FR2969488A1

FR2969488A1 - Cosmetic use of calcium hyaluronate having specified molecular weight, as cosmetic composition for increasing the glycosaminoglycans of the skin and as a composition for hydration of the skin

Info

Publication number: FR2969488A1
Application number: FR1061280A
Authority: FR
Inventors: Olivier Courtin
Original assignee: Laboratoires Clarins SAS
Current assignee: Laboratoires Clarins SAS
Priority date: 2010-12-27
Filing date: 2010-12-27
Publication date: 2012-06-29
Anticipated expiration: 2030-12-27
Also published as: FR2969488B1

Abstract

Cosmetic use of calcium hyaluronate having molecular weight of 5-50 kDa, is claimed. An independent claim is included for cosmetic composition comprising the calcium hyaluronate having molecular weight of 5-50 kDa. ACTIVITY : Dermatological. MECHANISM OF ACTION : None given.

Description

UTILISATION DE HYLURONATE DE CALCIUM POUR L'HYDRATATION CUTANEE USE OF CALCIUM HYLURONATE FOR SKIN MOISTURIZATION

DOMAINE TECHNIQUE La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique de hyaluronate de calcium, à une composition cosmétique comprenant du hyaluronate de calcium, ainsi qu'à un procédé cosmétique mettant en oeuvre du hyaluronate de calcium. TECHNICAL FIELD The present invention relates to the cosmetic use of calcium hyaluronate, to a cosmetic composition comprising calcium hyaluronate, and to a cosmetic process using calcium hyaluronate.

La présente invention trouve ses applications dans le domaine de la cosmétique. Le taux d'hydratation cutanée s'exprime en surface, mais c'est en profondeur que tout commence. Avant d'arriver dans les couches superficielles de l'épiderme, l'eau suit un circuit bien établi. Ce cheminement fait intervenir de nombreuses structures et mécanismes. Il prend naissance dans les couches profondes de la peau puisque l'eau transite depuis le flux sanguin jusqu'à la surface de la peau à travers le derme et l'épiderme puis s'évapore de façon imperceptible (perte insensible en eau ou PIE). L'eau en provenance de la circulation sanguine est tout d'abord stockée dans le derme qui représente le véritable réservoir en eau de la peau avec presque 70 % de l'eau totale. L'eau joue également un rôle au niveau du derme en améliorant ses qualités de résistance à la traction et à la compression. L'eau est captée et stockée grâce à des polymères, protéoglycanes et glycosaminoglycanes (acide hyaluronique ou hyaluronate, chondroitine sulfate, dermatane sulfate). Ces polymères fixent d'importantes quantités d'eau et assurent la turgescence des tissus et l'hydratation continue de la peau. Malgré la grande capacité de ces molécules à capter l'eau, une partie de celle-ci demeure mobilisable et diffuse vers l'épiderme dont la partie la plus superficielle va réellement jouer un rôle de barrière. The present invention finds its applications in the field of cosmetics. The level of skin hydration is expressed on the surface, but it is in depth that everything begins. Before arriving in the superficial layers of the epidermis, the water follows a well established circuit. This path involves many structures and mechanisms. It originates in the deep layers of the skin since the water transits from the blood flow to the skin surface through the dermis and epidermis and evaporates imperceptibly (insensible loss of water or PIE) . Water from the bloodstream is first stored in the dermis which represents the true water reservoir of the skin with almost 70% of the total water. Water also plays a role in the dermis by improving its qualities of resistance to traction and compression. Water is captured and stored using polymers, proteoglycans and glycosaminoglycans (hyaluronic acid or hyaluronate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate). These polymers bind large amounts of water and ensure the turgor of the tissues and the continuous hydration of the skin. Despite the large capacity of these molecules to capture water, part of it remains mobilizable and diffuses to the epidermis, the most superficial part will actually play a role of barrier.

Entre le derme très hydraté et l'épiderme, un gradient décroissant existe. Au niveau de l'épiderme, ce gradient est encore plus marqué entre les couches les plus profondes et les couches les plus superficielles. En particulier, si toutes les couches vivantes de l'épiderme présentent un taux d'hydratation élevé, la chute du gradient hydrique est abrupte à partir de la transition stratum granulosum et stratum corneum. A ce niveau le taux de 300/0 d'hydratation chute encore de moitié dans le stratum corneum jusqu'à atteindre 150/0 au niveau des couches les plus superficielles. Between the highly hydrated dermis and the epidermis, a decreasing gradient exists. At the level of the epidermis, this gradient is even more marked between the deepest layers and the most superficial layers. In particular, if all the living layers of the epidermis have a high hydration rate, the fall in the water gradient is abrupt from the stratum granulosum and stratum corneum transition. At this level the level of 300/0 of hydration falls by half in the stratum corneum until reaching 150/0 at the most superficial layers.

Au-delà de ce gradient hydrique, la mise en place d'autres gradients physiologiques permet aux cellules épidermiques d'exercer leurs fonctions spécifiques. C'est en particulier le cas du gradient de pH passant du pH neutre (7,4) dans les couches vitales à plutôt acide à la surface cutanée (environ 5,5). Beyond this water gradient, the introduction of other physiological gradients allows the epidermal cells to perform their specific functions. This is particularly the case of the pH gradient from neutral pH (7.4) in the vital layers to rather acidic at the cutaneous surface (about 5.5).

Ces mouvements d'eaux et de solutés sont accompagnés de mouvements cellulaires qui participent eux aussi à la mise en place de l'homéostasie cutanée. Ceux-ci sont le fruit d'un programme de différenciation cellulaire des couches basales prolifératives, source de renouvellement épidermique, à la couche cornée, jusqu'à l'étape ultime de desquamation. L'eau «capturée» au niveau de la couche cornée est maintenue grâce à différents composés comme les FNH (Facteurs Naturels d'Hydratation), le ciment intercellulaire et le film hydrolipidique qui confèrent à la peau une cohésion indispensable à sa fonction. These movements of water and solutes are accompanied by cellular movements which also participate in the establishment of cutaneous homeostasis. These are the result of a program of cellular differentiation of basal proliferative layers, source of epidermal renewal, at the stratum corneum, until the final stage of desquamation. The "captured" water at the level of the stratum corneum is maintained thanks to various compounds such as the FNH (Natural Hydration Factors), the intercellular cement and the hydrolipidic film which give the skin an essential cohesion to its function.

Tous les paramètres décrits précédemment correspondent à des conditions physiologiques non perturbées, assurées par une homéostasie régulée. En situation physiologique, la peau répond aux variations environnementales, notamment aux variations de température, d'humidité relative, aux ultraviolets, à la pollution, aux détergents, etc. All the parameters described above correspond to undisturbed physiological conditions, ensured by controlled homeostasis. In a physiological situation, the skin responds to environmental variations, including changes in temperature, relative humidity, ultraviolet radiation, pollution, detergents, etc.

Dans certains cas, la réponse adaptative de l'organisme est insuffisante ou dérégulée. C'est en particulier le cas des peaux « sèches ». Le phénotype « peau sèche » se caractérise par une peau rêche squameuse, de souplesse limitée avec une impression de tension au toucher. Pour les peaux âgées, ces symptômes sont accompagnés par des rougeurs, des fissures ou des démangeaisons. Des trois compartiments de la peau, c'est le derme qui se modifie le plus profondément durant les phénomènes de vieillissement, mais les autres compartiments ne sont pas épargnés. In some cases, the adaptive response of the body is insufficient or deregulated. This is particularly the case of "dry" skin. The "dry skin" phenotype is characterized by a rough, flaky skin with limited flexibility and a feeling of tension. For older skin, these symptoms are accompanied by redness, cracks or itching. Of the three compartments of the skin, it is the dermis that changes most deeply during aging phenomena, but the other compartments are not spared.

