JPH1084965A

JPH1084965A - Selection of individual having fertility recovering gene in plant of capsicum

Info

Publication number: JPH1084965A
Application number: JP8243422A
Authority: JP
Inventors: Koichi Kondo; 浩一近藤; Tetsuo Sasakuma; 哲夫笹隈
Original assignee: KIHARA KINEN YOKOHAMA SEIMEI K; KIHARA KINEN YOKOHAMA SEIMEI KAGAKU SHINKO ZAIDAN; TOKITA TANENAE KK
Current assignee: KIHARA KINEN YOKOHAMA SEIMEI K; KIHARA KINEN YOKOHAMA SEIMEI KAGAKU SHINKO ZAIDAN; TOKITA TANENAE KK
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1996-09-13
Publication date: 1998-04-07

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To simply judge the existence of a fertility recovering gene in high accuracy by selecting an individual containing a specific DNA linked to a fertility recovering gene. SOLUTION: An individual containing a DNA of the formula or substantially the same DNA as that of the formula is selected. The selection can be applied any plant as long as it is a plant belonging to the genus Capsicum and the selection is preferably applied a plant belonging to Capsicum annuum. Preferably, a certain individual is judged whether it has the DNA of the formula by using PCR.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、トウガラシ属（カ
プシウム（Capsicum）属）植物における稔性回復遺伝子
を有する個体の効率的な選抜方法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for efficiently selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum genus plant.

【０００２】[0002]

【従来の技術】トウガラシ属植物の細胞質雄性不稔性を
利用したＦ１種子生産では、雌系統には、雄性不稔細胞
質を有し、雄性不稔遺伝子を核遺伝子にもつ系統を用
い、雄系統には、雌系統の細胞質雄性不稔性に対する稔
性回復遺伝子を有する系統を用いることが必要である。
ある雄系統が稔性回復遺伝子を有するかどうかは外見か
らは判断できないので、実際に細胞質雄性不稔系統と交
配し、得られるＦ１個体が自殖により着果、結実するか
どうかを調べなければ、稔性回復遺伝子の有無を判断す
ることはできない。しかし、このような作業は多くの時
間と労力を要するため、より簡易に稔性回復遺伝子の有
無を判断する方法の開発が望まれていた。2. Description of the Related Art In F1 seed production utilizing the cytoplasmic male sterility of a Capsicum plant, a female line having a male sterile cytoplasm and a male sterile gene in a nuclear gene is used as a female line. Requires the use of a line having a fertility-restoring gene for the cytoplasmic male sterility of the female line.
Since it is not possible to judge from the appearance whether a certain male strain has a fertility restoring gene, it is necessary to actually cross with a cytoplasmic male sterile strain and examine whether the resulting F1 individuals settle and bear fruit by selfing. However, the presence or absence of the fertility restoring gene cannot be determined. However, since such an operation requires much time and labor, it has been desired to develop a method for more simply determining the presence or absence of a fertility restoring gene.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来技術の問題を解決することをその目的とするもので
あり、具体的には、稔性回復遺伝子の有無を簡易かつ高
い精度で判断する手段を提供することを目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to solve such problems of the prior art. Specifically, the present invention determines the presence or absence of a fertility restoring gene simply and with high accuracy. It is intended to provide a means for making a judgment.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するため、鋭意検討を重ねた結果、稔性回復遺伝子
と連鎖するＤＮＡ断片を見出し、この知見に基づき本発
明を完成するに至った。即ち、本発明は、配列番号１で
表されるＤＮＡ、又は配列番号１で表されるＤＮＡと実
質的に同一のＤＮＡを有する個体を選抜することにより
稔性回復遺伝子を有する個体を選抜することを特徴とす
るトウガラシ属植物における稔性回復遺伝子を有する個
体の選抜方法である。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies in order to solve the above problems, and as a result, have found a DNA fragment linked to the fertility restoring gene, and based on this finding, have completed the present invention. Reached. That is, the present invention is to select an individual having a fertility-restoring gene by selecting an individual having a DNA represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA substantially identical to the DNA represented by SEQ ID NO: 1. This is a method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant.

【０００５】[0005]

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の選抜方法は、配列番号１で表されるＤＮＡ、又
は配列番号１で表されるＤＮＡと実質的に同一のＤＮＡ
を有する個体を選抜することにより稔性回復遺伝子を有
する個体を選抜する。ここで、「配列番号１で表される
ＤＮＡと実質的に同一のＤＮＡ」とは、配列番号１で表
されるＤＮＡと同様に稔性回復遺伝子と連鎖し、かつ配
列番号１で表されるＤＮＡと同様の手段でその有無を確
認することができるＤＮＡをいう。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The selection method of the present invention comprises the steps of: providing a DNA represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA substantially identical to the DNA represented by SEQ ID NO: 1
By selecting the individual having the fertility restoring gene, the individual having the fertility restoring gene is selected. Here, the “DNA substantially identical to the DNA represented by SEQ ID NO: 1” is linked to the fertility restoring gene and is represented by SEQ ID NO: 1 similarly to the DNA represented by SEQ ID NO: 1. Refers to DNA whose presence can be confirmed by the same means as DNA.

【０００６】本発明の選抜方法は、トウガラシ属に属す
る植物であればどのような植物にも適用できるが、カプ
シウム・アヌウム（Capsicum annuum ）に属する植物に
適用するのが好ましい。ある個体が、配列番号１で表さ
れるＤＮＡ、又は配列番号１で表されるＤＮＡと実質的
に同一のＤＮＡ（以下、これらのＤＮＡを「マーカーＤ
ＮＡ」という）を有するかどうかは、サザンハイブリダ
イゼーションを利用して判断することもできるが、ポリ
メラーゼ連鎖反応（以下、「ＰＣＲ」という）を利用し
て判断することが好ましい。The selection method of the present invention can be applied to any plant belonging to the genus Capsicum, but is preferably applied to a plant belonging to Capsicum annuum. A certain individual is asked to express the DNA represented by SEQ ID NO: 1 or the DNA substantially identical to the DNA represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter, these DNAs are referred to as “marker D”).
NA) can be determined using Southern hybridization, but it is preferable to determine using polymerase chain reaction (hereinafter, referred to as “PCR”).

