JP2003156494A - Immunological diagnostics latex particle - Google Patents
Immunological diagnostics latex particleInfo
- Publication number
- JP2003156494A JP2003156494A JP2001390620A JP2001390620A JP2003156494A JP 2003156494 A JP2003156494 A JP 2003156494A JP 2001390620 A JP2001390620 A JP 2001390620A JP 2001390620 A JP2001390620 A JP 2001390620A JP 2003156494 A JP2003156494 A JP 2003156494A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- functional group
- latex
- graft
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Graft Or Block Polymers (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫学的診断薬材
料に適したラテックス粒子に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to latex particles suitable for immunological diagnostic material.
【0002】[0002]
【従来の技術】現在、診断の重要な手段の一つにラテッ
クス粒子を用いた免疫学的検査法がある。これは被検査
物質(抗原または抗体)と反応する物質(抗体または抗
原)を結合させたラテックス粒子を検体と混合させ、特
異的凝集の有無を判定する検査法である。2. Description of the Related Art At present, one of the important means for diagnosis is an immunological test method using latex particles. This is an inspection method in which latex particles having a substance (antibody or antigen) that reacts with a substance to be inspected (antigen or antibody) bound thereto are mixed with a sample to determine the presence or absence of specific aggregation.
【0003】従来から、赤血球にツベルクリン多糖体や
蛋白質を固定する凝集反応による方法等が開発された。
赤血球は大粒径・高比重であるので凝集反応の時間が短
く感度も比較的高いという利点があるものの、表面に種
々の抗原が存在し、個体差が大きいという欠点があっ
た。このほか、担体粒子としてポリスチレン、スチレン
−アクリル酸共重合体などを用いた免疫学的診断用ラテ
ックス粒子も開発されている。Conventionally, methods such as an agglutination reaction for fixing tuberculin polysaccharides and proteins to erythrocytes have been developed.
Since erythrocytes have a large particle size and high specific gravity, they have the advantage that the agglutination reaction time is short and the sensitivity is relatively high, but they have the drawback that various antigens are present on the surface and individual differences are large. In addition, latex particles for immunological diagnosis using polystyrene, styrene-acrylic acid copolymer, etc. as carrier particles have been developed.
【0004】これらのラテックス粒子は、ラテックス粒
子表面に硫酸基、カルボキシル基、エポキシ基、アミノ
基等の官能基が導入されているために、化学結合によっ
て抗原あるいは抗体を固定することができる。 しかし
測定の対象や検体の濃度や測定条件によっては、ラテッ
クス粒子表面に直接官能基を導入し抗原あるいは抗体を
化学結合によって感作させた免疫学的診断ラテックス粒
子の感度は、満足できない場合あるいは測定が不可能の
場合もあるものであった。Since these latex particles have functional groups such as a sulfate group, a carboxyl group, an epoxy group and an amino group introduced on the surface of the latex particles, an antigen or an antibody can be immobilized by a chemical bond. However, the sensitivity of immunologically-diagnosed latex particles in which a functional group is directly introduced onto the surface of latex particles and antigens or antibodies are sensitized by chemical bonds depending on the concentration of the measurement object or sample and the measurement conditions is not satisfied It was impossible in some cases.
【0005】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、かかる
従来技術の欠点を克服すべく鋭意検討した結果、ラテッ
クス粒子表面にグラフト重合により官能基を有するグラ
フト鎖を結合する或いはさらに結合したグラフト鎖の官
能基を別の官能基に変換した後、ラテックス粒子表面に
結合したグラフト鎖中の官能基に抗体または抗原を固定
化することにより、感度が向上することを見いだし、本
発明を完成するに至った。DISCLOSURE OF THE INVENTION The inventors of the present invention have made earnest studies to overcome the drawbacks of the prior art, and as a result, have grafted a graft chain having a functional group on the surface of latex particles by graft polymerization or further bonded thereto. By converting the functional group of the chain to another functional group and then immobilizing the antibody or the antigen on the functional group in the graft chain bonded to the surface of the latex particle, it was found that the sensitivity is improved, and the present invention is completed. Came to.
【0006】[0006]
【課題を解決するための手段】 かくして本発明によれ
ば、ラテックス粒子表面にグラフト重合により官能基を
有するグラフト鎖を結合する或いはさらに結合したグラ
フト鎖の官能基を別の官能基に変換した後、ラテックス
粒子表面に結合したグラフト鎖中の官能基に抗体または
抗原を固定化することにより感度を向上させる免疫学的
診断薬粒子が提供される。Thus, according to the present invention, after the graft chain having a functional group is bonded to the surface of the latex particle by graft polymerization, or after the functional group of the further bonded graft chain is converted into another functional group. Provided is an immunological diagnostic drug particle which improves sensitivity by immobilizing an antibody or an antigen on a functional group in a graft chain bonded to the surface of the latex particle.
【0007】従来の粒子表面に直接官能基を結合させ,
その官能基に抗原または抗体を固定させる方法に比べ
て,ラテックス粒子表面にグラフト重合により官能基を
有するグラフト鎖を結合する或いはさらに結合したグラ
フト鎖の官能基を別の官能基に変換した後、ラテックス
粒子表面に結合したグラフト鎖中の官能基に抗体または
抗原を固定化することは,導入できる官能基を増やすこ
とができるため,固定できる抗原または抗体を増加でき
る。それにより抗原抗体反応の活性点を増加させること
ができる。Conventionally, the functional group is directly bonded to the particle surface,
Compared with the method of immobilizing the antigen or antibody to the functional group, after the graft chain having a functional group is bonded to the latex particle surface by graft polymerization or the functional group of the further bonded graft chain is converted into another functional group, Immobilizing an antibody or an antigen on the functional group in the graft chain bonded to the surface of the latex particle can increase the number of functional groups that can be introduced, so that the antigen or antibody that can be immobilized can be increased. Thereby, the active sites of the antigen-antibody reaction can be increased.
【0008】また従来法の粒子表面に直接官能基により
固定された抗原または抗体の抗原抗体反応に比べて,グ
ラフト鎖に導入した官能基を介して抗原または抗体の抗
原抗体反応は,反応液中でグラフト基が柔軟な動きを
し,抗原・抗体反応の反応点はあたかも溶液反応のよう
な反応性を発現させる。また従来の固体表面での反応に
多く見られる立体障害によって未反応点が生じることに
よる反応性の低下を生じることは少ない。Compared with the conventional antigen-antibody reaction of an antigen or antibody immobilized on the surface of a particle by a functional group, the antigen-antibody reaction of an antigen or antibody via a functional group introduced into a graft chain is The graft group moves flexibly, and the reaction point of the antigen-antibody reaction develops reactivity as if it were a solution reaction. Further, steric hindrance that is often seen in the conventional reaction on the solid surface rarely causes a decrease in reactivity due to the generation of unreacted points.
