EA038283B1 - Способ лечения или предупреждения остеоартрита - Google Patents

Способ лечения или предупреждения остеоартрита Download PDF

Info

Publication number
EA038283B1
EA038283B1 EA201892322A EA201892322A EA038283B1 EA 038283 B1 EA038283 B1 EA 038283B1 EA 201892322 A EA201892322 A EA 201892322A EA 201892322 A EA201892322 A EA 201892322A EA 038283 B1 EA038283 B1 EA 038283B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
peptides
peptide
ser
amino acid
Prior art date
Application number
EA201892322A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201892322A1 (ru
Inventor
Тим Йоханнес Мария Велтинг
Марьолейн Мария Йоханна Карон
Original Assignee
Юниверситейт Маастрихт
Академис Зикенхёйс Маастрихт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юниверситейт Маастрихт, Академис Зикенхёйс Маастрихт filed Critical Юниверситейт Маастрихт
Publication of EA201892322A1 publication Critical patent/EA201892322A1/ru
Publication of EA038283B1 publication Critical patent/EA038283B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1875—Bone morphogenic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области медицины и предоставляет средства и способы для лечения, предупреждения или уменьшения интенсивности остеоартрита. Конкретнее, оно относится к пептиду для применения при лечении, облегчении или предупреждении остеоартрита, при этом пептид состоит из аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 18 или ее аналога, причем аналог представляет собой пептид, состоящий из аминокислотной последовательности согласно формуле 1 (SEQ ID NO: 29) или ее фрагмента, причем фрагмент состоит по меньшей мере из 10 последовательных аминокислот SEQ ID NO: 18 или аминокислотной последовательности согласно формуле 1.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области медицины и предоставляет средства и способы лечения, предупреждения или уменьшения интенсивности остеоартрита.
Предпосылки создания изобретения
Остеоартрит (ОА) представляет собой тип заболевания суставов, которое является результатом разрушения суставного хряща и подлежащей кости в комбинации с общей патологией сустава, включая воспаление синовиальной оболочки и патологию фиброзного слоя и мениска. Наиболее обычными симптомами являются суставная боль и тугоподвижность. Сначала симптомы могут появляться только после физической нагрузки, но со временем могут стать постоянными. Другие симптомы могут включать опухание суставов, уменьшенную амплитуду движений, и когда спина поражена ОА, может присутствовать слабость или онемение рук и ног. Пораженными суставами наиболее обычно являются суставы вблизи кончиков пальцев, в основании большого пальца кисти, шеи, нижней части спины, коленные суставы и тазобедренные суставы. Обычно суставы на одной стороне тела поражены сильнее, чем на другой. Как правило, проблемы появляются в течение лет. Это может повлиять на работу и обычную повседневную деятельность. В отличие от других типов артрита типично поражаются только суставы.
Причины включают предшествующее повреждение суставов, анормальное развитие суставов или конечностей, анормальное положение суставов и наследственные факторы. Риск выше у тех, у кого лишний вес, у кого одна нога другой длины и кто имеет работу, которая приводит к высоким уровням напряжения суставов. Полагают, что остеоартрит вызывается механической нагрузкой на сустав и несильными воспалительными процессами. Он развивается, так как теряется хрящевая ткань, причем в итоге поражается подлежащая кость. Также полагают, что в этиологию заболевания критически вовлечена субхондральная кость. Так как боль может сделать затруднительной физическую нагрузку, может иметь место потеря мышечной ткани. Диагноз обычно основывается на признаках и симптомах с помощью медицинской визуализации и других испытаний, иногда используемых или для подтверждения, или исключения других проблем. В отличие от ревматоидного артрита, который прежде всего является воспалительным состоянием, суставы обычно не становятся горячими или красными.
Лечение включает физические упражнения, усилия по снижению нагрузки на суставы, группы поддержки, лекарственные средства для смазывания и (местные) обезболивающие. Усилия по снижению нагрузки на суставы включают отдых и использование трости. Снижение массы тела может помочь тем, у кого излишний вес. Обезболивающие средства могут включать парацетамол (ацетаминофен). Если он не действует, можно использовать вводимые перорально NSAID, такие как напроксен, или вводимые местно кортикостероиды (например, триамцинолонацитонид), но такие лекарственные средства ассоциируются с более сильным побочным действием. Опиоиды, если используются, рекомендуются только на короткое время из-за опасности зависимости. Если боль или ограничение подвижности препятствуют нормальной жизни, несмотря на другое лечение, может помочь операция по замене сустава. Однако искусственный сустав сохраняется только ограниченное количество времени, и операция по полной замене сустава ассоциируется с тяжелыми осложнениями, подобными остеомиелиту. После полной замены сустава результаты для большинства людей являются хорошими.
ОА является наиболее обычной формой артрита с заболеванием коленного и тазобедренного сустава, поражающим примерно 3,8% населения по данным в 2010. Из этого числа поражены примерно 10% мужчин и 18% женщин в возрасте свыше 60 лет. Он является причиной того, что примерно 2% живут годами инвалидами. В Австралии поражены примерно 1,9 млн человек, а в Соединенных Штатах поражены примерно 27 млн человек. В возрасте до 45 лет он чаще встречается у мужчин, в то время как в возрасте после 45 лет он более обычен у женщин. Когда люди становятся старше, он становится обычнее у представителей обоих полов.
В то время как ОА является дегенеративным заболеванием суставов, которое может вызвать макроскопическую утрату хряща и морфологическое повреждение других тканей сустава, менее выраженные биохимические изменения происходят на самых ранних стадиях развития ОА. Содержание воды в здоровом хряще тонко уравновешивается сжимающим усилием вытекающей воды и давлением набухания воды поступающей, поддерживаемое различным осмотическим давлением ткани. Коллагеновые волокна вызывают усилие сжатия, в то время как эффект Гиббса-Доннана и протеогликаны хряща создают осмотическое давление, которое приводит к поступлению воды.
Однако во время начала ОА коллагеновая матрица становится менее организованной, и имеет место снижение содержания протеогликанов в хряще. Разрушение коллагеновых волокон приводит к общему росту содержания воды. Этот рост происходит, поскольку в то же время имеется общая потеря протеогликанов (и таким образом пониженная осмотическая сила тяги), она перевешивается потерей коллагена. В отсутствие защитного действия протеогликанов коллагеновые волокна хряща могут становиться чувствительными к разрушению и поэтому обостряют дегенерацию. Также может происходить воспаление синовиальной оболочки (выстилающей полость сустава) и окружающей капсулы сустава, хотя обычно умеренное (по сравнению с тем, какое происходит при ревматоидном артрите).
Изменения в суставном хряще и хондроцитах сустава, которые характеризуют ОА, схожи с клеточным, связанным с развитием процессом, управляющим развитием скелета путем эндохондриального
- 1 038283 окостенения. Аналогия между эндохондриальным окостенением и развитием ОА широко известна. Многие разрушающие хрящ ферменты, которые выделяются гипертрофированными хондроцитами в пластинке роста, также являются главными в развитии и усугубляют состояние ОА. Также обнаружено, что в хондроцитах сустава при ОА активными или разрегулированными также являются хорошо известные пути, регулирующие дифференцировку хондроцитов в пластинке роста (RUNX2, COL10A1, ALP).
Также могут быть поражены другие структуры в суставе. Связки в суставе становятся утолщенными и фиброзными, и мениск может повредиться и истираться. Мениск может полностью отсутствовать к тому времени, когда человеку заменяют сустав. Новые костные наросты, называемые шпорами или остеофитами, могут образовываться по краям суставов, возможно в попытке улучшить конгруэнтность поверхностей суставных хрящей в отсутствие мениска. Субхондральная кость увеличивается в объеме и становится менее минерализованной (остеопорозной/остеопенической). Также происходят повреждения костного мозга как результат остеоартритных изменений в субхондральной кости. Все эти изменения могут вызывать проблемы в функционировании и механической поддержке для вышележащего хрящевого слоя. Боль в суставе при остеоартрозе связана с утолщенной синовиальной оболочкой и повреждениями субхондральной кости.
Биохимически ОА характеризуется синтезом ферментов, разрушающих внеклеточный матрикс (ЕСМ), таких как аггреканазы (дизинтегрин и металлопротеиназа с тромбоспондиновыми мотивами (ADAMTS)) и металлопротеиназы матрикса (ММР), что приводит к активному разрушению матрикса хрящевой ткани. Аналогия между эндохондриальным окостенением и развитием ОА выяснена, и многие разрушающие хрящ и минерализующие ферменты, которые секретируются гипертрофированными хондроцитами в пластинке роста, также критически вовлекаются в ОА.
Несмотря на прогресс, достигнутый в понимании механизмов заболевания, установленное и экспериментальное лечение ОА является в основном симптоматическим путем облегчения боли и препятствования процессам дегенерации хряща для того, чтобы отложить полную замену сустава.
Сущность изобретения
Изобретение относится к пептиду, полученному из полноразмерного человеческого белка, называемого костным морфогенетическим белком-7 (ВМР-7), для применения при лечении, облегчении или предупреждении остеоартрита. Конкретнее, изобретение относится к пептиду для применения при лечении, облегчении или предупреждении остеоартрита, причем пептид состоит из аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 18 или ее аналога, причем аналог состоит из аминокислотной последовательности согласно формуле 1 или ее фрагмента, состоящего по меньшей мере из 10 последовательных аминокислот SEQ ID NO: 18 или аминокислотной последовательности согласно формуле 1.
Формула 1
PKPSSX1 РХ2ХЗ LX4X5 1X6 VX7X8 X9DX10X11 Х12 Х13 Х14Х15Х16
Х17Х18Х19Х20Х21 Μ V V Х22 Х23 S G S Х24 (SEQ ID NO: 29), .
в которой
X1 = А или V,
Х2 = Т, или D, или Е,
Х3 = Q, или D, или K, или S,
Х4 = N, или D, или Е, или Н,
Х5 = А, или D, или S,
Х6 = S, или I, или L, или М, или F, или Y, или Е, или Н, или K, или Q, или R, или D,
Х7 = L, или Е, или K, или Т, или М, или R,
Х8 = Y, или А, или D, или Е, или Н, или K, или S, или Т,
Х9 = F, или Н, или А, или D, или Е, или K, или Q, или R, или Y,
Х10 = D, или I, или L, или Е, или N, или S, или Т,
X11 = S, или D, или Е, или N, или R,
Х12 = S, или D, или Е, или K, или N, или Т,
Х13 = N, или Е, или Q, или R,
Х14 = V, или А, или D, или N, или R, или Т, или М, или Y, или Н,
X15 = I, или А, или D, или Е, или K, или N, или Q, или R, или S, или Т, или V,
X16 = L, или А, или Е, или K, или Q,
X17 = K, или D, или Е, или G, или Q, или R, или W,
X18 = K, или А, или D, или Е, или Н, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или V, или М,
Х19 = Y, или D, или Е, или Н, или K, или Q, или I, или R,
Х20 = R, или D, или Е, или K, или N, или S,
Х21 =N или D,
Х22 = R, или Е, или S, или D, или K, или Q, или L,
Х23 = А, или Е, или D, или S,
Х24 = Н или R.
