JPH0265776A - 酵母細胞の新規凍結保存法 - Google Patents
酵母細胞の新規凍結保存法Info
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- JPH0265776A JPH0265776A JP21447188A JP21447188A JPH0265776A JP H0265776 A JPH0265776 A JP H0265776A JP 21447188 A JP21447188 A JP 21447188A JP 21447188 A JP21447188 A JP 21447188A JP H0265776 A JPH0265776 A JP H0265776A
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は工業的に有用なアルコール醗酵能を有する酵母
細胞の長期安定保存に利用できる新規凍結保存方法に関
するものである。
細胞の長期安定保存に利用できる新規凍結保存方法に関
するものである。
約６０属にまたがる酵母のうち２，３の病原性酵母等を
除いて大多数の工業上有用な酵母とされていでき、保存
後には何らの障害を与えずに細胞を融解させ得る凍結保
存方法に関するものである。
除いて大多数の工業上有用な酵母とされていでき、保存
後には何らの障害を与えずに細胞を融解させ得る凍結保
存方法に関するものである。
酵母の保存技術において、継代培養保存法は。
微生物一般に用いられている基本的保存法である。
しかし、二の方法は、比較的高頻度で植え継ぐ必要があ
り、操作が繁雑であることや、継代中変異し易いことな
どの欠点を有する。このために、これに代る方法として
凍結乾燥保存法や凍結保存法などの長期保存法が開発さ
れてきている。
り、操作が繁雑であることや、継代中変異し易いことな
どの欠点を有する。このために、これに代る方法として
凍結乾燥保存法や凍結保存法などの長期保存法が開発さ
れてきている。
凍結乾燥保存法は、凍結しながら脱水を行う方法で、微
生物の長期保存に用いられる一般的な方法である。しか
し、酵母の場合、偽菌糸をつくるものが多く、このよう
な酵母に凍結乾燥を施すと死滅し易いために適用不可で
ある。
生物の長期保存に用いられる一般的な方法である。しか
し、酵母の場合、偽菌糸をつくるものが多く、このよう
な酵母に凍結乾燥を施すと死滅し易いために適用不可で
ある。
凍結保存法は、液体窒素などにより簡単に行うことがで
き、多くの微生物楼の保存に利用されている。しかし、
酵母は凍結に対する感受性が高いため生存率が極めて低
い。
き、多くの微生物楼の保存に利用されている。しかし、
酵母は凍結に対する感受性が高いため生存率が極めて低
い。
細胞は凍結速度によって異なった凍り方をし、緩慢の場
合は細胞外凍結、急速だと細胞内凍結を起す、一般に、
酵母のように大きな細胞（４〜１０μｓ）は細胞内凍結
を起し易い、！ＩＩ胞内棟内凍結細胞は、融解の際に生
長する氷晶によって障害を被ることが多く５特に酵母の
場合は顕著にそれが詔められる。それら凍結の防止剤と
して通常２０％のグリセリン溶液が用いられるのが一般
である。しかし、その場合の生存率は０．１〜０．３％
と低いため実際的でなく、より効果的な保存法が酵母に
関して検討されつつあるのが現状である。この場合のグ
リセリンの不凍効果が低いのは、外部からの細胞内微細
端造へのグリセリンの侵透性におのずと限界があること
が一因として考えられる。
合は細胞外凍結、急速だと細胞内凍結を起す、一般に、
酵母のように大きな細胞（４〜１０μｓ）は細胞内凍結
を起し易い、！ＩＩ胞内棟内凍結細胞は、融解の際に生
長する氷晶によって障害を被ることが多く５特に酵母の
場合は顕著にそれが詔められる。それら凍結の防止剤と
して通常２０％のグリセリン溶液が用いられるのが一般
である。しかし、その場合の生存率は０．１〜０．３％
と低いため実際的でなく、より効果的な保存法が酵母に
関して検討されつつあるのが現状である。この場合のグ
リセリンの不凍効果が低いのは、外部からの細胞内微細
端造へのグリセリンの侵透性におのずと限界があること
が一因として考えられる。
上記に鑑み１本発明者らはいわゆるグリコリンスにおけ
るような酵母細胞内でのアルコール醗酵経路からグリセ
リン醗酵経路へ転換せしめ、細胞内において内在性のグ
リセリンを生成せしめ各細胞基管へのグリセリン侵透を
より高効率で行わせた後、当該細胞を凍結処理に供し、
次いで強制融解させることにより、効率よく生存せしめ
る保存方法を見出し１本発明を完成した。
るような酵母細胞内でのアルコール醗酵経路からグリセ
リン醗酵経路へ転換せしめ、細胞内において内在性のグ
リセリンを生成せしめ各細胞基管へのグリセリン侵透を
より高効率で行わせた後、当該細胞を凍結処理に供し、
次いで強制融解させることにより、効率よく生存せしめ
る保存方法を見出し１本発明を完成した。
即ち、本発明によれば、アルコール生産能を有する酵母
菌を亜硫酸含有培地で培養し、細胞内にグリセリンを蓄
積させた後凍結保存することを特徴とする酵母細胞の保
存方法が提供される。
菌を亜硫酸含有培地で培養し、細胞内にグリセリンを蓄
積させた後凍結保存することを特徴とする酵母細胞の保
存方法が提供される。
本発明で保存対象となる酵母菌は、アルコール生産能を
有するものであればよい。本発明では、この酵母菌を、
凍結保存するに先立ち、亜硫酸含有培地で培養し、細胞
内にグリセリンを蓄積させる。この場合、培地としては
、慣用のＹＭ培地が用いられ、培地に対して添加する亜
硫酸成分は、亜硫酸ソーダ等の亜硫酸塩として用いられ
る。
有するものであればよい。本発明では、この酵母菌を、
凍結保存するに先立ち、亜硫酸含有培地で培養し、細胞
内にグリセリンを蓄積させる。この場合、培地としては
、慣用のＹＭ培地が用いられ、培地に対して添加する亜
硫酸成分は、亜硫酸ソーダ等の亜硫酸塩として用いられ
る。
亜硫酸成分の添加斌は、通常、１〜５重量％、好ましく
は２〜３重量％である。培養温度は、２５〜３２℃であ
る。培養時間は、通常、１−１．５時間である。
は２〜３重量％である。培養温度は、２５〜３２℃であ
る。培養時間は、通常、１−１．５時間である。
このようにして培養処理され、細胞内にグリセリンの蓄
積された酵母菌を、培地から分離し洗浄後、グリセリン
溶液に分散し、液体窒素で凍結する。
積された酵母菌を、培地から分離し洗浄後、グリセリン
溶液に分散し、液体窒素で凍結する。
前記のように凍結保存された酵母菌は、必要に応じ、こ
れを温度３０−４５℃の湯浴上で融解することにより、
高効率で生菌Ｍ母を得ることができる。
れを温度３０−４５℃の湯浴上で融解することにより、
高効率で生菌Ｍ母を得ることができる。
（発明の効果）
本発明の保存方法によれば、酵母菌を長期間凍結保存す
ることができる上、保存後、解凍した時の酵母菌の生存
率は高く、またその保存後の酵母菌は内部構造の障害を
受けず、保存前の酵母菌の性質を保持したものである。
ることができる上、保存後、解凍した時の酵母菌の生存
率は高く、またその保存後の酵母菌は内部構造の障害を
受けず、保存前の酵母菌の性質を保持したものである。
（実施例）
次に本発明を実施例によりさらに詳述する。
実施例１
酵母細胞（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓＣｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ、 ＨａｎｓｅｎＩＦＯ−０２２４）の−夜培養
細胞から、先ず、６４期細胞を選択する。この選択法は
以下の通りであり、その方法の骨子はエルトリニージョ
ン法による。
ｉａｅ、 ＨａｎｓｅｎＩＦＯ−０２２４）の−夜培養
細胞から、先ず、６４期細胞を選択する。この選択法は
以下の通りであり、その方法の骨子はエルトリニージョ
ン法による。
先ず、３０００ｒｐｍ、３℃水流速９ｍＱ／分のエルト
リニージョンローターに約３．２ Ｘ １０’／ｎｉｌ
濃度の菌液を１０−チャージする。ひき続き２００−の
蒸留水を流した後流速をｌｉｄ／分に」二げることによ
って６１期細胞を得る。以下の処理は全てこの６１期細
胞を用いる。当該期細胞を使用する目的は、生存率等測
定に際して再現性にすぐれ、信頼性の高い結果を得るこ
とにある６次に、この細胞を０．１，２．３％亜硫酸ナ
トリウムを含むＹＭ（グルコース１％；ポリペプトン１
％；イーストエクストラクト０．６％；モルトエクスト
ラフ８００部；ＰＨ５，６）培地に８，８ Ｘ １０’
／ｍＱの菌濃度になるように植菌し、３０℃において１
時間＠養を行い、ＤＳ（核***）期後期に至らしめる。
リニージョンローターに約３．２ Ｘ １０’／ｎｉｌ