【0009】この活性点の増加やその反応性の増加によ
り,従来免疫学的ラテックス粒子にくらべてその感度は
大幅に向上する。 また感度が十分の場合は,測定時間
の短縮が図れるようになる。Due to the increase of the active sites and the increase of the reactivity thereof, the sensitivity is greatly improved as compared with the conventional immunological latex particles. Also, if the sensitivity is sufficient, the measurement time can be shortened.
【0010】[0010]
【発明の実施の形態】 本発明における担体粒子は、測
定を行う時に用いられる液体媒体に実質的に不溶性で有
機高分子物質の担体粒子、例えばポリスチレン、ポリス
チレン−ジビニルベンゼン共重合体やスチレン−ブタジ
エン共重合体の如き乳化重合等により得られる合成高分
子粒子或いは天然由来や無機系の粒子でも良い。平均粒
径は0.001〜100μm、好ましくは0.02〜1
μmのものを用いることができる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The carrier particles in the present invention are carrier particles of an organic polymer substance which are substantially insoluble in a liquid medium used for measurement, such as polystyrene, polystyrene-divinylbenzene copolymer and styrene-butadiene. It may be synthetic polymer particles obtained by emulsion polymerization or the like such as copolymers or particles of natural origin or inorganic type. The average particle size is 0.001 to 100 μm, preferably 0.02 to 1
It is possible to use a micrometer type.
【0011】担体粒子にグラフト鎖を結合させる方法は
グラフト重合反応で行う。グラフト重合とは,幹ポリマ
ーに,幹とは異なる化学構造を有する枝ポリマーを結合
させ,グラフト共重合体をつくる反応をいう。The method of binding the graft chains to the carrier particles is carried out by a graft polymerization reaction. Graft polymerization is a reaction in which a branch polymer having a chemical structure different from that of the trunk is bonded to the trunk polymer to form a graft copolymer.
【0012】グラフト重合には,(1)幹ポリマーに重
合開始点をつくり,枝ポリマーを形成する単量体を重合
させる方法(グラフト(共)重合法),(2)あらかじ
め用意した枝ポリマーを高分子間反応によって幹ポリマ
ーに結合させるカップリング法がある。For graft polymerization, (1) a method of forming a polymerization initiation point in a trunk polymer and polymerizing a monomer forming a branch polymer (graft (co) polymerization method), (2) a branch polymer prepared in advance There is a coupling method in which a backbone polymer is bonded by a reaction between polymers.
【0013】本発明のグラフト重合反応は上記の両グラ
フト重合法とも適応することができるが、ラテックス粒
子表面と液の不均一系(固一液反応)での固体表面だけ
にグラフト鎖が作られることになる表面グラフトの方法
で行われる。The graft polymerization reaction of the present invention can be applied to both of the above graft polymerization methods, but the graft chain is formed only on the solid surface in the heterogeneous system (solid-liquid reaction) of the latex particle surface and the liquid. This is done by the method of surface grafting.
【0014】本発明のラテックス粒子へグラフト鎖を結
合させるグラフト重合反応には(1)重合体への連鎖移
動反応を利用する方法、(2)幹ポリマーを酸化するこ
とによって導入したペルオキシ基,あるいは側鎖のアミ
ノ基をジアズゾ化して導入したジアゾ基などを分解して
遊離基を生成するような分解性基を重合開始点として利
用する方法、(3)電子線やγ線などの放射線照射によ
る重合開始反応や,光化学反応を利用する方法、(4)
測鎖の水酸基やチオール基とセリウム(IV)塩などの
金属イオンとのレドックス機構による重合開始反応を利
用する方法、(5)水酸基,アミノ基、カルボキシル基
などの側鎖の活性基によるエポキシ,ラクタム,極性ビ
ニルモノマーなどの重合開始反応を利用する方法 等の
グラフト重合反応法が利用できる。In the graft polymerization reaction for bonding the graft chain to the latex particles of the present invention, (1) a method utilizing a chain transfer reaction to a polymer, (2) a peroxy group introduced by oxidizing a trunk polymer, or A method in which a decomposable group that decomposes a diazo group introduced by diazotizing a side chain amino group to generate a free radical is used as a polymerization initiation point, (3) by irradiation with electron beams or γ rays Method of utilizing polymerization initiation reaction and photochemical reaction, (4)
A method utilizing a polymerization initiation reaction by a redox mechanism of a hydroxyl group or a thiol group of a chain-measuring and a metal ion such as cerium (IV) salt, (5) an epoxy group having an active group of a side chain such as a hydroxyl group, an amino group and a carboxyl group Graft polymerization reaction methods such as those that utilize the polymerization initiation reaction of lactams and polar vinyl monomers can be used.
【0015】グラフト重合の具体的な方法を以下に例示
する。担体粒子に ラジカル開始剤,電子線やガンマ線
をあてて,ラジカルをあらかじめつくっておき,それに
例えばアクリル酸エステル,エチレングリコールモノマ
ー,エポキシ基を持つグリシシルメタクリレート,2−
ヒドロキシエチルメタクリレート等のモノマーをグラフ
ト重合する方法。A specific method of graft polymerization will be exemplified below. Radicals are created in advance by irradiating the carrier particles with a radical initiator, electron beam or gamma ray, and then, for example, acrylate ester, ethylene glycol monomer, epoxy group-containing glycicyl methacrylate, 2-
A method of graft-polymerizing a monomer such as hydroxyethyl methacrylate.
【0016】またポリスチレンにN,N、N‘、N’−
テトラエチレンジアミン(TMEDA)錯化剤の存在
下,アルキルリチュウム化合物で処理するとこれら官能
基のC−H結合がリチオ化される。 このようなポリマ
ーを幹に用いると,ポリマー主鎖からビニルポリマーの
アニオン重合が開始されるので,効率の良いグラフト重
合ができる。また,予めエチレングリコールの様に所定
の分子量を持つ,ポリマーやオリゴマーを担体表面に従
来法によりグラフト結合させることもできる。Further, polystyrene has N, N, N ', N'-
Treatment with an alkyllithium compound in the presence of a tetraethylenediamine (TMEDA) complexing agent lithiates the C—H bond of these functional groups. When such a polymer is used for the backbone, anionic polymerization of the vinyl polymer is initiated from the polymer main chain, so that efficient graft polymerization can be performed. Further, a polymer or oligomer having a predetermined molecular weight such as ethylene glycol may be previously graft-bonded to the surface of the carrier by a conventional method.
