JP2009240328A5

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Publication number: JP2009240328A5
Application number: JP2009170622A
Authority: JP
Filing date: 2009-07-21
Publication date: 2010-07-08
Anticipated expiration: 2027-04-10

Claims

ＧＩＰ分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）テスト化合物をイン・ビトロにて宿主細胞またはＧプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで該ＧＰＣＲが、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含む、工程；
（ｂ）該受容体の機能性を刺激するテスト化合物の能力を決定する工程であって、
該ＧＰＣＲの機能性を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬であることを示す、工程；
（ｃ）該化合物が、工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を前もって投与した脊椎動物から得られる試料中のＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程を含み、
該試料におけるＧＩＰレベルを増加させるテスト化合物の能力が、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。
ＧＩＰ分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）テスト化合物をイン・ビトロにて宿主細胞またはＧプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで該ＧＰＣＲが、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含む、工程；
（ｂ）該受容体の機能性を刺激するテスト化合物の能力を決定する工程であって、
該ＧＰＣＲの機能性を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬であることを示す、工程；
（ｃ）試料が由来する脊椎動物における骨質量のレベルを該化合物が増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物が工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を前もって投与されている工程を含み、
該脊椎動物における骨質量を増加させるテスト化合物の能力が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。
前記ＧＰＣＲが組換え体である、請求項１または２に記載の方法。
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
前記決定する工程が、第二のメッセンジャーのレベルの決定を介するものである請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
前記第二のメッセンジャーが環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ_３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性およびＣａ^２＋よりなる群から選択される請求項５に記載の方法。
ｃＡＭＰのレベルが増加する請求項６に記載の方法。
前記決定する工程が、メラニン保有細胞アッセイの使用を介するもの、前記ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の決定を介するもの、またはレポーターアッセイを介するものである請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞が酵母宿主細胞である請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞がメラニン保有細胞である請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
前記テスト化合物が、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
前記分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項１２に記載の方法。
前記ＧＰＣＲのアミノ酸配列が、配列番号２に対してその全長にわたって少なくとも８０％の同一性を有する請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＣＲが、配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項１〜１３いずれか１項記載の方法。
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニストが、ＧＰＲ１１９アゴニストを前もって投与した脊椎動物から得られる試料中のＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物におけるＧＩＰレベルを増加させるＧＰＲ１１９アゴニストの能力が、該ＧＰＲ１１９アゴニストが、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項１６に記載の方法。
前記分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項１７に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１０μＭの値未満のＥＣ_５０を有する、請求項１６〜２０いずれか１項記載の方法。
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）分泌促進薬を同定するための、Ｇプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）の使用であって、
（ａ）該ＧＰＣＲがテスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドと接触し、ここで該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含み、
（ｂ）前記公知のリガンドとＧＰＣＲの間の複合体が、検出可能であり；そして
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、
（ｉ）前記テスト化合物が、脊椎動物から得られる試料中のＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物は該テスト化合物を前もって投与されており、該テスト化合物はその存在下で、より少数の前記複合体が形成される、工程をさらに含み、
ここで脊椎動物におけるＧＩＰのレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、使用。
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）分泌促進薬を同定するための、Ｇプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）の使用であって、
（ａ）該ＧＰＣＲがテスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドと接触し、ここで該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含み、
（ｂ）前記公知のリガンドとＧＰＣＲの間の複合体が、検出可能であり；そして
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、
（ｉ）前記テスト化合物が、試料の由来する脊椎動物中の骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物は該テスト化合物を投与されており、該テスト化合物はその存在下で、より少数の前記複合体が形成される、工程をさらに含み、
ここで脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、使用。
前記公知のリガンドが標識されている、請求項２２または２３に記載の使用。
請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の使用であって、以下：
（ｉ）その存在下で、より少数の前記複合体が形成される前記テスト化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞またはＧＩＰを分泌可能な細胞と接触させる工程；および、
（ｉｉ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞または該ＧＩＰを分泌可能な細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程をさらに含み、
該脊椎動物腸内分泌細胞またはＧＩＰを分泌可能な細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬であることを示す、使用。
前記ＧＰＣＲが、組換え体である請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の使用。
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の使用。
前記公知のアゴニストがプロテイン−結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニストである請求項２２〜２７のいずれか１項に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項２８に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項２８または２９に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１０μＭの値未満のＥＣ_５０を有する、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項２８〜３１のいずれか１項記載の使用。
前記アゴニストの分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項３１に記載の使用。
前記テスト化合物が、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の使用。
前記テスト化合物の分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項３４に記載の使用。
前記ＧＰＣＲのアミノ酸配列が、配列番号２に対してその全長にわたって少なくとも８０％同一性を有する請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の使用。
前記ＧＰＣＲが、配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項２２〜３６のいずれか１項に記載の使用。
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）を、テスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドとイン・ビトロにて接触させる工程であって、ここで該ＧＰＣＲが、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含む、工程；
（ｂ）前記公知のリガンドとＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；そして
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程であって、ここで該決定する工程は、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示す、工程；
（ｄ）その存在下で、より少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を、前もって投与した脊椎動物から得られた試料中のＧＩＰのレベルを、テスト化合物が増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物においてＧＩＰのレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体（ＧＰＣＲ）を、テスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドとイン・ビトロにて接触させる工程であって、ここで該ＧＰＣＲが、
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｉｖ）０．１×ＳＳＣ中での６５℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧＰＣＲのアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２を有するＧＰＣＲの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、（ｉ）〜（ｖ）のＧＰＣＲ由来のＧＰＣＲ；
を含む、工程；
（ｂ）前記公知のリガンドとＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；そして
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程であって、ここで該決定する工程は、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示す、工程；
（ｄ）その存在下で、より少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物が、前もって投与される、試料が由来する脊椎動物の骨質量のレベルを、テスト化合物が増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、ＧＩＰ分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程（ｂ）における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。
前記公知のリガンドが標識されている、請求項３８〜３９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＣＲが組換え体である、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
前記公知のリガンドがＧプロテイン−結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニストである請求項３８〜４２いずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項４３に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである、請求項４３または４４に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１０μＭの値未満のＥＣ_５０を有する、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項４３〜４６のいずれか１項に記載の方法。
前記アゴニストの分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項４７に記載の方法。
前記テスト化合物が、モル当たり１０，０００グラム未満の分子量を有する小分子である請求項４３〜４８のいずれか１項に記載の方法。
前記テスト化合物の分子量が、モル当たり５，０００グラム未満である請求項４９に記載の方法。
前記ＧＰＣＲのアミノ酸配列が、配列番号２に対してその全長にわたって少なくとも８０％同一性を有する請求項４３〜５０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＣＲが、配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項４３〜５０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１μＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項１６〜２０いずれか１項記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項１６〜２０いずれか１項記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１μＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の使用。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１μＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有する、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−１（ＣＲＦ−１）受容体に対する選択性を超える少なくとも約１００倍のＧＰＲ１１９に対する選択性を有する、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、経口的に活性である、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有し、かつ、経口的に活性である、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−１（ＣＲＦ−１）受容体に対する選択性を超える少なくとも約１００倍のＧＰＲ１１９に対する選択性を有する、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、経口的に活性である、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有し、かつ、経口的に活性である、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−１（ＣＲＦ−１）受容体に対する選択性を超える少なくとも約１００倍のＧＰＲ１１９に対する選択性を有する、請求項４３〜４８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、経口的に活性である、請求項４３〜４８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１００ｎＭの値未満のＥＣ _５０を有し、かつ、経口的に活性である、請求項４３〜４８のいずれか１項に記載の方法。