濃度の菌液を１０−チャージする。ひき続き２００−の
蒸留水を流した後流速をｌｉｄ／分に」二げることによ
って６１期細胞を得る。以下の処理は全てこの６１期細
胞を用いる。当該期細胞を使用する目的は、生存率等測
定に際して再現性にすぐれ、信頼性の高い結果を得るこ
とにある６次に、この細胞を０．１，２．３％亜硫酸ナ
トリウムを含むＹＭ（グルコース１％；ポリペプトン１
％；イーストエクストラクト０．６％；モルトエクスト
ラフ８００部；ＰＨ５，６）培地に８，８ Ｘ １０’
／ｍＱの菌濃度になるように植菌し、３０℃において１
時間＠養を行い、ＤＳ（核***）期後期に至らしめる。
ここで、菌体内グリセリンを定量する。この結果を法衣
に示す。
に示す。
表−１
次に、前記で得た各菌体を洗浄後、７．５Ｘ１０７／呂
−となるように０．３＞グリセリンに懸濁し、１ｍ厚、
内径１０ｍ、高さ４０ｍの銅製チューブに１−を入れ、
ＬＮ、 （液体窒素）中で９日間冷凍保存した。この冷
凍保存後のチューブ入り細胞を４５℃湯浴中で強制融解
し、チューブ内の温度が２５〜３０℃となったら加温を
止め、その後、適当に希釈して冒寒天培地にプレートア
ウトし、酵母菌の生存率を計ｄＩｇする。
内径１０ｍ、高さ４０ｍの銅製チューブに１−を入れ、
ＬＮ、 （液体窒素）中で９日間冷凍保存した。この冷
凍保存後のチューブ入り細胞を４５℃湯浴中で強制融解
し、チューブ内の温度が２５〜３０℃となったら加温を
止め、その後、適当に希釈して冒寒天培地にプレートア
ウトし、酵母菌の生存率を計ｄＩｇする。
その結県を次長に示す。
表−２
Claims (1)
- （１）アルコール生産能を有する酵母菌を亜硫酸含有培
地で培養し、細胞内にグリセリンを蓄積させた後凍結保
存することを特徴とする酵母細胞の保存方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21447188A JPH0265776A (ja) | 1988-08-29 | 1988-08-29 | 酵母細胞の新規凍結保存法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21447188A JPH0265776A (ja) | 1988-08-29 | 1988-08-29 | 酵母細胞の新規凍結保存法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0265776A true JPH0265776A (ja) | 1990-03-06 |
| JPH0358268B2 JPH0358268B2 (ja) | 1991-09-04 |
Family
ID=16656275
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21447188A Granted JPH0265776A (ja) | 1988-08-29 | 1988-08-29 | 酵母細胞の新規凍結保存法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0265776A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008006621A1 (de) * | 2006-07-14 | 2008-01-17 | Rebholz, Erich | Verfahren und einrichtung zum zwischenlagern von mikroben |
-
1988
- 1988-08-29 JP JP21447188A patent/JPH0265776A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008006621A1 (de) * | 2006-07-14 | 2008-01-17 | Rebholz, Erich | Verfahren und einrichtung zum zwischenlagern von mikroben |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0358268B2 (ja) | 1991-09-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |