KR101479955B1 - 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precusor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트 - Google Patents

소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precusor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트에 관한 것으로, 보다 상세하게는 면역기능 억제와 관련된 Alpha-1-microglobulin와 세포성장 조절과 관련된 Bikunin, 두 개의 혈장 당단백질을 암호화하는 AMBP 유전자의 SNP를 발굴하고 이를 통해 한우의 경제형질을 예측하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 SNP 마커를 이용하면 한우의 등지방두께, 등심단면적, 근내지방도, 도체중을 예측할 수 있으며 궁극적으로 고능력 한우를 조기에 감별하여 선발 및 개량하는데 유용하게 사용될 수 있다.

Description

소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precusor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트{Method for predicting economic genetic trait in Hanwoo using AMBP gene and SNP marker associated with thereof and its Primer set}
본 발명은 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트에 관한 것으로, 보다 상세하게는 면역기능 억제와 관련된 Alpha-1-microglobulin와 세포성장 조절과 관련된 Bikunin, 두 개의 혈장 당단백질을 암호화하는 AMBP 유전자의 SNP를 발굴하고 이를 통해 한우의 경제형질을 예측하는 방법에 관한 것이다.
최근 우리나라의 경제발전으로 국민의 삶의 질이 향상되면서 소비자들의 요구의 변화에 따라 국내 한우(Bos taurus Coreanae)의 양적인 측면보다 질적으로 안전하고 우수한 제품을 공급받기를 원하게 되었다. 또한, 최근 EU와 FTA, 미국, 캐나다, 호주 등의 쇠고기 시장개방으로 인해 값싼 외국산 쇠고기의 국내 시장으로의 유통이 활발해짐에 따라 국내 한우의 경쟁력 향상을 위해서 한우의 경제형질 중 육량 및 육질관련 육종의 필요성과 중요성이 증가하고 있다.
한우에서 경제형질은 육량 및 육질로 평가가 된다. 육량은 도체중, 등지방두께 및 배최장근 단면적을 기초로 등급을 판정하며 육질은 근내지방도, 육색 지방색, 조직감 및 성숙도 등을 기초로 판정한다.
이전의 개체선발은 경제형질들의 표현형을 기초로 하여 선발, 개량이 되어져 왔으나 최근 분자유전학적 기술의 발달로 특정형질과 관련된 유전적 마커(marker)를 이용하여 DNA분자 수준에서 유전자의 구조와 기능의 해석을 통하여 양적 또는 질적 형질에 영향을 미치는 표지유전자를 발굴하게 되었다. 이에 따라 이전의 표현형에 의존하여 선발하고 개량하는 방법에서 DNA 분자 수준에서의 개체정보를 이용하여 선발하는 방법으로 점점 변화하게 되었다. 이렇듯, 분자수준에서의 선발이 가능하게 됨으로써 육종개량 방법에 획기적인 변화와 발전을 가져오게 되었다.
이러한 DNA 마커 중 하나인 단일염기다형성(SNP, single nucleotide polymorphism)은 염색체 단일부위에서 여러 가지 DNA 염기들 중 하나에 나타나는 일반적인 돌연변이로 인간의 게놈(genome)에서는 약 3백만 개의 SNP가 존재하여 약 500~1000염기당 1개꼴로 나타난다고 알려진다 있다.
이러한 SNP는 소에서 발굴 및 형질 관련성 연구가 진행되고 있으며, 지방세포 분화 및 체지방축적 등에 관여하는 지질대사 조절유전자와 그 외 다양한 형질관련 유전자의 SNP를 탐색하여 고품질 쇠고기 생산에 응용하는 연구가 활발히 추진되고 있다.
소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자는 소의 8번 염색체에 위치하고 있으며 12,158bp로 이루어져 있다. AMBP 유전자는 liver-specific enhancer에 의해 발현이 조절되며, 간에서만 발현되는 single-copy gene이다. AMBP 유전자는 두 개의 혈장 당단백질인 Alpha-1-microglobulin와 Bikunin을 암호화하고 있는데, furin-like protease에 의해 AMBP 단백질이 분열되어 alpha-1-microglobulin(A1M)과 Bikunin을 만든다. Alpha-1-microglobulin은 AMBP단백질과 결합하지만 bikunin은 결합하지 않으며 trans-Golgi network에서 AMBP단백질의 분열 후에 A1M와 bikunin은 분리된 단백질로 혈액으로 분비된다. A1M은 lipocalins superfamily로 면역기능을 억제하며, Bikunin은 inter-α-inhibitor family로서 세포성장을 조절하는데 관여한다고 보고되어 있다.
따라서 본 발명은 한우에서 AMBP 유전자에 위치한 SNP들을 조사하고 이 SNP가 한우의 육량 형질에 미치는 영향을 분석하여 한우의 경제형질을 판정하는 방법을 제공하고자 한다.
특허문헌 1. 출원번호 10-2009-0009045 한우 육질 관련 다형성(SNP) 마커 특허문헌 2. 출원번호 10-2006-0065802 소 근내지방도 관련 FABP4 유전자를 이용한 DNA 마커
본 발명의 목적은, 두 개의 혈장 단백질인 Alpha-1-microglobulin와 Bikunin를 암호하는 AMBP 유전자의 SNP를 탐색, 상기 SNP들 중 경제형질에 직접적인 연관성이 확인된 SNP를 선발하여 이를 한우의 경제형질 예측을 위한 SNP 마커로 개발하고 궁극적으로는 고능력 한우를 조기에 감별하여 선발할 수 있는 SNP 마커로 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 서열번호 2 및 3의 염기서열을 갖는 프라이머 세트를 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측을 위한 프라이머 세트를 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 2 및 3의 염기서열을 갖는 프라이머 세트에 의해 증폭되어 얻어진 T148C 또는 T179C SNP 마커, 혹은 T241A SNP 마커 중 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측을 위한 SNP 마커를 제공한다.
