KR20010073216A - 약 15ｋＤａ 및 약 45ｋＤａ 살충성 단백질을 코딩하는식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 - Google Patents
약 15ｋＤａ 및 약 45ｋＤａ 살충성 단백질을 코딩하는식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20010073216A KR20010073216A KR1020017004769A KR20017004769A KR20010073216A KR 20010073216 A KR20010073216 A KR 20010073216A KR 1020017004769 A KR1020017004769 A KR 1020017004769A KR 20017004769 A KR20017004769 A KR 20017004769A KR 20010073216 A KR20010073216 A KR 20010073216A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- plant
- host
- seq
- protein
- polynucleotide
- Prior art date
Links
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 28
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 title description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 66
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 12
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 abstract description 29
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 22
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 22
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 4
- 101710117021 Tyrosine-protein phosphatase YopH Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 10
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- 101000653197 Beet necrotic yellow vein virus (isolate Japan/S) Movement protein TGB3 Proteins 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 241000254175 Anthonomus grandis Species 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 101001057129 Bacillus cereus Enterotoxin Proteins 0.000 description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 101000700655 Mycobacterium leprae (strain TN) Serine-rich antigen Proteins 0.000 description 2
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- QGLZXHRNAYXIBU-WEVVVXLNSA-N aldicarb Chemical compound CNC(=O)O\N=C\C(C)(C)SC QGLZXHRNAYXIBU-WEVVVXLNSA-N 0.000 description 2
- -1 aldrin Chemical compound 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 241000218475 Agrotis segetum Species 0.000 description 1
- 101000664393 Bacillus thuringiensis subsp. finitimus S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 101100275988 Bacillus thuringiensis subsp. israelensis cyt2Ba1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100007933 Bacillus thuringiensis subsp. kyushuensis cyt2Aa1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150001086 COB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005944 Chlorpyrifos Substances 0.000 description 1
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 101100139611 Corynebacterium diphtheriae (strain ATCC 700971 / NCTC 13129 / Biotype gravis) qcrB gene Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241001071944 Cyta Species 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 1
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 239000005949 Malathion Substances 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- BIWJNBZANLAXMG-YQELWRJZSA-N chloordaan Chemical compound ClC1=C(Cl)[C@@]2(Cl)C3CC(Cl)C(Cl)C3[C@]1(Cl)C2(Cl)Cl BIWJNBZANLAXMG-YQELWRJZSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- LHHGDZSESBACKH-UHFFFAOYSA-N chlordecone Chemical compound ClC12C3(Cl)C(Cl)(Cl)C4(Cl)C2(Cl)C2(Cl)C4(Cl)C3(Cl)C1(Cl)C2=O LHHGDZSESBACKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N chlorpyrifos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150044717 cyt1Aa gene Proteins 0.000 description 1
- 101150034285 cytB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N diazinon Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC(C)=NC(C(C)C)=N1 FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFBKLUNHFCTMDC-PICURKEMSA-N dieldrin Chemical compound C([C@H]1[C@H]2[C@@]3(Cl)C(Cl)=C([C@]([C@H]22)(Cl)C3(Cl)Cl)Cl)[C@H]2[C@@H]2[C@H]1O2 DFBKLUNHFCTMDC-PICURKEMSA-N 0.000 description 1
- 229950006824 dieldrin Drugs 0.000 description 1
- NGPMUTDCEIKKFM-UHFFFAOYSA-N dieldrin Natural products CC1=C(Cl)C2(Cl)C3C4CC(C5OC45)C3C1(Cl)C2(Cl)Cl NGPMUTDCEIKKFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-[(dimethoxyphosphorothioyl)thio]succinate Chemical compound CCOC(=O)CC(SP(=S)(OC)OC)C(=O)OCC JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- JLYXXMFPNIAWKQ-GNIYUCBRSA-N gamma-hexachlorocyclohexane Chemical compound Cl[C@H]1[C@H](Cl)[C@@H](Cl)[C@@H](Cl)[C@H](Cl)[C@H]1Cl JLYXXMFPNIAWKQ-GNIYUCBRSA-N 0.000 description 1
- JLYXXMFPNIAWKQ-UHFFFAOYSA-N gamma-hexachlorocyclohexane Natural products ClC1C(Cl)C(Cl)C(Cl)C(Cl)C1Cl JLYXXMFPNIAWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000002919 insect venom Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229960002809 lindane Drugs 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000453 malathion Drugs 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- GVYLCNUFSHDAAW-UHFFFAOYSA-N mirex Chemical compound ClC12C(Cl)(Cl)C3(Cl)C4(Cl)C1(Cl)C1(Cl)C2(Cl)C3(Cl)C4(Cl)C1(Cl)Cl GVYLCNUFSHDAAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 101150017854 petB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150040669 petJ gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8285—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for nematode resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
Abstract
본 발명은 살충성 독소를 코딩하는, 식물에 최적화된 신규의 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은, 야생형 서열과 비교하여, 예를 들면, 그들을 특히 최적화된 식물내 발현에 적합하게 만들어주는 특정 변형을 보유하고 있다. 본원에 기술된 폴리뉴클레오티드 서열을 사용하여, 식물에 해충 내성을 부여하기 위해 당업계의 숙련가에게 공지된 기술에 따라 식물을 형질변환시킬 수 있다. 바람직한 실시양태에 있어서, 본 발명은 약 15kDa 및 약 45kDa의 살충성 단백질을 코딩하는, 식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
Description
곤충 및 다른 해충들은 농작물 손실과 이러한 해충들을 구제하는 비용에 있어서 농부에게 해마다 수천만 달러의 비용을 부담시킨다. 농작물 생산 환경에서 충해(蟲害)에 의하여 야기되는 손실은 농작물 수율의 감소, 농작물 질의 저하, 및 증가된 추수 비용을 포함한다.
화학적인 살충제는 효과적인 해충 구제 방법을 제공하여 왔다; 하지만, 대중은 음식물, 지하수, 및 환경 도처에서 발견될 수 있는 잔류 화학물질의 양에 관심을 가지게 되었다. 따라서, 합성 화학 살충제는 그들의 잠재적인 환경 유해 결과에 대하여 점차 자세히 조사되고 있다. 합성 화학 살충제는 토양 및 지하에 있는 대수층(帶水層)에 해독을 끼치고, 빗물이 땅 위를 흐른 결과 지표수를 오염시키며,타겟이 아닌 생명체를 파괴할 수 있다. 합성 화학 살충제는 애완동물, 사육동물 또는 어린아이들이 그들과 접촉하게 될 수도 있는 지역에 적용될 때, 대중의 안전을 위협한다는 부가적인 단점을 가지고 있다. 그들은 또한 특히 적절한 사용 기술을 따르지 않는 경우에, 그것을 사용하는 사람의 건강을 해칠 수 있다. 전세계의 조절 기구들은 많은 합성 살충제, 특히 분해가 잘 안되어 환경에 계속 남아 먹이사슬로 들어가게 되는 살충제들의 사용을 제한하고/하거나 금지하고 있다. 널리 사용되는 합성 화학 살충제의 예에는 유기염화물, 예를 들면, DDT, 미렉스(mirex), 케폰(kepone), 린데인(lindane), 알드린(aldrin), 클로르데인(chlordane), 알디카브(aldicarb), 및 다이엘드린(dieldrin); 유기인산염, 예를 들면, 클로르피리포스(chlorpyrifos), 파라티온(parathion), 말라티온(malathion), 및 다이아지논(diazinon); 및 카르빈산염이 포함된다. 살충제의 사용에 대한 엄격한 새로운 규제 및 몇몇 효과적인 살충제의 절판은 희생이 큰 해충을 구제하기 위한 경제적이며 효과적인 선택권을 제한할 수 있다.
