CN107949279A - 可用作用于治疗人类癌症的抗癌剂的苯甲酰胺或苯扎明化合物 - Google Patents

可用作用于治疗人类癌症的抗癌剂的苯甲酰胺或苯扎明化合物 Download PDF

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Abstract

所述发明提供了用于治疗响应胆固醇生物合成抑制的肿瘤的小分子抗癌化合物。该化合物选择性抑制肿瘤衍生癌细胞中的胆固醇生物合成途径，但是不影响正常***的细胞。

Description

可用作用于治疗人类癌症的抗癌剂的苯甲酰胺或苯扎明化 合物
相关申请的交叉参考
本申请要求2015年7月6日提交的美国临时申请号62/189,069的优先权权益，其全部内容经此引用并入本文。
技术领域
所述发明涉及小分子抗癌治疗剂。
发明背景
神经胶质瘤
神经胶质细胞——中枢神经***中最丰富的细胞类型——是围绕神经元并在其之间提供支持和隔离的细胞。不同于神经元，神经胶质细胞不传导电脉冲。在中枢神经***中存在两种主要类别的神经胶质细胞：星形胶质细胞和少突胶质细胞（Kandel ER等人,Principles of Neural Science, 第4版. McGraw-Hill New York (2000), 第2章, 第20-21页）。
脊椎动物神经***中的神经胶质细胞分为两种主要类别：小胶质细胞和大胶质细胞。小胶质细胞是在感染、损伤或疾病后动员起来的吞噬细胞，其来自于神经***之外的巨噬细胞。三种类型的大胶质细胞在脊椎动物的神经***中占主要地位：少突胶质细胞、施旺细胞和星形胶质细胞。星形胶质细胞——中枢神经***中数量最多的神经胶质细胞，其特征在于它们的星形形状和在其突起上的宽阔周足——被认为起到营养作用，并有助于在大脑毛细血管和小静脉中形成不透性内衬——血脑屏障——其防止血液中的有毒物质进入大脑。少突胶质细胞、突起相对较少的小细胞和施旺细胞产生用于隔离神经细胞轴突的髓磷脂。
术语“神经胶质瘤”涵盖了所有被认为源于神经胶质细胞系的肿瘤 （Veliz, I.等人, “Advances and challenges in the molecular biology and treatment ofglioblastoma – is there any hope for the future ” Ann. Trans. Med. 3(1): 7.Doi: 10.3978/j.issn.2305-5939.2014.10.06）。肿瘤的位置取决于其来源的细胞的类型。
恶性神经胶质瘤表现出类似于星形胶质细胞或少突胶质细胞的性质，因此被称为星形细胞瘤和少突神经胶质瘤。这些肿瘤根据细胞外观如何正常或异常按I至IV的等级进行分级。在所用的众多分级体系中，最常见的是世界卫生组织（WHO）对神经胶质瘤的分级体系（Louis DN等人, Acta Neuropathol, 2007, 114(2):97-109）。I级肿瘤生长缓慢，非恶性，并与长期生存联系在一起。II级肿瘤生长相对缓慢，但有时复发为更高等级的肿瘤。它们可以是非恶性或恶性的。III级肿瘤是恶性的，并常常复发为更高等级的肿瘤。IV级肿瘤快速复制，并且是极富侵略性的恶性肿瘤。
低级别星形细胞瘤通常是局部的并且生长缓慢。高级别星形细胞瘤快速生长并且是渗透性的。星形细胞瘤可以出现在大脑和神经***的不同部位，包括小脑、大脑、大脑中心区域、脑干和脊髓。
毛细胞性星形细胞瘤（也称为青少年毛细胞型星形细胞瘤）是I级星形细胞瘤，其通常停留在它们开始的区域，并且不会扩散。它们被认为是所有星形细胞瘤中“最良性的”（非癌性）。另外两种较不为人所知的I级星形细胞瘤是小脑星形细胞瘤和婴儿促纤维增生型星形细胞瘤。
弥漫性星形细胞瘤（也称为低级别或II级星形细胞瘤）（例如纤维性星形细胞瘤、肥胖细胞性星形细胞瘤、原浆性星形细胞瘤）倾向于侵袭周边组织，并且生长相对缓慢。
间变型星形细胞瘤是III级肿瘤。这些罕见的肿瘤需要比良性毛细胞性星形细胞瘤更积极的治疗。
IV级星形细胞瘤（也称为胶质母细胞瘤，此前称为“多形性胶质母细胞瘤”、“IV级胶质母细胞瘤”和“GBM”）。存在两种类型的IV级星形细胞瘤——原发性或新生的，以及继发性。原发性肿瘤非常具有侵略性，并且是IV级星形细胞瘤的最常见形式。继发性肿瘤是作为低级别肿瘤发生并演变成IV级肿瘤的那些。
室管膜下巨细胞性星形细胞瘤——室管膜下巨细胞性星形细胞瘤是与结节性脑硬化相关的脑室肿瘤。
少突神经胶质瘤可以在大脑半球中的任何地方找到，尽管额叶和颞叶是最常见的位置。有时，少突神经胶质瘤与其它细胞类型混合。这些肿瘤可以使用“A至D”体系分级，其基于个体肿瘤细胞的显微特征。该等级显示肿瘤细胞繁殖多么快速以及肿瘤的侵略性多么高。大约4%的原发性脑肿瘤是少突神经胶质瘤，占神经胶质瘤的大约10-15%。这些肿瘤中仅有6%在婴儿和儿童体内发现。大多数少突神经胶质瘤发生在50-60岁的成年人中，并且在男性中发现的次数多于女性。
混合型神经胶质瘤（或少突星形细胞瘤）通常含有高比例的超出一种的细胞类型，大多数通常为星形胶质细胞和少突胶质细胞。偶尔还会发现室管膜细胞。混合型神经胶质瘤的行为似乎取决于肿瘤的级别。还不清楚它们的行为是否基于最丰富的细胞类型。
室管膜细胞排列在大脑的脑室和脊髓的中心。这些肿瘤分为四种主要类型：室管膜下瘤（I级），通常缓慢生长的肿瘤；粘液***型室管膜瘤（I级），通常缓慢生长的肿瘤；室管膜细胞瘤（II级），最常见的室管膜肿瘤，其可以进一步分为以下亚型，包括细胞室管膜细胞瘤、***状室管膜细胞瘤、透明细胞型室管膜细胞瘤和伸长细胞型室管膜细胞瘤；和间变性室管膜细胞瘤（III级），通常更快生长的肿瘤。不同类型的室管膜细胞瘤出现在大脑和脊柱中的不同位置。室管膜下瘤通常出现在脑室附近。粘液***型室管膜瘤常常发生在脊柱下部。室管膜细胞瘤的位置通常沿着脑室***、在脑室***中或在脑室***旁边。间变性室管膜细胞瘤最常见于成人的脑中和儿童的头骨下背部（后颅窝）。极少在脊髓中发现它们。室管膜细胞瘤在成人中是相对罕见的肿瘤，占原发性脑肿瘤的2-3%。但是，它们在儿童中是列第六的最常见脑肿瘤。大约30%的儿科室管膜细胞瘤在小于3岁的儿童中被诊断。
视神经胶质瘤可以涉及视觉传导途径的任何部分，它们有可能沿着这些途径传播。大多数这些肿瘤发生在10岁以下的儿童中。I级毛细胞性星形细胞瘤和II级纤维性星形细胞瘤是影响这些结构的最常见的肿瘤。更高级别的肿瘤也可能出现在这种位置。20%的患有多发性神经纤维瘤（NF-1）的儿童将会发展视神经胶质瘤。这些神经胶质瘤通常为I级，毛细胞性星形细胞瘤。因此，患有视神经胶质瘤的儿童通常筛查NF-1。患有NF-1的成人通常不会发展视神经胶质瘤。
大脑神经胶质瘤病是一种不常见的脑肿瘤，其最常见于儿科，并且其特征是在大脑中广泛分布的神经胶质肿瘤细胞。这种肿瘤与其它神经胶质瘤不同，因为其分散并广泛分布，通常涉及两个或更多个大脑叶。其可以被认为是“广泛分布的低级别神经胶质瘤”，因为其不具有在高级别肿瘤中所看到的恶性特征。
胶质母细胞瘤
多形性胶质母细胞瘤（GBM）——WHO IV级恶性神经胶质瘤，分类名称“胶质母细胞瘤”——是成人中最常见也最具侵略性的原发性脑肿瘤。GBM占所有弥漫性星形细胞瘤的40%-60%，并占所有颅内肿瘤病变的10%-15%。这种肿瘤的生物学特性例如显著的增殖、主动侵袭和丰富的血管生成（Nakada, M.等人, Cancers, 2011, 3: 3242-3278）。GBM由低分化的肿瘤星形胶质细胞组成。微血管增生和/或坏死的存在对GBM的组织病理学诊断是必不可少的。
GBM是最具侵略性的人类癌症之一，并且因多种复杂因素而难以治疗：肿瘤细胞对常规疗法的耐受性非常高；大脑易受常规疗法的损害；大脑自我修复能力非常有限；并且许多药物不能穿过血脑屏障作用于肿瘤。
尽管治疗可以涉及放疗、手术和使用替莫唑胺（其是烷化剂）的化疗（P.J.Noughton等人, Clin. Cancer Res. (2000) 6:4110-4118），但是数十年的手术疗法、放疗和化疗未能显著改变GBM的存活率。采用多重模式治疗方法治疗的临床试验人群中GBM患者的中位生存期为大约12-15个月，仅有3%-5%的患者存活超过36个月（McNamara. M.G.等人,Cancers, 2013, 5: 1103-1119）。
多形性胶质母细胞瘤具有至少四种不同的分子亚型。可以基于以下对肿瘤变体进行分类：异柠檬酸脱氢酶（IDH）½和TP53中的体细胞突变；转录标签（经典的、间充质的、神经的或原神经的）、拷贝数变异，包括染色体1p和19q的共缺失；以及表皮生长因子受体（EGFR）的扩增或突变，和启动子相关CpG岛的提高的DNA高甲基化（Parker, N.R.等人,“Molecular heterogeneity in glioblastoma: potential clinical implications”,Frontiers in Oncology 5, article 55 (2015年3月)）。
经典GBM肿瘤的特征在于异常高的表皮生长因子受体（EGFR）水平，其是在一些细胞表面上发现的蛋白质，其在被表皮生长因子结合时发出信号使细胞保持数量增长（增殖）（The Cancer Genome Atlas (TCGA) Research Network, Nature 455: 1061-1068(2008)）。
在其它三种GBM亚型中，EGFR异常以低得多的比率发生。TP53基因编码通常抑制肿瘤生长的肿瘤蛋白p53。TP53在经典GBM肿瘤亚型中很少突变，但是在GBM的其它亚型中是最常突变的基因。
原神经GBM肿瘤的特征在于血小板衍生生长因子受体A（PDGFRA）的改变和在IDH1（编码异柠檬酸脱氢酶1的基因）中的点突变。该基因IDH1在突变时编码有助于异常细胞生长的蛋白。PDGFRA（其在细胞增殖、细胞迁移和血管生成中起重要作用）也被发现以异常高的量突变和表达。PDGFRA改变仅发生在原神经肿瘤中，而不在任何其它亚型中发生。当PDGFRA改变时，其蛋白质可能过度产生，导致不受控制的肿瘤生长。这种亚型的患者往往比其它亚型更年轻且存活时间更长。
间充质细胞亚群在多发性神经纤维瘤1型（NF1）肿瘤抑制基因中含有最多数量的突变。在间充质细胞亚群中还发生在PTEN（磷酸酶和张力蛋白同源物）和TP53肿瘤抑制基因中的频繁突变。PTEN蛋白充当肿瘤抑制剂，帮助调节细胞***周期。
虽然神经亚组在许多与其它组的相同基因中具有突变，该组并未从其它组中脱颖而出，因为具有明显更高或更低的突变率。神经组的特征在于表达几种标志物，其也是大脑的正常的非癌性神经细胞、或神经元的典型标志物，如NEFL、GABRA1、SYT1和SLC12A5。
虽然经典和间充质GBM表达基因表达谱让人联想到NSC，IDH-突变体神经胶质瘤显示原神经表型（Ilkanizadeh等人, “Glial Progenitors as Targets forTransformation in Glioma”, Adv. Cancer Res. 121: 1-65 (2014)）。
根据临床经验，已经建立了两种以其它方式在组织学上无法区分的GBM的亚组：原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤。原发性胶质母细胞瘤（其包含超过90%的活检或切除病例）在无低级别疾病的既往史的情况下重新出现，而继发性胶质母细胞瘤从先前诊断的低级别神经胶质瘤发展而来。原发性胶质母细胞瘤显示经典的间充质和神经表型，而继发性胶质母细胞瘤倾向于显示原神经表型，其在复发时向间充质表型移动（Parker,N.R.等人, “Molecular heterogeneity in glioblastoma: potential clinicalimplications”, Frontiers in Oncology 5, article 55 (2015年3月)）。
多形性胶质母细胞瘤的这些分子亚型似乎在它们的临床过程和治疗反应方面不同。例如，不同的亚型表现出对攻击性的化疗和放疗的不同反应，亚型之间的差别为大约50%。已经提出，各亚型的病理可能始于不同类型的细胞，这可以解释对治疗的反应的不同。在经典和间充质亚型中观察到最大的益处，其中强化疗法具有显著降低的死亡率；并且在神经亚型中存在疗效迹象；但是原神经亚型对包括常规化疗或化疗-放疗的强化疗法反应较差（Verhaak, RG等人, Cancer Cell, 17(1):98-110, 2010)）。
主要神经胶质瘤信号转导途径
几种主要的信号转导途径已经与神经胶质瘤联系在一起（Nakada, M.等人, Cancers,2011, 3: 3242-3278）。
1.受体酪氨酸激酶途径（RTK/PI3K/Akt/mTOR途径）
RTK/P13K/Akt途径调节各种基本的细胞过程，如增殖、生长、凋亡和细胞骨架重构。该途径涉及受体酪氨酸激酶（RTK），例如表皮生长因子受体（EGFR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFR）和血管内皮生长因子受体（VEGFR）等等，以及肿瘤抑制蛋白磷酸酶，例如磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN），以及蛋白激酶PI3K、Akt和mTOR。受体酪氨酸激酶途径（RTK/PI3K/Akt/mTOR途径）显示在图1中。
EGFR基因扩增是GBM中最常见的改变（大约40%）。EGFR是ErbB受体家族的一种跨膜糖蛋白成员。在GBM中，EGFR通过过度表达失调，这是由于EGFR基因扩增或活化突变，如导致非配体依赖性信号传导的EGFRvIII。EGFR畸变与GBM的经典亚型相关（TCGA ResearchNetwork, Nature 455: 1061-68；Verhaak, Roel G.W.等人, Cancer Cell, 2010, 17:98-110）。尽管已经提出EGFR的改变可能与GBM的提高的侵袭性相关（Nakada, M.等人,Cancers, 2011, 3: 3242-3278），EGFR抑制剂（例如吉非替尼、埃罗替尼）在临床试验中在GBM患者中并未引发临床反应（Rich, J.N.等人, N. Engl. J. Med. 2004, 351, 1260-1261；Haas-Kogan, D.A.等人, J. Natl. Cancer Inst. 2005, 97, 880-887；van denBent, M.J.等人, J. Clin. Oncol. 2009, 27, 1268-1274）。
已经在所有等级的星形细胞肿瘤中观察到血小板衍生生长因子受体（PDGFR），尤其是PDGFR-α和血小板衍生生长因子（PDGF）的过度表达，并已经提出了它们与恶性进展的关联（Nakada, M.等人, Cancers, 2011, 3: 3242-3278）。PDGFRA扩增（14%）以及IDH1突变是根据TCGA分类的GBM原神经亚型的主要特征（TCGA Research Network, Nature 455:1061-68；Verhaak, R.G.等人, Cancer Cell, 2010, 17: 98-110）。尽管该分子与GBM深度相关，使用伊马替尼的抗PDGFR疗法仅产生有限的临床反应（Reardon, D.A.等人, J.Clin. Oncol. 2005, 23, 9359-9368；Reardon, D.A.等人, Br. J. Cancer 2009, 101,1995-2004）。
PI3K是广泛表达的促进不同生物功能的脂质激酶。PI3K与RTK的结合导致通过磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸酯（PiP3）和3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1（PDK1）激活Akt，这影响多种基本细胞过程，包括细胞存活、增殖和迁移。根据GBM的整合基因组分类，PI3K突变（15%）与原神经亚型相关（TCGA Research Network, Nature, 2008, 455: 1061-68；Verhaak, R.G.等人, Cancer Cell, 2010, 17: 98-110）。
降低的PTEN活性可以激活RTK/PI3K/Akt途径，因为PTEN通过拮抗PI3K功能负向调节该途径。PTEN的纯合性缺失或突变是GBM中的常见遗传特征（40%），导致该 RTK/PI3K/Akt途径的组成性激活。根据TCGA研究，PTEN损失与GBM的经典和间充质亚型相关（TCGAResearch Network, Nature 455(23): 1061-68）。
Akt是调节细胞生长、增殖和凋亡的STK（丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶）。在大约80%的人GBM中报道了Akt激活，并与如下事实相关：RTK/PI3K/Akt信号转导在88%的GBM中改变（TCGA Research Network, Nature 455(23): 1061-68）。在GBM中没有检测到致癌的Akt突变。Akt抑制剂哌立福辛在恶性神经胶质瘤中经受临床评估（Nakada, M.等人, Cancers,2011, 3: 3242-3278）。
2. p14ARF/MDM2/p53途径
p53基因编码响应不同细胞应激的蛋白以调节诱导细胞周期停滞、细胞死亡、细胞分化、衰老、DNA修复和新血管形成的靶基因。在DNA损伤后，p53被激活并诱导基因转录（如p21Waf1/Cip1），其在G1期充当细胞周期进程的调节剂。小鼠双微体2同源物（MDM2）癌基因通过与p53基因形成紧密复合物来抑制p53转录活性，并参与p53的降解。该p14ARF基因编码直接结合MDM2并抑制MDM2-介导的p53降解的蛋白。反过来，通过p53负向调节p14ARF表达。因此，通过改变p53、MDM2或p14ARF基因任一种的表达引起p14ARF/MDM2/p53的失活。p53途径在继发性GBM的发展中起到至关重要的作用。p53基因是神经胶质瘤中最常突变的p53途径基因；但是，还描述了在该途径中涉及其它基因的分子异常（Nakada, M.等人, Cancers,2011, 3: 3242-3278）。该p14ARF/MDM2/p53途径显示在图2中。
3. RB途径
该RB（成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白）途径抑制细胞周期进入和进展，以及p53途径。通过RB1（在13q14处）编码的107-kDa RB1蛋白控制经G1进入细胞周期的S期的进展（Serrano,M.等人, Nature, 1993, 366: 704-707）。该CDKN2A蛋白（即p16INK4a，其是周期素依赖性激酶抑制剂2A）结合周期素依赖性激酶4（CDK4）并抑制该CDK4/周期素D1复合物，由此抑制细胞周期从G1期向S期的转变。由此，RB1、CDK4或CDKN2A的改变可以造成G1-S期转变的失调。但是，仅改变RB途径不足以诱导肿瘤形成。EGFR扩增增强了PI3K促生长途径，并通常与CDKN2A缺失相关。根据TCGA研究，CDKN2A损失与GBM的经典亚型相关（Nakada, M.等人,Cancers, 2011, 3: 3242-3278）。该RB途径显示在图3中。
4. Ras/MEK/MAPK途径
RAS（大鼠肉瘤）蛋白充当由RTK和多发性神经纤维瘤1型肿瘤抑制基因（NF-1）控制的on/off（RAS-GDP/RAS-GTP）开关。激活的RAS（RAS-GTP）随后激活丝氨酸/苏氨酸激酶RAF。RAF激活丝裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK），也称为MEK，其反过来激活MAPK。MAPK活化导致多种转录因子如Elk1、c-myc、Ets、STAT1/3和PPAR的活化。
NF-1肿瘤抑制基因编码神经纤维瘤蛋白，其主要充当RAS负调节物，并在腺苷酸环化酶-和Akt-mTOR-介导的途径中起作用。越来越多的证据表明，NF-1基因不仅涉及与NF-1相关的神经胶质瘤的肿瘤发生，还涉及零星发生的神经胶质瘤的肿瘤发生。在TCGA先导研究中，在18%的GBM中确定了NF-1突变/纯合性缺失。NF-1（37%）、p53（32%）和PTEN基因频繁失活的间充质GBM响应攻击性化疗-放疗辅助疗法（Nakada, M.等人, Cancers, 2011, 3:3242-3278）。该Ras/MAPK途径显示在图4中。在图4中显示了上述信号转导途径的全局视图。
其它信号转导途径可以在GBM启动、迁移和侵袭中起作用。
大脑干细胞
神经胶质细胞在人脑中的数量超过神经元10倍，并主要由终末分化细胞和较小的离散前体群组成（Ikanizadeh, S.等人, “Glial Progenitors as targets fortransformation in glioma”, Adv. Cancer Res. 121: 1-65 (2014)）。
两个主要的胚层——脑室区（VZ）和脑室下区（SVZ）——在前脑中产生了大多数神经元与神经胶质细胞（Garcia-Verdugo, JM等人, “Architecture and Cell types ofthe adlt subventricular zone: in search of the stem cells”, J. Neurobiol. 36:234-48 (1998)）。传统上认为这些胚层生成神经元的能力限于胚胎期；但是，现在已知新的神经元继续增加到成年脊椎动物大脑的某些区域。在成年哺乳动物中，仅在嗅球和海马体中观察到神经元增加。对嗅球指定的新神经元出生在侧脑室的SVZ中。SVZ细胞的亚群可以在培养基中增殖，产生球形细胞簇（神经球），其能够产生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。基于它们自我更新的能力和它们产生多种细胞类型的潜力，这些SVZ衍生细胞被认为是神经干细胞。证据还表明，神经干细胞（NSC）排列在第三和第四脑室中（Ikanizadeh, S.等人, “Glial Progenitors as targets for transformation in glioma”, Adv.Cancer Res. 121: 1-65 (2014), 引用Weiss, S.等人, “Multipotent CNS stem cellsare present in the adult mammalian spinal cord and ventricular neuroaxis”, J.Neurosci. 16(23): 7599-7609 (1996)；Xu, Y.等人, Neurogenesis in the ependymallayer of the adultrat 3rd ventricle”, Exptl Neurol. 192(2): 251-64 (2005)）。
神经胶质瘤在小鼠中的建模表明，在整个胶质和神经元细胞系中处于不同分化阶段的细胞具有生成神经胶质瘤的潜力。最近的进展突出了神经胶质瘤中的细胞异质性、肿瘤微环境的影响，以及耐受治疗的肿瘤细胞表现出高度的干细胞特性。
显示神经上皮组织起源的神经胶质瘤的转录谱表明，间充质表型与干细胞特性、侵袭性和不良存活率相关。（引用H.S. Phillips等人, “Molecular subclasses of high-grade glioma predict prognosis, delineate a pattern of disease progression,and resemble stages in neurogenesis”, Cancer Cell. 9(3): 157-73 (2006)；Sturm,D.等人, “Hotspot mutations in H3F3A and IDH1 define distinct epigenetic andbiological subgroups of glioblastoma”, Cancer Cell 22(4): 425-37 (2012)；Verhaak, RGW等人, “Integrated genomic analysis identifies clinically relevantsubtypes of glioblastoma characterized by abnormalities in PDGFRA, IDH1,EGFR, and NF1”, Cancer Cell. 17(1): 98-110 (2010)）。
癌症干细胞（CSC）或肿瘤启动细胞（TIC）是能够进行自我更新并重现整个肿瘤群的肿瘤细胞的亚群（Wang, L.等人, Interleukin-1β and transforming growth factor-β cooperate to induce neurosphere formation and increase tumorigenicity ofadherent LN-229 glioma cells”, Stem ell Res. & Therapy 3:5 (2012)）。已经从人神经胶质瘤组织和神经胶质瘤细胞系中识别了神经胶质瘤干细胞（GSC）。GSC的特征在于，当在补充有表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清条件下培养时能够自我更新以生成称为“神经球”的悬浮的细胞三维聚集体。这些神经胶质瘤神经球反映了原发性神经胶质瘤的生物学和病理学特性，显示了对化疗和放疗的耐受性，并具有增强的致癌潜力，在颅内移植后生成复制原始肿瘤特性的肿瘤（引用Ehrlicher, A.等人,“Guiding neuronal growth with light”, Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 99: 16024-8 (2002)；Difato, F.等人, “combined optical tweezers and laser dissector forcontrolled ablation of functional connections in neural networks”, J. Biomed.Opt. 16: 051306 (2011)；Dictus, C.等人, “Comparative analysis of in vitroconditons for rat adult neural progenitor cells”, J. Neurosci Methds. 161:250-58 (2007)）。
神经胶质瘤的动物模型
IDH突变型神经胶质瘤的研究受到缺乏产生IDH突变型神经胶质瘤的小鼠模型的阻碍。脑特异性IDH1R132H敲入小鼠是胚胎致死的（Izanizadeh, S.等人, 引用Sasaki, M.等人,“D-2 hydroxyglutarate produced by mutant IDH1 perturbs collagen maturationand basement membrane function”, Genes & Devel. 26(18): 2038-49 (2012)）。具有IDH1R132H突变的细胞系仅能短暂地在体外维持，因为该突变不能在非永生化细胞中持续存在。来自患者肿瘤的原发性IDH突变型神经胶质瘤不能在体外良好地生长（引用Piaskowski, S.等人, “Glioma acells showing IDH1 mutation cannot be propagatedin standard cell culture conditions”, Br. J. Cancer 104(6): 968-70 (2011)）。与正常细胞相反，向神经胶质瘤细胞中引入IDH突变降低了增殖速率，这最终导致针对包含IDH突变的培养的神经胶质瘤细胞的选择压力（引用Bralten, LBC等人, “IDH1 R132Hdecreases proliferation of glioma cell lines in vitro and in vivo”, AnnalsNeurol. 69(3): 455-63 (2011)）。
已经生成了GBM的自发性小鼠模型，其由三种神经胶质瘤相关肿瘤抑制基因的突变和因此的损失引起：Pten、p53和NF1。这些小鼠具有表现出与人GBM的组织病理学与分子相似性的肿瘤，并为自然史研究、分子研究和原发性（Mut6）细胞的衍生提供了有力的平台，所述原发性细胞在低传代培养中维持，并在同种异体移植物中重新引入以产生GBM（Llaguno SA等人, “Malignant Astrocytomas Originate from Neural Stem/Progenitor Cells in a Somatic Tumor Suppressor Mouse Model”, Cancer Cell.2009 Jan 6; 15(1): 45-56；Llaguno SA等人, “Neural and Cancer Stem Cells inTumor Suppressor Mouse Models of Malignant Astrocytoma”, Cold Spring HarbSymp Quant Biol. 2008; 73: 421-426）。
发明概述
根据一个方面，所述发明提供了式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
（式I）
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)– , –(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1-R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1-R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR、NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me、Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一方面，所述发明提供了式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-a)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，n = 1或2；R3 = H；并且R4选自H、Me和炔丙基。根据另一实施方案，R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基。根据另一实施方案，X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；并且X2 = L2–R6。
根据另一方面，所述发明提供了式I-b的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-b)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，n = 1或2；R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；R3 = H；并且R4选自H、Me和炔丙基。
根据另一方面，所述发明提供了式I-c的小分子抗增殖化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-c)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y2选自CR’R”、NR、O和S。在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、i-Pr和环丙基；
k = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；和
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，Y2选自CH2、NR、O和S。在该段落的上下文中，R选自H和Me；k = 1或2；n = 1或2；L2选自NH、O、S、CHOH、C=O、–S(CH2)–；并且R3 = H；并且R4选自H、Me和炔丙基。根据另一实施方案，L2选自NH、O和S；并且R6选自芳基和杂芳基。
根据另一方面，所述发明提供了式I-d的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-d)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y3选自CH2、NR、O和S。在该段落的上下文中，R选自H、Me、CD3、CF3、Et、异丙基和环丙基。
n = 1或2；
L2选自S、O和NH；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et和C2–C6炔基；并且
R6选自芳基、杂芳基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，Y3选自CH2、NH、NMe和O；R4选自H、Me和炔丙基；并且R6选自芳基和杂芳基。
根据另一方面，所述发明提供了式I-e的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-e)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y4选自CR’R”、NR、O和S。在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、异丙基和环丙基；
j = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；并且
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，Y4 = CH2；j = 1；n = 1或2；L2选自S、O、NH、CHOH、C=O和–S(CH2)–； R2选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；并且R4选自H、Me和炔丙基。
根据另一方面，所述发明提供了式I-f的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-f)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；并且
R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并选自H、D、F、Cl、Br、CF3、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、OR、NR2、NO2、N3、CN、CO2R、CO2NR2、SR、烷基酰基和芳基酰基。在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et、异丙基、环丙基、炔丙基和酰基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，n = 1或2；L2选自NH、O、S、–S(CH2)–、C=O和CHOH；R1和R2独立地选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由四至五个包含独立地选自CH2、NH、NMe和O的亚单元的亚单元链组成；R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3 = –(CH2)3–；R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由两个包含独立地选自CH2和CH-烷基的亚单元的亚单元链组成，并且R2可以如上所述与R1同时形成环；R3 = H；R4选自H、Me和炔丙基；并且R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并独立地选自H、F、Cl、Br、CF3、C1–C3烷基、炔丙基、OR、NR2、NO2、CN、CO2R和CO2NR2、SR。在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et和炔丙基。
根据另一方面，所述发明提供了选自以下的化合物：
。
根据一个实施方案，该化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
根据另一方面，所述发明提供了在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向该受试者给药所述发明的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
根据一个实施方案，该治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。根据另一实施方案，该治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。根据另一实施方案，该癌症为实体脑肿瘤。根据另一实施方案，该实体脑肿瘤为神经胶质瘤。根据另一实施方案，该神经胶质瘤为胶质母细胞瘤。根据另一实施方案，该实体脑肿瘤包含癌症干细胞。根据另一实施方案，该组合物的治疗量有效地选择性抑制癌细胞的生长、癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
附图概述
图1描绘了受体酪氨酸激酶（RTK/PI3K/Akt/mTOR）途径。
图2描绘了p14ARF/MDM2/p53途径。
图3描绘了成视网膜细胞瘤（RB）肿瘤抑制蛋白途径。
图4描绘了Ras/MEK/MAPK途径。
图5描绘了受体酪氨酸激酶（RTK/PI3K/Akt/mTOR）途径；p14ARF/MDM2/p53途径；成视网膜细胞瘤（RB）肿瘤抑制蛋白途径和Ras/MEK/MAPK途径的全局视图。
图6(a)–(d)显示了针对胶质母细胞瘤肿瘤衍生的神经元干细胞Mut6的整体筛选策略。
图7显示了化合物4C12在Mut6肿瘤细胞中诱导细胞死亡。用渐增浓度的化合物4C12处理正常星形胶质细胞、Mut6细胞和小鼠胚胎成纤维细胞。图7A，其显示了相对ATP活性（y轴，存活性的量度）vs浓度（nM）的曲线图，表明化合物4C12对Mut6细胞具有50 nM的ED50。正常星形胶质细胞和MEF不受化合物4C12的影响。图7B显示了在用化合物4C12和仅含载体的阴性对照物处理14小时、23小时和38小时后Mut6细胞和对照物MEF的相差显微镜照片。图7C显示了用载体（阴性对照物）处理过的所有细胞仍然存活，虽然在96小时后仅有50%的用化合物4C12处理过的Mut6肿瘤细胞存活。
图8显示了相对ATP活性（y轴）vs时间（x轴）的曲线图，表明用化合物化合物1、化合物2和4C12处理过的细胞显示出相对于对照物随时间推移降低的ATP活性。细胞在用测试化合物化合物1、化合物2和4C12以及阴性对照物处理前铺板48小时。随后用测试化合物处理培养基。将培养基移除，细胞洗涤两次。加入不含化合物的新鲜培养基。数据点为6小时、22小时、33小时、51小时、71小时，并且是连续的。在6小时和24小时的时间点之间确定了分子变化。ATP测定在96小时处进行。在第2天，用4C12处理的细胞为圆形。在第3天，细胞停滞在G2。在第4天，10-20%的细胞凋亡。在第5天，80-90%的细胞凋亡。
图9显示了作为ATP活性（y轴，存活性的量度）vs.浓度（nM）（x轴）绘制的表1中各类似化合物的IC50曲线。
图10描绘了确定与使用化合物4C12处理48小时相关的过度表达途径的微阵列分析的结果。
图11表明，经由至少四种主要路线实现典型哺乳动物细胞中胆固醇的体内稳态（取自Jiang W和Song, BL, “Ubiquitin ligases in cholesterol metabolism”,Diabetes Metab. J. 38: 171-180 (2014)）。
图12.图12A：显示用阴性对照物（仅载体）和用化合物4C12处理24小时和48小时的Mut6细胞的胆固醇（pg/细胞）和甘油三酸酯（pg/细胞）的柱形图。该图表明，在化合物4C12的存在下，胆固醇水平降低，并且甘油三酸酯水平提高。图12B：相对mRNA vs. 胆固醇合成酶的柱形图，表明胆固醇合成酶的基因被化合物4C12下调。用化合物4C12处理Mut6细胞24小时，随后对羟甲基戊二酰-CoA合酶（Hmgcs）；3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A还原酶（Hmgcr）；乙酰乙酰基-CoA合成酶（AACS）；Delta(24)-甾醇还原酶（Dhcr24）；7-脱氢胆固醇还原酶（Dhcr7）；甾醇C5-脱饱和酶（Sc5d）；角鲨烯合酶（SS）；和焦磷酸法尼酯（FPP）合酶（FPPS）测定mRNA水平。
图13：(a)–(e) 分别用化合物4C12处理Mut6细胞2、9、16、24和48小时，以及与DMSO对照物相比它们的胆固醇基因谱。数据表明，化合物4C12抑制Srebp2靶基因，而不抑制Srebp1靶基因。图13(f)显示了Western印迹。Mut6细胞仅用载体（-）或用化合物4C12（+）处理7小时、13小时和23小时。收集细胞，在SDS缓冲液中裂解，施以SDS PAGE，并通过标准方案将细胞蛋白转移到膜上。将该膜洗涤，用针对SREBP1、SREBP2的抗体和阳性对照物（钙粘着蛋白）处理，重新洗涤，并随后显露结合的抗体。印迹表明化合物4C12有效降低了SREBP2蛋白。
图14A是绘制用康帕丁/美伐他汀、化合物4C12和康帕丁/美伐他汀+化合物4C12的组合vs阴性对照物（仅载体）处理的Mut6细胞的ATP活性（存活性的量度）的柱形图。结果表明，康帕丁/美伐他汀与化合物4C12的组合发挥了大于各自独立作用的效果。图14B显示了他汀对胆固醇生物合成途径的甲羟戊酸臂的抑制效果。
图15(a)是绘制用康帕丁/美伐他汀、化合物4C12和康帕丁/美伐他汀+化合物4C12的组合vs阴性对照物（仅载体）处理的Mut6细胞的ATP活性（存活性的量度）的柱形图。图15(b)是显示ATP活性（存活性的量度）vs.胆固醇浓度（µM）的柱形图——Mut6细胞用化合物4C12处理 vs 用DMSO（阴性对照物）处理的细胞。添加胆固醇抑制了化合物4C12诱导的细胞死亡。15(c)显示了相对ATP活性（y轴，存活性的量度）vs.化合物4C12浓度（nM）（x轴）。通过敲低Insig1/Insig2增加SREBP2使Mut6细胞对化合物4C12较不敏感。
图16是用化合物4C12或DMSO（阴性对照物）处理的小鼠胚胎成纤维细胞（左）和星形胶质细胞（右）中胆固醇生物合成途径靶基因Hmgcs、Hmgcr、FPPS、LDLR以及SREBP1c的相对mRNA水平的柱形图。该图表明，在MEF和星形胶质细胞中，Srebp2靶基因并未被化合物4C12降低。
图17将用化合物4C12处理24小时和48小时的Mut6细胞和MEF细胞中的胆固醇水平（pg/细胞）（左）和甘油三酸酯水平（pg/细胞）（右）与阴性对照物（载体）进行了比较。结果表明，观察到的化合物4C12降低胆固醇是对Mut6肿瘤细胞特异性的，并且Mut6细胞具有低得多的胆固醇和甘油三酸酯的基础水平。
图18A是显示在用DMSO或用化合物4C12处理16小时的Mut6细胞中抑制胆固醇生物合成途径基因Hmgcs；Hmgcr、AACS、Dhcr24、Dhcr7、Sc5d、SS、FPPS、LDLR；和SREBP2的效果的柱形图。图18B是显示用化合物4C12 vs DMSO阴性对照物处理Mut6细胞16小时对ABCa1水平的影响的柱形图。
图19显示了各种原发性患者来源的胶质母细胞瘤细胞系（顶部左侧和顶部右侧）和在存在（底部左侧）与不存在（底部右侧）血清的情况下HeLa（子宫颈）、HT-29（结肠）、435（乳腺）、549（肺）、MCF7（乳腺）、HCC38（乳腺）、Daoy（髓母细胞瘤(脑)癌细胞系）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）细胞的相对ATP水平（y轴，存活性的量度）vs.化合物4C12的浓度（nM）。
发明详述
定义
本说明书通篇中使用的各种术语应具有本文中所述的定义。
术语“辅助疗法”是指增加到主要治疗中以防止疾病复发的治疗，或为了增强或延长主要疗法的效果而提供的额外疗法，如向手术方案中增加化疗。
本文中所用的术语“激动剂”是指能够激活受体以诱导完全或部分药理学反应的化学物质。受体可以被内源性或外源性激动剂与拮抗剂激活或灭活，导致刺激或抑制生物反应。生理激动剂是产生相同的身体反应但不与同一受体结合的物质。特定受体的内源性激动剂是由人体自然产生的化合物，其结合并激活受体。超激动剂是能够产生比目标受体的内源性激动剂更大的最大反应的化合物，因此效率大于100%。这不一定意味着它比内源性激动剂更有效，而只是比较在受体结合后可以在细胞内部产生的最大可能反应。完全激动剂结合并激活受体，在受体上表现出完整的功效。部分激动剂也结合并激活给定的受体，但是相对于完全激动剂在受体上仅具有部分功效。反向激动剂是结合至与该受体的激动剂相同的受体结合位点并逆转受体的组成型活性的药剂。反向激动剂发挥与受体激动剂相反的药理效应。不可逆激动剂是与受体永久结合以使该受体被永久激活的一类激动剂。其不同于单纯激动剂之处在于激动剂与受体的缔合是可逆的，而不可逆激动剂与受体的结合据信是不可逆的。这导致化合物产生激动剂活性的短暂爆发，接着是受体的脱敏与内化，这与长期治疗一起产生更像拮抗剂的效果。选择性激动剂对一种特定类型的受体是特异性的。
本文中所用的术语“拮抗剂”是指可以通过共价键、离子键、氢键、疏水性相互作用或其组合竞争性或非竞争性地结合酶、受体或或辅助受体并直接或间接地使相关下游信号传导途径失活的小分子、肽、蛋白或抗体。
本文中所用的术语“抗癌化合物”是指选择性靶向癌细胞并降低它们的生长、增殖或侵袭性或含有此类癌细胞的肿瘤的肿瘤负荷的小分子化合物。
本文中所用的术语“给药”包括体内给药，以及直接给药至离体组织。通常，组合物可以经口、经颊、肠胃外、局部、通过吸入或吹入（即通过口腔或通过鼻子）或经直肠以按需含有常规的无毒药学上可接受的载体、佐剂和媒介物的剂量单位制剂全身性给药，或者可以通过例如但不限于注射、植入、移植、局部施用或肠胃外的手段给药。
术语“类似物”和“衍生物”可以互换地用于指在一个或多个步骤中由具有类似结构的另一化合物制得的化合物。化合物的“衍生物”或“类似物”保留了至少一定程度的参比化合物的所需功能。因此，“衍生物”的替代术语可以是“功能性衍生物”。衍生物可以包括化学改性，如烷基化、酰化、氨甲酰化、碘化或衍生化该化合物的任何改性。此类衍生化分子包括例如其中游离氨基基团被衍生化以形成氢氯化胺、对甲苯磺酰基基团、苄氧羰基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲缩醛基团的那些分子。游离羧基基团可以衍生化以形成盐、酯、酰胺或酰肼。游离羟基基团可以衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。
本文中所用的术语“别构调节”是指通过在除了该受体的内源性配体（正位配体）之外的不同位点（即调节位点）处结合别构调节剂来调节受体并增强或抑制该内源性配体的作用的过程。其通常通过在受体分子中引起构象变化（这会导致配体结合亲和力的改变）来起作用。因此，别构配体通过原发性“配体”来“调节”其激活，并可以调节受体的激活的强度。许多别构酶受它们的底物的调控，此类底物被认为是“同促别构调节剂”。非底物调节分子被称为“异促别构调节剂”。
术语“别构调控”是通过在蛋白质的别构位点（指的是除该蛋白质的活性位点之外的位点）处结合效应分子来调控酶或其它蛋白。增强蛋白活性的效应剂被称为“别构激活剂”，而降低蛋白活性的那些被称为“别构抑制剂”。由此，当结合一个配体增强底物分子与其它结合位点之间的吸引力时，发生“别构激活”；当结合一个配体降低在其它活性位点处对底物的亲和力时，发生“别构抑制”。 本文中所用的术语“拮抗剂”是指抵消另一种物质的效果的物质。
术语“凋亡”或“程序性细胞死亡”是指高度调节和活性的过程，其促进包含一系列生物化学事件的生物体内稳态，所述生物化学事件导致多种形态变化，包括起泡、对细胞膜的改变（如膜不对称性和附着的丧失）、细胞皱缩、核碎裂、染色质凝聚以及染色体DNA碎裂，而不损害生物体。
凋亡性细胞死亡由许多不同的因素来诱导，并涉及许多信号传导途径，一些依赖于半胱天冬酶蛋白酶（一类半胱氨酸蛋白酶），其它是半胱天冬酶非依赖性的。其可以通过许多不同的细胞刺激（包括细胞表面受体、对应激的线粒体反应和细胞毒性T细胞）来触发，导致激活凋亡信号传导途径。
涉及细胞凋亡的半胱天冬酶在蛋白水解级联中传达细胞凋亡信号，其中半胱天冬酶裂解并激活其它半胱天冬酶，所述其它半胱天冬酶随后降解其它细胞靶，这导致细胞死亡。在级联的前端的半胱天冬酶包括半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9。半胱天冬酶-8是最初涉及对具有死亡结构域（DD）的受体（如Fas）的应答的半胱天冬酶。
TNF受体家族中的受体与细胞凋亡的诱导以及炎性信号传导相关。Fas受体（CD95）通过在其它细胞表面上表达的Fas-配体来介导细胞凋亡信号传导。Fas-FasL相互作用在免疫***中起重要作用，并缺乏该体系导致自身免疫，表明Fas-介导的细胞凋亡去除自身反应性淋巴细胞。Fas信号传导还涉及免疫监督以去除转化的细胞和病毒感染的细胞。Fas与另一细胞上的寡聚FasL结合通过被称为死亡结构域（DD）的细胞质结构域激活凋亡信号传导，所述细胞质结构域与信号传导接合体（其包括FAF、FADD和DAX）相互作用以激活半胱天冬酶蛋白水解级联。半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-10首先被激活，随后裂解并激活下游的半胱天冬酶和多种细胞底物，这导致细胞死亡。
线粒体通过向细胞质中释放线粒体蛋白来参与凋亡信号传导途径。细胞色素c——电子转运中的一种关键蛋白——响应细胞凋亡信号从线粒体中释放，并激活Apaf-1——从线粒体中释放的一种蛋白酶。激活的Apaf-1激活半胱天冬酶-9和半胱天冬酶途径的其它物质。Smac/DIABLO从线粒体中释放并抑制IAP蛋白，其通常与半胱天冬酶-9相互作用而抑制细胞凋亡。通过Bcl-2家族蛋白进行的细胞凋亡调节在家族成员形成进入线粒体膜的复合物时发生，其调节细胞色素c和其它蛋白的释放。引起细胞凋亡的TNF家族受体直接激活半胱天冬酶级联，但也可激活Bid（Bcl-2家族成员），其激活线粒体介导的细胞凋亡。Bax（另一Bcl-2家族成员）通过这种途径激活以定位于线粒体膜并提高其通透性，释放细胞色素c和其它线粒体蛋白。Bcl-2和Bcl-xL防止孔形成，阻断凋亡。与细胞色素c一样，AIF（细胞凋亡-诱导因子）是存在于线粒体中的蛋白，其受细胞凋亡性刺激而从线粒体中释放。尽管细胞色素C与半胱天冬酶依赖性细胞凋亡信号传导相关，AIF释放刺激半胱天冬酶非依赖性细胞凋亡，移动到核中，在那里它结合DNA。AIF的DNA结合刺激染色质凝聚，和DNA碎裂，这有可能通过募集核酸酶来实现。
线粒体应激途径始于从线粒体中释放细胞色素c，其随后与Apaf-1相互作用，导致半胱天冬酶-9的自裂解和激活。半胱天冬酶-3、-6和-7是下游半胱天冬酶，其通过上游蛋白酶激活并使得它们自身发挥作用以***细胞靶。
通过细胞毒素T细胞释放的粒酶B和穿孔素蛋白在靶细胞中诱导细胞凋亡，形成跨膜膜孔，并触发细胞凋亡，很可能是通过半胱天冬酶的裂解来实现，尽管已经提出粒酶B介导的细胞凋亡的半胱天冬酶-非依赖性机制。
通过细胞凋亡性信号传导途径激活的多重核酸酶产生核小体梯所致的核基因组的片段化是细胞凋亡的细胞应答特性。细胞凋亡所涉及的一种核酸酶是DNA片段化因子（DFF）——半胱天冬酶激活的DNAse（CAD）。DFF/CAD在细胞凋亡过程中由半胱天冬酶蛋白酶切割其相关抑制剂ICAD而被激活。DFF/CAD与染色质组分如拓扑异构酶II与组蛋白H1相互作用，使染色质结构凝聚并有可能将CAD募集至染色质。另一细胞凋亡激活的蛋白酶是内切核酸酶G（EndoG）。EndoG在核基因组中编码但在正常细胞中定位在线粒体中。EndoG可以在复制线粒体基因组和细胞凋亡中发挥作用。细胞凋亡性信号传导引起从线粒体释放EndoG。EndoG和DFF/CAD途径是独立的，因为EndoG途径在缺乏DFF的细胞中仍然发生。
缺氧，以及在缺氧之后重新充氧可以触发细胞色素c释放和细胞凋亡。糖原合成酶激酶（GSK-3）——在多数细胞类型中无处不在地表达的丝氨酸-苏氨酸激酶——由于活化线粒体细胞死亡途径的许多刺激而似乎介导了细胞凋亡或加强了细胞凋亡。Loberg, RD等人, J. Biol. Chem. 277 (44):41667-673 (2002)。已经证明诱导半胱天冬酶3激活和激活促细胞凋亡性肿瘤抑制基因p53。还提出了GSK-3促进促细胞凋亡性Bcl-2家族成员（Bax）的活化和易位，其在聚集和线粒体定位时诱导细胞色素c释放。Akt是GSK-3的重要调节子，并且GSK-3的磷酸化和失活可介导Akt的一些抗细胞凋亡性作用。
术语“检测标记物”或“报道基因”（或“报道分子”）是指可以被检测、或易于识别和测量的基因。该报道基因的表达可以在RNA水平下，或在蛋白质水平下测得。可以在试验检测方案中检测的基因产物包括但不限于标记酶、抗原、氨基酸序列标记、细胞表型标记、核酸序列标记等等。研究者可以将报道基因附着到细胞培养物、细菌、动物或植物中相关的另一基因上。例如，一些报道分子是可选标记物，或赋予表达它们的生物体以特性，由此使该生物体易于识别和检测。为了向生物体中引入报道基因，研究者可以在待***该细胞或生物体的相同DNA构建体中放置该报道基因与相关的基因。对于培养基中的细菌或真核细胞，这可以为质粒的形式。通常使用的报道基因可以包括但不限于荧光蛋白、萤光素酶、β-半乳糖苷酶和可选标记物，如氯霉素和卡那霉素。
本文中所用的术语“生物利用度”是指与标样或对照物相比活性药物成分或治疗部分从给药的剂型中被吸收到体循环中的比率和程度。
本文中所用的术语“生物标记”（或“生物特征”）是指肽、蛋白质、核酸、抗体、基因、代谢物或用作生物状态指标的任何其它物质。其为客观量度并评估为正常生物过程、致病过程或对治疗干预的药理反应的细胞或分子指标的特征。本文中所用的术语“指标”是指从一系列观察到的事实衍生出的任何物质、数字或比率，所述事实可以揭示作为时间的函数的相对变化；或信号、符号、标记、音符或症状，其是可见的或是其出现或存在的证据。一旦提出的生物标记已经被验证，其可用于诊断疾病风险、个体中疾病的存在或定制个体中疾病的治疗（药物治疗或给药方案的选择）。在评估潜在的药物疗法时，生物标记可以用作自然终点（如生存率或不可逆的发病率）的代用标记。如果治疗改变了该生物标记，并且该改变与改善的健康直接相关，该生物标记可以充当评估临床益处的代用终点。临床终点是可用于测量患者的感觉、功能或生存的变量。代用终点是意在替代临床终点的生物标记；这些生物标记被证实可以预测临床终点，其置信水平是监管机构和临床社区可接受的。
本文中所用的术语“结合”或其任何语法形式是指能够持有、吸引、相互作用或与之结合的能力。
本文中所用的术语“癌症”或“恶性肿瘤”是指其中异常细胞不受控制地***并侵袭附近组织的疾病。癌细胞还可以通过血液和淋巴***扩散到身体的其它部位。存在几种主要类型的癌症。瘤癌是在内衬或覆盖内部器官的皮肤或组织中开始的癌症。肉瘤是在骨骼、软骨、脂肪、肌肉、血管或其它***或支持组织中开始的癌症。白血病是在诸如骨髓的造血组织中开始的癌症，并导致产生大量异常血细胞和进入血液。淋巴瘤和多发性骨髓瘤是在免疫***的细胞中开始的癌症。中枢神经***癌症是在大脑和脊髓的组织中开始的癌症。
本文中所用的术语“载体”描述了不会对生物体造成显著刺激且不会消除所述发明的组合物的活性化合物的生物活性和性质的材料。载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性以使其适于给药至正在接受治疗的哺乳动物。该载体可以是惰性的，或者其可以具有药物益处和/或美容益处。术语“赋形剂”、“载体”或“媒介物”可互换使用以便指适于配制和给药本文中描述的药学上可接受的组合物的载体材料。本文中可用的载体和媒介物包括本领域中已知的任何此类材料，此类材料是无毒的，并且不会与其它组分相互作用。
术语“细胞”在本文中用于指活生物体的结构和功能单位，并且是归类为活体的生物体的最小单位。
本文中所用的术语“细胞系”是指永生化细胞的群体，其已经经历了转化并可以无限期地在培养基中传代。
本文中所用的术语“化学抗性”是指发展耐受多种在结构和功能上不同的药剂的细胞表型。肿瘤在化疗前可能具有内在的抗性，或者初始对化疗敏感的肿瘤可能在治疗过程中获得抗性。抗药性是涉及多个相互关联或独立的机制的多因素现象。涉及的机制的异源表达可以表征相同类型的肿瘤或相同肿瘤的细胞，并可以至少部分反映肿瘤进展。可以促进细胞抗性的示例性机制包括：参与降低细胞内药物浓度的防御因子的表达增加；药物-靶标相互作用的改变；细胞应答的改变，特别是提高的细胞修复DNA损伤或耐受应激条件的能力，以及凋亡途径中的缺陷。
本文中所用的术语“化学敏感的”、“化学敏感性”或“化学敏感肿瘤”是指对化疗或化学治疗剂有反应的肿瘤。化学敏感肿瘤的特征包括但不限于降低的肿瘤细胞群的增殖、减小的肿瘤尺寸、降低的肿瘤负荷、肿瘤细胞死亡和肿瘤细胞群被延缓/抑制的进展。
本文中所用的术语“化学治疗剂”是指可用于治疗或控制疾病（例如癌症）的化学品。
本文中所用的术语“化疗”是指采用一种或多种化学治疗剂的治疗过程。在癌症的情况下，化疗的目标是例如杀死癌细胞、减少癌细胞的增殖、降低含有癌细胞的肿瘤的生长、降低癌细胞的侵袭性、提高癌细胞的凋亡。
术语“化疗方案”（“联合化疗”）是指使用超过一种药物的化疗以便受益于超过一种药物的不同的毒性。联合癌症疗法的原理在于不同的药物通过不同的细胞毒性机制起作用；因为它们具有不同的剂量限制性副作用，它们可以以全剂量一起提供。
本文中所用的术语“相容”是指组合物的组分能够彼此结合，以使得在普通使用条件下不存在显著降低该组合物功效的相互作用。
本文中所用的术语“病症”是指多种健康状态，并意味着包括由任何潜在的机理或损伤造成的失调或疾病。
本文中所用的术语“接触”及其各种语法形式是指触及或即时或局部接近的状态或条件。使组合物接触靶标（例如但不限于器官、组织、细胞或肿瘤）可以通过本领域技术人员已知的任何给药手段进行。
本文中所用的术语“衍生物”是指可以在一个或多个步骤中由具有类似结构的另一化合物制得的化合物。肽或化合物的“衍生物”保留了至少一定程度的所述肽或化合物的所需功能。因此，“衍生物”的替代术语可以是“功能性衍生物”。衍生物可以包括肽的化学改性，如烷基化、酰化、氨甲酰化、碘化或衍生化该肽的任何改性。此类衍生化分子包括例如其中游离氨基基团被衍生化以形成氢氯化胺、对甲苯磺酰基基团、苄氧羰基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲缩醛基团的那些分子。游离羧基基团可以衍生化以形成盐、酯、酰胺或酰肼。游离羟基基团可以衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。组氨酸的咪唑氮可以衍生以形成N-im-苄基组氨酸。作为衍生物或类似物还包括的是含有一种或多种天然存在的二十种标准氨基酸的氨基酸衍生物（例如4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、3-甲基组氨酸、同丝氨酸、鸟氨酸或羧基谷氨酸酯）的那些肽，并可以包括并未通过肽键连接的氨基酸。此类肽衍生物可以在肽合成过程中混入，或可以通过公知的化学改性方法对肽进行改性（参见例如Glazer等人, Chemical Modification of Proteins, Selected Methods andAnalytical Procedures, Elsevier Biomedical Press, New York (1975)）。
术语“可检测标记物”涵盖了可选标记物和检测标记物。术语“可选标记物”是指可以选择或筛选用表达构建体转化的细胞的多种基因产物，包括抗药性标记物、可用于荧光激活细胞分选的抗原标记物、粘附标记物如用于允许选择性粘附的粘附性配体的受体等等。当合成制备或修改核酸时，可以利用待表达的核酸的预期宿主的已知密码子偏好。
术语“可检测反应”是指可以在检测中检测到的任何信号或反应，所述检测可以使用或不使用检测试剂来进行。可检测反应包括但不限于放射性衰变和能量（例如荧光、紫外线、红外线、可见光）发射、吸收、偏振、荧光、磷光、透射、反射或共振转移。可检测反应还包括色谱迁移率、浊度、电泳迁移率、质谱、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱和x射线衍射。或者，可检测反应可以是测量生物材料的一种或多种性质的检测的结果，所述性质例如熔点、密度、电导率、表面声波、催化活性或元素组成。
本文中所用的术语“疾病”或“失调”是指健康损害或功能异常的病症。
本文中所用的术语“剂量”是指规定一次服用的药物的量。
本文中所用的术语“药物”是指治疗剂或在疾病的预防、诊断、缓解、治疗或治愈中使用的任何物质。
术语“依莫帕米结合蛋白”（EBP）、“人甾醇异构酶”（HIS）和“delta8-delta7甾醇异构酶”可互换使用，以指催化delta(8)-甾醇向delta(7)-甾醇的转化的内质网的膜内在蛋白。
术语“有效量”或“有效的量”是指实现期望的生物效果所需或充足的量。
本文中所用的术语“有效剂量”是指实现期望的生物效果所需或充足的规定一次服用的药物的量。
本文中所用的术语“酶活性”是指在给定条件下在给定时间内消耗的底物（或形成的产物）的量。酶活性也可以被称为“转换数”。
本文中所用的术语“制剂”和“组合物”可互换使用，以指包含所有活性和惰性成分的所述发明的产物。
术语“功能等价物”或“功能等价”在本文中可互换使用，以指具有与参比物质、分子、多核苷酸、蛋白、肽或多肽类似或相同的生物活性的物质、分子、多核苷酸、蛋白、肽或多肽。任何保留化合物4C12的生物活性（例如调节对胆固醇生物合成抑制敏感的癌细胞）的小分子抗癌化合物可以用作此类功能等价物。
本文中所用的术语“生长”是指变得更大、更长或数量更多，或尺寸、数量或体积增加的过程。
术语“半数最大抑制浓度”（“IC50”）是化合物抑制生物或生化功能的有效性的量度。
术语“抑制”在本文中用于指降低过程的量或速率、完全停止该过程或减少、限制或阻断其作用或功能。抑制可以包括将物质的量、速率、作用功能或过程减少或降低至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%。
本文中所用的术语“抑制剂”是指结合酶并由此降低酶活性的分子。酶抑制剂是结合酶并由此降低酶活性的分子。抑制剂的结合可以阻止底物进入酶的活性位点和/或阻碍酶催化其反应。抑制剂结合是可逆或不可逆的。不可逆抑制剂通常与酶反应，并在化学上改变酶，例如通过修饰酶活性所需的关键氨基酸残基。相反，可逆抑制剂非共价地结合并根据这些抑制剂是结合酶、酶/底物复合物还是二者均结合而产生不同类型的抑制。酶抑制剂通常通过它们的特异性和效力来评估。
本文中所用的术语“损伤”是指外部药剂或力造成的对身体的结构或功能的损害或伤害，其可以是物理的或化学的。
本文中所用的术语“干扰”是指牵制、阻碍、减缓、打扰、阻塞、阻断、降低或防止动作或事件。例如，受体拮抗剂干扰（例如阻断或减缓）激动剂介导的反应，而不是自身激发生物反应。
本文中所用的术语“侵入”或“侵入性”是指包括穿透并移动穿过周围组织的在恶性细胞中的过程。
本文中所用的术语“Kaplan Meier曲线”或“Kaplan Meier生存曲线”是指在以许多小的间隔考虑时间的情况下临床研究受试者在给定时间长度内存活的概率图。KaplanMeier曲线假定：（i）在任何时候，被删除（即失去）的受试者的生存前景与继续被跟踪的受试者相同；（ii）在研究中早期和晚期招募的受试者的生存概率相同；和（iii）事件（例如死亡）在指定的时间发生。事件发生的概率在某个时间点计算，连续的概率乘以任何先前计算的概率得到最终的估计值。在任何特定时间的生存概率计算为存活受试者的数量除以处在危险中的受试者的数量。已经死亡、退出或从研究中删除的受试者不计为处在危险中。
本文中所用的术语“配体”是指可以选择性结合到分子上，以使配体与其结合配偶体之间的结合相互作用通过定量测定相对于非特异性相互作用可以检测的分子。衍生物、类似物或模拟物意在包含在该术语的定义中。
术语“标记物”和“细胞表面标记”在本文中可互换使用，以指使得细胞类型能够与其它种类的细胞区分开的受体、受体的组合、或在细胞表面发现的抗原决定簇或表位。能够选择性结合或粘附到其它信号传导分子上的特定的蛋白质受体（标记物）涂覆身体内每个细胞的表面。细胞利用这些受体和结合它们的分子作为与其它细胞通信的方法并在体内实施它们的适当功能。细胞分选技术基于细胞生物标记，其中细胞表面标记（一种或多种）可用于从细胞群中的阳性选择或阴性选择（即用于包含或排除）。
本文中所用的术语“最大耐受剂量”（MTD）是指不会产生不可接受的毒性的药物的最高剂量。
本文中所用的术语“中位生存期”是指50%的患有特定病症的个体仍然存活并且50%已经死亡的时间。例如，6个月的中位生存期表示在6个月后，50%的患有例如结肠癌的个体将存活，并且50%将死亡。当平均存活率相对较短时，如结肠癌，中位生存期通常用于描述病症的预后（即存活机会）。当评估药物或治疗以确定该药物或治疗是否会延长生命时，在临床研究中也使用中位生存期。
本文中所用的术语“转移”是指生物体或恶性或癌性细胞从身体一个部分向其它部分的迁移，产生疾病表现。
本文中所用的术语“迁移”是指细胞群从一个地方向另一个地方的移动。
本文中所用的术语“有丝***指数”是指细胞群中发生有丝***（细胞***）的细胞数量对未发生有丝***的细胞数量的比率。
本文中所用的术语“改性”指的是在一个或多个细节方面改变、变化、调节、调整、修改、影响或调控特定的量度或比例。
本文中所用的术语“改性剂”是指降低、减小程度或范围、或减轻病症、状态、失调、疾病、症状或综合征的形式、症状、迹象、品质、特征或性质的物质、组合物、治疗组分、活性成分、治疗剂、药物、代谢物、活性剂、蛋白、非治疗组分、非活性成分、非治疗剂或非活性剂。
本文中所用的术语“调节”指的是调控、改变、适应或调节特定量度或比例。
本文中所用的术语“瘤”是指遗传改变的细胞的异常增殖。恶性瘤（或恶性肿瘤）与癌症同义。良性瘤（或良性肿瘤）是自身停止生长，不侵入其它组织并且不形成转移瘤的肿瘤（实体瘤）。
本文中所用的术语“神经球” 是指当在补充有表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清条件下培养时的悬浮的细胞三维聚集体，其可以解离以形成大量次级球，或当在适当底物上的分化培养基中生长时诱导分化，产生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞——CNS的三种主要细胞类型。
本文中所用的术语“正常健康对照受试者”是指没有疾病的症状或其它临床证据的受试者。
本文中所用的术语“结果”是指可以测量的特定结果或效果。结果的非限制性实例包括疼痛减轻、肿瘤尺寸减小和存活期（例如无进展存活期或总存活期）。
本文中所用的术语“总存活期”（OS）是指从诊断日期或开始治疗疾病（如癌症）的时间长度，诊断患有该疾病的患者仍然存活。
本文中所用的术语“肠胃外”是指通过注射（即注射给药）引入身体，所述注射包括例如皮下（即皮下注射）、肌内（即注射入肌肉）；静脉内（即注射入静脉）、鞘内（即注射入脊髓周围或大脑蛛网膜下方的空间）或输注技术。肠胃外给药的组合物使用针头，例如外科针头来递送。本文中所用的术语“外科针头”是指适于将流体（即能够流动）组合物递送至选定的解剖学结构的任何针头。可注射制剂（如无菌可注射水性或油性悬浮液）可以根据已知技术使用示例性分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。
本文中所用的术语“药物制剂”或“药物组合物”是指用于预防、在强度上减轻、治愈或以其它方式治疗目标病症或疾病的制剂或组合物。
本文中所用的术语“药学上可接受的载体”是指常规可用于给药药物的任何基本无毒的载体，其中所述发明的小分子抗癌化合物将保持稳定和生物可利用。该药学上可接受的载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性以使其适于给药至正在治疗的哺乳动物。其还应当保持活性剂的稳定性和生物利用度。该药学上可接受的载体可以是液体或固体，并且当与活性剂和给定组合物的其它组分结合时，根据计划好的给药方式来选择以提供所需体积、稠度等等。
本文中所用的术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内适于与人和低等动物的组织接触而不具有不适当的毒性、刺激、过敏反应等等并与合理的收益/风险比相称的那些盐。当用于药物时，该盐应当是药学上可接受的，但是非药学上可接受的盐常规可用于制备其药学上可接受的盐。此类盐包括但不限于由下列酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。另外，此类盐可以作为碱金属或碱土金属盐来制备，如羧酸基团的钠、钾或钙盐。“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内适于与人和低等动物的组织接触而不具有不适当的毒性、刺激、过敏反应等等并与合理的收益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中是公知的。例如，P. H. Stahl等人在“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use”（Wiley VCH,Zurich, Switzerland: 2002）中详细描述了药学上可接受的盐。该盐可以在最终分离和纯化所述发明中描述的化合物的过程中原位制备，或通过将游离碱官能与合适的有机酸反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐（羟乙基磺酸盐）、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。同样，碱性含氮基团可以用试剂季铵化，此类试剂例如为低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物以及其它。由此获得水溶性或油溶性或分散性产物。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括此类无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及此类有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。碱性加成盐可以在最终分离和纯化本发明中描述的化合物的过程中通过将含有羧酸的部分与适当的碱（如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐）反应或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来原位制备。药学上可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等等的阳离子和无毒季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺等等。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等等。药学上可接受的盐还可使用本领域中公知的标准程序获得，例如通过使足够碱性的化合物（如胺）与提供生理上可接受的阴离子的合适的酸反应。还可以制造羧酸的碱金属（例如钠、钾或锂）或碱土金属（例如钙或镁）盐。
术语“原发性肿瘤”或“原发性癌症”可互换使用，以指在体内的原始的或首次出现的肿瘤。来自原发性癌症的癌细胞可以扩散至身体其它部位并形成新的、或继发性的肿瘤。这被称为转移。继发性肿瘤的癌症类型与原发性癌症相同。
本文中所用的术语“进展”是指疾病越来越严重或在体内扩散的过程。
本文中所用的术语“无进展生存期”（PFS）是指在治疗疾病期间和之后，患者带着疾病生存但其并未恶化的时间长度。
本文中所用的术语“增殖”是指细胞群通过单个细胞连续***成相同的子细胞来扩张，导致细胞数量增加或提高。
本文中所用的术语“复发”是指重新出现的疾病（例如癌症），通常在检测不到该疾病的一段时间后。
本文中所用的术语“减轻”或“减少”是指限制在发展该疾病的风险下的个体中该疾病的发生。
术语“顽固性”或“抗性”在本文中可互换使用，以指对治疗无反应的疾病或病症。该疾病可能在治疗开始时即耐受治疗，或其可以在治疗过程中变得耐受治疗。
本文中所用的术语“缓解”是指疾病的体征或症状的减少或消失。在部分缓解中，一些（但非全部）体征或症状消失。在完全缓解中，所有体征和症状均已经消失，尽管疾病可能仍在体内。
本文中所用的术语实体肿瘤中的疗效评估标准（或“RECIST”）是指量度癌症患者对治疗反应如何的标准方法。其基于肿瘤是否萎缩、保持不变或变得更大。要采用RECIST，必须存在至少一个可以在X射线、CT扫描或MRI扫描中测量的肿瘤。患者可能具有的反应类型是完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、进行性疾病（PD）和稳定疾病（SD）。
本文中所用的术语“体征”是指在体格检查或来自实验室检查中发现的内容，其显示某人可能患有病症或疾病。
术语“受试者”或“个体”或“患者”可互换使用，以指哺乳动物来源的动物物种的成员，包括但不限于小鼠、大鼠、猫、山羊、绵羊、马、仓鼠、白鼬、鸭嘴兽、猪、狗、豚鼠、兔子和灵长类动物如猴子、猿或人。
本文中所用的术语“需要此类治疗的受试者”是指苦于疾病、失调、病症或病理过程（例如实体肿瘤、脑肿瘤或神经胶质瘤）的患者。根据一些实施方案，术语“需要此类治疗的受试者”还用于指其癌症包含对胆固醇生物合成抑制敏感的癌细胞群的患者；（i）其将被给药治疗量的所述发明的小分子抗癌化合物；（ii）正在接受治疗量的所述发明的小分子抗癌化合物；或（iii）已经接受治疗量的所述发明的小分子抗癌化合物，除非该短语的上下文和用法另有所示。
本文中所用的术语“基本抑制”、“基本上抑制”等等是指抑制至少50%、抑制至少55%、抑制至少60%、抑制至少65%、抑制至少70%、抑制至少75%、抑制至少80%、抑制至少85%、抑制至少90%、抑制至少95%、或抑制至少99%。
本文中所用的术语“存活率”是指对规定的时间量未死于疾病（例如癌症）的个体的%。例如，如果对特定癌症的5年存活率为34%，这意味着初始诊断患有该癌症的100名个体中的34个在5年后仍然活着。
本文中所用的术语“症状”是指体征或疾病或病症。“症状管理”、“姑息治疗”和“支持性护理”在本文中可互换使用，以指提供护理以改善患有严重的或危及生命的疾病的患者的生活质量（QOL）。
本文中所用的术语“治疗剂”是指提供治疗效果的药物、分子、核酸、蛋白质、代谢物、组合物或其它物质。本文中所用的术语“活性”是指所述发明的组合物的成分、组分或组成导致了预期的治疗效果。术语“治疗剂”和“活性剂”在本文中可互换使用。
术语“治疗有效量”、“有效量”或“药物有效量”的一种或多种活性剂可互换使用，以指足以提供预期的治疗益处的量。剂量水平取决于许多因素，包括损伤的类型，患者的年龄、体重、性别、医疗状况，病症的严重程度，给药途径，以及所用的特定活性剂。因此，剂量方案可能变化很大，但是可以常规由医生采用标准方法来确定。此外，术语“治疗有效量”和“药物有效量”包括预防或防止的量。
本文中所用的术语“治疗组分”是指治疗有效剂量（即给药的剂量和频率），所述剂量消除、降低或防止该群体中一定百分比的特定疾病表现的进展。常用的治疗组分的实例是ED50，其描述了特定剂量形式的剂量，所述特定剂量对群体的50%的具体疾病表现是治疗有效的。
本文中所用的术语“治疗效果”是指治疗的结果，其结果被判定为期望的和有益的。治疗效果可直接或间接地包括阻止、降低或消除疾病表现。治疗效果还可直接或间接地包括阻止、降低或消除疾病表现的进展。
本文中所用的术语“甾醇”是指甾族醇，其包含共同的类固醇核（稠合的、还原的17个碳原子的环体系，环戊烷全氢菲）和羟基基团。
本文中所用的术语“治疗”包括废除、显著抑制、减缓或逆转病症的进展，显著改善病症的临床症状，或显著预防出现病症的临床症状。治疗进一步是指实现以下的一者或多者：（a）减轻失调的严重程度；（b）限制正在治疗的失调（一种或多种）所特有的症状的发展；（c）限制正在治疗的失调（一种或多种）所特有的症状的恶化；（d）限制先前患有该失调（一种或多种）的患者中该失调（一种或多种）的复发；和（e）限制先前对该失调（一种或多种）无症状的患者中症状的复发。
