ES2308181T3 - Inhibidores de proteasa. - Google Patents

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ES2308181T3 ES04734996T ES04734996T ES2308181T3 ES 2308181 T3 ES2308181 T3 ES 2308181T3 ES 04734996 T ES04734996 T ES 04734996T ES 04734996 T ES04734996 T ES 04734996T ES 2308181 T3 ES2308181 T3 ES 2308181T3
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Henrik Fuglsang
Lars Naerum
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Prozymex ApS
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I) para usar en medicina (Ver fórmula) o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R1 y R2 independientemente entre sí son hidrógeno, alquilo C1 - 6, alquenilo C2 - 6, alquinilo C2 - 6, un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C5 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C3 - 7 no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 arilo no sustituido o sustituido pero que no es bencilo cuando R6 son fenilo, un grupo alquil C1 - 6 heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril- alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C3 - 7-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C3 - 7-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, o R1 y R2 forman juntos un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C3 - 7 no sustituido o sustituido; R3 es hidrógeno, alquilo C1 - 6, o R3 y R1 forman juntos un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C3 - 7 no sustituido o sustituido, o R3 y R2 forman juntos un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C3 - 7 no sustituido o sustituido; R4 y R5 independientemente entre sí son hidrógeno o alquilo C1 - 6; R6 es alquilo C1 - 6, -CH(R7)CONH(R8), alquenilo C2 - 6, alquinilo C2 - 6, un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C5 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C3 - 7 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C3 - 7-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C3 - 7-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C1 - 5 no sustituido o sustituido; R7 es hidrógeno, un grupo alquilo C1 - 6 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 heteroarilo no sustituido o sustituido o una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural; R8 es hidrógeno, un grupo alquilo C1 - 6 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 heteroarilo no sustituido o sustituido, una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural o un grupo -CH(R7)CONH(R9); R9 es hidrógeno, un grupo alquilo C1 - 6 no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C3 - 10 no sustituido o sustituido, un grupo alquil C1 - 6 arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C1 - 6 heteroarilo no sustituido o sustituido, en el que un grupo sustituido está sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por alquilo C1 - 6, alquiltio C1 - 6, alquil C1 - 6 carbonilo, N-alquil C1 - 6 amida, alcoxi C1 - 6, dialquilamino- alquilo C1 - 6, amida, hidroxi, carboxi, amino, halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio y ciano; con la condición de que el compuesto no sea Ile-Gly a -Leu-Met-NH2, en la que Gly a es un resto alfa-aza-aminoácido.

Description

Inhibidores de proteasa.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos inhibidores de proteasa, más específicamente a inhibidores de cisteína y/o serina proteasas útiles en el tratamiento/prevención de inflamación, diabetes y enfermedades similares en las que están implicadas las proteasas, especialmente enfermedades inflamatorias mediadas por mastocitos. Más específicamente, la invención se refiere a monoacil semicarbazidas capaces de inhibir dipeptidil peptidasa I (DPP-I); conocida también como catepsina C, una enzima que escinde un dipéptido del extremo N terminal de una cadena poli-
peptídica.
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Antecedentes de la invención
La dipeptidil peptidasa-l (DPP-I; EC 3.4.14.1) conocida también como catepsina C es una cisteína proteasa lisosomal que pertenece a la familia de la papaína. La enzima se expresa constitutivamente en muchos tejidos con mayores niveles en pulmón, riñón, hígado y bazo. Los ADNc que codifican DPP-I de rata, humana y murina se han clonado y secuenciado y han mostrado que la enzima está altamente conservada. DPP-I se sintetiza como precursor inactivo (zimógeno), y se activa mediante una escisión no autocatalítica de un péptido de activación interna dentro del propéptido N-terminal. Una vez activada, DPP-I cataliza la retirada de dipéptidos del extremo N-terminal de los sustratos polipeptídicos con gran especificidad. El pH óptimo se encuentra en la región de 5-7 usando DPP-I humana 111.3. Adicionalmente, DPP-I es oligomérica, con poca homología de la secuencia de aminoácidos comparada con las exopeptidasas catepsina B, H, L, O y S que además son monoméricas. Datos recientes sugieren que, aparte de ser una enzima importante en la degradación de proteínas lisosomales, DPP-I funciona también como enzima clave en la activación de serina peptidasas granulares en linfocitos T citotóxicos y células asesinas naturales (granzimas A y B), mastocitos (quimasa y triptasa), y neutrófilos (catepsina G y elastasa).
Los mastocitos se encuentran en muchos tejidos, aunque están presentes en mayor número a lo largo de los revestimientos epiteliales del cuerpo, tales como la piel, el tracto respiratorio y el tracto gastrointestinal. Los mastocitos se localizan también en el tejido perivascular que rodea los pequeños vasos sanguíneos. En seres humanos, se han identificado dos tipos de mastocitos. El tipo T, que expresa únicamente triptasa, y el tipo MC, que expresa ambas triptasa y quimasa. En seres humanos, los mastocitos de tipo T se localizan fundamentalmente en el tejido alveolar y la mucosa intestinal mientras que las células de tipo TC predominan en la piel y la conjuntiva. Los mastocitos pueden liberar diferentes mediadores inflamatorios potentes incluyendo citoquinas, leucotrienos, prostaglandinas, histamina y proteoglicanos, aunque entre estos los productos más abundantes de la activación de mastocitos son las serina proteasas de la familia quimotripsina; triptasa y quimasa. Estas proteasas están situadas en los lisosomas de los mastocitos en forma de enzimas totalmente activas. El sitio exacto de activación de triptasa y quimasa a partir de precursores de zimógeno no se conoce, aunque el aparato de Golgi puede desempeñar un papel en este aspecto. DPP-I, que es particularmente abundante en mastocitos, parece ser la enzima clave responsable de la activación de quimasa y triptasa. Además, triptasa y quimasa están emergiendo como importantes mediadores de enfermedades alérgicas. Después de la secreción de mastocitos activados, hay evidencia de que estas proteasas están muy implicadas en procedimientos de inflamación, remodelado de tejido, broncoconstricción y secreción de moco, que han hecho a estas proteasas atractivas para intervención terapéutica. Los mastocitos parecen desempeñar también un papel en angiogénesis ya que estas células se acumulan en muchas situaciones dependientes de angiogénesis. Además, se ha descubierto que diversos mediadores de mastocito (por ejemplo, histamina, quimasa, VEGF y bFGF) son angiogénicos y regulan la proliferación y función de las células endoteliales.
Los neutrófilos provocan un daño considerable en numerosas afecciones patológicas. Cuando están activados, los neutrófilos secretan enzimas granulares destructivas incluyendo elastasa y catepsina G y experimentan estallidos oxidativos para liberar los intermedios de oxígeno reactivos. Se han realizado numerosos estudios sobre cada uno de estos agentes activantes en aislamiento. Enfisema pulmonar, fibrosis quística y artritis reumatoide son solo algunos ejemplos de afecciones patológicas asociadas con las potentes enzimas elastasa y catepsina G.
La fuerte evidencia que asocia triptasa y quimasa con numerosas enfermedades alérgicas, inmunológicas e inflamatorias mediadas por mastocitos, y el hecho de que catepsina G y elastasa parecen desempeñar también importantes papeles en estos tipos de enfermedades señalan a DPP-I como una enzima diana atractiva para intervención terapéutica contra las enfermedades mencionadas anteriormente, debido a su papel central en la activación de estas
proteasas.
El documento US 5.602.102 de la Universidad de Texas describe inhibidores de dipeptidil peptidasa I.
El documento WO 03/022871A2 de Probiodrug describe inhibidores de dipeptidil peptidasa I.
\newpage
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a compuestos de fórmula general (I)
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en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son como se definen en la parte detallada de esta descripción, o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster de los mismos.
Se contempla que los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de inflamación o diabetes de tipo 2, particularmente para tratamiento de prevención de enfermedades inflamatorias mediadas por mastocitos tales como asma, gripe severa, infección respiratoria por virus sincitial, inhibición de células CD8 T, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis reumatoide, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer o sepsis. Los compuestos de la presente invención son especialmente aplicables en apoptosis de célula diana.
De acuerdo con la presente invención se proporcionan compuestos, que se contemplan como útiles como herramientas de diagnóstico in vitro e in vivo.
Un objeto de la invención es proporcionar nuevos compuestos que tienen actividad farmacológica como inhibidores de proteasas, particularmente serina y/o cisteína proteasas, más particularmente cisteína proteasas, aún más particularmente cisteína proteasas de la superfamilia de la papaína, todavía más particularmente dipeptidil peptidasa I.
Otros objetos resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción.
Descripción detallada de la invención Definiciones
El término "DPP-I" o "DPPI" como se usa en este documento pretende indicar dipeptidil peptidasa I (EC 3.4.14.1) conocida también como catepsina C, catepsina J, dipeptidil aminopeptidasa I y dipeptidil transferasa. DPPI escinde un dipéptido Xaa-Xbb del extremo N terminal de una cadena polipeptídica Xaa-Xbb-Xcc-[Xxx]_{n}, excepto cuando Xaa es Arg o Lys, o cuando Xbb o Xcc es Pro.
El término "tratamiento" se define como la gestión y cuidado de un paciente con el fin de combatir la enfermedad, afección, o trastorno e incluye la administración de un compuesto de la presente invención para prevenir la aparición de los síntomas o las complicaciones, o aliviar los síntomas o las complicaciones, o eliminar la enfermedad, afección, o trastorno.
Como se usa en este documento, solo o en combinación, el término "alquilo C_{1-6}" se refiere a una cadena de hidrocarburo saturada, lineal o ramificada que tiene de uno a seis átomos de carbono. Los grupos alquilo C_{1-6} incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, iso-hexilo, 4-metilpentilo, neopentilo, 2,2-dimetilpropilo y similares.
Como se usa en este documento, solo o en combinación, el término "alquenilo C_{2-6}" se refiere a una cadena de hidrocarburo insaturada, lineal o ramificada, que tiene de dos a seis átomos de carbono y al menos un doble enlace. Los grupos alquenilo C_{2-6} incluyen, aunque sin limitación, vinilo, 1-propenilo, alilo, iso-propenilo, n-butenilo, n-pentenilo, n-hexenilo y similares.
Como se usa en este documento, solo o en combinación, el término "alquinilo C_{2-6}" se refiere a una cadena de hidrocarburo insaturada, lineal o ramificada, que tiene de dos a seis átomos de carbono y al menos un triple enlace. Los grupos alquinilo C_{2-6} incluyen, aunque sin limitación, -C=H, -C=CCH_{3}, -CH_{2}C=CH, -CH_{2}-CH_{2}C=CH, -CH(CH_{3})C=CH y similares.
El término "alcoxi C_{1-6}" en el presente contexto designa un grupo O-alquilo C_{1-6} usado solo o en combinación, en el que el alquilo C_{1-6} es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos de grupos alcoxi lineales son metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi y hexoxi. Los ejemplos de alcoxi ramificado son iso-propoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, iso-pentoxi y iso-hexoxi. Los ejemplos de alcoxi cíclico son ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi y ciclohexiloxi.
El término "alquiltio C_{1-6}" en el presente contexto designa un grupo -S-alquilo C_{1-6} en el que alquilo C_{1-6} es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen, aunque sin limitación, metiltio, etiltio, n-propiltio, isopropiltio, butiltio, isobutiltio, sec-butiltio, terc-butiltio, n-pentiltio, isopentiltio, neopentiltio, terc-pentiltio, n-hexiltio, isohexiltio y similares.
El término "alquilcarbonilo C_{1-6}" en el presente contexto designa un grupo -(CO)-alquilo C_{1-6} en el que alquilo C_{1-6} es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen, aunque sin limitación, metilcarbonilo, etilcarbonilo, n-propilcarbonilo, isopropilcarbonilo, butilcarbonilo, isobutilcarbonilo, sec-butilcarbonilo, terc-butilcarbonilo, n-pentilcarbonilo, iso-pentilcarbonilo, neopentilcarbonilo, terc-pentilcarbonilo, n-hexilcarbonilo, isohexilcarbonilo y similares.
El término "N-alquil C_{1-6} amida" en el presente contexto designa un grupo -(CO)NH-alquilo C_{1-6}, en el que alquilo C_{1-6} es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen, aunque sin limitación, N-metilamida, N-etilamida, N-propilamida, N-butilamida, N-pentilamida y N-hexilamida.
El término "dialquilamino alquilo C_{1-6}" como se usa en este documento designa un grupo di-alquil C_{1-4}-N-alquilo C_{1-6}, en el que alquilo C_{1-6} es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen, aunque sin limitación, dimetilaminometilo.
El término "cicloalquilo C_{3-10}" como se usa en este documento se refiere a un radical de uno o más hidrocarburos saturados mono-, bi-, tri- o espirocíclicos que tienen de tres a diez átomos de carbono. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, biciclo[3,2,1]octilo, espiro[4,5]decilo, norpinilo, norbonilo, norcarilo, adamantilo y similares.
El término "cicloalquenilo C_{5-10}" como se usa en este documento se refiere a un radical de uno o más hidrocarburos cíclicos saturados que tienen de cinco a diez átomos de carbono y al menos un doble enlace. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, ciclopentenilo y ciclohexenilo y similares.
El término "heterocicloalquilo C_{3-7}" como se usa en este documento se refiere a un radical de un heterociclo totalmente saturado tal como un hidrocarburo cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre, independientemente en el ciclo. Los ejemplos de heterociclos incluyen, aunque sin limitación, pirrolidina (1-pirrolidina, 2-pirrolidina, 3-pirrolidina, 4-pirrolidina, 5-pirrolidina), pirazolidina (1-pirazolidina, 2-pirazolidina, 3-pirazolidina, 4-pirazolidina, 5-pirazolidina), imidazolidina (1-imidazolidina, 2-imidazolidina, 3-imidazolidina, 4-imidazolidina, 5-imidazolidina), tiazolidina (2-tiazolidina, 3-tiazolidina, 4-tiazolidina, 5-tiazolidina), piperidina (1-piperidina, 2-piperidina, 3-piperidina, 4-piperidina, 5-piperidina, 6-piperidina), piperazina (1-piperazina, 2-piperazina, 3-piperazina, 4-piperazina, 5-piperazina, 6-piperazina), morfolina (2-morfolina, 3-morfolina, 4-morfolina, 5-morfolina, 6-morfolina), tiomorfolina (2-tiomorfolina, 3-tiomorfolina, 4-tiomorfolina, 5-tiomorfolina, 6-tiomorfolina), 1,2-oxatiolano (3-(1,2-oxatiolano), 4-(1,2-oxatiolano), 5-(1,2-oxatiolano)), 1,3-dioxolano (2-(1,3-dioxolano), 3-(1,3-dioxolano), 4-(1,3-dioxolano)), tetrahidropirano (2-tetrahidropirano, 3-tetrahidropirano, 4-tetrahidropirano, 5-tetrahidropirano, 6-tetrahidropirano), hexahidropiradizina, (1-(hexahidropiradizina), 2-(hexahidropiradizina), 3-(hexahidropiradizina), 4-(hexahidropiradizina), 5-(hexahidropiradizina), 6-(hexahidropiradizina)).
El término "arilo" como se usa en este documento pretende incluir sistemas de anillo aromático carbocíclico. Arilo pretende incluir también los derivados parcialmente hidrogenados de los sistemas carbocíclicos enumerados a continuación.
El término "heteroarilo" como se usa en este documento incluye sistemas de anillo aromático heterocíclicos que contienen uno o más heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre tales como furilo, tienilo, pirrolilo, y pretende incluir también los derivados parcialmente hidrogenados de los sistemas heterocíclicos enumerados a continuación.
Los ejemplos de "arilo" y "heteroarilo" incluyen, aunque sin limitación, fenilo, bifenilo, indenilo, naftilo (1-naftilo, 2-naftilo), N-hidroxitetrazolilo, N-hidroxitriazolilo, N-hidroxiimidazolilo, antracenilo (1-antracenilo, 2-antracenilo, 3-antracenilo), fenantrenilo, fluorenilo, pentalenilo, azulenilo, bifenilenilo, tiofenilo (1-tienilo, 2-tienilo), furilo (1-furilo, 2-furilo), furanilo, tiofenilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, piranilo, piridazinilo, pirazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tetrazolilo, tiadiazinilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo (tianaftenilo), indolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, quinazolinilo, fluorenilo, xantenilo, isoindanilo, benzhidrilo, acridinilo, bencisoxazolilo, purinilo, quinazolinilo, quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, fteridinilo, azepinilo, diazepinilo, pirrolilo (2-pirrolilo), pirazolilo (3-pirazolilo), imidazolilo (1-imidazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 5-imidazolilo), triazolilo (1,2,3-triazol-1-ilo, 1,2,3-triazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4-ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo), oxazolilo (2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo), tiazolilo (2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo), piridilo (2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo), pirimidinilo (2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 6-pirimidinilo), pirazinilo, piridazinilo (3-piridazinilo, 4-piridazinilo, 5-piridazinilo), isoquinolilo (1-isoquinolilo, 3-isoquinolilo, 4-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 6-isoquinolilo, 7-isoquinolilo, 8-isoquinolilo), quinolilo (2-quinolilo, 3-quinolilo, 4-quinolilo, 5-quinolilo, 6-quinolilo, 7-quinolilo, 8-quinolilo), benzo[b]furanilo (2-benzo[b]furanilo, 3-benzo[b]furanilo, 4-benzo[b]furanilo, 5-benzo[b]furanilo, 6-benzo[b]furanilo, 7-benzo[b]furanilo), 2,3-dihidro-benzo[b]furanilo (2-(2,3-dihidro-benzo[b]furanilo), 3-(2,3-dihidro-benzo[b]furanilo), 4-(2,3-dihidro-benzo[b]furanilo), 5-(2,3-dihidro-benzo[b]furanilo), 6-(2,3-dihidro-benzo[b]furanilo), 7-(2,3-dihidrobenzo[b]furanilo), benzo[b]tiofenilo (2-benzo[b]tiofenilo, 3-benzo[b]tiofenilo, 4-benzo[b]tiofenilo, 5-benzo[b]tiofenilo, 6-benzo[b]tiofenilo, 7-benzo[b]tiofenilo), 2,3-dihidro-benzo[b]tiofenilo (2-(2,3-dihidro-benzo[b]tiofenilo), 3-(2,3-dihidrobenzo[b]tiofenilo), 4-(2,3-dihidro-benzo[b]tiofenilo), 5-(2,3-dihidrobenzo[b]tiofenilo), 6-(2,3-dihidro-benzo[b]tiofenilo), 7-(2,3-dihidrobenzo[b]tiofenilo), indolilo (1-indolilo, 2-indolilo, 3-indolilo, 4-indolilo, 5-indolilo, 6-indolilo, 7-indolilo), indazolilo (1-indazolilo, 2-indazolilo, 3-indazolilo, 4-indazolilo, 5-indazolilo, 6-indazolilo, 7-indazolilo), bencimidazolilo, (1-bencimidazolilo, 2-bencimidazolilo, 4-bencimidazolilo, 5-bencimidazolilo, 6-bencimidazolilo, 7-bencimidazolilo, 8-bencimidazolilo), benzoxazolilo (1-benzoxazolilo, 2-benzoxazolilo), benzotiazolilo (1-benzotiazolilo, 2-benzotiazolilo, 4-benzotiazolilo, 5-benzotiazolilo, 6-benzotiazolilo, 7-benzotiazolilo), carbazolilo (1-carbazolilo, 2-carbazolilo, 3-carbazolilo, 4-carbazolilo). Los ejemplos no limitantes de derivados parcialmente hidrogenados son 1,2,3,4-tetrahidronaftilo, 1,4-dihidronaftilo, pirrolinilo, pirazolinilo, indolinilo, oxazolidinilo, oxazolinilo, oxazepinilo y similares.
El término "aril-alquilo C_{1-5}" como se usa en este documento se refiere a un grupo alquilo C_{1-5} como se ha definido anteriormente que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de carbono unidos mediante un grupo arilo como se ha definido anteriormente.
El término "heteroaril-alquilo C_{1-5}" como se usa en este documento se refiere a un alquilo C_{1-5} como se ha definido anteriormente que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco átomos de carbono unidos mediante un grupo heteroarilo como se ha definido anteriormente.
El término "alquil C_{1-6}arilo" como se usa en este documento se refiere a un grupo arilo como se ha definido anteriormente unido mediante un grupo alquilo C_{1-6} como se ha definido anteriormente que tiene uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis átomos de carbono.
El término "alquil C_{1-6} heteroarilo" como se usa en este documento se refiere a un grupo heteroarilo como se ha definido anteriormente unido mediante un grupo alquilo C_{1-6} como se ha definido anteriormente que tiene uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis átomos de carbono.
El término "aroílo" como se usa en este documento representa un grupo -(CO)-arilo en el que arilo es como se ha definido anteriormente.
El término "ciloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5}" como se usa en este documento se refiere a un grupo cicloalquilo como se ha definido anteriormente unido mediante un grupo alquilo como se ha definido anteriormente que tiene el número indicado de átomos de carbono.
El término "heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5}" como se usa en este documento se refiere a un grupo heterocicloalquilo como se ha definido anteriormente unido mediante un grupo alquilo como se ha definido anteriormente que tiene el número indicado de átomos de carbono.
"Halógeno" designa un átomo seleccionado entre el grupo constituido por F, Cl, Br y I.
Las expresiones "no sustituido" o "sustituido" como se usa en este documento se refieren a que los grupos en cuestión están opcionalmente no sustituidos o sustituidos con uno, dos o tres sustituyentes independientemente entre sí seleccionados entre alquilo C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, alquil C_{1-6} carbonilo, -N-alquil C_{1-6} amida, alcoxi C_{1-6}, dialquilamino-alquilo C_{1-6}, amida, hidroxi, carboxi, amino, halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio y ciano. Cuando los grupos en cuestión están sustituidos con más de un sustituyente los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Las expresiones "aminoácido", "resto aminoacídico", "aminoácido natural" y "resto aminoacídico natural" como se usa en este documento se refieren todos a los isómeros D o L de los 20 restos aminoacídicos convencionales: alanina (Ala), arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), cisteína (Cys), glutamina (Gin), ácido glutámico (Glu), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), metionina (Met), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), triptófano (Trp), tirosina (Tyr) y valina (Val).
Las expresiones "aminoácido no natural" y "resto aminoacídico no natural" como se usa en este documento se refiere a restos aminoacídicos no convencionales, o modificados, o no naturales. Los ejemplos de restos aminoacídicos no convencionales son 4-hidroxiprolina, 6-N-metil lisina, ácido 2-aminoisobutírico, isovalina, y alfa-metil serina. Los ejemplos de restos aminoacídicos no naturales son ácido pipecólico, ácido tiazolidina carboxílico, deshidroprolina, 3- y 4-metilprolina, y 3,3-dimetilprolina.
Ciertos de los términos definidos anteriormente pueden aparecer más de una vez en las fórmulas estructurales, y tras dicha aparición cada término se definirá independientemente del otro.
Como se usa en este documento, la expresión "un grupo funcional que puede convertirse en hidrógeno in vivo" pretende incluir cualquier grupo, que tras administrar los presentes compuestos a los sujetos en necesidad de los mismos puede convertirse en hidrógeno enzimáticamente o mediante el entorno ácido del estómago. Los ejemplos no limitantes de dichos grupos son acilo, carbamoílo, carbamoílo monoalquilado, carbamoílo dialquilado, alcoxicarbonilo incluyendo alcoxi C_{1-6}carbonilo, grupos alcoxialquilo incluyendo alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6} y similares tales como alquil C_{1-6} carbonilo, aroílo, alquil C_{1-6} carbamoílo (N-alquil C_{1-6} amida) y di-alquil C_{1-6}-alquilcarbamoílo.
Como se usa en este documento, la expresión "enfermedades y trastornos relacionados con dipeptidil peptidasa I" pretende incluir cualquier enfermedad o trastorno en la que un efecto, preferiblemente un efecto inhibidor, sobre la enzima dipeptidil peptidasa I es beneficioso.
El término "CI_{50}" como se usa en este documento se refiere a la concentración requerida para el 50% de inhibición de DPP-I en un ensayo de unión descrito en este documento (ensayo de DPP-I).
Las abreviaturas y símbolos usados habitualmente en el péptido y en la técnica química se usan en este documento para describir los compuestos de la presente invención. En general, las abreviaturas de los aminoácidos siguen la nomenclatura de la Joint Comision on Biochemical Nomenclature de IUPAC-IUB como se describe en Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984).
Ciertos grupos radicales se abrevian en este documento. t-Bu se refiere al radical butilo terciario, Boc se refiere al radical t-butiloxicarbonilo, Fmoc se refiere al radical fluorenilmetoxicarbonilo, Ph se refiere al radical fenilo, Cbz se refiere al radical benciloxicarbonilo.
Los compuestos
La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I)
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o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que
R_{1} y R_{2} independientemente entre sí son hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{6-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido pero que no es bencilo cuando R_{8} son fenilo, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, o R_{1} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{3} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, o R_{3} y R_{1} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, o R_{3} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{4} y R_{5} independientemente entre sí son hidrógeno o alquilo C_{1-6};
R_{8} es alquilo C_{1-6}, -CH(R_{7})CONH(R_{8}), alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{6-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6}-heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido;
R_{7} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido o una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural;
R_{8} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural o un grupo -CH(R_{7})CONH(R_{9});
R_{9} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido; en el que un grupo sustituido está sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, alquil C_{1-6} carbonilo, N-alquil C_{1-6} amida, alcoxi C_{1-6}, dialquilamino-alquilo C_{1-6}, amida, hidroxi, carboxi, amino, halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio y ciano, con la condición de que cualquiera del compuesto no sea Ile-Gly^{a}-Leu-Met-NH_{2} ni Tyr-AzAla-Gly-Phe-Leu, en la que en Gly^{a} es un \alpha-axa-aminoácido; o con la condición de que para usar en medicina, el compuesto no es Ile-Gly^{a}-Leu-Met-NH_{2}, en la que en Gly^{a} es un \alpha-axa-aminoácido; o con la condición de que para usar en la preparación de un medicamento, el compuesto puede ser Ile-Gly^{a}-Leu-Met-NH_{2} o Tyr-AzAla-Gly-Phe-Leu, en la que en Gly^{a} es un \alpha-axa-aminoácido.
R_{1} y R_{2} pueden ser, independientemente entre sí, hidrógeno, alquilo C_{1-6}, un grupo fenilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido; o R_{1} y R_{2} pueden ser, independientemente entre sí, metilo, etilo, propilo, butilo, iso-butilo, bencilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo o (4-piridil)metilo.
En una realización específica R_{1} es alquilo C_{1-6} y R_{2} es H.
En otras realizaciones, R_{1} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido tal como un grupo ciclohexilo no sustituido o sustituido.
R_{3} puede ser hidrógeno o metilo.
R_{1} y R_{3} pueden formar juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido.
También, R_{2} y R_{3} pueden formar juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido.
R_{4} y/o R_{5} pueden ser hidrógeno o metilo.
En una interesante realización, al menos uno de R_{3} y R_{4} y R_{5} es hidrógeno, y en particular todos los R_{3} y R_{4} y R_{5} son hidrógeno.
R_{6} puede ser -CH(R_{7})CONH(R_{8}), alquilo C_{1-6}, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido. De esta manera, R_{6} puede ser un grupo bencilo no sustituido o sustituido.
En otra realización R_{6} puede ser el grupo -CH(R_{7})CONH(R_{8}).
En particular R_{6} puede seleccionarse entre 2S-3-fenilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-ciclohexilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-butan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-2-feniletan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3, (benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida, 2-feniletilo, 2-(p-hidroxifenil)etilo, bencilo, o-clorobencilo, 2-furfurilo, 2-(3-indolil)etilo, 1-naftilmetilo, 4-piperonilo, p-clorobencilo, 2-(tiofen-2-il)etilo, m-fluorobencilo, o-fluorobencilo, p-fluorobencilo, o-trifluorometilbencilo, m-clorobencilo, o-metoxibencilo, o-metilbencilo, alfa-metilbencilo, o-(o-hidroximetilfeniltio)bencilo, o-bromobencilo, 2-cloro-6-fluorobencilo, o-etoxibencilo, [1,1'-bifenil-4-il]metilo, [1,1'-bifenil-2-il]metilo, p-[tiofen-2-il]bencilo, o-[N-morfolinil]bencilo, o-[N-piperidinil]bencilo y o-metiltiobencilo.
En una interesante realización R_{6} es un grupo [1,1'-bifenil-2-il]metilo no sustituido o sustituido o un grupo [1,1'-bifenil-4-il]metilo no sustituido o sustituido.
R_{7} puede ser hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido. De esta manera, R_{7} puede ser 2-feniletilo.
R_{8} puede ser hidrógeno, -CH(R_{7})CONH(R_{9}) o un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido.
De esta manera, cuando R_{8} es -CH(R_{7})CONH(R_{9}), R_{7} puede ser un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6}-heteroarilo no sustituido o sustituido. En una interesante realización R_{7} es (indol-3-il)metilo o (m-fluorofenil)metilo.
R_{9} puede ser hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido. En particular, R_{9} es hidrógeno.
Como se muestra en los ejemplos en este documento un compuesto representativo de la presente invención es un inhibidor selectivo de DPP-I, especialmente el compuesto del Ejemplo 11 se ha demostrado que inhibe selectivamente DPP-I, es decir, no inhibe Catepsina B, G, H, L, DPP-IV, elastasa neutrófila o triptasa.
Los compuestos preferidos de la invención son:
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(aminoacetil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-1-metil-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-ciclohexilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-3-naftil-2-propanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2S-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-butan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2S-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-2-feniletan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-amino-4-fenilbutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)-4-metilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(p-hidroxifenil)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-bencilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-furfuril)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(3-indolil)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-piperonilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(p-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(tiofen-2-il)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(m-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(p-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-trifluorometilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(m-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-metoxibencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-metilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(alfa-metilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminovaleril)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminohexanoil)-4-(o-crilorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminoisocaproil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-amino-3-fenil-propionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1,1-(2S-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1,1-(2R-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[o-(o-hidroximatriilfeniltriio)bencil]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-bromobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(2-cloro-6-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-etoxibencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-4-il]metil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-2-il]metil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(p-[tiofen-2-il]bencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-morfolinil]bencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-piperidinil]bencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-metiltiobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-1-metil-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-3-naftil-2-propanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2R-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-butan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2R-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-2-feniletan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-amino-4-fenilbutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-N-metilpentan-2-il-amida]-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)-4-metilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(p-hidroxifenil)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-bencilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-furfuril)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(3-indolil)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-piperonilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(p-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(tiofen-2-il)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(m-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(p-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-trifluorometilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(m-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-metoxibencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-metilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(alfa-metilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminovaleril)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminohexanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminoisocaproil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-amino-3-fenil-propionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[o-(o-hidroximetilfeniltio)bencil]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-bromobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(2-cloro-6-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-etoxibencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-4-il]metil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-2-il]metil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(p-[tiofen-2-il]bencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-morfolinil]bencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-piperidinil]bencil)semicarbazida; y
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-metiltiobencil)semicarbazida.
Los compuestos de la invención pueden existir en forma de isómeros geométricos o isómeros ópticos o estereoisómeros así como tautómeros. Por consiguiente, la invención incluye todos los isómeros geométricos y tautómeros incluyendo mezclas y mezclas racémicas de los mismos y una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, especialmente todos los isómeros R y S.
La presente invención incluye también sales farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos. Dichas sales incluyen sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, sales metálicas, sales de amonio y de amonio alquiladas farmacéuticamente aceptables. Las sales de adición de ácidos incluyen sales de ácidos inorgánicos así como de ácidos orgánicos. Los ejemplos representativos de ácidos inorgánicos adecuados incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico y similares. Los ejemplos representativos de ácidos orgánicos adecuados incluyen ácido fórmico, acético, tricloroacético, trifluoroacético, propiónico, benzoico, cinámico, cítrico, fumárico, glicólico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, oxálico, pícrico, pirúvico, salicílico, succínico, metanosulfónico, etanosulfónico, tartárico, ascórbico, pamoico, bismetileno salicílico, etanodisulfónico, glucónico, citracónico, aspártico, esteárico, palmítico, EDTA, glicólico, p-aminobenzoico, glutámico, bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y similares. Los ejemplos adicionales de sales de adición de ácidos inorgánicas u orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen las sales farmacéuticamente aceptables indicadas en J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2.
Los ejemplos de sales metálicas incluyen sales de litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Los ejemplos de sales de amonio y amonio alquilado incluyen sales de amonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio y similares.
Se pretenden también como sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables los hidratos que los presentes compuestos son capaces de formar.
Las sales de adición de ácidos pueden obtenerse como los productos directos de la síntesis del compuesto. Como alternativa, la base libre puede disolverse en un disolvente adecuado que contiene el ácido apropiado, y la sal aislada evaporando el disolvente o separando de otra manera la sal y el disolvente.
Los compuestos de la presente invención pueden formar solvatos con disolventes convencionales de bajo peso molecular usando procedimientos bien conocidos por las personas especialistas en la técnica. Dichos solvatos se contemplan también como dentro del alcance de la presente invención.
La invención incluye también profármacos de los presentes compuestos, que durante la administración experimentan conversión química por procedimientos metabólicos antes de convertirse en sustancias farmacológicas activas. En general, dichos profármacos serán derivados funcionales de los presentes compuestos, que pueden convertirse fácilmente in vivo en el compuesto requerido de Fórmula I. Los profármacos son cualquier compuesto unido covalentemente, que libere el fármaco precursor activo de acuerdo con la Fórmula I in vivo. Si un centro quiral u otra forma de un centro isomérico está presente en un compuesto de la presente invención, todas las formas de dicho isómero o isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros, pretenden incluirse en este documento. Los compuestos de la invención que contienen un centro quiral pueden usarse como una mezcla racémica, una mezcla enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica puede separarse usando técnicas bien conocidas y un enantiómero individual puede usarse en solitario. En los casos en los que los compuestos tienen dobles enlaces carbono-carbono insaturados, ambos isómeros cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En los casos en los que los compuestos pueden existir en formas tautomérica, tales como tautómeros ceto-enol, cada forma tautomérica se contempla como incluida dentro de esta invención existiendo en equilibrio o predominantemente en una forma. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de derivados de profármaco adecuados se describen, por ejemplo, en "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
La invención incluye también metabolitos activos de los presentes compuestos.
La presente invención incluye todos los complejos de los compuestos de esta invención.
El significado de cualquiera de los sustituyentes en cualquiera de sus apariciones en la Fórmula I o cualquier subfórmula de los mismos es independiente de su significado, o del significado de cualquier otro sustituyente, en cualquiera de sus apariciones, a menos que se especifique otra cosa.
En una realización preferida de esta invención, los compuestos de Fórmula I presentan un valor de CI_{50} de menos de 500 \muM, preferiblemente menos de 100 \muM, más preferiblemente menos de 50 \muM, aún más preferiblemente menos de 1 \muM, especialmente menos de 500 nM, particularmente menos de 100 nM, cuando se somete a un ensayo con dipeptidil dipeptidasa I humana tal como el ensayo descrito en este documento.
Procedimientos de preparación
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por los procedimientos indicados en los esquemas 1-3 a continuación.
A continuación, se da una lista de las abreviaturas usadas después de Materiales y Procedimientos.
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Esquema 1
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3 
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Reactivos y condiciones: a) Fmoc-AA-OPfp, DhbtOH, DMF; o Fmoc-AA-OH, TBTU, NEM, DMF; b) piperidina, DMF; c) Fmoc-NHNH-CO_{2}Pfp, DhbtOH, DMF; o Fmoc-N(R_{3})NH_{2}, CDI, DMF; d) FmocNHC(R_{1})R_{2}CO_{2}H o, BocNHC(R_{1}) R_{2}CO_{2}H TBTU, NEM, DMF; o, FmocNHC(R_{1})R_{2}CO_{2}Pfp, DhbtOH, DMF; e) 2% TIPS en
TFA.
El primer aminoácido protegido con Fmoc se carga en una resina derivatizada de Rink por procedimientos de acoplamiento peptídico convencionales (tal como usando ésteres de Pfp o el reactivo de acoplamiento TBTU), en un disolvente aprótico (tal como DMF). La semicarbazida (intermedio I) se forma por acilación con Fmoc-NHNH-CO_{2}Pfp o Fmoc-N(R_{3})NH-COlm en un disolvente aprótico (tal como DMF), con o sin el uso del aditivo DhbtOH. El resto N-terminal se introduce por acilación, tal como con un aminoácido activado con Fmoc o protegido con Boc, en DCM o DMF, con o sin la adición de base. Los productos deseados A se obtienen tras la escisión con una mezcla TFA/TIPS (el grupo Fmoc, si lo hubiera, se retira antes de la escisión).
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Esquema 2
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Reactivos y condiciones: a) CDI, THF; b) NH_{2}NH_{2}, THF; c) R_{5}R_{6}NH, THF; d) TFA.
Las semicarbazidas de fórmula B se preparan sin usar un soporte sólido. Un aminoácido protegido con Boc se convierte en su hidrazida por activación con CDI, seguido de reacción con hidrazina hidrato. La hidrazida de aminoácido II se hace reaccionar después con CDI de nuevo, y el desplazamiento con un conjunto de aminas diferentes, seguido de desprotección con Boc da los productos brutos, que se purifican por HPLC.
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Esquema 3
5
Reactivos y condiciones: a) CDI, THF; después BocNHNH_{2}; b) Mel; c) NaH, DMF, DCM; d) TFA, DCM; o HCl en dioxano; e) CDI, THF; después R_{5}R_{6}NH; f) TFA, TMSBr, PhSMe; o HBr en ácido acético.
Las semicarbazidas de fórmula C se preparan partiendo de la 3-benciloxicarbonilamino-1-terc-butoxicarbonilaminopirrolidin-2-ona III, que se prepara de forma análoga a los procedimientos generales descritos por Freidinger et al. (J. Org. Chem., 1982, 47,104-109) y Duffy et al. (Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9,1907-1910). El grupo Boc se retira preferiblemente con HCl en dioxano. La formación del enlace de semicarbazida (intermedio IV) se consigue por reacción con CDI en THF seguido de desplazamiento con la amina apropiada. El grupo Cbz se retira mediante TMSBr en TFA usando tioanisol como eliminador, o mediante HBr en ácido acético. Los productos deseados se obtienen después de la purificación por HPLC.
Los materiales de partida usados en este documento son aminoácidos disponibles en el mercado o se preparan por procedimientos rutinarios bien conocidos por los especialistas en la técnica y pueden encontrarse en los libros de referencia convencionales, tales como el COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Vol. I-VI (publicado por Wiley-lnterscience).
Los procedimientos de acoplamiento para formar enlaces de amida en este documento generalmente se conocen bien en la técnica. Los procedimientos de síntesis de péptido indicado de forma general por Bodansky et al., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984; E. Gross y J. Meienhofer, THE PEPTIDES, Vol. 1, 1-284 (1979); y J. M. Stewart y J. D. Young, SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, 2ª Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984, generalmente son ilustrativos de la técnica.
Los procedimientos sintéticos para preparar los compuestos de esta invención emplean frecuentemente grupos protectores para enmascarar una funcionalidad reactiva o minimizar reacciones secundarias no deseadas. Dichos grupos protectores se describen de forma general en Green, T. W. PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, John Wiley & Sons, Nueva York (1981). La expresión "grupos aminoprotectores" generalmente se refiere a los grupos Boc, acetilo, benzoílo, Fmoc y Cbz y derivados de los mismos como se conocen en la técnica. Los procedimientos para protección y desprotección, y sustitución de un grupo amino protector con otro resto se conocen bien.
Las sales de adición de ácidos de los compuestos de Fórmula I se preparan de una manera convencional en un disolvente adecuado a partir del compuesto precursor y un exceso de un ácido, tal como ácido clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, maleico, succínico o metanosulfónico. Ciertos de los compuestos forman sales internas o zwitteriones que pueden ser aceptables. Las sales catiónicas se preparan tratando el compuesto precursor con un exceso de un reactivo alcalino, tal como un hidróxido, carbonato o alcóxido, que contiene el catión apropiado; o con una amina orgánica apropiada. Los cationes tales como Li^{+}, Na^{+}, K^{+}, Ca^{++}, Mg^{++} y NH_{4}^{+} son ejemplos específicos de los cationes presentes en las sales farmacéuticamente aceptables. Haluros, sulfato, fosfato, alcanoatos (tal como acetato y trifluoroacetato), benzoatos, y sulfonatos (tal como mesilato) son ejemplos de aniones presentes en las sales farmacéuticamente aceptables.
Composiciones farmacéuticas
En un aspecto de esta invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende, como ingrediente activo, un compuesto de la presente invención junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Esta composición puede estar en forma de una dosificación unitaria y puede comprender de aproximadamente 0,1 \mug a aproximadamente 1000 mg tal como, por ejemplo, de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 5 \mug a aproximadamente 250 mg, de aproximadamente 50 \mug a aproximadamente 100 mg o de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg, del compuesto de la invención o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo. La composición de la invención puede usarse para administración oral, nasal, transdérmica, pulmonar o parenteral. Se contempla que la composición farmacéutica de la invención es útil para el tratamiento de inflamación, diabetes de tipo 2, asma, gripe severa, infección respiratoria por virus sincitial, inhibición de células CD8 T, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis reumatoide, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer, sepsis y/o por aplicación en apoptosis de célula diana.
Los compuestos de la invención pueden administrarse solos o junto con vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables, en dosis únicas o múltiples. Por consiguiente, los compuestos de Fórmula I pueden usarse en la fabricación de un medicamento. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden formularse con vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables así como cualquier otro adyuvante y excipiente de acuerdo con técnicas convencionales tales como las descritas en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1995.
Las composiciones farmacéuticas pueden formularse específicamente para administración por cualquier vía adecuada tal como la vía oral, rectal, nasal, pulmonar, tópica (incluyendo bucal y sublingual), transdérmica, intracisternal, intraperitoneal, vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intratecal, intravenosa y intradérmica), prefiriéndose la vía oral. Se entenderá que la vía preferida dependerá del estado general y edad del sujeto a tratar, la naturaleza de la afección a tratar y del ingrediente activo elegido.
Las composiciones farmacéuticas para administración oral incluyen formas de dosificación sólidas tales como cápsulas, comprimidos, grageas, píldoras, pastillas, polvos y gránulos. Cuando sea apropiado, pueden prepararse con recubrimientos tales como recubrimientos entéricos o pueden formularse para proporcionar la liberación controlada del ingrediente activo tal como liberación sostenida o prolongada de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen soluciones, emulsiones, suspensiones, jarabes y elixires.
Las composiciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas, dispersiones, suspensiones o emulsiones así como polvos estériles para reconstituir en soluciones o dispersiones inyectables estériles antes de su uso. Las formulaciones inyectables de depósito se contemplan también como dentro del alcance de la presente invención.
Otras formas de administración adecuadas incluyen supositorios, sprays, pomadas, cremas, geles, inhaladores, parches dérmicos, implantes, etc.
Una dosificación oral típica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día, y más preferiblemente de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día administrados en una o más dosificaciones tal como de 1 a 3 dosificaciones. La dosificación exacta dependerá de la frecuencia y modo de administración, el sexo, edad, peso y estado general del sujeto tratado, la naturaleza y gravedad de la afección tratada y cualquier enfermedad concomitante a tratar y otros factores evidentes para los especialistas en la técnica. Una persona especialista en la técnica sabe cómo ajustar la dosificación para obtener el efecto
deseado.
Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria por métodos conocidos por los especialistas en la técnica. Una forma de dosificación unitaria típica para administración oral una o más veces al día tal como de 1 a 3 veces al día puede contener de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 1000 mg tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 1000 mg, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 mg, y más preferiblemente de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 200 mg.
Para las vías parenterales, tal como administración intravenosa, intratecal, intramuscular y similares, las dosis típicamente son del orden de aproximadamente la mitad de la dosis empleada para administración oral.
Los compuestos de esta invención se utilizan generalmente como la sustancia libre o como una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Un ejemplo es una sal de adición de ácidos de un compuesto que tiene la utilidad de una base libre. Cuando un compuesto de Fórmula (I) contiene una base libre dichas sales se preparan de manera convencional tratando una solución o suspensión de una base libre de Fórmula (I) con un equivalente químico de un ácido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, ácidos orgánicos o inorgánicos. Los ejemplos representativos se han mencionado anteriormente. Las sales fisiológicamente aceptables de un compuesto con un grupo hidroxi incluyen el anión de dicho compuesto junto con un catión adecuado tal como el ión sodio o amonio.
Para administración parenteral, pueden emplearse soluciones de los nuevos compuestos de Fórmula (I) en solución acuosa estéril, propilenglicol acuoso o aceite de sésamo o cacahuete. Dichas soluciones acuosas deben tamponarse adecuadamente si fuera necesario y el diluyente líquido primero se hace isotónico con suficiente solución salina o glucosa. Las soluciones acuosas son particularmente adecuadas para administración intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Los medios acuosos estériles empleados son todos fácilmente disponibles por técnicas convencionales conocidas por los especialistas en la técnica.
Los vehículos farmacéuticos adecuados incluyen diluyentes sólidos inertes o cargas, solución acuosa estéril y diversos disolventes orgánicos. Los ejemplos de vehículos sólidos son lactosa, terra alba, sacarosa, ciclodextrina, talco, gelatina, goma de agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio, ácido esteárico o éteres de alquilo inferior de celulosa. Los ejemplos de vehículos líquidos son jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, fosfolípidos, ácidos grasos, aminas de ácido graso, polioxietileno o agua. Análogamente, el vehículo o diluyente pueden incluir cualquier material de liberación sostenida conocido en la técnica, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o mezclado con una cera. Las composiciones farmacéuticas formadas combinando los nuevos compuestos de Fórmula (I) y los vehículos farmacéuticamente aceptables se administran después fácilmente en diversas formas de dosificación adecuadas para las vías de administración descritas. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria por procedimientos conocidos en la técnica farmacéutica.
Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden presentarse en forma de unidades discretas tales como cápsulas o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo, y que pueden incluir un excipiente adecuado. Estas formulaciones pueden estar en forma de polvo o gránulos, como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o en forma de una emulsión líquida de aceite-en-agua o agua-en-aceite.
Si se usa un vehículo sólido para administración oral, la preparación puede dividirse en comprimidos; ponerse en una cápsula de gelatina dura en polvo o en forma de gránulos o puede estar en forma de un trocisco o pastilla. La cantidad de vehículo sólido variará ampliamente aunque normalmente será de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g. Si se usa un vehículo líquido, la preparación puede estar en forma de un jarabe, emulsión, cápsula de gelatina blanda o líquido inyectable estéril tal como una suspensión o solución líquida acuosa o no acuosa.
Un comprimido típico, que puede prepararse por técnicas convencionales de preparación de comprimidos, puede contener:
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Si se desea, la composición farmacéutica de la invención puede comprender el compuesto de Fórmula (I) junto con otras sustancias farmacológicamente activas tales como aquellas descritas en lo anterior.
Uso de la invención
Los compuestos de Fórmula I son útiles como inhibidores de proteasa, particularmente como inhibidores de cisteína y serina proteasas, más particularmente como inhibidores de cisteína proteasas, aún más particularmente como inhibidores de cisteína proteasas de la superfamilia de la papaína, todavía más particularmente como inhibidores de DPP-I e inhibidores selectivos de DPP-I. La presente invención proporciona composiciones útiles y formulaciones de dichos compuestos, incluyendo composiciones farmacéuticas y formulaciones de dichos compuestos.
Los compuestos de la presente invención pueden ser especialmente útiles para el tratamiento o prevención de enfermedades tales como inflamación, diabetes de tipo 2 y enfermedades similares que implican una proteasa. Los presentes compuestos son especialmente útiles para tratar enfermedades en las que están implicadas las cisteína proteasas y especialmente enfermedades en las que está implicada la dipeptidil peptidasa-l; más particularmente enfermedades inflamatorias mediadas por mastocitos. Los ejemplos de enfermedades en los que está empleada la dipeptidil peptidasa-l son: inflamación, diabetes de tipo 2, asma, gripe severa, infección respiratoria por virus sincitial, inhibición de células CD8 T, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis reumatoide, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer, sepsis así como en la apoptosis de célula
diana.
Se contempla que una cantidad eficaz de un compuesto o una composición de esta invención corresponde a una cantidad de ingrediente activo, es decir, compuesto activo o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo, en el intervalo de por ejemplo de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 100 mg por día, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg por día.
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de esta invención para la preparación de un medicamento, preferiblemente un medicamento para el tratamiento de inflamación, diabetes de tipo 2, asma, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer, sepsis o por aplicación en apoptosis de célula diana.
Para terapia aguda, se prefiere la administración parenteral de un compuesto de Fórmula I. Una infusión intravenosa del compuesto en dextrosa al 5% en agua o solución salina normal, o una formulación similar con los excipientes adecuados, es más eficaz, aunque una inyección ósea intramuscular también es útil. Típicamente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg; preferiblemente entre 0,1 y 20 mg/kg, de manera que se mantiene la concentración de fármaco en el plasma a una concentración eficaz para inhibir dipeptidil dipeptidasa I (catepsina C). Los compuestos pueden administrarse de una a cuatro veces al día a un nivel para conseguir una dosis diaria total de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 400 mg/kg/día. La cantidad precisa de un compuesto de la invención que sea terapéuticamente eficaz, y la vía por la que dicho compuesto se administra mejor, la determinará fácilmente un especialista habitual en la técnica comparando el nivel en sangre del agente respecto a la concentración requerida para tener un efecto terapéutico.
Los compuestos de esta invención pueden administrarse también por vía oral al paciente, de una manera tal que la concentración de fármaco es suficiente para inhibir la resorción ósea o para conseguir cualquier otra indicación terapéutica como se describe en este documento. Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra a una dosis oral de entre aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/kg de una manera consistente con el estado del paciente. Preferiblemente, la dosis oral sería de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 mg/kg.
No se esperan efectos toxicológicos inaceptables cuando los compuestos de la presente invención se administran de acuerdo con la presente invención.
Los compuestos de la presente invención inhiben total o parcialmente dipeptidil peptidasa I y, de esta manera, son útiles para el tratamiento y/o prevención de una gran diversidad de afecciones y trastornos en los que la inhibición de DPP-I es beneficiosa. Es de un interés específico que un efecto inhibidor selectivo pueda obtenerse usando los compuestos de la invención, es decir, los efectos secundarios respecto a la inhibición de otras proteasas pueden reducirse notablemente o eliminarse.
Por consiguiente, en otro aspecto la presente invención se refiere a un compuesto de Fórmula general (I) o cualquier isómero óptico o geométrico o forma tautomérica del mismo incluyendo mezclas de los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usar como composición farmacéutica.
La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que comprenden, como ingrediente activo, al menos un compuesto de Fórmula (I) o cualquier isómero óptico o geométrico o forma tautomérica del mismo incluyendo mezclas de los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Adicionalmente, la invención se refiere también al uso de los compuestos y composiciones de la presente invención para modular los niveles de DPPI en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) en necesidad del mismo en una cantidad eficaz para modular los niveles de DPPI. En una realización preferida, el compuesto o composición inhibe DPPI.
En los siguientes ejemplos sintéticos, todos los materiales de partida se obtuvieron de fuentes comerciales a menos que se indique otra cosa. Sin mayor elaboración, se cree que un especialista en la técnica, usando la descripción anterior, puede utilizar la presente invención en toda su extensión. Estos ejemplos se dan para ilustrar la invención, no para limitar su alcance.
Ejemplos Materiales y Procedimientos
La temperatura está en grados centígrados (ºC). Los experimentos se realizaron a temperatura ambiente (20ºC), a menos que se indique otra cosa. Todos los disolventes eran de calidad para HPLC. Los disolventes anhidros se obtuvieron almacenando sobre tamices moleculares activados de 4 \ring{A}. A menos que se indique otra cosa, los materiales de partida se adquirieron de suministradores comerciales y se usaron sin purificación adicional.
Las reacciones en fase sólida ejecutadas a temperatura ambiente se realizaron en jeringuillas de polietileno de fondo plano equipadas con filtros de Teflón sinterizados (poros de 70 \mum), tubos de Teflón, válvulas de Teflón para control de flujo, y succión para drenar las jeringuillas desde abajo, o en una parrilla de síntesis en paralelo VacMaster. La desprotección con Fmoc se realizó con piperidina al 20% (v/v) en DMF (2+10 min.). Los acoplamientos a TBTU se realizaron disolviendo el ácido (3 equiv.) en DMF con NEM (4 equiv.), seguido de la adición de TBTU (2,88 equiv.). La solución resultante se preactivó durante 10 min. antes de su uso. Los ésteres de Pfp (3 equiv.) se acoplaron con el DhbtOH (1 equiv.) presente. La desaparición del brillante color amarillo indicaba el encapsulado completo de los grupos amino unidos a resina. Las reacciones en fase sólida se ejecutaron generalmente en una cantidad de disolvente que era suficiente para cubrir la resina. Las cargas de resina se determinaron por escisión con Fmoc y medidas de densidad óptica a 290 nm, usando una curva de calibrado.
Los datos de RMN se adquirieron en un Bruker Advance DRX250, CDCl_{3} es deuteriocloroformo, DMSO-d_{6} es hexadeuteriodimetilsulfóxido, D_{2}O es óxido de deuterio, y CD_{3}OD es tetradeuteriometanol. Las abreviaturas para los datos de RMN son las siguientes: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, m = multiplete, dd = doblete de dobletes, dt =doblete de tripletes, td = triplete de dobletes, ap = aparente, a = ancho. Los desplazamientos químicos se indican en ppm, respecto a picos internos de disolvente (2,49 para DMSO-d_{6}, 7,25 para CDCl_{3}, 4,75 para D_{2}O, 3,35 para CD_{3}OD). Las constantes de acoplamiento J se indican en Hz. Los espectros EN-EM se obtuvieron en un instrumento Micromass Quattro micro^{TM} en el modo positivo a menos que se indique otra cosa.
La HPLC analítica se realizó en un sistema Gilson (detector UV/VIS-155 a 215 y 254 nm, jeringuilla de bombeo 402, módulo de inyección 819, acoplamiento de válvula 35, desgasificador 864, módulo de cambio de columna en línea 233 XL, y una columna Zorbax 300 SB RP-18, de 4,6 x 50 mm con una bomba 322). Eluyentes A (TFA al 0,1% en agua) y B (TFA al 1% en acetonitrilo) se usaron en un gradiente lineal (0% B \rightarrow 100% B en 7 min.). La pureza (dada entre paréntesis) es a 215 nm.
La HPLC preparativa se realizó en el mismo sistema Gilson, usando una columna Zorbax 300 SB RP-18, de 21,2 mm x 25 cm, con un flujo de 15 ml/min.
Abreviaturas
AA
Aminoácido
AFC
7-Amino-trifluorometil cumarina
CDI
1,1'-Carbonildiimidazol
DCM
Diclorometano
DE
Éter dietílico
DhbtOH
3,4-Dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina
DIC
N,N'-Diisopropilcarbodiimida
DIPEA
N,N-Diisopropiletilamina
DMAP
4-Dimetilaminopiridina
DMF
N,N-Dimetilformamida
DMSO
Dimetil sulfóxido
EA
Acetato de etilo
EDTA
Ácido etilendiaminatetraacético
Fmoc
9-Fluorenilmetoxicarbonilo
Im
1-lmidazolilo
NEM
N-Etilmorfolina
PE
Éter de petróleo (pe. 60-80º)
PEGA
Copolímero poli(etilenglicol)-poli(acrilamida)
Pfp
Pentafluorofenilo
Enlazador de amida de Rink
Ácido p-[(R,S)-\alpha-[1-(9H-fluoren-9-il)-metoxiformamido]-2,4-dimetoxibencil]-fenoxiacético
TBTU
N-óxido de tetrafluoroborato de N-[(1H-benzotriazol-1-il)-(dimetilamino)-metileno]-N-metilmetanaminio
TFA
Ácido trifluoroacético
THF
Tetrahidrofurano
TIPS
Triisopropilsilano
TMSBr
Bromuro de trimetilsililo
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Nomenclatura
La clase de compuesto descrita a continuación puede observarse como azapéptidos y como derivados de semicarbazida. Para nombrar los compuestos en los ejemplos a continuación el término semicarbazida se ha usado como grupo precursor, en lugar del término azapéptido.
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Ejemplo 1
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida 
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a) Preparación de Fmoc-NHNH_{2}: Fmoc-Cl (10 g, 38,7 mmol) disuelto en éter dietílico (180 ml) se añadió gota a gota a una solución de hidrazina hidrato (3,8 ml, 77 mmol) en éter dietílico (100 ml) enfriado en un baño de hielo. Se formó rápidamente una precipitación blanca. Cuando se hubo añadido todo el Fmoc-Cl la suspensión blanca resultante se calentó a ta. y se agitó durante 30 min. El sólido blanco se aisló por filtración, se lavó con éter dietílico (x 3) y agua (x 3) y se secó al vacío dando el producto deseado. Rendimiento: 8 g (81%); R_{f} = 0,2 (PE:EA 1:1 + unas cuantas gotas de ácido acético); HPLC: R_{t} = 4,16 min. (>99%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 250 MHz) \delta 8,34 (a, 1 H), 7,90-7,88 (d, J = 7,3, 2 H), 7,71-7,68 (d, J = 7,3, 2 H), 7,45-7,29 (m, 4 H), 4,30-4,18 (m, 3 H), 4,08 (a, 2 H); ^{13}C (DMSO-d_{6}, 250 MHz) \delta 158,2, 143,8, 140,7, 127,6, 127,0, 125,2, 120,0, 65,6, 46,7; EN-EM: masa calculada para C_{15}H_{15}N_{2}O_{2} 255,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 255,1.
b) Preparación de Fmoc-NHNH-CO_{2}Pfp: Fmoc-NHNH_{2} (750 mg, 2,95 mmol) y bis(pentafluorofenil)carbonato (1221 mg, 3,1 mmol) se agitaron en THF seco (15 ml) a ta durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EA (x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con HCl 1 M \mu1) y salmuera \mu1), se secaron (MgSO_{4}) y concentraron dando un aceite transparente, que solidificó al vacío. Sólido blanquecino. Rendimiento: 1,32 g (96%). R_{f} = 0,4 (PE:EA 3:1). Este compuesto se usó en bruto, ya que era parcialmente inestable a purificación tanto por recristalización como por cromatografía en sílice.
c) Esquema 1: la resina PEGA_{800} derivatizada con el enlazador de amida de Rink (L = 0,3 mmol/g, 405 mg, 109 \mumol) se desprotegió con Fmoc, y después se calentó con DMF \mu5). Fmoc-Fe-OPfp (182 mg, 328 \mumol) y DhbtOH (18 mg, 109 \mumol) se disolvieron en DMF (3 ml) y se añadieron a la resina. Después de la desaparición del color amarillo la resina se lavó con DMF \mu5). Después de la desprotección con Fmoc (como en el caso anterior) y de lavar con DMF \mu5) la amina unida a resina se aciló con Fmoc-NHNH-CO_{2}Pfp (170 mg, 366 \mumol) en presencia de DhbtOH (18 mg, 109 \mumol) en DMF (3 ml) durante 18 h. La resina se lavó con DMF \mu5), se desprotegió con Fmoc y se lavó de nuevo con DMF \mu5). Fmoc-Ala-OPfp (174 mg, 328 \mumol) y DhbtOH (18 mg, 109 \mumol) se disolvieron en DMF (3 ml) y añadieron a la resina. Después de la desaparición del color amarillo la resina se lavó con DMF \mu5), después se desprotegió con Fmoc y finalmente se lavó con DMF \mu5) y DCM (x 3). La escisión se consiguió mediante un tratamiento de 1 h con TIPS al 2% en TFA (se añadieron gotas de DCM para obtener una solución homogénea). La resina se lavó varias veces \mu6) con solución de TFA y los lavados combinados se concentraron dando un aceite transparente. El producto bruto se purificó por HPLC preparativa. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 24,5 mg (69%); HPLC: R_{t} = 2,77 min. (>98%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta 7,13-6,99 (m, 5 H), 4,19-4,13 (dd, J = 6,1, 8,3, 1 H), 3,87-3,79 (c, J = 7,1, 1 H), 2,90-2,82 (dd, J = 6,1, 14,0, 1 H), 2,75-2,66 (dd, J = 8,4,14,0, 1 H), 1,26-1,23 (d, J = 7,1, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{13}H_{20}N_{5}O_{3} 294,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 294,2.
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Ejemplo 2
1-(Aminoacetil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida 
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8
Esquema 1: partiendo de 200 mg de resina (0,06 mmol), siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 1c, excepto que se sustituye Fmoc-Ala-OPfp por Fmoc-Gly-OPfp. La formación del enlace de semicarbazida se consiguió por acilación con Fmoc-NHN-HCOIm. Esto se preparó justo antes de su uso por reacción de FmocNHNH_{2} (0,18 mmol) y CDI (0,18 mmol) en DMF seca (1 ml) durante 1 h. La solución resultante se añadió después directamente a la resina. Tiempo de reacción 16 h. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 3,1 mg (19%); HPLC: R_{t} = 2,42 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{18}N_{5}O_{3} 280,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 280,1
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Ejemplo 3
1-(2S-2-Aminopropionil)-1-metil-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida 
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9
Partiendo de 315 mg de resina (0,095 mmol), siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 2, excepto sustituyendo FmocNHNH_{2} por FmocN(Me)NH_{2} (preparado de acuerdo con el procedimiento de J. Org. Chem., 1999, 64, 7388-7394). Preactivación con CDI realizada durante 3 h en lugar de solo 1 h. Sólido blanco. Rendimiento: 13,3 mg (46%); HPLC: R_{t} = 2,71 min. (>99%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 250 MHz) \delta 8,64 (s, 1 H), 8,10 (a, 2 H), 7,59 (s, 1 H), 7,31-7,14 (m, 6 H), 6,88 (a, 1 H), 4,43-4,35 (m, 1 H), 3,50 (1 H, oculto bajo la señal del agua), 3,09-3,05 (m, 1 H), 2,90 (s, 3 H), 2,84-2,74 (m, 1 H), 1,30-1,18 (a, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{14}H_{22}N_{5}O_{3} 308,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 308,0.
Los Ejemplos 4-26 se prepararon todos usando la resina TentaGelS-NH_{2} (L=0,41 mmol/g, 150 mg, 0,062 mmol) derivatizada con el enlazador de Rink. El acoplamiento de derivados aminoacídicos individuales se realizó usando TBTU o química de Pfp-éster, como se describe en el Ejemplo 1 y en Materiales y Procedimientos. El enlace de semicarbazida se formó usando Fmoc-NHNH-COlm, como se describe en el Ejemplo 2. El lavado, escisión y purificación por HPLC se realizaron como se indica en el Ejemplo 1c.
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Ejemplo 4
1-(1-Aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-ciclohexilpropan-2-il-amida]semicarbazida
10
Sólido blanco. Rendimiento: 19,9 mg (62%); HPLC: R_{t} = 4,10 min. (>99%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/D_{2}O 10:1, 250 MHz) \delta 7,32-7,23 (m, 1 H), 7,05-6,94 (m, 3 H), 4,46-4,37 (m, 1 H), 4,07-4,01 (m, 1 H), 3,06-2,98 (dd, J = 5,0, 13,8, 1 H), 2,86-2,77 (dd, J = 9,2, 13,8, 1 H), 2,05-1,96 (m, 2 H), 1,74-1,15 (m, 19 H), 1,07-0,74 (m, 2 H); EN-EM: masa calculada para C_{26}H_{40}FN_{6}O_{4} 519,3 (MH^{+}). Encontrado m/z 519,1.
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Ejemplo 5
1-(1-Aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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11 
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Sólido blanco. Rendimiento: 16,9 mg (52%); HPLC: R_{t} = 4,21 min. (>99%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/D_{2}O 10:1, 250 MHz) \delta 7,33-6,95 (m, 9 H), 4,50-4,44 (m, 1 H), 4,13-4,07 (m, 1 H), 3,09-3,02 (dd, J = 5,0, 13,8, 1 H), 2,88-2,79 (dd, J = 9,7, 13,8, 1 H), 2,53-2,44 (2 H, parcialmente bajo la señal de DMSO), 2,07-1,99 (m, 2 H), 1,87-1,14 (m, 10 H); EN-EM: masa calculada para C_{27}H_{36}FN_{6}O_{4} 527,3 (MH^{+}). Encontrado m/z 527,0.
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Ejemplo 6
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida 
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12 
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Sólido blanco. Rendimiento: 13,3 mg (44%); HPLC: R_{t} = 3,64 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta 7,66-7,63 (d, J = 7,6, 1 H), 7,52-7,49 (d, J = 8,0, 1 H), 7,34-7,13 (m, 6 H), 7,01-6,97 (m, 2 H), 4,61-4,56 (m, 1 H), 4,35-4,29 (t, J = 7,4, 1 H), 4,02-3,96 (t, J = 6,6, 1 H), 3,36-3,28 (dd, J = 5,9, 14,7, 1 H), 3,19-3,10 (dd, J = 8,4, 14,7, 1 H), 2,88-2,77 (m, 2 H), 1,99-1,87 (m, 2 H), 1,04-0,98 (t, J = 7,6, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{25}H_{32}N_{7}O_{4} 494,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 494,0.
\newpage
Ejemplo 7
1-(2S-2-Aminopropanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida
13
Sólido blanco. Rendimiento: 13,1 mg (44%); HPLC: R_{t} = 3,56 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta 7,69-7,66 (d, J = 7,6, 1 H), 7,42-7,39 (d, J = 7,9, 1 H), 7,31-7,02 (m, 8 H), 4,56-4,41 (m, 2 H), 3,91-3,75 (1H, parcialmente bajo la señal del agua), 3,24-3,16 (dd, J = 5,3, 14,6, 1 H), 3,09-2,99 (m, 2 H), 2,86-2,77 (dd, J = 8,1, 13,8, 1 H), 1,44-1,41 (d, J =7,0, 3H; señal isomérica minoritaria observada); EN-EM: masa calculada para C_{24}H_{30}N_{7}O_{4} 480,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 480,1.
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Ejemplo 8
1-(2S-3-Naftil-2-propanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]3-metilbutan-2-il-amida]semicarbazida
14
Sólido blanco. Rendimiento: 20,5 mg (62%); HPLC: R_{t} = 4,11 min. (>95%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/D_{2}O 10:1, 250 MHz) \delta 7,92-7,81 (m, 4 H), 7,34-7,31 (d, J = 7,9, 1 H), 7,55-7,43 (m, 3 H), 7,34-7,25 (m, 1 H), 7,10-6,95 (m, 3 H), 4,50-4,45 (m, 1 H), 4,13-4,08 (m, 1 H), 4,03-4,01 (d, J = 6,0, 1 H), 3,36-3,28 (dd, J = 5,7, 14,4, 1 H), 3,21-3,13 (dd, J = 7,5, 14,4, 1 H), 3,06-2,95 (dd, J = 5,3, 13,8, 1 H), 2,88-2,79 (dd, J = 9,4, 13,8, 1 H), 1,99-1,86 (m, 1 H), 0,80-0,71 (dd, J = 6,6, 6 H); EN-EM: masa calculada para C_{28}H_{34}FN_{6}O_{4} 537,3 (MH^{+}). Encontrado m/z 537,0.