【０００７】ＰＣＲを利用する手段は、供試しようとす
る個体から抽出したＤＮＡを鋳型とし、マーカーＤＮＡ
の全体又は一部を増幅させることができるプライマーを
用いて、ＰＣＲを行い、増幅産物の有無によりマーカー
ＤＮＡの有無を判断する。鋳型として用いるＤＮＡは、
トウガラシ属植物から常法に従って抽出することができ
る。ＤＮＡは、植物体のどの部位から抽出してもよく、
また、供試する植物の成長段階も問わない。Means utilizing PCR is to use a DNA extracted from an individual to be tested as a template,
PCR is performed using a primer capable of amplifying all or part of the DNA, and the presence or absence of the marker DNA is determined based on the presence or absence of the amplification product. DNA used as a template is
It can be extracted from capsicum plants according to a conventional method. DNA may be extracted from any part of the plant,
Also, the stage of growth of the plant to be tested does not matter.

【０００８】マーカーＤＮＡの全体を増幅させることの
できるプライマーとしては、5'-AGAATTGGACGA-3'を挙げ
ることができる。マーカーＤＮＡの一部を増幅させるプ
ライマーは、配列番号１に記載の塩基配列の一部と対応
し、かつ、稔性回復遺伝子を有する個体に特異的なＤＮ
Ａ断片を増幅させることができるオリゴヌクレオチドで
あれば特に制限はないが、センスプライマーとしては、
配列番号２記載の塩基配列の一部と同一のオリゴヌクレ
オチドが好ましく、アンチセンスプライマーとしては、
配列番号３記載の塩基配列の一部と相補的なオリゴヌク
レオチドが好ましい。これらの中でも最も好ましいセン
スプライマーとしては、5'-ATTTTCAGATTGTGGCGACG-3'を
挙げることができ、最も好ましいアンチセンスプライマ
ーとしては、5'-CGACCATCACGACGAGG -3'を挙げることが
できる。ＰＣＲの反応条件は、通常の反応と同様のもの
でよいが、5'-AGAATTGGACGA-3'をプライマーとして用い
る場合、アニーリング温度を低く設定することが望まし
い。As a primer capable of amplifying the entire marker DNA, 5'-AGAATTGGACGA-3 'can be mentioned. The primer for amplifying a part of the marker DNA corresponds to a part of the base sequence of SEQ ID NO: 1 and is a DN specific to an individual having a fertility restoring gene.
There is no particular limitation as long as it is an oligonucleotide capable of amplifying the A fragment, but as a sense primer,
An oligonucleotide identical to a part of the nucleotide sequence described in SEQ ID NO: 2 is preferable, and as the antisense primer,
Oligonucleotides complementary to a part of the base sequence described in SEQ ID NO: 3 are preferred. Among these, the most preferred sense primer is 5'-ATTTTCAGATTGTGGCGACG-3 ', and the most preferred antisense primer is 5'-CGACCATCACGACGAGG-3'. The reaction conditions for PCR may be the same as those for ordinary reactions. However, when 5′-AGAATTGGACGA-3 ′ is used as a primer, it is desirable to set the annealing temperature low.

【０００９】[0009]

【実施例】以下に、実施例により本発明を更に詳細に説
明する。〔実施例１〕稔性回復遺伝子と連鎖するＤＮＡ断片をＲ
ＡＰＤ（Randum amplified polymorphic DNA）法により
検索した。トウガラシＦ１品種「DaJoAa」（東原農産よ
り入手）の雄系統、雌系統のそれぞれの成葉（２g ）か
らＣＴＡＢ法（Murray,H.G.and Thompson,W.F. 1980. R
apid isolation of high molecular weight plant DNA.
Nucleic Acids Res.8:4321-4325. ）によりＤＮＡを抽
出した。得られたＤＮＡを鋳型とし、69種類の12ヌクレ
オチド（ベックス社製）をプライマーとして、ＤＮＡ増
幅装置であるGeneAmp PCR System 9600（Perkin Elmer
社製）を用いてＰＣＲを行った。反応は、熱変性94℃、
１分、アニーリング39℃、１分、伸長反応72℃、２分の
35サイクルで行った。得られた増幅断片について、1.5
％アガロースゲルを用いて電気泳動を行った。この結
果、69種類のプライマーうち30のプライマーで、雄系統
と雌系統の間に多型が見られた。多型が検出された一例
を図１に示す。図１では、７種類のプライマーを用いて
増幅を行っているが、プライマー「Ａ０９」（ベックス
社の品名）を用いた場合には（左から11番目と12番目の
レーン）、雌雄間で泳動像に差異が生じた。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. [Example 1] A DNA fragment linked to a fertility restoring gene was
It was searched by APD (Randum amplified polymorphic DNA) method. The CTAB method (Murray, HGand Thompson, WF 1980. R) was performed from the adult leaves (2 g) of the male and female lines of the pepper F1 variety "DaJoAa" (obtained from Higashihara Nosan).
apid isolation of high molecular weight plant DNA.
Nucleic Acids Res. 8: 4321-4325.) To extract DNA. Using the obtained DNA as a template and 69 kinds of 12 nucleotides (manufactured by Vex) as primers, a GeneAmp PCR System 9600 (Perkin Elmer) which is a DNA amplification device
PCR). The reaction is heat denaturation at 94 ° C,
1 minute, annealing 39 ° C, 1 minute, extension reaction 72 ° C, 2 minutes
Performed in 35 cycles. For the amplified fragment obtained, 1.5
Electrophoresis was performed using a% agarose gel. As a result, polymorphism was observed between male and female strains in 30 of the 69 primers. One example in which a polymorphism was detected is shown in FIG. In FIG. 1, amplification is performed using seven types of primers. When primer “A09” (brand name of Vex) is used (eleventh and twelfth lanes from the left), electrophoresis between males and females is performed. There were differences in the images.

【００１０】雌雄間で多型がみられたプライマー30種類
のうち雄系統に特異的な増幅断片が検出されたのは16種
類であった。この16種類のプライマーを用い、bulked s
egregant analysis法により、稔性回復系統に特異的に
検出される断片の検索を行った。この結果、プライマー
5'-AGAATTGGACGA-3'（ベックス社の品名「Ａ０９」）を
用いた場合に、約1.3 kbの稔性回復系統に特異的な増幅
断片が検出された。図２は、「DaJoAa」の雄系統、雌系
統及びＦ２個体から抽出たＤＮＡを鋳型とし、「Ａ０
９」をプライマーとしてＰＣＲを行った場合の増幅産物
の電気泳動像を示す。左から２番目のレーンが「DaJoA
a」の雌系統であり、左から３番目のレーンが「DaJoA
a」の雄系統であり、左から４〜７番目のレーンがＦ２
個体のうち稔性を有する個体であり、左から８〜11番目
のレーンがＦ２個体のうち稔性を有しない個体である。
この図が示すように、「DaJoAa」の雄系統及び稔性を有
する個体には、約1.3 kbの特異的な増幅断片が検出され
た。Among the 30 primers in which polymorphism was observed between male and female, 16 of them detected amplified fragments specific to male strains. Using these 16 primers, bulked s
A fragment specifically detected in the fertility-recovery line was searched by egregant analysis. As a result, the primer
When 5'-AGAATTGGACGA-3 '(product name "A09" manufactured by Vex Inc.) was used, an amplified fragment of about 1.3 kb specific to the fertility restoration line was detected. FIG. 2 shows that DNA extracted from male and female strains of “DaJoAa” and F2 individuals was used as a template, and “A0
9 shows an electrophoresis image of an amplification product when PCR was performed using “9” as a primer. The second lane from the left is "DaJoA
a), and the third lane from the left is “DaJoA
a), and the fourth to seventh lanes from the left are F2
Among the individuals, the individuals having fertility, and the eighth to eleventh lanes from the left are individuals having no fertility among the F2 individuals.
As shown in this figure, a specific amplified fragment of about 1.3 kb was detected in the male strain of “DaJoAa” and individuals having fertility.

