CN1175806C - 一种以云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种以云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂,用现有化学和生物技术提取、分离,确定有效部位、有效成分,具有明显的清热解毒、抗菌消炎疗效,并具有明显的扶正培本功效,主治急慢性气管炎、咽炎、咽喉炎、扁桃炎、牙周炎、牙龈炎及无名肿毒等症。在药理活性筛选的指导下,本发明提供的制剂每单位剂量由20-60毫克提取物精粉和余量的药用辅剂制成医学上可接受的医药制剂。
Description
发明所属领域:
本发明涉及一种以药用昆虫云南琵琶甲提取物作为主要成份治疗上呼吸道感染药用制剂,对急慢性支气管炎、扁桃体炎、咽喉、咽喉炎、炎牙周炎、牙龈炎及无名肿毒等症有疗效的药物。
背景技术:
从世界范围看,昆虫药是天然动物药中开发、利用较成功的一个分支。九十年代以来,美国、法国、韩国、日本等国家对药用昆虫的研究最为关注、最为活跃。他们认为,昆虫是至今地球上未被人们利用的最大资源、是二十一世纪的主要药用资源之一。
云南琵琶甲是本发明人从少数民族走访发现的一个世代相传的验方,经我们科学鉴定的一个新种,它属于鞘翅目(Coeoptera)、拟步行虫科(Tenebrionidae)、琵琶甲族(Blaptini)、琵琶甲属(Blaps Fab)、日本琵琶甲(Blaps japonensis Mars.)云南亚种,因为琵琶甲属的昆虫至今在云南只发现一种,为了称谓方便,特命名为云南琵琶甲(Blaps japonensisyunnanensis Mars.)。
我们对云南琵琶甲的研究开发工作,紧紧围绕:1、从分子水平上,揭示天然药物有效成分的构效关系;2、从药理学角度,探索有效成分的量效关系,中药西制,发展各种先进实用的剂型。
通过检索及查阅国内外资料表明,没有其他人对此昆虫进行科学研究,我们研制的新药,国内外迄今尚无报道。
发明内容:
本发明提供一种以云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂,它以云南琵琶甲为原料,用化学和生物技术提取、分离,确定有效部位、有效成分,具有明显的清热解毒、抗菌消炎疗效,并具有明显的扶正培本功效。
其特征在于:
(1)、选用滇产云南琵琶甲,在常温至45℃下干燥、粉碎、过20-40目筛,加30-90%低级脂肪醇为溶剂提取,至少提取3次,过滤后合并过滤液,在常温至45℃、0.06至0.07MPa减压、浓缩至膏状,用色谱方法纯化,分离出活性成分,得提取物精粉,按重量计提取物含有醌类衍生物40-98%;
(2)、每单位剂量由20-60毫克提取物精粉和余量的药用辅剂制成医学上可接受的医药制剂。
上述抗菌消炎制剂,可以配制成为胶囊、片剂或粉剂。
上述制剂,以30-70%乙醇为溶剂提取时,温度应在常温至37℃,若以30-70%正丁醇为溶剂提取时,温度在常温至45℃,若以30-70%正己醇为溶剂提取时,温度为常温至40℃。
经对云南琵琶甲所含抗菌消炎有效成份的分离、纯化、理化特性、分子结构鉴定、抗炎免疫抑菌效果、毒理实验、制剂的制备工艺、质量检测标准、产品剂型、疗效反馈及临床观察、昆虫资源的科学鉴定、昆虫资源人工饲养等内容进行了较深入的***的研究证实,我们研制的制剂具有明显的清热解毒、抗菌消炎疗效,并具有明显的扶正培本功效。主要功效养阴清热、抗菌消炎、止咳化痰,特别适合于上呼吸感染患者。
现代医学理论研究证实,某些清热解毒药具有直接抗肿瘤作用,本制剂对无名肿毒疗效显著,加上它的扶正培本功效,我们研制的这种新药,在天然药物中是一种多功效新药,还未见到类似成果的报道。
下面通过主要的毒理学、药效学及临床观察实验结果进一步说明本药用制剂的安全性和有效性。
1、云南琵琶甲提取物抑菌实验(平皿法):