本文中所用的术语“肿瘤”是指涉及数量（增殖）或尺寸方面的异常细胞生长的疾病，其可能侵入或扩散至身体的其它部位（转移）。
术语“肿瘤负荷”或“肿瘤负载”在本文中可互换使用，以指身体中癌细胞的数量、肿瘤尺寸或癌症的量。
化合物
式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
（式I）
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、异丙基、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据一个实施方案，所述发明提供了式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1或2；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R5和R6独立地选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1或2；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O、S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R5和R6独立地选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
X2 = L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R5和R6独立地选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-a)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基、环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
n = 1或2；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
n = 1或2；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
X2 = L2–R6；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4、或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me、炔丙基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-b的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-b)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-b的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-c的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-c)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y2选自CR’R”、NR、O和S。在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、i-Pr和环丙基；
k = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-c的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y2选自CH2、NR、O和S。在该段落的上下文中，R选自H和Me；
k = 1或2；
n = 1或2；
L2选自NH、O、S、CHOH、C=O和–S(CH2)–；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-c的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y2选自CH2、NR、O和S。在该段落的上下文中，R选自H和Me；
k = 1或2；
n = 1或2；
L2选自NH、O和S；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R6选自芳基和杂芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-d的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-d)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y3选自CH2、NR、O和S。在该段落的上下文中，R选自H、Me、CD3、CF3、Et、异丙基和环丙基。
n = 1或2；
L2选自S、O、NH；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et和C2–C6炔基；
R6选自芳基、杂芳基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-d的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y3选自CH2、NH、NMe和O；
n = 1或2；
L2选自S、O和NH；
R4选自H、Me和炔丙基；
R6选自芳基和杂芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-e的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-e)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y4选自CR’R”、NR、O和S。在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、异丙基和环丙基；
j = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-e的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y4 = CH2；
j = 1；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O和–S(CH2)–；
R2选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；
R4选自H、Me和炔丙基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-f的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-f)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2。在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并选自H、D、F、Cl、Br、CF3、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、OR、NR2、NO2、N3、CN、CO2R、CO2NR2、SR、烷基酰基和芳基酰基。在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et、异丙基、环丙基、炔丙基和酰基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
根据另一实施方案，所述发明提供了式I-f的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O和–S(CH2)–；
R1和R2独立地选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由四或五个包含独立地选自CH2、NH、NMe和O的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3 = –(CH2)3–；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由两个包含独立地选自CH2和CH-烷基的亚单元的亚单元链组成。此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；
R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并选自H、F、Cl、Br、CF3、C1–C3烷基、炔丙基、OR、NR2、NO2、CN、CO2R、CO2NR2和SR。在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et和炔丙基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
化学取代基
本文中所用的术语“脂族”表示构成的碳原子的直链或支链排列，包括但不限于链烷烃（烷烃）——其是饱和的，烯烃（链烯烃或二烯烃）——其是不饱和的，和炔（炔烃）——其含有三键。在复杂结构中，该链可以支化或交联。
本文中所用的术语“低级”是指具有1至6个碳的基团。
本文中所用的术语”烷基”是指是指具有1至25个碳原子，或具有规定的碳原子数（例如C1-6烷基）或在此范围内的任何数字的直链或支链烃。在本申请的上下文中暗示，此类烷基基团可以任选用取代基取代，所述取代基例如但不限于卤素、全氟烷基、低级烷基、低级链烯基、低级炔基、低级环烷基、低级烷氧基、低级环烷氧基、低级烷基硫烷基、氧代、羟基。本文中所用的“烷基”的实例包括但不限于甲基、三氟甲基、乙基、丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、异丁基和异丙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、异丙氧基丁基、丙炔氧基乙基等等。
本文中所用的术语“链烯基”表示具有一个或多个双键的单价直链（非支链）或支链的烃链，其中该双键可以是非共轭的，或共轭到另一不饱和基团（例如多不饱和链烯基）上，并可以是未取代或取代的，允许多程度的取代。其可以任选被取代基取代，所述取代基例如但不限于卤素、全氟烷基、低级烷基、低级链烯基、低级炔基、低级环烷基、低级烷氧基、低级环烷氧基、低级烷基硫烷基、氧代、羟基。例如并且不受限制地，该链烯基可以是乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基、2-乙基己烯基、2-丙基-2-丁烯基、4-(2-甲基-3-丁烯)-戊烯基、6-甲氧基己烯基、2-三氟甲基-3-丁烯基等等。
本文中所用的术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键的烃基团，其任选被取代基取代，所述取代基例如但不限于卤素、全氟烷基、低级烷基、低级链烯基、低级炔基、低级环烷基、低级烷氧基、低级环烷氧基、低级烷基硫烷基、氧代、羟基。
本文中所用的术语“芳基”是指苯环或指稠合到一个或多个任选取代的苯环的任选取代的苯环体系，允许多程度的取代。取代基包括但不限于氰基、卤素、全氟烷基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫烷基、氧代、羟基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基羰基（-NRC(O)R）、羧基、酰基、酰氧基、烷氧基羰基、芳氧基、杂芳氧基、杂环基氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、杂环酰氧基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基甲酰基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基磺酰基。芳基的实例包括但不限于苯基、2-萘基、1-萘基、1-蒽基等等。
应理解的是，只要术语“烷基”或“芳基”或其前缀字根的任一者以取代基的名义出现时，它们将被解释为包含上文对烷基和芳基所给的那些限制。指定的碳原子数目（例如C1-10）应独立地指烷基、链烯基或炔基或环烷基部分的碳原子数目或其中术语“烷基”作为其前缀字根出现的更大取代基的烷基部分中的碳原子数目。
本文中所用的“环烷基”（在本文中与“脂族环”可以互换使用）是指具有总计3至10个碳环原子（但无杂原子）并任选具有一个或多个不饱和度的非芳族单价、单环或多环环结构，任选被取代基取代，所述取代基例如但不限于卤素、全氟烷基、环烷基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫烷基、氧代、羟基。“环烷基”例如包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、金刚烷基、降冰片基、降冰片烯基、环庚基或环辛基等等。
本文中所用的术语“杂环”和“杂环的”可互换使用，以指3至12元杂环的环，其任选具有一个或多个不饱和度，含有一个或多个选自-S-、-SO-、-SO2-、-O-或-N-的杂原子取代，任选被取代基取代，所述取代基包括但不限于硝基、氰基、卤素、全氟烷基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫烷基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、氧代、羟基、巯基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基羰基（-NRC(O)R）、羧基、酰基、酰氧基、烷氧基羰基、芳氧基、杂芳氧基、杂环基氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、杂环酰氧基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基甲酰基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基磺酰基、任选被烷基或芳基取代的甲硅烷基氧基、任选被烷氧基或烷基或芳基取代的甲硅烷基，允许多程度的取代。此类环任选可以稠合到一个或多个另外的“杂环的”环上。“杂环”的实例包括但不限于吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、3-吡咯啉、吡咯烷、吡啶、嘧啶、嘌呤、喹啉、异喹啉、咔唑、四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、1,3-二氧杂环己烷、哌啶、吡咯烷、吗啉、哌嗪等等。
杂环的实例包括但不限于吡啶基、噻唑基、四氢噻吩基、硫氧化四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、吲哚烯基（indolenyl）、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢呋喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、吖辛因基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、吩噁嗪基、2H-吡咯基、异噻唑基、异噁唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咱基、吩噁嗪基、异苯并二氢吡喃基、苯并二氢吡喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、噁唑烷基、苯并***基、苯异噁唑基、羟吲哚基、苯并噁唑啉基和靛红酰基（isatinoyl）。
本文中所用的术语“杂芳基”是指含有一个或多个氮、氧或硫杂原子的5至7元芳族环或多环杂环芳族环，其中N-氧化物和一氧化硫和二氧化硫是允许的杂芳族取代，任选被取代基取代，所述取代基包括但不限于硝基、氰基、卤素、全氟烷基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫烷基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、氧代、羟基、巯基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基、任选被烷基或芳基或杂芳基或杂环基或环烷基取代的氨基羰基（-NRC(O)R）、羧基、酰基、酰氧基、烷氧基羰基、芳氧基、杂芳氧基、杂环基氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、杂环酰氧基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基甲酰基、任选被烷基或环烷基或芳基或杂芳基或杂环基取代的氨基磺酰基、任选被烷基或芳基取代的甲硅烷基氧基、任选被烷氧基或烷基或芳基取代的甲硅烷基，允许多程度的取代。对于多环芳族环体系，一个或多个环可以含有一个或多个杂原子。本文中所用的“杂芳基”的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、***、四唑、噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、噻二唑、异噻唑、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、喹啉、异喹啉、喹唑啉、苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚和吲唑等等。
本文中所用的术语“稠合环烷基芳基”是指稠合到芳基基团上的环烷基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中芳基基团是取代点。本文中所用的“稠合环烷基芳基”的实例包括但不限于5-茚满基、5,6,7,8-四氢-2-萘基、等等。
本文中所用的术语“稠合芳基环烷基”是指稠合到环烷基基团上的芳基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中环烷基基团是取代点。本文中所用的“稠合芳基环烷基”的实例包括但不限于1-茚满基、2-茚满基、1-(1,2,3,4-四氢萘基)、等等。
本文中所用的术语“稠合杂环基芳基”是指稠合到芳基基团上的杂环基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中芳基基团是取代点。本文中所用的“稠合杂环基芳基”的实例包括但不限于3,4-亚甲基二氧基-1-苯基、等等。
本文中所用的术语“稠合芳基杂环基”是指稠合到杂环基基团上的芳基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中杂环基基团是取代点。本文中所用的“稠合芳基杂环基”的实例包括但不限于2-(1,3-苯并间二氧杂环戊烯基)、 等等。
本文中所用的术语“稠合环烷基杂芳基”是指稠合到杂芳基基团上的环烷基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中杂芳基基团是取代点。本文中所用的“稠合环烷基杂芳基”的实例包括但不限于5-氮杂-6-茚满基、等等。
本文中所用的术语“稠合杂芳基环烷基”是指稠合到环烷基基团上的杂芳基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中环烷基基团是取代点。本文中所用的“稠合杂芳基环烷基”的实例包括但不限于5-氮杂-1-茚满基、等等。
本文中所用的术语“稠合杂环基杂芳基”是指稠合到杂芳基基团上的杂环基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中杂芳基基团是取代点。本文中所用的“稠合杂环基杂芳基”的实例包括但不限于1,2,3,4-四氢-β-咔啉-8-基、等等。
本文中所用的术语“稠合杂芳基杂环基”是指稠合到杂环基基团上的杂芳基基团，二者具有两个共用的原子，并且其中杂环基基团是取代点。本文中所用的“稠合杂芳基杂环基”的实例包括但不限于–5-氮杂-2,3-二氢苯并呋喃-2-基、等等。
本文中所用的术语“直接键”，其中结构变量规格的一部分，是指所述变量两侧的取代基（在前和在后）的直接连接，称为“直接键”。
本文中所用的术语“O-连接部分”指的是通过氧原子键合的部分。因此，当R基团为O-连接部分时，R通过氧键合，并且其由此可以是醚、酯（例如--O--C(O)-任选取代的烷基）、碳酸酯或氨基甲酸酯（例如--O--C(O)--NH2或--O--C(O)--NH-任选取代的烷基）。类似地，术语“S-连接部分”指的是通过硫原子键合的部分。因此，当R基团为S-连接部分时，R通过硫键合，并且其因此可以是硫醚（例如--S-任选取代的烷基）、硫酯（--S--C(O)-任选取代的烷基）或二硫化物（例如--S--S-任选取代的烷基）。术语“N-连接部分”指的是通过氮原子键合的部分。因此，当R基团是N-连接部分时，R基团通过氮键合，并且这些中的一种或多种因此可以是N-连接氨基酸如--NH--CH2--COOH，氨基甲酸酯如--NH--C(O)--O-任选取代的烷基，胺如--NH-任选取代的烷基，酰胺如--NH--C(O)-任选取代的烷基或--N3。术语“C-连接部分”指的是通过碳原子键合的部分。当一个或多个R基团通过碳键合时，这些中的一种或多种因此可以是-任选取代的烷基如--CH2--CH2--O--CH3、--C(O)-任选取代的烷基羟基烷基、巯基烷基、氨基烷基或=CH-任选取代的烷基。
本文中所用的术语“烷氧基”是指基团RaO-，其中Ra是烷基。
本文中所用的术语“链烯基氧基”是指基团RaO-，其中Ra是链烯基。
本文中所用的术语“炔基氧基”是指基团RaO-，其中Ra是炔基。
本文中所用的术语“烷基硫烷基”是指基团RaS-，其中Ra是烷基。
本文中所用的术语“链烯基硫烷基”是指基团RaS-，其中Ra是链烯基。
本文中所用的术语“炔基硫烷基”是指基团RaS-，其中Ra是炔基。
本文中所用的术语“烷基亚磺酰基”是指基团RaS(O)-，其中Ra是烷基。
本文中所用的术语“链烯基亚磺酰基”是指基团RaS(O)-，其中Ra是链烯基。
本文中所用的术语“炔基亚磺酰基”是指基团RaS(O)-，其中Ra是炔基。
本文中所用的术语“烷基磺酰基”是指基团RaSO2-，其中Ra是烷基。
本文中所用的术语“链烯基磺酰基”是指基团RaSO2-，其中Ra是链烯基。
本文中所用的术语“炔基磺酰基”是指基团RaSO2-，其中Ra是炔基。
本文中所用的术语“酰基”是指基团RaC(O)-，其中Ra是烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基。
本文中所用的术语“芳酰基”是指基团RaC(O)-，其中Ra是芳基。
本文中所用的术语“杂芳酰基”是指基团RaC(O)-，其中Ra是杂芳基。
本文中所用的术语“杂环酰基”是指基团RaC(O)-，其中Ra是杂环基。
本文中所用的术语“烷氧基羰基”是指基团RaOC(O)-，其中Ra是烷基。
本文中所用的术语“酰氧基”是指基团RaC(O)O-，其中Ra是烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基。
本文中所用的术语“芳酰氧基”是指基团RaC(O)O-，其中Ra是芳基。
本文中所用的术语“杂芳酰氧基”是指基团RaC(O)O-，其中Ra是杂芳基。
本文中所用的术语“杂环酰基氧基”是指基团RaC(O)O-，其中Ra是杂环基。
本文中所用的术语“取代的”是指用一个或多个指定的取代基取代，允许多程度的取代，除非另外说明。
本文中所用的术语“含有”是指用O、S、SO、SO2、N或N-烷基的任一种的一个或多个在沿上面定义的烷基、链烯基、炔基或环烷基取代基的任何位置处的内部（in-line）取代，包括例如-CH2-O-CH2、-CH2-SO2-CH2、-CH2-NH-CH3等等。
本文中所用的术语“氧代”是指取代基=O。
本文中所用的术语“卤素”或“卤代”包括碘、溴、氯和氟。
本文中所用的术语“巯基”是指取代基-SH。
本文中所用的术语“羧基”是指取代基-COOH。
本文中所用的术语“氰基”是指取代基-CN。
本文中所用的术语“氨基磺酰基”是指取代基-SO2NH2。
本文中所用的术语“氨基甲酰基”是指取代基-C(O)NH2。
本文中所用的术语“硫烷基”是指取代基-S-。
本文中所用的术语“亚磺酰基”是指取代基-S(O)-。
本文中所用的术语“磺酰基”是指取代基-S(O)2-。
本文中所用的术语“乙氧基”是指取代基-O-CH2CH3。
本文中所用的术语“甲氧基”是指取代基-O-CH3。
本文中所用的术语“任选”指的是随后描述的事件可以发生或可以不发生，并且包括发生的事件和不发生的事件二者。
结构式I和式Ia-f的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并由此可以作为外消旋物和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体存在。本发明意在包含结构式I和式Ia-f的化合物的所有此类异构形式。
结构式I和式Ia-f的化合物可以通过例如从合适的溶剂（例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物）中分步结晶、或经由使用光学活性的固定相的手性色谱法分离为它们的个别非对映异构体。绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的X射线晶体分析法来确定，所述结晶产物或结晶中间体在必要的情况下用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生。
或者，结构通式I和式Ia-f的化合物的任何立体异构体可以通过使用光学纯的起始材料或已知绝对构型的试剂的立体特异性合成来获得。
如果需要的话，可以分离该化合物的外消旋混合物，以便分离个别的对映异构体。可以使用本领域中公知的方法来进行分离，如将化合物的外消旋混合物与对映异构体纯的化合物偶联以形成非对映异构体混合物，接着通过标准方法（如分步结晶或色谱法）分离个别的非对映异构体。偶联反应通常是使用对映异构体纯的酸或碱来形成盐。随后非对映异构衍生物可通过裂解添加的手性残基转化为纯的对映异构体。化合物的外消旋混合物也可以通过使用手性固定相的色谱方法而直接分离，该方法在本领域中是公知的。
一些本文中描述的化合物含有烯属双键，并且除非另行规定，指的是包括E和Z几何异构体。
一些本文中描述的化合物可以以互变异构体的形式存在，其具有不同的氢连接点，伴随着一个或多个双键位移。例如，酮和其烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。本发明的化合物包含个别的互变异构体及其混合物。
在通式I和式Ia-f的化合物中，原子可以表现出它们的天然同位素丰度，或该原子的一种或多种可以人工富集特定同位素，所述特定同位素具有相同原子序数，但原子质量或质量数不同于主要存在于自然界中的原子质量或质量数。本发明意在包括通式I和式Ia-g的化合物的所有合适的同位素变异。例如，氢（H）的不同同位素形式包括氕（1H）和氘（2H）。氕是自然界中存在的主要的氢同位素。氘的富集可以提供某些治疗优势，例如提高体内半衰期或减少剂量需求，或者可以提供可以用作表征生物样品的标样的化合物。通式I和式Ia-f中的同位素富集的化合物无需过度实验可通过本领域技术人员公知的常规技术或通过类似于本文中的方案与实施例中所述那些的方法使用适当的同位素富集的试剂和/或中间体来制备。
要理解的是，如本文中所用，提及结构式I和式Ia-f的化合物意味着也包括药学上可接受的盐，并且也包括非药学上可接受的盐——当它们用作游离化合物或其药学上可接受的盐的前体时或用于其它合成操作时。
组合物
根据另一方面，所述发明提供了包含治疗量的至少一种小分子抗癌化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本文中所用的术语“活性”是指具有药理或生物活性或效果。术语“活性成分”（“AI”、“活性药物成分”或“原料药”）是药物中具有药物活性的物质。
术语“制剂”和“组合物”在本文中可互换使用，以指包含所有活性和惰性成分的所述发明的产物。本文中所用的术语“药物制剂”或“药物组合物”是指用于预防、在强度上减弱、治愈或以其它方式治疗目标病症或疾病的制剂或组合物。
本文中所用的术语“粘结剂”是指将粉末粘结或“胶合”在一起并通过形成颗粒使其紧密结合，由此充当制剂中的“粘合剂”的物质。粘结剂增加稀释剂或疏松剂中已经可用的粘合强度。示例性的粘结剂包括糖如蔗糖；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；天然树胶如***胶、明胶和黄蓍树胶；海藻衍生物如藻酸、藻酸钠和藻酸铵钙；纤维素材料如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠和羟基丙基甲基纤维素；聚乙烯基吡咯烷酮；以及无机物如硅酸镁铝。该组合物中粘结剂的量可以为组合物的大约2至大约20重量%、更优选大约3至大约10重量%、甚至更优选大约3至大约6重量%。
本文中所用的术语“生物利用度”是指与标样或对照物相比活性药物成分或治疗部分从给药的剂型中被吸收到体循环中的比率和程度。
本文中所用的术语“胶囊”是指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性的明胶或淀粉制成的用于容纳或盛装包含活性成分的组合物的特殊容器或封套。硬壳胶囊通常由相对高凝胶强度的骨和猪皮明胶的共混物制成。胶囊本身可以含有少量的染料、不透明剂、增塑剂和防腐剂。
本文中所用的术语“着色剂”是指对该组合物或剂型提供着色的赋形剂。此类赋形剂可以包括食品级染料和吸附到示例性吸附剂（如粘土或氧化铝）上的食品级染料。着色剂的量可以为该组合物的大约0.1至大约5重量%、优选大约0.1至大约1重量%不等。
本文中所用的术语“稀释剂”是指通常构成该组合物或剂型的主要部分的物质。示例性的稀释剂包括糖如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇；衍生自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；以及纤维素如微晶纤维素。该组合物中稀释剂的量可以为总组合物的大约10至大约90重量%、优选大约25至大约75重量%、更优选大约30至大约60重量%、甚至更优选大约12至大约60重量%。
本文中所用的术语“崩解剂”是指添加到该组合物中以帮助其分解（崩解）并释放药物的材料。示例性的崩解剂包括淀粉；“冷水可溶性”改性淀粉如羧甲基淀粉钠；天然和合成的树胶如刺槐豆胶、刺梧桐胶、瓜尔胶、黄蓍树胶和琼脂；纤维素衍生物如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；微晶纤维素和交联微晶纤维素，如交联羧甲基纤维素钠；藻酸盐如藻酸和藻酸钠；粘土如膨润土；以及泡腾剂混合物。该组合物中崩解剂的量可以为该组合物的大约2至大约15重量%、更优选大约4至大约10重量%。
本文中所用的术语“助流剂”是指防止结块并改善颗粒的流动特性，以使流动平滑和均匀的材料。示例性的助流剂包括二氧化硅和滑石。该组合物中助流剂的量可以为总组合物的大约0.1重量%至大约5重量%、优选大约0.5至大约2重量%。
本文中所用的术语“润滑剂”是指添加到剂型中以便通过降低摩擦或磨损使片剂、颗粒等等在压制后能够从模具或模头中释放的物质。示例性润滑剂包括金属硬脂酸盐如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点蜡；以及水溶性润滑剂如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和d’l-亮氨酸。润滑剂通常在压制前非常靠后的步骤中添加，因为它们必须存在于颗粒的表面上并在它们和压片机部件之间。该组合物中润滑剂的量可以为该组合物的大约0.2至大约5重量%、优选大约0.5至大约2重量%、更优选大约0.3至大约1.5重量%。
本文中所用的术语“口服凝胶”是指分散或溶解在亲水性半固体基质中的活性成分。
本文中所用的术语“片剂”是指压制或模塑的固体剂型，其含有活性成分和合适的稀释剂。该片剂可通过压制通过湿法造粒、干法造粒或通过压实获得的混合物或颗粒来制备。
本文中所用的术语“治疗量”是指有效调控对胆固醇生物合成途径抑制敏感的癌细胞的所述发明的小分子抗癌化合物的量。与本文提供的教导结合，通过在多种活性化合物和权重因素如效力、相对生物利用度、患者体重、不利的副作用的严重程度和优选给药模式中选择，可以规划有效的预防性或治疗性治疗方案，其不会造成显著的毒性并仍有效治疗特定受试者。对任何特定应用的有效量可以根据诸如正在治疗的疾病或病症、特定的所述化合物、受试者的大小、或疾病或病症的严重程度的因素而不同。本领域普通技术人员可以根据经验确定特定的所述化合物和/或其它治疗剂的治疗有效量，而无需过度试验。通常优选使用最大剂量，即根据一定的医学判断的最高安全剂量。术语“剂量”和“用量”在本文中可互换使用。
对本文中描述的任何化合物，治疗有效量初始可以由初步体外研究和/或动物模型来确定。还可以由人数据确定治疗有效剂量。可以根据给药的化合物的相对生物利用度和效力调节所应用的剂量。
该抑制剂制剂可以在药学上可接受的溶液中给药，其可以常规地含有药学上可接受的浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体、佐剂和任选其它治疗剂。
根据另一实施方案，所述发明的组合物可以进一步包含一种或多种附加的相容性活性成分。本文中所用的“相容性”指的是此类组合物的组分能够在普通使用条件下以不存在将会显著降低该组合物功效的相互作用的方式相互组合。本文中所用的短语“附加的活性成分”是指除所述组合物的小分子抗癌化合物之外，发挥药学或任何其它有益活性的药剂。此类附加治疗剂的非限制性实例包括但不限于5-氟尿嘧啶、亚叶酸、奥沙利铂、卡培他滨、亚叶酸、依立替康、卡培他滨、奥沙利铂、贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗或其组合。
药学上可接受的载体
本文中所用的术语“药学上可接受的载体”是指一种或多种相容性固体或液体填料、稀释剂或包封物质，其例如用于给药至人或其它脊椎动物。本文中所用的术语“载体”是指有机的或无机成分，天然的或合成的，其与活性成分组合以促进应用。根据一些实施方案，该载体可以是惰性的，或其可以具有药用益处。
该药物组合物的组分也能够以使得不存在将会显著损害所需药物效力的相互作用的方式混合。
该载体可以是液体或固体的，并在考虑计划的给药方式的情况下选择，以便在与给定组合物的活性组分和其它组分组合时提供所需的体积、稠度等等。
给药
为了用于治疗，可以通过任何模式向受试者给药治疗量小分子抗癌化合物。给药该药物组合物可以通过本领域技术人员已知的任何手段来实现。给药途径包括但不限于肠胃外、经口、经颊、局部、通过吸入或吹入（即通过口腔或通过鼻子）或经直肠。
本文中所用的术语“肠胃外”是指通过注射（即注射给药）引入身体，所述注射包括例如皮下（即皮下注射）、肌内（即注射入肌肉）；静脉内（即注射入静脉）、鞘内（即注射入脊髓周围的空间）、胸骨内注射或输注技术。肠胃外给药的本发明的组合物使用针头，例如外科针头来递送。本文中所用的术语“外科针头”是指适于将本发明流体（即能够流动）组合物递送至选定的解剖学结构的任何针头。可注射制剂（如无菌可注射水性或油性悬浮液）可以根据已知技术使用示例性分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。
本发明的组合物可以是无菌注射水性溶液或油性悬浮液的形式。溶液通常被认为是两种或更多种物质的均质混合物；尽管并不一定如此，其通常为液体。在溶液中，溶质（或溶解的物质）的分子均匀分布在溶剂的那些分子中。悬浮液是其中细碎的物类与另一物类组合的分散体，其中前者被精细地磨碎和混合使得其不会快速沉降。本文中所用的术语“分散体”是指两相体系，其中一个相以颗粒或液滴形式分布在第二相或连续相中。在这些体系中，分散相常常被称为非连续相或内部相，并且连续相被称为外部相或分散介质。例如，在粗分散体中，该粒度为0.5毫米。在胶态分散体中，分散的颗粒的尺寸为大约1纳米至0.5毫米。分子分散体是其中分散相由单个分子组成的分散体；如果分子小于胶体尺寸，其结果为真溶液。
所述发明的组合物也可以为乳液形式。乳液是通过将两种不混溶的液体载体混合而制备的两相体系，所述液体载体中的一种在另一种中均匀分布，并且由直径等于或大于最大胶体颗粒的直径的小球组成。小球尺寸是至关重要的，并且必须使该体系实现最大稳定性。通常，不会发生两个相的分离，除非引入第三物质——乳化剂。因此，基本乳液含有至少三种组分——两种不混溶的液体载体和乳化剂，以及活性成分。大多数乳液将水相混入非水相中（或反之亦然）。但是，有可能制备基本上非水性的乳液，例如，非水性不混溶体系甘油和橄榄油的阴离子型和阳离子型表面活性剂。由此，本发明的组合物可以为水包油乳液的形式。该油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡，或其混合物。示例性乳化剂可以是天然存在的树胶，例如***胶或黄蓍树胶，天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸与己糖醇酐的酯或偏酯，例如失水山梨糖醇单油酸酯，以及偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如，聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。
根据一些实施方案，该组合物可以配制用于通过推注或连续输注的肠胃外给药。用于注射的制剂可以呈现为单位剂型，例如在安瓿中或在多剂量容器中，具有添加的防腐剂。该组合物可以采取诸如在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并可以含有配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬浮液可以制备成适当的油性注射悬浮液。示例性亲脂溶剂或媒介物包括脂肪油，如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酸酯，或脂质体。水性注射悬浮液可以含有提高该悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，该悬浮液还可以含有示例性稳定剂或提高化合物的溶解度以便能够制备高度浓缩溶液的药剂。或者，该活性化合物可以为粉末形式，以便在使用前与示例性媒介物，例如无菌无热原水一起构建。
该药物组合物还可以包含示例性的固相或凝胶相的载体或赋形剂。此类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、多种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。
示例性的液体或固体药物制剂形式是例如微包囊化，并且在适当的情况下与一种或多种赋形剂一起螺旋化（encochleated），涂布到微观金颗粒上，包含在脂质体、用于植入组织的丸粒中，或干燥到要擦入组织中的物体上。此类药物组合物也可以为颗粒、珠粒、粉末、片剂、包衣片剂、（微）胶囊、栓剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂、霜剂、滴剂或延迟释放活性化合物的制剂的形式，在其制剂中，如上所述常规使用赋形剂和添加剂和/或佐剂如崩解剂、粘结剂、包衣剂、膨胀剂、润滑剂或增溶剂。该药物组合物示例性地用于多种药物递送***。为了简单概述药物递送方法，参见Langer 1990 Science 249, 1527-1533，其经此引用并入本文。
根据结构，治疗量的所述发明的至少一种有效调控对胆固醇生物合成抑制敏感的癌细胞的小分子抗癌化合物，和任选至少一种附加的活性剂可以以自身形式（净形式）给药，或根据抑制剂的结构以药学上可接受的盐的形式给药。所述发明的抑制剂可以与有机或无机酸，或有机或无机碱形成药学上可接受的盐。当用在药物中时，该盐应当是药学上可接受的，但非药学上可接受的盐可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。此类盐包括但不限于由下列酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。同样，此类盐可以制备为碱金属或碱土金属盐，如羧酸基团的钠、钾或钙盐。
“药学上可接受的盐”指的是在合理的医学判断的范围内示例性用于与人或低等动物的组织接触而不具有不适当的毒性、刺激、过敏反应等等并与合理的收益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中是公知的。例如，P. H. Stahl等人在“Handbookof Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use”（Wiley VCH, Zurich,Switzerland: 2002）中详细描述了药学上可接受的盐。
该盐可以在最终分离和纯化所述发明中描述的化合物的过程中原位制备，或通过将游离碱官能与示例性的有机酸反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐（羟乙基磺酸盐）、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。同样，碱性含氮基团可以用试剂季铵化，此类试剂例如为低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物以及其它。由此获得水溶性或油溶性或分散性产物。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括此类无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及此类有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。碱性加成盐可以在最终分离和纯化本发明中描述的化合物的过程中通过将含有羧酸的部分与示例性的碱（如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐）反应或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来原位制备。药学上可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等等的阳离子和无毒季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺等等。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等等。药学上可接受的盐还可使用本领域中公知的标准程序获得，例如通过使足够碱性的化合物（如胺）与提供生理上可接受的阴离子的示例性的酸反应。还可以制造羧酸的碱金属（例如钠、钾或锂）或碱土金属（例如钙或镁）盐。
该制剂可以方便地以单位剂型形式呈现，并可以通过药学领域中公知的任何方法制备。所有方法包括使组合物或药学上可接受的盐或溶剂合物（“活性化合物”）与构成一种或多种助剂的载体结合的步骤。通常，制剂通过使活性剂与液体载体和/或细碎的固体载体均匀且密切地结合，并随后在必要的情况下将产物成型为所需制剂来制备。
该药物剂或其药学上可接受的酯、盐、溶剂合物或前药可以与其它不损害所需作用的活性材料，或与补充所需作用的材料混合。用于肠胃外、皮内、皮下、鞘内或局部施用的溶液或悬浮液可以包含但不限于例如以下组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调整张力的药剂如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以被封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。静脉内给药的特定载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。
用于肠胃外注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液和用于重构成无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。示例性的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇（丙二醇、聚乙二醇、甘油等等），其示例性混合物，植物油（如橄榄油）和可注射的有机酯如油酸乙酯。可以保持合适的流动性，例如通过使用包衣如卵磷脂、在分散液的情况下通过保持所需粒度，和通过使用表面活性剂。
这些组合物还可以含有佐剂，其包括防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过多种抗菌药剂和抗真菌药剂来确保阻止微生物的活动，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等等。还可能合意的是含有等渗剂，例如糖、氯化钠等等。可以通过使用延迟吸收的药剂来实现可注射的药物形式的延长吸收，所述延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝和明胶。
悬浮液，除了活性化合物之外，可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄蓍树胶及其混合物。
包括所述发明的组合物（一种或多种）的治疗剂（一种或多种）可以颗粒形式提供。本文中所用的术语“颗粒”是指纳米颗粒或微粒（或在一些情况下更大），其可以整体或部分地含有本文中描述的组合物或其它治疗剂（一种或多种）。该颗粒可以在被包衣包围的芯中含有该治疗剂（一种或多种）。治疗剂（一种或多种）还可以分散在整个颗粒中。该治疗剂（一种或多种）还可以吸附到该颗粒中。该颗粒可以具有任何等级的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放等等，以及其任意组合。除了治疗剂（一种或多种）之外，该颗粒可以包含常规用于药学和医药领域的任何材料，所述材料包括但不限于可侵蚀的、不可侵蚀的、生物可降解的或生物不可降解的材料或其组合。该颗粒可以是含有溶液状态或半固体状态的组合物的微胶囊。该颗粒可以具有几乎任何形状。
生物不可降解的和生物可降解的聚合材料可以用于制备用于递送治疗剂（一种或多种）的颗粒。此类聚合物可以是天然或合成的聚合物。基于释放所需的时间选择该聚合物。例如，生物胶粘剂聚合物包括生物可侵蚀的水凝胶，如Sawhney等人在Macromolecules(1993) 26, 581-587中所述，其教导经此引用并入本文。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。
该治疗剂（一种或多种）可以包含在控释***中。为了延长药物的作用，通常合意的是减缓来自皮下、鞘内或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用水溶性较差的结晶或非晶材料的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率随即取决于其溶解速率，其又取决于晶体尺寸和结晶形式。术语“控释”意在指其中药物从制剂中释放的方式和特征受控制的任何含药物制剂。这是指即释制剂以及非即释制剂，其中非即释制剂包括但不限于持续释放和延迟释放制剂。术语“持续释放”（也称为“长期释放”）以其常规含义在本文用于指提供药物在长时间内的逐步释放，并可导致药物的血液水平在长时间内基本恒定的药物制剂。或者，通过将药物溶解或悬浮于油媒介物中来实现肠胃外给药的药物形式的延迟吸收。术语“延迟释放”以其常规含义在本文用于指在制剂给药和药物从中释放之间存在时间延迟的药物制剂。“延迟释放”可以涉及或可以不涉及药物在长时间内的逐步释放，并由此可以是或可以不是“持续释放”。
根据一些实施方案，使用长期持续释放植入物对于治疗慢性病症是合意的。本文中所用的术语“长期”释放是指构建并安排该植入物以递送治疗水平的活性成分至少7天、优选大约30天至大约60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员公知的，并包括一些上述释放***。
可注射储库形式通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯内形成所述抑制剂的微包囊化基质来制造。根据抑制剂对聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。此类长效制剂可以用合适的聚合或疏水性材料（例如以可用油中的乳液形式）或离子交换树脂来配制，或配制为难溶衍生物，例如配制为难溶盐。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。储库可注射制剂也通过将所述发明的抑制剂封装到脂质体或微乳液中来制备，所述脂质体或微乳剂与身体组织相容。
该可注射制剂可以例如通过经由保留细菌的过滤器过滤或通过混入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述灭菌剂可以在临使用之前溶解或分散在无菌水或其它无菌注射介质中。可注射制剂，例如，无菌可注射的水性或油性悬浮液可以根据已知技术使用合适的分散剂或润滑剂以及悬浮剂来配制。无菌可注射的制剂也可以是在无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，如在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物和溶剂中，可以使用的是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的非挥发性油常规上用作溶剂或悬浮介质。为此，任何温和的非挥发油均可使用，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸用于制备可注射剂。
用于肠胃外（包括但不限于皮下、皮内、肌肉内、静脉内、鞘内和关节内）给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使该制剂与期望的接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性的无菌悬浮液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。该制剂可以存在于单位剂量或多剂量的容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并可以在冷冻干燥（冻干）条件下存储，仅需要在临使用前加入无菌液体载体（例如，盐水、注射用水）。临时注射溶液和悬浮液可以从前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
示例性缓冲剂包括：乙酸和盐（1-2% w/v）；柠檬酸和盐（1-3% w/v）；硼酸和盐（0.5-2.5% w/v）；磷酸和盐（0.8-2% w/v）。示例性防腐剂包括苯扎氯铵（0.003-0.03% w/v）；氯代丁醇（0.3-0.9% w/v）；对羟苯甲酸酯（0.01-0.25% w/v）和硫柳汞（0.004-0.02% w/v）。
为了以片剂或胶囊形式口服给药，可以将活性药物组分与任何口服无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述惰性载体如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露醇、乙醇（液体形式）等等。此外，当期望或需要时，合适的粘结剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也可以并入该混合物中。粉末和片剂可以包含大约5至大约95%的所述组合物。示例性粘结剂包括淀粉、明胶、天然糖类、玉米增甜剂、天然的和合成的树胶如***胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在润滑剂中，提及用于这些剂型的是硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜尔胶等等。在适当情况下也可以包含甜味剂和调味剂和防腐剂。
本发明的组合物还可以配制为糖浆剂和酏剂。糖浆剂和酏剂可以用甜味剂配制，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此类制剂还可以含有缓和剂、防腐剂和调味剂以及着色剂。缓和剂是主要用于减轻刺激，特别是粘膜或刮擦组织的保护剂。许多化学物质具有缓和性质。这些物质包括藻酸盐、黏质、树胶、糊精、淀粉、某些糖和聚合多元醇。其它包括***胶、琼脂、安息香、卡波姆、明胶、甘油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、丙二醇、藻酸钠、黄蓍树胶、水凝胶等等。
为了经颊给药，本发明的组合物可以采取以用于该途径的常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。
液体形式制剂还可以包括用于鼻内给药的溶液。
本发明的组合物可以为可分散的干粉形式，用于通过吸入或吹入（通过口或通过鼻）递送。干粉组合物可以通过本领域中已知的方法制备，如冻干和气流磨，如公开在国际专利公开号WO 91/16038中和公开在美国专利号6,921,527中，其公开内容经此引用并入本文。本发明的组合物以足以向受试者提供单位剂量治疗的量放置在示例性剂量容器中。剂量容器是装配在示例性吸入装置内以允许雾化该干粉组合物的剂量容器，即通过分散到气流中以形成气溶胶并随后将由此制得的气溶胶捕获到连接有接嘴的室中，所述接嘴用于需要治疗的受试者随后吸入。此类剂量容器包括本领域已知的封装组合物的任何容器，例如具有可移动部分的明胶或塑料胶囊，所述可移动部分允许将气（例如，空气）流导入容器以分散该干粉组合物。所述容器例如是美国专利号4,227,522；美国专利号4,192,309；和美国专利号4,105,027中所示那些。示例性容器还包括与Glaxo's Ventolin® Rotohaler牌粉末吸入器或Fison's Spinhaler®牌粉末吸入器联合使用的那些。另一示例性单位剂量容器（其提供了优异的湿气屏障）由铝箔塑料层压材料形成。将基于药物的粉末按重量或按体积填充到可成形箔中的凹处并用覆盖箔-塑料层压材料密闭封装。此类与粉末吸入装置一起使用的容器描述在美国专利号4,778,054中，并与Glaxo's Diskhaler®一起使用（美国专利号4,627,432；4,811,731；和5,035,237）。这些参考文献各自经此引用并入本文。
本发明的组合物可以是用于该组合物的直肠给药的栓剂形式。本文中所用的“直肠”或“经直肠”是指通过直肠引入体内，其中吸收通过直肠壁发生。这些组合物可以通过使药物与示例性的无刺激的赋形剂混合来制备，所述赋形剂如可可脂和聚乙二醇，其在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，并因此将在直肠中熔化并释放药物。当配制为栓剂时，本发明的组合物可以与传统的粘结剂和载体如甘油三酯一起配制。
术语“局部”是指在施用点或紧临施用点下方给药本发明的组合物。短语“局部施用”描述了施用到包括上皮表面的一个或多个表面上。尽管与透皮给药相比，局部给药通常提供局部而非全身效果，如本文中所用，除非另行说明或暗示，术语局部给药和透皮给药可互换地使用。对本申请而言，局部施用应包括漱口水和含漱剂。
局部给药还可以包括使用透皮给药如透皮贴或离子电渗装置，其根据本领域中公知的技术和程序来制备。术语“透皮递送***”、“透皮贴”或“贴剂”是指放置在皮肤上的胶粘剂体系，其通过由剂型穿过皮肤以便经全身循环散布的途径来递送延时释放剂量的药物（一种或多种）。透皮贴是用于递送多种药物的公知技术，所述药物包括但不限于用于运动疾病的莨菪胺、用于治疗心绞痛的***、用于高血压的可乐定、用于绝经后适应症的***和用于戒烟的烟碱。
用于本发明的示例性贴剂包括但不限于（1）基质贴剂；（2）储器贴剂；（3）多层药物/胶粘剂贴剂；和（4）整块药物/胶粘剂贴剂； TRANSDERMAL AND TOPICAL DRUG DELIVERYSYSTEMS, 第249-297页（Tapash K. Ghosh等人编辑, 1997），经此引用并入本文。这些贴剂在本领域中是公知的，并通常是市售的。
根据一些实施方案，该实体肿瘤是脑肿瘤。根据一些实施方案，该脑肿瘤是神经胶质瘤。根据一些实施方案，该神经胶质瘤是多形性胶质母细胞瘤。根据一些实施方案，该实体脑肿瘤包含癌症干细胞。 根据一些实施方案，该治疗量的所述小分子抗癌化合物有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。根据一些实施方案，该治疗量的所述小分子抗癌化合物有效地选择性抑制癌症干细胞的生长、癌症干细胞的增殖、诱导癌症干细胞的细胞死亡或其组合，而不会影响正常***的细胞。根据一些实施方案，该治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
除非另行限定，本文中所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管任何与本文所述那些相似或等同的方法和材料也可以用于实施或验证所述发明，现在描述优选的方法和材料。本文中提及的所有出版物经此引用并入本文以公开和描述与引用的出版物相关的方法和/或材料。
当提供值的范围时，要理解的是，在该范围的上限和下限之间的每个居间值（达到下限单位的十分之一，除非上下文明确地另行说明）和在所述范围内的任何其它所述值或居间值包含在本发明中。根据规定范围的任何特定的排除界限，可独立地包含在较小范围内的这些较小范围的上限和下限也包含于本发明中。当规定的范围包括一个或二个界限时，将那些包括的界限的二者均排除在外的范围也包括在本发明内。
必须注意，除非上下文明确地另行说明，本文中和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“该”包括复数对象。本文中所用的所有技术和科学术语具有相同含义。
本文中讨论的出版物仅为其在本申请提交日之前的公开内容而提供。本文中的任何内容均不应理解为承认所述发明没有资格因现有发明而早于此类出版物。此外，提供的出版物的日期可能与实际出版日期不同，其可能需要独立地确认。
实施例
提出下列实施例以便向本领域普通技术人员提供关于如何制造和使用所述发明的完整公开和描述，而非意图限制发明者视为其发明的范围，并且下列实施例也并非意在表示下面的试验是所进行的所有或仅有的试验。已试图确保所用数字的精确度（例如量、温度等等）但应考虑某些试验误差和偏差。除非另行说明，份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力为大气压或接近大气压。
实施例1. 化合物
使用具有100%的GBM发生率并条件性敲除p53、pTEN和NF1基因（Mut6；胶质母细胞瘤）的小鼠群，以便从在5%氧气中和在具有规定生长因子的无血清培养基中培养的GBM肿瘤中分离原代神经元干细胞。将来自多个肿瘤的原代细胞汇集，以便用针对University of TexasSouthwestern（UTSW）化合物档案的对照物进行高通量筛选，所述化合物档案包含~200,000种代表来自多个商业供应商的巨大化学空间的合成化合物，包括1200种来自PrestwickChemical Library®的市售药物和600种来自NIH图书馆的进行临床前检验的化合物。
实施基于发光的Celltiter-Glo®测定以测量细胞存活性，使用ATP水平作为读数。简而言之，制备在培养基中具有Mut6细胞的不透明壁多孔板（25µl/孔，384孔板）。制备含有不含细胞的培养基的对照孔以获得背景发光值。将测试化合物添加到试验孔中，并根据培养方案进行孵育。该板及其内容物在37℃，5%氧气下孵育96小时。在临加入CellTiter-Glo®试剂前生成ATP标准曲线。加入体积与各孔中存在的细胞培养基体积相等的CellTiter-Glo®试剂（对于384孔板，向含有细胞的25µl培养基中加入25µl试剂）。在定轨振荡器上将内容物混合2分钟以诱导细胞裂解。令该板在室温下孵育10分钟以稳定发光信号并记录发光值（例如GloMax ®, Lumistar, SPECTROstar, PHERAstar FS）。
最初的筛选产生了4480个阳性命中，具有≥50%抑制的细胞消耗（基于<-3的z-分数，这意味着-3的z-分数是低于平均值的3标准偏差）。进一步筛选该化合物以确定表现出≥70%抑制的Mut6 ATP消耗的化合物。该筛选确定了1078种化合物。针对正常***的细胞，例如野生型小鼠胚胎成纤维细胞、野生型小鼠星形胶质细胞和野生型小鼠SVZ干细胞测试该化合物。除去任何对所有三种野生型正常***细胞有毒的化合物，得到713种小分子，其中，在对正常星形胶质细胞和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）以较低摩尔浓度进行反向筛选后，确定了61种化合物仅杀死癌症干细胞。通过S9组分试验和肝细胞试验分析了这61种化合物，留下17种候选化合物。整体筛选策略显示在图6中。
S9代谢检测
雌性ICR/CD-1小鼠S9组分购自Celsis/In Vitro Technologies（Baltimore, MD）。将25微升（0.5毫克）的S9蛋白添加到15毫升玻璃旋盖试管中。在冰上加入含有相关化合物的350微升50 mM Tris, pH 7.5溶液。添加所有试剂后化合物的最终浓度为2 µM。加入125微升NADPH-再生体系（1.7 毫克/毫升NADP、7.8 毫克/毫升葡萄糖-6-磷酸、6 U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，在2% w/v NaHCO3/10 mm MgCl2中）以便分析I期代谢。附加地加入尿苷5’-二磷酸-α-D-葡糖醛酸（UDPGA 1.9 毫克/毫升）和3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸（PAPS, 100 毫克/毫升）用于II期反应。随后将该试管放置在37℃摇振水浴中。在添加I期和II期辅助因子后的不同时间点处，添加含有0.2%甲酸和200 ng/ml内标（n-苄基苯甲酰胺或甲苯磺丁脲，Sigma, St. Louis, MO）的0.5毫升甲醇停止反应。样品在RT下孵育10分钟，并随后在微型离心机上以16,100 x g旋转5分钟。通过LC-MS/MS分析上清液。7-乙氧基香豆素的代谢用于监控肝细胞性能。使用Applied Biosystems (Foster City, CA) 4000-QTrap（三重四级杆/离子阱组合仪器）对各化合物开发分析方法。追踪母离子和两种最重要的子离子以确定化合物身份，尽管仅有最丰富的子离子用于定量。具有Agilent C18 XDB柱（5微米填充；50×4.6 mm）的Shimadzu (Columbia, MD) Prominence LC用于色谱法。
肝细胞代谢检测
雄性ICR/CD-1小鼠肝细胞、InVitroGRO HI和HT Medium以及Celsis TorpedoAntibiotic Mix购自Celsis/In Vitro Technologies（Baltimore, MD）。冷冻保存的肝细胞在含有抗生素的HT Media中解冻，以2×106/毫升重新悬浮在HI培养基中并以0.05毫升（105个细胞）/孔在96孔板中铺板。待测试化合物以2 mM溶解在DMSO中，在HI培养基中进一步稀释至4 μM，并以50 μL添加到细胞中，使得最终化合物浓度为2 μM。两个附加的含有化合物但不含细胞的孔铺板以充当时间0（C0）和终点溶剂对照物（Cep）。该细胞随后放置在37℃，5% CO2培养箱中。在所示时间点处，收获孔内容物并加入2倍体积的含有0.15%甲酸和150 ng/ml 内标（n-苄基苯甲酰胺或甲苯磺丁脲，Sigma, St. Louis, MO）的甲醇以裂解细胞并沉淀蛋白质。样品在室温下孵育10分钟并在微型离心机上以16,100 g旋转5分钟。通过LC-MS/MS分析上清液。7-乙氧基香豆素的代谢用于监控肝细胞性能。使用AppliedBiosystems (Foster City, CA) 4000-QTrap（三重四级杆/离子阱组合仪器）对各化合物开发分析方法。追踪母离子和两种最重要的子离子以确定化合物身份，尽管仅有最丰富的子离子用于定量。具有Agilent C18 XDB柱（5微米填充；50×4.6 mm）的Shimadzu(Columbia, MD) Prominence LC用于色谱法。
实施例2. 候选化合物DS-1-033（下文称为化合物4C12）显示出对Mut6细胞的选择性毒性
图7显示了化合物4C12在Mut6肿瘤细胞中诱导细胞死亡。用渐增浓度的化合物4C12处理正常星形胶质细胞、Mut6细胞和小鼠胚胎成纤维细胞。图7A，其显示了相对ATP活性（y轴，存活性的量度）vs浓度（nM）的曲线图，表明化合物4C12对Mut6细胞具有50 nM的ED50。正常星形胶质细胞和MEF不受化合物4C12的影响。图7B显示了在用化合物4C12和仅含载体的阴性对照物处理14小时、23小时和38小时后Mut6细胞和对照物MEF的相差显微镜照片。下面的曲线图显示了用载体（阴性对照物）处理过的所有细胞仍然存活，虽然在96小时后仅有50%的用化合物4C12处理过的Mut6肿瘤细胞存活。
化合物4C12充当用于类似物开发和用于附加研究的初始先导化合物。示例性的类似化合物和它们的性质显示在表A中。使用一组六个物理化学参数建立类药性中枢神经***多参数优化（CNS MPO）算法，即[(a) 亲脂性，计算分配系数(ClogP)；(b) 在pH = 7.4下的计算分配系数(ClogD)；(c) 分子量(Mw)；(d) 拓扑极性表面积(TPSA)；(e) 氢键供体数量(HBD)；(f) 最基本中心(pK(a))]。参见Wager, TT 等人, “Moving beyond rules: thedevelopment of a central nervous system multi-parameter-optimization (CNSMPO) approach to enable alignment of drug-like properties”, ACS Chem.Neurosci. 1(6): 435-49 (2010)。绘制为ATP活性（y轴，存活性的量度）vs. 浓度（nM）（x轴）的类似化合物的IC50曲线显示在图9中。
通用程序A-1：
在装有回流冷凝器的烧瓶中，将羧酸（10毫摩尔，1当量）和乙酸钠（1.1当量）悬浮在水（20毫升）中。一次性引入4-氟苯硫酚（1.1当量），该反应混合物在90℃下搅拌。在4-16小时后，所得固体产物在室温下过滤并用水（80毫升）和己烷（30毫升）洗涤，并在高真空下干燥。
通用程序A-2：
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-1-095（0.5毫摩尔，1当量）、水（2毫升）、亲核试剂（1.1当量）和碳酸氢钠（1.1当量）。将试管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时。出现沉淀物，悬浮液在室温下搅拌整夜。将固体产物过滤并用水（20毫升）和己烷（10毫升）洗涤，并在高真空下干燥。
通用程序A-3：
在15毫升压力管中装入芳基氟（1毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、亲核试剂（1.1当量）和碳酸氢钠（2.1当量）。将试管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时。出现沉淀物，悬浮液在室温下搅拌整夜。将固体产物过滤并用水（20毫升）和己烷（10毫升）洗涤，并在高真空下干燥。
通用程序A-4：
在15毫升压力管中装入芳基氟（2.0毫摩尔，1当量）、干燥的二甲基甲酰胺（5毫升）、亲核试剂（4.0毫摩尔，2当量）和碳酸钾（829毫克，6.0毫摩尔，3当量）。将试管密封，该反应混合物在90℃下剧烈搅拌10小时。在室温下，该反应混合物用二氯甲烷（30毫升）和氢氧化钠1M（20毫升）稀释。有机相用15%氯化锂水溶液（5 × 20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。
通用程序B-1：
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中，将羧酸 DS-1-021（1毫摩尔，1当量）悬浮在干燥的二氯甲烷（5毫升）中。逐滴加入N-甲基吗啉（1当量），将所得黄色均匀溶液冷却至0℃。逐滴引入氯甲酸异丁酯（1当量）。在1小时后，逐滴加入胺（1.1当量），将反应混合物升温至室温。在4小时后，引入二氯甲烷（5毫升）和水（5毫升），有机相用水（10毫升）、饱和的碳酸钠（3 × 10毫升）洗涤。出现沉淀物，并用水溶解，有机相用盐水（10毫升）洗涤。该有机相在硫酸镁上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1%Et3N）获得纯净产物。
通用程序B-2：
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入酰基氯DS-1-059（321毫克，1.0毫摩尔，1当量）、干燥的二氯甲烷（1毫升）和4-二甲氨基吡啶（2.5摩尔%）并冷却至0℃。经10分钟逐滴加入胺（1当量）在干燥二氯甲烷（1毫升）中的溶液，将反应混合物缓慢升温至室温。在16小时后，该反应混合物用二氯甲烷（10毫升）稀释，用饱和碳酸氢钠（2×5毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得纯净产物。
通用程序B-3：
在50毫升烘箱干燥的烧瓶中装入羧酸（30.0毫摩尔，1当量）和亚硫酰氯（7.5毫升）并加热至回流。在4小时后，在减压下将所得均匀混合物浓缩至干燥。获得的残余物随后溶解在干燥的甲苯或二氯甲烷（5毫升）中，并蒸发溶剂。该过程重复两遍，获得酰基氯。引入干燥的二氯甲烷（20毫升）和4-二甲氨基吡啶（0.1摩尔%）并将烧瓶冷却至0℃。经15分钟逐滴加入胺（1当量）在干燥二氯甲烷（10毫升）中的溶液，并将所得溶液缓慢升温至室温。在3小时后，获得悬浮液，将固体过滤，用二***（3 × 20毫升）洗涤并在高真空下干燥以获得纯净产物。
通用程序C：
在装有回流冷凝器的25毫升三颈烧瓶中装入DS-1-175（492毫克，1.3毫摩尔，1当量）、硼酸（308毫克，2.2毫摩尔，1.76当量）、碳酸钾（829毫克，6.0毫摩尔，4.8当量）、水（2毫升）和甲苯（2.9毫升）。所得悬浮液通过3次冷冻-泵-解冻循环脱气，并引入四(三苯基膦)钯(0)（46毫克，0.04毫摩尔，3.2摩尔%）。该反应混合物在氩气下加热至回流，将均匀黄色溶液剧烈搅拌整夜。在室温下，将该反应混合物经硅藻土过滤，并用二***（25毫升）洗涤。该有机相用2 M HCl（2×10毫升）萃取，水层用固体氢氧化钾碱化至pH~12–13并用二氯甲烷（3 ×10毫升）萃取。有机相在硫酸镁上干燥、过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得纯净产物。
通用程序D:
在4毫升小瓶中装入胺和甲醇（0.12 M）。氯化氢鼓泡通过该悬浮液，直到固体完全溶解。所得均匀溶液在减压下浓缩以获得盐酸盐。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（DS-1-021）
按照通用程序A-1，使用4-氟-3-硝基苯甲酸（10.0毫摩尔）。亮黄色微晶粉末（96%）。1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.54 (bs, 1H), 8.61 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 8.00 (dt,J = 8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.73–7.67 (m, 2H), 7.42 (td, J = 8.8, 1.5 Hz, 2H), 6.90(dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 165.3, 163.6 (d, J CF =249.3 Hz), 143.9, 143.4 (d, J CF = 1.0 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.9 Hz), 134.1,128.2, 128.1, 126.5, 125.1 (d, J CF = 3.3 Hz), 117.8 (d, J CF = 22.1 Hz). IR (薄膜): 3100, 1691, 1606, 1524, 1490, 1412, 1337, 1239, 1159 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 292.0 (100%, [M–H]–, C13H7FNO4S要求292.0). mp: 214℃ (分解)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(吡啶-2-基甲基)苯甲酰胺（DS-1-023）
按照通用程序B-1，使用2-氨甲基吡啶。黄色固体（85%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ 9.42 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.83–8.78 (m, 1H), 8.53–8.48 (m, 1H), 8.05 (dt, J= 8.5, 1.4 Hz, 1H), 7.78–7.70 (m, 3H), 7.44 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.32 (d, J =7.8 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 7.5, 4.9 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.57(d, J = 5.8 Hz, 2H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.8, 163.5 (d, J CF = 249.1Hz), 158.3, 148.9, 144.1, 141.5 (d, J CF = 1.5 Hz), 138.2 (d, J CF = 8.9 Hz),136.7, 132.7, 131.5, 128.0, 125.4 (d, J CF = 3.2 Hz), 124.7, 122.2, 121.1,117.8 (d, J CF = 22.1 Hz), 44.8. IR (薄膜): 3072, 1651, 1645, 1607, 1590, 1520,1489, 1338, 1226, 1158 cm–1. MS (ES-API) m/z: 384.1 (100%, [M+H]+, C19H15FN3O3S要求384.1). mp: 140–141℃。
(R)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-031）
按照通用程序B-1，使用(R)-(+)-2-氨基甲基-1-乙基吡咯烷。黄色固体（46%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 9.0, 2.6 Hz, 1H),7.59 (ddd, J = 8.0, 5.1, 2.7 Hz, 2H), 7.21 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.87 (d, J =8.5 Hz, 2H), 3.71–3.63 (m, 1H), 3.34–3.26 (m, 1H), 3.19 (t, J = 8.2 Hz, 1H),2.80 (td, J = 7.9, 3.8 Hz, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.31–2.15 (m, 2H), 1.97–1.86(m, 1H), 1.78–1.55 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.4 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ 164.9, 164.2 (d, J CF = 252.4 Hz), 144.4, 143.2, 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz),131.9, 131.6, 128.2, 125.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.5 (d, J CF = 2.5 Hz), 117.8(d, J CF = 21.9 Hz), 62.1, 53.6, 48.1, 40.9, 28.3, 23.1, 14.2. IR (薄膜): 3097,2971, 2877, 2807, 1652, 1645, 1607, 1590, 1520, 1490, 1338, 1294, 1235, 1157cm–1. [α]D: +37.51° (0.885, MeOH). mp: 113℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-033）
按照通用程序B-1，使用2-氨基甲基-1-乙基吡咯烷。黄色固体（82%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.61–7.55 (m, 2H), 7.21 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.67 (ddd,J = 13.8, 7.3, 2.6 Hz, 1H), 3.30 (ddd, J = 13.7, 4.4, 2.5 Hz, 1H), 3.19 (td,J = 8.3, 2.5 Hz, 1H), 2.80 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.72–2.64 (m, 1H),2.30–2.15 (m, 2H), 1.96–1.86 (m, 1H), 1.78–1.54 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 164.2 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.4, 143.2(d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.9, 131.6, 128.2, 125.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.5 (d, J CF = 1.7 Hz), 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 62.0, 53.6,48.1, 40.9, 28.4, 23.1, 14.2。
N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-043）
按照通用程序B-2，使用N,N-二乙基乙二胺。黄色固体（32%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.60 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61–7.52 (m,2H), 7.23–7.15 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.84 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 3.45(q, J = 4.8 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.54 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.01(t, J = 7.0 Hz, 6H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.4, 164.2 (d, J CF = 252.3Hz), 144.4, 143.2 (d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.9, 131.6,128.2 (d, J CF = 2.1 Hz), 125.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.3 (d, J CF = 2.1 Hz),117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 51.0, 46.8, 37.5, 12.1. IR (薄膜): 3096, 2972, 2935,2821, 1652, 1645, 1608, 1558, 1538, 1506, 1489, 1338, 1294, 1227, 1158 cm–1.MS (ES-API) m/z: 392.1 (100%, [M+H]+, C19H23FN3O3S要求392.1). mp: 98℃。
(S)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-053）
按照通用程序B-2，使用(S)-(–)-2-氨基甲基-1-乙基吡咯烷。黄色固体（82%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H),7.60–7.53 (m, 2H), 7.22–7.16 (m, 2H), 7.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.84 (d, J =8.5 Hz, 1H), 3.65 (ddd, J = 13.6, 7.3, 2.7 Hz, 1H), 3.27 (ddd, J = 13.7, 4.7,2.8 Hz, 1H), 3.16 (ddd, J = 9.5, 7.1, 2.6 Hz, 1H), 2.79 (dq, J = 12.0, 7.4Hz, 1H), 2.66 (dddd, J = 8.8, 6.9, 4.6, 2.7 Hz, 1H), 2.29–2.12 (m, 2H), 1.89(dtd, J = 12.3, 8.5, 7.0 Hz, 1H), 1.77–1.52 (m, 3H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 164.2 (d, J CF = 252.4 Hz), 144.4, 143.2,138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.9, 131.6, 128.2 (d, J CF = 1.5 Hz), 125.6, 124.5(d, J CF = 2.0 Hz), 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 62.0, 53.6, 48.1, 40.9, 28.4,23.1, 14.2. [α]D: –40.35° (1.13, MeOH)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(苯基硫代)苯甲酰胺（DS-1-055）
按照通用程序A-2，使用苯硫酚。淡黄色固体（74%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64(s, 1H), 7.74 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.61–7.47 (m, 4H), 7.07–6.96 (m, 1H), 6.90(d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.68 (dd, J = 13.7, 7.6 Hz, 1H), 3.34–3.23 (m, 1H), 3.17(t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.81 (dq, J = 15.0, 7.4 Hz, 1H), 2.71–2.62 (m, 1H), 2.22(m, 2H), 2.03 (bs, 1H), 1.89 (dt, J = 16.9, 8.4 Hz, 1H), 1.79–1.53 (m, 3H),1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 144.5, 143.4,136.1, 131.7, 131.5, 130.6, 130.5, 130.4, 128.5, 124.4, 62.3, 53.6, 48.2,40.8, 28.2, 23.1, 14.2. IR (薄膜): 2969, 2807, 1639, 1608, 1546, 1521, 1460,1338, 1294, 1241 cm–1. MS (ES-API) m/z: 386.2 (100%, [M+H]+, C20H24N3O3S要求386.2). mp: 76℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氯（DS-1-059）
在装有回流冷凝器的25毫升烘箱干燥的烧瓶中装入DS-1-021（1.47克，5.0毫摩尔，1当量）和亚硫酰氯（10毫升）并加热至回流整夜。随后在减压下将所得均匀混合物浓缩至干燥。获得的黄色固体随后溶解在干燥的甲苯（5毫升）中并蒸发该溶剂。该过程重复两次，获得亮黄色微晶粉末形式的产物（1.50克，4.8毫摩尔，96%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.96(t, J = 1.6 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.63–7.56 (m, 2H), 7.25 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 6.94 (dd, J = 8.8, 1.3 Hz, 1H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ166.2, 164.5 (d, J CF = 253.3 Hz), 148.8 (d, J CF = 1.8 Hz), 144.4, 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 134.2, 130.1, 129.0, 128.4, 124.7 (d, J CF = 3.6 Hz), 118.2 (d, J CF = 22.1 Hz). IR (薄膜): 1739, 1597, 1525, 1490, 1394, 1298, 1196, 1159, 970,836, 731 cm–1. mp: 140℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-061）
按照通用程序B-2，使用2-(2-氨乙基)-1-甲基吡咯烷。淡黄色固体（84%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.51 (s, 1H), 8.54 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 8.6, 1.2Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.2, 5.4 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 3.74 (dq, J = 15.1, 5.1 Hz, 1H), 3.49–3.38 (m, 1H), 3.25–3.17(m, 1H), 2.63–2.54 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.29 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 2.04–1.85(m, 2H), 1.82–1.67 (m, 4H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.18 (d, J CF = 252.2Hz), 163.9, 144.2, 143.0 (d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 132.3,131.9, 128.1, 125.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 123.8, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 65.5,57.0, 40.5, 37.3, 27.6, 27.4, 22.8. IR (薄膜): 3072, 2945, 2877, 2789, 1652,1645, 1608, 1591, 1549, 1538, 1520, 1490, 1463, 1338, 1312, 1227, 1158 cm–1.MS (ES-API) m/z: 404.1 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O3S要求404.1). mp: 152–153℃ (分解)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)苯甲酰胺（DS-1-063）
按照通用程序B-2，使用1-(2-氨乙基)吡咯烷。黄色固体（73%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.63 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.56 (m,2H), 7.30 (s, 1H), 7.19 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.56(q, J = 5.5 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.66–2.61 (m, 4H), 1.85–1.76(m, 4H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.8, 164.2 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.3,143.2 (d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.9, 131.7, 128.1, 125.6(d, J CF = 3.6 Hz), 124.6, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 54.6, 54.0, 38.5, 23.6. IR(薄膜): 2971, 2813, 1654, 1648, 1610, 1591, 1520, 1491, 1338, 1294, 1227,1158 cm–1. MS (ES-API) m/z: 390.1 (100%, [M+H]+, C19H21FN3O3S要求390.1). mp:173–175℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-((4-(三氟甲基)苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-065）
按照通用程序A-2，使用4-(三氟甲基)苯硫酚。淡黄色固体（54%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.72 (q, J = 8.4 Hz, 4H),7.24 (s, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.7, 7.3, 2.3 Hz,1H), 3.28 (dt, J = 14.0, 3.4 Hz, 1H), 3.15 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 2.87 (s, 1H),2.81 (dq, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 2.72–2.63 (m, 1H), 2.29–2.12 (m, 2H), 1.88(dt, J = 16.4, 8.1 Hz, 1H), 1.77–1.52 (m, 2H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13CNMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.7, 144.9, 141.1, 135.8, 135.4 (d, J CF = 1.6 Hz),132.3, 132.2 (q, J CF = 33.0 Hz), 131.6, 128.6, 127.0 (q, J CF = 3.7 Hz), 124.5,123.6 (q, J CF = 272.6 Hz), 62.4, 53.5, 48.1, 40.8, 27.9, 22.9, 13.9. IR (薄膜): 3091, 2972, 2877, 2803, 1634, 1607, 1557, 1520, 1465, 1398, 1326, 1293,1170, 1127, 1104, 1063, 846 cm–1. MS (ES-API) m/z: 454.1 (100%, [M+H]+,C21H23F3N3O3S要求454.1). mp: 153–154℃ (分解)。
4-((3,4-二氟苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-067）
按照通用程序A-2，使用3,4-二氟苯硫酚。黄色固体（90%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.63 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.40–7.26(m, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.67 (ddd, J = 13.7, 7.3,2.6 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.18 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.81 (dq, J= 14.5, 7.2 Hz, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.32–2.13 (m, 2H), 1.98–1.85 (m, 1H),1.79–1.53 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.8,152.1 (dd, J CF = 250.4, 8.1 Hz), 151.0 (dd, J CF = 253.2, 11.7 Hz), 144.5,142.1, 132.9 (dd, J CF = 6.6, 3.7 Hz), 132.3, 131.7, 128.2, 126.7 (t, J CF = 4.9Hz), 125.0 (d, J CF = 17.4 Hz), 124.5, 119.3 (d, J CF = 17.6 Hz), 62.0, 53.6,48.1, 41.0, 28.4, 23.0, 14.2. IR (薄膜): 3076, 2972, 2878, 2807, 1652, 1645,1607, 1520, 1505, 1464, 1407, 1338, 1276, 1243, 1204, 1116, 1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 422.1 (100%, [M+H]+, C20H22F2N3O3S要求422.1). mp: 122℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((3-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-069）
按照通用程序A-2，使用3-氟代苯硫酚。黄色固体（76%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.49 (td, J = 8.1,5.7 Hz, 1H), 7.39 (dt, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.32 (ddd, J = 8.4, 2.5, 1.6 Hz,1H), 7.23 (ddd, J = 8.4, 2.6, 1.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.89 (s,1H), 3.67 (ddd, J = 13.7, 7.3, 2.6 Hz, 1H), 3.30 (ddd, J = 13.7, 4.5, 2.5 Hz,1H), 3.19 (ddd, J = 9.1, 7.1, 2.3 Hz, 1H), 2.81 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H),2.72–2.65 (m, 1H), 2.30–2.15 (m, 2H), 1.92 (dq, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 1.80–1.53 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 163.3(d, J CF = 251.3 Hz), 144.7, 142.2, 132.5 (d, J CF = 7.3 Hz), 132.2, 131.8 (d,J CF = 8.2 Hz), 131.7 (d, J CF = 3.1 Hz), 131.6, 128.5, 124.5, 122.7 (d, J CF =21.8 Hz), 117.8 (d, J CF = 20.9 Hz), 62.0, 53.6, 48.1, 40.9, 28.4, 23.1, 14.2.IR (薄膜): 2971, 2810, 1645, 1609, 1521, 1472, 1338, 1296, 1219, 1106 cm–1. MS(ES-API) m/z: 404.1 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O3S要求404.1). mp: 103℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(吡啶-2-基硫代)苯甲酰胺（DS-1-071）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-1-095（164毫克，0.50毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、2-巯基吡啶（61毫克，0.55毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（47毫克，0.55毫摩尔，1.1当量）。将该管密封，反应混合物在90℃下搅拌2小时，随后在室温下搅拌整夜。该反应混合物用乙酸乙酯（8毫升）和水（2毫升）稀释，随后加入碳酸氢钠（10当量）。该有机相用水（2 × 4毫升）和盐水（4毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得橙色油状的产物（87毫克，0.22毫摩尔，45%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65–8.62 (m, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.90–7.82 (m,1H), 7.80–7.70 (m, 1H), 7.58 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.34–7.30 (m, 1H), 7.28–7.24 (m, 1H), 3.69 (ddd, J = 13.9, 7.1, 3.6 Hz, 1H), 3.37(dt, J = 13.9, 3.3 Hz, 1H), 3.26 (td, J = 7.8, 3.0 Hz, 1H), 2.90–2.78 (m,2H), 2.39–2.23 (m, 2H), 2.00–1.89 (m, 1H), 1.81–1.68 (m, 2H), 1.69–1.55 (m,1H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 154.6, 151.3,146.7, 138.4, 138.1, 133.0, 131.4, 130.9, 128.9, 124.4, 123.7, 62.8, 53.7,48.7, 41.0, 28.3, 23.1, 13.7. IR (薄膜): 3051, 2969, 2876, 2804, 1661, 1652,1645, 1608, 1574, 1557, 1538, 1520, 1470, 1455, 1421, 1338, 1311, 1246, 1150,1108, 1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 387.1 (100%, [M+H]+, C19H23N4O3S要求387.1)。
N-(4-氯-3-硝基苄基)-1-(1-乙基吡咯烷-2-基)甲胺（DS-1-073）
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入4-氯-3-硝基苯甲醛（371毫克，2.0毫摩尔，1当量）、2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷（0.29毫升，2.0毫摩尔，1当量）、干燥的二氯甲烷（4毫升）和乙酸（0.23毫升，4.0毫摩尔，2当量）。在室温下搅拌1小时后，在0℃下一次性引入三乙酰氧基硼氢化钠（636毫克，3.0毫摩尔，1.5当量）。将该反应混合物缓慢升温至室温并搅拌整夜，此时其发生堵塞。小心地加入饱和碳酸氢钠（5毫升），随后加入二氯甲烷（6毫升）。该有机相用饱和碳酸氢钠（5毫升）、水（5毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得浅棕色油状的产物（170毫克，0.58毫摩尔，29%），其不经进一步纯化用于下一步骤。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.87 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 13.3, 8.5 Hz, 2H), 3.84 (dd, J = 18.6, 14.6 Hz,2H), 3.18–3.09 (m, 1H), 2.78 (dq, J = 14.8, 7.4 Hz, 2H), 2.66–2.53 (m, 1H),2.54–2.43 (m, 1H), 2.20 (dq, J = 11.3, 5.8 Hz, 1H), 2.13 (q, J = 7.3 Hz, 1H),1.93–1.83 (m, 1H), 1.80–1.64 (m, 3H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 147.0, 140.9, 131.7, 130.7, 124.1, 123.9, 63.0, 53.0, 51.9,51.4, 48.1, 28.2, 22.1, 13.1. IR (薄膜): 2969, 2874, 2799, 1569, 1538, 1479,1455, 1354, 1289, 1198, 1132, 1049 cm–1。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((2-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-075）
按照通用程序A-2，使用2-氟苯硫酚。黄色固体（88%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.65 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.64 (td, J = 7.3,1.8 Hz, 1H), 7.57 (dddd, J = 8.2, 7.1, 5.1, 1.8 Hz, 1H), 7.30 (td, J = 7.6,1.3 Hz, 1H), 7.26 (td, J = 8.4, 1.1 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 2H),3.67 (ddd, J = 13.7, 7.3, 2.6 Hz, 1H), 3.30 (ddd, J = 13.8, 4.5, 2.6 Hz, 1H),3.19 (ddd, J = 9.5, 7.1, 2.5 Hz, 1H), 2.81 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.68(s, 1H), 2.30–2.15 (m, 2H), 1.91 (dq, J = 12.3, 8.3 Hz, 1H), 1.80–1.63 (m,2H), 1.63–1.54 (m, 1H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ165.0, 163.2 (d, J CF = 251.0 Hz), 144.7, 141.3, 137.9, 133.4 (d, J CF = 8.1Hz), 132.2, 131.8, 128.0, 125.9 (d, J CF = 4.0 Hz), 124.6, 117.6 (d, J CF = 18.8Hz), 117.1 (d, J CF = 22.5 Hz), 62.0, 53.6, 48.1, 40.9, 28.3, 23.1, 14.2. IR(薄膜): 3076, 2970, 2876, 2805, 1652, 1645, 1608, 1549, 1520, 1474, 1338,1295, 1262, 1048 cm–1. MS (ES-API) m/z: 404.1 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O3S要求404.1). mp: 136℃。
4-((4-乙酰氨基苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-077）
按照通用程序A-2，使用4-乙酰氨基苯硫酚（1.73毫摩尔，1.1当量）。黄橙色固体（93%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.5, 2.0Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.55–7.51 (m, 2H), 7.45–7.39 (m, 1H), 6.93(s, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.67 (ddd, J = 13.7, 7.3, 2.6 Hz, 1H),3.30 (ddd, J = 13.7, 4.5, 2.6 Hz, 1H), 3.20 (ddd, J = 9.2, 6.8, 2.4 Hz, 1H),2.81 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.72–2.65 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.30–2.16(m, 1H), 1.91 (dq, J = 12.4, 8.4 Hz, 1H), 1.79–1.53 (m, 4H), 1.11 (t, J = 7.2Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 168.9, 165.3, 144.5, 144.2, 140.4, 137.1,131.3, 130.9, 128.4, 125.2, 124.4, 121.2, 64.6, 53.9, 49.8, 40.7, 28.1, 24.9,23.4, 12.7. IR (薄膜): 3101, 2969, 2808, 1646, 1607, 1591, 1520, 1464, 1397,1371, 1338, 1312, 1292, 1257, 1179 cm–1. MS (ES-API) m/z: 443.2 (100%, [M+H]+,C22H27N4O4S要求443.2). mp: 138–140℃ (分解)。
1-(1-乙基吡咯烷-2-基)-N-(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苄基)甲胺（DS-1-079）
在15毫升压力管中装入芳基氯DS-1-073（170毫克，0.58毫摩尔，1当量）、水（6毫升）、4-氟苯硫酚（0.07毫升，0.64毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（54毫克，0.64毫摩尔，1.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时，并随后在室温下搅拌整夜。该反应混合物用饱和碳酸氢钠（4毫升）稀释，水相用己烷（3×5毫升）和二氯甲烷（3×5毫升）萃取。合并的有机相用水（2 × 15毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得橙红色油状的产物（206毫克，0.53毫摩尔，91%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.56 (ddd,J = 8.7, 5.3, 0.9 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz 1H), 7.17 (t, J = 8.4Hz, 2H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.17–3.10 (m, 1H), 2.83–2.72(m, 1H), 2.63 (dd, J = 11.2, 3.7 Hz, 1H), 2.59–2.49 (m, 1H), 2.50–2.42 (m,1H), 2.23–2.07 (m, 2H), 1.93–1.83 (m, 1H), 1.78–1.62 (m, 3H), 1.57 (s, 1H),1.07 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 163.8 (d, J CF = 251.3 Hz),144.9, 139.1, 138.1 (d, J CF = 8.5 Hz), 137.2 (d, J CF = 1.5 Hz), 133.4, 128.1,126.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 125.0, 117.4 (d, J CF = 21.9 Hz), 64.0, 53.9, 52.8,52.4, 49.0, 29.1, 23.0, 14.0. IR (薄膜): 2967, 2798, 1590, 1556, 1519, 1490,1336, 1291, 1226, 1156, 1108, 1048, 834 cm–1. MS (ES-API) m/z: 390.2 (100%, [M+H]+, C20H25FN3O2S要求390.2)。
(S)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(吡咯烷-2-基甲基)苯甲酰胺（DS-1-085）
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入(S)-(+)-2-(氨基甲基)吡咯烷（0.16毫升，1.50毫摩尔，1.5当量）和干燥的二氯甲烷（2.5毫升）并浸没在冰浴中。随后逐滴加入酰基氯DS-1-059（312毫克，1.00毫摩尔，1当量）在干燥的二氯甲烷（2.5毫升）中的溶液。在14小时后，引入饱和碳酸氢钠（5毫升），有机相用饱和碳酸氢钠（2 × 5毫升）和水（5毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色油状的产物（27毫克，0.07毫摩尔，7%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.40 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.61–7.50 (m, 3H), 7.19 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.82(d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.31–4.20 (m, 1H), 3.55–3.40 (m, 2H), 3.07–3.01 (m, 1H),2.86 (dd, J = 12.5, 6.6 Hz, 1H), 2.12 (dt, J = 10.7, 6.4 Hz, 1H), 1.98–1.73(m, 3H), 1.40 (s, 2H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 167.5, 164.2 (d, J CF = 252.3Hz), 144.1, 141.9, 138.3 (d, J CF = 8.8 Hz), 134.1, 132.5, 128.1, 125.7, 125.0,117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 60.4, 50.8, 44.7, 28.5, 25.2. IR (薄膜): 3069, 2969,2875, 1622, 1608, 1590, 1548, 1520, 1491, 1418, 1337, 1292, 1225, 1157, 1049cm–1. MS (ES-API) m/z: 376.1 (100%, [M+H]+, C18H19FN3O3S要求376.1). [α]D: –89.02(c 1.35, CHCl3)。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-(2-吗啉代乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-089）
按照通用程序B-2，使用4-(2-氨乙基)吗啉。黄色固体（66%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.61–7.55(m, 2H), 7.25–7.18 (m, 2H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 3.75–3.70(m, 4H), 3.55 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.53–2.47 (m,4H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.7, 164.2 (d, J CF = 252.4 Hz), 144.3, 143.5(d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 131.8, 131.6, 128.3, 125.5 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.3, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 67.1, 56.8, 53.4, 36.3. IR (薄膜):3095, 2955, 2856, 2814, 1643, 1608, 1590, 1548, 1520, 1491, 1338, 1296, 1227,1158, 1117, 837 cm–1. MS (ES-API) m/z: 406.1 (100%, [M+H]+, C19H21FN3O4S要求406.1). mp: 159–161℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-氟-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-095）
在装有回流冷凝器并配有干燥管的50毫升烘箱干燥的烧瓶中装入4-氟-3-硝基苯甲酸（5.56克，30.0毫摩尔，1当量）和亚硫酰氯（7.5毫升）并加热至回流。在4小时后，在减压下将所得均匀混合物浓缩至干燥。获得的无色液体随后溶解在干燥的甲苯（5毫升）中并蒸发该溶剂。该过程重复两遍，获得无色液体形式的4-氟-3-硝基苯甲酰氯（4.06克，19.9毫摩尔，定量）。
引入干燥的二氯甲烷（30毫升），并将该烧瓶浸没在水浴中。向该溶液中逐滴加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷（3.7毫升，27.0毫摩尔，0.9当量）。在14小时后，所得米色悬浮液用二氯甲烷（20毫升）和饱和碳酸氢钠（50毫升）稀释，水层用浓氢氧化钾溶液碱化至pH~9。该有机相用饱和碳酸氢钠（2 × 50毫升）和水（50毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得粗产物，该粗产物溶解在二氯甲烷（20毫升）中并用HCl 2 M（3 × 10毫升）萃取。该水相用二氯甲烷（20毫升）洗涤，用浓氢氧化钾溶液碱化至pH~13并用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。有机层用碳酸氢钠（20毫升）、水（20毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥, 过滤并浓缩以获得浅棕色油状的纯产物（6.00克，20.3毫摩尔，75%），其在几天后颜色变深。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.45 (dd, J = 7.0, 2.3 Hz, 1H), 8.05 (ddd, J = 8.6, 4.2, 2.3 Hz,1H), 7.39–7.28 (m, 1H), 7.20 (bs, 1H), 3.63 (ddd, J = 13.6, 7.1, 2.7 Hz, 1H),3.31–3.22 (m, 1H), 3.19–3.11 (m, 1H), 2.79 (dq, J = 14.7, 7.3 Hz, 1H), 2.71–2.61 (m, 1H), 2.27–2.13 (m, 2H), 1.88 (ddd, J = 16.4, 12.0, 8.3 Hz, 1H),1.76–1.49 (m, 3H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.3,157.0 (d, J CF = 269.5 Hz), 137.1 (d, J CF = 7.7 Hz), 134.2 (d, J CF = 9.4 Hz),131.8, 125.1 (d, J CF = 2.1 Hz), 118.8 (d, J CF = 21.3 Hz), 62.1, 53.5, 48.1,41.3, 28.3, 22.9, 14.0. IR (薄膜): 3090, 2970, 2877, 2802, 1646, 1620, 1538,1494, 1351, 1316, 1268 cm–1. MS (ES-API) m/z: 296.2 (100%, [M+H]+, C14H19FN3O3要求296.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-(4-氟苯氧基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-103）
按照通用程序A-2，使用4-氟苯酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。米色固体（48%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36 (d, J = 2.2 Hz,1H), 7.93 (dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.16 (bs, 1H), 7.14–7.03 (m, 4H), 6.95(d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.68 (ddd, J = 13.7, 7.2, 3.0 Hz, 1H), 3.33 (dt, J =13.7, 3.5 Hz, 1H), 3.26–3.19 (m, 1H), 2.89–2.79 (m, 1H), 2.78–2.72 (m, 1H),2.37–2.19 (m, 2H), 2.01–1.86 (m, 1H), 1.82–1.55 (m, 3H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 160.1 (d, J CF = 244.8 Hz), 153.5, 150.5(d, J CF = 2.7 Hz), 140.3, 132.7, 129.4, 124.9, 121.8 (d, J CF = 8.5 Hz), 118.8,117.1 (d, J CF = 23.6 Hz), 62.6, 53.7, 48.4, 40.9, 28.3, 23.1, 13.9. IR (薄膜):3078, 2971, 2877, 2804, 1652, 1645, 1623, 1538, 1532, 1504, 1487, 1354, 1266,1226, 1188, 1148, 1090 cm–1. MS (ES-API) m/z: 388.2 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O4要求388.2). mp: 91–94℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)氨基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-105）
按照通用程序A-2，使用4-氟苯胺。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。橙色固体（71%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.60 (s, 1H), 8.68 (s,1H), 7.87 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.32–7.22 (m, 2H), 7.19–7.12 (m, 2H), 7.06 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.69 (ddd, J = 13.6, 7.1, 3.4 Hz, 1H), 3.42–3.25 (m, 2H),2.93–2.77 (m, 2H), 2.43–2.24 (m, 2H), 1.95 (dt, J = 17.0, 8.5 Hz, 1H), 1.84–1.61 (m, 3H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.5, 161.2(d, J CF = 247.2 Hz), 145.5, 134.4, 133.9 (d, J CF = 3.2 Hz), 132.1, 127.5 (d,J CF = 8.4 Hz), 125.9, 123.8, 117.0 (d, J CF = 22.8 Hz), 115.8, 62.7, 53.7,48.5, 40.9, 28.3, 23.2, 14.0. IR (薄膜): 3077, 2970, 2877, 2802, 1651, 1622,1558, 1506, 1411, 1353, 1268, 1212, 1153, 1072 cm–1. MS (ES-API) m/z: 387.2(100%, [M+H]+, C20H24FN4O3要求387.2). mp: 120℃。
3-((4-氟苯基)硫代)-4-硝基苯甲酸（DS-1-113）
按照通用程序A-1，使用3-氟-4-硝基苯甲酸（10.0毫摩尔）。黄色针状物（100%）。1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.64 (s, 1H), 8.34 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J =8.5 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.45 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 7.39(s, 1H). IR (薄膜): 1698, 1574, 1510, 1423, 1334, 1288, 1088, 822 cm–1. MS(ES-API) m/z: 291.9 (100%, [M–H]–, C13H7FNO4S要求292.0), 585.0 (12%、[2M–H]–),607.0 (17%、[2M+Na–2H]–)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-117）
在20毫升烘箱干燥的舒仑克管中装入叔丁醇钾（269毫克，2.40毫摩尔，2.4当量）并在高真空下加热至110℃。在30分钟后，在室温下引入引入4-溴苯甲酸（201毫克，1.00毫摩尔，1当量），并将固体共混物在高真空下加热至110℃。在30分钟后，在室温下在氩气下加入干燥的甲苯（6毫升）。在4毫升烘箱干燥的小瓶中装入乙酸钯（6.7毫克，0.03毫摩尔，3摩尔%）和Josiphos CyPF-tBu（16.6毫克，0.03毫摩尔，3摩尔%）。随后将该小瓶排空并用氩气回填三次，随后引入干燥的甲苯（3毫升）。在1分钟后，将所得橙色溶液一次性加入到舒仑克管中的白色悬浮液中，随后立即一次性加入4-氟苯硫酚（0.13毫升，1.20毫摩尔，1.2当量）。该舒仑克管用螺帽密封并加热至110℃。在16小时后，将所得棕色悬浮液冷却至室温，引入硅胶（500毫克），溶剂在减压下蒸发。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% EtOAc在己烷中，EtOAc含有4% AcOH）获得白色固体形式的与4-溴苯甲酸的3:1混合物中的产物（203毫克）。
在装有回流冷凝器的10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入获自在先步骤的羧酸（203毫克）与亚硫酰氯（3毫升）的混合物并加热至回流整夜。所得均匀混合物随后在减压下浓缩至干燥。获得的无色液体随后溶解在干燥的甲苯（2.5毫升）中并蒸发该溶剂。该过程重复两遍，获得无色油状的酰基氯的混合物。
引入干燥的二氯甲烷（4毫升），并逐滴加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷（0.10毫升，0.72毫摩尔，0.72当量）。在8小时后，该溶液用二氯甲烷（6毫升）和饱和碳酸氢钠（10毫升）稀释。该有机相用饱和碳酸氢钠（2 × 10毫升）和水（10毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩以获得棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1%NH3）获得浅棕色油状的所需酰胺（20毫克，0.056毫摩尔，8%，经3个步骤）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 7.70 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.49–7.43 (m, 2H), 7.22–7.13 (m, 2H),7.11–7.04 (m, 2H), 3.69 (ddd, J = 13.8, 7.3, 3.6 Hz, 1H), 3.35 (dt, J = 13.8,3.5 Hz, 1H), 3.27 (dt, J = 9.5, 4.7 Hz, 1H), 2.93–2.78 (m, 2H), 2.41–2.22 (m,2H), 1.93 (dq, J = 12.2, 8.0 Hz, 1H), 1.81–1.58 (m, 3H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 167.1, 163.1 (d, J CF = 249.4 Hz), 142.3, 136.0(d, J CF = 8.4 Hz), 132.1, 131.9, 128.8, 127.8 (d, J CF = 4.3 Hz), 116.9 (d, J CF = 22.1 Hz), 63.1, 53.7, 48.7, 40.7, 28.2, 23.2, 13.7. IR (薄膜): 3063, 2969,2875, 2801, 1652, 1644, 1634, 1595, 1538, 1488, 1397, 1296, 1225, 1156, 1085,1014, 834, 758 cm–1. MS (ES-API) m/z: 359.2 (100%, [M+H]+, C20H24FN2OS要求359.2)。
1-乙基-2-((4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)甲基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓碘化物（DS-1-119）
在5毫升烧瓶中装入DS-1-033（171毫克，0.42毫摩尔，1当量）、乙醇（1毫升）和碘甲烷（80微升，0.85毫摩尔，2当量）。该黄色溶液搅拌3小时，将所得悬浮液过滤，用乙醇（1毫升）和二***（2毫升）洗涤以获得黄色固体。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中）获得黄色固体形式的作为两种非对映异构体的混合物的所需铵盐（39毫克，0.07毫摩尔，17%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.97–8.86 (m, 1H), 8.85 (d, J = 1.9 Hz, 1H),8.17 (dt, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.57–7.49 (m, 2H), 7.22–7.15 (m, 2H), 6.82(d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.54–4.45* (m), 4.43–4.33 (m, 1H), 4.12–3.75 (m, 3H),3.73–3.49 (m, 3H), 3.39–3.32* (m), 3.28* (s), 3.27 (s, 3H), 3.23–3.16* (m),2.57–2.48 (m, 1H), 2.25–2.08 (m, 3H), 1.45* (t, J = 7.2 Hz), 1.41 (t, J = 7.3Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.4, 164.2 (d, J CF = 266.8 Hz), 144.2,143.9 (d, J CF = 1.5 Hz), 138.2 (d, J CF = 8.6 Hz), 132.3, 129.7, 128.1, 125.9,125.1 (d, J CF = 3.5 Hz), 117.9 (d, J CF = 22.0 Hz), 75.8*, 73.6, 64.5, 62.4*,59.8, 51.3*, 49.0*, 46.5*, 43.5, 37.9, 37.6*, 26.2, 19.2*, 18.9, 9.8, 8.7*. *次要的非对映异构体. IR (薄膜): 3260, 2940, 1652, 1607, 1590, 1520, 1489,1465, 1397, 1338, 1308, 1225, 1157, 749 cm–1. MS (ES-API) m/z: 418.2 (100%, [M+H]+,C21H25FN3O3S要求418.2). mp: 95–97℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-异丙基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-123）
按照通用程序A-2，使用4-异丙基苯硫酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色固体（28%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J = 1.8Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.40 (bs,1H), 7.34 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.67 (ddd, J = 13.8,7.1, 3.7 Hz, 1H), 3.36 (dt, J = 13.9, 3.4 Hz, 1H), 3.31–3.21 (m, 1H), 2.97(hept, J = 7.0 Hz, 1H), 2.93–2.79 (m, 2H), 2.42–2.23 (m, 2H), 1.94 (dq, J =12.5, 8.4 Hz, 1H), 1.81–1.58 (m, 3H), 1.29 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.13 (t, J =7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 151.7, 144.4, 144.0, 136.0,131.29, 131.26, 128.6, 128.4, 126.8, 124.7, 63.0, 53.6, 48.7, 40.9, 34.1,28.3, 23.9, 23.1, 13.6. IR (薄膜): 2963, 1654, 1605, 1559, 1520, 1490, 1458,1386, 1339, 1241, 1100, 1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 428.2 (100%, [M+H]+,C23H29N3O3S要求428.2). mp: 93–94℃。
4-((2,4-二氟苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-125）
按照通用程序A-2，使用2,4-二氟苯硫酚。黄色固体（77%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.69 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.63 (td, J = 8.4, 6.3 Hz, 1H),7.09–6.99 (m, 2H), 6.87 (dd, J = 8.5, 1.0 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 14.0, 7.4,3.0 Hz, 1H), 3.41–3.32 (m, 1H), 3.31–3.21 (m, 1H), 2.91–2.73 (m, 2H), 2.38–2.24 (m, 2H), 2.01–1.90 (m, 1H), 1.82–1.59 (m, 3H), 1.15 (t, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.2 (dd, J CF = 255.1, 11.3 Hz), 164.9, 163.8 (dd,J CF = 253.4, 12.5 Hz), 144.7, 141.0, 139.0 (dd, J CF = 9.9, 1.7 Hz), 132.2,132.0, 127.6, 124.8, 113.5 (dd, J CF = 21.6, 3.9 Hz), 113.3 (dd, J CF = 19.1,4.1 Hz), 105.8 (dd, J CF = 26.1, 26.1 Hz), 62.5, 53.6, 48.4, 40.8, 28.1, 23.1,14.0. IR (薄膜): 2969, 1648, 1608, 1546, 1522, 1485, 1466, 1420, 1339, 1294,1267, 1241, 1144, 967 cm–1. MS (ES-API) m/z: 422.1 (100%, [M+H]+, C20H21F2N3O3S要求422.1). mp: 63–65℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(吡啶-4-基硫代)苯甲酰胺（DS-1-129）
在15毫升压力管中装入DS-1-095（295毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、4-巯基吡啶（145毫克，1.30毫摩尔，1.3当量）和碳酸氢钠（109毫克，1.30毫摩尔，1.3当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时，并在室温下搅拌整夜。该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）稀释，有机层用饱和碳酸氢钠（2 × 20毫升）洗涤，并随后用2M HCl（3 × 10毫升）萃取。酸性的水相用浓氢氧化钾溶液碱化至pH~12，并用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。有机层在硫酸镁上干燥，过滤并引入硅胶（1克），随后在减压下蒸发溶剂。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得棕色固体形式的产物（191毫克，0.49毫摩尔，49%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69–8.65 (m, 2H), 8.60 (d, J = 1.9 Hz, 1H),7.83 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.44–7.39 (m, 2H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.13 (bs, 1H), 3.68 (ddd, J = 13.8, 7.3, 2.8 Hz, 1H), 3.35–3.28 (m, 1H),3.24–3.17 (m, 1H), 2.82 (dq, J = 12.1, 7.4 Hz, 1H), 2.76–2.70 (m, 1H), 2.32–2.19 (m, 2H), 1.92 (dq, J = 12.4, 8.3 Hz, 1H), 1.80–1.54 (m, 3H), 1.11 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.6, 151.2, 146.3, 142.4, 138.4,133.4, 131.7, 130.0, 128.2, 124.5, 62.3, 53.6, 48.3, 40.9, 28.3, 23.1, 14.0.IR (薄膜): 2968, 2801, 1660, 1652, 1608, 1573, 1538, 1520, 1470, 1404, 1339,1294, 1213, 1048, 749 cm–1. MS (ES-API) m/z: 387.1 (36%, [M+H]+, C19H23N4O3S要求387.1). mp: 155–157℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苄基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-131）
按照通用程序A-2，使用4-氟苄基硫醇。黄色固体（70%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.59 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.42–7.35 (m, 2H), 7.07–7.00 (m, 2H), 7.01 (bs, 1H), 4.20 (s, 2H),3.68 (ddd, J = 13.7, 7.2, 2.7 Hz, 1H), 3.32 (ddd, J = 13.7, 4.4, 2.9 Hz, 1H),3.25–3.17 (m, 1H), 2.83 (dq, J = 12.1, 7.4 Hz, 1H), 2.74–2.67 (m, 1H), 2.33–2.17 (m, 2H), 1.93 (dq, J = 12.4, 8.3 Hz, 1H), 1.81–1.56 (m, 3H), 1.13 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 162.5 (d, J CF = 247.2 Hz),145.2, 141.5, 132.0, 131.5, 130.8 (d, J CF = 8.2 Hz), 130.2 (d, J CF = 3.3 Hz),126.9, 124.5, 116.0 (d, J CF = 21.7 Hz), 62.2, 53.7, 48.2, 41.0, 36.9, 28.4,23.1, 14.2. IR (薄膜): 3075, 2969, 2876, 2801, 1652, 1607, 1548, 1510, 1465,1338, 1292, 1230, 1158, 1107, 1052 cm–1. MS (ES-API) m/z: 418.2 (100%, [M+H]+,C21H25FN3O3S要求418.2). mp: 142–143℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-甲氧基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-133）
按照通用程序A-2，使用4-甲氧基苯硫酚。黄色固体（53%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.65 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.52–7.46 (m,2H), 7.08 (bs, 1H), 7.05–6.99 (m, 2H), 6.89 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.88 (s,3H), 3.69 (ddd, J = 13.8, 7.3, 3.0 Hz, 1H), 3.32 (dt, J = 13.8, 3.5 Hz, 1H),3.24–3.18 (m, 1H), 2.83 (dq, J = 12.1, 7.4 Hz, 1H), 2.78–2.68 (m, 1H), 2.32–2.19 (m, 2H), 1.92 (dq, J = 12.3, 8.3 Hz, 1H), 1.81–1.55 (m, 3H), 1.12 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 161.6, 144.6, 144.3, 137.8,131.5, 131.4, 128.3, 124.5, 120.6, 116.0, 62.5, 55.6, 53.7, 48.4, 40.8, 28.2,23.1, 14.0. IR (薄膜): 2969, 2837, 1648, 1607, 1592, 1546, 1520, 1494, 1461,1338, 1290, 1251, 1173, 1106, 1048, 1028 cm–1. MS (ES-API) m/z: 416.2 (100%,[M+H]+, C21H26N3O4S要求416.2). mp: 69–71℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)亚磺酰基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-135)
在15毫升压力管中装入DS-1-033（101毫克，0.25毫摩尔，1当量）、乙酸（1.25毫升）和35%过氧化氢水溶液（31毫克，0.33毫摩尔，1.3当量）。将该管密封，该均匀溶液在60℃下搅拌。在16小时后，将该溶液冷却至室温，倾入冰-水（20毫升）中并用30%氢氧化铵水溶液碱化至pH~11。将所得沉淀物过滤并用水（10毫升）洗涤以获得浅棕色固体形式的作为非对映异构体的1:1混合物的产物（57毫克，0.14毫摩尔，54%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65(dd, J = 2.9, 1.7 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.38 (ddd, J = 8.2, 2.7,1.8 Hz, 1H), 7.73–7.67 (m, 2H), 7.34 (bs, 1H), 7.13–7.03 (m, 2H), 3.70 (ddd,J = 13.6, 7.1, 2.8 Hz, 1H), 3.34 (dt, J = 13.8, 3.5 Hz, 1H), 3.26–3.17 (m,1H), 2.88–2.79 (m, 1H), 2.79–2.72 (m, 1H), 2.35–2.20 (m, 2H), 2.00–1.89 (m,1H), 1.81–1.56 (m, 3H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 1.12* (t, J = 7.2 Hz,1.5H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.5 (d, J CF = 253.7 Hz), 164.3, 146.6,144.7, 140.4 (d, J CF = 3.3 Hz), 138.6, 133.5 (d, J CF = 8.5 Hz), 129.4 (d, J CF =9.0 Hz), 126.7, 124.4 (d, J CF = 8.0 Hz), 116.7 (d, J CF = 22.6 Hz), 62.3, 53.6,48.3, 41.1, 28.4, 23.08, 23.06*, 13.98, 13.96*. * 第二非对映异构体. IR (薄膜): 3073, 2970, 2876, 2799, 1667, 1652, 1608, 1588, 1532, 1493, 1346, 1294,1235, 1157, 1078, 1059 cm–1. MS (ES-API) m/z: 420.1 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O4S要求420.1), 442.2 (12%, [M+Na]+). mp: 88–90℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-((4-硝基苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-137）
按照通用程序A-2，使用4-硝基苯硫酚。通过色谱法在硅胶上纯化（0–15% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色固体（45%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J = 1.6Hz, 1H), 8.35–8.28 (m, 2H), 7.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.77–7.71 (m, 2H), 7.21(bs, 1H), 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J = 13.8, 7.3, 3.0 Hz, 1H),3.41–3.32 (m, 1H), 3.30–3.23 (m, 1H), 2.92–2.76 (m, 2H), 2.40–2.23 (m, 2H),1.96 (dq, J = 12.6, 8.2 Hz, 1H), 1.84–1.58 (m, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.6, 148.7, 145.8, 139.9, 139.6, 135.6, 133.2,131.8, 129.4, 125.1, 124.6, 62.3, 53.6, 48.3, 40.9, 28.3, 23.1, 14.1. IR (薄膜): 3098, 2970, 2876, 2804, 1659, 1652, 1607, 1578, 1548, 1520, 1464, 1344,1294, 1244, 1178, 1109, 1047, 1014 cm–1. MS (ES-API) m/z: 431.2 (100%, [M+H]+,C20H23N4O5S要求431.1). mp: 128–129℃。
4-(环己基硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-139）
