CN116223800A - 一种人***瘤病毒e6/e7胶体金检测试剂盒及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及免疫分析检测领域,涉及人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用。包括包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。将胶体金技术应用到HPVE6E7的检测中,通过把抗HPVE6E7抗体蛋白包被在结合垫或分析膜的检测带上,实现对样品中HPV病毒的E6E7检测,快速检测出HPVE6E7阳性标本,为***的临床筛查和治疗提供快速的辅助诊断方式。通过检测试剂盒实现特异性强,高灵敏,而且检测速度快10‑20分钟、无需专门设备,也不需要专业人员的操作,可应用于各医疗机构、社区、机场、甚至家庭等多种场所的初步筛查。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析检测领域,涉及人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用。
背景技术
E6/E7是致癌基因,编码病毒癌蛋白,在细胞转化和维持转化组织恶性表型的过程中起着至关重要的作用,E6/E7是HPV致癌基因(遗传物质)表达(开始合成致癌蛋白)的直接标志物、是致癌蛋白合成的模版、是宫颈病变开始和进展的必由之路,其表达水平体现了癌基因的活性.
目前主要的检测方法是通过反转录PCR扩增或者依赖支链DNA信号扩增检测E6/E7.
无论是哪种类型检测对设备要求较高,需在条件相对完善的实验室内方可进行,且平均检测时间需要4个小时以上,操作复杂,依赖于实时定量PCR仪和高水平技术人员;因此现有的检测技术繁琐且检测的费用也较高。检测还需要较长的时间,因此需要一个快速方便费用低的检测方式来进行改进。
发明内容
为解决上述问题,即解决上述背景技术提出的问题,本发明提出了一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用,具体技术方案如下:
一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。
试剂盒包括:包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。
所述检测卡包括卡壳、试纸条组成,所述试纸条包括样品垫、结合垫、检测线TE6线、检测线TE7线质控线C线、吸水垫硝酸纤维素膜、和PVC底板。所述结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
所述硝酸纤维素膜上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线,以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线。
所述卡壳的正面设置有观察窗和加样孔,所述观察窗与硝酸纤维素膜对应。所述样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
一种试剂盒用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
具体方法如下:
一、样本采集:宫颈细胞的采集:
1)窥阴器扩张***后,将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内,两端较短刷丝抵住***粘膜面,直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触;
2)捏住刷柄并以***为圆心,始终朝一个方向旋转至少3-5圈,用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中,拧紧瓶盖,摇晃数次后取出刷头。二、样本检验:
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,并严格按照说明书进行操作;
2)取出检测卡,将其平放;
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内;
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
本发明的有益技术效果为:为了克服现有方法的不足,将胶体金技术应用到HPVE6 E7的检测中,通过把抗HPV E6 E7抗体蛋白包被在结合垫或分析膜的检测带上,实现对样品中HPV病毒的E6 E7检测,快速检测出HPV E6 E7阳性标本,为***的临床筛查和治疗提供快速的辅助诊断方式。通过检测试剂盒实现特异性强,高灵敏,而且检测速度快10-20分钟、操作简便,无需专门设备,也不需要专业人员的操作,可应用于各医疗机构、社区、机场、甚至家庭等多种场所的初步筛查。
附图说明
图1为本发明试剂盒中试纸条结构示意图。
具体实施方式
下面来描述本发明的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是,这些实施方式仅仅用于解释本发明的技术原理,并非旨在限制本发明的保护范围。一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。包括:包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
检测卡包括卡壳1、试纸条2组成,所述试纸条2包括样品垫1、结合垫2、检测线TE6线3、检测线TE7线4质控线C线5、吸水垫6硝酸纤维素膜7、和PVC底板8。
结合垫2上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
硝酸纤维素膜7上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线3和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线4,以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线5。
卡壳1的正面设置有观察窗11和加样孔12,所述观察窗11与硝酸纤维素膜7对应。
双标记的胶体金免疫层析试纸条的制备过程如下:
1.胶体金制备:按柠檬酸三钠还原法制备胶体金,取50mL0.01%的氯金酸溶液,边加热边搅拌直至沸腾,沸腾后迅速加入2mL 1%的柠檬酸三钠溶液,快速均匀搅拌15min,直至液体变成红色不再变化,室温下自然冷却后补充超纯水至50mL,4℃保存备用。
2.金标蛋白制备:待标记金标蛋白包括但不限于鼠抗人HPV IgG抗体、兔抗人HPVIgG抗体、羊抗人HPV IgG抗体,用0.1M碳酸钠调节胶体金pH7.9~8.5,按每毫升胶体金溶液缓慢加入5~25ug待标记蛋白,混匀,静置10min,然后加入BSA至终浓度0.5~1%,混匀,静置10min,9000rpm离心2min,去沉淀,将上层溶液转至新管,12500离心10min,去上清,加入重悬液至原量,将溶液移至新管,12500rpm再次离心10min,加入用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬,置4℃备用。
胶体金试纸条的制备:用包被缓冲液稀释将链霉亲和素、检测待包被蛋白至0.5~1.5mg/mL浓度,用划膜喷金仪,距离结合垫1cm处,以0.5~1.5uL/cm喷涂于膜上,构成检测带4,质控带5,检测带与质控带距离约5mm,质控带同时距离吸水垫约1cm。分析膜37℃烘干,封装备用。
5.所使用的包被缓冲液是由硼酸盐、碳酸盐、磷酸盐、Tris-HCl或Tris-磷酸盐等,缓冲液的pH值为7.0~7.5范围内检测带TE6线:将鼠抗人HPVE6单克隆抗体与pH为7.2的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.4mg/mL混合溶液,喷在硝酸纤维素膜上,涂布量1uL/cm。
检测带TE7线:将鼠抗人HPVE7单克隆抗体与pH为7.2的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.4mg/mL混合溶液,喷在硝酸纤维素膜上,涂布量1uL/cm。
质控带C线:将羊抗鼠IgG多克隆抗体与pH为7.5的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.5mg/mL混合溶液,喷在硝酸纤维素膜上,涂布量为1uL/cm试剂盒用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
具体方法如下:
一、样本采集:宫颈细胞的采集:
1)窥阴器扩张***后,将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内,两端较短刷丝抵住***粘膜面,直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触;
2)捏住刷柄并以***为圆心,始终朝一个方向旋转至少3-5圈,用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中,拧紧瓶盖,摇晃数次后取出刷头。二、样本检验:
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,并严格按照说明书进行操作;
2)取出检测卡,将其平放;
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内;
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
三、检验结果解释:
1.阳性:两条***条带,检测线(T16线)和质控线(C线)均显色;或检测线(T18线)和质控线(C线)均显色;
2.阴性:一条***条带,仅质控线(C线)显色;
3.无效:质控线(C线)无显色,检测无效,建议另取检测卡重新检测。
在本发明实施例中,
通过实验反复对比,本方法具有较高的临床意义和价值.
术语“包括”或者任何其它类似用语旨在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、物品或者设备/装置不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其它要素,或者还包括这些过程、物品或者设备/装置所固有的要素。
至此,优选实施方式描述了本发明的技术方案,但是,本领域技术人员容易理解的是,本发明的保护范围显然不局限于这些具体实施方式。在不偏离本发明的原理的前提下,本领域技术人员可以对相关技术特征作出等同的更改或替换,这些更改或替换之后的技术方案都将落入本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。
2.根据权利要求1所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:试剂盒包括:包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。
3.根据权利要求2所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:所述检测卡包括卡壳(1)、试纸条(2)组成,所述试纸条(2)包括样品垫(1)、结合垫(2)、检测线TE6线(3)、检测线TE7线(4)质控线C线(5)、吸水垫(6)硝酸纤维素膜(7)、和PVC底板(8)。
4.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:所述结合垫(2)上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
5.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:所述硝酸纤维素膜(7)上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线(3)和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线(4),以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线(5)。
6.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:所述卡壳(1)的正面设置有观察窗(11)和加样孔(12),所述观察窗(11)与硝酸纤维素膜(7)对应。
7.根据权利要求2所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒,其特征在于:所述样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
8.一种权利要求1所述的试剂盒的检测方法,其特征在于:用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
9.根据权利要求8所述的试剂盒的检测方法,其特征在于:具体方法如下:
一、样本采集:宫颈细胞的采集:
1)窥阴器扩张***后,将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内,两端较短刷丝抵住***粘膜面,直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触;
2)捏住刷柄并以***为圆心,始终朝一个方向旋转至少3-5圈,用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中,拧紧瓶盖,摇晃数次后取出刷头。
二、样本检验:
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,并严格按照说明书进行操作;
2)取出检测卡,将其平放;
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内;
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
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Cited By (1)
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CN118243929A (zh) * | 2024-05-30 | 2024-06-25 | 弗雷米德生物医药技术(天津)有限公司 | 一种用于***癌前病变和癌变检测的联检试剂盒及其制备方法和应用 |
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2022
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