CN109206336B - 一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 - Google Patents
一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109206336B CN109206336B CN201811208330.4A CN201811208330A CN109206336B CN 109206336 B CN109206336 B CN 109206336B CN 201811208330 A CN201811208330 A CN 201811208330A CN 109206336 B CN109206336 B CN 109206336B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ceramide
- fermentation
- rice bran
- ganoderma
- ganoderma lucidum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 title claims abstract description 74
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 64
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 title claims abstract description 59
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 title 1
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims abstract description 58
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 claims abstract description 42
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 claims abstract description 24
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 12
- 241001489091 Ganoderma sinense Species 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000005360 mashing Methods 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 4
- 241001480597 Ganoderma tsugae Species 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 7
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract description 5
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000640636 Ganoderma leucocontextum Species 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 2
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 108010062085 ligninase Proteins 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001149422 Ganoderma applanatum Species 0.000 description 1
- 241000390476 Ganoderma lingzhi Species 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 description 1
- 241001540751 Talaromyces ruber Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 108010050181 aleurone Proteins 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
- C07C231/22—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C231/24—Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法。所述方法包括以下步骤：米糠经除杂、粉碎、过筛后，向米糠粉中加入灵芝菌发酵；将发酵液分离，取清液得到神经酰胺溶液，将所得神经酰胺溶液经浓缩结晶可得神经酰胺固体。本发明利用灵芝菌发酵米糠，不仅能显著提高米糠中神经酰胺的溶出，而且灵芝菌也会产生一定量的神经酰胺，本发明不需要任何衍生化过程，操作简单，提取方便、周期短、绿色环保，且不受地区气候限制，能显著降低经济成本。
Description
技术领域
本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法。
背景技术
神经酰胺(Ceramide)即N-脂酰神经鞘胺醇，又名分子钉、赛洛美，是一种广泛存在于真核生物细胞中的信号传导物质，主要以细胞膜的结构组成成分或胞内自由分子形式存在。神经酰胺是近年来被重点关注的一种药品、食品和化妆品活性成分，据报道，神经酰胺的生物功能主要有以下几个方面：①细胞黏合；②调节细胞增殖和分化；③诱导细胞凋亡；③调节蛋白分泌；④炎症中的作用。在化妆品中应用可起到屏障作用而防止水分的丢失，且具有防护和修复皮肤、提高人体免疫力、防癌抗癌等功效。