При этом X [#] обозначает позицию аминокислоты в человеческом белке ВМР-7, которая изменяется.
- 2 038283
Подробное описание изобретения
Остеоартритные хондроциты показывают типичный фенотип, который характеризуется пониженной экспрессией хондрогенных генов SOX9, COL2A1, ACAN и BAPX1/NKX3.2, повышенной экспрессией генов гипертрофной зоны RUNX2, COL10A1, ALP, повышенной экспрессией генов, кодирующих разрушающие хрящевой матрикс ферменты ММР13, ADAMTS5, и генов системы воспаления СОХ-2 и IL-6 (фиг. 1). Мы показали, что белок, называемый костным морфогенетическим белком-7 (ВМР-7, также называется ОР-1), способен спасти фенотип ОА (фиг. 1). Исследования авторов изобретения и более ранние исследования [22, 23], направленные на модифицирующие заболевание свойства ВМР-7, показывают, что он снижает экспрессию ММР13 в хондроцитах под воздействием ΓΓ-1β, стимулирует синтез протеогликанов в ОА хондроцитах, противодействует воспалительным цитокинам (например, ΓΓ-1β) и вызывает анаболическую реакцию в здоровых хондроцитах. Внутрисуставное введение ВМР-7 защищает от развития ОА и задерживает развитие ОА у крыс. Завершена фаза-1 клинических испытаний на больных ОА, и не сообщается о тяжелых неблагоприятных событиях после внутрисуставного введения ВМР-7. В соответствии с этим данные, приведенные в настоящем описании, показывают, что активность ВМР-7 подавляет гипертрофический фенотип (ОА) хондроцитов (фиг. 1).
Несмотря на такие многообещающие результаты, внутрисуставное применение полноразмерного рекомбинантного человеческого ВМР-7 для лечения ОА может быть неподходящим для клинического применения. Преклиническое испытание показало, что для получения релевантного результата необходимы еженедельные внутрисуставные инъекции. Высокая частота внутрисуставных инъекций неприемлема для клинического применения из-за опасности септического артрита и дискомфорта пациента. Хотя решение для предотвращения частых внутрисуставных инъекций может включать инкапсуляцию ВМР-7 в системе с внутрисуставным высвобождением для длительного регулируемого высвобождения, сохранение биоактивности ВМР-7 будет стоять под большим сомнением из-за условий денатурирования, которые обычно применяют для процесса получения существующих в настоящее время систем для регулируемого высвобождения. Синовиальная жидкость при ОА, в которой вероятно должен доставляться ВМР-7, является жесткой гидролитической и протеолитической окружающей средой, которая, как ожидается, вызывает быстрое разложение вводимого ВМР-7. Наконец, получение ВМР-7 по стандарту GMP технологически требует сопровождающих его высоких затрат.
Для безопасного и возможного клинического использования благоприятных характеристик активности ВМР-7 для лечения ОА авторы изобретения нашли молекулярные миметики для ВМР-7, которые более совместимы с жесткой окружающей средой ОА синовиальной жидкости и потенциально могут быть включены во внутрисуставные молекулярные высвобождающие системы для длительного высвобождения. По этой причине авторы изобретения собрались получить ряд перекрывающихся 20-мерных пептидов (табл. 1), которые все вместе охватывают весь зрелый полипептид ВМР-7 из 139 аминокислот SEQ ID NO: 27, табл. 3). Результаты подтвердили более ранние выводы [20, 21], что ни один из пептидов не имитирует потенциал ВМР-7 по спасению фенотипа ОА. Подробнее, все пептиды, представленные в табл. 1, проверили на экспрессию генов IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP, BAPX1/NKX3.2 и RUNX2 и вспомнили прогипертрофные, проминерализующие, прокатаболические и провоспалительные реакции. Это не было неожиданным, так как описаны проминерализующие/проостеогенные пептиды из ВМР-2 [20, 32] и ВМР-7 [21, 31].
Однако неожиданно оказалось, что, когда авторы изобретения синтезировали перекрывающиеся 20мерные пептиды из участка, который составляют аминокислоты 93-139 (SEQ ID NO: 1) зрелого человеческого ВМР-7, и заменили цистеиновые остатки в этом участке на сериновые остатки (SEQ ID NO: 28, табл. 3), обнаружилось, что пептиды из участка, образованного аминокислотами 100-139, активны как прехондрогенные и противовоспалительные агенты. Отбор пептидов из этого участка ранее идентифицировал их как остеогенные агенты, применимые для индукции образования кости [31]. Этот участок из аминокислот 100-139 человеческого полипептида ВМР-7 далее в настоящем описании называется участком В.
Табл. 2 показывает результаты анализа экспрессии некоторых генов в присутствии некоторых пептидов для применения согласно изобретению. Другие подробности приводятся в разделе Примеры.
Подробнее пептиды, приведенные в табл. 2, проверяли при экспрессии генов IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP, BAPX1/NKX3.2 и RUNX2. Авторы изобретения, к своему большому удивлению, обнаружили, что пептиды с аминокислотной последовательностью, соответствующей аминокислотам 100-139 ВМР-7 или ее фрагментам, напоминают искомую активность, имитирующую ВМР-7. Это означает, что они вызывают прохондрогенную и провоспалительную реакцию. Это неожиданно, так как до сих пор описаны только проминерализующие и проостеогенные пептиды из ВМР-2 [20] и ВМР-7 [21].
- 3 038283
Таблица 3. Аминокислотная последовательность зрелого ВМР-7. Цистеиновые и сериновые остатки подчеркнуты
Название Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
Зрелый ВМР-7 STGSKQRSQN RSKTPKNQEA LRMANVAENS SSDQRQACKK HELYVSFRDL GWQDWIIAPE GYAAYYCEGE CAFPLNSYMN ATNHAIVQTL VHFINPETVP KPCCAPTQLN AISVLYFDDS SNVILKKYRN MVVRACGCH 27
Зрелый ВМР-7 с цистеином, замененным на серин STGSKQRSQN RSKTPKNQEA LRMANVAENS SSDQRQASKK HELYVSFRDL GWQDWIIAPE GYAAYYSEGE SAFPLNSYMN ATNHAIVQTL VHFINPETVP KPSSAPTQLN AISVLYFDDS SNVILKKYRN MVVRASGSH 28
Последовательные и перекрывающиеся пептиды из участка В вызывают значительно пониженную экспрессию IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP и RUNX2 (с примечанием + в табл. 2), а также повышенную экспрессию хондрогенного маркера BAPX1/NKX3.2 (с примечанием + в табл. 2) в хондроцитах ОА сустава (табл. 2).
Так как ранее показано, что 10-мерные пептиды из этого участка являются активными в повышении пролиферации остеобластов и промотировании осаждения кальция в остеобластах [21], можно без риска предположить, что пептиды из этого участка также будут применимы в настоящем изобретении. В другом воплощении изобретения пептиды предпочтительно будут длиннее, например, длиной в 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 или более аминокислот. Также можно использовать более длинные пептиды, такие как пептиды длиной больше 21 аминокислоты, такой как более 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 или более 38, например 39 или 40 аминокислот.
Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к пептиду для применения при лечении, ослаблении или предупреждении остеоартрита, причем пептид включает аминокислотную последовательность из по меньшей мере 10 последовательных аминокислот, выбранных из последовательности согласно SEQ ID NO: 18. Это следует из результатов, приведенных в табл. 2.
Эксперименты авторов изобретения показали, что пептид имеет максимальную длину 40 аминокислот или около этого. Пептид для применения согласно изобретению предпочтительно полностью содержится в С-концевых 40 аминокислотах ВМР-7 (SEQ ID NO: 18). Каждый пептид, который имел дополнительную N-концевую аминокислоту позиции 100 (N-конец SEQ ID NO: 18), терял свою активность в анализах, используемых в настоящем описании (табл. 2, см. примеры пептидов с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 2, 3, 4 и 5).
Конечно, настоящее описание не следует интерпретировать как узкое, в котором отсутствуют вариации, допускаемые в пептидах для применения в изобретении, как описано выше. Специалист в данной области техники осознает тот факт, что конформация пептида сохраняется, даже когда изменены одна или несколько, например две, три, четыре или даже пять аминокислот, в частности, когда эти изменения относятся к консервативным аминокислотным заменам. Такие пептиды известны в технике как гомологичные пептиды. Следовательно, термин гомологи или аналоги, используемый в настоящем описании, относится к пептидам, которые сохраняют свою активность, но различаются в отношении их аминокислотных последовательностей. Гомологи или аналоги могут быть идентичны с последовательностями согласно SEQ ID NO: 18 или ее фрагментами на 75% или больше, например, на 77, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%.
При использовании в настоящем описании степень идентичности между двумя или большим числом аминокислотных последовательностей эквивалента функции числа идентичных позиций у последовательностей (т.е. % идентичности = число идентичных позиций, деленное на общее число позиций X100), исключая пропуски, которые необходимо вводить для оптимального выравнивания двух последовательностей, и выступы. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя или большим числом аминокислотных последовательностей можно выполнить с использованием стандартных методов, известных в технике. Например, свободно распространяемым инструментом, обычно используемым для этой цели, является инструмент Align в ресурсе NCBI, http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE_TYPE=BlastSearch&BLAST_SPEC=blast2seq&LINK_LO C=align2seq.
В предпочтительном воплощении выравнивание двух последовательностей должно выполняться по всей длине полипептидов.
Используемый в настоящем описании термин может представлять собой включает слова (может) представлять собой и могут представлять собой, в зависимости от контекста. Кроме того, присутствие слова может предполагается для пояснения опций для осуществления раскрытия на практике или претворения его в жизнь без ограничения.
Мы сделали вывод, что пептиды, происходящие из человеческого ВМР-7, описанные в настоящем
- 4 038283 описании, способны имитировать благоприятные характеристики полноразмерного человеческого белка ВМР-7 в отношении фенотипа ОА хондроцитов.
Вместе с тем мы определили локацию и природу супрессивного действия ВМР-7 на фенотип ОА, в то время как пептиды из других участков ВМР-7 не показывают активность или проминерализующее/гипертрофное действие. Биоактивная действенность пептидов-кандидатов оказалась неожиданно высокой. Независимо от проверяемой концентрации (проверяли 1000, 100, 10 и 1 наномолярную (нМ) концентрации), почти все пептиды участка В при скрининге вызывают схожие кратные различия величины экспрессии генов, в то время как контрольный пептид с аминокислотной последовательностью SFILKKVLYDRVNDSANIYS (SEQ ID NO: 49) не вызывает.
ВМР-7 обладает уникальным действием подавления фенотипа ОА хондроцитов (фиг. 1). Такое действие проявляется более всего, когда используют концентрацию ВМР-7 примерно 1 нМ. Концентрации ВМР-7 выше 1 нМ (например, 10 нМ или 100 нМ) имеют противоположное и отрицательное действие на фенотип хондроцитов и, таким образом, вызывают неблагоприятные повышенные уровни гипертрофии, повышенную минерализацию, повышенную экспрессию генов, разрушающих хрящ, и повышенную экспрессию генов системы воспаления. Без желания привязываться к какой-либо теории авторы изобретения предполагают, что ВМР-7 включает двойную активность, которая зависит от концентрации ВМР-7.
Неожиданно и в отличие от полноразмерного полипептида ВМР-7, 20-мерные пептиды согласно SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 17 эффективно подавляют фенотип ОА хондроцитов, независимо от испытываемой концентрации (проверяют концентрации 1000, 100, 10 и 1 нМ). При этом авторы изобретения неожиданно идентифицировали участок, включающий благоприятную подавляющую фенотип ОА биоактивность ВМР-7, в то время как пептиды из других участков в ВМР-7 показывают проминерализующее, прогипертрофное, прокатаболическое и провоспалительное действие.
После 24 ч, в течение которых хондроциты ОА подвергались воздействию отдельных пептидов, подавляющее действие на фенотип ОА пептидов-кандидатов было весьма эффективным, когда пептиды добавляли в культуры хондроцитов ОА через день до дня 10. Удивительно, что в культурах подавляющее действие на фенотип ОА пептидов, раскрытых в настоящем описании, даже длится до 8 дней после одного начального 48-часового воздействия.
Весьма сильная биоактивность в наномолярном интервале концентраций схожа с полноразмерным зрелым ВМР-7 и является терапевтически важной детерминантой, показывающей, что пептиды для применения согласно изобретению действительно являются сильными миметиками ВМР-7 для терапевтического применения при ОА.
Кроме действия пептидов для применения по изобретению на ОА, хондроциты пептиды-кандидаты показывают биологически схожие действия на модели in vitro дифференцировки хондроцитов. Удивительно, за восемь дней однократного воздействия и даже более определенно при длительном воздействии пептидов на дифференцирующие клетки-предшественники хондроцитоа (ATDC5) четко снижается экспрессия маркеров гипертрофии и минерализации, в то время как экспрессия аггрекана (маркер здоровых хондроцитов) и экспрессия BAPX1/NKX3.2 (антигипертрофический фактор) возрастает даже дополнительно при непрерывном воздействия пептидов для применения согласно изобретению.
Все вместе пептиды для применения согласно изобретению уменьшают фенотип хондроцитов ОА по типу воспаления, хотя в то же время поддерживают прохондрогенное действие на хондроциты ОА и здоровые хондроциты. В отличие от полноразмерного зрелого белка ВМР-7 пептиды можно выгодно использовать в терапии, поскольку они вообще менее чувствительны к конформационной и ферментативной инактивации. Пептиды можно биохимически отрегулировать для повышения их устойчивости и активности и функционализировать в отношении носителей; они намного меньше и поэтому подходят для включения в системы, предназначенные для внутрисуставного применения для высвобождения лекарственного средства в течение длительного времени.
Можно синтезировать варианты пептидов, описанных выше, которые более устойчивы к разложению при протеолитическом разложении в синовиальной жидкости. Также можно получить варианты, которые конформационно более ограничены и таким образом более биоактивны по сравнению с их исходными лидерными последовательностями. Это достижимо для специалистов, и требует теперь только обычных методик, которые идентифицируют участок В как активный участок для анаболической активности ВМР-7.
Такие варианты могут включать линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды. Технология CLIPS дает возможность обычного получения таких пептидов (http://www.pepscan.com/therapeutics/clipsplatform). Двухпетлевые пептиды могут содержать два идентичных пептида, описанных в настоящем описании, или два различных пептида, описанных в настоящем описании.
L-Пептид имеет три аналогичные последовательности, построенные из L- и D-аминокислот: Dэнантиомер или инверсо-пептид с одинаковой последовательностью, но состоящие из D-аминокислот и зеркальной конформации; ретро-пептид, состоящий из такой же последовательности L-аминокислот, но в обратном порядке; и ретроинверсо-пептид или пептид D-ретро-энантиомер, состоящий из Dаминокислот в обратной последовательности. В то время как L-пептид и его D-энантиомер являются зер
- 5 038283 кальными структурами друг друга, L-ретро-пептид является зеркальным изображением D-ретроинверсопептида. С другой стороны, L-пептид и D-ретроинверсо-пептид имеют подобное расположение боковых цепей, хотя их карбоксильные и аминогруппы имеют противоположные направления. Для небольших пептидов, которые не зависят от вторичной структуры в случае связывания, L-пептид и его Dретроинверсо-пептид вероятно имеют схожую аффинность связывания с мишенью L-белком.
Пептиды могут быть более активными, когда они являются петлевыми, такими как циклические пептиды. Такие пептиды также могут быть более устойчивыми и резистентными к протеолитическому разложению.
Такие пептиды и полипептиды могут быть более устойчивыми в окружающей среде, враждебной для линейных полипептидов, такой как гидролитическая или протеолитическая окружающая среда. В частности, для терапевтических целей может быть выгодно использование более устойчивых пептидов, таких как указанные выше. Следовательно, изобретение также относится к применению пептидов, выбранных из группы, включающей линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсопептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды.
Пути придания пептидам меньшей чувствительности к разложению известны в технике, как, например, инклюзия одной или нескольких не встречающихся в природе аминокислот, таких как Dэнантиомер L-аминокислоты, и ретро-ориентация пептидной цепи в ретроинверсо-варианте. Такие пептиды не являются природными, поэтому природные протеазы не способных их расщеплять.
Средства и способы повышения биоактивности пептидов для применения согласно изобретению также известны в технике. Примерами таких способов являются циклизация и образование петель пептидов, что обеспечивает более стесненное конформационное окружение существенных аминокислотных остатков.
В заявке на патент US 2006/0058231 раскрываются варианты ВМР-7 с улучшенными свойствами. Этот документ включен в настоящее описание в качестве ссылки. В US 2006/0058231 раскрывается, что некоторые аминокислоты в ВМР-7 можно заменить другими аминокислотами без воздействия на функцию белка ВМР-7.
К числу улучшенных свойств ВМР-7 в результате указанных выше аминокислотных замен относятся повышенный выход экспрессии, экспрессия в отсутствие продомена, повышенная растворимость, повышенная устойчивость, повышенная специфическая биологическая активность, измененная специфичность к рецепторам, измененная аффинность связывания рецепторов, измененная сорецепторная специфичность, измененная сорецепторная аффинность связывания, измененное связывание с ноггинами и уменьшенная иммуногенность.
Что касается аминокислот участка В, то это означает, что аминокислоты в позициях 6, 8, 9, 11, 12, 14, 16 - 18, 20-31, 35, 36 и 40 SEQ ID NO: 18 могут быть изменены или заменены без воздействия на активность ВМР-7. В некоторых случаях эти исправления (аминокислотные замены) даже улучшают активность ВМР-7.
Следовательно, участок, соответствующий SEQ ID NO: 18, также можно описать так, как показано в формуле 1.
Формула 1
PKPSSX1 РХ2ХЗ LX4X5 1X6 VX7X8 X9DX10X11 Х12 Х13 X14X15XI6
Х17Х18Х19Х20Х21 Μ V V Х22 Х23 S G S Х24 (SEQ ID NO: 29), .
в которой
X1 =A или V,
Х2 = Т, или D, или Е,
Х3 = Q, или D, или K, или S,
Х4 = N, или D, или Е, или Н,
Х5 = А или D, или S,
Х6 = S, или I, или L, или М, или F, или Y, или Е, или Н, или K, или Q, или R, или D,
Х7 = L, или Е, или K, или Т, или М, или R,
Х8 = Y, или А, или D, или Е, или Н, или K, или S, или Т,
Х9 = F, или Н, или А, или D, или Е, или K, или Q, или R, или Y,
Х10 = D, или I, или L, или Е, или N, или S, или Т,
X11 = S, или D, или Е, или N, или R,
Х12 = S, или D, или Е, или K, или N, или Т,
Х13 = N, или Е, или Q, или R,
Х14 = V, или А, или D, или N, или R, или Т, или М, или Y, или H,
X15 = I, или А, или D, или Е, или K, или N, или Q, или R, или S, или Т, или V,
X16 = L, или А, или Е, или K, или Q,
X17 = K, или D, или Е, или G, или Q, или R, или W,
X18 = K, или А, или D, или Е, или Н, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или V, или М,
X19 = Y, или D, или Е, или Н, или K, или Q, или I, или R,
- 6 038283
Х20 = R, или D, или Е, или K, или N, или S,
X21 = N или D,
Х22 = R, или Е, или S, или D, или K, или Q, или L,
Х23 = А, или Е, или D, или S,
Х24 = Н или R.
Указанные выше пептиды согласно формуле 1 можно рассматривать как эквиваленты или варианты или аналоги пептида согласно SEQ ID NO: 18. В одном воплощении изобретения вариант SEQ ID NO: 18 включает замену 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотные замены, выбранные из группы, включающей замены X1, Х2, Х3, Х4, Х5, Х6, Х7, Х8, Х9, Х10, X11, Х12, Х13, Х14, Х15, Х16, Х17, Х18, Х19, Х29, Х21, Х22, Х23 и Х24.
Аминокислоты в формуле 1, выделенные жирным шрифтом и подчеркнутые, представляют собой аминокислоты в пептидах согласно SEQ ID NO: 18 (последовательность дикого типа), которые предпочтительно не должны изменяться или замещаться. Предпочтительные аминокислоты в позициях Х1-Х24 подчеркнуты. Они представляют собой аминокислоты дикого типа в соответствующих позициях.
Кроме того, авторы изобретения проверили пептиды участка В согласно SEQ ID NO: 6-17 на их свойства изменения фенотипа ОА хондроцитов и нашли, что они также повышают экспрессию генов SOX9 и COL2A1 и понижают экспрессию СОХ-2 (табл. 5).
Кроме описанного выше участка В, авторы изобретения также обнаружили, что пептиды из другого участка (аминокислоты 58-85 зрелого белка ВМР-7) можно выгодно использовать для имитации благоприятного действия ВМР-7 при ОА. Пептиды из этого участка даже синергично улучшают действие пептидов из участка В, описанных выше. Второй участок в настоящем описании описывается как участок А. Пептиды из участка А вследствие этого применимы при лечении, облегчении или предупреждении остеоартрита в комбинации с пептидами из участка В.
Пептиды из участка А можно описать как состоящие из аминокислотной последовательности длиной в 12-28 аминокислот, включающей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 YSEGESAFPLNS или ее вариант согласно формуле 2 (SEQ ID NO: 31), причем аминокислотная последовательность указанного пептида заключается в SEQ ID NO: 32
APEGYAAYYSEGESAFPLNSYMNATNHA или ее варианте согласно формуле 3 (SEQ ID NO: 33).
Формула 3
Z1 Z2 Z3 G Y Z4 A Z5 Y S E G Z6 S Z7 Z8 Z9 L Z10 Z11 Z12 Μ N A T Z13 H A (SEQ ID NO: 33), в которой
Z1 = А, или I, или L, или М, или Y, или V, или Е, или Н, или K, или Q, или R,
Z2 = Р, или Y, или М,
Z3 = E, или R, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или L, или М, или V,
Z4 = А, или Е, или Q, или R, или S,
Z5 = Y, или N, или D,
Z6 = Е, или А, или Q,
Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
Z9 = Р или М,
Z10 = N, или А, или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V,
Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т,
Z12 = Y, или Н, или D, или G, или Н, или N, или R, или S, или Т, или при этом
Z13 = N, или F, или W, или Y, или Н, или K, или R.
Указанные выше пептиды согласно формуле 3 можно рассматривать как эквиваленты или варианты пептида согласно SEQ ID NO: 32. В одном воплощении изобретения вариант SEQ ID NO: 32 включает 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотную замену, выбранную из группы, включающей замены Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z12 и Z13.
Соответственно поэтому варианты участка, соответствующего SEQ ID NO: 30, также можно описать как показано в формуле 2.
Формула 2
Y S Е G Z6 S Z7 Z8 Z9 L Z10 Zl 1 (SEQ ID NO: 31) в которой
Z6 = Е, или А, или Q,
Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
Z9 = Р или М,
Z10 = N или, А или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V, или при этом
- 7 038283
Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т.
Примеры подходящих пептидов из участка А приведены в табл. 4.
Предпочтительные варианты могут включать линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды. Технология CLIPS дает возможность обычного получения таких пептидов (http://www.pepscan.com/therapeutics/clipsplatform). Двухпетлевые пептиды могут содержать два идентичных пептида из участка А или В, или два различных пептида из участка А или В, или их комбинации, описанные в настоящем описании. Особенно предпочтительными являются двухпетлевые пептиды, причем одна петля включает пептид из участка А, описанного в настоящем описании, и другая петля пептид из участка В, описанного в настоящем описании.
Таблица 4. Пептиды из участка А, подходящие для применения при лечении ОА в комбинации с пептидами из участка В.
SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность
34 APEGYAAYYSEGESAFPLNS
35 PEGYAAYYSEGESAFPLNSY
36 EGYAAYYSEGESAFPLNSYM
37 GYAAYYSEGESAFPLNSYMN
38 YAAYYSEGESAFPLNSYMNA
39 AAYYSEGESAFPLNSYMNAT
40 AYYSEGESAFPLNSYMNATN
41 YYSEGESAFPLNSYMNATNH
42 YSEGESAFPLNSYMNATNHA
43 YSEGESAFPLNS
44 APEGYAAYYSEGESAFPLNS
45 PEGYAAYYSEGESAFPLNS
46 EGYAAYYSEGESAFPLNS
47 GYAAYYSEGESAFPLNS
48 YAAYYSEGESAFPLNS
50 AAYYSEGESAFPLNS
51 AYYSEGESAFPLNS
52 YYSEGESAFPLNS
53 YSEGESAFPLNS
54 YSEGESAFPLNSY
55 YSEGESAFPLNSYM
56 YSEGESAFPLNSYMN
57 YSEGESAFPLNSYMNA
58 YSEGESAFPLNSYMN AT
59 YSEGESAFPLNSYMNATN
60 YSEGESAFPLNSYMNATNH
61 YSEGESAFPLNSYMNATNHA
62 APEGYAAYYSEGESAFPLNSYMNATNHA
63 PEGYAAYYSEGESAFPLNSYMNATNHA
64 EGYAAYYSEGESAFPLNSYMNATNHA
Таблица 1. Охватывающие человеческий ВМР-7 последовательные 20-мерные пептиды с перекрытием между пептидами по меньшей мере в 2 аминокислоты, и их свойства изменения фенотипа ОА хондроцитов
Последовательность пептида SEQ ID NO: IL- 6 ADAMTS5 COL10A ВАРХ1/ NKX3.2 ALP RUNX2
STGSKQRSQNRSKTPKNQEA 19 - - - - - -
KTPKNQEALRMANVAENSSS SSDQRQACKK 20 - - - - - -
SSDQRQACKKHELYVSFRDL 21 - - - - - -
DLGWQDWIIAPEGYAAYYCE 22 - - - - - -
CEGECAFPLNSYMNATNHAI 23 - - - - - -
AIVQTLVHFINPETVPKPCC 24 - - - - - -
CCAPTQLNAISVLYFDDSSN 25 - - - - - -
SSNVILKKYRNMVVRACGCH 26 - - - - - -
[-] обозначает отсутствие существенного действия или существенно пониженной экспрессии маркерных хондрогенных генов BAPX1/NKX3.2 или повышенной экспрессии маркеров фенотипа ОА хондроцитов IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP и RUNX2 RUNX2 в хондроцитах ОА сустава по сравнению с необработанными хондроцитами ОА сустава.
- 8 038283
Таблица 2. Полученные из человеческого ВМР-7 последовательные 20-мерные пептиды с цистеиновыми остатками, замененными на серин, и их свойства изменения фенотипа ОА хондроцитов. Результаты представлены наглядно на фиг. 2-7
Пептидная последовательность SEQ ID No: IL-6 ADAMTS5 COL10A BAPX1 /NKX3.2 ALP RUNX2
FINPETVPKPSSAPTQLNAISVLYF DDSSNVILKKYRNMVVRASGSH 1 - - - - - -
FINPETVPKPSSAPTQLNAI 2 - - - - - -
NPETVPKPSSAPTQLNAISV 3 - - - - - -
ETVPKPSSAPTQLNAISVLY 4 - - - - - -
VPKPSSAPTQLNAISVLYFD 5 - - - - - +
PKPSSAPTQLNAISVLYFDD 6 + + + + + +
KPSSAPTQLNAISVLYFDDS 7 + + + + + +
S S APTQLNAIS VLYFDD S SN 8 + + + + + +
APTQLNAISVLYFDDSSNVI 9 + + - + + +
TQLNAISVLYFDDS SNVILK 10 + + - + + +
LNAISVLYFDDSSNVILKKY 11 + + + + + +
AISVLYFDDSSNVILKKYRN 12 + + + + + +
SVLYFDDSSNVILKKYRNMV 13 + + + + + +
LYFDDSSNVILKKYRNMVVR 14 + + + + + -
FDDSSNVILKKYRNMVVRAS 15 + + + + + -
DSSNVILKKYRNMVVRASGS 16 + + + + + -
S SNVILKKYRNMVVRASGSH 17 + + + + + +
PKPSSAPTQLNAISVLYFDDSS NVILKKYRNMVVRASGSH 18 + + + + + +
[+] обозначает существенно повышенную экспрессию маркерного хондрогенного гена BAPX1/NKX3.2 или существенно пониженную экспрессию маркеров ОА фенотипа IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP и RUNX2 в хондроцитах ОА сустава по сравнению с необработанными хондроцитами ОА сустава
[-] обозначает отсутствие существенного действия или существенно пониженной экспрессии маркерных хондрогенных генов BAPX1/NKX3.2 или существенно повышенной экспрессии маркеров ОА фенотипа IL-6, ADAMTS5, COL10A, ALP и RUNX2 в хондроцитах ОА сустава по сравнению с необработанными хондроцитами ОА сустава
Пептид рассматривают как обладающий активностью, подавляющей фенотип ОА хондроцитов, когда по меньшей мере 5 из 6 маркеров являются положительными (+). Эти пептиды выделены жирным шрифтом.
Таблица 5. Полученные из человеческого ВМР-7 последовательные 20-мерные пептиды с цистеиновыми остатками, замененными на серин, и их свойства изменения фенотипа ОА хондроцитов
Пептидная последовательность SEQ ID No: COX-2 COL2A1 6XOS
PKPSSAPTQLNAISVLYFDD 6 + + +
KPSSAPTQLNAISVLYFDDS 7 + + +
SSAPTQLNAISVLYFDDSSN 8 + + +
APTQLNAISVLYFDDSSNVI 9 + + +
TQLNAISVLYFDDSSNVILK 10 + + +
LNAISVLYFDDSSNVILKKY 11 + + +
AISVLYFDDSSNVILKKYRN 12 + + +
S VLYFDDS SNVILKKYRNMV 13 + + +
LYFDDS SNVILKKYRNMVVR 14 + + +
FDDSSNVILKKYRNMVVRAS 15 + + +
SSNVILKKYRNMVVRASGS 16 + + +
SNVILKKYRNMVVRASGSH 17 + + +
[+] обозначает существенно повышенную экспрессию маркерных хондрогенных генов SOX9 и COL2A1 или существенно пониженную экспрессию фенотипического маркера ОА СОХ-2 в хонд- 9 038283 роцитах ОА сустава по сравнению с необработанными хондроцитами ОА сустава
Пояснения к фигурам
Фиг. 1. ВМР-7 спасает ОА-ассоциированный фенотип хондроцитов.
Остеоартритные хондроциты показывают типичный фенотип, отличающийся пониженной экспрессией SOX9, COL2A1 и BAPX1/NKX3.2 и повышенной экспрессией мРНК СОХ-2 и IL-6 (см. слева). ВМР-7 (1 нМ) способен спасать этот ОА-ассоциированный фенотип хондроцитов путем нормализации экспрессии указанных выше генов (изображение слева).
Функциональная активность фермента ALP в клеточных лизатах и секреция PGE2 в культуральной среде также нормализуются после обработки ВМР-7 ОА хондроцитов (справа).
Экспрессию указанных мРНК определяют колич. ОТ-ПЦР (ОТ-кПЦР (RT-qPCR)) относительно контрольных условий (нормализованных для экспрессии 28S рРНК). На диаграммах величины ошибки представляют среднее ± ср.-кв. ошибка, статистические различия вычисляют при сравнении со здоровым состоянием. *= р<0,05.
Фиг. 2-7. Действия пептидов, полученных из ВМР-7, на первичные человеческие хондроциты ОА сустава.
Действие 20-мерных пептидов (10 нМ) SEQ ID NO: 2-17 (пептиды с интервалами в 1 или 2 аминокислоты (перекрываются 18-19 аминокислот)) и случайного пептида с последовательностью согласно SEQ ID NO: 49 на экспрессию указанных генов определяют на проверенном пуле пассажа 2 человеческих хондроцитов ОА сустава (n=18) и сравнивают с полноразмерным рекомбинантным ВМР-7 (1 нМ). Образцы собирают через 24 ч и анализируют на указанные гены ОТ-кПЦР (исправленной для экспрессии 2BS рРНК и относительно контрольных условий (без воздействия пептидов)). На диаграммах числа по оси X представляют отдельные пептиды согласно их SEQ ID NO:, величины ошибки представляют среднее±ср.-кв. ошибка, статистические различия вычисляют (однофакторный ANOVA с поправкой Бонферрони) для контрольного состояния. *=р<0,05, ниже, чем контрольное состояние для ADAMTS5, ALP, COL10A1, RUNX2 и IL-6, и выше, чем контрольное состояние для BAPX1/NKX3.2. Случайный пептид представляет собой пептид согласно SEQ ID NO: 49.
Фиг. 8. Диаграмма, показывающая относительную экспрессию COL2A1, Col10A1, СОХ-2 и RUNX2 в изолированных хондроцитах пациентов с ОА в присутствии контрольного пептида, ВМР-7 и пептида согласно SEQ ID NO: 43.
Фиг. 9. Диаграмма, показывающая относительную экспрессию COL10A1 и ММР13 в эксплантатах хряща пациентов с ОА в присутствии контрольного пептида, ВМР-7 и пептида согласно SEQ ID NO: 43.
Примеры
Пример 1. Супрессивное действие на фенотип ОА хондроцитов пептидов ВМР-7 в присутствии ОА синовиальной жидкости.
Мы анализировали пептиды-кандидаты из участка В на их супрессивное действие на первичных хондроцитах ОА сустава в присутствии 20% (об./об.) ОА синовиальной жидкости (SF). Объединяют данные по трем отдельным изолятам ОА хондроцитов (n=3), каждый из которых проверяли трижды. Высеянные ОА хондроциты пассажа 2 подвергали воздействию 100 нМ пептида в отсутствие или в присутствии ОА синовиальной жидкости, и через 24 ч анализировали на экспрессию мРНК генов IL-6, ADAMTS5, COL10A1, ALP, BAPX1 и RUNX2 (исправленную для экспрессии 28S рРНК и относительно контрольных условий (без воздействия пептидов)).
Результаты оценивали как + или -, как показано в подстрочных примечаниях к таблицам.
Пример 2. Супрессивное действие пептидов ВМР-7 на гипертрофию во время хондрогенной дифференцировки клеток ATDC5.
Клетки ATDC5 дифференцируют с использованием стандартных протоколов в течение 8 дней в присутствии или в отсутствие 1 нМ и 10 нМ пептидов из участка В. Пептиды добавляют в начале дифференцировки и при каждой замене среды (несколько раз) или только в начале дифференцировки, но не во время каждой замены среды (однократно). В день 8 дифференцировки образцы собирают и анализируют ОК-кПЦР на экспрессию генов (исправленную на экспрессию b-актина и относительно t=0).
Пример 3. Оценка супрессивного действия на ОА ex vivo на моделях для ОА.
Пептиды для применения согласно изобретению также можно исследовать в испытании ex vivo. Биопсии полнослойного хряща (выбитые 3-мм) из мыщелоков бедренной кости от ТКА (стадия K&L 2-3) можно собрать в свежем состоянии непосредственно после операции, рандомизировать на пациента и поместить в культуру ex vivo, как описано ранее. Биопсии от пациентов можно подвергнуть воздействию выбранных пептидов через двадцать четыре часа в концентрациях 0,1, 1, 10 или 100 нМ в течение 7 суток, и среду можно заменять ежедневно свежим пептидом.
ВМР-7 в концентрации 1 нМ можно использовать в качестве положительного контроля, и носитель можно использовать в качестве отрицательного контроля. После воздействия можно провести биопсии хряща, обратившись к параметрам, определяющим основные свойства хряща. Можно определить содержание ДНК на сырую массу и содержание GAG. Также можно исследовать активность фермента ALP. Можно анализировать секрецию PGE2 и GAG в культуральной среде. Можно определить экспрессию
- 10 038283 генов для основных генов-маркеров фенотипа ОА хондроцитов, как описано в настоящем описании.
Локальные относящиеся к ОА изменения в биопсии в результате воздействия пептидов можно анализировать методами (иммуно)гистохимии (окрашивание альциановым синим и иммуноокрашивание для COL2A1, SOX9 и СОХ-2) для дополнительной поддержки утверждения, что пептиды для применения согласно изобретению подходят для медицинского применения при ОА.
Диффузию и локализацию пептидов при биопсиях хряща можно направить в подобную систему, в которой можно использовать биотинилированный вариант пептидов. После культивирования эти материалы биопсии можно обработать для гистохимии. Пептид, который диффундирует в материал биопсии хряща, можно визуализировать флуоресценцией с помощью детекции, опосредуемой стрептавидиномAlexaFluor 488. Такой подход также может способствовать визуализации фенотипической ситуации и локализации пептида методом MALDI-IMS и выделению его из возможных эндогенных фрагментов ВМР-7.
Пример 4. Проверка in vivo.
Аминокислотные последовательности участка В человека и мыши гомологичны на 100%. Для того, чтобы также установить активность in vivo пептидов для применения согласно изобретению, можно испытать характерные пептиды на общепринятой модели для посттравматического ОА модели DMM. У 12недельных мышей C57BL/6 можно дестабилизировать медиальный мениск. Через одну неделю после индукции DMM можно вводить пептиды внутрисуставными инъекциями дважды в неделю, как описано ранее. Доза может быть основана на исследованиях с внутрисуставными инъекциями ВМР-7, в которых еженедельные инъекции 250 нг ВМР-7 в коленный сустав крысы (в 100 мкл) показали благоприятные результаты. Так как в ОА сустав мыши можно инъецировать 10 мкл, в этом объеме в коленный сустав мыши можно инъецировать эквивалентное количество пептида 25 нг. В 2 других группах также можно испытать количество пептида 2,5 и 0,25 нг для определения фармакологической эффективности пептида. В качестве контроля можно использовать инъекции физиологического раствора. Объем выборки в этом эксперименте преимущественно составляет 8 мышей на группу. Животных можно умертвить в последующие моменты времени после начала обработки пептидами (2, 4, 8 недель). Коленные суставы можно обработать для (иммуно)гистохимических анализов и оценки OARSI (с сафранином-О; модифицирован Pritzker).
Пример 5. Обработка хондроцитов, изолированных у пациентов с ОА.
Хондроциты, изолированные у пациентов с ОА (n=8), испытывают с ВМР-7 (1 нМ) или 12-мерным пептидом согласно SEQ ID NO: 43 (1 нМ) в течение 24 ч. Экспрессию прохондрогенных (фиг. 8А) и гипертрофных (фиг. 8В, 8С и 8D) генов определяют через кОТ-ПЦР и нормализуют для уровней 28S рРНК. Полученные результаты подтверждают предыдущие выводы авторов изобретения, что ВМР-7 или 12мерный пептид вызывают ап-регуляцию прохондрогенных генов, таких как COL2A1 (А), и даунрегуляцию прогипертрофных генов, таких как COL10A1, СОХ-2 и RUNX2 (В, С, D). Эти результаты показывают биоактивность коровой последовательности пептида из участка А, имитирующую ВМР-7.
Пример 6. Обработка хрящевых эксплантатов.
Берут эксплантаты хряща 4 мм2 из неповрежденных участков хряща коленного сустава пациентов с ОА (n=5) и произвольно распределяют для различных условий экспериментальной обработки (4 эксплантата на группу обработки). После 24-часового периода уравновешивания эксплантаты обрабатывают ВМР-7 (1 нМ) или 12-мерным пептидом согласно SEQ ID NO: 43 (10 нМ) в течение 24 ч. Экспрессию гипертрофных генов определяют через кОТ-ПЦР и нормализуют для уровней 28S рРНК. После обработки ВМР-7 или 12-мером авторы изобретения наблюдали даун-регуляцию прогипертрофных генов, таких как COL10A1 (фиг. 9А) и ММР-13 (фиг. 9В). Такие результаты находятся в соответствии с действиями, описанными выше, и показывают биоактивность пептидов согласно изобретению, имитирующую ВМР-7.
Пример 7. Окрашивание хрящевых эксплантатов.
Хрящевые эксплантаты, полученные от 2 пациентов, культивируют в течение 14 дней в присутствии ВМР-7 (1 нМ) или имитирующего ВМР-7 пептида
SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13) при 10 нМ. Гликозаминогликаны (GAGs) - важный компонент внеклеточного матрикса (ЕСМ) - окрашивают сафранином-0 (в красный цвет), и другие ткани, напротив, окрашивают быстрым зеленым (в зеленый/синий цвет).
Эксплантаты от обоих пациентов показали повышенную интенсивность сафранина-0 в эксплантатах, обработанных ВМР-7 и пептидом
SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13) по сравнению с контролем.
Такие результаты находятся в соответствии с действиями, описанными выше и показывают биоактивность пептидов согласно изобретению, имитирующую ВМР-7.
Пример 8. Обработка хрящевых эксплантатов.
Берут эксплантаты хряща 3 мм2 из хряща коленного сустава пациентов с ОА (n=6) и обрабатывают ВМР-7 (1 нМ) пептидом
SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13)
- 11 038283 при 10 нМ или случайным иррелевантным контрольным пептидом (10 нМ) в течение 14 дней. Определяют ELISA уровни простагландина Е2 (PGE2) и прогипертрофический фактор.
Образцы синовиальной ткани пациентов с ОА (n=6) обрабатывают ВМР-7 (1 нМ), пептидом SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13) при 10 нМ или случайным иррелевантным контрольным пептидом (10 нМ) в течение 24 ч. Определяют ELISA уровни PGE2.
Образцы ткани жирового тела Гоффа пациентов с ОА (n=6) обрабатывают ВМР-7 (1 нМ), пептидом SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13) при 10 нМ или случайным иррелевантным контрольным пептидом (10 нМ) в течение 24 ч. Определяют ELISA уровни PGE2.
Образцы менисковой ткани пациентов с ОА (n=6) обрабатывают ВМР-7 (1 нМ), пептидом SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13) при 10 нМ или случайным иррелевантным контрольным пептидом (10 нМ) в течение 24 ч. Определяют ELISA уровни PGE2.
Результаты ясно показывают снижение уровней PGE2 в хряще и окружающих тканях после обработки ВМР-7 или пептидом
SVLYFDDSSNVILKKYRNMV (SEQ ID NO: 13).
Обработка случайным пептидом не приводит к снижению уровней PGE2.
Такие результаты находятся в соответствии с действиями, описанными выше и показывают биоактивность пептидов согласно изобретению, имитирующую ВМР-7.
Ссылки.
1. Glyn-Jones, S; Palmer, AJ; Agricola, R; Price, AJ; Vincent, TL; Weinans, H; Carr, AJ (3 March 2015). Osteoarthritis.. Lancet, 386: 376-87. doi:10.1016/S0140-6736(14)60802-3. PMID 25748615.
2. Berenbaum F. (2013). Osteoarthritis as an inflammatory disease (osteoarthritis is not osteoarthrosis!). Osteoarthritis and Cartilage, 21 (1): 16-21. doi:10.1016/j.joca.2012.11.012. PMID 23194896.
3. March, L; Smith, EU; Hoy, DG; Cross, MJ; Sanchez-Riera, L; Blyth, F; Buchbinder, R; Vos, T; Woolf, AD (June 2014). Burden of disability due to musculoskeletal (MSK) disorders. Best practice & research. Clinical rheumatology, 28 (3): 353-66. doi:10.1016/j.berh.2014.08.002. PMID 25481420.
4. Maroudas AI (April 1976). Balance between swelling pressure and collagen tension in normal and degenerate cartilage. Nature, 260 (5554): 808-9. doi:10.1038/260808a0. PMID 1264261.
5. Bollet AJ, Nance JL (July 1966). Biochemical Findings in Normal and Osteoarthritic Articular Cartilage. II. Chondroitin Sulfate Concentration and Chain Length, Water, and Ash Content. J. Clin. Invest., 45 (7): 1170-7. doi:10.1172/JCI105423. PMC 292789. PMID 16695915.
6. Brocklehurst R, Bayliss MT, Maroudas A, Coysh HL, Freeman MA, Revell PA, Ali SY (January 1984). The composition of normal and osteoarthritic articular cartilage from human knee joints. With special reference to unicompartmental replacement and osteotomy of the knee. J. Bone Joint Surg. Am., 66 (1): 95-106. PMID 6690447.
- 12 038283
7. Chou MC, Tsai PH, Huang GS, Lee HS, Lee CH, Lin MH, Lin CY, Chung HW (April 2009). Correlation between the MR T2 value at 4.7 T and relative water content in articular cartilage in experimental osteoarthritis induced by ACL transection. Osteoarthr. Cartil., 17 (4): 441-7. doi: 10.1016/j.joca.2008.09.009. PMID 18990590.
8. Grushko G, Schneiderman R, Maroudas A (1989). Some biochemical and biophysical parameters for the study of the pathogenesis of osteoarthritis: a comparison between the processes of ageing and degeneration in human hip cartilage. Connect. Tissue Res., 19 (2-4): 149-76. doi: 10.3109/03008208909043895. PMID 2805680.
9. Mankin HJ, Thrasher AZ (January 1975). Water content and binding in normal and osteoarthritic human cartilage. J. Bone Joint Surg. Am., 57 (1): 76-80. PMID 1123375.
10. Venn M, Maroudas A (April 1977). Chemical composition and swelling of normal and osteoarthrotic femoral head cartilage. I. Chemical composition. Ann. Rheum. Dis., 36 (2): 121-9. doi:10.1136/ard.36.2.121. PMC 1006646. PMID 856064.
11. Madry H, Luyten FP, Facchini A (2012). Biological aspects of early osteoarthritis. Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc., 20 (3): 407-22. doi: 10.1007/s00167-011-1705-8. PMID 22009557.
12. Englund M, Roemer FW, Hayashi D, Crema MD, Guermazi A (2012). Meniscus pathology, osteoarthritis and the treatment controversy. Nat. Rev. Rheumatol., 8 (7): 412-9. doi:10.1038/nrrheum.2012.69. PMID 22614907.
13. Li G, Yin J, Gao J, Cheng TS, Pavlos NJ, Zhang C, Zheng MH (2013). Subchondral bone in osteoarthritis: insight into risk factors and microstructural changes. Arthritis Research & Therapy, 15 (6): 223. doi:10.1186/ar4405. PMID 24321104.
14. Hill CL, Gale DG, Chaisson CE, Skinner K, Kazis L, Gale ME, Felson DT (2001). Knee effusions, popliteal cysts, and synovial thickening: association with knee pain in osteoarthritis. J. Rheumatol., 28 (6): 1330-7. PMID 11409127.
15. Felson DT, Chaisson CE, Hill CL, Totterman SM, Gale ME, Skinner KM, Kazis L, Gale DR (3 Apr 2001). The association of bone marrow lesions with pain in knee osteoarthritis. Ann Intern Med 134 (7): 541-9. doi: 10.7326/0003-4819-134-7-20010403000007. PMID 11281736
16. Sofat, N., Int. J. Exp. Pathol., 90, 463-479, (2009).
17. Dreier, R., Arthritis Res. Ther., 12, 216, (2010).
18. Tchetina, E. V., Arthritis, 2011, 683970, (2011).
19. van der Kraan, P. M. et.al., Osteoarthritis and cartilage, 20, 223-232, (2012).
20. Saito, A., Suzuki, Y., Ogata, S., Ohtsuki, C. & Tanihara, M., Accelerated bone repair with the use of a synthetic BMP-2-derived peptide and bone-marrow stromal cells. J. Biomed.
- 13 038283
Mater Res., A 72, 77-82, doi:10.1002/jbm.a.30208 (2005).
21. Chen, Y. & Webster, T. J., Increased osteoblast functions in the presence of BMP-7 short peptides for nanostructured biomaterial applications. J. Biomed. Mater Res., A 91, 296304, doi:10.1002/jbm.a.32246 (2009).
22. Caron, Μ. M. et al., Hypertrophic differentiation during chondrogenic differentiation of progenitor cells is stimulated by BMP-2 but suppressed by BMP-7. Osteoarthritis Cartilage 21, 604-613, doi:10.1016/j.joca.2013.01.009 (2013).
23. Caron, Μ. M. J. et al., BAPX1/NKX3.2 ACTS AS A CHONDROCYTE HYPERTROPHY MOLECULAR SWITCH IN OSTEOARTHRITIS. Arthritis & Rheumatology, 67 (2015).
24. Gentilucci, L., De Marco, R. & Cerisoli, L., Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide bonds, and cyclization. Curr. Pharm. Des., 16, 3185-3203 (2010).
25. Blaney Davidson, E. N. et al., Osteoarthritis Cartilage, 23, 478-486 (2015).
26. Glasson, S. S. et al., Nature, 434, 644-648 (2005).
27. Takayama, K. et al., Arthritis Res. Ther., 16, 482 (2014).
28. Hayashi et al., Arthritis Res. Ther., 10, RI 18, (2008).
29. Sekiya, I. et al., J. Orthop. Res., 27, 1088-1092, (2009).
30. Pritzker, К. P. et al., Osteoarthritis Cartilage, 14, 13-29, (2006).
31. Kirkwood, et al., J. Oral Implant., 24: 57-65 (2003).
32. Renner, J. et al., Tissue Engineering, 18: 2581-2589 (2012).
- 14 038283
Перечень последовательностей.
< 110> ЮНИВЕРСИТЕЙТ МААСТРИХТ И АКАДЕМИС ЗИКЕНХЁЙС МААСТРИХТ < 120> СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ОСТЕОАРТРИТА < 130> 338 WO <160> 64 <170> Patentin version 3.5 <210> 1 <211> 47 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 1
Phe lie Asn Pro Glu Thr Vai Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin 15 1015
Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie 20 2530
Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met Vai Vai Arg Ala ser Gly ser His 35 4045 <210> 2 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 2
Phe lie Asn Pro Glu Thr Vai Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin 15 10 15
Leu Asn Ala lie < 210> 3 <211> 20 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 3
Asn Pro Glu Thr Vai Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn 15 10 15
Ala lie ser Vai <210> 4 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 4
Glu Thr Vai Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie
- 15 038283
5 10 15 ser Vai Leu Tyr 20 <210> 5 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 5
Vai Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai
10 15
Leu Tyr Phe Asp < 210> 6 < 211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 6
Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu 15 10 15
Tyr Phe Asp Asp 20 < 210> 7 < 211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 7
Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr 15 10 15
Phe Asp Asp ser < 210> 8 < 211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 8 ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp
10 15
Asp ser ser Asn <210> 9 <211> 20
- 16 038283 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 9
Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser 15 10 15 ser Asn Vai lie <210> 10 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 10
Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn 15 10 15
Vai lie Leu Lys <210> 11 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 11
Leu Asn Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie 15 10 15
Leu Lys Lys Tyr <210> 12 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 12
Ala lie ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys 15 10 15
Lys Tyr Arg Asn 20 <210> 13 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 13 ser Vai Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr
10 15
- 17 038283
Arg Asn Met Vai 20 <210> 14 <211> 20 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 14
Leu Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr Arg Asn 15 10 15
Met Vai Vai Arg 20 <210> 15 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 15
Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met Vai 15 10 15
Vai Arg Ala ser <210> 16 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 16
Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met Vai Vai Arg
10 15
Ala ser Gl у ser 20 <210> 17 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 17 ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met Vai Vai Arg Ala
10 15 ser Glу ser His 20 <210> 18 <211> 40 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens
- 18 038283 <400> 18
Pro Lys Pro ser ser Ala Pro Thr Gin Leu Asn Ala lie ser Vai Leu 15 1015
Tyr Phe Asp Asp ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met 20 2530
Vai Vai Arg Ala ser Gly ser His
3540 <210> 19 <211> 20 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 19 ser Thr Gly ser Lys Gin Arg ser Gin Asn Arg ser Lys Thr Pro Lys
10 15
Asn Gin Glu Ala <210> 20 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 20
Lys Thr Pro Lys Asn Gin Glu Ala Leu Arg Met Ala Asn Vai Ala Glu
10 15
Asn ser ser ser ser ser Asp Gin Arg Gin Ala cys Lys Lys 20 25 30 <210> 21 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 21 ser ser Asp Gin Arg Gin Ala cys Lys Lys His Glu Leu Tyr Vai ser
10 15
Phe Arg Asp Leu 20 <210> 22 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 22
Asp Leu Gly Trp Gin Asp Trp lie lie Ala Pro Glu Gly Tyr Ala Ala
10 15
- 19 038283
Туг Туг cys Glu 20 <210> 23 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 23
Cys Glu Gly Glu Cys Al a Phe Pro Leu Asn 10 ser Tyr Met Asn Al a 15 Thr
1 5
Asn His Ala lie 20 <210> 24 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 24 Ala He Vai Gin Thr Leu Vai Hi s Phe He Asn Pro Glu Thr Vai Pro
1 5 Lys Pro cys cys 20 <210> 25 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 25 cys cys Ala Pro Thr G1 n Leu Asn 10 Ala He ser Vai Leu Tyr 15 Phe Asp
1 5 Asp ser ser Asn 20 <210> 26 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 26 ser ser Asn Vai lie Leu Lys Lys 10 Tyr Arg Asn Met Vai Vai 15 Arg Al a
1 5 10 15
cys G1у cys His 20 <210> 27 <211> 139 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 20 038283 <400> 27
ser 1 Thr Gly ser Lys 5 Gl n Arg ser Gl П Asn 10 Arg ser Lys Thr Pro 15 Lys
Asn Gl n Gl u Al a 20 Leu Arg Met Al a Asn 25 Vai Al a Gl u Asn ser 30 ser ser
Asp Gl n Arg 35 Gl n Al a cys Lys Lys 40 Hi s Gl u Leu Tyr Vai 45 ser Phe Arg
Asp Leu 50 Gly T rp Gl n Asp T rp 55 He He Al a Pro Gl u 60 Gly Tyr Al a Al a
Tyr 65 Tyr cys Gl u Gly Gl U 70 cys Al a Phe Pro Leu 75 Asn ser Tyr Met Asn 80
Al a Thr Asn Hi s Al a 85 He Vai Gl n Thr Leu 90 Vai Hi s Phe He Asn 95 Pro
Gl u Thr Vai Pro 100 Lys Pro cys cys Al a 105 Pro Thr Gl n Leu Asn 110 Al a He
ser Vai Leu 115 Tyr Phe Asp Asp ser 120 ser Asn Vai He Leu 12 5 Lys Lys Tyr
Arg Asn 130 Met Vai Vai Arg Ala 135 cys Gly cys Hi s
<210>
<211>
<212>
<213>
139 БЕЛОК Homo sapiens <400>
ser 1
Thr
Gly ser
Lys 5
Gl n
Arg ser
Gl n
Asn 10
Arg ser
Lys
Thr
Pro 15
Lys
Asn
Gl n
Gl u
Al a 20
Leu
Arg
Met
Al a
Asn 25
Vai
Al a
Gl u
Asn ser 30 ser ser
Asp
Gl n
Arg 35
Gl n
Al a ser
Lys
Lys 40
Hi s
Gl u
Leu
Tyr
Vai 45 ser
Phe
Arg
Asp
Leu 50
Gly
T rp
Gl n
Asp
T rp 55
He
He
Al a
Pro
Gl u 60
Gly
Tyr
Al a
Al a
Tyr 65
Tyr ser
Gl u
Gly
Gl u 70 ser
Al a
Phe
Pro
Leu 75
Asn ser
Tyr
Met
Asn 80
Al a
Thr
Asn
Hi s
Al a 85
He
Vai
Gl n
Thr
Leu 90
Vai
Hi s
Phe
He
Asn 95
Pro
- 21 038283
Glu Thr Vai Pro 100 Lys Pro ser ser Ala 105 Pro Thr G1 n Leu Asn 110 Al a He
ser Vai Leu 115 Tyr Phe Asp Asp ser 120 ser Asn Vai He Leu 12 5 Lys Lys Tyr
Arg Asn 130 Met Vai Vai Arg Ala 135 ser Gly ser Hi s
<210> <211> <212> <213> 29 40 БЕЛОК Homo sapiens
<220>
< 221> прочий_признак < 222> ¢6)..(6) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (8)..(9) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (11)..(12) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (14)..(14) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (16)..(18) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (20)..(31) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (35)..(36) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (40)..(40) <223> Хаа может быть любой природной аминокислотой
<400> 29
Pro Lys Pro 1 ser ser Xaa 5 Pro Xaa Xaa Leu Xaa Xaa 10 lie Xaa Vai Xaa 15
Хаа Хаа Asp Хаа Хаа Хаа Хаа 20
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Met
30
- 22 038283
Vai Vai Xaa Xaa ser Gly ser Xaa
40 <210> 30 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 30
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 <210> 31 <211> 12 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> прочий_признак < 222> (5)..(5) < 223> Xaa может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (7)..(9) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
< 221> прочий_признак < 222> (11)..(12) <223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <400> 31
Туг ser Glu Gly Хаа ser Хаа Хаа Хаа Leu Хаа Хаа
15 10
<210> <211> <212> <213> 32 28 БЕЛОК
