CN108902169B

CN108902169B - 鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用

Info

Publication number: CN108902169B
Application number: CN201810557603.XA
Authority: CN
Inventors: 崔勇; 相辉; 冯启理
Original assignee: South China Normal University
Current assignee: South China Normal University
Priority date: 2018-06-01
Filing date: 2018-06-01
Publication date: 2021-02-19
Anticipated expiration: 2038-06-01
Also published as: CN108902169A

Abstract

本发明公开了鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用，本发明将鳞翅目昆虫Abl被抑制表达后会增加虫体对病菌的易感性，家蚕更容易染上青头败血病和灵菌败血病，而存活下来的突变体相对于野生型提前进入五龄以及游走时期，并且蛹重和茧重都明显降低，同时孵化率也明显降低。如果抑制鳞翅目昆虫Abl的表达，可实现害虫防治的目的。从理论上来说，若过表达Abl基因也会引起丝蛋白产量、产率等性状的显著提升。

Description

鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用

技术领域

本发明涉及鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用。

背景技术

鳞翅目包括蛾、蝶两类昆虫，属有翅亚纲、全***类。全世界已知约20万种，中国已知约8000余种。该目为昆虫纲中仅次于鞘翅目的第2个大目。分布范围极广，以热带种类最为丰富。绝大多数种类的幼虫为害各类栽培植物，体形较大者常食尽叶片或钻蛀枝干。体形较小者往往卷叶、缀叶、结鞘、吐丝结网或钻入植物组织取食为害。

家蚕(Bombyx mori)是一种以桑叶为食料的鳞翅目泌丝昆虫，蚕一生经过卵、幼虫、蛹、成虫4个形态上和生理机能上完全不同的发育阶段。

Abl是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，通过对多个代表性品系的家蚕和野蚕的重测序数据分析发现。通过调查文献发现在脊椎动物里，Abl的缺失会损害T细胞和B细胞的发育和反应能力。然而，人们对家蚕里Abl的功能却了解甚少。

CRISPR-Cas 9***是继锌指核酸酶(ZFNs)和TALEN核酸酶之后，又一个可精确定点编辑基因组DNA的新技术，已被应用于小鼠、大鼠、家蚕等动物和拟南芥、水稻等植物基因组的精确修饰和定点突变。因此,本研究采用CRISPR-Cas 9介导的基因组编辑技术，对家蚕的Abl基因进行精确定点编辑，研究家蚕中Abl的功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶基因Abl作为害虫防治靶点的应用。

鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶基因Abl表达抑制剂和/或活性抑制剂在制备防治虫害药剂中的应用。

鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶基因Abl表达抑制剂和/或活性抑制剂在抑制虫体产卵中的应用。

进一步的，所述鳞翅目昆虫为蚕。

进一步的，所述酪氨酸蛋白激酶基因Abl表达抑制剂为抑制基因Abl表达的sgRNA。

进一步的，所述sgRNA作用的靶序列为GGGGATCGTCCTCTTCGTGATGG。

本发明的有益效果是：

本发明将鳞翅目昆虫Abl被抑制表达后会增加虫体对病菌的易感性，家蚕更容易染上青头败血病和灵菌败血病，而存活下来的突变体相对于野生型提前进入五龄以及游走时期，并且蛹重和茧重都明显降低，同时孵化率也明显降低。如果抑制鳞翅目昆虫Abl的表达，可实现害虫防治的目的。从理论上来说，若过表达Abl基因也会引起丝蛋白产量、产率等性状的显著提升。

附图说明

图1为CRISPR/Cas9***敲除Abl基因的靶位点选择；

图2为蚕卵显微注射敲除Abl基因后的孵化情况；

图3为Abl被抑制表达(Abl^-)的虫体相比野生型更容易感染青头败血病、灵菌败血病；

图4为Abl被抑制表达(Abl^-)虫体的幼虫期比野生型短，图中Mutant1～3表示Abl被抑制表达体(Abl^-)、Wild1～3表示野生型；

图5为Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕蛹表型；

图6为Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕蛹重量显著降低(N＝80，mean±SD)，并且更为集中；突变体表示Abl^-；

图7为Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕茧表型；

图8Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕茧全重量显著降低(mean±SD)，并且更为集中；

图9Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕茧层重量显著降低(mean±SD)，并且更为集中；

图10Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕孵化率明显降低。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1蚕基因Abl被抑制表达的表型

一、CRISPR/Cas9***敲除家蚕酪氨酸蛋白激酶(Abl)基因

(1)靶位点的选择

Abl基因的CDS序列(SEQ ID NO：1)共3747bp，具体序列为：

ATGGGCGCGCAGCAGGCCAAAGAACGCGGCACCGCCAGCGGCGCGTCCATGCGTTCGGCGCGCAGCAAGCCACGGGTGCCGAAGGACCCCCGCATGCTCGGCTCCAACATATTCACTGAACATAGCGAGGCGCTGCTGCAGAGCCGACCGCTGCCGCACATCCCAGACCTGCCCGACGAGGCCGCCGCGCCACCCGCTCCGCTGCCGCTCGACTCCGCTAACAGATGGACCTCGAAGGAGAATCTTTTGGCCCATCACGAAGAGGACGATCCCCAGCTGTTCGTAGCCCTCTACGATTTCCAGGCGGGAGGGGAGAACCAGCTCACGCTCAAGAAAGGCGAGCAGGTGCGCATCATGAGCTACAACAAGAGCGGCGAGTGGTGCGAAGCCCACACGCTGACTGGGGCCGTGGGCTGGGTGCCCAGCAACTACGTCACTCCAGTCAACAGTCTCGAGAAGCATTCATGGTACCATGGGCCGATTTCCCGCAACGCGGCGGAGTACCTCCTCTCGTCTGGGATCAATGGCAGCTTCCTGGTCCGCGAATCGGAATCGAGTCCTGGGCAACGCAGCATATCCCTCCGCTACGAAGGGAGAGTTTACCACTACCGCATCAACGAAGACGCCGATGGGAAGGTTTATGTGACCTCCGAGTCGAAGTTCGGAACGTTAGCGGAGCTGGTCCACCATCACTCGGTGGCGGGGGACGGTCTAATTACGCAGCTGCTGTATCCAGCACCGAAGCGCTCGAAGCCTACAGTGTTCCCCCTGGCTCCCCCCGACCACTGGGAGATCGATCGCACGGACATAGTGATGAAGCACAAGCTGGGCGGCGGCCAGTATGGAGACGTTTACGAAGCCGCTTGGAAGCGCGGCAACATCACGGTGGCGGTCAAAACACTCAAGGACGATACGATGGCGCTCAAGGATTTCCTGGAGGAAGCCTCCATAATGAAAGAGATGCGACACCCGAACCTGGTGCAGCTGCTCGGCGTGTGCACACGCGAGCCCCCGTTCTATATTATTACGGAGTTTATGTCCCGCGGAAACCTGCTGGAGTACCTGCGGGCGGGGGCGAGGGAGTGCGTGCCGGGCGCGGTCGTGCTCATGTACATGGCGACGCAGATAGCGTCCGGCATGAGCTACCTCGAGAGCCGCTCCTTCATCCACCGCGACCTCGCCGCCAGGAACTGCCTCGTGGGGGAGAACCATCTGGTCAAGGTGGCCGACTTCGGACTGGCTCGCCTGATGCGCGACGACACATACACGGCCCACGCCGGCGCCAAGTTCCCGATCAAGTGGACGGCGCCGGAGGGTCTGGCCTACAACACTTTCAGCACCAAATCGGATGTCTGGGCTTTCGGGATCCTGCTGTGGGAGATCGCCACGTACGGGATGTCTCCTTACCCCGGAGTGGATCTCGCGGACGTTTACCACATGCTTGAGAAGGGGTACCGCATGGAGTGTCCCCCGGGCTGCCCGGCGCCCGTCTACGAGCTCATGCGCGGCTGCTGGCAGTGGAGCCCCTCCGAGCGGCCCTCCTTCCGCGAGATACACCACGCGCTCGAGCACATGTTCCAGGACAACTCGATCACAGACGAAGTAGAGAAACAACTCCAAGAAGGCAGCGGCGCGCAGGCCGCCGGCACCCCGCTGCTGTCGCTGAAGAAGACGAGCGCCGACCCTCGAGCGGTGCAGATGCGGCGCCCGACCAACCGCCGCGGCAAGCAAGCCCCCACCCCTCCCAAACGCACTAGCCTGCTGTCCTCGTGCAGCTCCTTCCGCGAGTCGCAGTACGCCGCCGACGAGCACGCGCCCGACGACGCGCCCGCCGACGCGCTCGCCGACCTCAACGGAGGCGGGGGCCGCGGCGGGGCGGGGGCGGGGGCTGCGTCCTCAGAGGGGTCGCTGGCCGAGGCGACGCCCGACACCGACGAGTCCGCCGGCACCGAGCATCGGCATCGCCCCAAGCGACGTCATCACCATCCCCACCATCACCACAACGAGCCGCCCGCGAAGCAAGGCGTCCAAGTTGCCGCGCTCGAAGTGCAAAATGTCAAGCGAGCAATCAACAGATATGGGACGCTACCTAAAGGCGCACGTATCGGTGCTTTCTTGGAGTCCCTTCGCCAGAGTGGCGGTGGAGCGACGGCCGGAGCACCTGCCCGCGAGAGCTCCGCCCCCTCGTCTGAGGAGGCAAGGTCTCTGTCCCCGCGTACTGCGCGTGCCCAGCCACACATGATCCGGTCCAACTCCTCGGGCGGAGTGACGGCACCCTCGCCTGCCTCCCCGCGCGCCTCCCGTGCCACCCCTCAGCTGCGATCGTTTACCGGCAGCCCTGCTAAGCCTCGTCCGCGCATAGCGGAGTTGGAATTCCCGCCTCCACCGCCAGACCTACCGCCTCCCCCTGAAGACACCCAACCTCCACCTCCACCTCCGCCGCCGCCCCCCGCAGACCCCGCCGACTCGATCCTCGACCCTCCGCCCCCACTACTCGATAGTCATTTCGACTTCAATGAAAAACCCGCTAAACAAACAATGAAAGAAATGTTAGAGTTAAAACTCGTCGCAGAGATAAAGGAAAGAGCCGATAAAAAGAAGCAAAAGCTAAAAGAATCGCCTCCGTTCGAGGAACAAAATGTAGATTCGCAGCCTTCGTTCGGAGACCCTGTCACCAGATTAGTCTCTGAACTTTCAGAGAGCTTAAATATGGAAGCACTTCGTCGCGTCGATCGCAAACTTGATTCGGCAAAGACAGAAGACGGGAAGGAATCTGTGTCGCCGATTGACTTAAAGGCGAGCTTAAGAAAAACTGCGTACGGTAATAATGCAGAACAGAAAAGATCAGACGCGGAATCCAAAGTGGGTACCGATTTTAAATCGCAATTGAAGAAAGTAGAAGCCAACAAGAAGACTTCCGGAACAAACAAAGAACAAGAGGAGGGCGGTCGTCCGATCATCGACTTTAAGTCCCGTCTACGTAAGGTGGACAGCGGCGCGAATGTTACGAACGGAGCCAAGAAGTTCGAACAGACCTCACCAGATGAGAAAGAAGCTATCAAAAAAGACATTTCAAAGACAGAAGAACTCGACAGGTATCGATCAGAAAGTGGATCTTTGGACACGAGCGGCGGAGACGAGGAAGACAAGCGTCGGAGCACCGGCAGCATCAGTAGCCTAAAGAAACTGTGGGAGAGCAAAGAAACCGAAGAGAGACTCAGTCCCAAGATGAGAGCGCGAGACAACGAGTCCGACGAGGTCTCCCCTGAGGAACGATCCTGCGCGGCGAGGGGCGCGGGGCGGCGCGACGACAAGCCCAGCGTACCCAGCAAGCCCGTCGGGGTGCGGAAGCCGAGCAAGGGCGGTATCTACGCCAGCCCGCAAGTGGGCCCCGAGGAGGCGGAGAGCGGCGCCGCGCTGCGGGAGGTGCGCGGCGCGCTGGAGGCGTGCACGCGGTCCGTGCGGCGCGGCGGGGGGCGCGGCTCGCTGTGGCGGCTGCAGAGCTCGGAGCGGCTGGCGCGGCTCGGCGGGGTGTGCGGGGCGGCGGCCACCGCGTGCTCGCCACACGTGCGCGTGCAGCTGCGGGCCGCCGCCGCGCGACTGGAGGCGCAGGCGCGGGCGCTCGCCTCGCCCGCACCGCACACCCACCACCTCGCCGACGCCGTCGACCACGCGCTGCGGGACCTCGCCGACGTACTCAACCGGTGCTCCTCTTCTTCCTCTCACCCCACCAACAACATCCCGTAA(SEQ ID NO：1)。

根据Abl基因的CDS序列，以GG(19N)GG的选择原则选择合适的位点；靶点选择后确认是在一个外显子上(见图1)，本申请中sgRNA作用的靶点序列为GGGGATCGTCCTCTTCGTGATGG(SEQ ID NO：2)，整个靶点的GC含量应该控制在50％-60％。

(2)转录模板的扩增

1、引物设计：

正向引物F：

TAATACGACTCACTATAGGGGATCGTCCTCTTCGTGAGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCC(SEQ ID NO：3)

反向引物R：

AAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTTAACTTGCTATTTCTAGCTCTAAAA(SEQ ID NO：4)

2、模板Abl的扩增

反应体系：

反应程序：95℃、2min；95℃、10s，55℃、30s，72℃、33s，30个循环；72℃、10min。

3、阳性质粒构建

将上步PCR产物回收目的DNA片段，连接至PMD-18T载体中，连接体系如下：

将连接后的载体转化感受态细胞，培养筛选阳性菌落，对阳性菌落进行菌落PCR检测和测序验证，验证正确的菌落为所需的阳性菌落。

上述菌落PCR检测所用引物为PMD-T-F和R20，PCR产物大小约为530bp，菌落PCR检测引物的具体序列如下：

PMD-T-F:CGGTGATGACGGTGAAAACCTC(SEQ ID NO：5)，

R20:AAGCACCGACTCGGTGCC(SEQ ID NO：6)。

4、转录模板的扩增

以上述送测正确的阳性菌落质粒为模板，用引物扩增转录模板(根据

Kit的说明书进行操作)，反应体系如下：

反应程序：95℃、2min；95℃、10s，55℃、30s，72℃、30s，34个循环；72℃、10min。

(3)sgRNA合成

将其核苷酸置于冰上，而10X Reaction Buffer请置于常温。(

Kit试剂盒)参照

Kit试剂盒说明书进行sgRNA合成操作。

4反应体系：

加Nuclease-free Water至10μl。

反应程序：37℃水浴过夜(约16h)。

将10ul反应溶液用RNA free water补齐至300～400ul，并且加入等体积酚氯仿异戊醇纯化sgRNA，纯化后终浓度定到500～1000ng/ul，最后注射浓度按自己所需而定。

(4)蚕卵显微注射进行Abl基因敲除

将蚕事先放在涂有胶水的蚕卵纸上产卵，之后将卵放入无菌双蒸水中，浸泡五到十分钟，直到能用共线笔轻易扫下，然后用清水洗涤3遍，然后将蚕卵按照较厚的一面朝向注射的一面的规则将卵摆放整齐，吹干，沾胶二次固定，再吹干后用显微注射仪的双针注射***进行显微注射已经混合好的Cas9蛋白和sgRNA混合物(sgRNA浓度约为500ng/ul，Cas9—mRNA浓度约为300ng/ul)，总共注射了320颗卵，孵化281头，孵化率87.8％(表1、图2)。

表1 蚕卵显微注射敲除Abl基因的统计情况

*标注的发育未孵化阳性率是指注射后有些蚕成功发育成蚕的形状，但是不能成功孵化或破壳。

二、蚕基因Abl被抑制表达(采用sgRNA敲除)的表型

(1)易感染病菌

观察上述被注射敲除基因Abl后家蚕的表型，发现Abl被抑制表达的虫体在饲养过程中容易被病菌感染而染病，如图3所示，Abl被抑制表达(Abl^-)的虫体相比野生型更容易感染青头败血病、灵菌败血病等。

(2)幼虫期变短

相比野生型，Abl被抑制表达(Abl^-)的虫体更早进入5龄和游走期，因而Abl被抑制表达(Abl^-)虫体的幼虫期比野生型短，说明幼虫摄食的时间更短(图4)。

(3)蛹重下降

相比野生型，无论雄性还是雌性，Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕蛹重量均明显降低(图5和图6)。

(4)茧重下降

相比野生型，无论雄性还是雌性，Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕全茧重和茧层重都明显降低(图7、图8和图9)。

(5)孵化率下降

相比野生型，Abl被抑制表达(Abl^-)的蚕孵化率明显降低，见表2和图10。

表2 Abl被抑制表达(Abl^-)体与野生型的产卵及孵化率比较

上述结果说明，将鳞翅目昆虫Abl被抑制表达后，会影响虫体的生长，降低幼虫的摄食时间，降低蚕蛹重量、降低茧重，同时还会降低孵化率，以及增加虫体对病菌的易感性。如果抑制鳞翅目昆虫Abl的表达，可以实现害虫防治的目的。从理论上来说，若过表达Abl基因也会引起丝蛋白产量、产率等性状的显著提升。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 华南师范大学

<120> 鳞翅目昆虫酪氨酸蛋白激酶在防治虫害中的应用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3747

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgggcgcgc agcaggccaa agaacgcggc accgccagcg gcgcgtccat gcgttcggcg 60

cgcagcaagc cacgggtgcc gaaggacccc cgcatgctcg gctccaacat attcactgaa 120

catagcgagg cgctgctgca gagccgaccg ctgccgcaca tcccagacct gcccgacgag 180

gccgccgcgc cacccgctcc gctgccgctc gactccgcta acagatggac ctcgaaggag 240

aatcttttgg cccatcacga agaggacgat ccccagctgt tcgtagccct ctacgatttc 300

caggcgggag gggagaacca gctcacgctc aagaaaggcg agcaggtgcg catcatgagc 360

tacaacaaga gcggcgagtg gtgcgaagcc cacacgctga ctggggccgt gggctgggtg 420

cccagcaact acgtcactcc agtcaacagt ctcgagaagc attcatggta ccatgggccg 480

atttcccgca acgcggcgga gtacctcctc tcgtctggga tcaatggcag cttcctggtc 540

cgcgaatcgg aatcgagtcc tgggcaacgc agcatatccc tccgctacga agggagagtt 600

taccactacc gcatcaacga agacgccgat gggaaggttt atgtgacctc cgagtcgaag 660

ttcggaacgt tagcggagct ggtccaccat cactcggtgg cgggggacgg tctaattacg 720

cagctgctgt atccagcacc gaagcgctcg aagcctacag tgttccccct ggctcccccc 780

gaccactggg agatcgatcg cacggacata gtgatgaagc acaagctggg cggcggccag 840

tatggagacg tttacgaagc cgcttggaag cgcggcaaca tcacggtggc ggtcaaaaca 900

ctcaaggacg atacgatggc gctcaaggat ttcctggagg aagcctccat aatgaaagag 960

atgcgacacc cgaacctggt gcagctgctc ggcgtgtgca cacgcgagcc cccgttctat 1020

attattacgg agtttatgtc ccgcggaaac ctgctggagt acctgcgggc gggggcgagg 1080

gagtgcgtgc cgggcgcggt cgtgctcatg tacatggcga cgcagatagc gtccggcatg 1140

agctacctcg agagccgctc cttcatccac cgcgacctcg ccgccaggaa ctgcctcgtg 1200

ggggagaacc atctggtcaa ggtggccgac ttcggactgg ctcgcctgat gcgcgacgac 1260

acatacacgg cccacgccgg cgccaagttc ccgatcaagt ggacggcgcc ggagggtctg 1320

gcctacaaca ctttcagcac caaatcggat gtctgggctt tcgggatcct gctgtgggag 1380

atcgccacgt acgggatgtc tccttacccc ggagtggatc tcgcggacgt ttaccacatg 1440

cttgagaagg ggtaccgcat ggagtgtccc ccgggctgcc cggcgcccgt ctacgagctc 1500

atgcgcggct gctggcagtg gagcccctcc gagcggccct ccttccgcga gatacaccac 1560

gcgctcgagc acatgttcca ggacaactcg atcacagacg aagtagagaa acaactccaa 1620

gaaggcagcg gcgcgcaggc cgccggcacc ccgctgctgt cgctgaagaa gacgagcgcc 1680

gaccctcgag cggtgcagat gcggcgcccg accaaccgcc gcggcaagca agcccccacc 1740

cctcccaaac gcactagcct gctgtcctcg tgcagctcct tccgcgagtc gcagtacgcc 1800

gccgacgagc acgcgcccga cgacgcgccc gccgacgcgc tcgccgacct caacggaggc 1860

gggggccgcg gcggggcggg ggcgggggct gcgtcctcag aggggtcgct ggccgaggcg 1920

acgcccgaca ccgacgagtc cgccggcacc gagcatcggc atcgccccaa gcgacgtcat 1980

caccatcccc accatcacca caacgagccg cccgcgaagc aaggcgtcca agttgccgcg 2040

ctcgaagtgc aaaatgtcaa gcgagcaatc aacagatatg ggacgctacc taaaggcgca 2100

cgtatcggtg ctttcttgga gtcccttcgc cagagtggcg gtggagcgac ggccggagca 2160

cctgcccgcg agagctccgc cccctcgtct gaggaggcaa ggtctctgtc cccgcgtact 2220

gcgcgtgccc agccacacat gatccggtcc aactcctcgg gcggagtgac ggcaccctcg 2280

cctgcctccc cgcgcgcctc ccgtgccacc cctcagctgc gatcgtttac cggcagccct 2340

gctaagcctc gtccgcgcat agcggagttg gaattcccgc ctccaccgcc agacctaccg 2400

cctccccctg aagacaccca acctccacct ccacctccgc cgccgccccc cgcagacccc 2460

gccgactcga tcctcgaccc tccgccccca ctactcgata gtcatttcga cttcaatgaa 2520

aaacccgcta aacaaacaat gaaagaaatg ttagagttaa aactcgtcgc agagataaag 2580

gaaagagccg ataaaaagaa gcaaaagcta aaagaatcgc ctccgttcga ggaacaaaat 2640

gtagattcgc agccttcgtt cggagaccct gtcaccagat tagtctctga actttcagag 2700

agcttaaata tggaagcact tcgtcgcgtc gatcgcaaac ttgattcggc aaagacagaa 2760

gacgggaagg aatctgtgtc gccgattgac ttaaaggcga gcttaagaaa aactgcgtac 2820

ggtaataatg cagaacagaa aagatcagac gcggaatcca aagtgggtac cgattttaaa 2880

tcgcaattga agaaagtaga agccaacaag aagacttccg gaacaaacaa agaacaagag 2940

gagggcggtc gtccgatcat cgactttaag tcccgtctac gtaaggtgga cagcggcgcg 3000

aatgttacga acggagccaa gaagttcgaa cagacctcac cagatgagaa agaagctatc 3060

aaaaaagaca tttcaaagac agaagaactc gacaggtatc gatcagaaag tggatctttg 3120

gacacgagcg gcggagacga ggaagacaag cgtcggagca ccggcagcat cagtagccta 3180

aagaaactgt gggagagcaa agaaaccgaa gagagactca gtcccaagat gagagcgcga 3240

gacaacgagt ccgacgaggt ctcccctgag gaacgatcct gcgcggcgag gggcgcgggg 3300

cggcgcgacg acaagcccag cgtacccagc aagcccgtcg gggtgcggaa gccgagcaag 3360

ggcggtatct acgccagccc gcaagtgggc cccgaggagg cggagagcgg cgccgcgctg 3420

cgggaggtgc gcggcgcgct ggaggcgtgc acgcggtccg tgcggcgcgg cggggggcgc 3480

ggctcgctgt ggcggctgca gagctcggag cggctggcgc ggctcggcgg ggtgtgcggg 3540

gcggcggcca ccgcgtgctc gccacacgtg cgcgtgcagc tgcgggccgc cgccgcgcga 3600

ctggaggcgc aggcgcgggc gctcgcctcg cccgcaccgc acacccacca cctcgccgac 3660

gccgtcgacc acgcgctgcg ggacctcgcc gacgtactca accggtgctc ctcttcttcc 3720

tctcacccca ccaacaacat cccgtaa 3747

<210> 2

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggggatcgtc ctcttcgtga tgg 23

<210> 3

<211> 78

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

taatacgact cactataggg gatcgtcctc ttcgtgagtt ttagagctag aaatagcaag 60

ttaaaataag gctagtcc 78

<210> 4

<211> 79

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

aaaagcaccg actcggtgcc actttttcaa gttgataacg gactagcctt attttaactt 60

gctatttcta gctctaaaa 79

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

cggtgatgac ggtgaaaacc tc 22

<210> 6

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

aagcaccgac tcggtgcc 18

Claims

1.Abl表达抑制剂和/或活性抑制剂在增加家蚕病菌感染率，缩短家蚕幼虫期，降低家蚕蛹重、茧重、孵化率中的应用，其特征在于：所述Abl基因的CDS序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述Abl表达抑制剂为抑制基因Abl表达的sgRNA。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述sgRNA作用的靶序列为GGGGATCGTCCTCTTCGTGATGG。