米糠是稻谷脱壳后依附在糙米上的表面层，由碾白加工过程中产生的外果皮、中果皮、交朕层、种皮及糊粉层组成，米糠中集中了64％的稻米营养素以及90％以上的人体必需元素，其化学成分以糖类、脂肪和蛋白质为主，在国外被誉为“天赐营养源”。米糠中的神经酰胺含量较高，如在专利“含有从谷皮中提取的神经酰胺作为活性成分而具有抗特应性活性的组合物[(公开(公告)号：CN105311041A]”和“一种从米糠中提取高纯度神经酰胺的方法[(公开(公告)号：CN106008253B]”中，都提供了利用乙醇、石油醚等有机溶剂，经长时间加热、浸提的方式从米糠中制备神经酰胺的方法，但是由于植物细胞的细胞壁结构，使得壁内物质不易被分离提取出来，致使在提取过程中能量消耗大、有机溶剂用量大，且提取得率较低。而在“一种发酵法制备神经酰胺的工艺[(公开(公告)号：CN106119310A]”中，开始利用产紫青霉菌通过发酵来制备神经酰胺，虽然该发明简化了神经酰胺的制备工艺，但在制备过程中使用甲醇作为溶剂，残留的甲醇会对人体产生伤害，且该发明的生产周期较长。
为了更高效的获得神经酰胺，急需一种效率高、成本低、分离步骤简单、绿色环保的制备方法。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的提供一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，以米糠为原料，利用灵芝菌发酵米糠，不仅能显著提高米糠中神经酰胺的溶出，而且灵芝菌也会产生一定量的神经酰胺，故不需要任何衍生化过程，操作简单，提取方便、周期短、绿色环保。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，所述方法以米糠为原料，采用灵芝菌对米糠进行发酵以降解米糠的细胞壁；发酵后进行匀浆破壁获得破壁匀浆物，去除杂质后获得神经酰胺溶液。
进一步地，采用灵芝菌对米糠进行发酵时，需要控制发酵条件，以使灵芝菌进行深层发酵。
进一步地，为了使灵芝菌对米糠进行深层发酵，具体发酵条件为：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比(1～5):1的比例混合，放入发酵罐内，28±2℃条件下发酵2至5天，控制发酵罐内空间氧浓度为0.010～0.025mol/L，该发酵条件能够使灵芝菌在发酵罐内能良好的生长，产生丰富的菌丝，灵芝菌丝体的大量增殖，能够富集神经酰胺类化合物。
进一步地，所述灵芝种子液的制备方法包括：
菌种活化：用接种钩从斜面上切带培养基的灵芝菌丝接入固体培养基中部，28±2℃培养3至5天；
种子液制备：待灵芝菌丝长满固体培养基表面，用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，获得灵芝种子液，其中，无菌水的用量为固体培养基体积的2-5倍。
进一步地，发酵后进行匀浆破壁的方法具体为：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，在常温、70-120Mpa的条件下，高压均质1-5次，至无明显灵芝菌丝，获得破壁匀浆物。
进一步地，所述去除杂质的方法为：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物中的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
进一步地，采用灵芝菌对米糠进行发酵之前，需要对米糠进行处理，处理方法为：将米糠除杂，然后粉碎并过筛。
进一步地，所述灵芝菌为赤芝(G.lucidum)、紫芝(G.sinense)、松杉灵芝(G.tsugae Murr.)、中国灵芝(G.lingzhi)、白肉灵芝(G.leucocontextum)、中的一种。
进一步地，将制备获得的所述神经酰胺溶液和质量分数为95％的乙醇溶液按重量比1:5在常温下混合，搅拌均匀放置过夜，滤除沉淀后于0.001～0.01MPa，30-40℃条件下减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，得到神经酰胺固体，所述神经酰胺固体中，神经酰胺质量分数为0.1-1.0％。
进一步地，所述方法具体包括以下步骤：
原料处理：将米糠除杂，然后粉碎并过筛；
菌种活化：用接种钩从斜面上切0.5-1cm2带培养基的斜面灵芝菌菌丝接入固体培养基中部，28±2℃培养3至5天。
种子液制备：用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，得到灵芝种子液。
发酵培养：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比(1～5):1的比例混合，放入发酵罐内，在灵芝菌最适生长(即28±2℃，发酵罐内空间氧浓度为0.010～0.025mol/L)条件下发酵2至5天；
匀浆破壁：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，常温，90Mpa，高压均质2次，获得破壁匀浆物；
去除杂质：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
其中，灵芝(Ganoderma)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属的一种重要的药、食两用真菌，是我国传统的名贵药材之一。灵芝在深层发酵过程中，菌丝体会大量的增殖，不仅会产生多糖、三萜等活性物，还会产生丰富的胞外酶系，如纤维素酶类、半纤维素酶、木质素酶、蛋白酶、淀粉酶类等，这些酶类在胞外可进行多种胞外生化反应，可有效降解细胞壁，促进壁内物质的溶出，同时灵芝菌丝体的大量增殖，也会富集神经酰胺类化合物。因此，应用灵芝发酵的法从米糠中制备神经酰胺，可以获得更高的神经酰胺得率。
本发明的有益技术效果：
本发明所述方法采用灵芝菌对米糠进行发酵，由于灵芝菌所产生的胞外酶系(包括纤维素酶、半纤维素、木质素酶、蛋白酶等)可有效降解米糠的细胞壁，从而显著提高了神经酰胺的溶出，同时灵芝菌会大量增殖，也能产生一定量的神经酰胺。
本发明所述方法操作简单、提取方便，全程不使用乙醇、石油醚、甲醇等有机溶剂，产品安全无污染，利用本发明生产神经酰胺，可大大降低生产成本和环境污染，推动神经酰胺的大规模工业化生产。并且本发明所述方法采用灵芝菌对米糠进行深层发酵，发酵时间为2至5天，发酵周期短。
将本发明所述方法制备获得的神经酰胺溶液进行减压浓缩，获得的神经酰胺固体中，神经酰胺质量分数为0.1-1.0％。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细描述。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
相反，本发明涵盖任何由权利要求定义的在本发明的精髓和范围上做的替代、修改、等效方法以及方案。进一步，为了使公众对本发明有更好的了解，在下文对本发明的细节描述中，详尽描述了一些特定的细节部分。对本领域技术人员来说没有这些细节部分的描述也可以完全理解本发明。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所使用的灵芝为如下种类的菌株：赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(G.sinense)、树舌灵芝(G.aplanatum)、白肉灵芝(G.leucocontextum)。各菌株均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。
针对现有技术中，采用甲醇、乙醇、石油醚等有机溶剂从米糠中制备神经酰胺，存在壁内物质不易被分离提取出来，提取过程能量消耗大、有机溶剂用量大，且提取得率较低的问题。本发明实施例提供过一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法。
实施例1
一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，所述方法具体包括：
(1)原料处理：将米糠在80℃的烘箱内烘干后，去除杂质，然后粉碎并过20-40目筛；
(2)菌种活化：将赤芝(G.lucidum)用接种钩从斜面上切1cm2带培养基的斜面菌丝接入固体培养基中部，30℃培养5天；
(3)种子液制备：用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，得到灵芝种子液；
(4)发酵培养：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比5:1的比例混合，放入发酵罐内，30℃条件下培养5天，控制发酵罐内空间氧浓度为0.025mol/L；
(5)匀浆破壁：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，常温，100Mpa，高压均质2次，获得破壁匀浆物；
(6)去除杂质：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
在本实施例中，将所得神经酰胺溶液经浓缩结晶可得神经酰胺固体，具体方法为：将制备获得的所述神经酰胺溶液和质量分数为95％的乙醇溶液按重量比1:5在常温下混合，搅拌均匀放置过夜，滤除沉淀后于0.001～0.01MPa，30-40℃条件下减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，得到神经酰胺固体，获得的神经酰胺固体中，神经酰胺质量分数为10％。
实施例2
一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，所述方法具体包括：
(1)原料处理：将米糠在80℃的烘箱内烘干后，去除杂质，然后粉碎并过20-40目筛；
(2)菌种活化：将白肉灵芝(G.leucocontextum)用接种钩从斜面上切1cm2带培养基的斜面菌丝接入固体培养基中部，28℃培养5天；
(3)种子液制备：用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，得到灵芝种子液；
(4)发酵培养：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比3:1的比例混合，放入发酵罐内，28℃条件下培养5天，控制发酵罐内空间氧浓度为0.02mol/L；
(5)匀浆破壁：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，常温，70Mpa，高压均质5次，获得破壁匀浆物；
(6)去除杂质：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
(7)神经酰胺溶液经减压浓缩后可获得总神经酰胺含量为0.5％的神经酰胺原液。
本发明所述方法利用灵芝菌发酵米糠，不仅能显著提高米糠中神经酰胺的溶出，而且灵芝菌也会产生一定量的神经酰胺，故不需要任何衍生化过程，操作简单，提取方便；发酵周期短、见效快，且不受地区气候限制；利用本发明工艺生产神经酰胺，能大幅减少有机溶剂的用量，减少环境影响，降低经济成本。
Claims (8)
1.一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，所述方法以米糠为原料，采用灵芝菌对米糠进行发酵以降解米糠的细胞壁，同时，灵芝菌会大量繁殖，产生一定量的神经酰胺；发酵后进行匀浆破壁获得破壁匀浆物，去除杂质后获得神经酰胺溶液；
采用灵芝菌对米糠进行发酵时，控制发酵条件以使灵芝菌进行深层发酵；
为了使灵芝菌对米糠进行深层发酵，具体发酵条件为：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比(1～5):1的比例混合，放入发酵罐内，28±2℃条件下发酵2至5天，控制发酵罐内空间氧浓度为0.010～0.025mol/L。
2.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，所述灵芝种子液的制备方法包括：
菌种活化：用接种钩从斜面上切带培养基的斜面灵芝菌丝接入固体培养基中部，28±2℃培养3至5天；
种子液制备：用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，获得灵芝种子液，其中，无菌水的用量为固体培养基体积的2-5倍。