또한 본 발명은 T148C 또는 T179C SNP 마커는 서열번호 1에 표시된 염기서열에서 각각 148번째(T↔C)와 179번째(T↔C)의 염기치환으로 발생되는 것임을 특징으로 하는 SNP 마커를 제공한다.
또한 본 발명은 T241A SNP 마커는 서열번호 1에 표시된 염기서열에서 241번째(T↔A)의 염기치환으로 발생되는 것임을 특징으로 하는 SNP 마커를 제공한다.
또한 본 발명은 한우 시료에서 게놈 유전자와 소 유래의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자에 대응되는 증폭용 프라이머를 사용하여 PCR 방법으로 AMBP 유전자를 증폭하는 단계; 상기 증폭된 AMBP 유전자를 염기서열분석방법으로 T148C 또는 T179C SNP 마커, 혹은 T241A SNP 마커의 유전자형을 확인하는 단계; 상기 확인된 SNP 마커로부터 한우의 경제형질을 예측하는 단계; 를 포함하여 이루어지는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 한우의 경제형질 중 등지방두께를 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 CC 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 한우의 경제형질 중 등심단면적을 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 한우의 경제형질 중 근내지방도를 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형, 혹은 T241A SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법을 제공한다.
또한 본 발명은 한우의 경제형질 중 도체중을 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법을 제공한다.
상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법 및 이와 관련된 SNP 마커 및 프라이머 세트는, 한우의 경제형질과 연관성이 확인된 SNP를 선발, 이를 이용하여 한우의 등지방두께, 등심단면적, 근내지방도, 도체중을 예측할 수 있으며 궁극적으로 고능력 한우를 조기에 감별하여 선발 및 개량하는데 유용하게 사용될 수 있다.
도 1. AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자의 구조.
이하, 본 발명을 구체적인 실시예에 의해 보다 더 상세히 설명하고자 한다. 하지만, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 사상과 범위 내에서 여러 가지 변형 또는 수정할 수 있음은 이 분야에서 당업자에게 명백한 것이다.
실시예 1. 공시재료
AMBP 유전자 내 SNP 탐색을 위해 축산물품질평가원에서 보유한 도체성적이 있는 한우 24두의 조직을 이용하였으며, 경제형질 연관성 분석을 위해 한우 84두의 조직으로부터 genomic DNA를 추가로 더 정제하여 공시재료로 이용하였다.
실시예 2. Genomic DNA 추출
공시재료에서 조직을 약 12mg 취하였으며, DNA의 분리 및 추출은 Genomic DNA Extraction kit(BioneerTM)으로 지침서에 따라 시행되었고, 분리된 DNA는 TE Buffer(10mM Tris-HCL, pH 7.4, 1mM EDTA)에 용해하였다.
실시예 3. DNA 정량 분석
상기와 같은 방법으로 추출한 DNA는 분광 광도계(spectrophotometer)를 이용하여 260nm와 280nm 흡광도를 측정하여 OD260/OD280의 비가 1.8 ~ 2 0 정도인 DNA를 사용하였다.
실시예 4. 유전자 증폭
AMBP 유전자의 SNP 탐색을 위하여 NCBI에 등록된 AMBP 유전자(Accession No. AC_000165)의 염기서열을 이용하였다. 표 1은 AMBP 유전자 내의 SNP를 탐색하기 위해 사용된 프라이머 염기서열을 나타내었다.
AMBP 유전자 내 SNP 탐색을 위해 제작된 프라이머의 염기서열
Gene Primer Sequence 위치 증폭 산물의 크기 프라이머활성온도 NCMI accession no.
AMBP 서열번호2 F CCC CAG TCT GTA GCT GCC TC 4-314 311bp 63.5 AC_000165
R ACT GAG ACC CCA AGG CAC AT
서열번호3 F ACG TGG GTG AAT AGG TGA AGG 4367-4636 273bp 63.5
R CAA AAC TCC CTG CAC TTC CC

PCR(Polymerase Chain Reaction)은 GeneAMP PCR system 9700을 이용하여 다음과 같은 조건하에서 실시하였다. PCR 반응액은 주형 DNA(20~200ng/㎕) 1㎕, 각각의 프라이머 쌍 1㎕, 10X Buffer(10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1.5mM MgCl, pH 8.3) 2㎕, dNTP 1㎕, Taq Polymerase (10unit/㎕) 0.2㎕(Genetbio, Korea)를 첨가한 후 PCR 반응액을 총 20㎕로 조정하여 PCR 반응을 진행하였다. 반응조건은 예비가열 94℃ 1분, 63.5℃ 30초, 72℃ 30초로 35회 반복한 다음 마지막에 72℃에 5분을 주어 반응을 종료하였다. PCR 종료 후 2㎕의 PCR 산물을 2% 아가로즈 겔에 전기영동 하여 DNA의 증폭여부를 확인하였다. 증폭된 AMBP 유전자의 증폭산물은 AccuPrep? Gel Purification Kit(BioneerTM)을 이용하여 주요 증폭산물 외의 PCR 과정에 생성된 band를 제거하였다.
