CN110564702B - 二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用 - Google Patents

二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用。本发明的二化螟生长发育相关蛋白ND，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次发现ND基因参与二化螟的生长发育过程，其表达缺失可显著提高二化螟幼虫的死亡率，最终抑制种群的发展，可用于开发防治螟蛾科二化螟昆虫产品。

Description

二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和 应用
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用。
背景技术
二化螟(Chilo suppressalis)属鳞翅目螟蛾科，是一种重要的多食性农业害虫，主要危害水稻、茭白以及玉米、小麦等多种植物，尤其对早栽、生长茂密的田块及杂交水稻田危害较重。目前，对于二化螟的防治以施用化学杀虫剂为主，然而长期大量使用化学农药引发了环境压力以及抗药性等问题。为转变此类情况，开发和利用符合环保、健康、绿色生态建设、发展可持续理念的水稻害虫无公害防治措施成为当前的防治热点。
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NADH)脱氢酶(NADH dehydrogenase，ND))，又称辅酶Ⅰ脱氢酶(coenzymeⅠ-dependentdehydrogenases)，是细胞能量代谢所必需的辅酶，对生物的有氧呼吸起重要作用。NADH是线粒体电子传递链(ETC)中的主要电子载体之一。线粒体是细胞能量代谢、生物合成、细胞程序性死亡和氧化应激的关键参与者。因此，在生物体的生长发育过程中，ND起着重要的作用。
现有技术对于昆虫中Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)的研究主要是分子机制，对于其功能机理和应用研究较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种二化螟生长发育相关基因ND。
本发明的再一目的在于提供上述基因所编码的蛋白。
本发明的再一目的在于提供上述基因的dsRNA干扰序列。
本发明的再一目的在于提供含有上述基因的重组表达载体。
本发明的再一目的在于提供含有上述基因的重组菌株。
本发明的再一目的在于提供二化螟ND基因的应用。
本发明的再一目的在于提供二化螟ND基因的dsRNA干扰序列的应用。
本发明的二化螟生长发育相关蛋白ND，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
MVSWSALGRSFGINLLKTNNKLPNSIHNVTFSTSKAMSAGHGHKTMALQP
SRWQWHKFKDMFHYYAMVGLIPVGLIIFYTNVFIGPAQLAPIPEDYNPKH
WEYHRHPITRFIARYIHTNPQQEYEKFMHFIDEEAQRGKLRALEKAIIEK
MGERSDYQAYYYRPMVNKYLRLDKKAGDELYNRLGENLDE
本发明提供的二化螟生长发育相关基因ND的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：
GACACACGTACATATAAAGTTAGGACATAAAACTATTTCTATTATGTTGGTGTCATTGAATTGATAAGAACCACAGATTACAAAAAGATCGAAAAAAGATTTAGAATAAAACTGTCACTGTCAGAAAAGTCAAAACAGGAATGGTTTCTTGGAGTGCTTTGGGCCGATCTTTCGGCATTAATTTATTAAAAACTAATAACAAATTACCTAATTCTATACACAATGTGACTTTTTCTACTAGCAAGGCCATGAGCGCCGGCCATGGACACAAAACAATGGCTTTACAACCCTCCAGATGGCAATGGCACAAATTCAAGGATATGTTCCATTACTACGCCATGGTAGGCTTAATCCCAGTGGGGCTTATTATATTCTACACCAACGTGTTCATTGGGCCTGCTCAACTGGCCCCAATTCCAGAGGACTACAACCCGAAGCACTGGGAGTATCATCGCCATCCAATAACTCGTTTTATCGCCCGCTATATTCATACCAATCCACAGCAGGAGTATGAAAAATTCATGCACTTCATTGATGAAGAAGCCCAAAGGGGTAAACTAAGAGCTCTGGAGAAGGCAATTATAGAAAAGATGGGAGAACGCAGCGACTATCAAGCATATTATTATCGACCAATGGTTAACAAATACCTCCGTTTGGATAAGAAGGCCGGCGATGAACTTTATAATCGCCTTGGTGAGAATTTAGATGAATAAAAAAAATTATTGCGTTTTTATAAACACTGTTAGTATATTTTTAGTAATCAAGCATATTGTTACATTAATTCAATGTGGATAAATAATCTTTTGATTGTTGCTTGAAAATAGATTTATTTGAAGTATTTCATGTAATCATACCCTGATAAATGCAACAGGAAAATAAAATTATTCTACATTATGTTTTGTATTCATTTATTGTAACTTGCATGCTCTGATCAAAAATTGGCCATGATGTTAATTTTATAGTCATAGAAAATTGAAAAAAGATGAAGTTTGGGTGAAATAAAAATAGTTCTTATGGTAAAAAAAAAAAAA
上述序列全场1031bp。
本发明提供的二化螟生长发育相关基因ND的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：
ATGGTTTCTTGGAGTGCTTTGGGCCGATCTTTCGGCATTAATTTATTAAAAACTAATAACAAATTACCTAATTCTATACACAATGTGACTTTTTCTACTAGCAAGGCCATGAGCGCCGGCCATGGACACAAAACAATGGCTTTACAACCCTCCAGATGGCAATGGCACAAATTCAAGGATATGTTCCATTACTACGCCATGGTAGGCTTAATCCCAGTGGGGCTTATTATATTCTACACCAACGTGTTCATTGGGCCTGCTCAACTGGCCCCAATTCCAGAGGACTACAACCCGAAGCACTGGGAGTATCATCGCCATCCAATAACTCGTTTTATCGCCCGCTATATTCATACCAATCCACAGCAGGAGTATGAAAAATTCATGCACTTCATTGATGAAGAAGCCCAAAGGGGTAAACTAAGAGCTCTGGAGAAGGCAATTATAGAAAAGATGGGAGAACGCAGCGACTATCAAGCATATTATTATCGACCAATGGTTAACAAATACCTCCGTTTGGATAAGAAGGCCGGCGATGAACTTTATAATCGCCTTGGTGAGAATTTAGATGAATAA
上述序列全长573bp。
本发明还提供含有二化螟ND基因或其dsRNA干扰序列的重组表达载体和重组菌株。
根据本发明具体实施方式的二化螟ND基因的dsRNA干扰序列，其通过以下特异性引物序列扩增而得：
上游引物ds ND-F：tgGAATTCCAACGTGTTCATTGGGCCTG；
下游引物ds ND-R：tgGGTACCTTTTGATCAGAGCATGCAAGTT。
本发明提供上述基因在防治螟蛾科二化螟昆虫中的应用，包括将二化螟生长发育相关基因ND的dsRNA干扰序列饲喂二化螟的步骤。该干扰序列为双链RNA分子，利用特异性引物体外合成该序列的dsRNA，通过涂抹饲喂二化螟初孵幼虫。结果显示该序列可显著抑制Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的表达。沉默Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因对二化螟幼虫死亡率的影响，结果发现抑制Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的表达显著提高了幼虫的死亡率，可抑制种群的发展。
本发明的有益效果：
本发明首次发现Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因参与二化螟的生长发育过程，Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)表达的缺失显著提高二化螟幼虫的死亡率，最终抑制种群的发展。该基因可用于开发防治螟蛾科二化螟昆虫产品。
本发明提供了一种二化螟Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的干扰序列，该序列可显著抑制Nicotinamide adenine dinucleotidedehydrogenase(ND)基因的表达，可利用该序列干扰Nicotinamide adenine dinucleotidedehydrogenase(ND)基因的表达，抑制二化螟的生长，最终控制其种群的发展。可用于开发绿色环保的抗虫植物，最终达到绿色防治害虫的目的。
附图说明
图1显示饲喂ND基因的dsRNA后，二化螟ND基因的沉默效率；其中，dsND表示饲喂Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因dsRNA的处理组；dsEGFP表示饲喂EGFP基因dsRNA的对照组；H2O表示饲喂ddH2O的对照组；
图2显示饲喂Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的dsRNA对二化螟生长发育的影响；其中，dsND表示饲喂Nicotinamide adeninedinucleotide dehydrogenase(ND)基因dsRNA的处理组；dsEGFP表示饲喂EGFP基因dsRNA的对照组；H2O表示饲喂ddH2O的对照组。
具体实施方式
实施例1二化螟Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的克隆与分析
称取20mg的二化螟样品置于1.5ml无酶管中，利用一次性无酶研磨棒及液氮充分研磨后，使用提取试剂盒提取总RNA。
使用反转录试剂盒将提取的总RNA合成cDNA模板。
设计并合成如下引物：
上游引物序列ND-F：5'-ATGGTTTCTTGGAGTGCTTTGGG-3'；
下游引物序列ND-R：5'-TTATTCATCTAAATTCTCACCAAGGCG-3'。
利用上述引物ND-F和ND-R进行PCR扩增，扩增完毕后，用1％的琼脂糖凝胶电泳鉴定后，切胶并利用DNA凝胶回收试剂盒纯化回收目的片段。
将PCR产物连接到pEASY-T1载体上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆子，进行测序。
本发明的Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因开放阅读框架全长573bp，编码190个氨基酸残基，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，分子质量为22.4kDa，理论等电点为9.35。
实施例2饲喂ND基因的dsRNA后基因的沉默效率及其对二化螟生长发育的影响
2.1制备dsRNA模板
根据实施例1中所获得的Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因序列，设计特异性扩增引物(5'-端加上适当的酶切位点)，用于Nicotinamideadenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的dsRNA片段的扩增，设计的特异性引物如下：
上游引物序列ds ND-F：tgGAATTCCAACGTGTTCATTGGGCCTG
下游引物序列ds ND-R：tgGGTACCTTTTGATCAGAGCATGCAAGTT。
注：划线部分系列为EcoR I酶切位点
利用上述引物ds ND-F和ds ND-R进行PCR扩增，扩增完毕后，用1％的琼脂糖凝胶电泳鉴定后，切胶并利用DNA凝胶回收试剂盒纯化回收目的片段。最后通过TA克隆将其连接到pEASY-T1载体上。
2.2构建表达载体
利用AxyPrep Plasmid Miniprep kit试剂盒提取含有目的片段的质粒并酶切。酶切的目的片段与pET-2P载体连接。
重组载体转化入感受态细胞HT115的过程：将HT115从-80℃超低温冰箱中取出至于冰上融化5min，然后将连接产物用移液枪加入到HT115感受态细胞中，轻轻吸打混匀，冰上放置30min，然后于42℃水浴热激1min，再于冰上复苏2-3min，加入已灭菌的LB液体培养基至1ml，然后于37℃、150rpm摇床培养1h。取200μl菌液均匀涂布在卡那霉素抗性的LB培养基平板上，37℃倒置过夜培养。隔天挑取圆润饱满的单菌落，在卡那霉素抗性的LB液体培养基中扩大培养，将新鲜菌液于-80℃保存在30％已灭菌的甘油中，备用。
2.3饲喂ND基因
取100ml大肠杆菌中表达好的菌液，5000rpm离心5min，弃上清，用5ml(20:1)ddH2O悬浮菌液沉淀，4℃冰箱保存待用或直接用于饲喂实验。
提前两天用脱脂棉加水浸泡水稻种子MH63，饲喂实验时种子发芽。
用浓缩后的菌液均匀涂抹水稻种子，将三粒MH63水稻种子置于U形管中并保持环境湿润，取40头二化螟初孵幼虫接种于每个U形管中，饲喂二化螟幼虫72h。每个饲喂实验设置5个重复，分别用ddH2O、dsRNA(GFP、ND)饲喂。
饲喂72h后，取一部分干扰的幼虫收集作为定量样品来检测干扰效率，每个处理3个重复，每个重复15头幼虫。
7天后统计虫子的死亡率，并记录实验结果。
如图1所示，qRT-PCR检测结果显示，与对照组相比，饲喂ND基因的dsRNA显著抑制了ND在二化螟体内的表达。由此可见，该二化螟ND基因的干扰序列可显著抑制Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase(ND)基因的表达。
观察饲喂处理7天后二化螟生长情况，统计死亡率，如图2所示，与对照组H2O相比，饲喂ND基因dsRNA处理组的二化螟死亡率提高了35％；与对照组基因EGFP dsRNA相比，饲喂ND基因dsRNA处理组的二化螟死亡率提高了24.2％。因此，本发明提供的RNA干扰序列可应用于转基因抗二化螟植物的开发。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> 二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 190
<212> PRT
<213> 二化螟(Chilo suppressalis)
<400> 1
Met Val Ser Trp Ser Ala Leu Gly Arg Ser Phe Gly Ile Asn Leu Leu
1 5 10 15
Lys Thr Asn Asn Lys Leu Pro Asn Ser Ile His Asn Val Thr Phe Ser
20 25 30
Thr Ser Lys Ala Met Ser Ala Gly His Gly His Lys Thr Met Ala Leu
35 40 45
Gln Pro Ser Arg Trp Gln Trp His Lys Phe Lys Asp Met Phe His Tyr
50 55 60
Tyr Ala Met Val Gly Leu Ile Pro Val Gly Leu Ile Ile Phe Tyr Thr
65 70 75 80
Asn Val Phe Ile Gly Pro Ala Gln Leu Ala Pro Ile Pro Glu Asp Tyr
85 90 95
Asn Pro Lys His Trp Glu Tyr His Arg His Pro Ile Thr Arg Phe Ile
100 105 110
Ala Arg Tyr Ile His Thr Asn Pro Gln Gln Glu Tyr Glu Lys Phe Met
115 120 125
His Phe Ile Asp Glu Glu Ala Gln Arg Gly Lys Leu Arg Ala Leu Glu
130 135 140
Lys Ala Ile Ile Glu Lys Met Gly Glu Arg Ser Asp Tyr Gln Ala Tyr
145 150 155 160
Tyr Tyr Arg Pro Met Val Asn Lys Tyr Leu Arg Leu Asp Lys Lys Ala
165 170 175
Gly Asp Glu Leu Tyr Asn Arg Leu Gly Glu Asn Leu Asp Glu
180 185 190
<210> 2
<211> 1031
<212> DNA
<213> 二化螟(Chilo suppressalis)
<400> 2
gacacacgta catataaagt taggacataa aactatttct attatgttgg tgtcattgaa 60
ttgataagaa ccacagatta caaaaagatc gaaaaaagat ttagaataaa actgtcactg 120
tcagaaaagt caaaacagga atggtttctt ggagtgcttt gggccgatct ttcggcatta 180
atttattaaa aactaataac aaattaccta attctataca caatgtgact ttttctacta 240
gcaaggccat gagcgccggc catggacaca aaacaatggc tttacaaccc tccagatggc 300
aatggcacaa attcaaggat atgttccatt actacgccat ggtaggctta atcccagtgg 360
ggcttattat attctacacc aacgtgttca ttgggcctgc tcaactggcc ccaattccag 420
aggactacaa cccgaagcac tgggagtatc atcgccatcc aataactcgt tttatcgccc 480
gctatattca taccaatcca cagcaggagt atgaaaaatt catgcacttc attgatgaag 540
aagcccaaag gggtaaacta agagctctgg agaaggcaat tatagaaaag atgggagaac 600
gcagcgacta tcaagcatat tattatcgac caatggttaa caaatacctc cgtttggata 660
agaaggccgg cgatgaactt tataatcgcc ttggtgagaa tttagatgaa taaaaaaaat 720
tattgcgttt ttataaacac tgttagtata tttttagtaa tcaagcatat tgttacatta 780
attcaatgtg gataaataat cttttgattg ttgcttgaaa atagatttat ttgaagtatt 840
tcatgtaatc ataccctgat aaatgcaaca ggaaaataaa attattctac attatgtttt 900
gtattcattt attgtaactt gcatgctctg atcaaaaatt ggccatgatg ttaattttat 960
agtcatagaa aattgaaaaa agatgaagtt tgggtgaaat aaaaatagtt cttatggtaa 1020
aaaaaaaaaa a 1031
<210> 3
<211> 573
<212> DNA
<213> 二化螟(Chilo suppressalis)
<400> 3
atggtttctt ggagtgcttt gggccgatct ttcggcatta atttattaaa aactaataac 60
aaattaccta attctataca caatgtgact ttttctacta gcaaggccat gagcgccggc 120
catggacaca aaacaatggc tttacaaccc tccagatggc aatggcacaa attcaaggat 180
atgttccatt actacgccat ggtaggctta atcccagtgg ggcttattat attctacacc 240
aacgtgttca ttgggcctgc tcaactggcc ccaattccag aggactacaa cccgaagcac 300
tgggagtatc atcgccatcc aataactcgt tttatcgccc gctatattca taccaatcca 360
cagcaggagt atgaaaaatt catgcacttc attgatgaag aagcccaaag gggtaaacta 420
agagctctgg agaaggcaat tatagaaaag atgggagaac gcagcgacta tcaagcatat 480
tattatcgac caatggttaa caaatacctc cgtttggata agaaggccgg cgatgaactt 540
tataatcgcc ttggtgagaa tttagatgaa taa 573

Claims (3)

1.一种提高二化螟死亡率的方法，其特征在于，所述方法包括将二化螟生长发育相关基因ND的dsRNA干扰序列饲喂二化螟的步骤，
所述二化螟生长发育相关基因ND编码氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白。
2.根据权利要求1所述的提高二化螟死亡率的方法，其特征在于，所述dsRNA干扰序列通过以下特异性引物序列扩增编码氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质的基因得到：
上游引物ds ND -F：tgGAATTCCAACGTGTTCATTGGGCCTG;
下游引物ds ND -R：tgGGTACCTTTTGATCAGAGCATGCAAGTT。
3.根据权利要求1所述的提高二化螟死亡率的方法，其特征在于，所述二化螟生长发育相关基因ND的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854750B (zh) * 2022-05-12 2024-04-09 扬州大学 一种抑制二化螟幼虫头壳发育的干扰rna、试剂盒及使用方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107156194A (zh) * 2017-06-22 2017-09-15 嘉禾天奉富硒果业有限公司 环保高效柑橘杀虫剂
CN110144360A (zh) * 2019-06-06 2019-08-20 华中农业大学 一种二化螟SDR基因及其编码的蛋白质和应用、dsRNA及其扩增的引物对和应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10155958B2 (en) * 2011-03-31 2018-12-18 Shanghai Institutes For Biological Sciences, Cas Method for improving plant resistance to insects
WO2017128039A1 (zh) * 2016-01-26 2017-08-03 浙江大学 基因组合及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107156194A (zh) * 2017-06-22 2017-09-15 嘉禾天奉富硒果业有限公司 环保高效柑橘杀虫剂
CN110144360A (zh) * 2019-06-06 2019-08-20 华中农业大学 一种二化螟SDR基因及其编码的蛋白质和应用、dsRNA及其扩增的引物对和应用

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