La nature et la quantité des composants du derme, notamment le collagène, l'élastine, les glycoprotéines et les protéoglycanes, régissent les propriétés mécaniques de la peau et sont à l'origine des modifications physiopathologiques les plus visibles du relief cutané observées au cours du vieillissement. Les fibres donnent à la peau solidité, résistance, élasticité et tonicité. Les glycoprotéines et protéoglycanes apportent le volume et participent à l'hydratation. Les protéoglycanes, macromolécules complexes de grande taille dispersées entre les fibres du tissu conjonctif dermique, assurent en grande partie la tonicité de la peau. En fait, la structure des glycosaminoglycanes (GAGs) confèrent aux protéoglycanes des charges négatives permettant de « piéger » les ions, l'eau et divers métabolites, contribuant ainsi principalement à l'hydratation de la peau et à la résistance aux forces de pression et d'étirement. En vieillissant, la peau se ride, se relâche, est moins hydratée et se répare plus difficilement. L'acide hyaluronique (AH) joue un rôle structural important du fait de ses propriétés hydrodynamiques uniques. En s'imbriquant dans le réseau de faisceaux de collagènes, ces structures supramoléculaires d'AH déterminent la forme et l'organisation architecturale des tissus. Ils leur confèrent des propriétés mécaniques, notamment amortisseur des cartilages et élasticité des vaisseaux sanguins, tout en contribuant au maintien de l'intégrité et l'hydratation de nombreux tissus comme la peau et le cerveau. Plus de 500/0 de l'AH de l'organisme est présent dans la peau. Il est cependant intéressant de noter que pratiquement la totalité d'AH a disparu de l'épiderme dans la peau sénile. Dans le derme, le niveau total d'AH reste relativement constant mais avec l'âge, sa qualité se modifie. La taille du polymère se réduit et il devient moins extractible. Ces altérations pourraient être responsables de la perte d'hydratation observée dans la peau sénescente. L'AH possède également un fort pouvoir hygroscopique et de grandes capacités rhéologiques. Il augmente le volume de la MEC par remplissage, en se liant à l'eau et aux électrolytes. La molécule clé de l'hydratation cutanée est donc l'AH, capable d'attirer et de fixer jusqu'à 1000 fois son poids moléculaire en eau. L'AH est également impliqué dans la circulation des nutriments, des hormones et des cellules. Il a un rôle essentiel dans la plasticité des tissus au niveau des espaces extracellulaires, ainsi que dans la mobilité cellulaire, la prolifération et l'organisation tissulaires. Au cours du vieillissement cutanée sa concentration diminue et sa qualité se dégrade contribuant à une détérioration de la qualité des tissus et des processus de réparation, se manifestant par un ralentissement de la cicatrisation des plaies, un dessèchement très important, une atrophie dermique et des vergetures. Par ailleurs, au cours de la ménopause, et avec la diminution de la progestérone et des oestrogènes, le taux d'AH baisse de façon considérable dans le derme. Tous ces éléments contribuent au phénomène de formation des rides. The nature and quantity of the dermis components, including collagen, elastin, glycoproteins and proteoglycans, govern the mechanical properties of the skin and are responsible for the most visible pathophysiological changes in the cutaneous relief observed during the course of treatment. aging. The fibers give the skin strength, strength, elasticity and tone. Glycoproteins and proteoglycans bring volume and participate in hydration. Proteoglycans, large complex macromolecules dispersed between the fibers of the dermal connective tissue, largely ensure skin tone. In fact, the structure of glycosaminoglycans (GAGs) gives proteoglycans negative charges that "trap" ions, water and various metabolites, thus contributing mainly to skin hydration and resistance to pressure and stretching. As you age, the skin wrinkles, relaxes, is less hydrated and repairs more easily. Hyaluronic acid (HA) plays an important structural role because of its unique hydrodynamic properties. By interlocking in the network of collagen bundles, these supramolecular structures of AH determine the shape and architectural organization of the tissues. They give them mechanical properties, including cushioning cartilage and elasticity of the blood vessels, while helping to maintain the integrity and hydration of many tissues such as the skin and the brain. More than 500% of the body's HA is present in the skin. It is interesting to note, however, that almost all of HA has disappeared from the epidermis in senile skin. In the dermis, the total level of HA remains relatively constant but with age, its quality changes. The size of the polymer is reduced and becomes less extractable. These alterations could be responsible for the loss of hydration observed in the senescent skin. HA also has a high hygroscopic power and high rheological abilities. It increases the volume of ECM by filling, by binding to water and electrolytes. The key molecule of cutaneous hydration is therefore HA, capable of attracting and fixing up to 1000 times its molecular weight in water. HA is also involved in the circulation of nutrients, hormones and cells. It plays an essential role in tissue plasticity at the level of extracellular spaces, as well as in cell mobility, proliferation and tissue organization. During skin aging, its concentration decreases and its quality deteriorates, contributing to a deterioration of the quality of the tissues and repair processes, manifesting itself in a slowing down of wound healing, a very severe drying out, a dermal atrophy and stretch marks. . Moreover, during menopause, and with the decrease of progesterone and estrogen, the rate of HA drops significantly in the dermis. All these elements contribute to the formation of wrinkles.

Avec le vieillissement, l'exposition aux polluants environnementaux et les rayons ultraviolets du soleil, les cellules perdent graduellement leur capacité à produire de l'acide hyaluronique. Des études montrent que la peau des personnes âgées contient des niveaux inférieurs d'acide hyaluronique à ceux des personnes plus jeunes. En vieillissant, notre tissu cutané se déshydrate et les fibres de collagène et d'élastine perdent leur structure. Cela entraîne une perte du volume de la peau et la formation de rides et de sillons faciaux, caractéristiques courantes d'une peau marquée par l'âge. De nombreuses expérimentations ont déjà été effectuées pour injecter de l'acide hyaluronique au niveau du derme afin de palier à la diminution de sa concentration et de sa qualité avec l'âge. L'acide hyaluronique disponible dans le commerce permet d'obtenir certains résultats de comblement et de réhydratation, mais ces résultats ne sont pas aussi satisfaisant que prévu. Le pouvoir hydratant de ces acides hyaluroniques est insuffisant. Il existe donc un réel besoin de trouver un produit alternatif présentant à la fois un pouvoir hydratant amélioré et permettant d'apporter une solution efficace aux problèmes précités de l'art antérieur, en particulier permettant la mise en place d'une réponse adaptative suffisante et régulée de la peau vis-à-vis des variations environnementales, notamment des variations de température, d'humidité relative, des ultraviolets, de la pollution, des détergents, etc.. With aging, exposure to environmental pollutants and the sun's ultraviolet rays, cells gradually lose their ability to produce hyaluronic acid. Studies show that older people's skin contains lower levels of hyaluronic acid than those of younger people. As we age, our skin tissue dehydrates and the collagen and elastin fibers lose their structure. This results in loss of skin volume and the formation of facial wrinkles and furrows, common features of age-marked skin. Numerous experiments have already been carried out to inject hyaluronic acid into the dermis in order to overcome the decrease in its concentration and quality with age. Commercially available hyaluronic acid provides some filler and rehydration results, but these results are not as good as expected. The moisturizing power of these hyaluronic acids is insufficient. There is therefore a real need to find an alternative product having both an improved moisturizing power and to provide an effective solution to the aforementioned problems of the prior art, in particular allowing the establishment of a sufficient adaptive response and regulated skin with respect to environmental variations, including changes in temperature, relative humidity, ultraviolet, pollution, detergents, etc.

EXPOSE DE L'INVENTION Les inventeurs de la présente sont les tout premiers à avoir mis en évidence que l'utilisation de hyaluronate de calcium dans des applications cosmétiques, à la place de l'acide hyaluronique utilisé dans l'art antérieur, permet précisément de fournir une solution aux problèmes et besoins précités de l'art antérieur. Les données expérimentales montrent en effet de manière inattendue que le hyaluronate de calcium induit une augmentation significative des glycosaminoglycanes acides (GAGs acides) au niveau dermique et épidermique et une nette densification du réseau dermique, de la matrice extracellulaire et des espaces intercellulaires épidermiques. L'ensemble des observations et analyses réalisées montrent une meilleure hydratation de la peau sous l'action du hyaluronate de calcium. Le hyaluronate de calcium a en effet une action hydratante réelle et bien supérieure à l'acide hyaluronique de l'art antérieur, notamment au hyaluronate de sodium, le plus couramment utilisé en cosmétique. Aussi, la présente invention se rapporte à l'utilisation de hyaluronate de calcium dans des applications cosmétiques, notamment pour la stimulation des glycosaminoglycanes de la peau. SUMMARY OF THE INVENTION The inventors of the present are the first to have demonstrated that the use of calcium hyaluronate in cosmetic applications, in place of the hyaluronic acid used in the prior art, makes it possible precisely to provide a solution to the aforementioned problems and needs of the prior art. The experimental data show, in fact, unexpectedly that calcium hyaluronate induces a significant increase of acidic glycosaminoglycans (acidic GAGs) at the dermal and epidermal level and a clear densification of the dermal network, the extracellular matrix and the epidermal intercellular spaces. All the observations and analyzes carried out show a better hydration of the skin under the action of calcium hyaluronate. Calcium hyaluronate has indeed a real hydrating action and far superior to the hyaluronic acid of the prior art, in particular sodium hyaluronate, the most commonly used in cosmetics. Also, the present invention relates to the use of calcium hyaluronate in cosmetic applications, particularly for the stimulation of glycosaminoglycans of the skin.

