JP2009240328A5 - - Google Patents
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- GIP分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程:
(a) テスト化合物をイン・ビトロにて宿主細胞またはGプロテイン−結合受容体(GPCR)を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで該GPCRが、
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含む、工程;
(b) 該受容体の機能性を刺激するテスト化合物の能力を決定する工程であって、
該GPCRの機能性を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がGIP分泌促進薬であることを示す、工程;
(c) 該化合物が、工程(b)における前記受容体の機能性を刺激する化合物を前もって投与した脊椎動物から得られる試料中のGIPレベルを増加させるか否かを決定する工程を含み、
該試料におけるGIPレベルを増加させるテスト化合物の能力が、該テスト化合物がGIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。 - GIP分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程:
(a) テスト化合物をイン・ビトロにて宿主細胞またはGプロテイン−結合受容体(GPCR)を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで該GPCRが、
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含む、工程;
(b) 該受容体の機能性を刺激するテスト化合物の能力を決定する工程であって、
該GPCRの機能性を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がGIP分泌促進薬であることを示す、工程;
(c) 試料が由来する脊椎動物における骨質量のレベルを該化合物が増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物が工程(b)における前記受容体の機能性を刺激する化合物を前もって投与されている工程を含み、
該脊椎動物における骨質量を増加させるテスト化合物の能力が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。 - 前記GPCRが組換え体である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがGPCRをコードするポリヌクレオチドを含む請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記決定する工程が、第二のメッセンジャーのレベルの決定を介するものである請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第二のメッセンジャーが環状AMP(cAMP)、環状GMP(cGMP)、イノシトール1,4,5−三リン酸(IP3)、ジアシルグリセロール(DAG)、MAPキナーゼ活性、MAPK/ERKキナーゼキナーゼ−1(MEKK1)活性およびCa2+よりなる群から選択される請求項5に記載の方法。
- cAMPのレベルが増加する請求項6に記載の方法。
- 前記決定する工程が、メラニン保有細胞アッセイの使用を介するもの、前記GPCRを含む膜へのGTPγS結合の決定を介するもの、またはレポーターアッセイを介するものである請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が酵母宿主細胞である請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞がメラニン保有細胞である請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記テスト化合物が、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項12に記載の方法。
- 前記GPCRのアミノ酸配列が、配列番号2に対してその全長にわたって少なくとも80%の同一性を有する請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPCRが、配列番号2のアミノ酸配列を含む請求項1〜13いずれか1項記載の方法。
- グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド(GIP)分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程:
(a) Gプロテイン−結合受容体119(GPR119)アゴニストが、GPR119アゴニストを前もって投与した脊椎動物から得られる試料中のGIPレベルを増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物におけるGIPレベルを増加させるGPR119アゴニストの能力が、該GPR119アゴニストが、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。 - 前記GPR119アゴニストが、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項16に記載の方法。
- 前記分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項17に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストがヒトGPR119のアゴニストである請求項16〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは選択的GPR119アゴニストである、請求項16〜19のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは10μMの値未満のEC50を有する、請求項16〜20いずれか1項記載の方法。
- グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド(GIP)分泌促進薬を同定するための、Gプロテイン−結合受容体(GPCR)の使用であって、
(a) 該GPCRがテスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドと接触し、ここで該GPCRは:
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含み、
(b) 前記公知のリガンドとGPCRの間の複合体が、検出可能であり;そして
(c) 該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、
(i) 前記テスト化合物が、脊椎動物から得られる試料中のGIPレベルを増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物は該テスト化合物を前もって投与されており、該テスト化合物はその存在下で、より少数の前記複合体が形成される、工程をさらに含み、
ここで脊椎動物におけるGIPのレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、使用。 - グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド(GIP)分泌促進薬を同定するための、Gプロテイン−結合受容体(GPCR)の使用であって、
(a) 該GPCRがテスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドと接触し、ここで該GPCRは:
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含み、
(b) 前記公知のリガンドとGPCRの間の複合体が、検出可能であり;そして
(c) 該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、
(i) 前記テスト化合物が、試料の由来する脊椎動物中の骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程であって、該脊椎動物は該テスト化合物を投与されており、該テスト化合物はその存在下で、より少数の前記複合体が形成される、工程をさらに含み、
ここで脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、使用。 - 前記公知のリガンドが標識されている、請求項22または23に記載の使用。
- 請求項22〜24のいずれか一項に記載の使用であって、以下:
(i) その存在下で、より少数の前記複合体が形成される前記テスト化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞またはGIPを分泌可能な細胞と接触させる工程;および、
(ii) 該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞または該GIPを分泌可能な細胞からのGIP分泌を刺激するか否かを決定する工程をさらに含み、
該脊椎動物腸内分泌細胞またはGIPを分泌可能な細胞からのGIP分泌を刺激するテスト化合物の能力が、該テスト化合物がGIP分泌促進薬であることを示す、使用。 - 前記GPCRが、組換え体である請求項22〜25のいずれか1項に記載の使用。
- 前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがGPCRをコードするポリヌクレオチドを含む請求項22〜26のいずれか1項に記載の使用。
- 前記公知のアゴニストがプロテイン−結合受容体119(GPR119)アゴニストである請求項22〜27のいずれか1項に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストがヒトGPR119のアゴニストである請求項28に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストは選択的GPR119アゴニストである、請求項28または29に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストは10μMの値未満のEC50を有する、請求項28〜30のいずれか1項に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストが、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項28〜31のいずれか1項記載の使用。
- 前記アゴニストの分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項31に記載の使用。
- 前記テスト化合物が、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項22〜32のいずれか1項に記載の使用。
- 前記テスト化合物の分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項34に記載の使用。
- 前記GPCRのアミノ酸配列が、配列番号2に対してその全長にわたって少なくとも80%同一性を有する請求項22〜35のいずれか1項に記載の使用。
- 前記GPCRが、配列番号2のアミノ酸配列を含む請求項22〜36のいずれか1項に記載の使用。
- グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド(GIP)分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程:
(a) Gプロテイン−結合受容体(GPCR)を、テスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドとイン・ビトロにて接触させる工程であって、ここで該GPCRが、
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含む、工程;
(b) 前記公知のリガンドとGPCRの間の複合体を検出する工程;そして
(c) 該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程であって、ここで該決定する工程は、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示す、工程;
(d)その存在下で、より少数の前記複合体が工程(c)で形成される化合物を、前もって投与した脊椎動物から得られた試料中のGIPのレベルを、テスト化合物が増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物においてGIPのレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。 - グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド(GIP)分泌促進薬を同定するための方法であって、以下の工程:
(a) Gプロテイン−結合受容体(GPCR)を、テスト化合物の存在下または非存在下で該受容体に対する公知のリガンドとイン・ビトロにて接触させる工程であって、ここで該GPCRが、
(i) 配列番号2のアミノ酸1〜335;
(ii) 配列番号2のアミノ酸2〜335;
(iii) 特異的プライマー配列番号3および配列番号4を用いてヒトDNA試料にてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(iv) 0.1×SSC中での65℃における洗浄をともなう高ストリンジェンシーの条件下で配列番号1の相補体とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドによってコードされるGPCRのアミノ酸配列;
(v) 配列番号2を有するGPCRの構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列;または
(vi) (i)〜(v)で定義されるアミノ酸配列中の一個または数個のアミノ酸の置換、欠失、または付加による、(i)〜(v)のGPCR由来のGPCR;
を含む、工程;
(b) 前記公知のリガンドとGPCRの間の複合体を検出する工程;そして
(c) 該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程であって、ここで該決定する工程は、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示す、工程;
(d)その存在下で、より少数の前記複合体が工程(c)で形成される化合物が、前もって投与される、試料が由来する脊椎動物の骨質量のレベルを、テスト化合物が増加させるか否かを決定する工程を含み、
脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力が、該テスト化合物が、GIP分泌促進薬であることを示し、ここで該脊椎動物はヒトであり、該ヒトは、工程(b)における受容体の機能性を刺激する該化合物を投与されることに既に同意している、方法。 - 前記公知のリガンドが標識されている、請求項38〜39のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPCRが組換え体である、請求項38〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがGPCRをコードするポリヌクレオチドを含む請求項38〜41のいずれか1項に記載の方法。
- 前記公知のリガンドがGプロテイン−結合受容体119(GPR119)アゴニストである請求項38〜42いずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストがヒトGPR119のアゴニストである請求項43に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは選択的GPR119アゴニストである、請求項43または44に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、10μMの値未満のEC50を有する、請求項43〜45のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項43〜46のいずれか1項に記載の方法。
- 前記アゴニストの分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項47に記載の方法。
- 前記テスト化合物が、モル当たり10,000グラム未満の分子量を有する小分子である請求項43〜48のいずれか1項に記載の方法。
- 前記テスト化合物の分子量が、モル当たり5,000グラム未満である請求項49に記載の方法。
- 前記GPCRのアミノ酸配列が、配列番号2に対してその全長にわたって少なくとも80%同一性を有する請求項43〜50のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPCRが、配列番号2のアミノ酸配列を含む請求項43〜50のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは1μMの値未満のEC 50 を有する、請求項16〜20いずれか1項記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは100nMの値未満のEC 50 を有する、請求項16〜20いずれか1項記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストは1μMの値未満のEC 50 を有する、請求項28〜30のいずれか1項に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストは100nMの値未満のEC 50 を有する、請求項28〜30のいずれか1項に記載の使用。
- 前記GPR119アゴニストが、1μMの値未満のEC 50 を有する、請求項43〜45のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、100nMの値未満のEC 50 を有する、請求項43〜45のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−1(CRF−1)受容体に対する選択性を超える少なくとも約100倍のGPR119に対する選択性を有する、請求項16〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、経口的に活性である、請求項16〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、100nMの値未満のEC 50 を有し、かつ、経口的に活性である、請求項16〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−1(CRF−1)受容体に対する選択性を超える少なくとも約100倍のGPR119に対する選択性を有する、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、経口的に活性である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、100nMの値未満のEC 50 を有し、かつ、経口的に活性である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、コルチコトロピン放出因子−1(CRF−1)受容体に対する選択性を超える少なくとも約100倍のGPR119に対する選択性を有する、請求項43〜48のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、経口的に活性である、請求項43〜48のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GPR119アゴニストが、100nMの値未満のEC 50 を有し、かつ、経口的に活性である、請求項43〜48のいずれか1項に記載の方法。
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