CN211689106U - 一种微载体细胞培养袋 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种适用于微载体培养的微载体细胞培养袋，所述微载体细胞培养袋包括培养袋袋体、进样管路、取样管路、收液管路、微载体细胞收获管路及管路上配件。所述袋体上端边缘同轴向间隔固装有2个与袋体内部相通的管路，左侧为进样管路，右侧为取样管路，两个管路上均设置有控制管路开闭的软管夹；进样管路上连有玻璃接头；取样管路末端设有鲁尔接头；所述袋体的底部与袋体内部相连接设置一个收液管路和一个微载体细胞收获管路，两个管路上设有控制管路开闭的开关阀，且收液管路中设置了阻拦微载体的滤网。本实用新型的微载体细胞培养袋使用灵活，既可收获上清也可收获微载体，且管路不伸入袋内，减少对细胞的机械损伤。

Description

一种微载体细胞培养袋

技术领域

本实用新型涉及细胞生物技术领域，涉及细胞培养器，尤其是一种微载体细胞培养袋。

背景技术

细胞培养袋是一种安全且高效的细胞体外密闭培养***。与传统使用细胞培养瓶相比，可获得更多数量的细胞，封闭式培养降低细胞污染和操作人员污染的几率，培养袋中气体交换面积大，有利于在有限的培养空间大量培养，培养袋材质透明柔韧，便于在显微镜下直接观察细胞状态，因此细胞培养袋是目前进行体外细胞扩增培养的较好选择。

微载体培养技术是一种常用的细胞培养技术，微载体是直径大约60-300μm的球状微小颗粒，其材质适合细胞粘附和生长，因此应用微载体实现了贴壁细胞的悬浮培养。在大规模微载体培养时可使用生物反应器完成，一般培养体积可从5升到上千升。但在小规模微载体培养时尚无合适的培养容器，如果使用常规培养瓶时，需要对培养表面进行硅化处理，以防止细胞粘附到培养瓶上而不贴壁在微载体上，硅化剂具有毒性和挥发性，使得操作十分不方便。

细胞培养袋是小规模微载体培养的一种潜在选择，但现有细胞培养袋多为悬浮细胞培养设计，培养袋上各管路均伸入袋内，例如专利（CN 205576162 U）和专利（CN202519255 U）。这种设计对微载体培养是不利的，由于微载体体积和密度均较大，在液体晃动时与管路的袋内部分碰撞容易损伤微载体表面的细胞。其次，在培养期间需要经常取样观察细胞生长情况，现有细胞培养袋的管路多为悬于培养袋中间，不方便微载体取样；另外，如果想收获微载体细胞，现有细胞培养袋的管路深入袋体内部，难以完全收获，因此，现有的细胞培养袋虽然适于悬浮细胞培养，但在微载体培养时存在诸多不便之处。

细胞培养技术的工艺要求比较严格，必须保持完全的无菌操作，避免微生物及外界其他有害因素的影响。细胞培养技术的防止污染措施是关键，即便是完备的实验室，稍有不慎，也会有导致污染的可能，因此所有操作都要尽最大可能的保证无菌。对于微载体培养技术，由于难以在倒置显微镜下直接观察到细胞生长状态，因此，需要在培养过程中每天或每隔几天取样，通过染色等方法监测细胞生长情况。同时，微载体培养的时间一般较长，特别是需要收获微载体细胞培养上清时，为此，换液和补液也是必需的操作。在培养结束时，根据需要可能收集培养上清，也可能收集微载体细胞。为满足微载体细胞培养的需要，我们设计一种微载体细胞培养袋，将其运用于细胞生物领域的微载体细胞培养。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种适合微载体培养的微载体细胞培养袋。

为了使细胞培养袋适用于微载体培养，本实用新型提供了如下技术方案：

本实用新型的一种微载体细胞培养袋，主要结构包括：培养袋袋体、进样管路、取样管路、收液管路及微载体细胞收获管路。

本实用新型所述微载体细胞培养袋的特征在于：袋体四边热合制成密封边缘。另外，为了收液时方便，本实用新型在袋体上端密封边缘对称制有定位孔，当进行收液或微载体收获时，可以将微载体细胞培养袋提起，通过定位孔固定后，让液体在重力下自然回收。

本实用新型的微载体细胞培养袋特征还在于：在袋体上端边缘和下端边缘分别同轴向间隔固装有2个圆筒形管路，上端边缘的管路为进样管路和取样管路；下端边缘的管路为收液管路和微载体收获管路。这些管路均优选采用药用级材料制成，例如硅胶管（可使用内径3/16、外径1/16、壁厚1/16英寸），并且管路可以与蠕动泵、储液瓶等连接使用。

本实用新型的微载体细胞培养袋特征还在于：所述的进样管路，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且进样管路上设有软管夹，及玻璃接头和空气滤器。设置软管夹是用来控制管路开放和闭合；设置玻璃接头可以方便与带有液体出入管路的储液瓶连接，并且玻璃接头连接方便，不仅可以在超净台中操作，而且可以将玻璃接头在酒精灯上过火后更换，最大程度避免污染发生的可能。空气滤器的滤膜是可以除菌的0.2μm滤器，作用是保持玻璃接头一侧的无菌状态。

本实用新型的微载体细胞培养袋特征还在于：所述取样管路，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且取样管路上设有软管夹，及管路外端部连接鲁尔接头，末端安装密封端帽。设置软管夹是为了控制管路开放与闭合；设置鲁尔接头可以方便与带有鲁尔接头的无菌注射器配套使用，进行取样操作时，将软管夹打开，将末端密封端帽拧开，随用随取，且此取样管路只用来取样，只出不进，取样完毕，及时将软管夹关闭，不会存在污染问题。

本实用新型的微载体细胞培养袋特征还在于：所述收液管路位于袋体下端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且收液管路上设置有开关阀、管路内设有滤网，底端安装公母接头。其中滤网的孔径大于细胞直径且小于微载体直径，以保证换液时可以将单细胞换出但截留微载体，优选滤网孔径20~200μm，更优选滤网孔径30~100μm。设置开关阀是用来控制管路中溶液的流通状态；设置滤网是为了微载体细胞在培养过程，需要换液时，收集上清液使用，滤网可以完全地拦截微载体细胞，使得溶液被收集，而微载体细胞则继续留在培养袋中；管路末端设置公母接头，为了方便此接头能够与带公母接头管路的储液瓶相连接，使得收集的溶液在重力作用流进瓶中，收集完毕，将瓶子撤掉，末端公母接头封闭好。

本实用新型的微载体细胞培养袋特征还在于：所述微载体细胞收获管路位于袋体下端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且微载体细胞收获管路内设置开关阀和底端安装公母接头。设置开关阀，是为了控制管路的开放与闭合；管路末端设置公母接头，使用时将开关阀打开，末端公母接头与带有公母接头管路的储液瓶相连接，使得微载体细胞在重力作用下流进瓶中，收集完毕，将储液瓶撤掉，末端公母接头封闭好。

本实用新型所达到的有益效果：

1、正常培养时，所有管路闭合，形成封闭的无菌环境，减少污染可能性；

2、进样管路、收液管路和微载体收获管路均可以与储液瓶连接成密闭***，操作方便且防止发生污染；

3、进样管路设置的玻璃接头利于多次进样的无菌操作，最大限度避免污染；

4、取样端口的鲁尔接头可与带鲁尔口的注射器相连接，进行取样，取样口只出不进，安全、方便；

5、既可以通过带滤网的收液管路收获细胞培养上清，也可以通过不带滤网的微载体细胞收获管路收获微载体细胞，适用性广；

6、所有管路均不伸入袋体内部，适合与摇床联合使用进行微载体培养；

7、如果培养同一种细胞，可以重复使用，降低成本。

附图说明

图1是本实用新型的结构示意图。1—培养袋袋体、2—进样管路、3—取样管路、4—收液管路、5—微载体细胞收获管路、6—密封边缘、7—定位孔、8和11—软管夹、9—玻璃接头、10—空气滤器、12—鲁尔接头、13—密封端帽、14和17—开关阀、15—滤网、16和18—公母接头。