La présente invention se rapporte également à une composition cosmétique comprenant du hyaluronate de calcium. Autrement dit, le hyaluronate de calcium peut être utilisé seul ou dans une composition cosmétique. La présente invention se rapporte également à une telle composition 30 où la composition est une composition de stimulation des glycosaminoglycanes de la peau. La présente invention se rapporte également à une telle composition cosmétique, ladite composition étant une composition d'hydratation de la peau. Selon l'invention, l'acide hyaluronique dans une telle composition peut être utilisé comme seul agent à l'origine de l'hydratation de la peau ou en combinaison avec d'autres agents hydratants, par exemple ceux connus de l'homme du métier. The present invention also relates to a cosmetic composition comprising calcium hyaluronate. In other words, calcium hyaluronate can be used alone or in a cosmetic composition. The present invention also relates to such a composition wherein the composition is a composition for stimulating glycosaminoglycans in the skin. The present invention also relates to such a cosmetic composition, said composition being a moisturizing composition of the skin. According to the invention, the hyaluronic acid in such a composition can be used as the sole agent for the hydration of the skin or in combination with other moisturizing agents, for example those known to those skilled in the art. .

Selon l'invention, le hyaluronate de calcium peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme du métier. Il peut être obtenu par exemple par succession des étapes suivantes : fermentation au moyen de Iactobacilles à partir de glucose et de peptides issus du blé, purification, hydrolyse acide, concentration, précipitation au bioéthanol et séchage. According to the invention, calcium hyaluronate can be obtained by any method known to those skilled in the art. It can be obtained, for example, by following the following steps: fermentation by means of lactobacilli from glucose and peptides derived from wheat, purification, acid hydrolysis, concentration, bioethanol precipitation and drying.

Comme hyaluronate de calcium, on peut utiliser exemple Primalhyal 20 calcium (marque de commerce) commercialisé par la société Soliance (France). Dans la présente, on entend par « hydratation de la peau » ou « hydratation cutanée », l'hydratation du derme et/ou de l'épiderme. As calcium hyaluronate, it is possible to use the example Primalhyal calcium (trade mark) marketed by Soliance (France). In the present, the term "skin hydration" or "cutaneous hydration", hydration of the dermis and / or epidermis.

De la même manière, dans la présente, on entend par « stimulation des glycosaminoglycanes de la peau », stimulation des glycosaminoglycanes du derme et/ou de l'épiderme. Selon l'invention, dans l'utilisation ou la composition cosmétique, la masse moléculaire du hyaluronate de calcium est de préférence de 5 à 50 20 kD, de préférence de 5 à 20kDa. Selon l'invention, ladite composition cosmétique peut comprendre par exemple de 0,010/0 à 99,90/0 en poids de hyaluronate de calcium par rapport au poids total de la composition cosmétique. Par exemple, la concentration de hyaluronate de calcium peut aller de 0,010/0 à 500/0, par 25 exemple de 0,010/0 à 100/0, par exemple de 0,010/0 à 100/0, par exemple de 0,010/0 à 50/0, par exemple de 0,010/0 à 10/0 en poids de la composition cosmétique. La composition cosmétique de la présente invention peut être obtenue par simple mélange du hyaluronate de calcium avec une 30 composition cosmétique déjà connue de l'homme du métier, hydratante ou non, ou par mélange du hyaluronate de calcium dans une composition cosmétique préparée spécialement à cet effet, hydratante ou non sans le hyaluronate de calcium. In the same way, herein is meant by "stimulation of glycosaminoglycans of the skin", stimulation of the glycosaminoglycans of the dermis and / or epidermis. According to the invention, in the use or the cosmetic composition, the molecular weight of the calcium hyaluronate is preferably from 5 to 50 kD, preferably from 5 to 20 kDa. According to the invention, said cosmetic composition may comprise, for example, from 0.010% to 99.90% by weight of calcium hyaluronate relative to the total weight of the cosmetic composition. For example, the concentration of calcium hyaluronate can range from 0.010 / 0 to 500/0, for example from 0.010 / 0 to 100/0, for example from 0.010 / 0 to 100/0, for example from 0.010 / 0 to 50/0, for example from 0.010 / 0 to 10/0 by weight of the cosmetic composition. The cosmetic composition of the present invention can be obtained by simple mixing of calcium hyaluronate with a cosmetic composition already known to those skilled in the art, moisturizing or not, or by mixing calcium hyaluronate in a cosmetic composition prepared especially for this purpose. effect, moisturizing or not without calcium hyaluronate.

Ainsi, la composition selon l'invention peut comprendre en plus de l'acide hyaluronique un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques. Il peut s'agir par exemple d'un adoucissant, d'un colorant, d'un filtre solaire, d'un actif filmogène, d'un tensio-actif, d'un conservateur, d'un émulsionnant, d'un glycol, d'une vitamine. Grâce à ces connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter à la composition et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Thus, the composition according to the invention may comprise in addition to hyaluronic acid one or more formulating agents or additives of known and conventional use in cosmetic compositions. It may be for example a softener, a dye, a sunscreen, a film-forming active agent, a surfactant, a preservative, an emulsifier, a glycol , a vitamin. With this knowledge of cosmetics, those skilled in the art will know which formulating agents to add to the composition and in what quantities depending on the desired properties.

La composition cosmétique de la présente invention peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier. Il peut s'agir, par exemple, d'une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion, par exemple une emulsion eau dans l'huile ou une émulsion huile dans l'eau, un sérum, un gel, un gel moussant et une lotion. The cosmetic composition of the present invention may be in any form known to those skilled in the art. It may be, for example, a form selected from the group comprising an emulsion, for example a water-in-oil emulsion or an oil-in-water emulsion, a serum, a gel, a foaming gel and a lotion.

Par exemple, l'émulsion peut être une microémulsion ou une nanoémulsion. Par ailleurs, l'émulsion peut être, par exemple, une émulsion eau dans l'huile ou une émulsion huile dans l'eau. A titre d'exemple, l'émulsion peut être, par exemple, un lait. La présente invention se rapporte également à un procédé de traitement cosmétique comprenant une application topique de hyaluronate de calcium ou d'une composition cosmétique tels que définis ci-dessus. Selon l'invention, le procédé peut comprendre par exemple une application du hyaluronate de calcium ou de la composition cosmétique comprenant le hyaluronate de calcium à une fréquence d'au moins une fois par jour à au moins une fois par mois. Cette application peut être réalisée par exemple sur une période allant d'une semaine à un an ou plus, selon l'utilisatrice ou l'utilisateur. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif. For example, the emulsion may be a microemulsion or a nanoemulsion. On the other hand, the emulsion may be, for example, a water-in-oil emulsion or an oil-in-water emulsion. By way of example, the emulsion may be, for example, a milk. The present invention also relates to a cosmetic treatment method comprising a topical application of calcium hyaluronate or a cosmetic composition as defined above. According to the invention, the method may comprise, for example, an application of calcium hyaluronate or of the cosmetic composition comprising calcium hyaluronate at a frequency of at least once a day to at least once a month. This application can be performed for example over a period of a week to a year or more, depending on the user. Other advantages may still appear to those skilled in the art on reading the examples, illustrated by the appended figures, given for illustrative purposes.

BREVE DESCRIPTION DES FIGURES - Les figures 1 à 3 représentent des clichés photographiques d'observations en microscopie optique d'expiants de peau humaine : la figure 1 représente un lot témoin non traité, la figure 2 représente un lot traité avec du hyaluronate de sodium après 10 jours de traitement, et la figure 3 représente un lot traité avec du hyaluronate de calcium conformément à la présente invention, après 10 jours de traitement. Les observations sont toutes réalisées à l'aide d'un microscope Leica (marque de commerce) DMLB, à l'objectif x 40. Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra tri CCD Sony DXC 390P. L'échelle est indiquée sur les clichés. - La figure 4 représente une analyse statistique des données effectuée par le logiciel jmp de la société SAS. En ordonnée le pourcentage de surface des expiants occupés par des GAGs acides (% surf / GAGs ac), et en abscisse les lots analysés : contrôle (T) = témoin ; P1 = lot traité avec du hyaluronate de sodium de l'art antérieur ; P2 = lot traité avec du hyaluronate de calcium conformément à la présente invention. - La figure 5 représente un graphique permettant une comparaison des moyennes de GAGs (% surface occupée par les GAGs en ordonnée) par condition : contrôle à gauche, hyaluronate de sodium au centre, et hyaluronate de calcium à droite. Tout à droite, contrôle test de Dunnett 0,05. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES FIGS. 1 to 3 represent photographic snapshots of optical microscopy observations of explants of human skin: FIG. 1 represents an untreated control batch, FIG. 2 represents a batch treated with sodium hyaluronate after 10 days of treatment, and Figure 3 shows a batch treated with calcium hyaluronate according to the present invention after 10 days of treatment. The observations are all made using a Leica (trademark) DMLB microscope at the x 40 lens. The shots were taken with a Sony DXC 390P CCD sorting camera. The scale is indicated on the pictures. FIG. 4 represents a statistical analysis of the data carried out by the software jmp of the company SAS. On the ordinate, the percentage of surface area of explants occupied by acidic GAGs (% surf / GAGs ac), and on the abscissa the analyzed lots: control (T) = control; P1 = batch treated with sodium hyaluronate of the prior art; P2 = batch treated with calcium hyaluronate according to the present invention. FIG. 5 represents a graph allowing a comparison of the average GAGs (% area occupied by GAGs on the y-axis) by condition: control on the left, sodium hyaluronate in the center, and calcium hyaluronate on the right. All right, Dunnett test control 0.05.

EXEMPLES Ces expérimentations ont permises de démontrer le pouvoir hydratant important du hyaluronate de calcium et de comparer ce pouvoir hydratant avec un autre hyaluronate, le hyaluronate de sodium. Deux formulations cosmétiques ont été appliquées sur expiant de peau humaine : plastie abdominale de femme de type caucasien de 43 ans, maintenue en survie sur les structures épidermiques et dermiques. EXAMPLES These experiments have made it possible to demonstrate the important moisturizing power of calcium hyaluronate and to compare this moisturizing power with another hyaluronate, sodium hyaluronate. Two cosmetic formulations were applied on expiant human skin: abdominoplasty of Caucasian woman of 43 years, maintained in survival on epidermal and dermal structures.

I. Produits testés - Formulation comprenant le sodium hyaluronate (P1) : les inventeurs ont utilisé de l'acide hyaluronique TBPM (« Très Bas Poids Moléculaire ») (marque de commerce) de la société Salience. Dans les expérimentations, la formulation utilisée avec ce hyaluronate de sodium est la suivante (exprimée en % en poids) : - eau déminéralisée : 97,8 0/0 - Acide hyaluronique TBPM (marque de commerce) : 0,09 0/0 - SEPINOV EMT 10 (marque de commerce) (copolymère d'acrylate hydroxyéthyl / d'acryloyldiméthyl taurate de sodium) de la société Seppic : 2 0/0 - KATHON CG (marque de commerce) (eau et méthylchloroisothiazolinone & méthylisothiazolinone) de la société Romh and Haas : 0,1 %. - Formulation comprenant le hyaluronate de calcium (P2) : Il s'agit du Primalhyal 20 calcium commercialisé par la société Soliance (code produit SO_PRIM20CA). Ce produit se présente sous la forme d'une poudre blanche. En solution aqueuse 10/0 en poids dans de l'eau, il présente une DO (Densité Optique) à 420 nm inférieure à 0,100 et une DO à 600 nm inférieure à 0,050. Son pH standard en solution à 10/0 en poids dans de l'eau est de 5,0 - 8,0. Matière sèche, 1h à 105°C (Standard MS 105) supérieure à 850/0. Il présente une masse moléculaire de 5 - 20 kDa. Dans les expérimentations, la formulation utilisée avec ce hyaluronate de calcium est la suivante (exprimée en % en poids) : - eau déminéralisée : 97,8 0/0 - Primalhyal 20 calcium (hyaluronate de calcium hydrolysé) : 0,1 0/0 - SEPINOV EMT 10 (marque de commerce) (copolymère acrylate hydroxyéthyl / acryloyldiméthyl taurate de sodium) : 2 0/0 - KATHON CG (marque de commerce) (eau et méthylchloroisothiazolinone & méthylisothiazolinone) : 0,1 %. I. Products Tested - Formulation Comprising Sodium Hyaluronate (P1): The inventors used hyaluronic acid TBPM ("Very Low Molecular Weight") (trademark) from Salience. In the experiments, the formulation used with this sodium hyaluronate is the following (expressed in% by weight): - demineralized water: 97.8% - hyaluronic acid TBPM (trademark): 0.09% - SEPINOV EMT 10 (Trademark) (hydroxyethyl acrylate / sodium acryloyldimethyltaurate copolymer) from Seppic: 2/0/0 - KATHON CG (trade name) (water and methylchloroisothiazolinone & methylisothiazolinone) from Romh and Haas: 0.1%. - Formulation comprising calcium hyaluronate (P2): This is Primalhyal calcium marketed by Soliance (product code SO_PRIM20CA). This product is in the form of a white powder. In aqueous solution 10/0 by weight in water, it has an OD (Optical Density) at 420 nm less than 0.100 and an OD at 600 nm less than 0.050. Its standard pH in 10% solution by weight in water is 5.0 - 8.0. Dry matter, 1 hour at 105 ° C. (Standard MS 105) greater than 850/0. It has a molecular weight of 5-20 kDa. In the experiments, the formulation used with this calcium hyaluronate is the following (expressed in% by weight): demineralised water: 97.8% - Primalhyal calcium (hydrolysed calcium hyaluronate): 0.1% SEPINOV EMT 10 (Trademark) (hydroxyethyl acrylate / sodium acryloyldimethyltaurate copolymer): 20/0 - KATHON CG (Trade Mark) (water and methylchloroisothiazolinone & methylisothiazolinone): 0.1%.

II. Mode opératoire Tous les expiants ont été maintenus en survie en milieu de culture (BEM BIO-EC's Expiants Medium, 2ml) pendant 10 jours. Les formulations ont été appliquées sur les expiants par voie topique quotidiennement pendant 10 jours. II. Procedure All explants were kept alive in culture medium (BEM BIO-EC's Expiants Medium, 2ml) for 10 days. The formulations were applied to the explants topically daily for 10 days.

Aux jours 2, 4, 6 et 8 du traitement trois expiants de chaque lot (contrôle (= témoin), hyaluronate de sodium, hyaluronate de calcium) ont été prélevés et préparés pour des études histologiques. La description de la morphologie générale ainsi que l'évaluation de l'expression des glycosaminoglycanes ont été effectués. At days 2, 4, 6 and 8 of the treatment three expants of each lot (control (= control), sodium hyaluronate, calcium hyaluronate) were collected and prepared for histological studies. The description of the general morphology as well as the evaluation of the expression of the glycosaminoglycans were carried out.

11.1 Prélèvements A JO (= jour 0), les 3 expiants du lot TO ont été prélevés et coupés en deux. Une moitié a été fixée dans du formol tamponné et l'autre moitié a été 10 congelée à -80°C. A J10 (= 10eme jour de traitement), 3 expiants de chaque lot ont été prélevés et traités de la même manière. 11.1 Sampling at OJ (= day 0), the 3 expiants of batch TO were taken and cut in half. One half was fixed in buffered formalin and the other half was frozen at -80 ° C. At day 10 (= day 10 of treatment), 3 expiants of each lot were collected and treated in the same way.

11.2 Histologie 15 Après 24 heures de fixation dans le formol tamponné, les prélèvements ont été déshydratés et imprégnés en paraffine à l'aide d'un automate de déshydratation Leica TP1020. Les prélèvements ont été mis en bloc à l'aide d'une station d'enrobage Leica EG 1160. Des coupes de 5 pm ont été réalisées à l'aide d'un microtome type Minot, Leica RM 2125 et 20 collées sur des lames de verre histologiques Superfrost (marque déposée). Les observations microscopiques ont été réalisées en microscopie optique, à l'aide d'un microscope Leica type DMLB, à l'objectif x 40. Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra tri CCD Sony DXC 390P. Les figures 1 à 3 annexées présentent les clichés de ces 25 observations : la figure 1 représente un lot témoin non traité, la figure 2 représente un lot traité avec du hyaluronate de sodium après 10 jours de traitement, et la figure 3 représente un lot traité avec du hyaluronate de calcium conformément à la présente invention, après 10 jours de traitement. 11.2 Histology After 24 hours of fixation in buffered formalin, the specimens were dehydrated and paraffin-impregnated using a Leica TP1020 dehydration automaton. Samples were blotted using a Leica EG 1160 coating station. 5 μm sections were made using a Minot, Leica RM 2125 microtome and 20 glued onto slides. Histological glass Superfrost (registered trademark). The microscopic observations were made by light microscopy, using a Leica DMLB microscope, at the x 40 objective. The images were taken with a Sony DXC 390P CCD sorting camera. FIGS. 1 to 3 show the views of these observations: FIG. 1 represents an untreated control batch, FIG. 2 represents a batch treated with sodium hyaluronate after 10 days of treatment, and FIG. with calcium hyaluronate according to the present invention after 10 days of treatment.

30 11.2.1 - Examen de la morphologie générale L'observation de la morphologie générale a été effectuée sur des coupes en paraffine après coloration au trichrome de Masson, variante de Goldner. 11.2.1 - Examination of the general morphology The observation of the general morphology was carried out on paraffin sections after staining with Masson's trichrome, Goldner's variant.

Cette méthode est automatisée à l'aide de l'automate linéaire de coloration LEICA ST4040. L'objectif est de colorer les différentes structures cutanées afin de les identifier : I'hématoxyline de Groat colore les noyaux en noir ; le ponceau fuschine colore le cytoplasme des cellules en rose ; l'orange G molybdique permet de différencier la coloration induite par le ponceau fuschine ; - le vert lumière colore le tissu conjonctif (collagène) en vert ; - le bleu lumière peut remplacer le vert lumière. Le tissu conjonctif est alors coloré en bleu. En l'absence de derme ou de substrat dermique, les prélèvements de type peau ou épiderme reconstruit sont colorés sans les bains de vert lumière. Le mode opératoire qui a été utilisé est le suivant : Déparaffinaqe / réhydratation des coupes paraffine Placer les lames à colorer dans les paniers de coloration pour automate. Mettre l'appareil sous tension. Placer le panier dans le 1 er bain de Clearene de l'automate de coloration. Mettre l'automate en marche sur le programme « P1 » (2 min 30 / bain) 2 bains de Clearene 1 bain d'éthanol absolu 1 bain d'éthanol 95° 1 bain d'éthanol 70° 1 bain d'eau distillée Réhydratation des coupes cryostat - Placer les lames à colorer dans les paniers de coloration pour 30 automate. - Plonger les lames dans un bain d'eau distillée Fixation au Bouin Si les coupes n'ont pas déjà été fixées au Bouin (coupes cryostat ou coupes paraffine formol), une refixation est nécessaire : Plonger les lames dans un bain de Bouin pendant 1 min Plonger les lames dans de l'eau distillée. Renouveler les bains jusqu'à ce que l'eau reste limpide. Elimination de l'excès de Bouin Terminer la réhydratation dans l'automate : _ 1 bain de carbonate de lithium (permet de retirer l'excès de Bouin) 1 bain d'eau distillée Coloration Ouvrir le robinet d'eau courante. La coloration se poursuit automatiquement dans l'automate (2 min 30 / bain) 15 1 bain d'hématoxyline de Groat 2 bains d'eau courante _ 2 bains de fuschine-ponceau _ 1 bain d'eau acétique à 1 0/0 2 bains d'orange-G molybdique 20 _ 1 bain d'eau acétique à 1 0/0 _ 2 bains de vert lumière (ou de bleu lumière) 1 bain d'eau acétique à 0/0 _ 1 Déshydratation et montaqe La déshydratation se poursuit automatiquement dans l'automate (2 25 min 30 / bain) 1 bain d'éthanol absolu 1 bain d'éthanol absolu 2 bains de Clearene This method is automated using the LEICA ST4040 linear stainer. The objective is to color the different cutaneous structures in order to identify them: Hematoxylin from Groat colors the nuclei in black; the fuschine culvert stains the cytoplasm of the cells in pink; the molybdic orange G makes it possible to differentiate the coloration induced by the fuschine culvert; - the light green colors the connective tissue (collagen) in green; - the blue light can replace the green light. The connective tissue is then colored blue. In the absence of dermis or dermal substrate, reconstructed skin or epidermis samples are colored without light green baths. The procedure that was used is as follows: Deparaffinae / rehydration of paraffin sections Place the slides to be stained in the automated staining baskets. Turn on the power. Place the basket in the 1st Clearene bath of the coloring automaton. Switch on the "P1" program (2 min 30 / bath) 2 Clearene baths 1 absolute ethanol bath 1 ethanol bath 95 ° 1 ethanol bath 70 ° 1 distilled water bath Rehydration cryostat sections - Place the slides to be stained in the staining baskets for 30 PLCs. - Plunge the slides in a bath of distilled water Attachment to the Bouin If the cuts have not already been fixed to the Bouin (cryostat sections or formalin paraffin sections), a refixing is necessary: Plunge the slides in a Bouin bath for 1 hour. min Divide the slides in distilled water. Renew the baths until the water remains clear. Elimination of the excess of Bouin Finish the rehydration in the automaton: _ 1 bath of lithium carbonate (allows to remove the excess of Bouin) 1 bath of distilled water Coloring Open the tap of running water. Staining is continued automatically in the automaton (2 min 30 / bath) 1 Groat hematoxylin bath 2 running water baths _ 2 fuschine-culinal baths 1 acetic water bath 1/0/0 2 baths of orange-G molybdic 20 _ 1 bath of acetic water to 1 0/0 _ 2 baths of light green (or light blue) 1 bath of acetic water to 0/0 _ 1 Dehydration and montaqe Dehydration is automatically continues in the automaton (2 25 min 30 / bath) 1 absolute ethanol bath 1 absolute ethanol bath 2 Clearene baths

30 11.4.2- Expression des glycosaminoglycanes (GAGs) Une coloration des coupes histologiques des expiants de peau au bleu alcian (référence MO-H-134 de la société BIO-EC) spécifique des GAGs acides a été réalisée. Les noyaux ont été contre colorés en rouge avec du 10 Nuclear Fast Red (marque de commerce) (référence H-3403 de la société Vector). Cette coloration a été réalisée sur des échantillons fixés au Bouin et imprégnés en paraffine, et sur des coupes montées sur lames silanisées. 11.4.2- Expression of glycosaminoglycans (GAGs) Staining of the histological sections of skin explants with alcian blue (reference MO-H-134 from BIO-EC) specific for acidic GAGs was performed. The nuclei were colored against red with Nuclear Fast Red (Trademark H-3403 from Vector). This staining was performed on samples fixed to Bouin and impregnated in paraffin, and on sections mounted on silanized slides.

Le mode opératoire qui a été utilisé est le suivant : Déparaffinaqe / réhydratation - Placer les lames à colorer dans des paniers en fer - Placer le panier dans le 1 er bain de Clearene de l'automate de coloration (IE 007) - Mettre l'automate en marche sur le programme « P1 » (2 min30 / bain) 2 bains de Clearene 1 bain d'éthanol absolu 1 bain d'éthanol 95° 1 bain d'éthanol 70° 1 bain d'eau distillée _ 1 bain de carbonate de lithium (élimination de l'excès de Bouin) 1 bain d'eau distillée Préparation des bains Préparer un bain d'acide acétique à 30/0 : Mesurer 250 mL d'eau distillée dans une éprouvette graduée. Prélever 7,5 mL d'acide acétique glacial à la pasteurette. Ajouter directement dans l'éprouvette Recouvrir d'un morceau de parafilm. The procedure that has been used is as follows: Deparaffinae / rehydration - Place the slides to be stained in iron baskets - Place the basket in the 1st Clearene bath of the staining automaton (IE 007) - Put the PLC running on the "P1" program (2 min 30 / bath) 2 Clearene baths 1 absolute ethanol bath 1 ethanol bath 95 ° 1 ethanol bath 70 ° 1 distilled water bath _ 1 carbonate bath of lithium (removal of excess Bouin) 1 bath of distilled water Preparation of baths Prepare a bath of acetic acid at 30/0: Measure 250 mL of distilled water in a graduated cylinder. Take 7.5 mL glacial acetic acid from the pasteurette. Add directly to the test tube Cover with a piece of parafilm.