【００１１】雄系統及び稔性を有する個体に特異的な増
幅断片の塩基配列を決定するため、以下の操作を行っ
た。ＰＣＲ産物を電気泳動した後、稔性回復系統に特異
的に検出される約1.3 kbの断片をゲルから切り出した。
遠心法により、ゲル中のＤＮＡを抽出し、上記と同様の
条件でＰＣＲを行い、このＰＣＲ産物をクローニングに
供試した。ベクターpBluescript II SK(-)（Stratagene
社製）を制限酵素EcoR V（Takara社製）で切断した後、
rTaq polymerase （Takara社製）によりｄＴＴＰを付加
したＴ−ベクターを作出した。ＰＣＲ産物とＴ−ベクタ
ーのライゲーションは、Takara社製のライゲーションキ
ットを用い、大腸菌JM109 （TOYOBO社製）に形質転換し
た。The following operations were performed to determine the base sequences of amplified fragments specific to male strains and fertile individuals. After electrophoresis of the PCR product, a fragment of about 1.3 kb specifically detected in the fertility-recovery line was cut out from the gel.
The DNA in the gel was extracted by centrifugation, PCR was performed under the same conditions as above, and this PCR product was subjected to cloning. Vector pBluescript II SK (-) (Stratagene
After digestion with EcoR V (Takara)
A T-vector to which dTTP was added was created using rTaq polymerase (manufactured by Takara). For ligation of the PCR product and the T-vector, Escherichia coli JM109 (manufactured by TOYOBO) was transformed using a ligation kit manufactured by Takara.

【００１２】塩基配列の決定は、大腸菌より回収したプ
ラスミドを鋳型にSequiTherm Cycle-Sequencing Kit fo
r LI-COR Sequencing(Epicenter Technology社製）を用
いたCycle-Sequencing反応を行った後、LI-COR社製のＤ
ＮＡシーケンサーにより塩基配列を決定した。以上の操
作の結果、特異的な増幅断片の塩基配列は、配列番号１
に示す通りであり、その長さは1,339bp であった。な
お、配列番号１における１番目から252番目の塩基配列
は、18ＳｒＲＮＡ遺伝子と高い相同性を示した。The nucleotide sequence is determined by using the plasmid recovered from Escherichia coli as a template and using the SequiTherm Cycle-Sequencing Kit fo
r After performing a Cycle-Sequencing reaction using LI-COR Sequencing (Epicenter Technology),
The nucleotide sequence was determined using an NA sequencer. As a result of the above operation, the nucleotide sequence of the specific amplified fragment was SEQ ID NO: 1.
And its length was 1,339 bp. In addition, the 1st to 252nd base sequences in SEQ ID NO: 1 showed high homology with the 18S rRNA gene.

【００１３】〔実施例２〕トウガラシＦ１品種「DaJoA
a」を自殖し、Ｆ２集団64個体の稔性を調査した。この
結果、稔性を有する個体と稔性を有しない個体が47個体
と17個体に分離した。分離比が３：１であることから、
稔性を回復するという形質は、一つの優性遺伝子により
支配されていることが確認された。上記のＦ２集団64個
体のそれぞれから抽出したＤＮＡを鋳型とし、「Ａ０
９」をプライマーとして、ＰＣＲを行い、その増幅産物
について電気泳動を行った。この結果、雄系統に特異的
に検出された増幅断片は、稔性の有しないすべてのＦ２
個体（１７個体）で検出されなかった。また、この特異
的増幅断片は、稔性を有するＦ２個体４７個体中４６個
体で検出された。これにより、この雄系統に特異的な増
幅断片は、稔性回復遺伝子と強く連鎖するＤＮＡ断片で
あることが確認された。図３に、「DaJoAa」の雄系統、
雌系統及びＦ２個体から抽出したＤＮＡを鋳型とし、
「Ａ０９」をプライマーとして、ＰＣＲを行った場合の
増幅産物の電気泳動像を示す。左から１番目のレーンが
「DaJoAa」の雌系統であり、左から２番目のレーンが
「DaJoAa」の雄系統であり、左から３、５、６、７、
９、１０番目のレーンがＦ２個体のうち稔性を有する個
体であり、左から４、８番目のレーンがＦ２個体のうち
稔性を有しない個体である。この図が示すように、Ｆ２
個体のうち、稔性を有しない個体では、雄系統に特異的
に検出される増幅断片はみられないが、稔性を有する個
体では、雄系統に特異的に検出される増幅断片がみられ
る。Example 2 Pepper F1 variety "DaJoA"
"a" was selfed and the F2 population of 64 individuals was examined for fertility. As a result, fertile individuals and non-fertile individuals were separated into 47 individuals and 17 individuals. Since the separation ratio is 3: 1,
It was confirmed that the trait of restoring fertility was controlled by one dominant gene. Using DNA extracted from each of the 64 individuals in the F2 population as a template, “A0
PCR was performed using “9” as a primer, and the amplified product was subjected to electrophoresis. As a result, the amplified fragment specifically detected in the male strain was found in all non-fertile F2
It was not detected in individuals (17 individuals). This specific amplified fragment was detected in 46 of 47 fertile F2 individuals. This confirmed that the amplified fragment specific to this male strain was a DNA fragment strongly linked to the fertility restoring gene. Figure 3 shows the male strain of "DaJoAa",
Using DNA extracted from the female strain and the F2 individual as a template,
The electrophoresis image of the amplification product when performing PCR using "A09" as a primer is shown. The first lane from the left is a female strain of “DaJoAa”, the second lane from the left is a male strain of “DaJoAa”, and 3, 5, 6, 7,
The ninth and tenth lanes are fertile individuals among the F2 individuals, and the fourth and eighth lanes from the left are non-fertile individuals among the F2 individuals. As this figure shows, F2
Among individuals, non-fertile individuals do not have amplified fragments specifically detected in male strains, while fertile individuals have amplified fragments specifically detected in male strains. .