많은 합성 화학 살충제의 사용과 연관된 문제점들 때문에, 이러한 제제의 사용을 제한하고 대체 살충제를 동정해야 할 명확한 필요성이 존재한다. 합성 화학 살충제의 대체, 또는 이들 제제와 생물학적 살충제의 조합은 환경 내의 유독성 화학물질의 수준을 감소시킬 수 있을 것이다.
점차 더 많은 사람들에 의하여 사용되고 있는 생물학적 살충제는 토양 미생물바실러스 슈린지엔시스(Bacillus thuringiensis, "B.t.")이다. 토양 미생물인바실러스 슈린지엔시스는 그람-양성의 포자-형성 세균이다. 대부분의B.t.균주는살충 활성을 나타내지 않는다. 몇몇B.t.균주는 부포자 단백질 봉입체(parasporal protein inclusioins)를 생산하며, 그에 의해 특징지어질 수 있다. 이러한 "δ-내독소(δ-endotoxin)"는 전형적으로 특이적인 살충 활성을 가지고 있으며, 그럼 점에서 비특이적인 숙주 범위를 가지고 있는 외독소(exotoxin)와 구별된다. 이러한 봉입체는 종종 뚜렷한 형태를 가진 결정으로서 현미경으로 관찰된다. 상기 단백질은 해충에 매우 독성일 수 있으며, 그들의 독성 활성에 있어서 특이적이다.
비.슈린지엔시스아종쿠르스타키(kurstaki)의 포자 및 결정체 조제물(preparations)은 상업적인 인시류 해충용 살충제로서 수년간 사용되어 왔다. 예를 들면,비.슈린지엔시스변이주쿠르스타키HD-1은, 다수의 인시류 곤충에 독성을 나타내는 결정성 δ-내독소를 생산한다.
에세리히아 콜라이(Escherichia coli) 내에서의B.t. 결정성 단백질 유전자의 클로닝 및 발현은 15년 이상 전에 간행물에 기술된 바 있다(Schnepf, H.E., H.R. Whiteley [1981]Proc. Natl. Acad. Sci. USA78:2893-2897). 미국특허 제 4,448,885호 및 미국특허 제 4,467,036호는이.콜라이(E. coli) 내에서의B.t. 결정성 단백질의 발현을 개시하고 있다. 재조합 DNA에 근거한B.t. 산물이 생산되어 사용을 승인받아 왔다.
B.t. 살충제의 상업적 사용은 원래 협소한 범위의 인시류(lepidopteran, 모충(毛蟲, caterpillar)) 해충에 제한되어 있었다. 그러나, 보다 최근에 연구자들은 훨씬 더 넓은 범위의 해충에 대하여 특이성을 지닌B.t. 살충제를 발견하여 왔다. 예를 들면, 다른B.t. 종 즉,이스라엘렌시스(israelenis) 및모리소니(morrisoni)(a.k.a.tenebrionis, a.k.a.B.t.M-7)는 각각 쌍시류(Diptera)와 초시류(Coleoptera) 목의 곤충을 구제하는데 상업적으로 사용되어 왔다(Gaertner, F.H. [1989] "Cellular Delivery Systems for Insecticidal Proteins: Living and Non-living Microorganisms," inControlled Delivery of Crop Protection Agents, R.M. Wilkins, ed., Taylor and Francis, New York and London, 1990, pp. 245-255).
새로운B.t.아종이 동정되어 왔으며, 활성 δ-내독소 단백질의 유전자가 분리되어 서열분석 되었다(Hofte, H., H.R. Whiteley [1989]Microbiological Reviews52(2):242-255). Hofte 및 Whiteley는B.t. 결정성 단백질 유전자를 네개의 주요 클래스로 분류하였다. 상기 클래스는cryI(인시류-특이적),cryII(인시류- 및 쌍시류-특이적),cryIII(초시류-특이적), 및cryIV(쌍시류-특이적)이다. 다른 해충들에 대하여 특이적으로 독성을 나타내는 균주의 발견이 보고되어 왔다(Feitelson, J.S., J. Payne, L. Kim [1992]Bio/Technology10:271-275). 예를 들면, CryV 및 CryVI라는 명칭이 두 가지 새로운 그룹의 선충류-활성 독소 용으로 제안되어 왔다.
Hofte 및 Whiteley가 1989년에 발표한 결정성 단백질의 명명법 및 분류법은 유추된(deduced) 아미노산 서열 및 그 독소의 숙주 범위에 근거한 것이다. 그러한 체계는 다섯개의 주요 클래스로 나뉘어지는 14가지 상이한 유형의 독소 유전자를 포괄하도록 되어 있다. 서열 분석된바실러스 슈린지엔시스결정성 단백질 유전자의 수는 현재 50개 이상에 이른다. 오로지 아미노산 동일성(identity)에만 근거를 둔 수정된 명명법이 제안되어 왔다(Crickmoreet al. [1996] Society for InvertebratePathology, 29th Annual Meeting, IIIrd International Colloquium onBacillus thuringiensis, University of Cordoba, Cordoba, Spain, September 1-6, abstract). 연상기호 "cry"는 별개의 클래스로 남아 있는 cytA 및 cytB를 제외한 모든 독소 유전자들에 대해서는 그대로 남아있다. 1순위의 아라비아 숫자는 로마자로 바뀌었고, 4순위의 삽입구는 삭제되었다. 다수가 재분류되었을 지라도, 원래의 명칭 중 다수가 그대로 남아있다.
유전공학 기술을 사용하여B.t. 독소를 농경 환경에 전달하기 위한 새로운 접근방법들이 개발 중에 있으며, 이러한 방법에는 곤충에 대하여 내성을 가지도록B.t. 독소 유전자로 유전적으로 조작된 식물을 사용하는 방법, 및 안정화된 미생물 세포를B.t. 내독소 전달체로서 사용하는 방법 등이 포함된다(Gaertner, F.H., L. Kim [1988] TIBTECH 6:S4-S7). 따라서, 분리된B.t. 내독소 유전자는 상업적으로 가치있어 지고 있다.
B.t. 독소 및/또는 그들의 유전자를 변형시킴으로써 다양한 향상이 달성되어 왔다. 예를 들면, 미국특허 제 5,380,831호 및 제 5,567,862호는 향상된 식물내 발현성을 보유한 합성된 살충성 결정성 단백질 유전자의 생산에 관한 것이다.
