JP6688307B2 - 肝癌の検査方法 - Google Patents
肝癌の検査方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6688307B2 JP6688307B2 JP2017538533A JP2017538533A JP6688307B2 JP 6688307 B2 JP6688307 B2 JP 6688307B2 JP 2017538533 A JP2017538533 A JP 2017538533A JP 2017538533 A JP2017538533 A JP 2017538533A JP 6688307 B2 JP6688307 B2 JP 6688307B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- aim
- antibody
- liver cancer
- free aim
- free
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title claims description 96
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims description 96
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 123
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 83
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 66
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 54
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 30
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 28
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 25
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 19
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 11
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 8
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 39
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 38
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 12
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 12
- 101000911996 Homo sapiens CD5 antigen-like Proteins 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 8
- 102000051875 human CD5L Human genes 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 7
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 7
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 7
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000011984 electrochemiluminescence immunoassay Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 6
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 5
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 102100026862 CD5 antigen-like Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 3
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 108010063628 acarboxyprothrombin Proteins 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 229940088872 Apoptosis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000053028 CD36 Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000158 apoptosis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- -1 microplate readers Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000001426 native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine chloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003567 thiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(1)肝癌の検査方法であって、被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量する工程を含む、方法。
方法。
本発明に係る肝癌の検査方法は、被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量する工程を含むものである。AIMは、上記のとおり、組織マクロファージが特異的に産生する分子量約50kDaの分泌型タンパク質であり、ヒトおよびヒト以外の多くの哺乳類や鳥類において発現していることが知られている。また、AIMは、血液においては、尿中へ排出されずに安定的に存在するために、その大部分がIgMと複合体を形成し、非結合体で存在することがほとんどないことが知られている(非特許文献5、6)。また、被検者の試料中のAIM濃度がより低値である場合に、肝疾患または肝疾患になる可能性が高いとの示唆も存在している(特許文献2)。これらの知見にも関わらず、今回、肝癌の被験体において、生体試料中のfree AIMが顕著に増加することが見出された。したがって、被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量することによって、当該被験体における肝癌を良好な検出感度および特異性で検出することができる。本明細書中、「free AIM」とは、生体試料において、AIMの他の結合パートナー、特にIgM、と複合体を形成していない、非結合体のAIMをいう。これに対し、「total AIM」とは、「free AIM」と、他の結合パートナー(例えばIgM等)と複合体を形成したAIM(以下、複合体AIMとも称する)の総称であり、「total AIMを検出または測定する」とは、生体試料中のfree AIMと複合体AIMの両方を検出または測定することをいう。
<動物感作>
抗原として全長ヒトrAIM(2mg/ml)を等量のTiterMaxGold(G−1フナコシ)と混合しエマルジョンを作製した。免疫動物にはBalb/cマウス(チャールズリバー(株)8週齢のメス2匹を用い、後ろ足底部へ抗原溶液50μLを投与した。2週間後に同様の投与を行い、更に2週間以上をおいて抗原溶液50μgを後ろ足底部へ投与し3日後の細胞融合に備えた。
ミエローマ細胞にはマウスP3U1を用い、増殖培養には、RPMI1640(11875−119 GIBCO)に、グルタミンとピルビン酸を加え、FBS(S1560 BWT社)を10%になるように添加した培地を用いた。抗生物質としてはペニシリン、ストレプトマイシンを適量加えた。
麻酔下にて心臓採血を行ったマウスから、無菌的に膝窩リンパ節を摘出し、#200メッシュ付ビーカーにのせ、シリコン棒で押しながら、細胞浮遊液を調製した。細胞はRPMI1640にて2回の遠心洗浄を行った後、細胞数をカウントした。対数増殖期の状態のミエローマ細胞を遠心により集め、洗浄後、リンパ細胞とミエローマ細胞の比率が5対1となるように調製し、混合遠心を行った。細胞融合はPEG1500(783641 ロシュ)を用いて行った。すなわち、細胞ペレットへ1mLのPEG液を3分間かけて反応させ、その後段階的に希釈を行い、遠心にて洗浄した後、培地を加え96ウェルプレート15枚へ200μLずつ入れ、1週間の培養を行った。培地にはミエローマ細胞用培地にHATサプリメント(21060−017 GIBCO)を加え、FBS濃度を15%にしたものを用いた。
凍結保存された細胞を解凍し、増殖培養を行った後、1週間以上前に0.5mlのプリスタン(42−002 コスモバイオ)を腹腔内投与したヌードマウス(BALB/cAJcl−nu/nu 日本クレア)の腹腔へ、1×107個を投与し、およそ2週間後に4〜12mlの腹水を得た。遠心処理にて固形物を除去した後、凍結保存を行った。
健常人4例、NAFL患者6例、NASH患者6例、NASH肝癌患者(HCC)14例の血清を、還元条件と非還元条件にてアガロースゲル電気泳動を行い、抗AIM抗体にてウエスタンブロットを行った。
還元条件では、患者血清をSDSとメルカプトエタノールを含むsample bufferと混合し、99℃にて5分間還元した後、e−PAGEL(アト−株式会社)ゲルに添加し、SDS−PAGE法にて分離した。非還元条件では、患者血清をSDSとメルカプトエタノールを含まないsample bufferと混合し、Native−PAGE法にて分離した。電気泳動後、蛋白質をPVDF膜(Immobilon,ミリポア社)に転写し、実施例1で作製したマウス抗ヒトAIMモノクローナル抗体と4℃ overnightにて一次抗体反応を行った。二次抗体にHRP結合抗マウスIgG抗体、検出試薬としてLuminata Forte Western HRP Substrate(ミリポア社)を用い、シグナルの検出はImage Quant LAS 4000(GE Healthcare社)にて行った。
free AIMを定量するHuman AIM ELISA kit(CY−8080,CircuLex社)を用い、健常人10例、NAFL患者42例、NASH患者135例、NASH肝癌患者(HCC)26例の血清中のfree AIM濃度を測定した。測定はキットの取り扱い手順書に従って実施した。統計解析はMan−Whittney U testを用い、p<0.05を有意差ありとした。
その結果、NAFL患者、NASH患者のfree AIM濃度はそれぞれ1.07±0.568μg/mL、1.12±0.632μg/mLであり、健常人(1.12±0.187μg/mL)と差はなかったが、NASH肝癌患者(HCC)では、2.90±1.375μg/mLとfree AIMが有意に高かった(図2)。
前述のfree AIMを定量するHuman AIM ELISA kit (CY−8080,CircuLex社)を用いて、NASH患者135例、NASH肝癌患者(HCC)26例の血清中のfree AIM濃度を測定した。
さらにtotal AIMを定量するELISAを用いて、患者血清中のtotal AIM濃度を測定した。測定にあたっては、BCA法で濃度を値付けした標準物質を用いた。当該ELISAでは、定法に従って、マウス抗ヒトAIMモノクローナル抗体をプレートに固相化し、患者血清を添加した。洗浄後、HRP標識マウス抗ヒトAIMモノクローナル抗体にて反応させ、HRP基質にて発色させた。用いた抗AIM抗体は、いずれも実施例1に記載の方法に従って作製された抗体であり、free AIMと複合体AIMの双方を認識し、それぞれエピトープが異なる抗体である。
肝臓の線維化の進行に伴いtotal AIMの増加が報告されているため、Bruntの分類(Am J Gastroenterol. 1999 Sep;94(9):2467−2674)に従って、線維化のステージ1と2(F1−F2)、ステージ3(F3)、ステージ4(F4)の3群に患者を分けて解析した。NASH患者のうち、繊維化が見られなかった27例は除き、解析したNASH患者とNASH肝癌患者(HCC)のそれぞれの症例数は、F1−F2で71例と4例、F3で30例と10例、F4で7例と12例であった。
free AIMはいずれのステージにおいても、NASH患者に比べNASH肝癌患者(HCC)で有意に増加した(図3)。total AIMはいずれのステージでも、NASH患者とNASH肝癌患者の間に有意な差は見られなかった(図4)。
前述のfree AIMを定量するHuman AIM ELISA kit(CY−8080,CircuLex社)と、実施例4で使用したものと同じtotal AIMを定量するELISAを用い、NAFL患者42例、NASH患者135例とNASH肝癌患者(HCC)26例の血清中のfree AIM濃度とtotal AIM濃度を測定した。total AIMの増加に伴いfree AIMは増加したが、NAFL患者、NASH患者(あわせてnon−HCC)(白丸)に比べNASH肝癌患者(HCC)(黒丸)のfree AIMの増加は顕著であった(図5)。
NASH患者(135例)と、NASH肝癌患者(HCC)(26例)において、血清中のfree AIM濃度とtotal AIM濃度のROC解析を行った(表1参照)。
AUCは、free AIMでは0.927、total AIMでは0.801であった(表1の(A))。free AIMがより高い精度で肝癌の判別が可能であった。
肝癌の発症は、肝臓の線維化が進行するほど起こりやすいことが知られている。線維化ステージ3(F3)およびステージ4(F4)の線維化進行症例において、血清中のfree AIM濃度とtotal AIM濃度のROC解析を行った。線維化進行症例では、AUCはfree AIMでは0.918、total AIMでは0.709であった(表1の(B))。線維化進行症例においても、free AIMは高い精度で肝癌の判別が可能であったが、 total AIMの精度は低かった。
NAFL患者、NASH患者(あわせてnon−HCC患者)(177例)と、NASH肝癌患者(HCC)(26例)を対象に、血清中のfree AIM濃度とtotal AIM濃度およびfree AIM濃度とtotal AIM濃度の比率につきROC解析を行った。AUCは、free AIMで0.929、total AIMで0.806、free AIM/total AIM比で0.842であり、free AIMがより高い診断効率で肝癌患者の判別が可能であった(図6参照)。
NAFL患者、NASH患者(あわせてnon−HCC)(177例)と、NASH肝癌患者(HCC)(26例)について血中のfree AIM濃度を測定し、カットオフ値を1.6μg/mLとして、free AIMによる肝癌の診断的価値を検討した。その結果、NASH肝癌患者(HCC)で1.6μg/mL以上を示した患者は23例であり、診断感度は0.885(23/26)であった。また、肝癌ではない患者で1.6μg/mL未満を示した患者は152例であり、診断特異度は0.859(152/177)であった(表2)。
NASH肝癌患者25例を対象として、血中のfree AIM濃度、total AIM濃度、free AIM濃度とtotal AIM濃度の比率につき、腫瘍マーカー(PIVKA−II,AFP)との関連性を検討した。PIVKA−IIとAFPのカットオフ値をそれぞれ40mAU/mL、20ng/mLとして患者を分別し、それぞれの患者についてfree AIM濃度、total AIM濃度、free AIM濃度とtotal AIM濃度の比率を解析した。その結果、各腫瘍マーカーのカットオフ値以上を示した患者群と、カットオフ値未満を示した患者群間におけるfree AIM濃度、total AIM濃度、free AIM濃度とtotal AIM濃度の比率にいずれも有意差は認められなかった(表3)。
Claims (16)
- 肝癌の検査方法であって、
被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量する工程を含む、
方法。 - 肝癌の診断を補助する方法であって、
被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量する工程を含む、
方法。 - 肝癌を検査するために、被験体に由来する生体試料中のfree AIMを検出または定量する方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法であって、
前記生体試料が、体液である、
方法。 - 請求項4に記載の方法であって、
前記体液が、血清、血漿、全血および尿からなる群から選択される、
方法。 - 請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法であって、
前記肝癌が、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)に起因する肝癌である、
方法。 - 請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法であって、
前記検出または定量は、イムノアッセイによるものである、
方法。 - 請求項7に記載の方法であって、
前記検出または定量は、生体試料とfree AIMに結合する抗体とを接触させることにより行う、
方法。 - 請求項8に記載の方法であって、
前記検出または定量は、free AIMに特異的に結合する抗体により行う、
方法。 - 請求項8または請求項9に記載の方法であって、
前記検出または定量は、ELISAによる測定である、
方法。 - 請求項6〜10のいずれか1項に記載の方法であって、
前記検出または定量は、血清、血漿または全血から選択される血液試料をタンパク質変性条件に曝露することなく、かつ、還元条件に曝露することなく行うことを特徴とする、
方法。 - 請求項1または請求項2に記載の方法であって、
被験体に由来する生体試料中のtotal AIMを定量する工程をさらに含む、
方法。 - 請求項12に記載の方法であって、
free AIMとtotal AIMの比率を算出する工程をさらに含む、
方法。 - free AIMに結合する抗体を含む、肝癌の検査または診断補助用キット。
- 請求項14に記載のキットであって、
前記抗体が、free AIMに特異的に結合する抗体である、
キット。 - 請求項14または請求項15に記載のキットであって、
前記肝癌が、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)に起因する肝癌である、
キット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015178402 | 2015-09-10 | ||
JP2015178402 | 2015-09-10 | ||
PCT/JP2016/076562 WO2017043617A1 (ja) | 2015-09-10 | 2016-09-09 | 肝癌の検査方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017043617A1 JPWO2017043617A1 (ja) | 2018-08-16 |
JP6688307B2 true JP6688307B2 (ja) | 2020-04-28 |
Family
ID=58239926
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017538533A Active JP6688307B2 (ja) | 2015-09-10 | 2016-09-09 | 肝癌の検査方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20190317096A1 (ja) |
EP (1) | EP3349011B1 (ja) |
JP (1) | JP6688307B2 (ja) |
CN (1) | CN108351358B (ja) |
ES (1) | ES2908448T3 (ja) |
TW (1) | TWI704228B (ja) |
WO (1) | WO2017043617A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3681528A4 (en) * | 2017-09-13 | 2021-07-21 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | IDENTIFICATION AND MONITORING OF THE APOPTOSIS INHIBITOR OF MACROPHAGES |
JP7239139B2 (ja) * | 2018-08-03 | 2023-03-14 | 国立大学法人金沢大学 | 肝硬変の診断方法、非アルコール性脂肪肝炎及び肝細胞がんの合併症の診断方法並びに非アルコール性脂肪肝炎及び食道胃静脈瘤の合併症の診断方法 |
JP7315965B2 (ja) * | 2018-11-09 | 2023-07-27 | 積水メディカル株式会社 | ウィルス性肝癌の検出方法 |
JP7315968B2 (ja) * | 2019-01-31 | 2023-07-27 | 積水メディカル株式会社 | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 |
US20220146529A1 (en) * | 2019-01-31 | 2022-05-12 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunoassay method for free aim in biological sample |
CN113728233A (zh) * | 2019-01-31 | 2021-11-30 | 积水医疗株式会社 | 用于生物样品中的游离aim的免疫分析方法和分析试剂盒 |
WO2022025069A1 (ja) * | 2020-07-28 | 2022-02-03 | 株式会社シンクメディカル | 疾患リスク評価方法、疾患リスク評価装置、及び疾患リスク評価プログラム |
CN112661847B (zh) * | 2021-01-14 | 2022-06-03 | 温州医科大学 | 一种以巨噬细胞凋亡抑制因子为靶点的全人源拮抗抗体及其应用 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5314804A (en) * | 1992-03-24 | 1994-05-24 | Serim Research Corporation | Test for Helicobacter pylori |
JPWO2011145725A1 (ja) * | 2010-05-20 | 2013-07-22 | 宮崎 徹 | Aim関連疾患の診断方法及び診断用キット |
EP2572730A4 (en) * | 2010-05-20 | 2013-11-06 | Toru Miyazaki | PROCESS FOR PROPHYLAXIS OR TREATMENT OF METABOLIC SYNDROME |
JP6143015B2 (ja) * | 2012-04-27 | 2017-06-07 | 宮崎 徹 | 肝疾患の予防または治療剤 |
WO2017022315A1 (ja) * | 2015-08-06 | 2017-02-09 | エーディア株式会社 | 腎疾患の検査方法 |
-
2016
- 2016-09-09 EP EP16844478.4A patent/EP3349011B1/en active Active
- 2016-09-09 CN CN201680052566.6A patent/CN108351358B/zh active Active
- 2016-09-09 JP JP2017538533A patent/JP6688307B2/ja active Active
- 2016-09-09 ES ES16844478T patent/ES2908448T3/es active Active
- 2016-09-09 WO PCT/JP2016/076562 patent/WO2017043617A1/ja unknown
- 2016-09-09 TW TW105129335A patent/TWI704228B/zh active
- 2016-09-09 US US15/757,014 patent/US20190317096A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-12-28 US US17/135,168 patent/US20210123917A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3349011A4 (en) | 2019-02-06 |
ES2908448T3 (es) | 2022-04-29 |
WO2017043617A1 (ja) | 2017-03-16 |
JPWO2017043617A1 (ja) | 2018-08-16 |
US20190317096A1 (en) | 2019-10-17 |
CN108351358A (zh) | 2018-07-31 |
EP3349011B1 (en) | 2022-02-23 |
TW201723186A (zh) | 2017-07-01 |
EP3349011A1 (en) | 2018-07-18 |
US20210123917A1 (en) | 2021-04-29 |
CN108351358B (zh) | 2021-05-07 |
TWI704228B (zh) | 2020-09-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6688307B2 (ja) | 肝癌の検査方法 | |
JP6666916B2 (ja) | 腎疾患の検査方法 | |
US20110065199A1 (en) | Atherosclerosis marker and use thereof | |
JP7315968B2 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 | |
US10228373B2 (en) | Kit and method for diagnosis, prognosis or monitoring of liver disease through measurement of amount of AST | |
JP7315965B2 (ja) | ウィルス性肝癌の検出方法 | |
DK3102600T3 (en) | COMPOSITION AND PROCEDURE FOR DETECTIVE DEPARTURAL NEOPLASTIC DISEASE | |
US11242408B2 (en) | Monoclonal antibody specific for gamma-glutamyl-l-epsilon-lysine for the monitoring of apoptosis | |
WO2013046760A1 (ja) | 胃癌の検査方法及び検査キット | |
KR20190011358A (ko) | 위암 진단용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 위암 진단 방법 | |
JP2022075614A (ja) | 遊離aimに特異的なモノクローナル抗体およびその利用 | |
CN109997043B (zh) | 护理点测定法 | |
JP2024099260A (ja) | 骨強度の低下を伴う疾患検査用バイオマーカー | |
JP2024521881A (ja) | 非アルコール性脂肪性肝疾患のための線維症バイオマーカー | |
JP2013083556A (ja) | 膵臓癌の検査方法及び検査キット |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180316 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190628 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200309 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200403 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6688307 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |