CN115894597A

CN115894597A - 一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用

Info

Publication number: CN115894597A
Application number: CN202211370486.9A
Authority: CN
Inventors: 王静; 戴莉丝; 许余江胜
Original assignee: Guangzhou Good Skin Technology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Good Skin Technology Co ltd
Priority date: 2022-11-03
Filing date: 2022-11-03
Publication date: 2023-04-04

Abstract

本发明公开了一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用，包括以下步骤：S1、将积雪草全草粉碎进行搅拌提取；S2、通过压滤，并进行药液上树脂柱吸附，用乙醇将有效成分从树脂柱洗脱出来；S3、通过将药液上脱色树脂柱，对药液进行脱色，脱色液经刮板浓缩器浓缩至稠膏；S4、转至D级洁净区的微波干燥箱进行烘干；S5、通过粉碎、过筛、总混，即得积雪草总苷；S6、将乙醇溶解分离积雪草苷，得到羟基积雪草苷粗品；S7、通过95％乙醇溶解精制，烘干，粉碎过筛网后，即得羟基积雪草苷。根据本发明，获得不同舒缓修护功效体现的羟基积雪草苷，纯度高，安全无刺激，特别适合应用在儿童保湿及多重修护功效的护理产品中。

Description

一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用

技术领域

本发明涉及中药制备的技术领域，特别涉及一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用。

背景技术

积雪草Centella asiatica(L.)Urban为伞形科多年生草本植物，含有氨基酸类、黄酮类、三萜类等组成成分。羟基积雪草苷(madecassoside，MC)是积雪草中含量最高的五环类三萜化合物，分子式为C₄₈H₇₈O₂₀，相对分子质量975.13，外观形状为白色结晶。羟基积雪草苷是积雪草由异戊二烯途径合成的皂苷类次生植物代谢产物。天然衍生化合物在生物医药领域通常具有广泛的生物学活性，在临床与日常生活中亦具有较广泛的应用。

针对羟基积雪草苷在保湿、抗氧化、促进伤口愈合等方面的功能及机制的研究已较成熟。目前，它已被广泛用于湿巾、护肤品软膏类药品等日常生活用品的生产和对皮肤疾病的治疗，是治疗伤口、湿疹、痤疮、增生性瘢痕、烧伤性瘢痕、硬皮病和银屑病等皮肤疾病的高效药物。而在儿童日用护肤的研究领域，针对于儿童肌肤的脆弱敏感进行修护的功效研究还比较少。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明的目的是提供一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用，获得不同舒缓修护功效体现的羟基积雪草苷，纯度高，安全无刺激，特别适合应用在儿童保湿及多重修护功效的护理产品中。为了实现根据本发明的上述目的和其他优点，提供了一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，包括：

S1、将积雪草全草粉碎进行搅拌提取；

S2、通过压滤，并进行药液上树脂柱吸附，用乙醇将有效成分从树脂柱洗脱出来；

S3、通过将药液上脱色树脂柱，对药液进行脱色，脱色液经刮板浓缩器浓缩至稠膏；

S4、转至D级洁净区的微波干燥箱进行烘干；

S5、通过粉碎、过筛、总混，即得积雪草总苷；

S6、将乙醇溶解分离积雪草苷，得到羟基积雪草苷粗品；

S7、通过95％乙醇溶解精制，烘干，粉碎过筛网后，即得羟基积雪草苷。

优选的，步骤S1中将将积雪草全草粉碎至60目细粉，投入提取罐中，每罐900kg细粉，加入4.5吨沸水搅拌提取2小时。

优选的，步骤S5与步骤S7中的过筛均为100目。

优选的，步骤S6中的乙醇为5倍95％乙醇。

优选的，提取的羟基积雪草苷的质量分为1％-100％,其中羟基积雪草苷的质量分为95％的产品添加浓度为0.2％-0.04％。

优选的，提取的羟基积雪草苷的质量分为1％-10％，其中羟基积雪草苷的质量分为10％的产品添加浓度为0.1％-0.6％。

羟基积雪草苷在制备抗过敏产品中的应用。

羟基积雪草苷在制备化学灼伤修护产品中的应用。

本发明与现有技术相比，其有益效果是：通过本申请的制备工艺提取出的羟基积雪草苷，可制备成任意不同比例的羟基积雪草苷，获得不同舒缓修护功效体现的羟基积雪草苷，纯度高，安全无刺激，特别适合应用在儿童保湿及多重修护功效的护理产品中。

附图说明

图1为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的斑马鱼胚胎中性粒细胞抑制测试流程图；

图2为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的95％的羟基积雪草苷的修护效果图；

图3为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.1％的舒缓功效测试图；

图4为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.1％的舒缓功效柱状图；

图5为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.3％的舒缓功效测试图；

图6为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.3％的舒缓功效柱状图；

图7为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.6％的舒缓功效测试图；

图8为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的积雪草提取物浓度为0.6％的舒缓功效柱状图；

图9为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的羟基积雪草苷在过敏修护的实验图；

图10为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的羟基积雪草苷在化学灼伤修护的实验图；

图11为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的95％羟基积雪草苷的色谱图；

图12为根据本发明的具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺及应用的90％羟基积雪草苷的色谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

参照图1-12，一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，包括：S1、将积雪草全草粉碎进行搅拌提取；

S4、转至D级洁净区的微波干燥箱进行烘干；

S5、通过粉碎、过筛、总混，即得积雪草总苷；

S6、将乙醇溶解分离积雪草苷，得到羟基积雪草苷粗品；

S7、通过95％乙醇溶解精制，烘干，粉碎过筛网后，即得羟基积雪草苷，根据图11-12为羟基积雪草苷的色谱图，其中如下分别是95％羟基积雪草苷的峰表与90％羟基积雪草苷的峰表：

<峰表>

检测器A205nm

峰号	保留时间	面积	高度	面积％	理论塔板数(USP)	拖尾因子
							1	8.537	319085	28428	12.458	12668	1.049
2	9.034	25822	2280	1.008	13583	--
							3	11.384	2004706	141525	78.270	14360	0.983
4	20.817	211642	8746	8.263	16620	1.010
							总计		2561254	180979	100.000

<峰表>

检测器A205nm

峰号	保留时间	面积	高度	面积％	理论塔板数(USP)	拖尾因子
							1	8.868	332269	29064	13.776	13115	0.990
2	11.923	1917930	129295	79.517	14399	0.934
							3	22.099	161787	6213	6.708	16276	0.954
总计		2411986	164572	100.000

优选的，步骤S5与步骤S7中的过筛均为100目。

优选的，步骤S6中的乙醇为5倍95％乙醇。

羟基积雪草苷在制备抗过敏产品中的应用。

羟基积雪草苷在制备化学灼伤修护产品中的应用。

修护功效实验

一、化妆品修护效果筛查--斑马鱼胚胎中性粒细胞抑制测试方法

测试方法设计参照OECD TG 236标准。测试理论依据：BMC Biology.2010,8:151；JLeukoc Biol.2013,94(4):633-642；Molecules.2014,19(2):2390-2409,14:721-721。进行测试前，样品按照内部方法VI_SOP_002作为化妆品原料样品进行前处理。

1、术语和定义

1.1斑马鱼胚胎Zebrafish embryo

处在依靠卵黄提供能量发育阶段的斑马鱼胚胎。

1.2没有心跳Lack of heartbeat

一分钟内心脏没有跳动的鱼胚胎。

1.3 10％致死浓度10％ Lethal concentration,LC10

受试物导致10％受试鱼胚胎死亡的浓度。鱼胚胎没有心跳则判定为死亡。

2、原理

斑马鱼胚胎的中性粒细胞和人体中性粒细胞在形态、生化和生理功能上高度相似。中性粒细胞是在损伤或病菌入侵部位第一批出现的白细胞，作用于清除感染或有害物质。应用硫酸铜诱导斑马鱼胚胎侧线区域神经丘细胞损伤而引起中性粒细胞聚集的模型进行测试，比较受试物处理组和模型对照组的鱼胚胎侧线区域的中性粒细胞的数量变化，计算中性粒细胞抑制率以评价原料、配方或产品的修护效果筛查。

3、仪器和设备

3.1斑马鱼养殖设备

设备需配有温控装置，水循环和过滤装置，养殖容器用玻璃或常见食品级PC材质制成。可采用通用斑马鱼养殖设备或按实验室需求配备鱼缸(如长宽高45cm×45cm×30cm)。

3.2产卵盒/缸

由玻璃、不锈钢或其它惰性材料制成，配备网筛(网格大小为2mm×2mm，由不锈钢或多项材料组成用来保护鱼卵)。

3.3水质监测设备

pH计、溶解氧测定仪、盐度计(电导率测定仪)。

3.4分析天平

精度0.1mg。

3.5显微镜

配带照相***，最大放大倍数应大于80倍的体式显微镜。

3.6测试容器

测试容器：玻璃或聚苯乙烯测试容器(如6孔板，培养皿)。如测试物可能吸附于聚苯乙烯容器时(如非极性化学品)，应选用惰性材料(如玻璃)来减少吸附。

3.7恒温箱

精度±1℃。

3.8丰年虾孵化器

设备需配有孵化桶，气管，气量调节阀，气泵截止开关和止逆阀装置。

3.9其他常规测试仪器和设备

移液管、离心管、玻璃容器(如烧杯、容量瓶等)、旋涡混合仪、超声水浴锅、离心机、低温冰箱、可调节移液器和吸头。

4、主要试剂与耗材

4.1水

符合GB/T 6682规定。

4.2甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶剂

分析纯级别。

4.3亲鱼养殖用水

称取4g海盐溶于10L水配制而成，盐度为0.25～0.50‰，电导率为500～800μS/cm，溶解氧80％饱和度，pH值6.5～8.5，硬度30～300mg/L(以碳酸钙计)。

4.4丰年虾(Artemia salina)卵

丰年虾休眠卵需干燥避光冷藏。称取约15g海盐溶于1L水配制丰年虾卵孵化水，密度以不超过4g/L丰年虾卵为宜。

4.5鱼胚胎培养液

称取2940mg无水氯化钙，1233mg七水硫酸镁，630mg碳酸氢钠，55mg氯化钾溶于10L水配制而成。pH值6.5～8.5。化学品均为分析纯级别。

4.6硫酸铜溶液

用水配制159.6mg/L五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)储存液。室温储存。

工作液浓度为0.1596mg/L，用鱼胚胎培养液稀释，使用前新鲜配制。

4.7吲哚美辛溶液

用二甲基亚砜配制35.78mg/L吲哚美辛储存液。冷藏。

工作液浓度为0.003578mg/L吲哚美辛,用鱼胚胎培养液稀释，使用前新鲜配制。

4.8多聚甲醛

用磷酸缓冲盐溶液(PBS)配制含有4％多聚甲醛和0.8％氢氧化钠(NAOH)，pH为7.2～7.4的溶液。冷藏。

4.9 50％和70％酒精溶液

用水配制50％和70％酒精溶液。

4.10苏丹黑染色液

苏丹黑储存液：用70％酒精配制0.4％苏丹黑储存液。冷藏。

苯酚溶液：将8g苯酚溶于15mL乙醇溶液，将0.3g Na2HPO4·12H2O溶解于50mL水中，然后将二种溶液混合配制成苯酚溶液。室温储存，半年内有效。

苏丹黑染色液是将900μL 70％酒精溶液，100μL苏丹黑儲存液和1μL苯酚溶液混合而成。

4.11PBST

配制0.04％ Triton X-100于PBS溶液中。室温储存。

4.12漂白溶液

用水配制含有3％ H₂O₂和1％ KOH的溶液。使用前新鲜配制。

4.13清透液1

用水配制含有20％甘油和0.25％KOH的溶液。室温保存。

4.14清透液2

用水配制含有50％甘油和0.25％KOH的溶液。室温保存。

5、实验方法

5.1受试生物

应用来源可靠(如中国国家斑马鱼资源中心)的野生型AB品系斑马鱼(Daniorerio)产卵测试。亲鱼应具有较好的繁殖能力–鱼龄以6～12月最佳。传代尽量使用侧交以保持遗传多样性，纯品系亲鱼繁殖5代后需更换新一批亲鱼。亲鱼不应该有明显可见的感染和疾病特征，且在2个月内没有经历过药物治疗。在繁殖产卵测试前，亲鱼应在引入实验室后驯养14天以上。

5.2养殖要求

5.2.1养殖水温宜控制在26～28.5℃，室内温度建议控制在20～25℃。

5.2.2养殖密度宜控制在每升水1～2条鱼，以及每日固定的12～16h光照，且需保持良好的过滤统。

5.2.3每天至少喂食2次，包括至少1次丰年虾(Artemia salina)幼虫，喂食间隔在3小时以上，避免过量喂食影响水质和清洁度。

5.3产卵要求

5.3.1如用产卵缸收集鱼卵，将雄鱼和雌鱼以2：1的比率为宜在产卵前一天关灯前1～2h放进产卵缸中。由于斑马鱼偶尔不产卵，建议同时准备多个产卵缸备用。

5.3.2为避免基因偏差，将最少3个产卵缸中收集的鱼卵混合再进行挑选备用。若用养殖鱼缸收集鱼卵，收卵盒在产卵前一天关灯前或产卵当天开灯前放进要收集鱼卵的养殖鱼缸中。

5.3.3为避免鱼卵被成鱼所食，收卵盒用惰性网覆盖。

5.3.4交配、产卵和受精在开灯后大约30min内完成，届时可把收卵盒移出鱼缸。

5.3.5鱼卵从收卵盒取出后，建议用鱼胚胎培养液清洁鱼胚胎。

5.3.6挑选健康的斑马鱼胚胎，并以200μL鱼胚胎培养液中不超过1粒鱼胚胎的密度于28℃培养至受精后3天。

6、受试物准备

6.1化妆品原料

6.1.1水溶性原料：可用鱼胚胎培养液直接将受试物溶解配制成测试溶液。

6.1.2非水溶性原料：可选常用溶剂如甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶。如将受试物和有机溶剂按1：1(重量g：体积mL)混匀，超声处理10min，然后加入鱼胚胎培养液配制成所需浓度，震荡30s后于6500×g离心10min。取上清液进行测试。

6.2化妆品产品

6.2.1水溶性产品：可用鱼胚胎培养液直接将受试物溶解配制成测试溶液。建议最高测试浓度为5g/L。

6.2.2非水溶性产品：可选常用溶剂如甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶。如将受试物和有机溶剂按1：1(重量g：体积mL)混匀，超声处理10min，然后加入鱼胚胎培养液配制成所需浓度，震荡30s后于6500×g离心10min。取上清液进行测试。建议最高测试浓度为5g/L。

6.3注意事项

受试物测试溶液浓度需保证对斑马鱼胚胎的死亡率10％(没有心跳特征的胚胎界定为死亡)。测试时可根据需要设置多个浓度组。

7、测试步骤

以下测试步骤是6-孔板测试指引。测试流程可参考图1。如应用更大的测试容器(如培养皿)，测试指引需做相应调整。挑选健康的受精后3天大的斑马鱼胚胎。

7.1测试分组

测试需设定模型对照组(硫酸铜工作液)、阳性对照组(硫酸铜工作液+吲哚美辛工作液)和受试物组(硫酸铜工作液+受试物)。

7.2模型对照组设置

随机挑选20粒鱼胚胎，转移至3cm培养皿中，加入5mL含0.1596mg/L五水硫酸铜的鱼胚胎培养液(配制方法见4.6)。

7.3阳性对照组设置

随机挑选20粒鱼胚胎，转移至3cm培养皿中，加入5mL含0.1596mg/L五水硫酸铜0.003578mg/L吲哚美辛的鱼胚胎培养液(配制方法见4.6-4.7)。

7.4受试物处理

随机挑选20粒鱼胚胎，转移至3cm培养皿中，加入5mL含0.1596mg/L五水硫酸铜和受试物的鱼胚胎培养液(配制方法见4.6和6.1-6.3)。放置于28±1℃恒温箱中培养40～45min。

7.5鱼胚胎固定染色

将每测试组鱼胚胎于多聚甲醛中固定至少1h后，用PBST(配制方法见6.11)处理鱼胚胎3次，每次5min，然后用50％乙醇(配制方法见4.9)处理3min。用苏丹黑染色溶液(配制方法见4.10)对鱼胚胎进行室温染色1h后，用70％乙醇(配制方法见4.9)浸洗4次，每次5min，然后用PBST处理2次，每次5min。用漂白溶液处理鱼胚胎10min，如在试管里处理，则需保持盖子打开。然后用70％乙醇溶液处理5min，PBST处理1min，用清澈液1(配制方法见4.13)处理15min，清澈液2(配制方法见4.14)处理10min，再用PBST处理3min。

7.6样本的显微分析

将鱼胚胎侧身摆放。然后放到体式显微镜下对鱼胚胎尾部进行拍照。

7.7数据和结果计算

计数每粒鱼胚胎从***起四分之三尾部侧线区域(见附录B图B)的中性粒细胞数目。

8、结果计算

计算中性粒细胞抑制率：

中性粒细胞抑制率＝(C-T)/C×100％------------(1)

(1)式中：

T—受试物处理组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值；

C—模型对照组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值；

对受试物处理组鱼胚胎中性粒细胞数目和模型对照组中性粒细胞数目进行双尾T检验，取得p值。

9、测试有效性验证

9.1测试判定

各测试组暴露完成后至少90％鱼胚胎存活，否则对应测试组结果无效。

9.2测试要求

每批次测试须设置阳性对照组，要求每批次测试阳性对照组鱼胚胎中性粒细胞抑制率为正数且p<0.05。

10、结果报告

10.1中性粒细胞抑制率

受试物在对应测试浓度下对中性粒细胞的抑制率。

10.2评价

评价受试物抑制中性粒细胞的能力，分析受试物处理组与模型对照组的检测值是否具有统计学差异(p<0.05)。

11、结果相关性解读

在中性粒细胞抑制率为正数且具有统计学差异(p<0.05)情况下，测试结果可作为受试物具有修护效果的支持证据，但不替代人体功效测试。

注释：

1.斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集模型：对斑马鱼胚胎进行CuSO4暴露诱导损伤制造中性粒细胞聚集模型。

2.斑马鱼胚胎中性粒细胞抑制率＝[(模型对照组中性粒细胞数目-样品处理组中性粒细胞数目)×100/模型对照组中性粒细胞聚集数目]％。

3.p值为样品处理组中性粒细胞数目和模型对照组中性粒细胞数目进行T-Test分析所得，一般定为p<0.05具有统计学显著差异。

4.根据样品对斑马鱼胚胎中性粒细胞抑制率以及抑制率的统计学差异，对样品的修护

效果筛查进行评价，分为显著(抑制率为正数及p<0.05)和不显著(抑制率为负数或p≥0.05)。

修护效果筛查结果代表性图片如下图：

受试样品选择了95％的羟基积雪草苷，测试结果如图2，图2中分别为修护效果不显著、修护效果显著-30％中性粒细胞抑制率、VI-2021455S-1羟基积雪草苷95％﹕0.2％配方添加浓度，51％炎症细胞抑制率及VI-2021455S-1羟基积雪草苷95％﹕0.04％配方添加浓度，37％炎症细胞抑制率。

(以下内容是否能写成实施例)

选取不同添加浓度(0.1％、0.3％、0.6％)的羟基积雪草苷10％进行同样测试方法进行测试，得出以下舒缓修护的功效数据：

实施例1

将羟基积雪草苷10％稀释至0.1％的浓度进行舒缓修护测试，数据如下：

备注：客户指定往每个样品瓶内加入50mL的纯水制备测试样本。

舒缓功效测试结果如图3-4，图3中分别为舒缓效果不显著、舒缓效果显著-30％中性粒细胞聚集抑制率、VI-20221477S-1积雪草提取物plusl0.1％-舒缓效果显著-46％中性粒细胞聚集抑制率，其中图4为舒缓功效测试结果柱状图。

实施例2

将羟基积雪草苷10％稀释至0.3％的浓度进行舒缓修护测试，数据如下：

舒缓功效测试结果如图5-6，图5中分别为模型对照组：舒缓效果不显著-0％中性粒细胞聚集抑制率、阳性对照示例：0.0036mg/L吲哚美辛-舒缓效果显著-30％中性粒细胞聚集抑制率及受试样品组：VI-20221477S-2积雪草提取物plusl0.3％-舒缓效果显著39％中性粒细胞聚集抑制率，图6中为柱状图。

实施例3

将羟基积雪草苷10％稀释至0.6％的浓度进行舒缓修护测试，数据如下：

舒缓功效测试结果如图7-8，图7中分别为模型对照组：舒缓效果不显著-0％中性粒细胞聚集抑制率、阳性对照示例：0.0036mg/L吲哚美辛-舒缓效果显著-30％中性粒细胞聚集抑制率及受试样品组：VI-20221477S-3积雪草提取物plusl0.6％-舒缓效果显著41％中性粒细胞聚集抑制率，图6中为柱状图。

二、过敏修护

本次测试案例中，测试者因对狗毛过敏，导致手部应激性反应，红肿且伴有瘙痒等炎症症状。测试者使用羟基积雪草苷10％配置成的乳液涂抹14天后，红肿消退且痒的症状也消失，如图9所示。

三、化学灼伤修护

本次测试案例中，测试者误用化学原料，导致化学灼伤，脸颊脱皮红肿，伴有强烈的灼烧感。将羟基积雪草苷5％的溶液进行涂抹观察灼伤修护状况。

据测试者反馈：

使用羟基积雪草苷的溶液2天后，灼烧感消退；

使用7天后，灼伤部位红肿消失；

使用14天后，脸部症状消失，恢复原状。如图10所示。

这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的，对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims

1.一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将积雪草全草粉碎进行搅拌提取；

S4、转至D级洁净区的微波干燥箱进行烘干；

S5、通过粉碎、过筛、总混，即得积雪草总苷；

S6、将乙醇溶解分离积雪草苷，得到羟基积雪草苷粗品；

2.如权利要求1所述的一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，步骤S1中将将积雪草全草粉碎至60目细粉，投入提取罐中，每罐900kg细粉，加入4.5吨沸水搅拌提取2小时。

3.如权利要求1所述的一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，步骤S5与步骤S7中的过筛均为100目。

4.如权利要求1所述的一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，步骤S6中的乙醇为5倍95％乙醇。

5.如权利要求1所述的一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，提取的羟基积雪草苷的质量分为1％-100％,其中羟基积雪草苷的质量分为95％的产品添加浓度为0.2％-0.04％。

6.如权利要求5所述的一种具有多重修护功效的羟基积雪草苷的提取工艺，其特征在于，提取的羟基积雪草苷的质量分为1％-10％，其中羟基积雪草苷的质量分为10％的产品添加浓度为0.1％-0.6％。

7.如权利要求1-6所述的任一羟基积雪草苷在制备抗过敏产品中的应用。

8.如权利要求1所述的1-6所述的任一羟基积雪草苷在制备抗化学灼伤修护产品中的应用。