B.t. 독소의 성공적인 농업에의 활용에 있어서 장애가 되는 문제에는 곤충에 의한B.t. 독소에 대한 내성의 발현이 포함된다. 또한, 어떤 곤충은B.t.의 효과에 반응하지 않는다. 후자의 경우에는 목화다래바구미(boll weevil) 및 검은 뿌리잘라먹는 벌레(black cutworm)와 같은 곤충 뿐만 아니라, 지금까지B.t. δ-내독소에 대하여 뚜렷한 감수성을 전혀 갖지 않는 것으로 주장되어온 대부분 종의 성충이 포함된다.
따라서,B.t. 식물 공학에서 내성 관리 전략은 큰 관심사가 되어왔으며, 새로운 독소 유전자에 대한 큰 필요성이 남아 있다. 예를 들면, 국제공개 97/40162호(간행된 PCT 출원)는B.t. 분리주 PS80JJ1 및 PS149B1으로부터 수득가능한 15kDa 및 45kDa 초시류-활성 단백질을 개시하고 있다.
활발한 연구 및 연구력 투자의 결과, 신규의B.t. 분리주, 독소 및 유전자에 대한 특허, 그리고B.t. 분리주의 새로운 용도에 대한 특허가 꾸준히 등록되어 왔다. 리뷰를 위해서는, Feitelsonet al.,supra를 참조하라. 미국특허 제 5,589,382호는 선충류에 대한 활성을 보유한B.t. 분리주 PS80JJ1을 개시하고 있다. 미국특허 제 5,632,987호는B.t. 분리주 PS80JJ1이 옥수수 뿌리벌레에 대한 활성을 보유한 것으로 개시하고 있다. 하지만, 새로운B.t. 분리주, 및 공지의B.t. 분리주의 새로운 용도의 발견은 경험적이고, 예측불가한 영역으로 남아 있다. 곤충 및 다른 해충의 효과적인 구제를 초래하는 방식으로 식물 내에서 적절한 수준으로 성공적으로 발현될 수 있는 새로운 독소 유전자가 절실히 요구된다.
[발명의 간단한 요약]
본 발명은 해충, 특히 식물 해충의 구제에 유용한 물질 및 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 살충성 단백질을 코딩하는, 식물에 최적화된 신규폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은, 야생형(wild-type) 서열과 비교하여, 그들을 최적화된 식물내 발현에 특히 적합하게 만들어주는 특정 변형(modifications)을 보유하고 있다. 본원에 기술된 폴리뉴클레오티드 서열을 사용하여, 식물에 해충 내성을 부여하기 위해 당업계의 숙련가에게 공지된 기술에 따라 식물을 형질변환(transformation)시킬 수 있다. 바람직한 실시양태에 있어서, 본 발명은 약 15kDa 및 약 45kDa 살충성 단백질을 코딩하는, 식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
[서열의 간단한 설명]
서열 1은 옥수수에서의 발현을 위하여 최적화된, "80JJ1-15-PO5"라 명명된 유전자의 폴리뉴클레오티드 서열이다. 이 유전자는 약 15kDa 단백질을 코딩한다. 이 유전자 및 단백질은 국제공개 제 97/40162호에 개시되어 있다.
서열 2는 옥수수에서의 발현을 위하여 최적화된, "80JJ1-15-PO7"이라 명명된 유전자의 신규 폴리뉴클레오티드 서열이다. 이 유전자는 약 15kDa 단백질을 코딩하는 대체 유전자(alternative gene)이다.
서열 3은 "80JJ1-15-PO7"이라 명명된 유전자에 의해 코딩되는 신규 살충 활성 단백질의 아미노산 서열이다.
서열 4는 옥수수에서의 발현을 위하여 최적화된, "80JJ1-45-PO"라 명명된 유전자의 폴리뉴클레오티드 서열이다. 이 유전자는 약 45kDa 단백질을 코딩한다. 이 유전자는 국제공개 제 97/40162호에 개시되어 있다.
서열 5는지아 메이스(Zea mays)에서의 발현을 위하여 최적화된, "149B1-15-PO"라 명명된 유전자의 신규 폴리뉴클레오티드 서열이다. 이 유전자는 국제공개 제 97/40162호에 개시되어 있는 PS149B1으로부터 수득가능한 약 15kDa 단백질을 코딩한다.
서열 6은지아 메이스(Zea mays)에서의 발현을 위하여 최적화된, "149B1-45-PO"라 명명된 유전자의 신규 폴리뉴클레오티드 서열이다. 이 유전자는 국제공개 제 97/40162호에 개시되어 있는 PS149B1으로부터 수득가능한 약 45kDa 단백질을 코딩한다.
본 발명은 살충성 독소를 코딩하는, 식물에 최적화된 신규 폴리뉴클레오티드 서열에 관한 것이다.
본 발명은 해충, 특히 식물 해충의 구제에 유용한 물질 및 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 살충성 단백질을 코딩하는, 식물에 최적화된 신규 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은, 야생형(wild-type) 서열과 비교하여, 그들을 최적화된 식물내 발현에 특히 적합하게 만들어주는 특정 변형(modifications)을 보유하고 있다. 본원에 기술된 폴리뉴클레오티드 서열을 사용하여, 식물에 해충 내성을 부여하기 위해 당업계의 숙련가에게 공지된 기술에 따라 식물을 형질변환(transformation)시킬 수 있다. 바람직한 실시양태에 있어서, 본 발명은 약 15kDa 및 약 45kDa 살충성 단백질을 코딩하는, 식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
컴퓨터 또는 소프트웨어에 의해 보조되는 서열 정렬(sequence alignments)과같은 기술을 사용하여, 본 발명의 식물에 최적화된 유전자의 뉴클레오티드 서열과 야생형 유전자 또는 이전의 공지된 유전자 간의 차이점을 파악할 수 있다. 이와 마찬가지로, 야생형 독소 또는 이전의 공지된 독소와 비교한 본 발명의 독특한 아미노산 서열의 차이점을 파악할 수 있다.
본원에 개시된 유전자의 서열이 주어지면, 본 발명의 유전자를 몇 가지 수단에 의해 수득할 수 있음이 당업계의 숙련가에게 명백할 것이다. 바람직한 실시양태에 있어서, 본 발명의 유전자는, 예를 들면, 유전자 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 본원에 예시된 특정 유전자는 후술하는 배양균 기탁기관에 기탁된 특정 분리주 유래의 야생형 유전자를 본 발명의 가르침에 따라 변형시킴으로써(예를 들면, 점돌연변이 기술에 의해) 수득될 수 있다.
본원에 기술된 배양균들은 농업 연구 배양균 기탁소(Agricultural Research Service Patent Culture Collection(NRRL), Northern Regional Research Center, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604, USA)에 기탁되었다. 하기 목록의 기탁된 균주들은 상기 "배경기술" 항목에서 논의된 인용특허들에 개시되어 있다.
| 계대배양주 | 수탁번호 | 기탁일 |
| B.t.PS80JJ1 | NRRL B-18679 | 1990. 7. 17 |
| E. coli(NM522)(pMYC2421)(PS80JJ1 14kDa & 45kDa) | NRRL B-21555 | 1996. 3. 28 |
| E. coli(NM522)(pMYC2426)(PS80JJ1 14kDa & 45kDa) | NRRL B-21671 | 1997. 3. 26 |
| B.t.PS149B1 | NRRL B-21553 | 1996. 4. 8 |
| E. coli(NM522)(pMYC2429)(PS149B1 15kDa & 45kDa) | NRRL B-21673 | 1997. 3. 26 |
기탁주의 이용가능성이 정부의 결정에 의하여 보장된 특허권을 침해하는 방식으로 본 발명을 시행하여도 좋다는 인허를 구성하지는 않음을 이해하여야 한다.
유전자 및 독소.바람직한 실시양태에 있어서, 본 발명은 식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 서열은 서열 2, 서열 5, 및 서열 6으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다. 서열 2는 서열 3에 도시된 바람직한 단백질을 코딩한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 바람직한 숙주 세포 내에서 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 완전한 "유전자(genes)"를 생산하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 당업계의 숙련가라면 쉽게 알아차릴 수 있듯이, 서열 2, 서열 5, 및 서열 6은 종지코돈 없이 도시되어 있다. 서열 2, 서열 5, 및/또는 서열 6은, 당업계에 이미 공지되어 있는 바와 같이, 관심있는 숙주 내의 프로모터의 조절하에 적절하게 놓일 수 있다.
당업계의 숙련가라면 이미 알고 있듯이, DNA는 전형적으로 이중가닥 형태로 존재할 수 있다. 이러한 배열에 있어서, 한 가닥은 다른 하나의 가닥에 대하여 상보적이고, 그 역관계도 성립한다. "코딩 가닥(coding strand)"이란 용어는 당업계에서 종종 전사해독프레임(open reading frame, "ORF")으로 읽혀 관심있는 단백질 또는 펩티드를 생성할 수 있는 일련의 코돈(코돈이란 한번에 세개가 읽혀 하나의 특정 아미노산을 낳을 수 있는 세 개의 뉴클레오티드임)을 가지고 있는 가닥을 언급하기 위해 사용된다. 생체내(in vivo)에서 단백질을 발현하기 위하여, 하나의 DNA 가닥은 전형적으로, 단백질 해독의 주형으로 사용될 수 있는 상보적인 RNA 가닥으로 전사된다. DNA가 (예를 들면) 식물 내에서 복제됨에 따라, 추가의 상보적인 DNA 가닥이 생산된다. 따라서, 본 발명은 첨부된 서열목록에 도시된 예시된 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보성 가닥의 사용을 포함한다. 특별히 예시된 신규 DNA 분자와 기능적으로 동등한 RNA 및 PNA(peptide nucleic acids)는 본 발명에 포함된다.
본 발명의 특정 DNA 서열은 본원에 특별히 에시되어 있다. 이들 서열은 본 발명의 좋은 예이다. 본 발명은 본원에 특별히 예시된 유전자 및 서열 뿐만 아니라, 본원에 특별히 개시된 것과 비교할 때, 식물에서의 독소 발현과 관련하여 동일하거나 또는 유사한 특성을 시현하는 그의 등가물 및 변이체(돌연변이체(mutants), 융합체(fusions), 키메라(chimerics), 절두체(truncations), 단편(fragments), 및 더 작은 유전자와 같은)를 포함함이 명백하다. 본원에 사용될 때, "변이체(variants)" 및 "등가물(equivalents)"이라는 용어는, 식물 내에서의 본 발명의 유전자의 발현 및 그로부터 결과되는 살충 활성에 크게 영향을 미치지 않는 뉴클레오티드(또는 아미노산) 치환, 결실(내부 및/또는 말단), 부가, 또는 삽입을 보유한 서열을 의미한다. 살충 활성을 보유한 폴리뉴클레오티드 단백질의 단편, 및 전장(full-length) 단백질의 "살충성 영역(pesticidal portions)" 또한 본 발명에 포함된다.
표준기술을 사용하여, 유전자는 변형될 수 있으며, 유전자의 변이체가 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들면, 점 돌연변이(point mutation)를 만들기 위한 기술은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 상업적으로 입수가능한 엑소뉴클라아제 또는엔도뉴클라아제가 표준 방법에 따라 사용될 수 있으며,Bal31과 같은 효소 또는 부위-특이적 돌연변이유발법(site-directed mutagenesis)가 이들 유전자의 말단으로부터 뉴클레오티드를 체계적으로 절단해내는데 사용될 수 있다. 유용한 유전자는 또한 다양한 제한효소를 사용하여 얻을 수도 있다.
동등한(equivalent) 유전자는 본 발명의 유전자에 의해 코딩되는 독소와 높은 아미노산 동일성(identity) 또는 상동성(homology)을 보유한 독소를 코딩할 것임이 주목되어야 한다. 아미노산 상동성은 생물학적 활성에 책임이 있거나, 또는 궁극적으로 생물학적 활성에 책임이 있는 3차원 형상의 결정에 관여하는 독소의 중요 영역 내에서 가장 높을 것이다. 이러한 측면에서, 만일 어떤 아미노산 치환이 활성에 중요하지 않은 영역 내에 있거나 또는 분자의 3차원 형상에 영향을 미치지 않는 보존적 아미노산 치환이라면, 이러한 아미노산 치환은 허용가능하며 기대될 수 있다. 예를 들면, 아미노산은 다음의 클래스에 속할 수 있다: 비극성, 전하를 띠지 않은 극성, 염기성, 및 산성. 한 클래스의 아미노산이 동일한 종류의 다른 아미노산으로 치환되는 보존적 치환(conservative substitution)은, 그러한 치환이 화합물의 생물학적 활성을 심하게 변화시키지 않는 한, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 표 1은 각 클래스에 속하는 아미노산 예의 목록이다.
| 아미노산 클래스 | 아미노산 예 |
| 비극성 | Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp |
| 전하를 띠지 않은 극성 | Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn, Gln |
| 산성 | Asp, Glu |
| 염기성 | Lys, Arg, His |
몇몇 경우에, 비보존적 치환 또한 이루어질 수 있다. 중요한 인자는 이러한치환이 본 발명의 DNA 서열을 발현하는 식물의 능력 또는 독소의 생물학적 활성을 심각하게 손상시키지 않아야 한다는 것이다.
본원에서 사용될 때, "분리된(isolated)" 폴리뉴클레오티드 및/또는 "정제된(purified)" 독소는 이들이 자연계에서 발견될 당시에 함께 발견되곤 하는 다른 분자들과 결합되어 있지 않을 때의 분자를 의미한다; 이러한 용어는 그들의 식물에서의 사용을 포함한다. 따라서, "분리된" 및/또는 "정제된"이란 용어는 본원에 기술된 "인간의 손(hand of man)"의 개입을 의미한다.
재조합 숙주.본 발명의 독소-코딩 유전자는 매우 다양한 미생물 또는 식물 숙주 내로 도입될 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시양태에 있어서, 형질변환된 미생물 숙주는, 예를 들면, 결국 바람직한 실시양태에서 식물 세포 및 식물체를 본 발명의 유전자에 의해 코딩되는 독소를 발현하도록 형질변환시키는데 사용될 전구체(precursor)를 제조하기 위한 예비 단계에 사용될 수 있다. 이러한 방식으로 형질변환되고 사용되는 미생물은 본 발명의 범위 내에 있다. 재조합 미생물은, 예를 들면,B.t.,이.콜라이, 또는슈도모나스(Pseudomonas)일 수 있다. 형질변환은 당업계의 숙련가에 의해 표준 방법을 사용하여 이루어질 수 있다. 이러한 형질변환에 필요한 재료는 본원에 개시되어 있거나, 또는 그렇지 않으면 당업계의 숙련가에게 이미 입수가능하다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 유전자의 발현은, 직접적으로 또는 간접적으로, 관심있는 단백질의 세포내 생산 및 유지를 초래한다. 형질변환된식물이 해충에 의해 섭취될 때, 그 해충은 독소를 섭취하게 될 것이다. 그 결과는 해충의 구제이다.
B.t. 독소 유전자는 적절한 벡터를 통하여 숙주 내로, 바람직하게는 식물 숙주 내로 도입될 수 있다. 옥수수, 밀, 벼, 목화, 콩, 및 해바라기와 같은 다수의 관심있는 농작물이 있다. 본 발명의 유전자는 형질변환된 식물에서 폴리펩티드 살충제를 발현하는 유전자의 안정적인 유지 및 발현을 제공하는데 매우 적합하며, 바람직하게는 상기 살충제를 환경적인 분해 및 불활성화로부터 보다 잘 보호한다.
따라서, 본 발명은 식물내 발현을 위하여 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 재조합 숙주를 포함하며, 상기 서열은 서열 2, 서열 5, 및 서열 6으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다. 상기 재조합 숙주는, 예를 들면, 식물 세포일 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 전체 식물체 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 특히 바람직한 실시양태에 있어서, 식물은 서열 2와 같이 약 15kDa 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열 4와 같이 45kDa 단백질을 코딩하는 제 2의 폴리뉴클레오티드를 함께 발현하도록 형질변환됨으로써, 옥수수 뿌리벌레(corn rootworm)에 의한 손상에 대하여 내성을 가지게 될 수 있다. 이와 마찬가지로, 서열 5 및 서열 6은 유비퀴틴(ubiquitin) 프로모터와 같은 하나의 프로모터 또는 별개의 프로모터 하에서 함께 사용될 수 있다. 그 문제에 관해서는, 예를 들면, 서열 2 및 서열 6의 폴리뉴클레오티드가 함께 사용되거나, 또는 서열 4 및 서열 5가 함께 사용될 수 있다.
본 발명이 합성 유전자의 특정 실시양태를 제공하긴 하지만, 본원에 예시된유전자와 기능적으로 동등한 다른 유전자 또한 숙주, 바람직하게는 식물 숙주를 형질변환시키는데 사용될 수 있다. 합성 유전자를 생산하기 위한 안내자료는, 예를 들면, 미국특허 제 5,380,831호에서 찾아볼 수 있다.
본원에서 언급하거나 인용된 모든 간행물 및 특허문헌은 본 명세서의 명시된 가르침과 일치하는 한 전문 그대로 참고자료로서 포함된다.
하기는 본 발명을 시행하기 위한 과정을 설명하는 실시예이다. 이러한 실시예는 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1 - 독소 유전자의 식물 내로의 삽입
본 발명의 한 측면은 살충성 독소를 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열로 식물을 형질변환 시키는 것이다. 형질변환된 식물은 타겟 해충에 의한 공격에 대하여 내성을 갖는다. 본 발명의 유전자는 식물에서의 사용을 위하여 최적화 되어 있다.
분명히, 식물에서 유전자를 발현할 수 있는 프로모터 영역이 필요하다. 따라서, 식물내(in planta) 발현을 위하여, 본 발명의 DNA는 적절한 프로모터 영역의 조절 하에 있다. 그러한 구조물(constructs)을 사용함으로써 식물내 발현을 달성하기 위한 기술은 당업계에 공지되어 있다. 15kDa 및 45kDa 트란스젠(transgen) 양자의 발현을 위해 사용되는 바람직한 프로모터 영역은지아 메이스(Zea mays) 유비퀴틴 프로모터 +지.메이스(Z. mays) 엑손 1 및지.메이스(Z. mays) 인트론 1이다(Christensen, A.H.et al. (1992)Plant Mol. Biol.18:675-689). 두 트란스젠 용으로 바람직한 전사 종결자는 감자 프로테인아제 저해자 II(proteinase inhibitor II, "PinII") 종결자이다(An, G.et al. (1989) Plant Cell 1:115-22).
본원에 기술된 바와 같이, 살충성 독소를 코딩하는 유전자는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 식물 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들면, 바람직한 실시양태에서, 14kDa 및 44kDa 트란스젠(transgen)을 포함하는 옥수수 나무는, 기본적으로 Kleinet al.(1987)에 기술된 바와 같이, Bio-Rad社가 제조한 Biolistics?O PDS-100He 파티클 건(particle gun)을 사용한 마이크로젝타일 충격(microjectile bombardment)에 의해 수득되었다.
이.콜라이의 복제 시스템 및 형질변환된 세포의 선별을 가능케 하는 마커를 포함하는 다수의 클로닝 벡터가 외부 유전자를 고등 식물 내로 도입하기 위한 준비에 이용될 수 있다. 상기 벡터에는, 예를 들면, pBR322, pUC 시리즈, M13mp 시리즈, pACYC184 등이 포함된다. 따라서,B.t. 독소를 코딩하는 서열은 적절한 제한효소 부위에서 상기 벡터 내로 삽입될 수 있다. 이로부터 얻어진 플라스미드는이.콜라이를 형질변환시키는데 사용된다. 상기이.콜라이세포는 적절한 영양 배지 내에서 배양된 후, 수확되어 용균된다. 상기 플라스미드는 회수된다. 서열 분석, 제한효소 분석, 전기영동, 및 다른 생화학적-분자생물학적 방법이 분석방법으로서 일반적으로 수행된다. 각 조작 후에, 사용된 DNA 서열은 절단되어 다음DNA 서열에 연결될 수 있다. 각 플라스미드 서열은 동일한 또는 다른 플라스미드 내에 클로닝될 수 있다.
원하는 유전자를 식물 내로 삽입하기 위한 방법에 따라, 다른 DNA 서열이 필요할 수도 있다. 만일, 예를 들면, Ti 또는 Ri 플라스미드가 식물 세포 형질변환에 사용된다면, Ti 또는 Ri 플라스미드 T-DNA의 적어도 오른쪽 경계(border), 보다 바람직하게는 오른쪽 및 왼쪽 경계가 삽입될 유전자의 측접 영역(flanking region)으로서 연결되어야 한다. 식물 세포의 형질변환을 위한 T-DNA의 사용은 활발히 연구되어 왔으며, EP 120 516; Hoekema (1985) In:The Binary Plant Vector System, Offset-durkkerij Kanters B.V., Alblasserdam, Chapter 5; Fraleyet al., Crit. Rev. Plant Sci. 4:1-46; 및 Anet al. (1985)EMBO J. 4:277-287에 충분히 기술되어 있다.
일단 삽입된 DNA가 게놈 내에 통합되면, 그것은 거기에서 비교적 안정하며, 대체로 다시 빠져나오지 않는다. 그것은 보통 형질변환된 식물 세포에 특히 카나마이신, G418, 벨로마이신, 하이그로마이신 또는 클로람페니콜과 같은 생물치사제(biocide) 또는 항생제에 대한 내성을 부여하는 선별 마커를 포함하고 있다. 따라서, 개별적으로 사용된 마커는 삽입된 DNA를 포함하고 있지 않은 세포보다는 오히려 형질변환된 세포의 선별을 허용하여야 한다.
DNA를 식물 숙주 세포 내로 도입하는 데에는 다수의 기술이 이용가능하다. 그러한 기술에는아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens) 또는아그로박테리움 리조게네스(Agrobacterium rhizogenes)를 형질변환제로 사용하는T-DNA에 의한 형질변환(transformation), 융합(fusion), 주입(injection), 바이오리스틱스(미세입자 충격법) 또는 일렉트로포레이션 뿐만 아니라 기타 다른 가능한 방법들이 포함된다. 만일 형질변환을 위해 아그로박테리아가 사용된다면, 삽입될 DNA는 특별한 플라스미드, 즉 매개 벡터(intermediate vector) 또는 이원성 벡터(binary vector) 내로 클로닝되어야 한다. 매개 벡터는 T-DNA 내의 서열에 상동적인 서열 때문에, 상동 재조합(homologous recombination)을 통해 Ti 또는 Ri 플라스미드 내로 통합될 수 있다. Ti 또는 Ri 플라스미드 또한 T-DNA의 전달에 필요한vir영역을 포함한다. 매개 벡터는 아그로박테리아 내에서 스스로 복제할 수 없다. 매개 벡터는 헬퍼 플라스미드에 의해아그로박테리움 투메파시엔스내로 전달될 수 있다(conjugation, 접합). 이원성 벡터는이.콜라이및 아그로박테리아 내에서 스스로 복제할 수 있다. 그들은 선별 마커 유전자, 및 오른쪽 및 왼쪽 T-DNA 경계 영역에 의해 구획된 링커 또는 폴리링커를 포함한다. 그들은 아그로박테리아 내로 직접 형질변환될 수 있다(Holsterset al. [1978]Mol. Gen. Genet.163:181-187). 숙주 세포로 사용되는아그로박테리움은vir영역을 지닌 플라스미드를 포함하여야 한다.vir영역은 T-DNA를 식물 세포 내로 전달하는데 필요하다. 추가적인 T-DNA가 포함될 수도 있다. 그렇게 형질변환된 박테리아는 식물 세포를 형질변환시키는데 사용된다. 식물 외식편(explants)은 DNA를 식물 세포 내로 전달하기 위해아그로박테리움 투메파시엔스또는아그로박테리움 리조게네스와 함께 유리하게 재배될 수 있다. 이어서, 전체 식물은 선별을 위한 항생제 또는 생물치사제를 포함하기도 하는 적절한 배지 내에서 감염된 식물 재료(예를 들면, 잎 조각, 줄기 조각, 뿌리, 원형질, 또는 현탁 배양된 세포)로부터 재생될 수 있다. 그와 같이 수득된 식물은 삽입 DNA의 존재 여부에 대하여 검사된다. 주입 및 일렉트로포레이션의 경우에는 플라스미드에 대한 특별한 요구 사항은 없다. 예를 들면 pUC 유도체와 같은 통상의 플라스미드를 사용하는 것이 가능하다.
형질변환된 세포는 식물 내에서 보통의 방식으로 성장한다. 그들은 생식세포(germ cell)를 형성하여, 형질변환된 형질(들)을 자손 식물로 전달할 수 있다. 그러한 식물은 보통의 방식으로 생육될 수 있으며, 동일한 형질변환된 유전 인자 또는 다른 유전 인자를 가지고 있는 식물과 교배될 수 있다. 그로부터 얻어지는 잡종 개체는 상응하는 표현형적 특징을 가지고 있다.
본원에 기술된 실시예 및 실시양태는 단지 설명의 목적을 위한 것으로, 그러한 측면에서 다양한 변형 또는 변화가 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 제안될 것이며, 본원의 정신과 권한 및 하기 청구항의 범위 내에 포함되어야 함이 이해되어야 한다.
본 발명의 살충성 독소 발현 유전자를 사용하면, 식물 해충을 용이하게 구제할 수 있다.
Claims (25)
- 서열 2, 서열 5, 및 서열 6으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 2인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 5인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 6인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1항에 따른 폴리뉴클레오티드를 발현하는 재조합 숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 2인 것을 특징으로 하는 숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 5인 것을 특징으로 하는숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 6인 것을 특징으로 하는 숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 숙주는 식물 세포인 것을 특징으로 하는 숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 숙주는 식물인 것을 특징으로 하는 숙주.
- 제 5항에 있어서, 상기 숙주는 옥수수인 것을 특징으로 하는 숙주.
- 제 5항의 재조합 숙주를 생산하는 방법.
- 제 12항에 있어서, 상기 숙주는 식물 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 12항에 있어서, 상기 숙주는 식물인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 12항에 있어서, 상기 숙주는 옥수수인 것을 특징으로 하는 방법.
- 식물 해충을 구제하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 해충을 제 1항에 따른폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 제 1의 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 제 1의 단백질은 상기 폴리뉴클레오티드를 발현하는 재조합 숙주에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 16항에 있어서, 상기 숙주는 식물인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 16항에 있어서, 상기 숙주는지아 메이스(Zea mays) 식물인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 18항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 2인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 18항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 5인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 18항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열 6인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 19항에 있어서, 상기 방법은 상기 해충을 약 45kDa의 제 2의 단백질과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 20항에 있어서, 상기 방법은 상기 해충을 약 45kDa의 제 2의 단백질과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 21항에 있어서, 상기 방법은 상기 해충을 약 15kDa의 제 2의 단백질과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 서열 3의 아미노산 서열을 갖는 살충성 단백질.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10535998P | 1998-10-23 | 1998-10-23 | |
| US10540898P | 1998-10-23 | 1998-10-23 | |
| US60/105,408 | 1998-10-23 | ||
| US60/105,359 | 1998-10-23 | ||
| PCT/US1999/024647 WO2000024904A1 (en) | 1998-10-23 | 1999-10-21 | PLANT-OPTIMIZED POLYNUCLEOTIDES ENCODING APPROXIMATELY 15 kDa AND APPROXIMATELY 45 kDa PESTICIDAL PROTEINS |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20010073216A true KR20010073216A (ko) | 2001-07-31 |
Family
ID=26802496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020017004769A KR20010073216A (ko) | 1998-10-23 | 1999-10-21 | 약 15ｋＤａ 및 약 45ｋＤａ 살충성 단백질을 코딩하는식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6340593B1 (ko) |
| EP (1) | EP1124967B1 (ko) |
| JP (2) | JP4647099B2 (ko) |
| KR (1) | KR20010073216A (ko) |
| CN (1) | CN1324407A (ko) |
| AR (2) | AR020944A1 (ko) |
| AT (1) | ATE327333T1 (ko) |
| AU (1) | AU768246B2 (ko) |
| BR (1) | BR9914746A (ko) |
| CA (2) | CA2703161C (ko) |
| DE (2) | DE69940962D1 (ko) |
| ES (2) | ES2264283T3 (ko) |
| WO (1) | WO2000024904A1 (ko) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6372480B1 (en) | 1996-04-19 | 2002-04-16 | Mycogen Corporation | Pesticidal proteins |
| US6677148B1 (en) | 1996-04-19 | 2004-01-13 | Mycogen Corporation | Pesticidal proteins |
| KR100486823B1 (ko) * | 2000-04-28 | 2005-05-03 | 미쯔이카가쿠 가부시기가이샤 | 폴리이미드 및 폴리아미드산 |
| US7985892B1 (en) | 2004-06-29 | 2011-07-26 | Dow Agrosciences Llc | Truncated Cry35 proteins |
| US7323556B2 (en) * | 2004-09-29 | 2008-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Corn event DAS-59122-7 and methods for detection thereof |
| WO2011075595A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-043a47-3 and methods for detection thereof |
| WO2011075593A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-040416-8 and methods for detection thereof |
| US20110154524A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event DP-032316-8 and methods for detection thereof |
| WO2011084621A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-07-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-004114-3 and methods for detection thereof |
| UY34014A (es) | 2011-04-15 | 2012-11-30 | Dow Agrosciences Llc | Genes sintéticos para expresar proteínas en células de maíz, construcciones, plantas transgénicas, métodos para controlar pestes y composiciones |
| AP2014007886A0 (en) | 2012-02-01 | 2014-08-31 | Dow Agrosciences Llc | Synthetic chloroplast transit peptides |
| AR090558A1 (es) | 2012-04-24 | 2014-11-19 | Pioneer Hi Bred Int | Evento de maiz dp-004114-3 y metodos para su deteccion |
| CN104884625A (zh) | 2012-10-15 | 2015-09-02 | 先锋国际良种公司 | 增强cry内毒素的活性的方法和组合物 |
| WO2014071182A1 (en) | 2012-11-01 | 2014-05-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Directed evolution of synthetic gene cluster |
| CN115960896A (zh) | 2013-03-14 | 2023-04-14 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫害虫的组合物和方法 |
| WO2014150914A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Phi-4 polypeptides and methods for their use |
| EA030896B1 (ru) | 2013-08-16 | 2018-10-31 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки и способы их применения |
| BR122020001770B1 (pt) | 2013-09-13 | 2022-11-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Construto de dna, método de obtenção de planta transgênica, proteína de fusão, método para controlar uma população de praga de inseto, método para inibir o crescimento ou matar uma praga de inseto |
| JP2016536978A (ja) | 2013-10-04 | 2016-12-01 | ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー | トウモロコシ（Ｚｅａ ｍａｙｓ）メタロチオネイン様調節エレメントおよびその使用 |
| BR102014025499A2 (pt) | 2013-10-15 | 2015-09-29 | Dow Agrosciences Llc | elementos regulatórios de zea mays e uso dos mesmos |
| KR20160093728A (ko) | 2013-12-20 | 2016-08-08 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 딱정벌레류 해충에 대한 저항성을 부여하는 rnapii-140 핵산 분자 |
| BR102014031844A2 (pt) | 2013-12-20 | 2015-10-06 | Dow Agrosciences Llc | ras oposto (rop) e moléculas de ácido nucleico relacionadas que conferem resistência a pragas de coleópteros e hemípteros |
| BR102015000943A2 (pt) | 2014-01-17 | 2016-06-07 | Dow Agrosciences Llc | expressão aumentada de proteína em planta |
| CN106232620B (zh) | 2014-02-07 | 2022-05-13 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| US10227608B2 (en) | 2014-02-07 | 2019-03-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| MX2016014313A (es) | 2014-05-07 | 2017-06-30 | Dow Agrosciences Llc | Moleculas de acido nucleico dre4 que confieren resistencia a las plagas de coleopteros. |
| WO2016000237A1 (en) | 2014-07-03 | 2016-01-07 | Pioneer Overseas Corporation | Plants having enhanced tolerance to insect pests and related constructs and methods involving insect tolerance genes |
| CA2961733A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US10435706B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-10-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| EP3212000B1 (en) | 2014-10-27 | 2020-11-25 | Newleaf Symbiotics, Inc. | Methods and compositions for controlling corn rootworm |
| CN107529763B (zh) | 2015-03-11 | 2021-08-20 | 先锋国际良种公司 | Pip-72的杀昆虫组合及使用方法 |
| CN108064233B (zh) | 2015-05-19 | 2022-07-15 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CA2986265A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| MX2018000615A (es) | 2015-07-13 | 2018-08-01 | Pivot Bio Inc | Metodos y composiciones para mejorar atributos de plantas. |
| CA2994676A1 (en) | 2015-08-06 | 2017-02-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| ES2773072T3 (es) | 2015-08-28 | 2020-07-09 | Pioneer Hi Bred Int | Transformación de plantas mediada por Ochrobactrum |
| US11479516B2 (en) | 2015-10-05 | 2022-10-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Nitrogen fixation using refactored NIF clusters |
| CN108575091A (zh) | 2015-12-18 | 2018-09-25 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN117003840A (zh) | 2016-04-14 | 2023-11-07 | 先锋国际良种公司 | 具有改善的活性谱的杀昆虫多肽及其用途 |
| WO2017184673A1 (en) | 2016-04-19 | 2017-10-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal combinations of polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
| EA201892293A1 (ru) | 2016-05-04 | 2019-04-30 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки и способы их применения |
| CN109312359A (zh) | 2016-06-16 | 2019-02-05 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法 |
| MX2018015900A (es) | 2016-06-24 | 2019-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Elementos reguladores de planta y metodos para usarlos. |
| EP3954202A1 (en) | 2016-07-01 | 2022-02-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| CN109863167B (zh) | 2016-11-01 | 2022-12-23 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| US11174295B2 (en) | 2016-12-14 | 2021-11-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| US11213028B2 (en) | 2016-12-22 | 2022-01-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN110799474B (zh) | 2017-01-12 | 2022-07-26 | 皮沃特生物公司 | 用于改良植物性状的方法及组合物 |
| WO2018140214A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nematicidal protein from pseudomonas |