【００１４】〔実施例３〕実施例２と同様に、トウガラ
シＦ１品種「Muck-Gea-Ri 」（東原農産より入手）を自
殖し、Ｆ２集団63個体の稔性を調査したところ、稔性を
有する個体と稔性を有しない個体との分離比は３：１で
あった。また、実施例２と同様に、プライマー「Ａ０
９」による増幅産物の電気泳動像を調べたところ、雄系
統に特異的に検出された増幅断片は、Ｆ２個体のうち稔
性の無い個体には検出されなかったが、稔性を有する個
体の大部分で検出された。このことから、プライマー
「Ａ０９」は、「DaJoAa」だけでなく、「Muck-Gea-Ri
」についても、稔性回復遺伝子の有無を判断するため
に使用できることが確認された。なお、稔性を有するＦ
２個体の一部に、特異的増幅断片が検出されないものも
あったので、「DaJoAa」と同様、僅かながら組換えが生
じているものと考えられる。Example 3 In a manner similar to Example 2, the pepper F1 variety “Muck-Gea-Ri” (obtained from Higashihara Agricultural Products) was self-bred and the fertility of 63 F2 populations was examined. The separation ratio between the individuals having no fertility and the individuals having no fertility was 3: 1. In addition, as in Example 2, the primer “A0
When the electrophoresis image of the amplification product according to 9) was examined, the amplified fragment specifically detected in the male strain was not detected in the non-fertile individuals among the F2 individuals, but was not detected in the fertile individuals. Mostly detected. From this, the primer “A09” was used not only for “DaJoAa” but also for “Muck-Gea-Ri
Can be used to determine the presence or absence of a fertility restoring gene. In addition, F which has fertility
Since a specific amplified fragment was not detected in a part of the two individuals, recombination is considered to have occurred slightly as in "DaJoAa".

【００１５】図４は、「Muck-Gea-Ri 」のＦ２個体から
抽出したＤＮＡを鋳型とし、「Ａ０９」をプライマーと
してＰＣＲを行った場合の増幅産物の電気泳動像を示
す。左から２〜５番目のレーンがＦ２個体のうち稔性を
有する個体であり、左から６〜８番目のレーンがＦ２個
体のうち稔性を有しない個体である。この図が示すよう
に、稔性を有する個体のうち、左から３〜５番目のレー
ンでは、特異的な増幅断片が検出されるが、左から２番
目のレーンでは、そのような断片が検出されない。従っ
て、左から２番目のレーンでは組換えが生じたものと思
われる。FIG. 4 shows an electrophoresis image of an amplified product obtained by performing PCR using DNA extracted from F2 individuals of "Muck-Gea-Ri" as a template and "A09" as a primer. The second to fifth lanes from the left are fertile individuals among the F2 individuals, and the sixth to eighth lanes from the left are non-fertile individuals among the F2 individuals. As shown in this figure, among the fertile individuals, specific amplified fragments are detected in the third to fifth lanes from the left, but such fragments are detected in the second lane from the left. Not done. Therefore, it is considered that recombination occurred in the second lane from the left.

【００１６】〔実施例４〕細胞質雄性不稔系統と稔性回
復系統との交雑により得られたＦ１品種について、稔性
回復遺伝子と連鎖する増幅断片が検出されるかどうかを
調べた。供試した品種は、「キムチ」、「Jun-Rung」、
「DaJoAa」、「線紅香」、「Muck-Gea-Ri」（以上の５
品種は東原農産（株）より入手）、「大王」（農友種苗
（株）より入手）、「Dong-Bang 」（ソウル種苗（株）
より入手）、「大明」（中央種苗（株）より入手）、お
よび「香村」（韓農種苗（株）より入手）である。各品
種の増幅産物の電気泳動像を図５に示す。この図が示す
ように、「Jun-Rung」と「線紅香」を除く７品種で、稔
性回復遺伝子と連鎖していると考えられる約1.3 Kbの特
異的増幅断片が検出された。この結果から、この特異的
増幅断片と稔性回復遺伝子と強く連鎖していることに加
え、Ｆ１種子生産に用いられる稔性回復遺伝子の起源が
一つであることが推定された。Example 4 In the F1 variety obtained by crossing the cytoplasmic male sterile line with the fertility restoration line, it was examined whether or not an amplified fragment linked to the fertility restoration gene could be detected. The varieties tested were “Kimchi”, “Jun-Rung”,
"DaJoAa", "Red Benka", "Muck-Gea-Ri" (5
Varieties are obtained from Higashihara Agricultural Products Co., Ltd.), "Daio" (obtained from Noriyu Seed Co., Ltd.), "Dong-Bang" (Seoul Seed Co., Ltd.)
), "Daiming" (obtained from Central Seed and Seed Co., Ltd.), and "Komura" (obtained from Hanno Seed and Seed Co., Ltd.). FIG. 5 shows the electrophoresis images of the amplification products of each variety. As shown in this figure, a specific amplified fragment of about 1.3 Kb, which is considered to be linked to the fertility restoring gene, was detected in seven varieties except for “Jun-Rung” and “Shinkoka”. From these results, it was presumed that, in addition to being strongly linked to this specific amplified fragment and the fertility restoring gene, the origin of the fertility restoring gene used for F1 seed production was one.

【００１７】なお、「Jun-Rung」と「線紅香」では、特
異的増幅断片が検出されなかったが、これらの品種は、
特異的増幅断片が検出された「キムチ」、「DaJoAa」、
「Muck-Gea-Ri 」と同じく、東原農産（株）により育種
された品種であり、他の３品種と育種母本が全く異なる
とは考えにくい。従って、「Jun-Rung」および「線紅
香」では組換えが生じたことにより特異的増幅断片が検
出されなかったものと推定される。Although no specific amplified fragment was detected in “Jun-Rung” and “Shinko”, these varieties were
"Kimchi", "DaJoAa", in which specific amplified fragments were detected,
Like "Muck-Gea-Ri", it is a breed bred by Higashihara Nosan Co., Ltd., and it is unlikely that the breeding mother is completely different from the other three varieties. Therefore, it is presumed that specific amplification fragments were not detected in "Jun-Rung" and "Red Bengal" due to recombination.

【００１８】〔実施例５〕「DaJoAa」のＦ２個体から抽
出したＤＮＡを鋳型とし、「Ａ０９」をプライマーにし
て、実施例２と同様にＰＣＲを行い、その増幅断片につ
いて電気泳動を行った。ゲルをアルカリ変性後、ナイロ
ンメンブラン（Hybond-N+:Amersham社製）にサザントラ
ンスファーを行った。実施例１で得られたＤＮＡ（配列
番号１で表されるＤＮＡ）を変性させた後、ECL direct
nucleic acid labelling and detection systems （Am
ersham社製）によりＤＮＡを標識し、サザンハイブリダ
イゼーションを実施した。この結果を図６に示す。左か
ら４、７、１２、１６番目のレーンが稔性を有しない個
体であり、他はすべて稔性を有する個体である。この図
が示すように、稔性を有する個体の増幅産物はプローブ
とハイブリダイズしたが、稔性を有しない個体の増幅産
物はプローブとハイブリダイズしなかった。Example 5 PCR was carried out in the same manner as in Example 2 using DNA extracted from F2 individuals of "DaJoAa" as a template and "A09" as a primer, and the amplified fragment was subjected to electrophoresis. After denaturing the gel with alkali, Southern transfer was performed on a nylon membrane (Hybond-N +: manufactured by Amersham). After denaturing the DNA obtained in Example 1 (DNA represented by SEQ ID NO: 1), ECL direct
nucleic acid labelling and detection systems (Am
ersham) and the Southern hybridization was carried out. The result is shown in FIG. Lanes 4, 7, 12, and 16 from the left are individuals without fertility, and the others are all fertile. As shown in this figure, the amplification product of an individual having fertility hybridized with the probe, but the amplification product of an individual without fertility did not hybridize with the probe.

【００１９】〔実施例６〕稔性回復遺伝子を有する個体
をより効率的に選抜するため、実施例１で得られた特異
的ＤＮＡ断片のＳＴＳ（Sequence tagging site ）化を
行った。ＤＮＡ解析ソフトウェアーであるGenetix for
macintosh（Software development社製）を用いて、配
列番号１記載の塩基配列を解析し、ＰＣＲプライマーと
して好適なオリゴヌクレオチドの塩基配列を決定した。
この結果、以下の４種類のセンスプライマーと３種類の
アンチセンスプライマーが決定された。Example 6 In order to more efficiently select individuals having a fertility restoring gene, the specific DNA fragment obtained in Example 1 was converted to an STS (Sequence tagging site). Genetix for DNA analysis software
The base sequence of SEQ ID NO: 1 was analyzed using macintosh (manufactured by Software Development), and the base sequence of an oligonucleotide suitable as a PCR primer was determined.
As a result, the following four types of sense primers and three types of antisense primers were determined.

【００２０】＜センスプライマー＞ sense-1 ：CACAACTCAATCATAGCAAG （配列番号１における569-588 番目のヌクレオチドに対応） sense-2 ：ATAAACATCTACATACCTTGGG （配列番号１における691-712 番目のヌクレオチドに対応） sense-3 ：ATTTTCAGATTGTGGCGACG （配列番号１における180-199 番目のヌクレオチドに対応） sense-4 ：TAGACATTCATAGGTTCACACT （配列番号１における266-287 番目のヌクレオチドに対応）＜アンチセンスプライマー＞ anti-1 ：CCTCGTCGTGATGGTCG （配列番号１における1038-1054 番目のヌクレオチドに対応） anti-2 ：GCCTCGTCGTGATGGTCG （配列番号１における1037-1054 番目のヌクレオチドに対応） anti-3 ：CCATAACTCCCTCGTCCAA （配列番号１における1317-1335 番目のヌクレオチドに対応）<Sense primer> sense-1: CACAACTCAATCATAGCAAG (corresponding to nucleotides 569-588 in SEQ ID NO: 1) sense-2: ATAAACATCTACATACCTTGGG (corresponding to nucleotides 691-712 in SEQ ID NO: 1) sense-3: ATTTTCAGATTGTGGCGACG (Corresponding to nucleotides 180-199 in SEQ ID NO: 1) sense-4: TAGACATTCATAGGTTCACACT (corresponding to nucleotides 266-287 in SEQ ID NO: 1) <antisense primer> anti-1: CCTCGTCGTGATGGTCG (1038- in SEQ ID NO: 1) Anti-2: GCCTCGTCGTGATGGTCG (corresponding to nucleotides 1037-1054 in SEQ ID NO: 1) anti-3: CCATAACTCCCTCGTCCAA (corresponding to nucleotides 1317-1335 in SEQ ID NO: 1)

【００２１】上記プライマーをsense-1 とanti-1、sens
e-2 とanti-2、sense-1 とanti-3、sense-3 とanti-3、
sense-3 とanti-1、sense-4 とanti-1の６通りに組合
せ、「DaJoAa」の雄系統、雌系統及びＦ２個体から抽出
したＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行った。各プライマー
とマーカーＤＮＡの位置関係を図７に示す。ＰＣＲは、
GeneAmp PCR System 9600（Perkin Elmer社製）を用い
て行い、反応は、９５℃で５分間の前処理後、熱変成、
９４℃、１分、アニーリング、６２℃、１分、伸長反
応、７２℃、１分で２８サイクル行った後、７２℃、７
分で反応を終了させた。各プライマーによる増幅産物の
電気泳動像を図８〜１３に示す。これらの図が示すよう
に、sense-1 とanti-1（図８）、sense-2 とanti-2（図
９）、sense-1 とanti-3（図１０）の組合せでは、稔性
を有する個体と稔性を有しない個体との間で増幅産物に
差異がみられず、sense-4 とanti-1（図１３）の組合せ
では、多型が見られるが、Ｆ２個体の稔性とは相関して
いない。結局、sense-3 とanti-3（図１１）、sense-3
とanti-1（図１２）の組合せにおいてのみ、稔性回復遺
伝子と連鎖する特異的増幅断片が検出される。但し、se
nse-3 とanti-3の組合せでは、特異的増幅断片を示すバ
ンドの上に稔性回復と無関係なマイナーなバンドが検出
されるので、sense-3 とanti-1の組合せが、稔性回復遺
伝子を有する個体の選抜に用いるプライマーとして最も
好ましいと考えられる。The above primers were used for sense-1 and anti-1,
e-2 and anti-2, sense-1 and anti-3, sense-3 and anti-3,
PCR was carried out using DNA extracted from male and female strains of "DaJoAa" and F2 individuals as templates, using combinations of sense-3 and anti-1 and sense-4 and anti-1. FIG. 7 shows the positional relationship between each primer and the marker DNA. PCR is
The reaction was performed using GeneAmp PCR System 9600 (manufactured by Perkin Elmer). The reaction was performed at 95 ° C for 5 minutes, followed by heat denaturation,
After performing 28 cycles of 94 ° C., 1 minute, annealing, 62 ° C., 1 minute, extension reaction, 72 ° C., 1 minute, 72 ° C., 7 minutes
The reaction was terminated in minutes. 8 to 13 show the electrophoresis images of the amplification products of the respective primers. As shown in these figures, the combination of sense-1 and anti-1 (Fig. 8), sense-2 and anti-2 (Fig. 9), and sense-1 and anti-3 (Fig. No difference was observed in the amplification products between individuals having the fertility and individuals not having the fertility, and polymorphism was observed in the combination of sense-4 and anti-1 (FIG. 13). Are not correlated. After all, sense-3 and anti-3 (Fig. 11), sense-3
Only in the combination of and and anti-1 (FIG. 12), a specific amplified fragment linked to the fertility restoring gene is detected. Where se
In the combination of nse-3 and anti-3, a minor band unrelated to fertility restoration was detected above the band showing the specific amplified fragment. It is considered to be most preferable as a primer used for selection of an individual having a gene.

