JPS6226233A - 組織プラスミノ−ゲン活性化因子含有医薬組成物 - Google Patents
組織プラスミノ−ゲン活性化因子含有医薬組成物Info
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- JPS6226233A JPS6226233A JP61122049A JP12204986A JPS6226233A JP S6226233 A JPS6226233 A JP S6226233A JP 61122049 A JP61122049 A JP 61122049A JP 12204986 A JP12204986 A JP 12204986A JP S6226233 A JPS6226233 A JP S6226233A
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- Japan
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- aqueous solution
- concentration
- solution
- lyophilized pharmaceutical
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は組織プラスミノーゲン活性化因子、特に組織プ
ラスミノーゲン活性化因子を含有する医薬組成物、それ
らの製造およびそれらのヒトおよび動物医療におり゛る
使用に関する。
ラスミノーゲン活性化因子を含有する医薬組成物、それ
らの製造およびそれらのヒトおよび動物医療におり゛る
使用に関する。
画境全形成できる酵素系−凝血系−と画境を溶解できる
酵素系−フィブリン溶解系との間の健全な開放状血管床
全維持している動的均衡があるものと考えられている。
酵素系−フィブリン溶解系との間の健全な開放状血管床
全維持している動的均衡があるものと考えられている。
損傷からの失血を制限するために、損傷した血管には画
境が形成される。損傷が自然に回復された後に、余分の
画境はフィブリン溶解系の作動により溶解される。時に
は、画境が外傷をともなうことなく形成され、これは主
要血管にとどまることがあり、血流全部分的にまtは全
体的にさえも閉塞する結果金もたらす。これが心臓、肺
または脳で生じると、心筋梗塞、肺塞栓症または卒中を
発症させることがある。これらの組合せ症状は工業国に
おける罹病率および死亡率の主要因である。
境が形成される。損傷が自然に回復された後に、余分の
画境はフィブリン溶解系の作動により溶解される。時に
は、画境が外傷をともなうことなく形成され、これは主
要血管にとどまることがあり、血流全部分的にまtは全
体的にさえも閉塞する結果金もたらす。これが心臓、肺
または脳で生じると、心筋梗塞、肺塞栓症または卒中を
発症させることがある。これらの組合せ症状は工業国に
おける罹病率および死亡率の主要因である。
画境はタンパク分解酵素プラスミンにより溶解されつる
繊維網状構造よりなる。この酵素に不活性なプロ酵素プ
ラスミノーゲン(これは血漿の成分である)からプラス
ミノーゲン活性化因子の作用により誘導される。2:I
fiの免疫学的に異なる哺乳動物デラスミノーケ9ン活
性化因子が存在する。
繊維網状構造よりなる。この酵素に不活性なプロ酵素プ
ラスミノーゲン(これは血漿の成分である)からプラス
ミノーゲン活性化因子の作用により誘導される。2:I
fiの免疫学的に異なる哺乳動物デラスミノーケ9ン活
性化因子が存在する。
ウロキナーゼとしても知られている内在性プラスミノー
ゲン活性化因子は腎臓により産生される酵素であり、尿
から単離できる。これはまた多くの組織培養源からも生
成できる。血管プラスミノーゲン活性化因子としておよ
び組織プラスミノーゲン活性化因子(t −PA )と
しても知られている外在性プラスミノーゲン活性化因子
はかなりの組織ホモジネート(特にヒト子宮)、面前細
胞壁およびいくつかの細胞培養物から単離できる。これ
らの2種のプラスミノーゲン活性化因子に加えて、ベー
ター−血液溶解性ストレプトコツシ(5treptoc
occi )から生成される細菌生成物、ストレプトキ
ナーゼがある。ウロキナーゼおよびストレプトキナーゼ
の両方が付随する主要な欠点はこれらが循環器系全体に
活性であり、画境の部位でだけ活性ではないごとにある
。これらは、たとえばフイブリノーゲン、プロトロンビ
ン、ファクター■およびファクター■のようなその他の
血液タンパク全破壊し、かくして立坑形成能力を減じお
よび出血の危険全増大させる。これに対して、t −P
A の生物学的活性はt −PAが結合しており、これ
全活性化させるフィブリンの存在に依存する。かくして
、最大活性が画境の場所、すなわち溶解しようとするフ
ィブリン網状構造の存在する場所でだけ生じ、これは出
血の危険を格別に回避させる。
ゲン活性化因子は腎臓により産生される酵素であり、尿
から単離できる。これはまた多くの組織培養源からも生
成できる。血管プラスミノーゲン活性化因子としておよ
び組織プラスミノーゲン活性化因子(t −PA )と
しても知られている外在性プラスミノーゲン活性化因子
はかなりの組織ホモジネート(特にヒト子宮)、面前細
胞壁およびいくつかの細胞培養物から単離できる。これ
らの2種のプラスミノーゲン活性化因子に加えて、ベー
ター−血液溶解性ストレプトコツシ(5treptoc
occi )から生成される細菌生成物、ストレプトキ
ナーゼがある。ウロキナーゼおよびストレプトキナーゼ
の両方が付随する主要な欠点はこれらが循環器系全体に
活性であり、画境の部位でだけ活性ではないごとにある
。これらは、たとえばフイブリノーゲン、プロトロンビ
ン、ファクター■およびファクター■のようなその他の
血液タンパク全破壊し、かくして立坑形成能力を減じお
よび出血の危険全増大させる。これに対して、t −P
A の生物学的活性はt −PAが結合しており、これ
全活性化させるフィブリンの存在に依存する。かくして
、最大活性が画境の場所、すなわち溶解しようとするフ
ィブリン網状構造の存在する場所でだけ生じ、これは出
血の危険を格別に回避させる。
t −PA 投与の主要経路は血管内注入であり、従っ
て非経腸投与用溶液としてt’ −PAの製剤が要求さ
れる。タンパク質の場合に、医師または獣医師に薬品を
凍結乾燥医薬組成物として提供することが好ましい。こ
れは液体製剤にまさるその有意の移送および貯蔵長所に
よるものである。しかしながら、いづれのこのような凍
結乾燥製剤も不当に不便で困難な問題全付随することな
く所望の非経腸投与用溶液に容易に変換でき、および医
師または獣医師がこの製剤を適量の溶剤中で再構成する
ことにより単純にいづれか指定の状況に要求される濃度
金得ることができることが重要である。
て非経腸投与用溶液としてt’ −PAの製剤が要求さ
れる。タンパク質の場合に、医師または獣医師に薬品を
凍結乾燥医薬組成物として提供することが好ましい。こ
れは液体製剤にまさるその有意の移送および貯蔵長所に
よるものである。しかしながら、いづれのこのような凍
結乾燥製剤も不当に不便で困難な問題全付随することな
く所望の非経腸投与用溶液に容易に変換でき、および医
師または獣医師がこの製剤を適量の溶剤中で再構成する
ことにより単純にいづれか指定の状況に要求される濃度
金得ることができることが重要である。
たとえば、心臓または腎臓の障害t−Wする患者に大量
の溶液全投与することは、患者の心臓または腎臓により
大きいことさえあるストレス全厚えることから望ましく
ない。従って、投与容量はこのよう表状況で最低に維持
されるべきである。従って、非経腸投与用溶液は比較的
低濃度であるばかりでなく、また高い薬物濃度を有する
ものとして得ることができることが望ましい。
の溶液全投与することは、患者の心臓または腎臓により
大きいことさえあるストレス全厚えることから望ましく
ない。従って、投与容量はこのよう表状況で最低に維持
されるべきである。従って、非経腸投与用溶液は比較的
低濃度であるばかりでなく、また高い薬物濃度を有する
ものとして得ることができることが望ましい。
t −PAの多くの凍結乾燥医薬製剤が従来技術で、友
とえばEP−A−113319およびFBI’ −A−
123304に開示されている。これらの製剤はその−
4がほぼ中性であるt −PAの水性塩類溶液から製造
され、このような溶液中におけるt −PAの溶解度は
イオン性濃度全増加しないと低いという欠点に!する。
とえばEP−A−113319およびFBI’ −A−
123304に開示されている。これらの製剤はその−
4がほぼ中性であるt −PAの水性塩類溶液から製造
され、このような溶液中におけるt −PAの溶解度は
イオン性濃度全増加しないと低いという欠点に!する。
従って、このような凍結乾燥製剤から得られる非経腸投
与用溶液は成る状況では望ましくない大量の溶液全患者
に投与する必要があるほど低い濃度でt−pA’2含有
しているか、または高張性であって、投与すると赤血球
に対しC!害であることがあるかのいづれかである。
与用溶液は成る状況では望ましくない大量の溶液全患者
に投与する必要があるほど低い濃度でt−pA’2含有
しているか、または高張性であって、投与すると赤血球
に対しC!害であることがあるかのいづれかである。
ここに、t−PAの水溶液中における溶解度が、浴液の
pH’に酸性範囲内にすると改善できること、凍結乾燥
医薬製剤’6t−PAの酸性溶液から製造できること、
およびこの寒剤が投与した場付に有意の生理学的問題全
示さない非経腸投与用酢液全提供できることが見い出さ
れた。従って、本発明にt −PAの凍結乾燥医薬製剤
全製造する方法?提供し、この方法はpHが2〜5であ
るt −PAの冷凍水溶液全乾燥させることよりなる方
法である。
pH’に酸性範囲内にすると改善できること、凍結乾燥
医薬製剤’6t−PAの酸性溶液から製造できること、
およびこの寒剤が投与した場付に有意の生理学的問題全
示さない非経腸投与用酢液全提供できることが見い出さ
れた。従って、本発明にt −PAの凍結乾燥医薬製剤
全製造する方法?提供し、この方法はpHが2〜5であ
るt −PAの冷凍水溶液全乾燥させることよりなる方
法である。
t −PAの改善された溶解度の結果として、t−PA
が溶液から沈殿析出するいづれかの実質的な危険を付随
することなく、高濃度でt−pA’6含■する非経腸投
与用溶液を提供できる凍結乾燥医薬製剤が本発明に従い
製造できる。従って、本発明により必要な時および必要
な場合に、製剤tXとえば中性または酸性−の水を使用
して所望の濃度に溶解できる医師または獣医師に凍結乾
燥製剤を提供できる。すなわち、本発明はその取り扱い
が極めて柔軟であって、医師および獣医師により使用で
きる安定な凍結乾燥医薬展剤を提供するとともに、移送
および貯蔵がさらに簡便な手段を提供する。
が溶液から沈殿析出するいづれかの実質的な危険を付随
することなく、高濃度でt−pA’6含■する非経腸投
与用溶液を提供できる凍結乾燥医薬製剤が本発明に従い
製造できる。従って、本発明により必要な時および必要
な場合に、製剤tXとえば中性または酸性−の水を使用
して所望の濃度に溶解できる医師または獣医師に凍結乾
燥製剤を提供できる。すなわち、本発明はその取り扱い
が極めて柔軟であって、医師および獣医師により使用で
きる安定な凍結乾燥医薬展剤を提供するとともに、移送
および貯蔵がさらに簡便な手段を提供する。
本発明で使用するt −PAは哺乳動物に実質的に対応
するいづれかの生物活性タンパク質、特にヒトt −P
Aであることができ、グリコジル化している形およびグ
リコジル化していない形のもの全包含する。これは1p
−4−112122に記載されているような1鎖形また
は2鎖形t −PAであることができ、充分にグリコジ
ル化しているヒトt −PAの場合に、f17 [1,
000のポリアクリルアミドデルにもとづく見掛は上の
分子量および7.5〜8.0の等電点’kllNする。
するいづれかの生物活性タンパク質、特にヒトt −P
Aであることができ、グリコジル化している形およびグ
リコジル化していない形のもの全包含する。これは1p
−4−112122に記載されているような1鎖形また
は2鎖形t −PAであることができ、充分にグリコジ
ル化しているヒトt −PAの場合に、f17 [1,
000のポリアクリルアミドデルにもとづく見掛は上の
分子量および7.5〜8.0の等電点’kllNする。
好ましくは、t −PAi!約5 [10,D 00工
U/In9の比活性rwする〔工U、/ダー国際単位/
1!J9;国際単位はWHO、ナショナル インスチチ
ュート フォア バイオロジカル スタンタート ア
ンド コントロール(National 工n5ti
tute for Biologica1日tand
aria ani Control )、ホーリイ ヒ
ル、ハムプステッド、ロンドン(Ho1ly Hll
l、Hampetead、 London ) NW
3 61B、英国により規定されているとおりの活性単
位である〕。
U/In9の比活性rwする〔工U、/ダー国際単位/
1!J9;国際単位はWHO、ナショナル インスチチ
ュート フォア バイオロジカル スタンタート ア
ンド コントロール(National 工n5ti
tute for Biologica1日tand
aria ani Control )、ホーリイ ヒ
ル、ハムプステッド、ロンドン(Ho1ly Hll
l、Hampetead、 London ) NW
3 61B、英国により規定されているとおりの活性単
位である〕。
t −pAのアミノ酸配列は好ましくは第1図に記載の
配列に実質的に相当する。すなわち、この配列は第1図
の配列と同一であるか、または対立形質源あるいはその
他の一種またに二種以上のアミノ酸の欠落、置き換え、
挿入、転位ま友は付加全含み、生成する配列は第1図の
配列と少なくとも80%、好ましくは90チの相同性’
に一’Nし、このタンパクの同一の生物学的および免疫
学的性質全基本的に保有している。特に、t−PA配列
は第1図の配列と同一であるか、あるいはセリンN−末
端から°245245番目にメチオニンの代りにバリン
を有する以外は同一配列含有し、これらどちらの配列も
場合により、彫りの6個のアミノ酸のいづれかが存在し
ていないか、またに場合によりGay −Ala−Ar
gの追加のポリペプチド全方末端先行配列金有する。
配列に実質的に相当する。すなわち、この配列は第1図
の配列と同一であるか、または対立形質源あるいはその
他の一種またに二種以上のアミノ酸の欠落、置き換え、
挿入、転位ま友は付加全含み、生成する配列は第1図の
配列と少なくとも80%、好ましくは90チの相同性’
に一’Nし、このタンパクの同一の生物学的および免疫
学的性質全基本的に保有している。特に、t−PA配列
は第1図の配列と同一であるか、あるいはセリンN−末
端から°245245番目にメチオニンの代りにバリン
を有する以外は同一配列含有し、これらどちらの配列も
場合により、彫りの6個のアミノ酸のいづれかが存在し
ていないか、またに場合によりGay −Ala−Ar
gの追加のポリペプチド全方末端先行配列金有する。
第1図に示されているアミノ酸配列は65のシスティン
残基に!し、従って17のジスルフィド橋金形成する能
力全方する。構造がさらに詳細に決定されているその他
のタンパクとの同族性にもとづき、90番目の位置のア
ミノ酸とプロリンC−末端との間の配列についての仮定
構造が第2図に示されている。第2図において、*印は
2鎖形鎖はセリンプロテアーゼ領域を含有する。このN
−末端領域の構造は確定していないが、いくつかの提案
が提示されている〔プログレス イン フィブリツリシ
ス(Progrθss i、n Fibrinolya
i、s )、1986年、3.269〜276頁;およ
びゾロ2・ ナトル、アカド、サイ、(Proc、 N
atl、 Acad。
残基に!し、従って17のジスルフィド橋金形成する能
力全方する。構造がさらに詳細に決定されているその他
のタンパクとの同族性にもとづき、90番目の位置のア
ミノ酸とプロリンC−末端との間の配列についての仮定
構造が第2図に示されている。第2図において、*印は
2鎖形鎖はセリンプロテアーゼ領域を含有する。このN
−末端領域の構造は確定していないが、いくつかの提案
が提示されている〔プログレス イン フィブリツリシ
ス(Progrθss i、n Fibrinolya
i、s )、1986年、3.269〜276頁;およ
びゾロ2・ ナトル、アカド、サイ、(Proc、 N
atl、 Acad。
Sci、 ) 1984年、81.5655〜5659
頁参照〕。t −PAの構造の最も重要な特徴はこのタ
ンパク全フィブリンに結合する役目をはたしている2つ
の環状部分(92番目のアミノ酸と176番目のアミノ
酸の間および180番目のアミノ酸と261番目のアミ
ノ酸との間)およびB鎖の主要領域を含むことおよび、
プラスミノーゲンの活性化の役目をはた丁セリンプロテ
アーゼ領域にある。セリンプロテアーゼ領域における特
別に重要なアミノ酸は触媒的三ツ組アミノ酸、)(18
/ A8p/ Barである。t −PAにおいては、
これらに622番目、671番目および466番目に位
置している。264番目および695番目のシスティン
アミノ酸残基もまた重要であり、これらはt −PAの
2つの鍋形のA鎖とB@とk −緒に保持している。
頁参照〕。t −PAの構造の最も重要な特徴はこのタ
ンパク全フィブリンに結合する役目をはたしている2つ
の環状部分(92番目のアミノ酸と176番目のアミノ
酸の間および180番目のアミノ酸と261番目のアミ
ノ酸との間)およびB鎖の主要領域を含むことおよび、
プラスミノーゲンの活性化の役目をはた丁セリンプロテ
アーゼ領域にある。セリンプロテアーゼ領域における特
別に重要なアミノ酸は触媒的三ツ組アミノ酸、)(18
/ A8p/ Barである。t −PAにおいては、
これらに622番目、671番目および466番目に位
置している。264番目および695番目のシスティン
アミノ酸残基もまた重要であり、これらはt −PAの
2つの鍋形のA鎖とB@とk −緒に保持している。
第1図および第2図において、アミノ酸残基について下
記のとおりの慣用の1字記号および6字記号を使用し几
: 八日pD アスパラギン酸 工1θ エ インロ
イシンThr T スレオニン Leu
TJ ロイシンSer S セリy
Tyr Y チロシンGlu E グル
タミン酸Phθ F フェニルアラニンPro P
プロリン Hl[3HヒスチジンGly
G グリシン L7B K リジンAla
A アラニン ArgRアルヤニ70
7日 Cシスティン Trp W )リ
プトファンVal V バリン G
in Q グルタミンMet M メチオニン
Asn N アスパラギンt −PAは
当技術で既知のまたは開示されている製造方法のいづれ
かにより得ることができる。
記のとおりの慣用の1字記号および6字記号を使用し几
: 八日pD アスパラギン酸 工1θ エ インロ
イシンThr T スレオニン Leu
TJ ロイシンSer S セリy
Tyr Y チロシンGlu E グル
タミン酸Phθ F フェニルアラニンPro P
プロリン Hl[3HヒスチジンGly
G グリシン L7B K リジンAla
A アラニン ArgRアルヤニ70
7日 Cシスティン Trp W )リ
プトファンVal V バリン G
in Q グルタミンMet M メチオニン
Asn N アスパラギンt −PAは
当技術で既知のまたは開示されている製造方法のいづれ
かにより得ることができる。
−例として、t−PAUバイオキミカ エ バイオフィ
シ力 アクタ(Biochi、m1ca at Bio
physicaActa )、 1979年、580、
140〜156;1nP−A−4,1766またはEP
−A−113319に記載されている種類の正常ま几は
腫瘍セルラインから得ることができる。しかしながら、
t−pAは、友とえはBP−A−93619:KP−A
−117.059またはgp−A−117060に記載
されているようなりNA組換え技法を用いて誘導される
培養した形質転換またはトランスフェクションされたセ
ルラインから得ると好ましい。t−PAの製造にチャイ
ニーズハムスター卵巣(CIO)細胞全使用し、モレキ
ュラー アンド セルラーバイオロジイ(Mo1ecu
lar and (:ellularBiology
)、1985年5(7)、1750〜1759頁に記載
の方法で誘導すると特に好ましい。この方法で、クロー
ン化された遺伝子がジヒドロフオレートレダクターゼ(
dhfr ) f dhfr−CHO細胞にコードする
遺伝子によりコトランスフエクションされる。形質転換
体全発現するahfrはヌクレオシド不含培地で選択さ
れ、増加する濃度のメトトレキセートにさらされる。か
くして、ahfrおよびt −PA遺伝子に共に増幅さ
れて、高レベルのt−pAy発現することができる安定
なセルライン全溝く。
シ力 アクタ(Biochi、m1ca at Bio
physicaActa )、 1979年、580、
140〜156;1nP−A−4,1766またはEP
−A−113319に記載されている種類の正常ま几は
腫瘍セルラインから得ることができる。しかしながら、
t−pAは、友とえはBP−A−93619:KP−A
−117.059またはgp−A−117060に記載
されているようなりNA組換え技法を用いて誘導される
培養した形質転換またはトランスフェクションされたセ
ルラインから得ると好ましい。t−PAの製造にチャイ
ニーズハムスター卵巣(CIO)細胞全使用し、モレキ
ュラー アンド セルラーバイオロジイ(Mo1ecu
lar and (:ellularBiology
)、1985年5(7)、1750〜1759頁に記載
の方法で誘導すると特に好ましい。この方法で、クロー
ン化された遺伝子がジヒドロフオレートレダクターゼ(
dhfr ) f dhfr−CHO細胞にコードする
遺伝子によりコトランスフエクションされる。形質転換
体全発現するahfrはヌクレオシド不含培地で選択さ
れ、増加する濃度のメトトレキセートにさらされる。か
くして、ahfrおよびt −PA遺伝子に共に増幅さ
れて、高レベルのt−pAy発現することができる安定
なセルライン全溝く。
t −pAは好ましくは、下記の文献に記載されている
ような当技術で既知のまたは開示されている方法のいづ
れかを用いて精製す、る:バイオケミカ エ バイオロ
ジカルアクタ(Biochimicaet Bioph
ysica Acta )、1979年、580.14
0〜156貞:ジャーナル オプ バイオロジカル ケ
ミストリイ(J、 Biol、 Chem、 )、19
79年、254(6)、1998〜2006頁;同、1
981年、−3」トj−人−L」Ll、 7035〜7
041jW;ヨーロッパ ジャーナル オブバイオケミ
ストリイ(Eur、、r、 Biochem、 )、1
986年、162.681〜686貞;KP−A−41
766;IIP−A−113319;または()B−A
−2122219゜ 本発明の方法で使用するt −PAの水浴液中における
溶解度にはいづれかの上限が存在するようにはみえない
。150,000.000工U、/mt(国際単位/祷
)より大きいような極めて高い濃度でも、溶液はいづれ
の有意のt −PA沈殿をともなうことなく単に粘性に
なるだけである。従って、水溶液中におけるt −PA
の濃度は広い限界内、たとえば50.000〜50,0
00.000工U/祷で変えることができる。本発明か
ら最高の利益全確保する丸めには、t −PAの濃度は
100.000工U / rILt より大、さらに特
に500,00 [1工U/祷より犬、さらに特にi、
o o o、o o o工U/dより大である。t −
PAの濃度が約5.000.0001U/mtであると
最高に好ましい。
ような当技術で既知のまたは開示されている方法のいづ
れかを用いて精製す、る:バイオケミカ エ バイオロ
ジカルアクタ(Biochimicaet Bioph
ysica Acta )、1979年、580.14
0〜156貞:ジャーナル オプ バイオロジカル ケ
ミストリイ(J、 Biol、 Chem、 )、19
79年、254(6)、1998〜2006頁;同、1
981年、−3」トj−人−L」Ll、 7035〜7
041jW;ヨーロッパ ジャーナル オブバイオケミ
ストリイ(Eur、、r、 Biochem、 )、1
986年、162.681〜686貞;KP−A−41
766;IIP−A−113319;または()B−A
−2122219゜ 本発明の方法で使用するt −PAの水浴液中における
溶解度にはいづれかの上限が存在するようにはみえない
。150,000.000工U、/mt(国際単位/祷
)より大きいような極めて高い濃度でも、溶液はいづれ
の有意のt −PA沈殿をともなうことなく単に粘性に
なるだけである。従って、水溶液中におけるt −PA
の濃度は広い限界内、たとえば50.000〜50,0
00.000工U/祷で変えることができる。本発明か
ら最高の利益全確保する丸めには、t −PAの濃度は
100.000工U / rILt より大、さらに特
に500,00 [1工U/祷より犬、さらに特にi、
o o o、o o o工U/dより大である。t −
PAの濃度が約5.000.0001U/mtであると
最高に好ましい。
水溶液のPHの上限は好ましくは4.5である。実際に
、このP)Iは好ましくは2.5〜4.0の範囲、さら
に好ましくは2.8〜3.5の範囲、さらに特に好まし
くに約3.0である。水溶液の所望の−は生理学的に許
容されうる無機または有機酸を用いて得ると簡便である
。このような酸の例には塩酸、硫酸および硝酸、並びに
クエン酸、酒石酸およびベンゼンスルホン酸が包含され
る。これらの例の中で塩酸が好適である。
、このP)Iは好ましくは2.5〜4.0の範囲、さら
に好ましくは2.8〜3.5の範囲、さらに特に好まし
くに約3.0である。水溶液の所望の−は生理学的に許
容されうる無機または有機酸を用いて得ると簡便である
。このような酸の例には塩酸、硫酸および硝酸、並びに
クエン酸、酒石酸およびベンゼンスルホン酸が包含され
る。これらの例の中で塩酸が好適である。
成る種の生理学的に許容されうる共浴剤を水に加えて場
合により存在させることができるが、水溶液用の媒質は
全体的にあるいは実質的に水性であると好ましい。
合により存在させることができるが、水溶液用の媒質は
全体的にあるいは実質的に水性であると好ましい。
凍結乾燥医薬製剤から得られる非経腸投与用溶液は患者
の血清と通張、低張ま7?+は等張であることができる
。しかしながら、望ましく′ない副作用を回避するため
に、非経腸投与用溶液に等張であると好ましく、低度の
変化は生理学的にあまり関係法ない。実質的に等仮性の
非経腸投与用溶液は溶液の張度を要求されるレベルに上
昇させることができる生理学的に許容されうる助剤を含
ませることにより得ることができる。このような助剤は
凍結乾燥医薬製剤中にすでに存在するように凍結乾燥さ
せる水溶液の中に含ませることができ、あるいは所望の
非経腸投与用溶液を得るためにこの □ような製剤
全溶解するために用いられる中性または酸性−の水の中
に含有させることもできる。このような助剤の例に当技
術でよく知られており、デキストロース(無水物形また
は一水和物形)および塩化ナトリウムおよびまたその混
合物を包含する。水溶液または溶解用水中のこのような
助剤の濃度は使用する物質により変わることは勿論のこ
とである。塩化ナトリウムの場合に、この濃度は好まし
くは7〜10m9/ml、さらに好ましくは約8.5〜
/祷であり、この濃度にしばしば生理食塩液または生理
食塩水と称される濃度である。無水デキストロースの場
合に、その濃度は好ましくは60〜70r!1g/d、
さらに好ましくは約50■/−である。
の血清と通張、低張ま7?+は等張であることができる
。しかしながら、望ましく′ない副作用を回避するため
に、非経腸投与用溶液に等張であると好ましく、低度の
変化は生理学的にあまり関係法ない。実質的に等仮性の
非経腸投与用溶液は溶液の張度を要求されるレベルに上
昇させることができる生理学的に許容されうる助剤を含
ませることにより得ることができる。このような助剤は
凍結乾燥医薬製剤中にすでに存在するように凍結乾燥さ
せる水溶液の中に含ませることができ、あるいは所望の
非経腸投与用溶液を得るためにこの □ような製剤
全溶解するために用いられる中性または酸性−の水の中
に含有させることもできる。このような助剤の例に当技
術でよく知られており、デキストロース(無水物形また
は一水和物形)および塩化ナトリウムおよびまたその混
合物を包含する。水溶液または溶解用水中のこのような
助剤の濃度は使用する物質により変わることは勿論のこ
とである。塩化ナトリウムの場合に、この濃度は好まし
くは7〜10m9/ml、さらに好ましくは約8.5〜
/祷であり、この濃度にしばしば生理食塩液または生理
食塩水と称される濃度である。無水デキストロースの場
合に、その濃度は好ましくは60〜70r!1g/d、
さらに好ましくは約50■/−である。
水gih場合によりこの種の凍結乾・凍医薬製剤が通常
含封する添加剤?含有できる。このような例としてはヒ
ト血清アルブミン、結合剤およびマニトール、乳糖およ
びグルコースのような充填剤全包含する。さらに、t−
pAはガラスおよびプラスチック表面に吸着する傾向が
あり、従ってこのような吸着を防止するか、または最低
にするために、水溶液中に表面活性剤を含有させること
が望ましいことがある。このような表面活性剤の例には
[ライ−780J (Tvveen 3 [] )の商
品名で市販されているような無水ソルビトールの脂肪酸
S分エステルのポリオキシエチレン誘導体が含まれる。
含封する添加剤?含有できる。このような例としてはヒ
ト血清アルブミン、結合剤およびマニトール、乳糖およ
びグルコースのような充填剤全包含する。さらに、t−
pAはガラスおよびプラスチック表面に吸着する傾向が
あり、従ってこのような吸着を防止するか、または最低
にするために、水溶液中に表面活性剤を含有させること
が望ましいことがある。このような表面活性剤の例には
[ライ−780J (Tvveen 3 [] )の商
品名で市販されているような無水ソルビトールの脂肪酸
S分エステルのポリオキシエチレン誘導体が含まれる。
本発明の驚くべき利点の一つとしては、t−PAの実質
的に増大した溶解度に別にして、凍結乾燥医薬製剤の再
構成により得られる酸性非経腸投与用溶液の使用が患者
に投与した時にいづれか有意の有害な生理学的作用上水
さないことにある。血流は一般に、溶液のPHk接触す
るとほとんどすぐに中性に上昇させるように見え、t−
PAは迅速に血流内に分布される。しかしながら、この
方法はいづれの方法でも実質的に妨害されないことおよ
びこの非経腸投与用溶液および凍結乾燥させる水溶液お
よびまた再構成用の水は強力な緩衝剤全含有しないこと
が好ましい。しかし、この方法を有意に阻害しない弱い
緩衝剤は含ませてもよく、酸性PHでt −PAそれ自
体がそれ自体で弱いlj剤として作用することも確かで
ある。さらにま元、ヒト血清アルブミンは弱い緩衝剤と
して作用できる。
的に増大した溶解度に別にして、凍結乾燥医薬製剤の再
構成により得られる酸性非経腸投与用溶液の使用が患者
に投与した時にいづれか有意の有害な生理学的作用上水
さないことにある。血流は一般に、溶液のPHk接触す
るとほとんどすぐに中性に上昇させるように見え、t−
PAは迅速に血流内に分布される。しかしながら、この
方法はいづれの方法でも実質的に妨害されないことおよ
びこの非経腸投与用溶液および凍結乾燥させる水溶液お
よびまた再構成用の水は強力な緩衝剤全含有しないこと
が好ましい。しかし、この方法を有意に阻害しない弱い
緩衝剤は含ませてもよく、酸性PHでt −PAそれ自
体がそれ自体で弱いlj剤として作用することも確かで
ある。さらにま元、ヒト血清アルブミンは弱い緩衝剤と
して作用できる。
t −PAが2〜5の−の水浴液中で実質的に増大しf
c溶解度に!することから、この凍結乾燥製剤の再構成
から得られる非経腸投与用溶液にはt −PAの溶解度
全増強するためのリジンまたにオルニチンあるいはその
混合物のようないづれか追加の助剤全。含有させる必要
はない。
c溶解度に!することから、この凍結乾燥製剤の再構成
から得られる非経腸投与用溶液にはt −PAの溶解度
全増強するためのリジンまたにオルニチンあるいはその
混合物のようないづれか追加の助剤全。含有させる必要
はない。
t −PAの水溶液は精製したt −PAの溶液7得、
次いで2〜5のpH?!する水性媒質用メジウムと交換
することにより、あるいは精製しfct −PA全2〜
5のpH’に有する水性メジウム中に溶解することによ
り調製できる。
次いで2〜5のpH?!する水性媒質用メジウムと交換
することにより、あるいは精製しfct −PA全2〜
5のpH’に有する水性メジウム中に溶解することによ
り調製できる。
t −PAの精製はクロマトグラフィカラムから強力な
緩衝剤全含有する溶液としてタンパク全溶離する工程を
最終工程として含むことができる。
緩衝剤全含有する溶液としてタンパク全溶離する工程を
最終工程として含むことができる。
前記したように、非経腸投与用溶液および従って凍結乾
燥医薬製剤および水溶液は強力な緩衝剤を含■していな
い。従って、その除去を行なう簡便な手段としてメジウ
ムの交換に透析全使用すべきである。透析はn製溶液が
2〜5の−を有する水性メジウムに対して透析される透
析管または人工腎臓を用いて実施できる。特に精製溶液
中のt−pAの濃度が高い場合には、先ずこの溶液のp
t(′に2〜5に調整することが望ましいことがある。
燥医薬製剤および水溶液は強力な緩衝剤を含■していな
い。従って、その除去を行なう簡便な手段としてメジウ
ムの交換に透析全使用すべきである。透析はn製溶液が
2〜5の−を有する水性メジウムに対して透析される透
析管または人工腎臓を用いて実施できる。特に精製溶液
中のt−pAの濃度が高い場合には、先ずこの溶液のp
t(′に2〜5に調整することが望ましいことがある。
強力な緩衝剤全除去するとともにメジウムを交換するた
めのもう一つの手段は精製浴液をゲル濾過し、次いで2
〜5のpHff1!する水性メジウムでカラムを展開す
る方法である。
めのもう一つの手段は精製浴液をゲル濾過し、次いで2
〜5のpHff1!する水性メジウムでカラムを展開す
る方法である。
沈殿した固体の形のt −PAは好ましくは精製溶液か
らそのP)I i約5.5に調整し、ii’iその凍結
点のすぐ上の温度まで冷却し、次いでたとえば遠心分離
によりタンパク全敗り…すことにより得ることができる
。沈殿した固体は次いで2〜5のpH’に!する水性媒
質中に常法により溶解できる。
らそのP)I i約5.5に調整し、ii’iその凍結
点のすぐ上の温度まで冷却し、次いでたとえば遠心分離
によりタンパク全敗り…すことにより得ることができる
。沈殿した固体は次いで2〜5のpH’に!する水性媒
質中に常法により溶解できる。
生成する水浴液は都合良く、たとえは濾過殺菌により殺
菌し、および次いでアンプルま′fcはバイアルのよう
な無菌プラスチックま几ハガラス容器に、たとえば0.
5〜20彪の容量で分配する。
菌し、および次いでアンプルま′fcはバイアルのよう
な無菌プラスチックま几ハガラス容器に、たとえば0.
5〜20彪の容量で分配する。
t −PAの水浴液は、好ましくは−10〜−40°C
の温度で冷凍する。冷凍した水溶液は次いで、好ましく
はこの温度に真空乾燥全開始するまで保持するO 冷凍した水溶液の真空乾燥は適宜に実施でき、たとえば
0601〜0.1トールで実質的に全ての冷凍液の除去
が行なわれるまで充分な時間、部分的真空または完全真
空下に乾燥させること全包含する。
の温度で冷凍する。冷凍した水溶液は次いで、好ましく
はこの温度に真空乾燥全開始するまで保持するO 冷凍した水溶液の真空乾燥は適宜に実施でき、たとえば
0601〜0.1トールで実質的に全ての冷凍液の除去
が行なわれるまで充分な時間、部分的真空または完全真
空下に乾燥させること全包含する。
真空乾燥7行なう温度に通常、水浴液が実質的にまたは
完全に凍結した形で維持されるように、処理の開始時点
で−30〜−40°Cである。処理が進行し、水が除去
されるにつれて、温度は室温に達するまで次第に上昇す
ることかある。最後の痕跡量の水をできるだけ除去する
ために、処理の終了時点において室温まkはそのすぐ上
温度で約(LO1トールの実質的真空下に真空乾燥を行
なうと好ましい。生成する凍結乾燥医薬製剤の水含有量
は好ましくは2.5 %以下である。真空乾燥が完了し
友ならば、凍結乾燥させ友医薬製剤全含有する無菌のプ
ラスチックま几はガラス容器を都合良く密封する。
完全に凍結した形で維持されるように、処理の開始時点
で−30〜−40°Cである。処理が進行し、水が除去
されるにつれて、温度は室温に達するまで次第に上昇す
ることかある。最後の痕跡量の水をできるだけ除去する
ために、処理の終了時点において室温まkはそのすぐ上
温度で約(LO1トールの実質的真空下に真空乾燥を行
なうと好ましい。生成する凍結乾燥医薬製剤の水含有量
は好ましくは2.5 %以下である。真空乾燥が完了し
友ならば、凍結乾燥させ友医薬製剤全含有する無菌のプ
ラスチックま几はガラス容器を都合良く密封する。
冷凍した水溶液の真空乾燥中に、水が除去され、t −
PAが生理学的に許容されうる塩の形で残る。
PAが生理学的に許容されうる塩の形で残る。
従って、本発明はまfct −PAの生理学的に許容さ
れうる塩、特に塩酸塩のような生理学的に許容されうる
酸付加塩を提供する。
れうる塩、特に塩酸塩のような生理学的に許容されうる
酸付加塩を提供する。
本発明を使用することにより高濃度でt −PAを含有
する非経腸投与用溶液全提供できる凍結乾燥医薬製剤全
最初に得ることができる。従って、本発明はまた水を加
えるとt −pA2100,000IU/rnt より
大の、さらに特に500.000工U/dより大の、最
も特別に1.000.000工U/祷より大の濃度で提
供することができるt −PAの凍結乾燥医薬製剤全提
供する。
する非経腸投与用溶液全提供できる凍結乾燥医薬製剤全
最初に得ることができる。従って、本発明はまた水を加
えるとt −pA2100,000IU/rnt より
大の、さらに特に500.000工U/dより大の、最
も特別に1.000.000工U/祷より大の濃度で提
供することができるt −PAの凍結乾燥医薬製剤全提
供する。
投与用のt −PAの非経腸投与溶液を調製するには、
本発明の方法により得られt凍結乾燥医薬製剤を中性ま
たは酸性−の水で再構成する。凍結乾燥医薬製剤が得ら
れる水浴液が実質的に等張である場合に、再構成用の水
はまfc災質的に等張であると好ましい。
本発明の方法により得られt凍結乾燥医薬製剤を中性ま
たは酸性−の水で再構成する。凍結乾燥医薬製剤が得ら
れる水浴液が実質的に等張である場合に、再構成用の水
はまfc災質的に等張であると好ましい。
立坑のフィブリン網状構造全溶解する際のt−pAの生
物学的活性は血栓性障害の処置におけるその使用を導い
ている〔デ ランセラ) (TheLancet )、
1981年11月7日、1018〜1020頁:198
5年4月16日、842〜847頁;デ ニュー イン
グランド ジャーナル オプ メデイシy (The
New 11:nglana Journa:Lof
Medicine )、1984年、310(10)、
609〜616頁;同、1985年、312(14)、
962〜936頁〕。従って、本発明は哺乳動物におけ
る血栓性障害の処tm法金提供し、この方法は前記定義
のとおりの凍結乾燥医薬製剤から得られ7’Ct −P
Aの非経腸投与用溶液を哺乳動物に投与すること金含ん
でいる。別様には、ヒトまたは動物に使用する。特に血
栓性障害の処置に使用するkめのt −PAの凍結乾燥
医薬製剤全提供する。
物学的活性は血栓性障害の処置におけるその使用を導い
ている〔デ ランセラ) (TheLancet )、
1981年11月7日、1018〜1020頁:198
5年4月16日、842〜847頁;デ ニュー イン
グランド ジャーナル オプ メデイシy (The
New 11:nglana Journa:Lof
Medicine )、1984年、310(10)、
609〜616頁;同、1985年、312(14)、
962〜936頁〕。従って、本発明は哺乳動物におけ
る血栓性障害の処tm法金提供し、この方法は前記定義
のとおりの凍結乾燥医薬製剤から得られ7’Ct −P
Aの非経腸投与用溶液を哺乳動物に投与すること金含ん
でいる。別様には、ヒトまたは動物に使用する。特に血
栓性障害の処置に使用するkめのt −PAの凍結乾燥
医薬製剤全提供する。
血栓性障害の特定の例は当業者に知られているが、心筋
梗塞、深動脈血栓症、肺塞栓症および卒中を包含する。
梗塞、深動脈血栓症、肺塞栓症および卒中を包含する。
t −PAの主要投与経路は血管内、特に静脈内注入に
よるが、考えられるその他の投与経路、友とえば筋肉内
投与も使用できる。血管内注入は通常、注入用袋または
ビン内にあるいは電気的に操作される注入シリンジ内に
含有されている非経腸投与用溶液を用いて行なう。この
溶液は注入袋またはビンから患者に重力供給により、ま
たは注入ポンプ全使用することにより与えることができ
る。
よるが、考えられるその他の投与経路、友とえば筋肉内
投与も使用できる。血管内注入は通常、注入用袋または
ビン内にあるいは電気的に操作される注入シリンジ内に
含有されている非経腸投与用溶液を用いて行なう。この
溶液は注入袋またはビンから患者に重力供給により、ま
たは注入ポンプ全使用することにより与えることができ
る。
重力供給注入システム金使用すると、非経腸投与用溶液
の投与速度全総体的に充分に制御して供給できない。従
って、注入ポンプの使用が比較的高濃度のt−PAi含
有する溶液の場合に特に好適である。しかしながら、さ
らに好ましくは、投与速度を総体的により大きく制御で
きる電気的に操作する注入シリンジを使用する。
の投与速度全総体的に充分に制御して供給できない。従
って、注入ポンプの使用が比較的高濃度のt−PAi含
有する溶液の場合に特に好適である。しかしながら、さ
らに好ましくは、投与速度を総体的により大きく制御で
きる電気的に操作する注入シリンジを使用する。
血栓性障害を持つ哺乳動物の処置に■効なt−pAの量
は多くの因子、九とえば哺乳動物の年令および体重、処
置全必要とする正確な症状およびその重篤度、投与経路
を含む因子に依存して変わることは勿論であり、究極的
には主治医または主治獣医の裁量である。しかしながら
、たとえば冠状動脈血栓全溶解させる有効量は一般に1
50,000〜450.000工U/患者の体重#/時
の範囲テすると好ましい。従って、体重70kfiの成
人の場合に、1時間当りの有効量は一般に10.000
,000〜30,000,000工U1特に約20.0
00,000工U であり、この量は初回量を用いてま
たは用いることなく投与できる。さらに、この投与量は
いくつかの血栓症状、たとえば深動脈血栓症および急性
卒中のような症状に対しては、またはすでに再潅流され
ている冠状動脈の開放性全単純に維持するtめの場合に
はさらに少量にすると好ましい。
は多くの因子、九とえば哺乳動物の年令および体重、処
置全必要とする正確な症状およびその重篤度、投与経路
を含む因子に依存して変わることは勿論であり、究極的
には主治医または主治獣医の裁量である。しかしながら
、たとえば冠状動脈血栓全溶解させる有効量は一般に1
50,000〜450.000工U/患者の体重#/時
の範囲テすると好ましい。従って、体重70kfiの成
人の場合に、1時間当りの有効量は一般に10.000
,000〜30,000,000工U1特に約20.0
00,000工U であり、この量は初回量を用いてま
たは用いることなく投与できる。さらに、この投与量は
いくつかの血栓症状、たとえば深動脈血栓症および急性
卒中のような症状に対しては、またはすでに再潅流され
ている冠状動脈の開放性全単純に維持するtめの場合に
はさらに少量にすると好ましい。
これらの場合に、有効量は一般に7,000〜33.0
00工U/患者の体!IC9/時である。
00工U/患者の体!IC9/時である。
次側は本発明全例示するために示すものであって、本発
明全いづれの点でも制限しようとするものではない。
明全いづれの点でも制限しようとするものではない。
例 1
モレキュラー アンド セルラー バイオロジイ(Mo
1ecular and Ce1lular Biol
ogy )、1985年、5(7)、1750〜175
9頁の方法全使用して誘導され几培養した形成転換され
fc、CI(Oセルラインから得られfct −PAの
清浄にした収穫物でクロマトグラフィにより精製し、t
−PAio、17Mクエン酸ナトリウムおよび0.01
%(1量/容量)ツイーン80”k含有す′るpH5,
5の水浴液として採取する。浴液のpi−12塩酸で3
.0に調整し、生成する溶液2H−10カートリツジ(
Cartridge ) [アミコン社(八m1con
Lt4− )アッパー ヒル 、ストーンハウス、グ
ロセスターシャー(Upper Hlll、8tone
house、Gloucestershire )、英
国〕を用いて遠心分離により濃縮する。濃縮した水浴液
をゲル濾過カラム〔セファデックス(5ephaiax
) G −15[:l ;ファーマシア バイオチク
ノロシイ社(PharmaciaBiotechnol
ogy )、アップサラ、スエーデン(Uppsala
、 5vreaen ) 〕に適用し、0.01%(
1量/容量)ツイーン80金含有する0、85%塩類溶
液で3.0の−において溶出することによりさらに精製
する。このようにして得られた高度に精製されfc t
−PAの水溶液を便い捨て人工腎臓を用いてもう一度
濃縮する。t −PAは−を水酸化ナトリウムで5.5
に増大し、次いで懸濁液′(f−4°Cで2時間保持す
ることにより溶液から沈殿させる。t−pAに4°Cで
60分間、4000Xgで遠心分離することにより採取
する。このt −PAのペレツh i o、oi%(重
量/容量)ライ−780を含有する塩化ナトリウムの水
浴液(0,85%(重量/容量)〕に再溶解し、塩酸で
PI−13,0に調整する。使用した塩頌溶液の容量上
7,500,000工U/祷〜10、G OO,000
IU/mlの濃度tうるに必要なようにする。このt
−PAの溶液”kl]、[11%(重量/容量)ツイー
ン80に含有する塩化ナトリウムの水浴液CO,85%
(N量/容量)〕でさらに稀釈し、塩酸でpH3,0に
調整し、次いでま友同−酸性塩類溶液中の10%(重量
/容量)マニ) −ルの溶液”i 5.[10[+、[
1[+ [1工U/mtのt−PAii濃度およびマニ
トール25In9/dが得られるに充分な量で使用して
稀釈する。生成する溶液全フィルター殺菌し、次いでガ
ラスバイアル中に111Ltの容量で分配し、バイアル
を一35°Cで冷凍する。
1ecular and Ce1lular Biol
ogy )、1985年、5(7)、1750〜175
9頁の方法全使用して誘導され几培養した形成転換され
fc、CI(Oセルラインから得られfct −PAの
清浄にした収穫物でクロマトグラフィにより精製し、t
−PAio、17Mクエン酸ナトリウムおよび0.01
%(1量/容量)ツイーン80”k含有す′るpH5,
5の水浴液として採取する。浴液のpi−12塩酸で3
.0に調整し、生成する溶液2H−10カートリツジ(
Cartridge ) [アミコン社(八m1con
Lt4− )アッパー ヒル 、ストーンハウス、グ
ロセスターシャー(Upper Hlll、8tone
house、Gloucestershire )、英
国〕を用いて遠心分離により濃縮する。濃縮した水浴液
をゲル濾過カラム〔セファデックス(5ephaiax
) G −15[:l ;ファーマシア バイオチク
ノロシイ社(PharmaciaBiotechnol
ogy )、アップサラ、スエーデン(Uppsala
、 5vreaen ) 〕に適用し、0.01%(
1量/容量)ツイーン80金含有する0、85%塩類溶
液で3.0の−において溶出することによりさらに精製
する。このようにして得られた高度に精製されfc t
−PAの水溶液を便い捨て人工腎臓を用いてもう一度
濃縮する。t −PAは−を水酸化ナトリウムで5.5
に増大し、次いで懸濁液′(f−4°Cで2時間保持す
ることにより溶液から沈殿させる。t−pAに4°Cで
60分間、4000Xgで遠心分離することにより採取
する。このt −PAのペレツh i o、oi%(重
量/容量)ライ−780を含有する塩化ナトリウムの水
浴液(0,85%(重量/容量)〕に再溶解し、塩酸で
PI−13,0に調整する。使用した塩頌溶液の容量上
7,500,000工U/祷〜10、G OO,000
IU/mlの濃度tうるに必要なようにする。このt
−PAの溶液”kl]、[11%(重量/容量)ツイー
ン80に含有する塩化ナトリウムの水浴液CO,85%
(N量/容量)〕でさらに稀釈し、塩酸でpH3,0に
調整し、次いでま友同−酸性塩類溶液中の10%(重量
/容量)マニ) −ルの溶液”i 5.[10[+、[
1[+ [1工U/mtのt−PAii濃度およびマニ
トール25In9/dが得られるに充分な量で使用して
稀釈する。生成する溶液全フィルター殺菌し、次いでガ
ラスバイアル中に111Ltの容量で分配し、バイアル
を一35°Cで冷凍する。
0.05 )−ルで減圧全適用する。約24時間後に、
温度を徐々に5°Cに上昇させ、この温度で16時間保
持する。次いで、再度259Cに上昇させ、減圧t−0
,02トールにさらに24時間増大し、その後バイアル
を乾燥窒素の600トールの部分減圧下に密封する。
温度を徐々に5°Cに上昇させ、この温度で16時間保
持する。次いで、再度259Cに上昇させ、減圧t−0
,02トールにさらに24時間増大し、その後バイアル
を乾燥窒素の600トールの部分減圧下に密封する。
例 2
例1のt −PAの凍結乾燥製剤から得られた非経腸投
与用溶液の血栓俗解効果を頚静脈血栓のインビボモデル
で評価する。
与用溶液の血栓俗解効果を頚静脈血栓のインビボモデル
で評価する。
+a>方法
実験方法はコレン(Co11en )他により最初に記
載された方法〔ジエイ、タリン、インベスト。
載された方法〔ジエイ、タリン、インベスト。
(、L C11n、工nvest、 )、1986年、
71.368〜676頁〕に基本的に従う。
71.368〜676頁〕に基本的に従う。
例1の凍結乾燥製剤全、口、01%ツイーン80を含有
するpH3,0に調整し友無菌の等張塩類m液に迅速に
、完全に溶解する。かくして、500,000工U/I
Cgのt−PAk2時間注入するための非経腸投与用溶
液が得られる。注入は右太腿部静脈でカニユーレを用い
て行なう。4匹のニューシーラント白ウサギをこの実験
に使用する。注入後に、血栓溶解の程度全評価する。
するpH3,0に調整し友無菌の等張塩類m液に迅速に
、完全に溶解する。かくして、500,000工U/I
Cgのt−PAk2時間注入するための非経腸投与用溶
液が得られる。注入は右太腿部静脈でカニユーレを用い
て行なう。4匹のニューシーラント白ウサギをこの実験
に使用する。注入後に、血栓溶解の程度全評価する。
(1))結果
例1の凍結乾燥製剤から得られ之非経腸投与用浴液の血
栓俗解効果は血栓俗解チで表わして28.9±4.1で
ある。さらに、この溶液による有害な反応は見られない
。
栓俗解効果は血栓俗解チで表わして28.9±4.1で
ある。さらに、この溶液による有害な反応は見られない
。
第1図はt −PAの代表的アミノ酸配列會示すもので
あり、そして第2図はt −PAの90番目の位置のア
ミノ翠とゾロリンC末端との間のアミノ酸配列の仮定構
造デポすものである。
あり、そして第2図はt −PAの90番目の位置のア
ミノ翠とゾロリンC末端との間のアミノ酸配列の仮定構
造デポすものである。
Claims (30)
- (1)pHが2〜5である組織プラスミノーゲン活性化
因子(t−PA)の冷凍水溶液を真空乾燥させることか
らなるt−PAの凍結乾燥医薬製剤の製造方法。 - (2)t−PAが一鎖形または二鎖形である特許請求の
範囲第1項に記載の方法。 - (3)t−PAが第1図に記載されているアミノ酸配列
を有するか、またはセリンN−末端から245番目のア
ミノ酸がメチオニンの代りにバリンである以外は第1図
と同一アミノ酸配列を有し、場合により最初の3つのア
ミノ酸のいづれかが存在していないか、または場合によ
りGly−Ala−Argの追加のポリペプチドN−末
端先行配列を有するものである特許請求の範囲第1項ま
たは第2項に記載の方法。 - (4)t−PAをDNA組換え技術を用いて誘導された
培養した形質転換またはトランスフエクシヨンされたセ
ルラインから得る特許請求の範囲第1項〜第3項のいづ
れか一項に記載の方法。 - (5)水溶液中のt−PAの濃度が100,000IU
/mlより大である特許請求の範囲第1項〜第4項のい
づれか一項に記載の方法。 - (6)t−PAの濃度が500,000IU/mlより
大である特許請求の範囲第5項に記載の方法。 - (7)t−PAの濃度が1,000,000IU/ml
より大である特許請求の範囲第6項に記載の方法。 - (8)t−PAの濃度が約5,000,000IU/m
lである特許請求の範囲第7項に記載の方法。 - (9)水溶液のpHが2〜4.5である特許請求の範囲
第1項〜第8項のいづれか一項に記載の方法。 - (10)pHが2.5〜4.0である特許請求の範囲第
9項に記載の方法。 - (11)pHが2.8〜3.5である特許請求の範囲第
10項に記載の方法。 - (12)pHが約3.0である特許請求の範囲第11項
に記載の方法。 - (13)水溶液用のメジウムが全体的にまたは実質的に
水性である特許請求の範囲第1項〜第12項に記載の方
法。 - (14)水溶液用のメジウムが溶液をヒト血清と実質的
に等張にする生理学的に許容されうる助剤を含有する特
許請求の範囲第1項〜第13項のいづれか一項に記載の
方法。 - (15)生理学的に許容されうる助剤が塩化ナトリウム
である特許請求の範囲第14項に記載の方法。 - (16)生理学的に許容されうる助剤がデキストロース
である特許請求の範囲第14項に記載の方法。 - (17)水溶液が表面活性剤を含有する特許請求の範囲
第1項〜第16項のいづれか一項に記載の方法。 - (18)水溶液が実質的に緩衝されていない特許請求の
範囲第1項〜第17項に記載の方法。 - (19)水溶液がリジンまたはオルニチンあるいはその
塩を実質的に含有していない特許請求の範囲第1項〜第
18項のいづれか一項に記載の方法。 - (20)水溶液を殺菌する特許請求の範囲1項〜第19
項のいづれか一項に記載の方法。 - (21)前記特許請求の範囲第1項〜第20項のいづれ
か一項に記載の方法に従い得られる凍結乾燥医薬製剤。 - (22)水に溶解すると、100,000IU/mlよ
り大きいt−PA濃度を付与できるt−PAの凍結乾燥
医薬製剤。 - (23)濃度が500,000IU/mlより大きい特
許請求の範囲第22項に記載の凍結乾燥医薬製剤。 - (24)濃度が1,000,000IU/mlより大き
い特許請求の範囲第23項に記載の凍結乾燥医薬製剤。 - (25)特許請求の範囲第21項〜第24項のいづれか
一項に定義されているとおりの凍結乾燥医薬製剤の密封
容器。 - (26)t−PAの生理学的に許容されうる塩。
- (27)t−PAの生理学的に許容されうる酸付加塩。
- (28)t−PAの塩酸塩。
- (29)特許請求の範囲第21項〜第24項のいづれか
一項に定義されているとおりの凍結乾燥医薬製剤から得
られるt−PAの非経腸投与用溶液を哺乳動物に投与す
ることを含む哺乳動物における血栓性障害の処置方法。 - (30)ヒトまたは動物医療、特に血栓性障害の処置に
使用するための特許請求の範囲第21項〜第24項のい
づれか一項に定義されているとおりの凍結乾燥医薬製剤
。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB858513358A GB8513358D0 (en) | 1985-05-28 | 1985-05-28 | Formulation |
GB8513358 | 1985-05-28 | ||
GB8521705 | 1985-08-31 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5230427A Division JPH0759517B2 (ja) | 1985-05-28 | 1993-09-16 | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有医薬組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6226233A true JPS6226233A (ja) | 1987-02-04 |
JPH0369332B2 JPH0369332B2 (ja) | 1991-10-31 |
Family
ID=10579735
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61122049A Granted JPS6226233A (ja) | 1985-05-28 | 1986-05-27 | 組織プラスミノ−ゲン活性化因子含有医薬組成物 |
JP61122050A Granted JPS6226234A (ja) | 1985-05-28 | 1986-05-27 | 非経口溶液製剤 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61122050A Granted JPS6226234A (ja) | 1985-05-28 | 1986-05-27 | 非経口溶液製剤 |
Country Status (3)
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---|---|
JP (2) | JPS6226233A (ja) |
GB (1) | GB8513358D0 (ja) |
ZA (2) | ZA863956B (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62292729A (ja) * | 1986-06-12 | 1987-12-19 | Toyobo Co Ltd | ヒト子宮組織由来プラスミノ−ゲン活性化因子製剤 |
JPH0272124A (ja) * | 1988-06-20 | 1990-03-12 | Wellcome Found Ltd:The | 組織プラスミノーゲン活性化因子製剤 |
JPH06183995A (ja) * | 1985-05-28 | 1994-07-05 | Wellcome Found Ltd:The | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有医薬組成物 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NO882226L (no) * | 1987-05-22 | 1988-11-23 | Zymogenetics Inc | Fibrinolytiske proteiner. |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5728009A (en) * | 1980-06-11 | 1982-02-15 | Leuven Res & Dev Vzw | Novel plasminogen activator and drug having thrombosis dissolving activity |
JPS5942321A (ja) * | 1982-05-05 | 1984-03-08 | ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド | ヒト組織プラスミノ−ゲン活性化因子 |
JPS59118717A (ja) * | 1982-12-14 | 1984-07-09 | サウスアフリカン・インヴエンシヨンズ・デイヴエロツプメント・コ−ポレ−シヨン | プラスミノーゲン活性化剤 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60181028A (ja) * | 1984-02-29 | 1985-09-14 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 組織プラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−の溶解補助法 |
JPS60184026A (ja) * | 1984-03-01 | 1985-09-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 組織プラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−の溶解補助方法 |
-
1985
- 1985-05-28 GB GB858513358A patent/GB8513358D0/en active Pending
-
1986
- 1986-05-27 ZA ZA863956A patent/ZA863956B/xx unknown
- 1986-05-27 JP JP61122049A patent/JPS6226233A/ja active Granted
- 1986-05-27 ZA ZA863955A patent/ZA863955B/xx unknown
- 1986-05-27 JP JP61122050A patent/JPS6226234A/ja active Granted
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5728009A (en) * | 1980-06-11 | 1982-02-15 | Leuven Res & Dev Vzw | Novel plasminogen activator and drug having thrombosis dissolving activity |
JPS5942321A (ja) * | 1982-05-05 | 1984-03-08 | ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド | ヒト組織プラスミノ−ゲン活性化因子 |
JPS59118717A (ja) * | 1982-12-14 | 1984-07-09 | サウスアフリカン・インヴエンシヨンズ・デイヴエロツプメント・コ−ポレ−シヨン | プラスミノーゲン活性化剤 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06183995A (ja) * | 1985-05-28 | 1994-07-05 | Wellcome Found Ltd:The | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有医薬組成物 |
JPS62292729A (ja) * | 1986-06-12 | 1987-12-19 | Toyobo Co Ltd | ヒト子宮組織由来プラスミノ−ゲン活性化因子製剤 |
JPH0272124A (ja) * | 1988-06-20 | 1990-03-12 | Wellcome Found Ltd:The | 組織プラスミノーゲン活性化因子製剤 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0369332B2 (ja) | 1991-10-31 |
ZA863956B (en) | 1988-04-27 |
GB8513358D0 (en) | 1985-07-03 |
JPS6226234A (ja) | 1987-02-04 |
JPS6338327B2 (ja) | 1988-07-29 |
ZA863955B (en) | 1988-04-27 |
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