3.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，发酵后进行匀浆破壁的方法具体为：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，在常温、70-120Mpa的条件下，高压均质1-5次，获得破壁匀浆物。
4.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，所述去除杂质的方法为：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物中的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
5.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，采用灵芝菌对米糠进行发酵之前，需要对米糠进行处理，处理方法为：将米糠除杂，然后粉碎并过筛。
6.根据权利要求1-5任一项所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，所述灵芝菌采用赤芝、紫芝、中国灵芝、白肉灵芝、松杉灵芝中的一种。
7.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，将制备获得的所述神经酰胺溶液和质量分数为95％的乙醇溶液按重量比1:5 在常温下混合，搅拌均匀放置过夜，滤除沉淀后于0.001～0.01MPa，30-40℃条件下减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，得到神经酰胺固体，所述神经酰胺固体中，神经酰胺质量分数为0.1-1.0％。
8.根据权利要求1所述一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
原料处理：将米糠除杂，然后粉碎并过筛；
菌种活化：用接种钩从斜面上切0.5-1cm2 带培养基的斜面灵芝菌菌丝接入固体培养基中部，28±2℃培养3至5天；
种子液制备：用接种钩将带有灵芝菌的固体培养基捣碎，然后加入适量无菌水，得到灵芝种子液；
发酵培养：将灵芝种子液与米糠原料粉按质量比(1～5):1的比例混合，放入发酵罐内，28±2℃条件下2至5天，控制发酵罐内空间氧浓度为0.010～0.025mol/L；
匀浆破壁：发酵结束后，将发酵物加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过高压均质机，常温，70-120Mpa，高压均质1-5次，获得破壁匀浆物；
去除杂质：用过滤或离心的方式去除破壁匀浆物的杂质，收集过滤液或离心后上清液，得到神经酰胺溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811208330.4A CN109206336B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811208330.4A CN109206336B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109206336A CN109206336A (zh) | 2019-01-15 |
| CN109206336B true CN109206336B (zh) | 2021-06-29 |
Family
ID=64980629
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811208330.4A Expired - Fee Related CN109206336B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109206336B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109943602A (zh) * | 2019-03-29 | 2019-06-28 | 山东花物堂生物科技有限公司 | 一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺 |
| CN111773294A (zh) * | 2020-06-30 | 2020-10-16 | 潍坊市人民医院 | 神经酰胺抗肿瘤药及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1163312A (zh) * | 1996-03-29 | 1997-10-29 | 罗姆和哈斯公司 | 新颖的鞘脂和其制备方法 |
| CN1563398A (zh) * | 2004-04-05 | 2005-01-12 | 四川省时代生物技术有限责任公司 | 一种雅致放射毛霉用于生产神经酰胺的用途 |
| CN102057049A (zh) * | 2008-06-13 | 2011-05-11 | 赢创高施米特有限公司 | 使用真菌脂肪酶和脂肪酸烷基酯通过溶性鞘脂的酶促n-酰化反应制备鞘脂的方法 |
| CN106008253A (zh) * | 2016-05-25 | 2016-10-12 | 湖南华诚生物资源股份有限公司 | 一种从米糠中提取高纯度神经酰胺的方法 |
| CN106119310A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-11-16 | 湖北师范大学 | 一种发酵法制备神经酰胺的工艺 |
| US10006068B2 (en) * | 2013-07-30 | 2018-06-26 | Nippon Beet Sugar Manufacturing., Co., Ltd. | Method for producing pulverulent ceramide |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2780727B1 (fr) * | 1998-07-03 | 2000-09-08 | Atochem Elf Sa | Compositions cosmetiques, nouveaux analogues de ceramides a activite anti-elastase, procede de preparation et utilisations |
| JP6389400B2 (ja) * | 2013-11-21 | 2018-09-12 | 花王株式会社 | アセチル化スフィンゴイドの製造方法 |
-
2018
- 2018-10-17 CN CN201811208330.4A patent/CN109206336B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1163312A (zh) * | 1996-03-29 | 1997-10-29 | 罗姆和哈斯公司 | 新颖的鞘脂和其制备方法 |
| CN1563398A (zh) * | 2004-04-05 | 2005-01-12 | 四川省时代生物技术有限责任公司 | 一种雅致放射毛霉用于生产神经酰胺的用途 |
| CN102057049A (zh) * | 2008-06-13 | 2011-05-11 | 赢创高施米特有限公司 | 使用真菌脂肪酶和脂肪酸烷基酯通过溶性鞘脂的酶促n-酰化反应制备鞘脂的方法 |
| US10006068B2 (en) * | 2013-07-30 | 2018-06-26 | Nippon Beet Sugar Manufacturing., Co., Ltd. | Method for producing pulverulent ceramide |
| CN106008253A (zh) * | 2016-05-25 | 2016-10-12 | 湖南华诚生物资源股份有限公司 | 一种从米糠中提取高纯度神经酰胺的方法 |
| CN106119310A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-11-16 | 湖北师范大学 | 一种发酵法制备神经酰胺的工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 灵芝液体深层发酵及其对大豆异黄酮水解的研究;秦可欣;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20170315;正文第11页倒数第2段至第12页第1段，正文第10页2.2.1小节 * |
| 红厚壳、薄叶红厚壳和泰山赤灵芝菌丝体化学成分及生物活性研究;毋艳;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士） 医药卫生科技辑》;20061215;正文第100页第1段、第101页图25 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109206336A (zh) | 2019-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103981054B (zh) | 一种生物酶酿造油茶酒的方法 | |
| CN107501429B (zh) | 一种从绣球菌液体发酵菌丝体中提取生物活性β-葡聚糖的方法 | |
| CN103589185B (zh) | 一种荸荠皮色素和多酚的提取方法 | |
| CN106916861B (zh) | 一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法 | |
| CN101423855B (zh) | 一种利用灵芝菌种发酵海带下脚料制备多糖的方法 | |
| CN109206336B (zh) | 一种发酵法从米糠中制备神经酰胺的方法 | |
| CN108743466B (zh) | 一种茶麸提取物的制备方法及其应用 | |
| CN101735331B (zh) | 发酵法提取百合多糖的生产工艺及其产品 | |
| CN110106219B (zh) | 一种蛹虫草固体培养基残基再利用的方法 | |
| CN104844583A (zh) | 一种葛根素的生产方法 | |
| CN110628840A (zh) | 一种微生物发酵提取杨梅素的方法 | |
| CN107022462B (zh) | 一种酒用天然调味液的生产方法 | |
| CN105087522B (zh) | 一种真菌菌丝体液体深层发酵中产生的胞内酶的提取方法 | |
| CN114457136A (zh) | 一种基于玫瑰花发酵重组胶原蛋白的发酵液及其应用 | |
| CN113563488A (zh) | 一种医药级小分子海洋生物多糖的制备方法 | |
| CN106947796A (zh) | 一种d‑海藻糖提纯工艺 | |
| CN107141365B (zh) | 一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法 | |
| RU2407798C1 (ru) | Способ получения спирта | |
| CN109206475B (zh) | 一种利用单步酶解同时提取油体及蛋白的方法 | |
| CN105018263B (zh) | 一种葛根特种啤酒生产方法 | |
| AU2020102037A4 (en) | A method of efficiently increasing the alpha-glucosidase inhibitor content in fresh mulberry leaves by the solid-state fermentation | |
| RU2506312C2 (ru) | Способ получения спирта | |
| CN109777847B (zh) | 体细胞亲和灵芝菌株对共发酵生产强抗氧化活性多糖的方法 | |
| CN115678938A (zh) | 一种发酵咖啡渣制备甘露低聚糖的方法 | |
| RU2670156C1 (ru) | Способ получения этилового спирта |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210629 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |