JP2022186528A - 微粒子水酸化マグネシウムを含む殺菌性組成物及び破骨細胞分化抑制用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌(persister)に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
[項1]下記(A)及び(B)を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する殺菌性組成物。
(A)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積50%粒子径(D50)が20~1000nmである。
(B)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)と体積基準累積90%粒子径(D90)との比(D90/D10)が5以下である。
[項2]前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)が10~800nmである、項1に記載の殺菌性組成物。
[項3]前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積90%粒子径(D90)が40~2000nmである、項1又は2に記載の殺菌性組成物。
[項4]前記水酸化マグネシウムの下記式(I)で表される沈降度が0.3以上である、項1~3の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
・沈降度=H/H0 式(I)
(但し、当該水酸化マグネシウムを10g/Lの割合で水と混合し、10分間撹拌して得られたスラリー100mLをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをH0、10分間静置後に測定される内容物の高さをHとする。)
[項5]水酸化マグネシウム濃度が0.0003g/L以上の水性懸濁液である、項1~4の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
[項6]感染症細菌に対する殺菌及び/又は抗菌作用を有する、項1~5の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
[項7]歯周病原因菌に対する殺菌及び/又は抗菌作用を有する、項6に記載の殺菌性組成物。
[項8]生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び/又は抑制する作用を有する、項1~7の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
[項9]破骨細胞の分化抑制作用を有する、項1~8の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
[項10]下記(A)及び(B)を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
(A)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積50%粒子径(D50)が20~1000nmである。
(B)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)と体積基準累積90%粒子径(D90)との比(D90/D10)が5以下である。
[項11]前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)が10~800nmである、項10に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
[項12]前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積90%粒子径(D90)が40~2000nmである、項10又は11に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
[項13]前記水酸化マグネシウムの下記式(I)で表される沈降度が0.3以上である、項10~12の何れか一項に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
・沈降度=H/H0 式(I)
(但し、当該水酸化マグネシウムを10g/Lの割合で水と混合し、10分間撹拌して得られたスラリー100mLをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをH0、10分間静置後に測定される内容物の高さをHとする。)
[項14]液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、項1~13の何れか一項に記載の組成物。
[項15]生体及び/又は環境に使用するための、項1~14の何れか一項に記載の組成物。
[項16]医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、項1~15の何れか一項に記載の組成物。
[項17]洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、項1~16の何れか一項に記載の組成物。
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌(persister)に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
・沈降度=H/H0 式(I)
なお、当該水酸化マグネシウムを10g/Lの割合で水と混合し、10分間撹拌して得られたスラリー100mLをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをH0、10分間静置後に測定される内容物の高さをHとする。
ブタコレラ菌(serovar Choleraesuis)、チフス菌(serovar Typhi)、パラチフス菌(serovar Paratyphi A, B, C)、腸炎菌(serovar Enteritidis)等が挙げられる。
等が挙げられる。
以下の手順により、試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)を合成し、その後の各評価に供した。
0.2mol/Lの塩化マグネシウム水溶液1000mL及び0.5mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液640mLを、それぞれ122mL/分及び78mL/分の流量で、オーバーフローが200mLである連続反応槽に滞留時間が1分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて500rpmで攪拌すると共に、常時20℃となるように温度調整を行った。また、反応系のpHが10.2~10.4となるように、水酸化ナトリウム水溶液の流量調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを1000mL採取し、5.66gの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを220mLのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が10g/Lとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて5000rpmで30分間攪拌して再懸濁させることにより、500mLのスラリーを得た。その後、温度を50℃に調節しながら500rpmの攪拌下で4時間熟成させることにより、試験例1の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