按照通用程序A-2，使用环己烷硫醇。黄色固体（74%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.50 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.5Hz, 1H), 6.99 (bs, 1H), 3.69 (ddd, J = 13.6, 7.2, 2.7 Hz, 1H), 3.37–3.29 (m,2H), 3.25–3.17 (m, 1H), 2.83 (dq, J = 12.2, 7.4 Hz, 1H), 2.74–2.67 (m, 1H),2.32–2.17 (m, 2H), 2.12–2.03 (m, 2H), 1.92 (dq, J = 12.3, 8.3 Hz, 1H), 1.87–1.80 (m, 2H), 1.78–1.56 (m, 4H), 1.53–1.23 (m, 5H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 146.4, 140.7, 131.4, 131.1, 127.7, 124.5,62.2, 53.7, 48.2, 44.2, 41.0, 32.5, 28.4, 26.1, 25.7, 23.1, 14.2. IR (薄膜):2969, 2933, 2855, 2800, 1639, 1609, 1539, 1520, 1450, 1328, 1288, 1179, 1101,1052 cm–1. MS (ES-API) m/z: 392.2 (100%, [M+H]+, C20H30N3O3S要求392.2). mp: 145–146℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-氟-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-153）
按照通用程序B-3，使用4-氟-3-硝基苯甲酸和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。白色固体（89%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.71 (bs, 1H), 9.50 (t, J = 5.6 Hz, 1H),8.69 (dd, J = 7.3, 2.2 Hz, 1H), 8.43 (ddd, J = 8.7, 4.1, 2.3 Hz, 1H), 7.74(dd, J = 11.1, 8.8 Hz, 1H), 3.89–3.78 (m, 1H), 3.71–3.60 (m, 2H), 3.55 (dq, J= 12.1, 5.6 Hz, 1H), 3.50–3.36 (m, 1H), 3.13–3.02 (m, 2H), 2.17–2.06 (m, 1H),2.03–1.74 (m, 3H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ163.8, 156.4 (d, J CF = 266.4 Hz), 136.7 (d, J CF = 7.8 Hz), 135.1 (d, J CF = 10.1Hz), 130.5 (d, J CF = 3.6 Hz), 125.6 (d, J CF = 2.0 Hz), 118.9 (d, J CF = 21.4Hz), 65.9, 52.6, 48.5, 38.9, 27.1, 21.7, 10.2. IR (薄膜): 3249, 3058, 2946,2655, 2508, 1655, 1618, 1534, 1492, 1352, 1316, 1269 cm–1. mp: 161℃。
4-溴-3-硝基苯甲酸（DS-1-159）
在200毫升烧瓶中装入4-溴苯甲酸（9.84克，49.0毫摩尔）、硝酸（70%，90毫升）和发烟硝酸（90%，70毫升），装配回流冷凝器，所得悬浮液在回流下搅拌整夜。将获得的均匀的黄色溶液冷却至0℃，过滤，固体用冷水（100毫升）洗涤以获得白色粉末。从甲醇/水中重结晶获得微晶白色粉末形式的产物（10.82克，44.0毫摩尔，90%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ13.74 (bs, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.09–7.94 (m, 2H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ165.0, 149.6, 135.4, 133.8, 131.7, 126.0, 118.2。
4-((4-氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-163）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和4-氯苯硫酚。通过色谱法在硅胶上纯化（0–20%MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色固体（64%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.55–7.45 (m, 4H), 7.02 (s,1H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.68 (ddd, J = 13.7, 7.3, 2.7 Hz, 1H), 3.31(dt, J = 13.7, 3.4 Hz, 1H), 3.23–3.17 (m, 1H), 2.81 (dq, J = 12.2, 7.4 Hz,1H), 2.70 (bs, 1H), 2.33–2.15 (m, 2H), 1.92 (dq, J = 12.3, 8.3 Hz, 1H), 1.80–1.54 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9,144.6, 142.7, 137.3, 137.2, 132.1, 131.6, 130.8, 128.9, 128.4, 124.5, 62.2,53.6, 48.2, 40.9, 28.3, 23.1, 14.1. IR (薄膜): 2971, 2877, 2810, 1645, 1609,1548, 1520, 1475, 1389, 1338, 1294, 1242, 1093, 1048, 1013 cm–1. MS (ES-API)m/z: 420.1 (100%, [M+H]+, C20H23ClN3O3S要求420.1). mp: 126℃。
4-溴-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-175）
按照通用程序B-3，使用DS-1-159（8.13毫摩尔）和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。白色固体（85%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.76 (bs, 1H), 9.52 (t, J = 5.6 Hz,1H), 8.55 (d, J = 1.4 Hz 1H), 8.17 (dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J =8.3 Hz, 1H), 3.87–3.78 (m, 1H), 3.71–3.60 (m, 2H), 3.54 (dt, J = 11.8, 6.0Hz, 1H), 3.49–3.38 (m, 1H), 3.16–3.01 (m, 2H), 2.20–2.06 (m, 1H), 2.03–1.75(m, 3H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.9, 149.5,135.1, 134.2, 132.2, 124.4, 116.6, 65.8, 52.5, 48.5, 38.9, 27.1, 21.6, 10.3.IR (薄膜): 2684, 1648, 1538, 1470, 1397, 1354, 1311, 1247, 1032 cm–1. MS (ES-API) m/z: 356.1 (100%, [M–Cl]+, C14H19BrN3O3要求356.1). mp: 165℃ (分解)。
4-((4-氨基苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-177）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153（1当量）、4-氨基苯硫酚（2当量）和碳酸氢钠（3当量）。在整夜反应后，该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）稀释，通过加入固体氢氧化钾将水层碱化至pH~12。该有机相用饱和碳酸氢钠（2 × 20毫升）洗涤并随后用2M HCl（3 × 10毫升）萃取。该酸性水相用浓氢氧化钾溶液碱化至pH~10，并用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。有机层在硫酸镁上干燥，过滤并在减压下蒸发以获得红橙色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–25% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。橙色固体（53%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.35–7.30 (m, 2H), 7.13(bs, 1H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.79–6.74 (m, 2H), 4.00 (s, 2H), 3.69(ddd, J = 14.0, 7.3, 3.4 Hz, 1H), 3.40–3.31 (m, 1H), 3.30–3.23 (m, 1H), 2.90–2.74 (m, 2H), 2.37–2.23 (m, 2H), 1.94 (dq, J = 11.8, 7.9 Hz, 1H), 1.80–1.59(m, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.2, 149.0,145.4, 144.0, 137.5, 131.2, 131.0, 128.1, 124.5, 116.3, 116.3, 62.4, 53.6,48.3, 41.0, 28.2, 23.0, 13.9. IR (薄膜): 2970, 2876, 2806, 1652, 1644, 1598,1548, 1520, 1498, 1463, 1338, 1293, 1240, 1178, 1106, 1049, 910, 829, 733 cm–1. MS (ES-API) m/z: 401.1 (55%, [M+H]+, C20H25N4O3S要求401.2). mp: 166–168℃(分解)。
4-((4-(((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)氨基甲酰基)-2-硝基苯基)硫代)苯甲酸盐酸盐（DS-1-179）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-1-153（332毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）和4-巯基苯甲酸（170毫克，1.10毫摩尔，1.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时。出现黄色沉淀物，该悬浮液在室温下搅拌整夜。固体通过加入2M氢氧化钠（50毫升）来溶解，水相用二氯甲烷（3 × 50毫升）洗涤，用浓HCl酸化至pH~2–3，用二氯甲烷（3 × 50毫升）洗涤并在减压下浓缩以获得黄色淤浆。引入甲苯（20毫升）并蒸发该溶剂。该过程重复两遍以获得黄色固体，该固体与2M HCl（60毫升）一起研碎，过滤，用水（20毫升）和二***（50毫升）洗涤并在高真空下干燥。用最小量的丙酮研碎获得黄色固体形式的产物（180毫克，0.39毫摩尔，39%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.15 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 9.39(s, 1H), 8.77 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.83–3.74(m, 1H), 3.67–3.58 (m, 2H), 3.56–3.49 (m, 1H), 3.45–3.27 (m, 1H), 3.10–3.01(m, 2H), 2.09 (dt, J = 13.2, 6.7 Hz, 1H), 2.02–1.72 (m, 3H), 1.27 (t, J = 7.2Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 166.6, 164.2, 145.0, 139.9, 135.5, 135.0,132.6, 132.3, 131.5, 131.0, 129.0, 124.8, 65.9, 52.6, 48.5, 39.9, 27.1, 21.6,10.3. IR (薄膜): 2977, 1714, 1694, 1652, 1645, 1634, 1607, 1538, 1520, 1506,1464, 1456, 1394, 1336, 1103, 1047, 1014 cm–1. MS (ES-API) m/z: 430.1 (100%,[M–Cl]+, C21H24N3O5S要求430.1). mp: 135–137℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4'-氟-2-硝基-[1,1'-联苯]-4-甲酰胺（DS-1-181）
按照通用程序C，使用4-氟苯基硼酸。淡黄色固体（53%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.27 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.03 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.50–7.46 (m, 1H),7.31–7.25 (m, 2H), 7.14–7.08 (m, 2H), 3.73 (ddd, J = 13.8, 7.2, 3.0 Hz, 1H),3.36 (dt, J = 13.8, 3.5 Hz, 1H), 3.29–3.20 (m, 1H), 2.91–2.81 (m, 1H), 2.81–2.75 (m, 1H), 2.30 (ddt, J = 22.6, 17.0, 8.2 Hz, 2H), 1.95 (dq, J = 12.4, 7.9Hz, 1H), 1.82–1.59 (m, 3H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ 165.1, 163.1 (d, J CF = 248.9 Hz), 149.2, 137.8, 135.1, 132.6 (d, J CF = 3.6Hz), 132.4, 130.6, 129.7 (d, J CF = 8.4 Hz), 123.1, 116.0 (d, J CF = 21.9 Hz),62.6, 53.6, 48.4, 401.0, 28.3, 23.1, 13.9. IR (薄膜): 3075, 2972, 2878, 2812,1659, 1652, 1645, 1557, 1538, 1532, 1520, 1487, 1456, 1356, 1314, 1296, 1229,1162, 1098, 1008, 911, 837, 734 cm–1. MS (ES-API) m/z: 372.2 (100%, [M+H]+,C20H23FN3O3要求372.2). mp: 101℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3'-氟-2-硝基-[1,1'-联苯]-4-甲酰胺（DS-1-183）
按照通用程序C，使用3-氟苯基硼酸。浅棕色蜡（90%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.30 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.40 (td, J = 8.0, 5.9 Hz, 1H), 7.12 (td, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.06(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.02 (dt, J = 9.4, 2.0 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J = 13.9,7.1, 3.5 Hz, 1H), 3.39 (dt, J = 13.8, 3.3 Hz, 1H), 3.31–3.24 (m, 1H), 2.94–2.80 (m, 2H), 2.41–2.28 (m, 2H), 1.96 (dq, J = 12.3, 7.8 Hz, 1H), 1.85–1.60(m, 3H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.2, 162.7 (d,J CF = 247.4 Hz), 149.0, 138.6 (d, J CF = 8.0 Hz), 137.6 (d, J CF = 2.3 Hz),135.2, 132.2, 130.6, 130.5 (d, J = 8.5 Hz), 123.6 (d, J = 3.1 Hz), 123.2,115.7 (d, J = 21.1 Hz), 115.0 (d, J CF = 22.8 Hz), 62.9, 53.6, 48.6, 41.1,28.2, 23.0, 13.6. IR (薄膜): 3073, 2973, 2879, 2814, 1660, 1652, 1645, 1614,1588, 1557, 1538, 1532, 1476, 1436, 1357, 1300, 1270, 1188, 1159 cm–1. MS (ES-API) m/z: 372.2 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O3要求372.2)。
4-((4-溴苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-185）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和4-溴苯硫酚。通过与戊烷/二*** 2:1（3 × 3毫升）一起研碎来纯化。黄色固体（87%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 (d, J = 1.8 Hz,1H), 7.80 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.66–7.62 (m, 2H), 7.47–7.43 (m, 2H),7.20 (bs, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.8, 7.4, 3.1 Hz,1H), 3.38–3.31 (m, 1H), 3.24 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 2.89–2.79 (m, 1H), 2.77(bs, 1H), 2.36–2.21 (m, 2H), 1.94 (dq, J = 12.7, 8.3 Hz, 1H), 1.81–1.57 (m,3H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 144.6, 142.4,137.5, 133.7, 131.9, 131.7, 129.5, 128.4, 125.4, 124.7, 62.6, 53.6, 48.4,40.8, 28.1, 23.1, 13.9. IR (薄膜): 2968, 1660, 1652, 1644, 1607, 1564, 1548,1538, 1520, 1470, 1338, 1293, 1068, 1049, 1010 cm–1. MS (ES-API) m/z: 464.1(100%, [M+H]+, C20H23BrN3O3S要求464.1). mp: 131–132℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-191）
在5毫升烧瓶中，将DS-1-033 (110毫克，0.27毫摩尔，1当量）悬浮在甲醇（2毫升）中并逐滴加入盐酸在甲醇中的溶液（0.55 M，1毫升，0.55毫摩尔，2当量）。将所得黄色均匀溶液在减压下浓缩以获得黄色粉末形式的盐酸盐（117毫克，0.27毫摩尔，97%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.61 (bs, 1H), 9.26 (bs, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.7Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.3, 5.3 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.97–3.80 (m, 3H), 3.78–3.66 (m, 1H), 3.34–3.18 (m, 1H), 3.15–2.97 (m, 1H), 3.00–2.88 (m, 1H), 2.32–2.16 (m, 1H), 2.14–2.05 (m, 2H), 2.02–1.91 (m, 1H), 1.45 (bs, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 164.2 (d, J CF =252.4 Hz), 144.7, 143.7, 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 131.3, 130.2, 128.4, 126.3,125.3 (d, J CF = 3.5 Hz), 117.9 (d, J CF = 22.1 Hz), 67.8, 54.1, 51.8, 40.1,27.7, 23.9, 10.8. IR (薄膜): 3252, 3061, 2943, 2649, 2505, 2214, 1660, 1652,1608, 1590, 1538, 1520, 1489, 1464, 1398, 1338, 1309, 1227, 1158, 1107, 1092,1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 404.1 (100%, [M–Cl]+, C20H23FN3O3S要求404.1). mp:186–187℃ (分解)。
N-(2-((2-氨乙基)(甲基)氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-195）
在50毫升烘箱干燥的烧瓶中装入2,2'-二氨基-N-甲基二乙胺（3.2毫升，25.00毫摩尔，5当量）和二氯甲烷（13毫升）并冷却至–15℃。经30分钟逐滴加入酰基氯DS-1-059在二氯甲烷（15毫升）中的溶液，将该反应混合物缓慢升温至室温。在10小时后，用二氯甲烷（20毫升）稀释所得黄色悬浮液，并小心地用饱和碳酸氢钠（50毫升）淬灭。有机层用饱和碳酸氢钠（2× 25毫升）和水（25毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（408毫克，1.04毫摩尔，21%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80 (dd, J = 4.6, 1.7 Hz, 1H), 8.16–8.10(m, 1H), 7.90 (ddd, J = 8.5, 3.5, 1.9 Hz, 1H), 7.57 (ddd, J = 8.0, 5.1, 2.5Hz, 2H), 7.21 (td, J = 8.6, 2.5 Hz, 2H), 6.83 (dd, J = 8.5, 3.7 Hz, 1H),3.55–3.48 (m, 2H), 2.89–2.83 (m, 2H), 2.62 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.53 (q, J =5.9 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.14 (s, 2H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.6,164.1 (d, J CF = 252.1 Hz), 144.1, 142.9, 138.2 (d, J CF = 8.6 Hz), 132.4,131.8, 127.9, 125.6 (d, J CF = 3.3 Hz), 124.5, 117.7 (d, J CF = 22.0 Hz), 58.5,54.8, 42.6, 39.2, 38.2. IR (薄膜): 3290, 3095, 2950, 2852, 2804, 1652, 1645,1634, 1608, 1590, 1549, 1520, 1490, 1464, 1398, 1338, 1227, 1158, 1107, 1092,1050, 1014 cm–1. MS (ES-API) m/z: 393.1 (100%, [M+H]+, C18H22FN4O3S要求393.1).mp: 95–97℃ (分解)。
6-((4-氟苯基)硫代)烟酸（DS-1-203）
按照通用程序A-1，使用6-氯烟酸（5.00毫摩尔）。白色粉末（97%）。1H NMR (400 MHz,DMSO-d 6) δ 13.30 (s, 1H), 8.84 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.4,2.3 Hz, 1H), 7.73–7.66 (m, 2H), 7.42–7.34 (m, 2H), 6.99 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz,1H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 166.0, 165.5 (d, J CF = 1.4 Hz), 163.2 (d, J CF = 248.2 Hz), 150.3, 137.93 (d, J CF = 9.1 Hz), 137.88, 124.4 (d, J CF = 3.4 Hz),123.0, 119.8, 117.3 (d, J CF = 22.1 Hz). IR (薄膜): 2363, 1678, 1587, 1489,1421, 1369, 1301, 1281, 1226, 1148, 1104, 1090, 1015 cm–1. MS (ES-API) m/z:248.0 (100%, [M–H]–, C12H7FNO2S要求248.0), 519.1 (12%、[2M–2H+Na]–). mp: 194℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-6-((4-氟苯基)硫代)烟酰胺（DS-1-209）
按照通用程序B-3，使用DS-1-203和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。无色油（69%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.81 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.60–7.55 (m,2H), 7.48 (bs, 1H), 7.18–7.10 (m, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J= 13.9, 7.2, 4.0 Hz, 1H), 3.40 (dt, J = 14.0, 3.4 Hz, 1H), 3.34–3.29 (m, 1H),2.95–2.84 (m, 2H), 2.46–2.32 (m, 2H), 1.96 (dq, J = 12.4, 7.9 Hz, 1H), 1.85–1.62 (m, 3H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.6, 165.3(d, J CF = 1.4 Hz), 163.8 (d, J CF = 250.8 Hz), 148.3, 137.8 (d, J CF = 8.5 Hz),135.7, 126.1, 125.0 (d, J CF = 3.5 Hz), 120.1, 117.2 (d, J CF = 22.0 Hz), 63.5,53.7, 49.0, 40.4, 28.2, 23.2, 13.3. IR (薄膜): 3289, 3061, 2970, 2876, 2803,1659, 1652, 1645, 1588, 1549, 1538, 1491, 1455, 1360, 1316, 1272, 1225, 1157,1111, 1092, 1014 cm–1. MS (ES-API) m/z: 360.1 (100%, [M+H]+, C19H23FN3OS要求360.2)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-(4-氟苯基磺酰氨基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-213）
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入4-氟苯磺酰胺（193毫克，1.10毫摩尔，1.1当量）和干燥的二甲基甲酰胺（2.8毫升），在0℃下加入叔丁醇钾（129毫克，1.15毫摩尔，1.15当量）。将所得悬浮液加入到含有冷却至0℃的在干燥的二甲基甲酰胺（2.5毫升）中的芳基氟DS-1-153（332毫克，1.00毫摩尔，1当量）和叔丁醇钾（112毫克，1.00毫摩尔，1当量）的15毫升烘箱干燥的压力管中。将该压力管密封并加热至90℃。在16小时后，该反应混合物在减压下浓缩，残余物吸收在二氯甲烷（20毫升）中。该有机相用10%氯化锂（3 × 10毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得橙色固体。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（67毫克，0.15毫摩尔，15%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.53 (s, 1H), 8.44 (bs, 1H), 8.04 (dd, J = 8.7, 1.4 Hz, 1H),7.94–7.88 (m, 2H), 7.70 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.18–7.11 (m, 2H), 3.85–3.71 (m,1H), 3.70–3.60 (m, 2H), 3.51–3.43 (m, 1H), 3.18–3.06 (m, 1H), 2.86–2.68 (m,2H), 2.19–2.08 (m, 1H), 2.04–1.91 (m, 2H), 1.91–1.78 (m, 1H), 1.30 (t, J =7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.8, 165.4 (d, J CF = 255.8 Hz), 139.0,138.4, 136.0 (d, J CF = 3.2 Hz), 133.3, 130.1 (d, J CF = 9.5 Hz), 127.3, 125.7,120.5, 116.8 (d, J CF = 22.7 Hz), 66.1, 54.0, 50.8, 40.8, 28.0, 23.5, 11.8. IR(薄膜): 3282, 2983, 2661, 1710, 1652, 1608, 1520, 1493, 1354, 1304, 1226,1127, 1088, 970 cm–1. MS (ES-API) m/z: 451.1 (100%, [M+H]+, C20H24FN4O5S要求451.1). mp: 94–95℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-羟基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-217）
在250毫升耐压烧瓶中装入芳基氟DS-1-153（3.32克，10.0毫摩尔，1当量）、水（50毫升）、4-巯基苯酚（1.33克，10.5毫摩尔，1.05当量）和碳酸氢钠（1.76克，21.0毫摩尔，2.1当量）。将该烧瓶密封，该反应混合物在90℃下搅拌4小时。分离微红色油，该反应混合物在室温下搅拌整夜。该反应混合物用饱和碳酸氢钠（50毫升）、二氯甲烷（25毫升）和甲醇（25毫升）稀释。水层用二氯甲烷（2 × 20毫升）萃取。该有机相用水（50毫升）和盐水（50毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下蒸发以获得橙色固体形式的产物（3.97克，9.9毫摩尔，99%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.75 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.84 (bs, 1H), 7.82(dd, J = 8.6, 1.7 Hz, 1H), 7.40–7.37 (m, 2H), 6.91–6.88 (m, 3H), 5.43 (bs,1H), 3.87–3.77 (m, 1H), 3.55–3.45 (m, 1H), 3.41–3.32 (m, 1H), 3.03–2.91 (m,2H), 2.54–2.39 (m, 2H), 2.07–1.96 (m, 1H), 1.90–1.69 (m, 3H), 1.20 (t, J =7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.8, 160.0, 145.4, 144.2, 138.0,131.1, 130.7, 128.2, 125.1, 118.4, 118.4, 64.0, 53.7, 49.1, 40.6, 27.7, 23.0,13.1. IR (薄膜): 3289, 3094, 2972, 1652, 1607, 1520, 1496, 1455, 1338, 1279,1167, 1106, 1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 402.1 (100%, [M+H]+, C20H24N3O4S要求402.1). mp: 93–94℃ (分解)。
3-氰基-4-氟苯甲酸（DS-1-219）
在1升烧瓶中装入5-氟-2-甲酰基苄腈（10.0克，67.0毫摩尔，1当量）、水（100毫升）和叔丁醇（450毫升）。在10分钟后，在剧烈搅拌下一次性相继引入水合磷酸二氢钠（21.8克，158.0毫摩尔，2.36当量）和亚氯酸钠（28.0克，248.0毫摩尔，3.7当量）。无色悬浮液迅速变为橙色，并形成橙色气体。在18小时后，该反应混合物转为黄色，并在0℃下加入浓盐酸直到该白色固体完全溶解。在减压下在通风良好的通风橱中蒸发叔丁醇（注意：黄色气体逸出），用水将所得悬浮液稀释至500毫升，过滤并用水（1升）洗涤。将获得的白色固体溶解在乙酸乙酯（80毫升）中，用盐水（2 × 30毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得白色粉末状的产物（7.14克，43.2毫摩尔，65%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.57(s, 1H), 8.35 (dd, J = 6.3, 2.2 Hz, 1H), 8.26 (ddd, J = 8.8, 5.3, 2.2 Hz,1H), 7.61 (t, J = 9.0 Hz, 1H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.9, 164.9 (d, J CF = 261.5 Hz), 137.0 (d, J CF = 10.2 Hz), 135.2 (d, J CF = 1.2 Hz), 128.5 (d, J CF =3.3 Hz), 117.1 (d, J CF = 20.3 Hz), 113.3, 101.0 (d, J CF = 16.1 Hz)。
3-氰基-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-氟苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-223）
按照通用程序B-3，使用3-氰基-4-氟苯甲酸（DS-1-219）和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。米色固体（93%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.63 (bs, 1H), 9.39 (t, J = 5.6Hz, 1H), 8.51 (dd, J = 6.2, 2.3 Hz, 1H), 8.35 (ddd, J = 8.8, 5.2, 2.3 Hz,1H), 7.68 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 3.86–3.77 (m, 1H), 3.70–3.49 (m, 3H), 3.50–3.34 (m, 1H), 3.13–3.01 (m, 2H), 2.18–2.05 (m, 1H), 2.01–1.75 (m, 3H), 1.29(t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.0, 164.0 (d, J CF = 260.3Hz), 135.4 (d, J CF = 9.8 Hz), 133.3, 131.0 (d, J CF = 3.3 Hz), 116.9 (d, J CF =20.1 Hz), 113.5, 100.4 (d, J CF = 15.9 Hz), 65.9, 52.6, 48.5, 38.7, 27.0, 21.6,10.3. IR (薄膜): 3249, 2947, 2652, 1661, 1611, 1588, 1549, 1496, 1318, 1271,1106 cm–1. MS (ES-API) m/z: 276.1 (100%, [M+H]+, C15H19FN3O要求276.1). mp: 164–166℃ (分解)。
3-氨基-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-225）
在装有回流冷凝器的50毫升烧瓶中装入DS-1-033（403毫克，1.00毫摩尔，1当量）、铁粉（343毫克，6.15毫摩尔，6.15当量）、氯化铵（350毫克，6.55毫摩尔，6.55当量）、水（6.6毫升）和乙醇（13.3毫升）。将该反应混合物加热至90℃并剧烈搅拌。在1小时后，将该反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯 (50毫升）稀释。该有机相用水（2 × 25毫升）和盐水（25毫升）洗涤，在硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得无色油状的产物（360毫克，0.96毫摩尔，96%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 1.8 Hz, 1H),7.15–7.05 (m, 2H), 7.02 (dd, J = 8.0, 1.8 Hz, 2H), 6.96–6.89 (m, 2H), 4.46(s, 2H), 3.68 (ddd, J = 13.7, 7.4, 3.2 Hz, 1H), 3.33–3.26 (m, 1H), 3.22 (ddd,J = 9.5, 6.3, 3.5 Hz, 1H), 2.84 (dq, J = 12.2, 7.4 Hz, 1H), 2.78–2.68 (m,1H), 2.34–2.17 (m, 2H), 1.90 (dq, J = 12.2, 8.2 Hz, 1H), 1.78–1.57 (m, 3H),1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 167.2, 161.1 (d, J CF =245.8 Hz), 148.3, 136.4, 135.8, 130.3 (d, J CF = 3.1 Hz), 129.4 (d, J CF = 7.9Hz), 118.3, 115.8 (d, J CF = 22.1 Hz), 115.7, 114.0, 62.5, 53.2, 48.1, 40.9,27.9, 22.6, 13.4. IR (薄膜): 2970, 2877, 2809, 1711, 1652, 1634, 1615, 1591,1558, 1538, 1489, 1424, 1226, 1157 cm–1. MS (ES-API) m/z: 374.2 (100%, [M+H]+,C20H25FN3OS要求374.2)。
3-氰基-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-227）
按照通用程序A-3，使用DS-1-223和4-氟苯硫酚。白色固体（88%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.60–7.50(m, 2H), 7.20–7.13 (m, 2H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.9,7.3, 3.3 Hz, 1H), 3.39–3.32 (m, 1H), 3.30–3.25 (m, 1H), 2.92–2.76 (m, 2H),2.40–2.23 (m, 2H), 2.04 (bs, 1H), 1.95 (dq, J = 12.4, 8.1 Hz, 1H), 1.84–1.58(m, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.9, 163.0(d, J CF = 248.2 Hz), 144.9, 136.7 (d, J CF = 8.8 Hz), 132.8, 132.7, 132.4,128.2, 125.1 (d, J CF = 3.4 Hz), 117.5 (d, J CF = 22.2 Hz), 116.3, 110.1, 62.6,53.2, 48.2, 43.4, 28.7, 22.4, 13.8. IR (薄膜): 2970, 2876, 2803, 2226, 1645,1592, 1538, 1490, 1463, 1312, 1227, 1157, 1054, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z:384.2 (100%, [M+H]+, C21H23FN3OS要求384.2). mp: 79℃ (分解)。
N 1-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)间苯二甲酰胺（DS-1-231-M）
在25毫升烧瓶中，将DS-1-227（100毫克，0.261毫摩尔，1当量）溶解在乙醇（5毫升）中。引入2M氢氧化钠水溶液（5毫升），并将所得白色悬浮液加热至回流。在1小时后，该反应混合物在室温下用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1%NH3）获得灰白色固体形式的产物（50毫克，0.12毫摩尔，48%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.17 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.6,5.3 Hz, 2H), 7.37 (bs, 1H), 7.10 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.00 (bs, 1H), 6.83 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 3.59 (ddd, J = 13.5, 6.9, 3.5 Hz, 1H), 3.45 (bs, 1H), 3.30(dt, J = 13.6, 3.7 Hz, 1H), 3.16–3.09 (m, 1H), 2.81 (dq, J = 14.7, 7.3 Hz,1H), 2.69 (dt, J = 9.9, 4.2 Hz, 1H), 2.30–2.13 (m, 2H), 1.88 (dq, J = 12.1,8.1 Hz, 1H), 1.76–1.50 (m, 3H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz,CDCl3) δ 169.8, 166.5, 163.4 (d, J CF = 250.4 Hz), 143.8, 137.3 (d, J CF = 8.4Hz), 131.8, 131.0, 129.0, 127.7, 127.33, 127.29 (d, J CF = 3.7 Hz), 117.1 (d,J CF = 21.9 Hz), 62.5, 53.5, 48.5, 41.4, 28.2, 22.9, 13.8. IR (薄膜): 2970,2876, 2808, 1668, 1652, 1644, 1591, 1538, 1490, 1469, 1408, 1378, 1310, 1225,1156, 1046, 834 cm–1. MS (ES-API) m/z: 402.2 (100%, [M+H]+, C21H25FN3O2S要求402.2). mp: 75–76℃。
N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-239）
按照通用程序D，使用DS-1-043（0.13毫摩尔）。黄色固体（100%）。1H NMR (400 MHz,DMSO-d 6) δ 10.47 (bs, 1H), 9.31 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 1.8 Hz,1H), 8.12 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.7, 5.4 Hz, 2H), 7.44 (t,J = 8.8 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.66 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 3.22 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 3.16 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 6H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.0, 163.5 (d, J CF = 249.1 Hz), 144.1, 141.6 (d, J CF =1.2 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.9 Hz), 132.6, 131.1, 127.9, 125.3 (d, J CF = 3.3Hz), 124.8, 117.8 (d, J CF = 22.1 Hz), 49.6, 46.5, 34.3, 8.3. IR (薄膜): 3246,2980, 2644, 1652, 1608, 1590, 1540, 1520, 1489, 1472, 1398, 1338, 1312, 1224,1158, 1048, 838 cm–1. MS (ES-API) m/z: 392.1 (100%, [M–Cl]+, C19H23FN3O3S要求392.1). mp: 170–171℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-(2-吗啉代乙基)-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-241）
按照通用程序D，使用DS-1-089（0.12毫摩尔）。黄色固体（100%）。1H NMR (400 MHz,DMSO-d 6) δ 11.12 (bs, 1H), 9.27 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 1.5 Hz,1H), 8.12 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.3, 5.4 Hz, 2H), 7.44 (t,J = 8.7 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 3.87–3.78 (m, 2H), 3.70 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.52 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.30 (d, J= 5.1 Hz, 2H), 3.15–3.04 (m, 2H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.0, 163.5 (d,J CF = 249.2 Hz), 144.1, 141.5, 138.3 (d, J CF = 8.9 Hz), 132.7, 131.2, 127.8,125.3 (d, J CF = 3.2 Hz), 124.8, 117.8 (d, J CF = 22.1 Hz), 63.1, 55.2, 51.1,33.8. IR (薄膜): 1652, 1608, 1590, 1548, 1520, 1489, 1456, 1338, 1226, 1158,1104, 1048, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 406.1(52%, [M–Cl]+, C19H21FN3O4S要求406.1), 169.1 (100%). mp: 184–185℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-((4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-1-261）
在5毫升烧瓶中装入DS-1-217（201毫克，0.50毫摩尔，1当量）、二甲基甲酰胺（2.5毫升）、碳酸钾（138毫克，1.00毫摩尔，2当量）和炔丙基溴（80重量%在甲苯中，50微升，0.45毫摩尔，0.9当量）。所得悬浮液搅拌整夜并在减压下浓缩以获得黑色残余物，将其在二氯甲烷（10毫升）和饱和碳酸氢钠（10毫升）之间分配。水相用二氯甲烷（2 × 10毫升）萃取，有机层用水（30毫升）和盐水（30毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以提供棕色油。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得棕色油状的产物（38毫克，0.09毫摩尔，19%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (d, J = 1.9 Hz, 1H),7.80 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.54–7.49 (m, 2H), 7.34 (bs, 1H), 7.13–7.08(m, 2H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H) 4.78 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.71 (ddd, J =13.8, 7.2, 3.4 Hz, 1H), 3.37 (dt, J = 13.9, 3.6 Hz, 1H), 3.29–3.25 (m, 1H),2.94–2.78 (m, 2H), 2.60 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.43–2.24 (m, 2H), 1.95 (dq, J =12.4, 8.1 Hz, 1H), 1.83–1.60 (m, 3H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 165.0, 159.3, 144.2, 144.1, 137.6, 131.3, 131.2, 128.2, 124.6,121.5, 116.7, 77.8, 76.3, 62.8, 55.9, 53.6, 48.5, 40.7, 28.1, 23.0, 13.6. IR(薄膜): 2972, 1652, 1645, 1608, 1548, 1519, 1493, 1338, 1290, 1242, 1176,1108, 1049, 1022 cm–1. MS (ES-API) m/z: 440.2 (100%, [M+H]+, C23H26N3O4S要求440.2)。
2-((4-(((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)氨基甲酰基)-2-硝基苯基)硫代)-5-氟苯甲酸乙酯（DS-1-265）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153（5.18毫摩尔）和5-氟-2-巯基苯甲酸乙酯（5.44毫摩尔）。通过用1M 氢氧化钠（50毫升）、水（50毫升）和己烷（50毫升）洗涤粗固体来纯化，并在真空下干燥。黄色固体（94%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (d, J = 1.6 Hz, 1H),7.78 (dd, J = 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.67–7.61 (m, 2H), 7.29 (td, J = 8.3, 2.9 Hz,1H), 7.08 (bs, 1H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.69(ddd, J = 13.7, 7.3, 2.7 Hz, 1H), 3.31 (dt, J = 13.8, 3.1 Hz, 1H), 3.24–3.18(m, 1H), 2.82 (dq, J = 14.7, 7.4 Hz, 1H), 2.72 (bs, 1H), 2.34–2.16 (m, 2H),1.92 (dq, J = 12.3, 8.2 Hz, 1H), 1.81–1.53 (m, 3H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H),1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.2 (d, J CF = 2.4 Hz),165.0, 163.5 (d, J CF = 253.8 Hz), 144.8, 142.3 (d, J CF = 0.9 Hz), 140.0 (d, J CF = 8.1 Hz), 139.0 (d, J CF = 7.8 Hz), 132.1, 131.4, 129.3, 126.0 (d, J CF = 3.8Hz), 124.4, 120.0 (d, J CF = 21.4 Hz), 118.7 (d, J CF = 24.0 Hz), 62.3, 62.2,53.6, 48.2, 40.9, 28.2, 23.0, 14.04, 14.02. IR (薄膜): 3073, 2971, 2876,2803, 1732, 1646, 1607, 1578, 1520, 1465, 1339, 1293, 1271, 1248, 1200, 1103,1044 cm–1. MS (ES-API) m/z: 476.2 (100%, [M+H]+, C23H27FN3O5S要求476.2). mp: 56℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(喹啉-8-基硫代)苯甲酰胺（DS-1-269）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153、8-喹啉硫醇盐酸盐和碳酸氢钠（3当量）。黄色固体（96%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.95 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.29(d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66(t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 8.0, 3.9 Hz,1H), 6.99 (bs, 1H), 6.68 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.65 (ddd, J = 13.1, 6.9, 2.3Hz, 1H), 3.28 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.21–3.15 (m, 1H), 2.80 (dq, J = 14.4,7.4 Hz, 1H), 2.69 (bs, 1H), 2.31–2.15 (m, 2H), 1.95–1.84 (m, 1H), 1.78–1.53(m, 3H), 1.10 (t, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.2, 151.8,148.0, 144.8, 142.7, 138.4, 137.1, 131.6, 131.5, 131.2, 130.4, 129.5, 129.3,127.2, 124.3, 122.3, 62.3, 53.6, 48.2, 41.0, 28.3, 23.1, 14.1. IR (薄膜):2970, 2803, 1654, 1606, 1548, 1519, 1491, 1457, 1337, 1293, 1050, 828, 790cm–1. MS (ES-API) m/z: 437.2 (35%, [M+H]+, C23H25N4O3S要求437.2), 219.1 (100%）。mp: 203℃ (分解)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(对甲苯基硫代)苯甲酰胺（DS-1-271）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和对硫代甲酚。浅黄色固体（95%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.8 Hz,2H), 7.31 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.19 (bs, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H). 3.71(ddd, J = 13.4, 7.2, 2.4 Hz, 1H), 3.31 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.20 (t, J = 7.0Hz, 1H), 2.84 (dq, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 2.71 (bs, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.34–2.15 (m, 2H), 1.98–1.84 (m, 1H), 1.79–1.56 (m, 2H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 144.3, 143.9, 140.9, 135.9, 131.4, 131.3,131.1, 128.3, 126.5, 124.4, 62.4, 53.5, 48.2, 40.7, 28.0, 22.9, 21.4, 13.9.IR (薄膜): 2968, 2875, 2802, 1639, 1608, 1546, 1521, 1461, 1337, 1293, 1049,812 cm–1. MS (ES-API) m/z: 400.2 (100%, [M+H]+, C21H26N3O3S要求400.2). mp: 83–85℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)苯甲酰胺（DS-1-275）
在4毫升烘箱干燥的小瓶中，将酰基氯DS-1-059（312毫克，1.00毫摩尔，1当量）悬浮在干燥的二氯甲烷（1毫升）中。顺序逐滴加入吡啶（0.16毫升，2.0毫摩尔，2当量）和四氢糠胺（0.12毫升，1.2毫摩尔，1.2当量）。在48小时后，将黄色悬浮液过滤，固体用二***（10毫升）洗涤并溶解在二氯甲烷（20毫升）中。该有机相用10%盐酸（6 × 15毫升）、饱和碳酸氢钠（20毫升）、水（20毫升）和盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色固体形式的产物（257毫克，0.68毫摩尔，68%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J =1.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.63–7.53 (m, 2H), 7.25–7.18 (m,2H), 6.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.54 (bs, 1H), 4.05 (qd, J = 7.2, 3.2 Hz, 1H),3.88 (dt, J = 8.3, 6.7 Hz, 1H), 3.84–3.74 (m, 2H), 3.30 (ddd, J = 13.7, 7.9,4.5 Hz, 1H), 2.09–1.99 (m, 1H), 1.93 (p, J = 6.8 Hz, 2H), 1.64–1.53 (m, 1H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.7, 164.2 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.3, 143.4 (d,J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.9, 131.5, 128.2, 125.6 (d, J CF =3.6 Hz), 124.3, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 77.6, 68.2, 44.1, 28.9, 26.0. IR (薄膜): 2870, 1639, 1607, 1590, 1547, 1520, 1491, 1338, 1293, 1226, 1158, 1078,1049, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 377.1 (100%, [M+H]+, C18H18FN2O4S要求377.1),775.2 (37%、[2M+Na]+). mp: 172℃。
(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯基)(1-甲基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)甲酮（DS-1-279）
在4毫升烘箱干燥的小瓶中，将酰基氯（312毫克，1.00毫摩尔，1当量）悬浮在干燥的二氯甲烷（1毫升）。相继加入二甲氨基吡啶（2毫克，0.02毫摩尔，2摩尔%）和1-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪（168毫克，1.20毫摩尔，1.2当量）。在48小时后，将黄色悬浮液过滤，固体用二***（10毫升）洗涤并溶解在二氯甲烷（20毫升）中。该有机相用1M 氢氧化钠（3 × 20毫升）、水（20毫升）和盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色固体。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（169毫克，0.41毫摩尔，41%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 1.8 Hz,1H), 7.60–7.54 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 7.23–7.16 (m, 2H),6.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.20–4.13 (m, 1H), 3.81 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.35(ddd, J = 13.8, 11.1, 4.1 Hz, 1H), 2.90 (ddd, J = 10.4, 8.2, 1.8 Hz, 1H),2.74–2.58 (m, 3H), 2.50 (dt, J = 11.0, 3.5 Hz, 1H), 1.98–1.86 (m, 1H), 1.85–1.64 (m, 2H), 1.66–1.51 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz,CDCl3) δ 168.4, 164.2 (d, J CF = 252.2 Hz), 144.3, 141.6 (d, J CF = 1.6 Hz),138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 133.4, 132.1, 128.3, 125.6 (d, J CF = 3.5 Hz), 124.6,117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 64.4, 54.6, 52.0, 48.1, 40.6, 26.3, 21.5, 18.2. IR(薄膜): 2968, 2878, 2809, 1633, 1608, 1590, 1547, 1520, 1491, 1428, 1337,1291, 1227, 1157, 1050, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 416.1 (100%, [M+H]+,C21H23FN3O3S要求416.1). mp: 67–68℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-(3-吗啉代丙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-283）
在4毫升烘箱干燥的小瓶中，将酰基氯DS-1-059（312毫克，1.00毫摩尔，1当量）悬浮在干燥的二氯甲烷（1毫升）中。相继加入二甲氨基吡啶（1毫克，0.01毫摩尔，1摩尔%）和3-吗啉代丙胺（0.17毫升，1.20毫摩尔，1.2当量）。在48小时后，将黄色悬浮液过滤，固体用二***（20毫升）洗涤并溶解在二氯甲烷（40毫升）中。该有机相用1M 氢氧化钠（3 × 15毫升）、盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色固体形式的产物（363毫克，0.87毫摩尔，87%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (s, 1H), 8.35 (bs, 1H), 7.90(dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.63–7.53 (m, 2H), 7.25–7.18 (m, 2H), 6.89 (d, J =8.6 Hz, 1H) 3.75 (s, 4H), 3.59 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.66–2.50 (m, 6H), 1.84(s, 2H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.5, 164.2 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.0,143.4, 138.2 (d, J CF = 8.7 Hz), 132.3, 131.9, 128.2, 125.5 (d, J CF = 3.5 Hz),123.7, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 66.9, 58.9, 54.0, 41.1, 23.9. IR (薄膜):3286, 3076, 2956, 2855, 2814, 1640, 1608, 1590, 1547, 1520, 1491, 1462, 1337,1292, 1223, 1158, 1117, 1048, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 420.1 (100%, [M+H]+,C20H23FN3O4S要求420.1). mp: 144℃。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸(1-乙基吡咯烷-2-基)甲酯（DS-1-287）
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中，将酰基氯DS-1-059（623毫克，2.00毫摩尔，2当量）和二甲氨基吡啶（12毫克，0.10毫摩尔，0.1当量）悬浮在干燥的二氯甲烷（5毫升）中。在0℃下逐滴加入1-乙基-2-羟甲基吡咯烷（0.135毫升，1.00毫摩尔，1当量）。在24小时后，该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）和1M 氢氧化钠（40毫升）稀释。水相用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。合并的有机层用1M 氢氧化钠（5 × 10毫升）、水（30毫升）和盐水（30毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油状的产物（212毫克，0.52毫摩尔，52%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.84 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H),7.62–7.52 (m, 2H), 7.24–7.17 (m, 2H), 6.86 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.31 (dd, J =11.0, 5.3 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 11.0, 6.4 Hz, 1H), 3.15 (ddd, J = 9.2, 6.5,2.8 Hz, 1H), 2.91 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.81 (dq, J = 8.5, 5.6 Hz, 1H),2.41 (dq, J = 12.1, 6.6 Hz, 1H), 2.25 (td, J = 9.2, 7.5 Hz, 1H), 1.96 (dq, J= 12.2, 8.4 Hz, 1H), 1.84–1.72 (m, 2H), 1.74–1.62 (m, 1H), 1.11 (d, J = 14.4Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.4, 164.3 (d, J CF = 252.5 Hz), 145.2,144.4, 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 133.6, 128.0, 127.6, 127.2, 125.4, 117.9 (d,J CF = 22.0 Hz), 68.6, 62.1, 54.0, 49.5, 28.7, 23.2, 14.0. IR (薄膜): 3100,2970, 2877, 2798, 1723, 1608, 1591, 1556, 1526, 1491, 1385, 1339, 1306, 1287,1234, 1158, 1132, 1105, 1051, 837, 750 cm–1. MS (ES-API) m/z: 405.1 (100%, [M+H]+, C20H22FN2O4S要求405.1), 391.1 (6%, [M–CH3+H]+)。
4-((3,4-二氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-291）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和3,4-二氯苯硫酚。黄色固体（56%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 1.8 Hz,1H), 7.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 8.3, 1.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J =8.5 Hz, 1H), 3.72 (ddd, J = 13.1, 6.7, 3.0 Hz, 1H), 3.43–3.35 (m, 1H), 3.32–3.25 (m, 1H), 2.94–2.81 (m, 2H), 2.43–2.27 (m, 2H), 1.96 (dq, J = 16.7, 7.6Hz, 1H), 1.83–1.61 (m, 4H), 1.17 (t, J = 6.9 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.6, 144.5, 139.6, 136.6, 135.4, 133.6, 132.8, 132.7, 132.4, 132.3,131.0, 128.8, 124.4, 62.5, 53.2, 48.3, 43.5, 28.7, 22.4, 13.9. IR (薄膜):2969, 2799, 1659, 1652, 1634, 1607, 1548, 1520, 1454, 1338, 1293, 1247, 1141,1048, 1033 cm–1. MS (ES-API) m/z: 454.1 (100%, [M+H]+, C20H22Cl2N3O3S要求454.1).mp: 146–148℃ (分解)。
4-((3-氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-295）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和3-氯苯硫酚。黄色固体（80%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.68 (d, J = 1.3 Hz, 1H), (dd, J = 8.4, 1.1 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H),7.53–7.42 (m, 3H), 7.19 (bs, 1H), 6.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J =13.8, 7.3, 3.1 Hz, 1H), 3.39–3.32 (m, 1H), 3.29–3.22 (m, 1H), 2.90–2.75 (m,2H), 2.39–2.21 (m, 2H), 1.94 (dq, J = 12.3, 8.2 Hz, 1H), 1.84–1.56 (m, 3H),1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 144.7, 142.2,135.9, 135.6, 134.1, 132.4, 132.1, 131.8, 131.5, 130.8, 128.5, 124.6, 62.6,53.6, 48.3, 40.8, 28.0, 23.0, 14.0. IR (薄膜): 3072, 2969, 2875, 2799, 1644,1607, 1564, 1548, 1520, 1463, 1338, 1293, 1242, 1116, 1048, 782 cm–1. MS (ES-API) m/z: 420.1 (100%, [M+H]+, C20H23ClN3O3S要求420.1). mp: 73–74℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-氟-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺盐酸盐（DS-1-297)
按照通用程序B-3，使用4-氟-3-(甲基磺酰基)苯甲酸和 2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。棕色固体（100%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6/H2O) δ 10.21 (bs, 1H), 9.32 (t, J =5.1 Hz, 1H), 8.38 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 7.70 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.80–3.72 (m, 1H), 3.70–3.65 (m, 1H), 3.66–3.53 (m, 2H), 3.51–3.39 (m, 1H), 3.38(s, 3H), 3.07 (bs, 2H), 2.12 (dt, J = 12.8, 6.4 Hz, 1H), 1.96 (dt, J = 12.7,5.7 Hz, 1H), 1.93–1.74 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz,DMSO-d 6/H2O) δ 164.4, 160.5 (d, J CF = 258.3 Hz), 135.3 (d, J CF = 9.7 Hz), 130.6(d, J CF = 3.4 Hz), 129.0, 128.5 (d, J CF = 15.8 Hz), 117.8 (d, J CF = 22.1 Hz),65.9, 52.6, 48.5, 43.6, 39.0, 27.2, 21.7, 10.3. IR (薄膜): 3243, 2933, 2638,1652, 1602, 1557, 1486, 1455, 1393, 1315, 1261, 1146, 1066, 963, 844, 776 cm–1. MS (ES-API) m/z: 329.1 (100%, [M–Cl]+, C15H22FN2O3S要求329.1)。
4-((3,4-二甲基苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-1-299）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和3,4-二甲基苯硫酚。黄色固体（93%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.36–7.23 (m, 3H), 6.92(d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J = 13.5, 6.9, 3.1 Hz, 1H), 3.37 (d, J = 13.8Hz, 1H), 3.27 (bs, 1H), 3.32–3.21 (m, 1H), 2.92–2.77 (m, 1H), 2.39–2.19 (m,8H), 1.94 (dt, J = 17.0, 8.3 Hz, 1H), 1.83–1.59 (m, 4H), 1.15 (t, J = 7.0 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.1, 144.1, 142.1, 139.1, 139.2, 136.4,133.2, 132.5, 131.7, 128.1, 126.2, 124.6, 62.9, 53.4, 48.5, 43.3, 28.7, 22.5,19.5, 19.4, 13.8. IR (薄膜): 2968, 2805, 1634, 1608, 1557, 1538, 1520, 1470,1348, 1294, 1250, 1115, 1050 cm–1. MS (ES-API) m/z: 414.2 (100%, [M+H]+,C22H28N3O3S要求414.2). mp: 91–92℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺（DS-1-301）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-1-297（332毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、4-氟苯硫酚（0.12毫升，1.10毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（176毫克，2.10毫摩尔，2.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时，随后在室温下搅拌整夜。该反应混合物用水（20毫升）和二氯甲烷（20毫升）稀释。水相用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取，合并的有机层用水（20毫升）和盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–50% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得白色固体形式的产物（241毫克，0.55毫摩尔，55%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (s, 1H),7.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.61–7.51 (m, 2H), 7.22–7.15 (m, 2H), 6.95 (d, J =8.4 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.8, 7.2, 3.5 Hz, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.40–3.24(m, 2H), 2.93–2.77 (m, 2H), 2.41–2.24 (m, 2H), 1.95 (dq, J = 16.7, 8.0 Hz,1H), 1.83–1.59 (m, 4H), 1.16 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ165.5, 164.0 (d, J CF = 252.0 Hz), 144.1 (d, J CF = 1.3 Hz), 137.8 (d, J CF = 8.6Hz), 136.6, 132.4, 132.3, 128.8, 128.4, 125.5 (d, J CF = 3.6 Hz), 117.7 (d, J CF = 22.1 Hz), 62.5, 53.6, 48.4, 41.9, 41.0, 28.3, 23.1, 14.0. IR (薄膜): 3063,2970, 2877, 2803, 1652, 1634, 1592, 1532, 1490, 1455, 1312, 1227, 1142, 1038,959, 837, 737 cm–1. MS (ES-API) m/z: 437.1 (100%, [M+H]+, C21H26FN2O3S2要求437.1). mp: 82–83℃。
2-(2-(乙基氨基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐（DS-1-303）
在200毫升烧瓶中，将N-乙基乙二胺（5.3毫升，50.0毫摩尔，1当量）加热至100℃并在剧烈搅拌下经15分钟加入邻苯二甲酰亚胺（7.36克，50.0毫摩尔，1当量）。气态氨立即从该反应混合物中释放出来。在3小时后，将所得黄色油加热至130℃。在2小时后，移除加热浴，并向热的反应混合物中一次性加入乙醇（100毫升），立即逐滴加入在异丙醇中的5–6N HCl（12毫升）。该反应混合物在冷却时堵塞，在冰浴中冷却。将固体过滤，用冷的乙醇（100毫升）洗涤直到滤液为无色，并在高真空下干燥以获得白色固体形式的产物（8.07克，31.7毫摩尔，63%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.86 (bs, 2H), 7.93–7.84 (m, 4H), 3.89 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.22–3.15 (m, 2H), 3.02–2.92 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.2 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 167.9, 134.3, 132.0, 123.0, 44.1, 41.7, 33.9,10.8。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(间甲苯基硫代)苯甲酰胺（DS-1-305）
按照通用程序A-3，使用DS-1-153和3-甲基苯硫酚。黄色固体（92%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.42–7.37 (m, 3H), 7.38–7.28(m, 1H), 6.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J = 13.8, 7.2, 3.3 Hz, 1H),3.37 (bd, J = 13.0 Hz, 1H), 3.27 (bs, 1H), 2.86 (dq, J = 14.7, 7.2 Hz, 2H),2.41 (s, 3H), 2.38–2.22 (m, 2H), 1.95 (dq, J = 16.9, 8.2 Hz, 1H), 1.83–1.59(m, 4H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 144.4,143.7, 140.5, 136.5, 133.0, 131.5, 131.4, 130.2, 129.9, 128.5, 124.5, 62.5,53.6, 48.3, 40.8, 28.1, 23.0, 21.4, 14.0. IR (薄膜): 3060, 2969, 2875, 2799,1644, 1607, 1548, 1520, 1464, 1337, 1293, 1242, 1107, 1049 cm–1. MS (ES-API)m/z: 400.2 (100%, [M+H]+, C21H26N3O3S要求400.2)。
2-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮（DS-1-307)
在100毫升烘箱干燥的烧瓶中装入DS-1-303（2.55克，10.00毫摩尔，1当量）、干燥的乙腈（40毫升）和碳酸钾（1.38克，10.00毫摩尔，1当量）。逐滴加入炔丙基溴（80重量%在甲苯中，1.1毫升，10.00毫摩尔，1当量），该反应混合物剧烈搅拌40小时。将固体过滤，滤液在减压下浓缩以获得黄色固体形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得白色粉末状的产物（1.71克，6.68毫摩尔，67%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 7.84–7.79 (m, 2H), 7.74–7.64 (m, 2H), 3.77 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.47(d, J = 2.4 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.56 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.15(t, J = 2.4 Hz, 1H), 0.96 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ168.5, 133.9, 132.3, 123.3, 78.6, 73.0, 50.7, 47.5, 41.5, 36.0, 12.9. IR (薄膜): 3273, 2971, 2941, 2828, 1772, 1713, 1468, 1433, 1398, 1358, 1326, 1190,1172, 1156, 1098, 1087, 1030, 720 cm–1. MS (ES-API) m/z: 257.1 (100%, [M+H]+,C15H17N2O2要求257.1)。
3-氰基-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-(4-氟苯氧基)苯甲酰胺（DS-1-311）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-1-223（182毫克，0.58毫摩尔，1当量）、水（3毫升）、4-氟苯酚（72毫克，0.64毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（103毫克，1.23毫摩尔，2.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时并随后在室温下搅拌整夜。该反应混合物用水（10毫升）和二氯甲烷（10毫升）稀释。该水相用二氯甲烷（2 × 10毫升）萃取，合并的有机层用盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得白色固体形式的产物（101毫克，0.28毫摩尔，47%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 2.2 Hz, 1H),7.93 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 7.17–7.08 (m, 4H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H),3.70 (ddd, J = 13.8, 7.4, 3.0 Hz, 1H), 3.33 (ddd, J = 13.8, 4.0, 2.7 Hz, 1H),3.24 (td, J = 6.9, 2.4 Hz, 1H), 2.85 (dq, J = 12.1, 7.3 Hz, 1H), 2.75 (ddd, J= 10.7, 6.7, 3.7 Hz, 1H), 2.44 (bs, 1H), 2.35–2.20 (m, 2H), 1.99–1.89 (m,1H), 1.83–1.57 (m, 3H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ165.1, 162.2 (d, J CF = 0.8 Hz), 160.3 (d, J CF = 245.1 Hz), 150.1 (d, J CF = 2.8Hz), 133.3, 133.1, 129.5, 122.3 (d, J CF = 8.5 Hz), 117.2 (d, J CF = 23.6 Hz),115.7, 115.4, 103.3, 62.5, 53.7, 48.3, 40.7, 28.2, 23.1, 14.0. IR (薄膜):3075, 2970, 2936, 2876, 2802, 2234, 1660, 1652, 1645, 1608, 1548, 1538, 1505,1486, 1268, 1228, 1191, 1147, 1091, 852 cm–1. MS (ES-API) m/z: 368.2 (100%, [M+H]+, C21H23FN3O2要求368.2)。
3-氰基-4-氟-N-(2-吗啉代乙基)苯甲酰胺盐酸盐（DS-2-025）
按照通用程序B-3，使用3-氰基-4-氟苯甲酸和4-(2-氨乙基)吗啉。白色固体（92%）。1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.01 (bs, 1H), 9.21 (bs, 1H), 8.50 (dd, J = 6.2,2.2 Hz, 1H), 8.38–8.28 (m, 1H), 7.67 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 4.01–3.92 (m, 2H),3.89–3.78 (m, 2H), 3.70 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 3.53 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 3.37–3.28 (m, 2H), 3.17–3.06 (m, 2H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.9 (d, J CF =260.1 Hz), 163.8, 135.5 (d, J CF = 9.7 Hz), 133.4, 131.3 (d, J CF = 3.3 Hz),116.8 (d, J CF = 20.0 Hz), 113.6, 100.3 (d, J CF = 15.8 Hz), 63.1, 55.3, 51.1,33.8. IR (薄膜): 1652, 1538, 1495, 1102 cm–1. MS (ES-API) m/z: 278.1 (100%,[M–Cl]+, C14H17FN3O2要求278.1)。
3-氰基-4-((4-氟苯基)硫代)-N-(2-吗啉代乙基)苯甲酰胺（DS-2-027)
按照通用程序A-3，使用DS-2-025和4-氟苯硫酚。白色固体（90%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.06 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.59–7.52 (m,2H), 7.21–7.13 (m, 2H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.78 (bs, 4H), 3.58 (q, J =5.3 Hz, 2H), 2.72–2.55 (m, 6H), 1.83 (bs, 1H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ164.7, 163.8 (d, J CF = 251.8 Hz), 147.5 (d, J CF = 1.3 Hz), 137.3 (d, J CF = 8.7Hz), 132.1 (2C), 131.3, 127.5, 124.7 (d, J CF = 3.5 Hz), 117.5 (d, J CF = 22.2Hz), 116.1, 110.7, 66.8, 56.7, 53.3, 36.1. IR (薄膜): 3065, 2955, 2893, 2856,2814, 2226, 1641, 1596, 1542, 1490, 1461, 1309, 1227, 1157, 1144, 1117, 1054,836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 386.1 (100%, [M+H]+, C20H21FN3O2S要求386.1)。
N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-035)
在50毫升烧瓶中装入DS-1-307（768毫克，3.00毫摩尔，1当量）和乙醇（20毫升）。逐滴加入无水肼（0.28毫升，9.00毫摩尔，3当量），该均匀溶液搅拌60小时。将所得白色沉淀物过滤并用乙醇（3 × 10毫升）洗涤。无色滤液在减压下浓缩以获得黄色油状的粗二胺。
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入酰基氯DS-1-059（826毫克，2.65毫摩尔，1当量）、干燥的二氯甲烷（1.8毫升）和4-二甲氨基吡啶（3毫克，0.03毫摩尔，1摩尔%）并冷却至0℃。经10分钟逐滴加入粗二胺在干燥的二氯甲烷（2毫升）中的溶液，将该反应混合物缓慢升温至室温。在16小时后，该反应混合物用1M 氢氧化钠（30毫升）和二氯甲烷（50毫升）稀释。该有机相用1M 氢氧化钠（30毫升）、水（30毫升）和盐水（30毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色固体形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（679毫克，1.69毫摩尔，64%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (s, 1H), 7.86 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.60–7.55 (m, 2H),7.21 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.62–3.49 (m, 4H), 2.89(bs, 2H), 2.73 (bs, 2H), 2.32 (s, 1H), 1.67 (bs, 1H), 1.16 (t, J = 6.9 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.6, 164.2 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.3, 143.3(d, J CF = 1.6 Hz), 138.3 (d, J CF = 8.7 Hz), 131.8, 131.7, 128.2, 125.6 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.3, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 78.4, 73.4, 51.6, 47.5, 41.5,37.4, 12.8. IR (薄膜): 3094, 2973, 2840, 1652, 1644, 1634, 1608, 1590, 1549,1520, 1491, 1464, 1338, 1294, 1226, 1184, 1157, 1109, 1089, 1049, 839 cm–1. MS(ES-API) m/z: 402.1 (100%, [M+H]+, C20H21FN3O3S要求402.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3,4-二氟苯甲酰胺（DS-2-039）
按照通用程序B-3，使用3,4-二氟苯甲酸和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。灰白色固体（80%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.79 (s, 1H), 9.09 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.98–7.90 (m, 2H), 7.28–7.21 (m, 1H), 3.93–3.80 (m, 3H), 3.77–3.65 (m, 1H), 3.29–3.14 (m, 1H), 3.11–2.96 (m, 1H), 2.97–2.87 (m, 1H), 2.27–1.95 (m, 4H), 1.45(t, J = 7.3 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 164.5, 151.6 (dd, J CF = 241.8,12.7 Hz), 149.1 (dd, J CF = 237.4, 12.7 Hz), 131.1 (dd, J CF = 4.8, 3.6 Hz),124.9 (dd, J CF = 7.4, 3.4 Hz), 117.7 (d, J CF = 17.6 Hz), 116.8 (d, J CF = 18.5Hz), 66.0, 52.6, 48.6, 38.8, 27.0, 21.8, 10.3. IR (薄膜): 3260, 3042, 2947,2651, 2507, 1660, 1652, 1606, 1557, 1513, 1506, 1428, 1300, 1283, 1203, 1108,776 cm–1. MS (ES-API) m/z: 269.1 (100%, [M+H]+, C14H19F2N2O要求269.1)。
4-碘-3-硝基苯甲酸乙酯（DS-2-041）
在25毫升烧瓶中装入4-碘苯甲酸乙酯（5.52克，20.0毫摩尔，1当量）和硫酸（5毫升）并冷却至0℃。在剧烈搅拌下经30分钟用巴斯德吸管逐滴加入发烟硝酸（1.9毫升）和硫酸（2.7毫升）的冰冷却的混合物。所得黑色均匀混合物升温至室温并搅拌5小时以获得黄色悬浮液，将其倾倒在冰（100克）上。将黄色沉淀物过滤，溶解在乙酸乙酯（100毫升）中，用饱和的碳酸钠（2 × 100毫升）和盐水（100毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色粉末形式的粗产物。通过在回流下从乙醇中重结晶来纯化，获得该产物（4.09克，12.7毫摩尔，65%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.45 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 4.42 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.42(t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.2, 153.3, 142.4, 133.6,132.0, 126.1, 92.1, 62.2, 14.4。
3-氰基-4-(4-氟苯氧基)-N-(2-吗啉代乙基)苯甲酰胺（DS-2-045）
按照通用程序A-4，使用芳基氟DS-2-025和4-氟苯酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。白色固体（74%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10(d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.19–7.07 (m, 4H), 6.87 (bs,1H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.77 (bs, 4H), 3.58 (q, J = 4.9 Hz, 2H), 2.71–2.50 (m, 6H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.8, 162.3, 160.3 (d, J CF = 245.3Hz), 150.0 (d, J CF = 2.8 Hz), 133.4, 133.0, 129.3, 122.3 (d, J CF = 8.5 Hz),117.2 (d, J CF = 23.6 Hz), 115.7, 115.4, 103.2, 66.9, 57.0, 53.4, 36.2. IR (薄膜): 3076, 2942, 2857, 2817, 2233, 1659, 1652, 1644, 1609, 1548, 1505, 1486,1311, 1269, 1226, 1191, 1146, 1118, 1011, 852 cm–1. MS (ES-API) m/z: 370.2(100%, [M+H]+, C20H21FN3O3要求370.2)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)(羟基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-051）
在烘箱干燥的25毫升烧瓶中装入4-碘-3-硝基苯甲酸乙酯（642毫克，2.00毫摩尔，1当量）并排空和用氩气回填三遍。引入干燥的四氢呋喃（5毫升）并将烧瓶冷却至–40℃。经10分钟逐滴加入苯基氯化镁（2M在四氢呋喃中，1.1毫升，2.20毫摩尔，1.1当量），该均匀溶液逐渐由黄色转向深灰色。在5分钟后，经5分钟逐滴引入4-氟苯甲醛（0.26毫升，2.40毫摩尔，1.2当量），该反应混合物逐渐变为暗红色。在30分钟后，移除冷却浴，溶液在室温下搅拌1小时。加入饱和的氯化铵（2毫升），该反应混合物随后倾入水（25毫升）中。水相用乙酸乙酯（3× 20毫升）萃取，合并的有机层用盐水（50毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–100%乙酸乙酯在己烷中）获得黄色油状的产物，其不经进一步纯化用于下一步骤。
在10毫升烧瓶中装入预先制备的该乙酯和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷（2.8毫升，20.00毫摩尔，10当量）。该黄色溶液立即变为红色，引入***（7毫克，0.20毫摩尔，0.1当量）。在5天后，将该反应混合物装载到硅胶上并通过柱色谱法纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）以获得橙色固体形式的产物（140毫克，0.35毫摩尔，17%在两个步骤中），其为两种非对映异构体的1:1混合物。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (dd, J = 3.5,1.6 Hz, 1H), 7.91 (ddd, J = 8.0, 2.9, 1.7 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 14.7, 8.2Hz, 1H), 7.54–7.47 (m, 1H), 7.31–7.24 (m, 2H), 6.98 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44(d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.08 (bs, 1H), 3.78 (dtd, J = 11.4, 8.1, 3.3 Hz, 1H),3.33 (dq, J = 11.1, 3.2 Hz, 1H), 2.93 (dt, J = 21.7, 7.6 Hz, 1H), 2.88–2.73(m, 1H), 2.69 (bs, 1H), 2.27–2.08 (m, 2H), 1.88 (dt, J = 13.8, 7.4 Hz, 1H),1.76–1.54 (m, 3H), 1.04 (dt, J = 13.0, 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ165.8, 165.7, 162.49 (d, J CF = 247.1 Hz), 162.48 (d, J CF = 247.2 Hz), 148.02,147.99, 141.4 (2C), 137.91 (d, J CF = 3.3 Hz), 137.87 (d, J CF = 3.3 Hz),135.33, 135.28, 131.2, 131.1, 129.07 (2C), 129.02 (d, J CF = 8.8 Hz, 2C),128.96 (d, J CF = 8.8 Hz, 2C), 123.9 (2C), 115.7 (d, J CF = 21.5 Hz, 4C), 70.1,70.0, 63.3 (2C), 53.5, 53.4, 48.5 (2C), 40.3, 40.2, 27.33, 27.28, 22.8, 22.6,13.4, 13.3. IR (薄膜): 3077, 2973, 2879, 2815, 1660, 1652, 1645, 1604, 1564,1538, 1506, 1354, 1300, 1224, 1181, 1158, 1099, 1045, 842, 814, 738 cm–1. MS(ES-API) m/z: 402.2 (100%, [M+H]+, C21H25FN3O4要求402.2)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-氟-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-2-053）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-2-039（305毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、4-氟苯硫酚（0.12毫升，1.10毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（176毫克，2.10毫摩尔，2.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时并随后在室温下搅拌整夜。 该反应混合物用1M 氢氧化钠（10毫升）和二氯甲烷（10毫升）稀释。水相用二氯甲烷（3 × 5毫升）萃取，合并的有机层用盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色油状的产物（50毫克，0.13毫摩尔，13%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (dd, J = 10.2,1.7 Hz, 1H), 7.50–7.45 (m, 2H), 7.41 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.13–7.07 (m,2H), 7.00–6.95 (m, 1H), 6.94 (bs, 1H), 3.68 (ddd, J = 13.8, 7.4, 2.8 Hz, 1H),3.29 (ddd, J = 13.7, 4.1, 2.8 Hz, 1H), 3.24–3.17 (m, 1H), 2.82 (dq, J = 12.2,7.3 Hz, 1H), 2.74–2.67 (m, 1H), 2.32–2.17 (m, 2H), 1.91 (dq, J = 12.2, 8.2Hz, 1H), 1.80–1.56 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ 165.8 (d, J CF = 2.1 Hz), 163.2 (d, J CF = 249.9 Hz), 159.3 (d, J CF = 246.9Hz), 136.0 (d, J CF = 8.4 Hz), 134.57 (d, J CF = 6.4 Hz), 129.8 (d, J CF = 1.8Hz), 129.2 (d, J CF = 16.6 Hz), 126.3 (d, J CF = 3.3 Hz), 122.7 (d, J CF = 3.4Hz), 116.9 (d, J CF = 22.1 Hz), 114.5 (d, J CF = 23.2 Hz), 62.3, 53.5, 48.1,40.6, 28.1, 23.0, 14.0. IR (薄膜): 3068, 2970, 2876, 2800, 1644, 1607, 1590,1557, 1520, 1490, 1292, 1225, 1157, 1090, 1059, 1014, 834 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 377.1 (100%, [M+H]+, C20H23F2N2OS要求377.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯磺酰胺（DS-2-055）
在装有回流冷凝器的25毫升烧瓶中装入氯磺酸（5.2毫升，78.0毫摩尔，2.2当量）并加热至65℃。逐滴加入1-氟-2-硝基苯（3.7毫升，35.0毫摩尔，1当量）。所得棕色混合物随后加热至100℃。在14小时后，将冷却的反应混合物倾倒在冰（50克）上，水相用二氯甲烷（2 ×50毫升）萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠（2 × 50毫升）和盐水（50毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色液体形式的磺酰氯（5.06克，21.1毫摩尔，60%），其不经进一步纯化用于下一步骤。
在100毫升烧瓶中，该磺酰氯溶解在二氯甲烷（21毫升）中并冷却至0℃。经5分钟逐滴加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷（2.9毫升，21.0毫摩尔，1当量），使该反应混合物升温至室温整夜。在18小时后，将所得黄色沉淀物过滤并用二***（100毫升）洗涤以获得吸湿性黄色粉末形式的粗磺酰胺，其不经进一步纯化用于下一步骤。
在15毫升压力管中装入该粗磺酰胺（368毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、4-氟苯硫酚（0.12毫升，1.10毫摩尔，1.1当量）和碳酸氢钠（176毫克，2.10毫摩尔，2.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时并随后在室温下搅拌整夜。该反应混合物用饱和碳酸氢钠（10毫升）和二氯甲烷（10毫升）稀释。该水相用二氯甲烷（2 × 10毫升）萃取，合并的有机层用碳酸氢钠（2 × 10毫升）和盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得橙色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色油状的产物（223毫克，0.51毫摩尔，25%在三个步骤中）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H),7.60–7.55 (m, 2H), 7.25–7.19 (m, 2H), 6.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.20 (bs,1H), 3.11–3.05 (m, 1H), 2.97 (dd, J = 11.8, 2.6 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 11.8,4.3 Hz, 1H), 2.60–2.53 (m, 1H), 2.53–2.44 (m, 1H), 2.18–2.07 (m, 2H), 1.89–1.78 (m, 1H), 1.73–1.54 (m, 3H), 0.96 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz,CDCl3) δ 164.3 (d, J CF = 253.0 Hz), 145.1 (d, J CF = 1.5 Hz), 144.1, 138.3 (d,J CF = 8.7 Hz), 137.3, 131.0, 128.7, 124.9 (d, J CF = 3.6 Hz), 124.8, 118.0 (d,J CF = 22.1 Hz), 61.8, 53.4, 47.9, 44.1, 28.2, 23.1, 13.9. IR (薄膜): 3098,2971, 2877, 2804, 1593, 1554, 1520, 1491, 1455, 1393, 1338, 1291, 1227, 1171,1157, 1102, 1048, 1014, 942, 890, 837 cm–1. MS (ES-API) m/z: 440.1 (100%, [M+H]+, C19H23FN3O4S2要求440.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-(4-氟苯甲酰基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-057）
在5毫升烧瓶中装入醇DS-2-051（50毫克，0.13毫摩尔，1当量）、二氧化锰（109毫克，1.25毫摩尔，9.6当量）和干燥的二氯甲烷（2.5毫升）。所得黑色悬浮液在室温下搅拌。在6小时后，TLC分析显示原材料的不完全转化，并加入更多二氧化锰（109毫克，1.25毫摩尔，9.6当量）。在14小时后，该醇完全消耗，并经硅藻土过滤该反应混合物，用二氯甲烷洗涤直到滤液无色。将滤液在减压下浓缩以获得黄色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色油状的产物（47毫克，0.12毫摩尔，94%）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz,1H), 7.78–7.72 (m, 2H), 7.53 (bs, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15–7.08(m, 2H), 3.76 (ddd, J = 13.9, 7.2, 3.3 Hz, 1H), 3.43–3.36 (m, 1H), 3.25 (ddd,J = 9.6, 7.0, 2.8 Hz, 1H), 2.94–2.85 (m, 1H), 2.86–2.76 (m, 1H), 2.39–2.23(m, 2H), 2.03–1.89 (m, 1H), 1.85–1.60 (m, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13CNMR(100 MHz, CDCl3) δ 191.4, 166.3 (d, J CF = 257.0 Hz), 164.6, 146.7, 138.1,137.4, 132.7, 132.1 (d, J CF = 2.9 Hz), 132.0 (d, J CF = 9.6 Hz), 129.3, 123.5,116.3 (d, J CF = 22.2 Hz), 62.8, 53.6, 48.5, 41.0, 28.1, 23.1, 13.8. IR (薄膜):3075, 2971, 2877, 2803, 1668, 1598, 1538, 1506, 1412, 1349, 1299, 1281, 1241,1152, 938, 852 cm–1. MS (ES-API) m/z: 400.2 (100%, [M+H]+, C21H23FN3O4要求400.2)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-N-甲基-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-061）
在10毫升烧瓶中装入氢化钠（95%纯度，48毫克，2.00毫摩尔，2当量）和干燥的四氢呋喃（3毫升）并冷却至0℃。逐滴加入仲酰胺DS-1-033（403毫克，1.00毫摩尔，1当量）在干燥的四氢呋喃（2毫升）中的溶液，该黄色混合物在0℃下搅拌1小时，并在室温下搅拌0.5小时。向黄色悬浮液中逐滴引入碘甲烷（0.11毫升，1.20毫摩尔，1.2当量）在干燥的四氢呋喃（1.2毫升）中的溶液。在2小时后，通过TLC分析，该转化完全，该均匀反应混合物用水（10毫升）稀释。水相用乙酸乙酯（3 × 10毫升）萃取，合并的有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得橙色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得橙色油状的产物（183毫克，0.44毫摩尔，44%），其为两种旋转异构体的1:1.4混合物。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64* (s, 0.52H), 8.28† (s, 0.38H), 7.59–7.54(m, 2H), 7.48–7.39 (m, 1H), 7.22–7.16 (m, 2H), 6.81 (d, J = 7.6 Hz, 1H),3.75–3.67† (m, 0.38H), 3.46–3.35 (m, 1H), 3.25–3.14* (m, 0.48H), 3.07 (s, 4H,0.33H†), 2.93–2.62 (m, 2H), 2.41–2.13 (m, 2H, 0.57H*), 1.98–1.63 (m, 3H),1.15–1.00 (m, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 169.5*, 168.7†, 144.1 (2C),141.3†, 141.0*, 164.1 (d, J CF = 252.1 Hz, 2C), 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz, 2C),133.7 (2C), 132.9*, 132.1†, 128.1 (2C), 125.8*, 125.5†, 124.7 (2C), 117.7 (d,J CF = 22.0 Hz, 2C), 62.7, 61.5, 56.4, 53.8, 53.7, 52.1, 49.9, 49.3, 39.7,33.8, 29.8, 29.3, 29.1, 23.2, 23.0, 14.0. *和†标记该旋转异构体。IR (薄膜):2970, 2875, 2797, 1644, 1634, 1608, 1591, 1548, 1520, 1489, 1455, 1403, 1338,1290, 1226, 1157, 1108, 1092, 1050, 1014, 836 cm–1. MS (ES-API) m/z: 418.2(100%, [M+H]+, C21H25FN3O3S要求418.2)。
4-((4-羟基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（DS-2-073）
在装有回流冷凝器的250毫升烧瓶中，将4-氟-3-硝基苯甲酸（9.26克，50.0毫摩尔，1当量）和碳酸氢钠（4.41克，52.5毫摩尔，1.05当量）悬浮在水（100毫升）中。气体析出结束后，经5分钟引入4-巯基苯酚（6.62克，52.5毫摩尔，1.05当量），橙色反应混合物在90℃下搅拌。在4小时后，将所得黄色固体在室温下过滤并用水（200毫升）洗涤，在高真空下干燥以获得黄色粉末形式的产物（11.97克，41.09毫摩尔，82%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.51(s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.64 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz,1H), 7.44 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.01–6.88 (m, 3H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ165.4, 159.9, 145.1, 143.7, 137.7, 133.9, 127.9, 127.8, 126.5, 117.6, 117.1。
N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-4-氟-3-硝基苯甲酰胺盐酸盐（DS-2-077）
按照通用程序B-3，使用4-氟-3-硝基苯甲酸和N-乙基-N-(丙-2-炔-1-基)乙烷-1,2-二胺（参见DS-2-035）。米色固体（84%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.39 (s, 1H), 9.40(t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.68 (dd, J = 7.3, 2.2 Hz, 1H), 8.40 (ddd, J = 8.7, 4.2,2.3 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 11.1, 8.8 Hz, 1H), 4.30–4.18 (m, 2H), 3.82 (s,1H), 3.72 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 3.41–3.15 (m, 4H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 163.7, 156.3 (d, J CF = 266.1 Hz), 136.6 (d, J CF =7.7 Hz), 135.3 (d, J CF = 10.0 Hz), 130.8 (d, J CF = 3.7 Hz), 125.5 (d, J CF = 1.9Hz), 118.8 (d, J CF = 21.3 Hz), 81.4, 72.7, 50.7, 47.9, 40.9, 34.5, 8.8. IR (薄膜): 3204, 2948, 2480, 2125, 1661, 1652, 1621, 1538, 1495, 1470, 1456, 1352,1316, 1270 cm–1. MS (ES-API) m/z: 294.1 (100%, [M–Cl]+, C14H17FN3O3要求294.1)。
3-硝基-4-((4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)硫代)苯甲酸（DS-2-079）
在100毫升烧瓶中装入酚DS-2-073（2.91克，10.0毫摩尔，1当量）和氢氧化钠（1.20克，30.0毫摩尔，3当量）在乙醇（50毫升）中的溶液。向所得深紫色溶液中一次性加入炔丙基溴（80重量%在甲苯中，3.35毫升，30.0毫摩尔，3当量），该反应混合物在回流下加热。在3.5小时后，在室温下将黄色沉淀物过滤并用乙醇（3 × 50毫升）洗涤，在高真空下干燥以获得黄色粉末形式的产物（1.33克，4.05毫摩尔，41%）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.59 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.60–7.54 (m, 2H), 7.18–7.13(m, 2H), 6.73 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 2.3Hz, 1H). 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ 167.3, 158.9, 143.8, 139.2, 138.0, 137.4,134.4, 126.8, 125.9, 121.3, 116.8, 78.9, 78.8, 55.8. IR (薄膜): 1586, 1538,1404, 1327, 1179 cm–1. MS (ES-API) m/z: 328.0 (100%, [M–H]–, C16H10NO5S要求328.0)。
4-((4-叠氮基苯基)硫代)-N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-091）
在15毫升压力管中装入芳基氟DS-2-077（330毫克，1.00毫摩尔，1当量）、水（5毫升）、4-氨基苯硫酚（138毫克，1.10毫摩尔，1.1当量）和碳酸钾（290毫克，2.10毫摩尔，2.1当量）。将该管密封，该反应混合物在90℃下搅拌2小时并随后在室温下搅拌整夜。 该反应混合物用1M 氢氧化钠（15毫升）和二氯甲烷（20毫升）稀释。该有机相用1M 氢氧化钠（2 × 20毫升）、水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得橙色稠厚油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得橙色油状的苯胺（300毫克，0.75毫摩尔，75%）。
在10毫升烧瓶中装入该苯胺（300毫克，0.75毫摩尔，1当量）和2M 盐酸（3毫升）并冷却至0℃。逐滴加入亚硝酸钠（62毫克，0.90毫摩尔，1.2当量）在水（0.3毫升）中的溶液。在1小时后，逐滴引入叠氮化钠（73毫克，1.10毫摩尔，1.5当量）在水（0.6毫升）中的溶液，导致快速的气体析出。将该反应混合物缓慢升温至室温整夜并用水（15毫升）和二氯甲烷（20毫升）稀释，通过添加1M 氢氧化钠（9毫升）缓慢地碱化。水相用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。合并的有机层用水（20毫升）和盐水（20毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色固体形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–2.5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（210毫克，0.50毫摩尔，66%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.61 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.5Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H),3.52 (q, J = 5.3 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 2.78 (t, J = 5.8 Hz, 2H),2.62 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.5, 144.2, 143.3, 142.7, 137.5, 131.7, 131.6,128.2, 125.9, 124.2, 120.9, 78.3, 73.3, 51.4, 47.4, 41.4, 37.2, 12.7. IR (薄膜): 2971, 2130, 2096, 1637, 1608, 1589, 1548, 1520, 1488, 1464, 1338, 1293,1180, 1106, 1049, 832 cm–1. MS (ES-API) m/z: 425.1 (100%, [M+H]+, C20H21N6O3S要求425.1)。
N-(2-((4-苯甲酰基苄基)(乙基)氨基)乙基)-3-硝基-4-((4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-2-093）
在10毫升烧瓶中装入胺DS-2-111 (297毫克，0.74毫摩尔，1当量）、乙腈（4毫升）、碳酸钾（103毫克，0.74毫摩尔，1当量）和4-(溴甲基)二苯甲酮（205毫克，0.74毫摩尔，1当量）。将所得悬浮液剧烈搅拌16小时。将固体过滤，滤液在减压下浓缩以获得黄色固体形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–1% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（249毫克，0.42毫摩尔，56%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.58 (d, J = 1.9 Hz,1H), 7.76 – 7.69 (m, 5H), 7.59 (tt, J = 7.0, 7.0, 1.3 Hz, 1H), 7.52–7.41 (m,6H), 7.12–7.07 (m, 2H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.84 (bs, 1H), 4.77 (d, J =2.4 Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.49 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 2.72 (t, J = 5.7 Hz,2H), 2.66 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.13 (t, J = 7.0 Hz,3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 196.2, 164.4, 159.3, 144.4, 144.0, 137.6,137.5, 136.6, 132.4, 131.4, 131.0, 130.3, 129.9, 128.6, 128.3, 128.2, 123.9,121.5, 116.8, 77.8, 76.2, 57.8, 55.9, 51.6, 47.7, 37.3, 11.8. IR (薄膜):3063, 2970, 2934, 2818, 2122, 1660, 1652, 1645, 1607, 1548, 1520, 1494, 1463,1338, 1282, 1242, 1176, 1109, 1049, 1023, 925, 831 cm–1. MS (ES-API) m/z:594.2 (100%, [M+H]+, C34H32N3O5S要求594.2)。
4-(4-苯甲酰基苯氧基)-N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-097）
按照通用程序A-4，使用芳基氟DS-2-077和4-羟基二苯甲酮。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色油（88%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43(d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.91–7.86 (m, 2H), 7.82–7.77 (m, 2H), 7.63–7.58 (m, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.6Hz, 1H), 7.15–7.11 (m, 2H), 7.00 (bs, 1H), 3.56 (q, J = 5.1 Hz, 2H), 3.48 (d,J = 2.3 Hz, 2H), 2.86–2.80 (m, 2H), 2.67 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.27 (t, J =2.3 Hz, 1H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 195.4, 164.4,159.0, 151.7, 141.3, 137.6, 134.2, 133.2, 132.8, 132.7, 130.9, 130.0, 128.5,125.0, 121.5, 118.5, 78.1, 73.8, 51.7, 47.7, 41.5, 37.3, 12.7. IR (薄膜):3066, 2972, 2831, 1660, 1652, 1622, 1596, 1537, 1487, 1352, 1307, 1259, 1204,1167, 1150, 1082, 925 cm–1. MS (ES-API) m/z: 472.2 (100%, [M+H]+, C27H26N3O5要求472.2)。
4-(4-氟苯甲酰基)-3-硝基苯甲酸乙酯（DS-2-099)
在烘箱干燥的25毫升烧瓶中装入4-碘-3-硝基苯甲酸乙酯（3.21克，10.0毫摩尔，1当量），并排空和用氩气回填三遍。引入干燥的四氢呋喃（25毫升），将该烧瓶冷却至–40℃。经1小时逐滴加入苯基氯化镁（2M在四氢呋喃中，5.5毫升，11毫摩尔，1.1当量），该均匀溶液逐渐由黄色转向深灰色。在10分钟后，经30分钟逐滴引入4-氟苯甲醛（1.3毫升，12.0毫摩尔，1.2当量），该反应混合物逐渐转为暗红色。在30分钟后，移除冷却浴，该溶液在室温下搅拌6小时。加入饱和的氯化铵（10毫升），随后将该反应混合物倾入水（100毫升）中。该水相用乙酸乙酯（3 × 30毫升）萃取，合并的有机层用盐水（100毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得棕色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–25% 乙酸乙酯在己烷中）获得橙色油状的产物（3.02克），其不经进一步纯化用于下一步骤。
在100毫升烧瓶中装入醇（1.51克）、二氧化锰（8.69克，100毫摩尔，20当量）和干燥的二氯甲烷（50毫升）。所得黑色悬浮液在室温下搅拌。在40小时后，加入另外的二氧化锰（4.35克，50毫摩尔，10当量），该反应混合物在回流下加热。在4小时后，将该反应混合物在室温下经硅藻土过滤，用二氯甲烷洗涤直到滤液为无色。将滤液在减压下浓缩以获得黄色固体形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–10% EtOAc在己烷中）获得白色粉末状产物（869毫克，2.74毫摩尔，55%在两个步骤中）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 8.44 (dd, J = 7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.80–7.44 (m, 2H), 7.57 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.18–7.11 (m, 2H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 7.1Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 191.1, 166.3 (d, J CF = 257.1 Hz), 163.8,146.6, 139.4, 134.9, 133.2, 132.0, 131.9, 129.0, 125.7, 116.2 (d, J CF = 22.2Hz), 62.3, 14.3. IR (薄膜): 1726, 1678, 1598, 1537, 1349, 1284, 1240, 1151,1112, 1016, 940, 852 cm–1. MS (ES-API) m/z: 318.1 (100%, [M+H]+, C16H13FNO5要求318.1)。
4-(2-苯甲酰基苯氧基)-N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-101）
按照通用程序A-4，使用芳基氟DS-2-077和2-羟基二苯甲酮。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–2% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色油（34%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.25(d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.75–7.70 (m, 2H), 7.63–7.54 (m, 3H), 7.41 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 7.16–7.13 (m, 1H), 6.93 (d, J = 8.7Hz, 1H), 6.86 (bs, 1H), 3.51 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 2.3 Hz, 2H),2.79–2.75 (m, 2H), 2.62 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.23 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 1.08(t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 194.5, 164.4, 153.1, 152.0,139.5, 136.7, 133.6, 132.73, 132.69, 132.0, 130.9, 129.8, 129.3, 128.4,125.8, 124.6, 121.0, 119.0, 78.3, 73.3, 51.4, 47.4, 41.4, 37.2, 12.7. IR (薄膜): 3063, 2972, 2937, 2829, 1660, 1652, 1644, 1620, 1602, 1532, 1479, 1449,1352, 1317, 1294, 1264, 1200, 1183, 1149, 1104, 1079, 930 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 472.2 (100%, [M+H]+, C27H25N3O5要求472.2)。
4-(4-氟苯甲酰基)-3-硝基苯甲酸（DS-2-103）
在50毫升烧瓶中装入该乙酯（635毫克，2.00毫摩尔，1当量）、一水合氢氧化锂（168毫克，4毫摩尔，2当量）和水（10毫升）。所得悬浮液在回流下加热2小时。向所得均匀橙色溶液中逐滴加入1M 盐酸（4毫升），沉淀白色固体。将该反应混合物冷却至室温并过滤，用水（50毫升）洗涤以获得白色粉末形式的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–60% EtOAc在己烷中，1% AcOH）获得白色固体形式的产物（372毫克，1.29毫摩尔，64%）。1H NMR (400 MHz,DMSO-d 6) δ 13.94 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.41 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.87–7.83 (m, 2H), 7.81 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42–7.36 (m, 2H). 13C NMR(100 MHz,DMSO-d 6) δ 191.3, 165.6 (d, J CF = 253.9 Hz), 165.0, 146.2, 138.3, 135.2,133.6, 132.3 (d, J CF = 9.8 Hz), 132.0, 129.6, 125.4, 116.3 (d, J CF = 22.3 Hz).IR (薄膜): 1704, 1681, 1596, 1532, 1505, 1417, 1351, 1281, 1243, 1150, 857cm–1. MS (ES-API) m/z: 288.0 (100%, [M–H]–, C14H7FNO5要求288.0), 577.0 (20%,[2M–H]–)。
N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-4-(4-氟苯甲酰基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-107）
在装有回流冷凝器的10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入羧酸（145毫克，0.50毫摩尔，1当量）和亚硫酰氯（1.5毫升），并在回流下加热4小时。所得均匀混合物随后在减压下浓缩至干燥。获得的白色固体随后溶解在干燥的二氯甲烷（2毫升）中并蒸发该溶剂。该过程重复两遍，获得白色固体形式的该酰基氯。
在10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入该酰基氯、干燥的二氯甲烷（1.5毫升）和4-二甲氨基吡啶（1毫克，0.008毫摩尔，1摩尔%）并冷却至0℃。经10分钟逐滴加入N-乙基-N-(丙-2-炔-1-基)乙烷-1,2-二胺（参见DS-2-035）（95毫克，0.75毫摩尔，1.5当量）在干燥的二氯甲烷（1.5毫升）中的溶液，并将该反应混合物缓慢升温至室温。在16小时后，该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）和水（20毫升）稀释并用1M 氢氧化钠碱化以达到pH~12。该水相用二氯甲烷（3 × 10毫升）萃取。合并的有机层用水（30毫升）、盐水（30毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得黄色油状的粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得浅黄色油状的产物（169毫克，0.43毫摩尔，85%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.21 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.82–7.72 (m, 2H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.17–7.11 (m, 2H), 7.08 (bs, 1H),3.59 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 3.47 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 2.86–2.81 (m, 2H), 2.65(q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.27 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13CNMR(100 MHz, CDCl3) δ 191.2, 166.3 (d, J CF = 257.1 Hz), 164.1, 146.6, 138.0,137.3, 132.7, 132.0 (d, J CF = 3.1 Hz), 131.9 (d, J CF = 9.6 Hz), 129.2, 123.1,116.2 (d, J CF = 22.2 Hz), 78.3, 73.4, 51.4, 47.5, 41.4, 37.4, 12.7. IR (薄膜):3078, 2973, 2939, 2831, 2361, 1674, 1652, 1645, 1598, 1538, 1506, 1349, 1307,1281, 1241, 1184, 1152, 940, 852 cm–1. MS (ES-API) m/z: 398.2 (100%, [M+H]+,C21H21FN3O4要求398.1)。
N-(2-(乙基氨基)乙基)-3-硝基-4-((4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)硫代)苯甲酰胺（DS-2-111）
在装有回流冷凝器并配有干燥管的10毫升烘箱干燥的烧瓶中装入该羧酸DS-2-079（1.15克，3.50毫摩尔，1当量）和亚硫酰氯（3.5毫升）并加热至回流。在4小时后，在减压下将所得均匀混合物浓缩至干燥。获得的固体残余物随后溶解在干燥的二氯甲烷（3毫升）中并蒸发该溶剂。该过程重复两遍，获得黄绿色固体形式的该酰基氯。
