CN112655556A - 一种王草的组织培养脱毒快繁方法 - Google Patents
一种王草的组织培养脱毒快繁方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112655556A CN112655556A CN202011527958.8A CN202011527958A CN112655556A CN 112655556 A CN112655556 A CN 112655556A CN 202011527958 A CN202011527958 A CN 202011527958A CN 112655556 A CN112655556 A CN 112655556A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- stem
- wangcao
- seedling
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims abstract description 28
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 41
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 20
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 20
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 20
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 19
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 18
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 15
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 claims description 10
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 10
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 10
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 238000005553 drilling Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 claims description 5
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 claims description 5
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 5
- QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N thiophanate-methyl Chemical compound COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241001646834 Mesona Species 0.000 claims description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241001646828 Platostoma chinense Species 0.000 claims 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 6
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000004459 forage Substances 0.000 abstract 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 11
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 7
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 244000299452 Gouania lupuloides Species 0.000 description 3
- 235000000292 Gouania lupuloides Nutrition 0.000 description 3
- 241001503951 Phoma Species 0.000 description 3
- 241000412329 Stylosanthes hispida Species 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 208000004770 Fusariosis Diseases 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- 206010051919 Fusarium infection Diseases 0.000 description 2
- 244000245214 Mentha canadensis Species 0.000 description 2
- 235000016278 Mentha canadensis Nutrition 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 244000115721 Pennisetum typhoides Species 0.000 description 2
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 1
- 241001558165 Alternaria sp. Species 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000380130 Ehrharta erecta Species 0.000 description 1
- 241001492222 Epicoccum Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000654381 Homo sapiens Sodium channel protein type 8 subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 244000188472 Ilex paraguariensis Species 0.000 description 1
- 235000003368 Ilex paraguariensis Nutrition 0.000 description 1
- 241001429318 Johnsongrass mosaic virus Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 241000209046 Pennisetum Species 0.000 description 1
- 244000130556 Pennisetum purpureum Species 0.000 description 1
- 235000007195 Pennisetum typhoides Nutrition 0.000 description 1
- 241000228453 Pyrenophora Species 0.000 description 1
- 102100031371 Sodium channel protein type 8 subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 241001495120 Stylosanthes Species 0.000 description 1
- 241001522021 Stylosanthes hamata Species 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- DFWFIQKMSFGDCQ-UHFFFAOYSA-N deethylatrazine Chemical compound CC(C)NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 DFWFIQKMSFGDCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种王草的组织培养脱毒快繁方法，本发明通过茎尖培养方法，生产出无病毒的健康种苗；本发明方法克服了王草常年通过无性繁殖，易携带的大量病菌和病毒，品质、产量降低及生产性能受限等问题，该方法可以促进种苗提纯复壮、缩短良种繁育周期；脱毒苗生产不受空间和季节限制，且脱毒健康种苗较原种茎运送也更为便捷；延长饲草料优质品种的使用年限，为南方饲草料供应及草产业化发展提供了重要保障。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种王草的组织培养脱毒快繁方法。
背景技术
全世界每年因病虫草害造成的种植作物损失高达35％(Pigmentel et al.，1981)，仅美国一国每年因牧草病害在各类草地上导致的平均损失就达到其总产的26％，天然草原因发生病害导致的损失为5％，其中种子田的损失高达52％(James etal.，1981)。在生态农业和集约化农业不断发展的今天，长期以来在生产实践上被忽视为不急之务的牧草病害危害已经与日俱增，逐渐成为提高生产能力的一大限制因素(南志标，2000)。在热带地区，高温高湿的气候为牧草病原微生物的生长和繁殖提供了更有利条件，导致牧草产量和品质降低，甚至绝收，如柱花草炭疽病在美国佛罗里达可造成有钩柱花草(Stylosantheshamata)干物质产量降低58％；在哥伦比亚炭疽病使圭亚那柱花草(S.guianensis)营养价值降低64％～100％；在澳大利亚，造成干物质产量降低22％～67％，种子产量降低16％～49％；我国测定炭疽病可使牧草产量降低20％～39.9％，种子减产28％～70.1％，粗蛋白含量降低51.8％，有4个柱花草品种先后因炭疽病被淘汰(易克贤，2001)。
热研4号王草(Pennisetum purpureum×P.americanum cv.Reyan No.4)是由象草和美洲狼尾草杂交育成的多年生禾本科牧草，分蘖多，植株高大。株高1.5～4.5m，茎较粗2～3cm，叶片长60～130cm，宽3.5～6.0cm。中国热带农业科学院热带作物品种资源研所于1998年经过全国草品种审定委员会审定通过。据相关文献报道热研4号王草上常见由镰刀菌、黑孢霉和茎点霉引起的叶斑病，且为害程度较为严重，且携带有一些病毒。练启仙等2004～2005年对贵州花江地区王草病害调查结果表明，该地区存在Gibberella sp.引起的王草茎腐病、Alternaria sp.引起的王草褐斑病、Phoma sp.引起的王草叶斑病、Epicoccumsp.引起的王草斑点病和Rhizoctonia sp.引起的王草纹枯病等典型病害(练启仙等，2006；2007)。郑丽等对海南省牧草病害调查结果表明，造成海南王草叶斑病病害的病原菌主要有Phoma sp.、Rhizoctonia sp、Curvular sp.、Drechslera sacchari和Alternaria sp.5种病菌(郑丽，2014)。张驰等对海南、广西两省的热研4号王草真菌病害调查结果显示热研4号王草在海南地区发生叶斑病大多是由于镰刀菌侵染，在广西地区，热研4号王草因茎点霉、黑孢霉或镰刀菌侵染发生叶斑病的情况较为常见，且发病程度较为严重，均发现有茎点霉引起王草发生叶斑病的现象(张驰，2016)。巴西学者Karina报道了从象草里发现一个新型约翰逊草花叶病毒(JGMV-CNPGL)(Karina N.Silva，2016)。
热研4号王草于20世纪80年代从CIAT引进，1998年通过全国草品种审定委员会审定，适口性好，营养价值丰富，鲜草产量高，适应性广，一直以田间种茎(节)为原种无性繁殖主要繁殖方式在我国大面积推广，全国大部分省区均有种植，近40年来，已是我国南方牧草的当家品种，据不完全统计，推广面积达2000多万亩。常年的通过无性繁殖，易携带的大量的病菌和病毒，进而可影响热研4号王草本身自有的优越的生产性能。通过脱毒技术，脱除植物所感染的病毒及病菌，在超净无菌的条件下培养不带病菌的植株，生产出无病毒的种苗，为南方草产业和畜牧业发展提供基础保障。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种王草的组织培养脱毒快繁方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种王草的组织培养脱毒快繁方法，它包括以下步骤：
S1.外植体的选择：在无菌环境下剥取王草带有1-2个叶原基的顶端分生组织的茎尖或茎段；
S2.初代培养：将步骤S1剥取的茎尖或茎段接种到初代培养基上进行不定芽的诱导培养；其中，所述初代培养基为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3％；
S3.继代培养：将初代培养的不定芽切掉叶片，保留基部1cm高的茎段接种于增殖培养基上进行增殖培养，其中，所述增殖培养基为：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.01mg/L+活性0.5％+蔗糖3％；
S4.壮苗培养：将继代培养的不定芽接种在壮苗培养基上进行壮苗培养，所述壮苗培养基为：MS+活性炭0.5％+蔗糖4％；
S5.生根培养：将壮苗培养后的不定芽由芽丛单个切下，保留叶片后转入生根培养基中培养，培养至小苗长至7-8cm后进行炼苗移栽；其中，所述生根培养基为：1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.5％+蔗糖4％；
S6.炼苗移栽：将生根培养的瓶苗打开瓶盖，室内炼苗3-4d后进行移栽。
进一步地，所述王草为热研4号王草。
进一步地，步骤S1中所述外植体采用以下方法制备：取王草茎节和顶芽枝条，剪掉叶片，保留茎尖及部分茎段，75％酒精擦拭后，于超净工作台吹干后，逐层剥去叶片、叶原基，每剥掉一层都换用消毒后的手术刀，直至露出带有1-2个叶原基的顶端分生组织，并小心挖出。
进一步地，初代培养、继代培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500-2000lx。
进一步地，步骤S4中所述壮苗培养的时间为1个月。
进一步地，步骤S6中所述移栽的具体步骤为：取出炼苗后的小苗，洗净根部培养基后，移栽到育苗钵，基质为园田土、河沙、椰糠和草炭土的混合物，其中，各原料的重量比为河沙:椰糠:草炭土＝1:1:1:1，移栽前浇透水，移栽时打深1cm小孔，将王草苗基部放入小孔中，并用基质盖严，浇定根水，喷800倍甲基托布津，遮荫保湿，15d后去掉塑料薄膜并及时浇水。
本发明具有以下优点：本发明通过茎尖培养技术(脱毒技术)，脱除了王草所感染的病毒及病菌，生产出无病毒的健康种苗；本发明方法克服了王草常年通过无性繁殖，易携带的大量病菌和病毒进而影响王草本身自有的优越生产性能的缺陷，一定程度上恢复王草原品种优良特性，提高了品质与产量，同时可以促进种苗提纯复壮和缩短繁种周期，节省种子费用，较原种苗运送也更为便捷，且脱毒苗生产不受空间和季节限制，可连续进行繁殖和生产，有效从促进南方草业和畜牧业产业化发展。
附图说明
图1为热研4号王草茎节和顶芽的枝条；
图2为热研4号王草茎节和顶芽的枝条剪掉叶片后保留茎尖及部分茎段的示意图；
图3为带有1-2个叶原基的顶端分生组织；
图4为经初代培养20d后有茎尖萌动的示意图；
图5为经初代培养60d时茎尖发育为高4-5cm不定芽的示意图；
图6为经继代培养20d时不定芽高4-5cm并有新的不定芽分出示意图；
图7为不定芽经壮苗培养1个月后的示意图；
图8为经生根培养约30d小苗长至7-8cm的示意图；
图9为脱毒苗的示意图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
实施例1：一种热研4号王草的组织培养脱毒快繁方法，它包括以下步骤：
S1.外植体的选择：取王草茎节和顶芽枝条，如图1所示，剪掉叶片，保留茎尖及部分茎段，如图2所示，75％酒精擦拭后，于超净工作台吹干后，逐层剥去叶片、叶原基，每剥掉一层都换用消毒后的手术刀，直至露出带有1-2个叶原基的顶端分生组织，如图3所示，并小心挖出；
S2.初代培养：将步骤S1剥取的茎尖接种到初代培养基上进行不定芽的诱导培养，接种时将茎尖的生长点朝上，伤口紧贴培养基表面，剥取的白色茎尖经10d培养，茎尖变绿膨大，20d后有茎尖萌动，如图4所示，并开始伸出新叶；60d时，茎尖发育为高4-5cm的不定芽，如图5所示；其中，所述初代培养基为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500lx；
S3.继代培养：将初代培养的不定芽切掉叶片，保留基部1cm高的茎段接种于增殖培养基上进行增殖培养，每20天继代一次，形成芽丛后，接种时切分为2芽的小丛，每瓶接种3丛，接种的继代培养基上5d，就会伸出新叶，20d时，不定芽高4-5cm，并有新的不定芽分出，如图6所示，增殖系数为4；其中，所述增殖培养基为：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.01mg/L+活性0.5％+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500lx；
S4.壮苗培养：将继代培养的不定芽2芽每丛，接在壮苗培养基上，每瓶4丛株，在壮苗培养基上进行壮苗培养1个月，如图7所示；所述壮苗培养基为：MS+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500lx；
S5.生根培养：将壮苗培养后生长约3cm的不定芽由芽丛单个切下，保留叶片，转入生根培养基中培养，培养7d左右，在苗基部有白色根突出，以后根陆续长出，20d左右基本长齐，生根率达100％，根系粗壮，约30d培养至小苗长至7-8cm后进行炼苗移栽；其中，所述生根培养基为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500lx；
S6.炼苗移栽：将生根培养的瓶苗打开瓶盖，室内炼苗3-4d后取出炼苗后的小苗，洗净根部培养基后，移栽到育苗钵，基质为园田土、河沙、椰糠和草炭土的混合物，其中，各原料的重量比为河沙:椰糠:草炭土＝1:1:1:1，移栽前浇透水，移栽时打深1cm小孔，将王草苗基部放入小孔中，并用基质盖严，浇定根水，喷800倍甲基托布津，遮荫保湿，15d后去掉塑料薄膜并及时浇水；小苗移栽成活率为90％左右。移栽3个月，株高可达30cm，可带土定植到田间，如图9所示。
实施例2：一种热研4号王草的组织培养脱毒快繁方法，它包括以下步骤：
S1.外植体的选择：取王草茎节和顶芽枝条，如图1所示，剪掉叶片，保留茎尖及部分茎段，如图2所示，75％酒精擦拭后，于超净工作台吹干后，逐层剥去叶片、叶原基，每剥掉一层都换用消毒后的手术刀，直至露出带有1-2个叶原基的顶端分生组织，如图3所示，并小心挖出；
S2.初代培养：将步骤S1剥取的茎段接种到初代培养基上进行不定芽的诱导培养，接种时将茎段的生长点朝上，伤口紧贴培养基表面，剥取的白色茎尖经10d培养，茎尖变绿膨大，20d后有茎尖萌动，如图4所示，并开始伸出新叶；60d时，茎尖发育为高5cm的不定芽，如图5所示；其中，所述初代培养基为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度2000lx；
S3.继代培养：将初代培养的不定芽切掉叶片，保留基部1cm高的茎段接种于增殖培养基上进行增殖培养，每20天继代一次，形成芽丛后，接种时切分为4芽的小丛，每瓶接种4丛，接种的继代培养基上5d，就会伸出新叶，20d时，不定芽高4-5cm，并有新的不定芽分出，如图6所示，增殖系数为8；其中，所述增殖培养基为：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.01mg/L+活性0.5％+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度2000lx；
S4.壮苗培养：将继代培养的不定芽3芽每丛，接在壮苗培养基上，每瓶5丛株，在壮苗培养基上进行壮苗培养1个月，如图7所示；所述壮苗培养基为：MS+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度2000lx；
S5.生根培养：将壮苗培养后生长约5cm的不定芽由芽丛单个切下，保留叶片，转入生根培养基中培养，培养7d左右，在苗基部有白色根突出，以后根陆续长出，20d左右基本长齐，生根率达100％，根系粗壮，约30d培养至小苗长至7-8cm后进行炼苗移栽；其中，所述生根培养基为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度2000lx；
S6.炼苗移栽：将生根培养的瓶苗打开瓶盖，室内炼苗3-4d后取出炼苗后的小苗，洗净根部培养基后，移栽到育苗钵，基质为园田土、河沙、椰糠和草炭土的混合物，其中，各原料的重量比为河沙:椰糠:草炭土＝1:1:1:1，移栽前浇透水，移栽时打深1cm小孔，将王草苗基部放入小孔中，并用基质盖严，浇定根水，喷800倍甲基托布津，遮荫保湿，15d后去掉塑料薄膜并及时浇水；小苗移栽成活率为90％左右。移栽3个月，株高可达30cm，可带土定植到田间，如图9所示。
实施例3：一种热研4号王草的组织培养脱毒快繁方法，它包括以下步骤：
S1.外植体的选择：取王草茎节和顶芽枝条，如图1所示，剪掉叶片，保留茎尖及部分茎段，如图2所示，75％酒精擦拭后，于超净工作台吹干后，逐层剥去叶片、叶原基，每剥掉一层都换用消毒后的手术刀，直至露出带有1-2个叶原基的顶端分生组织，如图3所示，并小心挖出；
S2.初代培养：将步骤S1剥取的茎尖或茎段接种到初代培养基上进行不定芽的诱导培养，接种时将茎尖或茎段的生长点朝上，伤口紧贴培养基表面，剥取的白色茎尖经10d培养，茎尖变绿膨大，20d后有茎尖萌动，如图4所示，并开始伸出新叶；60d时，茎尖发育为高4-5cm的不定芽，如图5所示；其中，所述初代培养基为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1800lx；
S3.继代培养：将初代培养的不定芽切掉叶片，保留基部1cm高的茎段接种于增殖培养基上进行增殖培养，每20天继代一次，形成芽丛后，接种时切分为3芽的小丛，每瓶接种3丛，接种的继代培养基上5d，就会伸出新叶，20d时，不定芽高4-5cm，并有新的不定芽分出，如图6所示，增殖系数为6；其中，所述增殖培养基为：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.01mg/L+活性0.5％+蔗糖3％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1700lx；
S4.壮苗培养：将继代培养的不定芽2芽每丛，接在壮苗培养基上，每瓶5丛株，在壮苗培养基上进行壮苗培养1个月，如图7所示；所述壮苗培养基为：MS+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1800lx；
S5.生根培养：将壮苗培养后生长约4cm的不定芽由芽丛单个切下，保留叶片，转入生根培养基中培养，培养7d左右，在苗基部有白色根突出，以后根陆续长出，20d左右基本长齐，生根率达100％，根系粗壮，约30d培养至小苗长至7-8cm后进行炼苗移栽；其中，所述生根培养基为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭0.5％+蔗糖4％；培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1600lx；
S6.炼苗移栽：将生根培养的瓶苗打开瓶盖，室内炼苗3-4d后取出炼苗后的小苗，洗净根部培养基后，移栽到育苗钵，基质为园田土、河沙、椰糠和草炭土的混合物，其中，各原料的重量比为河沙:椰糠:草炭土＝1:1:1:1，移栽前浇透水，移栽时打深1cm小孔，将王草苗基部放入小孔中，并用基质盖严，浇定根水，喷800倍甲基托布津，遮荫保湿，15d后去掉塑料薄膜并及时浇水；小苗移栽成活率为90％左右。移栽3个月，株高可达30cm，可带土定植到田间，如图9所示。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1.外植体的选择：在无菌环境下剥取王草带有1-2个叶原基的顶端分生组织的茎尖或茎段；
S2.初代培养：将步骤S1剥取的茎尖或茎段接种到初代培养基上进行不定芽的诱导培养；其中，所述初代培养基为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3％；
S3.继代培养：将初代培养的不定芽切掉叶片，保留基部1cm高的茎段接种于增殖培养基上进行增殖培养，其中，所述增殖培养基为：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.01mg/L+活性0.5％+蔗糖3％；
S4.壮苗培养：将继代培养的不定芽接种在壮苗培养基上进行壮苗培养，所述壮苗培养基为：MS+活性炭0.5％+蔗糖4％；
S5.生根培养：将壮苗培养后的不定芽由芽丛单个切下，保留叶片后转入生根培养基中培养，培养至小苗长至7-8cm后进行炼苗移栽；其中，所述生根培养基为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭0.5％+蔗糖4％；
S6.炼苗移栽：将生根培养的瓶苗打开瓶盖，室内炼苗3-4d后进行移栽。
2.根据权利要求1所述的一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，所述王草为热研4号王草。
3.根据权利要求1所述的一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，步骤S1中所述外植体采用以下方法制备：取王草茎节和顶芽枝条，剪掉叶片，保留茎尖及部分茎段，75％酒精擦拭后，于超净工作台吹干后，逐层剥去叶片、叶原基，每剥掉一层都换用消毒后的手术刀，直至露出带有1-2个叶原基的顶端分生组织，并小心挖出。
4.根据权利要求1所述的一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，初代培养、继代培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：温度25±2℃，光照12/12hr，光照强度1500-2000lx。
5.根据权利要求1所述的一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，步骤S4中所述壮苗培养的时间为1个月。
6.根据权利要求1所述的一种王草的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，步骤S6中所述移栽的具体步骤为：取出炼苗后的小苗，洗净根部培养基后，移栽到育苗钵，基质为园田土、河沙、椰糠和草炭土的混合物，其中，各原料的重量比为河沙:椰糠:草炭土＝1:1:1:1，移栽前浇透水，移栽时打深1cm小孔，将王草苗基部放入小孔中，并用基质盖严，浇定根水，喷800倍甲基托布津，遮荫保湿，15d后去掉塑料薄膜并及时浇水。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011527958.8A CN112655556A (zh) | 2020-12-22 | 2020-12-22 | 一种王草的组织培养脱毒快繁方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011527958.8A CN112655556A (zh) | 2020-12-22 | 2020-12-22 | 一种王草的组织培养脱毒快繁方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112655556A true CN112655556A (zh) | 2021-04-16 |
Family
ID=75407569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011527958.8A Pending CN112655556A (zh) | 2020-12-22 | 2020-12-22 | 一种王草的组织培养脱毒快繁方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112655556A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115918533A (zh) * | 2022-11-29 | 2023-04-07 | 上饶师范学院 | 一种桂牧一号象草小滴玻璃化法超低温保存的方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101869054A (zh) * | 2009-04-23 | 2010-10-27 | 上海上房园林植物研究所 | 紫叶狼尾草的组织培养方法 |
| CN101953304A (zh) * | 2010-10-19 | 2011-01-26 | 赵国平 | 美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法 |
| US20150150162A1 (en) * | 2012-06-12 | 2015-05-28 | New Energy Farms Limited | Plant Propagation |
| CN106332781A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-01-18 | 遵义市龙驰生物科技有限公司 | 一种杂交狼尾草高效扩繁方法 |
| CN107006256A (zh) * | 2017-04-21 | 2017-08-04 | 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 | 一种提高王草分蘖数的种植方法 |
| CN110692518A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-01-17 | 高州市石生源生物科技发展有限公司 | 一种粤草组织培养快速繁殖育种方法 |
-
2020
- 2020-12-22 CN CN202011527958.8A patent/CN112655556A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101869054A (zh) * | 2009-04-23 | 2010-10-27 | 上海上房园林植物研究所 | 紫叶狼尾草的组织培养方法 |
| CN101953304A (zh) * | 2010-10-19 | 2011-01-26 | 赵国平 | 美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法 |
| US20150150162A1 (en) * | 2012-06-12 | 2015-05-28 | New Energy Farms Limited | Plant Propagation |
| CN106332781A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-01-18 | 遵义市龙驰生物科技有限公司 | 一种杂交狼尾草高效扩繁方法 |
| CN107006256A (zh) * | 2017-04-21 | 2017-08-04 | 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 | 一种提高王草分蘖数的种植方法 |
| CN110692518A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-01-17 | 高州市石生源生物科技发展有限公司 | 一种粤草组织培养快速繁殖育种方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 刘红美等: "第3代杂交狼尾草优质种苗快速繁育技术研究", 《山西农业科学》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115918533A (zh) * | 2022-11-29 | 2023-04-07 | 上饶师范学院 | 一种桂牧一号象草小滴玻璃化法超低温保存的方法 |
| CN115918533B (zh) * | 2022-11-29 | 2023-11-28 | 上饶师范学院 | 一种桂牧一号象草小滴玻璃化法超低温保存的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107980635B (zh) | 一种高成活率的苹果组培苗两步移栽法 | |
| CN106105749A (zh) | 一种杜鹃花扦插繁殖方法 | |
| CN102972190A (zh) | 一种西瓜嫁接及嫁接苗培育的方法 | |
| CN104642109B (zh) | 一种以鳞茎片为外植体构建大蒜微繁的方法 | |
| CN103181280A (zh) | 一种鱼腥草扦插繁殖方法 | |
| CN105766619B (zh) | 一种黄花菜种子的培育方法 | |
| CN104585027A (zh) | 一种生姜组培苗的炼苗方法 | |
| CN106538251A (zh) | 一种降低大叶种茶树萎芽病的快速育苗方法 | |
| CN109757274B (zh) | 罗汉果组培苗高产高效移栽方法 | |
| CN101422136B (zh) | 沿阶草胚状体诱导及培养方法 | |
| CN111480578B (zh) | 一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法 | |
| CN101816286B (zh) | 一种利用鳞片组培快速繁殖欧洲水仙的方法 | |
| CN112655556A (zh) | 一种王草的组织培养脱毒快繁方法 | |
| CN116058281B (zh) | 一种沙木蓼组织快繁方法 | |
| CN109526743B (zh) | 大蒜愈伤组织快繁和良种繁育方法 | |
| CN104303765B (zh) | 石斛的高产种植方法 | |
| CN103125398A (zh) | 一种提高结球甘蓝离体再生效率的组织培养方法 | |
| LU500165B1 (en) | Aseptic seedling cultivation method for roegneria | |
| CN1303868C (zh) | 鞘蕊苏栽培方法 | |
| CN115005105A (zh) | 一种蓝莓组织培养方法 | |
| CN109757231A (zh) | 一种山药种质资源快速繁殖与保存的方法 | |
| CN106134565A (zh) | 一种马蔺种子即采即播提高种子发芽率的方法 | |
| CN112167060B (zh) | 一种背蛇生的人工高效繁殖方法 | |
| CN104272949A (zh) | 一种景天植物培养育苗方法 | |
| CN112840938A (zh) | 一种碧根果实生苗规模化快速繁育方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210416 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |