CN115260054B - 一种金刚烷胺二聚体及其制备方法和作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用 - Google Patents
一种金刚烷胺二聚体及其制备方法和作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种金刚烷胺二聚体及其制备方法和在制备疫苗佐剂中的应用。本发明提供一种金刚烷胺二聚体，具有式1所示结构。本发明提供的金刚烷胺二聚体，以金刚烷胺作为佐剂母体分子，将两个金刚烷胺通过乙酰基作为连接子(linker)，连接到式2所示结构的化合物的基础结构上得到金刚烷胺二聚体。本发明提供的金刚烷胺二聚体相较于铝佐剂或金刚烷胺单体佐剂具有更好的增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的抗体反应，产生更高水平的IgG。
Description
技术领域
本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种金刚烷胺二聚体及其制备方法和作为备疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。
背景技术
佐剂是一种能够通过增强免疫反应并改变免疫反应的类型来促进抗原特异性免疫应答的非特异性免疫增强剂，通常能减少抗原用量与免疫次数，产生更快速和持久的免疫反应，提高疫苗的免疫反应强度与有效性。
自1926年铝的佐剂效应第一次被发现以来，迄今为止，被批准的人用预防疫苗佐剂并不多，新疫苗佐剂研发也被称为医学史上最慢的过程之一，因此设计高效低毒的佐剂，从而本质上优化疫苗免疫反应具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种金刚烷胺二聚体及其制备方法和作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用，本发明提供的金刚烷胺二聚体相较于铝佐剂具有更好增强体液免疫应答效果。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种金刚烷胺二聚体，具有式1所示结构：
本发明提供了上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体的制备方法，包括以下步骤：
将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行取代反应，得到式3所示结构的第一中间产物；
将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解酸化反应，得到式4所示结构的第二中间产物；
将所述第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺缩合反应，得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体。
优选的，式2所示结构的化合物和卤代乙酸甲酯的摩尔比为1:(10～11)。
优选的，所述第二中间产物和金刚烷胺的质量比为3:5。
优选的，所述取代反应的温度为50～70℃，所述取代反应的保温时间为12～24h。
优选的，所述酰胺缩合反应的温度为室温，所述酰胺缩合反应的保温时间为18～24h。
本发明提供了上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体或上述技术方案所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。
优选的，所述疫苗为抗病毒疫苗疫苗。
优选的，所述抗病毒疫苗为抗新型冠状病毒疫苗。
本发明提供一种疫苗，包括疫苗活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体或上述技术方案所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体。
本发明提供一种金刚烷胺二聚体，具有式1所示结构：
本发明提供的金刚烷胺二聚体，以金刚烷胺作为母体分子，将两个金刚烷胺通过乙酰基作为连接子(linker)，连接到结构上得到金刚烷胺二聚体。金刚烷胺具有良好的生物相容性，已获FDA批准用于大规模临床应用。在动物模型中，即使反复大剂量注射，也未观察到金刚烷胺的不良反应。而且，金刚烷胺可以在体内和体外增强抗原诱导的免疫反应，增加多种免疫调节细胞因子如干扰素和肿瘤坏死因子的分泌。但是，裸金刚烷胺不可避免地会从体内排出过快，这会降低其免疫刺激能力。本发明将单体金刚烷胺分子连接在一起得到金刚烷胺二聚体，以提高金刚烷胺在体内的利用效率和循环周期。
本发明提供的金刚烷胺二聚体相较于铝佐剂或金刚烷胺单体佐剂具有更好的增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的抗体反应，产生更高水平的IgG。
同时本发明选择以金刚烷胺作为母体分子，得到金刚烷胺二聚体，作为新型佐剂应用在疫苗中，节约了大量的佐剂分子前期筛选与研发周期。
本发明提供上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体的制备方法，包括以下步骤：将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行取代反应，得到式3所示结构的第一中间产物；将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解酸化反应，得到式4所示结构的第二中间产物；将所述第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺缩合反应，得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体。本发明提供的制备方法通过依次进行取代反应、水解酸化反应和酰胺缩合反应成功合成金刚烷胺二聚体，本发明提供的制备方法过程简单，可操作性强，适宜工业化生产。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的金刚烷胺二聚体的制备流程图；
图2为本发明实施例1制备的金刚烷胺二聚体的质谱图；
图3为本发明实施例1制备的金刚烷胺二聚体第二次免疫后7天采血的ELISA实验结果图；
图4为本发明实施例1制备的金刚烷胺二聚体第三次免疫后7天采血的ELISA实验结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种金刚烷胺二聚体，具有式1所示结构：
本发明提供的金刚烷胺二聚体，1份子结构中含有2分子的金刚烷胺结构，相较于铝佐剂或金刚烷胺单体佐剂具有更好的增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的抗体反应，产生更高水平的IgG。同时本发明选择以金刚烷胺作为母体分子，合成金刚烷胺二聚体，作为新型佐剂应用在疫苗中，节约了大量的佐剂分子前期筛选与研发周期。
本发明提供了上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体的制备方法，包括以下步骤：
将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行取代反应，得到式3所示结构的第一中间产物；
将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解酸化反应，得到式4所示结构的第二中间产物；
将所述第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺缩合反应，得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体。
在本发明中，若无特殊说明，所有制备原料/组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。
将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行取代反应，得到式3所示结构的第一中间产物；
在本发明中，式2所示结构的化合物的英文名称为1,4(1,4)-dibenzenacyclohexaphane-12,43-diol。
在本发明中，式2所示结构的化合物的化学式为C16H16O2。
在本发明中，式2所示结构的化合物的相对分子质量为240.12。
在本发明中，所述卤代乙酸甲酯具体优选为氯代乙酸甲酯。
在本发明中，所述无机碱催化剂具体优选为碳酸铯。
在本发明中，所述极性有机溶剂具体优选为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。
在本发明中，式2所示结构的化合物和卤代乙酸甲酯的摩尔比为1:(10～11)。
在本发明的具体实施例中，所述卤代乙酸甲酯具体优选为氯代乙酸甲酯时，式2所示结构的化合物和氯代乙酸甲酯的摩尔比具体优选为0.083:0.91。
在本发明中，式2所示结构的化合物和所述无机碱催化剂的质量比优选为20:137。
本发明对所述极性有机溶剂的用量没有特殊要求，将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂完全溶解即可。
本发明对式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中的具体实施过程没有特殊要求。
在本发明中，所述取代反应的温度优选为50～70℃，更优选为60℃。
在本发明中，所述取代反应的保温时间优选为12～24h，更优选为20h。
在本发明中，所述取代反应得到取代反应液，本发明优选对所述取代反应液进行后处理，得到式3所示结构的第一中间产物。在本发明中，所述后处理优选包括：依次进行固液分离、滤液萃取和除去油机萃取相中的有机萃取剂。本发明优选对降温至室温的取代反应液进行固液分离，在本发明中，所述固液分离具体优选为过滤，本发明优选通过所述固液分离去除固态的无机碱催化剂。在本发明中，所述萃取使用的萃取剂具体优选水和乙酸乙酯，所述萃取后，本发明保留萃取有机相。本发明优选通过旋转蒸发去除萃取后的有机相中的有机萃取剂。本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。
本发明优选采用ESI-MS正离子模式进行式3所示结构的第一中间产物的鉴定。
得到式3所示结构的第一中间产物后，本发明将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解酸化反应，得到式4所示结构的第二中间产物；
在本发明中，所述式3所示结构的第一中间产物的醇溶液具体优选为第一中间产物的乙醇溶液。
本发明对所述式3所示结构的第一中间产物的醇溶液中式3所示结构的第一中间产物的质量含量没有特殊要求。
在本发明中，所述碱性溶液优选为：向所述第一中间产物的醇溶液中加入NaOH。
在本发明中，所述NaOH与式2所述结构的原料的质量比优选为166.2:30。
在本发明中，式2所示结构的第一中间产物的醇溶液加入NaOH后发生水解反应，生成醇钠产品。在本发明中，所述水解反应的时间优选为1～2h。
在本发明中，所述式2所示结构的第一中间产物的醇溶液在碱性溶液中进行水解反应得到碱性水解反应液，本发明优选对所述碱性水解反应液进行萃取，得到水相产物，所述萃取使用的萃取剂具体优选水和乙酸乙酯，所述萃取后，本发明保留萃取水相，所述萃取水相为碱性水解反应液。
在本发明中，所述碱性水解反应液在酸性溶液中进行酸化反应。
在本发明中，所述酸性溶液优选为：向所述碱性水解反应液中加入HCl。
在本发明中，所述酸化反应的pH值优选为5。
在本发明中，在酸性反应得到酸性水解液，本发明优选对所述酸性水解液进行后处理，得到式4所示结构的第二中间产物。在本发明中，所述后处理优选包括：依次进行萃取得到有机相和除去有机萃取剂。在本发明中，所述萃取的的萃取剂优选为水和乙酸乙酯，所述萃取后，本发明保留萃取有机相。本发明优选通过旋转蒸发去除萃取后的有机相中的有机萃取剂。本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。
本发明由式3所示结构的第一中间产物制备式4所示结构的第二中间产物时，采用先在碱性环境中进行水解反应得到醇钠，然后在酸性环境中进行酸化反应得到-OH，能够有效提高式4所示结构的第二中间产物的产率。
本发明优选采用ESI-MS正离子模式进行式4所示结构的第二中间产物的鉴定。
得到式4所示结构的第二中间产物后，本发明将所述第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺缩合反应，得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体。
在本发明中，所述有机缩合剂具体优选为2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)。
在本发明中，所述有机胺催化剂具体优选为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。
在本发明中，所述有机溶剂具体优选为DMF。
在本发明中，所述第二中间产物和金刚烷胺的质量比优选为3:5。
在本发明中，式4所示结构的第二中间产物和有机缩合剂的质量比优选为30:19.21。
在本发明中，式4所示结构的第二中间产物和有机胺催化剂的质量比优选为30:13.05。
本发明对所述有机溶剂的用量没有特殊要求，能够确保所述式4所示结构的第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂完全溶解即可。
在本发明中，所述酰胺缩合反应的温度优选为室温。
在本发明中，所述酰胺缩合反应的保温时间优选为18～24h。
在本发明中，所述酰胺缩合反应后得到酰胺缩合反应液，本发明优选对所述酰胺缩合反应液进行后处理，得到式1所示结构的手性分子化合物。在本发明中，所述后处理优选包括依次进行：萃取、有机相干燥、浓缩和分离纯化。在本发明中，所述萃取优选将所述酰胺缩合反应液、乙酸乙酯和水混合进行萃取得到萃取有机相。本发明优选采用无水硫酸钠对所述萃取有机相进行干燥，干燥后将所述硫酸钠过滤去除后进行浓缩，所述浓缩优选为真空浓缩。本发明优选采用薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)进行分离纯化。
本发明优选采用ESI-MS正离子模式进行终产物的鉴定。
本发明提供了上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体或上述技术方案所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。
在本发明中，所述疫苗具体优选为抗病毒疫苗。
在本发明中，所述抗病毒疫苗具体优选为新型冠状病毒疫苗。
在本发明中，所述新型冠状病毒疫苗具体优选为新型冠状病毒RBD蛋白。
在本发明的具体实施例中，所述新型冠状病毒RBD蛋白具体为新冠病毒重组蛋白疫苗。
本发明提供了一种疫苗，包括免疫活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为上述技术方案所述的金刚烷胺二聚体或上述技术方案所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体。
在本发明中，所述疫苗中，所述免疫活成成分和疫苗佐剂的质量比具体优选为10:10。
在本发明中，所述疫苗优选进行肌肉注射免疫。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的上述技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
在本发明中，实施例中使用的原料的种类及来源为：：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate，HATU)、N,N-二异丙基乙胺(N,N-Diisopropylethylamine,DIPEA)、氢氧化钠(NaOH)、盐酸(HCl)、乙醇(EtOH)和N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)购自阿达玛斯试剂有限公司(中国，上海)；1,4(1,4)-dibenzenacyclohexaphane-12,43-diol购自大赛璐药物手性技术有限公司(中国，上海)；碳酸铯(Cs2CO3)购自TCI化成工业发展有限公司(中国，上海)；金刚烷胺、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)购自sigma-aldrich贸易有限公司(中国，上海)；氯乙酸甲酯购自阿拉丁试剂有限公司(中国，上海)；SARS-CoV-2的RBD蛋白购自北京义翘神州生物技术有限公司(中国，北京)；辣根过氧货物酶标记的羊抗鼠IgG抗体购自安诺伦生物科技有限公司(中国，北京)；酶标板购自美国康宁有限公司。
实施例1
按照图1所述的合成路线图，称量20mg的式2所示结构的化合物(1,4(1,4)-dibenzenacyclohexaphane-12,43-diol，记为S1，0.083mmol)加入装有磁力搅拌子的圆底烧瓶中，随后加入3mL无水DMF溶解式2所示结构的化合物；将氯乙酸甲酯(80μL，0.91mmol)和Cs2CO3(137mg，0.42mmol)加入圆底烧瓶中。在油浴60℃下搅拌反应20h。反应结束后，先过滤反应物以除去Cs2CO3；过滤后的产物用水/乙酸乙酯进行萃取，保留乙酸乙酯相产物；随后，反应产物利用旋转蒸发仪进行减压浓缩，得到的产物借助电喷雾电离质谱(Electrosprayionization-MS,ESI-MS)正离子模式进行化合物鉴定，得到式3所示结构的第一中间产物，记为S2。
将式3所示结构的第一中间产物用乙醇重新溶解，并向溶液中加入166.2mg NaOH；反应1.5h后终止反应；随后用水/乙酸乙酯进行萃取，此时保留水相产物；进一步向水相中加入HCl，调节至pH为5；再次利用水/乙酸乙酯进行萃取，保留乙酸乙酯相产物，利用旋转蒸发仪进行减压浓缩，得到的产物借助ESI-MS负离子模式进行化合物鉴定，得到式4所示结构的第二中间产物，记为S3。
将30mg式4所示结构的第二中间产物溶解在2mL无水DMF中，在搅拌下加入金刚烷胺(50mg，0.327mmol)、HATU(19.21mg，0.051mmol)和DIPEA(17.6μL，0.101mmol)；反应进行24h；反应结束后产物用水/乙酸乙酯进行萃取，保留乙酸乙酯相产物，并用无水Na2SO4进行干燥，过滤并真空浓缩；通过薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)进行分离纯化，并利用ESI-MS正离子模式进行终产物的鉴定,得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体，记为R6A。，质谱图如图2所示；
测试例1
利用新冠免疫蛋白疫苗RBD与实施例1制备的金刚烷胺二聚体佐剂免疫动物
6-8周Balb/c小鼠随机分为以下4组(n＝6)：(1)21μg(0.033μmol)金刚烷胺二聚体和10μg RBD(R6A+RBD组)；(2)10μg(0.066μmol)金刚烷胺和10μg RBD(Ada组)；(3)10μg RBD(RBD组)；(4)0.9％生理盐水作为阴性对照组(Blank组)。分别在第0天、14天通过肌肉注射进行小鼠免疫。于第二次免疫后7天进行尾静脉采血，收集血清样品。
所有动物实验经中国医学科学院医学生物学研究所动物实验伦理委员会批准，严格按照云南省实验室动物福利与伦理委员会规定操作。
测试例2
采用ELISA检测实施例1制备的金刚烷胺二聚体佐剂比金刚烷胺单体佐剂提高新型冠状蛋白疫苗的体液免疫应答
抗体是机体体液免疫产生用来抵抗病原微生物的感染，能够与病原体结合阻止感染靶细胞，保护机体。上述测试例1中的4组所有BALB/c小鼠在于第二次免疫后7天采血做ELISA检测。
具体步骤：用抗原溶液包被96孔板，50-100μL/孔，密封孔板，放入4℃冰箱包被过夜，抗原为RBD蛋白，浓度为5μg/mL；次日，控干板内液体，用0.01M PBS与0.05％Tween配成的PBST洗板4-5次，在吸水纸上拍干板底水分，加入1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS，在37℃条件封闭2小时。封闭结束后，控干板内液体，用PBST洗板4～5次，在吸水纸上拍干板底水分，将稀释后的待测血清样品加入每个孔中，血清稀释度为1:10000，并在37℃条件下孵育2小时。孵育结束，控干板内液体，再用PBST洗板4～5次并在吸水纸上拍干板底水分，随后，将用HRP标记的抗鼠抗体加入96孔板中，针对小鼠的IgG按1:5000稀释，在37℃条件下孵育1小时。二抗孵育结束，控干板内液体，再用PBST洗板4～-5次并在吸水纸上拍干板底水分，向每孔加入100μL 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)与过氧化氢(H2O2)混合液作为显色底物，孵育时间为8～10分钟，然后加入50μL 1M H2SO4终止显色，最后，用酶标仪双波长450nm和测630nm各孔OD值。
ELISA实验结果见图3，图3为测试例1中4组样品第二次免疫后7天采血的ELISA实验结果；图3中：R6A+RBD组为金刚烷胺二聚体和RBD；Ada组为金刚烷胺单体和RBD；RBD组为10μg RBD；Blank组为0.9％生理盐水作为阴性对照组；*表示R6A+RBD组与Ada+RBD组的统计学对比分析P值(P<0.05)；**表示R6A+RBD组与RBD组的统计学对比分析P值(P<0.01)。
图3的结果表明在1:10000的血清稀释度下实施例1制备的金刚烷胺二聚体佐剂组(R6A+RBD)的抗体水平高于金刚烷胺单体佐剂组(Ada+RBD)和不加佐剂的蛋白疫苗组(RBD组)，引起了更强的体液免疫反应。
测试例3
实施例1制备的金刚烷胺二聚体佐剂能够比金刚烷胺单体佐剂和铝佐剂提高三针免疫时的新型冠状蛋白疫苗的体液免疫应答水平；
具体测试过程为：利用新冠免疫蛋白疫苗与金刚烷胺二聚体等佐剂免疫动物；
6～8周Balb/c小鼠随机分为以下五组(n＝6)：(1)21μg(0.033μmol)金刚烷胺二聚体和10μg RBD(R6A+RBD组)；(2)10μg(0.066μmol)金刚烷胺和10μg RBD(Ada组)；(3)35μg铝佐剂和10μg RBD(Alu+RBD组)；(4)10μg RBD(RBD组)；(5)0.9％生理盐水作为阴性对照组(Blank组)。于第三次免疫后7天进行尾静脉采血，收集血清样品。
所有动物实验经中国医学科学院医学生物学研究所动物实验伦理委员会批准，严格按照云南省实验室动物福利与伦理委员会规定操作。
采用ELISA检测实施例1制备的金刚烷胺二聚体佐剂能够比金刚烷胺单体佐剂和铝佐剂提高三针免疫时的新型冠状蛋白疫苗的体液免疫应答.
由抗原刺激机体产生的特异性抗体的免疫反应称为体液免疫，主要通过检测抗体的滴度的水平(主要是IgG)来体现体液免疫应答的强度与中和抗体实验来验证抗体的有效性。
具体步骤：用抗原溶液包被96孔板，50～100μL/孔，密封孔板，放入4℃冰箱包被过夜，抗原为RBD蛋白，浓度为5μg/mL；次日，控干板内液体，用0.01M PBS与0.05％Tween配成的PBST洗板4～5次，在吸水纸上拍干板底水分，加入1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS，在37℃条件封闭2小时。封闭结束后，控干板内液体，用PBST洗板4～5次，在吸水纸上拍干板底水分，将稀释后的待测血清样品加入每个孔中，小鼠的血清稀释度分别为:1:10000、1:20000、1:40000、1:80000、1:160000，并在37℃条件下孵育2小时。孵育结束，控干板内液体，再用PBST洗板4～5次并在吸水纸上拍干板底水分，随后，将用HRP标记的抗鼠抗体加入96孔板中，针对小鼠的IgG按1:5000稀释，在37℃条件下孵育1小时。二抗孵育结束，控干板内液体，再用PBST洗板4～5次并在吸水纸上拍干板底水分，向每孔加入100μL3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)与过氧化氢(H2O2)混合液作为显色底物，孵育时间为8～10分钟，然后加入50μL1M H2SO4终止显色，最后，用酶标仪双波长450nm和测630nm各孔OD值。
ELISA实验结果见图4，图4中：R6A+RBD组为金刚烷胺二聚体+RBD；Ada+RBD组为金刚烷胺+RBD；Alu+RBD组为铝佐剂+RBD；RBD组为RBD；Blank组为0.9％生理盐水；****表示R6A+RBD组与Ada+RBD组的统计学对比分析P值(P<0.0001)；**表示R6A+RBD组与Alu+RBD组的统计学对比分析P值(P<0.01)。
由图4可以得出：三针免疫后金刚烷胺二聚体佐剂组(R6A+RBD)的抗体水平高于金刚烷胺单体佐剂组(Ada+RBD)和铝佐剂组(Alu+RBD)，并具有显著性差异。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (8)
1.一种金刚烷胺二聚体，其特征在于，具有式1所示结构：
2.权利要求1所述的金刚烷胺二聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将式2所示结构的化合物、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行取代反应，得到式3所示结构的第一中间产物；
将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解酸化反应，得到式4所示结构的第二中间产物；
将所述第二中间产物、金刚烷胺、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺缩合反应，得到式1所示结构的金刚烷胺二聚体。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，式2所示结构的化合物和卤代乙酸甲酯的摩尔比为1:10～11。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第二中间产物和金刚烷胺的质量比为3:5。
5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应的温度为50～70℃，所述取代反应的保温时间为12～24h。
6.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于，所述酰胺缩合反应的温度为室温，所述酰胺缩合反应的保温时间为18～24h。
7.权利要求1所述的金刚烷胺二聚体或权利要求2～6任一项所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用；所述疫苗为抗新型冠状病毒疫苗。
8.一种疫苗，其特征在于，包括免疫活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为权利要求1所述的金刚烷胺二聚体或权利要求2～6任一项所述的制备方法制备得到的金刚烷胺二聚体；所述疫苗为抗新型冠状病毒疫苗。
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Also Published As
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