Homo sapi ens
<400> 32
Ala Pre > Glu Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe
1 5 10 15
Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala Thr Asn His Ala
20 25
<210> 33 <211> 28 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> прочий_признак < 222> (1)..(3) < 223> Хаа может быть любой природной аминокислотой <220>
- 23 038283
<221> <222> <223> прочий_признак ¢6)..(6) Xaa может быть любой природной аминокислотой
<220> <221> <222> <223> прочий_признак ¢8)..(8) Xaa может быть любой природной аминокислотой
<220> <221> <222> <223> прочий_признак (13)..(13) Хаа может быть любой природной аминокислотой
<220> <221> <222> <223> прочий_признак (15)..(17) Хаа может быть любой природной аминокислотой
<220> <221> <222> <223> прочий_признак (19)..(21) Хаа может быть любой природной аминокислотой
<220> <221> <222> <223> прочий_признак (26)..(26) Хаа может быть любой природной аминокислотой
<400> 33 Xaa Xaa Xaa Gly Tyr Xaa Ala Хаа Туг ser Glu Gly Хаа ser Хаа Хаа
10 15
Xaa Leu Хаа Хаа Хаа Met Asn Ala Thr Xaa His Ala 20 25 <210> 34 <211> 20 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 34
Ala Pro Glu Gly Туг Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe
10 15
Pro Leu Asn ser <210> 35 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 35
Pro Glu Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro 15 10 15
Leu Asn ser Tyr
- 24 038283 <210> 36 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 36
Glu Gly Tyr Ala Ala Туг Tyr ser Glu Gly Glu sen Ala Phe Pro Leu 15 10 15
Asn ser Tyr Met <210> 37 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 37
Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn 15 10 15 ser Tyr Met Asn 20 <210> 38 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 38
Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 15
Tyr Met Asn Ala 20 <210> 39 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 39
Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr 15 10 15
Met Asn Ala Thr <210> 40 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 40
Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met 15 10 15
- 25 038283
Asn Ala Thr Asη <210> 41 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 41
Туг Tyr ser Glu Gl у Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn 15 10 15
Ala Thr Asn His <210> 42 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 42
Tyr ser Glu Glу Glu ser Ala Phe
5
Thr Asn His Ala <210> 43 <211> 12 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 43
Tyr ser Glu Glу Glu ser Ala Phe
5
Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala
15
Pro Leu Asn ser <210> 44 <211> 20 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 44
Ala Pro Glu Glу Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe 15 10 15
Pro Leu Asn ser <210> 45 <211> 19 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 45
- 26 038283
Pro Glu Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro 15 10 15
Leu Asn ser <210> 46 <211> 18 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 46
Glu Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu 15 10 15
Asn ser < 210> 47 < 211> 17 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 47
Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn 15 10 15 ser <210> 48 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 48
Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 15 <210> 49 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 49 ser Phe lie Leu Lys Lys Vai Leu Tyr Asp Arg Vai Asn Asp ser Ala
10 15
Asn lie Tyr ser 20 <210> 50 <211> 15 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens
- 27 038283 <400> 50
Ala Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 15 <210> 51 <211> 14 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 51
Ala Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 <210> 52 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 52
Tyr Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 <210> 53 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 53
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser 15 10 <210> 54 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 54
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr 15 10 <210> 55 <211> 14 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 55
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met 15 10 <210> 56 <211> 15 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 56
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn
- 28 038283
10 15 <210> 57 <211> 16 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 57
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala 15 10 15 <210> 58 <211> 17 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 58
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala
10 15
Thr <210> 59 <211> 18 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 59
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala 15 10 15
Thr Asn <210> 60 <211> 19 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 60
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala 15 10 15
Thr Asn His <210> 61 <211> 20 <212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400> 61
Tyr ser Glu Gly Glu ser Ala Phe Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala 15 10 15
- 29 038283
Thr Asn Hi s Al a
20
<210> 62
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapi ens
<400> 62
Ala Pro Glu Gly Tyr Al a Ala Tyr Tyr ser G1 u Gly G1 u ser Al a Phe
1 5 10 15
Pro Leu Asn ser Tyr Met Asn Al a Thr Asn Hi s Al a
20 25
<210> 63
<211> 27
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapi ens
<400> 63
Pro Glu Gly Tyr Ala Al a Tyr Tyr ser G1 U Gly G1 u ser Al a Phe Pro
1 5 10 15
Leu Asn ser Tyr Met Asn Ala Thr Asn Hi s Al a
20 25
<210> 64
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapi ens
<400> 64
Glu Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr ser G1 u Gly G1 u ser Al a Phe Pro Leu
1 5 10 15
Asn ser Tyr Met Asn Al a Thr Asn Hi s Al a
20 25
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (20)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение пептида при лечении, облегчении или предупреждении остеоартрита, причем пептид состоит из аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 18 или ее аналога, причем аналог представляет собой пептид, состоящий из аминокислотной последовательности согласно формуле 1 (SEQ ID NO: 29) или ее фрагмента, состоящего по меньшей мере из 10 последовательных аминокислот SEQ ID NO: 18 или аминокислотной последовательности согласно формуле 1, где формула 1 представляет собой
    PKPSSX1 РХ2ХЗ LX4X5 1X6 VX7X8 X9DX10X11 Х12 Х13 X14X15XI6
    Х17Х18Х19Х20Х21 Μ V V Х22 Х23 S G S Х24 (SEQ ID NO: 29), .
    где
    X1 = А или V,
    Х2 = Т, или D, или Е,
    Х3 = Q, или D, или K, или S,
    Х4 = N, или D, или Е, или Н,
    Х5 = А, или D, или S,
    Х6 = S, или I, или L, или М, или F, или Y, или Е, или Н, или K, или Q, или R, или D,
    Х7 = L, или Е, или K, или Т, или М, или R,
    Х8 = Y, или А, или D, или Е, или Н, или K, или S, или Т,
    Х9 = F, или Н, или А, или D, или Е, или K, или Q, или R, или Y,
    X10 = D, или I, или L, или Е, или N, или S, или Т,
    X11 = S, или D, или Е, или N, или R,
    Х12 = S, или D, или Е, или K, или N, или Т,
    X13 = N, или Е, или Q, или R,
    - 30 038283
    Х14 = V, или А, или D, или N, или R, или Т, или М, или Y, или Н,
    X15 = I, или А, или D, или Е, или K, или N, или Q, или R, или S, или Т, или V,
    Х16 = L, или А, или Е, или K, или Q,
    Х17 = K, или D, или Е, или G, или Q, или R, или W,
    X18 = K, или А, или D, или Е, или Н, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или V, или М,
    X19 = Y, или D, или Е, или Н, или K, или Q, или I, или R,
    Х20 = R, или D, или Е, или K, или N, или S,
    Х21 = N или D,
    Х22 = R, или Е, или S, или D, или K, или Q, или L,
    Х23 = А, или Е, или D, или S,
    Х24 = Н или R.
  2. 2. Применение по п.1, причем указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6-17.
  3. 3. Применение по п.1 или 2, причем пептид выбирают из группы, включающей линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды.
  4. 4. Применение по любому из пп.1-3, причем лечение включает введение по меньшей мере одного второго пептида, причем указанный второй пептид имеет от 12 до 28 аминокислот в длину и включает аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 или ее вариант согласно формуле 2 (SEQ ID NO: 31), причем аминокислотная последовательность указанного второго пептида содержится в SEQ ID NO: 32 или ее варианте согласно формуле 3 (SEQ ID NO: 33).
  5. 5. Применение по п.4, причем вариант согласно SEQ ID NO: 32 включает 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 замен аминокислоты, выбранных из группы, включающей замены Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z12 и Z13, где
    Z1 = А, или I, или L, или М, или Y, или V, или Е, или Н, или K, или Q, или R,
    Z2 = Р, или Y, или М,
    Z3 = Е, или R, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или L, или М, или V,
    Z4 = А, или Е, или Q, или R, или S,
    Z5 = Y, или N, или D,
    Z6 = Е, или А, или Q,
    Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
    Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
    Z9 = Р или М,
    Z10 = N, или А, или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V,
    Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т,
    Z12 = Y, или Н, или D, или G, или Н, или N, или R, или S, или Т, или при этом
    Z13 = N, или F, или W, или Y, или Н, или K, или R.
  6. 6. Применение по п.4 или 5, причем вариант согласно SEQ ID NO: 31 включает 5, 4, 3, 2 или 1 замен аминокислоты, выбранных из группы, включающей замены Z6, Z7, Z8, Z9, Z10 и Z11, где
    Z6 = Е, или А, или Q,
    Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
    Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
    Z9 = Р или М,
    Z10 = N, или А, или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V, или где
    Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т.
  7. 7. Применение по любому из пп.4-6, причем второй пептид включает аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 30.
  8. 8. Применение по любому из пп.4-7, причем аминокислотная последовательность второго пептида полностью содержится в SEQ ID NO: 32.
  9. 9. Применение по любому из пп.4-8, причем второй пептид выбирают из группы, включающей линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды.
  10. 10. Применение по любому из пп.4-9, причем второй пептид состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 34-48 и SEQ ID NO: 50-64.
  11. 11. Способ для лечения, облегчения или предупреждения остеоартрита (АО), причем указанный способ включает введение пептида, где указанный пептид состоит из аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 18 или ее аналога, причем аналог представляет собой пептид, состоящий из аминокислотной последовательности согласно формуле 1 (SEQ ID NO: 29) или ее фрагмента, состоящего по меньшей мере из 10 последовательных аминокислот SEQ ID NO: 18 или аминокислотной последовательности согласно формуле 1, где формула 1 представляет собой
    - 31 038283
    PKPSSX1 PX2X3 LX4X5 1X6 VX7X8 X9DX10X11 X12 X13 X14X15XI6
    X17X18X19X20X21 Μ V V X22 X23 S G S X24 (SEQ ID NO: 29), .
    где
    X1 = А или V,
    Х2 = Т, или D, или Е,
    Х3 = Q, или D, или K, или S,
    Х4 = N, или D, или Е, или Н,
    Х5 = А, или D, или S,
    Х6 = S, или I, или L, или М, или F, или Y, или Е, или Н, или K, или Q, или R, или D,
    Х7 = L, или Е, или K, или Т, или М, или R,
    Х8 = Y, или А, или D, или Е, или Н, или K, или S, или Т,
    Х9 = F, или Н, или А, или D, или Е, или K, или Q, или R, или Y,
    X10 = D, или I, или L, или Е, или N, или S, или Т,
    X11 = S, или D, или Е, или N, или R,
    Х12 = S, или D, или Е, или K, или N, или Т,
    Х13 = N, или Е, или Q, или R,
    Х14 = V, или А, или D, или N, или R, или Т, или М, или Y, или Н,
    X15 = I, или А, или D, или Е, или K, или N, или Q, или R, или S, или Т, или V,
    X16 = L, или А, или Е, или K, или Q,
    X17 = K, или D, или Е, или G, или Q, или R, или W,
    X18 = K, или А, или D, или Е, или Н, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или V, или М,
    Х19 = Y, или D, или Е, или Н, или K, или Q, или I, или R,
    Х20 = R, или D, или Е, или K, или N, или S,
    Х21 = N или D,
    Х22 = R, или Е, или S, или D, или K, или Q, или L,
    Х23 = А, или Е, или D, или S,
    Х24 = Н или R.
  12. 12. Способ по п.11, причем указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6-17.
  13. 13. Способ по п.11 или 12, причем пептид выбирают из группы, включающей линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды.
  14. 14. Способ по любому из пп.11-13, причем лечение включает введение по меньшей мере одного второго пептида, причем указанный второй пептид имеет от 12 до 28 аминокислот в длину и включает аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 30 или ее вариант согласно формуле 2 (SEQ ID NO: 31), причем аминокислотная последовательность указанного второго пептида содержится в SEQ ID NO: 32 или ее варианте согласно формуле 3 (SEQ ID NO: 33).
  15. 15. Способ по п.14, причем вариант согласно SEQ ID NO: 32 включает 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 замен аминокислоты, выбранных из группы, включающей замены Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z12 и Z13, где
    Z1 = А, или I, или L, или М, или Y, или V, или Е, или Н, или K, или Q, или R,
    Z2 = Р, или Y, или М,
    Z3 = Е, или R, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или S, или Т, или I, или L, или М, или V,
    Z4 = А, или Е, или Q, или R, или S,
    Z5 = Y, или N, или D,
    Z6 = Е, или А, или Q,
    Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
    Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
    Z9 = Р или М,
    Z10 = N, или А, или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V,
    Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т,
    Z12 = Y, или Н, или D, или G, или Н, или N, или R, или S, или Т, или при этом
    Z13 = N, или F, или W, или Y, или Н, или K, или R.
  16. 16. Способ по п.14 или 15, причем вариант согласно SEQ ID NO: 31 включает 5, 4, 3, 2 или 1 замен аминокислоты, выбранных из группы, включающей замены Z6, Z7, Z8, Z9, Z10 и Z11, где
    Z6 = Е, или А, или Q,
    Z7 = А, или D, или Е, или Н, или K, или S,
    Z8 = F, или А, или D, или Е, или Н, или Q, или R, или S,
    Z9 = Р или М,
    Z10 = N, или А, или D, или S, или Т, или Е, или Q, или R, или I, или V, или где
    Z11 = S, или А, или D, или Е, или Н, или K, или N, или Р, или Q, или Т.
    - 32 038283
  17. 17. Способ по любому из пп.14-16, причем второй пептид включает аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 30.
  18. 18. Способ по любому из пп.14-17, причем аминокислотная последовательность второго пептида полностью содержится в SEQ ID NO: 32.
  19. 19. Способ по любому из пп.14-18, причем второй пептид выбирают из группы, включающей линейные пептиды, линейные ретроинверсо-пептиды, ретроинверсо-пептиды, циклические пептиды, однопетлевые пептиды и двухпетлевые пептиды.
  20. 20. Способ по любому из пп.14-19, причем второй пептид состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 34-48 и SEQ ID NO: 50-64.
EA201892322A 2016-04-13 2017-03-31 Способ лечения или предупреждения остеоартрита EA038283B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16165106 2016-04-13
PCT/EP2017/057720 WO2017178253A1 (en) 2016-04-13 2017-03-31 Method for the treatment or prevention of osteoarthritis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201892322A1 EA201892322A1 (ru) 2019-05-31
EA038283B1 true EA038283B1 (ru) 2021-08-04

Family

ID=55755390

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201892322A EA038283B1 (ru) 2016-04-13 2017-03-31 Способ лечения или предупреждения остеоартрита

Country Status (8)

Country Link
US (2) US10639352B2 (ru)
EP (1) EP3442559B1 (ru)
AU (1) AU2017249631A1 (ru)
BR (1) BR112018071215A2 (ru)
CA (1) CA3020632A1 (ru)
EA (1) EA038283B1 (ru)
WO (1) WO2017178253A1 (ru)
ZA (1) ZA201806807B (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112018071215A2 (pt) * 2016-04-13 2019-02-19 Universiteit Maastricht peptídeo para uso no tratamento, melhora ou prevenção de osteoartrite
CN110092816B (zh) * 2018-01-29 2023-08-01 上海市第一人民医院 预防和治疗纤维化的小分子多肽及其应用
US20210401937A1 (en) * 2018-10-31 2021-12-30 The Regents Of The University Of California Composition and method for arthritis
KR20230064952A (ko) * 2021-11-04 2023-05-11 (주)케어젠 생리 활성을 갖는 펩타이드 및 그의 용도

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009154330A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 Industry Foundation Of Chonnam National University An synthetic peptide containing bone forming peptide 2(bfp 2) for stimulating osteoblast differentiation, and pharmaceutical composition comprising the synthetic peptide
WO2011163398A2 (en) * 2010-06-25 2011-12-29 Nanovis, Inc. Biomimetic peptides for bone augmentation

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5739307A (en) * 1995-08-28 1998-04-14 Washington University Polynucleotide encoding neurturin neurotrophic factor
EP2319526A1 (en) * 2004-06-17 2011-05-11 Thrasos Therapeutics, Inc. Tdf-related compounds and analogs thereof
BR112018071215A2 (pt) * 2016-04-13 2019-02-19 Universiteit Maastricht peptídeo para uso no tratamento, melhora ou prevenção de osteoartrite

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009154330A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 Industry Foundation Of Chonnam National University An synthetic peptide containing bone forming peptide 2(bfp 2) for stimulating osteoblast differentiation, and pharmaceutical composition comprising the synthetic peptide
WO2011163398A2 (en) * 2010-06-25 2011-12-29 Nanovis, Inc. Biomimetic peptides for bone augmentation

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ATSUHIRO SAITO, YOSHIHISA SUZUKI, SHIN-ICHI OGATA, CHIKARA OHTSUKI, MASAO TANIHARA: "Accelerated bone repair with the use of a synthetic BMP-2-derived peptide and bone-marrow stromal cells", JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH, vol. 72A, no. 1, 1 January 2005 (2005-01-01), pages 77 - 82, XP055177958, ISSN: 00219304, DOI: 10.1002/jbm.a.30208 *
HAYASHI MASAYA; MUNETA TAKESHI; JU YOUNG-JIN; MOCHIZUKI TOMOYUKI; SEKIYA ICHIRO: "Weekly intra-articular injections of bone morphogenetic protein-7 inhibits osteoarthritis progression", ARTHRITIS RESEARCH AND THERAPY, BIOMED CENTRAL, LONDON, GB, vol. 10, no. 5, 30 September 2008 (2008-09-30), GB, pages R118, XP021046821, ISSN: 1478-6354, DOI: 10.1186/ar2521 *
HUNTER DAVID J; PIKE MARILYN C; JONAS BETH L; KISSIN EUGENE; KROP JULIE; MCALINDON TIM: "Phase 1 safety and tolerability study of BMP-7 in symptomatic knee osteoarthritis", BMC MUSCULOSKELETAL DISORDERS, BIOMED CENTRAL, LONDON, GB, vol. 11, no. 1, 10 October 2010 (2010-10-10), GB, pages 232, XP021076295, ISSN: 1471-2474, DOI: 10.1186/1471-2474-11-232 *
M.M.J. CARON, P.J. EMANS, A. CREMERS, D.A.M. SURTEL, M.M.E. COOLSEN, L.W. VAN RHIJN, T.J.M. WELTING: "Hypertrophic differentiation during chondrogenic differentiation of progenitor cells is stimulated by BMP-2 but suppressed by BMP-7", OSTEOARTHRITIS AND CARTILAGE, BAILLIERE TINDALL, LONDON., GB, vol. 21, no. 4, 1 April 2013 (2013-04-01), GB, pages 604 - 613, XP055293553, ISSN: 1063-4584, DOI: 10.1016/j.joca.2013.01.009 *
YUPENG CHEN, THOMAS J. WEBSTER: "Increased osteoblast functions in the presence of BMP-7 short peptides for nanostructured biomaterial applications", JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH PART A, JOHN WILEY & SONS, US, vol. 91A, no. 1, 1 October 2009 (2009-10-01), US, pages 296 - 304, XP055293547, ISSN: 1549-3296, DOI: 10.1002/jbm.a.32246 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA3020632A1 (en) 2017-10-19
ZA201806807B (en) 2023-04-26
EP3442559A1 (en) 2019-02-20
BR112018071215A2 (pt) 2019-02-19
US10639352B2 (en) 2020-05-05
WO2017178253A1 (en) 2017-10-19
AU2017249631A1 (en) 2018-11-01
US20190125838A1 (en) 2019-05-02
US20200261539A1 (en) 2020-08-20
US11141462B2 (en) 2021-10-12
EP3442559B1 (en) 2024-05-01
EA201892322A1 (ru) 2019-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11141462B2 (en) Method for the treatment or prevention of osteoarthritis
US11141461B2 (en) Method for the treatment or prevention of osteoarthritis
CA2698766C (en) Use of gip for the treatment of disorders associated with dysfunctional synaptic transmission
DK172503B1 (da) Gen, som koder for BMP-3-protein, vektor indeholdende et sådant gen, celle transformeret med en sådan vektor, BMP-3-protein
CA2698780C (en) Use of glp-1 analogues for the treatment of disorders associated with dysfunctional synaptic transmission
CN101370821B (zh) 新型肽及其用途
KR101029705B1 (ko) 신규 펩타이드 및 그 용도
CN102482323B (zh) 新型肽及其应用
KR101736280B1 (ko) 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP6700182B2 (ja) 軟骨及び椎間板組織病理の治療のためのポリペプチド及び組成物
US20230272045A1 (en) Il-1 receptor antagonist (il-1 ra) fusion proteins binding to the extracellular matrix
US20240009350A1 (en) Methods for improving mechanical properties of a tissue or for regenerating an injured or diseased tissue