引入干燥的二氯甲烷（2.3毫升）和4-二甲氨基吡啶（4毫克，0.04毫摩尔，1摩尔%），将烧瓶冷却至0℃。经15分钟逐滴加入N-乙基乙二胺（0.37毫升，3.50毫摩尔，1当量）在干燥的二氯甲烷（1.2毫升）中的溶液，所得黄色溶液缓慢升温至室温。在3小时后，该反应混合物浓缩至干燥。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（297毫克，0.74毫摩尔，21%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (d, J =1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.52–7.47 (m, 2H), 7.24 (s, 1H),7.11–7.07 (m, 2H), 6.86 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.53(q, J = 5.4 Hz, 2H), 2.91–2.84 (m, 2H), 2.69 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.58 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 2.29 (bs, 1H), 1.12 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz,CDCl3) δ 164.9, 159.4, 144.3, 144.1, 137.7, 131.8, 131.3, 128.2, 124.4,121.7, 116.9, 77.9, 76.4, 56.1, 48.1, 43.8, 39.6, 15.2. IR (薄膜): 3293,2969, 1652, 1644, 1607, 1591, 1574, 1548, 1520, 1494, 1463, 1338, 1290, 1242,1176, 1109, 1049, 1023, 926, 831 cm–1. MS (ES-API) m/z: 400.1 (100%, [M+H]+,C20H22N3O4S要求400.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-((4-氟苯基)硫代)-4-硝基苯甲酰胺（DS-2-115）
按照通用程序B-3，使用DS-2-113和2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷。所得悬浮液用二氯甲烷（10毫升）稀释，用饱和碳酸氢钠（2 × 5毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3)。黄色固体（85%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J =8.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.3, 5.4 Hz, 2H), 7.36 (bs, 1H), 7.16 (t, J = 8.4Hz, 2H), 3.65–3.54 (m, 1H), 3.32–3.18 (m, 2H), 2.86–2.71 (m, 2H), 2.39–2.23(m, 2H), 1.96–1.82 (m, 1H), 1.79–1.69 (m, 1H), 1.65–1.46 (m, 2H), 1.09 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.4, 164.1 (d, J CF = 252.0 Hz),146.1, 140.0, 138.9, 138.2 (d, J CF = 8.6 Hz), 127.0, 126.3, 125.7 (d, J CF =3.5 Hz), 123.7, 117.7 (d, J CF = 22.0 Hz), 62.9, 53.6, 48.7, 40.6, 28.1, 23.2,13.4. IR (薄膜): 3064, 2970, 2876, 2801, 1667, 1652, 1590, 1574, 1516, 1490,1456, 1336, 1306, 1224, 1156, 1111, 1014, 837 cm–1. MS (ES-API) m/z: 404.2(100%, [M+H]+, C20H23FN3O3S要求404.1)。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-121)
按照通用程序B-2，使用2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙胺。黄色固体（74%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.64 (s, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62–7.54 (m, 2H), 7.22(t, J = 8.5 Hz, 2H), 7.08 (bs, 1H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.56 (q, J =5.2 Hz, 2H), 2.72–2.49 (m, 10H), 2.34 (s, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ164.6, 164.3 (d, J CF = 252.3 Hz), 144.4, 143.5, 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz),131.9, 131.6, 128.3, 125.6 (d, J CF = 3.5 Hz), 124.4, 117.9 (d, J CF = 22.0 Hz),56.3, 54.8, 52.7, 46.0, 36.4. IR (薄膜): 3284, 2942, 2796, 1634, 1607, 1551,1520, 1490, 1456, 1334, 1286, 1228, 1168, 1106, 1091, 1049, 1012, 841 cm–1. MS(ES-API) m/z: 419.2 (100%, [M+H]+, C20H24FN4O3S要求419.2)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(2-(哌啶-1-基)乙基)苯甲酰胺（DS-2-125)
按照通用程序B-2，使用1-(2-氨乙基)哌啶。黄色固体（72%）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.72 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63–7.53 (m, 2H), 7.25–7.17(m, 2H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.65–3.55 (m, 2H), 2.70 (bs, 2H), 2.60(bs, 4H), 1.71 (bs, 4H), 1.52 (bs, 2H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.5, 164.2(d, J CF = 252.3 Hz), 144.4, 143.2, 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.8, 131.7,128.2, 125.6 (d, J CF = 3.5 Hz), 124.5, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 56.7, 54.3,36.6, 26.1, 24.3. IR (薄膜): 2940, 2782, 1634, 1608, 1591, 1538, 1520, 1506,1493, 1470, 1332, 1288, 1224, 1159, 1131, 1106, 1048, 834 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 404.1 (100%, [M+H]+, C20H23FN3O3S要求404.1)。
4-(2-(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁 酯（DS-2-127）
按照通用程序B-2，使用4-(2-氨乙基)-1-boc-哌嗪。黄色固体（79%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.63–7.53 (m, 2H), 7.25–7.18 (m,2H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.71–3.45 (m, 6H), 2.83–2.47 (m, 6 H), 1.46(s, 9H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.6, 164.2 (d, J CF = 252.4 Hz), 154.8,144.3, 143.4, 138.3 (d, J CF = 8.6 Hz), 131.7, 131.6, 128.2, 125.4 (d, J CF =3.2 Hz), 124.3, 117.8 (d, J CF = 22.0 Hz), 79.9, 56.4, 52.7, 43.6 (bs), 36.6,28.5. IR (薄膜): 3070, 2978, 2937, 2815, 1694, 1682, 1668, 1652, 1645, 1608,1590, 1548, 1520, 1462, 1424, 1366, 1338, 1293, 1243, 1159, 1131, 1050, 1005,837 cm–1. MS (ES-API) m/z: 505.2 (100%, [M+H]+, C24H30FN4O5S要求505.2)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)苯甲酰胺（DS-2-129）
在10毫升烧瓶中装入DS-2-127（505毫克，1.00毫摩尔，1当量），并引入三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液（20%，5毫升）。该反应混合物搅拌整夜并在减压下浓缩至干燥。该油状残余物溶解在二氯甲烷（20毫升）和饱和碳酸氢钠（20毫升）中。水相用二氯甲烷（2 × 10毫升）萃取，合并的有机层用盐水（30毫升）洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩以获得粗产物。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–20% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）获得黄色固体形式的产物（239毫克，0.59毫摩尔，59%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (d, J = 1.8 Hz,1H), 7.79 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.61–7.55 (m, 2H), 7.25–7.18 (m, 2H),6.95 (bs, 1H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.55 (q, J = 5.5 Hz, 2H), 2.98–2.93(m, 4H), 2.62 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.54 (s, 4H), 2.40 (bs, 1H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 164.6, 164.2 (d, J CF = 252.4 Hz), 144.2, 143.3, 138.3 (d, J CF =8.6 Hz), 131.8, 131.7, 128.2, 125.5 (d, J CF = 3.4 Hz), 124.4, 117.8 (d, J CF =22.0 Hz), 56.8, 53.8, 45.9, 36.4. IR (薄膜): 2945, 2821, 1652, 1634, 1608,1590, 1548, 1520, 1490, 1464, 1338, 1226, 1158, 1049, 837 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 405.1 (100%, [M+H]+, C19H22FN4O3S要求405.1)。
4-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（DS-2-143）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和4-氯-3-三氟甲基-苯硫酚。浅黄色固体（78%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.72–7.62 (m, 2H), 7.04 (bs, 1H), 6.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.72–3.60 (m, 1H), 3.29 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.18 (s, 1H), 2.85–2.75 (m, 1H),2.69 (s, 1H), 2.31–2.14 (m, 2H), 1.97–1.85 (m, 1H), 1.79–1.63 (m, 2H), 1.63–1.53 (m, 1H), 1.10 (t, J = 6.5 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 164.7,144.8, 141.0, 140.1, 135.0, 134.6 (q, J CF = 5.2 Hz), 133.5, 132.6, 131.8,130.4 (q, J CF = 32.0 Hz), 130.2, 128.3, 124.7, 122.2 (q, J CF = 274.0 Hz),62.1, 53.6, 48.1, 41.1, 28.3, 23.0, 14.1. IR (薄膜): 3096, 2970, 2801, 1644,1607, 1522, 1469, 1396, 1338, 1307, 1254, 1178, 1144, 1110, 1037 cm–1. MS (ES-API) m/z: 488.1 (100%, [M+H]+, C21H22ClF3N3O3S要求488.1)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-((3-(三氟甲基)苯基)硫代)苯甲酰胺（JCH-107）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和3-三氟苯硫酚。淡黄色固体（72%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83–7.76 (m, 3H), 7.68–7.62(m, 1H), 7.14 (bs, 1H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.9, 6.8,2.7 Hz, 1H), 3.36–3.30 (m, 1H), 3.22 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.83 (dq, J = 11.8,7.4 Hz, 1H), 2.74 (bs, 1H), 2.34–2.16 (m, 2H), 1.98–1.87 (m, 1H), 1.81–1.56(m, 3H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.8, 144.9,141.8, 139.3, 132.9 (q, J CF = 32.9 Hz), 132.6 (q, J CF = 3.7 Hz), 132.3, 132.1,131.8, 130.9, 128.5, 127.3 (q, J CF = 3.6 Hz), 124.7, 123.5 (q, J CF = 271.5),62.5, 53.7, 48.4, 40.8, 28.2, 23.1, 14.0. IR (薄膜): 3073, 2971, 2877, 2805,1644, 1608, 1548, 1523, 1338, 1323.5, 1306, 1170, 1130, 1111 cm–1. MS (ES-API)m/z: 454.1 (100%, [M+H]+, C21H23F3N3O3S要求454.1). mp: 136℃。
4-((3-氨基苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-109）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和3-氨基苯硫酚。所得双相混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和的碳酸氢钠、水和盐水洗涤，在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。橙色固体（64%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.27–7.22 (m, 1H), 7.12 (bs, 1H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 7.6 Hz,1H), 6.89–6.86 (m, 1H), 6.80 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.68(ddd, J = 13.8, 7.3, 2.9 Hz, 1H), 3.31 (dt, J = 14, 3.6 Hz, 1H), 3.23–3.17(m, 1H), 2.82 (dq, J = 12.1, 7.4 Hz, 1H), 2.75–2.68 (m, 1H), 2.32–2.17 (m,2H), 1.96–1.86 (m, 1H), 1.77–1.55 (m, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR(100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 148.2, 144.4, 143.8, 131.5, 131.4, 131.2, 130.8,128.7, 125.5, 124.5, 121.6, 117.0, 62.5, 53.6, 48.3, 40.9, 28.2, 23.1, 14.0.IR (薄膜): 3095, 2969, 2876, 2809, 1644, 1607, 1594, 1546, 1519, 1482, 1465,1337, 1294, 1049 cm–1. MS (ES-API) m/z: 401.1 (38%, [M+H]+, C20H25N4O3S要求401.2). mp: 56–62℃。
4-((2-氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-111）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-氯苯硫酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色固体（62%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.6Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.51–7.46 (m, 1H), 7.42–7.37 (m, 1H), 7.17(bs, 1H), 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.69 (ddd, J = 13.8, 7.3, 3.0 Hz, 1H),3.32 (dt, J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 3.25–3.18 (m, 1H), 2.83 (dq, J = 12.1, 7.4Hz, 1H), 2.77–2.70 (m, 1H), 2.34–2.19 (m, 2H), 1.97–1.87 (m, 1H), 1.79–1.56(m, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 165.0, 144.6,141.1, 140.2, 138.3, 132.3, 132.0, 131.7, 131.2, 129.4, 128.5, 127.9, 124.8,62.6, 53.6, 48.4, 40.8, 28.2, 23.1, 13.9. IR (薄膜): 3063, 2970, 2876, 2805,1651, 1608, 1548, 1520, 1465, 1451, 1338, 1295, 1243, 1036, 748 cm–1. MS (ES-API) m/z: 420.1 (100% [M+H]+, C20H23ClN3O3S要求420.1). mp: 135–137℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(邻甲苯基硫代)苯甲酰胺（JCH-114）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-甲基苯硫酚。将该黄色沉淀物过滤，溶解在二氯甲烷中，用1M 氢氧化钠（3×）、水和盐水洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。淡黄色固体（31%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.6,2.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.47–7.38 (m, 2H), 7.33–7.28 (m, 1H),7.22 (bs, 1H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J = 13.9, 7.4, 3.1 Hz,1H), 3.32 (dt, J = 13.9, 3.5 Hz, 1H), 3.24–3.18 (m, 1H), 2.83 (dq, 12.0, 7.4Hz, 1H), 2.77–2.70 (m, 1H), 2.34–2.18 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.96–1.86 (m,1H), 1.79–1.56 (m, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ165.1, 144.6, 143.4, 142.6, 137.3, 131.64, 131.60, 131.4, 131.2, 129.2,127.9, 127.6, 124.8, 62.7, 53.6, 48.4, 40.8, 28.2, 23.1, 20.6, 13.9. IR (薄膜): 3063, 2970, 2876, 2804, 1643, 1608, 1547, 1521, 1467, 1338, 1294, 1048,750 cm–1. MS (ES-API) m/z: 400.2 (100% [M+H]+, C21H26N3O3S要求400.2). mp: 88–91℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((2-甲氧基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-117）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-甲氧基苯硫酚。将该黄色沉淀物过滤，溶解在二氯甲烷中，用1M 氢氧化钠（3×）、水和盐水洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。淡黄色固体（28%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.59–7.50 (m, 2H), 7.43 (s, 1H), 7.09–7.01 (m, 2H), 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H),3.77 (s, 3H), 3.75–3.67 (m, 1H), 3.42–3.35 (m, 1H), 3.32–3.26 (m, 1H), 2.93–2.82 (m, 2H), 2.43–2.28 (m, 2H), 2.00–1.90 (m, 1H), 1.83–1.61 (m, 3H), 1.16(t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 165.2, 160.3, 144.6, 142.8,137.9, 132.9, 131.3, 131.1, 128.1, 124.8, 122.0, 117.6, 112.0, 63.3, 56.1,53.7, 48.9, 40.8, 28.1, 23.2, 13.5. IR (薄膜): 3272, 3068, 2969, 2803, 1638,1608, 1549, 1521, 1476, 1341, 1295, 1276, 1250, 751 cm–1. MS (ES-API) m/z:416.2 (100%, [M+H]+, C21H26N3O4S要求416.2). mp: 104–107℃。
4-((2,4-二氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-120）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2,4-二氯苯硫酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。淡黄色固体（44%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.3Hz, 1H), 7.61 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 7.06 (bs,1H), 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.68 (ddd, J = 13.8, 7.3, 2.7 Hz, 1H), 3.33–3.27 (m, 1H), 3.22–3.16 (m, 1H), 2.81 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.73–2.66(m, 1H), 2.31–2.16 (m, 2H), 1.96–1.86 (m, 1H), 1.79–1.54 (m, 3H), 1.11 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 144.7, 141.1, 140.4, 138.9,138.0, 132.4, 131.8, 131.1, 128.9, 128.1, 127.8, 124.8, 62.2, 53.6, 48.2,40.9, 28.3, 23.1, 14.1. IR (薄膜): 3081, 2970, 2938, 2876, 2804, 1644, 1607,1548, 1520, 1454, 1338, 1294, 1243, 1098, 1049, 815, 737 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 454.1 (100%, [M+H]+, C20H22Cl2N3O3S要求454.1). mp: 135–137℃。
4-((3,5-二氯苯基)硫代)-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-124）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和3,5-二氯苯硫酚。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。淡黄色固体（61%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.51–7.49 (m, 1H),7.48–7.46 (m, 2H), 7.21 (bs, 1H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J =13.8, 7.4, 3.0 Hz, 1H), 3.35–3.29 (m, 1H), 3.23–3.17 (m, 1H), 2.88–2.78 (m,1H), 2.76–2.70 (m, 1H), 2.33–2.19 (m, 2H), 1.97–1.87 (m, 1H), 1.79–1.56 (m,3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.8, 144.9, 141.0,136.6, 133.9, 133.7, 132.6, 131.9, 130.8, 128.7, 124.7, 62.5, 53.6, 48.3,40.8, 28.1, 23.1, 14.0. IR (薄膜): 3072, 2970, 2938, 2805, 1644, 1608, 1559,1522, 1466, 1406, 1339, 1294, 1141, 1106, 1048, 800, 736 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 454.1 (100%, [M+H]+, C20H22Cl2N3O3S要求454.1). mp: 44–47℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基-4-(喹啉-2-基硫代)苯甲酰胺（JCH-127）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-喹啉硫醇。该反应混合物用二氯甲烷稀释，用1M 氢氧化钠（3×）、水和盐水洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0-10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3)。黄色固体（41%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.60 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.89–7.82 (m, 2H), 7.77–7.72 (m, 1H), 7.59 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.52–7.47 (m, 2H), 7.18 (bs, 1H), 3.75–3.67 (m, 1H), 3.38–3.31 (m, 1H), 3.22 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 2.89–2.79 (m, 1H), 2.78–2.70 (m, 1H), 2.34–2.17 (m, 3H), 1.99–1.88 (m, 1H), 1.82–1.58 (m, 3H), 1.31 (t, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz,CDCl3) δ 164.9, 155.1, 148.7, 147.5, 137.8, 136.6, 133.7, 132.1, 131.2,130.6, 129.1, 127.8, 127.5, 127.2, 124.2 (2C), 62.4, 53.6, 48.3, 40.9, 28.1,23.0, 14.0. IR (薄膜): 3067, 2970, 2876, 2807, 1652, 1608, 1589, 1524, 1467,1422, 1340, 1295, 1138, 1097, 910, 733 cm–1. MS (ES-API) m/z: 437.2 (58%, [M+H]+, C23H25N4O3S要求437.2). mp: 40–43℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((3-羟基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-140）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和3-巯基酚。该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）和甲醇（5毫升）稀释，用饱和碳酸氢钠（3 × 10毫升）、水（10毫升）和盐水（10毫升）洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。橙色固体（14%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J =1.6 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.60 (bs, 1H), 7.32 (t, J = 8.0Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03–7.00 (m, 1H), 6.98–6.94 (m, 1H), 6.89(d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.26 (bs, 1H), 3.79–3.71 (m, 1H), 3.43 (dd, J = 14.1,3.8 Hz, 1H), 3.32–3.25 (m, 1H), 2.96–2.84 (m, 2H), 2.45–2.30 (m, 2H), 2.02–1.92 (m, 1H), 1.85–1.62 (m, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz,CDCl3) δ 165.7, 158.7, 144.3, 144.0, 131.5, 131.4, 130.9, 130.7, 128.5,126.9, 124.6, 123.1, 118.7, 63.5, 53.6, 48.9, 40.9, 27.9, 23.0, 13.4. IR (薄膜): 3066, 2972, 2811, 1652, 1645, 1607, 1548, 1520, 1464, 1456, 1338, 1301,1262, 1242, 1049, 736 cm–1. MS (ES-API) m/z: 402.2 (100% [M+H]+, C20H24N3O4S要求402.1). mp: 77–80℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((2-羟基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-143）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-巯基酚。该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）和甲醇（5毫升）稀释，用饱和碳酸氢钠（3 × 10毫升）、水（10毫升）和盐水（10毫升）洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（5–10% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。橙色固体（54%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.60 (s, 1H),7.88 (bs, 1H), 7.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.41 (bs, 1H), 3.80–3.70 (m, 1H), 3.45–3.37 (m, 1H), 3.31–3.24(m, 1H), 2.98–2.83 (m, 2H), 2.45–2.31 (m, 2H), 1.97–1.85 (m, 1H), 1.82–1.68(m, 2H), 1.67–1.57 (m, 1H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ 165.1, 161.6, 144.5, 142.1, 137.5, 133.4, 131.01, 130.99, 127.7, 125.4,119.9, 118.8, 115.5, 64.7, 53.4, 49.0, 40.1, 27.4, 22.9, 12.7. IR (薄膜):3286, 3060, 2971, 2877, 2806, 1643, 1606, 1544, 1520, 1454, 1387, 1338, 1290,1255, 1050, 844, 753, 736 cm–1. MS (ES-API) m/z: 402.2 (100%, [M+H]+,C20H24N3O4S要求402.1). mp: 109–113℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((3-甲氧基苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-146）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和3-甲氧基苯硫酚。橙色固体（67%）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H),7.41 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.13–7.03 (m, 2H), 6.96(d, 8.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.69 (ddd, J = 13.8, 7.3, 3.0 Hz, 1H), 3.36–3.28 (m, 1H), 3.22 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 2.83 (dq, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 2.73(bs, 1H), 2.34–2.18 (m, 3H), 1.98–1.86 (m, 1H), 1.80–1.56 (m, 3H), 1.13 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 165.1, 160.8, 144.4, 143.3, 131.7,131.5, 131.24, 131.21, 128.5, 128.1, 124.5, 120.8, 116.6, 62.4, 55.6, 53.6,48.3, 40.9, 28.2, 23.1, 14.0. IR (薄膜): 3069, 2969, 2876, 2806, 1643, 1608,1590, 1548, 1521, 1467, 1338, 1285, 1248, 1040, 748, 736 cm–1. MS (ES-API) m/ z: 416.2 (100%, [M+H]+, C21H26N3O4S要求416.2). mp: 103–105℃。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((2-(羟甲基)苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（JCH-149）
按照通用程序A-3，使用芳基氟DS-1-153和2-巯基苄醇。该反应混合物用二氯甲烷（20毫升）和甲醇（5毫升）稀释，用饱和碳酸氢钠（3 × 10毫升）、水（10毫升）和盐水（10毫升）洗涤。有机层在无水硫酸镁上干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法在硅胶上纯化（0–5% MeOH在DCM中，MeOH含有1% NH3）。黄色固体（40%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.72 (s, 1H),7.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60–7.55 (m, 2H), 7.46–7.31 (m, 2H), 6.73 (dd, J = 8.8, 0.8 Hz, 1H), 4.75 (s, 2H), 3.76–3.69 (m,1H), 3.40–3.32 (m, 1H), 3.29–3.21 (m, 1H), 2.92–2.77 (m, 2H), 2.60 (bs, 1H),2.39–2.23 (m, 2H), 1.98–1.88 (m, 1H), 1.80–1.59 (m, 3H), 1.15 (t, J = 6.8 Hz,3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.9, 145.5, 144.5, 142.1, 137.3, 131.52,131.48, 131.3, 129.2, 128.8, 127.7, 127.6, 124.9, 62.8, 62.5, 53.5, 48.4,40.5, 27.6, 22.8, 13.7. IR (薄膜): 3068, 2972, 2877, 2814, 1648, 1608, 1547,1522, 1466, 1339, 1295, 1047, 910, 733 cm–1. MS (ES-API) m/z: 416.2 (100%, [M+H]+, C21H26N3O4S要求416.2). mp: 59–63℃。
2-((4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯（WW3-79）
将4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（0.7478克， 2.55毫摩尔）、DMAP (0.0669克，0.55毫摩尔）、EDC盐酸盐（0.5371克，2.80毫摩尔）和CH2Cl2（12毫升）的混合物在室温下搅拌1小时。随后加入在CH2Cl2（2毫升）中的2-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯（0.5012克，2.51毫摩尔），所得溶液在室温下搅拌21小时。该反应溶液用CH2Cl2（30毫升）稀释，并相继用饱和NaCl水溶液（30毫升）和饱和NaHCO3水溶液（30毫升）稀释。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物经快速色谱法在硅胶上纯化（1:19 MeOH:CH2Cl2）以获得黄色凝胶形式的标题产物（0.8348克，70%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.90 (s, 1 H), 8.72 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.54 (dd, J = 8.7, 5.3 Hz, 2 H), 7.17 (t, J =8.6 Hz, 2 H), 6.81 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 4.15 (t, J = 9.8 Hz, 1 H), 3.53 (d,J = 13.5 Hz, 1 H), 3.47 – 3.20 (m, 3 H), 2.05 (dt, J = 17.2, 8.5 Hz, 1 H),1.96 – 1.80 (m, 2 H), 1.71 (s, 1 H), 1.44 (s, 9 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ164.3, 164.0 (d, J = 252.0 Hz, 157.5, 144.4, 142.6, 138.1 (d, J = 8.7 Hz),131.8, 131.4, 127.9, 125.7 (d, J = 3.7 Hz), 124.3, 117.5 (d, J = 22.0 Hz),80.7, 56.0, 47.7, 47.4, 29.6, 28.4, 24.0. MS (ESI) m/z 376.1 (100%, [M+H-Boc]+)。
4-((4-氟苯基)硫代)-N-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺（WW3-107）
WW3-79（0.3116克，0.66毫摩尔）和HCl（4 M在1,4-二氧杂环己烷中，12毫升）的混合物在室温下搅拌2.5小时，随后缓慢倾入4 N NaOH（35毫升）溶液中。所得溶液用CH2Cl2（3 ×35毫升）萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得脱保护胺，其直接用于下一步骤而不进行进一步的纯化。
上述脱保护胺、甲醛（37%，0.1914克，2.36毫摩尔）、AcOH（0.05毫升，0.87毫摩尔）、CH3OH（12毫升）和NaBH(OAc)3（0.3188克，1.47毫摩尔）的混合物在室温下搅拌17小时。该反应溶液随后缓慢倾入饱和的NaHCO3水溶液（35毫升）中并用DCM（3×35毫升）萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化（1:19MeOH:CH2Cl2）以获得黄色固体形式的标题产物（0.1837克，72%两个步骤）。mp 101 – 103℃； 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1 H), 7.80 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1 H),7.60 – 7.46 (m, 2 H), 7.26 – 7.13 (m, 3 H), 6.84 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.76(ddd, J = 14.0, 7.6, 3.1 Hz, 1 H), 3.32 (d, J = 13.7 Hz, 1 H), 3.14 (s, 1 H),2.60 (s, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 2.37 – 2.25 (m, 1 H), 1.94 (dq, J = 12.6, 8.1Hz, 1 H), 1.81 – 1.57 (m, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 164.9, 164.06 (d, J= 252.4 Hz), 144.3, 143.1, 138.2 (d, J = 8.7 Hz), 131.5, 128.1, 125.4 (d, J =3.7 Hz), 124.6, 117.7 (d, J = 22.0 Hz), 64.4, 57.1, 40.5, 40.0, 28.0, 22.9.MS (ESI) m/z 390.1 (100%, [M+H]+)。
N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基-N-(丙-2-炔-1-基)苯甲酰胺（WW2-292）
将DS-1-033（0.1355克，0.34毫摩尔）溶解在无水DMF（2.0毫升）中，接着在0℃下加入NaH（60%，0.0272克，0.68毫摩尔）。该烧瓶随后立即用氩气冲洗并用装有氩气球的橡胶隔膜密封。该反应溶液在0℃下搅拌8分钟，并经注射器加入炔丙基溴（80%在甲苯中，0.041毫升，0.37毫摩尔）。所得溶液在0℃下搅拌3小时，通过缓慢加入水（25毫升）并随后加入EtOAc（25毫升）来淬灭该反应。所得双相溶液通过20% LiCl溶液（3×25毫升）和盐水（25毫升）洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。在硅胶上的快速色谱法（1:19 甲醇:CH2Cl2）提供了棕色油状的作为两种旋转异构体的混合物的所需产物（0.0722克，49%）。该旋转异构体在50℃下聚结。1H NMR (400 MHz, CDCl3, 50℃) δ 8.45 (s, 1 H), 7.62 – 7.52 (m,2 H), 7.46 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.22 – 7.11 (m, 2 H), 6.84 (d, J = 8.4Hz, 1 H), 4.30 (s, 2 H), 3.49 (d, J = 51.7 Hz, 2 H), 3.05 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 2.91 – 2.64 (m, 2 H), 2.43 – 2.23 (m, 2 H), 2.18 (td, J = 9.2, 7.2 Hz, 1H), 1.86 (dq, J = 12.3, 8.2 Hz, 1 H), 1.75 – 1.39 (m, 3 H), 1.04 (t, J = 7.2Hz, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3, 50℃) δ 169.1, 164.0 (d, J = 252.3 Hz),144.5, 141.4, 138.0 (d, J = 8.6 Hz), 132.7, 132.0, 128.1, 125.7 (d, J = 3.7Hz), 124.8, 117.5 (d, J = 22.1 Hz), 78.4, 73.5, 62.8, 53.3, 49.3, 28.9, 22.7,12.8. MS (ESI) m/z 442.2 (100%, [M+H]+)。
(2-(乙基(2-羟乙基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将2-(乙基氨基)乙醇（0.9173克，10.31毫摩尔）和(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯（2.4964克，11.14毫摩尔）溶解在CH3CN（12毫升）中，接着加入碳酸钾（2.0617克，14.84毫摩尔）。形成的悬浮液在50℃下剧烈搅拌20小时，并随后经硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤。在真空中除去溶剂，残余物溶解在DCM（3毫升）中并通过硅胶短垫纯化，用19:1 DCM/甲醇的混合物洗脱以获得无色凝胶形式的标题产物（2.1548克，90%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.55 (t, J= 5.3 Hz, 2 H), 3.17 (q, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.69 – 2.49 (m, 6 H), 1.41 (s, 9H), 1.01 (t, J = 7.1 Hz, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 156.2, 58.8, 55.3,53.0, 47.7, 40.6, 38.5, 28.3, 11.5. MS (ESI) m/z 233.2 (100%, [M+H]+)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸2-(乙基(2-(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)乙基)氨基)乙酯
将(2-(乙基(2-羟乙基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯（0.2921克，1.26毫摩尔）、HCl（37%，2毫升）和1,4-二氧杂环己烷（6毫升）的混合物在室温下搅拌4小时。在除去过量HCl和溶剂后，残余物通过2N NaOH溶液中和，用DCM（3×30毫升）萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩至大约6毫升。
向装有回流冷凝器的火焰干燥的烧瓶中加入4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（0.2970克，1.01毫摩尔）和亚硫酰氯（6毫升）。所得反应溶液在回流下搅拌4小时。在冷却至室温后，在减压下蒸发过量的亚硫酰氯以获得黄色固体形式的酰基氯中间体。
在0℃下向上述脱保护胺在DCM中的溶液中加入Et3N（0.30毫升，2.16毫摩尔），接着在5分钟内分份加入酰基氯中间体。所得溶液在0℃下搅拌1小时并随后在室温下再搅拌1小时。将该反应溶液转移到分液漏斗中并加入25毫升饱和的NaHCO3溶液。所得双相溶液用DCM（3×25毫升）萃取，合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。在硅胶上的快速色谱法（1:19 甲醇:CH2Cl2）提供黄色凝胶形式的标题产物（0.2529克，37%）。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.62 (s, 1 H), 8.48 (s, 1 H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.66(d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.61 – 7.49 (m, 4 H), 7.20 – 7.10 (m, 5 H), 6.81 – 6.68(m, 2 H), 4.39 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.45 (q, J = 5.4 Hz, 2 H), 2.83 (t, J =5.3 Hz, 2 H), 2.71 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 2.59 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 0.99 (t,J = 7.0 Hz, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 164.4, 164.3, 164.1 (d, J = 252.4Hz). 164.0 (d, J = 252.2 Hz), 145.5, 145.4, 143.8, 143.1, 138.2 (d, J = 8.6Hz), 138.2 (d, J = 8.7 Hz), 133.2, 131.6, 131.3, 127.8, 126.9, 126.8, 125.3(d, J = 3.4 Hz), 124.9 (d, J = 3.5 Hz), 124.2, 117.8 (d, J = 22.1 Hz). 117.6(d, J = 22.0 Hz), 63.7, 52.5, 52.3, 48.2, 37.6, 12.2. MS (ESI) m/z 683.2(30%, [M+H]+)。
N-(2-(乙基(2-羟乙基)氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰胺（WW3-62）
向15毫升烧瓶中加入4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸2-(乙基(2-(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)乙基)氨基)乙酯（0.1262克，0.18毫摩尔）、水（3毫升）、NaOH（0.0905克，2.26毫摩尔）、THF（1毫升）和甲醇（1毫升）。该反应溶液在50℃下搅拌3小时并用水（20毫升）稀释，接着用DCM（3×25毫升）萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得黄色凝胶形式的所需产物（0.0507克，67%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.64 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 7.79 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H), 7.63 – 7.44 (m, 3H), 7.17 (t, J = 8.6 Hz, 2 H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.61 (t, J = 5.2Hz, 2 H), 3.47 (q, J = 5.6 Hz, 2 H), 2.91 (s, 1 H), 2.69 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.67 – 2.55 (m, 4 H), 0.99 (t, J = 7.1 Hz, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ164.7, 164.0 (d, J = 250.9 Hz), 144.0, 143.0, 143.0, 138.1 (d, J = 8.6 Hz),131.9, 131.5, 127.91, 125.4 (d, J = 3.7 Hz), 124.3, 117.6 (d, J = 22.0 Hz),59.5, 55.1, 52.0, 48.0, 38.4, 11.6. MS (ESI) m/z 408.2 (100%, [M+H]+)。
3-叠氮基-N-((1-乙基吡咯烷-2-基)甲基)-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（WW3-57）
向含有DS-1-225（0.1423克，0.38毫摩尔）的25毫升烧瓶中加入6 M HCl（1.5毫升）、THF（1.5毫升）和DMF（0.8毫升）。将该混合物冷却至0℃并加入NaNO2（0.0346克，0.50 毫摩尔）。该反应溶液在0℃下搅拌50分钟，并加入在水（0.6毫升）中的NaN3（0.0398克，0.61毫摩尔）。随后使所得溶液升温至室温并搅拌整夜，接着加入1 N NaOH（30毫升）。该溶液用CH2Cl2（3×30毫升）萃取，合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该残余物溶解在EtOAc（30毫升）中，用10% LiCl溶液（30毫升）和盐水（3×30毫升）洗涤以获得浅棕色凝胶形式的标题产物（0.1298克，85%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.91 (s, 1 H), 7.75 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.52 – 7.39 (m, 3 H), 7.14 – 7.04 (m, 2 H), 6.76 (d, J = 8.3 Hz, 1 H),3.73 (ddd, J = 14.3, 7.1, 5.3 Hz, 1 H), 3.60 – 3.36 (m, 2 H), 3.13 (s, 1 H),3.03 – 2.90 (m, 1 H), 2.71 – 2.35 (m, 2 H), 2.11 – 1.94 (m, 1 H), 1.91 – 1.81(m, 2 H), 1.75 (dt, J = 12.6, 6.4 Hz, 1 H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3 H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 166.2, 163.3 (d, J = 250.2 Hz), 137.3, 136.7 (d, J = 8.4Hz), 133.9, 132.5, 128.0, 126.1 (d, J = 3.5 Hz), 123.3, 117.0 (d, J = 22.0Hz), 116.9, 64.6, 53.7, 49.7, 40.4, 27.9, 23.3, 12.4. MS (ESI) m/z 400.2(100%, [M+H]+)。
4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸乙酯
将4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（0.8795克，3.00毫摩尔）、DMAP（0.0814克，0.67毫摩尔）、EDC盐酸盐（0.6330克，3.30毫摩尔）和CH2Cl2（7毫升）的混合物在室温下搅拌30分钟。随后加入乙醇（0.7102克，15.44毫摩尔），所得溶液在室温下搅拌24小时。该反应溶液用CH2Cl2（30毫升）稀释，用盐水（30毫升）和2 N NaOH溶液（30毫升）洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化（10:1 己烷:EtOAc）以获得黄色固体形式的标题产物（0.8088克，84%）。mp 112 – 115℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.83 (d, J = 1.6 Hz, 1 H), 7.94 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1 H), 7.69 – 7.44 (m, 2H), 7.26 – 7.12 (m, 2 H), 6.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 4.37 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ164.3, 164.10 (d, J =252.4 Hz), 145.0, 144.3, 138.2 (d, J = 8.7 Hz), 133.5, 127.8, 127.6, 127.0,125.3 (d, J = 3.6 Hz), 117.7(d, J = 22.0 Hz), 61.7, 14.2。
3-氨基-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酸乙酯
向50毫升烧瓶中加入4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸乙酯（0.2132克，0.66毫摩尔）、甲醇（5毫升）和Pd/C（2刮勺，10%在活性炭上）。该反应烧瓶用隔膜密封，在真空除去空气后，在隔膜顶部装备氢气球。该反应悬浮液随后在室温下搅拌15小时，并经硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤。将滤液在减压下浓缩以提供黄色凝胶形式的所需产物（0.1856克，>95%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (s, 1 H), 7.38 (s, 2 H), 7.15 (dd, J = 8.8, 5.1Hz, 2 H), 6.96 (t, J = 8.7 Hz, 2 H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.38 (t, J =7.1 Hz, 3 H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 166.3, 161.7 (d, J = 246.3 Hz),147.6, 135.6, 132.2, 130.1 (d, J = 8.0 Hz), 129.4, 121.2, 119.3 (d, J = 2.2Hz), 116.3 (d, J = 22.2 Hz), 116.1, 61.1, 14.3. MS (ESI) m/z 292.1(100%, [M+H]+)。
3-叠氮基-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酸
3-氨基-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酸乙酯（0.1674克，0.58毫摩尔）、LiOH · H2O（0.1496克，56%，1.99毫摩尔）、THF（5毫升）和水（3毫升）的混合物在72℃下搅拌2.5小时。该反应溶液冷却至室温并随后在冰水浴中冷却至0℃。随后使用6 N HCl溶液将该反应溶液酸化至pH = 1，并在0℃下加入NaNO2（0.0505克，0.73毫摩尔）。所得溶液在0℃下搅拌25分钟，并加入NaN3（0.0623克，0.96毫摩尔）。该反应溶液随后逐渐升温至室温并搅拌整夜。该反应混合物用15毫升水稀释并用CH2Cl2（3×25毫升）萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得橙色固体形式的标题产物（0.1322克，79%两个步骤）。mp 156 – 158℃；1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (d, J = 1.7 Hz, 1 H), 7.65 (dd, J = 8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 8.6, 5.3 Hz, 2 H), 7.15 (t, J = 8.6 Hz, 2 H), 6.73 (d, J =8.3 Hz, 1 H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 170.9, 163.6 (d, J = 251.5 Hz),137.9, 137.4 (d, J = 8.6 Hz), 136.5, 127.2, 126.9, 126.8, 125.1 (d, J = 3.5Hz), 119.3, 117.3 (d, J = 22.0 Hz). MS (ESI) m/z 288.0 (100%, [M-H]-)。
3-叠氮基-N-(2-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酰胺（WW3-77）
将3-叠氮基-4-((4-氟苯基)硫代)苯甲酸（0.1231克， 0.43毫摩尔）、DMAP（0.0153克，0.13毫摩尔）、EDC盐酸盐（0.0886克，0.46毫摩尔）和CH2Cl2 (3毫升）的混合物在室温下搅拌20分钟。随后加入在DCM（1毫升）中的N 1-乙基-N 1-(丙-2-炔-1-基)乙烷-1,2-二胺（0.0520克，0.41毫摩尔），所得溶液在室温下搅拌20小时。该反应溶液用CH2Cl2（25毫升）稀释，用盐水（25毫升）和饱和的NaHCO3溶液（25毫升）洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化（1:19 MeOH:CH2Cl2）以获得橙色凝胶形式的标题产物（0.1364克，83%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.61 (d, J = 1.7 Hz, 1 H), 7.45(dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 2 H), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1 H), 7.10 (t, J = 8.6Hz, 2 H), 6.85 (s, 1 H), 6.75 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 3.48 (dd, J = 11.4, 4.9Hz, 2 H), 3.40 (d, J = 2.4 Hz, 2 H), 2.74 (dd, J = 6.4, 5.3 Hz, 2 H), 2.58(q, J = 7.2 Hz, 2 H), 2.19 (t, J = 2.3 Hz, 1 H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 165.9, 163.3 (d, J = 250.2 Hz), 137.3, 136.6 (d, J =8.4 Hz), 133.8, 133.3, 128.1, 126.2 (d, J=3.4 Hz), 123.0, 117.5, 117.0 (d, J = 22.1 Hz), 78.2, 73.3, 51.4, 47.3, 41.2, 37.1, 12.7. MS (ESI) m/z 398.2(100%, [M+H]+)。
4-苯甲酰基苯甲酸2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(丙-2-炔-1-基)氨基)乙酯
将4-苯甲酰基苯甲酸（0.2009克，0.89毫摩尔）、DMAP（0.0344克，0.28毫摩尔）、EDC盐酸盐（0.1758克，0.92毫摩尔）和CH2Cl2（5毫升）的混合物在室温下搅拌1小时。随后加入在CH2Cl2（2毫升）中的(2-((2-羟乙基)(丙-2-炔-1-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯（0.1952克，0.81毫摩尔），所得溶液在室温下搅拌18.5小时。该反应溶液用CH2Cl2（25毫升）稀释，用盐水（30毫升）和饱和的NaHCO3溶液（30毫升）洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化（1:19 MeOH:CH2Cl2）以获得无色凝胶形式的标题产物（0.3031克，83%）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.82(d, J = 8.2 Hz, 2 H), 7.78 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1 H),7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2 H), 4.43 (t, J = 5.5 Hz, 2 H), 3.48 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.94 (t, J = 5.6 Hz, 2 H), 2.71 (t, J = 5.9Hz, 2 H), 2.21 (t, J = 2.3 Hz, 1 H), 1.38 (s, 9 H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ195.9, 165.8, 155.9, 141.3, 136.9, 133.1, 132.9, 130.1, 129.8, 129.5, 128.4,78.1, 73.5, 63.2, 52.8, 51.9, 42.4, 37.8, 28.8, 28.4. MS (ESI) m/z 451.2(100%, [M+H]+)。
4-苯甲酰基苯甲酸2-((2-(4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酰氨基)乙基)(丙-2-炔-1-基)氨基)乙酯（WW3-80）
将4-苯甲酰基苯甲酸2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(丙-2-炔-1-基)氨基)乙酯（0.1818克，0.40毫摩尔）溶解在无水CH2Cl2（2.5毫升）中，接着加入三氟乙酸（1毫升，13.06毫摩尔）。所得溶液在室温下搅拌3小时并随后在0℃下缓慢倾入到30毫升饱和的NaHCO3溶液中。该双相溶液用CH2Cl2（3×30毫升）萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩以获得脱保护胺，其直接用于下一步骤而不进行进一步纯化。
将4-((4-氟苯基)硫代)-3-硝基苯甲酸（0.1191克，0.41毫摩尔）、DMAP（0.0112克，0.09毫摩尔）、EDC盐酸盐（0.0900克，0.47毫摩尔）和CH2Cl2（2毫升）的混合物在室温下搅拌20分钟。随后加入在CH2Cl2（3毫升）中的上述脱保护胺，所得反应混合物在室温下搅拌整夜并用CH2Cl2（25毫升）稀释，用盐水（25毫升）和饱和的NaHCO3溶液（25毫升）洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化（1:19 MeOH:CH2Cl2）以获得黄色凝胶形式的标题产物（0.1844克，73%两个步骤）。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.58 (s, 1 H), 7.97 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.84 – 7.64 (m, 5 H), 7.64– 7.58 (m, 1 H), 7.56 – 7.44 (m, 4 H), 7.23 – 7.05 (m, 3 H), 6.75 (d, J = 8.6Hz, 1 H), 4.49 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.68 – 3.46 (m, 4 H), 3.01 (t, J = 5.1Hz, 2 H), 2.91 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.27 (t, J = 2.3 Hz, 1 H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 195.7, 165.9, 164.6, 164.0 (d, J = 252.4 Hz), 144.0, 143.1,141.3, 138.1 (d, J = 8.7 Hz), 136.7, 133.0, 132.8, 131.7, 131.3, 130.0,129.7, 129.3, 128.5, 127.8, 125.3 (d, J = 3.5 Hz), 124.4, 117.6 (d, J = 22.1Hz), 77.7, 74.1, 62.9, 52.5, 52.2, 43.0, 37.3. MS (ESI) m/z 626.2 (100%, [M+H]+)。
表A. 示例性类似化合物及其性质
血浆稳定性
在市售血浆（Bioreclamation, Westbury, NY）中将化合物稀释到2 µM的最终浓度，并将200 µl等分到多个Eppendorf小瓶中。一个小瓶立即通过添加等体积的含有0.2%甲酸和200 ng/ml内标（n-苄基苯甲酰胺或甲苯磺丁脲，Sigma, St. Louis, MO）的甲醇来萃取。将小瓶涡旋15秒，在室温下孵育10分钟并在16,100 x g下离心5分钟。上清液在16100 x g下再离心5分钟，将第二上清液放置在HPLC小瓶中并如上所述通过LC-MS/MS分析。剩余的等分试样在37℃水浴中孵育至多24小时。在各个点处，将样品取出并如上所述进行处理。LC-MS/MS分析如对S9和肝细胞稳定性分析所述。
代谢稳定性数据分析
采用McNaney等人（McNaney, CA, DM Drexler, S Hnatyshyn, TA Zvyaga, JOKnipe, JV Belcastro和M Sanders. 2008. An automated liquid chromatography-massspectrometry process to determine metabolic stability half-life and intrinsicclearance of drug candidates by substrate depletion. Assay and DrugDevelopment Technologies 6:121-129. Determination of Plasma and BrainPharmacokinetics）描述的方法，为了通过底物耗尽确定代谢稳定性半衰期进行修改。“%剩余”值用于评估化合物的经时代谢稳定性。将各时间点处孵育样品的LC/MS/MS峰面积除以时间0（T0）样品的LC/MS/MS峰面积并乘以100。随后绘制化合物的%剩余的自然对数（LN）vs时间（以分钟为单位），穿过LN(100)处的y轴截距绘制线性回归曲线。一些化合物的代谢在较晚的时间点处未能显示线性动力学，因此排除了这些时间点。半衰期（T½）计算为T½ =0.693/斜率。
血浆和脑药代动力学的测定
通过以25-50毫克/毫升溶解在DMSO中来制备化合物以便给药。将化合物稀释成各Excel数据文件中列出的最终制剂（最常见的是10% DMSO/10%聚氧乙烯蓖麻油/80% D5W(5%右旋糖水溶液，pH 7.4)）。成年CD-1雌性小鼠以0.2毫升的总体积给药IP，并在给药后的不同时间处通过吸入过量CO2处死。用ACD溶液（柠檬酸钠）涂覆的注射器和针头通过心脏穿刺收集全血。随后将血液以9300×g离心10分钟以分离血浆。血浆储存在-80℃下直至分析。在处死后立即从小鼠中分离脑，用PBS冲洗三次并轻轻吸干以除去任何表面粘附的血液，称重并在液氮中快速冷冻。通过在3倍体积的PBS中匀化脑组织来制备裂解物（以克为单位的脑重量X =添加的以毫升为单位的PBS体积）。总裂解物体积估计为添加的PBS体积+以毫升为单位的脑体积。通过添加200微升含有0.15%甲酸和150 ng/ml内标（n-苄基苯甲酰胺或甲苯磺丁脲）的乙腈或甲醇以沉淀血浆或组织蛋白并释放结合的药物来处理100微升的血浆或脑。将该混合物在16,100×g下离心5分钟，将上清液重新离心并通过LC-MS/MS直接分析。
使用连接有Shimadzu Prominence LC的AB/Sciex（Applied Biosystems, FosterCity, CA）4000 Qtrap质谱仪通过LC-MS/MS监测化合物水平。通过追踪前体至单个数据文件的方法框中指示的碎片离子转换，用质谱仪在MRM（多反应监测）模式下检测化合物。通过将化合物添加到空白血浆或空白脑裂解物中来制备标准曲线。将高于获自空白血浆或脑裂解物的信号3X的值指定为检测限（LOD）。定量限（LOQ）定义为反演计算产生理论值的20%以内的浓度时的最低浓度。通常，在两条曲线上的点的反演计算在4个数量级（1000至1 ng/ml）上均产生理论值的15%以内的值。使用Phoenix WinNonLin（Certara, Corporation,Princeton, NJ）的非房室分析工具计算药代动力学参数。使用脑中血液量（30微升/克脑组织）的参考值和实测的血浆浓度扣除大脑脉管***中化合物的量（Kwon, Y. (2001). TheHandbook of Essential Pharmacokinetics, Pharmacodynamics, and Drug Metabolismfor Industrial Scientists. Kluwer Academic /Plenum Publishers, 第231-232页）。
对该测定，假定化合物在血浆和血液之间同等地分配。使用扣减过的脑AUC和血浆AUC计算脑:血比。
表B. 示例性化合物的药代动力学参数
实施例2. 胆固醇生物合成途径的解除调控
进行微阵列分析以识别与使用化合物4C12处理48小时相关的过度表达途径。显示在图9中的结果表明化合物4C12解除了对胆固醇生物合成途径的调控。
胆固醇途径
在血浆中循环的脂质的主要类型包括胆固醇和胆固醇酯、磷脂和甘油三酸酯（Braunwald’s Heart Disease, P. Libby, R. Bonow, D. Mann和D. Zipes, Eds., 第8版, Saunders Elsevier, Philadelphia, PA (2008) 在1071页）。胆固醇贡献了哺乳动物细胞膜的基本组分，并提供了用于类固醇激素和胆汁酸的底物。许多细胞功能严重依赖膜胆固醇，细胞严格调节胆固醇含量。血浆中的大部分胆固醇在脂蛋白颗粒的核中以胆固醇酯的形式循环。酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）通过将脂肪酰基链从磷脂酰胆碱转移至胆固醇而在血液隔室中形成胆固醇酯。同上。
脂蛋白是复杂的大分子结构，由磷脂与游离胆固醇的包膜、胆固醇酯和甘油三酸酯的核组成。同上。在1072页。甘油三酸酯由共价连接至三种脂肪酸的三碳甘油骨架组成。它们的脂肪酸组成在链长度和饱和度方面不等。甘油三酸酯分子是非极性和疏水性的，并且在脂蛋白的核中运输。通过脂肪酶水解甘油三酸酯产生用于能量的游离脂肪酸（FFA）。同上。磷脂（所有细胞膜的成分）由连接至两种脂肪酸的甘油分子组成。脂肪酸在长度和存在单个或多个双键方面不同。甘油部分的第三个碳携带磷酸基团，四种分子之一与该基团连接：胆碱（磷脂酰胆碱或卵磷脂），乙醇胺（磷脂酰乙醇胺），丝氨酸（磷脂酰丝氨酸）或肌醇（磷脂酰肌醇）。磷脂（其为极性分子，比甘油三酸酯或胆固醇或其酯更易溶）参与信号转导途径。通过与膜相关的磷脂酶水解产生第二信使，如二酰基甘油、溶血磷脂、磷脂酸和游离脂肪酸（FFA），如可以调节许多细胞功能的花生四烯酸。同上。
包含脂蛋白的蛋白部分的载脂蛋白在尺寸、血浆的水性环境中的密度以及脂质和载脂蛋白含量方面不同。脂蛋白的分类反映了通过超高速离心机中的浮选测得的它们在血浆中的密度（1.006克/毫升）。例如，由乳糜微粒（指的是在餐后将膳食胆固醇与甘油三酸酯从小肠运输到用于降解的组织的一类脂蛋白）和极低密度脂蛋白（VLDL）组成的富含甘油三酸酯的脂蛋白具有小于1.06克/毫升的密度。同上。
载脂蛋白具有四种主要作用：（1）脂蛋白（apo B100和B48）的组装和分泌；（2）脂蛋白（apo B、apo E、apo A1、apo AII）的结构完整性；（3）酶的共激活剂或抑制剂（apo A1、C1、CII、CIII）；和（4）与特异性受体和蛋白质结合或对接以便细胞吸收整个颗粒或选择性吸收脂质成分（apoA1、B100、E）。同上。几种载脂蛋白（AIV、AV、D和J）的作用仍未完全理解。同上。
低密度脂蛋白（或LDL胆固醇）颗粒在整个身体内携带胆固醇，将其递送至不同的器官和组织。过量部分在血液中循环。LDL颗粒主要含有用蛋白质部分apoB100包装的胆固醇酯。同上。在1076页。
高密度脂蛋白（或HDL胆固醇）充当胆固醇清除剂，吸收血液中过量的胆固醇并将其带回至肝脏（胆固醇在其中分解）。 载脂蛋白A1（HDL的主要蛋白）在肠道和肝脏中合成。不含脂质的Apo A1从细胞膜中和从富含甘油三酸酯的脂蛋白水解过程流出的多余磷脂中获得磷脂。不含脂质的apo A1与ABCA1结合并经由cAMP促进其磷酸化，这提高磷脂和胆固醇向apo A1上的净流出以形成新的HDL颗粒。同上。这些新生的HDL颗粒将进一步介导细胞胆固醇流出。同上。
清道夫受体B类（SR-B1；在人体中也称为CLA-1(同上，引用Acton, S等人,“Identification of scavenger receptor SR-B1 as a high density lipoproteinreceptor,” Science 271: 518 (1996))）和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCA1）（同上，引用Krinbou，L等人，“Biogenesis and speciation of nascent apo A1-containingparticles in various cell lines”, J. Lipid Res 46: 1668 (2005)）结合HDL颗粒。SR-B1——HDL的受体（也用于HDL和VLDL，但亲和力较低）——介导HDL胆固醇酯在类固醇生成组织、肝细胞和内皮中的选择性摄取。ABCA1介导细胞磷脂（和可能的胆固醇）外流，并且对HDL生物发生是必需和基本的。同上。
经由至少四种主要途径实现细胞胆固醇体内稳态：（1）在内质网中由乙酰-CoA的胆固醇从头生物合成；（2）低密度脂蛋白（LDL）受体介导的来自血浆的LDL衍生胆固醇内吞的胆固醇吸收；3）由ABC家族转运蛋白如ATP结合盒，亚家族A（ABC1），成员1（ABCA1）/ATP结合盒，亚家族G，成员1（ABCG1）介导的胆固醇流出和由载脂蛋白B（ApoB）介导的分泌；和（4）通过酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）使胆固醇与脂肪酸一起酯化成胆固醇酯（CE）（参见图11 (Jiang, W.和Song, B-L, “Ubiquitin Ligases in Cholesterol Metabolism”,Diabetes Metab. 38: 171-80 (2014))）。
胆固醇生物合成途径
胆固醇合成分四个阶段进行：（1）三个乙酸酯单元缩合形成六碳中间体甲羟戊酸；（2）甲羟戊酸转化为活化的异戊二烯单元；（3）六个5-碳异戊二烯单元聚合形成30-碳直链角鲨烯；和（4）角鲨烯环化形成类固醇核，进一步发生一系列变化以产生胆固醇（Endo, A., “Ahistorical perspective on the discovery of statins”, Proc. Jpn Acad, Ser. BPhys. Biol. Sci 86(5): 484-93 (2010)）。
胆固醇生物合成途径的甲羟戊酸臂（其包括线粒体、过氧化物酶体、细胞质和内质网中的酶活性）开始于消耗乙酰-CoA，这在三个细胞区室（线粒体、细胞质和过氧化物酶体）中发生，并终结于在内质网中生成角鲨烯（Mazein, A.等人, “A comprehensive machine-readable view of the mammalian cholesterol biosynthesis pathway,” BiochemicalPharmacol. 86: 56-66 (2013)）。以下是甲羟戊酸臂的酶：
乙酰-CoA乙酰转移酶（ACAT1；ACAT2；乙酰乙酰基-CoA硫解酶；EC2.3.1.9）催化两分子的乙酰辅酶A的可逆缩合并形成乙酰乙酰基-CoA。同上。
羟基甲基戊二酰-CoA合酶（HMGCS1(细胞质)；HMGCS2(线粒体和过氧化物酶体)；EC2.3.3.10）催化由乙酰CoA和乙酰乙酰基CoA形成3-羟基-3-甲基戊二酰CoA（3HMG-CoA）。同上。
羟甲基戊二酰-CoA裂解酶（线粒体，HMGCL；EC4.1.3.4）将HMG-CoA转化为乙酰-CoA，并且乙酰乙酸（HMGCR；EC 1.1.34）催化3HMG-CoA向甲羟戊酸的转化。这一步骤是胆固醇形成的关键步骤。HMGCR受信号传导途径的高度调控，包括SREBP途径。同上。
甲羟戊酸激酶（MVK；ATP:甲羟戊酸5-磷酸转移酶；EC 2.7.1.36）催化甲羟戊酸向磷酸甲羟戊酸的转化。同上。
磷酸甲羟戊酸激酶（PMVK；EC 2.7.4.2）催化从甲羟戊酸5-磷酸形成甲羟戊酸5-二磷酸。同上。
二磷酸甲羟戊酸脱羧酶（MVD；甲羟戊酸(二磷酸)脱羧酶；EC 4.1.1.33）使甲羟戊酸5-二磷酸脱羧，形成异戊烯基二磷酸，同时水解ATP。同上。
异戊烯基二磷酸δ-异构酶（ID11；ID12；EC 5.3.3.2）将异戊烯基二磷酸异构化为二甲基烯丙基二磷酸（类异戊二烯的基本结构单元）。同上。
法呢基二磷酸合酶（FDPS；EC2.5.1.10；EC2.5.1.1；二甲基烯丙基转移酶）催化导致法呢基二磷酸形成的两个反应。在第一反应（EC 2.5.1.1活性）中，异戊基二磷酸和二甲基烯丙基二磷酸缩合形成香叶基二磷酸。接着，香叶基二磷酸和异戊烯基二磷酸缩合形成法呢基二磷酸（EC 2.5.1.10活性）。同上。
香叶基香叶基焦磷酸合酶（GGPS1；EC 1.5.1.29；EC 2.5.1.10；法呢基二磷酸合酶；EC 2.5.1.1；二甲基烯丙基转移酶）催化法呢基二磷酸形成的两个反应和三个异戊烯基二磷酸分子加成到二甲基烯丙基二磷酸以形成香叶基香叶基焦磷酸。同上。
法呢基二磷酸法呢基转移酶1（FDFT1；EC2.5.1.21；角鲨烯合酶）催化两个法呢基二磷酸分子（C15）的两步骤还原性二聚以形成角鲨烯（C30）。该FDFT1表达水平受胆固醇状态的调控；人FDFT1基因具有复合启动子，其具有用于SREBP-1a和SREBP-2的多个结合位点。同上。
该途径的甾醇臂开始于角鲨烯，并终结于Bloch和Kandutsch-Russell途径上的胆固醇制造以及在分流途径上的24(S),25-环氧胆固醇。同上。以下是甾醇臂的酶：
角鲨烯环氧酶（SQLE；EC 1.14.13.132，角鲨烯单加氧酶）催化角鲨烯向角鲨烯-2,3-环氧化物的转化以及角鲨烯-2,3-环氧化物（2,3-氧化角鲨烯）向2,3:22,23-双环氧角鲨烯（2,3:22,23-二氧角鲨烯）的转化。第一个反应是胆固醇生物合成途径中的第一个氧化步骤。第二个步骤是从角鲨烯2,3-环氧化物形成24(S),25-环氧胆固醇的第一步骤。同上。
羊毛甾醇合酶（LSS；OLC；OSC；2,3-氧化角鲨烯:羊毛甾醇环化酶；EC 5.4.99.7）催化角鲨烯-2,3-环氧化物向羊毛甾醇和2,3:22,23-双环氧角鲨烯环向24 (S),25-环氧羊毛甾醇的环化反应。同上。
δ(24)-甾醇还原酶（DHCR24；24-脱氢胆固醇还原酶；EC 1.3.1.72）催化中间体代谢物的δ-24双键的还原。特别是其将羊毛甾醇转化为24,25-二氢羊毛甾醇（Kandutsch-Russel途径的初始代谢物）并还提供了将链甾醇转化为胆固醇的Bloch途径的最后一步。Bloch途径的中间体被DHCR24转化为Kandutsch-Russell途径的中间体。同上。
羊毛甾醇14-α脱甲基酶（CYP51A1；细胞色素P450，家族51，亚家族A，多肽1；EC1.14.13.70）在三个步骤中将羊毛甾醇转化为4,4-二甲基-5α-胆甾-8,14,24-三烯-3β-醇和将24,25-二氢羊毛甾醇转化为4,4-二甲基-5α-胆甾-8,14-二烯-3β-醇。同上。
δ(14)-甾醇还原酶（TM7F2；跨膜7超家族成员2，EC1.3.1.70）催化胆固醇的三个分支上的反应和24(S),25-环氧胆固醇途径。同上。
甲基甾醇单加氧酶1（MSM01；SC4MOL；C-4甲基甾醇氧化酶；EC 1.14.13.72）催化C4甲基甾醇的去甲基化。同上。
4-α-羧基甾醇 3-脱氢酶（脱羧）（NSDHL；NAD(P)依赖性类固醇脱氢酶样；EC1.1.1.170）参与后-角鲨烯胆固醇和24(S),25-环氧胆固醇合成的多个步骤。同上。
3-酮-类固醇还原酶（HSD17B7；17-β-羟基类固醇脱氢酶7；EC 1.1.1.270）在Bloch途径中将酵母甾酮转化为酵母甾醇。同上。
3-β-羟基类固醇-δ(8),δ(7)-异构酶（EBP；依莫帕米结合蛋白；EC5.3.3.5）催化δ(8)-甾醇向δ(7)-甾醇的转化。同上。
烯胆甾烷醇氧化酶（SC5DL；甾醇-C5-脱饱和酶(ERG3)δ-5-脱饱和酶同源物, 酿酒酵母样；EC 1.14.21.6）催化7-脱氢胆固醇、7-脱氢链甾醇和24(S),25-环氧-7-脱氢胆固醇的制造。同上。
7-脱氢胆固醇还原酶（DHCR7；EC 1.3.1.21）催化7-脱氢胆固醇的C7-C8双键的还原和胆固醇的形成，并从7-脱氢链甾醇生成链甾醇和从24(S),25-环氧-7-脱氢胆固醇生成24(S),25-环氧胆固醇。同上。
细胞色素P450，家族3，亚家族A，多肽4（CYP3A4；1,8-桉叶素2-外-单加氧酶；牛磺鹅去氧胆酸6α-羟化酶；EC1.14.13.97）催化胆固醇的羟基化，生成25-羟基胆固醇和4β-羟基胆固醇。同上。
胆固醇25-羟化酶（CH25H；胆固醇25-单加氧酶；EC1.14.99.38）使用二铁辅因子来催化胆固醇的羟基化以产生25-羟基胆固醇，并具有催化24-羟基胆固醇向24,25-二羟基胆固醇的转换的能力。同上。
细胞色素P450，家族7，亚家族A，多肽1（CYP7A1；胆固醇7-α-羟化酶；EC1.14.13.17）负责在胆固醇的位置7处引入亲水性部分以形成7α-羟基胆固醇。同上。
细胞色素P450，家族27，亚族A，多肽1（CYP27A1；甾醇27-羟化酶；EC 1.14.13.15）催化线粒体胆固醇向27-羟基胆固醇和25-羟基胆固醇的转换。同上。
细胞色素P450 46A1（CYP46A1，胆固醇24-羟化酶，EC 1.14.13.98）催化胆固醇向24(S)-羟基胆固醇的转化。同上。
作为生理调节剂的胆固醇合成中的中间体
胆固醇合成中的中间体——主要是甾醇（例如7-脱氢胆固醇，其被DHCR7(7-脱氢胆固醇还原酶)转化成胆固醇，但其也是维生素D的前体）——已经被认为具有不同于胆固醇的调节功能（Sharpe, LJ和Brown, AJ, “Controlling cholesterol synthesis beyond 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26):18707-715 (2013)）。
C4-甲基甾醇通过羊毛甾醇14α-脱甲基酶（由CYP51A1(细胞色素P450，家族51，亚家族A，多肽1)编码）制造并通过SC4MOL（甾醇-C4-甲基氧化酶样1；甲基甾醇单加氧酶1）和其配偶体NSDHL（NAD(P)-依赖性类固醇脱氢酶样；4-α-羧基甾醇3-脱氢酶，脱羧）去甲基化。同上。
24,25-二氢羊毛甾醇据称是3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶（HMGCR）的主要降解信号（同上，引用Song, BL等人, “Insig-mediated degradation of HMG-CoAreductase stimulated by lanosterol, an intermediate in the synthesis ofcholeseterol”, Cell Meta. 1:179-89 (2005)；Lange, Y.等人, “Effectors of rapidhomeostatic responses of endoplasmic reticulum cholesterol and 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase”, J. Biol. Chem. 283: 1445-55 (2008)）。
非甾醇中间体角鲨烯已经参与刺激HMGCR降解（同上，引用Leichner, GS等人,“Metabolically regulated endoplasmic reticulum-associated degradation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase. Evidence for requirement ofageranylgeranylated protein”, J. Biol. Chem. 286: 32150-61 (2011)）。
许多胆固醇合成中间体可以用作核肝X受体（LXR）的激活配体，其上调胆固醇输出基因并抑制炎性基因。这些甾醇包括24,25-二氢羊毛甾醇（同上，引用Zhu, J.等人,“Effects of FoxO4 overexpression on cholesterol biosynthesis, triacylglycerolaccumulation, and glucose uptake”, J. Lipid Res. 51: 1312-24 (2010)），减数***激活甾醇（MAS）（同上，引用He, M等人, “Mutations in the human SC4MOL geneencoding a methyl sterol oxidase cause psoriasiform dermatitis, microcephaly,and developmental delay”, J. Clin. Invest. 121: 97 6-984 (2011)）和链甾醇（同上，引用Yang, C.等人, “Sterol intermediates from choleseterol biosyntheticpathway as liver X receptor ligands”, J. Biol. Chem. 281: 27816-826 (2006)；Spann, NJ等人, “Regulated accumulation of desmosterol integrates macrophagelipid metabolism and inflammatory responses”, Cell 151: 138-52 (2012)）。
氧甾醇24(S),25-环氧胆固醇（24,25-EC）——一种有效的LXR激动剂（同上，引用Lehmann, JM等人, “Activation of the nuclear receptor LXR by oxysterolsdefines a new hormone response pathway”, J. Biol. Chem. 272: 3137-40(1997)）——在甾醇合成的分流途径中产生（同上，引用Spencer, TA等人, “24(S),25-epoxyscholesterol. Evidence consistent with a role in the regulation ofhepatic cholestrogenesis”, J. Biol. Chem. 260: 13391-94 (1985)），其产生是通过角鲨烯单加氧酶（SM）和羊毛甾醇合酶（LS）的相对活性来确定的。LS的部分抑制或敲低将更多通量转移到分流路径中，产生更多的14,15-环氧胆固醇（14,15-EC）（同上，引用Dang, H.等人, “Suppression of 2,3-oxidosqualene cyclase by high fat diet contributesto liver X receptor-α-mediated improvement of hepatic lipid profile”, J.Biol. Chem. 284: 6218-26 (2009)），而LS的过度表达消除了24,25-EC产生（同上，引用Wong, J.等人,“Endogenous 24(S),25-epoxycholesterol fine-tunes acute controlof cellular cholesterol homeostasis”, J. Biol. Chem. 283: 700-707 (2008)）。相反，SM的过度表达增加了24,25-EC的产生（同上，引用Zerenturk, EJ等人, “Theendogenous regulator 24(S),25-epoxycholesterol inhibits choleseterolsynthesis at DHCR24 (Seladin-1)”, Biochim. Biophys. Acta 1821: 1269-77(2012)）。SM和LS差异化调节以改变14,15-EC生产的程度尚不清楚。
通过低密度脂蛋白（LDL）受体介导的LDL衍生胆固醇内吞作用从血浆中摄取胆固醇
LDL受体调节胆固醇进入细胞；严格的控制机制根据需要改变其在细胞表面上的表达（Braunwald’s Heart Disease, P. Libby, R. Bonow, D. Mann和D. Zipes编辑, 第8版,Saunders Elsevier, Philadelphia, PA (2008) 在1072页）。脂蛋白的其它受体包括结合VLDL但不结合LDL的几种。同上。介导乳糜微粒残留体和VLDL的摄取的LDL受体相关肽优先识别载脂蛋白E（apo E）（同上，引用Hiltunen, TP等人, “Expression of LDL receptor,VLDL receptor, LDL receptor-related protein, and scavenger receptor in rabbitatherosclerotic lesions: Marked induction of scavenger receptor and VLDLreceptor expression during lesion development”, Circulation 97: 1079 (1998)）。该LDL受体相关肽与肝脂肪酶相互作用。还存在特异性VLDL受体（同上，引用Nimph, J和Schneider, WJ, “The VLDL receptor: an LDL receptor relative with eight ligandbinding repeats, LR8”. Atherosclerosis 141: 191-202 (1998)）。肝细胞和含有apo E的各种脂蛋白之间的相互作用是复杂的并涉及细胞表面蛋白聚糖，所述细胞表面蛋白聚糖为涉及残余体脂蛋白识别的脂解酶（脂蛋白脂肪酶和肝脂肪酶）提供支架（同上，引用Mahley, RW, Ji, Zs, “Remnant lipoprotein metabolism: key pathways involvingcell-surface heparin sulfate proteoglycans and apolipoprotein E”, J. LipidRes. 40: 1- (1999)；Barown MI等人, “A macrophage receptor for apolipoproteinB48: cloning, expression and atherosclerosis”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 97:7488 (2000)；de Man, FH等人, “Lipolysis of very low density lipoproteins byheparin sulfate proteoglycan-bound lipoprotein lipase”, J. Lipid Res. 38:2465 (1997)）。
巨噬细胞表达结合修饰（尤其是氧化）脂蛋白的受体。这些清道夫脂蛋白受体介导氧化LDL被巨噬细胞摄入。与受调节的LDL受体相反，高细胞胆固醇含量不抑制清道夫受体，使内膜巨噬细胞积聚丰富的胆固醇，变成泡沫细胞并形成脂肪条纹。内皮细胞还可以通过特异性受体如Lox-1吸收修饰的脂蛋白（Sawamura, T.等人, “an endothelial receptorfor oxidized low-density lipoprotein”, Nature 386: 73 (1997)）。
胆固醇流出受ABC家族转运蛋白如ATP结合盒，亚家族A（ABC1），成员1（ABCA1）/ATP结合盒，亚甲基G，成员1（ABCG1）的介导，分泌受载脂蛋白B（ApoB）的介导
因为体内的大多数细胞不表达分解代谢胆固醇的途径，胆固醇流出对保持体内稳态至关重要。（Phillips, MC, “Molecular Mechanisms of Cellular Cholesterol Efflux”,J. Biol. Chem. 289 (35): 24020-29 (2014)）。高密度脂蛋白（HDL）包含直径为7-12纳米的微乳颗粒的非均质集群，所述颗粒含有由磷脂（PL）和载脂蛋白（apo）的单分子层稳定的胆固醇酯（CE）和甘油三酸酯（TG）分子的核，其中apo1是主要组分（同上，引用Phillips,MC, “New insights into the determination of HDL structure byapolipoproteins”, J. Lipid Res. 54: 2034-48 (2013)）。颗粒中存在PL使得HDL能够溶解和转运从细胞中释放的未酯化（游离）胆固醇（FC），由此介导从胆固醇负载的动脉巨噬细胞中去除胆固醇并将其转运至肝脏以便分解代谢和从体内消除（“胆固醇逆向转运”）（同上，引用Rothblat, GH和Phillips, MC, “High-density lipoprotein heterogeneityand function in reverse cholesterol transport”, Curr. Opin. Lipidol. 21: 229-38 (2010)；Rosenson, RS等人, “Cholesterol efflux and atheroprotection:advancing the concept of reverse cholesterol transport”, Circulation 125:1905-19 (2012)）。
胆固醇逆向转运的第一步骤是FC从细胞质膜流出到HDL。同上。在巨噬细胞的情况下，已经确定了四种流出途径：水扩散流出途径，清道夫受体B类，1型（SR-B1）途径；ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）途径和ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）途径。同上。前两个过程（其是被动的）涉及简单的扩散（水扩散途径）和促进的扩散（SR-B1介导的途径）。同上。两个主动过程涉及跨膜转运蛋白的ATP结合盒（ABC）家族的成员，即ABCA1和ABCG1。同上。接受细胞胆固醇的个体血清样品的效率取决于存在的HDL颗粒的分布和供体细胞中表达的胆固醇转运蛋白的水平。同上。
水扩散流出途径
HDL是负责介导从小鼠L细胞成纤维细胞单层中的FC流出的血清组分。转移通过水相中间体发生，其中单体FC分子从供体颗粒上解吸并扩散直到它们被受体颗粒吸收。从供体到受体的高度疏水性胆固醇分子的转移速率受解吸到水相中的速率的限制，其对转移的FC分子所处的磷脂（PL）环境的物理状态敏感。当卵磷脂-胆固醇乙酰基转移酶作用于HDL时，通过其中释放的FC返回细胞被酯化反应阻止的代谢捕获促进了细胞外培养基中从细胞向HDL的净质量FC流出（同上，引用Czarnecka, H和Yokoyama, S., “Regulation of cellularcholesterol efflux by lecithin: cholesterol acyltransferase reaction throughnonspecific lipid exchange”, J. Biol. Chem. 271: 1023-27 (1996)）。
SR-B1流出途径
SR-B1是还包括溶酶体整合膜蛋白-2（LIMP-2）的清道夫受体蛋白的CD36超家族的成员。同上。该受体在肝脏中表达最丰富，在那里，其在胆固醇逆向转运途径和类固醇生成组织中发挥作用，介导胆固醇递送（同上，引用Zannis, V.等人, “Role of apoA-1, ABCA1,LCAT and SR-B1 in the biogenesis of HDL”, J. Mol. Med. 84: 276-94 (2006)）。其是位于质膜中的同源寡聚糖蛋白，具有两个N端和C端跨膜结构域和大的中央胞外域（同上，引用Williams, DL,等人, “Scavenger receptor B1 and cholesterol trafficking”,Curr. Opin. Lipidol. 10: 329-39 (1999)；Meyer, JM等人, “New developments inselective cholesteryl ester uptake”, Curr. Opin. Lipidol. 24: 386-92 (2013)）。在1996年，确定了SR-B1是介导胆固醇摄入到细胞中的HDL受体。该过程涉及将HDL颗粒中的胆固醇酯（CE）选择性转移到细胞中，而HDL颗粒本身不具有内吞摄取和降解。除了促进HDL胆固醇向细胞的递送之外，SR-B1还增强细胞胆固醇向HDL的流出（同上，引用Ji, Y等人,“Scavenger receptor B1 promotes high density lipoprotein-mediated cellularcholesterol efflux”, J. Biol. Chem. 272: 20982-985 (1997)；Jian, B.等人,“Scavenger receptor class B type 1 as a mediator of cellular cholesterolefflux to lipoproteins and phospholipid acceptors”, J. Biol. Chem. 273: 5599-5606 (1998)），这两个过程是相关的（同上，引用Gu, X等人, “Scavenger receptor classB, type 1-mediated [3H]cholesterol efflux to high and alow densitylipoproteins is dependent on lipoprotein binding to the receptor”, J. Biol.Chem. 275: 29993-30001 (2000)）。对于经由SR-B1的CE选择性摄取，HDL结合和CE摄取紧密结合。从HDL摄取CE的机制涉及两步骤过程，其中HDL首先结合到受体，随后CE分子从结合的HDL颗粒转移到细胞质膜中，较大HDL颗粒与SR-B1的结合增强提高了CE的选择性递送（同上，引用Thuahnai, ST等人, “SR-B1-mediated cholesteryl ester selective uptakeand efflux of unesterified cholesterol: influence of HDL size and structure”,J. Biol. Chem. 279: 12448-455 (2004)）。HDL与SR-B1的胞外域的结合包括与识别基序的直接的蛋白质-蛋白质接触，该识别基序是HDL载脂蛋白特有的两亲性α螺旋（同上，引用Williams, DL等人, “Binding and cross-linking studies show that scavengerreceptor B1 interacts with multiple sites in apolipoprotein A-1 and identifythe class A amphipathic α helix as a recognition motif”, J. Biol. Chem. 275:18897-18904 (2000)）。与CE选择性摄取是被动过程一致，摄取速率与初始存在于HDL颗粒中的CE量成正比。
FC流出和HDL结合并非完全结合，FC流出机制在低和高细胞外HDL浓度下通过不同的途径进行（同上，引用Thuahnai, ST等人, “SR-B1-mediated cholesteryl esterselective uptake and efflux of unesterified cholesterol: influence of HDLsize and structure”, J. Biol. Chem. 279: 12448-455 (2004)；de la Llera-Moya,M.等人, “S Scavenger receptor B1 (SR-B1) mediates free cholesterol fluxindependently of HDL tethering to the cell surface”, J. Lipid Res. 40: 575-80(1999)）。在低HDL浓度下，HDL与SR-B1的结合是至关重要的，允许双向FC通过存在于受体胞外域中的疏水性通道。因为结合的HDL颗粒和细胞质膜之间的FC浓度梯度与CE的相反，质膜中相对较高的FC/PL比导致净质量FC转运的方向向着细胞外。与此概念一致，提高HDL的PL含量促进了FC从细胞中流出（同上，引用Yancey, PG等人, “High density lipoproteinphospholipid compositon is a major determinant of the bi-directional flux andnet movement of cellular free cholesterol mediated by scavenger receptor B1”,J. Biol. Chem. 275: 36596-36604 (2000)）。与较小的HDL相比，较大的HDL颗粒促进更多的FC流出，因为它们更好地与SR-B1结合（同上，引用Thuahnai, ST等人, “SR-B1-mediatedcholesteryl ester selective uptake and efflux of unesterified cholesterol:influence of HDL size and structure”, J. Biol. Chem. 279: 12448-455 (2004)）。在其中与受体的结合饱和的较高HDL浓度下，FC流出仍然随HDL浓度的提高而增加（同上，引用Thuahnai, ST等人, “SR-B1-mediated cholesteryl ester selective uptake andefflux of unesterified cholesterol: influence of HDL size and structure”, J.Biol. Chem. 279: 12448-455 (2004)），因为SR-B1诱导FC在细胞质膜中的重组。
ABCG1流出途径
ABCG1作为同源二聚体发挥作用，并以几种类型表达，其中其通过其跨膜转运胆固醇和氧甾醇的能力来介导胆固醇转运。同上。ABCG1的表达增强了FC和PL向HDL的流出（同上，引用Wang, N.等人, “ATP-binding cassette transporters G1 and G4 mediate cellularcholesterol efflux to high-density lipoproteins”, Proc. Natl Acad. Sci. USA101: 9774-79 (2004)；Kennedy, MA等人, “ABCG1 has a critical role in mediatingcholesterol efflux to HDL and preventing cellular lipid accumulation”, CellMetab. 1: 121-31 (2005)），而不是向无脂质的apoA-1（同上，引用Vaughan, AM和Oram,JF, “ABCG1 redistributes cell cholesterol to domains removable by highdensity lipoprotein but not by lipid-depleted apolipoproteins”, J. Biol.Chem. 280: 20150-57 (2005)；Sankaranarayanan, S.等人, “Effects of acceptorcomposition and mechanism of ABCG1-mediated cellular free cholesterolefflux”, J. Lipid Res. 50: 275-84 (2009)）。转运蛋白的存在诱导质膜胆固醇的重组，使其对胆固醇氧化酶变得可以接近（同上，引用Vaughan, AM和Oram, JF, “ABCG1redistributes cell cholesterol to domains removable by high densitylipoprotein but not by lipid-depleted apolipoproteins”, J. Biol. Chem. 280:20150-57 (2005)），产生激活质膜FC储池，并促进了FC分子从该环境向细胞外培养基中的解吸附。提高的ABCG1表达同样提高了FC向HDL2和HDL3的流出，但是对由这些脂蛋白颗粒的FC流入没有影响。
ABCA1流出途径
ABCA1是完整的转运蛋白，通过胆固醇负载上调其表达，这导致了提高的FC流出。同上。通过两个细胞质、核苷酸结合结构域的ATP的结合和水解控制跨膜结构域的构型，使得挤出袋可用于将底物从细胞质小叶转移到双层膜的外膜小叶。同上。ABCA1主动运输磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸和鞘磷脂，并优先运输磷脂酰胆碱（同上，引用Quazi, F和Molday, RS,“Differential phospholipid substrates and directional transport by ATP-binding cassette proteins ABCA, ABCA7, and ABCA4 and disease-causingmutants”, J. Biol. Chem. 288: 34414-26 (2013)）。这种PL移位酶活性导致PL和FC的同时流出（同上，引用Gillotte, KL,等人, “Removal of cellular cholesterol by pre-β-HDL involves plasma membrane microsolubilization”, J. Lipid Res. 39: 1918-28(1998)；Smith, JD等人, “ABCA1 mediates concurrent cholesterol and phospholipidefflux to apolipoprotein A-1”, J. Lipid Res. 45: 635-44 (2004)）至无脂质的apoA-1（血浆前-β1-HDL）。释放至apoA-1的细胞FC起源于质膜和内涵体间隔（同上，引用Chen, W.等人, “Preferential ATP-binding cassette transporter A1-mediatedcholesterol efflux from late endosomes/lysosomes”, J. Biol. Chem. 276: 43564-69 (2001)）。
ABCA1的PL移位酶活性诱导质膜中脂质结构域的重组（同上，引用Landry, YD,等人, “ATP-binding cassette transporter A1 expression disruptsraft membranemicrodomains through its ATPase-related functions”, J. Biol. Chem. 281:36091-101 (2006)）。ABCA1将PL和FC输出到各种血浆载脂蛋白。除FC流出外，细胞内信号传导途径通过apoA-1与ABCA1的相互作用而激活（同上，引用Mineo, C和Shaul, PW,“Regulation of signal transduction by HDL”, J. Lipid Res. 54: 2315-24 (2013)；Liu, Y和Tang, C., “Regulation of ABCA1 functions by signaling pathways”,Biochim. Biophys. Acta, 1821: 522-29 (2012)）。
众所周知，质膜中ABCA1的活性增强了apoA-1与细胞表面的结合，但是关于这种结合在通过apo-A1获得膜PL方面的作用一直存在争议。同上。已经提出，apoA-1在ABCA1结合到转运蛋白时直接由ABCA1获得PL，或在由ABCA1活性产生的膜脂质结合位点处间接地获得。同上。
新生HDL颗粒的ABCA1介导的装配主要发生在细胞表面（同上，引用Faulkner, LE等人, “An analysis of the role ofa retroendocytosis pathway in ABCA1-mediatedcholesterol efflux from macrophages”, J. Lipid Res. 49: 1322-32 (2008)；Denis,M.等人, “ATP-binding cassette A-1-mediated lipidation of apolipoprotein A-1occurs at the plasma membrane and not in the endocytic compatments”, J. Biol.Chem. 283: 16178-186 (2008)），其中用于HDL颗粒形成的胞外apoA-1是可用的。在由ABCA1活性产生的新生HDL颗粒中的FC/PL比取决于细胞类型和细胞的代谢状态，但与较小的颗粒相比，较大颗粒的群体总是相对富含FC。
胆固醇流出的调节部分取决于ABCA1途径，其又受羟基甾醇（尤其是24和27-OH胆固醇，其充当肝特异性受体(LXR)家族的转录调节因子的配体）控制（Braunwald’s HeartDisease, P. Libby, R. Bonow, D. Mann和D. Zipes编辑, 第8版, Saunders Elsevier,Philadelphia, PA (2008)在1076页）。
已经通过体内基因证据证实，ABCA1流出功能具有抗癌活性，其在通过致癌突变或癌症特异性ABCA1功能缺失突变抑制ABCA1基因表达之后被破坏。Smith, B.和Land, H.,“Anticancer activity of the cholesterol exporter ABCA1 gene,” Cell Rep. 22(3): 580-90 (2012)。已经提出ABCA1介导的流出的丧失是允许线粒体胆固醇水平积累（其支持癌症生存）的关键步骤。同上。他们将他们的数据解释为支持癌细胞中线粒体胆固醇升高的因果作用，并假设与癌细胞中发现的胆固醇合成升高一致，ABCA1的缺乏使得线粒体胆固醇增加，抑制线粒体细胞死亡促进分子的释放，并因此促进癌细胞存活。同上。
通过酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）用脂肪酸将胆固醇酯化成胆固醇酯（CE）
膜中的胆固醇含量在蛋白质调节水平调节胆固醇酰基转移酶（CAT）途径（Braunwald’sHeart Disease, P. Libby, R. Bonow, D. Mann和D. Zipes编辑, 第8版, SaundersElsevier, Philadelphia, PA (2008)在1076页, 引用Willner, E.等人, “Deficiencyof acyl CoA:cholesterol aceyltransferase 2 prevents atherosclerosis inapolipoprotein E-deficient mice., Proc. Natl Acad. Sci. USA 100: 1262(2003)）。人类表达两种单独形式的ACAT（ACT1和ACAT2），其衍生自不同的基因，并在细胞质和内质网腔中介导胆固醇酯化用于脂蛋白组装和分泌。
调节胆固醇含量
在细胞胆固醇充足的条件下，细胞可以通过降低胆固醇的从头合成来降低胆固醇的输入。细胞还可以降低经由LDL-R进入细胞的胆固醇的量，提高以胆固醇酯形式储存的量，并通过提高其向质膜移动以便流出来促进胆固醇的去除。
已经详细研究了HMG CoA还原酶的调节——胆固醇生物合成中的限速步骤。但是，这种酶在胆固醇合成途径中非常早地起作用。越来越多的证据表明，超过HMG CoA还原酶的酶充当通量控制点，并且胆固醇合成的调节可以在整个途径中在多个水平处发生。（Sharpe, LJ和Brown, AJ, “Controlling cholesterol synthesis beyond 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26): 18707-715(2013)）。
转录调节
甾醇调节元件结合蛋白（SREBP）
SREBP——膜结合的转录因子，其协调脂肪酸和胆固醇两种主要的膜结构块的合成（Brown, MS & Goldstein, JL, “The SREBP pathway: regulation of cholesterolmetabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor”, Cell 89:331-40 (1997)）——属于基本的螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链（bHLH-Zip）家族的转录因子。存在三种SREBP蛋白（SREB-1a，SREBP-1c和SREBP-2），其来自两个名为srebp1和srebp2的srebp基因。同上。SREBP2亚型在调节胆固醇合成基因中起主要作用。
如表1中所示，几乎所有编码胆固醇合成酶的基因都是SREBP靶标。
基因名称 基因符号 SREBP靶标
乙酰-CoA乙酰转移酶，胞浆 ACAT2 是
3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶1 (可溶) MHGCS1 是
3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶 HMGCR 是
甲羟戊酸激酶 MVK 是
磷酸甲羟戊酸激酶 PMVK 是
甲羟戊酸（二磷酸）脱羧酶 MVD 是
异戊烯基二磷酸Δ-异构酶1/2 ID11/ID12 是
法呢基二磷酸合酶 FDFS 是
香叶基香叶基二磷酸合酶1 GGPS1 是
法呢基二磷酸法呢基转移酶1 FDFT1 是
角鲨烯环氧酶 SQLE 是
羊毛甾醇合酶(2,3-氧化角鲨烯-羊毛甾醇环化酶) LSS 是
细胞色素P450，家族51，亚家族A，多肽1 CYPS1A1 是
跨膜7超家族成员2 TM75F2 是
核纤层蛋白B受体 LBR 不是
甲基甾醇单加氧酶1 SCAMOL 是
NAD(P)依赖性类固醇脱氢酶样 NSDHL 是
17-β-羟基类固醇脱氢酶7 HSD17B7 是
依莫帕米结合蛋白(甾醇异构酶) EBP 是
甾醇C5-脱饱和酶 SC5D 是
7-脱氢胆固醇还原酶 DHCR7 是
24脱氢胆固醇还原酶 DHCR24 是
取自Sharpe, LJ和Brown, AJ, “Controlling cholesterol synthesis beyond3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26):18707-715 (2013)。
SREBP在基因转录水平协调地调节胆固醇生物合成途径和受体介导的LDL内吞作用（Brown, MS和Goldstein, JL, “A proteolytic pathway that controls thecholesterol content of membranes, cells and blood”, Proc. Natl Acad. Sci. USA96: 11041-48 (1999)）。在胆固醇生物合成途径中，SREBP调节HMG CoA还原酶的转录以及在胆固醇生物合成途径中编码许多其他酶的基因的转录，包括HMG CoA合酶、法呢基二磷酸合酶和角鲨烯合酶。同上。调查DHCR24启动子调节的研究提供了SREBP-2结合位点的证据[Daimiel, LA,等人, “Promoter analysis of the DHCR24 (3β-hydroxysterol ∆24-reductase) gene: characterization of SREBP (sterol-regulatory element-binding-protein)-mediated activation”, Biosci. Rep. (2013)/art:e000/doi10.1042/BSR20120095)；Zerenturk, EJ,等人, “Sterols regulate 3β-hydroxysterol∆24-reductase (DHCR24) via dual sterol regulatory elements: cooperativeinduction of key enzymes in lipid synthesis by sterol regulatory elementbinding proteins”, Biochim. Et Biophys. Acta 1821 (10): 1350-60 (2012)）。SREBP还调节LDL受体，LDL受体通过受体介导的内吞作用提供胆固醇，并调节编码脂肪酸合成和摄取酶的基因的转录，所述酶包括乙酰CoA羧化酶、脂肪酸合酶、硬脂酰基CoA脱饱和酶-1和脂蛋白脂肪酶（Brown, MS & Goldstein, JL, “The SREBP pathway: regulation ofcholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcriptionfactor”, Cell 89: 331-40 (1997)）。
新生的SREBP靶向内质网（ER）膜而没有任何转录活性，因为它们不能用于其位于细胞核中的靶基因（Brown, MS & Goldstein, JL, “The SREBP pathway: regulation ofcholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcriptionfactor”, Cell 89: 331-40 (1997)）。为了在细胞甾醇低时增强转录，通过必须以正确顺序发生的两次连续切割从内质网膜释放SREBP的活性NH2-末端结构域。第一次切割由Site-1蛋白酶（S1P）催化，该蛋白酶是一种膜结合的枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶，其裂解突入内质网腔的SREBP的亲水环（Brown, MS和Goldstein, JL, “A proteolyticpathway that controls the cholesterol content of membranes, cells and blood”,Proc. Natl Acad. Sci. USA 96: 11041-48 (1999)）。在Site-2处的第二次切割需要S2P的作用，S2P是一种疏水性蛋白，其似乎是锌金属蛋白酶，并发生在SREBP的跨膜结构域内。同上。甾醇通过抑制S1P来阻断SREBP的加工。同上。甾醇通过选择性抑制S1P造成的切割来阻断蛋白水解释放过程；S2P是间接调节的，因为在通过S1P处理SREBP之前它不能起作用。同上。
SREBP裂解激活蛋白（SCAP）——一种整合的ER膜调节蛋白——对于位点1处的切割是必需的，并且是甾醇抑制该切割的靶标，即当甾醇在细胞中过度累积时，SCAP丧失其活性。同上。在细胞中，发现SCAP与SREBP紧密复合。SCAP含有两个不同的结构域：跨越膜八次的疏水性N端结构域，和突出到胞质溶胶中的亲水性C端结构域（DeBose-Boyd, R. A.“Feedback Regulation of Cholesterol Synthesis: Sterol-acceleratedubiquitination and degradation of HMG CoA Reductase”, Cell Res. 18 (6): 609-21 (2008)）。SCAP的膜结构域的160个氨基酸的片段被称为甾醇感应域。（Brown, MS和Goldstein, JL, “A proteolytic pathway that controls the cholesterol contentof membranes, cells and blood”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 96: 11041-48(1999)）。SCAP的C-末端结构域介导与SREBP的组成型关联，SREBP是在甾醇剥夺的细胞中从ER到Golgi的SREBP的SCAP依赖性易位所需的（DeBose-Boyd, R. A. “FeedbackRegulation of Cholesterol Synthesis: Sterol-accelerated ubiquitination anddegradation of HMG CoA Reductase”, Cell Res. 18 (6): 609-21 (2008)）。具有完整转录活性的NH2-末端bHL-Zip结构域从膜释放以到达细胞核并充当转录因子以激活负责胆固醇和脂肪酸生物合成与LDL摄取的基因 （Brown, MS和Goldstein, JL, “A proteolyticpathway that controls the cholesterol content of membranes, cells and blood”,Proc. Natl Acad. Sci. USA 96: 11041-48 (1999)）。
当甾醇在细胞内聚集时，SREBP从ER膜的蛋白水解释放被阻断，已经进入细胞核的NH2-末端结构域迅速降解，结果，所有靶基因的转录降低。同上。对于其转录完全依赖于SREBP的胆固醇生物合成酶来说，这种下降是完全的，但对于其基础转录可以由其它因子维持的脂肪酸生物合成酶来说，其是较不完全的。
其它因子
除了SREBP之外，还有许多其他转录因子涉及胆固醇生物合成中各种酶的转录控制（Sharpe, LJ和Brown, AJ, “Controlling cholesterol synthesis beyond 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26): 18707-715(2013)）。
肝X受体（LXR）
肝X受体（LXR）是核受体超家族的配体激活的转录因子（Baranowski, M.,“Biological role of liver X receptors”, J. Physiol. Pharmacology. 59 Suppl.7: 31-55 (2008)）。存在两种LXR同种型（称为α和β），其在激活时与类视黄醇X受体形成异源二聚体并与在靶基因的启动子区中发现的LXR反应元件结合。同上。代谢活性组织中LXRα的高表达水平与受体在脂质代谢中的中心作用相符，而LXRβ更普遍表达。（Pehkonen, P.等人, “Genome-wide landscape of liver X receptor chromatin binding and generegulation in human macrophages”, BMC Genomics 13: 50 (2012)）。两种LXR都存在于免疫***的各种细胞中，如巨噬细胞、树突状细胞和淋巴细胞。同上。在巨噬细胞中，过量脂蛋白衍生的胆固醇的积累激活了LXR并触发胆固醇流出的转录程序如ATP结合盒转运蛋白（ABC）A1（ABCA1）和ABCG1的诱导，同时受体转录抑制炎性基因，如诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β和单核细胞趋化蛋白-1。同上。已经报道了LXR通过直接沉默两种胆甾醇酶（FDFT1和CYP51A1）的基因表达来调节胆固醇生物合成（Sharpe, LJ和Brown, AJ,“Controlling cholesterol synthesis beyond 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoAreductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26): 18707-715 (2013)，引用Wang, Y.等人, “Regulation of cholesterologenesis by the oxysterol receptor, LXRα”, J.Biol. Chem. 283: 26332-339 (2008)）。
LXR的内源性激动剂包括氧化甾醇，其是氧化的胆固醇衍生物（Baranowski, M.,“Biological role of liver X receptors”, J. Physiol. Pharmacol. 59 Suppl. 7:31-55 (2008)）。LXR已被表征为脂质和碳水化合物代谢的关键转录调节因子，并且显示作为甾醇传感器起作用，通过刺激胆固醇逆向转运并激活其向肝脏中的胆汁酸的转化，由此保护细胞免受胆固醇超载。同上。该发现导致在动脉粥样硬化的啮齿动物模型中鉴定LXR激动剂为有效的抗动脉粥样硬化剂。同上。然而，第一代LXR激活剂也显示经由SREBP1c刺激脂肪生成，导致肝脂肪变性和高甘油三酸酯血症。同上。
尽管它们具有脂肪生成作用，LXR激动剂具有抗糖尿病特性。同上。在2型糖尿病和胰岛素抗性的啮齿动物模型中，LXR激活可以使血糖正常化并改善胰岛素敏感性。同上。尽管LXR激动剂的抗糖尿病作用被认为主要来自抑制肝糖异生，但一些研究表明LXR激活也可以增强外周葡萄糖摄取。同上。
合成的LXR配体对乳腺、***、卵巢、肺、皮肤和结直肠癌细胞的抗增殖作用的公开报道表明LXR是癌症预防和治疗中的潜在靶标。（Nguyen-Vu, T.等人, “Liver xreceptor ligands disrupt breast cancer cell proliferation through an E2F-mediated mechanism,” Breast Cancer Res. 15: R51 (2013)）。在用合成LXR配体GW3965处理后，通过对四种乳腺细胞系[MCF-7(ER+)、T-47D(ER+)、SK-BR-3(ER-)和MDA-MB-231]的基因表达的微阵列分析显示细胞系特异性转录应答和一组通用响应基因。同上。在常见的响应基因组中，上调的基因倾向于在LXR配体和LXR的已知代谢效应中起作用，而下调的基因大多包括那些在细胞周期调控、DNA复制和其它细胞增殖相关过程中起作用的基因。同上。下调基因的转录因子结合位点分析揭示了E2F结合位点序列基序的富集。同上。相应地，E2F2转录物水平在LXR配体处理后下调。同上。敲低E2F2表达，类似于LXR配体处理，导致***受体阳性乳腺癌细胞增殖的显着中断。同上。配体处理也降低了E2F2与靶基因的顺式调控区域的结合。
激活的LXRα的表达阻断了人结直肠癌细胞的增殖并减缓了小鼠中异种移植肿瘤的生长，并且在Apc(min/+)小鼠中给药化学致癌物后减少了肠肿瘤的形成（Lo Sasso, G.等人, “Liver X receptors inhibit proliferation of human colorectal cancercells and growth of intestinal tumors in mice”, Gastroenterology 144(7):1497-507 (2013)）。已经报道了LXR与细胞凋亡的联系（Pehkonen, P.等人, “Genome-widelandscape of liver X receptor chromatin binding and gene regulation in humanmacrophages”, BMC Genomics 13: 50 (2012)）。
MicroRNA和可变剪接
总体而言，在胆固醇合成方面对于miRNA的报道相对较少。（Sharpe, LJ和Brown, AJ,“Controlling cholesterol synthesis beyond 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoAreductase (HMGCR)”, J. Biol. Chem. 288 (26): 18707-715 (2013)）。在胆固醇代谢方面，或许研究得最好的microRNA（miRNA）是miR-33——一种在SREBP基因中编码的内含子miRNA，其控制细胞胆固醇输出，而其SREBP宿主基因刺激胆固醇合成（同上，引用Fernandez-Hernando,等人, “MicroRNAs in metabolic disease”, Arterioscl.Thromb. Vasc. Biol. 33: 178-85 (2013)）。
HMGCR的可变剪接受甾醇的调节，当甾醇水平低时存在按比例较少的非生产性转录物，而当甾醇水平较高时存在更多的非生产性转录物（同上，引用Medina, M.W.,等人,“Coordinately regulated alternative splicing of genes involved in cholesterolbiosynthesis and uptake”, PLosONE 6: e19420 (2011)）。这种效应还延伸至其它胆甾醇化基因，包括HMGSC1和MVK （同上，引用Medina, M.W.,等人, “Coordinately regulatedalternative splicing of genes involved in cholesterol biosynthesis anduptake”, PLosONE 6: e19420 (2011)）。因为该作用是通过SREBP-2介导的，并且对于除HMGCR之外的所有胆固醇合成酶都发生替代转录物（同上，引用de la Grange, P.,等人,“a new advance in alternative splicing databases from catalogue to detailedanalysis of regulation of expression and function of human alternativesplicing variants”, BMC Bioinformatics 8: 180 (2007)），这种效应可以涉及整个胆固醇合成途径。
翻译后调节
由于经由SREBP途径的转录下调相对较慢，仅在数小时后靶基因的mRNA才降低，因此胆固醇合成的快速关闭需要转录后控制。采用生理学甾醇降解信号如24,25-二氢羊毛甾醇，和侧链氧甾醇如24,25-EC和27-羟基胆固醇（由胆固醇本身产生）（同上，引用Lange, Y.等人, “Effectors of rapid homeostatic responses of endoplasmic reticulumcholesterol and 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase”, J. Biol. Chem.283: 1445-55 (2008)；Nguyen, AD等人,“Hypoxyia stimulates degradation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase through accumulation oflanosterol and hypoxia-inducible factor-mediated induction of Insigs”, J.Biol. Chem. 282: 27436-446 (2007)），通过甲羟戊酸途径的非甾醇和甾醇产物加速3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶（HMGCR）的周转（同上，引用Roitelman, J和Simoni, RD,“Distinct sterol and nonsterol signals for the regulated degradation of 3-hyudroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase”, J. Biol. Chem. 267: 25264-273(1992)）。调节的周转是蛋白质瘤并且需要Insig蛋白质，其也用于抑制SREBP激活（Jo, Y和Debose-Boyd, RA,” Control of cholesterol synthesis through regulated ER-associated degradation of HMG CoA reductase”, Crit. Rev. Biochem. Mol. Bio.445: 185-198 (2010)；Burg, JS和Espenshade, PJ,“Regulation of HMG-CoA reductasein mammals and yeast”, Prog. Lipid Res. 50: 403-410 (2011)）。
调节的ER相关降解也发生在通过角鲨烯单加氧酶（SM）催化的胆固醇合成中的后续步骤，尽管其机理与HMGCR不同。已经提出角鲨烯单加氧酶作为胆固醇合成中的第二限速酶（同上，引用Gonzalez, R.等人, “Two major regulatory steps in cholesterolsynthesis by human renal cancer cells”, Arch. Biochem. Biophys. 196: 574-80(1979)；Hidaka, Y,等人, “Regulation of squalene epoxidase in HepG2 cells”, J.Lipid Res. 31: 2087-94 (1990)）。胆固醇自身加速SM降解——终产物抑制的一个实例（同上，引用Gill, S.等人, “Cholesterol-dependent degradation of squalenemonooxygenase, a control point in cholesterol synthesis beyond HMG-CoAreductase”, Cell Metab. 13: 260-73 (2011)），并且与HMGCR不同，SM周转不需要Insig蛋白。
胆固醇合成的反馈调节
胆固醇积聚降低胆固醇生物合成途径中HMG CoA还原酶和几种其它酶的活性，由此限制胆固醇的产生。
HMG CoA还原酶——胆固醇合成中的限速酶，他汀类药物的靶标——通过多种机理施以反馈控制，这些机理由甲羟戊酸代谢的甾醇和非甾醇终产物介导，使得必需的非甾醇类异戊二烯可以恒定地供应而无需冒胆固醇或其甾醇前体之一可能有毒的过量产生的风险。（DeBose-Boyd, R. A. “Feedback Regulation of Cholesterol Synthesis:Sterol-accelerated ubiquitination and degradation of HMG CoA Reductase”, CellRes. 18 (6): 609-21 (2008)）。例如，用他汀类药物康帕丁（HMG-CoA还原酶的竞争性抑制剂）处理培养的细胞阻断了甲羟戊酸的产生，由此降低了通常控制这种反馈调节的甾醇和非甾醇类异戊二烯的水平。同上。由于还原酶基因转录增强、mRNA的有效翻译和延长的还原酶蛋白半衰期的综合作用，细胞对HMG-CoA还原酶的抑制作用具有补偿性增加的反应。同上。完全逆转还原酶的这种补偿性增加需要甲羟戊酸代谢的甾醇和非甾醇终产物的调节作用。同上。
甾醇抑制甾醇调节元件结合蛋白（SREBP）和低密度脂蛋白（LDL）-受体的活性（同上，引用Horton, JD,等人, “SREBPs: activators of the complete program ofcholesterol and fatty acid synthesis in the liver”, J. Clin. Invest. 109:1125-31 (2002)）。非甾醇甲羟戊酸衍生产物（一种或多种）通过可能由还原酶mRNA的复合体5'-非翻译区介导的不明确机理来控制翻译效应（同上，引用Nakanishi, M.等人,“Multivalent control of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase.Mevalonate-derived product inhibits translation of mRNA and acceleratesdegradation of enzyme”, J. Biol. Chem. 263: 8929-37 (1988)）。甲羟戊酸代谢的甾醇和非甾醇终产物组合以通过泛素-蛋白体途径介导的机理加速还原酶蛋白的降解（同上，引用Roitelman, J.和Simoni, RD, “Distinct sterol and nonsterol signals for theregulated degradation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase”, J. Biol.Che. 267: 25264-273 (1992)；McGee, TP等人, “Degradation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase in endoplasmic reticulum membranes isaccelerated as a result of increased susceptibility to proteolysis”, J. Biol.Chem. 271: 25630-638 (1996)；Ravid, T.等人, “The ubiquitin proteasome pathwaymediates the regulated degradation of mammalian 3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A reductase”, J. Biol. Chem. 275: 35840-47 (2000)）。
对SREBP的Golgi运输的ER抑制来自于SCAP与称为胰岛素诱导基因1和2蛋白（Insig-1和Insig-2）的ER保留蛋白的甾醇诱导结合（DeBose-Boyd, R. A. “FeedbackRegulation of Cholesterol Synthesis: Sterol-accelerated ubiquitination anddegradation of HMG CoA Reductase”, Cell Res. 18 (6): 609-21 (2008)；引用Yang,T.等人, “Crucial step in cholesterol homeostasis: sterols promote binding ofSCAP to INSIG-1, a membrane protein that facilitates retention of SREBPs inER”, Cell 110: 489-500 (2002)；Yabe, D.等人, “Insig-2, a second endoplasmicreticulum protein that binds SCAP and blocks export of sterol regulatoryelement-binding proteins”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 12753-758 (2002)）。Insig结合阻塞了由COPII蛋白识别的SCAP中的胞质结合位点，其将货物分子掺入囊泡中，所述囊泡将ER衍生蛋白质递送至Golgi（同上，引用Sun LP等人, “From the Cover:Sterol-regulated transport of SREBPs from endoplasmic reticulum to Golgi:Insig renders sorting signal in Scap inaccessible to COPII proteins”, Proc.Natl Acad. Sci. USA 104: 6519-26 (2007)）。SCAP-Insig结合由包括跨膜螺旋2-6的SCAP的膜结构域的片段介导（同上，引用Hua, X等人, “Sterol resistance in CHO cellstraced to point mutation in SREBP cleavage-activating protein”, Cell 87: 415-26 (1996)；Yang, T.等人, “Crucial step in cholesterol homeostasis: sterolspromote binding of SCAP to INSIG-1, a membrane protein that facilitatesretention of SREBPs in ER”, Cell 110: 489-500 (2002)），即甾醇感应结构域（同上，引用Kuwabara, PE, “The sterol-sensing domain: multiple families, a uniquerole”, Trends Genet. 18: 193-201 (2002)），因为在至少四种其它多面体蛋白质中发现了跨膜螺旋的类似拉伸，包括假定与甾醇相互作用的Niemann Pick C1蛋白（肠胆固醇转运蛋白复合物的一部分）、Patched、Dispatched和还原酶。该区域内的点突变破坏了Insig结合，这减少了ER中突变体SCAP-SREBP复合物的甾醇介导的保留（同上，引用Yang, T.等人,“Crucial step in cholesterol homeostasis: sterols promote binding of SCAP toINSIG-1, a membrane protein that facilitates retention of SREBPs in ER”, Cell110: 489-500 (2002)；Yabe, D., “Insig-2, a second endoplasmic reticulumprotein that binds SCAP and blocks export of sterol regulatory element-binding proteins”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 12753-758 (2002)；Yabe, D.等人, “Three mutations in sterol-sensing domain of SCAP block interaction withinsig and render SREBP cleavage insensitive to sterols”, Proc.Natl Acad. Sci.USA 99: 16672-77 (2002)；Nohturfft, A.等人, “A substitution in a single codonof SREBP cleavage-activating protein causes sterol resistance in three mutantChinese hamster ovary cell lines”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 93: 13709-714(1996)；Nohturfft, A.等人, “Sterols regulate processing of carbohydrate chainsof wild-type SREBP cleavage-activating protein (SCAP), but not sterol-resistant mutants Y298C o D443N”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 95: 12848-853(1998)）。
下列观察结果表明Insigs可能在HMG CoA还原酶的降解中发挥了作用。首先，当在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中通过转染过度表达Insigs时，在用甾醇处理该细胞时HMG CoA还原酶不能被降解（同上，引用Sever, N.等人, “Accelerated degradation of HMG CoAreductase mediated by binding of insig-1 to its sterol-sensing domain”, Mol.Cell 11: 25-33 (2003)）。Insig-1的共同表达恢复了HMG CoA还原酶的甾醇加速降解，表明内源性Insigs被过度表达的还原酶饱和。同上。其次，通过RNA干扰（RNAi）还原Insig-1和Insig-2消除了内源性HMG CoA还原酶的甾醇加速降解（同上，引用Sever, N.等人,“Insig-dependent ubiquitination and degradation of mammalian 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase stimulated by sterols and geranylgeraniol”, J.Biol. Chem. 278: 52479-90 (2003)）。第三，缺少两种Insigs的突变体CHO细胞不受甾醇刺激的HMG CoA还原酶降解以及甾醇介导的SREBP加工抑制的影响（同上，引用Lee, P.C.等人, “Isolation of sterol-resistant Chinese hamster ovary cells with geneticdeficiencies in both Insig-1 and Insig-2”, J. Biol. Chem. 280: 25242-249(2005)）。
HMG CoA还原酶的降解符合甾醇诱导的其膜结构域与Insigs的结合（同上，引用Sever, N.等人, “Accelerated degradation of HMG CoA reductase mediated bybinding of insig-1 to its sterol-sensing domain”, Mol. Cell 11: 25-33(2003)）——需要位于HMG CoA还原酶的第二跨膜片段中的四肽序列（YIYF）的作用。其中YIYF序列突变为丙氨酸残基的HMG CoA还原酶的突变体形式不再与Insigs结合，并且该酶不会发生快速降解。该YIYF序列还存在于SCAP的第二跨膜结构域中，在那里它介导SCAP-Insig复合物的甾醇依赖性形成（同上，引用Yang, T.等人, “Crucial step incholesterol homeostasis: sterols promote binding of SCAP to INSIG-1, amembrane protein that facilitates retention of SREBPs in ER”, Cell 110: 489-500 (2002)；Yabe, D., “Insig-2, a second endoplasmic reticulum protein thatbinds SCAP and blocks export of sterol regulatory element-binding proteins”,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 12753-758 (2002)）。在细胞中过度表达SCAP的甾醇感应结构域阻断胰岛素介导的、固醇加速的HMG CoA还原酶的降解；在SCAP固醇感应结构域中YIYF序列的突变消除了这种抑制，表明SCAP和HMG CoA还原酶与Insigs上的相同位点结合，并且当细胞内甾醇水平升高时，这两种蛋白竞争限制量的Insigs。同上。
糖蛋白78（Gp78）——一种E3泛素连接酶——介导ApoB-100、Insig1和2蛋白以及HMG-CoA还原酶的泛素化（Jiang, W., Song, B-L, “Ubiquitin Ligases in CholesterolMetabolism”, Diabetes Metab. 38: 171-80 (2014)）。高浓度的甾醇（羊毛甾醇）促进3-羟基-3-甲基戊二酰基CoA还原酶的NH2-末端跨膜结构域与Insigs相互作用（同上，引用Sever, N.等人, “Accelerated degradation of HMG CoA reductase mediated bybinding of insig-1 to its sterol-sensing domain”, Mol. Cell 11: 25-33 (2003)；Song, BL等人, “Insig-mediated degradation of HMG CoA reductase stimulatd bylanosterol, an intermediate in the synthesis of choleseterol”, Cell Metab. 1:179-89 (2005)），并且甾醇依赖性Insig结合导致泛素连接酶的募集。
Gp78在ER膜中组成型结合Insig-1。同上。当细胞甾醇水平高时，Insig-1/gp78复合物结合3-羟基-3-甲基戊二酰基CoA还原酶的跨膜结构域。同上。在至少两种与gp78、p97/VCP和Aup1相关的蛋白的帮助下（同上，引用Song, BL等人, “Gp8, a membrane-anchoredubiquitin ligase, associates with Insig-1 and couples sterol-regulatedubiquitination to degradation of HMG CoA reductase”, Mol. Cell 19: 829-40(2005)；Jo, Y等人, “ancient ubiquitous protein 1 mediates sterol-inducedubiquitination of 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase in lipid droplet-associated endoplasmic reticulum membranes”, Mol. Biol. Cell 24: 169-83(2013)），泛素化的还原酶易位至脂质小滴相关的ER膜并且从膜错位至胞质溶胶中用于蛋白酶体降解（同上，引用Jo, Y等人, “ancient ubiquitous protein 1 mediates sterol-induced ubiquitination of 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase in lipiddroplet-associated endoplasmic reticulum membranes”, Mol. Biol. Cell 24: 169-83 (2013)；Hartman IZ,等人, “Sterol-inducd dislocation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase from endoplasmic reticulum membranes intothe cytosol through a subcellular compartment resembling lipi droplets”, J.Biol. Chem. 285: 19288-98 (2010)）。这种后泛素化过程可以通过香叶基香叶醇或其代谢活性香叶基香叶基焦磷酸来促进（同上，引用Sever, N. etal, “Insig-dependentubiquitination and degradation of mammalian 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoAreductase stimulated by sterols and geranylgeraniol”, J. Biol. Chem. 278:52479-90 (2003)）。
简而言之，Insig-1的泛素化是通过gp78介导的并受甾醇调控。同上。Insig-1在低甾醇条件下被gp78修饰。同上。高甾醇促进SCAP结合Insig，并且gp78被竞争掉，由此稳定Insig-1。同上。
Gp78介导的泛素化和Insig-1的降解提供了收敛反馈抑制的机制，由此抑制SREBP加工需要新合成的Insig-1和新获得的甾醇的收敛（DeBose-Boyd, R. A. “FeedbackRegulation of Cholesterol Synthesis: Sterol-accelerated ubiquitination anddegradation of HMG CoA Reductase”, Cell Res. 18 (6): 609-21 (2008)；引用Gong,Y.等人, “Sterol-regulated ubiquitination and degradation of Insig-1 creates aconvergent mechanism for feedback control of cholesterol synthesis anduptake”, Cell Metab. 3:15-24(2006)）。在甾醇耗尽的细胞中，SCAP-SREBP复合物不再结合Insig-1，其又被泛素化并降解。同上。这些SCAP-SREBP复合物可以自由离开ER并转移到Golgi，在这里SREBP被加工成刺激靶基因转录的核形式，包括Insig-1基因。同上。Insig-1基因的提高的转录导致提高的Insig-1蛋白合成，但该蛋白被泛素化并降解，直到甾醇积累至足以触发SCAP结合的水平。同上。
Insig-2已被定义为具有结合特异性的膜结合氧甾醇结合蛋白，其与氧甾醇抑制SREBP加工的能力相关（同上，引用Sun, LP,等人, “Sterol-regulated transport ofSREBPs from endoplasmic reticulum to Golgi: Insig renders sorting signal inScap inaccessible to COPII proteins”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 104: 6519-26(2007)；Radhakrishnan, A.等人, “From the Cover: Sterol-regulated transport ofSREBPs from endoplasmic reticulum to Golgi: Oxysterols block transport bybinding to Insig”, Proc. Natl Acad. Sci. USA 104: 6511-18 (2007)）。在许多组织中通过特定的水解酶合成了在异辛基侧链中的各个位置处含有羟基的氧甾醇、胆固醇衍生物（例如24-羟基胆固醇、25-羟基胆固醇、27-羟基胆固醇）；氧甾醇在胆固醇输出中起关键作用，并且是合成胆汁酸的中间体（同上，引用Russell, DW, “Oxsterol biosyntheticenzymes”, Biochim. Biophys. Acta–Molec. Cell Biol. Lipids 1529: 126-135(2000)）。氧甾醇（其在水溶液中比胆固醇明显更易溶解）可以容易地通过质膜并进入细胞，并且通过刺激HMG Co A还原酶和SCAP与Insigs的结合而极端有效地抑制胆固醇合成。同上。因此，SCAP-Insig复合物的形成可以通过将胆固醇结合到SCAP的膜结构域上或通过将氧固醇结合到Insigs上来启动，二者均阻止SCAP-SREBP并入从ER到Golgi的途径中萌发的囊泡中。同上。
Insig-介导的HMG CoA还原酶的调节受三类甾醇的控制：氧甾醇、胆固醇和甲基化甾醇（例如羊毛甾醇和24,25-二氢羊毛甾醇）。同上。氧甾醇通过它们与Insigs的直接结合加速HMG Co A还原酶的降解并阻断SCAP-SREBP从ER到Golgi的转运。同上。胆固醇不直接调节HMG Co A还原酶的稳定性，但与SCAP结合并触发Insig结合，由此防止SCAP-SREBP从ER这种逃逸。同上。羊毛甾醇选择性加速HMG Co A还原酶的降解，而不影响SCAP-SREBP从ER到Golgi的转运。同上。但是，羊毛甾醇的脱甲基化被认为是胆固醇合成的后-角鲨烯部分中的限速步骤（同上，引用Gaylor, JL, “Membrane bound enzymes of cholesterolsynthesis from lanosterol”, Biochem. Biophys. Res. Communic., 292: 1139-46(2002)；Williams,MT,等人, “Investigation of the rate-determining microsomalreaction of cholesterol biosynthesis from lanosterol in Morris hepatomas andliver”, Cancer Res. 37 : 1377-83 (1977)）。羊毛甾醇的积累被避免；它无法通过SCAP阻断SREBP处理，这确保了编码催化羊毛甾醇后反应的酶的mRNA保持提高，并且羊毛甾醇代谢成胆固醇。
矛盾之处在于，gp78缺陷提高了小鼠肝脏中3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶和胰岛素蛋白水平，因为Insigs不仅在转录后负调节3-羟基-3-甲基戊二酰基CoA还原酶，而且还通过与SCAP结合抑制SREBP加工（Jiang, W. and Song, B-L, “Ubiquitin Ligases inCholesterol Metabolism”, Diabetes Metab. 38: 171-80 (2014)，引用Nohturfft, A.等人, “Topology of SREBP cleavage-activating protein, a polytopic membraneprotein with a sterol sensing domain”, J. Biol. Chem. 273: 17243-250 (1998)）。这两种结果在胆固醇生物合成方面是矛盾的。来自L-gp78+小鼠的研究表明，在gp78缺陷的小鼠肝脏中胆固醇和脂肪酸的生物合成降低（同上，引用Edwards, PA等人,“Purification and properties of rat liver 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzymeA reductase”, Biochim. Biophys. Acta 574: 123-35 (1979)）。这已经被解释为意味着Insig-SCAP-SREBP轴占优势，尽管3-羟基-3-甲基戊二酸单酰CoA（HMG CoA）还原酶升高。同上。
ApoB-100——极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）的基本蛋白质组分，其在血浆胆固醇转运中起到关键作用——是g78的另一种底物。同上。在正常情况下，ApoB-100是定向分泌蛋白之一。同上。但是，当细胞脂质可用性受限时（例如新合成的核心脂质(甘油三酸酯、胆固醇酯)或微粒体甘油三酸酯转移蛋白活性降低），新生ApoB-100发生由gp78介导的ER相关降解。同上。当gp78过度表达时，通过apoB-100的26S蛋白体的泛素化和降解减少（同上，引用Ravid, T.等人, “The ubiquitin-proteasome pathway mediatesthe regulated degradation of mammalian 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme Areductase”, J. Biol. Chem. 275: 35840-847 (2000)）。当gp78被敲低时，HepG2细胞中apoB-100的分泌和VLDL的组装增加（同上，引用Hua, X.,等人, “Sterol resistance inCHO cells traced to point mutation in SREBP cleavage-activating protein”,Cell 87: 415-426 (1996)）。ApoB-100的逆转移也需要p97/VCP，类似于HMG CoA还原酶（同上，引用Nakanishi, M.等人, “multivalent control of 3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A reductase. Mevalonate-derived product inhibits translation of mRNAand accelerates degradation of enzyme”, J. Biol. Chem. 263: 8929-37 (1988)；Hua, X.,等人, “Sterol resistance in CHO cells traced to point mutation inSREBP cleavage-activating protein”, Cell 87: 415-426 (1996)）。
TRC8
人TRC8是位于ER膜中的多通膜蛋白，其结合Insig-1和Insig-2（同上，引用Inoue, S.等人, “Inhibition of degradation of 3-hydroxyl-3-methylglutaryl-coenzyme Areductase in vivo by cysteine protease inhibitors”, J. Biol. Chem. 266:13311-17 (1991)）。其含有保守的甾醇感应结构域和具有泛素连接酶活性的C-末端RING结构域（同上，引用Yabe, D.等人, “Insig-2, a second endoplasmic reticulum proteinthat binds SCAP and blocks export of sterol regulatory element-bindingproteins”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 12753-758 (2002)；Sun LP等人, “Fromthe Cover: Sterol-regulated transport of SREBPs from endoplasmic reticulum toGolgi: Insig renders sorting signal in Scap inaccessible to COPII proteins”,Proc. Natl Acad. Sci. USA 104: 6519-26 (2007)）。在SV-589细胞中的RNAi研究显示，敲低TRC8与gp78结合可以显著降低甾醇调节的遍在蛋白化以及HMG CoA还原酶的降解，表明gp78和TRC8都参与了在CHO-7和SV-589细胞中的HMG CoA还原酶的甾醇加速泛素化（同上，引用Inoue, S.等人, “Inhibition of degradation of 3-hydroxyl-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase in vivo by cysteine protease inhibitors”,J. Biol. Chem. 266: 13311-17 (1991)）。
TEB4
人TEB4是一种910个氨基酸的ER膜驻留泛素连接酶。在哺乳动物细胞中，胆固醇刺激角鲨烯单加氧酶（SM）的降解，该酶催化胆固醇合成中的第一个氧化步骤，由此角鲨烯转化为由TEB4介导的角鲨烯-2,3-环氧化物（37）（同上，引用Sever, N.等人, “Accelerateddegradation of HMG CoA reductase mediated by binding of insig-1 to itssterol-sensing domain”, Mol. Cell 11: 25-33 (2003)）。 作为SREBP-2的靶基因之一，SM的转录和SM蛋白的稳定性均由甾醇调节（同上，引用Sever, N.等人, “Insig-dependentubiquitination and degradation of mammalin 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoAreductase stimulated by sterols and geranylgeraniol”, J. Biol. Chem. 278:52479-490 (2003)）。SM蛋白水平在哺乳动物细胞中被胆固醇负调节（同上，引用Lee, PC,等人, “Isolation of sterol-resistant Chinese hamster ovary cells with geneticdeficiencies in both Insig-1 and Insig-2”, J. Biol. Chem. 280: 25242-249(2005)）。当存在胆固醇而不是24,25-二氢羊毛甾醇或侧链氧甾醇（如27-羟基胆固醇）时，SM被TEB4泛素化（同上，引用Sever, N.等人, “Accelerated degradation of HMG CoAreductase mediated by binding of insig-1 to its sterol-sensing domain”, Mol.Cell 11: 25-33 (2003)；Lee, PC等人, “Isolation of sterol-resistant Chinesehamster ovary cells with genetic deficiencies in both Insig-1 and Insig-2”,J. Biol. Chem. 280: 25242-249 (2005)）。
IDOL
低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因家族由涉及特定配体的受体介导的内吞作用的细胞表面蛋白组成。低密度脂蛋白（LDL）通常在细胞膜上结合并被摄入细胞，终结于降解蛋白质并使胆固醇可用于抑制微粒体酶HMG CoA还原酶的溶酶体中。同时，发生胆固醇酯合成的相互刺激。
LDL-R（IDOL）的可诱导降解物调节LDL-R的降解并需要E2酶UBE2D（同上，引用Schroepfer, GJ, Jr., “Oxysterols: modulators of cholesterol metabolism andother processes”, Physiol. Rev. 80: 361-554 (2000)；Bjorkhem, I., “Dooxysterols control choleseterol homeostasis”, J. Clin. Invest. 110: 725-30(2002)）。
LDL-R基因的转录主要由甾醇反应方式的SREBP调节。同上。LDL-R也通过蛋白原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型（PCSK9）介导的溶酶体中LDLR的降解在转录后水平下调节（同上，引用Radhakrishnan, A.等人, “Direct binding of cholesterol to thepurified membrane region of SCAP: Mechanism for a sterol-sensing domain”,Mol. Cell 15: 259-68 (2004)）。PCSK9在内质网（ER）中合成为大约74 kD的可溶性酶原，其中其发生自动催化处理以释放约60 kDa的加工酶以便从细胞中分泌。同上。PCSK9结合LDLR的胞外结构域，这导致LDLR的溶酶体降解。同上。
IDOL也是LDL-R的转录后调节剂（同上，引用Schroepfer, GJ, Jr.,“Oxysterols: modulators of cholesterol metabolism and other processes”,Physiol. Rev. 80: 361-554 (2000)）。激活LXR可以降低LDLR的丰度而不改变其mRNA水平，并随后抑制不同细胞中LDL的摄取（同上，引用Schroepfer, GJ, Jr., “Oxysterols:modulators of cholesterol metabolism and other processes”, Physiol. Rev. 80:361-554 (2000)）。IDOL可以根据其胞质结构域通过LDL-R的泛素化和降解来提高血浆胆固醇水平。 IDOL的减少或消除可以提高LDL-R蛋白水平并促进LDL摄取。Idol在肝脏中的表达相对较低，并且不受LXR调控，而LXR-IDOL途径似乎在外周细胞（例如巨噬细胞、小肠、肾上腺）中更活跃。
作为抗肿瘤剂的胆固醇生物合成途径抑制剂
他汀类药物（其作为降脂药物开发以控制高胆固醇血症）竞争性抑制HMG-CoA还原酶，并且已被提出作为抗癌剂，因为它们能够以对抑制HMG-CoA还原酶敏感和特异性的方式在多种肿瘤细胞中触发细胞凋亡（Thumher, M.,等人, “Novel aspects of mevalonatepathway inhibitors as antitumor agents”, Clin. Cancer Res. 18: 3524-31(2012)，引用Wong, WW等人, “HMG-CoA reductase inhibitors and the malignantcell: the statin family of drugs as triggers of tumor-specific apoptosis”,Leukemia 16: 508-19 (2002)）。这种凋亡反应部分归因于香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）的下游消耗，并由此归因于蛋白质异戊烯化的抑制。蛋白质异戊烯化产生脂质化的疏水性结构域并在膜结合或蛋白质-蛋白质相互作用中起作用。在小的鸟苷三磷酸酶（GTPases）的Ras和Rho家族的许多成员中发生了异戊二烯化。三种酶（法呢基转移酶(FTase)，香叶基香叶基转移酶(GGTase)I和GGTaseII）可以催化蛋白质异戊烯化。
虽然他汀治疗阻断了胆固醇的细胞内合成，但它也改变了肿瘤细胞膜的胆固醇含量，干扰了关键的信号传导途径（Cruz, PMR等人, “The role of cholesterolmetabolism and cholesterol transport in carcinogenesis: a review ofscientific findings, relevant to future cancer therapeutics”, Frontiers inPharmacol. 4(119): doi:10.3369/ phar.2013.00119, 引用Zhuang, L.等人,“Cholesterol targeting alters lipid raft composition and cell survival inprostate cancer cells and zenografts”, J. Clin. Invest. 115: 959-68 (2005)）。
已显示他汀类具有免疫调节活性（Thumher, M.等人, “Novel aspects ofmevalonate pathway inhibitors as antitumor agents”, Clin. Cancer Res. 18:3524-31 (2012), 引用Greenwood, J等人, “Statin therapy and autoimmune disease:from protein prenylation to immunomodulation”, Nat. Rev. Immunol. 6:358-70(2006)），并诱导异戊二烯基焦磷酸的在人树突状细胞中耗尽[Gruenbacher, G.等人,“CD56+ human blood dendritic cells effectively promote TH1-type gammadelta Tcell responses”, Blood 114: 4422-31 (2009)；Steinman, RM, Banchereau, J.,“Taking dendritic cells into medicine”, Nature 449: 419-26 (2007)）。异戊烯基焦磷酸丧失被翻译成半胱天冬酶1的激活，其切割IL-1β和IL-18的预成形体并使得能够释放生物活性的细胞因子。他汀类治疗的树突状细胞（DC）由此能够潜在地激活IL-2引发的自然杀伤（NK）细胞（同上，引用Gruenbacher, G.等人, “IL-2 costimulation enablesstatin-mediated activation of human NK cells, preferentially through amechanism involving CD56+ dendritic cells”, Cancer Res. 70: 9611-20 (2010)）。NK细胞，其识别和攻击缺乏MHC I类分子的肿瘤细胞（同上，引用Munz, C.等人,“Dendritic cell maturation by innate lymphocytes: coordinated stimulation ofinnate and adaptive immunity”, J. Exptl Med. 202: 203-7 (2005)；Maniar, A. 等人, “Human gammadelta T lymphocytes induce robust NK cell-mediated antitumorcytotoxicity through CD137 engagement”, Blood 116: 1726-33 (2010)），有助于先天性免疫反应对抗癌细胞。IL-2引发的NK细胞的他汀类药物诱导的响应可以在细胞培养物用类异戊二烯焦磷酸GGPP重构时被完全消除，这能够发生蛋白质香叶酰香叶酰化，尽管他汀介导抑制HMB-CoA还原酶。他汀还直接作用于人癌细胞以诱导细胞凋亡，并且NK细胞产生的IFN-γ与他汀类合作以协同地增强肿瘤细胞死亡（同上，引用Gruenbacher, G.等人, “IL-2 costimulation enables statin-mediated activation of human NK cells,preferentially through a mechanism involving CD56+ dendritic cells”, CancerRes. 70: 9611-20 (2010)）。
突变体p53（其存在于所有人类癌症的一半以上）可以显著上调癌细胞中的甲羟戊酸途径活性，这有助于维持恶性表型（同上，引用Freed-Pastor, WA等人, “Mutant p53disrupts mammary tissue architecture via the mevalonate pathway”, Cell 148:244-58 (2012)）。辛伐他汀可以显著降低表达单突变体p53等位基因的癌细胞的三维生长，并能诱导广泛的癌细胞死亡，显着降低其侵袭性表型。在类异戊二烯反向添加试验中，补充GGPP足以在存在HMG-CoA还原酶抑制的情况下恢复入侵表型，表明蛋白质香叶酰香叶酰化的上调是突变体p53的重要作用（同上，引用Freed-Pastor, WA,等人, “Mutant p53disrupts mammary tissue architecture via the mevalonate pathway”, Cell 148:244-58 (2012)）。
双膦酸盐——防止骨吸收的药物——作用于HMG-CoA还原酶下游以抑制焦磷酸法尼酯（FPP）合酶。双膦酸盐和他汀类药物最终都会导致FPP和GGPP丧失，由此不能进行Ras超家族小GTPases的法呢基化和香叶酰香叶酰化。关于双膦酸盐，由于破坏这些GTPases的膜锚定而对Ras信号传导的抑制最终终止了破骨细胞介导的骨吸收（同上，引用Konstantinopoulos, PA等人, “Post translational modifications and regulationof the RAS superfamily of GTPases as anticancer targets”, Nat. Rev. DrugDiscov. 6: 541-55 (2007)）。
甲羟戊酸途径抑制剂还包括多种类异戊二烯（Cruz, PMR,等人, “The role ofcholesterol metabolism and cholesterol transport in carcinogenesis: a reviewof scientific findings, relevant to future cancer therapeutics”, Frontiers inPharmacol. 4(119): doi:10.3369/ phar.2013.00119, Id.,引用Mo, H and Elson, CE,“Studies of the isopreoid-mediated inhibition of mevalonate synthesis appliedto cancer chemotherapy and chemoprevention”, Exp. Biol. Med. (Maywood) 229:567-85 (2004)），植物的甲羟戊酸衍生次级代谢产物（Bach, TJ, “Some new aspects ofisoprenoid biosynthesis in plants – a review”, Lipids 30: 191-202 (1995)）。已经发现类异戊二烯抑制肝HMG-CoA还原酶活性的效力与它们在肿瘤抑制中的效力强相关（同上，引用Elson, CE和Quereshi, AA, “Coupling the choleseterol – and tumor-suppressive actions of palm oil to the impact of its minor constituents on 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity”, ProstaglandinsLeukot. Essent. Fatty Acids 52: 205-207 (1995)）。生育三烯酚（维生素E分子）和具有法呢醇侧链的“混合类异戊二烯”下调肿瘤中的HMG-CoA还原酶活性并因此诱导了细胞周期停滞和细胞凋亡（同上，引用Mo H和Elfakhani, CE, “Mevalonate-suppressivetocotrienols for cancer chemoprevention and adjuvant therapy, inTocotrienols: Vitamin E beyond tocopherols”, 编辑RR. Wilson等人(Boca Raton:CRC Press), 135-149 (2013)）。通过补充甲羟戊酸减弱生育三烯酚的生长抑制效果（同上，引用Hussein, D和Mo, H, “d-δ-tocotrienol-mediated suppression of theproliferation of human PANC-1, M1A PaCa2 and BxPC-3 pancreatic carcinomacells”, Pancreas 38: e124-e136 (2009)）。
唑类抗真菌化合物（如酮康唑）阻断参与胆固醇生物合成的几种细胞色素P450酶的活性（例如CYP51A1，其催化羊毛甾醇的脱甲基化的，和CYP17A1，其介导雄激素合成中的一个步骤）已经在临床上用于治疗激素顽固性***癌，最近已被CYP17A1拮抗剂阿比特龙超越（Gorin, A.等人, “Regulation of choletrol biosynthesis and cancersignaling”, Curr. Op. Pharmcol. 12(6) 710-16 (2012)；引用(4)）。伊曲康唑经由其对hedgehog途径中Smoothened的抑制作用显示出对抗髓母细胞瘤的活性（同上，引用Kim, J.等人, “Itraconazole, a commonly used antifungal that inhibits Hedgehogpathway activity and cancer growth”, Cancer Cell. 17(4): 388-99 (2010)），并经由其对溶酶体胆固醇运输的干扰抑制血管生成（同上，引用Xu, J.等人, “Choleseroltrafficking is required for mTPOR activation in endothelial cells”, Proc.Natl Acad. Sci. USA 107(10): 4764-69 (2010)）。伊曲康唑（一种公认的CYP51/ERG11抗真菌抗生素）的抗血管生成作用经由抑制内体胆固醇运输和抑制mTOR信号传导发挥作用。同上。
在肿瘤细胞中，经由PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2提高的生长因子或类固醇激素受体的信号传导活性（Gorin, A.等人, “Regulation of choletrol biosynthesis andcancer signaling”, Curr. Opin. Pharmacol. 12(6): 710-16 (2012), 引用Menendez,JA和Lupu, R., “Fatty acid synthase and the lipogenic phenotype in cancerpathogenesis”, Nat. Rev. Cancer 7(10): 763-77 (2007)），HIF-1α、p53（同上，引用Oliverase, G.等人, “Novel anti-fatty acid synthase compounds with anti-canceractivity in Her2+ breast cancer”, Ann. N.Y. Acad. Sci. 1210: 86-92 (2010)）和音猬因子（SHH）（同上，引用Bhatia, B.等人, “Sonic hedgehog signaling andmalignant transformation of the cerebellar granule neuron precursor cells”,Oncogene 30(4): 410-22 (2011)）途径调节和激活SREBP-1——脂肪生成的主要调节成分。据报道，使用雷帕霉素抑制mTORC1对SREBP-1核定位及其丰度影响不大，但抑制其上游因子如EGFR、PI3K和Akt，显着降低SREBP-1 N端水平并降低其在核中的丰度（Guo, D等人,“Targeting SREBP-1 driven lipid metabolism to treat cancer”, Curr. Pharm Des.20(15): 2619-26 (2014)引用Guo, D.等人, “EGFR signaling through han Akt-SREBP-1-dependent, rapamycin-resistant pathway sensitizes glioblastomas toantilipogenic therapy”, Science Signaling 2: ra82 (2009)）。mTOR激酶抑制剂Torin-1（同上，引用Peterson, TR等人, “DEPTOR is an mTOR inhibitor frequentlyoverexpressed in multiple myeloma cells and required for their survival”,Cell 137: 873-86 (2009)），其抑制mTORC1和mTORC2活性（同上，引用Sabatini, DM,“mTOR and cancer: insights into a complex relationship”, Nat. Rev. Cancer 6:729-34 (2006)）与单独由雷帕霉素抑制mTORC1相比显著降低了核内的SREBP-1丰度（同上，引用Peterson, TR,等人, “mTOR complex I regulates lipin 1 localization tocontrol the SREBP pathway”, Cell 146: 408-20 (2011), Hagiwara,等人, “HepaticmTORC2 activates glycolysis and lipogenesis through Akt, glucokinase andSREBP1c”, Cell Metab. 15: 725-38 (2012)）。
已经在许多癌中观察到脂肪生成酶的过表达（Gorin, A.等人, “Regulation ofcholesterol biosynthesis and cancer signaling”, Curr. Opin. Pharmacol. 12(6):710-16 (2012), 引用Nagahashi, M.等人, “Sphingosine-1-phosphate produced bysphingosine kinase 1 promotes breast cancer progression by stimulatingangiogenesis and lymphangiogenesis”, Cancer Res. 72(3): 726-35 (2012)）并已经描述为与疾病严重程度、增加的复发风险和较低的存活机会相关联（同上，引用Uddin, S.等人, “High prevalence of fatty acid synthase expression in colorectalcancers in Middle Eastern patients and its potential role as a therapeutictarget”, Am. J. Gastroenterol. 104(7): 1790-1801 (2009；Mashima, T.等人, “Denovo fatty-acid synthesis and related pathways as molecular targets forcancer therapy”, Br. J. Cancer 100 (9): 1369-72 (2009)）。
脂质和甾醇的加速合成也是恶性转化的基本机制成分。氧化的LDL受体1（OLR1）是永生化MCF10A乳腺上皮细胞的Src激酶转化所需的（同上，引用Hirsch, HA等人, “Atranscriptional signature and common gene networks link cancer with lipidmetabolism and diverse human diseases”, Cancer Cell. 17(4): 348-61 (2010)）。OLR1在转化过程中被显著诱导，并且通过siRNA消耗OLR1阻断了形态转化并抑制细胞迁移和侵入，并导致体内肿瘤生长的降低。同上。相反，ORL1蛋白在MCF10A和HCC1143乳腺上皮细胞中的过度表达导致BCL2（其为凋亡的负调节剂）的显著上调（同上，引用Khaidakov, M.等人, “Oxidized LDL receptor 1 (OLR1) as a possible link between obesity,dyslipidemia and cancer”, PLoS One 6(5): e20277 (2011)）。
与二氢胆固醇-7还原酶（DHCR7）复合的EBP催化第二胆固醇环中C7和C8之间双键的异构化（Gabitova, L.等人, “Molecular Pathways: Sterols and receptorsignaling in Cancer”, Clin. Cancer Res. 19(23): 6344-50 (2013)）。该复合物介导胆固醇环氧化物水解酶的活性（同上，引用de Medina, P.等人, “Identification andpharmacological characterization of choleseterol-5,6-epoxide hydrolase as atarget for tamoxifen and AEBS ligands”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107:13520-5 (2010)）。
存在几种已知的EBP抑制剂，其中一些已被描述为抗癌剂。例如，天然存在的甾体生物碱5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑并-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇（dendrogenin A）的甾醇缀合物（其在正常情况下产生，但不在癌细胞中产生）和5,6α-环氧-胆固醇和组胺（同上，引用de Medina, P.等人, “Dendrogenin A arises from cholesterol and histaminemetabolism and shows cell differentiation and anti-tumour properties”, NatureCommunic. 4: 1840 (2013)；de Medina, P.等人, “Synthesis of newalkylaminooxysterols with potent cell differentiating activities:identification of leads for the treatment of cancer and neurodegenerativediseases”, J. Med. Chem. 52: 7765-77 (2009)）已经显示抑制癌细胞生长并在不同类型的癌症的各种肿瘤细胞系中诱导体外分化（同上，引用de Medina, P.等人, “Synthesisof new alkylaminooxysterols with potent cell differentiating activities:identification of leads for the treatment of cancer and neurodegenerativediseases”, J. Med. Chem. 52: 7765-77 (2009)）。其还抑制体内黑素瘤异种移植研究中的肿瘤生长和延长的动物存活（同上，引用de Medina, P.等人, “Dendrogenin A arisesfrom cholesterol and histamine metabolism and shows cell differentiation andanti-tumour properties”, Nature Communic. 4: 1840 (2013)）。
SR31747A（顺式-N-环己基-N-乙基-3-(3-氯-4-环己基-苯基)丙烯-2-基胺盐酸盐）——一种选择性外周σ结合位点配体，其生物活性包括免疫调节和抑制细胞增殖——以纳摩尔亲和力结合SR31747A结合蛋白1（SR-BP）和EBP（Berthois, Y.等人, “SR31747A isa sigma receptor ligand exhibiting antitumoural activity both in vitro and invivo”, Br. J. Cancer 88: 438-46 (2003)）。在下列乳腺和***癌细胞系中体外评估SR31747A对增殖活性的作用：乳腺（来自乳腺腺癌胸腔积液的激素响应性MCF-7细胞；MCF-7AZ；衍生自MCF-7细胞系的激素非依赖性MCF-7/LCC1细胞；对抗***LY117018的生长抑制作用具有抗性的MCF-7LY2；由转移性人乳腺癌肿瘤建立的激素无应答MDA-MB-321和BT20）；和***癌（激素反应性***癌细胞系LNCaP；由骨髓转移建立的激素无应答PC3细胞系；由脑转移建立的激素无应答DU145）。同上。SR31747A诱导细胞增殖的浓度依赖性抑制，无论细胞是激素应答的还是无应答的。同上。通过加入胆固醇可以部分降低SR31747A的抗增殖作用（同上。Labit-Le Bouteiller, C.等人, “Antiproliferative effects ofSR31747A in animal cell lines are mediated by inhibition of cholesterolbiosynthesis at the sterol isomerase step”, Eur. J. Biochem. 256: 342-49(1998)），因此证实了EBP的参与。对SR31747A的敏感性与EBP的细胞水平无关（Berthois,Y.等人, “SR31747A is a sigma receptor ligand exhibiting antitumoural activityboth in vitro and in vivo”, Br. J. Cancer 88: 438-46 (2003)）。SR31747A还在小鼠异种移植模型中抑制体内增殖。同上。CHO细胞中的鼠EBP cDNA过度表达提高了这些细胞对SR31747A诱导的增殖抑制的抗性（Labit-Le Bouteiller, C.等人, “Antiprolifertiveeffects of SR31747A in animal cell lines are mediated by inhibition ofcholesterol biosynthesis at the sterol isomerase step”, Eur. J. Biochem. 256:342-49 (1998)）。
他莫昔芬，以竞争性方式抑制SR31747结合并诱导∆8-甾醇的积累，而依莫帕米（人甾醇异构酶的高亲和力配体）和异博定（另一种钙通道阻断剂）在抑制SR31747与其哺乳动物靶标的结合方面效率低下，表明它们的结合位点不重叠（Paul, R.等人, “Both theimmunosuppressant SR31747 and the antiestrogen tamoxifen bind to an emopamil-insensative site of Mammalian ∆8-∆7 sterol isomerase”, J. Pharmacol. ExptlThera. 285(3): 1296-1302 (1998)）。一些药物，例如顺式-氟哌噻吨、三氟胸苷、7-酮胆甾烷醇和它莫西芬，仅抑制SR31747与哺乳动物EBP酶的结合，而其他药物，例如氟哌啶醇和丁苯吗啉，对酵母酶比对哺乳动物更有效。同上。
实施例3. 显示胆固醇合成酶被4C12下调的试验
图12A是显示用化合物4C12处理24小时和48小时vs.阴性对照物（仅载体）的在Mut6细胞中的胆固醇（pg/细胞）和甘油三酸酯（pg/细胞）水平的柱形图。该图表明，在化合物4C12的存在下，胆固醇水平降低，并且甘油三酸酯水平提高。图12B是相对mRNA vs. 胆固醇合成酶的柱形图，表明胆固醇合成酶的基因被化合物4C12下调。用化合物4C12处理Mut6细胞24小时，随后对羟甲基戊二酰-CoA合酶（Hmgcs）；3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A还原酶（Hmgcr）；乙酰乙酰基-CoA合成酶（AACS）；Delta(24)-甾醇还原酶（Dhcr24）；7-脱氢胆固醇还原酶（Dhcr7）；甾醇C5-脱饱和酶（Sc5d）；角鲨烯合酶（SS）；和焦磷酸法尼酯（FPP）合酶（FPPS）测定mRNA水平。
在图13(a)–(e)中，分别用化合物4C12处理Mut6细胞2、9、16、24和48小时，以及与DMSO对照物相比它们的胆固醇基因谱。数据表明，化合物4C12抑制Srebp2靶基因，而不抑制Srebp1靶基因。(f) Western印迹。Mut6细胞仅用载体（-）或用化合物4C12（+）处理7小时、13小时和23小时。收集细胞，在SDS缓冲液中裂解，施以SDS PAGE，并通过标准方案将细胞蛋白转移到膜上。将该膜洗涤，用针对SREBP1、SREBP2的抗体和阳性对照物（钙粘着蛋白）处理，重新洗涤，并随后显露结合的抗体。印迹表明化合物4C12有效降低了SREBP2蛋白。
实施例4: 确定胆固醇降低在化合物4C12诱导的细胞死亡中在功能上是否重要的试验
图14A和15（a）是绘制用康帕丁/美伐他汀、化合物4C12和康帕丁/美伐他汀+化合物4C12的组合vs阴性对照物（仅载体）处理的Mut6细胞的ATP活性（存活性的量度）的柱形图。结果表明，康帕丁/美伐他汀与化合物4C12的组合发挥了大于各自独立作用的效果。图13B显示了他汀对胆固醇生物合成途径的甲羟戊酸臂的抑制效果。
图15(b)是显示ATP活性（存活性的量度）vs.胆固醇浓度（µM）的柱形图——Mut6细胞用化合物4C12处理 vs 用DMSO（阴性对照物）处理的细胞。添加胆固醇抑制了化合物4C12诱导的细胞死亡。15(c)显示了相对ATP活性（y轴，存活性的量度）vs.化合物4C12浓度（nM）（x轴）。通过敲低Insig1/Insig2增加SREBP2使Mut6细胞对化合物4C12较不敏感。
图16是用化合物4C12或DMSO（阴性对照物）处理的小鼠胚胎成纤维细胞（左）和星形胶质细胞（右）中胆固醇生物合成途径靶基因Hmgcs、Hmgcr、FPPS、LDLR；以及SREBP1c的相对mRNA水平的柱形图。该图表明，在MEF和星形胶质细胞中，Srebp2靶基因并未被化合物4C12降低。
图17将用化合物4C12处理24小时和48小时的Mut6细胞和MEF细胞中的胆固醇水平（pg/细胞）（左）和甘油三酸酯水平（pg/细胞）（右）与阴性对照物（载体）进行了比较。结果表明，观察到的化合物4C12降低胆固醇是对Mut6肿瘤细胞特异性的，并且Mut6细胞具有低得多的胆固醇和甘油三酸酯的基础水平。
图18A是显示在用DMSO或用化合物4C12处理16小时的Mut6细胞中抑制胆固醇生物合成途径基因Hmgcs；Hmgcr、AACS、Dhcr24、Dhcr7、Sc5d、SS、FPPS、LDLR；和SREBP2的效果的柱形图。图18B是显示用化合物4C12 vs DMSO阴性对照物处理Mut6细胞16小时对ABCa1水平的影响的柱形图。
图19显示了各种原发性患者来源的胶质母细胞瘤细胞系（顶部左侧和顶部右侧）和在存在（底部左侧）与不存在（底部右侧）血清的情况下HeLa（子宫颈）、HT-29（结肠）、435（乳腺）、549（肺）、MCF7（乳腺）、HCC38（乳腺）、Daoy（髓母细胞瘤(脑)癌细胞系）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）细胞的相对ATP水平（y轴，存活性的量度）vs.化合物4C12的浓度（nM）。
虽然已经参照其具体实施方案对本发明进行了描述，本领域技术人员应当理解的是，在不背离本发明的真实精神和范围的情况下可以进行多种改变和可以替换同等物。此外，可以作出许多修改，以使得具体的情况、材料、物质的成分、方法、方法的一个步骤或多个步骤适应于所述发明的客观精神和范围。所有这样的修饰意图在其随附权利要求的范围内。

Claims (83)

1.式I的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
（式I）
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
Y1选自C=O、CH2和SO2；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1-R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1-R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成，此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR、NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me、Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
2.如权利要求1所述的化合物，其中：
n = 1或2；
R3 = H；并且
R4选自H、Me和炔丙基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中：
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基。
4.如权利要求3所述的化合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；并且
X2 = L2–R6。
5.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
6.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求5的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
8.如权利要求6所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
9.如权利要求6所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
12.如权利要求9所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
13.如权利要求6所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
14.式I-a的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-a)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L1–R5；
X2选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3、SO2Me和L2–R6；
n = 1、2或3；
L1选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成，此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R5选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
15.如权利要求14所述的化合物，其中：
n = 1或2；
R3 = H；并且
R4选自H、Me和炔丙基。
16.如权利要求15所述的化合物，其中：
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基。
17.如权利要求16所述的化合物，其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；并且
X2 = L2–R6。
18.如权利要求14所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
19.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求18的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
22.如权利要求19所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
25.如权利要求22所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
26.如权利要求19所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
27.式I-b的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-b)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成，此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；和
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
28.如权利要求27所述的化合物，其中：
n = 1或2；
R1和R2独立地选自H、C1–C6烷基、C2–C6炔基、C1–C6羟基烷基和酰氧基烷基；
R3 = H；并且
R4选自H、Me和炔丙基。
29.如权利要求27所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
30.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求29的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
32.如权利要求30所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
33.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
36.如权利要求33所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
37.如权利要求30所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
38.式I-c的小分子抗增殖化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-c)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y2选自CR’R”、NR、O和S，在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、i-Pr和环丙基；
k = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；和
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
39.如权利要求38所述的化合物，其中：
Y2选自CH2、NR、O和S，在该段落的上下文中，R选自H和Me；
k = 1或2；
n = 1或2；
L2选自NH、O、S、CHOH、C=O、–S(CH2)–；并且
R3 = H；并且
R4选自H、Me和炔丙基。
40.如权利要求39所述的化合物，其中：
L2选自NH、O和S；并且
R6选自芳基和杂芳基。
41.如权利要求38所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
42.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求41的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
44.如权利要求42所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
45.如权利要求42所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
48.如权利要求45所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
49.如权利要求42所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
50.式I-d的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-d)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y3选自CH2、NR、O和S，在该段落的上下文中，R选自H、Me、CD3、CF3、Et、异丙基和环丙基，
n = 1或2；
L2选自S、O和NH；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et和C2–C6炔基；并且
R6选自芳基、杂芳基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
51.如权利要求50所述的化合物，其中：
Y3选自CH2、NH、NMe和O；
R4选自H、Me和炔丙基；并且
R6选自芳基和杂芳基。
52.如权利要求50所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
53.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求52的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
59.如权利要求56所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
60.如权利要求53所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
61.式I-e的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-e)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
Y4选自CR’R”、NR、O和S，在该段落的上下文中，R、R’和R”独立地选自H、F、Me、Et、异丙基和环丙基；
j = 0、1、2或3；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；并且
R6选自环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、苄基、稠合杂芳基芳基、稠合芳基杂芳基和稠合芳基芳基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
62.如权利要求61所述的化合物，其中：
Y4 = CH2；
j = 1；
n = 1或2；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O和–S(CH2)–；
R2选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；并且
R4选自H、Me和炔丙基。
63.如权利要求61所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
64.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求63的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
65.如权利要求64所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
66.如权利要求64所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
67.如权利要求64所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
70.如权利要求67所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
71.如权利要求64所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
72.式I-f的小分子抗癌化合物或其药学上可接受的盐、前药、活性代谢物或溶剂合物：
(式I-f)
其中：
X1选自H、F、Cl、CN、NH2、NO2、N3和SO2Me；
n = 1、2或3；
L2选自S、O、NH、CHOH、C=O、–O(CH2)–、–S(CH2)–、–(CH2)O–和–(CH2)S–；
R1选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由三至六个包含独立地选自(CR7R8)、NR9、O和S的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3包含–(CR10R11)m–，其中m = 2、3、4或5；
R2选自H、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、C1–C6羟基烷基、C1–C6烷氧基烷基和酰氧基烷基；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由一至四个包含独立地选自–(CR12R13)–的亚单元的亚单元链组成，此外，R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3选自H、D、F、Me和Et；
R4选自H、Me、CD3、CF3、Et、i-Pr、环丙基和C2–C6炔基；
R7和R8独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R9选自H、Me、Et、异丙基和环丙基；
R10和R11独立地选自H、D、F、Me、Et、OR和NR2，在该段落的上下文中，R选自H、Me和Et；
R12和R13独立地选自H、D、F、Me和Et；并且
R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并选自H、D、F、Cl、Br、CF3、C1–C6烷基、C2–C6链烯基、C2–C6炔基、环烷基、OR、NR2、NO2、N3、CN、CO2R、CO2NR2、SR、烷基酰基和芳基酰基，在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et、异丙基、环丙基、炔丙基和酰基；
以使每当存在立体中心时均包括所有可能的立体异构体，包括旋光异构体。
73.如权利要求72所述的化合物，其中：
n = 1或2；
L2选自NH、O、S、–S(CH2)–、C=O和CHOH；
R1和R2独立地选自H、C1–C3烷基、炔丙基、C1–C3羟基烷基和酰氧基烷基；
R1和R2可以任选形成环，以使R1–R2由四或五个包含独立地选自CH2、NH、NMe和O的亚单元的亚单元链组成；
R1和R3可以任选形成环，以使R1–R3 = –(CH2)3–；
R2和R4可以任选形成环，以使R2–R4由两个包含独立地选自CH2和CH-烷基的亚单元的亚单元链组成，并且R2可以如上所述与R1同时形成环；
R3 = H；
R4选自H、Me和炔丙基；并且
R14和R15可以在芳族环上的任何可用位置处连接，并独立地选自H、F、Cl、Br、CF3、C1–C3烷基、炔丙基、OR、NR2、NO2、CN、CO2R和CO2NR2、SR，在该段落的上下文中，R独立地选自H、Me、Et和炔丙基。
74.如权利要求72所述的化合物，其中所述化合物为包含治疗量的所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物的形式。
75.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者给药权利要求74的药物组合物，其中所述治疗量有效抑制肿瘤生长、抑制肿瘤增殖、诱导细胞死亡或其组合。
76.如权利要求75所述的方法，其中所述治疗量有效抑制胆固醇生物合成途径。
77.如权利要求75所述的方法，其中所述治疗量有效下调SHREBP2及其靶基因。
78.如权利要求75所述的方法，其中所述癌症是实体脑肿瘤。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述实体脑肿瘤是神经胶质瘤。
80.如权利要求79所述的方法，其中所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
81.如权利要求78所述的方法，其中所述实体脑肿瘤包含癌症干细胞。
82.如权利要求75所述的方法，其中所述治疗量的所述组合物有效地选择性抑制癌细胞的生长、抑制癌细胞的增殖、诱导癌细胞的细胞死亡或其组合，而不影响正常***的细胞。
83.化合物，选自：
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