KR20210019030A

KR20210019030A - 돼지 써코바이러스에 대한 백신 접종

Info

Publication number: KR20210019030A
Application number: KR1020207037372A
Authority: KR
Inventors: 로만 크레즈시
Original assignee: 세바 상뜨 아니말르
Priority date: 2018-06-11
Filing date: 2019-06-10
Publication date: 2021-02-19
Also published as: US20210338792A1; EP3801609A1; JP2021527073A; PH12020552130A1; BR112020025211A2; CA3102685A1; WO2019238611A1; US11918637B2; CN112292149A; MX2020013484A

Abstract

본 발명은 돼지 써코바이러스에 의한 질환을 치료 또는 예방하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 특히 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법으로서, (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법을 개시한다.

Description

돼지 써코바이러스에 대한 백신 접종

본 발명은 돼지 써코바이러스(Porcine circovirus)에 의한 질환을 치료 또는 예방하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

돼지 써코바이러스는 돼지를 감염시키는 주요 바이러스 부류이다. PCV1, PCV2 및 PCV3을 비롯한 몇몇 유형의 PCV가 보고되었다. 이러한 바이러스는 전 세계적으로 존재하며, 특히 PCV2가 대부분의 돼지 무리를 감염시키고 있다. 일부는 비(非)병원성이지만, PCV2a, PCV2b, PCV2d, 또한 의심되는 PCV3을 비롯한 다른 것들은 질환(PCVD)을 유발할 수 있다. PCV 관련 질환에는, 특히 이유후전신소모성증후군(PMWS: Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome), 돼지피부염신증증후군(PDNS: Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome), 돼지호흡기복합증후군(PRDC: Porcine Respiratory Disease Complex), 번식장애, 육아종성 장염, 삼출성 표피염(exudative epidermitis), 괴사성 림프절염(necrotizing lymphadenitis) 및 선천성 진전증(congenital tremor)이 포함된다.

따라서, 돼지 무리에서 PCV 감염 및 관련 질환(PCVD)의 제어는 육종자들에게 중요한 문제이다. 오늘날은 주로 백신 접종을 기반으로 한다. 현재, 여러 PCV 백신, 특히 항-PCV2 백신이 새끼 돼지에게 사용 가능하다. 이러한 백신은 불활성화(예를 들어, 사멸된) 백신 또는 서브유닛(sub-unit) 백신이다. PCV2 백신과 같은 PCV 백신은 림프 조직에서 바이러스 유도 병변을 감소시키는 것을 통해 바이러스 부담을 감소시키고, PCVD를 제어할 수 있다. 백신 접종된 돼지의 조건 및 상태에 따라, 이러한 백신은 완벽하게 효과적일 수 있다. 하지만, 새끼 돼지에서, 모계 유래 면역이 이러한 백신의 효능을 부정적으로 방해할 수 있다고 보고되었다. 특히, 이러한 간섭은, 예를 들어 백신 접종 시 새끼 돼지의 나이, 백신 접종 시기 및 모계 유래 면역의 수준과 관련이 있을 수 있다고 언급되었다. 연구에 따르면, 높은 수준의 모계 유래 항체가 새끼 돼지에서 PCV2 백신 접종 후 체액성 면역반응을 방해하는 것으로 나타났다[22]. 높은 수준의 수동 면역을 가진 새끼 돼지에서, 백신 접종 시 항체의 감소가 관찰되었다. 또한, Haake 등[11]은, 1주령의 새끼 돼지에게 백신을 접종하면 새끼 돼지에서 능동적 체액성 면역의 유도를 변경할 수 있다고 시사하였다.

MDA 간섭의 정확한 원인은 여전히 조사 대상이지만, 돼지 무리에서 강력한 보호를 제공할 수 있는 최적화된 항-PCV 백신 접종 전략 또는 요법이 필요하다.

본 출원은 돼지에게 PCV 백신을 접종하고, 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 신규한 방법을 제공한다.

더욱 특히, 본 발명은 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법으로서, (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 방법에 따르면, 암퇘지는 이의 새끼 돼지의 이유기에 PCV 백신을 접종 받는다고 이해해야 한다.

본 발명자들은 이러한 신규한 백신 접종 요법에 의해 부여된 임상 보호(백신 효능)를 조사하여, 새끼를 낳은 적이 없는 암퇘지(gilt)와 새끼를 낳은 적이 있는 암퇘지(sow)에서 유도된 수동 획득 면역을 평가할 필요 없이 고유한 용량의 백신으로 적절한 보호를 제공할 수 있음을 발견하였다. 이유기의 암퇘지에게 백신을 접종하는 것과 2주령 내지 7주령의 이의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 조합하면, 돼지 무리에서 PCV 감염 및 관련 질환을 제어하는 데 매우 효과적이며, 모계 유래 면역에 의한 간섭을 받지 않는 것으로 보인다.

본 발명은 더욱 특히, 돼지에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 돼지에게 PCV 감염 또는 질환에 대한 백신을 접종하는 방법으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 특히, 돼지에서 보호성 항-PCV 면역을 유도하는 방법으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법으로서, (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이며; 바람직하게는 상기 방법은 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 3주령 내지 6주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법에 사용하기 위한 PCV 백신으로서, (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 사용하기 위한 PCV 백신에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 방법은 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 새끼 돼지에게는 3주령 내지 6주령에 PCV 백신을 접종하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 돼지에게 PCV 감염 또는 질환에 대한 백신을 접종하는 데 사용하기 위한 PCV 백신으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한 PCV 백신에 관한 것이다.

본 발명은 또한 돼지에서 보호성 항-PCV 면역을 유도하는 데 사용하기 위한 PCV 백신으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한 PCV 백신에 관한 것이다.

본 발명은 또한 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 통해 돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하기 위한 백신의 제조를 위한 PCV 항원의 용도에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 용도는 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 3주령 내지 6주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 통해 돼지에게 PCV 감염 또는 질환에 대한 백신을 접종하기 위한 조성물의 제조를 위한 PCV 항원의 용도로서, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 경우의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 통해 돼지에서 보호성 항-PCV 면역을 유도하기 위한 PCV 백신의 제조를 위한 PCV 항원의 용도로서, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 경우의 용도에 관한 것이다.

본 발명자들은, 이유기(즉, 이의 새끼 돼지의 이유기)의 암퇘지에게 백신을 접종하는 경우, 다음 세대 새끼 돼지가 2주령 내지 7주령에 백신 접종에 대하여 고도로 반응성일 수 있다는 것을 발견하였다. 그 결과, 새끼 돼지는 1회 백신 접종에 의해 효과적으로 보호될 수 있으며, 암퇘지에게는 이유기마다 백신을 접종할 수 있다.

가장 바람직한 구현예에서, 3주령 내지 6주령의 새끼 돼지에게 백신을 접종한다.

전형적인 구현예에서, 이유기에, 즉, 본질적으로 동일한 날에 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 백신을 접종한다.

특정하고 유리한 구현예에서, 암퇘지와 새끼 돼지의 백신 접종은 PCV 백신의 1회 근육내 주사와 같은 PCV 백신의 1회 주사를 포함한다.

본 발명은 임의의 PCV 백신과 함께 사용될 수 있으며, 보다 더욱 특히는 불활성화 PCV2 백신을 사용하여 PCV2 백신을 접종하는 것이 특히 적합하다.

백신 조성물

본원에 사용된 "백신"이란 용어는, PCV에 대한 동물(예를 들어, 돼지)의 면역반응을 유발하거나, 자극하거나 또는 증폭시키기 위해 사용될 수 있는 임의의 조성물을 포함한다.

따라서, 백신은 표적 바이러스로부터의 항원을 적어도 하나 포함한다. 항원은, 비제한적으로, 전바이러스(whole virus)(불활성화된 또는 약독화된 형태), 추출물 또는 이의 분획, 단리된 바이러스 단백질 또는 다른 바이러스 구성요소, 이를 인코딩하는 핵산, 또는 이들의 단편 또는 유도체일 수 있다.

백신은, 항원(또는 면역원)에 더하여, 투여 경로에 따라, 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 희석제, 아쥬반트, 동결건조 안정화제, 습윤화제 또는 유화제, pH 완충제, 겔화제 또는 점도증강제, 또는 보존제와 같은 당업자에게 그 자체로 공지된 다른 성분을 포함할 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제의 예에는, 비제한적으로, 탈염수 또는 증류수; 식염수; 피넛 오일, 아라키스 오일, 홍화 오일, 올리브 오일, 목화씨 오일, 옥수수 오일, 참기름 또는 코코넛 오일과 같은 식물성 오일; 메틸폴리실록산, 페닐폴리실록산 및 메틸페닐폴리실록산과 같은 폴리실록산을 포함하는 실리콘 오일; 휘발성 실리콘; 경질 유동 파라핀 오일 또는 중질 유동 파라핀 오일과 같은 미네랄 오일; 스쿠알렌; 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 염 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체; 저급 알칸올, 예를 들어 에탄올 또는 이소프로판올; 저급 아르알칸올; 저급 폴리알킬렌 글리콜 또는 저급 알킬렌 글리콜, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜 또는 글리세린; 이소프로필 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트 또는 에틸 올레에이트와 같은 지방산 에스테르; 폴리비닐피롤리돈; 아가; 카라기난; 트래거캔스검 또는 아카시아검, 및 바셀린이 포함된다. 전형적으로, 담체 또는 담체들은 백신 조성물의 10 중량% 내지 99.9 중량%를 차지할 수 있으며, 인산수소나트륨, 인산이수소나트륨, 인산수소칼륨, 인산이수소칼륨, 이들의 혼합물 등과 같은 당업계에 공지된 시약을 사용하여 전형적인 방법에 의해 완충될 수 있다.

아쥬반트의 예에는, 비제한적으로, 수중유 에멀젼, 수산화알루미늄(alum), 면역자극복합체, 비이온성 블록 중합체 또는 공중합체, 사이토카인(예컨대, IL-1, IL-2, IL-7, IFN-[알파], IFN-[베타], IFN-γ 등), 사포닌, 모노포스포릴 지질 A(MLA), 무라밀 다이펩타이드(MDP) 등이 포함된다. 다른 적합한 아쥬반트에는, 예를 들어 황산알루미늄칼륨, 대장균, 콜레라 독소 또는 이의 B 서브유닛, 디프테리아 독소, 파상풍 독소, 백일해 독소에서 단리된 열불안정성 또는 열안정성 장독소(들), 프로인트 불완전 또는 완전 아쥬반트 등이 포함된다. 디프테리아 독소, 파상풍 독소 및 백일해 독소와 같은 독소 기반 아쥬반트는, 예를 들어 포름알데히드로의 처리에 의해 사용 전 불활성화시킬 수 있다.

동결건조 안정화제의 예는, 예를 들어 소르비톨, 만니톨, 전분, 수크로오스, 덱스트란 또는 글루코오스와 탄수화물; 알부민 또는 카제인과 같은 단백질; 및 이들의 유도체일 수 있다.

백신은 또한 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae); 아데노바이러스(Adenovirus); 동부말뇌척수염바이러스(Eastern equine encephalomyelitis virus)와 같은 알파바이러스(Alphavirus); 대장섬모충(Balantidium coli); 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica); 브라키스피라 종(Brachyspira spp.), 바람직하게는 브라키스피라 하이오디센테리아(B. hyodysentheriae), 브라키스피라 필로시콜리(B. pilosicoli), 브라키스피라 이노센스(B. innocens), 돼지유산균(Brucella suis), 바람직하게는 생물형 1, 2 및 3; 돼지열병바이러스(Classical swine fever virus), 아프리카돼지열병바이러스(African swine fever virus); 클라미디아(Chlamydia) 및 클라미도필라(Chlamydophila) 종, 및 바람직하게는 클라미디아 페코룸(C. pecorum) 및 클라미디아 아보르투스(C. abortus); 클로스트리듐 종(Clostridium spp.), 바람직하게는 클로스트리듐 디피실(Cl. difficile), 클로스트리듐 퍼프린젠스(Cl. perfringens) 유형 A, B 및 C, 클로스트리듐 노비(Cl. novyi), 클로스트리듐 셉티쿰(Cl. septicum), 클로스트리듐 테타니(Cl. tetani); 소화기호흡기코로나바이러스(Digestive and respiratory Coronavirus); 작은와포자충(Cryptosporidium parvum); 에이메리아 종(Eimeria spp.); 에페리트로주노시스 수이스(Eperythrozoonosis suis)(현재는 마이코플라즈마 헤모수이스(Mycoplasma haemosuis)); 단독균(Erysipelothrix rhusiopathiae); 대장균; 헤모필루스 파라수이스(Haemophilus parasuis), 바람직하게는 아형 1, 7 및 14; 응집성뇌척수염바이러스(Hemagglutinating encephalomyelitis virus); 이소스포라 수이스(lsospora suis); 일본뇌염바이러스(Japanese Encephalitis virus); 로소니아 인트라셀룰라리스(Lawsonia intracellularis); 렙토스피라 종(Leptospira spp.), 바람직하게는 렙토스피라 오스트랄리스(Leptospira australis), 렙토스피라 카니콜라(Leptospira canicola), 렙토스피라 그립포티포사(Leptospira grippotyphosa), 황달출혈성렙토스피라(Leptospira icterohaemorrhagicae), 렙토스피라 인테로간스(Leptospira interrogans), 렙토스피라 포모나(Leptospira Pomona) 및 렙토스피라 타라소비(Leptospira tarassovi); 만헤이미아 헤몰리티카(Mannheimia haemolytica); 마이코박테리움 종(Mycobacterium spp.), 바람직하게는, 마이코박테리움 아비움(Μ. avium), 마이코박테리움 인트라셀룰라레(Μ. intracellulare), 마이코박테리움 보비스(M. bovis); 마이코플라즈마 하이오뉴모니아(Mycoplasma hyopneumoniae); 파보바이러스(Parvovirus); 파스퇴렐라 물토시다(Pasteurella multocida); 돼지거대세포바이러스(Porcine cytomegalovirus), 돼지파보바이러스(Porcine parvovirus); 돼지생식기호흡기증후군바이러스(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus); 가성광견병바이러스(Pseudorabies virus); 로타바이러스(Rotavirus); 사기야마바이러스(Sagiyama virus); 살모넬라 종(Salmonella spp.), 바람직하게는 살모넬라 티히무리움(S. thyhimurium) 및 살모넬라 콜레라에수이스(S. choleraesuis); 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp.), 바람직하게는 스타필로코커스 하이쿠스(S. hyicus); 스트렙토코커스 종(Streptococcus spp.), 바람직하게는 스트렙토코커스 수이스(Strep. suis); 돼지거대세포바이러스(Swine cytomegalovirus); 돼지헤르페스바이러스(Swine herpes virus); 돼지인플루엔자바이러스(Swine influenza virus); 돼지폭스바이러스(Swinepox virus); 톡소플라즈마 곤디(Toxoplasma gondii); 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus) 및/또는 돼지의 발진 바이러스와 같은 다른 병원체로부터의 항원을 포함할 수 있다.

본 발명의 백신 조성물은 수용액, 유중수 또는 수중유 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 팅크, 비경구, 피하, 피내, 근육내 또는 정맥내 투여용 제제(예를 들어, 주사 가능한 투여), 예컨대 멸균 현탁액 또는 에멀젼과 같은 액체 제형일 수 있다. 이러한 제형은 당업계에 공지되어 있으며, 전형적으로 적절한 담체 또는 용매 시스템에 항원 및 다른 전형적인 첨가제를 용해시켜 제조한다. 액체 제형은 또한 현탁화제 또는 유화제를 함유하는 현탁액 및 에멀젼을 포함할 수 있다.

투여 요법

본 발명은 본질적으로 이유기의 암퇘지에게 1회 투여하고, 3주령 내지 6주령의 새끼 돼지에게 1회 투여하는 것을 포함하는, 돼지에서 개선된 PCV 백신 접종 요법을 제공한다. 전형적인 구현예에서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지는 본질적으로 이유기에, 동일한 날에 처리된다. 이러한 백신 접종은 MDA를 평가할 필요 없이 새끼 돼지를 효과적으로 보호한다. 이러한 백신 접종 요법은 다음 이유 때까지 암퇘지를 효과적으로 보호한다. 이러한 백신 접종은 3주령 내지 6주령에서의 1회 백신 접종으로 다음 세대 새끼 돼지의 효과적인 백신 접종을 보장한다.

투여 경로는 경피, 점막 투여 또는 다른 비경구 경로(피내, 근육내, 피하, 정맥내 또는 복강내)일 수 있다. 본 발명의 백신은 편리하게 비강내로, 경피로(즉, 전신 흡수를 위해 피부 표면 상에 또는 피부 표면에 적용됨), 비경구로, 안구 등으로 투여될 수 있다. 비경구 투여 경로에는, 비제한적으로, 근육내, 정맥내, 복강내 경로 등이 포함된다. 근육내가 바람직하다.

본 발명의 백신은 1회 용량으로 투여될 수 있다. 나아가, 본 발명의 백신은 단독으로 투여되거나, 예를 들어 다른 돼지 면역원성 또는 백신 조성물과 같은 1종 이상의 추가의 조성물과 함께 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

실제로, 면역학적 유효 용량에 필요한 정확한 양은 대상의 연령 및 일반 조건, 제형의 특성 및 투여 방식과 같은 요인에 따라 대상마다 다를 수 있다. 적절한 "유효량"은 단지 통상의 실험만을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 비인간 동물 대상의 체중, 백신의 농도 및 다른 전형적인 요인을 기반으로 최소 유효 투여량을 찾기 위해 백신의 적절한 용량을 결정하거나 적정하는 방법이 당업계에 공지되어 있다. 전형적인 구현예에서, 백신은 0.5 ml 내지 5 ml의 단일 용량을 포함한다. 가장 바람직하게는, 암퇘지에게 2 ml 내지 4 ml를 투여하고, 새끼 돼지에게 0.5 ml 내지 3 ml를 투여한다.

특정 구현예에서, 본 발명은 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법에 관한 것이다. PCV 감염 또는 질환을 제어하는 것은, 특히 PCV 감염 및 관련 질환을 예방, 감소 또는 제한하거나; 무리에서 PCV의 확산을 예방, 감소 또는 제한하거나; PCV 관련 질환의 발생 또는 중증도를 예방, 감소 또는 제한하거나; 또는 PCV 바이러스 부하를 감소시키는 것을 나타낸다.

PCV2 백신 접종

바람직한 구현예에서, 본 발명은 돼지에게 PCV2 백신을 접종하거나, PCV2 감염 또는 질환을 제어하는 데 사용된다. 따라서, 본 발명은 PCV2 백신을 사용한다.

써코백(Circovac®)(Ceva), 인겔벡(Ingelvac®), 써코플렉스(CircoFLEX)(Boehringer Ingelheim Vetmedica) 또는 수박신(Suvaxyn®)과 같은 현재 개발된 PCV2 백신은, 불활성화 PCV2 백신 또는 서브유닛 백신이다. PCV2 서브유닛 백신은 전형적으로 PCV2a의 ORF2 유전자의 재조합 발현에 의해 생성된, 정제된 재조합 PCV2a 캡시드 단백질을 사용한다. 이와 관련하여, PCV2 단리물 Imp 1011의 ORF2에 의해 인코딩된 단백질은 EP1741785에 보고되어 있다. PCV2 단리물 PCV2Rm의 ORF2에 의해 인코딩된 단백질은 WO2010/061000에 보고되어 있다. PCV2 단리물 412의 ORF2에 의해 인코딩된 단백질은 EP1816200에 보고되어 있다. 추가의 PCV2 단리물의 ORF2에 의해 인코딩된 또 다른 단백질은 EP1036180 또는 EP2225367에 보고되어 있다. 개선된 합성 ORF2 유형 단백질은 WO2013/030320 및 WO2014/167060에 보고되어 있다.

특정 구현예에서, 본 발명은 불활성화 PCV2 백신인 PCV2 백신을 사용한다. 백신은 불활성화 PCV2a, 불활성화 PCV2b 또는 불활성화 PCV2d와 같은 임의의 불활성화 PCV2 계통을 포함할 수 있다. 특정예는 써코백(Circovac)이다.

또 다른 특정 구현예에서, 본 발명은 PCV2 ORF2 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 함유하는(또는 발현하는) 서브유닛 백신인 PCV2 백신을 사용한다. 특정 구현예에서, ORF2는 PCV2 단리물 Imp1011, PCV2Rm 또는 412의 ORF2; 또는 이와 같은 단백질과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 ORF2; 또는 적어도 10개, 15개 또는 그 이상, 바람직하게는 적어도 20개의 인접 아미노산 잔기를 포함하는 이의 면역원성 단편에서 선택된다.

본 발명의 추가의 양태 및 이점이 청구된 발명을 예시하는 하기의 실험 섹션에 개시될 것이다.

도 1은, 임상 연구 B의 면역화 프로토콜을 예시한 것이다.
도 2는, 암퇘지의 PCV2 IgG 수준을 보여준다.
도 3은, 새끼 돼지의 PCV2 IgG 수준을 보여준다.

실시예

임상 연구 A

실험 설계

본 연구는 PCVD 연구에 관한 EU 컨소시엄의 기준에 따라, PCVD의 진단이 확인된 이탈리아 양돈장에서 수행하였다. 본 연구는 무작위, 통제, 맹검 설계에 따라 수행하였다.

암퇘지 사전 등록: PCV2에 대한 ELISA 항체 검출 및 S/P 값의 계산을 위해, 150마리 암퇘지를 임신 중에 채혈하였다. 각각 50마리 암퇘지로 구성된 3개의 군을 조직하고, 이를 a) 평균 출산수; b) 평균 S/P 값에 따라 동등화된 3개의 상이한 군에 할당하였다.

암퇘지 등록: 50마리 암퇘지로 구성된 3개의 군을 다음과 같이 처리하였다:

ㆍ 군 A: 이유기에 백신을 접종함 (V1);

ㆍ 군 B: 분만 예정일 5주 및 3주 전에 백신을 접종함 (V2);

ㆍ 군 C: 백신을 접종하지 않음/대조군 (NV)

분만 예정일 1주 전에 모든 암퇘지를 채혈하였다.

새끼 돼지 등록: 3주령의 젖먹이 새끼 돼지 약 900마리(연구 군 당 100마리 이상의 새끼 돼지)를 연구에 등록시켰다.

연구 등록 시, 상기 언급된 암퇘지(군 A, 군 B 및 군 C)의 새끼 돼지를 귀 태그를 이용하여 개별적으로 식별하고, 동물의 40%의 체중을 측정하고, 20%를 샘플링 시점마다 채혈하였다.

이어서, 새끼 돼지를 개별 한배새끼 내에서 3개의 연구 군 중 하나로 무작위 할당하였다. 모든 새끼 돼지에게 써코벡(좌측) 근육내 주사를 투여하였으며, 이때 하나의 군(A)에게는 3주령에, 다른 군(B)에게는 6주령에 투여하였다. 하나의 군(C)에게는 염수(플라시보)를 주사하고, 음성 대조군으로 유지하였다.

새끼 돼지의 체중을 연구 등록 시, 이유기 종결 시 및 6개월 되었을 때에 측정하였다. 가능한 경우, 도축 시 시체 무게를 기록하였다. 새끼 돼지에게 투여되는 개별 처리를 이환율의 척도로 기록하였다. 사인이 명확하고 PCV2와 관련이 없는 경우(예를 들어, 암퇘지에게 짓밟힌 새끼 돼지, 다리 부러짐 등)를 제외하고는, 각각의 죽은 새끼 돼지에 대하여 사후 검사를 수행하여 사인을 결정하였다.

백신 접종 계획 효능의 주요 매개변수로서의 평균 1일 체중 증가, 이환율 및 사망률, 및 PCV2 바이러스 혈증을 연구 군 간에 비교하였다.

표 1에 표시된 시점에 따라 군 당 20마리 새끼 돼지에서 혈액 샘플을 채취하였다. 체중 측정 시점 또한 표 1에 제시되어 있다.

모든 새끼 돼지를 백신 접종 직후, 1일차, 1주차 및 이후 모든 반응이 사라질 때까지 매주 백신 접종 반응에 대하여 모니터링하였다.

시험 제품

조사 물품

제품 : 써코벡(CEVA)

조성/역가 : INACTIVATED PCV2 백신

제시 : 100 ml PET 바이알

동물

약 3주령의 건강한 새끼 돼지 900마리(각 군 당 100마리)를 연구에 포함시켰다. 암퇘지로부터의 모든 새끼 돼지에게 어린 새끼 돼지일 때 백신을 접종하고, 1차 채혈 시 부스팅하였다. 암퇘지에게 지점 2에 표시된 계획에 따라 이전 수유기의 젖을 뗄 때 또는 분만 5주 및 3주 전(2개의 암퇘지 군)에 백신을 접종하였다.

가축 사양

연구 동물(모든 군이 혼합됨)을 농장의 표준으로 수용하였다.

연구 동물에게 농장의 표준으로 먹이를 공급하였다.

맹검

본 연구는 맹검 방식이다. 백신 바이알을 라벨 코드로만 식별하였다.

처리

ㆍ 용량: 암퇘지에게 2 ml, 새끼 돼지에게 0.5 ml

ㆍ 경로: 근육내 주사

ㆍ 주사 부위: 목의 좌측

о 군 A: 3주령에 처리

о 군 B: 6주령에 처리

о 군 C: 백신을 접종하지 않음

효과 평가

하기 매개변수를 사용하여 상이한 백신 접종 프로토콜의 효능을 평가하였다.

i. 평균 1일 체중 증가(ADWG)

ii. 도태된 동물 및 사인을 포함한 사망률

iii. 이환율(개별 처리/주사)

iv. PCV2에 대하여 PCR 양성인 동물의 비율

v. 혈액 샘플에서의 PCV2의 바이러스 부하(Q-PCR)

vi. PRRSV 및 M hyo에 대한 혈청학적 프로파일링

vii. 자연적으로 죽은 동물과 인도적으로 안락사시킨 동물에 대한 부검 및 미생물학적 조사

viii. 도살장에서 채점하는 폐 병변

체액성 및 세포 매개 면역반응의 동역학을, 각각, ELISA 혈청학(INGENASA) 및 IFN-감마 SC에 대한 ELISpot으로 측정하였다. 이러한 조사는 저장된 혈액 샘플 및 PBMC에서 수행하였다.

나아가, 모계 유래 항체의 수준, 백신 접종에 대한 면역반응 및 현장 감염 시기를 평가하기 위해 PCV2에 대한 항체 역가를 결정하였다.

PCV2에 대한 표준 절차 Q-PCR에 따른 혈액 샘플에서의 PCV2의 바이러스 부하(Q-PCR)

혈청학

상업적으로 입수 가능한 키트[IDEXX 실험실(PRRS 및 Mhyo) 및INGENASA (PCV2) IgM+IgG]를 사용하여 백신 접종 및 감염에 대한 혈청학적 반응을 측정하였다.

응고 후, 혈청을 2개의 혈청 튜브에 나누고, 샘플을 분석 시까지 -18℃ 이하에서 보관하였다.

세포 매개 면역반응

세포 매개 면역반응은 IFN-감마 SC를 결정하기 위해 ELISpot 검정으로 측정하였다.

IFN-γ ELISpot 검정: 420xg(1800 rpm)에서 30분 동안 원심분리하는 단계를 통해 Histopaque-1077^® 용액의 밀도 구배로 말초혈액 단핵구 세포(PBMC)를 단리하였다.

종결 시, PBMC를 흡인으로 회수하고, RPMI-1640 배지에 재현탁시켜, 10% FCS가 보충된 200 μl RPMI-1640 중 200,000개 세포 밀도로 항-IFN-γ 단클론 항체(P2G10 - BD Pharmingen)가 코팅된 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 시험관내 항원 자극을 PCV2 항원(바이러스: 0.1-1 MOI; 크기 정도: μg/ml)을 이용하여 적어도 20시간 동안 수행하였다. PBMC에 의한 IFN-γ 분비를 항-IFN-γ(P2C11 - BD Pharmingen) 비오틴-접합된 단클론 항체, 2차 알칼리성 포스파타아제-접합된 항체(Vector) 및 NBT/BCIP 전개 기질 용액(BioRad)을 사용하여 검출하였다. 세포가 IFN-γ를 분비한 경우 기질의 침전으로 인해, 반응은 AID^® ELISpot 판독기에 의해 청색 스폿으로 가시화되었다.

도살장에서의 폐 병변

도살장에서, 폐 병변을 Madec's gride 및 SPES grid에 따라 점검하였다.

이러한 실험 결과는, 이러한 신규한 백신 접종 요법에 의해 부여된 임상 보호(백신 효능)를 확인시켜 주고, 새끼를 낳은 적이 없는 암퇘지와 새끼를 낳은 적이 있는 암퇘지에서 유도된 수동 획득 면역을 평가할 필요 없이 고유한 용량의 백신으로 적절한 보호를 제공할 수 있음을 확인시켜 준다.

임상 연구 B

10마리의 새끼를 낳은 적이 없는 암퇘지로 구성된 3개의 군에, 하기 표에 제시된 백신 접종 요법에 따라, 써코벡(2 mL)으로 백신을 접종하였다:

바이러스 혈증 및 면역반응을 평가하기 위해, 연구 전반에 걸쳐 도 1에 화살표로 표시된 날에 각각의 동물에서 12개의 혈액 샘플을 채취하였다. 암퇘지 및 새끼 돼지에서 항-PCV2 IgG의 평균 값은 도 2 및 도 3에 제시되어 있다.

도 2의 결과는, 백신 접종이 암퇘지에서 특정 항체의 생산을 유도하였음을 명백하게 보여준다. 놀랍게도, 군 B의 암퇘지에서의 역가가 군 A보다 더 균일하였다. 군 A 암퇘지는 분만 전 부스터 백신 접종에 대한 반응으로 각각의 분만 전에 항상 높은 역가를 나타냈다. 본 발명자들은 군 B의 암퇘지에서 이러한 피크를 관찰하지 못했다. 이는, 군 B의 암퇘지가 분만 직전에 초유로 옮겨질 정도로 높은 농도의 항체를 갖고 있지 않아, 결과적으로 새끼 돼지의 혈액에 MDA로서 나타남을 의미한다.

유사하게, 도 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 군 A의 암퇘지에서 태어난 새끼 돼지는 1주차 및 또한 3주차에 훨씬 더 높은 항체의 역가를 나타냈다. 나아가, 역가의 매우 큰 변동이 군 A에서 관찰되었다. 대조적으로, 첫 번째 출산인 암퇘지 B에서 태어난 새끼 돼지(첫 번째 분만)는 1주차에 중간 정도의 역가 및 3주차에 비교적 낮은 역가를 나타냈으며, 2번째 출산인 암퇘지 B에서 태어난 새끼 돼지(두 번째 분만)는 1주차에 매우 높은 역가(본 발병자들이 이 시기에 백신을 접종하지 않았기 때문에, 간섭하지 않음) 및 3주차(백신 접종 시)에 중간 정도의 역가를 나타냈다. 또한, 3주차 역가는 군 A 및 또한 군 C(대조군, 백신을 접종하지 않은 암퇘지)의 새끼 돼지보다 훨씬 더 균일하였다. 군 C의 새끼 돼지의 일부 또한 높은 역가를 나타냈는데, 이는 아마도 이의 모체가 감염되어 감염후 항체를 생성하였기 때문인 것으로 여겨진다. 이의 역가는 군 B의 새끼 돼지보다 훨씬 더 가변적이었다.

본 발명자들은, 암퇘지에서 이들 자체를 보호하기 위해 균일한 수준의 면역 상태를 달성하기를 원했고, 또한 새끼 돼지에서 백신 접종을 방해하지 않으면서 이들을 보호하기 위해 적절하고(너무 높지 않은) 균일한 면역 상태(MDA의 수준)를 달성하기 원했기 때문에, 군 B의 면역화 프로파일이 유리하다.

따라서, 이러한 실험 결과는 추가로 이러한 신규한 백신 접종 요법에 의해 부여된 임상 보호(백신 효능)를 확인시켜주고, 새끼를 낳은 적이 없는 암퇘지와 새끼를 낳은 적이 있는 암퇘지에서 유도된 수동 획득 면역을 평가할 필요 없이 고유한 용량의 백신으로 적절한 보호를 제공할 수 있음을 확인시켜 준다.

Claims

돼지 무리에서 PCV 감염 또는 질환을 제어하는 방법에 사용하기 위한 PCV 백신으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 사용하기 위한 PCV 백신.
제1항에 있어서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 3주령 내지 6주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 방법에 사용하기 위한, PCV 백신.
돼지에게 PCV 감염 또는 질환에 대한 백신을 접종하는 데 사용하기 위한 PCV 백신으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
돼지에서 보호성 항-PCV 면역을 유도하는 데 사용하기 위한 PCV 백신으로서, 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하며, 여기서 (i) 이유기의 암퇘지에게 PCV 백신을 접종하고, (ii) 2주령 내지 7주령의 새끼 돼지에게 PCV 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 3주령의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 6주령의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항에 있어서, 이유기에, 본질적으로 동일한 날에 암퇘지와 이의 새끼 돼지에게 백신을 접종하는 것을 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항에 있어서, 상기 PCV가 PCV2인 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제8항에 있어서, 암퇘지와 새끼 돼지의 백신 접종이 불활성화 PCV2 백신을 이용하여 수행되는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제8항 또는 제9항에 있어서, 암퇘지와 새끼 돼지의 백신 접종이 PCV2 백신의 1회 주사를 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항에 있어서, 암퇘지와 새끼 돼지의 백신 접종이 PCV 백신의 1회 근육내 주사를 포함하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.
제1항에 있어서, 암퇘지에게 이의 새끼 돼지의 이유기마다 백신을 접종하는 경우에 사용하기 위한, PCV 백신.