| MX2019009371A (es) | 2017-02-08 | 2019-09-23 | Pionner Hi Bred Int Inc | Combinaciones insecticidas de proteinas insecticidas derivadas de plantas y metodos para su uso. |
| UA126971C2 (uk) | 2017-05-26 | 2023-03-01 | Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. | Інсектицидний поліпептид з поліпшеним спектром активності і його застосування |
| WO2019074598A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | VIRUS-INDUCED GENETIC SILENCING TECHNOLOGY FOR THE CONTROL OF INSECTS IN MAIZE |
| CA3079955A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Pivot Bio, Inc. | Methods and compositions for improving engineered microbes that fix nitrogen |
| EP3755797A1 (en) | 2018-02-22 | 2020-12-30 | Zymergen, Inc. | Method for creating a genomic library enriched for bacillus and identification of novel cry toxins |
| WO2019169150A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant health assay |
| CA3088011A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-09-06 | Zymergen Inc. | Insecticidal protein discovery platform and insecticidal proteins discovered therefrom |
| CA3092075A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| WO2019178042A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| US11702668B2 (en) | 2018-05-22 | 2023-07-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| CA3103977A1 (en) | 2018-06-27 | 2020-01-02 | Pivot Bio, Inc. | Agricultural compositions comprising remodeled nitrogen fixing microbes |
| MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| WO2021076346A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack |
| TW202142114A (zh) | 2020-02-04 | 2021-11-16 | 美商陶氏農業科學公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關之方法 |
| US20230235352A1 (en) | 2020-07-14 | 2023-07-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| BR112023002603A2 (pt) | 2020-08-10 | 2023-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Elementos reguladores de plantas e métodos de uso dos mesmos |
| TW202345696A (zh) | 2022-05-18 | 2023-12-01 | 美商科迪華農業科技有限責任公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關的方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5380831A (en) | 1986-04-04 | 1995-01-10 | Mycogen Plant Science, Inc. | Synthetic insecticidal crystal protein gene |
| NZ230375A (en) | 1988-09-09 | 1991-07-26 | Lubrizol Genetics Inc | Synthetic gene encoding b. thuringiensis insecticidal protein |
| EP0374753A3 (de) * | 1988-12-19 | 1991-05-29 | American Cyanamid Company | Insektizide Toxine, Gene, die diese Toxine kodieren, Antikörper, die sie binden, sowie transgene Pflanzenzellen und transgene Pflanzen, die diese Toxine exprimieren |
| UA48104C2 (uk) | 1991-10-04 | 2002-08-15 | Новартіс Аг | Фрагмент днк, який містить послідовність,що кодує інсектицидний протеїн, оптимізовану для кукурудзи,фрагмент днк, який забезпечує направлену бажану для серцевини стебла експресію зв'язаного з нею структурного гена в рослині, фрагмент днк, який забезпечує специфічну для пилку експресію зв`язаного з нею структурного гена в рослині, рекомбінантна молекула днк, спосіб одержання оптимізованої для кукурудзи кодуючої послідовності інсектицидного протеїну, спосіб захисту рослин кукурудзи щонайменше від однієї комахи-шкідника |
| JPH0750012A (ja) * | 1993-08-04 | 1995-02-21 | Sumitomo Metal Mining Co Ltd | 磁気ディスクの製造方法 |
| US5530195A (en) | 1994-06-10 | 1996-06-25 | Ciba-Geigy Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a toxin active against insects |
| ATE443437T1 (de) * | 1995-10-13 | 2009-10-15 | Dow Agrosciences Llc | Modifiziertes bacillus thuringiensis gen zur kontrolle von lepidoptera in pflanzen |
| US6083499A (en) | 1996-04-19 | 2000-07-04 | Mycogen Corporation | Pesticidal toxins |
-
1999
- 1999-10-21 DE DE69940962T patent/DE69940962D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 WO PCT/US1999/024647 patent/WO2000024904A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-10-21 ES ES99971037T patent/ES2264283T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 BR BR9914746-7A patent/BR9914746A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-10-21 AU AU12181/00A patent/AU768246B2/en not_active Expired
- 1999-10-21 DE DE69931511T patent/DE69931511T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 ES ES06002115T patent/ES2327948T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 CA CA2703161A patent/CA2703161C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 JP JP2000578456A patent/JP4647099B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 EP EP99971037A patent/EP1124967B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 KR KR1020017004769A patent/KR20010073216A/ko active Search and Examination
- 1999-10-21 AT AT99971037T patent/ATE327333T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-10-21 CA CA2345905A patent/CA2345905C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 CN CN99812497A patent/CN1324407A/zh active Pending
- 1999-10-21 US US09/422,487 patent/US6340593B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-22 AR ARP990105351A patent/AR020944A1/es active IP Right Grant
-
2008
- 2008-03-27 AR ARP080101268A patent/AR066201A2/es active IP Right Grant
-
2010
- 2010-01-07 JP JP2010001776A patent/JP4912473B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69940962D1 (de) | 2009-07-16 |
| CA2703161A1 (en) | 2000-05-04 |
| DE69931511T2 (de) | 2006-09-28 |
| AR066201A2 (es) | 2009-08-05 |
| CN1324407A (zh) | 2001-11-28 |
| JP4912473B2 (ja) | 2012-04-11 |
| US6340593B1 (en) | 2002-01-22 |
| CA2345905A1 (en) | 2000-05-04 |
| BR9914746A (pt) | 2001-10-30 |
| JP2010131021A (ja) | 2010-06-17 |
| JP4647099B2 (ja) | 2011-03-09 |
| JP2002528083A (ja) | 2002-09-03 |
| ES2264283T3 (es) | 2006-12-16 |
| CA2345905C (en) | 2010-08-03 |
| DE69931511D1 (de) | 2006-06-29 |
| CA2703161C (en) | 2011-12-20 |
| AU1218100A (en) | 2000-05-15 |
| EP1124967A1 (en) | 2001-08-22 |
| EP1124967B1 (en) | 2006-05-24 |
| ES2327948T3 (es) | 2009-11-05 |
| AU768246B2 (en) | 2003-12-04 |
| ATE327333T1 (de) | 2006-06-15 |
| WO2000024904A1 (en) | 2000-05-04 |
| AR020944A1 (es) | 2002-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1124967B1 (en) | PLANT-OPTIMIZED POLYNUCLEOTIDES ENCODING APPROXIMATELY 15 kDa AND APPROXIMATELY 45 kDa PESTICIDAL PROTEINS | |
| EP1029056B1 (en) | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins | |
| RU2267535C2 (ru) | Пестицидный белок (варианты) | |
| US7790961B2 (en) | Pesticidal proteins | |
| EP1676922B1 (en) | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins | |
| EP1710312B1 (en) | Plant-optimized polynucleotide encoding approximately 45 kDa pesticidal protein | |
| CA2594294C (en) | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins | |
| AU774176B2 (en) | Plant-optimised genes encoding pesticidal toxins | |
| WO2000024903A2 (en) | Plant-optimized polynucleotides encoding pesticidal 43f- and 80jj1/130-type proteins | |
| WO2000024905A1 (en) | Plant-optimized genes encoding pesticidal cytc-type toxins | |
| WO2000024894A1 (en) | Plant-optimized marker genes | |
| CN101348792A (zh) | 编码大约15kDa的杀虫蛋白质的植物最优化的多核苷酸 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| AMND | Amendment | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| J201 | Request for trial against refusal decision | ||
| E801 | Decision on dismissal of amendment | ||
| B601 | Maintenance of original decision after re-examination before a trial | ||
| J301 | Trial decision |
Free format text: TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20070220 Effective date: 20071127 |
|
| J2X1 | Appeal (before the patent court) |
Free format text: APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL |
|
| J302 | Written judgement (patent court) |
Free format text: JUDGMENT (PATENT COURT) FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20080102 Effective date: 20090108 |
|
| J2X2 | Appeal (before the supreme court) |
Free format text: APPEAL BEFORE THE SUPREME COURT FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL |
|
| J303 | Written judgement (supreme court) |
Free format text: JUDGMENT (SUPREME COURT) FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20090204 Effective date: 20090417 |