2.0mol/Lの塩化マグネシウム水溶液500mLを反応層内で300rpm攪拌下、12.0mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液150mLを25mL/分の流量で添加するバッチ反応を行った。反応期間中、常時20℃となるように温度調整を行った。この反応により52.76gの水酸化マグネシウムを含む反応スラリーを650mL得た。得られたスラリーを300rpmの攪拌下、90℃で2時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを1055mLのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が10g/Lとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて5000rpmで30分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例2の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
1.8mol/Lの塩化マグネシウム水溶液2825mL及び2.2mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液2553mLを、それぞれ49mL/分及び36mL/分の流量で、オーバーフローが840mLである連続反応槽に滞留時間が10分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて600rpmで攪拌すると共に、常時40℃となるように温度調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを600mL採取し、32.19gの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、攪拌翼付きオートクレーブを用いて620rpmの攪拌下、170℃で2時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを1600mLのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が10g/Lとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて5000rpmで30分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例3の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
・粒度分布測定:
前処理として、試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)10mLを0.2重量%ヘキサメタリン酸ナトリウム水溶液60mLで希釈し、超音波ホモジナイザー(日本精機製作所製)を用いて、350μAで3分間超音波処理を行った。前処理後、動的光散乱法粒度分布測定システムEL-SZ2000(大塚電子社製)を用いて粒度分布を測定し、体積基準累積10%粒子径(D10)、同50%粒子径(D50)、及び同90%粒子径(D90)を求めた。
試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリーの走査型電子顕微鏡(Scanning Electron Microscope:SEM)写真を、日本電子株式会社製SEM(JSM-7600F)を使用して撮影した。SEMによる測定時の倍率は、制限されるものではないが、例えば10,000~50,000倍とすることができる。
試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリーの沈降度を、以下の手順により測定した。即ち、試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリー(濃度10g/L)を10分間撹拌後、100mLをメスシリンダーに入れ、直後の内容物の高さH0及び10分間静置後の内容物の高さHを測定し、下記式(I)から沈降度を求めた。
・沈降度=H/H0 式(I)
上記手順で測定された試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリーの粒度分布をそれぞれ図1A~1Cに示し、試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリーのSEM写真をそれぞれ図2A~2Cに示す。また、試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーの体積基準累積10%粒子径(D10)、同50%粒子径(D50)、同90%粒子径(D90)、同90%粒子径(D90)と同10%粒子径(D10)との比(D90/D10)、及び沈降度を以下の表1に示す。
(III-1.水酸化マグネシウムの粒度分布に関する検討)
水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてn=3で評価した。
試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度500mg/L)を調製して用いた。
大腸菌(Escherichia coli)BW25113株(国立遺伝学研究所 NBRPから入手)を用いた。
以下の2種の培地を用いた。
LB寒天培地:トリプトン(Trypton;BD Bacto社製)10g、酵母エキス(Yeast extract;BD Bacto社製)5g、塩化ナトリウム(NaCl)10g及び寒天(Wako社製)15gを1Lの純水に溶解させ、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌した後、10cmディッシュに20mLずつ分注した。
LB培地:トリプトン(Trypton;BD Bacto社製)10g、酵母エキス(Yeast extract;BD Bacto社製)5g、塩化ナトリウム(NaCl)10gを1Lの純水に溶解させ、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌した。
細菌をグリセロールストックからLB寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、37℃で24時間培養した。形成したシングルコロニーをLB培地(10mL)に播種し、37℃の条件下で一晩培養した。一晩培養した菌液250μLをLB培地25mLに播種し、600nmの吸光度が0.6(OD600=0.6)になるまで37℃、180rpmで培養した。
菌液を3,500gで10分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、1×PBS(リン酸緩衝液:137mmol/L 塩化ナトリウム(NaCl)、8.1mmol/Lリン酸水素二ナトリウム(Na2HPO4)、2.68mmol/L 塩化カリウム(KCl)、1.47mmol/L リン酸二水素カリウム(KH2PO4)、pH7.4)を等量加え、再懸濁させた後、3,500gで10分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度500mg/L)にそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を1mLずつ1.5mLのマイクロチューブに移し、37℃の条件下で培養した。0、1、3、6、及び18時間後の菌液を回収し、それぞれ10倍連続希釈(1×PBS)することにより、菌濃度100~109の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を10μLずつLB寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、37℃の条件下で24時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から1mL中の菌数(細胞/mL)を計算した。
得られた結果を以下の表2及び図3のグラフに示す。1×PBS単独を用いた対照例を基準として、硫酸マグネシウムスラリーを用いた比較例では、大腸菌に対する殺菌作用は殆ど見られなかったのに対し、試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを用いた群では、何れも顕著な殺菌作用が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例3(水酸化マグネシウムのD50=437nm)→試験例2(同D50=190nm)→試験例1(同D50=57nm)の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの濃度の観点から評価した。なお、各群についてn=3で評価した。
試験例1の水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度10mg/L、50mg/L、100mg/L、及び500mg/L)を調製して用いた。
前記III-1と同じく大腸菌(Escherichia coli)BW25113を用いた。
前記III-1と同様に実施した。
前記III-1と同様に実施した。
得られた結果を以下の表3及び図4のグラフに示す。水酸化マグネシウム濃度が高くなる(濃度10mg/L→50mg/L→100mg/L→500mg/L)に従い、水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用が向上する傾向が認められた。
試験例1の水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)の大腸菌に対する殺菌性を、Persisterに対する殺菌効果の観点から評価した。なお、各群についてn=3で評価した。
試験例1の水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度500mg/L)を調製して用いた。
前記III-1、III-2と同じく大腸菌(Escherichia coli)BW25113株を用いた。
大腸菌(Escherichia coli)BW25113株を用い、前記III-1と同様の操作を実施し、OD600=0.6の菌液を準備した。Persister大腸菌を誘導するために、菌液にリファンピシンを終濃度100μg/mLで加え、37℃、180rpmで30分間培養した。菌液を3,500gで10分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、100μg/mLのアンピシリンを含むLB培地で3時間培養することで、非Persister大腸菌を排除した。
Persister化した大腸菌(Escherichia coli)BW25113株及び大腸菌(Escherichia coli)BW25113株を用い、前記III-1と同様に実施した。
得られた結果を以下の表4及び図5のグラフに示す。水酸化マグネシウムスラリーは、persister化した大腸菌(Escherichia coli)BW25113株に対しても、非persister大腸菌(Escherichia coli)BW25113株に対するのと同様の殺菌作用が認められた。
口腔内細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス(Aggregatibacter actinomycetemcomitans:以下適宜「AA菌」と略す。)及びストレプトコッカス・サングイニス(Streptococcus sanguinis:以下適宜「SS菌」と略す。)に対する水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)の殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてn=3で評価した。
試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度500mg/L)を調製して用いた。
以下の2種の口腔内細菌を用いた。
・アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス(Aggregatibacter actinomycetemcomitans:AA菌)Y4株(ATCC43718;ATCCから入手)(以下適宜「細菌種1」とする。)
・ストレプトコッカス・サングイニス(Streptococcus sanguinis:SS菌)ATCC10556株(ATCCから入手)(以下適宜「細菌種2」とする。)
以下の2種の培地を用いた。
BHI寒天培地:ブレインハートインフュージョン(Brain heart infusion;BHI)培地(BD Bacto社製)37g、酵母エキス(Yeast extract;BD Bacto社製)10g及び寒天(Wako社製)15gを1Lの純水に溶解させ、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌した後、10cmディッシュに20mLずつ分注した。
BHI培地:ブレインハートインフュージョン(BHI)培地(BD Bacto社製)37g、酵母エキス(Yeast extract;BD Bacto社製)10gを1Lの純水に溶解させ、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌した。
細菌をグリセロールストックからBHI寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、37℃、5%CO2で24時間培養した。形成したシングルコロニーをBHI培地(10mL)に播種し、37℃、5%CO2の条件下で一晩培養した。
細菌種1及び2に対し行った。菌液は16時間培養したものを使用した。菌液を3,500gで10分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、1×PBS(リン酸緩衝液:137mmol/L 塩化ナトリウム(NaCl)、8.1mmol/Lリン酸水素二ナトリウム(Na2HPO4)、2.68mmol/L 塩化カリウム(KCl)、1.47mmol/L リン酸二水素カリウム(KH2PO4)、pH7.4)を等量加え、再懸濁させた後、3,500gで10分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例1~3の水酸化マグネシウムスラリーを500mg/L含む1×PBSにそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を1mLずつ1.5mLのマイクロチューブに移し、37℃、5%CO2の条件下で培養した。0、1、2、及び3時間後の菌液を回収し、それぞれ10倍連続希釈(1×PBS)することにより、菌濃度100~109の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を10μLずつBHI寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、37℃、5%CO2の条件下で24時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から1mL中の菌数(細胞/mL)を計算した。0時間目の菌数を100%としたときのそれぞれの時間での細菌の減少率から殺菌効果を検証した。