【００２２】[0022]

【発明の効果】本発明は、トウガラシ属植物における稔
性回復遺伝子を有する個体の効率的な選抜方法を提供す
る。Industrial Applicability The present invention provides a method for efficiently selecting individuals having a fertility restoring gene in a Capsicum plant.

【００２３】[0023]

【配列表】[Sequence list]

配列番号：１配列の長さ：１３３９配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：トウガラシ（Capsicum annuum L.）配列 AGAATTGGAC GACAGGCCCG GGTAATCTTT GAATTTCATC GTGAAGGGGA TAGATCATTT 60 CAATTGTTGG TATTCAACGA GGAATTCCTA GTAAGCGCAA GTCATCAGCT CACGTTGACT 120 ACGTCCCTGC CCTTTGTACA CACCACTCGT CGCTCCTGCC GATTGAATGA TCCAGTGAAA 180 TTTTCAGATT GTGGCGACGT GAGCGGTTCA CTGCCCGTTA TGTTGTAAGA AGTCCATTGA 240 ACCTTATCAT TTCTTCAACA AACACTAGAC ATTCATAGGT TCACACTTAT TTGGGGATTT 300 CCTACTAGCA TGGAATAATT CATTCACTTG GTCATTTTAT CAAACACCTC ACATGCACAA 360 CTTAGGAATA AGTATAATAA CCCAACTAAT CATCATGAAC AACCAAATTT ACATGTTTCC 420 ACCCATATAT TATCATACAT TCATACAAAC CACATAAGTA TCCCATCTTG GAGGTCATTC 480 AACATCAACA ACAAGTACAT AATCCATTTA CCACACAATT ACCACATGCT AAGGCCAAGG 540 CTTGATAATC TTGTAGACAA ACATGAAACA CAACTCAATC ATAGCAAGAA CATTAACTTT 600 AACTCACAAG AATCATTAAA AATTCATAAA AATAAATCTT GGAGATCTAG AAAAAGGTAC 660 TTGACCTTCT TGGAAGAAAG GGACCCAAGA ATAAACATCT ACATACCTTG GGAAAACTCT 720 TTTCTGGAAG TCTCTAGGAA GAATTCTTGG TCCTTGCTCT TGATTCTATC TTAATTTTTG 780 GTGGAAGAAG AGCCAATTTT TTAATTTAGG AAACCCTAGT TTTGGCTGAA AGAAGTGAAA 840 TGAAAATGAG GCCTTCAACA CTTAAGTGGG TATTTATAGA GGTTGGGGAA AGAGTGGAAA 900 ATACCTAAAT TCCCTTTAAA GAGAAAGAGT TGAAAACTAT TGATCGGGGT CTGTGACGAT 960 TGATCTGACG GTCCATCAGA GGGACTGATG GTCCACCAGA TCGTCCGCCA CTCGAGTGAC 1020 AAGTTCGGGT CATTATGCCT CGTCGTGATG GTCGAAGTGA AGGTCCGTCA AGAATCTGAT 1080 GATACACCAG ATCGTCCATC TCTAAGGGTT CAAGAATGGA CCCTTCTGTT TCGACCTGAT 1140 GGACCCCTTG ACGGTCCGTC AACTTATTGA CAGTCCACCA CTTTGGCCGT CACATGATGA 1200 AAAGAAAAAG GAGTCACTTC CTTGGCTTGA TGGGAAACTT GATGGCCCAC CAAGGCTGAC 1260 GGTCTACCAG GTCGACCATC AAGCCTGGGC AATTCCAATA CCATTTAGTA AAACGGCCAT 1320 AACTCCCTCG TCCAATTCT 1339 SEQ ID NO: 1 Sequence length: 1339 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Double-stranded Topology: Linear Sequence type: Genomic DNA Origin Organism: Capsicum (Capsicum annuum L.) Sequence AGAATTGGAC GACAGGCCCG GGTAATCTTT GAATTTCATC GTGAAGGGGA TAGATCATTT 60 CAATTGTTGG TATTCAACGA GGAATTCCTA GTAAGCGCAA GTCATCAGCT CACGTTGACT 120 ACGTCCCTGC CCTTTGTACA CACCACTCGT CGCTCCTGCC GATTGAATGA TCCAGTGAAA 180 TTTTCAGATT GTGGCGACGT GAGCGGTTCA CTGCCCGTTA TGTTGTAAGA AGTCCATTGA 240 ACCTTATCAT TTCTTCAACA AACACTAGAC ATTCATAGGT TCACACTTAT TTGGGGATTT 300 CCTACTAGCA TGGAATAATT CATTCACTTG GTCATTTTAT CAAACACCTC ACATGCACAA 360 CTTAGGAATA AGTATAATAA CCCAACTAAT CATCATGAAC AACCAAATTT ACATGTTTCC 420 ACCCATATAT TATCATACAT TCATACAAAC CACATAAGTA TCCCATCTTG GAGGTCATTC 480 AACATCAACA ACAAGTACAT AATCCATTTA CCACACAATT ACCACATGCT AAGGCCAAGG 540 CTTGATAATC TTGTAGACAA ACATGAAACA CAACTCAATC ATAGCAAGAA CATTAACTTT 600 AACTCACAAG AATCATTAAA AATTCATAAA AATAAATCTT GGAGATCTAG AAATGACCTGC GAAGAAAG GGACCCAAGA ATAAACATCT ACATACCTTG GGAAAACTCT 720 TTTCTGGAAG TCTCTAGGAA GAATTCTTGG TCCTTGCTCT TGATTCTATC TTAATTTTTG 780 GTGGAAGAAG AGCCAATTTT TTAATTTAGG AAACCCTAGT TTTGGCTGAA AGAAGTGAAA 840 TGAAAATGAG GCCTTCAACA CTTAAGTGGG TATTTATAGA GGTTGGGGAA AGAGTGGAAA 900 ATACCTAAAT TCCCTTTAAA GAGAAAGAGT TGAAAACTAT TGATCGGGGT CTGTGACGAT 960 TGATCTGACG GTCCATCAGA GGGACTGATG GTCCACCAGA TCGTCCGCCA CTCGAGTGAC 1020 AAGTTCGGGT CATTATGCCT CGTCGTGATG GTCGAAGTGA AGGTCCGTCA AGAATCTGAT 1080 GATACACCAG ATCGTCCATC TCTAAGGGTT CAAGAATGGA CCCTTCTGTT TCGACCTGAT 1140 GGACCCCTTG ACGGTCCGTC AACTTATTGA CAGTCCACCA CTTTGGCCGT CACATGATGA 1200 AAAGAAAAAG GAGTCACTTC CTTGGCTTGA TGGGAAACTT GATGGCCCAC CAAGGCTGAC 1260 GGTCTGACGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCCTCAGAGCCTAGATC

【００２４】配列番号：２配列の長さ：２８６配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：トウガラシ（Capsicum annuum L.）配列ＡＧＡＡＴＴＧＧＡＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＧＧＧＴＡＡＴＣＴＴＴＧＡＡ
ＴＴＴＣＡＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＧＡＴＡＧＡＴＣＡＴＴＴ６０ＣＡＡＴＴＧＴＴＧＧＴＡＴＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＡＴＴＣＣＴＡＧＴＡ
ＡＧＣＧＣＡＡＧＴＣＡＴＣＡＧＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＴ１２０ＡＣＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣＣＡＣＴＣＧＴＣＧＣ
ＴＣＣＴＧＣＣＧＡＴＴＧＡＡＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＡＡＡ１８０ＴＴＴＴＣＡＧＡＴＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＴＣＡＣＴＧ
ＣＣＣＧＴＴＡＴＧＴＴＧＴＡＡＧＡＡＧＴＣＣＡＴＴＧＡ２４０ＡＣＣＴＴＡＴＣＡＴＴＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＡＣＡＣＴＡＧＡＣＡＴＴ
ＣＡＴＡＧＧＴＴＣＡＣＡＣ２８６SEQ ID NO: 2 Sequence length: 286 Sequence type: nucleic acid Number of strands: double-stranded Topology: linear Sequence type: Genomic DNA Origin Organism: Capsicum annuum L. Sequence AGAATTGGAC GACAGGCCCG GGTAATCTTT GAA
TTTCATC GTGAAGGGGA TAGATCATTT 60 CAATTGTTTGG TATTCAACGA GGAATTCCTA GTA
AGCGCAA GTCATCAGCT CACGTGACT 120 ACGTCCCTGC CCTTTGTACA CACCACTCGT CGC
TCCTGCC GATTGAATGA TCCAGTGAAA 180 TTTTCAGATT GTGGCGACGT GAGCGGTTCA CTG
CCCGTTA TGTTGTAAGA AGTCCATTGA 240 ACCTTATCAT TCTTCCAACA AACACTAGAC ATT
CATAGGT TCACAC 286

【００２５】配列番号：３配列の長さ：１０５３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ起源生物名：トウガラシ（Capsicum annuum L.）配列 TTATTTGGGG ATTTCCTACT AGCATGGAAT AATTCATTCA CTTGGTCATT TTATCAAACA 60 CCTCACATGC ACAACTTAGG AATAAGTATA ATAACCCAAC TAATCATCAT GAACAACCAA 120 ATTTACATGT TTCCACCCAT ATATTATCAT ACATTCATAC AAACCACATA AGTATCCCAT 180 CTTGGAGGTC ATTCAACATC AACAACAAGT ACATAATCCA TTTACCACAC AATTACCACA 240 TGCTAAGGCC AAGGCTTGAT AATCTTGTAG ACAAACATGA AACACAACTC AATCATAGCA 300 AGAACATTAA CTTTAACTCA CAAGAATCAT TAAAAATTCA TAAAAATAAA TCTTGGAGAT 360 CTAGAAAAAG GTACTTGACC TTCTTGGAAG AAAGGGACCC AAGAATAAAC ATCTACATAC 420 CTTGGGAAAA CTCTTTTCTG GAAGTCTCTA GGAAGAATTC TTGGTCCTTG CTCTTGATTC 480 TATCTTAATT TTTGGTGGAA GAAGAGCCAA TTTTTTAATT TAGGAAACCC TAGTTTTGGC 540 TGAAAGAAGT GAAATGAAAA TGAGGCCTTC AACACTTAAG TGGGTATTTA TAGAGGTTGG 600 GGAAAGAGTG GAAAATACCT AAATTCCCTT TAAAGAGAAA GAGTTGAAAA CTATTGATCG 660 GGGTCTGTGA CGATTGATCT GACGGTCCAT CAGAGGGACT GATGGTCCAC CAGATCGTCC 720 GCCACTCGAG TGACAAGTTC GGGTCATTAT GCCTCGTCGT GATGGTCGAA GTGAAGGTCC 780 GTCAAGAATC TGATGATACA CCAGATCGTC CATCTCTAAG GGTTCAAGAA TGGACCCTTC 840 TGTTTCGACC TGATGGACCC CTTGACGGTC CGTCAACTTA TTGACAGTCC ACCACTTTGG 900 CCGTCACATG ATGAAAAGAA AAAGGAGTCA CTTCCTTGGC TTGATGGGAA ACTTGATGGC 960 CCACCAAGGC TGACGGTCTA CCAGGTCGAC CATCAAGCCT GGGCAATTCC AATACCATTT 1020 AGTAAAACGG CCATAACTCC CTCGTCCAAT TCT
１０５３SEQ ID NO: 3 Sequence length: 1053 Sequence type: nucleic acid Number of strands: double-stranded Topology: linear Sequence type: Genomic DNA Origin Organism: Capsicum (Capsicum annuum L.) Sequence TTATTTGGGG ATTTCCTACT AGCATGGAAT AATTCATTCA CTTGGTCATT TTATCAAACA 60 CCTCACATGC ACAACTTAGG AATAAGTATA ATAACCCAAC TAATCATCAT GAACAACCAA 120 ATTTACATGT TTCCACCCAT ATATTATCAT ACATTCATAC AAACCACATA AGTATCCCAT 180 CTTGGAGGTC ATTCAACATC AACAACAAGT ACATAATCCA TTTACCACAC AATTACCACA 240 TGCTAAGGCC AAGGCTTGAT AATCTTGTAG ACAAACATGA AACACAACTC AATCATAGCA 300 AGAACATTAA CTTTAACTCA CAAGAATCAT TAAAAATTCA TAAAAATAAA TCTTGGAGAT 360 CTAGAAAAAG GTACTTGACC TTCTTGGAAG AAAGGGACCC AAGAATAAAC ATCTACATAC 420 CTTGGGAAAA CTCTTTTCTG GAAGTCTCTA GGAAGAATTC TTGGTCCTTG CTCTTGATTC 480 TATCTTAATT TTTGGTGGAA GAAGAGCCAA TTTTTTAATT TAGGAAACCC TAGTTTTGGC 540 TGAAAGAAGT GAAATGAAAA TGAGGCCTTC AACACTTAAG TGGGTATTTA TAGAGGTTGG 600 GGAAGATGGATCAATC AGTTGAAAA CTATTGATCG 660 GGGTCTGTGA CGATTGATCT GACGGTCCAT CAGAGGGACT GATGGTCCAC CAGATCGTCC 720 GCCACTCGAG TGACAAGTTC GGGTCATTAT GCCTCGTCGT GATGGTCGAA GTGAAGGTCC 780 GTCAAGAATC TGATGATACA CCAGATCGTC CATCTCTAAG GGTTCAAGAA TGGACCCTTC 840 TGTTTCGACC TGATGGACCC CTTGACGGTC CGTCAACTTA TTGACAGTCC ACCACTTTGG 900 CCGTCACATG ATGAAAAGAA AAAGGAGTCA CTTCCTTGGC TTGATGGGAA ACTTGATGGC 960 CCACCAAGGC TGACGGTCTA CCAGGTCGAC CATCAAGCCT GGGCAATTCC AATACCATTT 1020 AGTAAAACGG CCATAACTCC CTCGTCCAAT TCT
1053

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 1 is a photograph showing the results of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図２】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 2 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図３】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 3 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図４】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 4 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図５】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 5 is a photograph showing the result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図６】サザンハイブリダイゼーションの結果を示す写
真である。FIG. 6 is a photograph showing a result of Southern hybridization.

【図７】マーカーＤＮＡとプライマーの位置関係を示す
図である。FIG. 7 is a diagram showing a positional relationship between a marker DNA and a primer.

【図８】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 8 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図９】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真で
ある。FIG. 9 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図１０】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真
である。FIG. 10 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図１１】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真
である。FIG. 11 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図１２】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真
である。FIG. 12 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

【図１３】ＰＣＲ増幅産物の電気泳動の結果を示す写真
である。FIG. 13 is a photograph showing a result of electrophoresis of a PCR amplification product.

─────────────────────────────────────────────────────
────────────────────────────────────────────────── ───

【手続補正書】[Procedure amendment]

【提出日】平成８年９月２６日[Submission date] September 26, 1996

【手続補正１】[Procedure amendment 1]

【補正対象書類名】図面[Document name to be amended] Drawing

【補正対象項目名】全図[Correction target item name] All figures

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【図１】 FIG.

【図２】 FIG. 2

【図１３】 FIG. 13

【図３】 FIG. 3

【図４】 FIG. 4

【図５】 FIG. 5

【図６】 FIG. 6

【図８】 FIG. 8

【図７】 FIG. 7

【図９】 FIG. 9

【図１０】 FIG. 10

【図１１】 FIG. 11

【図１２】 FIG.

Claims

【特許請求の範囲】[Claims]

【請求項１】配列番号１で表されるＤＮＡ、又は配列
番号１で表されるＤＮＡと実質的に同一のＤＮＡを有す
る個体を選抜することにより稔性回復遺伝子を有する個
体を選抜することを特徴とするトウガラシ属植物におけ
る稔性回復遺伝子を有する個体の選抜方法。1. A method for selecting an individual having a fertility-restoring gene by selecting a DNA represented by SEQ ID NO: 1 or an individual having substantially the same DNA as the DNA represented by SEQ ID NO: 1. A method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant.

【請求項２】ＤＮＡの有無を、ポリメラーゼ連鎖反応
による増幅断片の有無により判断することを特徴とする
請求項１記載のトウガラシ属植物における稔性回復遺伝
子を有する個体の選抜方法。2. The method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant according to claim 1, wherein the presence or absence of DNA is determined by the presence or absence of an amplified fragment by polymerase chain reaction.

【請求項３】ポリメラーゼ連鎖反応におけるプライマ
ーが、5'-AGAATTGGACGA-3'であることを特徴とする請求
項２記載のトウガラシ属植物における稔性回復遺伝子を
有する個体の選抜方法。3. The method for selecting an individual having a fertility restoration gene in a Capsicum plant according to claim 2, wherein the primer in the polymerase chain reaction is 5′-AGAATTGGACGA-3 ′.

【請求項４】ポリメラーゼ連鎖反応におけるセンスプ
ライマーが、配列番号２記載の塩基配列の一部と同一の
オリゴヌクレオチドであり、かつ、アンチセンスプライ
マーが配列番号３記載の塩基配列の一部と相補的なオリ
ゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項２記載の
トウガラシ属植物における稔性回復遺伝子を有する個体
の選抜方法。4. The sense primer in the polymerase chain reaction is an oligonucleotide identical to a part of the base sequence of SEQ ID NO: 2, and the antisense primer is complementary to a part of the base sequence of SEQ ID NO: 3. The method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant according to claim 2, which is a unique oligonucleotide.

【請求項５】センスプライマーが、5'-ATTTTCAGATTGT
GGCGACG-3'であり、アンチセンスプライマーが、5'-CGA
CCATCACGACGAGG -3'であることを特徴とする請求項４記
載のトウガラシ属植物における稔性回復遺伝子を有する
個体の選抜方法。5. The method according to claim 5, wherein the sense primer is 5′-ATTTTCAGATTGT.
GGCGACG-3 'and the antisense primer is 5'-CGA
The method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant according to claim 4, which is CCATCACGACGAGG-3 '.

【請求項６】トウガラシ属植物が、カプシウム・アヌ
ウムに属する植物であることを特徴とする請求項１乃至
５のいずれか一項に記載のトウガラシ属植物における稔
性回復遺伝子を有する個体の選抜方法。6. The method for selecting an individual having a fertility restoring gene in a Capsicum plant according to any one of claims 1 to 5, wherein the Capsicum plant is a plant belonging to Capsium anum. .