CN107865944A - 一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该药物由白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲6味药材组成，具体的澄清工艺是以II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清药物组合物提取液，具体的质量控制方法是运用薄层色谱法对药物组合物中白薇、银杏叶进行薄层鉴别，同时结合高效液相色谱法测定药物组合物Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷的含量，本发明采用的澄清工艺和质量控制方法，具有设备投资少、操作工艺简单，克服了传统醇沉法耗醇量大，乙醇回收繁琐，药物多成分的复杂测定方法等缺陷，快速、有效地确保组合物的内在质量、疗效和稳定性，提高药物组合物质量标准的可控性。

Description

一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量 控制方法
技术领域
本发明采用天然澄清剂的澄清工艺和现代分析检测仪器检测中药制剂技术领域，涉及一种修复皮肤屏障的药物组合物的质量控制方法。
背景技术
近年来，随着糖皮质激素外用制剂的广泛使用，激素依赖性皮炎逐渐增多，已成为皮肤科的常见病。该病具有多形态损害，对激素依赖，反复发作等特点，严重影响着患者的容貌及心理健康。一般来说，强效的激素药膏在面部使用超过1.5个月，弱效或含有微量激素的违规化妆品长时间使用(1-2年)，都会在局部诱发激素依赖性皮炎。长期外用糖皮质激素导致皮肤屏障破坏，皮肤出现萎缩，角质层变薄，真皮***退变，同时诱导炎性因子表达有关，使面部皮肤炎症反复发作并逐渐加重，从而对激素产生依赖。患者皮肤屏障功能破坏后，皮肤对外界各种理化刺激的敏感性增高，每遇日晒、风吹、热及进食刺激性食物后症状加重。因此，应配合使用能恢复皮肤屏障功能的防敏、保湿医学护肤品，以降低皮肤敏感性。针对这一情况，不少研究者将皮肤修复产品作为研发的重点。如专利201510725856.X，该专利公开了一种皮肤修复液及其应用，该皮肤修复液包括甘油、1，2-戊二醇、甘草酸二钾、人寡肽、透明质酸钠、库拉索芦荟汁、水。如专利201510888998.8，该专利公开了一种一种皮肤修复液及其制备方法，该修复液由红花、马齿笕、大黄、艾叶、天麻、米醋、香茅、柠檬、鳄鱼蛋原液组成。如专利201510540856.2，该专利公开一种用于皮肤修复的多肽组合物，该多肽由六肽-3、铜肽、棕榈酰三肽-1、五肽-31等组成。如专利201510812038.3，该专利公开了一种用于皮肤修复的制剂制备方法及其制剂，该制剂由大黄、冰片、紫草、地榆、虎杖、苦参、芒硝、白芷、马鞭草、金钱草、千里光、银杏叶、石斛、珍珠、儿茶、苍术、金银花等组成。但这些产品都没有从激素依赖性皮炎的病理生理特点入手解决问题，因此使用时间长，效果却不理想，这就为生产厂家和使用者带来了困扰，并且不少化学品会对皮肤造成不可逆转的伤害，而天然植物化妆品不使用化学药品，对皮肤无刺激性，并能够帮助皮肤逐渐恢复正常功能，因此天然植物化妆品备受消费者青睐。
中药复方制剂的制备经常包括提取过程，而得到的中药提取物是一个复杂的混合体系，包括活性成分和杂质，其中含有大量的微细粒子、淀粉、鞣质、蛋白质、多糖等物质(偶有药材残渣，泥沙等杂质)，共同形成1-100Knm是胶体分散体系，属于动力学及热力学不稳定体系，具有自发沉降的趋势。为保留活性成分，除去这些杂质，使固液迅速而完全地分离，就要设法破坏混合体系的稳定性。中药复方制剂多采用水提醇沉工艺，该工艺具有澄清药液、减少服用量等优点。但该工艺在澄清药液同时将中药中的一些醇不溶性的大分子如蛋白质及部分多糖作为杂质除去，而这些成分具有广泛的生理活性和药用价值。絮凝澄清法是在混悬的中药提取液中加入一种澄清剂以吸附架桥和电中和方式除去溶液中的粗粒子，以达到分离纯化目的的一种高效技术，ZTC1+1天然澄清剂是一种从食品中提取，以天然多糖等为原料制成的天然高分子物质，由A、B2 种组分组成，其澄清原理是采用“1+1”澄清技术，其中1组分起主絮凝作用，另1组分起辅助絮凝作用，具有较好的澄清效果。
随着科学的发展，分析仪器的普及应用，使中药复方检测分析和质量控制不断提高和完善。薄层色谱法(TLC)，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。高效液相色谱检测分析技术在中药质量控制中发挥越来越重要的作用。它是通过光谱色谱等分析手段对中药或复方进行成分检测，利用不同成分特有的化学图谱，反映中药或复方所含的内在化学成分的种类和含量。
药物组合物由白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲6 味药材组成，其活性成分较多，依据2015版中国药典，各组分药材的色谱条件与***适用性试验方法各不相同，逐一测定复方中各药材的目标成分含量，不利于评价和控制复方中药的质量，从而保证其药效成分的稳定性和数量。
本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲为原料，制备并澄清获得了所述的修复皮肤屏障的组合物，其中，所述的白薇选用萝藦科植物白薇的干燥根；粗齿冷水花选用荨麻科冷水花属；粗齿冷水花的干燥全草；银杏叶选用银杏科植物银杏的干燥叶；黄花倒水莲选用远志科远志属植物黄花倒水莲的干燥根；金线莲选兰科开唇兰属多年生草本植物金线莲的干燥全草；石崖茶选用山茶科杨桐属植物亮叶黄瑞木的干燥叶，上述中药饮片经广东省中医院药学部陈燕芬主任中药师鉴定符合国家标准，样品凭证留存在广东省中医院中药制剂实验室备查。
根据《中国药典》和文献记载：
白薇为白薇选用萝藦科植物白薇或蔓生白薇的干燥根或根茎。白薇苦、咸、寒，归胃、肝、肾经，功能清热凉血、利尿通淋、解毒疗疮。用于温邪伤营发热、阴虚发热、骨蒸劳热、产后血虚发热、热淋、血淋、痈疽肿毒。
粗齿冷水花又名紫绿草、青药、水麻叶、水甘草、大茴香、宫麻，为荨麻科冷水花属粗齿冷水花的全草，分布于我国广西、贵州、四川和云南等省，具有清热解毒、活血祛风、理气止痛的功效，主治高热、喉蛾肿痛、鹅口疮、跌打损伤、骨折、风湿痹痛，广西民间用其于健脾、催乳、止咳、消炎、防治***和***等妇科疾病。
银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶。银杏叶是一种名贵中药，味甘、苦、涩、平，归心、肺经。功能活血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂，用于治疗瘀血阻络、胸痹心痛、中风偏瘫、肺虚咳喘、高脂血症。目前研究认为，银杏叶中的主要活性成分有黄酮类、萜内酯类、有机酸类，此外还含有聚戊烯醇类酯、多糖类、烷基酚酸类化合物及一些其他营养成分等。银杏叶提取物具有减轻神经细胞损伤和脑部缺血的作用。
黄花倒水莲又名黄花参、黄花吊水莲，其为远志科远志属植物黄花倒水莲的干燥根，是一种应用历史悠久的民间药物。其具有健脾、散瘀通络等功效，传统上用于治疗劳倦乏力、子宫脱垂、小儿疳积、脾虚水肿、带下、***、跌打损伤、急慢性肝炎等症。最新的研究发现其具有良好的抗氧自由基活性，其皂苷类成分具有很强的降血脂作用。
石崖茶为山茶科杨桐属植物亮叶黄瑞木的干燥叶，又名石芽茶、石岩茶、石山茶、亮叶杨桐、亮叶红淡、亮叶黄瑞木，主要分布于我国广西、广东和贵州等地，资源丰富，民间应用该植物的历史悠久。石崖茶香气浓郁，味先微苦而后甘凉清甜，具有清热解毒、护肝明目、消炎润肺、养颜降压、调血脂、健胃消食等作用，是一种保健和药用价值都很高的野生植物。石崖茶中主要含有类黄酮、三萜皂苷类、茶多酚、多糖等成分。
金线莲为兰科开唇兰属多年生草本植物金线莲，是十分珍稀的中草药，素有“神草”“乌人参”等美称。全身药用，味平，性甘，具有清热凉血、除湿解毒、益寿延年等功用，可治疗肺热咳嗽、风湿骨痛、糖尿病、膀胱炎等。富含多糖、黄酮类、微量元素、氨基酸、酚类、三萜类等多种物质。
目前，国内外尚未见将白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲提取物的组合物用于修复皮肤屏障的相关报道。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供的药物组合物，针对皮肤的结构和激素依赖性皮炎肌肤损伤的机制，具有改善表皮细胞微循环和促进皮肤新陈代谢的作用，能加速组织再生与修复等作用；科学严谨的临床实验进一步证明其具有良好的修复皮肤屏障作用，且无皮肤刺激性，不良反应低，十分安全，社会需求量大，非常适合添加到膏霜乳液等化妆品中，具有良好的社会和经济效益。
发明内容
本发明目的在于根据现代技术，提供一种具有修复皮肤屏障作用的中药药物组合物的快速澄清、高效质量控制方法，从整体上评价和控制药物组合物质量，保证修复皮肤屏障中药的疗效更加稳定、可靠。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺，取具有修复皮肤屏障作用的中药制剂常规乙醇浸泡提取，浸泡液减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附，5％-95％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即为所述的具有修复皮肤屏障作用的药物组合物，置于60℃水浴，先加入4％洗脱液体积的II型ZTC1+1天然澄清剂B 组分，1h后加入2％体积的II型ZTC1+1天然澄清剂A组分，期间每半小时搅拌 1分钟令杂质成分凝聚沉淀，然后在离心机中以4000r/min离心10min，取上清液；所述的II型ZTC1+1天然澄清剂：它是一种以天然多糖为原料制成的天然高分子物质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶，配成1％的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶的复合酶，用1％醋酸配成1％浓度的溶液使用。
A组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤；
B组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤。。
一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)用薄层色谱法鉴别该药物中药材白薇，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加甲醇30mL，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取白薇对照药材粉末1g，加甲醇30mL，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为白薇药材溶液；
c.白薇薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)用薄层色谱法鉴别该药物中药材银杏叶，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加乙醇20mL，超声提取30分钟，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取银杏叶对照药材1g，加乙醇20mL，加热回流提取10min，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液；
c.银杏叶薄层色谱鉴别：依照薄层色谱法试验，分别吸取银杏叶对照药材溶液和供试样品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸- 水(5∶3∶1∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷：3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视；
(3)用高效液相色谱法测定药物中金线莲苷的含量，包括：
a.高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0～10min 30％A→35％A、10～ 45min 35％A→45％A、45～60min 45％A→75％A，平衡时间15min，流速 0.8mL/min，进样量10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长215nm；
b.供试品溶液的配制：取修复皮肤屏障作用的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附， 5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
c.对照品溶液的制备：精密称取Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷对照品各2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液；
d.线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到标准品的回归方程；
e.测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。
作为优选的，修复皮肤屏障的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法的供试品溶液为水提液，具体方法为：取修复皮肤屏障作用的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用。
优选的，所述的修复皮肤屏障的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法用于提取方法相同的药物组合物片剂，颗粒剂或药物组成含有白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲药材的复方。
优选的，在修复皮肤屏障的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法的含量测定方法中：供试品稀释5倍，过0.22μm滤膜，10μL进液相色谱仪、金线莲苷的含量为：10.51μg/ml。
优选的，所述的薄层色谱法鉴别白薇、银杏叶中，白薇以正丁醇-乙酸乙酯 -水(4∶1∶5)作为展开剂，喷硫酸乙醇溶液显色、银杏叶以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)作为展开剂，喷：3％三氯化铝乙醇溶液显色。
本发明以粗齿冷水花药材的鉴定成分Hernandulcin，黄花倒水莲药材的鉴定成分远志皂苷，石崖茶药材的鉴定成分山茶苷A，金线莲药材的鉴定成分金线莲苷为指标，该方法避免了药物组成药材中药物成分在同一色谱条件下响应 (峰)的重叠，以活性成分的含量测定为控制标准，更加合理、真实地反映一种具有修复皮肤屏障作用的中药药物组合物的质量。
说明书附图
图1是白薇对照药材图。
图2是银杏叶对照药材图。
图3是215nm波长下Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷对照品的色谱图。
图4是修复皮肤屏障的药物组合物215nm波长下HPLC色谱图。
图5是空白对照溶液在215nm波长下HPLC色谱图。
具体实施方式
本发明一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该澄清工艺按如下步骤进行：
澄清工艺及各成分含量
(1)澄清剂的配制：II型ZTC1+1天然澄清剂由A，B两组分组成。A组分：精密量取1.0g A组分中加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤即得。B组分：精密量取1.0g B组分中加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤，即得。
(2)澄清剂A、B加入顺序：根据说明书，ZTC天然澄清剂主要是根据溶液的性质选择不同的添加顺序，一般中药复方相对于蛋白质等电点(pH＝4.8)为酸性环境，添加顺序为先B后A组分，B组分用量为A组分2倍。
(3)评价指标：分别选取Hernandulcin含量保留率(X1)，远志皂苷含量保留率(X2)，山茶苷A含量保留率(X3)，金线莲苷含量保留率(X4)、固形物去除率(X5)作为评价指标进行综合评分，将化合物保留率权重定为0.7，固形物去除率X5权重定为0.3，即OD％＝(0.7X1+0.7X2+0.7X3+0.7X4)/4+0.3X5。计算公式如下：
化合物保留率＝澄清后提取液化合物的含量/提取液中化合物的含量×100％
固形物去除率＝(澄清前固形物含量-澄清后固形物含量)/澄清前固形物含量×100％
(4)工艺考察：以澄清剂加入量，料液比，温度，时间为考察因素，各选取最佳的3水平，以L9(34)正交表进行试验，以化合物保留率和固形物去除率计算综合评分，进行方差分析，结果见表2。由正交试验的方差分析可以看出，澄清剂加入量及提取液料液比对综合评分有显著影响，温度和时间对提取液的澄清效果无统计学意义。试验中发现，澄清剂B组分为4％时药物组合物水提液澄效果好，确定II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清药物组合物提取液的最佳工艺条件为澄清剂加入量B组分4％，B组分为2％料液比为1∶5，温度为60℃，反应时间1h。
表2 L9(34)正交试验结果
(5)各成分含量：以II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清药物组合物提取液的最佳工艺条件：澄清剂加入量B组分4％，B组分为2％料液比为1∶5，温度为60℃，反应时间1h，制备样品。高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，流动相梯度见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长215nm，进样10μL。选择215nm波长分别测定Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷含量。样品连续进针3次，取平均值。按本发明质量控制方法测得每克生药，金线莲苷的含量为：10.51μg/ml。
如图1-5所示，本发明一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该质量控制方法按如下步骤进行：
(1)供试品溶液的配制：取修复皮肤屏障作用的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
(2)对照品溶液的制备精密称取Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度对照品溶液。
(3)线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号(峰面积)和浓度进行线性回归，得到5 种标准品的回归方程。Hernandulcin Y＝253.53X+42.37(R2＝0.9996)，浓度在 3.245～30.35g/mL范围线性良好。，远志皂苷Y＝288.53X+34.05(R2＝0.9997)，浓度在2.245～22.34g/mL范围线性良好。，山茶苷A Y＝228.53X+38.48 (R2＝0.9999)，浓度在3.545～35.35g/mL范围线性良好。，金线莲苷Y＝267.15 X+51.31(R2＝0.9995)，浓度在4.245～42.35g/mL范围线性良好。
(4)测定方法：照高效液相色谱条件测定，色谱条件和***适用性和 InertsilODS-3色谱柱，流动相见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，进样10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长215nm。
表1流动相梯度洗脱表
(5)对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括精密度、重复性、稳定性等。
2.银屑灵药物组合物中白薇、银杏叶用薄层色谱法鉴别：
(1)白薇薄层色谱法鉴别
供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加甲醇30mL，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白薇对照药材粉末1g，加甲醇30mL，超声提取 20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为白薇药材溶液；
白薇薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)银杏叶薄层色谱法鉴别
供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加乙醇20mL，超声提取30分钟，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取银杏叶对照药材1g，加乙醇20mL，加热回流提取10min，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液；
银杏叶薄层色谱鉴别：依照薄层色谱法试验，分别吸取银杏叶对照药材溶液和供试样品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸- 水(5∶3∶1∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷：3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视；
本发明一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，优选的供试品溶液的制备：该方法公示品溶液的制备：取修复皮肤屏障作用的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的 2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
本发明一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法中，优选的测定方法：高效液相色谱条件测定，色谱条件和***适用性试验： Inertsil ODS-3色谱柱，流动相梯度见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长215nm，进样10μL。
本发明所述的质量控制方法，由于Hernandulcin的最大吸收波长为240nm，远志皂苷的最大吸收波长为202nm，山茶苷A和金线莲苷的最大吸收波长为215 nm，故选择215nm波长分别测定金线莲苷含量。
本申请发明人经考察获知，当采用乙腈-水，乙腈-甲酸水，甲醇-水体系作为流动相梯度洗脱时，药物成分分离不理想，运用甲醇-甲酸水体系洗脱，药物各成分没有重叠，且峰形优异。本实验方案通过对药物活性成分含量的质量控制，从整体上评价和控制药物组合物质量，更加合理、真实地反映一种修复皮肤屏障的中药药物组合物的质量。

Claims (6)

1.一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺，其特征在于：取修复皮肤屏障作用的中药制剂常规乙醇浸泡提取，浸泡液减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附，用5％-95％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即为所述的修复皮肤屏障作用的药物组合物，置于60℃水浴，先加入4％洗脱液体积的II型ZTC1+1天然澄清剂B组分，1h后加入2％体积的II型ZTC1+1天然澄清剂A组分，期间每半小时搅拌1分钟令杂质成分凝聚沉淀，然后在离心机中以4000r/min离心10min，取上清液；所述的II型ZTC1+1天然澄清剂：它是一种以天然多糖为原料制成的天然高分子物质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶，配成1％的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶的复合酶，用1％醋酸配成1％浓度的溶液使用。
A组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤；
B组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100 mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤。
2.一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的质量控制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)用薄层色谱法鉴别该药物中药材白薇，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加甲醇30mL，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取白薇对照药材粉末1g，加甲醇30mL，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为白薇药材溶液；
c.白薇薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)用薄层色谱法鉴别该药物中药材银杏叶，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加乙醇20mL，超声提取30分钟，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取银杏叶对照药材1g，加乙醇20mL，加热回流提取10min，滤过，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液；
c.银杏叶薄层色谱鉴别：依照薄层色谱法试验，分别吸取银杏叶对照药材溶液和供试样品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷：3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视；
(3)用高效液相色谱法测定药物中Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷的含量，包括：
a.高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0～10min 30％A→35％A、10～45min 35％A→45％A、45～60min 45％A→75％A，平衡时间15min，流速0.8mL/min，进样量10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长215nm；
b.供试品溶液的配制：取修复皮肤屏障的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
c.对照品溶液的制备：精密称取Hernandulcin，远志皂苷，山茶苷A和金线莲苷对照品各2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液；
d.线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到标准品的回归方程；
e.测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。
3.根据权利要求1，2所述的一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该方法供试品溶液为醇提液，具体方法为：取修复皮肤屏障的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用。
4.根据权利要求1，2所述的一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于：该方法用于提取方法相同的药物组合物片剂，颗粒剂或药物组成含有白薇、粗齿冷水花、银杏叶、黄花倒水莲、石崖茶和金线莲药材的复方。
5.根据权利要求1，2所述的一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于，含量测定方法中：供试品稀释5倍，过0.22μm滤膜，10μL进液相色谱仪、金线莲苷的含量为：10.50μg/ml。
6.根据权利要求1，2所述的一种具有修复皮肤屏障作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于：所述的薄层色谱法鉴别白薇、银杏叶中，白薇以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)作为展开剂，喷硫酸乙醇溶液显色、银杏叶以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)作为展开剂，喷：3％三氯化铝乙醇溶液显色。
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