Mélanger par retournement. Verser dans un bac de coloration. Vérifier le pH du bleu alcian. L'ajuster si nécessaire par du NaOH 0,1 N ou du HCI IN. Filtrer la quantité nécessaire de bleu alcian directement dans un bac de coloration à l'aide d'un entonnoir et d'un filtre de taille 30 adaptée. Mix by turning. Pour into a staining tray. Check the pH of the alcian blue. Adjust if necessary with 0.1 N NaOH or 1N HCl. Filter the required amount of alcian blue directly into a staining tray using a funnel and a suitable sized filter.

Coloration Plonger le panier dans chacun des bacs mentionnés ci-dessous en respectant le temps imparti à chacun. Il est bon d'agiter doucement le panier dans les bains d'acide acétique et de Nuclear Fast Red. Coloring Plunge the basket into each of the bins mentioned below, respecting the time allowed to each. It is good to gently shake the basket in the acetic acid and Nuclear Fast Red baths.

Entre chaque bain, le panier doit être égoutté au-dessus du bac puis essuyé légèrement sur un papier absorbant. Plonger dans l'acide acétique à 3 % pendant 3 min Plonger dans le bleu alcian pH 2,5 pendant 24 h à 37°C Plonger dans de l'eau distillée 3 fois pendant 5 minutes Plonger dans le Nuclear Fast Red pendant 1 à 10 minutes Plonger dans de l'eau distillée Remarques : La durée de la contre-coloration par le Nuclear Fast Red est variable en fonction l'âge de la solution. Après coloration, récupérer le bleu alcian et le Nuclear Fast Red. Between each bath, the basket must be drained above the tray and then wiped lightly on absorbent paper. Immerse in 3% acetic acid for 3 min. Immerse in alcian blue pH 2.5 for 24 h at 37 ° C. Immerse in distilled water 3 times for 5 minutes. Immerse in the Nuclear Fast Red for 1 to 10 minutes. minutes Dive in distilled water Remarks: The duration of the counterstain by the Nuclear Fast Red is variable depending on the age of the solution. After staining, recover the alcian blue and the Nuclear Fast Red.

Déshydratation et montaqe Placer le panier dans un bain d'eau distillée dans l'automate de coloration Mettre l'automate en marche sur le programme « P1 » (2 min30 / bain) 1 bain d'eau distillée 2 bains d'éthanol absolu 2 bains de Clearene - Monter les lames à l'Eukitt Les GAGs sont des polysaccharides complexes retrouvés en 25 abondance à la surface des cellules, et constituent un élément important des matrices extracellulaires. Les GAGs neutres, proche de la jonction dermoépidermique ODE) sont des réservoirs de facteurs de croissance ; les GAGs acides, localisés dans l'épiderme et le derme papillaire sont essentiellement constitués d'acide hyaluronique, impliqué dans l'hydratation de la peau. In 30 vivo, les GAGs sont impliqués dans l'élasticité et l'hydratation de la peau.20 11.3 Analyse d'images Pour chaque biopsie, 9 images ont été analysées à l'aide du logiciel d'analyse d'images Olympus Ce11"D (marque de commerce). 11.4 Résultats et discussion 11.4.1 - Morpholoqie A JO (jour 0, départ des expérimentations), le stratum corneum est assez épais, compact et très nettement kératinisé en surface et à sa base. L'épiderme présente 4 à 5 assises cellulaires avec une bonne morphologie. Dehydration and mounting Place the basket in a distilled water bath in the coloring automaton Switch on the PLC on the "P1" program (2 min30 / bath) 1 distilled water bath 2 absolute ethanol baths 2 Clearene Baths - Mounting Eukitt Slides GAGs are complex polysaccharides found abundantly on the surface of cells, and are an important component of extracellular matrices. Neutral GAGs, close to the dermoepidermal junction ODE) are reservoirs of growth factors; Acidic GAGs, located in the epidermis and papillary dermis, consist essentially of hyaluronic acid, which is involved in the hydration of the skin. In vivo, GAGs are involved in the elasticity and hydration of the skin.20 11.3 Image analysis For each biopsy, 9 images were analyzed using the Olympus Ce11 "image analysis software D (trade mark) 11.4 Results and discussion 11.4.1 - Morphology At OJ (day 0, start of experiments), the stratum corneum is quite thick, compact and very clearly keratinised at the surface and at the base. 4 to 5 cell seats with a good morphology.

Le relief de la jonction dermo-épidermique est net. Le derme papillaire présente un collagène avec des fibres assez épaisses formant un réseau assez dense. Il est bien cellularisé. Après 10 jours : - Sur le lot non traité (contrôle), le stratum corneum est épais, modérément feuilleté, nettement kératinisé en surface et très nettement à sa base. La parakératose est très nette. Le relief de la jonction dermoépidermique est net. Le derme papillaire présente un collagène avec des fibres assez épaisses formant un réseau plus ou moins dense. Il est bien cellularisé. - Sur le lot traité avec le produit «hyaluronate de sodium» (P1), le stratum corneum est épais, modérément feuilleté, nettement kératinisé en surface et modérément à sa base. La parakératose est très nette. L'épiderme présente 4 à 5 assises cellulaires. Le relief de la jonction dermo-épidermique est net. Le derme papillaire présente un collagène avec des fibres assez épaisses formant un réseau assez dense. Il est bien cellularisé. - Sur le lot traité conformément à la présente invention avec le produit « hyaluronate de calcium » (P2), le stratum corneum est très épais, modérément feuilleté, nettement kératinisé en surface et à sa base. La parakératose est assez nette. L'épiderme présente 6 à 7 assises cellulaires. The relief of the dermal-epidermal junction is clear. The papillary dermis presents a collagen with rather thick fibers forming a fairly dense network. It is well cellularized. After 10 days: - On the untreated lot (control), the stratum corneum is thick, moderately flaky, clearly keratinized on the surface and very clearly at its base. Parakeratosis is very clear. The relief of the dermoepidermal junction is clear. The papillary dermis presents a collagen with rather thick fibers forming a more or less dense network. It is well cellularized. - On the batch treated with the product "sodium hyaluronate" (P1), the stratum corneum is thick, moderately flaky, clearly keratinized on the surface and moderately at its base. Parakeratosis is very clear. The epidermis has 4 to 5 cell layers. The relief of the dermal-epidermal junction is clear. The papillary dermis presents a collagen with rather thick fibers forming a fairly dense network. It is well cellularized. - On the batch treated according to the present invention with the product "calcium hyaluronate" (P2), the stratum corneum is very thick, moderately laminated, markedly keratinized at the surface and at its base. Parakeratosis is quite clear. The epidermis has 6 to 7 cell layers.

Le relief de la jonction dermo-épidermique est net. Le derme papillaire présente un collagène avec des fibres assez épaisses formant un réseau dense. Il est bien cellularisé. 11.4.2- Expression des GAGs (voir clichés photographiques représentatifs des figures 2 et 3 annexées) A J0, les GAGs acides sont très faibles dans les espaces inter-cellulaires épidermiques et très modérés dans le derme papillaire. The relief of the dermal-epidermal junction is clear. The papillary dermis presents collagen with rather thick fibers forming a dense network. It is well cellularized. 11.4.2- Expression of GAGs (see representative photographic snapshots of appended Figures 2 and 3) At D0, the acid GAGs are very weak in the inter-cellular spaces epidermal and very moderate in the papillary dermis.

Après 10 jours : - Sur le lot non traité (contrôle ou témoin), les GAGs acides sont très faibles dans les espaces inter-cellulaires épidermiques et sont très modérés dans le derme papillaire. - Sur le lot traité avec le produit « hyaluronate de sodium » (P1), les GAGs acides sont très modérés dans les espaces inter-cellulaires épidermiques et sont très modérés dans le derme papillaire. - Sur le lot traité avec le produit « hyaluronate de calcium » (P2), les GAGs acides sont assez nets dans les espaces inter-cellulaires épidermiques et sont assez nets dans le derme papillaire. After 10 days: - On the untreated lot (control or control), the acidic GAGs are very weak in the inter-cellular epidermal spaces and are very moderate in the papillary dermis. - On the batch treated with the product "sodium hyaluronate" (P1), the acidic GAGs are very moderate in the inter-cellular epidermal spaces and are very moderate in the papillary dermis. - On the lot treated with the product "calcium hyaluronate" (P2), the acid GAGs are fairly clear in the inter-cellular epidermal spaces and are quite clear in the papillary dermis.

Le tableau 1 suivant présente les résultats des analyses d'image réalisées à partir d'une coloration des GAGs au bleu alcian) : The following table 1 presents the results of the image analyzes carried out starting from a coloration of GAGs with the alcian blue):

Tableau 1 GAGs (% surface) Contrôle sodium calcium hyaluronate hyaluronate (P1) (P2) 9,2 26,1 7,3 22,7 13,9 50,2 16,4 16,3 14 11,7 12,1 14,4 18 9,8 23,4 12,3 22,3 16,1 9,3 11,6 39,3 7,5 16,2 18,6 5,9 20,2 37,9 La figure 4 annexée représente une analyse statistique des données effectuée par le logiciel jmp (SAS). En ordonnée le pourcentage de surface des expiants occupés par des GAGs acides, et en abscisse les lots analysés : contrôle = témoin ; P1 = lot traité avec du hyaluronate de sodium de l'art antérieur ; P2 = lot traité avec du hyaluronate de calcium conformément à la présente invention. La figure 5 annexée représente un graphique permettant une comparaison des moyennes de GAGs (% surface occupée par les GAGs en ordonnée) par condition : contrôle à gauche, hyaluronate de sodium au centre, et hyaluronate de calcium à droite. Tout à droite, contrôle test de Dunnett 0,05. Anal se de la variance Source Degrés Somme des Carré Rapport F Prob. > F de liberté carrés moyen Produit 2 676,0289 338,014 3,7763 0,0375* Résidus 24 2148,1978 89,508 - - Total 26 2824,2267 - - - Moyennes pour l'anova Niveau Nombre Moyenne Écart-type LIC 95 % LSC 95 0/0 contrôle 9 12,5556 3,1536 6,047 19,064 P1 9 16,5000 3,1536 9,991 23,009 P2 9 24,5778 3,1536 18,069 31,087 L'erreur-type utilise une estimation groupée de la variance de l'erreur Table 1 GAGs (% area) Control sodium calcium hyaluronate hyaluronate (P1) (P2) 9.2 26.1 7.3 22.7 13.9 50.2 16.4 16.3 14 11.7 12.1 14 , 4 18 9.8 23.4 12.3 22.3 16.1 9.3 11.6 39.3 7.5 16.2 18.6 5.9 20.2 37.9 Attached Figure 4 represents a statistical analysis of the data carried out by the software jmp (SAS). On the ordinate, the percentage of surface area of explants occupied by acid GAGs, and on the abscissa the batches analyzed: control = control; P1 = batch treated with sodium hyaluronate of the prior art; P2 = batch treated with calcium hyaluronate according to the present invention. The attached FIG. 5 represents a graph allowing a comparison of the GAG averages (% GAG surface occupied on the y-axis) by condition: control on the left, sodium hyaluronate in the center, and calcium hyaluronate on the right. All right, Dunnett test control 0.05. Anal of variance Source Degrees Sum of Squares Report F Prob. > F average square freedom Product 2 676.0289 338.014 3.7763 0.0375 * Residue 24 2148.1978 89.508 - - Total 26 2824.2267 - - - Averages for the average Level Average number Standard deviation LIC 95% LSC 95 0/0 control 9 12,5556 3,1536 6,047 19,064 P1 9 16,5000 3,1536 9,991 23,009 P2 9 24,5778 3,1536 18,069 31,087 The standard error uses a pooled estimate of the variance of the error

Comparaisons de moyennes 20 Comparaisons avec un contrôle en utilisant la méthode de Dunnett Groupe de contrôle = contrôle Id Alpha 2,34947 0,05 Abs(différence)-différence la moins significative Niveau P-value Niveau Abs(différence)-différence la moins P-value significative P2 1,544 0,0235* P1 - 6,53 0,5868 contrôle - 10,5 1,0000 Les valeurs positives montrent des paires de moyennes qui sont significativement différentes. Comparisons of averages 20 Comparisons with a control using the Dunnett method Control group = control Id Alpha 2,34947 0,05 Abs (difference) -difference least significant Level P-value Level Abs (difference) -difference least P -value value P2 1,544 0,0235 * P1 - 6,53 0,5868 control - 10,5 1,0000 Positive values show pairs of averages that are significantly different.

III. Conclusion L'augmentation du bleu alcian est directement corrélée à l'augmentation des glycosaminoglycanes acides (GAGs acides) dans l'expiant de peau après 10 jours de traitement. L'augmentation des GAGs acides au niveau du derme papillaire concourt à une plus grande densification du réseau dermique. Cette augmentation permet également de densifier la matrice extracellulaire de l'espace intercellulaire épidermique. L'observation microscopique des expiants colorés au bleu alcian montre que le produit « hyaluronate de calcium » (P2) favorise l'augmentation des GAGs au niveau dermique et épidermique (voir paragraphe 4). Les données issues de l'analyse d'images indiquent que le produit « hyaluronate de calcium » (P2) induit une augmentation significative de la surface occupée par la coloration au bleu alcian en comparaison aux explants-contrôle (voir photographies et graphe annexés). III. Conclusion The increase in alcian blue is directly correlated with the increase of acidic glycosaminoglycans (acidic GAGs) in the skin explant after 10 days of treatment. The increase in acid GAGs in the papillary dermis contributes to a greater densification of the dermal network. This increase also makes it possible to densify the extracellular matrix of the epidermal intercellular space. Microscopic observation of alkali blue colored explants shows that the product "calcium hyaluronate" (P2) promotes the increase of GAGs at the dermal and epidermal level (see paragraph 4). The data from the image analysis indicate that the product "calcium hyaluronate" (P2) induces a significant increase in the area occupied by alcian blue staining compared to control explants (see attached photographs and graph).

En conséquence, le produit « hyaluronate de calcium » (P2) dans l'utilisation conforme à la présente invention favorise une nette densification du réseau dermique et des espaces intercellulaires épidermiques. L'augmentation significative des GAGs acides n'est pas observée lorsque les expiants de peau sont traités avec le produit « sodium hyaluronate (P1) (voir graphe). La présence des GAGs acides au niveau du derme papillaire et dans les espaces intercellulaires épidermiques reste très modérée. As a result, the product "calcium hyaluronate" (P2) in the use according to the present invention promotes a clear densification of the dermal network and epidermal intercellular spaces. The significant increase in acidic GAGs is not observed when skin explants are treated with the product "sodium hyaluronate (P1)" (see graph). The presence of acidic GAGs in the papillary dermis and in the epidermal intercellular spaces remains very moderate.

L'ensemble des observations microscopiques (morphologie et coloration au bleu alcian) ainsi que l'analyse des clichés photographiques traduisent une meilleure hydratation de l'épiderme et du derme sous l'action du produit « hyaluronate de calcium » (P2). All the microscopic observations (morphology and coloration with alcian blue) as well as the analysis of the photographic plates reflect a better hydration of the epidermis and the dermis under the action of the product "calcium hyaluronate" (P2).

Le hyaluronate de calcium a une action hydratante réelle et bien supérieure au sodium hyaluronate, le plus couramment utilisé en cosmétique dans l'art antérieur. Calcium hyaluronate has a real moisturizing action and far superior to sodium hyaluronate, the most commonly used in cosmetics in the prior art.

IV. Exemple de composition cosmétique utilisable selon la présente invention Les pourcentages des composés sont exprimés en pourcentage en poids de la composition. « Q.S.P » signifie « quantité suffisante pour » ou « Quantum satis ». IV. Example of a cosmetic composition that can be used according to the present invention The percentages of the compounds are expressed as percentage by weight of the composition. "Q.S.P" means "sufficient quantity for" or "Quantum satis".

A. Gel moussant On prépare un gel moussant utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés 0/0 CARBOMER 8,00 LAURYL ETHER SULFATE DE SODIUM 5,00 C12-13 PARETH 3 0,50 DECYL GLUCOSIDE 10,00 COCAMIDOPROPYL BETAINE 5,00 GLYCERINE 5,00 PRIMALHYAL 0,10 CHELATANT 0,05 SODIUM HYDROXIDE q.s.pH CONSERVATEURS 0,05 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 B. Lotion On prépare une lotion utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés 0/0 GLYCOLS 2,00 ETHANOL 5,00 PRIMALHYAL 0,10 CHLORURE DE SODIUM 1,00 CONSERVATEURS 0,50 SOLUBILISANT 0,30 PARFUM 0,10 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 C. sérum On prépare un sérum utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés 0/0 ARISTOFLEX AVC 1,00 SEPIGEL 305 0,20 ISONONANOATE D'ISONONYLE 3,00 SILICONE VOLATIL 0345 5,00 ALUMINIUM STARCH OCTENYLSUCCINATE 2,00 ACIDE SALICYLIQUE 0,10 ALCOOL 96.2° NON DENATURE 5,00 GLYCERINE 4,00 PRIMALHYAL 0,10 TROMETHAMINE q.s.pH CONSERVATEURS q.s. PARFUM q.s. EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 D. Gel-Crème hydratant On prépare un gel-crème hydratant utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés 0/0 SENSIVA SC 50 0,20 TAPIOCA 1,00 SEPIGEL 305 1,00 ARISTOFLEX AVC 1,00 GLYCOLS 5,00 LUBRAJEL MS FREE 5,00 TRIGLYCERIDES C8 C10 1,50 SILICONE VOLATIL 0345 5,00 PHENYL TRIMETHICONE 1,00 SILICONE DC 5225 C 1,00 PRIMALHYAL 0,10 CHELATANT 0,05 CONSERVATEURS q.s. PARFUM q.s. EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 E. Crème hydratante On prépare une crème hydratante utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés 0/0 LANETTE SX 1,70 HYDROGENATED POLYISOBUTENE 7,00 ISONONANOATE D'ISONONYLE 5,00 STEARATE DE GLYCEROL AE 5,60 C12-15 ALKYL BENZOATE 3,50 METHYL GLUCETH 20 SEQUISTEARA 0,50 GLYCERINE 3,00 OSMOCIDE 3 5,00 CARBOMER 0,25 SILICA 0,15 SUBMICA FL 0,10 TALC ROSE 0,50 SILICONE DC 1503 0,15 PRIMALHYAL 0,10 EDTA DISODIQUE 0,10 CONSERVATEURS q.s. TROMETHAMINE q.s. EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 N/Ref : BIP208628FR00 A. Foaming gel A foaming gel which can be used according to the present invention is prepared by mixing the following compounds: Compounds 0/0 CARBOMER 8.00 LAURYL ETHER SODIUM SULFATE 5.00 C12-13 PARETH 3 0.50 DECYL GLUCOSIDE 10.00 COCAMIDOPROPYL BETAINE 5.00 GLYCERIN 5.00 PRIMALHYAL 0.10 CHELATING 0.05 SODIUM HYDROXIDE qspH PRESERVATIVES 0.05 DEMINERALIZED WATER QSP 100 B. Lotion A lotion which can be used according to the present invention is prepared by mixing the following compounds: GLYCOLS 2.00 ETHANOL 5.00 PRIMALHYAL 0.10 SODIUM CHLORIDE 1.00 PRESERVATIVES 0.50 SOLUBILIZER 0.30 PERFUME 0.10 DEMINERALIZED WATER QSP 100 C. Serum A serum is prepared according to the present invention by mixing the compounds following: Compounds 0/0 ARISTOFLEX AVC 1,00 SEPIGEL 305 0,20 ISONONYL ISONONYCALL 3,00 SILICONE VOLATIL 0345 5,00 ALUMINUM STARCH OCTENYLSUCCINATE 2,00 SALICYLIC ACID 0,10 ALCOHOL 96,2 ° NO DENATURE 5,00 GLYCERIN 4 , 00 PRIMALHYAL 0.10 TROMETHAMINE q. s.pH CONSERVATORS q.s. PERFUME q.s. DEMINERALIZED WATER QSP 100 D. Gel-Moisturizing Cream A moisturizing gel-cream that can be used according to the present invention is prepared by mixing the following compounds: Compounds 0/0 SENSIVA SC 50 0.20 TAPIOCA 1.00 SEPIGEL 305 1.00 ARISTOFLEX AVC 1 , 00 GLYCOLS 5,00 LUBRAJEL MS FREE 5,00 TRIGLYCERIDES C8 C10 1,50 SILICONE VOLATIL 0345 5,00 PHENYL TRIMETHICONE 1,00 SILICONE DC 5225 C 1,00 PRIMALHYAL 0,10 CHELATING 0,05 PRESERVATIVES qs PERFUME q.s. DEMINERALIZED WATER QSP 100 E. Moisturizing Cream A moisturizing cream which can be used according to the present invention is prepared by mixing the following compounds: Compounds 0/0 LANETTE SX 1.70 HYDROGENATED POLYISOBUTENE 7.00 ISONONYL ISONONYANATE 5.00 GLYCEROL STEARATE AE 5 , 60 C12-15 ALKYL BENZOATE 3.50 METHYL GLUCETH 20 SEQUISTEARA 0.50 GLYCERIN 3.00 OSMOCIDE 3 5.00 CARBOMER 0.25 SILICA 0.15 SUBMICA FL 0.10 TALC ROSE 0.50 SILICONE DC 1503 0.15 PRIMALHYAL 0.10 EDTA DISODIUM 0.10 PRESERVATIVES qs TROMETHAMINE q.s. DEMINERALIZED WATER Q.S.P 100 N / Ref: BIP208628FR00

Claims

REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique de hyaluronate de calcium dont REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique de hyaluronate de calcium dont la masse moléculaire est de 5 à 50 kDa. REVENDICATIONS1. Cosmetic use of calcium hyaluronate of which CLAIMS1. Cosmetic use of calcium hyaluronate with a molecular weight of 5 to 50 kDa.

2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle la masse moléculaire du hyaluronate de calcium est de 5 à 20 kDa. 2. Cosmetic use according to claim 1, wherein the molecular weight of calcium hyaluronate is 5 to 20 kDa.

3. Composition cosmétique comprenant du hyaluronate de calcium 10 dont la masse moléculaire est de 5 à 50 kDa. 3. A cosmetic composition comprising calcium hyaluronate 10 having a molecular weight of 5 to 50 kDa.

4. Composition cosmétique selon la revendication 3, ladite composition étant une composition destinée à augmenter les glycosaminoglycanes de la peau. 4. Cosmetic composition according to claim 3, said composition being a composition intended to increase the glycosaminoglycans of the skin.

5. Composition cosmétique selon la revendication 3 ou 4, ladite composition étant une composition d'hydratation de la peau. 5. Cosmetic composition according to claim 3 or 4, said composition being a hydration composition of the skin.

6. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 20 3 à 5, dans laquelle la masse moléculaire du hyaluronate de calcium est de 5 à 20 kDa. The cosmetic composition according to any one of claims 3 to 5, wherein the molecular weight of the calcium hyaluronate is 5 to 20 kDa.

7. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, ladite composition comprenant de 0,01 à 5% en poids de hyaluronate 25 de calcium par rapport au poids total de la composition. 7. Cosmetic composition according to any one of claims 3 to 6, said composition comprising from 0.01 to 5% by weight of calcium hyaluronate relative to the total weight of the composition.

8. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, dans laquelle la composition cosmétique comprenant du hyaluronate de calcium est sous une forme choisie dans le groupe le comprenant une émulsion eau dans l'huile, une émulsion huile dans l'eau, un gel, un gel moussant et une lotion. 8. Cosmetic composition according to any one of claims 3 to 7, wherein the cosmetic composition comprising calcium hyaluronate is in a form selected from the group comprising a water-in-oil emulsion, an oil-in-water emulsion. , a gel, a foaming gel and a lotion.

9. Procédé de traitement cosmétique comprenant une application topique de hyaluronate de calcium selon l'une quelconque des revendications 1 à 2 ou d'une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 3 à 8. 9. Cosmetic treatment process comprising a topical application of calcium hyaluronate according to any one of claims 1 to 2 or a cosmetic composition according to any one of claims 3 to 8.