得られた結果を以下の表5並びに図6A(AA菌Y4株)及び図6B(SS菌ATCC10556株)のグラフに示す。試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーは、AA菌Y4株及びSS菌ATCC10556株の何れに対しても、顕著な殺菌作用を示した。また、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例3(水酸化マグネシウムのD50=437nm)→試験例2(同D50=190nm)→試験例1(同D50=57nm)の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)による生体細胞の炎症応答抑制作用(抗炎症作用)を、歯周病原性細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス(Aggregatibacter actinomycetemcomitans:AA菌)由来のリポ多糖(LPS)によりマウス単球・マクロファージ様細胞に誘導した炎症性サイトカイン・インターロイキン-1β(IL-1β)発現の抑制作用に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてn=3で評価した。
試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度50mg/L、100mg/L、250mg/L、及び500mg/L)を調製して用いた。
IL-1産生マウス単球・マクロファージ様細胞J774.1株(RIKEN CELL BANKから入手)を用いた。
マウス単球・マクロファージ様細胞J774.1株を6ウェルプレート(CELLSTAR社製)に細胞数1×106個/ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、歯周病原性細菌であるAA菌由来リポ多糖(LPS)を濃度2ng/mLとなるよう加えると共に、試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度50mg/L、100mg/L、250mg/L、及び500mg/L)となるように添加して2時間の培養を行った。また、対照例としてAA菌由来LPSを加えないと共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない1×PBSを用いた例、及び、未処置例としてAA菌由来LPSを濃度2ng/mLとなるよう加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない1×PBSを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、炎症性サイトカインであるインターロイキン-1β(IL-1β)遺伝子の発現を検出した。
RNAの採取:培養2時間後の細胞から、RNA抽出試薬(シカジーニアス(登録商標)、関東化学株式会社製)を用いて、推奨のプロトコールに従い、1.5mLマイクロチューブ(WATSON社製)内にRNAを抽出した。抽出されたRNAの濃度を、超微量分光分析装置NanoDrop2000(Thermo Scientific社製)を用いて計測した。
得られた結果を以下の表7及び図7のグラフに示す。AA菌由来LPSを加えない対照群に対して、AA菌由来LPSを加えた未処置群では、AA株由来LPSにより炎症性サイトカインであるインターロイキン-1β(IL-1β)遺伝子の発現量が増加しており、炎症が誘導されたことが示された。これに対し、AA菌由来LPS及び試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、未処置群と比較してIL-1β遺伝子の発現量が低減されており、何れも顕著な炎症応答抑制作用(抗炎症作用)が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの炎症応答抑制作用は、試験例3(水酸化マグネシウムのD50=437nm)→試験例2(同D50=190nm)→試験例1(同D50=57nm)の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。また、各試験例の水酸化マグネシウムスラリーについて水酸化マグネシウム濃度の影響を検討すると、何れも水酸化マグネシウム濃度が高くなる(濃度10mg/L→50mg/L→100mg/L→500mg/L)に従って、炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。
水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)による破骨細胞の分化修飾作用を、破骨細胞分化誘導因子(RANKL、M-CSF)によりマウス骨髄細胞に誘導した破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子発現の抑制作用に基づき評価した。なお、各試験の各群についてn=3で評価した。
試験例1の水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液を調製して用いた。
ddYマウス(日本エスエルシー株式会社から入手)の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
マウス骨髄細胞を6ウェルプレート(CELLSTAR社製)に細胞数1×105個/ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、破骨細胞分化誘導因子であるRANKL(濃度40ng/mL)及びM-CSF(濃度20ng/mL)を加えると共に、試験例1の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度10mg/L及び100mg/L)となるように添加して2時間の培養を行った。また、未処置例としてRANKL(濃度40ng/mL)及びM-CSF(濃度20ng/mL)を加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない1×PBSを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、破骨細胞の形成及び破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子の発現を検出した。
酒石酸耐性酸ホスファターゼ(TRAP)染色は以下の手順で行った。即ち、leukocyte acid phosphatase kit(Sigma-Aldrich製)を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のTRAP陽性細胞を染色し、BZ-9000 fluorescence microscope (Keyance製)で観察した。さらに3核以上のTRAP陽性細胞数を目視でカウントした。
リアルタイムRT-qPCR法は、使用したプライマーを除き、前記Vと同様の手順で実施した。使用したプライマー(GAPDH遺伝子の増幅用Forward及びReverseプライマー、並びに、破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子の増幅用Forward及びReverseプライマー)の塩基配列を以下の表8に示す。
リアルタイムRT-qPCR法による破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子の発現抑制効果を図8及び以下の表9及び表10に示す。水酸化マグネシウムスラリーを加えない対照群では、破骨細胞分化誘導因子(RANKL、M-CSF)によりマウス骨髄細胞に破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子発現が誘導されたのに対し、試験例1の水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、対照群と比較して破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー(Cathepsin K、DC-STAMP、NFATc1)遺伝子の発現量が何れも抑制されており、顕著な破骨細胞分化修飾作用が認められた。
水酸化マグネシウムスラリー(殺菌性組成物)による破骨細胞の分化修飾作用を、TRAP染色写真に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてn=3で評価した。
試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーを1×PBSと混合した試験液(水酸化マグネシウム濃度1mg/L、10mg/L、及び100mg/L)を調製して用いた。
前記実施例VIと同様に、ddYマウス(日本エスエルシー株式会社から入手)の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
前記実施例VIと同様に、酒石酸耐性酸ホスファターゼ(TRAP)染色は以下の手順で行った。即ち、leukocyte acid phosphatase kit(Sigma-Aldrich製)を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のTRAP陽性細胞を染色し、BZ-9000 fluorescence microscope (Keyance製)で観察した。さらに3核以上のTRAP陽性細胞数を目視でカウントした。
得られたTRAP染色写真を図10Aに示すと共に、本写真に基づくTRAP陽性細胞数(破骨細胞数)の計測結果を下記の表11並びに図10Bに示す。即ち、試験例1~3の各水酸化マグネシウムスラリーは、水酸化マグネシウム濃度が高くなる(濃度1mg/L→10mg/L→100mg/L)に従い、破骨細胞形成(TRAP陽性細胞数)が抑制されており、破骨細胞分化作用の抑制効果が認められた。
Claims (17)
- 下記(A)及び(B)を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する殺菌性組成物。
(A)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積50%粒子径(D50)が20~1000nmである。
(B)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)と体積基準累積90%粒子径(D90)との比(D90/D10)が5以下である。 - 前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)が10~800nmである、請求項1に記載の殺菌性組成物。
- 前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積90%粒子径(D90)が40~2000nmである、請求項1又は2に記載の殺菌性組成物。
- 前記水酸化マグネシウムの下記式(I)で表される沈降度が0.3以上である、請求項1~3の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
・沈降度=H/H0 式(I)
(但し、当該水酸化マグネシウムを10g/Lの割合で水と混合し、10分間撹拌して得られたスラリー100mLをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをH0、10分間静置後に測定される内容物の高さをHとする。) - 水酸化マグネシウム濃度が0.0003g/L以上の水性懸濁液である、請求項1~4の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
- 感染症細菌に対する殺菌及び/又は抗菌作用を有する、請求項1~5の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
- 歯周病原因菌に対する殺菌及び/又は抗菌作用を有する、請求項6に記載の殺菌性組成物。
- 生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び/又は抑制する作用を有する、請求項1~7の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
- 破骨細胞の分化抑制作用を有する、請求項1~8の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
- 下記(A)及び(B)を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
(A)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積50%粒子径(D50)が20~1000nmである。
(B)動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)と体積基準累積90%粒子径(D90)との比(D90/D10)が5以下である。 - 前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積10%粒子径(D10)が10~800nmである、請求項10に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
- 前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積90%粒子径(D90)が40~2000nmである、請求項10又は11に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
- 前記水酸化マグネシウムの下記式(I)で表される沈降度が0.3以上である、請求項10~12の何れか一項に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
・沈降度=H/H0 式(I)
(但し、当該水酸化マグネシウムを10g/Lの割合で水と混合し、10分間撹拌して得られたスラリー100mLをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをH0、10分間静置後に測定される内容物の高さをHとする。) - 液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、請求項1~13の何れか一項に記載の組成物。
- 生体及び/又は環境に使用するための、請求項1~14の何れか一項に記載の組成物。
- 医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、請求項1~15の何れか一項に記載の組成物。
- 洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、請求項1~16の何れか一項に記載の組成物。
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