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Ejemplo 9
1-[2S-2-Amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-butan-2-il-amida]semicarbazida
15
Sólido blanco. Rendimiento: 13,8 mg (45%); HPLC: R_{t} = 2,91 min. (>99%); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/D_{2}O 10:1, 250 MHz) \delta 8,79-8,76 (d, J = 6,6, 2 H), 7,87-7,84 (d, J = 6,6, 2 H), 7,62-7,59 (d, J = 7,5, 1 H), 7,34-7,31 (d, J = 6,9, 1 H), 7,13-6,95 (m, 3 H), 4,51-4,45 (m, 1 H), 4,20-4,14 (m, 1 H), 4,09-4,04 (dd, J = 5,3, 7,5, 1 H), 3,41-3,20 (m, 2 H), 3,17-3,09 (dd, J = 5,3, 14,8, 1 H), 3,01-2,92 (dd, J = 8,2, 14,8, 1 H), 1,70-1,40 (m, 2 H), 0,81-0,75 (t, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{24}H_{30}N_{8}O_{4} 495,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 495,0.
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Ejemplo 10
1-[2S-2-Amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2il-amida)-2-feniletan-2-il-amida]semicarbazida 
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16 
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Sólido blanco. Rendimiento: 18,9 mg (57%); HPLC: R_{t} = 3,26 min.(>36%)/3,36 min.(>63%); picos isobáricos; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/D_{2}0 10:1, 250 MHz) \delta 8,80-8,73 (m, 2 H), 7,89-7,84 (m, 2 H), 7,62-7,54 (m, 1 H), 7,36-6,88 (m, 9 H), 5,38 (s, 0,5 H), 5,32 (s, 0,5 H), 4,53-4,37 (m, 1 H), 4,21-4,15 (m, 1 H), 3,42-2,86 (m, 4 H); EN-EM: masa calculada para C_{28}H_{31}N_{8}O_{4} 543,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 543,0.
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Ejemplo 11
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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17 
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Sólido blanco. Rendimiento: 21,6 mg (54%); HPLC: R_{t} = 4,17 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta 7,22-6,72 (m, 9 H), 4,53-4,45 (m, 1 H), 3,92-3,81 (m, 2 H), 3,15-3,07 (dd, J =5,3, 14,4, 1 H), 2,85-2,75 (dd, J = 10,4, 14,4, 1 H), 2,32-2,26 (t, J =7,8, 2 H), 1,88-1,59 (m, 4 H), 0,92-0,81 (t, J = 7,5, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{24}H_{31}FN_{6}O_{4} 487,24 (MH^{+}). Encontrado m/z 487,2
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Ejemplo 12
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida
18
Sólido blanco. Rendimiento: 14 mg (44%); HPLC: R_{t} = 4,03 min. (>98%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta 7,74-7,55 (d, J = 7,0, 1 H), 7,33-7,00 (m, 8 H), 4,79-4,70 (m, 1 H), 4,17-4,12 (dd, J = 5,3, 8,2, 1 H), 3,88-3,83 (t, J = 6,6, 1 H), 3,43-3,32 (m, 1 H, parcialmente oculto bajo la señal del metanol), 3,22-3,12 (dd, J = 8,6, 14,7, 1 H), 2,58-2,49 (t, J = 8,5, 2 H), 2,05-1,69 (m, 4 H), 1,14-1,08 (t, J = 7,5, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{26}H_{34}N_{7}O_{4} 508,3 (MH^{+}). Encontrado m/z 508,5.
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Ejemplo 13
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida
19
Sólido blanco. Rendimiento: 13 mg (41%); HPLC: R_{t} = 3,97 min. (>99%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta 7,73-7,70 (d, J = 7,3, 1 H), 7,49-7,03 (m, 8 H), 4,75-4,68 (m, 1 H), 4,63-4,58 (t, J = 7,0, 1 H), 3,93-3,88 (m, 1 H), 3,35-3,17 (m, 3 H), 3,04-2,95 (dd, J = 8,4, 13,8, 1 H), 2,11-1,92 (m, 2 H), 1,23-1,15 (t, J = 7,5, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{2}5H_{31}FN_{7}O_{4} 512,3 (MH^{+}). Encontrado m/z 512,4
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Ejemplo 14
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida
20 
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Sólido blanco. Rendimiento: 12 mg (38%); HPLC: R_{t} = 4,14 min. (>96%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz; una señal oculta bajo el pico del agua) \delta 7,41-7,18 (m, 5 H), 6,98-6,89 (m, 4 H), 4,78-4,70 (m, 1 H), 4,62-4,44 (dd, J = 5,6, 7,8, 1 H), 3,33-2,91 (m, 4 H), 2,17-1,88 (m, 2 H), 1,29-1,18 (t, J = 7,6, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{24}H_{32}ClN_{6}O_{5} 519,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 519,4.
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Ejemplo 15
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida
21
Sólido blanco. Rendimiento: 18 mg (33%); HPLC: R_{t} = 4,21 min. (>98%); EN-EM: masa calculada para C_{25}H_{34}ClN_{6}O_{5}. 533,2 (MH^{+}) Encontrado m/z 533,4.
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Ejemplo 16
1-(2S-2-amino-4-fenilbutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida 
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22 
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Ejemplo 17
1-(2S-2-aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan2-il-amida]semicarbazida
23
Ejemplo 18
1-(2S-2-aminobutanoil)-4[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida]semicarbazida 
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24 
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Ejemplo 19
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida 
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25 
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Ejemplo 20
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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26 
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Ejemplo 21
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenil]butan-2-il-amida]semicarbazida 
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27 
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Ejemplo 22
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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28 
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Ejemplo 23
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4[2S-N[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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29 
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Ejemplo 24
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida 
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30 
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Ejemplo 25
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]semicarbazida 
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31 
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Ejemplo 26
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida 
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Ejemplo 27
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2-feniletil)semicarbazida 
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33 
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Esquema 2: a) Preparación de W-Boc-L-alaninahidrazida: se añadió CDI (4,71 g, 29,1 mmol) lentamente a una solución de N^{\alpha}-Boc-L-alanina (5,0 g, 26,4 mmol) en 50 ml THF seco. Después de la adición la solución se agitó durante 30 min. Después, se añadió hidrazina monohidrato (3,85 ml, 79,3 mmol) y la solución resultante se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se concentró y el sólido blanco se disolvió en 1,4-dioxano y se liofilizó durante una noche. El producto bruto se suspendió en éter dietílico, se enfrió a -18ºC y se filtró. El filtrado se secó al vacío durante una noche produciendo 5,6 g (104%) de producto bruto. El sólido era una mezcla de imidazol y el producto deseado (imidazol:producto 2:1, determinada por ^{1}H RMN) y se usó sin purificación adicional. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6} intercambiado con D_{2}O, 250 MHz) \delta 3,96-3,85 (m, 1 H), 1,39-1,31 (s, 6 H), 1,18-1,10 (d, J = 7,2, 3 H).
b) Se añadió CDI (44 mg, 0,27 mmol) a una solución de AP-Boc-L-alaninahidrazida (59,9 mg, 0,295 mmol) en 1,0 ml de THF seco. La solución resultante se agitó durante una noche y se añadió 2-feniletilamina (0,27 mmol) disuelta en 0,5 ml de THF seco. La mezcla de reacción se agitó durante una noche, y después se concentró. El residuo se trató con 1 ml de TFA al 95%/H_{2}O durante 5 min, y se concentró seguido de purificación por HPLC preparativa. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 45 mg (66%); HPLC: R_{t} = 3,11 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,37-7,21 (m, 5 H), 4,10-4,02 (c, J = 7,2, 1 H), 3,40-3,31 (td, J = 6,9, 2,51, 2 H), 2,79-2,72 (t, J = 6,9, 2 H), 1,50-1,45 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{18}N_{4}O_{2} 251,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 251,0.
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Ejemplo 28
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2-feniletil)-4-metilsemicarbazida
34
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por N-metil-fenetilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 29 mg (41%); HPLC: R_{t} = 3,17 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,37-7,20 (m, 5 H), 4,15-4,04 (c, J = 7,2, 1 H), 3,54-3,45 (m, 2 H), 2,87-2,75 (m, 5 H), 1,54-1,49 (d, J =7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{13}H_{21}N_{4}O_{2} 265,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 265,0.
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Ejemplo 29
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-[2-(p-hidroxifenil)etil]semicarbazida
35
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por triamina (disuelta en DMF). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 20 mg (28%); HPLC: R_{t} = 2,46 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,15-7,07 (m, 2 H), 6,84-6,76 (m, 2 H), 4,10-4,01 (c, J = 7,2, 1 H), 3,35-3,25 (td, J = 6,9, 3,14, 2 H), 2,71-2,63 (t, 6,9, 2 H), 1,50-1,43 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{19}N_{4}O_{3} 267,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 267,0.
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Ejemplo 30
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-bencilsemicarbazida
36
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por bencilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 23 mg (36%); HPLC: R_{t} = 2,57 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,40-7,23 (m, 5 H), 4,34-4,29 (s, 2 H), 4,15-4,05 (c, J = 7,2, 1 H), 1,55-1,49 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{17}N_{4}O_{2} 237,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 237,0.
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Ejemplo 31
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida
37
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por o-clorobencilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 24 mg (33%); HPLC: R_{t} = 3,02 min. (>99%);^{1} H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,23-7,01 (m, 4 H), 4,20-4,15 (s, 2 H), 3,94-3,84 (c, J = 7,2, 1 H), 1,35-1,27 (d, J =7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{16}Cl_{4}O_{2} 271,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 271,0.
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Ejemplo 32
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2-furfuril)semicarbazida
38
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por furfurilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 6 mg (10%); HPLC (15 min. gradiente): R_{t} = 1,80 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,44-7,37 (m, 1 H), 6,39-6,34 (m, 1 H), 6,26-6,22 (m, 1 H), 4,30-4,26 (s, 2 H), 4,16-4,05 (c, J = 7,2, 1 H), 1,55-1,47 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{9}H_{15}N_{4}O_{3} 227,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 227,0.
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Ejemplo 33
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-[2-(3-indolil)etil]semicarbazida
39
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por triptamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (22 mg, 0,14 mmol), AP-Boc-L-alaninahidrazida (45 mg, 0,22 mmol) en 0,5 ml de THF seco, triptamina (22 mg, 0,14 mmol) en 100 \mul de DMF. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 13 mg (17%); HPLC: R_{t} = 3,11 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,68-7,61 (m, 1 H), 7,48-7,42 (m, 1 H), 7,27-7,06 (m, 3 H), 4,09-3,97 (c, J = 7,2, 1 H), 3,46-3,37 (td, J = 6,9, 3,14, 2 H), 2,95-2,87 (t, J = 6,9, 2 H), 1,48-1,41 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{14}H_{20}N_{5}O_{2} 290,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 290,2.
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Ejemplo 34
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida 
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40 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 1-naftilmetilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 42 mg (55%); HPLC: R_{t} = 3,50 min. (>97%);^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 8,03-7,81 (m, 3 H), 7,63-7,40 (m, 4 H), 4,79-4,74 (s, 2 H), 4,13-4,03 (c, J = 7,2, 1 H), 1,52-1,45 (d, J =7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{15}H_{19}N_{4}O_{2} 287. (MH^{+}). Encontrado m/z 287,0.
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Ejemplo 35
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-piperonilsemicarbazida 
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41 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por piperonilamina. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 14 mg (19%); HPLC: R_{t} = 2,70 min. (>95%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 6,85-6,72 (m, 3 H), 5,91-5,88 (s, 2 H), 4,23-4,20 (s, 2 H), 4,16-4,05 (c, J = 7,2, 1 H), 1,55-1,48 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{17}N_{4}O_{4} 281,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 280,9.
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Ejemplo 36
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(p-clorobencil)semicarbazida 
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42 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por p-clorobencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol), N-Boc-L-alaninahidrazida (90 mg, 0,25 mmol), 4-clorobencilamina (35 \mul, 0,44 mmol). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 52 mg (71%); HPLC: R_{t} = 3,30 min. (>97%);^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,37-7,30 (m, 2 H), 7,27-7,19 (m, 2 H), 4,31-4,26 (s, 2 H), 4,16-4,05 (c, J = 7,2, 1 H), 1,55-1,49 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{16}ClN_{4}O_{2} 271,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 271,1.
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Ejemplo 37
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-[2-(tiofen-2-il)etil]semicarbazida 
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43 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 2-(tiofen-2-il)etilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol), AP-Boc-L-alaninahidrazida (90 mg, 0,44 mmol), 2-tiofenoetilamina (35 \mul, 0,27 mmol). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 47 mg (67%); HPLC: R_{t} = 2,72 min. (>91%);^{1} H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,28-7,22 (m, 1 H), 7,00-6,94 (m, 1 H), 6,90-6,86 (m, 1 H), 4,12-4,02 (c, J = 7,2, 1 H), 3,45-3,32 (td, J = 6,5, 3,5, 2 H), 3,03-2,93 (t, J = 6,6, 2 H), 1,52-1,47 (d, J =7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{10}H_{17}N_{4}O_{2}S 257,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 257,2.
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Ejemplo 38
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(m-fluorobencil)semicarbazida
44
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 3-fluorobencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AP-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 3-fluorobencilamina (31 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 34 mg (55%); HPLC: R_{t} = 2,71 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,42-7,27 (m, 1 H), 7,11-6,94 (m, 3 H), 4,34-4,29 (s, 2 H), 4,17-4,01 (m, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{15}FN_{4}O_{2} 255,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 255,1.
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Ejemplo 39
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(o-fluorobencil)semicarbazida
45
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 2-fluorobencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AP-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 2-fluorobencilamina (31 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 27 mg (44%); HPLC: R_{t} = 2,59 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,38-7,28 (m, 2 H), 7,22-7,07 (m, 2 H), 4,41-4,37 (s, 2 H), 4,21-4,08 (m, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{15}FN_{4}O_{2} 255,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 255,1.
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Ejemplo 40
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(p-fluorobencil)semicarbazida
46
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 4-fluorobencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AP-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 4-fluorobencilamina (31 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 39 mg (62%); HPLC: R_{t} = 2,70 min. (>99%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,39-7,31 (m, 2 H), 7,22-7,10 (m, 2 H), 4,40-4,33 (s, 2 H), 4,28-4,15 (m, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{15}FN_{4}O_{2} 255,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 255,1.
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Ejemplo 41
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(o-trifluorometilbencil)semicarbazida 
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47 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 2-trifluorometilbencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), N^{\alpha}-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 2-trifluorometilbencilamina (38 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 31 mg (41%); HPLC: R_{t} = 3,37 min. (>98%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,85-7,46 (m, 4 H), 4,54-4,52 (s, 2 H), 4,22-4,08 (c, J = 7,2, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{15}F_{3}N_{4}O_{2} 305,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 305,1.
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Ejemplo 42
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(m-clorobencil)semicarbazida 
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48 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 3-clorobencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AP-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 3-clorobencilamina (34 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 47 mg (70%); HPLC: R_{t} = 3,17 min. (>98%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,31-7,21 (m, 3 H), 7,18-7,11 (m, 1 H), 4,31-4,26 (s, 2 H), 4,16-4,05 (m, J = 7,2, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{11}H_{15}ClN_{4}O_{2} 271,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 271,1.
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Ejemplo 43
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(o-metoxibencil)semicarbazida 
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49 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 2-metoxibencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AP-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 2-metoxibencilamina (36 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 35 mg (53%); HPLC: R_{t} = 2,91 min. (>97%);^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,33-7,21 (m, 2 H), 7,09-6,99 (m, 2 H), 4,31-4,28 (s, 2 H), 4,16-4,05 (m, 1 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{18}N_{4}O_{3} 267,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 267,1.
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Ejemplo 44
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(o-metilbencil)semicarbazida 
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50 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por 2-metilbencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), AF-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), 2-metilbencilamina (34 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 41 mg (66%); HPLC: R_{t} = 2,98 min. (>98%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,33-7,25 (s, 4 H), 4,31-4,26 (s, 2 H), 4,25-4,14 (m, 1 H), 2,35-2,29 (s, 3 H), 1,61-1,53 (d, J = 7,2, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{18}N_{4}O_{2} 251,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 251,2.
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Ejemplo 45
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(alfa-metilbencil)semicarbazida 
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51 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 27, excepto sustituyendo 2-feniletilamina por (+/-)-alfa-metilbencilamina. Se aplicaron los siguientes cambios: CDI (44 mg, 0,27 mmol, 1,1 equiv.), N^{\alpha}-Boc-L-alanina (50 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.), (+/-)-alfa-metilbencilamina (35 \mul, 0,27 mmol, 1,1 equiv.). Rendimiento: 20 mg (33%); HPLC: R_{t} = 2,91 min. (>92%); ^{1}H RMN (D_{2}O, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,51-7,31 (m, 5 H), 4,90-4,80 (m, 1 H), 4,25-4,14 (m, 1 H), 1,61-1,55 (d, J = 7,2, 3 H), 1,51-1,45 (d, J = 6,91, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{18}N_{4}O_{2} 251,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 251,2.