1-1培养基---采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的Muller-Hinton琼脂培养基。
1-2对照品---选用哈尔滨中药二厂出产的双黄莲粉针剂。
1-3供试菌株---共选用了八种:金黄色葡萄球菌(Staphyloccus albus,ATCC-25923)、绿脓杆菌(Pseudomonas aerusinosa,ATCC--27853)、大肠杆菌(Escherichia coli ATCC--25922)、结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)甲型溶血性链球菌、(S.hemolyticus)以及痢疾杆菌、宋氏痢疾杆菌。其中金黄色葡萄球菌(Staphyloccus albus,ATCC-25923)、绿脓杆菌(Pseudomonasaerusinosa,ATCC--27853)、大肠杆菌(Escherichia coli,ATCC--25922)为美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的菌株,其余五种为云南省微生物研究所提供的菌种。
1-4试验结果---抑菌试验结果表明,云南琵琶甲提取物对八种菌株均有明显地抑制作用,最低抑菌浓度(MIC)在0.0417g%-0.1250g%之间,小于对照品双黄莲粉针剂(MIC:一般在0.1250g%-0.5000g%之间)。
供试八种菌株包括了革兰氏阴性菌,革兰氏阳性菌,杆菌和球菌,均为新型抗生素筛选常用的指示菌,所以从抑菌试验结果可以初步表明,云南琵琶甲提取物具有广谱抗菌活性。因此云南琵琶甲提取物具有清热解毒、抗菌消炎的功效。
2、毒理学试验
毒理学试验包括急毒、长毒、特殊毒性试验(致癌试验、生殖毒性试验、致突变试验)三个部份,由指定单位昆明医学院天然药物药理重点实验室完成。特殊毒性试验要回答的是潜在性危害问题,对用药者及下一代有无致癌、致畸、致突变的危险。我们研制的是中药二类新药,按规定特殊毒性试验可以不做,报送说明资料即可。云南琵琶甲是云南省少数民族尤其是彝族世世代代袭用的验方,至少有几百年使用经验,没有发现任何毒副作用,非常安全。
2-1急毒试验:
实验动物----选体重为18-20.0g健康的ICR小鼠20只,雌雄各半用于进行预试验,探索该提取物的中毒剂量及死亡剂量。预试结果证明,该药剂毒性很低,测不出半数至死量(LD50),故按规定采用最大耐受量试验(M.T.D)。
最大耐受量试验---选体重为18-20.0g健康的ICR小鼠20只,雌雄各半用于进行最大耐受量试验,按常规设计要求灌胃给药后,计算得最大耐受量(M.T.D)。
毒理试验结果---试验结果最大耐受量为30.3g/Kg体重/日,云南琵琶甲毒性很低,该剂量为临床推荐量的797倍。在给药后8小时、24小时直至到第七天的观察中,未见动物出现中毒反应。在15天的连续观察中,试验动物情况良好,活动、食欲、粪便均未见异常,口、眼、鼻、耳无异常分泌物。体重增长也属正常范围,平均每天每只增长0.5克左右。在15天的连续观察后,将小鼠解剖,内脏完全正常。毒理结论认为,以云南琵琶甲提取物为原料的药用制剂,是一种少有的安全可靠的新药。
1-2长期毒性试验:
长期毒性试验的主要目的是观察动物因长期连续给药所产生的毒性反应,以确定该药的毒性和临床用药安全剂量。
实验动物----选了两种动物:1、狗,年龄5个月。每剂量组雌雄各2只;2、大鼠,鼠龄7周,体重为120-150.0g健康的SD系大鼠,每剂量组雌雄各10只;对照组与试验组动物数量相同。
剂量---急毒理试验结果表明,云南琵琶甲毒性很低,测不出半数至死量(LD50),最大耐受量为30.3g/Kg体重/日,因此长期毒性试验选两个剂量组就足够说明问题了:1、与临床推荐量一致,此为低剂量;2、最大耐受量(M.T.D)的1/8,即3.8g/Kg体重/日,此为高剂量,相当于临床推荐量的100倍左右。
对照品---选用哈尔滨中药二厂出产的双黄莲粉针剂。
毒理试验结果---急毒理试验结果表明,云南琵琶甲毒性很低,最大耐受量(M.T.D)为30.3g/Kg体重/日,该剂量为临床推荐量的797倍,在给药后8小时、24小时直至到第6周的观察中,未见动物出现中毒反应。在42天的连续观察中,试验动物情况良好,活动、食欲、粪便均未见异常,口、眼、鼻、耳无异常分泌物,尿常规、血常规、肝肾功能、体重完全正常。在42天的连续观察后,将2/3的动物处死,解剖,留下1/3动物继续观察了3周,再处死解剖检查,检查结果发现内脏(包括心、肝、脾、肺、肾等脏器)毫无异样,一致正常!长期毒性试验结论认为,以云南琵琶甲提取物为原料的药用制剂,是一种非常安全可靠的新药。
3、临床疗效观察:临床疗效观察由昆明医学院第一附属医院完成。
3-1病例选择:按随机原则,对到该院口腔科就诊的口腔颌面部感染、牙周病患者共130例,设治疗组(100例)与对照组(30例)。
3-2对照组:选用云南金柯制药有限公司生产的复方板兰根片口服。
3-3临床疗效观察结论:以云南琵琶甲提取物为原料的药用制剂,经临床疗效观察证实,总有效率达93.33%,对口腔颔面部患者有效率达90.00%;对牙周炎患者有效率高达96.67%。它不仅显效快,疗效显著,而且患者均未出现不适及毒副作用。
4、制备工艺及剂型研究
研究了胶囊剂型和片剂,各留三批样品,进行稳定性实验观察,并经云南省药检所正式复核,胶囊和片剂的各项质量指标均达到标准规定,性能稳定,说明制备工艺的设计是合理可行的。
5、新药材鉴定资料
云南琵琶甲为新发现的药材,按***有关规定必须进行新药材鉴定研究,为此我们完成了全套科学鉴定资料,包括:名称及命名依据;药材的来源及其鉴定依据、主要产地、药用部位;生长特征,生态环境,培殖技术,产地加工和炮制方法,急毒及长毒试验等资料。经毒理试验结果表明,云南琵琶甲毒性很低,测不出半数至死量(LD50),最大耐受量(M.T.D)为30.5g/Kg体重/日,该剂量为临床推荐量的800倍左右,是一种非常安全的新药资源。“云南琵琶甲”这个名称,就是我们鉴定后提出的。与云南琵琶甲形态十分相似的昆虫有6-7种之多,容易混淆。对云南琵琶甲有了科学鉴定资料,为今后采集、使用提供了科学依据。
6、云南琵琶甲提取物药用制剂的抗炎作用的检验:云南琵琶甲提取物药用制剂对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高的作用。
皮肤毛细血管通透性增高是检验药物是否有抗炎作用的最常用动物模型之一,而且由于炎症反应发生于动物皮肤,故本方法具有可以直接观察炎症变化的优点。
醌类衍生物是云南琵琶甲提取物的主要有效成分,临床上用于治疗多种急慢性感染炎症,效果好。
取30只小鼠,雄雌各半,体重19-21g,随机均分为三组,每组10只,雄雌各半,用生理盐水为对照,另两组经口服高低两个剂量云南琵琶甲提取物药用制剂(下表中简称:提取物),按常规进行操作,对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高的作用,实验结果如下表1:
表1 提取物对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高的影响
药物 剂量(mg/kg) 鼠数(只) 蓝斑色泽深浅(级) 蓝斑染料量(μg)
生理盐水 --- 10 6.2±2.1 2.00±0.23
提取物 120 10 2.7±1.4 1.25±0.20
提取物 300 10 2.5±1.1 1.12±0.16
从实验结果可以看出,无论以蓝斑色泽深浅(数字小,抗菌作用强)评比,或是蓝斑染料量(μg,数字小,抗菌作用强)进行比较,云南琵琶甲提取物组动物数值均明显低于生理盐水对照组,表明云南琵琶甲提取物药用制剂能明显抑制二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高,即其具有明显消炎功能。