具体实施方式

下面结合附图进一步说明本实用新型的技术方案、特点及功效，但应当说明的是，这些实施方式并非对本实用新型的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本实用新型的保护范围之内。

一种微载体细胞培养袋，如图1所示，所述培养袋包括袋体1和多个进出液及取样管路，所述袋体四边热合制成密封边缘6，在袋体上部的边缘间隔安装有进样管路2和取样管路3，取样管路可连接带有鲁尔接头的注射器，随用随连接，左侧接种管路可连接管路及瓶子使用，用于接种细胞悬液和微载体细胞液以及补充培养基使用，顶端的空气滤器10可以用于排气；袋体底端下部设置收液管路4和微载体细胞收获管路5，均设置有开关阀，右侧中有滤网15，用于微载体细胞液中溶液排出使用，多个进出液管路均与袋体内部相连通设置。

在本实施例中，为了便于培养袋的挂放与排出废液及收获溶液时的使用，所述袋体的上部的密封边缘对称制有定位孔7。

本细胞培养袋上端左侧设置了进样管路2（连接有软管夹8、玻璃接头9和空气滤器10），使用时需搭配带有玻璃接头的管路及储液瓶使用，接种微载体细胞或补充培养基时，需将管路置于蠕动泵上，打开软管夹8，使溶液缓慢流入细胞培养袋中，加料完毕后，将软管夹8夹紧靠近细胞培养袋处的管路，操作方便，随时可进行补液。

本细胞培养袋上端右侧设置了取样管路3，底端连接鲁尔接头12和端帽13，使用时将端帽13拧下来，用带有鲁尔接头的无菌注射器直接相连，打开软管夹11，对袋中微载体细胞进行取样，取样完毕后，闭合软管夹11，且此管路只进不出，避免污染，取样方便，随用随取。

在本实施例中，细胞培养袋下部固装有收液管路4和微载体收获管路5。收液管路4中装有开关阀14和滤网15，底端连有公母接头16，当需要收液或换液时，先将管路末端的公母接头16与带有公母接头管路的储液瓶连接，再将开关阀14打开，培养袋袋体挂放起来，使得溶液排出，而微载体细胞被拦截继续留在细胞培养袋中，排出时采用全封闭管路，不会造成细胞液的损失。然后再通过进样管路补充新鲜培养基，继续培养。在微载体收获管路5中设有开关阀17和公母接头18。在需要收获微载体时，先将管路末端的公母接头18与带有公母接头管路的储液瓶连接，再将开关阀17打开，培养袋袋体挂放起来，能够将微载体细胞液全部收获。

收获了微载体细胞和培养液的微载体细胞培养袋内仍为无菌状态，如需继续培养同样的细胞，可重新向袋内接种微载体和细胞，实现培养袋的重复利用，达到降低成本和利于环保的效果。

Claims (4)

1.一种微载体细胞培养袋，其特征在于包括袋体（1）、进样管路（2）、取样管路（3）、收液管路（4）和微载体细胞收获管路（5）组成，其中进样管路（2）位于带有定位孔的袋体上端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且进样管路上设有软管夹（8），及玻璃接头（9）和空气滤器（10），所述取样管路（3）位于带有定位孔的袋体上端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且取样管路上设有软管夹（11），及管路外端部连接鲁尔接头（12），末端安装密封端帽（13）。

2.根据权利要求1所述的一种微载体细胞培养袋，其特征在于所述袋体（1）四边热合制成密封边缘（6），袋体上端的密封边缘对称制有定位孔（7）。

3.根据权利要求1所述的一种微载体细胞培养袋，其特征在于：所述收液管路（4）位于袋体下端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且收液管路上设置有开关阀（14）、管路内设有滤网（15），底端安装公母接头（16）。

4.根据权利要求1所述的一种微载体细胞培养袋，其特征在于：所述微载体细胞收获管路（5）位于袋体下端，与袋体内腔相通但不伸入内部，并且微载体细胞收获管路内设置开关阀（17）和底端安装公母接头（18）。

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