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Ejemplo 46
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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52 
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Esquema 2 sin el aislamiento del compuesto II: se añadió CDI (45 mg, 0,28 mmol, 1,1 equiv.) lentamente a una solución de ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico (51 mg, 0,25 mmol, 1,0 equiv.) en 1,0 ml de THF seco. Después de la adición la solución se agitó durante 2 h. Después, se añadió hidrazina monohidrato (13,4 \mul, 0,28 mmol, 1,1 equiv.) y la solución resultante se agitó durante una noche. Se añadió CDI (45 mg, 0,28 mmol, 1,1 equiv.) y la solución se agitó durante 6 h. Se añadió 2-clorobencilamina (27 \mul, 0,23 mmol, 0,9 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche, y se concentró. El residuo se trató con 1 ml de TFA al 95%/H_{2}O durante 2 h, y se concentró seguido de purificación sobre HPLC preparativa. Rendimiento: 9,4 mg (13%); HPLC: R_{t} = 3,39 min. (>99%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,41-7,28 (m, 2 H), 7,26-7,13 (m, 2 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 3,80-3,71 (t, J = 6,59, 1 H), 1,96-1,79 (m, 2 H), 1,07-0,95 (t, J = 7,54, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{17}ClN_{4}O_{2} 285,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 285,1.
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Ejemplo 47
1-(2S-2-Aminovaleril)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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53 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 46, excepto sustituyendo ácido AP-Boc-L-aminobutírico por ácido AP-Boc-L-aminovalérico. Rendimiento: 11,7 mg (16%); HPLC: R_{t} = 3,36 min. (>99%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,41-7,28 (m, 2 H), 7,26-7,13 (m, 2 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 3,80-3,71 (t, J = 6,59, 1 H), 1,93-1,66 (m, 2 H), 1,49-1,34 (m, 2 H), 0,98-0,86 (t, J = 7,22, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{13}H_{19}ClN_{4}O_{2} 299,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 299,1.
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Ejemplo 48
1-(2S-2-Aminohexanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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54 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 46, excepto sustituyendo ácido Af-Boc-L-aminobutírico por ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminocaproico. Rendimiento: 30 mg (38%); HPLC: R_{t} = 3,46 min. (>99%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,41-7,28 (m, 2 H), 7,26-7,13 (m, 2 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 3,80-3,71 (t, J = 6,59, 1 H), 1,89-1,68 (m, 2 H), 1,43-1,21 (m, 4 H), 0,94-0,82 (t, J = 7,22, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{14}H_{21}ClN_{4}O_{2} 313,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 313,1.
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Ejemplo 49
1-(2S-2-Aminoisocaproil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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55 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 46, excepto sustituyendo ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico por ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminoisocaproico. Rendimiento: 17,8 mg (23%); HPLC: R_{t} = 3,45 min. (>99%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,41-7,28 (m, 2 H), 7,26-7,13 (m, 2 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 3,80-3,71 (t, J = 6,59, 1 H), 1,77-1,57 (m, 3 H), 0,98-0,90 (m, 6 H); EN-EM: masa calculada para C_{14}H_{21}ClN_{4}O_{2} 313,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 313,1.
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Ejemplo 50
1-(1-Aminociclohexano-1-carbonil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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56 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 46, excepto sustituyendo ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico por ácido Boc-1-amino-1-ciclohexanoico. Rendimiento:3,8 mg (5%); HPLC: R_{t} = 3,42 min. (>98%); ^{1}H RMN(CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,41-7,28 (m, 2 H), 7,26-7,13 (m, 2 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 2,19-1,20 (m, 10 H); EN-EM: masa calculada para C_{15}H_{21}ClN_{4}O_{2} 325,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 325,1.
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Ejemplo 51
1-(2S-2-Amino-3-fenil-propionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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57 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 46, excepto sustituyendo ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico por N^{\alpha}-Boc-L-fenilalanina. Rendimiento: 15,6 mg (18%); HPLC: R_{t} = 3,71 min. (>97%); ^{1}H RMN (CD_{3}OD, 250 MHz) \delta (se observó rotamería) 7,38-7,14 (m, 9 H), 4,44-4,37 (s, 2 H), 3,80-3,61 (m, 3 H); EN-EM: masa calculada para C_{17}H_{19}ClN_{4}O_{2} 347,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 347,1.
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Ejemplo 52
1,1-(2S-1,4-ciclo-Aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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58 
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Esquema 3:
Etapa a)
Preparación de Cbz-L-Met-NHNHBoc
Se disolvió Cbz-L-metionina (5 g, 17,65 mmol) en THF seco (20 ml) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió CDI (3,15 g, 19,42 mmol) en una porción, dando como resultado un desprendimiento vigoroso de gas. Después de 20 min. se añadió BocNHNH_{2} (2,57 g, 19,42 mmol) y la solución resultante se agitó durante un periodo de 20 h, momento en el cual se vertió en agua (150 ml) y se extrajo con EA (x3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron una vez con NaHCO_{3} ac. sat., ácido cítrico ac. al 10% y salmuera. El secado sobre MgSO_{4} seguido de evaporación dio un aceite que se secó al vacío dando un sólido blanco. Rendimiento: 6,75 g (96%); HPLC: R_{t} = 5,00 (>99%); ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 9,00 (a, 1 H), 7,29 (m, 5 H), 7,27 (a, 1 H), 6,15-6,11 (d, J = 8,4, 1 H), 5,12-4,98 (m, 2 H), 4,45-4,40 (m, 1 H), 2,57-2,52 (t, J = 7,1, 2 H), 2,13-1,89 (m, 5 H), 1,42 (s, 9 H); ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 171,7, 156,7, 155,7, 136,5, 128,9, 128,5, 128,4, 81,9, 67,5, 52,8, 32,3, 30,3, 28,5, 15,6; EN-EM: masa calculada para C_{18}H_{28}N_{3}O_{5}S 398,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 398,1.
Etapa b)
Preparación de yoduro de Cbz-L-Met-NHNHBoc metil sulfonio
Se agitó Cbz-L-Met-NHNHBoc (6,65 g, 16,73 mmol) en yoduro de metilo (25 ml) a ta durante un periodo de 72 h. Se añadió DCM (50 ml) y la solución amarilla se concentró dando un aceite amarillo, que se secó al vacío dando la sal sulfonio en forma de un sólido amarillo. Rendimiento: 9,1 g (100%); HPLC: R_{t} = 3,86 (>99%); ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 9,33 (a, 1 H), 7,27-7,19 (m, 5 H), 6,93 (a, 1 H), 6,38-6,36 (d, J = 7, 1, 1 H), 5,01 (s, 2 H), 4,61-4,59 (m, 1 H), 3,75-3,58 (m, 2 H), 3,08 (s, 3 H), 2,99 (s, 3 H), 2,45-2,30 (m, 2 H), 1,34 (s, 9 H); ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 171,1, 156,9, 155,8, 136,5, 129,0, 128,6, 128,4, 82,0, 67,7, 52,3, 40,3, 28,7, 26,8, 26,4; EN-EM: masa calculada para C_{19}H_{30}N_{3}O_{5}S 412,2 (M+). Encontrado m/z 412,1.
Etapa c)
Preparación de 3(S)-benciloxicarbonilamino-1-terc-butoxicarbonilaminopirrolidin-2-ona
Se disolvió yoduro de Cbz-L-Met-NHNHBoc metil sulfonio (9 g, 16,68 mmol) en DCM seco:DMF 1:1 (338 ml). La solución amarilla resultante se enfrió en un baño de hielo en atmósfera de Ar, y se añadió NaH (suspensión al 60% en aceite mineral; 1344 mg, 33,6 mmol) en una porción. La solución se agitó a 0ºC durante 3 h, durante este tiempo el color cambió de amarillo a diversas tonalidades de rojo. La reacción se interrumpió mediante la adición de EA (115 ml) y agua (27 ml), y después se agitó durante una noche a temperatura ambiente. El volumen se concentró hasta aprox. 100 ml, se diluyó con agua (300 ml) y se extrajo con EA (x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron dando el producto bruto en forma de un resto semi-sólido (6 g después del secado). Esto se disolvió en EA caliente:DE 1:2 (60 ml), después se enfrió lentamente a ta y finalmente a -18ºC. Después de 1 h se añadieron 10 ml más de DE y 20 ml más de n-heptano en porciones a la solución fría. Después del almacenamiento a -18ºC durante una noche, se aisló un sólido blanco, se lavó con n-heptano (x 3) y se secó. Rendimiento: 2,9 g (50%); HPLC: R_{t} = 4,68 (>86%)/4,97 (>12%); picos isobáricos; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 7,28-7,19 (m, 5 H), 6,81 (s, 1 H), 5,51-5,49 (d, J = 7,1, 1 H), 5,03 (s, 2 H), 4,30-4,20 (m, 1 H), 3,58-3,37 (m, 2 H), 2,58-2,47 (m, 1 H), 2,02-1,70 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H); ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 172,1, 156,8, 154,7, 136,7, 128,9, 128,5,128,4, 82,2, 67,3, 51,2, 46,3, 28,5, 26,4; EN-EM: masa calculada para C_{17}H_{24}N_{3}O_{5} 350,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 350,1.
Etapa d)
Preparación de 3(S)-benciloxicarbonilamino-1-aminopirrolidin-2-ona
Se disolvió 3(S)-benciloxicarbonilamino-1-terc-butoxicarbonilaminopirrolidin-2-ona (100 mg, 0,286 mmol) en HCl en dioxano (4 M, 2 ml) y se dejó a ta durante 18 h. La solución se evaporó a sequedad y el residuo bruto se purificó por HPLC preparativa dando un sólido blanco. Rendimiento: 35 mg (49%); HPLC: R_{t} = 3,61 (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{16}N_{3}O_{3} 250,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 250,1.
Etapa e)
Preparación de 1,1-(2S-1,4-ciclo-benciloxicarbonilaminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida
Se disolvieron 3(S)-benciloxicarbonilamino-1-aminopirrolidin-2-ona (35 mg, 0,14 mmol) y NEM (35 \mul, 0,28 mmol) en THF seco (1,5 ml), y se añadió CDI (25 mg, 0,154 mmol). Después de un periodo de 21 h a ta se añadió o-clorobencilamina (19 \mul, 0,154 mmol). Después de 4,5 h el producto bruto se purificó por HPLC preparativa dando un sólido blanco. Rendimiento: 20 mg (34%); HPLC: R_{t} = 4,84 (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{20}H_{22}N_{4}O_{4} 417,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 417,0.
Etapa f)
Preparación de 1,1-(2S-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida
Se disolvió 1,1-(2S-1,4-ciclo-benciloxicarbonilaminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida (19 mg, 46 \mumol) en ácido acético glacial (300 \mul). Se añadió HBr en ácido acético (5,7 M, 20 \mul, 114 \mumol). Después de 22 h a se añadieron 20 \mul más de HBr en ácido acético, y otros 20 \mul después de 3,5 h más. Tres horas después el producto bruto se purificó por HPLC preparativa dando un sólido blanco. Rendimiento: 10,7 mg (83%); HPLC: R_{t} = 3,34 (>99%); ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 7,56-7,34 (m, 4 H), 4,59 (s, 2 H), 4,29-4,21 (t, J = 9,1, 1 H), 3,85-3,66 (m, 2 H), 2,78-2,66 (m, 1 H), 2,34-2,21 (m, 1 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{16}ClN_{4}O_{2} 283,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 283,1.
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Ejemplo 53
1,1-(2R-1,4-ciclo-Aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida 
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59 
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Esquema 3:
Etapa a)
Preparación de Cbz-D-Met-NHNHBoc
Partiendo de Cbz-D-metionina (2 g, 7,06 mmol), siguiendo el procedimiento del Ejemplo 52 a) dio un sólido blanco. Rendimiento: 2,7 g (71%); HPLC: R_{t} = 4,03 (gradiente más corto; >99%); R_{f} (PE:EA 1:1) = 0,62; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 8,92 (a, 1 H), 7,32 (m, 5 H), 7,09 (a, 1 H), 6,09-6,05 (d, J = 8,2, 1 H), 5,15-5,00 (m, 2 H), 4,54-4,45 (m, 1 H), 2,60-2,55 (t, J = 7,1, 2 H), 2,19-1,89 (m, 5 H), 1,45 (s, 9 H); ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 173,2, 156,8, 155,8, 136,4, 128,9, 128,6, 128,5, 82,2, 67,6, 52,8, 32,2, 30,3, 28,5,15,6; EN-EM: masa calculada para C_{18}H_{28}N_{3}O_{5}S 398,2 (MH^{+}). Encontrado ml z 398,2.
Etapa b)
Preparación de yoduro de Cbz-D-Met-NHNHBoc metil sulfonio
Partiendo de Cbz-D-Met-NHNHBoc (2,6 g, 6,55 mmol), siguiendo el procedimiento del Ejemplo 52 b) dio un sólido amarillo. Rendimiento: 3,5 g (100%); HPLC: R_{t} = 3,71 (>99%); ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 9,55 (a, 1 H), 7,58 (a, 1 H), 7,28-7,19 (m, 5 H), 6,73-6,70 (d, J = 7,5, 1 H), 5,00 (s, 2 H), 4,50-4,47 (m, 1 H), 3,68-3,59 (m, 2 H), 3,08 (s, 3 H), 3,03 (s, 3 H), 2,33-2,21 (m, 2 H), 1,35 (s, 9 H); ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 171,8, 156,9, 155,8, 136,5, 128,8, 128,5, 128,3, 81,4, 67,3, 52,0, 40,0, 28,6, 26,3, 26,0; EN-EM: masa calculada para C_{19}H_{30}N_{3}O_{5}S 412,2 (M+). Encontrado m/z 412,2.
Etapa c)
Preparación de 3(R)-benciloxicarbonilamino-1-terc-butoxicarbonilaminopirrolidin-2-ona
Partiendo de yoduro de Cbz-D-Met-NHNHBoc metil sulfonio (1,7 g, 3,15 mmol), siguiendo el procedimiento del Ejemplo 52 c) dio el producto bruto en forma de un aceite transparente (1,1 g después del secado). Esto se purificó sobre sílice, usando EA:n-heptano 2:1 dando un sólido blanco. Rendimiento: 660 mg (60%); HPLC: R_{t} = 4,47 (>66%)/4,80 (>28%); picos isobáricos; R_{f} (PE:EA 1:1) = 0,3; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 7,18-7,10 (m, 5 H), 6,65 (a, 1 H), 5,36 (a, 1 H), 4,93 (s, 2 H), 4,19-4,06 (m, 1 H), 3,44-3,27 (m, 2 H), 2,49-2,38 (m, 1 H), 1,90-1,77 (m, 1 H), 1,29 (s, 9 H); EN-EM: masa calculada para C_{17}H_{24}N_{3}O_{5} 350,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 350,1.
Etapa d)
Preparación de 3(R)-benciloxicarbonilamino-1-aminopirrolidin-2-ona
3(R)-Benciloxicarbonilamino-1-terc-butoxicarbonilaminopirrolidin-2-ona (650 mg, 1,86 mmol) se disolvió en DCM (10 ml). Se añadió TFA:H_{2}O 95:5 (12 ml) y la solución resultante se dejó a -18ºC durante 3 días, punto en el cual se recogió a ta durante 6 h y finalmente se concentró al vacío. El aceite residual bruto se purificó por HPLC preparativa dando un sólido blanco. Rendimiento: 56 mg (12%); HPLC: R_{t} = 3,36 (>95%); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{16}N_{3}O_{3} 250,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 250,1.
Etapa e)
Preparación de 1,1-(2R-1,4-ciclo-benciloxicarbonilaminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida
Partiendo de 3(R)-benciloxicarbonilamino-1-aminopirrolidin-2-ona (28 mg, 0,113 mmol), siguiendo el procedimiento del Ejemplo 52 e) dio un sólido blanco. Rendimiento: 13 mg (28%); HPLC: R_{t} = 4,90 (>95%); EN-EM: masa calculada para C_{20}H_{22}N_{4}O_{4} 417,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 417,1.
Etapa f)
Preparación de 1,1-(2R-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida
Se disolvió 1,1-(2R-1,4-ciclo-benciloxicarbonilaminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida (13 mg, 31 \mumol) en TFA puro (625 \mul, 8 mmol). Se añadió tioanisol (185 \mul, 1,56 mmol), seguido de TMSBr (41 \mul, 312 \mumol). Después de 3 h a ta la solución se concentró, y el producto bruto se purificó por HPLC preparativa dando un sólido blanco. Rendimiento: 3 mg (34%); HPLC: R_{t} = 3,15 (>99%); ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 250 MHz) \delta 7,57-7,35 (m, 4 H), 4,60 (s, 2 H), 4,30-4,22 (t, J = 9,1, 1 H), 3,86-3,67 (m, 2 H), 2,79-2,67 (m, 1 H), 2,34-2,18 (m, 1 H); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{16}ClN_{4}O_{2} 283,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 283,1.
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Ejemplo 54
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[o-(o-hidroximetilfeniltio)bencil]semicarbazida 
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60 
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Esquema 2: a) Preparación de hidrazida del ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico: se añadió CDI (1,76 g, 10,8 mmol) lentamente a una solución de ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico (2,0 g, 9,84 mmol) en 20 ml de THF seco. Después de la adición la solución se agitó durante 1 h. Después, se añadió hidrazina monohidrato (1,44 ml, 29,5 mmol) y la solución resultante se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se concentró y el sólido blanco se volvió a disolver en 1,4-dioxano y se liofilizó durante una noche produciendo 3,85 g (180%) de producto bruto. El sólido era una mezcla de imidazol y producto deseado (imidazol:producto 2:1, determinado por ^{1}H RMN) y se usó sin purificación adicional. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 250 MHz) \delta 9,08-8,89 (s, 1 H), 6,75-6,10 (d, J = 8,2, 1 H), 3,79-3,64 (c, J = 7,91, 14,4, 1 H), 1,61-1,34 (m, 2 H), 1,34-1,18 (s, 9 H), 0,81-0,63 (t, J = 7,54, 3 H).
b) Se añadió CDI (41 mg, 0,26 mmol) a una solución de hidrazida del ácido N^{\alpha}-Boc-L-aminobutírico (50 mg, 0,23 mmol) en 1,0 ml de THF seco. La solución resultante se agitó durante una noche y se añadió alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico (0,26 mmol) disuelto en 1,0 ml de THF seco. La mezcla de reacción se agitó durante una noche, y después se concentró. El residuo se trató con 1 ml de TFA al 95%/H_{2}O durante 5 min, y se concentró seguido de purificación por HPLC preparativa. El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco. Rendimiento: 25 mg (28%); HPLC: R_{t} = 3,66 min. (>98%); EN-EM: masa calculada para C_{19}H_{24}N_{4}O_{2}S 389,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 389,1.
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Ejemplo 55
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-bromobencil)semicarbazida 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por o-bromobencilamina. Rendimiento: 49 mg (65%); HPLC: R_{t} = 3,12 min.(>99%); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{17}BrN_{4}O_{2} 329,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 329,1
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Ejemplo 56
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(2-cloro-6-fluorobencil)semicarbazida
62
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por 2-cloro-6-fluorobencilamina. Rendimiento: 14 mg (20%); HPLC: R_{t} = 3,03 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{12}H_{17}ClFN_{4}O_{2} 303,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 303,0
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Ejemplo 57
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-etoxibencil)semicarbazida
63
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por o-etoxibencilamina. Rendimiento: 28 mg (41%); HPLC: R_{t} = 3,27 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{14}H_{23}N_{4}O_{3} 295,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 295,2
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Ejemplo 58
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-4-il]metil)semicarbazida
64
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por (1,1'-bifenil-4-il)metilamina. Rendimiento: 34 mg (45%); HPLC: R_{t} = 3,86 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{18}H_{23}N_{4}O_{2} 327,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 327,2.
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Ejemplo 59
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-2-il]metil)semicarbazida
65
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por (1,1'-bifenil-2-il)metilamina. Rendimiento: 63 mg (83%); HPLC: R_{t} = 3,97 min. (>97%); EN-EM: masa calculada para C_{18}H_{23}N_{4}O_{2} 327,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 327,4.
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Ejemplo 60
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(p-[tiofen-2-il]bencil)semicarbazida
66
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por p-(tiofen-2-il)bencilamina. Rendimiento: 29 mg (37%); HPLC: R_{t} = 3,92 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{16}H_{21}N_{4}O_{2}S 333,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 333,2.
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Ejemplo 61
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-morfolinillbencil)semicarbazida
67
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por o-(N-morfolinil)bencilamina. Rendimiento: 32 mg (41%); HPLC: R_{t} = 2,55 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{16}H_{26}N_{5}O_{3} 336,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 336,3.
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Ejemplo 62
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida
68
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por 1-naftilmetilamina. Rendimiento: 32 mg (46%); HPLC: R_{t} = 3,53 min. (>99%); EN-EM: masa calculada para C_{16}H_{21}N_{4}O_{2} 301,2 (MH^{+}). Encontrado m/z 301,3.
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Ejemplo 63
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-piperidinil]bencil)semicarbazida
69
Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por o-(N-piperidinil)bencilamina. Rendimiento: 7 mg (9%); HPLC: R_{t} = 2,71 min. (>96%); EN-EM: masa calculada para C_{17}H_{28}N_{5}O_{2} 334-2 (MH^{+}). Encontrado m/z 334,2.
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Ejemplo 64
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-metiltiobencil)semicarbazida 
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70 
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Esquema 2: siguiendo el procedimiento general del ejemplo 54, excepto sustituyendo alcohol 2-[2-(aminometil)feniltio]-bencílico por o-metiltiobencilamina. Rendimiento: 20 mg (29%); HPLC: R_{t} = 3,27 min. (99>%); EN-EM: masa calculada para C_{13}H_{21}N_{4}O_{2}S 297,1 (MH^{+}). Encontrado m/z 297,2.
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Ensayos Biológicos
Los compuestos de esta invención pueden ensayarse en uno de los diversos ensayos biológicos para determinar sus propiedades farmacológicas.
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Ensayo de dipeptidil peptidasa I (DPP-I) humana
Usando este ensayo, se determinó el valor CI_{50} de un compuesto de la invención como inhibidor de DPP-I usando un sustrato de AFC.
Tampón de ensayo (pH 6,0)
Se disolvieron fosfato sódico 100 mM (8,9 g de Na_{2}HPO_{4}; M = 177,99), KCl 150 mM (5,6 g de KCl; M = 74,6) y EDTA 1,5 mM (279 mg de EDTA; M = 372,2) en 500 ml de H_{2}O, y el pH se ajustó a 6,0. Cisteína*HCl (Sigma C-1276; M = 157,6), 1 mg/ml de tampón de ensayo, correspondiente a 6 mM, se añadió a la solución para la activación de la enzima DPP-I.
Sustrato
Se usó Gly-Phe-AFC*TFA (Enzyme Systems Products AFC-033) como sustrato para la determinación de los valores de CI_{50}. K_{m} era 270 \muM. El sustrato se solubilizó en DMSO dando una solución madre 7,5 mM (se añadieron 2,2 mg de sustrato a 0,5 ml de DMSO).
DPP-I
DPP-I humana (hDDP-l; obtenida de UniZyme NS, DK-2970 Horsholm, Dinamarca) se almacenó a -20ºC en un tampón que contenía Na-fosfato 2,5 mM, NaCl 150 mM, cisteamina 2 mM, glicerol al 50%, pH 7,0 a una concentración de 2,5 mg/ml. Esta solución madre se diluyó 200 veces en el tampón de ensayo.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadió tampón de ensayo (230 \mul) al pocillo, seguido de 10 \mul de DPP-I diluida, correspondiente a 9,1 nM en el ensayo. Después, se añadieron 5 \mul de DMSO (control) o de sustancia de ensayo en diversas concentraciones, y la solución se mezcló. La placa se incubó a 37ºC durante 10 minutos, seguido de la adición de 5 \mul de sustrato 7,5 mM (correspondiente a 150 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era de 400 nm, y la emisión se midió a 505 nm durante 10 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas fueran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó una regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de catepsina B de hígado humana
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-1 sobre catepsina B humana, usando un sustrato fluorogénico.
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Tampón de ensayo (pH 6, 1)
Tampón MES 0,1 M (1,95 g; M = 195,2) y EDTA 1 mM (37 mg; M = 372,2) se mezclaron en 100 ml de H_{2}O y el pH se ajustó a 6,1. Se añadió DTT (10 \mul, 0,5 M) para activación de la enzima (correspondiente a 5 mM).
Catepsina B
Catepsina B de hígado humana (Enzyme System Products, CAT-B; reserva 25 \mug/54 \mul = 463 ng/\mul). Se diluyó una alícuota a una concentración de 40 ng/\mul añadiendo 53 \mul de tampón de ensayo (sin DTT). Justo antes del experimento, se realizaron dos etapas más de dilución:
4 ng/\mul: 5 \mul (40 ng/\mul) + 45 \mul tampón (sin DTT)
0,1 ng/\mul: 5 \mul (4 ng/\mul) + 285 \mul tampón (sin DTT)
Sustrato
Boc-Leu-Arg-Arg-AFC*2TFA (Enzyme System Products AFC113). Reserva de solución madre (20 mM; 15,1 mg disuelto en 1 ml de DMSO). Diluido adicionalmente en H_{2}O hasta 10 mM. K_{m} para este sustrato se ha determinado que es de 600 \muM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 84 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 10 \mul de DMSO al 1% en tampón de ensayo (control) o un compuesto de la invención (10 \muM en el ensayo). Después se añadieron 10 \mul (0,1 ng/\mul, correspondiente a 1 ng en el ensayo) de enzima, y 5 min. después se añadieron 6 \mul de sustrato (10 mM, correspondiente a 600 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era 400 nm, y la emisión se midió a 505 nm durante 10-20 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de catepsina G humana
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-l respecto a catepsina G humana, usando un sustrato cromogénico.
Tampón de ensayo (pH 8,3)
Se preparó un tampón que contenía Tris/HCl 100 mM pH 8,3 (25ºC), NaCl 500 mM, y CaCl_{2} 20 mM. Se añadió DTNB (ácido 5,5'-ditio-bis(2-nitrobenzoico)) justo antes del experimento (10 \mul, 1,25 mM/pocillo).
Catepsina G
La catepsina G humana (Calbiochem Nº Cat 219373, 50 ng/\mul = 0,1 mU/\mul de reserva) se reconstituyó en acetato sódico 50 mM y NaCl 150 mM (pH 5,5), y se almacenó a -20ºC. Se diluyó a 2 ng/\mul en tampón justo antes del experimento.
Sustrato
Suc-Ala-Ala-Pro-Phel-SBzl (Bachem Nº Cat 4009924.0050) diluido a 1 mM en tampón a partir de la reserva 10 mM en tampón. K_{m} se determinó a 100-200 \muM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 60 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 10 \mul de DTNB (1,25 mM), y 10 \mul de un compuesto de la invención (100 \muM, diluido con tampón de ensayo dando 10 \muM en el ensayo). Después, se añadieron 10 \mul (2 ng/\mul) de enzima, y 10 min. después (a 37ºC) se añadieron 10 \mul de sustrato (100 \muM de concentración final). La absorción se midió a 410 nm durante 10 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el espectrómetro UV se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de catepsina H de hígado humana
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-1 respecto a catepsina H humana, usando un sustrato fluorogénico.
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Tampón de ensayo (pH 6,0)
Fosfato sódico 50 mM (0,89 g de Na_{2}HPO_{4}; M = 177,99), EDTA 2,0 mM (74 mg de EDTA; M = 372,2), Triton-X al 0,012% (390 \mul al 3%) disuelto en 100 ml de H_{2}O y el pH se ajustó a 6,0.
Catepsina H
La catepsina H de hígado humana (Enzyme System Products, Cath-1; 25 \mug) se solubilizó en 60 \mul de tampón de enzima (dando una reserva con una concentración de 417 ng/\mul). La reserva de enzima (5 \mul) se diluyó con 1245 \mul de tampón de enzima. Antes de ejecutar el experimento se añadió 1 \mul de DTT 0,5 M/100 \mul de solución de enzima. Se incubó durante 5 minutos en hielo, después se añadió a la mezcla de reacción.
Sustrato
ARG-AFC*2HBR (Enzyme System Products AF002; 10,6 mg) se disolvió en 1 ml de DMSO, dando una solución 20 mM. K_{m} para este sustrato se ha determinado que era 27 \muM
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 50 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 25 \mul de inhibidor de referencia (cistatina; reserva 1 mg/ml, diluido con tampón de ensayo dando 10 nM en el ensayo) o un compuesto de la invención (diluido con tampón de ensayo dando 10 \muM en el ensayo). Después se añadieron 25 \mul (40 ng) de enzima, y 1 min. después (a 37ºC), se añadieron 100 \mul de sustrato ARG-AFC (15 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era 400 nm, y la emisión se midió a 505 nm durante 10-20 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de catepsina L de hígado humana
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-l respecto a catepsina L humana, usando un sustrato fluorogénico.
Tampón de ensayo (pH 5,5)
Acetato sódico 20 mM (M = 82,04; 164 mg), EDTA 4,0 mM (M = 372,2; 149 mg), Triton-X al 0,012% (390 \mul al 3%) disuelto en 100 ml de H_{2}O y el pH se ajustó a 5,5.
Catepsina L
La catepsina L de hígado humana (Enzyme System Products, Catl-1; 5 \mul de una reserva de 1,61 \muU/\mul) se solubilizó en 2500 \mul de tampón de enzima. Antes de ejecutar el experimento, se añadió 1 \mul de DTT 0,5 M/100 \mul de solución de enzima. Se incubó durante 5 minutos en hielo, después se añadió a la mezcla de reacción.
Sustrato
Z-Phe-ARG-AFC*TFA (Enzyme System Products AF052; 15,6 mg) se disolvió en 1 ml de DMSO, dando una solución 20 mM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 50 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 25 \mul de inhibidor de referencia (cistatina, reserva 1 mg/ml, diluido con tampón de ensayo dando 25 nM en el ensayo) o un compuesto de la invención (diluido con tampón de ensayo dando 10 \muM en el ensayo). Después se añadieron 25 \mul (80 nU) de enzima, y 1 min. después (a 37ºC) se añadieron 100 \mul de sustrato (10 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era 400 nm, y la emisión se midió a 505 nm durante 10-20 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de DPP-IV de Aspergillus
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-l respecto a DPP-IV de Aspergillus, usando un sustrato fluorogénico.
Tampón de ensayo (pH 7,4)
Tris 50 mM, Triton al 0,1%.
DPP-IV de Aspergillus
DPP-IV de Aspergillus (Enzyme System Products, SPE01; 5 mU disuelto en 25 \mul de tampón de ensayo, dando una reserva con una concentración de 0,2 mU/\mul). Antes de ejecutar el experimento, se diluyeron 5 \mul de solución madre de enzima a 0,004 mU/\mul con 245 \mul de tampón.
Sustrato
Gly-Pro-AFC*TFA (Enzyme System Products AF039; 10 mg) se disolvió en 1 ml de DMSO, dando una solución 20 mM. Se diluyó adicionalmente en tampón a 1 mM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 60 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 10 \mul de DMSO al 1% en tampón de ensayo (control) o un compuesto de la invención (100 \muM, correspondiente a 10 \muM en el ensayo). Se incubó a 37ºC, después se añadieron 10 \mul de enzima (correspondiente a 0,04 mU en el ensayo), seguido de 10 \mul de sustrato (100 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era 400 nm, y la emisión se midió a 505 nm durante 10-20 minutos a 30ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de elastasa neutrófila humana
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-1 respecto a elastasa neutrófila humana, usando un sustrato fluorogénico.
Tampón de ensayo (pH 7,5)
Tampón que contiene Tris/HCl 100 mM, pH 7,5 (25ºC), y NaCl 500 mM.
Elastasa neutrófila
Elastasa neutrófila humana (Calbiochem Nº Cat 324681, 50 ng/\mul de reserva) se reconstituyó en acetato sódico 50 mM, pH 5,5 y NaCl 200 mM, después se almacenó a -20ºC. Se diluyó a 1 ng/\mul en tampón justo antes del experimento.
Sustrato
MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC (Calbiochem Nº Cat 324740) se disolvió en tampón hasta 4 mM (398 \mul/mg) justo antes del experimento. K_{m} se determinó que era 560 \muM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 80 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 10 \mul de enzima (1 ng/\mul). Se incubó durante 10 min. a 37ºC, después se añadieron 10 \mul de sustrato, y posteriormente un compuesto de la invención (10 \muM en el ensayo). La longitud de onda de excitación era 380 nm, y la emisión se midió a 460 nm durante 10-20 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} > 0,99). Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de triptasa
Usando este ensayo, se determinó la selectividad de un compuesto de la invención para hDPP-l respecto a \beta-triptasa, usando un sustrato fluorogénico.
Tampón de ensayo (pH 7,5)
Tampón HEPES 0,1 M (pH 7,5) con NaCl 0,5 M.
Triptasa
Rh-piel \beta-triptasa (Promega Nº G7061) se diluyó hasta una solución madre final de 0,08 \mug/\mul en tampón de ensayo.
Rh-pulmón \beta-triptasa (Promega Nº G5631) se diluyó hasta una solución madre final de 0,08 \mug/\mul en tampón de ensayo.
Sustrato
Z-ARG-AMC*HCl (BACHEM 11130; 10 mg) se disolvió en 1 ml de DMSO, dando una solución 20 mM. K_{m} se determinó que era > 400 \muM.
Condiciones de ensayo
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos. Se añadieron 85 \mul de tampón de ensayo al pocillo seguido de 5 \mul de reserva de enzima. Después se añadieron 5 \mul de sustrato, y posteriormente 5 \mul de DMSO al 4% en tampón de ensayo (control) o un compuesto de la invención (10 \muM en el ensayo) La longitud de onda de excitación era 380 nm, y la emisión se midió a 460 nm durante 10-20 minutos a 37ºC. Cada medida se realizó por duplicado. En el software (SOFTmax Pro) usado para la recogida de datos desde el fluorómetro (Molecular Devices: Gemini XS), se aseguró que las pendientes medidas eran lineales (R^{2} >0,99).
Los datos se exportaron a GraphPad Prism y se realizó la regresión no lineal usando la opción de respuesta a dosis sigmoidea (pendiente variable).
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Ensayo de CYP1A2 humana
Este ensayo se usó para determinar el efecto de un compuesto de la invención sobre la enzima metabolizante del hígado CYP1A2.
Se usó el kit de selección Vivid® CYP1A2 Azul de PanVera.
Componentes del kit
Tampón de Reacción Vivid®CYP450 I: tampón fosfato potásico 200 mM, pH 8.
Reactivo CYP1A2 baculosomes®: CYP1A2 y NADH-P450 reductasa (contenido específico de P450: 1,1 \muM). Microsomas preparados a partir de células de insecto que se infectaron con baculovirus que contiene el ADNc para CYP1A2 humana y citrocromo P450 reductasa de conejo.
Sistema de Regeneración: glucosa-6-fosfato 333 mM y 40 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en tampón fosfato potásico 100 mM, pH 8.
Sustrato Vivid® CYP1A2 Azul.
Azul Convencional Vivid®: 3-ciano-7-hidroxicumarina.
NADP^{+} 10 mM en tampón fosfato potásico 100 mM, pH 8.
Procedimiento
Los tubos se descongelaron en hielo. Se suministró tampón de reacción 2x (temperatura ambiente) en dos tubos eppendorf (para Mezcla A y Mezcla B).
Controles o compuestos de la invención: se diluyó a una concentración de 50 \muM.
Compuesto de control positivo: \alpha-naftoflavona.
Controles negativos: DMSO y H_{2}O.
Mezcla A: 485 \mul de tampón de reacción, 10 \mul del sistema de regeneración, 5 \mul de reactivo de baculosoma. Mezclar suavemente y poner en hielo.
Mezcla B: 88,5 \mul de tampón de reacción, 1,5 \mul de sustrato, 10 \mul de NADP^{+} 10 mM.
En una placa de 96 pocillos (Costar c-3904), se suministraron 40 \mul de una muestra 50 \muM. SE añadieron 50 \mul de Mezcla A. Se incubó 20 min. a ta. Después, se añadieron 10 \mul de Mezcla B. Se determinó la fluorescencia (Molecular Devices, SPECTRAmax Gemini EM): Ex: 409 nm, Em: 460 nm, a 37ºC durante 20 min. (Automezcla: 5 s, lectura superior).
Siguiendo el procedimiento para CYP1A2, usando los siguientes kits apropiados, se determinó el efecto de un compuesto de la invención sobre las otras enzimas CYP:
Kit de Selección Vivid® CYP2C9 Rojo de PanVera.
Kit de Selección Vivid® CYP2C19 Rojo de PanVera.
Kit de Selección Vivid® CYP2D6 Cian de PanVera.
Kit de Selección Vivid® CYP3A4 Rojo de PanVera.
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Ensayo de DPP-I celular
Se usó el siguiente ensayo para determinar el efecto inhibidor de los compuestos de la invención sobre DPP-I
Cultivo celular
Las células RBL-2H3 (línea celular de leucemia basófila), se obtuvieron de la American Type Culture Collection. Las células se cultivaron a 37ºC en una atmósfera de aire humidificado con CO_{2} al 5%. Las células se cultivaron en un medio completo (CM) constituido por RPMI (GIBCO) complementado con suero bovino fetal inactivado celular de rata. con calor al 10% (FBS; GIBCO), 100 U/ml de penicilina y 100 ug/ml de estreptomicina (GIBCO).
Tratamiento de las células
Todos los experimentos basados en células que emplean inhibidores de DPP-I se realizaron por adición del compuesto (mantenido a menos de -20ºC como una solución madre 10 mM en DMSO (Sigma)) durante el tiempo y las y concentraciones indicadas hasta que los cultivos que crecían en los platillos de cultivo se hicieron sub-confluentes. Todos los experimentos se realizaron por triplicado. Después del tratamiento, las células se lavaron dos veces en PBS enfriado con hielo (Sigma) y se rasparon del platillo de cultivo. Después de otro lavado en PBS las células se lisaron en H_{2}O enfriada con hielo que contenía Triton al 0,3% x 100. Se añadió un volumen adicional de tampón que contenía MOPS 40 mM, NaCl 2 M, EDTA 2 mM y 20% de glicerol. El lisado celular se clarificó por centrifugación a 3000 rpm durante 10 min. El sobrenadante resultante se transfirió a tubos eppendorf. Se usó el ensayo de Coomassie más Proteína (Pierece) para determinar los niveles de proteína de las muestras.
Medida in vitro de la actividad de DPP-I
La actividad de DPP-I en lisados celulares se realizó en fosfato sódico 100 mM, KCl 150 mM, EDTA 1,5 mM (pH = 6) usando 50 uM de H-G(Y(3NO2))GPP(K(Abz))G-OH (Schafer-N, Dinamarca) como sustrato. Para cada medida, se usó un lisado celular correspondiente a aproximadamente 50 \mug de proteína. Todas las muestras se prepararon por duplicado.
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Ensayo para la determinación de la estabilidad metabólica en microsomas de hígado de rata
El ensayo se realizó en Cerep. (Seattle) de acuerdo con el protocolo descrito por Kuhnz et. al. (Kuhnz, W., Gieschan, H. Drug Metab. Dispos., 26,1120-1127), usando microsomas de hígado de rata (0,3 mg/ml), compuesto de ensayo (1 \muM), NADP (1 mM), y G6P (5 mM), y G6PDHasa (1 U/ml) con metanol al 0,6%/acetonitrilo al 0,6% en agua. La incubación se realizó a 37ºC en tampón fosfato (50 mM, pH = 7,4), y las muestras se analizaron para el producto iónico restante (control de reacción seleccionado) por HPLC-EM/EM (Thermo Finnigan) a intervalos de 0, 15, 30, 45 y 60 min..
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Resultados
71
72
Los resultados muestran que el compuesto ensayado es un inhibidor selectivo de DPP-I.

Claims (38)

1. Un compuesto de fórmula (I) para usar en medicina
73
o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que
R_{1} y R_{2} independientemente entre sí son hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{5-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido pero que no es bencilo cuando R_{6} son fenilo, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, o R_{1} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{3} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, o R_{3} y R_{1} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, o R_{3} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{4} y R_{5} independientemente entre sí son hidrógeno o alquilo C_{1-6};
R_{6} es alquilo C_{1-6}, -CH(R_{7})CONH(R_{8}), alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{5-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido; R_{7} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido o una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural;
R_{8} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural o un grupo -CH(R_{7})CONH(R_{9});
R_{9} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, en el que un grupo sustituido está sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, alquil C_{1-6} carbonilo, N-alquil C_{1-6} amida, alcoxi C_{1-6}, dialquilamino-alquilo C_{1-6}, amida, hidroxi, carboxi, amino, halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio y ciano; con la condición de que el compuesto no sea Ile-Gly^{a}-Leu-Met-NH_{2}, en la que Gly^{a} es un resto \alpha-aza-aminoácido.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{1} y R_{2}, independientemente entre sí, son hidrógeno, alquilo C_{1-6}, un grupo fenilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que R_{1} y R_{2}, independientemente entre sí, se seleccionan entre metilo, etilo, propilo, butilo, iso-butilo, bencilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo y (4-piridil)metilo.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que R_{1} es alquilo C_{1-6} y R_{2} es H.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{1} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en el que R_{1} y R_{2} juntos forman un grupo ciclohexilo no sustituido o sustituido.
7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R_{3} es hidrógeno o metilo.
8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que R_{1} y R_{3} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{2} y R_{3} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido.
10. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R_{4} es hidrógeno o metilo.
11. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R_{5} es hidrógeno o metilo.
12. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, 10-11, en el que al menos uno de R_{3} y R_{4} y R_{5} es hidrógeno.
13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en el que R_{3} y R_{4} y R_{5} es hidrógeno.
14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R_{6} es-CH(R_{7})CONH(R_{8}), alquilo C_{1-6}, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido.
15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R_{6} es un grupo bencilo no sustituido o sustituido.
16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que R_{6} es el grupo -CH(R_{7})CONH(R_{8}).
17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{6} se selecciona entre 2S-3-fenilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-ciclohexilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-butan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-2-feniletan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida, 25-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil) propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3, (benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida, 2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il) propan-2-il-amida, 2-feniletilo, 2-(p-hidroxifenil)etilo, bencilo, o-clorobencilo, 2-furfurilo, 2-(3-indolil)etilo, 1-naftilmetilo, 4-piperonilo, p-clorobencilo, 2-(tiofen-2-il)etilo, m-fluorobencilo, o-fluorobencilo, p-fluorobencilo, o-trifluorometilbencilo, m-clorobencilo, o-metoxibencilo, o-metilbencilo, alfa-metilbencilo, o-(o-hidroximetilfeniltio)bencilo, o-bromobencilo, 2-cloro-6-fluorobencilo, o-etoxibencilo, [1,1'-bifenil-4-il]metilo, [1,1'-bifenil-2-il]metilo, p-[tiofen-2-il]bencilo, o-[N-morfolinil]bencilo, o-[N-piperidinil]bencilo y o-metiltiobencilo.
18. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que R_{6} es un grupo [1,1'-bifenil-2-il]metilo no sustituido o sustituido o un grupo [1,1'-bifenil-4-il]metilo no sustituido o sustituido.
19. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, 16, en el que R_{7} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido.
20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 19, en el que R_{7} es un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido.
21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 20, en el que R_{7} es 2-feniletilo.
22. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, 16-21, en el que R_{8} es hidrógeno, -CH(R_{7})CONH(R_{9}) o un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido.
23. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 22, en el que R_{8} es -CH(R_{7})CONH(R_{9}) y R_{7} es un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6}-heteroarilo no sustituido o sustituido.
24. Un compuesto de la reivindicación 23, en el que R_{7} es (indol-3-il)metilo o (m-fluorofenil)metilo.
25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R_{9} es hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido.
26. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 25, en el que R_{9} es hidrógeno.
27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado entre el grupo constituido por
1-(2S-2-Aminopropionil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(aminoacetil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-1-metil-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-ciclohexilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida] semicarbazida;
1-(2S-3-naftil-2-propanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida] semicarbazida;
1-[2S-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-butan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2S-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-2-feniletan-2-il-amida] semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-amino-4-fenilbutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il) propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil) propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il) propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)-4-metilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(p-hidroxifenil)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-bencilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(2-furfuril)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(3-indolil)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-piperonilsemicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(p-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-[2-(tiofen-2-il)etil]semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(m-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(p-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-trifluorometilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)4-(m-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-metoxibencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(o-metilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminopropionil)-4-(alfa-metilbencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminovaleril)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminohexanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-aminoisocaproil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(1-aminociclohexano-1-carbonil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-amino-3-fenil-propionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1,1-(2S-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1,1-(2R-1,4-ciclo-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-[o-(o-hidroximetilfeniltio)bencil]semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-bromobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(2-cloro-6-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-etoxibencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-4-il]metil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-2-il]metil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(p-[tiofen-2-il]bencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-morfolinil]bencil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-piperidinil]bencil)semicarbazida; y
1-(2S-2-Aminobutanoil)-4-(o-metiltiobencil)semicarbazida.
\vskip1.000000\baselineskip
28. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado entre el grupo constituido por
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-1-metil-4-(2S-3-fenilpropan-2-il-amida)semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-3-naftil-2-propanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-metilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2R-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)-butan-2-il-amida]semicarbazida;
1-[2R-2-amino-3-(4-piridil)propanoil]-4-[2S-N-(2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida)2-feniletan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(indol-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil) propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-amino-4-fenilbutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-fenilpropan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]-3-(p-hidroxifenil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-4-metilpentan-2-il-amida]-3-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-metoxifenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-N-(benzo[b]tiofen-3-il)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(p-clorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminopentanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(2-naftil)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[25-N-[25-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-3-(1,1'-bifenil-4-il)propan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-feniletil)-metilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(p-hidroxifenil)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-bencilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(2-furfuril)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(3-indolil)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-piperonilsemicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(p-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-[2-(tiofen-2-il)etil]semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(m-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(p-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-trifluorometilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(m-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-metoxibencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(o-metilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminopropionil)-4-(alfa-metilbencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminobutanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminovaleril)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminohexanoil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-aminoisocaproil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-amino-3-fenil-propionil)-4-(o-clorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[2S-N-[2S-3-(m-fluorofenil)propan-2-il-amida]-4-fenilbutan-2-il-amida]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-[o-(o-hidroximetilfeniltio)bencil]semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-bromobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(2-cloro-6-fluorobencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-etoxibencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-4-il]metil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-([1,1'-bifenil-2-il]metil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(p-[tiofen-2-il]bencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-morfolinil]bencil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(1-naftilmetil)semicarbazida;
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-[N-piperidinil]bencil)semicarbazida; y
1-(2R-2-Aminobutanoil)-4-(o-metiltiobencil)semicarbazida.
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29. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que en el ensayo de DPP-I presenta un valor de CI_{50} menor de 500 \muM tal como, por ejemplo, menor de 100 \muM, menor de 50 \muM, menor de 1 \muM, menor de 500 nM, menor de 100 nM o menor de 50 nM.
30. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-29 para usar como inhibidor de proteasa.
31. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 30 para usar como inhibidor de cisteína proteasa.
32. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-31 para usar en el tratamiento, profilaxis y/o diagnóstico de inflamación, diabetes de tipo 2, asma, gripe severa, infección respiratoria por virus sincitial, inhibición de células CD8 T, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis reumatoide, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer, sepsis o para aplicación en apoptosis de célula diana.
33. Una composición farmacéutica que comprende, como sustancia activa, un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-32 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
34. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 33 en forma de dosificación unitaria, que comprende de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 1000 mg tal como, por ejemplo, de aproximadamente 10 \mug a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 100 mg o de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg, de la sustancia activa.
35. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 33 o 34 para administración oral, nasal, transdérmica, pulmonar o parenteral.
36. Uso de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-32 para la preparación de un medicamento.
37. El uso de un compuesto de fórmula (I)
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74 
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para la preparación de un medicamento para modular los niveles de DPP-1 en un sujeto, o para el tratamiento, profilaxis y/o diagnóstico de inflamación, diabetes de tipo 2, asma, gripe severa, infección respiratoria por virus sincitial, inhibición de células CD8 T, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, dermatitis atópica, síndrome de Papillon Lefevre, síndrome de Haim Munk, enfermedad de las encías, periodontitis, artritis reumatoide, enfermedad de Huntington, enfermedad de Chagas, enfermedad de Alzheimer, sepsis o para aplicación en apoptosis de célula diana,
en la que
R_{1} y R_{2} independientemente entre sí son hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{5-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido pero que no es bencilo cuando R_{6} son fenilo, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, o R_{1} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{3} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, o R_{3} y R_{1} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, o R_{3} y R_{2} forman juntos un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido o un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido;
R_{4} y R_{5} independientemente entre sí son hidrógeno o alquilo C_{1-6};
R_{6} es alquilo C_{1-6}, -CH(R_{7})CONH(R_{8}), alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquenilo C_{5-10} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquilo C_{3-7} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heterocicloalquil C_{3-7}-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6}-heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo arilo no sustituido o sustituido, un grupo heteroarilo no sustituido o sustituido, un grupo aril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido, un grupo heteroaril-alquilo C_{1-5} no sustituido o sustituido;
R_{7} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido o una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural;
R_{8} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, una cadena lateral de un resto aminoacídico natural o no natural o un grupo -CH(R_{7})CONH(R_{9});
R_{9} es hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-6} no sustituido o sustituido, un grupo cicloalquilo C_{3-10} no sustituido o sustituido, un grupo alquil C_{1-6} arilo no sustituido o sustituido o un grupo alquil C_{1-6} heteroarilo no sustituido o sustituido, en la que un grupo sustituido está sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, alquil C_{1-6} carbonilo, N-alquil C_{1-6} amida, alcoxi C_{1-6}, dialquilamino-alquilo C_{1-6}, amida, hidroxi, carboxi, amino, halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometiltio y ciano.
38. Un compuesto de fórmula (I)
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75 
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en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 28.
Con la condición de que el compuesto no sea Ile-Gly^{a}-Leu-Met-NH_{2}, o Tyr-AzAla-Gly-Phe-Leu,
en la que Gly^{a} es un resto \alpha-aza-aminoácido.
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