CN110478484B - 抑制jdp2表达的物质在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明中公开了抑制JDP2表达的试剂在制备提高细胞对抗肿瘤药物的敏感性药物中的应用，一种抗肿瘤药物，以及检测JDP2表达量的试剂在制备试剂盒中的应用。为预防和治疗卵巢癌，提供了新的思路。

Description

抑制JDP2表达的物质在制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物领域，具体涉及抑制JDP2表达的试剂在制备药物中的应用，一种抗肿瘤药物，以及检测JDP2表达量的试剂在制备试剂盒中的应用。
背景技术
卵巢癌是世界范围内致死率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁女性的生命健康。据2018年全球癌症最新数据显示卵巢癌死亡人数为184,799，与往年数据相比，其死亡率呈快速上升趋势。由于卵巢癌的早期症状不明显且缺乏有效的诊断筛查技术，70％的卵巢癌患者在初次诊断时已是晚期(FIGO分期III和IV期)。目前，晚期卵巢癌的主要治疗方案是肿瘤细胞减灭术联合术后以铂类为基础的化疗方案。近年来，尽管临床手术技能及肿瘤细胞减灭术满意度不断提高，但是晚期卵巢癌患者生存预后依然没有得到根本改善，5年生存率只有30％。据最新数据统计，卵巢癌复发是卵巢癌患者死亡的主要原因，大约75％的卵巢癌患者死于肿瘤复发，其中60％的患者是因为肿瘤耐药导致的肿瘤复发。因此，阐明卵巢癌耐药的分子机制为肿瘤复发提供新的科学依据；对克服肿瘤耐药性以及降低卵巢癌患者死亡有显著的临床意义。
大多数临床化疗药物的抗癌机理是通过诱导DNA损伤进而导致肿瘤细胞死亡。研究表明，阿霉素，顺铂，托泊替康等DNA损伤药物通过诱导ROS(Reactive Oxygen Species)急剧上升，导致不可逆的氧化损伤和细胞衰老，甚至导致细胞死亡。然而，越来越多的研究表明肿瘤细胞可以抵抗化疗药物对其诱导的DNA损伤作用。在化疗药物诱导下存活的癌细胞通过维持高度活化的抗氧化还原水平，其不仅激活ROS清除***以应对氧化应激而且还抑制细胞凋亡，进而产生氧化应激耐受性。其中，谷胱甘肽(GSH)作为重要的非酶类抗氧化剂，在肿瘤细胞抵抗化疗药物诱导DNA损伤起到重要作用。GSH既可作为抗氧化剂直接清除ROS，也可作为其他氧化还原***的电子供体，与谷胱甘肽还原酶(GP)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)组成谷胱甘肽***清除过氧化物相关产物。报道表明，GSH在多种肿瘤中处于高水平，并且通过抑制细胞凋亡、促进细胞转移及对放化疗耐受，从而促进肿瘤的恶性进展，表明GSH还原体系在肿瘤恶性转化中起到重要作用。目前，肿瘤细胞是通过何种机制调控GSH维持在高度活化的水平尚不清楚。因此，揭示癌细胞调控GSH合成的具体分子机制以及深入探讨GSH抵抗化疗药物对其诱导的DNA损伤作用，对探索以抗衡GSH合成为靶点的肿瘤治疗具有重要临床指导意义。
发明内容
本发明的目的在于提供抑制JDP2表达的试剂在制备药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种抗肿瘤药物。
本发明的再一目的在于提供检测JDP2表达量的试剂在制备试剂盒中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
试剂在制备药物中的应用，所述试剂用于抑制JDP2表达，所述药物用于下列的至少之一：
提高细胞对抗肿瘤药物的敏感性；
抑制细胞内GSH合成相关基因的表达；
抑制细胞内GSH水平；
促进细胞内ROS水平；
抑制PRMT5介导的甲基化修饰。
进一步地，所述抗肿瘤药物为化疗药物。
更进一步地，所述化疗药物包括且不限于托泊替康、顺铂中的至少一种。
进一步地，所述合成相关基因包括SLC7A11、GCLM、GSS中的至少一种。
进一步地，所述试剂通过沉默JDP2抑制JDP2表达。
进一步地，所述细胞为卵巢癌细胞。
更进一步地，所述卵巢癌细胞为上皮性卵巢癌细胞。
进一步地，所述药物用于治疗卵巢癌。
更进一步地，所述卵巢癌为上皮性卵巢癌。
一种抗肿瘤药物，其特征在于：含有用于抑制JDP2表达的试剂和化疗药物。
进一步地，所述化疗药物包括且不限于托泊替康、顺铂中的至少一种。
检测JDP2表达量的试剂在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒用于下列的至少一种：
检测肿瘤耐药性；
肿瘤预后；
预测肿瘤复发。
进一步地，所述耐药性是指肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。
更进一步地，化疗药物包括且不限于托泊替康、顺铂中的至少一种。
进一步地，所述肿瘤为卵巢癌。
更进一步地，所述卵巢癌为上皮性卵巢癌。
本发明的有益效果是：
本发明主要通过分析公共数据库及临床样品数据，发现JDP2在卵巢癌中明显高表达，并且与肿瘤患者的总体生存预后和复发预后呈负相关。通过体内体外实验，证明JDP2促进卵巢癌DNA损伤剂如顺铂和托泊替康的耐药性。进一步，通过JDP2ChIPseq数据分析发现，DNA损伤压力诱导JDP2结合到GSH合成相关的关键因子SLC7A11、GCLM、GSS的启动子上。JDP2激活GSH合成相关的关键因子转录水平，进而提高细胞内的GSH的水平，维持ROS稳态并抵抗化疗药物对细胞的损伤。进一步检测发现，JDP2招募PRMT5，进而募集WDR5/MLL甲基转移酶复合物促进GSH合成相关的关键因子启动子H3K4me3甲基化修饰。用WDR5-MLL相互作用的小分子拮抗剂OICR-9429拮抗甲基化修饰，联合化疗药物治疗，抑制了JDP2/PRMT5复合物对GSH合成代谢的调控，导致DNA损伤中ROS水平升高到致死性剂量，从而有效治疗癌细胞。综上所述：JDP2可通过与PRMT5结合进而促进GSH合成相关的关键因子启动子H3K4me3甲基化修饰，从而维持高水平的GSH，进而促进卵巢癌的肿瘤耐药性及肿瘤复发。针对JDP2高表达的卵巢癌细胞，需联合使用WDR5/MLL的抑制剂OICR-9429和顺铂/托泊替康能有效抑制肿瘤细胞内的GSH水平，进而维持高水平ROS和促进肿瘤细胞死亡。本发明为卵巢癌耐药提供了新的诊断、治疗方法。
附图说明
图1为公共数据库NCBI/GEO/GSE38666；GSE14407；GSE66957中卵巢癌癌组织与正常卵巢中JDP2mRNA表达，进一步，通过Kaplan–Meier分析卵巢癌患者中JDP高表达组和低表达组的总生存预后和复发生存预后。
图2为Western blotting和Real-time PCR检测JDP2在2株卵巢上皮细胞和8株人卵巢癌细胞中的蛋白和mRNA表达水平，进一步，在146例卵巢癌组织检测JDP2的表达以及分析JDP2的表达与卵巢癌患者的5年总生存期和5年无复发生存期关系。
图3为JDP2的表达与细胞凋亡的关系。
图4为JDP2参与调控SLC7A11、GCLM和GSS的表达水平，进而促进GSH，抵抗ROS生成。
图5为在DNA损伤压力下，JDP2与PRMT5结合，进而促进GSH生成。
图6为DNA损伤压力下，JDP2/PRMT5促进合成关键因子启动子的甲基化修饰。
图7为托泊替康化疗后，JDP2不同表达组腹膜内接种荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况和小鼠存活率。
图8为构建原发性卵巢癌组织OV-1和OV-2建立PDX模型，检测顺铂/托泊替康联合OICR-9429的治疗效果。
具体实施方式
下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。
下面结合具体实施例子，进一步阐明本发明内容。下列实施例中未标明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》(第三版)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
发明人通过生物信息学方法对NCBI GEO datasets(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds/)多个卵巢癌组织mRNA表达芯片的公共数据(GSE38666；GSE14407；GSE66957)进行了分析。GSE38666，GSE14407和GSE66957的mRNA芯片都包含12例正常卵巢上皮细胞以及分别18例，12例和57例的卵巢癌组织的mRNA数据。其中，JDP2mRNA水平在卵巢癌组织中显著升高(图1A)，提示着JDP2可能参与卵巢癌的恶性发展。
为了验证JDP2的表达上调是否与卵巢癌的恶性发展以及与患者的生存预后密切相关，本发明进一步通过Keplan-Meier Plotter生存分析网站(http://kmplot.com/analysis/)分析JDP2与卵巢癌患者预后关系。数值用均数±SD表示，P<0.05认为在统计学上有显著性差异。JDP2高表达与患者的总体和复发生存预后呈负相关，提示着JDP2高表达的患者预后较差(图1B)。临床上采用DNA损伤剂治疗卵巢癌，包括一线药物顺铂和卡铂，以及二线药物托泊替康，多柔比星，和吉西他滨。这些药物诱导不同类型的DNA损伤，从而杀伤肿瘤细胞。通过KM Plotter分析发现JDP2高表达与接受铂类或者托泊替康药物治疗的病人总生存预后以及复发呈显著相关(图1B)，这提示了JDP2的表达与卵巢肿瘤患者抵抗DNA损伤剂密切相关。
基于以上内容，发明人从分子、细胞、动物和临床样本等多个层次，对发明人发现的JDP2进行***和深入的研究，以明确JDP2在卵巢癌发展中的分子机理。
实施例1临床组织中检测JDP2高表达与卵巢癌患者的不良预后密切相关
本实施例在2株卵巢癌上皮细胞(IOSE80,HOSEpic)和8株卵巢癌细胞(OV90,OV56,COV644,OVCAR3,COV362,TOV112D,A2780和SKOV3)中的检测JDP2蛋白和mRNA表达水平。为了进一步验证JDP2表达是否与卵巢癌的恶性进展和患者生存预后相关，本实施例在146例卵巢癌患者组织石蜡切片中检测JDP2的蛋白表达并分析JDP2的表达与卵巢癌临床病理特征的相关性。上述检测JDP2基因在RNA水平所用的引物为：
JDP2-F：5’-TGGGCTGTCTCTGTCTGTTG-3’(SEQ ID NO：1)；
JDP2-R：5’-GCTCTGTCATCACTCAGGCA-3’(SEQ ID NO：2)。
结果：JDP2蛋白和mRNA表达水平在8株卵巢癌细胞中明显高于2株卵巢癌上皮细胞(图2A、B)提示JDP2在卵巢癌中高表达，其可能作为促癌因子。JDP2在化疗后耐药病人组织中的表达明显高于非耐药的病人组织。免疫组织化学(IHC)统计分析显示JDP2水平与化疗耐药(P<0.001；r＝0.37)显著相关，复发(P＝0.002；r＝0.25)和FIGO阶段(P＝0.009；r＝0.21)，但与较短的总体/无复发生存期呈负相关，提示相对于JDP2低表达的患者，JDP2高表达的卵巢癌患者预后不良，生存时间更短(图2C、D、E)。
结论：
1)JDP2在卵巢癌细胞和组织中高表达；
2)JDP2在卵巢癌中高表达，其表达上调与患者耐药抗性、FIGO分期及患者复发密切相关。
实施例2：体外实验证明JDP2参与调控卵巢癌化疗耐受
为了研究JDP2在卵巢癌的生物学功能，本实施例在OV90和OVCAR3两株卵巢癌细胞系中，应用逆转录病毒载体***分别建立了稳定高表达和沉默JDP2表达的卵巢癌细胞系。在OV90和OVCAR3卵巢癌细胞中检测JDP2是否具有提高卵巢癌细胞对化疗药物的抵抗能力。在细胞中加入DNA损伤剂顺铂的处理，分别检测JDP2的表达对卵巢癌细胞凋亡和存活的影响。
结果：Western Blotting检测结果表明，本研究成功建立了外源性高表达JDP2和沉默内源性JDP2表达的卵巢癌稳定细胞系(图3A)。高表达JDP2可以提高卵巢癌细胞对化疗药物的抗凋亡能力(图3B)。同时克隆形成实验发现高表达JDP2可以提高卵巢肿瘤细胞的抗凋亡促进增殖作用(图3C)；以上结果表明JDP2高表达促进卵巢癌细胞抵抗化疗药物的细胞毒性。
结论：JDP2具有提高卵巢癌细胞对化疗药物的抵抗能力。
实施例3JDP2高表达调控谷胱甘肽还原***
本实施例采用DNA损伤剂(CPT)诱导细胞DNA损伤，并在处理的细胞中富集JDP2结合的DNA片段，并将纯化的DNA进行深度测序(ChIP sequencing，ChIP-seq)。ChIP过程采用Millipore染色质共沉淀试剂盒，将纯化的DNA样品送金维智公司进行建库测序，并使用HiSeq 2000测序仪器进行深度测序。测序后的数据使用bowtie2(2.2.9版本)算法将读数定位到人类基因组序列(hg19)。ChIP peak calling使用MACS(1.401版本)算法拟合。当ChIPpeak落在基因的转录起始位点(transcriptional start site，TSS)周围4kb(±2kb)时，定义为TSS。当ChIP peak落在基因TSS周围6kb(±3kb)时，定义为启动子。使用Network2Canvas进行Gene ontology(GO聚类)和KEGG通路分析。ChIP-qPCR、Q-PCR、WB、以及GSH、ROS检测实验进一步检测JDP2对SLC7A11，GCLM和GSS这三个基因的调控情况。其中，Q-PCR检测SLC7A11，GCLM和GSS三个基因表达量的引物分别为：
SLC7A11-F:5’-TCTCCAAAGGAGGTTACCTGC-3’(SEQ ID NO：3)，
SLC7A11-R:5’-AGACTCCCCTCAGTAAAGTGAC-3’(SEQ ID NO：4)；
GCLM-F:5’-ATGGTTTAAACAAGGCGCTCCTGGCG-3’(SEQ ID NO：5)，
GCLM-R:5’-GTACCTGCAGGGATTACAGGCATGAGG-3’(SEQ ID NO：6)；
GSS-F:5’-CCTAGCCGGTTTGTGCTAAAG-3’(SEQ ID NO：7)，
GSS-R:5’-TTTCAGGGCCTGTACCATTTC-3’(SEQ ID NO：8)。
结果：通过JDP2的ChIP-seq数据分析发现JDP2在基因组的启动子区域有明显的富集(24％)(图4A)。此外，JDP2的ChIP-seq数据的Gene Onology(GO)聚类分析得出，JDP2与“Response to drug”，“glutathione metabolic process”，“Glutathione biosyntheticprocess”和“Glutathione metabolism”信号通路明显相关，提示JDP2参与调控GSH的代谢过程，并且与药物反应相关(如图4B)。与该假设一致，本研究通过ChIP-seq数据的KEGG信号通路分析，JDP2与“Glutathione metabolism”“Platinum drug resistance”相关，进一步提示JDP2参与GSH的代谢过程并促进药物耐受性(图4B)。通过富集程度分析，JDP2在GSH合成相关基因SLC7A11、GCLM、GSS的启动子上有明显富集(图4C)，提示JDP2可能调控这3个基因的转录水平，进而影响GSH的水平。进一步通过ChIP qPCR验证JDP2在GSH合成相关基因启动子的富集程度。在DNA损伤下，ChIP qPCR显示JDP2在合成相关基因启动子明显富集，而沉默JDP2的表达，明显抑制JDP2在GSH合成相关基因启动子富集程度(图4D)。与该结果一致，在DNA损伤下，JDP2明显促进了SLC7A11、GCLM、GSS的mRNA和蛋白表达，而沉默JDP2的表达，明显抑制了SLC7A11、GCLM、GSS的mRNA和蛋白表达(图4E、F)。更重要的是，JDP2高表达明显增加了细胞内GSH的水平，但抑制了细胞内ROS的水平(图4G)。然而沉默JDP2的表达，明显抑制了细胞内GSH的水平，反而促进了细胞内ROS的水平。以上实验结果表明，在DNA损伤下，JDP2参与调控GSH相关基因的转录调控，并促进GSH生成进而抵抗氧化应激。
结论：JDP2通过调控GSH还原***，抵抗化疗药物引起的氧化应激和细胞毒性。
实施例4：JDP2/PRMT5介导表观遗传修饰进而促进JDP2的转录活性
(1)PRMT5/JDP2转录活性
为了进一步探索DNA损伤下，JDP2介导的转录调控机制，本实施例通过免疫共沉淀实验分析JDP2与PRMT5结合的蛋白情况。首先，该实验先用喜树碱(DNA拓扑异构酶I的抑制剂)处理细胞，进一步，通过RPMT5的抗体进行免疫共沉淀实验。同时，构建截短型的JDP2的质粒，检测RPMT5与截短型JDP2结合的结构域。敲低PRMT5的表达，检测PRMT5对GSH，ROS以及SLC7A11、GCLM、GSS的影响。
结果：在DNA损伤的情况下，明显促进PRMT5与JDP2的结合(图5A)。通过PRMT5与截短型JDP2免疫共沉淀实验证明，PRMT5与JDP2的亮氨酸拉链结构域结合(图5B)。以往有文献报道JDP2通过招募组蛋白去乙酰化蛋白HDAC3，启动组蛋白的去乙酰化而导致转录抑制。那么在DNA损伤的情况，PRMT5是否与HDAC3竞争性的结合JDP2，而参与JDP2的转录调控？通过免疫共沉淀实验证明，在DNA损伤明显抑制JDP2与HDAC3的结合亲和力(图5C)。敲低PRMT5的表达，明显抑制了JDP2调控GSH代谢相关基因的转录水平以及蛋白水平，并抑制JDP2诱导的GSH的产生，导致了DNA损伤诱导的ROS水平的升高(图5D、E、F)。在DNA损伤压力下，PRMT5与HDAC3竞争性结合JDP2，并促进GSH的生成抵抗氧化应激。
结论：
1)PRMT5通过拮抗JDP2与HDAC3结合，从而促进JDP2转录激活。
2)PRMT5/JDP2参与GSH合成代谢过程，抵抗ROS生成。
(2)PRMT5介导的甲基化修饰促进了合成GSH相关基因的转录
以往文献报道，PRMT5通过对组蛋白的H3R2me1和H3R2me2s的甲基化修饰，进而通过招募WDR5/MLL复合物进而促进组蛋白的H3K4me3的甲基化而促进转录调控。组蛋白的H3K4me3的修饰也进一步招募RNA聚合酶II参与到基因的转录调控中。在DNA损伤的情况下，检测H3R2me1、H3R2me2s、WDR5/MLL、H3K4me3、TFIID、POll在SLC7A11启动子上的富集程度，并且检测敲低WDR5对SLC7A11、GCLM、GSS以及GSH和ROS的调控作用。
结果：DNA损伤显著上调了H3R2me1和H3R2me2s在SLC7A11启动子上的富集程度，并且在敲低β-catenin、JDP2、PRMT5的时候，显著抑制了H3R2me1和H3R2me2s在SLC7A11启动子上的富集程度(图6A)，揭示了PRMT5通过组蛋白的甲基化修饰而促进JDP2激活GSH的过程。于此结果一致的是，DNA损伤诱导的JDP2/PRMT5明显的促进了WDR5、MLL1-3、TFIID和Pol II富集到SLC7A11的启动子上(图6B、C)。此外，敲低WDR5的表达明显抑制了GSH相关基因的转录水平，进而抑制GSH的水平，但是促进了ROS的水平(图6D、E)。WDR5的小分子抑制剂OICR-9429联合化疗药物明显促进肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，促进肿瘤细胞死亡(图6F)。以上实验结果证明PRMT5通过调控组蛋白的甲基化修饰而促进JDP2激活GSH的过程，进而抵抗化疗药物的杀伤作用。
结论：
1)JDP2/PRMT5形成复合物，进而招募WDR5、MLL促进H3K4的甲基化，从而促进GSH相关基因启动子上的甲基化修饰和转录上调。
2)WDR5小分子抑制剂OICR-9429明显拮抗JDP2/PRMT5复合物引起的表观遗传修饰，与化疗药物联合使用明显上调ROS的水平，促进肿瘤细胞凋亡。
实施例5小分子抑制剂联合化疗药物有助于治疗卵巢癌化疗耐受
(1)在体内实验中证实，JDP2促进卵巢癌对托泊替康的药物抵抗
临床上用的托泊替康是优化CPT后的临床药物，广泛用于治疗卵巢癌、肺癌和其他癌症。本实施例采用腹腔内种植肿瘤作为模型，将5×106带luciferase表达的肿瘤细胞注射到BALB/C裸鼠的腹腔中，每个实验组6只。使用体内荧光素酶成像***记录肿瘤的荧光强度。当小鼠体内的肿瘤荧光值达到2×107p/sec/cm2/sr，开始使用托泊替康(10mg/kg体重)，每周处理3次，一直处理6周。待小鼠饲养至实验终点时，采用颈椎脱臼法处死所有小鼠。取出肿瘤组织进行后续的实验，以及将肿瘤组织用甲醛固定和石蜡包埋切片用于目的蛋白的免疫组化染色。
结果：通过腹膜内卵巢癌小鼠模型检查JDP2失调对DNA损伤压力的影响。如图7-A-D所示，在托泊替康治疗的小鼠中，上调JDP2表达的细胞形成了肿瘤维持较高的生长速率，如TUNEL+细胞较少所示，并且表现出较高的GSH浓度，但较低的ROS水平，导致了小鼠较差的生存预后。相比之下，通过短干扰RNA(siRNA)沉默JDP2，掺入二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)纳米脂质体，显着增强托泊替康的抗肿瘤作用，导致肿瘤生长速度较低和减少了瘤内的GSH水平的，但ROS水平和细胞凋亡较高(图7A、B、C、D)。因此，以上结果进一步支持了JDP2参与调控GSH代谢和抑制ROS诱导的细胞凋亡而对DNA损伤治疗产生抗性的观点。
结论：在体内实验中，JDP2高表达增强卵巢癌细胞对托泊替康的化疗抵抗性。
(2)在体内实验中证实，JDP2促进卵巢癌对托泊替康的药物抵抗
本发明采用病人来源异种移植(patient-derived xenografts(PDX))。PDX模型是将刚手术取下的新鲜卵巢癌肿瘤组织，剪切成1～3mm的肿瘤块，接种到雌性的NOD-SCIDIL-2rγ-/-(NSG)的小鼠皮下。每周测量肿瘤的长度和宽度并做好记录，计算肿瘤体积(L*W2/2)并按照肿瘤体积和记录时间绘制肿瘤的生长曲线，当肿瘤的体积在～0.2cm3的时候，将小鼠分成6组，分别单独接受溶剂，顺铂(5mg/kg体重)，托泊替康(10mg/kg体重)，或者OICR-9429(3mg/kg体重)，或者OICR-9429(3mg/kg体重)和托泊替康(10mg/kg体重)联合处理，或者OICR-9429(3mg/kg)和顺铂(5mg/kg体重)联合处理，每周处理3次，一直处理6周。待小鼠饲养至实验终点时，采用颈椎脱臼法处死所有小鼠。取出肿瘤组织进行后续的实验，以及将肿瘤组织用甲醛固定和石蜡包埋切片用于目的蛋白的免疫组化染色。
结果：本发明使用两例临床卵巢癌组织建立的PDX模型进一步检测联合OICR-9429和DNA损伤化学治疗剂对癌症的治疗效果(图8-A)。如图8-A-C所示，单独使用OICR-9429并没有明显的抑制肿瘤生长，但是OICR-9429联合托泊替康治疗显着增强了卵巢癌对托泊替康的敏感性，导致高水平的ROS并抑制肿瘤生长。此外，OICR-9429联合托泊替康使用显着增强了卵巢癌对托泊替康的敏感性，导致高水平的ROS并抑制肿瘤生长。于此结果一致，OICR-9429联合顺铂使用显着增强了卵巢癌对顺铂的敏感性，导致高水平的ROS并抑制肿瘤生长。因此，这些结果表明，经典DNA损伤化学治疗剂和OICR-9429的联合使用通过促进高水平的ROS进而杀伤肿瘤细胞，为肿瘤耐药性治疗提供了新的治疗策略。
结论：在PDX模型中OICR-9429抑制JDP2/PRMT5介导的表观遗传修饰，与托泊替康/顺铂联合使用具有较强的化疗抵抗性。
综上所述，JDP2能够作为肿瘤耐药检测靶点、肿瘤预后检测靶点、预测肿瘤复发检测靶点。据此可制备相应肿瘤耐药检测试剂盒、肿瘤预后检测试剂盒、预测肿瘤复发检测试剂盒，该些试剂盒中含有检测JDP2的RNA转录水平的试剂、定量检测JDP2的蛋白表达水平的试剂等。通过检测患者肿瘤组织中JDP2的RNA和蛋白表达水平从而判断该患者是否对托泊替康/顺铂治疗具有化疗抵抗性。通过检测患者肿瘤组织中JDP2的表达，从而判断该患者是否具有较高的复发倾向。通过检测患者肿瘤组织中JDP2的表达，从而对JDP2高表达的病人制定WDR5抑制剂与托泊替康/顺铂联合治疗的方案，以实现治疗的效果。
本领域的专业技术人员容易理解，以上所述仅为本发明专利的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均落在本发明要求的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 中山大学
广州杰尔克生物技术有限公司
<120> 抑制JDP2表达的物质在制备抗肿瘤药物中的应用
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Claims (4)

1.试剂在制备药物中的应用，所述试剂用于抑制JDP2表达，所述药物用于下列的至少之一：
提高细胞对抗肿瘤药物的敏感性；
抑制细胞内GSH合成相关基因的表达；
抑制细胞内GSH水平；
促进细胞内ROS水平；
抑制PRMT5介导的甲基化修饰；
所述试剂通过沉默JDP2或者小分子抑制剂抑制JDP2表达，所述沉默JDP2的试剂为siRNA，所述小分子抑制剂为OICR-9429；
所述抗肿瘤药物为化疗药物，所述化疗药物为托泊替康或顺铂；
所述细胞为卵巢癌细胞；
所述药物用于治疗卵巢癌。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述合成相关基因包括SLC7A11、GCLM、GSS中的至少一种。
3.一种抗肿瘤药物，其特征在于：含有用于抑制JDP2表达的试剂和化疗药物；
所述试剂通过沉默JDP2或者小分子抑制剂抑制JDP2表达，所述沉默JDP2的试剂为siRNA，所述小分子抑制剂为OICR-9429；
所述化疗药物为托泊替康或顺铂。
4.检测JDP2表达量的试剂在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒用于下列的至少一种：
检测肿瘤耐药性；
肿瘤预后；
预测肿瘤复发；
所述检测JDP2表达量的试剂为引物，引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；
所述肿瘤为卵巢癌；
所述耐药性是指肿瘤细胞对化疗药物的耐药性；
所述化疗药物为托泊替康或顺铂。
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