삭제
실시예 5. 염기서열 분석
AMBP 유전자의 SNP를 탐색하기 위해 PCR 반응을 실시하고, 정제단계를 거친 후, AMBP 유전자의 순수 PCR 산물을 생성하였다. 생성된 산물은 BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems, USA)를 사용하여 SNP가 존재하는 PCR 산물의 염기들마다 형광 dye를 부착하여 염기서열 분석을 준비하였다. 준비된 산물은 최종 정제(ethanol down)과정을 거쳐 ABI 3130 XL Genetic Analyzer(Applied Biosystems, USA)를 통하여 각각에 대한 염기서열을 결정하였다. 결정된 염기서열은 seqMAN Ⅱ(DNA STAR Inc.) 프로그램을 이용하여 각 SNPs를 탐색하였다.
실시예 6. 통계분석
조사된 경제형질 측정치에 대한 SNP 유전자형의 효과를 추정하기 위해서 SAS 9.2(SAS, USA) 프로그램을 이용하여 분석을 실시하였다. 유전자형의 효과가 유의한 형질들에 대해 최소 유의차 검정으로 평균간 차이에 대한 유의성의 통계분석을 이용한 모형은 다음과 같다.
Y ij = μ + G i + e ij
Y ij : 관측치
μ: 대상 형질의 전체 평균
G i : 유전자형(Genotype)의 효과
e ij : 임의 오차
실시예 7 : 결과
7-1. 한우 AMBP 유전자 SNP 탐색
본 발명에서 선정된 AMBP 유전자는 총 10개의 엑손(exon)으로 이루어져 있으며, AMBP 유전자의 예상 변이 지역을 중심으로 표 1과 같은 프라이머들을 제작하여 24두를 이용하여 염기서열 분석을 실시한 결과 엑손 1 지역에서 3개(C119A, T148C, T179C), 인트론(intron) 1지역에서 1개(T241A), 엑손 4 지역에서 1개(C4500T), 인트론 4 지역에서 1개(T4605C)를 탐색하였다(도 1, 표 2).
AMBP 유전자 내 탐색된 SNPs의 유전자형을 살펴보면 119번째 염기는 C가 A로 바뀌는 CC, CA, AA 유전자형으로 구분되었으며, 148번째 염기와 179번째 염기는 T가 C로 바뀌는 TT, TC, CC 유전자형으로 구분되었다. 인트론 1에 위치하는 241번째 염기는 A가 T로 바뀌는 AA, AT, TT 유전자형으로 구분되었으며, 4500번째 염기는 C가 T로 바꾸는 CC, CT, TT 유전자형, 4605번째 염기는 T가 C로 바뀌는 TT, TC, CC 유전자형으로 구분되었다. 탐색된 SNPs 중 T148C와 C4500T는 단백질 아미노산 구조에 변화를 주는 미센스(missense SNP)로 확인되었다.
AMBP 유전자 내에서 확인된 SNPs
유전자 No. SNP Location position Amino acid Change



AMBP

 1 rs43578541 C119A Exon 1
2 rs137621153 T148C Exon 1 Val -> Ala
3 rs43578540 T179C Exon 1
4 rs43578539 T241A Intron 1
5 rs43578531 C4500T Exon 4 Ala -> Ser
6 rs43578532 T4605C Intron 4
7-2. AMBP 유전자와 경제형질과의 연관성 분석
AMBP 유전자 내 T148C, T179C, T241A SNPs의 유전자형별 발생 빈도
Gene SNP Genotype Frequency Allele Frequency
AMBP T148C CC CT TT C T
0.488 0.476 0.036 0.726 0.274
T179C CC CT TT C T
0.488 0.476 0.036 0.726 0.274
T241A AA AT TT A T
0.310 0.595 0.095 0.607 0.393
T148C 또는 T179C SNP 와 경제형질과의 연관성 분석 결과
Traits Genotype ( T148C 또는 T179C)
CC CT TT
BF(cm) 14.12 ± 0.838 a 11.25 ± 0.849 b 11.67 ±3.100 ab
LMA(cm2) 90.37 ± 1.465 a 92.78 ± 1.484 ab 104.67 ±5.418 b
MS 4.49 ± 0.393 a 5.68 ± 0.398 b 9.00 ± 1.453 c
CW(kg) 431.32 ± 7.010 a 409.88 ± 7.097 b 439.66 ± 25.915 ab
BF: Backfat thickness, LMA: muscle area, MS: marbling score, CW: carcass weight
T241A SNP와 경제형질과의 연관성 분석
Traits Genotype ( T241A )
AA AT TT
BF 13.12 ± 1.087 12.62 ± 0.784 11.50 ± 1.960
LMA 91.27 ± 1.910 92.00 ± 1.377 94.63 ± 3.442
MS 3.96 ± 0.485 a 5.48 ± 0.350 b 7.63 ± 0.874 c
CW 429.12 ± 9.014 418.66 ± 6.500 413.50 ± 16.251
한우 24두를 공시재료로 수행된 실험에서 탐색된 6개의 SNPs 중 경제형질과 연관성을 나타낸 것은 T148C, T179C, T241A였다. 따라서 3개의 SNPs에 대하여 한우 84두를 추가 실험하여 AMBP 유전자형에 따른 각 형질(등지방두께, 등심단면적, 근내지방도, 도체중)에 미치는 효과를 분석하였다.
분석한 결과 T148C와 T179C에서는 모든 개체에서 서로 같은 유전자형을 보였으며, 등지방두께, 등심단면적, 근내지방도, 도체중 모두에서 유의한 연관성이 검출되었고, T241A에서는 근내지방도에서 유의성이 나타났다(표 4).
AMBP 유전자의 T148C 또는 T179C의 유전자형에 대한 경제형질과의 연관성을 분석한 결과 각각의 유전자형이 경제형질(등지방두께, 등심단면적, 근내지방도, 도체중) 모두에서 유의한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 등지방두께는 CC 유전자형이 14.12 ± 0.838로 가장 높았으며, CT 유전자형이 11.25 ± 0.849, TT 유전자형이 11.67 ±3.100로 나타났다. 등심단면적에서는 TT 유전자형(104.67 ±5.418)이 CC 유전자형(90.37 ± 1.465)이나 CT 유전자형(92.78 ± 1.484)에 비해 훨씬 높은 수치를 나타냈다. 이는 대립유전자 T가 대립유전자 C보다 등지방 효과에 있어서 더 두꺼운 것으로 볼 수 있다. 근내지방도는 TT 유전자형이 9.00 ± 1.453, CT 유전자형이 5.68 ± 0.398, CC 유전자형이 4.49 ± 0.393로, 유전자형 마다 각각 수치의 차이를 보이며 유의성을 나타냈으며, 도체중에서는 TT 유전자형이 439.66 ± 25.915으로 가장 높게 나타났으며, 그 다음으로 CC 유전자형 431.32 ± 7.010, CT유전자형 409.88± 7.097 순으로 나타났다(표 4).
AMBP 유전자의 T241A의 유전자형에 대한 경제형질과의 연관성을 분석한 결과 각각의 유전자형이 경제형질 중 근내지방도에서 유의한 영향을 미치는 것으로 나타났다(표 5). 등지방두께와 도체중에서는 AA 유전자형(13.12 ± 1.087, 429.12 ± 9.014)이 AT 유전자형(12.62 ± 0.784, 418.66 ± 6.500)과 TT 유전자형(11.50 ± 1.960, 413.50 ± 16.251)에 비해 높은 수치를 나타냈지만 유의성은 나타나지 않았다. 근내지방도에서는 TT 유전자형이 7.63 ± 0.874로 AA 유전자형 3.96 ± 0.485, AT 유전자형 5.48 ± 0.350보다 높게 나타났으며 유의적인 연관성을 나타내었다(표 5).
AMBP 유전자 내 T148C, T179C, T241A 총 3개의 SNPs에서 한우의 경제형질과의 연관성이 확인되었다. T148C와 T179C는 모든 개체에서 서로 같은 유전자형을 나타냈으며, 측정된 경제형질 모두에서 유의적 연관성을 확인할 수 있었다. 또한 T241A는 한우의 경제형질 중 근내지방도에서 유의한 결과를 확인할 수 있었다.
이러한 결과로 미루어 볼 때, AMBP 유전자 내 T148C 또는 T179C, T241A SNPs 들은 한우의 경제형질을 정확히 예측하여 우수한 경제형질을 갖는 개체를 선발하여 육종하는데 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
<110> Hankyong national university Industry Academic Cooperation Foundation <120> Method for predicting economic genetic trait in Hanwoo using AMBP gene and SNP marker associated with thereof and its Primer set <130> P13-0018 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 12158 <212> DNA <213> alpha-1-microglobulin/bikunin precursor <400> 1 cagccccagt ctgtagctgc ctcgagcagg gagctggtgg ctcttccatc cccagaccag 60 ccaagcctgt gagtgacagc ccagacagag gaaccagagc catgcggagt ctcagcggcc 120 tgctgttgtt actgactgcc tgcctggtgg taaacgccag ctccgtgccc acattgcctg 180 atgacattca agtgcaggag aacttcgacc tgtctagggt aaggctggca tctctggcgg 240 tgatggcagg gtgtctgagc ggctgggcct tgctggcagg aaggggcaag tcctatgtgc 300 cttggggtct cagtctctgc atctggaact ccaggggtgg gtccctcagg gccctttctg 360 ctgctcagac tgtcaggact tcattgaagc tgcacctctg cactcaccct ttcgtgggat 420 tctgggctgc cattctgagt caaagatcct gtagtctgaa cctgtactgt tgggctccat 480 gggaaattgt attccgatta gaacccaccc agagaaggct tctcggagaa ggcaatggca 540 ccccactcca gtactcttgc ctggaaactc ccatggacgg aggagcctgt aggctgcagt 600 ccatggggtc gctaagagtc agacacgact gagcgacttc actttcactt ttcactttca 660 tgcattggag aaggaaatag caacccactc cagtgttctt gcctggagaa tcccagggac 720 ggcggagcct ggtgggctgc tgtctatggg gtcgcacaga gtcggacacg actgaagcga 780 ctcagcagca gcagcagaga aggctggtgc cgaccaagtc ctgctgcccc tgcagcgcct 840 ccccccaaca gtgcccagct ttgtgtgact cttctgccca ccccctaacc tgcatccctt 900 catcctttaa ctactcacct ctgccgcaac atctctgtta gcccatcctg ggccctctgc 960 cctacctgta ggatcatggg gagaagagga gcaggacaga aatcaggctg gtgggactaa 1020 gcggcctggg cagggcgctg tgccagggga ggctgccgtc cagccccggc tctgcccgaa 1080 tctctgggtg accttgagca aagcctgttc ctccactgcc accccaggct ccttctgacc 1140 tttgtagccg cagtatggat tttgtttaca tttagggatg aggaagggtt gtggggagca 1200 aggcatgagg aacaggtctc tggtggtctg ggatgacgaa gggtctgcag acacctaagg 1260 gctctttcta gaagcggcag gctcatcctg ggtcaggctc agcttaggga aaggagttac 1320 tttctaacac agaggtatgg gctgtgtgca aggtggtgag tacccctgga ggagtaagag 1380 acgggactcc tgctcttggg gagcagtggt tgatggtgac cttggggcat ggggatttgg 1440 atcctgtcca gtgagcagcc caaaacctgc atctcagcag tcaggccctc tgccaactgg 1500 cggggtgggg tctgcctgcc gtctccctcc taagccagcc atgatgcctg gagctccatc 1560 atcagagttc catcctccct ggaagcctcg tagcctccag ttacctgtga gacacgatca 1620 cttaggagga gacgtcattg agagggggga gggggacaga cgccctccca gtcttgtcca 1680 ggtccagatc cttagggctt gtggctgcct cctagatcta tgggaagtgg ttcaatgtgg 1740 ccgtgggctc cacctgccca tggctgaaga ggttcaagga gaagatgacc atgagcacag 1800 tggtgttgaa agcggggccg acgagcaagg agatcagcgt caccaacact cacaggcggt 1860 gagtggggat ggggttagag gactgggacc cactccttcc cccaccccaa ccctgacttc 1920 agcctccacc ctgtcctgga aagtagcagg tctctacttc cagccaggac tcactcctga 1980 gggccagact tctctgcttc ccaccgccgg ggcagcccgt tctaactgtc ccatctacac 2040 ctcaagggca acgtccccaa cactctgcct gtttcccaat ctactcttgc cccttgggct 2100 tcctttagct cagtaaaggc gtttctacac aagctggaaa gttgggtggt aggtgcatgt 2160 cctagactct tctttgctct gccatgaccg tttggtccac catccagcct tgtccctgct 2220 cttccttatt ccctctggtc tgtttacttc ttccctcttc actgccctgg accaagtaac 2280 cttcagcttt ctttcctact gttatctaca gtagcctctc tacatttctc cccacctcta 2340 acctccaact ttccatcctt gcaaccattc atcacctcgc aaccagaaag gcctttcaaa 2400 aactcaaatc tgcttaaacc tttccagagt tccttcccta ttgcccttga gataaagttc 2460 aactccttca acatagcctt cagccctctg tgacccccaa gtgctcactg ttcccttccc 2520 cacataccta catactctct gacccaccta gctggatctt ctttcagttt ctggaaccct 2580 ccatcctctg ggactttgca tcaaatattt cttctaccca gaaaacctct ccccacttcc 2640 tgcactaatt cctatggatc cttcaggact caggttcttt gttgcctcct ccaggaaggc 2700 ctctctgact ccctccaccc atccaggttc aggttacagg ccttcttttg tgctctctga 2760 gtacccctgc ttcccgccac gtggcagtaa cctcaccgac tgcatctgcc tctggcctgc 2820 ccaccccctt cactgggttt tagaatctaa tgctccatga cgggacaggg tctcccctgc 2880 ctttctgtgt atccccagcc tgtggcatag tgcttggcac atagatgatg ctcgttaaat 2940 atcaataaga taaatgatca tcattataac aataatgggc ttccctggta actcagctgg 3000 taaagatagt agctaatgtg tgcatagtac ttactctaag ctctctgcat aaaatatctc 3060 atttgatgct ctcaaccacc atatgaggta gaaactatca ttatccccat ttctcagatg 3120 agaaaagtgg ggcaagagag acagagagta ataaatgact taatgtgtta atgaatcgtt 3180 ctgatttcct ggtgtatacg aatactgtgc tgatttttag tgctgggttt accaagaaga 3240 tagcatcagt tagctccttg cttccctcag tccctctgct ctcttctgtg aaacagatgt 3300 ctctcaggac tggtgtgaga actaaaccag atatttggaa atgttacttt ccaaattaca 3360 aaaaaaaaaa aaaaaccctg tatttggaag gaccttccag gagagcgggg tgtcaggaca 3420 atggtctcta ccagatacta tcttcatttt ggtttgttca tttccaggaa aggtgtctgt 3480 gaatcgatct ctggtactta tgagaaaaca agcactgatg ggaagtttct ctatcacaaa 3540 gccagtaagt tgagtcaaag gggacaccca cagttctctc cttcactaaa aaaaatgcct 3600 gacatcttaa cctctctgcc cctacagcca ttcctcccat ttttctgcaa tgtcatctag 3660 cctcccacca aattcccccc ctccttctct ctctccttct ttctctttct ctctctagct 3720 cctaccccca tgacccttgc cccacccatg tacacgctca tcaagtgctg attttaagtg 3780 atgagctgaa aacattgctg aattcaagtg atggttctga atgctgggga taacatcaag 3840 atttcatcac tcttcctgtt aggcatctgc aatcaactga taaaaatttg ctaagcatct 3900 accatgtaca gagtgtatgg tgctaaggga tagacacatg tggacatgaa tttatcatta 3960 atccagcaaa tgtttattga atttgctcta tgcatcaaat aaatgtgtca gagctttaat 4020 gtttgcatag atgaatggtt ggataaataa atgagtgaga gaattaaaaa atggtaagtg 4080 aatatatgta agatggtaga tttgttgagt aatcaatcat taaatagata aactgatggg 4140 ctaacagatg gaggaaagaa agaaggaaag agggagggaa ggaaggaagg aaaatgggtg 4200 tatttatgga ctgatatatg gagaggacgg atggatgaaa cgatggtgga tgaattaatg 4260 acgaatctat ggaggagatg gatggagaga gagagtgaag atggatgaat agataaatga 4320 atatatgcaa aggatgggtg gacagaagga ttgatgaata gatgatacgt gggtgaatag 4380 gtgaagggtc tcaggataga agccttctga ccactgatct ttttgtcttc cttcatcttc 4440 catgcagagt ggaatatcac catggagtcc tatgtggtcc acaccaacta cgatgagtac 4500 gccatttttc tgaccaagaa attaagccgt cgccatggac ccaccattac tgtcaagctc 4560 tatggtaaag gcccggagct gggggtggga ggagacctgt catttgggga aatgaagtgg 4620 ggaagtgcag ggagttttgc tttttccttc caacaaaact ccagttacgg gaaaggtgaa 4680 aacatttagt ctccctgtag aaggtagagc tcagtctccc atttgaggtt gaagcctctt 4740 cttttgaact caaaatttcc agaaaattct agcatctctg ggcccttaaa gaaccactct 4800 tgtgctgggt ggagatctgg gagacctgga atggggagcc tgggaaggct cctcctcctc 4860 ttctggagct gagctttctg taagggtact gaagagaccc aactgagtca ataggtctca 4920 aatgtccccg aaatgaaagt ccctgggcaa aataatgcca ggccctggca gccctgggcc 4980 ctgtggttct aggcatctcc cctgcctccc acttgcaggg cgtgagccgc agcttcggga 5040 aagcctgctg gaggaattca gggaggtggc cctgggtgtg ggcatccccg aagatgccat 5100 cttcacaatg cccgacagag gtaatggcac cccaccccgt ctcacatttc tgtcccctcc 5160 tcgtcctctg tggcctccag agcacatccc cccggcccct gggtctgtcc caccaccctt 5220 tgaggtaaac tgggctatgg ttcccctcct ctctttatag aaaaggcact ctgggtccct 5280 ggacttgtcc caggtcagtt ggcgtgtacc tggcagagct gaggctagag ccagttcagc 5340 attcactctg ctgccacctg ccaagtgcgg tgatagccag aattcagggc cgcctcttgg 5400 gaggtaatag agggtaggag ttagagcacg gagcttcaaa ctgagctggg tggcttctgg 5460 aggctttcag agcctcattt cctcatctgt aaaatgggga taataatgtc cccccttaga 5520 agctgctact gtaaggggtc aatgagataa aggcattaaa tacagtagca ccatacgtgg 5580 tttctagtaa gtgctggata gatgtcagcc ttggaatgct ggtggggcgg agggggtgga 5640 gacgatagag gtggtgacag cggtgtagcc accagcctgt cgattttcca gcgatgacct 5700 tcagcaatcc atgcgggtgg agccgtcccc gcagtgggct gatgcatggg acaggtccca 5760 gcgagggggc ccacctgccg catggccatt agttcttcgg aagaagcaaa gcctgtctgg 5820 gtcttactcc ctctctctcc tgtcctctga ctcaggtgaa tgtgttcctg gagagcagga 5880 tccagtgccc actccagtct cggtgagcac ctctgtcccc cagcccagcc ccaccctgcc 5940 cgcttaggct cctctgccgt gctggagggt ggggttgcag agagaaggcg gcgatgggca 6000 agtcagaccc acctgggctc agtctcagtt cttcatgggg ctagttgctg ccccatgcga 6060 tgtccctttc ctcgtctgtg gcatggagta attaccttta ccttccaggt gctggaatcc 6120 agtgacatgt tagaaaagta cctaaaagca gtgacagact caataatgag ataaagatac 6180 tcaacactca atagatgaaa ataaagtcag ttgagctctg aaaaacagca aacccgagag 6240 caagcagctt ctcaagccaa tgcctctcct atgctgactt ttgatttggg gggcttcctt 6300 ctgcttaatt ttcctgtttt ttgccatatt gattaagcct tcattctttc tctgattatt 6360 tggaaattat atatactaat ttagtctact gttgtgtcta tatgtgtatg tgtgtgtgtg 6420 tgtgtgtgtg tgtgtgtaaa aatacatata tttattttag aaacatattt ttgaaatttt 6480 tttcatttta atctttactt ttttaattat gaaagtatat aacatatata caagggactt 6540 ggaaaataca gaacaaggtt tcatatgttc cactatatat tacaattatt ttttttaaat 6600 agataaatta aggttattag ttggagtttc aatatcaaac tctcaaaaat taatagaatg 6660 aatatacagg gaagtagaag gagatagtag acctgaaaag cactgaaaac caattcaaca 6720 taattaagat ttatatagtt ttcacacaac agcagaatac aaactctatt caagttcccg 6780 tagactataa actaggagac actggaacat atccagggac agaagatgaa atgcaaaaat 6840 ttcatggtct gaagatgttg aaatcataca gaatctgttc tcatcactgt ggaattacgt 6900 tagaaatcaa tattgaaaga cacttgaaaa taatccatgt tttcaagtgc aatgtgacat 6960 ttaccaagag aaatctttga cttcgccatc gaaagcctca ataaagttag actaaaaaga 7020 aacagagggt aactacagag aagaaaccat ttaaatgaga aactagtatc aaaatgagag 7080 attaatatta aagatacttt aaacaaaatc ccatgtattt ggaaattaga tgttcacttt 7140 taaatgatga gtgtatctaa gaagccatta caaggaagat taaaaatatt tgtaatagaa 7200 taaaaatgaa aagagaattt gttgcatgca actgaagaaa attttaagga ctgaaggaaa 7260 gcaaaaaagg acaataatgt cctacttcta catagaattc acactgttaa catatttctt 7320 tgctttccta tttttttaat taattagttt attttaattg gaggctaatt actttacaat 7380 attgtagtag tttttgccaa aaattgacat gaatcagcca tgggtatacc tgtgttcccc 7440 atcctgaact ccccctccca cctccttccc catcccatcc ctctgggtca tcccagtgca 7500 ccagccctga gcaccctgtc tcatgcatca aatctggact ggggatctat ttcacatatg 7560 ataatataca tgtttcaatg ctgttctctc aaatcatccc atcctcgccc tctcccacag 7620 agtccaaaag actgttctat acatctgtgt gtcttttgct gtctcgcata tagggtcatc 7680 gttaccatct ttctaaattc catatatatg cgttattata cagtattggt ctttttcttt 7740 ctgacttact tcactctgta taataggctc cagtttcatc cacctcatta gaactgattc 7800 aagtgcattc tttttaatgg ctgagtaaga ttccattgtg tatatgtacc acagctttct 7860 tatccattca tctgctgatg gacatctagg ttgcttccat gtcctggcta ttataaacag 7920 tgctgcgatg aacattgggg tacacgtgtc tctttccctt ctggtttcct cagtgtgtat 7980 gcccagcagt gggattgctg ggtcatatgg cagttctatt tctggttttt taaggactct 8040 ccacactgtt ctccatagtg gctaaccact tccctatttt ttaagaaaaa ttaccattgc 8100 tactgtaaag ctaacatact ctcattataa ataattaaaa caatgcagta taaaaagtat 8160 aaaaaacaag ttttgaaaaa ttccaccacc tacaaactct gagcattcac attattccag 8220 aaatcttgac ctgtatacac ctggagaggg gcagatgtaa agaaagttgg atagacagat 8280 gcacagattt agatatgctg ttattaaatg gaattgcatt ccagatgcta ttcctaaatt 8340 tgaaaagaca ttcattgttg tttaaaaaaa atcttcaaat aaatatttct ccttgccaag 8400 aggttaattt agtaaagaat gctctaagtc aagattgggc ttcccttatg gctcagctgg 8460 taaagaatcc acctgcaatg cgggagacct gggttcaatc tctgggttgg gaagatcccc 8520 tggagaaggg aaaggctacc tactccagta ttgtggcctg gagaattcca tggactgtat 8580 agtccactgg gtcacgaaga gtcggacacg actgaacgac tttaaatgta agtaaacact 8640 ttcagagggt gtctcttgtc tctgggactt ggcagacaga cctctttact ttcgtgtgtt 8700 ctatctcctt ctcccttttt cttttactct gtccagattg ataccattcc cattctgttc 8760 tatctctgca attcccagac atttagtaat agctctatat tttaatggat tctacattct 8820 ctcctagtga atacaacaca gcttcaccat tcctgagtta ttatttctat taatctctta 8880 atgccatttc ttcacaaact gctgtgtttg aggaagtttt gaatatttga atcctggaat 8940 tcttccctgt ttgagaatat cctcctgttc ccttcaacct tgaatgagat ttctgaagtc 9000 ggtctggata gtttctgttc tgcttctttt tatctgtctc ctgcctcatc tgttttagcc 9060 agttgttttt gctgtttggt ttcgaagttg tgtccaactt tttcgacccc atggactgta 9120 gcttgccagg ctcctctgtc catgggattc tccaggcaag aatagtagaa tgggttgcca 9180 tgccctcctc caagggatct tcttgaccta gagattgaac ccttgtctct tgaattggca 9240 ggcggattct ttaccactag tgccacagaa agcccgatgc tttgggaaaa acagcccatt 9300 catcagtcta gtagctgtgt ttctgtctac accttgatcc tcagagcaaa tggcttttac 9360 attcccaggg tccaggggaa caactgtggc taggtccctg aaatagcttc ttctgttttt 9420 cccccagagg gctcggcggg ctgtgctgac ccaggaagag gaaggctctg gggctggaca 9480 accagtaact aatttcagca agaaagcagg tgaggatcac tccctgtttt tttttaaccc 9540 ctcttctgcc acactcgaga gaggaagggc ccacagctgg ttcactccag ctgcccttat 9600 caccatgaag tctttttatt cttctactag aatgaagcaa aagcctataa aaggcaaatc 9660 ccgttctctg ccccgtgcca gacattgttg agagagggga tcacaagcca tggtccctga 9720 gcttagaaac attcagctcc atgatgagaa gcaagttcct ggcctgtctg ttttacttcg 9780 tggcctccta gccttggttt tctcatctgt acaatgggat aacagcctgt tgagctgatc 9840 tcaagggctc tttgtggaga cacatggaaa atatgtgaga atactctgtg tagttgatag 9900 accaatcact cttcaactct ttcagcaaac attgaaccct gaccctgcat cgccccccag 9960 accctctgct gagcactggg atcatggaga caaacacgtc ttctggtcta gtagaggagg 10020 cagtcaagga agaaaataaa ggacttgaaa gaagagagta agctaaagag ttgagggagc 10080 tcagaagagg gaggggagaa gtgatcaagg aggacttcct ggatgaagga gaattcatgt 10140 tatgtccatt tatggtttat ggaggaaggc attctagcat tccaggggca ggaatgatga 10200 gggcaaaggc acagggctgg gacatcaggc agagaggtca ggctgccagc atgcatgctg 10260 gtgaatgtag cctcaaccac tgtctttaca gggctgtagg gcagacaaga ccaaagccgg 10320 atgcttggtc tctgggccac tgataacacc tcatattatg gcacgggttt ttggagtcca 10380 acaaatatga cttggaatct cagctctagg taaccctgag gaaatctctt tgcctctcag 10440 ggagtcaatt tccttatctt taaaacgggc tgagaatgat tcctcttaat gcagagatga 10500 aaactaaacg aggtgattcc cctttgaagt gtccagcctg gtgacaggca cacactcagc 10560 actcagcgag cactgctgtt ctgcccctcc gcagattcct gccagctgga ctactcacaa 10620 gggccttgcc tggggctgtt caagaggtat ttctataacg gtacatccat ggcctgtgag 10680 accttcttat atggcggctg catggggaat ggcaacaact tcctctcgga gaaggagtgt 10740 ctgcagacct gccggactgt gggtgagcac caccccactt ccgcctcccc cgtactggtc 10800 acttctgtcc tcccaacaga ccacctgccc actgaacagg tagctaacag aggatgctcc 10860 ggtggtggga ttccagggtc ggtttcctga aggcatagga attgagcact tgggtgtggg 10920 tgaccctcgg cacatatgtc ttctaggggg ctggtttctc aatctatagg aagaggtcta 10980 ggtgttccag gtgagtaggg tccctgccgg gtgtctcagg tcagcgatca cgaggttttc 11040 taatgctctg tgcctccctc ccactccgca gaggcctgta acctccccat agtccagggg 11100 ccatgccgaa gctacatcca gctctgggca tttgatgctg tcaaggggaa gtgcgtccgc 11160 ttcagctatg ggggctgcaa gggcaatggt aacaaatttt actcggagaa ggagtgtaag 11220 gagtactgtg gcattcctgg tgaaggtagg aggccccaca acgccgggcg gggctgaggg 11280 gccgccagaa tcctggttgg ggagccctgg tagggatctg gagagctgag ttctggattc 11340 tgtactggtg accagcacac ccactctctc agtttcccac ctgtaaaacg gggccaagcc 11400 caattttacc ccagctggga tggggcacct ggggaggtgc tggcctgagc agggagggtg 11460 gggttgagtg gggcagaggc gggctccaat cctggcattc agtgccacat tcgggctggc 11520 cacatcgtta ctcaaatgat tcaaatactt ccagtcactg cttcctgaag gctcaggcct 11580 ctggatcttc tcaatctact ctgtccctgt tacagtgctt gagtgctcag tcatgtccgc 11640 ctctttgtga ccccgtggac tgtaccaatt taagtctcag ttttctcttt tgtaaagtgg 11700 cacaaaggac ccacttccta ggcggcacgg tgccttgcct ggttcatacc tgtctagcag 11760 cagccagtac tagtaacggt ggcaatgctg cgatggtaac aagaatagca ttccaagaag 11820 ccgcagccat tgaagattta tatgccttat ctccccaccg gaaaaatggt gcctaaagta 11880 aatcagaggc aaaaacatag gtcatcctgt ggaatgcatc tcggagttac caagtcaccc 11940 tgcaagcaga agtttctggc ctcaggctca ggctcgaact cagtccgagc tgtcttccct 12000 cctccatgag gcatccccat gccctgaccg cccccaacca caggcccttg ggtgacccca 12060 cacctactcc ctgagcctct ctgtgtccac agcggatgag gagttgctgc gcttctccaa 12120 ctgaccggtc cgcaggcctg aagtccacaa ggcagcag 12158 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AMBP_F <400> 2 ccccagtctg tagctgcctc 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AMBP_R <400> 3 acgtgggtga ataggtgaag g 21

Claims (9)

  1. 서열번호 2 및 3의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트를 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측을 위한 프라이머 세트.
  2. 서열번호 2 및 3의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트에 의해 증폭되어 얻어진 T148C 또는 T179C SNP 마커, 혹은 T241A SNP 마커 중 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측을 위한 SNP 마커.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 T148C 또는 T179C SNP 마커는 서열번호 1에 표시된 염기서열에서 각각 148번째(T↔C)와 179번째(T↔C)의 염기치환으로 발생되는 것임을 특징으로 하는 SNP 마커.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 T241A SNP 마커는 서열번호 1에 표시된 염기서열에서 241번째(T↔A)의 염기치환으로 발생되는 것임을 특징으로 하는 SNP 마커.
  5. 한우 시료에서 게놈 유전자와 소 유래의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자에 대응되는 증폭용 프라이머를 사용하여 PCR 방법으로 AMBP 유전자를 증폭하는 단계; 상기 증폭된 AMBP 유전자를 염기서열분석방법으로 T148C 또는 T179C SNP 마커, 혹은 T241A SNP 마커의 유전자형을 확인하는 단계; 상기 확인된 SNP 마커로부터 한우의 경제형질을 예측하는 단계; 를 포함하여 이루어지는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 한우의 경제형질 중 등지방두께를 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 CC 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법.
  7. 제 5항에 있어서,
    상기 한우의 경제형질 중 등심단면적을 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법.
  8. 제 5항에 있어서,
    상기 한우의 경제형질 중 근내지방도를 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형, 혹은 T241A SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법.
  9. 제 5항에 있어서,
    상기 한우의 경제형질 중 도체중을 판정하는 방법은 T148C 또는 T179C SNP 마커의 TT 유전자형을 선발하는 것을 특징으로 하는 소의 AMBP(Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자를 이용한 한우 경제형질 예측방법.
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