【0017】Tsuchida(Tsuchida、
E.et al.,Makromol.Chem.,R
apid Commun.2、621−626(198
1)は、活性化されたポリスチレン誘導体をポリエチレ
ングリコールと反応させることによって、ポリスチレン
をグラフト化することを開示している。Tsuchida (Tsuchida,
E. et al. , Makromol. Chem. , R
rapid Commun. 2, 621-626 (198
1) discloses grafting polystyrene by reacting an activated polystyrene derivative with polyethylene glycol.
【0018】Becker、H.,H.Lucas、
J.Maul、V.N.R.Pillai、H.Anz
inger、M.Mutter、Makromol.C
hem.,Rapid Commun.,3、217−
223(1982))は、ペプチド合成のためのポリマ
ーの支持体として使用するためのポリスチレンの上にグ
ラフト化したポリエチレングリコール(PEG)を開示
している。Becker, H .; , H .; Lucas,
J. Maul, V.M. N. R. Pillai, H .; Anz
inger, M .; Mutter, Makromol. C
hem. , Rapid Commun. , 3, 217-
223 (1982)) discloses polyethylene glycol (PEG) grafted onto polystyrene for use as a polymeric support for peptide synthesis.
【0019】BayerおよびRapp(米国特許第
4,908,405号、E.BayerおよびW.Ra
ppに対して発行された、”Graft Coplym
ersof Crosslinked Polymer
s and Polyoxethylene,Proc
esses For Their Productio
n,and Their Usage”(1990))
は、架橋したポリマーおよびポリ(エチレングリコー
ル)のグラフトコポリマーを開示しており、そしてそれ
らの製造および使用の開示を提供している。Bayer and Rapp (US Pat. No. 4,908,405, E. Bayer and W. Ra).
"Graft Copolym, issued to pp
ersof Crosslinked Polymer
s and Polyoxethylene, Proc
esses For Ther Product
n, and Ther Usage "(1990))
Discloses cross-linked polymers and graft copolymers of poly (ethylene glycol) and provides disclosure of their manufacture and use.
【0020】H.Becker、H.Lucas、J.
Maul、V.N.R.Pillai、H.Anzin
ger、M.Mutter、Makromol.Che
m.、Rapid Commun.,3、217−22
3(1982))には、クロロメチル化架橋ポリスチレ
ン−ジビニルベンゼンをエチレングリコールまたは低分
子量ポリ(エチレングリコール)オリゴマーと反応させ
ることによって製造することが記載されている。H. Becker, H .; Lucas, J .;
Maul, V.M. N. R. Pillai, H .; Anzin
ger, M.G. Mutter, Makromol. Che
m. , Rapid Commun. , 3, 217-22
3 (1982)) describes the preparation of chloromethylated crosslinked polystyrene-divinylbenzene by reaction with ethylene glycol or low molecular weight poly (ethylene glycol) oligomers.
【0021】Candau,Francoise等C.
R.Hebd.SeancesAcad.Sci.,S
Er.C(1976),283(11),453は ク
ロロメチル化したポリスチレンに,末端をKアルコホレ
ート基を持つポリオキシメチレンをグラフト化してい
る。Candau, Francoise et al.
R. Hebd. Sequences Acad. Sci. , S
Er. C (1976), 283 (11), 453 is a chloromethylated polystyrene grafted with polyoxymethylene having a K-alkofolate group at the end.
【0022】また 放射線を用いる方法としては,その
放射線源としてCo60のγ線源と電子線照射が利用さ
れる。 担体粒子にあらかじめ電子線やγ線を照射し、
やクロロメチルスチレン(CMS)、アクリル酸(A
A),メタクリル酸グリシジル等の反応液と接触させ担
体粒子にポリクロロメチルスチレン、アクリル酸ポリマ
ー,ポリメタクリル酸グリシジル等のグラフト鎖を導入
できる。As a method of using radiation, a Co60 γ-ray source and electron beam irradiation are used as the radiation source. Pre-irradiate carrier particles with electron beams or γ rays,
And chloromethylstyrene (CMS), acrylic acid (A
A), graft chains of polychloromethylstyrene, acrylic acid polymer, polyglycidyl methacrylate, etc. can be introduced into the carrier particles by contact with a reaction liquid such as glycidyl methacrylate.
【0023】導入した官能基が抗原または抗体を固定し
うる場合は,そのまま抗原または抗体を固定する。しか
し,官能基が抗原または抗体に対して不活性の場合や不
十分な場合は,グラフト重合後に新たに抗原または抗体
を固定しうる官能基を化学的反応等により導入したり置
換したりすることができる。When the introduced functional group can fix the antigen or antibody, the antigen or antibody is fixed as it is. However, if the functional group is inactive or insufficient with respect to the antigen or antibody, then a functional group capable of newly immobilizing the antigen or antibody after graft polymerization should be introduced or replaced by a chemical reaction. You can
【0024】例えばクロロメチルスチレン(CMS)の
場合,ジメチルアミンを反応することにより3級アミン
を導入することができる。また,スチレンやクロロメチ
ルスチレンの代わりにグリシジルメタクリレート(GM
A)を用いる方法もある。この方法ではグリシジルメタ
クリレート(GMA)のグリシジル基を利用して,亜硫
酸ナトリウムやジエタノールアミンを反応させることに
よりスルホン化や3級アミンの導入することができる。For example, in the case of chloromethylstyrene (CMS), a tertiary amine can be introduced by reacting with dimethylamine. Also, instead of styrene and chloromethylstyrene, glycidyl methacrylate (GM
There is also a method of using A). In this method, the glycidyl group of glycidyl methacrylate (GMA) can be used to react with sodium sulfite or diethanolamine to introduce a sulfonate or a tertiary amine.
【0025】ポリスチレン粒子のポリエチレングリコー
ルをグラフト重合した後,ポリエチレングリコールの水
酸基をクロロスルホン酸によりスルホネイト化し,アン
モニアで処理することによりアミノ基にすることができ
る。After graft-polymerizing polyethylene glycol of polystyrene particles, the hydroxyl groups of polyethylene glycol can be converted to amino groups by sulfonation with chlorosulfonic acid and treatment with ammonia.
【0026】このグラフト重合後に新たに抗原または抗
体を固定しうる官能基を化学的反応等により導入したり
置換したりする場合,抗原または抗体を固定させる条件
によりその反応を可能な限り反応させることができる
し,1部の反応に留めることもできる。When a functional group capable of newly immobilizing an antigen or antibody is introduced or replaced by a chemical reaction or the like after this graft polymerization, the reaction should be performed as much as possible depending on the conditions for immobilizing the antigen or antibody. You can do it, or you can limit it to one reaction.
【0027】本発明における抗原または抗体とは、検体
中に一般に含まれている成分であれば特に制限されない
が、各種タンパク質、多糖類、脂質等が挙げられる。The antigen or antibody in the present invention is not particularly limited as long as it is a component generally contained in a sample, but various proteins, polysaccharides, lipids and the like can be mentioned.
【0028】より詳細には,例えば,変性ガンマグロブ
ミン、リウマチ因子、抗核因子、アルブミン、IgG、
IgA、IgM、IgE、IgD、ストレプトリジン
O、C−反応性タンパク、アルファフェトプロテイン
(AFT)、癌胎児性抗原(CEA)、胎盤ラクトゲン
(HPL)、絨毛性ゴナドトロピン(HCG)、エスト
ロゲン抗体、インシュリン抗体、B型肝炎表面抗原(H
BS)、抗HBS抗体、梅毒トレポネーマ抗原、風疹抗
原、補体成分C1、C3、C4、HBs抗体、HIV抗
体、HTLV−1抗体、プラスミノーゲン、アンチトロ
ンビン−III、D−ダイマー、TAT、PPI等の凝
固線溶マーカー、β2−マイクログロブリン、フェリチ
ン、TPA、IAP、尿中ポリアミン、α−フェトプロ
ティン、CA19−9、CA−50、CA15−3、前
立腺特異抗原(PA)、CA−125、CA−130、
CA602、CA72−4、APO−AI,APO−A
II,APO−B,APO−CII,APO−CII
I,APO−E)などのポリポタンパク、α1−マクロ
グロブリン、α2−マクログロブリン、などがあげられ
る。More specifically, for example, denatured gamma globumin, rheumatoid factor, antinuclear factor, albumin, IgG,
IgA, IgM, IgE, IgD, streptolysin O, C-reactive protein, alphafetoprotein (AFT), carcinoembryonic antigen (CEA), placental lactogen (HPL), chorionic gonadotropin (HCG), estrogen antibody, insulin antibody. , Hepatitis B surface antigen (H
BS), anti-HBS antibody, Treponema pallidum antigen, rubella antigen, complement components C1, C3, C4, HBs antibody, HIV antibody, HTLV-1 antibody, plasminogen, antithrombin-III, D-dimer, TAT, PPI. Coagulation / fibrinolysis markers such as β2-microglobulin, ferritin, TPA, IAP, urinary polyamine, α-fetoprotein, CA19-9, CA-50, CA15-3, prostate specific antigen (PA), CA-125, CA-130,
CA602, CA72-4, APO-AI, APO-A
II, APO-B, APO-CII, APO-CII
I, APO-E) and other polypoproteins, α1-macroglobulin, α2-macroglobulin, and the like.
【0029】抗原とは、人あるいは動物に対して抗体産
生を惹起する能力のあるすべての物質のうちで、診断な
どの特別の目的の下に選択された単一ないし複数の物質
またはそれらを含有する混合物を意味している。抗原に
対して特異的に結合するのは、通常、その抗体である。
抗体としては、ポリクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体のどちらを用いても良い。The term “antigen” refers to all substances capable of inducing antibody production in humans or animals, and contains one or more substances selected for a particular purpose such as diagnosis, or contains them. Means a mixture of It is the antibody that normally binds specifically to the antigen.
As the antibody, either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody may be used.
【0030】また、免疫活性物質として、メトトレキセ
ート(抗ガン剤)に特異的に結合するDNAオリゴマー
を用い、精製したオリゴマーに蛍光物質または発光物質
をラベルして抗原などを測定することも可能である。該
ラテックス粒子は、農薬や環境汚染物質などの分析試薬
にも応用できる。この例として、環境汚染物質として指
摘されるダイオキシン、田畑やゴルフ場に散布される除
草剤、森林に散布される殺虫剤、野菜に付着する各種の
農薬の測定に用いることができる。It is also possible to use a DNA oligomer that specifically binds to methotrexate (an anticancer agent) as an immunoactive substance, and label the purified oligomer with a fluorescent substance or a luminescent substance to measure an antigen or the like. . The latex particles can also be applied to analytical reagents such as agricultural chemicals and environmental pollutants. As an example of this, it can be used for measurement of dioxin pointed out as an environmental pollutant, a herbicide applied to fields and golf courses, an insecticide applied to forests, and various pesticides attached to vegetables.
【0031】同様に、犬、猫、牛、馬、豚のような動物
について、その抗原や抗体などを測定することも可能で
ある。Similarly, it is possible to measure the antigens and antibodies of animals such as dogs, cats, cows, horses and pigs.
【0032】抗原抗体反応を利用して、生体試料中の免
疫活性物質を測定する免疫学的測定方法は臨床検査の分
野で広く用いられている。例えば一元免疫拡散法(SR
ID)、免疫比濁法(TIA)、免疫比ろう法、赤血球
凝集法(HA)やラテックス凝集法(LA)や酵素免疫
測定法(EIA、ELISA)、蛍光抗体測定法(FI
A),放射免疫測定法(RIA)、化学発光法(RL
U)等が拳げられ、それぞれ操作性.感度、精度等に一
長一短が有り、使用目的により使い分けられている。An immunological measurement method for measuring an immunologically active substance in a biological sample by utilizing an antigen-antibody reaction is widely used in the field of clinical examination. For example, single immunodiffusion method (SR
ID), immunoturbidimetric assay (TIA), immunonephelometric assay, haemagglutination assay (HA), latex agglutination assay (LA), enzyme immunoassay (EIA, ELISA), fluorescent antibody assay (FI)
A), radioimmunoassay (RIA), chemiluminescence (RL)
U) etc. are fisted, and each is easy to operate. There are merits and demerits in sensitivity, accuracy, etc., and they are used properly according to the purpose of use.
【0033】本発明のラテックス粒子はラテックス凝集
法や免疫比濁法に用いられる。ラテックス凝集反応は
ポリスチレン粒子に抗原を吸着させ抗体を検出する間接
凝集反応である。代表的なものとしてCPR、CEA、
AFT、RA試験がある。The latex particles of the present invention are used in a latex agglutination method and an immunoturbidimetric method. Latex agglutination reaction
This is an indirect agglutination reaction in which an antigen is adsorbed on polystyrene particles and an antibody is detected. Typical ones are CPR, CEA,
There are AFT and RA tests.
【0034】免疫比濁法は、抗原抗体反応で主ずる不溶
性の免疫複合体を光学的に滴定する方法で、B/F分離
操作が不要と操作が簡便であり、中程度の感度を有し、
一般の分光計や汎用の自動分析機で使用可能であるので
広く用いられている。例えば血清試料中の免疫グロブリ
ンG、A、M、トランスフェリン、補体、アポリポ蛋白
やβ−リポ蛋白、Lp(a)、C反応性蛋白(CR
P))、抗ストレプトリジン0(ASO)、リウマチ因
子(RF)、プラスミノーゲン、アルブミン等の測定に
利用されている。The immunoturbidimetric method is a method of optically titrating an insoluble immune complex, which is the main component of an antigen-antibody reaction, and it is easy to operate without requiring a B / F separation operation and has a medium sensitivity. ,
It is widely used because it can be used in general spectrometers and general-purpose automatic analyzers. For example, immunoglobulin G, A, M, transferrin, complement, apolipoprotein and β-lipoprotein, Lp (a), C-reactive protein (CR) in serum samples.
P)), anti-streptolysin 0 (ASO), rheumatoid factor (RF), plasminogen, albumin and the like.
【0035】その原理は試料中の抗原/抗体が試薬中の
抗体/抗原と反応する抗原抗体反応の結果、不溶性の抗
原抗体複合体からなる反応生成物(懸濁粒子)が定量的
に生じ、この懸濁粒子が光の透過を妨げること(散乱さ
せること)を利用して光学的に定量する分析法である。
従がって感度や精度、分析所用時間は懸濁粒子の形成程
度に大きく左右される。一般的に抗原溶液とその抗原に
特異的な抗体を混合した場合、10−3秒オーダーで抗
原抗体反応が起こるが、その後、光学的に測定可能な懸
濁粒子が形成されるまでには数分から数時間、或いはは
数日間を要する場合もある。The principle is that the antigen / antibody in the sample reacts with the antibody / antigen in the reagent, and as a result of the antigen-antibody reaction, a reaction product (suspended particles) consisting of an insoluble antigen-antibody complex is quantitatively produced. This suspended particle is an analysis method that optically quantifies by utilizing the fact that it blocks (scatters) the transmission of light.
Therefore, the sensitivity, accuracy, and time required for analysis depend largely on the degree of formation of suspended particles. Generally, when an antigen solution and an antibody specific to the antigen are mixed, an antigen-antibody reaction occurs in the order of 10 to 3 seconds, but after that, several times are required until optically measurable suspended particles are formed. It may take from minutes to hours, or even days.
【0036】一般的に行なわれているラテックス凝集反
応において光学的に測定する方法は、ある平均粒径をも
つラテックスに定量しようとする抗原に対する抗体又は
定量しようとする抗体に対する抗原を感作し、この感作
ラテックスをプラスチックやガラス等を使用したセル内
で患者の尿、糞便分散液,血清又は血漿を含む水溶媒中
で反応させる。目的とする物質がセル中に存在する場
合、ラテックスは凝集し、セル外部より0.3〜2.4
μmの波長から選ばれる適当な波長の光を照射し、吸光
度変化を測定することにより、セル中の抗体又は抗原量
を定量できる。実際には、ラテックス凝集反応を光学的
に測定する方法において既知の異なるレベルの検体を測
定することによって得られる濃度と平均反応速度又は濃
度と吸光度変化の検量線を使用して、これに未知濃度の
検体の反応速度又は吸光度変化を測定することによりそ
の濃度を定量することが可能となる。In the latex agglutination reaction which is generally carried out, an optical measurement method is to sensitize an antibody against an antigen to be quantified or an antigen against an antibody to be quantified into a latex having a certain average particle size, This sensitized latex is reacted in a cell using plastic, glass or the like in a water solvent containing urine, fecal dispersion, serum or plasma of the patient. When the target substance is present in the cell, the latex agglomerates, and 0.3 to 2.4 is introduced from the outside of the cell.
The amount of antibody or antigen in the cell can be quantified by irradiating with light of an appropriate wavelength selected from the wavelength of μm and measuring the change in absorbance. In practice, using a calibration curve of concentration and average reaction rate or concentration and absorbance change obtained by measuring different levels of known analytes in the method of optically measuring latex agglutination reaction, unknown concentration The concentration can be quantified by measuring the reaction rate or the change in absorbance of the sample.
【0037】実際の検体を測定するには,この前記検量
線の作成に用いたと同一の感作担体粒子を用いて、その
作成の場合と実質的に一定条件下で未知試料と該感作担
体とを反応させ、その吸光度を測定し、この吸光度を前
記検量線と比較、照合することにより、該未知試料中の
抗原及び・又は抗体の量(又は濃度)を定量することが
できる。To measure an actual sample, the same sensitized carrier particles as those used in the preparation of the calibration curve were used, and an unknown sample and the sensitized carrier were prepared under substantially the same conditions as in the preparation. By reacting with and measuring the absorbance, and comparing and matching this absorbance with the calibration curve, the amount (or concentration) of the antigen and / or antibody in the unknown sample can be quantified.
【0038】また、別法として、前記検量線を作成する
場合に、例えば一定の吸光度に達するに要する反応時間
あるいは吸光度の経時変化(反応速度)と使用した標準
試料中の抗原又は抗体の量(濃度)との関係を示す検量
線を作成しておけば、これと実質的に同一条件下で、前
記感作担体粒子と未知試料とを反応させて、前記の一定
吸光度に達するに要する反応時間あるいは反応速度を読
みとることにより、該未知試料中の抗原及び・又は抗体
の量(又は濃度)を定量することもできる。Alternatively, when preparing the calibration curve, for example, the reaction time required to reach a certain absorbance or the change in absorbance with time (reaction rate) and the amount of the antigen or antibody in the standard sample used ( If a calibration curve showing the relationship with (concentration) is created, the reaction time required to reach the above-mentioned constant absorbance by reacting the sensitized carrier particles with an unknown sample under substantially the same conditions as these. Alternatively, the amount (or concentration) of the antigen and / or antibody in the unknown sample can be quantified by reading the reaction rate.
【0039】本発明のラテックス凝集反応を利用した方
法は安全性や測定時間が短い,従来から広く用いられて
いる測定装置を利用できるという利点を有する。The method using the latex agglutination reaction of the present invention has the advantages of safety and short measurement time, and the use of measuring devices that have been widely used in the past.
【0040】しかし本発明はラテックス凝集反応法によ
って限定されるものではない。本発明の効果として感度
の向上そして・または測定時間の短縮はラジオイムノア
ッセイ法や蛍光法,発光法等の担体粒子を用いる他の測
定方法にも及ぶ。However, the present invention is not limited by the latex agglutination reaction method. As an effect of the present invention, improvement in sensitivity and / or reduction in measurement time extends to other measurement methods using carrier particles such as a radioimmunoassay method, a fluorescence method and a luminescence method.
【0041】近年、免疫診断では尿、糞便分散液,血
清、血漿等に含まれる微量物質、例えば癌マーカーであ
るαフエトプロテイン(AFP)やカルテイノエンブリ
オイツクアンテイジエン(CFA)などは数数ng/m
lといった濃度まで定量することが望まれている。 物
質によって測定を必要とする濃度範囲は様々であり、数
ng/mlから数μmg/mlまでの広範囲の濃度を定
量しなければならない。Recently, in immunodiagnosis, trace substances contained in urine, fecal dispersion, serum, plasma, etc., such as α-fetoprotein (AFP), which is a cancer marker, and Cartenoembrio uitquantiteien (CFA), etc. ng / m
It is desired to quantify to a concentration such as 1. The concentration range that needs to be measured varies depending on the substance, and a wide range of concentrations from several ng / ml to several μmg / ml must be quantified.
【0042】ラテックス凝集反応試薬の高感度測定を行
うために,比較的大きな平均粒径のラテックスを使用す
る。ラテックスに対する抗体又は抗原感作量を多くす
る。特異性、親和性が,高い感作する抗体または抗原を
用いる。吸光度の測定が可能な範囲において,感作粒子
の濃度を高くする等することが行われてきた。In order to carry out a highly sensitive measurement of the latex agglutination reagent, a latex having a relatively large average particle size is used. Increase the amount of antibody or antigen sensitization to latex. Use an antibody or antigen that sensitizes with high specificity and affinity. It has been practiced to increase the concentration of sensitized particles within a range where the absorbance can be measured.
【0043】比較的大きな平均粒径のラテックスを使用
する方法は,低濃度での感度の向上は達成されるが高濃
度においては検量線の直線性がなくなり、測定範囲が狭
くなるという難点を有する。 また抗体又は抗原を多量
に使用することや感作粒子の濃度を高くすることは、使
用する抗原、抗体や高濃度粒子が必ずしもそれに応じた
効果をあげられないことや試薬コストの上昇を招くこと
になる。 このように従来の方法では、感度、測定範
囲、測定時間等で対象検体の微量物質ではまだ不満足な
あるいは不可能なものであった。The method using a latex having a relatively large average particle size has a drawback that the sensitivity is improved at a low concentration, but the linearity of the calibration curve is lost at a high concentration and the measurement range is narrowed. . In addition, using a large amount of antibody or antigen or increasing the concentration of sensitizing particles may not always give the corresponding effect to the antigen, antibody or high-concentration particles to be used, or may increase the cost of reagents. become. As described above, in the conventional method, the trace amount of the target sample was still unsatisfactory or impossible in terms of sensitivity, measurement range, measurement time, and the like.
【0044】[0044]
【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明はその要旨を越えない限り、以下の実施例に
よって限定されるものではない。EXAMPLES The present invention will be described in detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples as long as the gist thereof is not exceeded.
【0045】(実施例1)平均粒子径0.05ミクロン
のスチレン−ジビニルベンゼン共重合体から製造された
担体粒子を基材とし,Lee、Yoon−Sik法(I
nnovation Prespect.Solid
Phase Sybth.Comb.Libr.,Co
llect.Pap.,Int Symp.,5th
(1999),Meetin Date 1997,3
33,Mayfloweer Scientific
Ltd.,Kingswinford,UK)に準じ
て,ポリスチレン粒子表面をオゾンで処理し、ポリスチ
レン表面にハイドロパーオキサイド基を導入し,引き続
き常法によりアクリル酸を熱重合により,ポリスチレン
表面にポリアクリル酸鎖をグラフト重合した。Example 1 Using the carrier particles prepared from a styrene-divinylbenzene copolymer having an average particle diameter of 0.05 micron as a base material, the Lee, Yoon-Sik method (I
nnovation Present. Solid
Phase Sybth. Comb. Libr. , Co
llect. Pap. , Int Symp. , 5th
(1999), Meetin Date 1997, 3
33, Mayflowee Scientific
Ltd. , Kingswind, UK), the surface of polystyrene particles is treated with ozone, hydroperoxide groups are introduced on the surface of polystyrene, and then acrylic acid is thermally polymerized by a conventional method to graft-polymerize a polyacrylic acid chain on the surface of polystyrene. did.
【0046】このアクリル酸をグラフト重合したスチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合体ラテックス粒子に対し
て,抗ヒトβ2−マイクログロプリン抗体で感作させ
た。The styrene-divinylbenzene copolymer latex particles graft-polymerized with acrylic acid were sensitized with an anti-human β2-microglobulin antibody.
【0047】検体とラテックス粒子の懸濁液を反応させ
ると、検体中のβ2−マイクログロブリンとラテックス
粒子に吸着した抗β2−マイクログロプリン抗体が抗原
抗体反応を開始し、ラテックス粒子が凝集を始める。こ
の凝集反応を波長570nmの吸光度(あるいは濁度)
変化として捉えたとき、その変化量は検体中のβ2−マ
イクログロプリン濃度に比例するので、既知濃度の標準
液を用いて作成した検量線から、検体中のβ2−マイク
ログロブリン濃度を求めることができる。When the suspension of the sample and the latex particles is reacted, β2-microglobulin in the sample and the anti-β2-microglobulin antibody adsorbed on the latex particles start an antigen-antibody reaction, and the latex particles start to aggregate. This agglutination reaction is measured by absorbance (or turbidity) at a wavelength of 570 nm.
When grasped as a change, the amount of change is proportional to the β2-microglobulin concentration in the sample, so the β2-microglobulin concentration in the sample can be obtained from a calibration curve prepared using a standard solution having a known concentration. .
【0048】比較例として腎障害の早期発見と経過監察
に用いられている尿中・血清中のβ2−マイクログロブ
リン測定試薬として用いられている抗ヒトβ2−マイク
ログロブリン抗体感作ラテックス粒子として用いられて
いるβ2−マイクログロブリン測定用ラテックス試薬
(スペリオル BETAII、インタメディツク(株)
社)を用いた。As a comparative example, it is used as an anti-human β2-microglobulin antibody-sensitized latex particle used as a reagent for measuring β2-microglobulin in urine / serum used for early detection and progress monitoring of renal damage. Latex reagent for β2-microglobulin measurement (Superior BETAII, Intermedic Corporation)
Company) was used.
【0049】日立社製吸光度測定装置(7150型)を
使用し,測定の主波長を570nm,副波長を800n
mを用いて, 既知の濃度の標準試料を,所定の倍率で
希釈した種々の希釈標準試料として調整したβ2−マイ
クログロブリン20μlを試料として,緩衝液としてト
リスー(ヒトロキンメテル)−アミノメタン150μl
使用し,抗ヒトβ2−マイクログロプリン抗体を感作し
たグラフトラテックス粒子懸濁液150μlを用いて吸
光度変化量を測定した。Using a Hitachi absorbance measurement device (Model 7150), the main wavelength of measurement is 570 nm and the sub-wavelength is 800 n.
20 μl of β2-microglobulin, which was prepared by diluting standard samples of known concentration with various dilution factors at various times, was used as a sample, and 150 μl of tris- (human loquinmetel) -aminomethane was used as a buffer solution.
The amount of change in absorbance was measured using 150 μl of the graft latex particle suspension sensitized with the anti-human β2-microglobulin antibody.
【0050】その吸光度変化量と濃度の関係を表1に示
す。Table 1 shows the relationship between the amount of change in absorbance and the concentration.
【表1】 [Table 1]
【0051】(実施例2)実施例1で使用したスチレン
−ジビニルベンゼン共重合体から製造された担体粒子を
基材とし,H.Becker法Makromol.ch
em.,Rapid Commun.3,217(19
82)に準じて,ポリエチレングリコール(PEG)鎖
をグラフト化した。グラフト化は、先ずスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体のベンゼン環に公知の方法でクロ
ロメチル基を導入した。これとは別にTHF中で分子量
400のPEGをソディユーム ナフタレートで処理
し,ソディユーム ポリエチレングリコレートとした。
この溶液にクロロメチル基を導入したスチレン−ジ
ビニルベンゼン共重合体粒子を加え,還流しながら反応
させグラフト化を行った。Example 2 Using the carrier particles prepared from the styrene-divinylbenzene copolymer used in Example 1 as a base material, H. Becker method Makromol. ch
em. , Rapid Commun. 3,217 (19
According to 82), polyethylene glycol (PEG) chains were grafted. In the grafting, first, a chloromethyl group was introduced into the benzene ring of the styrene-divinylbenzene copolymer by a known method. Separately, PEG having a molecular weight of 400 was treated with sodium naphthalate in THF to obtain sodium polyethylene glycolate.
Styrene-divinylbenzene copolymer particles introduced with chloromethyl groups were added to this solution, and the mixture was reacted under reflux for grafting.
【0052】得られたポリエチレングリコール鎖をグラ
フト化したスチレン−ジビニルベンゼン共重合体粒子の
ポリエチレングリコールの水酸基を公知の方法でアミノ
基に変換した。The hydroxyl groups of polyethylene glycol of the obtained styrene-divinylbenzene copolymer particles grafted with polyethylene glycol chains were converted into amino groups by a known method.
【0053】アミノ化は、スチレン−ジビニルベンゼン
共重合体粒子にグラフト化されたポリエチレングリコー
ル鎖の水酸基をチオニールクロライドによりアルキルス
ルホネイト化し,引き続きアンモニアで処理することに
よりアミノ基に変換した。For the amination, the hydroxyl groups of the polyethylene glycol chains grafted on the styrene-divinylbenzene copolymer particles were alkylsulfonated with thionyl chloride and subsequently treated with ammonia to be converted into amino groups.
【0054】このアミノ基末端に変換されたポリエチレ
ングリコール鎖をグラフト化したスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体粒子に対して,抗ヒトヘモグロビン抗体
で感作させた。The styrene-divinylbenzene copolymer particles grafted with polyethylene glycol chains converted to the amino terminal were sensitized with an anti-human hemoglobin antibody.
【0055】検体と抗ヒトヘモグロビンウサギポリクロ
ーナル抗体感作ラテックス粒子を反応させると、検体中
のトヘモグロビンとラテックス粒子に吸着した抗ヒトヘ
モグロビンウサギポリクローナル抗体が抗原抗体反応を
開始し、ラテックス粒子が凝集を始める。この凝集反応
を波長450nmの吸光度変化量としてとらえたとき、
その変化量は検体中のヒトヘモグロピン濃度に比例する
ので、既知濃度の標準波を用いて作成した検量線から、
検体中のヒトヘモグロビン定量値を求めることができ
る。When the sample is reacted with anti-human hemoglobin rabbit polyclonal antibody-sensitized latex particles, tohemoglobin in the sample and the anti-human hemoglobin rabbit polyclonal antibody adsorbed on the latex particles start an antigen-antibody reaction, and the latex particles aggregate. start. When this agglutination reaction is taken as the amount of change in absorbance at a wavelength of 450 nm,
Since the amount of change is proportional to the concentration of human hemoglobin in the sample, from the calibration curve created using the standard wave of known concentration,
The quantitative value of human hemoglobin in the sample can be obtained.
【0056】比較例2として消化管出血のスクリーニン
グテストとして用いられる糞便中のヒトヘモグロビン測
定用診断薬として用いられる抗ヒトヘモグロビン抗体感
作ラテックス粒子を用いたヒトヘモグロビン測定用ラテ
ックス試薬(Hemo.II、インタメディツク(株)
社)を用いた。As a comparative example 2, a latex reagent for measuring human hemoglobin (Hemo. II, which uses latex particles sensitized with anti-human hemoglobin antibody used as a diagnostic agent for measuring human hemoglobin in feces used as a screening test for gastrointestinal bleeding) Intermedic Corporation
Company) was used.
【0057】実施例1と同じ自動分析装置を使用し,測
定の主波長を450nm,副波長800nmを用いて,
既知の濃度の標準試料を,所定の倍率で希釈した種々の
希釈標準試料として調整しヒトヘモグロビンを12μ
l,緩衝液としてトリスー(ヒトロキンメテル)−アミ
ノメタン100μlを用い,抗ヒトヘモグロビン抗体で
感作させた本発明のグラフト化ラテックス粒子懸濁液1
00μlを用いて、その吸光度変化量を測定した。 こ
の吸光度変化量と濃度の関係は表2であった。Using the same automatic analyzer as in Example 1, using a main wavelength of measurement of 450 nm and a sub-wavelength of 800 nm,
Standard samples with known concentrations were prepared as various diluted standard samples diluted with a predetermined magnification, and human hemoglobin was adjusted to 12 μm.
1. Grafted latex particle suspension 1 of the present invention, which was sensitized with an anti-human hemoglobin antibody using 100 μl of tris- (human loquinmeter) -aminomethane as a buffer
The amount of change in absorbance was measured using 00 μl. Table 2 shows the relationship between the change in absorbance and the concentration.
【表2】 [Table 2]
【0058】比較例の最低検出感度は10ng/mlで
あったが,実施例2の最低検出感度は5ng/mlであ
った。The minimum detection sensitivity of the comparative example was 10 ng / ml, while the minimum detection sensitivity of Example 2 was 5 ng / ml.
【0059】[0059]
【発明の効果】 本発明のグラフト重合により官能基を
導入し、抗原あるいは抗体を感作させたグラフト化ラテ
ックス粒子は、従来の官能基がラテックス表面に直接存
在し、その官能基と抗体あるいは抗原を感作させたラテ
ックス粒子に比べ、診断薬としての鋭敏性に優れ、広い
濃度範囲にわたって高感度に抗原抗体反応の測定が可能
となる。EFFECT OF THE INVENTION Grafted latex particles in which a functional group is introduced by graft polymerization of the present invention to sensitize an antigen or an antibody have conventional functional groups directly present on the latex surface, and the functional group and the antibody or the antigen are present. Compared with latex particles sensitized with, the sensitivity as a diagnostic agent is superior, and the antigen-antibody reaction can be measured with high sensitivity over a wide concentration range.
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) C08G 81/02 C08G 81/02 Front page continuation (51) Int.Cl. 7 Identification code FI theme code (reference) C08G 81/02 C08G 81/02
Claims (5)
官能基を有するグラフト鎖を結合し、該官能基に抗体ま
たは抗原を感作させることを特徴とする免疫学的診断用
ラテックス粒子1. Latex particles for immunological diagnosis, characterized in that a graft chain having a functional group is bound to the surface of the latex particle by graft polymerization to sensitize the functional group with an antibody or an antigen.
官能基を有するグラフト鎖を結合し、さらに結合したグ
ラフト鎖の官能基を別の官能基に変換した後、ラテック
ス粒子表面に結合したグラフト鎖中の官能基に抗体また
は抗原を感作させることを特徴とする免疫学的診断用ラ
テックス粒子2. A graft chain having a functional group is bonded to the latex particle surface by graft polymerization, the functional group of the bonded graft chain is converted into another functional group, and the graft chain in the graft chain bonded to the latex particle surface is then converted into another functional group. Latex particles for immunological diagnosis characterized by sensitizing a functional group with an antibody or an antigen
あるところの請求項1記載の免疫学的診断用ラテックス
粒子。3. The latex particle for immunological diagnosis according to claim 1, wherein the graft chain is a polymer of acrylic acid.
るところの請求項2記載の免疫学的診断用ラテックス粒
子。4. The latex particle for immunological diagnosis according to claim 2, wherein the graft chain is polyethylene glycol.
合したものであるところの請求項1記載の免疫学的診断
用ラテックス粒子。5. The latex particle for immunological diagnosis according to claim 1, wherein the graft chain is obtained by polymerizing glycidyl methacrylate.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2001390620A JP2003156494A (en) | 2001-11-19 | 2001-11-19 | Immunological diagnostics latex particle |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2001390620A JP2003156494A (en) | 2001-11-19 | 2001-11-19 | Immunological diagnostics latex particle |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2003156494A true JP2003156494A (en) | 2003-05-30 |
Family
ID=19188396
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001390620A Pending JP2003156494A (en) | 2001-11-19 | 2001-11-19 | Immunological diagnostics latex particle |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2003156494A (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018043688A1 (en) * | 2016-08-31 | 2018-03-08 | 積水化学工業株式会社 | Analyte concentration measuring method, particle containing agglutinated fluorescent material, and inspection device |
-
2001
- 2001-11-19 JP JP2001390620A patent/JP2003156494A/en active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018043688A1 (en) * | 2016-08-31 | 2018-03-08 | 積水化学工業株式会社 | Analyte concentration measuring method, particle containing agglutinated fluorescent material, and inspection device |
JP6348239B1 (en) * | 2016-08-31 | 2018-06-27 | 積水化学工業株式会社 | Analyte concentration measurement method, aggregated fluorescent material-containing particles, and inspection device |
CN109716131A (en) * | 2016-08-31 | 2019-05-03 | 积水化学工业株式会社 | The particle and check device of analyte concentration determination method, the fluorescent material containing cohesion |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5501949A (en) | Particle bound binding component immunoassay | |
US9063144B2 (en) | Detection method and quantification method for target substance | |
CN1092866A (en) | A kind of based on light scattering and there is not the immune analysis method of particle self aggregation situation | |
EP0070527B1 (en) | Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor | |
US4843010A (en) | Polymerization-induced separation immunoassays | |
US4711840A (en) | Polymerization-induced separation immunoassays | |
EP0142810A2 (en) | Polymerizable compounds integrally containing antibodies and their uses in polymerization induced separation immunoassays | |
EP0323692B1 (en) | Water-insoluble reagent, elements containing same and methods of use | |
JP3010509B2 (en) | Immunoassay container, immunoassay method and immunoassay apparatus | |
JPS61286755A (en) | Solid phase immunity testing method and composition using light-emitting fine particle | |
JPS61128168A (en) | Immunological analysis | |
JP4086266B2 (en) | Immunoassay method | |
US4792527A (en) | Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor | |
JPH08262024A (en) | Kit for immunoassay of in vivo substance and immunoassay method | |
JPH0843391A (en) | Measuring method for antigen antibody reaction | |
JP2003156494A (en) | Immunological diagnostics latex particle | |
JPH06160387A (en) | Measuring method for antigen-antibody reaction | |
EP0228225A2 (en) | Immunoassay kit and method employing modified solid surface | |
US6927071B2 (en) | Method for reducing non-specific aggregation of latex microparticles in the presence of serum or plasma | |
JP2004144687A (en) | Method for measuring substance | |
JPH0772155A (en) | Method for measuring antigen-antibody reaction | |
JPS6024450A (en) | Measurement of biologically active substance | |
JP3681873B2 (en) | Method for measuring substances | |
JPS59122950A (en) | Method for measuring biologically active substance and labeling agent used therein | |
JP2006105910A (en) | Measurement method and measurement reagent of target substance |