaccine with aluminum oxide hydrate, 54 piglets were born, of which 12 got sick and 5 died. The morbidity rate in this group was 22.2%, mortality 9.2%, preventive effectiveness 77.8%, with safety 90.8%.
В 3-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с масляным адъювантом, было получено 53 поросенка, из них 11 заболело, 4 пало. Заболеваемость составила 20,7%, смертность 7,5%, профилактическая эффективность 79,3%, а сохранность 92,5%.In the 3rd group, where sows were immunized with a vaccine with an oil adjuvant, 53 piglets were produced, of which 11 got sick and 4 died. The incidence was 20.7%, mortality 7.5%, preventive effectiveness 79.3%, and safety 92.5%.
В четвертой группе, где свиноматки вакцинировались вакциной без адъювантов, родилось 55 поросят, из них 19 заболело, 8 пало. Заболеваемость составила 34,5%, смертность 14,5%, профилактическая эффективность 65,5%, а сохранность 85,5%.In the fourth group, where sows were vaccinated with the vaccine without adjuvants, 55 piglets were born, of which 19 got sick and 8 died. The incidence was 34.5%, mortality 14.5%, preventive effectiveness 65.5%, and safety 85.5%.
В 5-й группе было получено 53 поросенка, из них 27 заболело, 11 пало. Заболеваемость составила 50,9%, смертность 20,7%, сохранность 79,3%.In the 5th group, 53 piglets were produced, of which 27 got sick and 11 died. The incidence was 50.9%, mortality 20.7%, safety 79.3%.
Следовательно, применение вакцины против эшерихиоза, полученной по заявляемому способу позволило более эффективно профилактировать заболевание поросят с эшерихиозной инфекцией. При этом заболеваемость снизилась по сравнению с аналогом на 7,7%, аналогом 2 на 6,2%, аналогом 3 на 20%, а в сравнении с группой (контроль) на 36,4%, при этом падеж сократился в 1,4-5,5 раза, что свидетельствует о высокой эффективности заявляемой вакцины.Consequently, the use of a vaccine against Escherichiosis obtained according to the claimed method made it possible to more effectively prevent the disease of piglets with Escherichiosis infection. At the same time, the incidence decreased in comparison with the analogue by 7.7%, analogue 2 by 6.2%, analogue 3 by 20%, and in comparison with the group (control) by 36.4%, while the mortality rate decreased by 1.4 -5.5 times, which indicates the high effectiveness of the proposed vaccine.
Иммуногенные свойства эшерихиозной вакцины изучали у поросят, полученных от вакцинированных супоросных свиноматок. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.The immunogenic properties of the Escherichia vaccine were studied in piglets obtained from vaccinated pregnant sows. Blood serum to determine the presence of antitoxic antibodies in the diffuse precipitation reaction was collected 7, 14, 28 and 56 days after the last vaccination.
Влияние применения вакцин на титр антител у поросят представлены в таблице 5.The effect of vaccine use on antibody titer in piglets is presented in Table 5.
Из материалов таблицы 5 видно, что иммунизация свиноматок и поросят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции. Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у поросят, которых у животных первой группы в 1,2-9 раз больше, чем у животных из остальных опытных групп.From the materials in Table 5 it is clear that immunization of sows and piglets by the claimed method provides more intense and long-lasting specific immunity against Escherichia infection. This is evidenced by the number of antibodies to E. coli toxins in piglets, which in animals of the first group are 1.2-9 times greater than in animals from the other experimental groups.
Claims (2)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2813752C1 true RU2813752C1 (en) | 2024-02-16 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2432174C1 (en) * | 2010-07-27 | 2011-10-27 | Федеральное государственное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method for producing colibacillosis anatoxin |
| RU2644654C2 (en) * | 2016-07-20 | 2018-02-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины | Method for producing hydroxide of aluminum oil theo-vaccine against campylobacteriosis |
| RU2753410C2 (en) * | 2020-01-14 | 2021-08-16 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method for obtaining toxoid vaccine against escherichiosis of animals |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2432174C1 (en) * | 2010-07-27 | 2011-10-27 | Федеральное государственное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method for producing colibacillosis anatoxin |
| RU2644654C2 (en) * | 2016-07-20 | 2018-02-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины | Method for producing hydroxide of aluminum oil theo-vaccine against campylobacteriosis |
| RU2753410C2 (en) * | 2020-01-14 | 2021-08-16 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method for obtaining toxoid vaccine against escherichiosis of animals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2429012C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2428202C1 (en) | Associated vaccine against anaerobic enterotoxemia and colibacillosis diarrhea in calves | |
| RU2813752C1 (en) | Method of producing aluminum hydroxide oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
| RU2806810C1 (en) | Hydroxide aluminum oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| RU2649831C1 (en) | Method of prevention of acute intestinal diseases of piglets | |
| PILEHCHIAN et al. | Large scale production of Blackleg vaccine by fermenter and enriched culture medium in Iran | |
| RU2764600C1 (en) | Vaccine against escherichiosis of calves and piglets | |
| RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2813771C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2753410C2 (en) | Method for obtaining toxoid vaccine against escherichiosis of animals | |
| CN106267176A (en) | Infectious coryza of chicken vaccine combination and its preparation method and application | |
| RU2814593C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2766549C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in piglets | |
| RU2766249C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in calves | |
| RU2316344C1 (en) | Associated vaccine against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
| RU2263143C2 (en) | Strain of bacterium streptococcus pyogenes 289 used for preparing vaccine against streptococcosis in fur animal | |
| RU2761379C1 (en) | Polyvalent inactivated vaccine against swine streptococcosis, method for its production and use | |
| RU2708891C1 (en) | Vaccine for rota-, coronaviral infection and cattle colibacillosis | |
| RU2521651C1 (en) | STRAINS OF BACTERIA Moraxella bovoculi "SH-CH6 N-DEP" USED TO MANUFACTURE DIAGNOSTIC PREPARATIONS AND VACCINES AGAINST INFECTIOUS KERATOCONJUNCTIVITIS OF CATTLE | |
| RU2699035C2 (en) | Polyvalent cattle vaccine against anaerobic enterotoxemia and method of using it | |
| RU2741643C1 (en) | Associated vaccine against myxomatosis, pasteurellosis and viral haemorrhagic disease 1 and type 2 of rabbits | |
| UA117089U (en) | SITC Vaccine Inactivated for Specific Prevention of Streptococcal, Enterococcal and Staphylococcal Etiology | |
| RU2340357C2 (en) | Vaccine against animal colibacillosis | |
| RU2292913C1 (en) | Associated vaccine aginst salmonellosis and colibacteriosis |