CN116223800A - 一种人***瘤病毒e6/e7胶体金检测试剂盒及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及免疫分析检测领域，涉及人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用。包括包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。将胶体金技术应用到HPVE6E7的检测中，通过把抗HPVE6E7抗体蛋白包被在结合垫或分析膜的检测带上，实现对样品中HPV病毒的E6E7检测，快速检测出HPVE6E7阳性标本，为***的临床筛查和治疗提供快速的辅助诊断方式。通过检测试剂盒实现特异性强，高灵敏，而且检测速度快10‑20分钟、无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于各医疗机构、社区、机场、甚至家庭等多种场所的初步筛查。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析检测领域，涉及人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用。
背景技术
E6/E7是致癌基因，编码病毒癌蛋白，在细胞转化和维持转化组织恶性表型的过程中起着至关重要的作用,E6/E7是HPV致癌基因(遗传物质)表达(开始合成致癌蛋白)的直接标志物、是致癌蛋白合成的模版、是宫颈病变开始和进展的必由之路,其表达水平体现了癌基因的活性.
目前主要的检测方法是通过反转录PCR扩增或者依赖支链DNA信号扩增检测E6/E7.
无论是哪种类型检测对设备要求较高，需在条件相对完善的实验室内方可进行，且平均检测时间需要4个小时以上，操作复杂，依赖于实时定量PCR仪和高水平技术人员；因此现有的检测技术繁琐且检测的费用也较高。检测还需要较长的时间，因此需要一个快速方便费用低的检测方式来进行改进。
发明内容
为解决上述问题，即解决上述背景技术提出的问题，本发明提出了一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒及应用，具体技术方案如下：
一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。
试剂盒包括：包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。
所述检测卡包括卡壳、试纸条组成，所述试纸条包括样品垫、结合垫、检测线TE6线、检测线TE7线质控线C线、吸水垫硝酸纤维素膜、和PVC底板。所述结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
所述硝酸纤维素膜上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线，以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线。
所述卡壳的正面设置有观察窗和加样孔，所述观察窗与硝酸纤维素膜对应。所述样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
一种试剂盒用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
具体方法如下：
一、样本采集：宫颈细胞的采集：
1)窥阴器扩张***后，将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内，两端较短刷丝抵住***粘膜面，直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触；
2)捏住刷柄并以***为圆心，始终朝一个方向旋转至少3-5圈，用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中，拧紧瓶盖，摇晃数次后取出刷头。二、样本检验：
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
2)取出检测卡，将其平放；
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
本发明的有益技术效果为：为了克服现有方法的不足，将胶体金技术应用到HPVE6 E7的检测中，通过把抗HPV E6 E7抗体蛋白包被在结合垫或分析膜的检测带上，实现对样品中HPV病毒的E6 E7检测，快速检测出HPV E6 E7阳性标本，为***的临床筛查和治疗提供快速的辅助诊断方式。通过检测试剂盒实现特异性强，高灵敏，而且检测速度快10-20分钟、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于各医疗机构、社区、机场、甚至家庭等多种场所的初步筛查。
附图说明
图1为本发明试剂盒中试纸条结构示意图。
具体实施方式
下面来描述本发明的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是，这些实施方式仅仅用于解释本发明的技术原理，并非旨在限制本发明的保护范围。一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。包括：包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
检测卡包括卡壳1、试纸条2组成，所述试纸条2包括样品垫1、结合垫2、检测线TE6线3、检测线TE7线4质控线C线5、吸水垫6硝酸纤维素膜7、和PVC底板8。
结合垫2上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
硝酸纤维素膜7上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线3和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线4，以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线5。
卡壳1的正面设置有观察窗11和加样孔12，所述观察窗11与硝酸纤维素膜7对应。
双标记的胶体金免疫层析试纸条的制备过程如下：
1.胶体金制备：按柠檬酸三钠还原法制备胶体金，取50mL0.01％的氯金酸溶液，边加热边搅拌直至沸腾，沸腾后迅速加入2mL 1％的柠檬酸三钠溶液，快速均匀搅拌15min，直至液体变成红色不再变化，室温下自然冷却后补充超纯水至50mL，4℃保存备用。
2.金标蛋白制备：待标记金标蛋白包括但不限于鼠抗人HPV IgG抗体、兔抗人HPVIgG抗体、羊抗人HPV IgG抗体，用0.1M碳酸钠调节胶体金pH7.9～8.5，按每毫升胶体金溶液缓慢加入5～25ug待标记蛋白，混匀，静置10min，然后加入BSA至终浓度0.5～1％，混匀，静置10min，9000rpm离心2min，去沉淀，将上层溶液转至新管，12500离心10min，去上清，加入重悬液至原量，将溶液移至新管，12500rpm再次离心10min，加入用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬，置4℃备用。
胶体金试纸条的制备：用包被缓冲液稀释将链霉亲和素、检测待包被蛋白至0.5～1.5mg/mL浓度，用划膜喷金仪，距离结合垫1cm处，以0.5～1.5uL/cm喷涂于膜上，构成检测带4，质控带5，检测带与质控带距离约5mm，质控带同时距离吸水垫约1cm。分析膜37℃烘干，封装备用。
5.所使用的包被缓冲液是由硼酸盐、碳酸盐、磷酸盐、Tris-HCl或Tris-磷酸盐等，缓冲液的pH值为7.0～7.5范围内检测带TE6线：将鼠抗人HPVE6单克隆抗体与pH为7.2的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.4mg/mL混合溶液，喷在硝酸纤维素膜上，涂布量1uL/cm。
检测带TE7线：将鼠抗人HPVE7单克隆抗体与pH为7.2的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.4mg/mL混合溶液，喷在硝酸纤维素膜上，涂布量1uL/cm。
质控带C线：将羊抗鼠IgG多克隆抗体与pH为7.5的10mM PBS缓冲溶液混合配制成为浓度为0.5mg/mL混合溶液，喷在硝酸纤维素膜上，涂布量为1uL/cm试剂盒用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
具体方法如下：
一、样本采集：宫颈细胞的采集：
1)窥阴器扩张***后，将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内，两端较短刷丝抵住***粘膜面，直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触；
2)捏住刷柄并以***为圆心，始终朝一个方向旋转至少3-5圈，用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中，拧紧瓶盖，摇晃数次后取出刷头。二、样本检验：
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
2)取出检测卡，将其平放；
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
三、检验结果解释：
1.阳性：两条***条带，检测线(T16线)和质控线(C线)均显色；或检测线(T18线)和质控线(C线)均显色；
2.阴性：一条***条带，仅质控线(C线)显色；
3.无效：质控线(C线)无显色，检测无效，建议另取检测卡重新检测。
在本发明实施例中，
通过实验反复对比,本方法具有较高的临床意义和价值.
术语“包括”或者任何其它类似用语旨在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、物品或者设备/装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其它要素，或者还包括这些过程、物品或者设备/装置所固有的要素。
至此，优选实施方式描述了本发明的技术方案，但是，本领域技术人员容易理解的是，本发明的保护范围显然不局限于这些具体实施方式。在不偏离本发明的原理的前提下，本领域技术人员可以对相关技术特征作出等同的更改或替换，这些更改或替换之后的技术方案都将落入本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：采用胶体金免疫层析技术制作一种HPV病毒E6 E7快速检测试剂盒。
2.根据权利要求1所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括：包装盒和放于盒体内的检测试剂卡、样本提取液、样本抽提管、无菌采样拭子、吸管和说明书一份。
3.根据权利要求2所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述检测卡包括卡壳(1)、试纸条(2)组成，所述试纸条(2)包括样品垫(1)、结合垫(2)、检测线TE6线(3)、检测线TE7线(4)质控线C线(5)、吸水垫(6)硝酸纤维素膜(7)、和PVC底板(8)。
4.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述结合垫(2)上包被有胶体金标记的鼠抗人HPV E6蛋白单克隆抗体和鼠抗人HPV E7蛋白单克隆抗体。
5.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜(7)上分别包被有抗人HPV E6蛋白单克隆抗体检测线TE6线(3)和包被有抗人HPV E7蛋白单克隆抗体检测线TE7线(4)，以及包被有抗鼠HPV E6和HPV E7 IgG抗体构成的质控线C线(5)。
6.根据权利要求3所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述卡壳(1)的正面设置有观察窗(11)和加样孔(12)，所述观察窗(11)与硝酸纤维素膜(7)对应。
7.根据权利要求2所述的人***瘤病毒E6/E7胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述样本抽提管和吸管的吸头均为聚苯乙烯塑料。
8.一种权利要求1所述的试剂盒的检测方法，其特征在于：用于HPV病毒抗原分型的人***瘤病毒E6/E7的快速检测。
9.根据权利要求8所述的试剂盒的检测方法，其特征在于：具体方法如下：
一、样本采集：宫颈细胞的采集：
1)窥阴器扩张***后，将宫颈刷头中央较长刷丝***宫颈管内，两端较短刷丝抵住***粘膜面，直到两翼刷毛和宫颈口两侧紧密接触；
2)捏住刷柄并以***为圆心，始终朝一个方向旋转至少3-5圈，用镊子或剪刀取下刷头放入标本收集的标本提取液中，拧紧瓶盖，摇晃数次后取出刷头。
二、样本检验：
1)在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，并严格按照说明书进行操作；
2)取出检测卡，将其平放；
3)用吸管在标本提取液中液体离瓶底深度三分之一处吸取2-3滴已处理过的样本(60-90μL)垂直滴入检测卡的加样孔内；
4)室温放置10-20分钟后观察检测结果即可。
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| CN (1) | CN116223800A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118243929A (zh) * | 2024-05-30 | 2024-06-25 | 弗雷米德生物医药技术（天津）有限公司 | 一种用于***癌前病变和癌变检测的联检试剂盒及其制备方法和应用 |
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| CN111394460A (zh) * | 2020-04-02 | 2020-07-10 | 安徽科技学院 | 一种乳腺癌检测胶体金侧向层析试纸条和同时检测乳腺癌和***的胶体金侧向层析试纸条 |
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2022
- 2022-12-12 CN CN202211589582.2A patent/CN116223800A/zh active Pending
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