7、云南琵琶甲提取物药用制剂的免疫作用--巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。巨噬细胞具有强大的吞噬能力,鸡红细胞对鼠类是一种较强的抗原性异物,当将鸡红细胞注入小鼠腹腔后,可引起腹腔巨噬细胞聚集并吞噬鸡红细胞,这是一项机体免疫功能的主要指标,因此可以检验药物对机体免疫能力的影响。
取30只小鼠,雄雌各半,体重19-21g,随机均分为三组,每组10只,雄雌各半,用生理盐水为对照,另两组经口服高低两个剂量云南琵琶甲提取物药用制剂(简称:提取物),按常规进行操作,对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力影响的实验。实验结果如下表2:
表2:提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
药物 剂量(mg/kg) 鼠数(只) 吞噬百分率 吞噬指数
生理盐水 --- 10 30.2±3.70 0.511±0.029
提取物 100 10 63.4±5.28 0.945±0.119
提取物 250 10 65.2±3.08 0.945±0.119
从实验结果可以看出,无论以吞噬百分率(数字大,免疫功能增强)评比,或以吞噬指数(数字大,免疫功能增强)进行比较,云南琵琶甲提取物组动物数值均明显高于生理盐水对照组,表明云南琵琶甲提取物药用制剂能明显增高对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,即增高小鼠免疫功能。
具体实施方式:
在药理活性筛选的指导下,以云南琵琶甲为原料,用现有化学和生物技术提取、分离,确定有效部位、有效成分。具体提取工艺如下:以药用昆虫为原料,将其在常温至37℃下干燥、粉碎、过20-40目筛,加30-70%低级脂肪醇为溶剂提取,若以30-70%乙醇为溶剂提取,温度应在常温至37℃,若以30-70%正丁醇为溶剂提取温度在常温至45℃,若以30-70%正己醇为溶剂提取温度在常温至40℃,至少提取3次,常规过滤后,取过滤液在常温至45℃下、0.06至0.07MPa减压、浓缩至膏状,用色谱方法纯化,分离出活性成分,得提取物精粉。用GC/MS及NMR等先进技术确定活性分子的结构,表明提取物精粉含有醌类衍生物40-98%(重量)。本药用制剂由4.5-10.2%(重量)提取物和余量的药用辅剂制成医学上可接受的医药制剂。可以配制成为胶囊、片剂、粉剂,若灌制成胶囊,铝塑压板后,经辐照消毒灭菌,包装即完成整个研制过程。
本发明所述的药物主要用于上呼吸道的治疗。经抗炎、免疫、毒理、药理及临床试验证明,本药物安全、可靠、疗效高,无毒副作用,并具有调节免疫功能、扶正培本功效。
本发明所述的醌类衍生物,为药用制剂主要抗菌消炎的有效成分。醌类成分有多种多样的生物活性,有的能抗菌、抗病毒,有的可抗癌,有的能凝血,有的则为生物氧化还原反应中的辅酶等,其作用很广,这是因为醌类成分容易被还原转化为二酚类衍生物,后者再被氧化转变为醌;所以它们就起到了电子传递作用;加以它们本身是生物(包括昆虫及人)新陈代谢的产物,容易参加生物的生化反应过程,从而促进或干扰了患者体内某些生化反应,而表现出多种生化活性,因而这类成分,有着广阔的前途。
药用昆虫与其他资源昆虫最大不同点在于它必须有明确的药理活性或临床疗效,有效的化学成分则是它具有药理活性或临床疗效的决定因素。
实施例:
1、取云南琵琶甲虫体干粉,经50-60%甲醇提取3次后,常规过滤后,低温减压浓缩,用100-300目硅胶柱层析纯化,分出活性有机分子,此为提取物精粉,含醌类衍生物70-98%(重量)。
称取提取物精粉50克,称取淀粉(过筛80-100目)150克,将二者混合均匀,灌装成胶囊1000粒,铝塑压板后,经8K强度辐照消毒灭菌,包装即完成整个研制过程。
2、取云南琵琶甲虫体干粉经,50-60%甲醇提取3次后,常规过滤后,低温减压浓缩,用100-300目硅胶柱层析纯化,分出活性成分,此为提取物精粉,含醌类衍生物70-98%(重量)。
称取提取物精粉50克,及医用几丁质(过筛80-100目)150克。将二者混合均匀,灌装成胶囊1000粒,铝塑压板后,经辐照消毒灭菌,包装即完成整个研制过程。
3、取云南琵琶甲虫体干粉,经60-70%乙醇提取4次后,常规过滤后,低温减压浓缩,用100-300目硅胶柱层析纯化,分出活性成分,此为提取物精粉,含醌类衍生物80-96%(重量)。
称取提取物精粉40克,药用淀粉160克。将二者混合均匀,灌装成胶囊1000粒,铝塑压板后,经辐照消毒灭菌,包装即完成整个研制过程。本品主要用于上呼吸道感染包括:扁桃体炎、咽喉炎、牙周炎、牙龈炎以及急慢性支气管炎。
4、取云南琵琶甲虫体干粉,经正己醇提取4次后,常规过滤后,低温减压浓缩,用200-300目硅胶柱层析纯化,分出活性成分,此为提取物精粉,含醌类衍生物65-97%(重量)。
称取提取物精粉60克,药用混合赋形剂140克(内含糊精54.3克,淀粉54.3克,糖粉27.2克,氢氧化铝凝胶4.2克)。将二者混合均匀,采取全粉末直接压片法,压制成1000片,每片含取提取物精粉60mg,装瓶后,经辐照消毒灭菌,包装即完成整个研制过程。本品主要用于上呼吸道感染包括:扁桃体炎、咽喉炎、牙周炎、牙龈炎以及急慢性支气管炎。
实施病例
本发明提供的药用制剂,其治疗扁桃体炎、咽喉炎、牙周炎、牙龈炎以及急慢性支气管炎、无名肿痛等疾病效果好。
下面是几个病例的摘录资料:
1,刘永平:男,47岁。主要症状:咳嗽、头痛、咽喉肿痛,有时恶心。服用药用制剂(胶囊),每日四次每次三粒,3天病情好转,饮食逐渐恢复正常,7天后症状消失。他在治疗的过程中,只服用本胶囊。
2,李宜宜,女,10岁。主要症状:发烧38℃、咳嗽、打喷嚏、流清鼻涕不止、咽喉肿痛。服用药用制剂(片剂),每日三次每次三片,2天病情逐渐好转,精神逐渐恢复正常,7天后痊愈。她在治疗的过程中,只服用本片剂。
3、李家发,男,65岁。反复咳嗽,咽喉干疼,再度加重后,到中医院就诊。查:神差,体瘦,病态显露。舌质暗红并伴有瘀点,苔白腻,脉玄滑。服用药用制剂(胶囊),每天三次,每次三粒,4天后病情缓解,9天后痊愈。
4、王淑芳,女,29岁,发热、头痛、咽痛3天,加重伴咳嗽2天后来诊。查:急性热病容,咽充血,扁桃体呈肿大,舌质红,苔黄腻,脉玄数。服用云南琵琶甲提取物药用制剂(胶囊),每天三次,每次三粒,2天后病情缓解,5天后痊愈。
Claims (3)
1、一种以云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂,其特征在于:
(1)、选用滇产云南琵琶甲,在常温至45℃下干燥、粉碎、过20-40目筛,加30-90%低级脂肪醇为溶剂提取,至少提取3次,过滤后合并过滤液,在常温至45℃、0.06至0.07Mpa条件下减压、浓缩至膏状,用色谱方法纯化,分离出活性成分,得提取物精粉,按重量计提取物含有醌类衍生物40-98%;
(2)、每单位剂量由20-60毫克提取物精粉和余量的药用辅剂制成医学上可接受的医药制剂,最终组份总和为100%。
2、一种以权利要求1所述的云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂,其特征在于:可以配制成为胶囊、片剂或粉剂。
3、一种以权利要求1所述的云南琵琶甲提取物作为主要成份的抗菌消炎制剂,其特征在于:以30-70%乙醇为溶剂提取,温度为常温至37℃,以30-70%正丁醇为溶剂提取,温度为常温至45℃,以30-70%正己醇为溶剂提取,温度为常温至40℃。
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C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |